Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Применение молекулярного маркирования для повышения эффективности селекции риса

ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Автореферат диссертации по теме "Применение молекулярного маркирования для повышения эффективности селекции риса"

На правах русшг^си

МЯГКИХ ЮЛИЯ АЛЕКСАНДРОВНА

ПРИМЕНЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНОГО МАРКИРОВАНИЯ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ СЕЛЕКЦИИ РИСА

Специальность 06.01.05 - селекция и семеноводство

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

□ □348 1376

Краснодар - 2009

003481376

Работа выполнена в ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт риса в 2006-2009 гг.

Научный руководитель: кандидат биологических наук

Мухина Жанна Михайловна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Щеглов Николай Иванович

кандидат биологических наук Звягин Андрей Сергеевич

Ведущая организация: ГНУ Краснодарский научно-исследовательский институт сельского хозяйства им. П. П. Лукьяненко

Защита диссертации состоится «26» ноября 2009 года в 9 часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.03 при ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет», а с авторефератом на сайте http: / www.kubsau.ru.

Автореферат разослан « »_2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Кравцов А.М,

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Создание новых сортов сельскохозяйственных растений, в том числе и риса, основано на использовании природного или созданного человеком генетического разнообразия. Для отбора растений, несущих хозяйственно ценные признаки, и отслеживание их в процессе селекции, используют легко распознаваемые фенотипические проявления генов - маркеры.

Применение в качестве фенотипических маркеров белковых молекул (изоферменты, запасные белки) - продуктов индивидуальных генов -существенно расширило возможности их картирования и мониторинга в селекционном процессе, что позволило создать новые методы идентификации и систематизации сортов.

Развитие методов молекулярной биологии, в частности, таких как: рестрикционный анализ, полимеразная цепная реакция (ПЦР)- амплификация ДНК, секвенирование ДНК (определение олигонуклеотидной последовательности ДНК) привело к появлению нового класса молекулярно-генетических маркеров — фрагментов ДНК, соответствующих нуклеотидным последовательностям, входящих непосредственно в структуру агрономически важного гена или сцепленных с ним.

Возможности ДНК-маркеров во много раз превосходят потенциал изоферментов или запасных белков. Кроме того, проявление таких молекулярных маркеров нейтрально по отношению к фенотипу, не является тканеспецифичным и их можно обнаружить на любой стадии развития растений.

Методы ДНК-генотипирования и селекции при помощи молекулярных маркеров (marker assisted selection - MAS) позволяют ускорить перенос генов, контролирующих хозяйственно ценные признаки, в процессе селекции и обеспечить создание новых сортов с целым комплексом заданных свойств.

Успехи в молекулярной биологии риса (Oryza sativa L.J -благоприятная среда для активного использования маркерных технологий именно для этой культуры. Секвенирование генома риса и клонирование генов позволяют создавать ДНК-маркеры, эффективные в работе практической селекции.

Одним из наиболее вредоносных заболеваний риса на всей территории его возделывания, в том числе и России, является пирикуляриоз, вызываемый грибом Pyricularia otyzae Cav. Селекция устойчивых сортов - наиболее эффективный подход борьбы с данной болезнью. В создании устойчивых к пирикуляриозу сортов риса применение ДНК-маркеров может быть полезно как для непосредственного проведения селекции с помощью маркеров, так и для поиска доноров генов резистентности.

Цель и задачи исследований. Целью работы являлась разработка молекулярно-генетических маркеров для идентификации селекционно

важных генов и на основе этого создание исходного материала риса, устойчивого к пирикуляриозу.

В проводимых исследованиях были поставлены следующие задачи:

1.Создать внутригенную кодоминантную ДНК-маркерную систему идентификации гена устойчивости риса к пирикуляриозу Pi-ta.

2. Провести поиск доноров гена Pi-ta в исходном материале ВНИИ

риса.

3. Осуществить перенос генов широкого спектра устойчивости к пирикуляриозу Pi-l и Pi-ЗЗ в генетическую плазму отечественного сорта риса, используя молекулярные маркеры, тесно сцепленные с целевыми генами.

Научная новизна исследований.

1. Впервые создана кодоминантная внутригенная ДНК-маркерная система на основе полимеразной цепной реакции, позволяющая идентифицировать аллельное состояние гена устойчивости к пирикуляриозу Pi-ta.

2. Изучено 104 предселекционные линии ВНИИ риса разработанной маркерной системой гена Pi-ta .

3. Получены сортообразцы, несущие гены устойчивости к пирикуляриозу Pi-l и Pi-ЗЗ в гомозиготном состоянии и обладающие комплексом признаков, соответствующих местным агроклиматическим условиям.

Практическая значимость.

Показана эффективность применения созданной кодоминантной внутригенной ДНК-маркерной системы для обнаружения гена резистентности к пирикуляриозу риса Pi-ta и ведения маркерной селекции на устойчивость к данному патогену.

Полученные растения риса и их семена, несущие гены Pi-l и Pi-ЗЗ, могут быть использованы как доноры указанных генов в селекционных программах на устойчивость к пирикуляриозу. Созданные образцы, в отличие от линий зарубежной селекции с данными генами, имеют период вегетации, вегетационный период и морфотип близкий к отечественным сортам.

Основные положения, выносимые на защиту:

- внутригенная кодоминантная ДНК-маркерная система идентификации гена устойчивости риса к пирикуляриозу Pi-ta;.

- поиск доноров гена Pi-ta в банке данных генетических ресурсов ВНИИ риса;

- характеристика созданных сортобразцов риса на генетической основе отечественного сорта Виктория, несущих гены широкого спектра устойчивости к пирикуляриозу Pi-l и Pi-ЗЗ

- применение молекулярно генетических методов для отслеживания селекционно важных генов и на основе этого создание исходного материала риса, устойчивого к пирикуляриозу.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены на заседаниях методического совета ВНИИ риса в 2006-2009 гг., а также были представлены на V Московском международном конгрессе (Москва 16-19 марта 2009 г), IX молодежной научной конференции (Москва, В апреля 2009 г.)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе одна в изданиях рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов и их обсуждения, выводов и списка литературы. Работа изложена на страницах машинописного текста, включающих 16 таблиц и 13 рисунков. Список использованной литературы включает! 53 источника, в том числе - 106 иностранных авторов.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводились с 2006 г. по 2009 г. в лаборатории биотехнологии и молекулярной биологии Всероссийского научно -исследовательского института риса, а также на базе лаборатории генной инженерии растений биолого-почвенного факультета Санкт-Петербургского Государственного Университета.

В целях создания на генетической основе российских сортов линий риса с генами устойчивости к пирикуляриозу Pi-1 и Pi-33 была проведена гибридизация отечественного сорта Виктория с образцом зарубежной селекции - донором указанных генов. Сорт Виктория принадлежит к подвиду О.sativa japónica. В проводимой работе в качестве доноров генов устойчивости задействована линия indica С101 -Lac (Pi-l+Pi-33).

Гибридизацию растений риса осуществляли используя пневмокастрацию цветков и опыление «твел»-методом (Лось Г.Д., 2003). 104 образца риса были проанализированы ДНК-маркерной системой гена Pita в целях поиска сортов-доноров данного фактора устойчивости. Растения риса родительских сортов высаживапьсь в 10-ти литровые вегетационные сосуды, в виде 7-ми дневных проростков. Сосуды заполнялись сухой почвой, взятой с рисовых полей, на V* от общего объема. Характеристики почвы: луговочерноземная слабосолонцеватая тяжелосуглинистая, со следующими показателями: гумус - 3,01%; общие: азот - 0,25%, фосфор - 0, 13%, калий - 1,25% азот легкогидролизуемый - 7, 26; фосфор подвижный - 2,52; калий обменный - 33,8 мг/100г. рН - 7,47.

Для выделения ДНК из исследуемых образцов использовали бесхлорофилльные семидневные проростки, получаемые путем инкубации на увлажненной фильтровальной бумаге в темноте, при температуре 25-27°С. Экстракцию ДНК проводили, используя СТАВ-метод (Murray M.G., Thompson W.F. 1980).

Из растений, задействованных в процессе маркерной селекции, образцы ДНК выделяли по упрощенной методике.

Свежесрезанную часть листа (2-Зсм) растирали в 500 мкл экстрагирующего буфера в пластиковой пробирке объемом 1,5 мл. Буфер использовали следующего состава: 1М Тиб-НС! (рН 7.5), 5М №С1, 0.5М ЕОТА (рН В.0), 10% 805. Инкубировали образцы при 60°С в течение 1 - 3 часов. Отделяли супернатант центрифугированием при 12000 об/мин. К перенесенной в чистую пробирку верхней фазе добавляли 300 мкл охлажденного изопропанола, оставляли на 20 минут, предварительно перемешав. После этого образец центрифугировали 5 минут при 12000 об/мин. Полученный осадок промывали 100 мкл 70% этанола, высушивали и растворяли в 100 мкл 0,1 *ТЕ буфера.

Концентрацию выделенной ДНК определяли спектрофотометрически по стандартной методике (Маниатис и др., 1984) и методом разведений полученных препаратов - электрофорез проб в агарозном геле, содержащем 1 мкг/мл бромистого этидия, и последующая визуализация в ультрафиолете с учетом порога чувствительности бромистого этидия (Остерман Л.А., 1981).

