Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Природный ингибитор липазы гриба Rhizopus Microsporus

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ахмедова, Захро Рахматовна

ВВЕДЕНИЕ. 4

ГЛАВА I. ПРИРОДНЫЕ ИНГИБИТОРЫ ФЕРМЕНТОВ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ) 6

1.1. Ингибиторы протеияаз из грибов. 11

1.2. Ингибиторы нуклеаз грибов. 16

1.3. Белковые ингибиторы ферментов липидного обмена. 18

ГЛАВА 2. ОБЩЕ ОБЩЕНИЯ О ЛИПОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТАХ

ГРИБОВ.20

ГЛАВА 3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ИССЛЕДОВАНИЯ .35

ЗД. Культивирование гриба.

3.2. Препарат липазы из гомогената мицелия.35

3*3. Определение липазной активности.36

3.4. Определение ингибиторной активности.37

3.5. Определение белка.

3.6. Аналитический диск-электрофорез на ПААГе.38

3.7. Препаративный диск-электрофорез на ПААГе.

3.8. Энзимограмма липаз на ПААГе

3.9. Обработка ингибиторным белком гелевых столбиков с липазной активностью после электрофореза.

3.10. Очистка ингибитора липазы.41

3.11. Определение молекулярной массы.

3.12. Определение аминокислотного состав ингибитора. 42

3.13. Определение N -концевой аминокислоты ингиби-торного белка.43

3.14. Определение С -концевой аминокислоты.44

3.15. Методика получения поликефамида.45

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

ГЛАВА 4. ОШАРУЖШИЕ ИНГИБИТОРА ЛИПАЗЫ В КУЛЬТУРЕ

RHIZOPUS MICROSPORIA .48

ГЛАВА 5. ВВДЕЛЕНИЕ И ОЧИСТКА ИНГИШТОРА ЛИПАЗЫ ИЗ НАД

ОСАД ОЧНОЙ ЖИДКОСТИ ГОМОГШАТА МИЦЕЛИЯ ГРИБА.62

5.1. Получение препарата ингибитора. 62

5.2. Свойства ингибитора липазы.

5.3. Определение молекулярной массы ингибитора.70

5.4. Определение N- и С-концевых аминокислот ингибитора.

5.5; Субъединичная структура ингибитора липазы.74

ГЛАВА 6. ВВДЕЛЕНИЕ, ОЧИСТКА РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ ЛИПАЗ ИЗ ГРИБА RHIZOPUS MICROSPORIA И ИЗУЧЕНИЕ ИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ С ИНГИБИТОРОМ.83

6.1. Получение частично очищенных комплексных препаратов внеклеточных липаз .83

6.2. Очистка внеклеточных и внутриклеточных липаз гриба Rhizopus microsporus .87-S

6.3; Изучение взаимодействия ингибитора с различными формами липазы гриба Rhizopus micro sporus . 94

ВЫВОДЫ.I0I-I

Введение Диссертация по биологии, на тему "Природный ингибитор липазы гриба Rhizopus Microsporus"

В то же время не для всех ферментов выделены их природные ингибиторы; Прежде всего это относится к липазам (КЖ-3,IiI.3). В связи с тем, что внутриклеточные липазы участвуют в метаболизме липидов, являющихся компонентами различных внутриклеточных структур, можно ожидать, что клетки контролируют активность этих ферментов и с помощью белковых ингибиторов;' Поэтому поиск природных ингибиторов липаз среди внутриклеточных белков микроорганизмов является актуальным. В последние годы в институте микробиологии АН УзССР описаны ряд продуцентов липаз, среди которых - Rhizopus microsporus, отличается как высокой продуктивностью, так и содержанием мноявственности молекулярных форм. При изучении липаз этого гриба нами было обнаружено вещество белковой природы, при взаимодействии которого с различными формами липаз этого же продуцента активность последних понижалась.

Целью настоящей работы было получение и изучение ингибитора липазы из гриба Rhizopus microsporus. В связи с этими основными задачами исследования были:

1) Поиск ингибитора в гомогенате мицелия;

2) разработка способа выделения и очистки ингибитора липазы;

3) изучение некоторых физико-химических свойств ингибитора;

4) выделение и очистка различных форм липаз и изучение взаимодействия ингибитора с ними.

