Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Ранние изменения показателей метаболизма ткани в ответ на стимуляцию-факторами-регуляторами пролиферативной активности

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Ранние изменения показателей метаболизма ткани в ответ на стимуляцию-факторами-регуляторами пролиферативной активности"

ВОРОНЕЖСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

Р Г Б ОД

На правах рукописи

1 з МАЙ 19Й5

МАСЛОВ АЛЕКСАНДР ЮРЬЕВИЧ

РАННИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ МЕТАБОЛИЗМА ТКАНИ В ОТВЕТ НА СТИМУЛЯЦИЮ ФАКТОРАМИ - РЕГУЛЯТОРАМИ ПРОЛИФЕРАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ.

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Воронеж - 1996 год.

Работа выполнена в Воронежской государственной медицинской академии им. H.H. Бурденко.

Научный руководитель - Академик МАН, доктор биологических

наук, профессор А.Н. Пашков

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор А.У. Игамбердиев кандидат биологических наук, доцент В.Н. Золотухина

Ведущая организация: Российский государственный медицинский

университет им. Н.И. Пирогова

Защита состоится « & » ^ ^_1996 г. в « ^ » часов нг

заседании диссертационного Совета К 063.48.14 при Воронежской государственном университете по адресу: 394693 Воронеж Университетская площадь 1

С диссертацией можно ознакомиться в зональной научной библиотеке Воронежского госуниверситета. Автореферат разослан « 6 » мая 1996 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета,

кандидат биологических наук, доцент

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования.

Предсказанное что называется "на кончике пера" [Bullough W.S., Laurence Е.В., 1960; Iversen О.Н., 1960], а затем нашедшее блестящее экспериментальное подтверждение в работах тех же авторов (1964, 1965) существование ингибиторов клеточной пролиферации действующих на уровне ткани - кейлонов, является подтверждением эффективности приложения общенаучных кибернетических принципов (использование отрицательной обратной связи для поддержания устойчивости системы) в биологических исследованиях.

С течением времени представление о кейлонах и антикейлонах постулированные Bullough W.S. в кейлон-антикейлонной теории регуляции клеточного гомеостаза ткани как о простых триггерах, однозначно определяющих поведение клетки в митотическом цикле, постепенно заместилось понятием "факторы роста". Факторы роста относятся к семейству цитокинов [Strain A.J., 1993; Weller M. et al., 1994], т.е. представляют собой секретируемые пептиды и белки, с помощью которых осуществляется локальные взаимодействия между клетками. Понятие "фактор роста" несет значительно большую смысловую нагрузку, нежели кейлон или антикейлон. Факторы роста обладают плейотропным действием и кроме митогенного (или антимитогенного) действия обладают морфо- и мотогенным эффектами, а также способны индуцировать [щтодифференцировку [Matsumoto К., Kagoshima M., Nakayama T., 1995; Derman M.P., Cunha M.J. et al., 1995; Yang X.M., Park M., 1995; Viangiacapra F.J. et al., 1995]. Влияние факторов роста (даже одного

типа) неоднозначно и зависит от многих условий, в частности: тиг клетки-мишени, ее физиологическое состояние; наличие или отсутствие клеточного окружения; наличие или отсутствие другю факторов роста или агентов, не относящихся к данному семейству у т.д.

В целом, исследования в области регуляции клеточногс размножения давно вышли за пределы определенных им изначальнс рамок и в настоящее время включают в себя изучении пробле\< морфогенеза и дифференцировки. Это новое, динамично развивающееся направление биологической науки, имеет огромную теоретическую общебиологическую и несомненную практическую (биология развития, онкология) значимость.

