Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Проблемы экологии патогенных лептоспир

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Проблемы экологии патогенных лептоспир"

РГ6 од

1 о ^Т^Т'^зАКАДЕШЯ вди11инс1шх нлук

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ИНСТИТУТ ЭПИДЕМИОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ ИМЕНИ ПОЧЕТНОГО АКАДЕМИКА Н.Ф.ГАМАЛЕИ

На правах рукописи

АНАНЬИНА Юлия Васильевна

ПРОБЛЕМЫ ЭКОЛОГИИ ПАТОГЕННЫХ ЛЕПТОСПИ?

03.00.07 - микробиология 14.00.30 - эпидемиология

АВТОРЕФЕРАТ- ■ - •

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук1'

Москве - 1993

Работа выполнена в научно-исследовательском институте

I

эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика' Н.Ф.Гамалеи РАЫН

Научный консультант - доктор медицинских наук, профессор

П. Г. Чернуха

Официальные оппонента:

член-корреспондент РАМН , доктор биологических наук,

профессор • й.Б.Тарасевич

доктор медицинских наук,

профессор Б.С.Кяктенко

доктор медицинских наук,

профессор Е.А.Ведьыина

Ведущая организация - Всероссийский Государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветпрепаратоз.

Защита состоится п_

^ » 1333 г. в

часов на заседании Специализированного совета Д001.07.01 в научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи РА1Ш по адресу: 123098, Москва, ул.Гамалеи, 18.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИКЭ51 ик.Н.Ф.Гамалеи РАМН '

УУ 0/

Автореферат разослан ____ 1933 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доктор медицинских наук

Е.И.Коптелоза

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

. Актуальность проблемы. Анализ современной эпидемической ' и эпизоотической ситуации дает основание отнести ледтоспирозы к числу наиболее распространенных природноочаговых зоонозов в' Российской Федерации. Наметившаяся в предшествующе десятилетие тенденция роста заболеваемости этими инфекциями к началу 90-х годов приобрела весьма выраженный и устойчивый характер. Об этом свидетельствует не только прогрессирующее увеличение числа спорадических случаев, но и регистрация на отдельных территориях эйидеыкческих вспышек (Ю.й.Федоров, В.В.ГоршрнйО, 1990).

По тянести клинического течения и показателям летальности, достигающим в зндеиичннх регионах 10-30$, лептоспиоозы заниыавт одно г.з первых-мест в инфекционной патологии. Медико-социальнзя значимость проблемы обусловлена также вероятностью развития отдаленных клинических последствий, в частности, неврологических у переболевших тяжелыми фораами икфенции ( в.яаоиаг , 1982; 3.А.Гольдекштейн, 1989). Этио-патогенез этих состояний практически не изучен, что является основным препятствием для разработки средств и методов их диагностики-и терапии. - . -

Несмотря на достаточно детальную и всестороннюю изученность закономерностей циркуляции сатогенпых лелтоспар в. природных и трансфоруированних экосистемах (В.В.Ананьин, Е.В.Карасева, 1961; В.С.Киктеако, 1985; Ю.Г.Чернуха, 1988; Ю.А.Малахоз, 1988; Е.Л.Бернасозсхая,-1987 и др..) не все клинико-эпидемиологячэские факты находят доланое объяснение з свете ииеюцмхся представлений. К а им откосятся наблюдения

о выраженных отличиях в степени эпидемической реализации... некоторых.широко.распространенных среди диких и селъкохозяй-стзенных животных серозароз патогенных лептоспир ( сорепь&геп!, услпсаа, гагаазот1,_Ьахг13о,ро1 • ■) ,__ХарБКТере КЛИНИЧЕСКОГО ТечеНИЯ

инфекции при-различных этиологических формах лептоспирозов к. др.-В значительной мере это обусловлено ограниченностью сведений по сравнительной экологии лептоспир, представляющих различные внутривидовые таксоны £серовары). Б частности, практически не изучены факторы, обусловливающие свойственную патогенный лептоспираи специфическую взаимосвязи с.хозяином (гсстальну» специфичность), особенности их органной персистен-ции, степень внутривидовой вариабельности патогенных свойств и их свянь с эпидемической активностью очагов.

Обоснование экологического :-; своеобразий возбудитзлей.: отдельных.внутривидовых таксоно^ицгет принципиальное значение, как для решения теоретически: вопросов систематики лептоспир (проблема вида), терминологических разногласий в среде яелто-спирокогоз ("лептоспироз11 или "лептоспирозы"), так и для разработки тактики дифференцированного подхода к контролю различных этиокэгичееаих форм инфекции.

Дель исследования, В связи с излогзяньш целью работы явилось экспериментальное изучение особенностей экологии патогенных ЛбШ.'ОСПйр ( ЬврЬ>вр1г>1 Зд^еггокапа ), ОТНОСЯЩИХСЯ К различных внутривидовым таксонаь, и анализ характера их влияния па эпидеиачзское я клиническое проявление лептоспи-рознсй инфекции.

Основный задачи исследования:

- Дать оценку сравнительной таксономической эффективности имыуносерологических методов внутривидовой дифференциации лептоспир (ииыуноабссрбционного и монофакторного анализа антигенной структуры, реакции кикроагглвтинации с панелями ыоноклональнкх антител).

Изучить геномнкй полиморфизм представителей рода 1«р1и>эр1га методой геномной дактилоскопии с использованием ДНК фага М13 в качестве молекулярного зонда. _ - •• .

- Определить таксономическое^положение и вирулентность лепто-спир, в тон числе и ранее неизвестных возбудителей, циркулирую. них в природных и ентропургических очагах с различны«

уровнем эпидемической активности.

- ' Исследовать особенности гостальной и органной персистенции лептоспир отдельных серо'варов на'экспериментальных и природных моделях. . ..

- Изучить возможность персистенции лептоспир в тканях центральной нервной системы ылекопитаюпдах, обладающих различ-гой степенью восприимчивости и чувствительности к лептоспи-родной инфекции. - ..

- Определить патоисрфолсгическзе последствия персистенции лептоспир в тхавях головного и спинного иозга золотистых

ХОМЯКОВ.

- Разработать питательную среду для выделения.и культивирования лептоспир нового сероьара ЬапЗи в серологичесйой . , группе ¿атап±са.

- На основе результатов собственных исследований и данных

литера-туры провести сравнительный анализ особенностей экологии лептоспир различных сероваров в паразитической и . сапрефитической фазах существования и дать оценку характера их влияния на эпидемическое и клиническое проявление лепто-спирозной инфекции.

Научная новизна.

Установлена способность патогенных лептоспир персисти-ровать з тканях центральной нервной систеш млекопитающих восприимчивых гидов, обладающих различной степенью чувствительности к леятослирозной инфекции. Показана зависимость нейротропности возбудителей от их серовариаатной принадлежности и вирулентности.

Определены павоморфологические последствия персистенции лептоспир в тканях голозного и спинного ысзга экспериыенталь-.них животных, виракающиеся в изменениях перлично-деструятиз-ного характера по типу спонгиозных энцефалопатий ( зиъ-ш ероое1оаив . )1 ранее не описанных при спирсхетсзах.

В опытах на.природных и лабораторных моделях (полевых шлах, золотистых хоияках) показано, что свойственная патогенные лептоспираы отдельных сероваров гостальная специфичность обусловлена, как видовыми, так и популяционныш различиями в зоспркиычивосга,их теплокровных хозяез, а векае конкурентными взаимоотношзаиями между возбудителями на тканевой уровне, в частности, конкурентным исключением.

С го мочь гибридизационного теста с ДНК фага М15 установлено величие гапервариабельных последовательностей з' хро-косоыной ДНК лспгоспар непатогекнкх видоз а одного чз

СерОЯарОБ Leptospira lnterrcgpjas - grippotyphosa. Показана 303U0K-ность использования метода геномной дактилоскопии з целях видовой дифференциации лелтосзир, контроля микробных коллекций и, вероятно, оценки их способности к длительному существованию в сапрофиткчеисой фазе.

Установлена высокая таксономическая эффективность реакции иикроагглютйн&ции с панелями монокл&нальных антител, позволяющей проводить дифференциацию лептосплс на субсеро-вариантноы уровне.

Выделен и идентифицирован новый серовар iania в серологической группе JaTaaica - ранее неизвестный возбудитель, циркулирующий э Приморском крае в популяциях полевых иышей и отличающийся от других представителей патогенного вида своеобрзг:...аи питательными потребностями и низкой вирулентностью. • ...Получены доказательства клонапьного происхождения штааиа 10 (серовар ъуав ), рзнее заявленного schoid et ai.. как новый вид ( ь.in&dai ), и.штауиоз-контьыияантов, выделенных ааыи из коимерчевкой питательной среды, что послукило-основанием для Международного подкомитета по таксономии исключить его ИЗ числа Species lncertaa aedis .

Представлено обоснование экологического своеобразия патогенных лептоспир различных внутривидовых таксонов по

.....- - -- -- -- - - ,V*' ' s *

признакам гостальяой, органной, тканевой специфичности, относительной роли паразитической я салрофитичесной ..фаз . существования, з значительной мере обусловливающих характер эпидемического и клинического проявления инфекции при различных этиологических фориах лептоспирозов.