Поскольку в литературе до настоящего времени отсутствуют данные об ингибиторах липаз, первую часть обзора литературы мы посвящали природным ингибиторам ферментов вообще. Вторая часть обзора литературы посвящена липояитическим ферментам, где преимущественно освещены вопросы выделения, очистки и функциональные свойства липаз грибов.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Ахмедова, Захро Рахматовна

ВЫВОДЫ

1. Показано, что в гомогенате мицелия гриба Rhizopus micro sporus одновременно может присутствовать ингибитор белковой природы в свободном и в связанном с липазами состоянии в то время как в культуральной жидкости обнаруживаются только свободные формы липаз.

2. Впервые из мицелия гриба Rhizopus micro sporus получен ингибитор липазы в высокоочшценном состоянии осаждением изопро-панолом, гель-х^оштографией на сефадексе G-75, ионообменной хроматографией на ДЭАЭ-целлкшозе и рехроматографией на сефадек-се G-75.

Показана его гомогенность рехроматографией на ДЭАЭ-целлю-лозе и сефадексе G-75, методами диск-электрофореза в ПААГе, ультрацентрифугированием, определением N-концевых аминокислот. Молекулярная масса ингибитора 24 кД, ингибиторная активность 58,6 ед/мг.

3. Установлено, что ингибитор представляет собой олигомер-ный белок, содержащий 164±12 остатка аминокислот и состоящий из двух субъединиц. На N -конце расположен лейцин, на С-конце - глицин.

4. Разработан способ очистки внеклеточных форм липаз гриба Rhizopus micro sporus с использованием биоспецифического сорбента-ноликефамида. Одновременно достигнуто разделение различных форм липаз. Из фильтрата культуральной жидкости в гомогенном состоянии получены две формы липазы с мр 28 вД ( Rf 0,77), 43 ВД ( Rf 0,52).

5. Изучено взаимодействие ингибитора с различными молекулярными формами липаз из гриба Rhizopus micro sporus. Установлено, что ингибитор неодинаково действует на различные молекулярные формы липазы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ахмедова, Захро Рахматовна, Ташкент

1. Алщцжанова М.И. Безбородов A.M., Давралов К. Липазная активность протопластов Oospora lactis. Микробиология, т. ХУК, вып. 3, 1980, с. 421-426.

2. Аренде И.М.,' Дорохов В.В., Турочкина Б.М. Препараты липазыиз глубинной культуры Aspergillus awamori2^? и их характеристика. Прикладная биохимия и микробиология, т. 10, вып.7, 1974а, с. 92-98.

3. Аренде И.М., Дорохов В .В. ^Турочкина Т.М., Ильин В.А.,

4. Смурных Л.М. Ферментативный гидролиз касторового масла препаратом липазы микробного происхождения. Микробиология. Промышленность, $ 7, 19746, с. 20-23.

5. Аренде И.М., Дорохов В.В., Турочкина Т.М., Борисова Т.Т.

6. Питательные среды для биосинтеза липазы Aspergillus awamori. Прикладная биохимия и микробиология, т. 2, вып. 5, 1975, с. 691-696.

7. Ахмеджанов Р. Биоспецифическая адсорбционная хроматографиялиполитических ферментов. Автореферат канд. дисс., Ташкент, 1981, с. 62-65.

8. Безбородов A.M., Андреева Н.А., Черменский Д.Н., Петрова

9. Н.Т. Поиск актиномицетов продуктов ингибиторов про-теолитических ферментов. - Микробиология, т. 46, № 2, 1977, с. 232-238.

10. Безбородов A.M., Биосинтез микроорганизмами ингибиторовферментов белковой природы. Прикладная биохимия и микробиология, т. Х1У, вып. 7, 1978, с. 5.

11. Безбородов A.M. Функция гидролитических ферментов в микробных клетках. В кн.: "Биосинтез ферментов микроорганизмами". Очистка, свойства, иммобилизация ферментов. М., 1979, с. 128.

12. Безбородов A.M. Специфические белки микроорганизмов какрегуляторы ферментативной активности. Тезисы докл. и сообщений Международного симпозиума ФЕМО, Регуляция микробного метаболизма факторами внешней среды, Пущина, 1983, с. 15.

13. Беленький Б.Г., Ганкина Э.С., Нестеров В.В. Экспрессныйультрачувствительный метод идентификации N -концевых аминокислот в белках и пептидах с помощью тонкослойной хроматографии. - Доклады АН СССР, 1967, 172 , 9193.

14. Брокерхоф X., Дженсен Р. Липолитические ферменты. Под ред.