Идентификацию генов Р'1-1 и Р1-33 в процессе селекции осуществляли тесно сцепленными микросателлитными маркерами, сиквенс которых представлен в табл.1.

Таблица 1. Нуклеотидные последовательности, используемых в работе ДНК-

маркеров

ДНК-маркер Прямой праймер Обратный праймер

Ят 224 АТСОАТССАТСТТСАСОАСО ТССТАТААААОССАТТСООО

Ят 72 ССООСОАТААААСААТОАО ОСАТСОСТССТААСТААОО

Ят 310 ССААААСАТТТААААТАТСАТО б СТТОТТО бТСАТТАССАТТС

Для четкой идентификации ПЦР-продуктов данных маркеров использовали 8% полиакриламидный гель (ПААГ). Для анализа продуктов амплификации достаточно двух с половиной часов при напряжении 250 V. Информация об основных условиях проведения молекулярно-генетичского анализа отражена в табл. 2.

Таблица 2 . Условия ПЦР-анализа маркерных локусов

Микросателлитный локус Температура отжига праймеров Разделение продуктов ПЦР Размер продуктов ПЦР

Ят 224 56 °С 8% ПААГ 124-158 п.н.*

ПпЛ2 56 °С 1,5% агарозный гель 152-198 п.н.

Ит 310 ! 56°С 1 . 2% агарозный гель 85-120 п.н.

* - пар нуклеотидов.

При исследовании маркерной системы гена устойчивости к пирикуляриозу РПа использовали праймерные пары, представленные в табл. 3.

Таблица 3. Нуклеотидная последовательность праймеров, входящих в состав ДНК-маркерной системы идентификации гена устойчивости РПа

Праймер Сиквенс праймера

Р1 вСС вТй ССТ ТСТ АТС ТТТА ССТ в

Ш АТС САА С ТС ТТА ввС ССА АСА ТТС

¥2 ТГО АСА СТС ТСА ААв йАС Твй вАТ

Ю. ТСА АвТ САв СГТ вАА вАТ вСА ТА в А

Праймерные последовательности, использованные в работе, синтезированы фирмой ЗАО «Синтол», Россия.

Параметры ПЦР для кодоминантного маркера гена Р'Ыа начальная денатурация ДНК при 94 °С - 5 минут, следующие 30 циклов: 30 секунд отжиг праймеров при 65 °С, 30 секунд элонгация при 72 °С, 15 секунд денатурация при 94 °С, последний цикл синтеза 5 минут при 72 °С.

ПЦР также осуществляли по укороченной программе, которая составляет около 50 минут:

начальная денатурация ДНК при 94 °С - 1 минута, следующие 30 циклов:

10 секунд отжиг праймеров при 65 °С, 5 секунд денатурация при 94 °С, последний цикл синтеза 1 минут при 72 °С.

Для электрофоретического разделения продуктов ПЦР маркеров использовали 8% акриламидный гель на основе 1 *Трис-боратного буфера. Электрофорез проводили при напряжении 250V в течение 3 часов. Для идентификации продуктов ПЦР микросателлитных локусов RM72, RM310 использовали электрофорез в агарозном геле. Визуализировали амплифицированные фрагменты ДНК в ультрафиолетовом свете, предварительно окрашивая гелевые пластины раствором бромистого этидия.

Предварительная оценка линии С101-Lac и сорта Виктория на устойчивость к местной популяции Pyricularia oryzae проводилась в условиях вегетационного опыта в соответствии с методическими указаниями (Фролова B.C. и др., 1983; Аверьянов A.A. и др., 1990). В качестве контроля был использован сорт риса Волгоградский, проявляющий низкую устойчивость к пирикуляриозу. Инокуляцию растений проводили культурой гриба, предоставленной сотрудниками лаборатории защиты растений ВНИИ риса, выделенной на посевах риса с полей Краснодарского края.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Создание внутригенной кодомннатнтной ДНК-маркерной системы гена устойчивости к пирикуляриозу риса Pi-la.

Наиболее удобными и эффективными являются внутригенные ДНК-маркеры. Для их разработки необходимо знание нуклеотидной последовательности гена и его положение на хромосоме.

Доминантный ген устойчивости к пирикуляриозу Pi-ta секвенирован и имеются предположения о его роли в формировании иммунитета риса. Он расположен в области центромеры 12-той хромосомы. По результатам анализа аминокислотной последовательности продукта гена, была определена его принадлежность к наиболее распространенному классу генов устойчивости растений - NBS-LRR, кодирующих белки, в структуру которых входит нуклеотид-связывающий домен - nucleotide binding site (NBS), а также рецепторная область, богатая лейцином - leucine rich repeat (LRR).

Одной из главных причин выбора для проведения работы именно с данным геном, была информация, о том что этот ген является эффективным в Краснодарской зоне рисосеяния.

Аллельспецифичный праймер каждой пары имели один общий нуклеотид в зоне SNP, но отжигались на цепи ДНК соответственно своей последовательности, но в противоположных направлениях. Дополнительные

праймеры для каждой пары были подобраны произвольно, с точки зрения методического удобства.

Принцип работы всей маркерной системы представлен на рис. 1.

Рисунок 1. Схема работы кодоминантной ДНК-маркерной системы Примечание:

™- первая праймерная пара и место ее отжига на цепи ДНК шшшшжа - вторая праймерная пара и место ее отжига на цепи ДНК

<■■..................... Стрелками показано направление синтеза специфичного

продукта

Для проверки эффективности созданной маркерной системы была поставлена пробная ПЦР с сортами ATI и /R36 (положительный контроль) и Nipponbare (отрицательный контроль) и произвольно взятыми сортами из коллекции ВНИИ риса см. рис. 2.

1 2 3 4 5 6

Рисунок 2. Электрофоретическое разделение продуктов амплификации маркер гена Pi-ta Примечание:

1 -сорт К] (положительный контроль), 2- сорт МрропЬаге (отрицательный контроль), 3-сорт Виктория, 4 - сорт /Я36 (положительный контроль), 5 - сорт Топс/е, 6 - сорт Ои 244

Из рисунка 2 видно, что продукты амплификации, соответствующие рецессивной (образцы № 2, №3, №5, №6) и доминантной (образцы №1 и №4) аллелям, значительно отличаются по размеру и их можно визуально различить.

Таким образом, анализ результатов проверки созданной аллельспецифичной кодоминантной маркерной системы показал ее эффективность при идентификации доминантной и рецессивной аллели гена резистентности к пирикуляриозу РПа, что свидетельствует о перспективности ее использования в программах маркерной селекции на устойчивость риса к пирикуляриозу.

3.2 Поиск доноров устойчивости к пирикуляриозу риса кодоминантной маркерной системой гена РЫа

Поиск доноров резистентности - один из главных этапов в селекции устойчивых к пирикуляриозу форм риса. Традиционно для идентификации генетической плазмы, несущей устойчивость к пирикуляриозу, применяют фитопатологические исследования. Однако такие анализы трудоемки и для их проведения необходимы совместимые изоляты возбудителя, а присутствие одного гена устойчивости иногда может фенотипически скрывать другие факторы, определяющие резистентность к той же расе гриба. Использование ДНК-маркеров позволяет безошибочно идентифицировать аллели генов устойчивости в анализируемых растениях. Созданная кодоминантная внутригенная маркерная система гена Р\-1а была использована нами для скрининга ДНК образцов риса для контрольного питомника ВНИИ риса в 2009 году с целью поиска доноров данного фактора устойчивости (рис.3).

1 234 5 6 78 91011

1213 14 15 16 17 18 19

Рисунок 3. Аллельная миграция продуктов ПЦР в локусе маркера гена Pi-la

Примечание:

1-СПСУ-08-167; 2 - СПСУ-08-170; 3 - СПСУ-08-242; 4 -СПСУ08-244; 5 - СПСУ-08-498; 6 - СПСУ-08-504; 7 - сорт Ю; 8 - маркер BsuRl; 9 -СПСУ-08-563; 10 - СПСУ-08-571; 11 - СПСУ-08-616;12 - СПСУ-08-1690; 13 - СПСУ-08-1694; ¡4 - СПСУ-08-1697; 15 - СПСУ-08-1706; 16-СПСУ-08-1759; 17 - СПСУ-08-1805; 18 - маркер BsuRl; 19 - сорт К\. Проведено исследование 104 образцов риса на предмет присутствия доминантной аллели гена Pi-la. Аллель, определяющая устойчивость к пирикуляриозу, не выявлена ни в одном сортообразце. Результат проделанной работы свидетельствует об эффективности применения данной маркерной системы на большом количестве образцов, а также успешного использования ее в программах маркерной селекции на устойчивость к пирикуляриозу, создания исходного материала с геном резистентности Pi-la для селекции риса.

3.3 Проверка линии риса C101-Lac и сорта Виктория на устойчивость к местной популяции пирикуляриоза.

Оценка линий доноров целевых генов проводилась в условиях вегетационного опыта, согласно методике, описанной в разделе «Материал и методы». На рис. 4 представлены фотографии листьев риса всех исследуемых сортов риса через 14 дней после их заражения Учет интенсивности заражения растений показал, что линия риса C101-Lac проявили полную устойчивость к местной популяции грибного патогена. Тогда как, сорт риса Виктория, выступающий в роли материнской родительской формы, оценивается как неустойчивый (ИРБ=55,6%). В качестве контроля использовался сорт Волгоградский, который является сильновосприимчивым к данному заболеванию (ИРБ = 100%).