К сожалению, подавляющее большинство исследований в это* области нацелены на изучение конечных эффектов (митогенного морфогенного, мотогенного и дифференцирующего) факторов ростг на клетки-мишени и проводятся в основном с использование!* морфологических методов. Работы же биохимического плана имеют узконаправленный характер, их целью является разрешения проблек трансдукции управляющих сигналов. При такой постановке вопрос« из поля зрения исследователя выпадает целый период из жизш клетки - время от приема управляющего сигнала (первичный ответ, I виде изменения концентрации внутриклеточного кальция наблюдается уже через 5-10 минут после взаимодействия с факторол роста) до морфологической манифестации реакции клетки на это' сигнал (лаг-период в отношении начала синтеза ДНК составляет 48 72 часа [Сошег^сЬоп МЛ. а!., 1995]). Очевидно, что процессы происходящие в течении лаг-периода, направлены на подготовку I

обеспечение успешности полноценного ответа клетки-мишени на управляющее воздействие фактора роста, независимо от того каким будет этот ответ. Знание механизмов подготовки клетки к реализации ответа индуцируемого фактором роста не только позволит исследователю глубже понять интимные стороны пролиферации, морфогенеза и дифференцировки, но и, возможно, цаст в его руки инструмент управления этими процессами. Возможно гакже, что расстройство именно этих, подготовительных реакций, имеется в опухолевых клетках, следовательно, работа в этой области может дать новые данные для понимания процессов происходящих при опухолевой трансформации и прогрессии.

Все вышеизложенное определило цель нашего исследования и задачи, которые необходимо решить для достижения поставленной цели.

Цель исследования. Поиск изменений со стороны специфического и неспецифического метаболизма ткани в различных физиологических состояниях в ранние сроки после стимуляции ее факторами роста различной биологической направленности.

Задачи исследования.

1. Создание экспериментальной модели, пригодной для исследования показателей обмена веществ и влияния на них различных факторов: разработка и отработка методов изоляции и культивирования печени крысы с сохранением ее основных метаболических показателей.

2. Изучить показатели состояния свободно-радикальной -антирадикальной системы, энергетического обмена и

системы детоксикации аммиака в изолированной печени культивируемой в условиях моделирующих нормальные.

3. Исследовать изменение состояния показателей свободно-радикальной - антирадикальной системы, энергетическогс обмена и системы детоксикации аммиака в изолированной печени культивируемой в условиях моделирующих нормальные в ответ на стимуляцию органа регуляторами пролиферативной активности.

4. Исследовать изменение состояния показателей свободно-радикальной - антирадикальной системы, энергетическогс обмена и системы детоксикации аммиака в изолированной печени культивируемой в условиях моделирующих патологические (5 мМ N11(01 в перфузионной жидкости) е ответ на стимуляцию органа регуляторами пролиферативной активности.

5. Оценить степень влияния регуляторов пролиферативной активности на различные метаболические пути с точк* зрения их филогенетической древности.

Научная новизна исследования. Впервые проведено исследование влияния факторов роста на широкий спект| показателей метаболизма ткани с точки зрения изучения механизма подготовки клетки к реализации ответа индуцируемого этим* факторами. Впервые исследована роль физиологического состояни? ткани в прохождении лаг-периода после стимуляции факторам* роста. Нами установлено, что наиболее глубокие и отчетливы» изменения под действием факторов роста происходят I филогенетически более древних метаболических путях. В отношение

свободно-радикальной - антирадикальной системы установлено, что стимулятор пролиферации главным образом действует на антирадикальное звено, активируя его, а ингибитор на свободно-радикальное, угнетая интенсивность ПОЛ.

Влияние положительного и отрицательного индукторов на неспецифический метаболизм в основном носит разнонаправленный характер - основной эффект первого сводится к переводу ткани на более низкий уровень интенсивности течения метаболических процессов, в то время как второй оказывает в целом стимулирующее влияние на неспецифический метаболизм. Воздействие факторами роста на ткань, независимо от их природы, приводит к улучшению сопряженности между отдельными компонентами энергетического обмена. Метаболические пути, ответственные за выполнение специфических функций клетки, не испытывают на себе влияние ингибитора пролиферации и угнетаются стимулятором.