Практическая ценность работа.

Из числа "гиперБИрулентных" штаммов сеоовара сорепьаееп! отобраны два высо-коишуногеннкх, используемых с 1987 г. в Ставропольском НПО "Аллерген" для производства лептоспироэной вакцина.

На основании результатов определения чувствительности лептоспир к.лептоспироцидной активности нормальных сывороток животных из ^коллекции сапрофигов отобран штамм, используемый в производстве рсдоспецифичевкого лептоспирозного диагностику*^ для реакции елайд--агглвтинации.

Разработана питательная среда для выделения и культи- , вирования дептоопир нового серовара ьалка (серогруппа ^-гагиса). Рекомендовано использовать итамм Ещ^ча при проведении диагностических исследований в Дальневосточном регионе с целью снижения вероятности гилодиагностики лептоспирозов. "

В практику здравоохранения внедрены."Методический указания до эпидемиологии, клинике, диагностике и профилактика-лептсспироча',' Минздрава СССР (1979) и Минздрава РСФСР (1987).

Материалы работы отражены в учебном пособии "^ептоспи--розы" для организаторов здравоохранения из развизавдзхсн стран (1Ь>82 г), учебном кинофильме "Наблюдение за очагам лептоспирозов", снятом ьа Центрнаучфильые пс .заказу ВСЗ/ ЮНЕП (1933 г.) иск участи? агтора, а .тагне. внедрены в учебный процесс на кафедрах микробиологии> эпидемиологии и энтомологии -ДОЛИУ враче?.. • •Полученные роз^лмаяы могут быть использованы .при разработке дифференцированной эдствин эшдаадгора к контроля (включая зтвотрогшую терапкк) лептоспирозов различных

этиологических фору.

Апробация работы. Материалы диссертации долокекы: аа конференции "Лабораторные животные з медицинских исследованиях "(Москва, 1974), У1 Всесоюзной конференции по лелтоспи-розу (Баку, 1975), Симпозиуме по актуальный проблемам лепто-спнроза (Москва, 1579), УП Всесоюзной конференции по лепто-спирсзвм (Киев, 1979), ЛИ Всесоюзной конференции по лепто-снирозам (Тбилиси, 1983),^Европейской научной конференции по лёптоспирозам ( Англия, Херефорд, 1986), I Всесоюзной конференции "Проблемы патологии и экологической взаимосвязи болезней диких теплокровных и сельскохозяйственных яизотных" "(Новосибирск, 1388); Всесоюзной конференции "Эпизоотология? эпидемиология,-средства диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней обцих для человека, и -¡животных'1^ (Львов,-1988), Мекдународном конгрессе по зоокозам (ЧСФР, Брно, 1588), Всесоюзной конференции по природной очаговости болезней (Новосибирск, 1989), УП Европейской и IX Всесоюзной конференции по лёптоспирозам (Москва, 1991), заседании сектора "Инфектология" при Бюро Отделения профк-_ лактической медицины РАМН (1992), з таюге научных конференциях отделов медицинской микробиологии и инфекций с природной очаговостью (1938,1992). _ ^

Публикации. 'По теме'диссертации опубликовано '54 ."боты, 5 методических материалов (инструкции, рекомендации, регламенты производства), получены 3 авторских свидетельства. Их список приводится в конце автореферата.

Структура и объем диссертации. Диссертация написана в ионографяческои стиле и включает введение, 4 главы результатов собственных исследований и их обсуждения, общ'ее заключение по работе и выводы. Список литературы содержит 223 наименования. Работа изложена на 187 страницах ыаикнописного текста и иллюстрирована 28 таблицами, . 28 рисукхаки а фотографиями.

Основные результаты, представленные в диссертации,получены лично автором. Исследования по отдельны!! разделан работы проводились в комплексе с лабораторией генной инженерии патогенных кикроорганигагоз (руководитель - докт.биол.наук А.Л.Гкнцбург, ведущий научи,сотрудник, канд.мед.наук И.А.Цагпкйк), лабораторией микробиологии латентных инфекций (руководитель - проф. ,докг.кед.наук Б.А.Зуев, ведущий научк. сотрудник, докт.ьед.наук - ¿..У.Харитонова) ЕИИЗМ им. 'Н.С.Гамалеи ?А?.Щ, а таюге лабораторией по контролю иепюспирояных препаратов ВГЕКИ зетлрепараюв (руководитель - дскт.вет.Нйук, профессор Ю.А.Малахов).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

I. ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТАКСОНОМИИ ЛЕПТОССШР.

Первый этап работы включал анализ экологических аспектов феяо- и геносистенатики яептоспар, сравнительную оценку некоторых методов их видовой и внутривидовой дифференциации, а также определение таксономического статуса возбудителей, циркулирующих в природных иантропургических очагах с различной эпидемической ситуацией.

I.I. Идентификация внутривидовая, классификация

Ieptospira interrogans С ПОМОЩЬЮ реакЦИИ МИКроаГ'ГЛЮТИНЗЦИИ

с панелями моноклональких антител. _ - - .,

Использование ионоклональных антител (ыА'Г) различной специфичности рассматривается в последние годы как наиболее перспективный подход к созданию альтернативной системы внутривидовой классификации, лептоспир ( Ч. J .Texpetrn ,I?87). • Ранее оценка этого метода проводилась в основном на эталонных штаммах. Нами проведено скринировзние 113-и 'полевых изолятоз патогенных лептоспир серологических групп- Pomona

Grippdtyphoea % И Ic tero ¡Menorrhagias , ВЫДеЛвННЫХ ИВ

геррятории России, Беларуси, Литвы, Грузии, Украины. США, Китая, в реакции микроагглютинации (РИА) с панелями uAT, .. полученными в лаборатории- тропической гигиены Амстердамского Королевского Тропического института.

.Идентификацию штампов серогруг.пы Grippotjihosa - проводили, используя-МАТ гибридоыных КЛОНОВ ГД (С?, СЗ, С9, CI3.CI7, Cig)t полученных К штамму Moscva У (серозар srlppatypboac).

Согласно результатам идентификации ^классической перекрестной реакции иыыуноабсорбции полевых изолатов во всех исследованных очагах циркулировали лептоспиры серовара • епрро^ьояа. Между тем, спектр их реактивности смАТ панели «мел существенные отличия. Шташш, выделенные в одном из природных очагов Московской области, агглютинировались всеми ыАТ, •кроме з? 71-019. Профиль их ыикроагглвтинации не имел качественных отличий несмотря на значительный временной разрыв ленду выделением культур - более 60-и лет (?ис.1.).Сходные результаты отмечены при изучении изолягов из географически отдаленных очагов Приморского края, Тюменской, Иркутской областей, Ямала и Беларуси. -

Для лептоспир,- циркулирующих среди крупного рогатого, скоте в Северо-Кавказском регионе и Израиле, бала характерна свабая^рЦхтлЕность с иА.Т * тх^з • . •

Полностью отличный■от предыдущих был профиль шташов от обыкновенных полевок из природных очагов Литвы (Рис.2). Наконец, культуры серовара кпрро-ьл^аа , выделанные от, больньуслептоспирозоы людей^в провинции Сычуань (Китай), резко отличались, как между собой, таккот предыдущих групп.

Использование эмпирически подобранных панелей ыАГ^к серогрулпан рсдцш» И 1с1вгоЬаешоггЬав1лв ДаВЭЛО ВОЗМОЖность дифференцировать отдельные серовара ( соответственно

ьогйок, топЗаЗсот, родопа И сорепЬадвп1, 1<ЛвгоЬаеютгЬавАае).

Однако ш^амьювых отличий на субсерсвариаяткоы уровне не выявлено.

Серогруппа бпррсйурЬоза. Серо бор опрро^рЬоеа

МюЬуа V.. 'Дмитровский

Рис.1. Профиль нинроагглвтинации очаговых ттаиюв лептоспир — моноклональными антителами смАТ;.Московская область.

телр

Серогрцппо бп'рро^урЬоза Серобар ^¡рро^-рЬояа

ш

- 'XV,

):В1$20_

Щео

"¿70240 Т:5£20

1:1260 _1: *Й0 ~

J:\iO_

1: <0~" 1:20

Ко 5 МГ

т т

ЬООСх

Ш т

'<т ■К**

Ж У///; //У/. х<\,,: V

ш

¡ш

Г71СЗ

ш

• ? 7 7

м

щ т

пмэ

уЩШ

у/АШ

Шшш

Г71С13

Г71С16

'{У/,

■¿Л,*. ¿"г £ »г. * ¿ л 1 и

Г71П9

' аг.аЦз 3

ИЗ _Нкт. й___ ____________ __________ ...________. .. , -

Рис.2. Профиль мияроагглютинацки очаговых штаммов лептоспир моноклональныки антителами (мАТ): Литва.