Сорт Линия риса Сорт

Волгоградский С101-Lac Виктория

ии

шт

Рисунок 4. Листья риса после заражения Краснодарской популяцией патогена

3.4 Программа пирамидирования генов широкого спектра устойчивости к пирикуляриозу Pi-1 и Pi-ЗЗ в генплазму отечественного сорта риса

В проводимой работе по введению генов устойчивости к пирикуляриозу Pi-1 и Pi-ЗЗ в генотип сорта риса Виктория, адаптированного к местным агроклиматическим условиям, в качестве доноров переносимых аллелей использована линия ClOl-Lac (Франция) подвида indica. В условиях Краснодарского края данные линии проявили себя как позднеспелые, с вегетационным периодом 140 - 155 дней. В местной зоне рисосеяния предпочтительно возделывание сортов, созревающих не более, чем за 125 дней. При гибридизации российский сорт выступал в качестве материнской формы.

Контроль присутствия донорных генов устойчивости проводили ДНК-маркерами (см. главу «Материал и методы»).

На рис. 5 схематично представлен план работы по переносу генов ¡'¡-1 и Р1-33 в генотип сорта риса Виктория из линий-доноров указанных генов.

Донорные линии риса X

PiPi

pipi

Сорт Виктория

Pi pi

pi pi

Сорт Виктория

ВС,

Гибриды первого X поколения Fl J,

ВС2

ПЦР анализ 1

ВС2 Fl

Сегрегирующая популяция

PiPi Pi pi pipi

4

ПЦР-аналк~

Рисунок 5. Схема эксперимента по пирамидированию

целевых генов

В работе использовали маркер молекулярной массы рВЯ222/В$иШ. При работе с молекулярными маркерами для селекционных задач важным фактором является время, затраченное на лабораторный эксперимент. Более удобны в работе маркеры, которые позволяют производить точную идентификацию результатов в агарозном геле, так как на визуализацию продуктов ПЦР уходит 40 - 60 минут.

Возможность определения разницы аллельного состояния изучаемого микросателлитного повтора в геноме родительских форм, при электрофорезе ампликонов в агарозном геле, показали локусы Ят72 и ЛтЗЮ

Полученные семена гибридов первого поколения высеяли в вегетационные сосуды для возвратных скрещиваний с сортом риса Виктория. Рекуррентный российский сорт высевали в три срока, с разницей в 10 дней, тем самым, увеличивая вероятность совпадения периодов цветения родительских форм. В осенне-зимний период для проведения исследований по плану работ задействовали камеры искусственного климата ВНИИ риса; в весенне-летний период растения выращивали на вегетационной площадке. Результаты проведения первого возвратного скрещивания представлены в табл. 4.

Таблица 4. Результаты скрещивания гибридов Р1 с сортом Виктория

Комбинация скрещивания Опылено метелок, шт. Опылено цветков, шт. Получено гибридных семян ВС1, шт. Завязываемость гибридных семян, %

3 Викториях с?В икториях С101-Ьас 12 280 65 23,2

После посева семян ВС( из всех растений были выделены образцы ДНК, ПЦР-анализом с маркерами генов Р/-/ и Рг-ЗЗ оценили в них наличие переносимых аллелей (рис.6).

1234567 89 10 1112

Рисунок 6. Результаты электрофореза продуктов ПЦР локуса Яш224 в полиакриламидном геле

Примечание:

I - линия С101 -Ьас - донор гена Я/-/; 3 - сорт Виктория; 2, 4- 12 -анализируемые ВС - растения.

На рис. 6 показаны результаты электрофоретического разделения продуктов ПЦР локуса Ят224 с растениями из ВС|-популяции комбинации СЮЬЬасхВиктория. Донорная аллель выявлена в растениях №3, №4, №5 и №7, которые являются гетерозиготными по изучаемому локусу - на электрофореграмме четко читаются и донорная и материнская аллели. Растения №2 и № 10 несут ген Р\-1 в гомозиготном состоянии.

123456789

Рисунок 7. Результаты электрофореза продуктов ПЦР локуса Rml2 в полиакриламидном геле

Примечание: I - линия С101- Lac - донор гена Pi-33; 6- сорт Виктория;

2-5, 7-9 - анализируемые ВС - растения.

На рис. 7 показаны результаты электрофореза в полиакриламидном геле продуктов ПЦР по локусу Rmll с ДНК анализируемых растений, сортом Виктория и линии, несушей гены Pi 1 и Pi-ЗЗ. Видно, изучаемые образцы и линия ClOl-Lac являются полиморфными по данному микросателлитному повтору. Гетерозиготным является растение № 5,

гомозиготным - растение № 7. Результаты проверки растений популяции ВС1 представлены в табл. 5.

Таблица 5. Проверка гибридов ВС] Р1 на гетерозиготность по изучаемым локусам_

Ген, устойчивости к пирикуляриозу Маркер, сцепленный с целевым локусом Кол-во ! Кол-во выявленных исследованных ( гетерозиготных растений, шт. | растений, шт.

РП Нт 224 54 1 15

/'¡33 Ят 72 54 I 12

Среди растений поколения ВСЬ несущих переносимую аллель, отмечали те, которые показали наименьший период вегетации до цветения, их в первую очередь использовали при последующем беккроссировании. Растения, в генотипе которых аллели устойчивости не были обнаружены, выбраковывали. В ВСгпопуляциях фертильность метелки в среднем составляла около 50%.

Таблица 6. Результаты второго беккроссирования

Комбинация скрещивания Опылено цветков, шт. Опылено метелок, шт. Получено гибридных семян ВС1, шт. Завязываемость гибридных семян, %

$Викториях(?Викториях С101-Ьас 320 11 112 35

В полученных ВСг-популяциях работа проводилась по той же схеме.

Отобранные по молекулярным данным растения, несущие донорные аллели (см. табл. 7), вовлекались в следующий беккросс, формы с нежелательным морфотипом нами предварительно выбраковывались.

Таблица 7. Проверка гибридов ВС2Р1 на присутствие аллелей донорных генов РП и Р/33

Ген,устойчивости к пирикуляриозу Маркер, сцепленный с целевым локусом Кол-во исследованных растений, шт. Кол-во растений, несущих доминантную аллель целевых генов, шт.

РП Яш 224 98 19

Р133 Ят 72 98 25

В 10 исследуемых растениях одновременно были идентифицированы два гена (РП+Р133) в гетерозиготном состоянии. Именно эти образцы были использоваться в дальнейших беккроссах. Растения, в генотипе которых аллели устойчивости не были обнаружены, выбраковывали.

В результате несовпадения сроков цветения родительских форм следующий по плану беккросс осуществлен не был. Растения поколения ВС2Р1 были оставлены на самоопыление. ВС2Р1.

Длина вегетационного периода растений ВС2Р1 в среднем составила 120-125 дней. Ботаническая разновидность Уаг. ИаИса А1е(. Одна часть семян популяции растений ВС2 П была использована для фитопатологической проверки на устойчивость к пирикуляриозу, другая -вовлечена в дальнейшее беккроссирование. На рис. 8 показаны семена растений поколения ВС2Р2.

Рисунок 8. Метелка и семена растения риса из популяции ВС2Р2, несущего гены устойчивости /VI и/>¿33

Часть полученных от самоопыления семян была оставлена для фитопатологической проверки на устойчивость к местной популяции патогена. Другая часть использована для дальнейших возвратных скрещиваний. В табл. 8 представлены биометрические данные растений популяции ВС2Р2.

Таблица 8 . Краткая характеристика растений риса из популяции ВС2Р2

Признак Значение признака у растений риса

№ растения 3 4 7 8 9 10 11 13

Введенный ген устойчивости к пирикуляриозу газ Р13 3 Р11 Р» 33 Р1\ газ РИ /4 33 РП газ газ

Высота растений, см 63 57 61 53 57 49 57 59

Число продуктивных стеблей, шт 1 1 2 1 1 1 1 1

Длина главной метелки, см. 14 15 14 14 12 10 13 13

Число колосков на главной метелке, шт. 86 74 87 76 76 65 87 77

Число выполненных зерновок, шт. 77 65 78 63 66 57 73 64

Пустозерность (стерильность), % 10,4 12,1 10,3 17,1 13,1 12,3 16,1 16,8

Масса зерна с главной метелки, г. 2,1 1,6 2,1 1,5 1,9 1,6 1,9 1,5

Масса 1000 зерен, г 27,3 24,6 26,9 23,8 28,7 28,0 26,0 23,4

Начиная с поколения ВС3, дальнейшие возвратные скрещивания не проводили. Известно, что доля генома рекуррентной родительской формы в потомстве ВСз составляет 93.75 % .

Таблица 9. Результаты третьего беккроссирования

Получе

Опыл но

Комбинация скрещивания Опылено ено гибрид Завязываемость

метелок, шт. цветк ов, шт. ных семян ВС1, шт. гибридных семян, %

$Викторияхс?Ви кториях C101-Lac 10 360 50 13,8

Таблица 10. Проверка гибридов BCjFl на наличие аллелей донорных генов РИ и «33

Ген устойчивости к пирикуляриозу Маркер, сцепленный с целевым локусом Кол-во исследованных растений, шт. Кол-во растений, несущих доминантную аллель целевых генов, шт.

