Препараты класса актиномицетов и фуллеренов, подавляющие репродукцию вируса иммунодефицита человека

Лобач, Ольга Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Препараты класса актиномицетов и фуллеренов, подавляющие репродукцию вируса иммунодефицита человека
ВАК РФ 03.02.02, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Препараты класса актиномицетов и фуллеренов, подавляющие репродукцию вируса иммунодефицита человека"

На правах рукописи

ЛОБАЧ ОЛЬГА АЛЕКСАНДРОВНА

ПРЕПАРАТЫ КЛАССА АКТИНОМИЦЕТОВ И ФУЛЛЕРЕНОВ, ПОДАВЛЯЮЩИЕ РЕПРОДУКЦИЮ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Специальность - 03.02.02 - вирусология

Москва-2010 г.

2« Ш? 2№

003494550

Работа выполнена в лаборатории вирусов иммунодефицита НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН

Научный руководитель:

Доктор медицинских наук, профессор Дмитрий Николаевич Носик Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор Георгий Артемьевич Галегов Доктор биологических наук Ирина Анатольевна Ленева

Ведущая организация:

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН

Защита состоится «_»______2010 г. в__час.

На заседании Специализированного диссертационного совета при НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН по адресу: 123098, г. Москва, ул.Гамалеи, 16.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН.

Автореферат разослан «_»_____2010 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета Доктор медицинских наук Елена Ивановна Бурцева

Часть 1. Введение Актуальность проблемы

Проблема ВИЧ-инфекции, к огромному нашему сожалению, шагнула с человечеством в XXI век и является одной из наиболее драматичных проблем наших дней. Впервые синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД, AIDS) был описан у гомосексуалистов в США в 1981 году. Два года спустя L.Montagnier и соавторы идентифицировали возбудитель СПИДа ретровирус человека, первоначально названный LAV (Lymphoadenopathy-associated virus). Сейчас он известен как вирус иммунодефицита I типа (ВИЧ-1). С тех пор десятки миллионов человек стали жертвами этого смертельного заболевания, которое быстро приобрело характер пандемии.

«Железный занавес», отделявший Россию от Запада и Востока, на некоторое время задержал развитие эпидемии ВИЧ-инфекции у нас в стране. Первый ВИЧ-инфицированный гражданин СССР был обнаружен в 1987 году, но до середины 90-х годов абсолютное количество зараженных было относительно невелико - в начале 1994 г. зарегистрировано 717 человек. Однако с этого момента начался бурный рост заболеваемости. Этому значительно способствовало ухудшение экономической ситуации в России и странах СНГ, разрушение системы здравоохранения, рост наркомании, проституции, а также новые миграционные потоки. В 2000 году в России было зарегистрировано 68,5 тыс. человек, в 2004 г. более 262 тысяч, в 2007 г. уже 410 тысяч, в 2008 г. более 450 тысяч, и на 31 мая 2009 г. около 490 тыс. ВИЧ-инфицированных граждан РФ. Однако эти цифры недостаточно точно отражают реальную картину, так как, по данным ВОЗ, на каждого зарегистрированного приходится несколько незарегистрированных людей. Лидирующее место заняли жители крупнейших городов страны: Москвы и Московской области, Санкт-Петербурга, Екатеринбурга, Калининграда и

других. Через несколько лет возникнет еще одна проблема -сотни тысяч человек перейдут в терминальную стадию заболевания и из разряда медицинских данная проблема окончательно станет социальной.

Несмотря на значительный прогресс в изучении СПИДа этиотропная терапия ВИЧ-инфекции пока далека от совершенства. За короткий срок были созданы новые препараты активные в отношении ВИЧ, однако сложная природа вируса, позволяет ему различными способами адаптироваться к действию лекарств. Появляются резистентные штаммы вируса, что приводит к необходимости изменения доз препаратов или применения их комбинаций. И даже несмотря на это во многих случаях эффект оказывается только временным.

Поэтому актуален поиск новых противовирусных средств, эффективных в отношении различных штаммов ВИЧ, а также новых вариантов комбинированного применения лекарственных препаратов, позволяющих повысить их противовирусный эффект и снизить их токсичность.

Настоящая работа выполнена в плане научно-исследовательских разработок НИИ вирусологии имени Д.И.Ивановского РАМН и является частью заданий выполненных в рамках Государственной научно-технической программы «Борьба с наиболее распространенными болезнями».

Цели и задачи исследования

Целью настоящего исследования было изучение препаратов, эффективных в отношении вируса иммунодефицита человека на модели культур клеток человека, инфицированных ВИЧ.

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

- исследовать противовирусную активность препаратов продуцентов актиномицетов и грибов в отношении ВИЧ,

- исследовать противовирусную активность препаратов класса фуллеренов в отношении ВИЧ.

Научная новизна работы

При выполнении настоящей работы был получен ряд новых данных, имеющих, как теоретическое, так и практическое значение.

Установлено, что природные продукты метаболизма актиномицетов обладают противовирусным действием в отношении вируса иммунодефицита человека.

Показано, что применение препарата милайф «in vitro» защищает вирус-инфицированные клетки от цитопатического действия ВИЧ-1.

Обнаружено снижение на определенный период (4-5 месяцев) количества РНК ВИЧ-1 и инфекционного титра вируса в периферической крови двух ВИЧ-инфицированных больных, принимавших препарат милайф.

Установлено, что препараты на основе различных производных фуллеренов обладают противовирусным действием в отношении вируса иммунодефицита человека.

Впервые обнаружено, что комбинированное применение препаратов фуллевир и ретровир вызывает аддитивный антиретровирусный эффект.

Практическая ценность работы

Показано, что препарат фуллевир обладает антиретровирусным эффектом, как при индивидуальном, так и при сочетанном применении с ретровиром (азидотимидином) и перспективен для клинических испытаний.

Коллекция штаммов ВИЧ дополнена новыми изолятами вируса иммунодефицита человека, выделенными от ВИЧ-инфицированных лиц РФ.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Природные гиполипидемические соединения, получаемые микробиологическим синтезом из актиномицетов (рода стрептомицетов), обладают противовирусным действием в отношении вируса иммунодефицита человека.

2. Препарат милайф, получаемый на основе биомассы мицелия монокультуры гриба Fusarium sambucinum, обладает противовирусным действием в отношении вируса иммунодефицита человека.

3. Производные фуллеренов обладают противовирусной активностью в отношении вируса иммунодефицита человека, которая зависит от структуры функциональных групп, соединенных с молекулой фуллерена.

4. Комбинированное применение препаратов фуллевир и ретровир вызывает аддитивный антиретровирусный эффект.

Апробация работы

Основные экспериментальные материалы и положения диссертации доложены и обсуждены на XIII международной конференции по проблемам СПИДа (Дурбан, 2000), на научно-практической конференции "Клеточная биология на пороге XXI века" (Санкт-Петербург, 2000), на заседаниях Ученого Совета НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН (Москва, 2007, 2008).

Диссертация апробирована 9 декабря 2009 г. на заседании Экспертного Совета по предварительной экспертизе диссертационных работ при НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН.

Публикация результатов исследования

Основные положения диссертации отражены в 9 научных работах, из них 5 в журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем исследования

Диссертационная работа изложена на 143 стр. машинописи и состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 11 рисунками и 9 таблицами.

Глава 1. Материалы и методы

В работе были использованы вирусологические, молекулярно-биологические и иммунологические методы исследования. При проведении экспериментов применялись методы иммунофлюоресцентного и иммуноферментного анализа, полимеразной цепной реакции, колориметрический метод МТТ и др. В работе были использованы линии клеток человека СЕМ, МТ-4, ^гка1, полученные из коллекции НИИ вирусологии им Д.И.Ивановского РАМН. Референс-штаммы ВИЧ были получены из музея вирусных штаммов НИИ вирусологии им Д.И.Ивановского РАМН. Описание ряда методов, условий постановки экспериментов приводится при изложении полученных результатов. Достоверность значений определяли по ^критерию Стьюдента, Все значения представлены в виде средней ± стандартное отклонение

Глава 2. Исследование противовирусной активности гиполипидемических соединений

Антиретровирусная терапия, включая применение ингибиторов протеаз, в большинстве случаев сопровождается дислипидемией. Резкое повышение в крови пациентов уровня холестерина требует применения специальных препаратов. Это, естественно, способствует развитию склероза сосудов и повышению риска развития осложняющих заболеваний. Поэтому

поиск природных гиполипидемических соединений, одновременно ингибирующих развитие ВИЧ, представляет особенно большой интерес.

В Государственном научном Центре по антибиотикам путем микробиологического синтеза были получены 15 гиполипидемических соединений, являющихся природными продуктами метаболизма актиномицетов и грибов. На модели культур лимфобластоидных клеток, инфицированных ВИЧ, проведен предварительный анализ активности соединений в отношении ВИЧ.