15. Давранов К., Дияров Ж; Выделение внутриклеточной липазытермотолерантного гриба Rhizopus microsporus и ее свойства. Химия природных соединений, № 41, 1977, е.- 566-670.

16. Давранов К.,-Дияров Ж;, Ризаева М* Изучение внеклеточныхлипаз гриба Rhizopus microsporus Уз ЛТ-Г. Прикладная биохимия и микробиология, т. 14, вып. 3, 1978, с; 389-397.

17. Дэвени Я;, Гергей. В кн* "Аминокислоты, пептиды и белки".

18. Под ред* Р.С.Резнина. 1976, с. 274*

19. Закиров М.З*, Султанова И.Г., Давранов К. Rhizopus microsporus штамм Уз ЛТ-I. Термотолерантный продуцент липазы* Прикладная биохимия и микробиология, т. II, 4, 1975, с. 546-549.

20. Зигель М., Безбородов A.M. Внутриклеточные рибонуклеазы

21. Penicillium brevi-compactum И ИХ Природные ИНГИбиторы. Прикладная биохимия и микробиология, т. 17, № 2, 1981, с. 203-209.

22. Зубенко Т.Ф. Условия биосинтеза липазы термотолерантнымгрибом- Rhizopus microsporus. Автореф.канд;дисс., Ташкент, 1980.

23. Иванова Г.С., Безбородов A.M. Специфический ингибитор рибонуклеазы Aspergillus ciavatus 1816. - Микробиология, т. 41, & 2, 1972, с. 224-230.

24. Иванова Г.С., Сайманова Р.А. Ингибиторы нуклеаз микроорганизмов. М. : Наука, 1974, с. 282-289.

25. Имамура И., Катаока К. Биохимическое исследование производства сыра "Рокфор"". I. Способность образовывать липазу У Penicillium roqueforti. Нихон тукусан танкайхо, 1965, РЖ. Биохим, 1965, В 14, с. 231.

26. Мосолов В.В. Протеолитические ферменты. М.: Наука, 1971,с. 250.

27. Рахимов М.М., Джанбаева Н;Р., Юлдашев П.Х. Липолитическиеактивности ферментов в семенах хлопчатника. Химия природных соединений, I 5, 1970а, с. 642-645.

28. Рахимов М.М., Мадьяров. Ш.Р., Джанбаева П.Р., Юлдошев П.Х.

29. Характеристика липолитических ферментов. Химия природных соединений, ft 6, 1970в, с. 738-744.

30. Рахимов М.М., Джанбаева Н.Р. Взаимосвязь триацениназ семянхлопчатника. Биохимия, т. 41, вып. 8, 1976, с. 1373-1379.

31. Рахимов М.М., Юлдашев Н.Х. Лилолитические ферменты в прорастающих семенах хлопчатника. Химия природных соединений, 1976, $ 6, с. 782-783. .

32. Рахимов М.М., Джанбаева Н.Р. Лилолитические ферменты.

33. Успехи современной биологии, т. 84, вып. 3, 1977, с. 323-328. .

34. Рахимов М.М,., Мадьяров Ш.Р., Джанбаева Н.Р., Алауллаев

35. А.Х, Динамика изменения липолитических ферментов при хранении хлопковых семян в различных условиях, Мас-ложировая- промышленность, 1981.

36. Рубан С.М. Микробные легенды и липазы. М.: Наука, 1977,с. 86.

37. Табак М.Я. Влияние условий культивирования на биосинтезлипазы Oospora lactis. Автореф.канд.дисс. Ташкент, 1979.

38. Туйчибаев. М.Х., Мусимов Ф.А., АхмедоваН., Шпинев А., Шрходжаев X., Муратова X., Алматов. К.Т., Рахимов М.М., Ташмухамедов Б.А. Изучение триадетиназы семян хлопчатника. --Биохимия, т. 42, 1977, с. 2160-2167.

39. Alford J.A., Pierse D.A. Production of lipase by Pseudomo4nas fragi in synthetic medium, J. Bacteriol., 1963» v. 86, N 7, P. 24-29.

40. Alford J.A., Smith J.L. Production of microbiol lipasesfor the study of treglyceride structure. J. Amer. Oil Chem. Soc., 1965, v. 42, p. 1038-1040.

41. Alford J.A., Smith J.L., Lilly H.D. Relationship of Microbial Activity to changes in Lipids of Poods. J. Appl. Bacteriol., 1965, v. 34, N 1, p. 133-146.

42. Archibald R.M., Ortis P. Determination of mol. weigth proteins by physic methods. J. Biol. Chem., 1965» 165, 443, 946.