Pil Rm 224 120 55

Pi33 Rm 72 120 47

Растения, анализ ДНК которых показал присутствие донорных генов, были использованы для получения семян BC3F1 поколения. Самоопыление растений риса, гетерозиготных по селектируемым генам, дает возможность перевести приоритетную аллель в гомозиготное состояние. Среди растений ВС3 были отобраны формы с наименьшим вегетационным периодом и наибольшей фертильностью метелки. Семена этих растений высеяли для получения сегрегирующей BC3F1 популяции. Маркерный анализ полученной популяции выявил образцы, несущие вводимые целевые гены в гомозиготном состоянии.

Для селекции риса на современном этапе желательным является низкорослый тип растений, с высокой интенсивностью первоначального роста, устойчивый к полеганию, с продуктивной метелкой и неосыпающимися в фазу полной спелости колосками. Среди растений, которые по результатам ДНК-анализа, несли гены PiI и Pi-ЗЗ в гомозиготном состоянии, удалось отобрать несколько форм, совмещающих в себе скороспелость, низкорослость, неосыпаемость и повышенную фертильность колосков. В рабочую коллекцию ВНИИ риса, в качестве исходного материала, переданы семена растений популяции BC3F1. Вегетационный период растений составляет 105-120 дней, а их морфотипы близки рекуррентному сорту

Виктория. Переданные сортообразцы риса несут гены Р1-1, Р1-33 и />/-1+Р1-33 в гомозиготном состоянии.

Переданные образцы риса могут быть использованы в качестве доноров указанных генов. Главные их преимущества над линиями-донорами - вегетационным период, адаптированный к местным климатическим условиям и генетическая близость отечественным сортам, что позволит преодолеть высокую стерильность гибридов в селекционных программах.

ВЫВОДЫ

1. Современные ДНК-маркерные технологии позволяют оценивать присутствие интересующих генов и их аллелей в селекционно важном материале риса, а также вести направленный и контролируемый процесс отбора растений с полезными признаками.

2. Молекулярный полиморфизм локуса расоспецифической устойчивости к пирикуляриозу РЫа позволил создать маркерную систему данного гена для идентификации его аллельного состояния в сортах и сортообразцах риса.

3. Созданный внутригенный аллельспецифичный маркер гена РЫа успешно применим для проведения массового скрининга коллекции исходного материала риса с целью поиска доноров целевого гена.

4. Применение молекулярных маркеров, тесно сцепленных с генами широкого спектра устойчивости к пирикуляриозу РИ и РгЗЗ, повысило эффективность и скорость создания исходного материала с пирамидированными генами, на основе элитной отечественной генетической плазмы риса.

5. Созданные методом маркерной селекции сортообразцы риса с генами устойчивости к пирикуляриозу РИ и РШ могут служить донорами данных генов в селекционных программах на устойчивость к пирикуляриозу.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИЧЕСКОЙ СЕЛЕКЦИИ

1. Рекомендовать сортообразцы риса с пирамидированнми генами широкого спектра устойчивости к пирикуляриозу РИ и Р133, переданные в рабочую коллекцию ВНИИ риса, в качестве доноров указанных генов, а также для их дальнейшего использования в селекции на устойчивость к патогену.

2. Использовать созданную ДНК-маркерную систему гена устойчивости к пирикуляриозу РЫа для скрининга образцов рабочей коллекции ВНИИ риса, с целью выявления доноров целевого гена.

3. Применять созданный молекулярный маркер гена устойчивости к пирикуляриозу РЫа для идентификации аллельного состояния данного гена в программах по маркерной селекции, направленных на создание устойчивых к патогену сортов риса.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Статьи в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ на соискание ученой степени кандидата наук

1. . Мягких, Ю. А Создание исходного материала риса для селекции на устойчивость к пирикуляриозу / Ю.А. Мягких // Тр. Куб. ГАУ. - 2009. №2(17).- С. 139-140

2. Статьи в аналитических сборниках и материалах конференции

1. Мухина, Ж.М. Изучение биоразнообразия фитопатогенного гриба (Magnaporihe grísea) (Herbert) Barr с использованием методов молекулярного маркирования/ Ж.М. Мухина, С.А. Волкова, Ю.А. Мягких // метод, рекомендации,- Краснодар, 2007. - 20 с.

2. Мухина, Ж.М. Создание кодоминантного молекулярного ПЦР-маркера для идентификации гена расоспецифической устойчивости к пирикуляриозу риса Pi- ta /Ж.М. Мухина, Ю.А. Мягких, Д.И. Богомаз, Т.В. Матвеева, C.B. Токмаков // Рисоводство,- 2008. №12. -С. 3-5

3. Мягких, Ю.А. Молекулярно- генетический подход к созданию исходного материала в программах, селекции риса / Ю.А. Мягких, Ж.М. Мухина, C.B. Токмаков // материалы: международ, научно-практическая конф. «Селекция сортов риса, устойчивых к абиотическим и биотическим стрессам, для стран умеренного климата и Центральной Азии». -Краснодар, 2009,- С. 60-63

4. Мухина, Ж.М. Использование молекулярно-генетических подходов для идентификации гена расоспецифической устойчивости к пирикуляриозу риса Pi-ta/ЖМ. Мухина, Ю.А. Мягких, C.B. Токмаков // материалы: XVII международный симпозиум «Нетрадиционное растениеводство. Селекция. Охрана природы. Эниология. Экология и здоровье»,- Алушта, 2008. -С.472-473

5. Токмаков, C.B. Создание внутригенного маркера к гену RC окраски перикарпа краснозерного риса / C.B. Токмаков, Ж.М. Мухина, Ю.А. Мягких // материалы: международ, научно-практическая конф. «Селекция сортов риса, устойчивых к абиотическим и биотическим стрессам, для стран умеренного климата и Центральной Азии». - Краснодар, 2009.- С. 75-78

6. Мухина, Ж.М. Создание внутригенных ДНК-маркеров и их использование в практической селекции риса / Ж.М. Мухина, И.И. Супрун, Е.Т. Ильницкая, С.А. Волкова, Ю.А. Мягких, Е.В. Дубина, C.B. Токмаков.// материалы Пятый Московский международ, конгр. «Биотехнология: состояние и перспективы развития». - М., 2009.

7. Мягких, Ю.А. Применение методов молекулярного маркирования в селекции риса на устойчивость стрессовым биотическим факторам / Ю.А. Мягких // IX молодежная науч. конф. «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» М., 2009.- С. 22

8. Мягких, Ю.А. Применение методов молекулярного маркирования для создания исходного материала риса для селекции / Ю.А. Мягких, Ж.М. Мухина, C.B. Токмаков // Рисоводство. - 2009. №14,- С. 17-19

Подписано в печать 16.10.2009 Бумага офсетная.

Печать офсетная

Усл. печ. л. 1 Тираж 120

Заказ №876

Типография Кубанского государственного аграрного университета 350044 г. Краснодар, ул. Калинина, 13

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мягких, Юлия Александровна

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Культура риса Orisa sativa L.

1.2 Изучение генома риса

1.3 Проблема пирикуляриоза риса

1.4 Генетика устойчивости риса к патогену

1.5 Молекулярные маркеры: понятие и основные виды

1.6 Маркерная селекция для выведения новых сортов риса

1.7 Гены устойчивости к пирикуляриозу риса

1.7.1 Гены широко спектра устойчивости к патогену Pi-1 и Pi

1.7.2 Ген Pi-ta - один из эффективных генов устойчивости риса к пирикуляриозу в Краснодарской зоне рисосеяния

2.МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

2.1 Исходный материал для серии возвратных скрещиваний

2.2 Исходный материал для поиска доноров устойчивости к пирикуляриозу риса

2.3 Подготовка растительного материала и экстракция ДНК

2.4 Молекулярные маркеры, использованные в работе

2.5 Разработка кодоминантной ДНК-маркерной системы

2.6 Постановка полимеразной цепной реакции и электрофореза продуктов амплификации

2.7 Гибридизация растений риса

2.8 Оценка устойчивости риса к пирикуляриозу

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Создание внутригенной кодоминатнтной ДНК — маркерной системы гена устойчивости к пирикуляриозу риса Pi-ta

3.2 Поиск доноров устойчивости к пирикуляриозу рисас помощью кодоминантной ДНК-маркерной системы гена устойчивости к пирикуляриозуРг-ta

3.3 Проверка линии С101-Lac на устойчивость к местной популяции пирикуляриоза

3.4 Программа пирамидирования генов широкого спектра устойчивости к пирикуляриозу Pi-1 и Pi-ЗЗ в генетическую плазму отечественного сорта риса Виктория 68 ВЫВОДЫ 84 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Применение молекулярного маркирования для повышения эффективности селекции риса"

Актуальность проблемы.

Создание новых сортов сельскохозяйственных растений, в том числе и риса, основано на использовании природного или созданного человеком генетического разнообразия. Для отбора растений, несущих хозяйственно ценные признаки, и отслеживания этих признаков в процессе селекции используют легко распознаваемые фенотипические проявления генов -маркеры.

Применение в качестве фенотипических маркеров белковых молекул (изоферменты, запасные белки) - продуктов индивидуальных генов -существенно расширило возможности картирования генов и их мониторинга в селекционном процессе и позволило создать новые методы идентификации и систематизации сортов.