Контроль вируса ♦♦♦♦♦♦♦♦♦♦♦

♦♦♦♦♦♦♦♦♦♦♦

♦<М>ФФФФФФФФ ФФФФФФФФФФФ

Схема внесения

Рис.1. Влияние соединения №25 на снижение уровня вирусного антигена р24 при различных схемах внесения

В результате первичного скрининга из исследованных соединений для дальнейшего изучения были отобраны три: соединения №№ 16, 17 и 25, обладавшие активностью в отношении ВИЧ-1. Важным моментом оказалось время введения препаратов: все соединения проявляли активность при профилактической схеме применения - за 1 час до

инфицирования клеток и при одновременном внесении с вирусом. При этом у соединений №16 и №25 максимальный эффект был при одновременном введении препаратов и заражении клеток вирусом, а у соединения №17 наибольший эффект был при внесении за 1 час до инфицирования. В случае добавления всех соединений через 1 час после инфицирования клеток, противовирусный эффект отсутствовал.

Поэтому можно предположить, что обнаруженная противовирусная активность связана с воздействием данных соединений на ранние этапы репродукции вируса иммунодефицита человека.

120 т

юо -

о4

$80 --

§60 I

40 -20 -О -

О 1 10

Концентрация, мкг/мл

Рис.2. Влияние различных концентраций соединения №25 на ингибирование репродукции ВИЧ

Отмечено наличие зависимости действия препаратов от дозы: с увеличением концентрации противовирусная активность возрастала. Например, в случае соединения №25 при концентрации 3 мкг/мл отмечено 50%-снижение уровня антигена

вируса, а при 10 мкг/мл -90%-снижение уровня антигена вируса (Р<0,05).

Таким образом, обнаруженная противоретровирусная активность новых гиполипидемических соединений, действующих на ранних этапах репродукции ВИЧ, представляет интерес в плане создания препаратов для профилактики заражения вирусом иммунодефицита человека.

Глава 3. Исследование противовирусной активности препарата милайф

3.1. Исследование противовирусной активности препарата милайф на модели культур клеток

Основу препарата "милайф" составляет биомасса мицелия монокультуры гриба Fusarium sambucinum, содержащая комплекс биологически активных веществ, включая аминокислоты, ненасыщенные жирные кислоты, олигопептиды, углеводы и микроэлементы. Разрешен к клиническому применению приказами Министерства здравоохранения РФ.

В исследованиях препарата милайф на модели культур клеток человека обнаружена противовирусная активность в отношении вируса иммунодефицита человека в дозах 1,0-2,5 мкг/мл при профилактической схеме введения: за 24 и 2 часа до инфицирования клеток (Р<0,05). ЭК50 составила 1 мкг/мл. При одновременном внесении препарата и вируса в клетки также отмечен противовирусный эффект, однако он был ниже (на 1015%), чем при профилактическом введении. Активность в случае применения препарата после заражения клеток была еще меньше. СТ50 препарата (50%-среднетоксичная концентрация) составила 8 мкг/мл.

Рис.3. Влияние препарата милайф на снижение уровня вирусного антигена при различных схемах внесения

Таким образом, наблюдается сходная закономерность с гиполипидемическими соединениями, полученными из актиномицетов и грибов, у которых также обнаружен противовирусный эффект в случае применения препаратов по профилактической схеме внесения и одновременно с вирусом.

Обнаруженная противовирусная активность дает основание рассчитывать на возможный эффект, в случае применения препарата при комплексной терапии для лечения ВИЧ-инфекции.

3.2. Исследование активности препарата милайф при лечении ВИЧ-инфицированных больных

Исследованы образцы периферической крови двух ВИЧ-инфицированных больных (стадия 3), принимавших препарат милайф под наблюдение врачей медицинского научно-производственного центра «Дижафарм» согласно инструкции по его приему в течение 7 и 8 месяцев.

Месяцы

Рис.4.Изменение вирусной нагрузки в процессе лечения милайфом у больной Я.

Установлено снижение уровня РНК ВИЧ-1 в периферической крови в течение первых 2-х месяцев после начала приема препарата у больной Я. с 183000 копий/мл до 17000 копий/мл. У больной И. с 25000 копий/мл до 4400 копий/мл. В случае больной Я. эффект снижения уровня вирусной нагрузки длился до 5-го месяца приема препарата после этого начался ее рост независимо от продолжающего приема препарата. У больной И. в период со 2-го по 4-й месяц отмечено колебания содержания РНК

вируса в крови, которое, однако, было ниже концентрации вируса до начала приема препарата. После 4-х месяцев лечения также, как и в первом случае, начался подъем уровня содержания РНК ВИЧ-1 в крови.

Сходные закономерности отмечены при исследовании экспрессии антигенов вируса на поверхности лимфоцитов периферической крови с помощью метода

иммунофлюоресценции, Обнаружено 12-14% специфично окрашенных клеток в начале периода исследования, снижение до 5-8% в середине, и возрастание процента зараженных клеток в конце периода наблюдения.

Аналогичные кривые получены при определении уровня р24 антигена ВИЧ-1 и инфекционного титра вируса. Необходимо отметить, что изоляты вируса выделялись от пациентов в течение всего периода наблюдения (выделено 14 изолятов ВИЧ-1). Для изолятов, выделенных в начале лечения и в заключительный период наблюдения, был характерен более выраженный цитопатический эффект.

Отмечено увеличение количества Т4-лимфоцитов (в среднем) у больной И. от 290 в 1мм3 в начале приема препарата до 623 в 1 мм3 в конце, у больной Я. 428 и 563 в 1 мм3, соответственно.

Таким образом, при приеме препарата милайф обнаружено снижение на определенный период (4-5 месяцев) уровня вирусной нагрузки в периферической крови двух ВИЧ-инфицированных больных и увеличение количества Т4-лимфоцитов. Данные только двух больных не позволяют сделать статистически обоснованные выводы, однако очевидно, что у препарата есть определенный противовирусный и иммуностимулирующий потенциал, который, возможно, будет полезен при комбинированной антиретровирусной терапии ВИЧ-инфекции.

Глава 4. Исследование противовирусной активности препаратов на основе фуллерена.

4.1. Аддукты фуллерена С60 с пиперидинами

Перспективность создания наноаддуктов в качестве потенциальных антивирусных пролекарств, сочетающих в молекуле два важных фармакофорных фрагмента - высоко функционализованные производные пиперидина и органически модифицированный фуллерен С60, связана, во-первых, с использованием пиперидинов, для которых уже показана анти-ВИЧ активность, и, во-вторых, с уникальностью фуллеренового сфероида существенно снижать токсичность биологически активного аддукта в сочетании с собственной антивирусной активностью его производных.

Кроме того, размер и форма цилиндрической полости протеазы ВИЧ комплиментарна фуллерену Сбо, что стимулировало экспериментальные и теоретические исследования анти-ВИЧ активности производных фуллерена. Некоторые производные фуллерена также оказались ингибиторами обратной транскриптазы ВИЧ. Поэтому в соответствии с идеей о многонаправленном действии средств на химическом факультете МГУ им.М.В.Ломоносова были синтезированы 12 новых фуллереновых аддуктов на основе производных транс-4-амино-З-гидроксипиперидинов и 3,4-дигидроксипиперидинов.

Некоторые из полученных фуллереновых аддуктов на основе производных транс-4-амино-З-гидроксипиперидинов и 3,4-дигидроксипиперидинов in vitro показали умеренную анти-ВИЧ активность. Защита клеток от цитопатического действия вируса у соединения 7 при концентрации 10 мкг/мл составила 17,5%, у соединения 12 - 15%, у соединения 15 - 21%. Наибольшая

активность отмечена при концентрации 0,1 мкг/мл у соединения 21 - 54% и у соединения 23 - 47%.

В данном состоянии эти препараты не могут рассматриваться в качестве противовирусных средств, однако, появление специфической активности в зависимости от изменения строения аддукта, присоединенного к молекуле фуллерена, позволяет осуществлять направленный синтез новых производных с большим антиретровирусным эффектом. Поэтому целевые наноаддукты представляют новую фармакофорную модель для медицинской химии с большим фармакологическим потенциалом.

4.2. Аддукты фуллерена с полигидрополиаминокапроновой кислотой

Исследовали препарат фуллевир®, представляющий собой натриевую соль фуллеренполигидрополиаминокапроновой кислоты, производства Группы Компаний ИнтелФарм®. Целью исследования являлось изучение активности нового препарата в отношении вируса иммунодефицита человека, а также исследование возможности его совместного применения с другими антиретровирусными средствами. В качестве антиретровирусного референс-препарата использовали препарат ретровир (азидотимидин) производства ГлаксоСмитКляйн (Бельгия).

Для исследования цитотоксического действия фуллевира препарат вводили в культуральную среду неинфицированных клеток в концентрации 0,25-500 мкг/мл. Дозы препарата 0,5-100 мкг/мл не оказывали цитотоксического действия на клетки. СТ50 (50%-среднетоксическая концентрация) составила 400 мкг/мл.