Изучение реакции ткани на факторы роста в условиях моделирующих патологические позволило сделать заключение о приоритетности выполнения тканью функций возложенных на нее как на компонент более сложной системы, перед ответом на местные регуляторные воздействия - практически не влияя на ответ ткани на воздействие отрицательного индуктора пролиферации, измененное физиологическое состояние ткани сочеталось с полной отменой эффектов положительного индуктора. Мы обнаружили, что факторы роста, не оказывая влияния на скорость и пути детоксикации аммиака, купируют токсический эффект последнего, выражающийся в значительном разобщении компонентов энергетического обмена.

Теоретическое и практическое значение исследования

заключается в расширении представлений о биологической роли факторов - регуляторов пролиферации как агентов обладающих не только митогенной активностью, но и способных управлять широким спектром метаболических реакций. Понимание тонких механизмов подготовки клетки к реализации ответов индуцируемых факторами роста открывает новые подходы к решению проблем морфогенеза, регенерации, поддержания клеточного гомеостаза ткани, опухолевого роста.

Материалы работы используются в учебном процессе на кафедре медицинской биологии и генетики с курсом экологии и на кафедре биохимии ВГМА.

Публикация и апробация работы. По материалам исследований опубликовано 6 научных работ. Основные положения диссертации докладывались на Втором национальном Конгрессе пс профилактической медицине (Санкт-Петербург, 1995), научно-практических конференциях ВГМА (Воронеж, 1994, 1995), международной конференции Clinical Chemiluminiscence (Берлин, 1996).

Работа выполнена без соавторства. Из научных трудов опубликованных в соавторстве, в диссертацию включены материалы, полученные лично автором.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 135 страницах и состоит из введения, обзора литературы, главь посвященной материалам и методам, четырех глав собственны? исследований, обсуждения результатов, выводов и списке литературы. Библиографический указатель включает 184 источника

из иих 37 отечественных и 147 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 39 рисунками и 8 таблицами.

Положения выносимые на защиту.

1. Эндогенные факторы, стимулирующие и ингибирующие пролиферативную активность ткани, оказывают разнонаправленное воздействие на показатели специфического и неспецифического метаболизма.

2. Нагрузка культивируемой печени хлоридом аммония приводит к устранению эффектов оказываемых положительным индуктором пролиферации, не влияя на воздействие отрицательного индуктора.

3. Изменяя активность ряда ферментов, регуляторы пролиферативной активности, способствуют улучшению согласованности отдельных звеньев метаболизма культивируемой печени, причем этот эффект не исчезает при нагрузке органа аммиаком, купируя токсическое влияние последнего.

4. Ранние изменения происходящие в изолированной печени при стимуляции ее регуляторами пролиферативной активности обусловлены подготовкой ткани к реализации ответов определяемых направленностью управляющих воздействий.

5. Наиболее отчетливо эффекты регуляторов пролиферативной активности проявляются в отношении филогенетически более древних метаболических путей.

6. Выполнение органом функций возлагаемым на него, как компонент сложной системы - организма, имеют более

высокий приоритет перед ответом на местные регуляторньи воздействия.

2. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

2.1 МА ТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. В качестве объекта исследований использовал* изолированную печень 143 беспородных белых крыс обоего пол* средним весом 221±3 г. Перед забоем крысы сутки голодали Экстирпацию печени производили после предварительно* гепаринизации животного, под внутрибрюшинным кетминовыг. наркозом. Выделенный орган помещали в специально сконструированную установку с термостатируемо* культивационной камерой (37°С) и регулируемой скоростьк перфузии. Перфузию изолированной печени осуществляли чере: портальную вену со скоростью 5 мл/мин средой Хенкса (рН 7.4) Отток перфузионной жидкости происходил свободно, через заднюк полую вену. В течение первых 30 мин, во всех сериях опытов проводили перфузию базовым раствором - средой Хенкса, ДЛ5 стабилизации метаболических реакций и адаптации органа к новык условиям существования, в последующие 30 мин - время опыта культуральная жидкость дополнительно содержала факторы роста ионы аммония либо их комбинацию. Общая продолжительности эксперимента - 60 мин.