43. Arima K., Len W., Beppu T. Studies on the Lipase of thermophilic fungus Humicola lanuginoso. Agr. Biol, chem., 1972, v. 36, N 5, P. 893-895.

44. Barrett A.J. Proteinases in Mammalian Cells and Tissues.- Amsterdam: Elsevier (North-Holland), 1977, P. 735.

45. Barrett A.J. Introduction: the classification of proteinases "Protein Degradation Health and Disease". Amsterdam et al., 1980, p. 1-15.

46. Beck J., Fiun G,, Wief D.H. The intracellular proteinasesand their inhibitors in yeast. A mutant with altered regulation of proteinase an inhibitor detiwity. J. Biol.Chem., 1980, v. 255, N 10, p. 4821-4828.

47. Betz H., Hinze H., Holzer H. Izolation and properties oftwo inhibitors of proteinase В from Yeast. J. Biol. Chem., 1974, v. 249, N 14, p. 4515-4521.

48. Betz H. Levers and turnover of the proteinase В inhibitorsin Yeast. Biochim. et Biophys, Acta, 1975, v. 404, p. 142-151.

49. Chapus C., Semeriva M., Desnuelle P. Absorption and activation of pancreatic lipase on interfase. In: Enzymes Lipid Metab. Proc. Collog. Strassburg, 1977, N.-Y. London, 1978, p. 127-154.

50. Cohen G.N., Holzer H. (Eds.) Limited proteolysis in microorganisms. Washington, USGPO, 1979, P. 255.

51. Daffagupta J.K., Pujjiwara T., Crishin E.V., Lidner K.,

52. Mannor P.O., Bieniazer N.J., Saenger U., Suck D. Crystallisation of the fungal enzyme proteinase К and amino acid composition. J. Molec. Biol., 1964, v. 97, N 2, p. 267-271.

53. Davis B.I. Disc electrophoresis. Method and applicationto human Serum proteins. Ann. New York Acad. Sci., 1964, v. 121, p. 404-427.

54. Desnuelle P., Savary P. Specifities of lipases. J. Lipid

55. Res., 1965, v. 4, p. 369-584.

56. Desnuelle P. La lipase pencreatique. Biochemie, 1971,53, p. 841-852.

57. Desnuelle P. The Lipases: The enzymes. New York, Academic Press, 1972, v. 7, P. 575-614.

58. Eitenmiller R.R., YakLe J.R., Shahami K.M. Production andproperties of Penicillium roqueforti lipase. J.Food. Sci., 1970, v. 35, N 2, p. 130-133.

59. Ferguson A.R., Katsunuma T., Betz H., Holzer H. Purification and properties of an inhibitor of the tryptophan-synthase inactivating enzymes in yeast. - Europ. J. Biochem., 1973, v. 32, p. 444-450.

60. Ferguson A.R., Katsunuma Т., Retz H., Holzer H. Purification and properties of an proteinases A ans В caploxy-peptidase Y. Adv. Enzyme Regulation, v. 15» 1975, Pergamon Press, Oxford, p. 125-154.

61. Finkenstadt W.R., Laskowski M. Peptide bind clevage on trypsintrypsin inhibitor complex formation. J. Biol, Chem. 1965, v. 240, p. 962.

62. Fritz H., Tschesche H. (EDS). Proc. 1st. Int. Res. Conf.

63. Proteinase Inhibitors, Berlin: Walter de Gruyter, 1971, P. 304.

64. Fritz H., Tschesche H., Greene L.J., Truscheit E. (EDS).

65. Bayer Symp. V. Proteinase Inhibitors. Berlins Springer, 1974, p. 751.

66. Fukumoto I., Iwai M., Tsujisaka Y. Studies on lipase. I.

67. Purification and crystallisation of a lipase secreted by Aspergillus niger. J. Gen, and Appl.Microbiol., 1963, v. 9, N 3, P. 353-356.

68. Greighton Т.Е. Homology of protein structures: proteinasinhibitors. Nature, 1975, v. 255, N 5511, P. 743745.

69. Grey W.R. Seguential degradation plus dansulution. In:

70. Methods in Enzymology", 1967» v. XI, p. 469-475.

71. Hayashi R., Oka Y., Hata T. Yeast pro-proteinase C. Part1.. Isolation and some physicоchemical properties. -Agr. Biol. Chem., 1969, v. 33, P. 196-206.