Таблица 1

Исследование противовирусной активности препарата фулпевир на модели клеток человека, инфицированных ВИЧ-1

Условия опыта Концентрация мкг/мл Жизнеспособность клеток, % ЦПЭ Защита клеток, %

Контроль клеток* 0 95±0,3 - -

Контроль вируса 0 24±0,5 ++++ -

0,25 73±0,6 ++ 53,0+0,3

Фуллевир 0,5 77+0,4 + 77,7±0,2

1,0 92+0,5 86,9+0,1

5,0 94+0,2 94,0±0,1

Ретровир 0,267 94+0,2 - 94,0±0,1

Примечание: * - контроль неинфицированных клеток

Исследование противовирусной активности фуллевира (Таблица 1,2, рис.5) показало, что препарат в концентрации 0,255 мкг/мл защищал инфицированные клетки от цитопатического действия вируса (Р<0,01). Наибольшая активность отмечена при концентрации 5 мкг/мл - более чем 90% защита клеток и снижение уровня вирусного антигена в культуральной жидкости инфицированных клеток. Соответственно, ЗК90 (90% эффективная концентрация) 5 мкг/мл. Химиотерапевтический индекс >1000.

Рис. 5. Снижение уровня р24 антигена вируса иммунодефицита человека в культуральной жидкости клеток, инфицированных ВИЧ-1, при добавлении фуллевира

Изучение индивидуального применения аминокислотных радикалов, не связанных с молекулой фуллерена, не выявило их противовирусной активности.

Испытание различных схем введения фуллевира (профилактической и лечебной) показало, что препарат эффективен, как при применении за 1 час до заражения, 1 час после заражения, а также при одновременном с инфицированием клеток введении средства.

Таблица 2

Исследование противовирусной активности фуллевира при различном времени контакта с клетками на модели клеток человека, инфицированных ВИЧ-1

Условия опыта/ концентрация, мкг/мл Экспозиция клеток с препаратом Отмывание клеток Жизнеспособность клеток, % Защита клеток**, %

Контроль клеток* - - 94,6±0,3 -

Контроль вируса - - 32,3±0,5 -

Препарат 1,0 1 ч + 83,6±0,5 61,9±0,4

5,0 1 ч + 84,5±0,3 66,7±0,2

1,0 2ч + 88,1+0,5 76,2±0,4

5,0 2ч + 93,8±0,08 90,5±0,2

1,0 24 ч + 87,4±0,3 81,0±0,4

5,0 24 ч + 92,3±0,2 90,5+0,2

1,0 весь опыт - 88,4±0,2 90,5±0,2

5,0 весь опыт - 93,2±0,1 96,1±0,1

Примечание: * - контроль неинфицированных клеток (-) - без отмывания клеток (+) - отмывание клеток (**) - Степень защиты клеток от цитодеструктивного действия вируса определяли по формуле:

А - В

% защиты = .......— х 100,

К - В где:

А - число жизнеспособных клеток в опытной группе; В - то же в инфицированной культуре (контроль вируса); К - то же в неинфицированной культуре (контроль клеток).

Исследование зависимости противовирусной активности от времени контакта: препарата с клетками: 1, 2, 24 часа и 5 суток - показало, что достаточно 1 часа контакта клеток с фуллевиром для появления противовирусной защиты клеток - 61,9-66,7% в зависимости от дозы препарата (1 и 5 мкг/мл, соответственно). Однако увеличение времени контакта препарата с клетками увеличивало степень противовирусной

защиты от 76,2% при 2-х часовом взаимодействии до 96,1% - при 5 суточном (время эксперимента) (Р<0,01).

Фуллевир + .....Ретровир..

Рис. 6. Исследование антиретровирусной активности препаратов на модели клеток человека, инфицированных ВИЧ-1

При изучении комбинированного применения фуллевира с ретровиром - ингибитором обратной транскриптазы ВИЧ (Рис. 6), был обнаружен синергидный антиретровирусный эффект. Применение минимально эффективных концентраций препаратов - 0,5 мкг/мл фуллевира и 0,03 мкг/мл ретровира дало эффект, равный эффекту ЭК90 фуллевира (Р<0,01).

Полученные данные свидетельствуют о наличии у препарата фуллевир выраженной антиретровирусной активности. Обнаруженный противовирусный эффект препарата фуллевир сохранялся при использовании 7 различных штаммов ВИЧ-1 с разными биологическими свойствами.

Таким образом, можно рассматривать фуллевир, как новый перспективный антиретровирусный препарат для лечения ВИЧ-инфекции.

Выводы:

1. Установлено, что природные гиполипидемические соединения, получаемые микробиологическим синтезом из актиномицетов и грибов, обладают противовирусным действием в отношении вируса иммунодефицита человека.

2. Показано, что препарат милайф обладает противовирусным действием в отношении вируса иммунодефицита человека в системе «¡п vitro» при профилактической схеме внесения.

3. Установлено, что аддукты фуллеренов на основе производных транс-4-амино-З-гидроксипиперидинов и 3,4-дигидроксипиперидинов снижали уровень репродукции ВИЧ-1 в культуре клеток.

4. Показано, что препарат фуллевир (натриевая соль

фуллеренполигидрополиаминокапроновой кислоты) обладает

противовирусным действием в отношении вируса иммунодефицита человека.

5. Впервые обнаружено, что комбинированное применение препаратов фуллевир и ретровир вызывает аддитивный антиретровирусный эффект.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Носик Д.Н., Калнина Л.Б., Киселева И.А., Бочкова М.С., Лобач O.A., Ирова Т.И., Покровский В.В., Львов Д.К. Свойства вирусов иммунодефицита человека, выделенных на территории СНГ. II В сб.: «Актуальные проблемы инфекционной патологии», Санкт-Петербург, 1993, ч.2, с.163.

2. Киселева И.А., Лобач O.A.. Петраков А., Подчерняева Р.Я., Носик Д.Н. Криоконсевация клеток, чувствительных к инфицированию вирусом иммунодефицита человека. // В сб.: «Биология клетки», Пущино, 1994.

3. Носик H.H., Носик Д.Н., Кузнецова Н.В., Кравченко A.B., Бочкова М.С., Петрова М.С., Лобач O.A.. Покровский В.В. Чувствительность к анти-ВИЧ-препаратам изолятов ВИЧ-1, выделенных на территории России // Вопросы вирусологии, 1997, №3, с.111-115

4. Иваницкая Л.П., Носик Д.Н., Бибикова М.В., Якушкина Н.И., Григорьев В.В., Лобач O.A. Состояние и перспективы создания новых препаратов для терапии и профилактики ВИЧ-инфекции и СПИДа II Антибиотики и химиотерапия, 1999, 44, 10, 39-44

5. Носик Д.Н., Подчерняева Р.Я., Киселева И.А., Лобач O.A., Майорова С.Н. II Консервация клеток, инфицированных вирусом иммунодефицита человека. Цитология, 2001, том 43, с.373

6. Bochkova M., Kalnina L., Lobach P., Nossik N., Kravchenko A., Petrova M., Bobkov A., Pokrovsky V., Nossik D. (2000): Biological phenotype features of Human Immunideficiency Viruses from different epidemic regions in the territory of Russia. Abstracts XIII AIDS Conference, Durban, v.1, 26

7. Л.П.Иваницкая, Д.H.Носик, М.В.Бибикова, Н.И.Якушкина, И.А.Спиридонова, В.Б.Григорьев, О.А.Лобач. Состояние и перспективы создания новых препаратов для терапии и профилактики ВИЧ-инфекции и СПИДа II Круглый стол, 2003, № 4, с.60-65

8. М.В.Бибикова, Д.Н.Носик, О.А.Лобач. Я.В.Чмель, А.В.Катлинский. Влияние новых природных гиполипидемических соединений на вирус иммунодефицита человека // Антибиотики и химиотерапия, 2004, №1, с.14-16

9. Д.Н.Носик, И.К.Лялина, Л.Б.Калнина, О.А.Лобач. М.С.Чатаева, Л.Д.Раснецов. Антиретровирусный препарат фуллевир // Вопросы вирусологии, 2009, №5, с 41-43

Подписано в печать: 13.01.2010

Заказ № 3310 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Лобач, Ольга Александровна

Введение

Часть 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. История открытия

Глава 2. Происхождение и генетическое разнообразие ВИЧ

Глава 3. Характеристика вируса иммунодефицита.