Всего проведено 6 серий опытов:

1) Биологический контроль - перфузия средой Хенкса.

2) «Аммиак» - базовый раствор содержал дополнительно 5 мМ хлорида аммония.

3) «Кейлон» - базовый раствор содержал препарат кейлона.

4) «Антикейлон» - базовый раствор содержал препарат антикейлона.

5) «Кейлон+Аммиак» - базовый раствор содержал препарат кейлона и 5 мМ хлорида аммония.

6) «Антикейлон+Аммиак» - базовый раствор содержал препарат антикейлона и 5 мМ хлорида аммония.

Дозу факторов роста определяли по степени гашения хемилюминесценции [Пашков А.Н., 1991]. За одну дозу препарата принимали такое количество фактора роста, которое гасило хемилюминесценцию в системе генерировавшей свободные радикалы на 50%. Опытные растворы содержали 1 дозу кейлона или антикейлона на 10 мл среды Хенкса.

Исследовали оттекающий перфузат и ткань печени. В перфузате определяли активность ЛДГ, АлАТ, антирадикальную активность, содержание белка, лактата, аммиака, глутамина и мочевины. Ткань печени по окончанию эксперимента замораживали в жидком азоте и гомогенизировали в изотоническом растворе с добавлением тритона XI00. В гомогенате определяли активность ЛДГ, СДГ, МДГ, ГДГ, аргиназы, СОД, содержание белка и МДА. В качестве регистрирующей аппаратуры использовали спектроколориметр «8реко1», спектрофотометр СФ-46 и хемилюминометр ХЛМ1Ц-01 с приставкой, позволяющей генерировать свободные радикалы под действием УФ-облучения.

Обработку данных производили на персональном компьютере IBM АТ386/387. Использовались программные продукты: СУБД PARADOX for WINDOWS v.5.0, электронные таблицы EXCEL for WINDOWS v.5.0, статистический пакет STATISTICA for WINDOWS v.2.0.

В расчетах использовались методы параметрической статистики. Взаимосвязь различных показателей выявлялась при помощи вычисления коэффициента корреляции г и путем применения канонического анализа. Для подтверждения достоверности полученных результатов использовался t-критерий Стыодента и метод многофакторного дисперсионного анализа, который позволял также выявить силу влияния контролируемых факторов на изменения изучаемых параметров.

2.2 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.2.1 Определение интактности и специфической функциональной активности изолированной печени.

Сохранение интактности и специфической функциональной активности исследуемой ткани - важнейшие задачи, без решения которых применение метода культуры изолированных органов не может считаться оправданным.

В изолированных тканях при переживании создаются благоприятные условия для интенсификации процессоЕ пероксидного окисления липидов [Джафаров А.И., 1979; Биленкс М.В.,1989]. Нами было проведено исследование уровня вторичного продукта ПОЛ - малонового диальдегида, в гомогенате интактно?

печени животного, в печени выделенной по принятому нами методу и в печени подвергнутой 20-ти минутной преинкубации при 37°С. Уровень МДА в печени, которая была немедленно после выделения подключена к перфузионной системе, практически не отличался от уровня в нативной печени, в то время как задержка с началом перфузии приводит к значительному возрастанию интенсивности ПОЛ, что выражается в подъеме уровня МДА. Можно заключить, что подготовка печени к эксперименту с применением нашей методики не происходит изменений характерных для переживающих органов.

Исследование скорости экскреции лактата позволило судить об адекватности снабжения ткани кислородом, т.е., в конечном итоге, об адекватности условий культивирования. Культивируемая печень обладает стабильно низким уровнем экскреции лактата. Недостаток кислорода в культуральной жидкости (на тридцатой минуте опыта прекращена аэрация перфузата) ведет к быстрому и значительному возрастанию лактата в перфузионной жидкости, т.е. можно сделать вывод, что в применяемых нами условиях культивирования уровень снабжения кислородом ткани достаточный.