Таким образом, яа модели лептоспир серовара ег1ррогл>ьова поэана возможность дифференциации штаммов лептоспир на суб-серовариантном зровне, используя эмпирически подобранные панели ыАТ. Высокая•дискриминирующая способность, воспроизводимость и экономичность метода свидетельствуют о перспективности его использования в целях создания альтернативной системы внутривидовой классификации лептоспир, проведения эпиданализа и изучении яопуляционной структуры возбудителей.

1.2. Монофакторкый анализ антигенной структуры различных географических изолятов лептоспир серологической группы

1<^егоЬаетоггЬа21ве.

Эпидениологические_наблюдения последнего десятилетия свидетельствуют о прогрессирующем возрастании этиологической роли лептоспир серогруппы ХсигоЬагпоггЬаеСае В Общей структуре заболеваемости людей лептоспирозаыи в России , Франции .Англии и Других странах. В этой связи возникает необходимость в уточнении нозоареала этой инфекции и детальной идентификации циркулирующих в Очагах возбудителей.

Методом ыокофактррного анализа антигенной структуры по в.йЕеъу. - (1957) определено таксономическое положение 188-и. полевых изолятов иктерогемсррагических лептоспир^. выделенных в 1975-1989 гг на территории России, Украины, Молдавии, Грузии и.Узбекистана.^Большая их часть изолирована из почек серых крыс, обитающих в различных^экологических ЗОНоХ, .остйльйыв - от грызунов других, видов и больных, лептоспырозом ладьй. Согласно полученным данным 179 (95,2^) культур оказались идентичными сзроьару сорвглчееш и ТОЛЬКО 9 (4,8/5) - 1с*вгоЬаэтаогт1-.ае1ао • Причем

возбудители обоих сероваров циркулировали в популяциях крыс в одних' и тех ае очагах и биотопах. Анализ имеющихся эпизоо-тологических и.экспериментальных данных дает, основание.';-.-. ; ДЛЯ_ВЫВОДа, ЧТО лептоспиры 11зге:т>ЬаегюггЬа51ае . ЯВЛЯЮТСЯ антигенным вариантом сероззра соресьа^епх . , вероятно, нестабильным и не имеющим самостоятельной экологической ниши.

1.3.,' напха - новый серозар в серологической группе ¿атап!са : выделение, идентификация и экологические, особенности. '

С начала 60-2 годов стало известно о циркуляции .в популяциях полевых ныаей: ( Ароаеюв яег^ииа ) Приморского края ранее неизвестных возбудителей лептоспирозоз, не размножающихся в обычных искусственных питательных средах (Б.В.Высоцкий, В.В.Ананьин, 196ч-). 3 1987'г.' при обследовании природного очага лелтоспирозоз -б одном из районов рисосеяния При-хенкайской, низменности, .проводившегося нами совместно с ПЧИ Сибири и Дальнего Востока и Уссурийской ПЧС,. среди полевых мышей были .также обнаружены носители "некультивируёмых^1 -лептоспир. С помощью разработанной, наш-питательной среды . ( иад/взх ) адекватной физиологическим потребностям этого" возбудителя был выделен штаны - Капк& - и проведена его идентификация согласно'классической схеме. -

'В перекрестной реакции никроэгглктинаций с' 23 групповыми антисывороткамк/штаммами культура наг&а -, реагировала с антисывороткой Те^агаЛ вй1алг3.0е 4-6 до 10% гомологичного титра и г1г.е тегга' . На. этом основании она была отнесена •

К серологической группе Javanica.

Перекрестная реакция микроагглвтинации с референтными штампами, представляющими 13 сероваров группы Jamaica; и акяисывороткамк к ним показала антигенное родство штамма Eanka с эталонами Kerala (cepOSap aeaonl ), Аа 5 (iluminense), De 10 (dehong), I 82 (zhenkang), Teldrat Bateviae 46 (javaniea).

. В тостах перекрестной абсорбции агглютининов с изучаемым и 5—jo референтными шташами/адтисыворотками серогруппы Javanica во всех абсорбированных сыворотках определялось значительное количество остаточных антител к гомологичным штаммам (10-100$). На этом основании в соответствии с правилами Меадуыародного_подкомитета по таксономии лелтоспир итамм ^anfci ОТНбСеК К новому серовару hanka в серологической группе .'avamca

1.4. Геномная дактилоскопия представителей рода-

Xeptospira.

Ранее на других бактериальных моделях (холерный вибрион, легиопеллы и др.) была .показана эффективность метода"геномной дактилоскопии с..использованием ДНК .фага MI3 в качестве молекулярного \ зонда _для родо- и видоспецифической идентификации микроорганизмов, характеризуащася высокой .степень» фено- и^генотипического родства, но различной эпидемической значимостью (А.Л.Гикцбург^с соавт., I58S). В этой связи указанный аетод был использован нами для^изучения геномного полицорфизма^лептоспир различной видовой, серологической:, принадлежности и вирулентности. Работа проводилась на 23-х Штаммах следующих видов: 17 - Leptospira interrogans

(серовары copenhageni, icterohaemorrhsgiae, lai, grippotyphoea,

tarassovi, monjRkor И hanka), 2 - Leptoopira blileia (patoc, bairac-ali), I - Ioptonpira (beptonema) illini, 2 - Ieptoeplra inaiai К I _ leptoepira phor.ey parra.

Хромосомную ДНК выделяли модифицированным методом ¡carme (1971). Эксперименты по геномной дактилоскопии проводили, как описано в работе А.Л.Гикцбурга с соавт. (1987).

Результаты гибридизации ДНК фага MI3 с рестрицировакными фрагментами хромосомной ДНК лептоспир показали наличие гипервариабельных последовательностей в геноме всех штаммов непатогенных видов (Рис.3 - доронки 4-9). При этом отмечен выраженный геномный полиморфизм: каждый штамм имел строго индивидуальную картину гибридизации, за исключением КО ( lyme ) и Еан-яб , имевших клональное происхождение.

Из 17-и исследованных штаммов патогенных лептоспир только з ДНК культур серовара grippotypfcoea обнаружены гипервариабельные повторы,- детектируемые с помощью ДНК фага MI3 (Рис.3- дорокки 1-3, одна полоса гибридизации). ДНК ■ лептоспир остальных ссроваров не гибридизовалась.с указанным зондом. Последний факт представляет интерес с экологической точки зрения, поскольку именно лептоспираы указанного серовара свойственна способность продолжительное время ( до 279-и дней) переживать в 'почвз природного очага в отличие от других лептоспир, например, saxicoeMn« (С.В.Зайцев,

1981). : _ __ _ ........

Таким образом, метод геномной дактилоскопии, с одной стороны, позволяет дифференцировать патогенные штаммы от

23,13

tsiQ^yU*

О'

¡О

-И

СП?

IO

_ 9,42

e> 6,68

— <36 2,32

Ijoptospira interrogans

Leptospira biflexa

48

«Bai-Pa- EcjH Lyme J,ap- t 6 SJOiram-toc (Ly- Jorüi^tone-: __gali I ine) вод na 11:

tPho-■ney Upen

123 .^5 6 7 8 э

Г

Рис. 17. Результаты анализа ДНЯ лептоспир истодом геномной

"дактилоскопии". Исследуемая ДНК расцеплялась задо- , лунлеазой шла ш . Справа указано местоположение и молекулярная масса реперных фрагментов.

г? -

непатогенных, с другой - обнаруживать различия в структуре генома , отражающиеся на одной из основных характеристик лептоспир - способности к существованию в сапрофнткческЬЯ фазе. Третью возможную область его применения ~ контроль микробных коллекций - иллюстрируют следующие факты.

В 1386 г. зС1ш1л et а1. опубликовано сообщение о выделении штамма лептоспир из конного биоптата больного Лайм-борреляозои, который был отнесен авторами к новому виду -ХлрЪоарЦ-а 1пяаа1 , ССрОВар 1уша , .типовой штамм ЙЮ. В процессе работы с коммерческой твинальбуминозой жидкой питательной средой дан производства фирмы игсо нами были установлены факты контаминации двух сзрий среды лег.тоспирами и выделены три штам.«а-нонтаыкяанта. Два из них ( еитн -85 и эмн - 37) в тестах перекрестной абсорбции агглютининов оказались полностью идентичными птамму МО ( 1уте-), а по фенотиппчсским паркерам соответствовали сапрофитаи. При геномной дактилоскопии с ДНК фага М13 втаммы-контаминанты я '¿10 ( 1уие ) имели идентичные . гибридиэационкые профили (рис.3), что доказывало их кло-налькое происхождение. На этом оснований Международному, подкомитету го таксономии лептоспир било предложено.исключить. из рассмотрения вопрос о присвоении видового статуса

ЬерЪоэр^.га ЭлгЛв!, '

II. ОСОБЕННОСТИ ЭКОЛОГИИ ПАТОГЕННЫХ ЛЕПТОСПИР В ПАРАЗИТИЧЕСКОЙ ФАЗЕ СУ!ЦЕСТВОВАКИЯ. ... . •. ■

2.1. Гетерогенность- природных популяций лептоспир по признаку'зирулентыост/.