Репликативный цикл ВИЧ

Глава 4. Патогенез ВИЧ-инфекции

Глава 5. Клиническое течение ВИЧ-инфекции

Глава.6. Лечение

6.1. Химиотерапия вирусных инфекций

6.2. Лекарственная терапия ВИЧ-инфекции и СПИДа

Часть 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 1. Материалы и методы

Глава 2. Исследование противовирусной активности гиполипидемических соединений

Глава 3. Исследование противовирусной активности препарата

Милайф

3.1. Исследование противовирусной активности препарата Милайф на модели культу клеток

3.2. Исследование антиретровирусной активности препарата Милайф при лечении ВИЧ-инфицированных больных

Глава 4. Исследование противовирусной активности препаратов на основе фуллерена

4.1. Аддукты фуллерена С60 с пиперидинами

4.2. Аддукты фуллерена с полигидрополиаминокапроновой кислотой

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Препараты класса актиномицетов и фуллеренов, подавляющие репродукцию вируса иммунодефицита человека"

Актуальность проблемы

Проблема ВИЧ-инфекции, к огромному нашему сожалению, шагнула с человечеством в XXI век и является одной из наиболее драматичных проблем наших дней. Впервые синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД, AIDS) был описан у гомосексуалистов в США в 1981 году. Два года спустя L.Montagnier и соавторы идентифицировали возбудитель СПИДа - ретровирус человека, первоначально названный LAV (Lymphoadenopathy-associated virus). Сейчас он известен как вирус иммунодефицита I типа (ВИЧ-1). С тех пор десятки миллионов человек стали жертвами этого смертельного заболевания, которое быстро приобрело характер пандемии.

Железный занавес», отделявший Россию от Запада и Востока, на некоторое время задержал развитие эпидемии ВИЧ-инфекции у нас в стране. Первый ВИЧ-инфицированный гражданин СССР был обнаружен в 1987 году, но до середины 90-х годов абсолютное количество зараженных было относительно невелико - в начале 1994 г. зарегистрировано 717 человек. Однако с этого момента начался бурный рост заболеваемости. Этому значительно способствовало ухудшение экономической ситуации в России и странах СНГ, разрушение системы здравоохранения, рост наркомании, проституции, а также новые миграционные потоки. В 2000 году в России было зарегистрировано 68,5 тыс. человек, в 2004 г. более <262 тысяч, в 2007 г. уже 410 тысяч, в 2008 г. более 450 тысяч, и , на- 31 мая 2009 г. около 490 тыс. ВИЧ-инфицированных граждан РФ. Однако эти цифры недостаточно точно отражают реальную картину, так как, по данным ВОЗ, на каждого зарегистрированного приходится несколько незарегистрированных людей. Лидирующее место заняли жители крупнейших городов страны: Москвы и Московской области, Санкт-Петербурга, Екатеринбурга, Калининграда и других. Через несколько лет возникнет еще одна проблема -сотни тысяч человек перейдут в терминальную стадию заболевания и из разряда медицинских данная проблема окончательно станет социальной.

Цели и задачи исследования

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

- исследовать противовирусную активность препаратов продуцентов актиномицетов и грибов в отношении ВИЧ,

- исследовать противовирусную активность препаратов класса фуллеренов в отношении ВИЧ.

Научная новизна работы

Показано, что применение препарата Милайф «in vitro» защищает вирус-инфицированные клетки от цитопатического действия ВИЧ-1.

Практическая ценность работы

Основные положения, выносимые на защиту

2. Препарат Милайф, получаемый на основе биомассы мицелия монокультуры гриба Fusarium sambucinum, обладает противовирусным действием в отношении вируса иммунодефицита человека.

4. Комбинированное применение препаратов фуллевир и ретровир вызывает аддитивный антиретровирусный эффект.

Апробация работы

НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН (Москва, 2007, 2008).

Публикация результатов исследования

Основные положения диссертации отражены в 9 научных работах, из них 5 в журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем исследования

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Лобач, Ольга Александровна

Выводы:

2. Показано, что препарат Милайф обладает противовирусным действием в отношении вируса иммунодефицита человека в системе «in vitro» при профилактической схеме внесения.

4. Показано, что препарат фуллевир (натриевая соль фуллеренполигидрополиаминокапроновой кислоты) обладает противовирусным действием в отношении вируса иммунодефицита человека.

Работа выполнена в плане исследований НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН (Директор - Академик РАМН Д.К.Львов) на базе лаборатории вирусов иммунодефицита с испытательным Центром по экспертной оценке противовирусных и дезинфекционных средств. Некоторые разделы исследований были выполнены в соавторстве с сотрудниками Института вирусологии Л.Б.Калниной, И.А.Киселевой, М.С.Бочковой, М.С.Чатаевой, Л.М.Селимовой, которым выражаю глубокую благодарность. Отдельные фрагменты работы выполнены совместно с сотрудниками ГНЦ по антибиотикам д.б.н. М.В.Бибиковой, Российского Центра профилактики и борьбы со СПИДом: академиком РАМН В.В.Покровским, д.м.н. А.В.Кравченко, химфака МГУ им.М.В.Ломоносова профессором Г.В.Гришиной, доцентом И.В.Трушковым, к.х.н, И. С. Веселовым, которым выражаю искреннюю признательность.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Лобач, Ольга Александровна, Москва

1. Анджапаридзе О.Г., Мацевич Г.Р., Маренникова С.С. Иммуноферментный анализ для выявления антигенов ВИЧ (применение, возможности, ограничения) // Вопр. вирусол.-М.-1 991 .-N3.-C. 180-1 82

2. Антимикробная терапия. Дж. Сэнфорд, Д.Гилберт, Дж. Гербердинг, М.Сэнде // М., Практика, 1996, 224 с.

3. Белозеров Е.С. Принципы терапии больных ВИЧ/СПИД // Военно-медицинские аспекты ВИЧ-инфекции СПб,-1999.-С.8-11

4. Бобков А.Ф., Селимова Л.М., Покровский А.Ф. и др. Генотипирование и филогенетический анализ изолятов ВИЧ-1, циркулирующих в России // Вопр. вирусол.-М.-1997.-N1,-С.13-16

5. Бобков А.Ф., Казеннова Е.В., Селимова Л.М. и др. Субтипы ВИЧ-1 в России //Журн. микробиол. 1999. - № 1. - С.43-45.

6. Бобков А.Ф., Казеннова Е.В., Селимова Л.М., и др. Молекулярно-вирусологические особенности эпидемии ВИЧ-инфекции в России и других странах СНГ // Вестник Российской Академии Медицинских Наук. 2003. - № 12. - С. 83-85.

7. Богословская Е.В., Шипулин Г.А., Башкирова Л.Ю. и др. Определение лекарственной устойчивости ВИЧ у пациентов, получавших противоретровирусную терапию // Эпидемиол. и инфекц. бол. 2004 - № 4 - С. 38-42

8. Борисов Л.Б., Смирнова A.M., Фрейдлин И.С. и др. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: Учебник/ М.-Медицина, 1994.-528 с.

9. Букринская А.Г. Вирусология. М.-Медицина, 1986.-336 с.

10. Власов Н.Н. и др. ВИЧ-инфекция. Основы комбинированной противовирусной терапии // СПб.-1998.-С.1-40

11. Волянский Ю.Л., Телепнева Л.Г., Васильев Н.В. ВИЧ-инфекция. Факты и гипотезы // Харьков.-1993

12. Вудли М., Уэлан А. Терапевтический справочник Вашингтонского университета // Практика.-М.-1995.-С.832

13. Галегов Г.А. Лекарственная устойчивость и ее значение в процессе лечения ВИЧ-инфекции // Consilium medicum. 2001.- Экстра выпуск, ВИЧ-инфекция. - С. 11-13.

14. Галегов Г.А. Синтетические ингибиторы протеиназы ВИЧ и новые возможности лекарственной терапии ВИЧ-инфекции и СПИДа // Вопросы вирусологии, 1997, № 6, с.284-286

15. Галегов Г.А., Корнеева М.Н., Носик Д.Н. и др. Действие З'-азидо-З'-дезоксинуклеозидов на репродукцию вируса СПИД в культуре клеток // Вопр. вирусол.-М-1988.-Т.22.-N 3.-С.802-806.

16. ГОСТ Р ИСО 5479-2002. Статистические методы. Проверка отклонения распределения вероятностей от нормального распределения. М.: Изд-во стандартов.2002. 30 с.

17. Гришина Г.В., Карамов Э.В., Корнилаева Г.В., Чумаков Т.И., Зефиров Н.С. //Патент РФ № 2198658, бюл. № 5,2003.

18. Гришина Г.В., Борисенко А.А., Носань З.Г., Ашкинадзе Л.Д., Веселов И.С., Зефиров Н.С., Карамов Э.В., Корнилаева Г.В Л ДАН РАН, 2003, 391, 4, 487-491.

19. Гришина Г.В., Веселов И.С., Даванков В.А., Ильин М.М., Зефиров Н.С. Направленный синтез наноструктур на основе двух фармакофорных фрагментов высоко функционализованных производных фуллерена и пиперидина ЖОрХ, 2008, 44, с. 287.

20. Денисов Б. П. (редактор-составитель,) Демография ВИЧ. — МГУ. — Москва: МАКС Пресс, 2009. — Т. вып. 2. — 130 с. — ISBN 978-5-317-02956-2

21. Жданов В.М., Гайдамович С.Я. Общая и частная вирусология.- М.-Медицина, 1982, 520 с.