Состояние цитоплазматической мембраны культивируемого органа оценивалось по содержанию белка, активности ЛДГ, АлАТ и антирадикальной активности в оттекающем перфузате. Активность ЛДГ и антирадикалъная активность оставались стабильно низкими на протяжение всего времени эксперимента; белок и АлАТ определялись в следовых количествах.

Низкий уровень изученных параметров говорит о сохранности цитоплазматических мембран. В тоже время, наличие в перфузионной жидкости токсического агента - аммиака, ведет к утрате мембранами интактности.

Для определения сохранности специфической функциональной активности печени исследовали ее способность к синтезу мочевины при нагрузке органа хлоридом аммония. Эксперименты показали, что наличие избыточного количества ионов аммония в перфузионной жидкости приводит к резкому увеличению синтезируемой и экскретируемой мочевины, следовательно, изолированная печень сохранила свои специфические функционально - метаболические свойства.

Таким образом, исследование показателей обмена веществ позволяют заключить, что при применении выбранных нами методов выделения и культивирования изолированного органа в условиях, моделирующих нормальные, нарушений интактности клеток и потери их функциональной активности не отмечается. В тоже время, в патологических условиях наблюдалась потеря гепатоцитами интактности.

2.2.2 Факторы - регуляторы митотической активности и свободно-радикальные процессы в изолированной печени.

Избыток ионов аммония в культуральной жидкости не оказывает достоверного воздействия на интенсивность пероксидного окисления и активность супероксиддисмутазы.

Положительный индуктор пролиферации - антикейлон, оказывает преимущественное воздействие на антирадикальные

процессы, вызывая активизацию антиоксидантов как первого рода (превентивных) - мочевина, так и второго рода (прерывающих цепь размножения свободных радикалов) - СОД; изменения (возрастание) со стороны ПОЛ недостоверны (при расчете с использованием ь критерия), однако результаты дисперсионного анализа показывают значимость влияния препарата антикейлона на активность этого процесса. Возможные эффекты, связанные с активацией ПОЛ изображены на Рис. I.

Рис. 1 Схема, иллюстрирующая возможные эффекты антикейлона опосредованные процессами ПОЛ.

сод

□ Нейлон ШАнтиквйпон

Рис. 2 Изменения интенсивности ПОЛ и активности СОД в ткани под влиянием регуляторов пролиферации. 'р <

Отрицательный индуктор пролиферации - кейлон, преимущественно влияет собственно на процессы ПОЛ в изолированной печени, угнетая их интенсивность, что выразилось в достоверном снижении количества МДА в гомогенате ткани.

Ионы аммония, при их наличии в перфузионной жидкости совместно с факторами роста, полностью снимают эффект антикейлона на активность СОД, не изменяя реакцию органа на кейлон.

2.2.3 Факторы - регуляторы митотической активности и некоторые

ферменты энергетического обмена в изолированной печени.

Фактор, тормозящий пролиферацию клеток - кейлон, вызывает достоверное уменьшение активности фермента гликолиза - ЛДГ (на

47%) и ферментов цикла трикарбоновых кислот - СДГ и МДГ (на 53% и 43% соответственно). Важно отметить, что эти изменения согласованы между собой, т.е. сохраняется высокая степень корреляционной связи между активностью ЛДГ и интегральным показателем активности изученных ферментов цикла Кребса. Более того, влияние кейлона приводит к еще большему возрастанию корреляции между гликолизом и ЦТК, делая эту связь функциональной (Сап г = 0.9831, против 0.8172 в контроле).

Хотя фактор, стимулирующий пролиферацию клеток -антикейлон, не оказывает достоверного влияния на активность изученных ферментов, обращает на себя внимание эффект, сходный с эффектом кейлона - усиливается согласованность между последовательными звеньями катаболизма глюкозы (Сап г = 0.8989, против 0.8172 в контроле).

Избыток ионов аммония в перфузионной жидкости оказывает в целом угнетающее воздействие на активность ферментов энергетического обмена, причем в случае с лактатдегидрогеназой эти изменения достоверны. Кроме того, ионы аммония разобщают гликолиз и цикл Кребса - исчезает корреляция между гликолизом и ЦТК (по данным канонического анализа).