С целью выяснения вопроса, в какой мере уровень эпидемической активности очагов лептоспирозов определяется внутривидовой и Енутрипопуляционной вариабельностью патогенных свойств циркулирующих в них возбудителей, определена вирулентность 108 полевых изолятоб лептоспир, выделенных на территориях с различной эпидемической ситуацией. В их числе 49 - серсьара сорспЬааегс!. 1 34 - ейрроЧурЬоаа И 25 -

ЬгОпка, ро1, -1агаЕ5от1, ccz.dc!>:, тов^окоу, ае-^гое, вах&>еЫп#.

, В качестве экспериментальной модели использовали^сирий-СКИХ ЗОЛОТИСТЫХ ХСМЯКОВ ( Меаоог1сеиш аиха1шэ) 3-5-НедеЛЬНОГО возраста массой 25-40 г, которым внутрибришинно вводили 7-8-дневнке культуры свегевыделенных штаммов в различных дозах.

Большая часть (91,8^6) географических изолятов серовара сореаЬаееп! зызыззлй летальную инфекцию у экспериментальных' животных с характерным актерогеморрагическим симптоцокомп-лексом; причем все эти штаммы выделены в очагах с высоким уровнем эпидемической активности (Калининградская область, Краснодарский край,-Грузия и др.).".Исключение составляла группа штаммов, выявленных от серых-крыс в Ташкентском., огэисе^ которые вызывали у хомякоб бессимптомное почечное -дептбспкроносительство. Следует отметить, что з этом'регионе спорадические случаи болезни ВеЕля-Ьаскльеьа регистра-^ руатск редко и характеризуйся легким течением (а.Я.Якубова, 1985)._ _ . _ .....'......;

Лептсопиры серовара рпрроэдлоаа такте в ссяовкоы были представлены зысоковируленткыми изолнтами из Московской области, Приморского края и Беларуси, ко в Литве и Львовской

области выделялись культуры, приводящие к развития реналь-ной инфекции. Высокая вирулентность отмечена у всех изоля-ТОВ серовзров mozdok , monjakor , pci , eejroe И

ОДНОГО ИЗ штаммов saxkoebing , БЫДеЛбКНОГО В МОСКОВСКОЙ

области, другой ¡птгмм тсг-о'' яе серовара, но из природного очага, расположенного в зоне кесткого радиоактивного поражения (Припять)', характеризовался низкой вирулентностью, равно как И все культуры сероваров taraeoovi И hanks.

Полученные результаты свидетельствуют о гетерогенности природных популяций лептоспир по признаку вирулентности. Несмотря на очевидную сопряженность между серологической принадлежностью и степенью патогзнности изолятов, з определенных условиях в пределах одного серовара возможно формирование высоко- и слабовирулентных клоков. Обсуждение вероятных механизмов их образования затруднено из-за отсутствия сведений о молекулярно-генетической организации факторов патогенности лептоспир, а также процессах генетического обмена, обеспечивающих гетерогенность их популяций. Не лииено вероятности допущение о селективном нехайкзме формирования популяций лептоспир с различным уровнем вирулентности в процессе сиены ими естественных сред обитания. Динамическая изменчивость структуры популяций хозяина по показателям численности, возрастного состава, иммунной прослойки, а также смена фоновых видов в природных очагах, могут определять и динамику изменений популяций лептоспир, в данном случае по признаку вирулентности.

2.2. Гостальная специфичность патогенных дептоспир.

Как Оь'ло установлено сначала эгиэоотологически-ми наблюдениями , а затем подтверждено в эксперименте , важной экологической особенностью патогенных лептоспир является доогатсчпо строгая приуроченность отдельных сероваров к определенному виду хозяина или гостальная специфичность ( в.веъи£1ег1 , 1958; Ю.Г.Чернуха, 1985). Согласно полученным нами ранее экспериментальным данный гостальная.специфичность в значительной.мере обусловлена выраженными видовыми различиями в восприимчивости хозяев к лепгоспирам разных сероваров (Й.Б.АнаньЕна,.1974). Дальнейшие исследования показали, что специализация патогенных свойств лептоспир проявляется не только в отношении определенных видов, но п географических популяций животных. Доказательства этого полокзкпя получены при изучении.сравнительной восприимчивости, полезых. шшей"( Аро4еаиа agrari.ua) . кз различных географических регионов к лептоспирам сероваров погйок , шоаЗаЭсот . И роьопа ', СврОЛОГИЧеСКОЙ

группа .'Рохогт . (Таблица 1)<

Заражение лептоспирами »огаок полевых мышей, обитающих на Неверном лавказе, в случаез приводило к развитию почечного иссательств&. Напротив, введение им равных дез

7

(ХО' ЫИКОООКЫХ клеток) культур аапЗ<Ло/ И рошота. . выделенных от сельскохозяйственных кивотных, не вызывало ронадькоЧ инфе?:цмк". Б опытах на полевых мышах дальневосточных популяций (срзднеачурских к уссурийских) установлено,

Г г

Таблица I. Восприимчивость полевых .чашей различных географических популяций к лептоспираы серогруппк

Pomona.

Серовар Штамм

7ептоспироносительстБО у полевых мышей:

европейских среднеамурских уссурийских

mozdok Apod,agr..T08 б/6х 0/15 0/21

monJakoY Манихино 0/24 0/15 0/21

рошопа Июньсьий 2 О/б 0/15 0/21

х - в числителе - число зверьков,, в почках которых обнаружены лептоспиры, в знаменателе - общее чисчо зараженных.

что они резистентны не только к лептоспираы nonjakor

и

рсшопа , НО И шсгйок •

Согласно зпизоотологическим наблюдениям полевые мыаи играют роль основного резервуара лептоспир серовара покаск на территории европейской части России, Западной Украины, з то время как ни в-Алтайской крае, ни на Дальнем Востоке циркуляции этого возбудителя не обнаружено, выявленный"нами факт циркуляции среди уссурийских полевых мышей лептоспир ранее неизвестного серовара - ьшка - служит дополнительным подтверядением субвидовой гетерогенности полевых мышей по признаку восприимчивости к возбудителям лептоспирозов. В то же время, способность лептоспир паразитировать в организме хозяев определенных видов и географических популяций является важным экологическим маркером, характер«-

зующиы внутривидовые таксоны возбудителя.

при изучении патогенных свойств лептоспир нового серовара ьгл}са была отмечена чрезвычайно низкая их вирулентность, в процессе многократных ( п= 16)последователь^ ных пассажей штамма Нал]® через организм золотистых хомяков отмечалось снижение продолжительности почечного лептоспироносительства, равно как и доли лептоспироносителей среди инфицированных животных (.Таблица 2).

Таблица 2. Результаты пассирования лептоспир серовара Ьаз&а через организм золотистых хомяков.

V

К пассажа Яндекс йаксимальяая продоляитель-

абс. % ность ( в дпях)

лептоспироносительства

- XX

1-4 28/30 53,3 ¿Л

5-8 25/28 89,3 33

9 * 22 15/29 51,7 26

13- 16 8/2 9 27,5 18

х - пассажи проводились I раз в 3-4- недели: суспензию пот;зк хомяка-лептослкроносителя вводили внутрибркшияне животным следующей группы и т.д.

хх - в числителе - число животных, в почках которых обнаружены лептосписн, в знаменателе - общее число инфицированных.

По .леей вероятности описанный опыт моделирует процесс естественной элиминации'лептоспир из популяций несвойственных ии видов животных. Вакно отметить, что он протекал

значительно интенсивнее при заражении золотистых хомяков смешанной культурой лептоспир серозаров Ьшла и ^1рро-^ьоза : ухе на 2-3-ы пассахэ возбудители ьспка не обнаруживались в почках, а концентрация впррспурьоэа прогрессивно возрастала, что приводило к гибели нивотнкх. "оследнее наблюдение свидетельствует о важной роли конкурентных взаимоотношений патогенных лептоспир различных сероваров. в частности," конкурентного исключения как одного из факторов гостальной специфичности, .....;

В определенных случаях несмотря на узость экологической ниши фактор конкурентного исключения не действует и у хозяина развивается смешанная инфекция ( полевки-экономки: оазосоаЫпг/

ег1рра*ур&°за , свиньи: рождай/ гагаРзотП ). ВОЗМОЖНЫМ объяснением этого явления шяет служить допущение о селективном тропизме лептоспир отдельных сероваров к конкретным, биотопам на тканевом уровне, например, различным отделам нефрона.

2.3. Чувствительность Хер1обр1га к лептоспироцидной активности нормальных сывороток животных.

К числу вааньгх маркеров адаптации грамотрицательных бактерий к организму хозяина относят степень их чувствительности к бактерицидной активности нормальных сывороток кизоткых ( ошпг , 1977). В этой сзязи был изучен спектр лептоспироцидной активности нормальных сывороток (ЛАС) аивоткых 8-и видов, обладающих различной степенью восприимчивости и чувствительности к лептоспирозной инфекции: морской свинки, кролика, курицы, барана, крупного рогатого

скота, .полевых мышей, обыкновенных полевок и полевок--'

\ ÖKOHOÜCOC. В ОПКТаХ ^СПОЛЪЗОВаЛЙ 273 ШТаИМа: 222 Leptospira

interrogans (18 Сер0ГруПП,' 116 СбрОВарОВ), 36 - Leptospira • » .

blflexa . (21 серогрулпа, 25'сероваров), 15---Leptospira ;

kaiaohataaica I s? . II. . ЛАС . Определяли ПО МеТОДУ H.Johnaoa (1967)._ ■■ ' ■ •• ; .