22. Казеннова Е.В., Бобков А.Ф. Подтипы вируса иммунодефицита человека 1 типа: классификация, происхождение и распространение в Европе // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -2003. №1. - С.90-96.

23. Казеннова Е.В., Бобков А.Ф., Селимова Л.М. и др. Анализ субтипов гена gag вариантов ВИЧ-1, выделенных в России, методом сравнительной оценки электрофоретической подвижности гетеродуплексов // Вопр. Вирусол. 2001. - Т.46. - С.12-16.

24. Калнина Л.Б. Поиск и изучение препаратов, активных в отношении ВИЧ, на модели изолятов ВИЧ // Автореферат дисс. канд. биол. наук. М.-1999.-С.1-30

25. Кузнецова Н.В. Консервация вирусов иммунодефицита человека и чувствительность к антивирусным препаратам // Автореферат дисс. канд. наук.- М.-1994.-С.1-30

26. Ладная Н.Н. Распространение различных субтипов ВИЧ на территории Российской Федерации.: Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 2000. 24 с.

27. Ладная Н. Н. Презентация от 28.02.2008 "Национальный доклад о ходе работы для ССГА ООН";

28. Лакин Г.Ф. "Биометрия" //Москва, изд-во "Высшая школа", 1990. 352с.

29. Лысенко А.Я., Турьянов М.Х., Лавдовская М.В., Подольский В.М. ВИЧ-инфекция СПИД-ассоциируемые заболевания // ТОО »Рарогъ».-М.-1996.-С.624.

30. Малый В.П. ВИЧ. СПИД. Новейший медицинский справочник. — М.: Эксмо, 2009. — 672 с. — ISBN 978-5699-31017-3

31. Маренникова С.С., Степанова Л.Г., Носик М.Н., Рытик П.Г. и др. О штаммовых особенностях, циркулирующего в СССР ВИЧ-1, по данным изучения его свойств в клеточных культурах // Вопр. Вирусол.-М.-1991 .-N5.-С.356-360

32. Медицинская вирусология: руководство. // Под ред. Д.К.Львова.-М.ООО «Медицинское информационное агетство», 2008.-656с.:ил.

33. Новохатский А.С., Хлябич Н.Г. Теория и практика лабораторной диагностики синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД) // ВИНИТИ.- М.-1 992.-С.1-221

34. Носик Д.Н., Иваницкая Л.П., Сато Ш. // Современные представления о ВИЧ-инфекции и СПИДе. М., Центр по биотехнологии, медицине и фармации, 1999, 59 с.

35. Носик Д.Н., Калнина Л.Б., Злобин А.Ю., и др.//, Характеристика штаммов вируса иммунодефицита человека, выделенных от ВИЧ-инфицированных лиц натерритории СССР// Вопр. Вирусологии, 1992, №1, с.24-47

36. Носик Д.Н., Носик Н.Н. ВИЧ-инфекция: профессиональный риск и экстренная профилактика. М.-Издательство НЦССХ им.А.Н.Бакулева РАМН, 2004,- 55 с.

37. Носик Д.Н. Вирусы иммунодефицита человека и животных // Инфекционные и паразитарные болезни. -М.-1989.-Вып.10.-С.1-15.

38. Носик Д.Н. Создание коллекции вирусов иммунодефицита человека, циркулирующих на территории Российской Федерации // Автореферат дисс. докт. мед. наук. М.-1992.-С.1-79.

39. Носик Н.Н. Цитокины при вирусных инфекциях // Вопр. вирусологии, 2000.-31 .-с.4-10

40. Персина И.С. Клетки Ларгенганса-структура, функция, роль в патологии // Архив патол.-1985.-N47.-Вып.2.-С.86-93

41. Пиот П. Доклад UNAIDS в рамках Всемирной кампании борьбы со СПИДом,23 апреля 1998г.

42. Пиотровский Л.Б., Киселев О.И. Фуллерены в биологии. С.Петербург.- Издательство «Росток», 2006.- 335 С.

43. Покровский В.В., Ермак Т.Н., Беляева В.В., Юрин О.Г. ВИЧ-инфекция: клиника, диагностика и лечение // М., ГЭОТАР Медицина, 2000, 496 с.

44. Покровский В.В., Ладная Н.Н., Буравцова Е.В. ВИЧ-инфекция // Информационный бюллетень. 1999. - № 15. - 36 с.

45. Покровский В.В., Ладная Н.Н., Соколова Е.В., Буравцова Е.В. ВИЧ-инфекция; // Информационный бюллетень. -2004.-№ 26. 36 с.

46. Покровский В.В., Ладная Н.Н., Соколова Е.В., Буравцова Е.В. ВИЧ-инфекция // Информационный бюллетень. -2005. № 27. - 36 с.

47. Покровский В.В., Янкина З.К. Эпидемиологическое расследование первого случая СПИД, выявленного у гражданина СССР II Журнал микробиологии.- 1987.-№12.- С.8-11.

48. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии / Под ред Л.С.Страчуновского, Ю.Б.Белоусова, С.Н.Козлова // М., 2002, 381 с.

49. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение прикладных программ STATISTICA. М., Медиа Сфера 2003. - 306 с.

50. Ройт А., БростоффДж., Мейл Д. Иммунология. М.- Мир, 2000.-592 с.

51. Руководство по доклиническому испытанию препаратов, Издание Фармкомитета РФ, Москва, 2000, 359 с.

52. Сапин М.Р., Энтиген Л.Е. // Иммунная система чел овека.-М.-Мир.-1996.-С. 1-304

53. Смолли Р.Е. Открывая фуллерены//УФН, т.168 (3), с.323, 1998.

54. Соколов В. И., Станкевич И. В. Фуллерены-новые аллотропные формы углерода: структура, электронное строение и химические свойства//Успехи химии, т.62 (5), с.455, 1993.

55. Статистические данные // СПИД Инфосвязь.-2000.-Ы6,-С.46-4756. "Статистический словарь". Гл. ред. М.А. Королев, 2-е изд., перераб. и доп. -// М.: Финансы и статистика. -1989. - 623с.

56. Суханова А.Л., Казеннова Е.В., Бобкова М.Р. и др. Варианты вируса иммунодефицита человека типа 1, обнаруживаемые в России среди инфицированных половым путем // Вопросы вирусологии.- 2004. № 49. -С. 4-7.

57. Тамм И. //Стратегия химиотерапии. Пер. с англ. М.-1996.-С.210-245

58. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А. СПИД // Издание Народной академии культурных и общечеловеческих ценностей.-М.-1992.-С.1-352

59. Чекановская Л.А. Гамма-плант как новый нетоксичный индуктор интерферона // Вопр.вирусологии.-М.-1997.-N 3.-С.123-126

60. Чекановская Л.А., Генералов А.В. Выделение и характеристика препарата гамма-плант из растения Solanum tuberosum // Химико-фармацевтический журнал.-2000.-N 3.-С.51-56

61. Шипулин Г. А., Богословская Е. В., Цыганова Г. М., Большаков Ю. В., Покровский В. В. // Отечественная ПЦР-тест-система для количественного определения РНК ВИЧ в плазме крови. // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2001. — №1. — с. 40-43

62. Abrams D.I., Goldman A.i., Launer С. et al. Comparative trial of didanozine or zalcitabine after treatment with zidovudine in patients with Human Immunodeficiency Virus Infection // J.N.Engl.Med.-1994.-330.-P.657-662

63. Acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) among blacks and Hispanics United States // JAMA.-1986.-V.261 .-N 20,-P.2799-2800.

64. AIDSinfo.nih.gov Recommendations for Use of Antiretroviral Drugs in Pregnant HIV-1 -Infected Women for Maternal Health and Interventions to Reduce Perinatal HIV-1 Transmission in the United States October 12, 2006

65. Albert J., Fenyo E. Simple, sensitive and specific detection of human immunodeficiency virus type 1 in clinical specimens by polymerasechain reactions with nested primers // J. of Clin. Microb.-1990.-Vol.28.-N7.-P.1560-1564

66. Ammaranond P., Cunningham P., Oelrichs R. et al. Rates of transmission of antiretroviral drug resistant strains of HIV-1 II J. Clin. Virol. 2003. - Vol.26. - P.153-161.

67. Asjo В., Albert J., Karlsson A. Replicative capacity of human immnodeficiency virus from patients with varying severity of HIV infection // Lancet.-1986.-Vol.2.-P.660-662

68. Barre-Sinoussi F., Mugeyre M., Dauguet C. Isolation of a T-lymphotropic retroviruses from a patient at risk for AIDS // Science.-1983.-Vol.220.-P. 868-871

69. Bayles E., Gao F., Bibollet-Ruche F. et al. Hibrid origin of SIV in chimpanzees // Science. 2003. - P. 1713.

70. Beerenwinkel N., Daumer M., Sing T. et al. Estimating HIV evolutionary pathways and the genetic barrier to drug resistance II J Infect Dis. 2005. - Vol. 191(11). P.1953-1960.