Факторы роста, независимо от характера направленности, при применении совместно с хлоридом аммония, оказывают купирующие воздействие, устраняя разобщающий эффект последнего - восстанавливается сильная прямая корреляционная связь между гликолизом и циклом Кребса.

к

2.2.4 Факторы - регуляторы митотической активности и детоксикация аммиака в изолированной печени.

Наличие в культуральной жидкости фактора стимулирующегс пролиферацию - антикейлона приводит к достоверному сниженик активности аргиназы (на 29%) и значимому увеличению активноси глутаматдегидрогеназы (на 41%). Влияние препарата антикейлош на ГЛДГ не сводится только к повышению ее активности применение метода канонического анализа позволило выявит! усиление связи между активностью ГЛДГ и интенсивностью ЦТК оцениваемого по интегральному показателю СДГ - МДГ, в это? серии в сравнении с биологическим контролем (Can г = 0.9642 против 0.7877 в контроле).

Кроме того, воздействие антикейлоном приводит * повышению скорости экскреции из перфузируемого органа ионое аммония (при их отсутствии в притекающей среде) - на 169%, г также продуктов их метаболизма - мочевины и глутамина (на 111% у 99% соответственно). Возможная схема, увязывающая вышеозначенные события приведена на Рис. 3.

Фактор ингибирующий пролиферацию - кейлон приводит ъ достоверному снижению активности глутаматдегидрогеназы (нг 34%), не влияя при этом на активность аргиназы. Препарат кейлош не влияет также и на экскрецию аммиака и продуктов его связывания в условиях культивирования, моделирующю нормальные.

Рис. 3 Схема, иллюстрирующая возможный механизм влияния антикейлона на азотистый метаболизм.

Добавление в культуральную среду хлорида аммония приводит к резкому возрастанию скорости продукции связанных форм аммиака - мочевины (на 313%) и глутамина (на 725%).

Препараты кейлона и антикейлона не влияют на интенсивность захвата ионов аммония из культуральной среды и достоверно не изменяют суммарный выход его связанных форм, однако в балансе глутамин - мочевина наблюдается

перераспределение в сторону уменьшения доли мочевины, особенно ярко выраженное под влиянием кейлона (Рис. 4).

Мочевина, %

Рис. 4 Влияние препаратов кейлона и антикейлона на долю мочевины в суммарной продукции аминосодержащих веществ (глутамин и мочевина).

(Уиг+\/д1п)Л/атт

Рис. 5 Влияние препаратов кейлона и антикейлона на отношение суммарной скорости экскреции мочевины и глутамина к скорости поглощения аммиака в условиях

избыточного содержания хлорида аммония в культуральной среде.

При действии хлорида аммония, как унарного фактора, суммарная скорость экскреции глутамина и мочевины полностью сбалансирована эквимолярным поглощением аммиака из перфузионной жидкости, т.е. (\гиг+УЕ|П)А''атт=1. Добавление в культуральную среду факторов роста на фоне, избыточного количества ионов аммония, приводит к парадоксальному результату - суммарное количество экскретированных связанных форм аммиака значительно превышает долю поглощенных ионов аммония, т.е. (V иг 1 (Рис. 5).

Определение источника добавочных аминогрупп и биологического смысла этого феномена требует дополнительных исследований, которые выходят за рамки целей и задач представляемой работы.

Исследование влияние препаратов кейлона и антикейлона на метаболизм аммиака в патологических условиях показало, что эффект факторов роста на активность ГЛДГ практически не зависит от наличия этого агента в перфузионной жидкости; более того, препарат кейлона устраняет разобщение между активностью ГЛДГ и парой СДГ - МДГ, которое является одним из проявлений токсического действия аммиака. В тоже время, повышение содержания аммиака в среде, убирает ингибирующее влияние антикейлона на активность аргиназы.