Нормальные, сыворотки- морской свинки, обыкновенно полевок, по'левон-зяоноыок.ц полевых ыышёй не обладали лептоспи-роцидным'действием. Степень вырзгенности'ЛАС животных дру-. гих видов существенно варьировала. Отмечена высокая чувствительность..к ЛАС барана и КРС сапрофитических и казахстанских штаммов (.97,7-г lOO'fo), а такке.значительные колебания этого показателя у патогенных,- от 100/5 чувствительности лептоспир TarassoTi до абсолютной резистентности -Calledeui . Все свекевыделенные вирулентные штакш'(-'25)

CepOBapOB Copenhagen!, grippotyphosa, решопа И »asXoebiiig ■'

также оказались резистентными к ЛАС,, в то время как среди авирулентнкх культур встречались как чувствительные, так к резистентные. Бескрячковые'морфологические варианты лгптосп'ир отличались от своих крючковых аналогоз высокой степенью чувствительности к ЛАС. Полученные данные свидетельствуют против Бозиожкостй использования указанного критерия с целью дифференциации патогенных и сапрофитических лептоспир, с одной стороны, и авирулентных от вчрулетчых - с другой, ках ранее предлагалось Jo.4nson и »дБсг! (1367). Вместе с тец, полученные данные о

•количественных различиях в агглютинирующей' способности нормальных сывороток в отношении патогенных и сапрофитиче- • ских лептоспир позволили установить гфяроду'лозсноцологитель-вых реакций при использовании сапрофнтов в реакции микроагглютинации, при диагностических исследованиях.

2Л.. Особенности органной персистенции патогенных .' лептоспио. -

О/ . - ' ;

. • Согласно традиционным представлениям'эпителий проксимальных' извитых канальцев коркового слоя почек - не только основная, но и единственно возможная локализация'патогенных лептоспир в организме специфического хозяина. 3 последнее десятилетие были получены экспериментальные доказательства способности лептоспир оероваров Ьвг^а, ЪгаУ.з1ата и гмепгЬеп 'персистирозать не только в почках, но и слизистой оболочке различных отделов гениального тракта КРС и сзяней ( 5Ша V. . 1985,1986), что подтвердило ранее предложенную гипотезу о возможности полового пути передачи инфекции в популяциях природных хозяев (В.(;.Киктенко,1962).

Клинические данные об относительно зысокоа частоте' неврологической си'ыптоматики у больных лептсскирозами и возможности развития отдаленных последствий (от астеновеге-тативнего синдрома до тетраллегий й-необратимых эпклеми-формных знцефвлепатий) /в.Еаригс , 1982> косвенно свидетельствуют о нвйротрогдаости патогенных лзптоспир. В згой связи наиз проведено экспериментальное изучение их способности персистирозать в" ткзнях центральной нервной системы

(млекопитаюцих восприимчивых видов, но обладающих различной степенью инфекционной чувствительности к лептоспирозной инфекции.

Работу проводили на следующих экспериментальных моделях: сирийских золотистых хомяках 3-5-недельного возраста кассой 35-40 г, взрослых обыкновенных полевках ( Mlorotua arralls ) МЭССОЙ 25-30 Г. И ТвЛЯТЭХ 6-МвСЯЧНОГО возраста. Для заражения использовал:: 7-8-дневяыс культуры 11-И штаммов сероваров copenbageni, grippotyphosa, mosdolc,

taraaeori, hante.

Инфицирующий материал вводили хомякам и полевкам внутри-брюшиннс, телятам - внутривенно. В различные сроки после заражения аивотных анестезировали эфиром, проводили некро- -псию, а печень, почки и головной мозг исследовали на наличие лоптоспир микроскопическим и бактериологическим ..методами .

Инфицирование хомяков лелтоспирами сероьара copechagcni в сублётальннх дозах приводило к раззитив практически Сессиыптомной формы инфекции, единственными проявлениями которой были кратковременная атаксия и гиперестезия на 814- день после заразения. Б 83- 100^ случаев у зверьков развивалось почечное лептоспиропосительство, максимальная продолкительность которого составляла 126 дней - срок • наблюдения (таблица Ъ). В тканях головного мозга лептоспи-ры обнаруживались с меньшей частотой: 28-50% в зависимости от штамма, а максимальная продолжительность переисгенцин составила 115 дней.

ТАШПА 3. ПЕРСИСТЕНЦИЯ ЛЕПТОСПИР СЕ1ЮВАРА.. соииншэт В ОРГАНАХ ЗОЛОТИСТЫХ ХОМЯКОВ.

ШТАММ ДОЗА '.. ДЕТАЛЬ- Обнаружение лептоспир в органах макс.длительность

(ыикр.кл.) ЯОСТЬх - персистенции(в днях)

печень почка мозг печень почка мозг

1. Свинья 45 ю7 6/6 б/б б/б 4/6 - -

п ю2 0/8 0/8 8/8 4/8 115 115

2. Rat.norT.X10I ш7 6/6 5/6 . 5/6 3/6 - -

и 102 0/8 0/8 6/8 3/8 126 84

3. Rat.norr.36?, ю7 б/б б/б б/б 4/6 - -

ю2 / 0/8 0/?хх 7/7 2/7 92 53

х - в числителе - чиолс павших животных или дсптоопироносктелей, в знаменателе- оовде число зараженных.

хх - один хомяк пал по неспецифическим причинам.

Заражение хомяков' лептоспирани grippotyphosa также приводило к развитию почечного лептоспироносительства в 73-100$ случаев, в 30-33% лептоспиры изолированы из головного мозга на 61-й день болезни.

При экспериментальной гриппотифозной инфекции у обыкновенных полевок ренокультуры изолированы в IOUyè случаев, а присутствие лептоспир в мозговой ткани установлено у 11,8'/» зверьков на 34-й день (срок наблюдения). Как и при спонтан-' sifu лептоспирозе в природных условиях, заболевание протекало бессимптомно.

лептоспйрозная инфекция, вызванная возоудитслпми серовара œozdok , проявлялась в форме почечного лептоспироносительства у 4-х опытных телят, причем из мозга одного из них с помощью биопробы на золотистых хомяках на 46-й день после заражения удалось выделить культуру.

Иная картина отмечена в аналогичных опытах со штаммами сероваров taraoaovi и hanta , представленными слабозирулентнами культурами. У хомяков ренальное носи-тельство лептоспир tarassc-ri наблюдалось в 87- 100$ случаев, его продолжительность колебалась от 57-и до 127-и дней. Ни в одном случае из тканей головного мозга не удалось выделить культуру. Из 116-и хомяков, инфицированных штаммом hanka ,лептоспиры обнаружены в почках 65% зверьков, в тканях головного мозга - у одного (0,86^).

Таким образом, селективным тропизмом к нервной ткани,-по нашим данным, обладали ьысоковирулентные птаммы серо-.]

вароз coppahageni , grippotyphosa к . isozdok •

У лептоспир С пониженной вирулентностью - гагаэзот!, ЬапЗа -сохранялась способность к персистенции'в почках, но некро-тропность' отсутствовала.

2.5. Патсморфологические последствия персистенции лептоспир в тканях центральной нервной системы сирийских золотистых хомяков.

Следующий этап изучения феномена персистенции лептоспир включал определение патоморфологических изменений в тканях почек, головного и спинного мозга золотистых хомяков. Органы, извлеченные в процессе некропсии, фиксировали в нейтральном формалине, нидкости Буэна, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином-эозином и-по методу Ниссля.

Патогистологические изменения в органах хомяков, инфицированных лептоспирами серовера еорепЬаВеп1 .спустя 3 месяца от-момента заражения выраналксь в следующем. В спинном, стволовых отделах головного мозга, ыозжечко обнаружена изменепия первичнодестоуктквкого характера по типу спон-гиозной энцефалопатии. В паравентрикулярном ядре гипоталамуса, сером веществе спинного мозга многие пейроны находились в состоянии лиггноза, гяперхрэматоэа и вакуолизации; в ряде случаев отмечался лизис и вапэдение нейронов.

и белой веществе продолговатого н спинного мозга таете определи аас-ь вакуолизация нейронов и отчетливая гипертрофия астро^ли'/.

1< тканях головного":! спинного ксзга хочякоз, ¡-кф'гццрэ-ванпах лептосш-:рш.'К сероларг игачаог: а штс.е з нейтральной гру.пю паюгастояогйчгскя:. •п\,с.:-:е:,.иГ и> счьпр^^г.о.

Изменения в корковом слое почек хомяков обеих экспериментальных ГруПП ( copenhageni И tarasaovi ) ПОЛНОСТЬЮ совпадали с неоднократно описанными в литературе и выражались в белковой дистрофии эпителия извитых канальцев.