71. Briones C, Perez-Olmeda M, Rodriguez С et al. Primary genotypic and phenotypic HIV-1 drug resistance in recent seroconverters in Madrid // J Acquir Immune Defic Syndr. -2001. Vol. 26(2). - P: 145-150.

72. Carpenter C.C., Fischl M.A., Hammer S.M. et al. Antiretroviral Therapy for HIV infection in 1997: updated recommendations of the International AIDS Sosaity II USA Panel.-JAMA.-1997. v. 227:p.1962-1969

73. Carr JK, Nadai Y, Eyzaguirre L et al. Outbreak of a West African recombinant of HIV-1 in Tashkent, Uzbekistan // JAIDS. 2005. - Vol. 39(5). - P.570-575.

74. Centers for Desease Control. Pneumocystis pneumonia // Centers for desease control. Pneumocystis pneumonia. -Los Angelos. Morb.Mortal Wkly Rep.(MMWR).-1981 .-30.-P.250-252

75. Cheng-Mayer C., Shiodo t., Levy J.A. Host range, replicative and cytopathic properties of human immunodeficiency virus type 1 are determined by very few aminoacid change in tat and gp 120 // J.Virol.-1991 .-65.-P.6931-6941

76. Clavel F. Mechanisms of HIV drug resistance. In HIV Infection / Antiviral resistance-scientufic basis and recommendations for management // Bash Medical Publishing. 2004. - P. 17-47.

77. Clerici M., Sarin A., Coffman R.L. et al. Type1/type2 cytokine modulation of T-cell programmed cell deth as a model for human immunodeficiency virus pathogenesis // Proc. Nat. Acad. Sci.-USA.-1994.-91.-P. 11811-11815

78. Coffin J.M., Haase A., Levy J.A., Montagnier L., Oroszlan L., Teich N. Human immunodeficiency viruses // Science.-1982.-Vol.232.-P.697-700

79. Coffin J.M. Structure and classification of retroviruses // In the retroviridae. Levy J.A.(Ed.) Plenum Press.-1992.-P.19-49

80. Coffin J.M. HIV population dynamics in vivo: implications for genetic variation, pathogenesis, and therapy // Science. -1995. Vol. 267(5197). - P.483-489.

81. Collier A.C. Coombs R.W., Schoenfeld D.A. et al. Treatment of human immunodeficiency virus infection with saquinavir,zidovudine and zalcitabine // N.Engl.J.Med.-1996.-334.-P.1011-1017

82. Condra, J. H., Holder D. J., Schleif W. A. et al. Genetic correlates of in vivo viral resistance to indinavir, a human immunodeficiency virus type 1 protease inhibitor //J. Virol. -1996. Vol.70. - P.8270-8276.

83. Daniel M.D., Naidu Y.M., Lii Y. Simian immunodeficiency virus from African green monkeys // J.Virology.-1988.-Vol.62.-N 11.-P.4123-4128

84. De Clercq E. Chemotherapeutic approach to the treatment of the acquired immunodeficiency syndrome AIDS // J.Med.Chem.-1986.-29.-P. 1561-1569

85. Deeks S.G. International perspectives on antiretroviral resistance. Nonnucleoside reverse transcriptase inhibitor resistance // J. Acquir. Immune. Defic. Syndr. 2001. - Vol. 26. - P.S25-33.

86. Descamps D, Collin G, Letourneur F et al., Susceptibility of human immunodeficiency virus type 1 group О isolates to antiretroviral agents: in vitro phenotypic and genotypic analyses. J Virol. 1997. Vol. 71(11). - P.8893-8898.

87. Domingo E. Quasispecies theory in virology // J. Virol. -2002. Vol. 76. - P. 463-465.

88. Duwe S., Brunn M., Altmann D. et al. Frequency of genotypic and phenotypic. drug-resistant HIV-1 amongtherapy-naive patients of the German seroconverter study. // J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 2001. - Vol.26. -P.266-273

89. Emery S, Neuhaus JA, Phillips AN et al. Major clinical outcomes in antiretroviral therapy (ART)-naive participants and in those not receiving ART at baseline in the SMART Study. J Infect Dis 2008; 197: 1133-1144.

90. Esnouf R., Ren J., Ross C. et al. Mechanism of inhibition of HIV-1 reverse transcriptase by non-nucleoside inhibitors // Nat. Struct. Biol. 1995. - Vol. 2(4). - P.303-308.

91. Fauci A.S. Host factors and the pathogenesis of HIV-induced deseases // Nature.-1996.-Vol.384.-P.529-534

92. Ferdats A, Konicheva V, Dievberna I et al. An HIV type 1 subtype A outbreak among injecting drug users in Latvia // AIDS Res Hum Retroviruses. 1999. - Vol. 15(16). -P.1487-1490.

93. Flint S.J., Enquist L.W., Krug R.M. et al. Principles of Virology: Molecular Biology, Pathogenesis, and Control. -ASM Press, Washington, USA, 2000. 804 p.

94. Fonjungo P.N., Mpoudi E.N., Torimoro J.N. et al. Human immunodeficiency virus type 1 group M protease in Cameroon: genetic diversity and protease inhibitor mutational features // J. Clin. Microbiol. 2002. - Vol. 40. -P.837-845.

95. Gallo R.C. The AIDS virus // Scientifics American.-1987.-Vol.256.-N 1.-P.39-48

96. Gallo R.C., Montagnier L. AIDS in 1988 // J. of Scien. America.-1988.-Vol.259.-P.41-48

97. Gallo R.C. Frequent detection and isolation of cytopathic retroviruses (HTLV-III) from patient with AIDS and at risk for AIDS // Science. 1984. - Vol.224. - P.500-503.

98. Gao F., Vidal N., Li Y., et al. Evidence of two distinct subsubtypes within the HIV-1 subtype A radiation// AIDS Res Hum Retroviruses. -2001. -V.17. -P.675-688.

99. Gessani S., Borghi P., Fantuzzi L. et al. Induction of cytokines by HIV-1 and its gp 120 protein in human peropheral blood monocyte/macrophages and modulation of cytokine response during differentiation // J.Leukoc. Biol.-1997.-Vol.62.-P.49-53.

100. Gifford R.J., de Olivera Т., Rambaut A. et. al. Phylogenetic surveillance of viral genetic diversity and the evolving molecular epidemiology of human immunodeficiency virus tupel J. of Virology, 2007, 81, 13050-13056.

101. Haynes B.F., Pantaleo G., Fauci A. Towards an Understsnding of the Correlates of Protective Immunity to HIV Infection // Science.-1996.-271.-P.324-327

102. Haas G., Samri A., Gomard E. et al. Cytotoxic T-cell responses to HIV-1 reverse transcriptase, integrase and protease // AIDS. 1998. - Vol. 12(12). - P. 1427-1436.

103. Haase A.T. Population biology of HIV-1 infection: viral and CD4+ T cell demographics and dynamics in lymphatic tissues // Annu. Rev. Immunol. -1999. Vol. 17. - P.625-656.

104. Harada S., Koyaanagi Y., Yamamoto N. Infection of HTLV-IIl/LAV in HTLV-1 earring cells MT-2 and MT-4 application in piaque assay // Science.-1986.-Vol.229.-P.563-566

105. Ho D.D., Neumann A.U., Perlson A.S. et al. Rapid turover of plasma virions and CD4 lymphocytes in HIV-1 infection // Nature.-1995.-373.-P. 123-126

106. Johnson V.A., Brun-Vezinet F., Clotet B. et al. Update of the drug resistance mutations in HIV-1: 2005 // International AIDS Society USA. - Topics in HIV Medicine. - Special Contribution. - 2005. - Vol. 13 (1). - P. 51-57.

107. Kageyama S., Hoekzema D.T., Murakava Y. et al. A C2 symmetry-based HIV protease inhibitor, A77003, irreversibly infectivity of HIV-1 in vitro // AIDS Res. Hum. Retroviruses. 1994. - Vol.10. - P.735-743.

108. Kaldor S. W., Kalish V. J., Davies J. F.ll, et al. VIRACEPT (Nelfinavir Mesylate, AG1343): a potent, orally bioavailable inhibitor of HIV-1 protease // J. Med. Chem. 1997. - Vol. 40. - P.3979-3985

109. Kantor R, Katzenstein DA, Efron B, et al., Impact of HIV-1 subtype and antiretroviral therapy on protease and reverse transcriptase genotype: results of a global collaboration II PLoS Med. 2005. - Vol. 2(4). - P. 0325-0337.

110. Kantor R., D. Katzenstein. Polymorphism in HIV-1 non-subtype В protease and reverse transcriptase and its potential impact on drug susceptibility and drug resistance evolution // AIDS Rev. 2003. - Vol. 5. - P.25-35.