2.3 Заключение Полученные результаты были рассмотрены с точки зрения теории трехкомпонентного строения ткани [Прилуцкий В.И. Романов Ю.А., 1968; Романов Ю.А. с соавт., 1984].

Кейлон

/Про 11П ф с рал I в ный ^ пул

Антикейлон

Рис. 6 Схема, иллюстрирующая теорию трехкомпонентного строения ткани и место препаратов кейлона и антикейлона в этой теории.

Воздействие препаратов кейлона и антикейлона сводится, в конечном итоге, к переходу баллотирующего пула в фиксированный пул и пул пролиферирующих клеток соответственно. Возможно предположить, что те изменения, которые мы наблюдали со стороны показателей обмена веществ при воздействии факторами роста, суть характеристики пролиферирующих (или готовящихся к пролиферации) клеток либо клеток выполняющих специализированные функции, т.е. модуляция метаболических процессов индуцируемая антикейлоном направлена на обеспечение успешности пролиферации, в то время как стимуляция кейлоном оптимизирует выполнение тканью специфических функций.

Полученные нам данные о подавлении эффектов положительного индуктора пролиферации при нагрузке органа

аммиаком позволило сформулировать концепцию приоритета: в процессе эволюции, в соответствии с одним из основных принципов построения устойчивых систем - принципа иерархичности, сформировалась система приоритетов для органов и тканей, входящих в состав многоклеточных организмов, в которой необходимость выполнять специфические функции (тем более связанные с поддержанием жизнедеятельности) возложенные на ткань (или орган), как компонент более сложной системы -организма, преобладает над ответом на местные регуляторные воздействия.

3. ВЫВОДЫ.

1. Действие препаратов кейлона и антикейлона отчетливее проявляется при рассмотрении эволюционно более древних метаболических путей.

2. Действие антикейлона на метаболизм связано с его основной функцией - индукция пролиферации; эффекты фактора направлены на обеспечение успешности этого процесса и проявляются, прежде всего, в интенсификации неспецифического метаболизма ткани и подавлении эндогенных ингибиторов пролиферации.

3. Эффект кейлона на неспецифический метаболизм сводится к снижению его интенсивности, в то время как выполнение специализированных функций находится под положительным контролем со стороны этого фактора.

4. Факторы роста различной природы способствуют оптимизации взаимодействия между различными

компонентами энергетического обмена, тем самым повышая КПД ткани.

5. Не препятствуя выполнению органом специализированной функции - детоксикация аммиака, факторы роста в определенной степени купируют токсический эффект последнего.

6. Выполнение органом функций возложенных на него как на компонент сложной системы - организма, имеют более высокий приоритет, чем ответ на местные регуляторные воздействия.

4. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Метод получения первичной культуры гепатоцитов на микроносителях II В сб.: Актуальные вопросы современной медицины. - Воронеж, 1993. - С. 13.

2. Применение методов математического анализа е биоритмологических исследованиях / соавт.: А.Н. Пашков Л В сб.: Актуальные проблемы медицины. - Воронеж, 1993. • Т.2. - С. 184-186.

3. Влияние препарата антикейлона на метаболическую и антирадикальную активность ткани печени крысы / соавт.: А.Н. Пашков, Н.М. Стаднюк // Тезисы Второго национального Конгресса по профилактической медицине 23-26 мая 1995 г. - "Впервые в медицине". - Саша-Петербург, 1995. - С. 123.

4. Препарат антикейлона способен активизировать антирадикальные процессы в ткани / соавт.: Н.М. Стаднюк // В сборн. научн. работ молодых ученых: Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины. -Воронеж, 1995. -С.28-31.

5. Опыт использование перфузируемой печени в качестве тест-системы в медико-биологических экспериментах / соавт.: Н.М. Стаднюк // В сборн. научн. работ молодых ученых: Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины. - Воронеж, 1995. - С.24-27.

6. Hepatocyte growth factor intensify of antiradical activity in perfused rat liver / соавт.: A.N. Pashkov // Second International Conference on Clinical Chemiluminescence. - Berlin, April, 1996. - P.37.