'Хаким образом, патогистологическими исследованиями установлено, что пероистенция лептоспир в тканях.ЦНС мохет сопровождаться изменениями по типу губчатой энцефалопатии ( Status spoagiosua ), ранее описанной при медленных инфекциях, вызываемых вирусами (А.П.Авцын, 1972; В.А.Зуев, 1985). При спирохетозной инфекции подобная морфологическая картина наблюдается ..первые.

Продолжение исследований особенностей органно й перси— стенции патогенных лептоспир представляется перспективным в двух аспектах:' с позиций раскрытия этиопатогенеза под-острых и хронических энцефалопатия и изучения механизмов развития отдаленных клинических последствий лептоспирозной инфекции. Неврологические последствия описаны при лептоспи-розах человека, вызванных возбудителями серо группы iotero-

haenorrhagiae , реже Grippotyphosa, Pomona, Sejroe И

Hetidoaodia • Способность к персистенцик в ЦНС млекопитающих лептоспир первых трех серогрупп доказана в наших экспериментах. Таким образом, определение на экспериментальной модели "нейротропностя" лептоспир может рассматриваться как прогностический маркер для оценки степени риска раззития отдаленных неврологических последствии при лептоспирозах.

В этой связи перспективной представляется разработка специфичных и чувствительных тест-систем на основе методов

нового поколения (полимеразяая цепкая реакция и др.) для изучения феномена персисюнции и проведения диагностических • исследований, а такзе использование тактики лечения больных другими нейроспирохетозаыи, в частности, Лайи-боррелиозш.

III. ЭКОЛОГИЯ ЛЕПТОСПИР В САПРОФЙТЙЧЕСКОЙ ФАЗЕ СУЩЕСТВОВАНИЯ.

Несмотря на ограниченность сведений об особенностях экологии патогенных лептоспир з сапрофитической фазе суще- ' ствования, имеются веские основания для вывода об их внутривидовой гетерогенности по способности к длительному существованию во внешней среде и толерантности к ее абиотическим факторам. Они основаны на результатах экологических экспериментов, установивших, что лептсспяры серовара кг1рро1;урЪэ5а способны переживать'н почзе природного очага до 279- суток, а серовара еахьоемдв - менее одних суток (С.В.Зайцев, 1981;.

а границах рода Хе^оэриа ' к составляющих его видов мояно выделить группы резко отличные по относительной роли паразитической и сапрофитической фаз существования в судьбе популяций. Одним, например, серовара 5г1рр01урЬеса .". свойствен ¿пирокия ареал распространения, широкий круг хозяев, включаЬщяй далекие з экологическом и филогенетическом отношении виды, преимущественно водный путь передача инфекция, способность к длительному переживанию бо гневней среде, наличие, как у сзпрофитов,.гипервариабельных повторов з геноме. Напротив, для лептоспир серсгруппн (сероьарн Ьаг13о и вахУорыде } доказана строгая

- ъг-

гостальная специфичность, возможность полового пути передачи инфекции. Внешняя, среда не играет сколько-нибудь существенной роли в сохранении популяций, либо эта роль отрицательна. Между этими крайними вариантами вероятно существует градиент переходных форм.

Изложенные факты позволяют, прийти к заключении, что термины "сЕпроноз" йли "сапрозооноз", часто используемые применительно к лептослирозам,'правомерны только в отношении тех этиологически:: форм, для которых имеются'доказательства возможности существования их возбудителей в сапрофитичзской фазе, на созрл(енцоы уровне знаний - только лептпепир серовара giippotTphoca

17. ВЛИЯНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ ЗШОГМ ЛЕПТОСПИР НА :. . ЗПИДЩЧЕСКОЕ ПРОЯВЛЕНИЕ ЛЕПТОСПИРОЗОВ.

Как свидетельствует анализ многолетних эпидемиологических и эпизоотологических наблюдений, выракенкое эпидемическое проявление свойственно .возбудителям, относящимся к ограниченному числу сероваров ( copenbagenl, рогопа и др.). Для' других характерна либо ничтожно малая эпидемическая реализация ( taraseori )j она значительно низе ожидаемой ( barajo ), принимая во внимание высокую пора-женность этими лептоспирозами сельскохозяйственных хивот-ных, а также значительный уровень профессиональных и рекреационных контактов населения с антропургическими очагами. Поскольку причины этих различий не вполне ясны, мы предприняли попытку оценить вознонное влияние экологических особенностей возбудителей на эпидемическую реализаций лептослирсзной инфекции.

Работа проводилась в политипичных и полигостальных очагах лептоспирозов, в которых при прочих разных условиях возбудители одних сероваров инициировали спорадическое проявление инфекции среди людей, а другие не имели эпидемической реализации.

В течение 2-х летних сезонов 1986-198? гг противоэпидемическим отрядоы лаборатории лептоспирозов НИИЭМ км.Н.Ф. Гамалеи РАМН проведено комплексное изучение природных и антропургических очагов лептоспирозов з 8-и районах Калининградской области. При анализе полученных результ&тов отмечено несовпадение этиологической структуры лептоспирозов грызунов, сельскохоаяйственных зивотных и людей. Исследование в РЫА сывороток свиней из'6-и хозяйств области выявило наличие специфических агглютининов в 4-7,случаев, Преимущественно К лептоспираа Sarassori Iatero-

hse-Eorrhpgiae (19.I^) И Pomorn (12,5$). "з ПОЧеК СВИНей выделены 36 ытакиов: 31 - taxa3SOTÎ.' , 3 - copfcnh^eai и

2 — ротлаа •

В этиологии лептоспирозов КРС по данным серологических исследований доминировали серегруппы sejroe (35,5£)>

Grippotn'bosa I^terohaomorrii^piae

(.16,7 56).

Согласно результатам обследования природных с<гагоз среди серых крыс циркулировали преимущественно лептоспиры Сепогруппы Iotorohaemorrh.4glae (92(3)'Î) СерОВЗрОЗ coptnbsiîcnJ. и lctsrohaor.orrkigiu j ПОЛеЗЭК-ЗБОЕОКО:: - ci-ippotyphosa

(31,зеилероек-бурозубок - pot" (79,5J£).

За тот же период m основании кчяляпо-апидечаояолне-

ских я лабораторных данных диагноз лоптоспироз серогруппы

Icterohaeaorrhagiae установлен у 56% бОЛЬНЫХ, grippotyphoaa-- 32%, Sejroe - и pomona - 4$. Таким образом, лептоспиры серогруппы Tarassoyi , широко распространенные среди свиней в антропургических очагах, равно как и poi ( JaTBxiica J, циркулирующие в природных очагах, не были представлены в этнологической струк!'уре заболеваний людей.

Среди экологических факторов, обусловивших указанные особенности, следует упомянуть следующие. Доминирование лептоспир серогруппы Ictezohaeoorrhagiao В ЭТИОЛОГИЧвСКОЙ структуре заболеваний людей можно объяснить высокой численностью основного резервуара инфекции (серой крысы), интенсивностью эпизоотического процесса в их популяциях с вовлечением кивотных других видов (свиней, КРС, землероек, полевок-экономок], а также высокой вирулентностью циркулирующих в очагах штаммов. Эпидемическое проявление лептоспир серогруппы Grippotyphosa также обусловлено высоким уровнем вовлечения в эпизоотию основных хозяев - КРС в антропургических очагах и полевок-экономок - в природных. Выделенные в очагах штамма так« отличала высокая вирулентность.

Незначительная заболеваемость людей лептоспирозом Pomona ' вполне соответствовала тому удельному весу, который имела эта инфекция в патологии свиней.( 12,Tfi).

Низкое эпидемическое проявление лептсспироза sejroe. при достаточно высокой пораженнссти КРС (37,5$) , а также его отсутствие при лептоспирозе pol легко объяснить, принимая во внимание экспериментальные доказательства

ПОЛОВОГО пути передачи инфекции hardjo у коров ( >.ЗШа , 1985) и мнение об аналогичном механизме передачи лептоспир -pol. в популяциях обыкновенных бурозубок (В.С.Киктенко, 1985). Отсутствие регистрации случаев лептоспироза WrassoYi среди людей на протяжении нескольких лет на фоне высокой пораженности свиней этими возбудителями, по всей вероятности, связано с низкой вирулентностью циркулирующих в очагах штаммов (Раздел 2.1).

• Таким образом, в условиях конкретных-природных и антро-пургичесних очагов оказалось возможным проследить влияние некоторых экологических особенностей возбудителей, представляющих различные внутривидовые таксоны, на характер эпидемической реализации лептоспирозной инфекции.

ВЫВОДЫ

I. В эксперименте установлена способность патогенных лептоспир персистировагь в тканях центральной нервной системы млекопитающих-восприимчивых видов, обладающих' различной степенью инфекционной чувствительности к' лептоспирозной инфекции (золотистых хомяков, полевок, зелкт).

• 2. Селективный тропизи к нервной ткани определен у выеокозирулентных возбудителей сероваров cojenbageni, gzipj/otypboea и aoídok. • У лептоспир с пониженной

вирулентностью ( tarassoYi , baala ) СОХраНЯЛаСЬ СПОСОбность к персистенции в почках, но изйротропкость отсутствовала.

