Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ПОЗИЦИОННОЕ КЛОНИРОВАНИЕ ЛОКУСОВ КОЛИЧЕСТВЕННЫХ ПРИЗНАКОВ ДОМАШНЕЙ КУРИЦЫ

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "ПОЗИЦИОННОЕ КЛОНИРОВАНИЕ ЛОКУСОВ КОЛИЧЕСТВЕННЫХ ПРИЗНАКОВ ДОМАШНЕЙ КУРИЦЫ"

на правах рукописи

СТЕКОЛЬНИКОВА Виктория Александровна

ПОЗИЦИОННОЕ КЛОНИРОВАНИЕ ЛОКУСОВ КОЛИЧЕСТВЕННЫХ ПРИЗНАКОВ ДОМАШНЕЙ КУРИЦЫ

Специальность 03.00.15 — генетика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 2006

Рабата выполнена в лаборатории молекулярной организации генома ГНУ ВНИИГРЖ РАСХН

Научный руководитель:

доктор биологических наук А.А. Сазанов

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Л.В.Коэнкова (ГНУ ВНИИГРЖ РАСХН) кандидат биологических наук Е.Г.Нероном (Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины МЧС России)

Ведущее учреждение: Институт экспериментальной медицины РАМН

Защита состоится „{?.?. 2006 г. в И часов на заседании диссертационного

совета Д 006.012.01 по защите диссертаций на соисканве ученой степени

доктора биологических наук при ГНУ ВНИИГРЖ РАСХН

по адресу: 196601, Санкт-Петербург — Пушкин, Московское шоссе 55-а. Факс:

(812) 465 99 89

е.шш'1:5pbvaitgen@inaii.nt

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИИГРЖ РАСХН

Ученый секретарь диссертационного совета Д 006.01X01 доктор биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Большинство хозяйственно ценных признаков домашних животных имеют сложный полигенный тип наследования и контролируются многими генами, расположенными в локусах QTL (quantitative trait loci). Изучение комплексной молекулярной архитектуры QTL представляет интерес с точки зрения обшей генетики (Mackay, 2001). Позиционное клонирование QTL - это получение совокупности перекрывающихся протяженных геномных клонов (контига) района хромосомы, оказавшего наибольшее влияние на количественные признаки.

В настоящее время известно несколько случаев успешного позиционного клонирования QTL у человека и мыши (Bednar et al, 2002; Zhang and Krabe, 2002; Pershoase et al, Genomics 2000) и один у крупного рогатого скота (Grisart et al, 2002). В последнем исследовании был клонирован район величиной 3 сМ, обладающий наибольшим влиянием на жирность молока. В указанном исследовании был выявлен «ген-кящшдат» для этого признака — DOATI, показаны различия в его нуклеотидной последовательности у особей с различающимся фенотипом (Grisart et al, 2002),

Несмотря на то, что у домашней курицы пока не известно случаев успешного позиционного клонирования QTL, такие работы финансируются рядом государственных проектов и проводятся в нескольких ведущих лабораториях Европы и США (http^/www.bbsrc.ac.uk). Существующие в настоящее время генетические карты домашней курицы сравнительно плотно насыщены молекулярными маркерами (http://www.thearkdb.org) и могут быть использованы в качестве инструмента для позиционного клонирования.

Геномные библиотеки высокой плотности (гридированные геномные библиотеки) позволяют получать протяженные фрагменты ДНК, содержащие интересующую исследователей последовательность, и широко используются для анализа генома с использованием различных подходов (Buitkamp et al., .1998).

РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева ЦНБ имени Н.И. Желг.з»ова Фонд научньЦ

Представленная работа посвящена позиционному клонированию двух районов хромосомы 4 домашней курицы, содержащих QTL толщины скорлупы на 53 неделе жизни (ST53) и массы белка в яйце на 33 неделе (AW33). Указанные признаки различаются у двух линий кур (польская зеленоногая и род-айленд) на 3,3% и 7,5%, соответственно.