Развитие методов молекулярной биологии, в частности, таких как: рестрикционный анализ, полимеразная цепная реакция (ПНР)- амплификация ДНК, секвенирование ДНК (определение олигонуклеотидной последовательности ДНК) привело к появлению нового класса молекулярно-генетических маркеров — фрагментов ДНК, соответствующих нуклеотидным последовательностям, входящих непосредственно в структуру агрономически важного гена или сцепленных с этим геном.

Возможности ДНК-маркеров во много раз превосходят потенциал изоферментов или запасных белков. Кроме того, проявление таких молекулярных маркеров нейтрально по отношению к фенотипу, не является тканеспецифичным и их можно обнаружить на любой стадии развития растений [38].

Методы ДНК-генотипирования и селекции при помощи молекулярных маркеров (marker assisted selection - MAS) позволяют ускорить перенос хозяйственно ценных генов в процессе селекции и обеспечить создание новых сортов с целым комплексом заданных свойств[39].

Успехи в молекулярной биологии риса (Oryza sativa L.) — благоприятная среда для активного использования маркерных технологий именно для этой культуры. Секвенирование генома риса и клонирование генов позволяют создавать ДНК-маркеры, эффективные в работе практической селекции.

Одним из наиболее вредоносных заболеваний риса на всей территории возделывания, в том числе и России, является пирикуляриоз, вызываемый грибом Pyricularia oryzae Cav. Селекция устойчивых сортов — наиболее эффективный подход борьбы с данной болезнью. В создании устойчивых к пирикуляриозу сортов риса применение ДНК-маркеров может быть полезно как для непосредственного проведения селекции с помощью маркеров, так и для поиска доноров генов резистентности.

Цель и задачи исследований. Целью работы являлась разработка молекулярно-генетических маркеров для идентификации селекционно важных генов и на основе этого создание исходного материала риса, устойчивого к пирикуляриозу.

В проводимых исследованиях были поставлены следующие задачи:

1.Создать внутригенную кодоминантную ДНК-маркерную систему гена устойчивости риса к пирикуляриозу Pi-ta.

2. Провести поиск доноров гена Pi-ta в исходном селекционном материале ВНИИ риса.

3. Осуществить перенос генов широкого спектра устойчивости к пирикуляриозу Рг-1 и Рг-33 в генетическую плазму отечественного сорта риса, используя молекулярные маркеры, тесно сцепленные с целевыми генами.

Научная новизна исследований.

1. Впервые создана кодоминантная внутригенная ДНК-маркерная система на основе полимеразной цепной реакции, позволяющая идентифицировать аллельное состояние гена устойчивости к пирикуляриозу РПа.

2. Изучено 104 предселекционные линии ВНИИ риса разработанной маркерной системой гена РЫа .

3. Получены сортообразцы, несущие гены устойчивости к пирикуляриозу Р1-1 и Рг-ЗЗ в гомозиготном состоянии и обладающие комплексом признаков, соответствующих местным агроклиматическим условиям.

Научно-практическая ценность работы.

Показана эффективность применения созданной кодоминантной внутригенной ДНК-маркерной системы для обнаружения гена устойчивости к пирикуляриозу РЫа и ведения маркерной селекции на устойчивость к данному патогену.

Полученные растения риса и их семена, несущие гены Р1-1 и Рг-ЗЗ, могут быть использованы как доноры указанных генов в селекционных программах на устойчивость к пирикуляриозу. Созданные образцы, в отличие от линий зарубежной селекции с данными генами, имеют период вегетации, вегетационный период и морфотип близкий к отечественным сортам.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены на заседаниях методического совета ВНИИ риса в 2006-2009 гг., а также были представлены на V Московском международном конгрессе (Москва 16-19 марта 2009 г), IX молодежной научной конференции (Москва, 8 апреля 2009 г.)

Публикации результатов исследований. По материалам исследований опубликовано 9 печатных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов и их обсуждения, выводов и списка литературы. Работа изложена на страницах машинописного текста, включающих 16 таблиц и 13 рисунков. Список использованной литературы включает153 источника, в том числе - 106 иностранных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Селекция и семеноводство", Мягких, Юлия Александровна

выводы

1. Молекулярный полиморфизм локуса расоспецифической устойчивости к пирикуляриозу РЫа позволил создать маркерную систему данного гена для идентификации его аллельного состояния в сортах и сортообразцах риса.

2. Созданный внутригенный аллельспецифичный маркер гена РМа успешно применим для проведения массового скрининга коллекции исходного материала риса с целью поиска доноров целевого гена.

3. Применение молекулярных маркеров, тесно сцепленных с генами широкого спектра устойчивости к пирикуляриозу РП и Р1ЗЗ, повысило эффективность и скорость создания исходного селекционного материала с пирамидированными генами, на основе элитной отечественной генетической плазмы риса.

4. Созданные методом маркерной селекции сортообразцы риса с генами устойчивости к пирикуляриозу РП и РгЗЗ могут служить донорами данных генов в селекционных программах на устойчивых к пирикуляриозу.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИЧЕСКОЙ СЕЛЕКЦИИ

1. Рекомендовать сортообразцы риса с пирамидированнми генами широкого спектра устойчивости к пирикуляриозу РП и Р1ЗЗ, переданные в рабочую коллекцию ВНИИ риса, в качестве доноров указанных генов, а также для их дальнейшего использования в селекции на устойчивость к патогену.

2. Использовать созданную ДНК-маркерную систему гена устойчивости к пирикуляриозу РЫа для скрининга образцов рабочей коллекции ВНИИ риса, с целью выявления доноров целевого гена.

3. Применять созданный молекулярный маркер гена устойчивости к пирикуляриозу РЫа для идентификации аллельного состояния данного гена в программах по маркерной селекции, направленных на создание устойчивых к патогену сортов риса.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Мягких, Юлия Александровна, Краснодар

1. Алешин, Е.П. Рис / Е.П. Алешин, Н.Е Алешин. — 2-е изд., перераб. и доп. — Краснодар, 1997. 506 с.

2. Ван дер Планк, Я. Генетические и молекулярные основы патогенеза у растений /Я. Ван дер Планк М.: Мир, 1981.-236 с.

3. Введение в генетику, биоинформатика, ДНК-технология, генная терапия, ДНК-экология, протеомика, метаболика/ В.И. Глазко,

4. Г.В. Глазко. К.: КВ1Ц, 2003.- 640 с.

5. Глазко, В.И. ДНК-технологии в генетике и селекции: курс лекций/ В.И. Глазко, Т.Т. Глазко. Краснодар: ВНИИ риса, 2006. - 399 с.

6. Гостимский, С.А. Использование молекулярных маркеров для анализа генома растений/ С.А. Гостимский, З.Г. Кокаева, В.К. Боброва // Генетика.-1999.-Т.35.- С.1538-1549.

7. Грибные болезни риса / JI.JI. Дорофеева A.A. Кодяков, В.И Кратенко и др..- Ташкент: Фан, 1992. 96 с.

8. Деменьтьева, М.И. Фитопатология / М.И. Деменьтьева, М., 1985. — 397с.

9. Дзюба, В.А. Генетика риса / В.А. Дзюба. - Краснодар: ВНИИ риса, 2004.- 283с.

10. Дьяков, Ю.Т. Общая и молекулярная фитопатология / Ю.Т. Дьяков, O.JI. Озерецковская В.Г. Джавахия, и др. М.: Общество фитопатологов, 2001.-302 с.

11. Зеленский, Г.Л. Селекция сортов риса, устойчивых к пирикуляриозу, рисовой листовой нематоде и бактериальному ожогу в условиях Российской Федерации/ Зеленский Григорий Леонидович: автореф. дис. . д-ра с.-х. наук.- Краснодар, 1993.-48 с.

12. Зеленский, Г.JI. Перспективы создания сортов риса с высокой продуктивностью и адаптивными качествами/ Г.Л. Зеленский // Рисоводство.- 2003.- № 3.- С.7-11.

13. Иванова, Д.И. Иммунохимическое изучение водо — солерастворимых белков зерновки риса в связи с вопросами эволюции и таксономии культурных видов рода Oryza L./ Д.И. Иванова: тр. по прикл. бот., ген. и сел.-1979.- № 3.- С.135-144.

14. Иванова, Д.И. Подвидовая дифференциация Oryza sativa L. по результатам иммунохимического анализа белков зерна / Д.И. Иванова // С.-х. биология.- 1980.-№6.- С.874-877.

15. Иванова, Д.И. Полиморфизм спирторастворимого белка зерновки риса и перспективы его использование в оценке внутривидового разнообразия Oryza sativa L./ Д.И. Иванова. // С.- х. биология.- 1983.- №4.- С.41-45.

16. Иванова, Д.И. Идентификация геномов, субгеномов и подвидов риса по белкам зерновки / Д.И. Иванова // С.-х. биология.- 1986.- №7.- С.З- 9.

17. Ильницкая, Е.Т. Молекулярное маркирование в селекции риса на устойчивость к пирикуляриозу/ Ильницкая Елена Тарасовна.: автореф. дис. . канд. биол. наук,- Краснодар, 2007.-24 с.

18. Коваленко, Е.Д. Методические. указания по оценке устойчивости сортов риса к возбудителю пирикуляриоза / Е.Д. Коваленко, Ю.В Горбунова, A.A. Ковалева, и др. М., 1988.- 42 с.

19. Конарев, A.B. Использование молекулярных маркеров в работе с генетическими ресурсами растений / A.B. Конарев // С.-х. биология.- 1998.-№5.- С.3-25.