.3. Определены, патоморфологичёские' последствия персистенций лептоспир в тканях головного и .спинного мозга золотистых хоуякое', выражающиеся в изменениях первично-. деструктивного характера поткйу спонгиоэных энцефалопатия ( swms Bporvjicaua' ), ранее не описанных при спирохетозвх.

В опытах- на природных и лабораторных моделях. (полеЕых мьшах,'золотистых хомяках) показано,' что свойственная патогенным лептоспкрам отдельных сероваров гостальная специфичность обусловлена, как видовыми, так. и',популяцией- -ными различиям'/! в восприимчивости их теплокровных хозяев, • а также конкурентными взаимоотношениями между возбудителями на тканевом уровне, в частности,' конкурентным исключением.

5. Установлена гетерогенность популяций патогенных лептоспир по признаку вирулентности: в процессе их цирку- ■ "ляции в природных очдгах, агро- и урбоценозах происходит образование как высоко-, так.и слабсвирулентных клокое, даже В пределах одного серовара C'copenhageai, grippotyphosa,. ss-ikoebir^).

6. С помовц>ю гибридизационпого теста с. ДНК фага м13 показано наличие гипервариабельных последовательностей в геноме лептоспир •непатогешшх видов ( leptoepьв ыяеш,

Xaptosplra phoney parva, Leptoneme. illini, boptospira inadaiJt .3 также одного ИЗ сероваров Leptospira interrosana - grippotypljosa. метод геномной дактилоскопии i/охет быть' использован з целях видовой дифференциации лептоспир, контроля микробных коллекций и, вероятно, оценки их способности к длительному существованию во внешней среде.

7. На модели лептоспир серовара grippotyphose. определена высокая таксономическая эффективность реакции микроагглютинации с панелями моноклональных антител, позволяющая дифференцировать итамиы на субсеровариантном уровне.

8. Выделен и идентифицирован новый серозар капы в серологической группе Ja-ranica -.ранее неизвестный возбудитель лептоспироза, циркулирующий в популяциях полевых гшпей Приморского края и отличающийся от других представителей патогенного вида низкой вирулентностью и своеобразными питательными потребностями. Разработана питательная среда для его культивирования.

9.Получены доказательства клонального происхождения штамма 1BI0 (серовар ijae ), ранее заявленного schmia как новый вид лептоспир ( ь. lnadai ), и штаммоз-контаминантов выделенных нами-из коммерческой питательной среды вага , что послужило основанием для Ь'елдународного подкомитета по таксономии ИСКЛЮЧИТЬ его ИЗ списка Speeles incertaa asdle.

10. Представлено обоснование экологического своеобразия патогенных лептоспир-различных внутривидовых таксонов по признакам гостальной, органной, тканевой специфичности, относительной роли паразитической и сапрофитической фаз существования, в значительной мерз обусловливающих характер эпидемического и клинического проявления инфекции при отдельных этиологических формах лептоспирозов.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАНИЙ ПО TE!J!E ДИССЕРТАЦИИ.

1. Золотистые хомяки f Cricetua buiatua ) как эксперимен- • тэлькая модель лелтоспирозной инфекции // Сб.Лабораторные животные з медицинских исследованиях.Материалы конф. М.,-1975 - с. 185 (соавт.Ю.Г.Чернуха).

2. Dependence of Pathogenic Properties oi ^sptoapirae on Anical

u>

Subspeoies // Zbi.Bakt.0rig.A25I - 1975- ?.175-Х7Э(соавт. Ю.Г.Черну-xa, И.Л.Коковин, А.П. Девятова и др.).

3. ¡Зависимость антителогенеза от вида хозяина возбуди-тел.'// Сб.Лелтоспироз. Тезисы докл. У1 Всесоюзной конф. Баку - I97S - с.185 (соавт.Ю.Г.Чернуха).

4. Патогенносхь лептоспкр различных серологических типов для некоторых видов диких грызунов // Там же с .139-149 (соавт.Ю.Г.Чернуха, И.Л.Коковин).

5. Эпидемиологическое значение некоторых иммунологических показателей источников лептоспирозной инфекции // Сб. Иммунологические аспекты эпидемиологии.Тезисы докл.Кишенев. 1977- с.103-104 (соавт. А.1!.Самохвалов, Ю.Г.Чернуха,

ID.А. Малахов и др.).

6. .Метод мембранных фильтров для выделения лелтослир из воды открытых водоемов // Сб.Актуальные вопросы санитарной микробиологии М.,-1978 - с.11-12.

7. Серологическое исследование на лептоспироз речных бобров ( Castor fiber )// Материалы симпозиума по лептоспи-розу.М.- 1979 - с.33-34 (соавт. Е.В.Карасева, И.Л.Коковин).

8. Эпизоотия лепгоспироза среди серых крыс на рисовых полях в Краснодарском крае // Тезисы докл.УН Всесоюзной конф. по лепмспирозу.Киев- 1979 - c.III-ИЗ (соавт. Е.В.Карасева, В.А.Рыльникоз и др.).

9.Индикация лептоспир методом флуоресцирующих антител// Сб.изучение гуморального и клеточного иммунитета у здоровых лиц и больных. Ярославль.- I98Q - с.121-123(соавт.С.В.Зайцев).

10. Влияние ионов трехвалентного железа ка вирулент- « -ность лептоспир серовара mozüok // Материалы У съезда

эпиц., ыикроб., паразитол.Азербайджана.Баку- 1980-с.15-16-(соавт.й.Г.Чернуха).

11. Определение физико-химической структуры антител

в сыворотке крови и моче телят при экспериментальном лепто-спирозе// Тезисы докл. 3-й Всесосзной конф.по профилактике и ыеран борьбы с лептоспирозоы с/х нквотных.Махачкала- 1980-с.130-131 (соавт. Ю.Г.Чернуха, Ю.А.Малахов, А.П.Самохвалов).

12. Эпизоотия лзптоепироза а популяциях серых крис свиноводческих ферм // Там не. с.77-78 (соавт.З.В.Карзсева, 3.С.Шишкина и др.).

13. Trainicg Exercise on Veaigatcg Disease Cootrol fcograame

in a Serefioping CouutrX. P*rt III. Leptospirose 0ÎEP/O3SH TrcjeoV/ M.-196I- p.1-107.

(соавт. Л.Н.Ходакевиу, О.Е.Петручук).

14. Роль серых крыс з природном очаге лептоспироза на рисозых полях // Сб.Экология и медицинское значение серой красы. АН СССР. M.-- 1983 - C.6S-7I (саавт.Е.В. Карасева, Е.А.Рытаников).

15. Бактерицидная активность нормальных сывороток животных некоторых видов в отношении патогенных и сапрофитных лептоспир// Журнал ыикрооиол,- 1983- №6 - с.33-3? (соавт. Ы.Г.Чернуха.

16. ЗТИОлогическая Структура ЛеМОСПИрОЗа 1сЪегоЬ1ешог-гьасае серы:т крыс (. н^гйм Е0.ггей1сш> )// ХурНЭЛ ЫИКрОбИОЛ.-

1983 - »6 - с.24-26 (соавт.К).Г.Чернуха).

17..Природа ложноположительных реакций при использовании сапрофитных штаммов лептоспир в серологической диагностике лептоспирозов животных // Тееисы докл.УН Всесоюзн. конф.по лептоспироэам. Тбилиси- 1983- е.- 259-260 (соавт.Ю>Г.~Чернуха, Е.М.Петров). "

18. Чувствительность патогенных и сапрофитных лептоспир к бактерицидному действию мертиолата натрия //.Там ге-с.¿60-262.

19.. Сероэпидемиологическое исследование в антропогенно-

трансформируемом очаге Косковской области у/ Там ке - с.137-135 (соавт. Е.л.Рейчук, М.З.Солошенко, Л).Г. Чернуха).

20,. Чувствительность различных морфологических вариантов Хоргозр1га . к лепгоспироцидной активности нормальных сывороток жизотпых // Журнал.иикробиол.- 1984- «10 -с.72-73 (соавт,¡0.Г.Чернуха). .

21. Взаимоотношения изяду патогенными лептоснирами и дикими грызунами в условиях экспершгента//Сб.Фауна и экология грызунов.Изд.ИГУ- 1985- вып.16 - с.107-127.

22. Различия в восприимчивости полевых иь1шеЯ Алтайского края и Московской области к лептсспярам серэзара яо?ло)с серо группы ьаом. // Курнгл };икробиол.-19а5-Ч 2 - с.45-49. '^согвт. В.Г.Чернуха, О.А.Евдскииова, А.й.Чеховлч;.

23. Лептоспироз у серых крыс (. Еаииз погтег!сиз з»г;0

в Узбекистане// Сб. Серая крыса. I всесоюзк.совещание М.-1533- т.2- с.25-51 ^соавт. Е.З.Карасева, К.Я.Нхубова;.

2'!-. влияние рисосеяния ка природные очаги лептссяироза на Кубани /[ ¿'юля. .'/осковск. об-ва испнсат.природы. итд. биологии - 1986 - т.51- зып.5- с.25-3.9 (соавт. Е.В.Карзсе-ва, В.А.гыльнкков и др.).