72. Hayashi R,, Mihami Y,, Hata T. Yeast pro-proteinase C. Part

73. I. The activation by protein denaturants. Agr.

74. Biol. Chem., 1972, v. 36, p. 621-629.

75. Hayashi R., Hata T. Yeast pro-proteinase C. Part IV. Activation by yeast proteinase A and activation mechanism. Agr. Biol. Chem., 1972, v. 36, p. 630-638.

76. Hirono S., Nykymura K.T., Jitaka Y., Mitsui Y. Crystalstructure of the complex subtilisin BPN with its protein inhibitor Streptomyces Subtilisin inhibitor. The structure of 4,3° A. Resolution. J.Molec. Biol., 1979, v. 131, p. 833-869,

77. Holzer H. Regulatory role of proteinasus and proteinase inhibitore in yeast. Proceed, of the 9th FEBS - Meeting, Budapest, 1974, p. 87.

78. Holzer H. Chemistry and Biology of macromolecular inhibitors from yeast activity an proteinases A and В car-boxypeptidase Y. Adv. Enzyme Regulation, 1975, v. 13, Pergamon Press, Oxford, p. 125-134.

79. Ikenaka Т., Odani S., Sakai M., Nabeshima Y., Saso S., Murao S. Amino acid Sequence of an alkaline proteinase inhibitor (Streptomyces subtilisin inhibitors) from Streptomyces albogriseolus S-3253. J. Biochem.,1974, v. 76, p. 1191-1209.

80. Imamura Т., Kataoka H. Biochemical study of production ofcheese Rogfor. Ability to produce lipase. Japan, J. Zootechn. Sci., 1963, v. 74, N 2, p. 334-348.

81. Inamye K., Tonomura В., Hiromi K., Saso S., Murao S. The

82. Ito K. Protease inhibitors inhibit production of protein Iof the auter membrane in Escherichia coli. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1978, v. 82, N 1, p. 99-107.

83. Ivanova G.S., Besborodov A.M. Natural regulators of intracellular ribonuclease activity of Aspergillus cla-vatus. Folia microbiol., 1973, v. 18, p. 212-222.

84. Iwai M., Tsujisaka Y., Okamoto Y., Fukumoto J. Lipid regueiremat for the lipase production by Geotrichum can-didum Link. Agric. and Biol. Chem., 1973, v. 37, N 4, p. 929-931.

85. Iwai M., Isujisaka Y. Interconversion of the lipase from

86. Rhiz. delemar. Agr. and Biol. Chem., 1974, v. 38, N 6, p. 1949-1953.

87. Jensen R.G., Dennis Gordon. Specificity of Geotrichium candidum lipase with respect to double bond position Triglycerides containing cis Astadecenoic Acids. - Lipides, 1972, v. 7, N 11, p. 738-741.

88. Jobert J., Kruger H., Townshend G.S., Rated D.P. Purification. Some properties and the complete Primary structures of two protease inhibitors (DE-3 and DE-4) from Macrotyloma axillare Seed. Europ. v. Biochem., 1979, v. 97, P. 85-91.

89. Kakinuma А», Sugino A., Morya N., Isoiio M. Plasminostreptin, a protein proteinase inhibitor produces by Streptomyces antiforbrinolyticus. I. Isolation and characterization. J. Biol. Chem., 1978, v. 255, N 5, P. 1529-1557.

90. Kataoka н. Изучение липазы^Новая липаза, образуемая Rhizopus hanhow. Якудзайгаку, Arch. Pract. Pharm., 1970, v. 50, N 1, p. 66-70.

91. Kennedy M., Krag S., Lennars W. Localization of a phospholipase and its inhibitor in Bacillus subtilis. Fe-der. Proceed., 1974b, v. 55, p. 1469.

92. Klin G., Satre M., Vignais P. Natural protein inhibitorfrom Candida utilis mitochondria Binding properies of the radio labelled inhibitor. FEBS Left. ,1977, v. 84, 11, p. 129-154.

93. Krag S., Lennarz W. Purification and characterisation in

94. Bacillus subtilis. J. Bio1.Chem., 1975, v. 250, N 8, p. 2815-2822.

95. Kramer D.N., Cullbauet G.C. A substrate for the bluorometric determination Lipase activity. Analyt. Chem., 1965, 55, N 4, p. 588-589.

96. Кто11 V., Pranzke С., Genz S. Purification of lipase Geotrichum candidum. Pharmazie, 1975, 28, 263.