Цели н ?аца^ц исследования. Целью данной работы является позиционное клонирование двух локусов количественных признаков домашней курицы -масса белка в яйце на 33-ей неделе жизни курицы-несушки (AW33) и толщина скорлупы яйца на 53-ей неделе жизни курицы-несушки (ST53). Поставлены следующие задачи:

- получение протяженных геномных клонов границ локусов количественных признаков масса белка в яйце на 33-ей неделе жизни курицы-несушки (AW33) и толсшна скорлупы яйца на 53-ей неделе жизни курицы-несушки (ST33)

- установление локализации ВАС-клоаоа, содержащих последовательности микросаггелдитов MCW0170, MCW0114 и ADL0241, на митотннеских хромосомах домашней курицы методом FISH

- установление положение последовательностей полученных ВАС-клонов в составе чернового варианта полного сиквенса генома домашней курицы

• получение всех доступных нуклеотидкых последовательностей и данных их расшифровки, пространственно связанных с выявленными ВАС-югонами

- создание списка генов, являющихся позиционными кандидатами для QTL AW33 и ST53

Цаучная новизна работы. Продемонстрирована эффективность использования градированных геномных библиотек для позионоого клонирования локусов количественных признаков птиц. Путем позиционного клонирования локусов количественных признаков толщины скорлупы на 53 неделе жизни (ST53) и массы белка в яйце на 33 неделе (AW33) выявлено 15 протяженных геномных клонов, содержащих микросателлнтные последовательности ДНК, ограничивающие локусы количественных признаков AW33 и ST53 и установлена их локализация в районах GGA4q21-22 и GGA4ql 1-12,

соответственно. Выявлены интервалы полного сиквенса генома йОА4 65.565.518 —68.451.718 (38 генов) к СйА4 16.643.314- 17.834.699 (16 генов), являющиеся критическими для А\>/33 и 5Т53, соответственно. Тедругическал н практическая ценность работы. Результаты представленной к защите работы использованы при составлении баз данных по генетическим и физическим картам хромосом курицы и сравнительным картам человека, мыши и курипы (www.thearkdb.org) и банка данных нухлеотидных последовательностей (www.rUm.ncbi.nih.gov) в сети Интернет. Материалы днссертадии используются при чтении лекций на кафедре генетики и селекции Санкт-Петербургского государственного университета в рамках магистерской программы «Эволюционная цитогенетика».

прпйя!ртя работы. Материалы работы были представлены на конференции «Актуальные [фоблшы пшют» Московсютэ обпксгаа генешков и сеяекцисмерсв (Мпжа^ 2000)1 Ш-ол Сьаае Вссросайосого обикства гагшмзв и сскхщигрсе (Мосгва, 2004), а такяе а рубсгем щ Х-ой Международной конференции по теномам животных, растений и микроорганизмов (Сан-Диего, США, 2002); 4-ой Европейской онтогенетической конференции (Болонья, Италия, 2004); 16-ой Европейской конференции по цитогенетике животных и генному картированию (Жойе ен Жосас, -Франция,2004); Х11-0Й Международной конференции по геномам животных, растений и микроорганизмов (Сан-Диего, США, 2004; ХГО-ой Международной конференции по геномам животных, растений и микроорганизмов (Сан-Диего, США, 2005). Результаты периодически докладывались на семинарах отдела молекулярной генетики н биотехнологии ГНУ ВНИИГРЖ РАСХН. Исследования проводили в соответствии с планом научно-исследовательской работы ГНУ ВНИИГРЖ Россельхозакадемви по теме «Разработать систему молекулярно-генетических маркеров, обеспечивающих повышение эффективности селекции сельскохозяйственных животных» (номер государственной регистрации 01.200.118843).

руДпшгяния результатов, Материалы, представленные в диссертации были опубликованы в научных журналах "Animal Genetics", "Chromosome Research", "Hereditas". Всего no теме работы опубликовано 16 печатных работ, из них 7 статей и 9 тезисов.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 127 страницах машинописного текста, включает 7 таблиц, 15 рисунков и состоит из следующих разделов: «Введение», «Обзор литературы», «Материал и методы», «Результаты», «Обсуждение», «Выводы», «Практические предложения» и «Список литературы». Список цитированной литературы насчитывает 22 русских и 158 иностранных названия,

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы Материал. Материалом для приготовления препаратов митотических хромосом послужили эмбрионы домашней курицы породной группы Бурый Леггорн из частного хозяйства АЛ. Вахромесвой (С.Петербург), В качестве ДНК-матриц для полимеразной цепной реакции (ГГЦР) была использована тотальная геномная ДНК домашней курицы породной группы Бурый Леггорн из генетической коллекции института генетики и разведения животных Польской академии наук (Варшава, Польша). В работе были использованы градированные геномные ВАС-библиотеки джунглевой курицы 031 %TF256-BI и 032-JF256-RJ (Ресурсный Центр Техасского Университета, Техас, США (hbz.tamu.edu)>.