25. Идентификация штатов лепгоспя? оерогруппк г^го-

ЬассгтгЬаЙЕ!? , ЗЫД5ЛеНННХ НЗ территории ЗСС? ОТ С«?КХ К?ЫС И

из других источников // Иатерпагы г.о зкологии и катодам ограничения численности сероЗ крысы.3-е Везссюзн.созег.вяно. И.~1Эо? - ч,2- с.237-242 {соззт.'й.Г.Чернуха, й.В.Карасева).

2а. Популяции патогенных гзптосппр раз личной влругект-' ностл в природе // Хурн.микробпол.- 1988- £8 ■- с.13-16 (сеевт. О.Г.Чернуха, К.Я.Борозксз).

27. Источник:; инфэхцил в счагз иктерогеыоррагичбекэго лелтоеппроза // Об.Злизоотол., зпйдзц., средства дгагн., терапии и яро|.ен$9ец. болезпеГ; обеих зля человека п зазогл. львоь - 1983 - с.168-163 (соагт.О.А.Ездокваэзг, 1С.Г.Чернуха. С .В. ЗзГ:п,ез).

28. Выделение штампов лептоспир серовара lyne и неидеитифицированных лептоспир из коммерческой питательной среды// Там же - с.135-136.(соавт.Е.М.Петров).

29. Персистирование патогенных -лептоспир в центральной нервной системе диких грызунов// Тезисы докл. I -й

Всесоюзк.конф. "Проблемы патологии а эколог.взаимосвязи

it

болезеней диких теплокровных и с/х кивотных.Новосибирск-

1988 - с.23-24 (соавт.A.B.Чеховкч, D.Г.Чернуха).

•j)

33. Пораденность сельскохозяйственных нивотных в очаге иктерогеморрагического лептоспироза// Там же - с.56. (соавт. В.Г.Чернуха, О.А.Евдокимова).

31. Особенности эпизоотического процесса при иктеро-геморрагическом лептоспирозе // Тан ке - с.36(соавт.

Ю.Г.Чернуха, O.A.Евдокимова).

32. О несоответствии ареалов хозяина и возбудителя// лТурксл кикробиол,- 1988 - Й12 - с.71-73 (соаг,т.И.Г.Чернуха, О.А.Евдокимова).

53. Функционирование осуценного природного очага

лептоспирозов в Нечерноземье// Журнал минробиол. - 1988-№9 - с.51-56 (осавт.Ю.Г.Чернуха, А.В.Чехович и др.).

34. Tha го1ч of Iron conpousds 1д the iat.hrjgons3io of Leptospirosis Infection// Isr.J.yet.Msi.-I9Sa- r.44- al- pp 67-6g.

(соавт. Ю.Г. Чернуха).

35. Persistence of Pathogenic ^eptospirea in the Central Nervous System of .Animal Hosts// in. s ZOONOSIS. YI Joint Meeting of the European Leptospira Yorkers. Brno- 1988- p.7.19 (co.authcr Yu.tt. Chemukba).

36. Populations of Pathogenic Beptospirea with Different Virulences In nature// The зале book - p.7.25 (co-author Yu.O.Chernukha),

37. Эколого-патогеветические особенности .различных этиологических форм лептоспирозов// Тезисы XII Всесоюзк. яояф. по природной очаговости болезеней.Новосибирск- 1989-с.8-Ю (соавт.Ю.Г.Чернуха). • 4 ' "

'38.' Серая крыса.Иедицикское значение.Летоспкрозы// В кн.: Серая крыса.■Систематика, экология, регуляция численности - Изд."Наука" - I99Q - с.353-358.

39. Совершенствование■иммунобиологических лзптоопирозЕых препаратов.Экспериментальное изучение новой концентрированной очищенной лептоспирозной вакцины против иктерогеморрэгиче-ского лег.тоспироза для иммунизация лвдзй// 2урнал микробиол-1950 - ;г2 - с.ч-7-51 (соазт.Б.А.Ягозкин, H.H.Костила и др.).

40. Использование ДНК фа^а Ы13 для выявления геномного полиморфизма у возбудителей бактериальных инфекций// Сб. Бактериальные плазмиды.£езиоы докл.конф.Нальчик - 1990 -'j.öc-87 'соавт.'Л.А.Иагияяк, О.ЯЛ'окзрская и др.).

41. Isolation

tuirt Identj f ication of a new cerovax hcxüsi. of Leptospira intcrrocn-ar Jarsrdoa aerogroup // in:Lept0Epir03is. research Conference .Abetr. Eiiine.Jtipan- 1930- p,C3.I.

¿1-2 ienaio polymorphic cf I-aptosptiR SSi аз a KcShcI of tsreii' iicntiiicatioi// The ssre boolc - oo-authors

43. Data on 1'atuxai Pool of Leptospirosis in Terrotoriss Affected by radio-active "^terials// The, »¿me book- 02.1 (co-authors Yu.O.CIleroukta,

O.A.EvdokimCYa).

^4. Xeptospiroais ,iu Idthuaaia // In.: beptospirosi3 Abstracts YXI European and IX All-Union Research conference.Иозссл- I990-p.I.II (co-authora L.Mott'junas, B.Bronlavoids}.

45 •Data on -Lept03pirc0is Katuxe.1 ioci ia areas a-ifected by radioactive contamination // The sane book- p.4«3t (co-authors OeA,Evdokimov&, О.V.Savelyeva, S.Y.Kharlaßhin)•

46 .Epide^iolog-i.cai peculiarities of teptospirosis in rico-growing plantations in Ukraine // The звав book - p.4.7. (oo-a'-thorb Yu.I.Podko-ryto7: iu.G.Chernuküj O.A.EvdoldjDoya).

4?.Monoclonal Antibody Analysis od Leptospira Interrogans tirovar grippotyphoea strains isolated in diverse geographical areao // The ваше book - p.5.1. (eo-ai\thorü W.J.Terpstra, E.Sorver).

48. One -point eerodiagnosia of huaati leptospirosis: balron-Ali dlide-ag^iytination tast // The вале book - p.5.18 (co-authora E.M. Petrov, A.P.Samaonova). -

49. Cultural And Pathogenic Peculiarities of ^ptcspira interrogans harlca eero-mr, JaYanica serogroup// The sane book - p.7.1, (co-author S.M.Hakoev).

dkx fingerprinting of Leptospira species // the same book-p.5.21. ( I.A.Sha<5lnyanr О.Ы.Токагэкауа ).

51. Исследование мелких млекопитающих северо-восточных

/

Каракумов на зараженность,лептоспирозом // 2урнал микросиол. -.1991 - №7 - с.42-45 ^.созвт.й.А.Лап^оз, Ф.М.Бокитейк

52. Дептоспирозы,// Фельдшер к акушерка - 1991 -йЗ -с.3-10.

53.-Геномная дактилоскопия возбудителей салропозов// Журнал мккробиол.- 1991'- ®6- с.25-29 (соавт.И.А.Шагинкн, О.Н.ТокарскаяЖ др.).

54. Специфичность взаимоотношений паразит-хозяин в природноочагозых системах // В кн.: Проблемы ияфентологил. Н., медицина - 1991 - C.33U - 331 (соавт.Ю.Г.Чернуха).

СПИСОК ДОКУМЕНТОВ ПО ВНЕДРЕНИЮ НАУЧНЫХ ДОСТИЖЕНИЙ ........ -В ПРАКТИКУ

1. Методические указания по"эпидемиологии и профилактике лептоспирозов Минздрава СССР // И.- 1979- с.1-18.

2. Методические рекомендации Минздрава РСФСР. Раздел I. Эпидемиология я профилактика лептоспирозов. Раздел 2. Этиология и лабораторная диагностика// М.- 1987 - с.4-34.

3. Регламент производства KS39-87. Вакцина лептоспироз-ная инактивированная жидкая. 1987- г- 91 с.

4. Инструкция по изготовлению и контролю. Вакцина лептоспирозяая. иктерогеморрагическая концентрированная инактивированная яидкая.1990 г. - с.Г24.

5. Штамм патогенна лептоспир Leptospira leiei-ohs.euiorrHagiee, используемый для получения поливалентной противолептоспироз-" ноя вакцины ('Авт.свид. J&I5S6527.28.06.1985; соазт.Ю.Г.Чзрну-xas Н.И.Борозноз, И.л.ЯОКОВЙН). ■

6. Штамм патогенных лептоспир Hatt-is-norvegicus 302, используемый для получения поливалентной лротизоле'птоспироз-ной вакцины (Авт.свид. ShI62I340.2S.06.IS85; соавт.В.Г.Чернуха, Н.И.Борозноз). .' .

7.'Штамм бактерий leptospir« bifida BalranaU .ИСПО^ЬЗувМЫЙ для приготовления таркорезистентяого родослецкфпчеекого лептоспирозного ансигена-диагностикума (Авт.свид. RI4S935I. 28.*07.IS37; со авт. D. Г.'Чернуха, К.К.Пегроз)..

h I