97. Laboureur P., Zabrausse M. Lipase de Rhizopus arrhizus.

98. Obtention, purification et properties de la lipase de R. ar. var. delemar. Bull. Cos. Chim.-Biol., 1966, 48, p. 747.

99. Lampkin S.L., Gole K.W., Vitto A., Gaertner F.H. The protease problem in Neurospora, Arch. Biochem. and Biophys., 1976, v. 177, P- 561-565.

100. Laskowski I.M., Sealock R.W. Protein-proteinase inhibitors- molecular aspects. In: The Enzymes (ed. Boyer P.). -N.Y.-London: Acad.Press, 1971» v. 3, p. 575-391.

101. Laskowski M., Kato I. Protein inhibitors of proteinases.- Ann. Rev. Biochem., 1980, v. 49, p. 593-626.

102. Lenney J.P., Dables J.M. Yeast proteinase B: identification of the inactive form as an enzyme inhibitor complex. - Arch. Biochem. Biophys., 1969» v. 129, p. 407-409.

103. Lenney J.P. Three Yeast proteins which inhibit three

104. Yeast proteases. Feder. Proc., 1973» v. 32, p. 656.

105. Lenney J.P. Three Yeast proteases А, В and C. J, Bacteriol., 1975, v. 122, N 3, P. 1265-1273.

106. Liu W.H., Beppu Т., Arima K. Effect of inhibitors on lipase action of thermophilic bungus Humicola lanegi-nosa S-38. Agr. Biol. Chem., 1974b, v. 37, N 11, p. 2487-2492.

107. Loper-Romero E., Ruiz-Herreka J., Bartneieki-Garcia S. Purification and properties of an inhibitor protein ofchitin synthetase from Mucor rouxii. Biochim. et Biophys. Acta, 1978, v. 525, p. 338-345.

108. Lowry O.H., Rosenbrough N.X., Randa U.R. Protein measurement with the Folin Phenol reagent. J. Biol. Ghem., 1951, N 193, P. 265-269.

109. Maier K., Muller H., Tesch R., Witt I., Holzer H. Aminoacid Sequence of yeast proteinase В inhibitor I comparison with inhibitor 2. Biochem. and Biophys. Res. Commun., 1979a, v. 91, N 4, p. 1390-1398.

110. Maier K., Muller H., Holzer H. Purification and molecularcharacterization of two inhibitors of yeast proteinase B. J, Biol. Chem., 1979b, v. 254, N 17, p. 8491-8497.

111. Maier K.,Muller H., Tesch R., Troep R., Witt I., Holzer H.

112. Primary structure of yeast proteinase В inhibitor. -J. Biol. Chem., 1979c, v. 254, N 24, p. 12555-12561.

113. Magnusson S., Ottesen M., Foltmann В., Dom K., Neurath H.

114. EDS). Proc. II th FEBS Meet. Regulatory proteolytic Enzymes and their inhibitors. Oxfords Pergamon Press, 1978, p. 236.

115. Matern H., Weiser U., Holzer H. Isolation, characterization and localization of the proteinase В inhibitor ■p1.? from Saccharomyces carlsbergensis. Europ. J. Biochem., 1979, v. 101, N 2, p. 325-332.

116. Matile P., Niemken A. The vacuole as the lysosome of theyeast cell. Arch. J. Microbiol., 1967, v. 56, p. 148-155.

117. Matsushima Kin-ichi. A note on a novel fungal alkaline proteinase inhibitor from Aspergillus oryzae. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1979, v. 90, N 4, p.1142-1146.

118. Mauvernay R.Y., Laboureur P., Labrousse M. Impovements inand. relating to Lipases. Patent Great Britain N 1084431, 1917, Benzonana, 1974.

119. Meyn M.S., Rossman Т., Troll W. A protease inhibitor blocks

120. SOS functions in Escherichia coli: antipain prevents repressor inactivation, ultraviolet mutagenesis, and filamentous growth. Proc. Nat. Acad. Sci.USA, 1977, v. 74, N 3, p. 1152-1156.

121. Murao S., Oda K., Eoyama T. New metallo proteinase inhibitor produced by Streptomyces migrescens TK-23: SMPI. Agric.Biol.Chem., 1978, v. 42, N 4, p.899-900.

122. Murao S., Sato S. S-SI, a New Alkiline protease inhibitorfrom Streptomyces albogriseosus S-3253* Agr.Biol. Chem., 1972a, v. 36, N 1, p. 160-163.