111. Karlsson A.C., Deeks S.G., Barbour J.D. et al. Dual pressure from antiretroviral therapy and cell-mediated immune response on the human immunodeficiency virustype 1 protease gene 11 J. Virol. 2003. - Vol. 77(12). - P. 6743-6752.

112. Keele B.F., Van Heuverswyn F., Li Y.et. al. Chimpanzee reservoirs of pandemic fnd nonpndemic HIV-1 .Science, 2006, 313, 523-526.

113. Kiguchi Т., Yuumoto Y., Ninomiya I., Naito Т., Deki K., Ishibashi M., Kobayashi J. Tetrahedron Lett. 1992, 33, 7389.

114. Klatzmann D., Barre-Sinoussi F., Nugeyre M.T., Montangnier L. Selective tropism of lymphadenopathy associated virus (LAV) for helper-inducer T lymphocytes // Science.-1984.-Vol.225.-P. 59-63

115. Kohlstaedt L.A., Wang J., Friedman J.M. et al. Crystal structure at 3.5 A resolution of HIV-1 reverse transcriptase complexed with an inhibitor // Science. 1992. - Vol. 256(5065). - P.1783-1790.

116. Korber В., Muldon M., Theiler J. et al. Timing the ancestor of the HIV-1 pandemic strains // Science. 2000. - Vol. 288. - P. 1789-1796.

117. Kraevsky A., Galegov G.A, Tarusova N. Khorlin A., Korneyeva M., Nosik D. et al. // Europaisches patentamt. N 901341.1. Prioritat 20.12.1988.

118. Krayevsky A, Arzumanov A, Shirokova E et al. dNTP modified at triphosphate residues: substrate properties towards DNApolymerases and stability in human serum // Nucleosides Nucleotides. 1998. - Vol. 17(1-3). - P. 681693

119. Krebs R, Immendorfer U, Thrall SH et al. Single-step kinetics of HIV-1 reverse transcriptase mutants responsible for virus resistance to nucleoside inhibitors zidovudine and

120. ТС и Biochemistry. 1997. - Vol. 36(33). - P.10292-10300.

121. Kuritzkes D.R. HIV Pathogenesis and Viral Markers // HIV Clinical Management, Medscape, Inc.-1999.- v.2

122. Kurbanov F, Kondo M, Tanaka Y, et al. Human immunodeficiency virus in Uzbekistan: epidemiological and genetic analyses // AIDS Res Hum Retroviruses. 2003. -Vol. 19(9). P.731-738.

123. Larder B.A., Darby C., Richman D.D. HIV with reduced sensivity to zidovudine (AZT) isolated during prolong therapy // Science.-1989.-243.-P.1731-1734.

124. Leinikki P., Liitsola K., Laukkanen T. et al. The identification of the genetic subtypes of HIV-1 circulating on the territory of Russia // Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 1996. - Vol. (6). - P. 25-28.

125. Leitner Т., Korovina G., Marquina S. et al. Molecular and biological characterization of Russian HIV-1 strains // AIDS Res. Hum. retroviruses.- 1996. Vol.12. - P.1595-1603.

126. Levy J.A., Hoffman A.D., Kramer S.M. Isolation of lymphocytopathic retroviruses from San Francisco patients with AIDS // Science.-1984.-Vol.225.-P.840-842.

127. Levy J.A., Mackewicz C.E., Barker E. et al. Controlling HIV pathogenesis: the role of the noncytoxic anti-HIV response of Cd8+ T-cells // Immunol.Today.-1996.-17.-P.217-224.

128. Lifson J.D., Engleman E.G. Role of CD4 in normal immunity and HIV infection // Nature.-1989.-Vol.323.-P.93-117.

129. Liles W.C., Van Voorhis W.C. Review: Nomenclature and Biolgical Significance of Cytokines Involved in Inflammation and the Host Immune Response // J.lnfec.Dis.-1995.-Vol.172.-P.1573-1580.

130. Little SJ, Holte S, Routy JP et al. Antiretroviral-drug resistance among patients recently infected with HIV II N Engl J Med. 2002. - Vol. 347(6). - P. 385-394.

131. Lohse A., Jensen H., Bach P., Bols M. J. Chem. Soc., Perkin Trans. I. 2000, 659.

132. Loveday C., Hill A. Prediction of progression to AIDS with serum HIV-1 RNA and CD4 count // Lancet. 1995. - Vol. 345(8952). - P.790-791.

133. Lukashov V., Karamov E., Eremin V., et al. Extreme founder effect in an HIV type 1 subtype A epidemic among drug users in Svetlogorsk, Belarus // AIDS Res. Hum. Retroviruses.-1998.-V.14.-P. 1299-1302.

134. Lukashov V.V., de Ronde A., de Jong J. et al. 2000 Epidemiology of HIV-1 and emerging problems // International Journal of Antimicob. Agents. 2000. - Vol. 16. - P. 463-466.

135. Lvov D.K., Pokrovsky V.V., Nosik D.N., Stachanova V.M., Sato S., Kavana R. HIV-infection in Russia // Clinical Virology.(Japan).-1994.-Vol.22.-N 2.-P.41.

136. Mackewicz C.E., Ortega H., Levy J. Effect of Cytokines on HIV Replication in CD4+ Lymphocytes: Lack of Identity with the CD8+ Cell Antiviral Factor // Cell Immunol.-1993.-153.-P.329-343.

137. Masharsky A.E., Klimov N.A., Kozlov A.P. 2003. Molecular cloning and analysis of full-length genome of HIV type 1 strains prevalent in countries of the former Soviet Union // AIDS Res. Hum. Retroviruses. -2003. Vol. 19. - P. 933939.

138. Mason R.D., Bowmer M.I., Howley C.M. et al. Antiretroviral drug resistance mutations sustain or enhance CTL recognition of common HIV-1 Pol epitopes // J. Immunol. -2004. Vol. 172. - P. 7212-7219.

139. Mellors R.C. Pathogenesis of HIV Infection and AIDS // Data on file, Medline, Cornell Univ.Med. College.-1997.

140. Menendez-Arias L., Martinez M.A., Quinones-Mateu M.E., Martinez-Picado J. Fitness variations and their impact on the evolution of antiretroviral drug resistance // Curr. Drug. Targets. Infect. Disord. 2003. - Vol. 3(4). - P.355-371.

141. Menzo S., Monachetti A., Balotta C. et al. Processivity and drug-dependence of HIV-1 protease: determinants of viral fitness in variants resistant to protease inhibitors // AIDS. -2003. Vol. 17(5). - P. 663-671.

142. Miller V, Larder BA. Mutational patterns in the HIV genome and cross-resistance following nucleoside and nucleotide analogue drug exposure // Antivir Ther. 2001. - Vol. 6. -P.25-44.

143. Miller V. International perspectives on antiretroviral resistance. Nucleoside reverse transcriptase inhibitor resistance // J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 2001. - Vol. 26. - P. S34-S50.

144. Montagnier L., Gruest J., Chamaref S. Adaption of lymphadenopathy-associated virus (LAV) to replication in EBV-transformed B-lymphoblastoid cell lines // Science.-1984.-Vol.225.-P.63-66.

145. Montefiori D.S., Robinson W.E., Mitchell W.M. In vitro evaluation of mismatched double-stranded RNA (ampligen) for combination therapy in the treatment of AIDS // AIDS Res. Human Retroviral989.-Vol.5.-N.2.-P. 1 93-203

146. Mulish J.M., Reeves J.D., Gordon S.N., et. al. Virally induced CD4+T cells depletion is not sufficient to induce AIDS in a natural host. J.Immunol., 2007, 179, 3047-3056.

147. Murphy R.L., Montaner J. Nevirapine: a review of its development, pharmacological profile and potential for clinical use // Exp.Opin.Invest.Drugs.-1996.-N 5.-P.1183-1199.

148. Naganawa S, Sato S, Nossik D et al. First report of CRF03AB recombinant HIV type 1 in injecting drug users in Ukraine // AIDS Res Hum Retroviruses. 2002. - Vol. 18(15). P.1145-1149.

149. Nossik D.N., Lvov D.K. Human immunodeficiency viruses circulating in Russian territory // Sov.Sci.Rev.E.Virology.-1994.-Vol.5.-P.113-140.

150. Novitsky V.A., Montano M.A., Essex M. Molecular epidemiology of an HIV-1 subtype A subcluster among injection drug users in the Southern Ukraine // 1998 Aug 10;14(12):1079-85 from 1996, Odessa, no recomb.

151. Pandrea, I., D. Descamps, G. Collin, D.L. Robertson, F. Damond, V. Dimitrienco, S. Gheorghita; M. Pecec, F.

152. Simon, F. Brun-Vezinet, and C. Apetrei. HIV type 1 genetic diversity and genotypic drug susceptibility in the Republic of Moldova // AIDS Res. Hum. Retroviruses. 2001. - Vol. 17. - P.1297-1304.