Mero-iMt Препараты мятотнческих хромосом домашней курицы

приготавливали из 96-часовых и 72-часовых эмбрионов (Родионов и др., 1981) согласно общепринятым методикам. Процедуры мечения ДНК зондов для гибридизации in situ проводили при помощи набора для ник-траяслядаш ("Ферментас", Вильнюс, Литва) с использованием biotin-11-dUTP. Преципитацию ДНК-зондов проводили путем переосаждения этанолом в присутствии конкурирующей ДНК в целях супрессии неспецифической

гибридизации. Гибридизацию ДНК/ДНК in situ проводили по стандартной методике (Lichter et al., 1991) с некоторыми модификациями. Детекцию сигнала проводили при помощи авцяин-FITC флуоресцентной системы детекции. После чего препараты окрашивали раствором пропидиум иодида в антифейде Vectashield фирмы «Vector» и анализировали с использованием системы люминесцентного микроскопа «Люмам» при увеличении об.ЮОх, ок.1 Ох, CCD-камеры «CHIPER» и компьютерной программы Lsta VideoTest-FISH 1.0, Внутрихромосомную локализацию проводили на основании измерений фракционных расстояний от сигнала до теломера короткого плеча fFLpter). Полученные значения соотносили со стандартными идиограммами RBG-исчерченности хромосом домашней курицы (Ladjali-Mohammedi et al., 1999). Анализ in silico проводили с использованием баз данных чернового варианта полного сиквенса генома домашней курицы (http^/www.ncbi.nlm.nih.govymapview/mi45_search.cgj?taxid»9031 к

http^/www.ensembl.org/Gallus^gallus/) на примет привязки имеющихся контигов к сиквенсу и получения нуклеотидных последовательностей районов QTL AW33 и ST53. Для выявления кодирующих последовательностей внутри контигов н их сравнения с известными генами других организмов использовали пакет компьютерных программ BLAST.

Результаты

Определены координаты двадцати клонов, имеющих гомологию последовательностей ДНК вставки с микросателяигнымн локусами MC WO 170, MCWO114 и ADL0241. Проверка клонов на предмет наличия искомой последовательности методом ПНР с использованием праймеров для трех микросзтеллЕтяых локусов (MCWO 170, MCW0114 и ADL0241) позволила установить соответствие двух ВАС-клонов локуеу MCW0170 (QTL AW33), девяти - локусу MCW0114 (QTL ST53) и четырех ВАС-клонов локусу ADL0241 (QTL ST53) (Таблица I). Методом флуоресцентной гибридизации ДНК-ДНК in situ (FISH) установлена внутрихромосомкая

локализация 15-ти ВАС-клонов, содержащих микросателлитные лояусы (Таблица 1). Установлено следующее положение микросателлитных маркеров локуса ST53 на GGA4: MCW0114 - 17.834.202-17.834.699 п.н. и ADL0241 -16,643.314-16.643.645 п.н. Выявлено 16 EST (колирующих последовательностей) домашней курицы, расположенных в этом районе (Таблица 2). Установлен наиболее вероятный критический интервал для QTL AW33 на GGA4- 65.565.518 - 68.451.718 п.н., который содержит 38 EST (Таблица 3).

Таблица 1. Результаты флуоресцентной гибридизации ДНК-ДНК in situ (FISH) ВАС-клонов, содержащих микросателлитные локусы.