123. Murao S., Sato S., Muto N. Isolation of alkaline proteaseinhibitor producing microorganisms. J. Agric.Biol. Chem., 1972b, v. 36, N 10, p. 1737-1744. 125. Nagoaka K., Yamada Y., Koasze Y. Studies on Mucor lipase.

124. Part I. Production on lipase with a newly isolated Mucor sp. Agr. Biol. Chem., 1969, v. 33, N 3, p. 299-303.

125. Nagaoka K., Yamada Y. Studies on Mucor lipases. Part II.

126. Separation and characterization of three lipolytic enzymes. Agr,Biol.Chem., 1969b, v. 33» N 7, p.986-993»

127. Nagaoka K., Yamada Y. Purification of Mucor lipases andtheir properties. Agr.Biol.Chem., 1973, v. 37, N 12, p. 2791-2796.

128. Nama A., Borgstrom B. The Exocellular lipase from Rhizopus arrhizus. Scand. Journal Gastroent., 1978, v.6,p. 217-223.

129. Oda K., Koyama Т., Murao S. Purification and propertiesof a proteinaceous metallo-proteinase inhibitor from Streptomyces nigrescens TK-23. Biochim. et Biophys. Acta, 1979, v. 571, P. 147-156.

130. Ogiso Т., Sugiura M. Studies on Bile-sensitive Lipase.

131. Purification and properties of Lipase from Mucor ^a-vanicus. Chem. Pharm. Bull., 1969, v. 17, N 5, p. 1025-1033.

132. Ogiso Т., Suguira M. Studies on Bile-sensitive Lipase.1.. Action Pattern and Mechanism of lipolysis by Mucor lipase. Chem. Pharm. Bull., 1971, v. 19, N 17, p. 2457-2465.

133. Oi S., Samacla A., Satomura Y. Purification and some properties of two types of Penicillium Lipase I and H, and conversion of types I and II under various modification conditions. Agr. Biol. Chem., 1967, v. 31, N 11, p. 1357-1366.

134. Ono Y., Nojima S. Phospholipases of the membrane fractionof Mycobacterium phlei. Biochim. Biophys. Acta, 1969, v. 176, p. 111-119.

135. Ota Y., Yamada K. Lipase from Candida paralipolytica. Part

136. Anionio surgactants as the essential activator in the systems cultified by poly. Agr. Biol. Chem., 1966, v. 30, p. 351.

137. Ozawa K., Laskowski M. The reactive site of trypain inhibitors. J. Biol. Chem., 1966, v. 241, p. 3955-3961.

138. Ponard M., Sari H., Narit S., Entressangles В., Desnuelle P.1.hibition of pancreatic lipase by mixed micelles of diethyl-nitrophenylphosphorus and bile salts. Biochim. et Biophys. Acta, 1978, v. 530, p. 227-235.

139. Reich E., Rifkin D.B., Shaw E. (Edits). Cold Spring Harbor

140. Conf. Cell proliferation. Vol. 2. Proteases and Biological Control. Cold Spring Harbor Lab., 1975,p.1021.

141. Roulearu M., Lamy F. Purification and characterisation ofa trypsin inhibitor from Solanum tuberosum. Cand. J.Biochem., 1975, v. 53, P. 958-971.

142. Saheki Т., Matsuda Y., Holzer H. Purification and characterization of macromolecular inhibitors of proteinase from yeast. Europ. J. Biochem., 1974, v. 47, p.325-332.

143. Sato S., Kimura Т., Murao S. Preparation of immobilitedprotease inhibitor (S-SI) and application to enzyme purification. Agr. Biol. Chem., 1975, v. 39, N 2, p. 415-422.

144. Savary P., Desnuelle P, Sur quelares elements de specificete pendant lihydrolyse enzymatique des trygliceri-des. Biochim. et Biophys. Acta, 1956, v. 21, p. 349-360.

145. Schultze H.E., Hermans J.P. Human Proteins in Molecular

146. Biology. 1966, v. 1, p. 173-235. Elsewer, Amsterdam.

147. Semeriva M., Benzonona G., Desnuelle P. Sur la Lipas de

148. Rhizopus arrhizus. Specificite de position. Bull. Soc. Chim. Biol., v. 49, p. 71-79.

149. Semeriva M., Benzonona G., Desnuelle P. Some propertieslipases from Rhizopus arrhizus. Separation glycopep-tide from enzyme. Biochim. et Biophys, Acta, 1969, v. 191, P. 598-610.