20. Конарев, В.Г. Белки как генетические маркеры растений / В.Г. Конарев. -М.: Колос, 1983.-320с.

21. Коротенко, Т.Jl. Оценка исходного материала для селекции сортов риса с высоким качеством зерна / Коротенко Татьяна Леонидовна.: Автореф. дис. канд. с.-х. наук.- Краснодар.- 1990.- 21 с.

22. Костылев, П.И.Северный рис (генетика, селекция, технология) / П.И. Костылев, A.A. Парфенюк В.И. Степовой.- Ростов н/Д: ЗАО «Книга», 2004.-576 с.

23. Лабораторный экспресс-метод оценки сортовой устойчивости риса к пирикуляриозу / A.A. Аверьянов, В.П. Лапикова, Г.Г. Петелина. — Большие Вяземы: ВНИИФ, 1990.- 12 с.

24. Лобашев, М.Е. Генетика / М.Е. Лобашев. Ленинград: Издательство ленинградского университета, 1969.- 752с.

25. Лось, Г.Д. Перспективный способ гибридизации риса / Г.Д. Лось // С.-х. биология,- 1987.- № 12,- С.107-109.

26. Лось, Г.Д., Создание исходного материала для селекции риса / Г.Д. Лось, А.Р. Третьяков // Рисоводство.- 2003.- №3.- С.12-13.

27. Лось, Г.Д. Методика гибридизации риса / Г.Д. Лось // Рисоводство.-2007,-№10.- С.42-51.

28. Ляховкин, А.Г. Рис. Мировое производство и генофонд / А.Г. Ляховкин 2-е изд., перераб. и доп. -СПб.: «профи-информ», 2005.- 288 с.

29. Маниатис, Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование / Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Сэмбрук. М.: Мир. 1984.- 480 с.

30. Методические указания по оценке устойчивости сортообразцов риса к пирикуляриозу в инфекционном питомнике / В.С.Фролова, Е.Д. Коваленко, Ж.Г. Наскидашвили и др.. -М.: ВАСХНИЛ, 1983.- 14 с.

31. Мухина, Ж.М. Генотипирование российских сортов риса микросателлитными маркерами / Ж.М. Мухина, B.C. Ковалев, И.И. Супрун и др.. // Рисоводство. №2, 2002. - С. 32-35.

32. Наскидашвили, Ж.Г. Селекция на устойчивость к пирикуляриозу риса / Ж.Г Наскидашвили., Н.Н.Сокерина, Г.Л. Зеленский // Защита растений.-1987.-№ 12. -С. 18-19.

33. Олдендерфер, М. С. Кластерный анализ Факторный, дискриминантный и кластерный анализ / М. С. Олдендерфер, С.К Блэшфилд. М., 1989. - С.139-210.

34. Остерман, Л.А. 1981 Методы исследования нуклеиновых кислот.- М.: Наука, 1981.- 288 с.

35. Пересыпкин, В.Ф. Болезни зерновых культур / В.Ф. Пересыпкин. М.: Колос, 1979.-279 с.

36. Петрова, А.И. Болезни риса и борьба с ними / А.И. Петрова. М., 1968.-112 с.

37. Растениеводство с основами селекции и семеноводства / Г.В. Коренев, П.И. Подгорный, С.Н. Щербак, М. - 1973.-512 с.

38. Селькохозяйственная биотехнология: учеб. / B.C. Шевелуха, Е.А. Калашникова, C.B. Дектярев и др..: Под ред. B.C. Шевелухи. — М., 1998. 416 с.

39. Сиволап, Ю.М. Исследование молекулярно-генетического полиморфизма сортов Triticum aestivum L. с помощью RAPD- и SSRP-анализа / Ю.М. Сиволап, C.B. Чеботарь, Е.А. Топчиева и др. // Генетика.- 1999.- Т. 35.- С. 1665-1673.

40. Созинов, А.А. Полиморфизм белков и его значение в генетике и селекции / А.А. Созинов. М., 1985.- 245с.

41. Система рисоводства Краснодарского края: рекомендации / Под общ. ред. Е.М.Харитонова.- Краснодар: ВНИИ риса, 2005.- 340 с.

42. Суворова, Г.Н., Фунатсуки X., Терами Ф. Филогенетическое родство некоторых сортов, видов и гибридов рода Fagopyrum Mill., установленное RAPD-анализом / Г.Н. Суворова, X. Фунатсуки, Ф. Терами // Генетика.-1999.- Т. 35.- С. 1659-1664.

43. Хавкин, Э.Е. Молекулярные маркеры в растениеводстве/ Э.Е. Хавкин // Сельскохозяйственная биология.- 1997.- №5.- С.3-19.

44. Хавкин, Э.Е. Молекулярная селекция растений: ДНК-технологии создания новых сортов сельскохозяйственных культур / Э.Е. Хавкин // С.-х. биология.- 2003.- №3.- С.26-41.

45. Шибата, Д.К. Полимеразная цепная реакция и молекулярно-генетический анализ биоптатов / Д.К. Шибата // Молекулярная клиническая диагностика,-М.: Мир, 1999.- С. 395-427.

46. Шиловский В.Н. Селекция и сорта риса на Кубани / В.Н. Шиловский, Е.М.Харитонов, А.Х. Шеуджен Майкоп, 2001.-34 с.

47. Akagi, Н., Highly polymorphic microsatellites of rice consist of AT repeats, and classification of closely related cultivars with these microsatellite loci / Akagi H., Yokozeki Y., Inagaki A. et al. // Theor. Appl. Genet.- 1997,- V. 94.- P.61-67.

48. Aharon, A. DNA microarrays for functional plant genomics/ Aharon A., Vorst О // Plant Mol. Biol.- 2001.- V. 48.- P. 99-118.

49. Ahn, S.N. RFLP analysis of genomic regions associated with cooked-kernel elongation in rice / Ahn S.N., Bollich C.N., McClung A.M. et al. // Theor. Appl. Genet.- 1991.- V. 87.- P. 141-145.

50. Ahn, S.N. Comparative linkage maps of the rice and maize genomes / Ahn S.N., Tenksley S.D. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA -1993.- V. 90.- P. 79807984.

51. Ahn, S.N. Molecular mapping of a new gene for resistance to rice blast (Pyricularia grisea Sacc.) / Ahn S.N., Kim Y.K., Hong H.C. et al. // Euphytica.- 2000.- V. 116.- P. 17-22.

52. Andaea, V.C. QTLs conferring cold tolerance at the booting stage of rice using recombinant inbred lines from a japonicax indica cross / Andaea V.C., Mackill D.J. // Theor. Appl. Genet.- 2003,- V.106.- P. 1084-1090.

53. Atkins, J.S. International set of rice varieties for differentiating races of Pyricularia oryzae / Atkins J.S. Robert A.L., Adair C.R. et al. // Phytopathology.- 1967.- V. 57.- P. 297-301.

54. Ayres, N.M. Microsatellites and a single-nucleotide polymorphism differentiate apparent amylose classes in an extended pedigree of US rice germ plasm / Ayres N.M., McClung A.M., Larkin H.P. // Theor. Appl. Genet.-1997.- V. 94.- P. 773-781.

55. Barry, G. The use of the Monsanto draft rice genome sequence in research/Barry G.//Plant Physiol.- 2001.- V. 125.-P. 1164-1165.

56. Berruyer, B. Identification and fine mapping of Pi33, the rice resistance gene corresponding to the Magnaporthe grisea avirulence gene ACE1 / Berruyer B., Adreit H., Milazzo J. et al. // Theor. Appl. Genet.- 2003.- V.107.-P.1139-1147.

57. Bryan, G.T. A single amino acid difference distinguishes resistant and susceptible alleles of the rice blast resistance gene Pi-ta / Bryan G.T., Wu K.S., Farrall L. et al. // The Plant Cell- 2000.- V.12.- P. 2033-2045.

58. Castiglioni, P An AFLP-Based Procedure for the Efficient Mapping of Mutations and DNA Probes in Barley / Castiglioni P., Pozzi C., Heun M., Terzi V., et al. // Genetics.- 1998.- V. 149.- P. 2039-2056.

59. Causse, M.A. Saturated molecular map of the rice genome based on an interspecific backcross population / Causse M.A., Fulton T.M., Cho Y.G. et al. // Genetics.- 1994.- V.138.- P. 1251-1274.

60. Chen, D.H. Phenotypic characterization of the Rice Blast Resistance Gene Pi-2(t) / Chen D.H., Zeigler R.S., Ahn S.W. et al. // Plant Disease.- 1996.-V.80.-P.52-56.

61. Chen, D.H. Pathotypes of Pyricularia grisea in rice fields of central and southern China / Chen D.H., Chen B.T., Zhang D.P. et al. // Plant Disease.-2001.- V.85.- P. 843-850.

62. Chen, M. An integrated physical and genetic map of the rice genome / Chen M., Presting G., Barbazuk W.B. et al. // The Plant Cell.- 2002.- V. 14.- P. 537545.

63. Chen, M. Sequence organization and conservation in sh2/al-homologous regions of sorghum and rice / Chen M., San Miguel P., Bennetzen J.L. // Genetics.- 1998.- V. 148.- P. 435-443.

64. Chin, E.C.L. Maize simple repetitive DNA sequences: abundance and allele variation / Chin E.C.L., Senior M.L., Shu H. et al. // Genome.- 1996.- V.39.- P. 866-873.