ВАС-клон Библиотека Мякро-сателлит-ный локус FLpter Локализация на GGA4 Число проанализированных хромосом

JE023N15 032-JF256-RI MCW0114 0,35±0.017 4qll 16

JE048017 032-JF256-R1 MCW0114 0.3&&0.013 4qll 16

JE054L1 032-JF256-RI MCW0114 0.35*0.015 4qll 11

JE068D24 032-JF256-RI MCW0114 0.43±0.029 4qll-12 12

JB051G11 031-JF256-BI MCW0114 0.35±0.018 4qll 14

JB052GS 031-JF256-BI MCW0I14 0.33±0.0t7 4qll 17

JB085F11 031-JF256-BI MCW0114 0.36±0.018 4qll 15

JBÖ89D11 031-JF256-BI MCW0114 0.35±0.015 4qll 13

JB09609 031-JF256-BI MCW0114 0.37±0,Q34 4qll 12

JB024F7 031-JF256-BI ADL024I C.35±0.0I2 4qll 15

JB024M12 031-JF256-BI ADL0241 0.38±0.012 4qtl 17

JB096J14 03I-JF256-BI ADL0241 0.36*0.013 4ql 1 12

JB097F17 031-JF256-BI ADL0241 0.36±0.018 4qll IS

JB095I15 031-JF256-BI MC WO 170 0.75±0.016 4q21 15

JB096L3 03 ] -JF256-BI MC WO 170 0.76Ю.013 4q22 19

Таблица 2. Список кодирующих последовательностей ДНК критического интервала 1,2 млн.п.н. <ЗТЬ БТ53

Ла Положение на ОСА4 Идентификационный номер Описание

1 16710015 16920778 ХМ.420348 гомология [Ь1ЯАРЬ2

2 16941649 17036962 ХМ.420349 гомология МАР4К4

3 17042102 17065993 ХМ_420350 гомология НЛО 178 (гипотетический белок)

4 17078901 17105036 ХМ 420351 гомология ИДО 128

5 17110031 17142579 ХМ_420332 гомология РЫ20298 (гипотетический белок)

6 17175913 17147736 ХМ__420353 гомология №№

7 17251083 17246778 ХМ_420354 гомология Х-ОС203547 (гипотетический белок)

8 17374303 17347243 №1.203361 мтмис

9 17388585 17387771 ЛМ_205»5 НМЙ2а

10 17417169 17437962 ХМ_420355 гомология С099Е2

11 17477780 17443138 ХМ.420356 гомология МТМК1

12 17520616 17479157 ХМ 420357 гомология МТМ1

13 17566453 17532690 ХМ 420358 гомология СХОКРб

14 17786217 17783731 ХМ_420359 гомологии ШС919666 (гипотетический белок)

15 17795219 17787180 ХМ.420360 гомология РАМПА

16 17812226 17826844 ХМ_420361 гомология ГОЭ

Таблица 3, Список кодирующих последовательностей ДНК критического

интервала 2,9 млк.гт.н. QTL AW33.

Ht Положение HaGGA4 Идентификационный номер Описание

1 65565518 65589897 , NM_204174 гомология CLOCK

2 65600468 65610272 ХМ.426Э36 гомология НТМР

3 65610175 65665630 ХМ_42070Э гомология FU13352 (гипотетический белок)

4 65665643 65691795 NMjOO1004368 KDR

5 65750354 65802421 NM_204361 KIT

6 65879355 65903878 NMJHM749 PDGFRA

7 65541110 6594509$ ХМ 426337 гомология PITX2

8 65954398 65975718 XM 42070S гомология СН1С2

9 66137749 66170636 ХМ_420706 гомология МшпЬ-сввзывающему белку Pan troglodytes

10 66171718 66198907 ХМ 420707 гомология LNX

11 66200+55 66238370 ХМ_420708 гипотетический белок LOC422754 Callus Salins

12 66240028 66421896 ХМ 420709 гомология STXBP1

13 66423729 66427127 ХМ_420710 гомология Rasll lb Mus musculus

14 66456380 66458632 ХМ_429985 гипотетический белок LOC422757 Gallus gallus

15 66466964 66488293 ХМ_420711 гомология USP46

16 66624443 66637771 ХМ.420712 гомологи* LOCI32671 (гипотетический белок)

17 66639232 66644516 ХМ_420713 гомология SGCB

18 66647043 66655287 ХМ_420714 гомология MGC38937 (гипотетический белок)

19 66663433 66697809 ХМ_420715 гомология KIAA0276 (гипотетический белок)

Таблица 3. Продолжение.