150. Semeriva M., Benzonona G., Desnuelle P. Purification ofa lipase from Rizopus arrhizus. Identification of two active form of the enzyme. Biochim. et Biophys. Acta, 1976, v. 144, N 3, P. 703-705.

151. Siepen D., Yu P.H., Kuba M.R. Proteolytic enzymes of Neurospora crassa. Europ.J.Biochem., 1975, v. 56, p. 271-281.

152. Smeaton J.R., Elliott W.H. Isolation and properties of aspecific bacterial ribonuclear inhibitor, Biochem. et Biophys. Acta, 1967, v. 145, p. 547-560.

153. Somkuti G.A., Babel F.J. Lipase activity of Mucor pusillus. Appl. Microbiol., 1968, v. 16, N 4, p. 616619.

154. Somkuti G.A., Babel F.J., Somkuti A.C. Lipase from Mucorpusillus. Appl. Microbiol., 1969, v. 17, N 4, p. 606-617.

155. Spoerel N., Herrich P., Bickle T.A. A novel bacteriophagedefence mechanism: the antilestrication protein.

156. Nature, 1979, v. 278, p. 30-34.t

157. Sugino H., Nakagawo S., Eakinume A. Plasminostreptin, aprotein proteinase inhibitor produced by Streptomy-ces antifibrinolyticus. II. Determination of the reactive site for proteinase. J, Biol. Chem., 1978, v. 250, N 5, P. 1538-1545.

158. Sugino H., Kakiuma A., Iwanage S. Plasminostreptin, aprotein proteinase inhibitor produced by Streptomy-ces antifibrinolyticus. III. Elucidation of the primary structure. J. Biol, Chem., 1978, v. 25, N 5, P. 1546-1555.

159. Sugiuro M., Ogiso T. Studies on Bile-sensitive lipase.

160. VIII. Product inhibitor of Mucor lipase and role of bile salts and Ca+2 to the inhibition. Chem.Pharm. Bull., 1970, v. 18, N 4, p. 663-670.

161. Suzuki K., Uyeda M., Shibata M. Ар 1-2C, a new alkalineprotease inhibitor produced by Str. griseoiucarnatusstrain No ЕЮ-250. Agr. Biol. Chem., 1978, v. 42, N 8, p. 1539-154-3.

162. Tsujisaka Y., Iwai N., Fukumoto J., Okamoto Y. Inducedformation of lipase by Geotrichum candidum Link. -Agr. Biol. Chem., 1973, v. 37, p. 837-842.

163. Uozumi T., Tamura G., Arima K. Studies on the autolysisof Asp. orysae. IV. Presence of ribonuclease inhibitor in the mycelia. Agr. Biol. Chem., 1968, v. 32, p. 969.

164. Uozumi Т., Tamura G., Arima E. Studies on autolysis of

165. Asp. orysae. VII and VIII. Purification and properties of on intracellular nuclease inhibitor. Agr. Biol. Chem., 1969, v. 33, P. 636-658.

166. Uozumi Т., Ishino K., Beppu T., Arima K. Purificationand properties of the nuclease inhibitor of the Asp. orysae and kinetics of the interaction with cristalline nuclease 0. J. Biol. Chem., 1976, v. 251, N 9, P. 2808-2813.

167. Uyeda M., Voshida S., Suzuki K., Shilata M. Isolation ofan alkaline protease inhibitor, AP-I. Produced by Streptomyces pseudogriseolus strain No КПЮ-332. -Agr. Biol. Chem., 1976, v. 40, N 6, p. 1237-1238.

168. Verger R., Sarda L., Desnuelle P. Sulphohydryl groupsof porcine pancreatic Lipase. Biochim. et Bio-phys. Acta, 1970, v. 207, P. 277-379.

169. Willstatter R., Waldschmidt-Leitr E., Memmen P. Die Lipidspaltung Ferment der Pancreas. S. Physiol. Chem., 1923, B. 125, p. 93-104.

170. Wills E.D. Lipases. Advance in lipid research. N.Y.

171. Acad. Press., 1965» v. 3, P. 197-240.

172. Xu P.H., Silpen D., Kula M.R., Tsai H. On the Stoichimetry and reversibility of interaction between Neuro-spora crassa protease I and its inhibitor. FEBS Letters, 1974, v. 42, N 2, p. 227-230.

173. Yu P.H., Kula M.R., Tsai Hsin. Isolation of specific protease inhibitors from Neurospora crassa. Can. J. Biochem., 1976, v. 54, p. 699-703.