65. Conaway-Bormans, C.A. Molecular markers linked to the blast resistance gene Pi-z, in rice for use in marker-assisted selection / Conaway-Bormans C.A., Marchetti M.A., Johnson C.W. et al. // Theor. Appl. Genet.- 2003.-V.107.- P. 1014-1020.

66. Correa-Victoria, F.J. Gene combinations in rice for the development of durable resistance to Pyricularia grisea in Colombia / Correa-Victoria F.J.,

67. Tharreau D., Martinez C., Vales M. et al. Proc. 3rd Int. Temperate Rice Conference.- Punta del Este.- 2003.

68. Deng, Y. Genetic characterization and fine mapping of the blast resistance locus Pigm(t) tightly linked to Pi2 and Pi9 in a broad-spectrum resistant Chinese variety /. Deng Y., Zhu X.,-Shen Y., He Z. // Theor. Appl. Genet.-2006.- V. 113.- P. 705-713.

69. Diwan, N. Automated sizing of fluorescent-labeled simple sequence repeat (SSR) markers to assay genetic variation in soybean / Diwan N., Cregan P.B. // Theor. Appl. Genet. 1997.- V.95. - P. 723-733.

70. Dong, Y. Mapping of QTL for embryo size in rice / Dong Y., Tsuzuki E., KamiuntenH. etal. // Crop science.- 2003.- V.43.- P. 1086-1071.

71. Dudley, J. W. Molecular markers in plant improvement-manipulation of genes affecting quantitative traits / J.W. Dudley // Crop science.- 1993.- V.33.- P. 660668.

72. Foote, T. Detailed comparative mapping of cereal chromosome regions corresponding to the Phi locus in wheat / Foote T., Roberts M., Kurata N et al. //Genetics.- 1997.-V. 147.-P. 801-807

73. Fuji, K. Identification of a RFLP marker tightly linked to the panicle blast resistance gene, Pbl in rice / Fuji K. Hayano-Saito Y., Saito K. et al. // Breeding science.-2000.-V.50.-P. 183-188.

74. Fuentes, J.L. Analysis of genetic diversity in Cuban rice varieties using izozyme, RAPD, and AFLP markers / Fuentes J.L., Escobar F., Alvares A. et al. //Euphytica.- 1999.-V.109.-P. 107-115.

75. Fuji, K. Gene analysis of panicle blast resistance in rice cultivars with rice stripe resistance / Fuji K., Hayano-Saito Y., Sugiura N.et al. // Breed. Res.- 1999.-V.I.- P. 203-210.

76. Fukuoka, S. QTL-analysis and mapping of pi21, a recessive gene for field resistance to rice blast in Japanese upland rice / Fukuoka S., Okuno K. // Theor. Appl. Genet.- 2001.- V. 103.- P. 185-190.

77. Girish Kumar, K. Marker assisted backcross gene introgression of major genes for blast resistance in rice/ Girish Kumar K., Hittalmani S., Srinivasachary K. // Advances in Rice Blast Research.- 2000.- P.43-53.

78. Goff, S.G. A draft sequence of the rice genome (Oryza sativa L. ssp. japónica) / Goff S.G., Ricke D., Lan T.H., Presting G., Wang R. et al. // Science.- 2002.- V.296.- P. 92-100.

79. Goto, K. Joint studies on fungus strains of rice blast. 2. Special report of forecasting the occurrence of diseases and insect pests injuries/ Goto K., Kosaka T., Yamada M. et al. 1964.-V. 18.-P. 1-132.

80. Goto, K. Joint studies on fungus strains of rice blast. 1. Special report of forecasting the occurrence of diseases and insect pests injuries/ Goto K., Yamanaka T., Narita T., Ichicawa T. et al. 1961.- V.18.-P. 1-86.

81. Gupta, P.K. Molecular markers and their applications in wheat breeding / Gupta P.K., Varshney R.K., Sharma P.S. // Plant Breed.- 1999.- V.118.- P. 369-390.

82. Harushima, Y. A high-density rice genetic map with 2275 markers using a single F2 population/ Harushima Y., Yano M., Shomura A. et al. // Genetics.- 1998.- V.148.- P. 479-494.

83. Hittalmani, S. Fine mapping and DNA marker-assisted pyramiding of the three major genes for blast resistance in rice / Hittalmani S., Parco A., Mew T.V. // Theor. Appl. Genet.- 2000.- V.100.- P. 1121-1128.

84. Huang, N. Pyramiding of bacterial blight resistance genes in rice: marker-assisted selection using RFLP and PCR / Huang N., Angeles E.R., Domingo J. et al. // Theor. Appl. Genet.- 1997- V.95.- P. 313-320.

85. Ichicawa, N. A rapid PCR-aided selection of a rice line containing the Rf-1 gene which is involved in restoration of the cytoplasmic male sterility/ Ichicawa N., Kishimoto N., Inagaki A. et al. // Mol. Breed.-1997.- V. 3.- P. 195-202.

86. Jaisval, P. Gramene: development and integration of trait and gene ontologies for rice / Jaisval P., Ware D., Ni J. et al. // Comparative and functional genomics.- 2002.- V.3.- P. 132-136.

87. Jena, K.K. Marker assisted selection- a new paradigm in plant breeding / Jena K.K., Moon H.P., Mackill D.J. // Korean J. Breed.- 2003.- V.35.- P. 133140.

88. Jansen, R. C. A Comment on Codominant Scoring of AFLP Markers / Jansen R. C., Geerlings H., A. Oeveren J. V.// Genetics.- 2001.- V.158.- P. 925-926.

89. Jeung, J.U. Fingerprinting temperate japonica and tropical indica rice genotypes by comparative analysis of DNA markers / Jeung J.U., Hwang H.G., Moon H.P. // Euphytica.- 2005.- V.146.- P.239-251.

90. Jia, Y. Development of Dominant Rice Blast Pi-ta Resistance Gene Markers / Jia Y., Wang Z., SinghP. // Crop Science.- 2002. V. 42. P.2145-2149.

91. Jiang J. and Wang S. Identification of a 118-kb DNA fragment containing the locus of blast resistance gene Pi-2(t) in rice // Mol. Genet. Genomics.-2002.- V.268.- P. 249-252.

92. Khush G.S., Brar D.S., Hardy B. Rice genetics VI.- Los Banos.- 2001.488 p.

93. Kinoshita T., Report of Committee on Gene Symbolization, Nomenclature and Linkage Groups // Rice Genetics Newsletter- 1995.- V. 12.- P. 9-153.

94. Kiyosawa S. Gene analysis for blast resistance // Oryza.- 1981.-V. 18.-P.196-203.

95. Kiyosawa S., Yamaguchi H., Yamada M. The influence of resistance gene frequencies in rice plants on virulence gene frequencies in blast fungus population in Japan // Ann. Phytopath. Sos. Jap.- 1982.-V.48.- P. 199-209.

96. Kosaka T., Yamada M., Matsumoto S., Matsuyama N. et al. Joint studies on fungus strains of rice blast // Japan. J. Breed.- 1972.- V.2.- P. 25-30.

97. Kurata N., Moore G., Nagamura Y, Foote T. et al. Conservation of genome structure between rice and weat // Biotechnology- 1994.-V. 12,- P. 276-278.

98. Lang N., Subudhi P., Virmani S., Brar D. et al. Development of PCR-based markers for thermosensitive genetic male sterility gene tms3(t) in rice (<Oryza sativa L.) //Hereditas.- 1999.- V.131.- P. 121-127.

99. Levy M., Shahjahan K.M., Valent B. Lineage structure, avirulence locus polymorphism and organization of pathotype diversity in rice blast fungus // Abstract 3rd Int. Rice Genet. Symp.- Manila, the Philippines.-1995.- poster 81.

100. Lippman Z., Tanksley S.D. Dissecting the genetic pathway to extreme fruit size in tomato using a cross between the small fruited wild species L.pimpinellifolium and L.esculentum Var. Giant Heirloomi // Genetics.-2001.- V.158.- P.413-422.

101. Litt M., And Luty J.A. A hypervariable microsatellite revealed by in vitro amplification of a dinucleotide repeat within the cardiac muscle actin gene // Am.J.Hum.Genet.- 1989.- V.44.- P. 388-396.

102. Liu, G. Two broad-spectrum blast resistance genes, Pi9(t) and Pi2(t), are physically linked on rice chromosome 6 / Liu G., Lu G., Zeng L., Wang G.L. // Mol. Genet. Genomics.- 2002.- V.267.- P. 472-480.

103. Ma, Z.Q. Frequencies and sequence characteristics of dinucleotide, trinucleotide, and tetra-nucleotide microsatellites in wheat / Ma Z.Q., Roder M., Sorrells M.E. // Genome.- 1996.- V.39.- P. 123-130.

104. Mackill, D.J. Classifying japonica rice cultivars with RAPD markers / Mackill D.J. // Crop Sci.- 1995.- V.35.- P. 889-894.

105. Mackill, D.J. Genes for resistance to the Philippine isolates of rice blast pathogen / Mackill D.J., Bonman J.M., Such H.C. // Rice Genetics Newsletter.- 1985.-V.2.- P.80-81.

106. Mackill, D.J. Inheritance of blast resistance in near-isogenic lines of rice / Mackill D.J., Bonman J.M. // Phytopathology.- 1992.- V.82.- P.746-749.

107. Mackill D.J. Level of polymorphism and genetic mapping of AFLP markers in rice / Mackill D.J.-, Zhang Z., Redona E.D. et al. // Genome.-1996.- V.39.- P.969-977.

108. McCouch, S.R. Molecular mapping of rice chromosomes / McCouch S.R., Kochert G., Yu Z.H. et al. // Theor. Appl. Genet.-1988.- V.76.- P. 815-829.

109. McCouch, S.R. Mapping of blast resistance genes in rice / McCouch S.R., Nelson R.G., Tohme J. et al. // Rice blast disease.-1994.- V.I.- P. 167186.

110. McCouch, S.R. Microsatellite markers in rice: abundance, diversity, and applications / McCouch S.R., Temnykh S., Lukashova A. et al. // Rice genetic 4. Proceeding of the fourth international rice genetic symposium.- Los Banos.- 2001.-P. 117-135.

111. McCouch, S.R. Development and mapping of 2240 new SSR markers for rice (Oryza sativa L.)/ McCouch S.R., Teytelman L., Xu Y. et al. // DNA research.- 2002.- V.9.- P. 199-207.

112. Mekwatanakarn, P. Sexually fertile Magnaporthe grisea rice pathogens in Thailand / Mekwatanakarn P., Kositratana W., Phromraksa T., Zeigler R.S. // Plant Disease.- 1999,- V.83.- P. 939-943.

113. Mew, T.V. Fine-mapping of major genes for blast resistance in rice / Mew T.V., Parco A.S., Hittalmani S., et al. // Rice Genet. Newsl.- 1994.-V.ll.-P. 126-128.

114. Mitchell, T.K. The rice blast pathosystem as a case study for the development of new tools and raw materials for genome analysis of plant pathogens / Mitchell T.K., Michael R.T., Jeong J.-S. et al. // New Phytologist.-2003.- Vol.159. P. 53-61

115. Miyamoto, M. High resolution mapping of the indica-derived genes. I. Pib / Miyamoto M., Ando I., Rybka K. et al. // Mol. Plant-Microbe Interact.-1996.-V.9.-P. 6-13.

116. Mohan, M. Genome mapping, molecular marker and marker-assisted selection in crop plants / Mohan M., Nair S., Bhagwat A. et al. // Molecular Breeding.- 1997.- V.3.- P. 87-103.

117. Morgante, M. PCR-amplified microsatellite markers in plant genetics /Morgante M., Oliveri A.M. // Plant J.- 1993.- V.3.- P. 175-182.

118. Murray, M.G. Rapid isolation of high molecular weight plant DNA / Murray M.G., Thompson W.F. // Nucleic Acids Research.- 1980.- V.10.- P. 4321-4325.

119. Openshau, S.J. Marker assisted selection in backross breeding. In: Analysis of molecular marker data / Openshau S.J., Jarboe S.J., Bears W.D. // Joint plant Breed. Symp. Ser., Corvallis, Oregon, USA.- 1994.- P. 41-43.

120. Oka, H.I. Genetic analysis of resistance to blast disease in rice (by biometrical genetic method) / Oka H.I., Lin K.I. // Japanese Journal of Genetics.- 1957.- V.32.- P. 20-27.

121. Panaud, O. Frequency of microsatellite sequences in rice (Oryza sativa L.) / Panaud O., Chen X., McCouch S.R. // Genome. 1995. V.38. P. 1170-1176.

122. Ribaut, J.M. Marker-assisted selection: new tools and strategies / Ribaut J.M., Hoisington D. // trends in plant science.- 1998.- V. 3.- P.236-239.

123. Saghai Maroof, M.A. Analysis of the barley and rice genomes by comparative RFLP mapping/ Saghai Maroof M.A., Yang G.P., Biyashev R.M. et al. // Theor. Appl. Genet.- 1996.- V.92.- P. 541-551.

124. Saji, S. A physical map with yeast artificial chromosome (YAC) clones covering 63% of the 12 rice chromosomes/ Saji S., Umehara Y., Baltazar A.A.// Genome.- 2001.- V. 44.- P. 32-37.

125. Sasaki, R. Inheritance of rice blast resistance/ Sasaki R. // Japan. J. Genet.- 1922.- V.I.- P.81-85.

126. Sasaki, T. The progress in rice genomics/ Sasaki T. // Euphytica.- 2001.-V.118.P. 103-111.

127. Science of the rice plant. Volume Three. Genetics / Edited by Matsuo T., Futsuhara Y., Kikushi F., Yamaguchi H. -Tokyo: Food and agriculture policy research center, 1997,- 1003 p.

128. Schlotterer, C. Polymorphism and locus-specific effects on polymorphism at microsatellite loci in natural Drosophila melanogaster populations/ Schlotterer C., Soller M. // Genetics.- 1997.- V.146. P. 309-320.

129. Tanksley, S.D. Restriction fragment lenth polymorphism maps and the concept of graphical genotypes/ Tanksley S.D.// Theor. Appl. Genet.- 1989.-V. 75.-P. 95-101.

130. Temnykh, S. Mapping and genome organization of microsatellite in rice (Oryza sativa L.) / Temnykh S., Park W.D., Ayres N. // Theor. Appl. Genet.-2000.-V. 100.-P. 697-712.

131. Thomas, M.R. Microsatellite repeats in grapevine reveal DNA polymorphism when analysed as sequence-tagged sites (STSs) / Thomas M.R., Scott N.S. // Theor. Appl. Genet.- 1993.- V.86.- P. 985-990.

132. Umehara, Y. Construction and characterization of a rice YAC library for physical mapping/ Umehara Y., Inagaki A., Tanoue H. // Molecular Breeding.-1995.- V.I.- P. 79-89.

133. Wang, G.LG. RFLP mapping of genes conferring complete and partial resistance to blast in a durably resistance rice cultivar / Wang G.L., Mackill D.J., Bonman M., McCouch S.R. // Genetics.- 1994.- V.136.- P. 1421-1434.

134. Wang, G.L. Construction of a rice bacterial artificial chromosome library and Identification of clones linked to Xa-21 disease resistance locus/ Wang G.L., Holsten T.E., Song W.Y., Wang H.P. // Plant J.- 1995.- V.7.- P. 525533.

135. Weber, J.L. Human DNA polymorphism and methods of analysis // Curr. Opin. Biotechnol.- 1990.- V.I.- P. 166-171.

136. Wu K.S. Abundance, polymorphism and genetic mapping of microsatellites in rice / Wu K.S., Tanksley S.D. // Mol. Gen. Genet.- 1993.-V.241.- P. 225-235.

137. Yamada, M. Pathogenic specialization of rice blast fungus in Japan // Jap. Agr. Res. Quart.- 1985.-V. 19.- P.178-183.

138. Yamamoto, T. Fine mapping of quantitative trait loci Hd-1, Hd-2 and Hd-3, controlling heading date of rice, as single Mendelian factors / Yamamoto T., Kuboki Y., Lin S.Y., // Theor. Appl. Genet.- 1998.- V. 97.- P. 37-44.

139. Yan, J. Molecular marker-assisted dissection of genotype-environment interaction for plant type traits in rice (Oryza sativa L.)/ Yan, J., Zhu J., He C., Benmoussa M., Wu P. // Crop science.- 1999.- V. 39,- P. 538-544.

140. Yang R.S. Comparative analysis of microsatellite DNA polymorphism in landraces and cultivars of rice / Yang R.S., Saghai Maroof M.A., Xu C.G., Zhang Q., Biyashev R.M. // Mol. Gen. Genet.- 1994.- V.245.- P. 187-194.

141. Yang, T. Construction and utility of 10-kb libraries for efficient clone-gap closure for rice genome sequencing/ Yang T., Yu Y., Nah G., Atkins M., Lee S. et al. // Theor.Appl.Genet.- 2003.- V. 107.- P. 652-660. .

142. Yao, F.Y. Mapping and genetic analysis of two fertility restorer loci in the wild-abortive cytoplasmic male sterility system of rice/ Yao F.Y., Xu C.G., Yu S.B. et al. // Euphitica 1997.- V. 98.- P.183-187.

143. Yoshimura, S. Identification of a YAC clone carrying the Xa-1 allele, a bacterial blight resistance gene in rice / Yoshimura S., Umehara Y., Kurata N. et al. // Theor. Appl. Genet.- 1996.- V. 93.-P. 117-122.

144. Yoshimura, S. Expression of Xal, a bacterial blight resistance gene in rice, is induced by bacterial inoculation / Yoshimura S., Yamanouchi U., Katayose Y. et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA.- 1998.- V. 95.-P. 16631668.

145. Young, N.D. A cautiously optimistic vision for marker-assisted breeding "//Mol. Breed.- 1999.-V.5.-P. 505-510.

146. Yu, Z.H. Molecular mapping of genes for resistance to rice blast / Yu Z.H., Mackill D.J., Bonman J.M. // Theor. Appl. Genet.- 1996.- V. 93.- P. 859863.

147. Yu, J. A draft sequence of the rice genome (Oryza sativa L. ssp. indica) / Yu J., Hu S., Wang J., Wong G.K., Li S., Deng Y. et al. // Science.- 2002.-V.296.- P. 79-91.

148. Zhu, J. AFLP markers for the study of rice biodiversity/ Zhu J., Gale M.D., Quarre S. // Theor. Appl. Genetic.- 1998.- V.96.- P. 602-611.