№ Положение H&GGA4 Иденгифика-цмоиный номер Описание

20 66703766 66727724 ХМ_42071б гомология FU21511 (гипотетический белок)

21 66747763 «763703 XM42Û717 гомология анонимному EST AK 15 9811 Mus muscutus

22 66786976 66917584 XM.4207Í8 гомология К1АА0826 (гипотетический бедок)

23 66922646 66931934 ХМ_426338 гомология SLCJ0A4

24 66936293 66961902 ХМ 420719 гомология KIAA1458 (гипотетический белок)

25 66979331 67031666 ХМ_420720 тес

26 67034230 67038500 ХМ_420721 гомология ТХК

27 6704486$ 67053517 ХМ_426339 гомология LOCI52319 (гипотетический белок)

23 67059087 67066S77 NMJZ05220 CNGA1

29 67118207 67234496 XML426340 гомология CORIN

30 67256Í59 67278261 ХМ_420722 гомология ATP1QD

31 «7284451 67293590 ХМ.420723 гомология COMMD8

32 67406517 67442196 ХМ_420724 гомология GABRA4

33 67540632 67674866 ХМ_420725 гомология GABRG1

34 68068539 68072818 ХМ_420726 гомологи» GíJ^DAl

35 68076996 68102550 ХМ 420727 гомология FLJ13220 (гипотетический белок)

36 68112726 68126201 ХМ_420728 гомология YIPF7

37 68138508 68166693 ХМ 429986 гипотетический белок LOC422775 Gallus ^allus

38 68322466 68562121 XMJÍ26341 гипотетический белок LOC428785 Gallus galtus

Обсуждение

Тонкое картирование двух районов хромосомы 4 домашней курицы, содержащих QTL толщины скорлупы на S3 неделе жизни (ST3J) и массы белка в яйце на 33 неделе (AW33), было провешено Бадейкой и соавт. в 2002 году (Waidecka tt а]., 2002). Указанные признаки различаются у двух линий кур (польская зеленоногая и род-айяенд) на 3,3% к 7,5%, соответственно. Методом гибридологического анализа косегрегацда мшфосателшпньк ДНК-маркеров и количественных признаков были определены маркеры интервалов генетической карты (районок хромосом), контролирующих QTL AW33 и ST53 (Wardecka et aL, 2002). С использованием баз данных компьютерной сета Интернет вами была показана локализация количественного признака AW33 в пределах интервала, ограниченного шпфосателлитиыми локусами MCW0170 и LEI0081, и QTL ST53 внутри района с границами MCW0114 и ADLQ241.

Получение 15-ти протяженных геномных клонов, содержащих нуклеотидяые последовательности границ QTL AW33 и ST53, и их физическое картирование па хромосоме 4 домашней курицы позволило провести привязку данных гибридологического анализа к контягам, объединяющим известные секвекировакные ВАС-клоиы. Благодаря этому нам удалось выявить Гранины QTL в терминах полного сиквенса генома домашней курицы - вар нукдеотшюв (п.н.). Нами было установлено следующее положение шгкросателяитных маркеров локуса ST53 на GGA4: MCW0114 - 17,834Л02-17.834.699 п.н. и ADLQ241 - 16.643314-16.643.645 п.н. Полученный интервал величиной 1,2 млн.п.н. является критическим для признака ST53, Выявлено 16 EST (кодирующих последовательностей) домашней курицы, расположенных в этом районе, которые можно считать генами - позиционными кандидатами для этого QTL, Из них 2 EST представляет собой структурные гены этого объекта, а 10 имеют высокую степень гомологии с известными генами человека, а 4 — генам предсказанных

(гипотетических) белков этого вида (Таблица 2). Вое гсны-ортологи человека, для которых известна хромосомная локализация, находятся в гомологичном районе хромосом этого вида. Кроме того, на основании данных по внутр»хромосомной локализации микросателдитов MCW0U4 и ADL0241 на длинном плече GGA4 и в положении 16-17 млн.п.н. на сиквенсе, нами была уточнена локализация центромера этой хромосомы, который находится не в положении 18.4-19.9 млн.п.н. как считалось ранее, а около 16 млн.п.н.

В отношении QTL AW33, установлена локализация единственного достоверно известного микросателлнтного маркера этого количественного npraHaKa-MCW0I70(MCW0l91)ra(KiA4BrowK^imH 68.451.521-68.451.718 п.н. Поскольку было известно направление, в котором расположен район, критический для QTL AW33, и примерное рекомбиыационное расстояние для доверительного интервала его локализации, вторая граница QTL определена в сайте локализации ортодога гена CLOCK (65.565.518 - 65.589.897 п.н.), который на основании его функциональной характеристики был признан наиболее вероятным геном-кандндаггом Для AW33). Установлен наиболее вероятный критический интервал для QTL AW33 (68.451.521 - 65.589.897 п.н.) величиной около 2,9 млн.п.н., который содержит 38 EST (5 известных генов домашней курицы, 4 гена предсказанных (гипотетических) белков этого виза, 17 ортологов генов человека, 1 — шимпанзе, 2 — домовой мыши и 9 предсказанных генов человека) (Таблица 3).

Выводы

1. Путем скрининга геномных библиотек выявлено 15 протяженных геномных клонов, содержащих микросатедлитные последовательности ДНК, ограничивающие локусы количественных признаков AW33 (масса белка Яйца на 33-ей неделе жизни несушки) и ST53 (толщина скорлупы яйца на 53-ей неделе жизни несушки).

¿.Методом прямого физического картирования ВАС-клонов на миготических хромосомах домашней курицы при помощи флуоресцентной ДНК-ДНК гибридизации in situ (FISH) установлена локализация .токусов количественных признаков AW33 и ST33 в районах длинного плеча хромосомы 4 домашней курицы GGA4q21-22 и GGA4ql Ы2, соответственно.

3. Путем анализа геномных баз данных in silico выявлены интервалы полного скквеяса генома домашней курицы GGA4 65.565.518 - 68.451.718 (2,9 мтп.н.) и GGA4 16.643.314 - 17.834.699 (1,2 млн.п.н), оказывающими влияние на проявление признаков AW33 и ST53.

4. Идентифицировано 38 и 16 генов, являющихся позиционными кандидатами для признаков AW33 и ST53, соответственно.

Практические предложения Результаты представленной к защите работы рекомендуется использовать при создании систем молекулярных маркеров для прямой генной селекции несушек по признакам качества яйца с целью оптимизации толщины скорлупы и массы белка. Материалы диссертации могут быть использованы в учебном процессе в высших учебных заведениях биологического, сельскохозяйственного и ветеринарного профилей.

Список публикаций по теме диссертации

1. Сазанов А.А., Сазанова А.Л., Трухина А.В., Царева В.А.. Козырева А.А., Смирнов АФ. Молекулярио-онтогенетический анализ генома птиц // Материалы 2-ой конференции Московского общества генетиков и селекционеров «Актуальные проблемы генетики». Москва. 2003. С. 328-329.

2. Сазанов А.А.. Царева В. А.. Смирнов А. Ф.. Вардецка Б., Корчах М., Ящак К., Романов М.Н. Позиционное клонирование районов хромосом, контролирующих количественные признаки у кур // Тезисы докладов итогового семинара по физике и астрономии по результатам конкурса грантов 2002 года для молодых ученых Санкт-Петербурга. Санкт-Петербург. ПИЯФ. 2003. С 44-45.

3. Sazanov А.А., Romanov M.N., Sazanova A.L., Tzareva V.A. Kozyreva A.A., Smirnov A.F., Price J.A., Dodgsoti J.B. Chromosomal localization of large-insert clones of the chicken genome: expanding the comparative шар If Plant, Animal and Microbe Genome ХП. San Diego. CA. 2004. P. 234.

4. Sazanov AA, Sazanova A.L., Tzareva V.A, Kozyreva A.A., Smirnov A.F., Romanov M.N., Price J.A., Dodgson J.B. Refined localization of the chicken KITLG, MGP and TYR genes on GGA1 by FISH mapping using BACs ti Animal Genetics. 2004. V. 35. P. 148 - 150.

5. Сазанов A.A., Сазанова АЛ., Царева В.А~ Козырева А.А., Смирнов А.Ф. Локализация генов ANX5, ALB и EDNRA на хромосоме 4 домашней курицы; ортология с хромосомой 4 человека И Селекционно-генетические методы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр. / ГНУ ВНИИГРЖ. - С.-П, 2004. - С. 200 - 203.

6. Сазанов А. А., Царева В. А.. Смирнов А.Ф., Вардецка Б., Корчак М- Ящак К., Романов M.IL Позиционное клонирование локусов количественных признаков у домашней курицы // Тезисы докладов итогового семинара по физике и астрономии по результатам конкурса грантов 2003 года для молодых ученых Санкт-Петербурга. Санкт-Петербург, ПИЯФ. 2003. С 42.

7. Sazanov A.A., Sazanova AX.y Tzareva V.A.. Kozyreva A.A, Smirnov A.F., Romanov M.N., Price J-A^ Dodgson J.B. Chromosomal localization of three GGA4 genes using BAC-based FISH mapping; a region of conserved syntetiy between the chicken and human genomes // Hereditas. 2004. V. 140. P. 249-251.

8. Sazanov АЛ., Sazanova A.L., Stelmlnifcova V.A.. Kozyreva A.A^ Smirnov AJF., Romanov M.N,, Price JA., Dodgsoit i.B. Chromosomal localization of CTSL: expanding of die region of evolutionary conservatism between GGAZ and HSA9 // Animal Genetics. 2004. V..35. P. 260.

9. Сазанов A.A., Сазанова AJL, Марева В .А,. Козырева A^A., Смирнов А.Ф. Выявление и характеристика районов хромосом домашней курицы, ортологичных наиболее обогащенным генами районам хромосомы 3 человека // Материалы Ш съезда ВОГиС. Москва. 2004. Т. 2. С. 270.

10. Сазанов А. А, Романов М.Н., Сазанова AJL, Царева В. А.. Козырева А. Ач Прайс Дж^., .Смирнов А.Ф., Додеон Дж.Б. Локализация на хромосомах протяженных геномных клонов домашней курицы в целях сравнительного картирования // Материалы Ш съезда ВОГиС. Москва. 2004. Т. 2. С 271.

11. Sazanov А.А., Romanov M.N., Wardecka Вч Sazanova A.L, Korczak M., S^yl'pikova V.A.. Kozyreva A.A., Smirnov A.F., Dodgson J.B4 Jaszczak K. Chromosomal localization of GGA4 BACs containing QTL-lmked micro satellites // Cytogenetic and Genome Research. 2004. V, 106. N. 1. P. 19.

12. Sazanov A.A., Romanov M.N., Sazanova A.L., Stekolnikova У.Д~ Kozyreva A.A., Malewsfci Т., Smirnov A.F. Chromosomal localization of fifteen HSA3pl4-p21 Notl clones oq GG A12; orthology of a chicken microchromosome to a gene-rich region ofHSA3 // Animal Genetics. 2005. V. 36. P. 71-73,

13. Sazanov AJV., Romanov M.N.; Sazanova AI^, gtekolnikova V.A.. Kozyreva A. A., Smirnov A.F., Dodgson J.B. Localisation of seven HSA3ql3-q23 Notl linking clones on the chicken microchromosomes 14 and 15 by double-color FISH // Plant, Animal and Microbe Genome XIII. San Diego. CA. 2005. P. 208. (P550).

14. Sazanov A.A., Romanov M.N., Ward^cka B„ Sazanova A.L., Korczak M., Stekol'nikova V.A.. Kozyreva A.A, Smirnov A.F., Jaszczak K., Dodgson I.B.

Chromosomal localization of fifteen large insert BAC clones containing three microsatellites on chicken chromosome 4 (GGA4) which refine its centromere position // Animal Genetics. 2005. V. 36. P. 161-163.

15. Sazanov A.A., Sazanova A.L., Romanov M.N., StekoI'nikoya, yrA-t Malewski T., Korczak M., Jaszczak K., Smimov A.F. Molecular organization of chicken genome // Genomics and micro arrays in biology and medicine. Sucha Beskidska. Poland. 2005. P. 26.

!6. SazanovA^., SazanovaA.L., Stekol'nikova V. A.. Kozyreva A.A., Romanov M.N., Malewski T., Smimov A.F. Chromosomal localization of seven HSA3ql3—>q23 Hotl linking clones on chicken microchromosomes: orthology of GGA14 and GGA15 to a gene-rich region of HSA3 tl Cytogenetic and Genome Research,2005. V. 111. P. 128-133.

Подписано в печать 14.06.2006 г. Формат 60X84 1/16 Бумага офсетная. Объем 1 печл. Тираж 100 экз. Заказ № 2.00

Отпечатано на ризографе ГНУ СЗНИИМЭСХ