153. Pantaleo G., Graziosi C., Fauci A. The Immunopathogenesis of Human Immunodeficiency Virus Infection // N. Engl. J. Med. -1995. -Vol.328.-N 5.-P.327-335.

154. Parker M.M., Wade N., Lloyd R.M. et al. Prevalence of genotypic drug resistance among a cohort of HIV-infected newborns // JAIDS. 2003. - Vol. 32. - P.292-297.

155. Patick A.K., Potts K.E. Protease inhibitors as antiviral agents // Clin. Microbiol. Rev. 1998. - Vol.11(4). - P.614-627.

156. Pauwels R., De Clercq E., Desmyter J. et al. Sensitive and rapid assay on MT-4 cells for detectionof antiviral compaunds against of the AIDS virus // J.Virol.Methods.-1987.-16.-P.171-185.

157. Piantadosi A., Chohan В., Chohan V. et. al. Chronic HIV-1 infection frequently fails to protect against superinfection. PLOS pathogens, 2007, 3, 1745-1760.

158. Picker L.J. Immunopathogenesis of acute AIDS virus infection. Current Opinion in immunology, 2006, 18, 1-7.

159. Plosker G.L., Figgitt D.P. Tipranavir // Drugs. 2003. - Vol. 63(15). - P.1611-1618.

160. Popovic M., Saragadharan M.G., Gallo R.C. Detection, isolation and continuous production cytopathic retroviruses (HTLV -III) from patients with AIDS and pre AIDS // Science.-1984.-Vol.244.-P.497-500.

161. Puro V., Ranchino M., Profili F. Ocupationals exposures to blood and risk of HIV transmission in a general hospital (1986-1988) // Eur.J.Epidemiol.-1990.-Vol.6.-N 1.-P.67-70.

162. Quinones-Mateu M.E., Arts E.J. Fitness of drug resistant HIV-1: methodology and clinical implications // Drug Resist Updat. 2002. - Vol. 5(6). - P. 224-233.

163. Race E., Meynard J.-L., Soriano V., Zolopa A.R. Recomendations for management. In HIV Infection/Antiviral resistance -scientufic basis and recommendations for management. Bash Medical Publishing. - 2004. - p. 110123.

164. Rhee SY, Kantor R, Katzenstein DA, HIV-1 pol mutation frequency by subtype and treatment experience: extension of the HIVseq program to seven non-B subtypes // AIDS. -2006. Vol. 20. - P. 643-651.

165. Richman DD. Susceptibility to nucleoside analogues of zidovudine-resistant isolates of human immunodeficiency virus // Am. J. Med. 1990. - Vol.88. - P. 8S-10S.

166. Ruiz-Jarabo C.M., Arias A., Baranowski E. et al. Memory in viral quasispecies // J. Virol. 2000. - Vol. 74(8). - P. 3543-3547.

167. Saag M.S. Evolving Understanding of the Immunopathogenesis of HIV // AIDS Res.Hum.Retrovirus.-1994.-Vol.10.-N 8.-P.887-892.

168. Salomon H, Wainberg MA, Brenner В et al. Prevalence of HIV-1 resistant to antiretroviral drugs in 81 individuals newly infected by sexual contact or injecting drug use // AIDS. 2000. - Vol. 14(2). P.F17-23.

169. Shafer R.W. Genotypic testing for human immunodeficiency virus type 1 drug resistance // Clin. Microbiol. Rev. 2002. - Vol. 15(2). - P.247-277.

170. Sharp P.M., Bailes E., Chaudhuri R.R. et al. The origins of acquired immune deficiency syndrome viruses: where and when? // Phil. Trans. R. Soc. Lond. B. 2001. -Vol. 356. P. 867-876.

171. Schneider J., Hunsmann G. Simian lentiviruses the SIV group // J. of AIDS.-1988.-Vol.2.-P.1-9.

172. Simon V., Padte N., Murray D. et al. Infectivity and replication capacity of drug-resistant human immunodeficiency virus type 1 variants isolated during primary infection // J. Virol. 2003. - Vol. 77. - P.7736-7745.

173. Smith S.M. HIV CTL escape: at what cost? // Retrovirology. 2004. - Vol. 1. - P. 8-12.

174. Soares MA, De Oliveira T, Brindeiro RM et al. A specific subtype С of human immunodeficiency virus type 1 circulates in Brazil // AIDS. 2003. - Vol. 17. - P. 11-21.

175. Soriano V., de Mendoza, Zolopa A., Kiazand A. Epidemiology of HIV drug resistance. In HIV Infection/ Antiviral resistance scientufic basis and recommendations for management/ Bash Medical Publishing. - 2004. - p. 1747.

176. Sundstrom C., Nilsson K. Establishment and characterization of a human histiocytie lymphome cell lines (U-937) // Int.J.Cancer.-1976.-17.-P.565-577.

177. Takahashi I., Takama M., Ladnoff A.M. Envelope structure model of human immunodeficiency virus type 1 // J. of AIDS.-1989.-Vol.2.-P. 136-140.

178. Taylor S, Cane P, Hue S, et al., Identification of a transmission chain of HIV type 1 containing drug resistance-associated mutations // AIDS Res Hum Retroviruses. 2003. -Vol 19(5). - P.353-361.

179. Taylor B.S., Sobieszezyk M.E., McCutchan F.E. et. al. The challenge of HIV-1 subtype diversity. N.engl.J.Med., 2008, 358, 1590-1602

180. Tateno M., Lavy-J.A. MT-4 plaque formation can distinguish cytopatic subtypes of the HIV // Virology.-1988.-Vol.299.-P.299-301.

181. Ustina V, Zilmer K, Tammai L, et al., Epidemiology of HIV in Estonia // AIDS Res Hum Retroviruses. 2001. - Vol. 17(1). - P. 81-85.

182. Walker B.D. and Korber B.T. Immune control of HIV: the obstacles of HLA and viral diversity // Nature Immunology. -2001. Vol. 2(6): 473-475.

183. Walker B.D., Burton D.R. Toward an AIDS Vaccine. Science, 2008, 320, 760-764.

184. Walsh, J.C., A.L. Pozniak, M.R. Nelson, et al. Virologic rebound on HAART in the context of low treatment adherence with a low prevalence of antiretroviral drug resistance // J Acquir. Immune Defic. Syndr. 2002. - Vol. 30. - P.278-287.

185. Weber J. The story of AIDS // Adelphi Communic.Ltd.-Bollington.UK.-1993.-P.24.

186. Weber J., Rangel H.R., Chakraborty B. et al. Role of baseline pol genotype in HIV-1 fitness evolution // J. Aquir. Immune Defic. Syndr. 2003. - Vol. 33. - P. 448-460.

187. Wegner SA, Brodine SK, Mascola JR, et al., Prevalence ofgenotypic and phenotypic resistance to anti-retroviral drugsiin a cohort of therapy-naive' HIV-1' infected US military personnel // AIDS. 2000. - Vol. 14(8). - P.1009-1015.

188. Wei X, Ghosh SK, Taylor ME, et al. Viral dynamics in human immunodeficiency virus type 1 infection. Nature. -1995.- v. 373: p.117-122.

189. Willberg C.B., McConnell J.J., Eriksson E.M. et. al. Immunity to HIV-1 is influenced by continued natural exposure to exogenous virus. PLOS pathogens, 2008, 4, 113.

190. Wong Staal F., Shaw G.M., Hahn B.H., Salahuddin S.Z., Popovic M., Markham P., Redfield R., Gallo R.C. Genomic diversity of human T-lymphotropic virus type III (HTLV-III) // Science.-1985.-229.-P.759-762.

191. World Health Organization (WHO) // The HIV/AIDS Pandemic.Overview.-Copengagen.-1993.-P. 1-10.

192. Yeni P.G., Hammer S.M., Hirsch M.S. et al. Treatment for adult HIV infection: 2004 recommendations of the International AIDS Society-USA Panel // JAMA. 2004. -Vol. 292(2). - P.251-265.

193. Zhang L, Dailey PJ, He T, et al. Rapid clearance of simian immunodeficiency virus particles from plasma of rhesus macaques. J Virol. -1999,- v. 73.-p.855-860

194. Zhang Y.M., Imamichi H., Imamichi T. et al. Drug resistance during indinavir therapy is caused by mutations in the protease gene and in its Gag substrate cleavage sites // J. Virol. 1997. - Vol. 71(9). - P. 6662-6670.

195. Ziermann R., Limoli K., Das K. et al. A mutation in human immunodeficiency virus type 1 protease, N88S, that causes in vitro hypersensitivity to amprenavir // J. Virol. 2000. -Vol. 74(9). - P.4414-4419.

Информация о работе

Лобач, Ольга Александровна
кандидата биологических наук
Москва, 2010
ВАК 03.02.02

Диссертация

Препараты класса актиномицетов и фуллеренов, подавляющие репродукцию вируса иммунодефицита человека - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы