Посттравматическое выживание нейронов чувствительного узла спинномозгового нерва крысы

Гусева, Дарья Сергеевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Посттравматическое выживание нейронов чувствительного узла спинномозгового нерва крысы
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Посттравматическое выживание нейронов чувствительного узла спинномозгового нерва крысы"

На правах рукописи

I усева Дарья Сергеевна

Посттравматическое выживание нейронов чувс1в:1тельного узла спинномозгового нерва крысы

03 00 25 — I ие:оло1 ия, цию.ю! ия и клеточная биология

Авгорефсра! ' тисссртапии на соискание >ченой оепени кан тлдата биоло! ических на\ к

Москва — 2005

Работа выпошсна в Казанском I ос\дарственном медицинском чниверситете

Научный руководитель:

локтор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Челышев Юрий Александрович

Швалев Вадим Николаевич

Викторов Илья Васильевич

Ведущая организация:

Российский государственный медицинский университет

Защита диссертации состоится « 2 » « и <0. » 2005 I в ^"час на

заседании диссертационного совета Д 212 203 08 при Российском }ниверси!е1е дружбы наротов по атресу 117198 Россия, I Москва, уч Миклухо-Маклая, д 8

С' диссертацией можно ознакомиться в на\чной библио1еке Российскою \ ниверситета тр\жбы паротов (117198, I Москва, >л Микл\хо-Мак 1ая, л 6)

Автореферат разослан «. »« » 2005 I

Ученый секретарь диссертационно!о совета, кандидат биологических наук

Саврова Ольга Борисовна

JVW/3

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность. Успех регенерации периферического нерва в значшельной мере определяется способностью нейронов выживать после травмы Феномен посттравма] ической тегенерации и 1ибечи чувствительных нейронов летально описан в работах с повреждением их периферического отроегка (Cajal, 1928, McKay et al, 2002) Имекися единичные работы, свидетепьсшующие о том, чго фенотип регенерирующих чувствительных нейронов существенно различается при травме центра 1ьною или периферического офосгков (Broude et al , 1997, Smith, Skene, 1997, Gavazzi et al , 2000) Данных о поведении чувавигсльпых нейронов при нарушении целостности их ценгральных отростков явно недостаточно Сравнитечьные исследования посправматической гибели нейронов при повреждении цен трального или периферического отростков пракжчески отсутствуют

При анализе поведения нейронов следует учитывать характер травмы Становится очевидным, что чувс!ви1ельныс нейроны по-разному реагируют на перерезку и лигирование периферическою отростка В первом счучае регенерация отростка разрешена, а при лигировании нерва она запрещена, что сказывается на способности чтого нейрона к выживанию (Челышев, Ра1инов, 2002, 2003) При центральной аксотомии регенерирующие аксоны псевдоуниполярных нейронов не мо!ут проникнуть в спинной мозг через барьер в зоне входа задних корешков, образованный глиальными клетками, и п результате действия здесь ингибиторов pocia аксонов (Fournier et al , 2001 Grimpe, 2005) Для преодоления iToro барьера представляется принципиально важным исследование молекулярных и клеючных механизмов, кошрочируюших регенерацию центральных отростков чу вс1витслы1ых нейронов

Количество псевдоунипочярных нейронов, ваупающих в посттравматический апоптоз после повреждения периферического отростка, зависит oi их принадлежности к конкретной субпопуляции (Рагинов, Челышев, 2003) Перерезка сед&чищного нерва у половозрелых крыс вызывае! i ибсть части нейронов в поясничных чувс!вигельных узчах (McKay et al, 2002, Рагинов, Челышев, 2003) При эюм раньше и в наибольшем количестве гибну! мачые нейроны с темным перикарионом и безмиелиновым отростком (В-кле1ки) и в меньшей мере большие нейроны со светлым перикарионом и миелинизированным отростком (А-клстки) (Tandrup et al , 2000) При лигировании седалищного нерва уменьшение количества малых нспептидергических нейронов, связывающихся с изолектином В4 (IB4), более выражено, по сравнению с ЫР200+-нейронами (проприоцептивные нейроны большого диаметра и ткжльпые нейроны среднего диаметра) (Рагинов, Челышев, 2003) Однако, до сих пор остается неясной реакция чувствительных нейронов, принадлежащих конкретным субпопуляциям, в ответ на центральную аксотомию

Большое значение для цитопротекции и восстановления функции травмированных нейронов имеют свободные радикалы и антиоксидантная система

клетки (Яо5епГс1с1 а1 , 1997. ВогсЬек й а1 , 1998) Мо 1ек\лы свободных радикалов, [аких как оксид азота (N0), обладают значительной реакционной способное!^ (Реутов и др , 1997) N0 выступает в роли ключевого регулятора функций клетки, в том числе процесса апоптоза (Брганс и др, 1998) Травма нейронов и нейродегенеративные нарушения сопровождаются окислительным сфессом На модели хронической травмы седалищного нерва усыновлено, что активные формы кислорода ухудшают микроциркуляцию в иннервируемой ткани-мигпени и замедляют восстановление функции нерва (КИаЫ, КЬос1г, 2001) Антиоксиданшая система, в состав которой входит ряд функционально важных ферментов, защищает структуры нерва от повреждения В последние годы активно исследуют роль Си^п-супероксиддисмутазы (Си/7п-СОД) в ан-тиоксидантной защите нейронов в центральной и периферической нервной системе, включая ее противоапоптозное действие (Яой^ет й а1 , 1994, Багмсепв « а! , 2004, Уагт е1 а] , 2004) Учитывая немногочисленные данные о влиянии Си-содержагцих соединений на регенерацию в периферической нервной системе, представляется актуальным изучение содержания меди (Си) в чувствительных узлах и в седалищном нерве после травмы

Цель и задачи исследования Целью настоящего исследования является оценка количес1ва нейронов различных субпопуляций в чувс!вительном узле спинномозгового нерва крысы после центральной аксотомии и/или травмы их периферических отрос1ков, а также уровня Си-содсржащих соединений в чувствительных узлах и седалищном нерве при его повреждении В работе были поставлены следующие задачи'

1 Оценить общее количес1во нейронов в чувствительном \3 1е спинномозгового нерва Ь5, а также количество №200 - и 1В4+-пейронов на 30-е и 60-е сутки после

-перерезки задних корешков (центральная аксотомия), -перерезки седалищного нерва: -лигирования седалищною нерва,

-центральной аксотомии в комбинации с перерезкой седалищного нерва, -цсшральной аксотомии в комбинации с лигироваиием седалищного нерва

2 Исследовать экспрессию каспазы-9 для оценки вероятное ж вступления в посттравма 1ический апонюз нейронов чувешитетьного узш спинномозгового нерва Ь5 на 30-е сутки после центральной аксотомии

3 Определить уровень Си-содержащих соединений в чувствшечьных узлах спинномозговых нервов Ь4-Ь5 и седалищном нерве крысы на 1-е сутки после его перерезки методом электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) Научная новизна Впервые экспериментально обосновано представление о том, что посттравматическая гибель нейронов чувствительного узла спинномозюво-го нерва более выражена при повреждении периферического, а не центрального отростка Впервые установлено, что поведение чувствительных нейронов, принадлежащих конкретным субпопуляциям, различается в ответ на центральную

* • г>

, »>• -

аксотомию ко шчество ЫР200+-нейронов уменьшаемся в бо 1ылей степени по сравнению с 1В4+-нейронами Получены новые данные о различной динамике численности нейронов этих субпопуляций в ходе регенерации после фавмы периферических отроаков и при центральной аксотомии Новые резулыащ по исследованию динамики экспрессии каспазы-9 позволяют высказать предположение о том, чго увеличение уровня этого фермеша в клетке не может расцениваться как признак необратимою вступления клс!ки в апотоз Впервые показано, что после фавмы периферического нерва конценфация Си(П), входящей в состав молеку I антиоксидашной защиты клетки, увеличивайся в цен-фальном отрезке нерва и не измепяе1ся в периферическом отрезке Научно-практическая значимость. Данные работы значимы для понимания механизмов пластичности периферических нейронов, зависимости их выживания и фенотипа от дсйс!вия нейротрофических сигналов, поступающих в пери-карион по различным каналам из ЦНС и из иннервируемой ткани-мишени Полученные данные о динамике посттравчашческой гибели нейронов чувс!ви-1ельною узла позволяю! оценить перспективы полноты восстановления сенсорной функции периферического нерва в клинической практике Результаты исследований, свидетельствующие о различном поведении ЫР200+- и 1В4 -нейронов при центральной аксоюмии и повреждении периферического офостка, имеют пракшческое значение для прогноза восстановления функции афферентных волокон различной сенсорной модальности (болевая, температурная, тактильная чувствительность, проириорецеппия) Полученные результаты обосновываю! целесообразное 1ь использования модели стандартной травмы нейронов чувствительною у31а спинномозгового нерва в качестве тест-системы для эффективного скрининга новых фармако Ю1ических нейро-протекторов и особенно тех, коюрые способны избирав !ьно поддерживать выживание чувствительных нейронов конкретных субпопуляпий Данные об уровне Си-содержащих соечинений в периферическом нерве имеют значение для анализа молекулярных и клеючных механизмов ан1Иоксидантной защиты клеток, взаимоотношений между антиоксидаптной и контролирующей апоптоз системами, чю важно для предотвращения гибели нейронов при нейродегепе-ративных заболеваниях и травмах Положения, выносимые на защиту

1 Посггравматическая гибель нейронов чу ветви 1ельного узла спинномоз-ювою нерва более выражена при повреждении периферического, а не центрального отростка

2 Харак!ер изменения количества ЫБ200- и 1В4-иммунопозитивных нейронов чувствительного узла спинномозгового нерва различен при центральной аксотомии и при травме их периферических отростков При центральной аксотомии в большей мере уменьшается количество ЫР200-иммунопозитивных нейронов

3 Уровень важных для антиоксидантной защиты процесса регенерации Cu-содержащих соединений в центральном отрезке нерва возрастает через I сутки после его перерезки Апробация работы Материалы работы доложены на Международном молодежном научном Форуме «Ломоносов-2005» (Москва, 2005), Всероссийской научной конференции «Реактивность и пластичность гистологических структур в нормальных, экспериментальных и патологических условиях» (Оренбург, 2003), 83-й еже:одной конференции немецкою физиологического общества (Лейпциг, 2004), международной научной конференции, посвященной ЮО-легию со дня рождения академика П Я Герке (Минск, 2004), научной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы гистологии Гистогенез и регенерация тканей» (Санкт-Петербург, 2004), IX Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине», посвященной 190-летию Казанского государственного медицинского университета (2004), Бабухинских чтениях в Орле (2004), 4-м форуме европейского неврологического общества (FENS) (Лиссабон, 2004), V Общероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Казань, 2004), VII Российской молодежной научной школе «Актуальные проблемы магнитного резонанса и его приложений» (Казань, 2004), юбилейной научной конференции физического факультета, посвященной 200-летию Казанского государственного университета (2004), VII Всероссийской конференции по патологии клетки (Москва, 2005). Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ Структура и объем диссертации Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 182 источника Работа изложена ira 103 страницах машинописно! о текста, иллюстрирована 30 рисунками и 10 таблицами

Работа осуществлена при поддержке грантов Федеральная целевая программа "Интеграция науки и высшею образования России на 2002-2004 годы", государственный контракт №И0061/1315 от 16 09 02, фонда НИОКР Р1 06-6 6231/2003; программа «Фундаментальные исследования и высшее образование» Американского фонда гражданских исследований и разработок (АФГИР), ПОЦ КГУ «Материалы и технологии XXI века» (RFC 007)

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Эксперименты проведены на 174 белых беспородных крысах-самцах массой 150-200 г Животные находились в пластмассовых клетках при температуре 18-20°С, имели свободный доступ к пище и воде Операции на животных проведены под уретановым наркозом (Srgma, 1,2 г/кг внутрибрюшинно)

В экспериментах с центральной аксотомией у опытных животных в асептических условиях проводили левостороннюю ламинэктомию на уровне поясничных сегментов L4-L5 с последующей перерезкой задних корешков на уров-

не Ь4-Т5 (группы 1, 2) (табт 1), концы корешков не сшивали Рану зашивали послойно У контрольных животных (группы 11, 12) проводили левосюрон-июю ламинэктомию, но без последующей перерезки задних корешков У части животных друтих групп после послойного рассечения кожи и мышц на уровне середины бедра выделяли левый седалищный нерв и в одном случае его перерезали, концы нерва не сшивали (группы 3, 4), в друюм — накладывали двойную лигатур) хирургической шелковой нитью 3/0 (группы 5, 6) Рану зашивали послойно В части экспериментов в гех же условиях была осуществлена комбинация центральной аксоюмии с перерезкой (группы 7, 8) или лшированием (группы 9, 10) седалищного нерва

Таблица !

Количество животных и вид травмы в экспериментальных группах

Экспериментальные условия Срок после гравмы (сутки) № группы Количество животных

Центральная аксотомия 30 1 5

60 2 6

Перерезка седалищного нерва 30 3 7

60 4 7

Цитирование седалищного нерва 30 5 8

60 6 9

Центральная аксоюмия + перерезка седалищного нерва 30 7 5

60 8 5

Центральная аксоюмия + лигирование седалищного нерва 30 9 6

60 10 9

Контроль центральной аксотомии 30 11 5

60 12 5

Ингактные животные 13 7

На 30-е и 60-е сутки после ламинэмомии у опытных, а также у ин)акт-ных крыс выделяли чувс!вительные узлы спинномозговых нервов L5 с обеих сторон Материал фиксировали в 10%-ом нейтральном формалине, обезвоживали и заливали в иарафин Каждый 5-й серийный срез толщиной 7 мкм окрашивали метилеиовым синим, подсчитывали количество нейронов с видимыми ядрышками (Henken et al, 1990) Иммуногистохимические исследования проводили непрямым сгрептавидин-биотиновым методом с использованием LSAB-kit (DAKO) Тяжелый компонент нейрофиламентного триплета белок NF200 выявляли при помощи соответствующих антител (Sigma) в разведении 1:100. Часть материала исследовали с использованием ангител против каспазы-9 (Sigma) Часть срезов использовали для выявления 1В4+-нейронов при помощи иммуногистохимической реакции с маркером малых непептидергических нейронов изолектином В4 (IB4) (2 мкг/мл), конъюгированным с пероксидазой хре-

на (Sigma) Псе подсчсчы провелити на оптическом микроскопе МБИ-6 при увеличении хбОО со встроенной окулярной сеткой Результаты подсчетов в материале от животных всех групп обрабатывали по t-критерию Стьюдепта

Концентрацию Cu(II) и N0 в чувствительных узлах спинномозговых нервов L4-L5 после травмы седалищного нерва регистрировали методом ЭПР У животных опытной группы в асептических условиях после послойного рассечения кожи и мышц на уровне середины бедра выделяли и пересекали левый и правый седалищные нервы, концы нервов не сшивали Рану зашивали послойно Через 24 часа выделяли и забирали чувствительные узлы и седалищные нервы с обеих сторон

Метод образования парамагнитного комплекса, регистрируемого при помощи ЭПР, основан на взаимодействии Cu(II) и N0 с ловушкой диэтилдитио-карбаматом (ДЭТК) Для определения содержания CufII) и N0 в биологических образцах нами апробированы различные меюдики формирования комплекса Си(П)ДЭТК2 и 1Ч0-Ре(Н)ДЭТК2 с целью повышения чувствительности метода определения содержания Cu(II) и N0 (Цапин А И и др , 1994, Ванин, 1999, Sheu et al , 2000) Наиболее чувствительным оказался метод определения уровня Cu(II) и N0 с экстракцией комплекса Си(Н)ДЭТК2 и NO-Fe(Iiyi3TK2 при помощи этилацетата (Zhang et al 2001) В этой части работы в качестве объекта сравнения использовали кору головного мозга крысы, в которой детально исследовано содержание N0 и установлена высокая концентрация этой ключевой молекулы (Sjakste, 2002)

Спиновые ловушки формировали за 30 минут до заббра материала Дтя этого животным вводили внутрибрюшинно 400 мг/кг ДЭГК и подкожно цитрат железа (40 mi/кг сульфата железа + 200 мг/ki цитра i а натрия) ДЭТК, цифат железа и NO формируют стабильный, детектируемый при помощи ЭПР комплекс (NO-Fe(IT)flr3I К2) (Ванин, 1999) Одновременно происходи! связывание Cu(II) и ДЭТК с формированием комп ткса Си(П)ДЭГК2, также детектируемого при помощи ЭПР Через 30 мин\т пос ie введения препаратов забирали ч>в-ствительные \злы спинномозговых нервов L4 и L5, седалищные нервы и кор\ готовного моз!а, которые помещали в полиэтиленовые трубки с внутренним диаметром 5 мм и сразу замораживали в жидком азоте (Ванин, 1999) Перед измерением спектров ЭПР образец помещали в жидкий азот Спектры ЭПР регистрировали при температуре 77К на Э1 IP спектрометре Bruker ESP 300

В другой экспериментальной группе использовали комбинированный метод приготовления образцов нервной ткани с экстракцией комплексов Си(П)ДЭТК2 и КО-Ре(11)ДЭТК2 при помощи этилацетата Спустя 30 минут после введения препаратов животных декапитировали, быстро извлекали чувствительные узлы спинномозговых нервов L4 и L5, седалищные нервы и кору головного мозга, взвешивали, добавляли предварительно насыщенный водой (для увеличения скорости диффузии гидрофобных комплексов Си(Н)ДЭТК2 и

Кт0-РеШ)ДЭТК2 в органическую фаз\) этитацетат в соотношении I 1 по объему и гомогенизировали Потученную смесь пен грифу 1ировали при 2000§ в течение 8 минут Органическую фазу с растворенными в ней комплексами отделяли от водной и помещали в кварцевые трубки с внутренним диаметром 2 мм Спектры ЭПР регистрировали при комнатной температуре Концен¡рацию комплексов Си(Н)ДЭТК2 и ЫО-Ре(П)ДЭТК2 определяли при помощи двойного интегрирования спектров и сравнения с эталонной концентрационной зависимостью Результаты обрабатывали по 1:-критерию Стьюдета

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Количественные и фенотипические характеристики нейронов чувствительного узла спинномозгового нерва Ь5 после центральной аксотомии, травмы периферического нерва и их комбинации

На 30-е с>1ки после центральной аксотомии (группа 1), перерезки (группа 3) или лигирования (группа 5) седалищного нерва общее количество нейронов в чувствительном узле спинномозгового нерва Ь5 не изменятся После центральной аксотомии в комбинации с перерезкой евдалшщюю нерва (группа 7) или его лигированисм (группа 9) общее количество нейронов уменьшается соответственно на 26,2% (Р^0,05) и 10,1% (Р<0,05) (рис 1)

2000-

1500-

1000-

—А— Центральная аксотомия —о— Пигирование нерва —п— Перерезка нерва

—V— Центральная аксотомия + лигироваиие нерва —О— Центральная аксотомия + перерезка нерва

Интактные животные

Рис. 1. Общее количество нейронов в чувствительных узлах спинномозгового нерва Ь5 на разных сроках после травмы их центрального и периферического отростков По оси абсцисс — срок после травмы в сутках, по оси ординат — количество нейронов в узле Пунктирной линией указано общее количество нейронов в чувствительном узле интактных животных Здесь и на рисунках 2-8 (*) — Р<0,05 при сравнении значений у животных опытной и интактной групп

К 60-м суткам посгтравмагическая гибель нейронов выявлена во всех экспериментальных группах Увеличение численности гибнущих нейронов прослежено в следующем ряду центральная аксотомия (8,8%, Р<0,05) -> лиги-рование седалищного нерва (13,0%, Р<0,05) —» перерезка седалищного нерва (29,3%, Р<0,05) —» центральная аксотомия в комбинации с лшированием седалищного нерва (30,4%, Р<0,05) —> центральная аксотомия в комбинации с перерезкой седалищного нерва (56,8%, Р<0,05)

Если сдвиги по общему количеству нейронов заре1 истриропаны нами только к 60-м суткам после центральной аксотомии (группа 2), то достоверные различия в количестве нейронов, принадлежащих конкретным субпопуляциям, по сравнению с интактными животными, зафиксированы как на 30-е (группа 1), так и на 60-е сутки после травмы (рис 2) При этом реакции нейронов исследованных субпопуляний различаются Так, уменьшение количества ОТ200 -нейронов на 30-е сутки после центральной аксотомии более выражено по сравнению с 1В4+-нейронами и составляет 50,0% (Р<0,05)

животные

Рис.2. Влияние центральной аксотомии на количество ОТ200+- и 1В4 -нейронов Здесь и на последующих рисунках 3-7 свеыые сюлбики — ЫР200+-нейроны, темные — 1В4+-нейроны По оси ординат — количество нейронов, по оси абсцисс — время после травмы в сутках

На 60-е сутки после травмы сохраняется снижение количесгва №200 -нейронов Не выявлено достоверного различия в количестве 1В4+-нейронов по отношению к интактному чувствительному узлу спинномозгового нерва. Количество ОТ200 - и 1В4 -нейронов у контрольных животных (ламинэктомия без перерезки задних корешков), достоверно не отличалось от интактных.

После перерезки седалищного нерва уменьшение количества нейронов в чувствительном узле Ь5 регистрируется на 60-е сутки и составляет 29,3%

(Р<0,05) Тем не менее, уже на 30-е еуи<и после перерезки нерва (группа 3) зафиксирована достоверная разница в численности нейронов конкретных субпопуляций по сравнению с интактными животными (рис 3)' количество №200+-и ТВ4+-нейронов уменьшается на 44,4% (Р<0,05) и 53,6% (Р<0,05), соответственно На 60-е сутки после перерезки нерва (группа4) тенденция к уменьшению численности 1В4+-нейронов сохраняется, а количество КР200+-нейронов восстанавливается до исходного уровня

1200-

800-

Интактные 30 60

животные

Рис. 3. Влияние перерезки седалищного нерва на количество ЫР200+- и 1В4 -нейронов. См подпись к рис 2

После лширования седалищного нерва, как и в группах живошых с цен-фальцой аксоюмисй и перерезкой седалищного нерва, общее количество нейронов уменьшае1ся точько на 60-е сутки (группа 6), при этом количество выживающих нейронов на 13,0% (Р<0,05) меньше, по сравнению с инткшыми животными В отличие от группы с перерезкой седалищного нерва, количество ОТ200+-нсйропов к 60-м суткам после травмы не тотько не восстанавливается (рис 4), по и продо гжает зиачитетьно уменьшаться ее ш на 30-е сутки (группа 5) уменьшение составляет 23,8% (Р<0,05), то на 60-е сутки — 75,5% (Р<0,05) Существенное снижение количества 1В4 -нейронов зарегистрировано уже на 30-е сутки — 64,8% (Р<0,05), а к 60-м суткам разница при сравнении с соответствующим показателем у интактных животных составляет 66,0%о (Р<0,05)

800-

400

Интактные животные

Рис. 4. Влияние лигирования седалищного нерва на количество нейронов конкретных субпопуляций См подпись к рис 2

После комбинированной операции (цешральная аксотомия + перерезка седалищного нерва) общее количество нейронов в узле Ь5 у опытных животных было меньше, чем у интактных на 30-е (группа 7) и 60-е (группа 8) сутки, соответственно, на 26,2% (Р<0,05) и 56,8% (Р<0,05) Отмечено значительное уменьшение количества нейронов, принадлежащих конкретным субпопуляциям (рис 4) Численность №200+-нейронов уменьшается на 30-е и 60-е сутки, соответственно, на 47,5% и 62,4% (Р<0,05) На 30-е сутки количес!во 1В4+-нейронов

на 79,3% (Р^0,05) меньше по отношению к интактным животным, а на 60-е — на 79,2% (Р<0,05)

1200-

800-

400-

* *

Интактные животные

Рис. 5. Количество №200+- и 1В4+-нейронов после комбинированной операции (центральная аксотомия + перерезка седалищного нерва) См подпись к рис. 2.

К 30-м (группа 9) и 60-м (фуппаЮ) с>ткам после комбинированной травмы (центральная аксотомия + лигирование седалищного нерва) общее количество нейронов в узле снижается соответственно на 10,1% и 30,4% (Р<0,05)

+ +

К 30-м суткам зпачи1ельно уменьшается количество №200 - и 1В4 -нейронов, соответственно на 69,7% и 78,1% (Р<0,05) Этот уровень сохраняется к 60-м суткам после травмы

животные

Рис. 6. Количество №200и 1В4+-нейронов после комбинированной операции (центральная аксотомия + лигирование седалищного нерва) См подпись к рис 2

Полученные данные указывают на то, что поведение нейронов, принадлежащих конкретным субпопуляциям, различайся в ответ на травму их центральных или периферических отростков После центральной аксотомии в большей степени снижается количеаво №200 -нейронов, что может быть связано как с их гибелью, так и с уменьшением экспрессии белка №200 в выживающих нейронах Другая картина наблюдается в отношении 1В4 -нейронов Их количество уменьшается к 30-м суткам после центральной аксотомии, по восстанавливается к 60-м Это наблюдение может свидетельствовать о том, что зарегистрированное нами изменение количества ГВ4+-нейронов скорее связано не с их гибелью, а с изменением уровня экспрессии признака, маркируемого ГВ4 В наших экспериментах при травме периферических отростков чувствительных нейронов зарегистрирована более выраженная гибель 1В4 -нейронов, по сравнению с №200 -нейронами Эти данные согласуются с резулыатами других исследований (Coggeshall й а1, 1997; Тепс1гир е1 а1, 2000; Рагинов, Че-лышев, 2002) о меньшей устойчивости к травме именно малых нейронов, включающих субпопуляцию 1В4+-нейронов Вместе с тем, нейропротекторное действие некоторых фармакологических стимуляторов регенерации периферического нерва оказывается более эффективным в отношении субпопуляции

1В4+-нсйроиов (Ратинов, Челышев, 2002) Одним из предположений, объясняющих более выраженную посттравматическую гибель 1В4+-нейронов при повреждении периферических оiростков может служить представление о нейро-протекгорном действии одною и того же нейрофофичсского фактора, коюрый поступает из ткани-мишени в перикарион нейронов как по центральным, так и по периферическим отросткам Кандидаюм на роль подобного фактора может служить глиальный нейротрофический фактор (GDNF), который поддерживает выживание нечувствительных к нейротрофинам малых нейронов, связывающихся с 1В4 (Petruska et al , 2000), и стимулирует регенерацию центральных отростков части нейронов (Ramer et al , 2000) 1аким образом, для поддержания численности субпопуляпии №200+-нейропов важным факюром является целостность их центральных отростков и, вероятно, поступление в их перикарионы нейрофофических факюров из ЦНС Численность субнопуляции IB4 -нейронов в значительной мере определяется наличием связи с клетками-мишенями, расположенными на периферии, и возможностью транспорта нейрофофических факторов, преимущественно из шванновских клеток (Rich et al , 1989, Lckan et al., 1997)

В чувствительном узле спинномозгового нерва L5 после травмы седалищного нерва (перерезка, лигирование), а также центральной аксотомии в комбинации с перерезкой эюго нерва отмечено присутствие единичных NF200+-bojiokoh, расположенных в непосредственной близости от перикарио-нов NF200+- и NF2.00 -нейронов (шбл 2) После ценфальной аксотомии в комбинации с лигированием седалищного нерва количество №200+-волокон, окружающих NF200 -нейроны, на 60-е сутки в 6,6 раза больше (Р<0,05), чем в группе с лигированием нерва, и в 2 раза больше (Р<0,05) количества таковых, окружающих NF200 -нейроны

По-видимому, в случае комбинации ценфальной аксотомии и чш ирова-ния седалищного нерва происходит активное ветвление волокон NF200 -нейронов в результате усиления экспрессии в этих нейронах нейротро-фических факторов и пос юдующей аутокринной стимуляции формирования и ветвления собственных отростков Учитывая принадлежность NF200 -нейронов к попутяциям средних и больших нейронов, можно полагать значительное увеличение экспрессии в них глиального нейротрофического фактора (GDNF) и нсйротрофина-3 (NT-3) при центральной аксогомии в комбинации с ли1ирова-нисм седалищного нерва Возможно, при комбинации центральной аксотомии с лигированием нерва содержание нейротрофических факторов в перикарионе NF200 -нейронов и их отростках значительно выше, чем в условиях комбинации центральной аксотомии с перерезкой нерва Другой механизм, стимулирующий ветвление NF200+-bo;iokoh в чувствительных узлах, может быть связан с активной выработкой нейротрофических факторов в клетках-сателлитах, ко-

торые непосредственно контактируюi с волокнами и, как нейроны, способны вырабатывать нейротрофические факюры (Zhou et al, 1999)

Таблица 2

Количество NF200 - и NF200 -нейронов чувствительного узла L5 крысы, окруженных NF200 -волокнами, на сюроне операции после центральной аксогомии, травмы седалищного нерва и их комбинации

Экспериментальные условия Срок после травмы (сутки) №200+-волокна, окружающие

NF200+-нейроны NF200 -нейроны

Центральная аксоюмия 30 - -

60 - -

11еререзка седалишног о нерва 30 2,0±0,11 -

60 1,3±0,33 -

Лигирование седалищного нерва 30 -

60 5,0±0,03 2,0±0,41

I (ентральная аксотомия + перерезка седалищного нерва 30 4,5±0,50 1,5±0,50

60 2,0±1,33 2,0±0,57

Центральная аксотомия + лигирование седалищного нерва 30 22,5±1,50* 7,0±1,01

60 33,0±2,28* 16,3±2,03

Контрольные животные 30 - -

60 - -

Интактные животные 30 - -

(*) — Р<0,05 при сравнении значений количеава NF200+- и NF200 -нейронов, окруженных NF200 -волокнами

Экспрессия каспазы-9 в нейронах чувствительного узла спинномозгового нерва Ь5

По локализации каспазы-9 нейроны чувствительного узла спинномозговою нерва Ь5 интактного животного могут быть подразделены на три группы В первой — каспаза-9 определялась исключительно в ядре Количество этих нейронов составляло 18% от общего количества каспаза-9 -нейронов В нейронах второй группы ферменты был выявлен только в цитоплазме (16,7%) Подавляющее большинство нейронов (65,2%) содержало каспазу-9 как в ядре, так и в ци гоплазме

К 30-м суткам после центральной аксотомии количес!во нейронов, имеющих ядерную локализацию каспазы-9, увеличивалось на 50,5% (Р<0,05). К этому сроку на 29,2% (Р<0,05), по сравнению с интакгными животными, воз-

растает количество нейронов, экспрессирующих касиазу-9 как в ядре, так и в цитоплазме (рис 7)

2500 200015001000'

Интактные животные

Центральная аксотомия 30 суток

Рис. 7. Количество каспаза-9 -нейронов в чувствительном узле спинномозговою нерва Ь5 после цешральной аксотомии Белые сюлбики — нейроны с локализацией каспаза-9 -нейронов в ядре и цитоплазме; серые — в ядре, черные — в цитоплазме По оси ординат— количество нейронов

У интактных животных 33% ТВ4 -нейронов были каспа-за-9-иммуноположительпыми Количество 1В4 нейронов, дающих положительную реакцию с антителами против каспазы-9, составило 50%. К 30-м суткам после цешральной аксотомии количеово 1В4 -нейронов, имеющих положительную реакцию с антителами против каспазы-9, увеличилось на 62,2% (Р<'0,05), а количес!во каспаза-9+-нейропов, не связывающихся с 1В4, — на 47,1% (Р<0,05)

Каспаза-9 — ключевая протеаза в реализации цитохром с-зависимого апоптоза Установлено, что она локализована в митохондриях нейронов различных шпов и кардиомиоцитов, т е в клс!очных типах с наиболее надежным механизмом секвестрирования данною фермента (Кга^\¥<;к1 а1, 1999) В подобных необновляющихся постмитотичсских клетках прокаспаза-9 должна быть надежно «спрятана» в закрытом компартменте для снижения вероятности ее спонтанного выхода в цитозоль и запуска апоптоза Вместе с тем, апоптоз-индуцирующие сигналы в нейронах активируют транслокацию каспазы-9 из митохондрий в ядро (Кта^шэкл е1 а1, 1999) Возможно, именно поэтому в наших экспериментах через 30 суток после центральной аксоюмии количество чувствительных нейронов с локализацией фермента в ядре, а также в ядре и цитоплазме, достоверно возрастает С другой стороны, нами не зарегистрировано уменьшение общего количества нейронов через 30 и 60 суток после центральной аксотомии Эти данные с учетом динамики экспрессии каспазы-9 позволя-

ют высказать предположение о том, чга увеличение уровня каспазы-9 не может расцениваться как признак необратимого вс!уптения кле!ки в апоптоз, поскольку не зарегистрировано уменьшение общею количества нейронов к этому сроку Это представление согласуется с данными Cheng, Zochodne (2003).

Рис. 8. Количество каспаза-9+-нейронов в чувствительном узте спинномозгового нерва Ь5 к 30-м суткам после центральной аксотомии Темные столбики — каспаза-9 -нейроны с локализацией как в ядре, так в ядре и цитоплазме, светлые — каспаза-9 -нейроны По оси ординат — количество нейронов 1 — ин-такгные животные, 2 — центральная аксотомия

Анализ уровня Си-содержащих соединений и NО в чувствительных узлах 1,4 Ь5 и седалищном нерве

Приготовление образцов с использованием экстракции згиланетатом дает возможность надежно различать спектры ЭПР Си-содержащих комптексов и комплекса ЖЗ-РеЦВДЭТКг и повысить точность опреде гения концентрации Си-содержащих соединений в образцах нервной ткани Наиболее подходящим способом формирования детектируемого при помощи ЭПР парамагнитного комплекса МО-Ре(П)ДЭТК2 для определения количественного содержания N0 в чувствительных узлах крысы является прямой количественный метод

Спектр ЭПР комплекса Си(П)ДЭТК2 состоит из четырех линий, соответствующих магнитной сверхтонкой структуре изотопов 63Си и 65Си с незначительно отличающимися константами сверхтонкого взаимодействия, спектр ЭПР комплекса ГчгО-Ре(П)ДЭТК2 — триплет с четко различимой сверхтонкой структурой с положением центральной линии g=2 035 и расщеплением между сверхтонкими компонентами около 17 Гс Было замечено, что форма сигнала

ЭПР практически не изменяется от спектра к спектру и меняется лишь соотношение ишепсивностей между сигналами от Си(П)ДЭТК2 и ГТО-Ре(П)ДЭТК2

В качеаве контроля нами исследован спектр ЭПР коры юловного мозга (рис 9) Нужно отметить, что сигнал комплекса Ж)-Ре(ЩДЭТК2 практически не перекрывался си1 налом Ж)-Ре(11)ДЭТК2, что позволяет производить точные измерения интенсивности ЭПР сигналов Ж)-Рс(Н)ДЭТ1<2 в этих условиях Интенсивность сигнала, соотве!ствующего комплексу МО-Ре(П)ДЭТК2, зиачи-тетьно вырастала по сравнению с интенсивностью, зарегистрированной в ходе измерений при температуре 77К Применение данного модифицированного метода помо1Ло разделить спектры ЭПР от Си-содержащих комплексов и комплекса ЫО-Рс(П)ДЭТК2, и, таким образом, значительно повысить точность определения концентрации Си-содержащих соединений в образцах нервной ткани

Н, Гс

Рис. 9. Типичный спектр ЭПР в образце из коры юловною моз1а крысы,

т-зоок

Комбинированный меюд подготовки образцов ткани с эксфакцией этил-ацетаюм позволил более точно определить концентрацию комплекса Си(П)ДЭТК2 в чувешительных узлах спинномозювых нервов Ь4-Ь5, седалищном нерве без привлечения процедуры вычитания спектров (рис 10, табл 3)

Си(П)ДЭТК

Интактный нерв

г I п I а г\ | п VI м .

Перерезка 24 часа

3300

3400 3500

Н, Гс

3600

Рис. 10. Спектр ЭПР в образцах седалищного нерва крысы Стрелкой указаны пики, соответствующие сигналу о г комплекса (Си(П)ДЭТК2)

Таблица 3

Уровень Си-содержащих соединений (моль/л) в чувствительных узлах спинномозговых нервов Ь4-Ь5 и седалищном нерве через 24 часа после ею перерезки

Интактный материал Перерезка нерва

Нерв (проксимальный отрезок) (20,1 ±0,2) 10 7 (47,9±5,5) 10"7*

Нерв (дисгальный отрезок) (29,6±3,0) Ю-7

Чувствительные узлы Ь4-Ь5 (55,7±2,4) Ю-7 (48,3+11,3) 10"7

* — Р<"0 05 при сравнении контроля и опыта

I В образцах чувствительных узлов спинномозговых нервов Ь4-Ь5 интакт-

ных животных концентрация комплекса ЫО-Ре(П)ДЭТК2 составляет 7,3 10 8

моль/л, а у животных спустя 3 суток после перерезки седалищного нерва —

7,1 10 8 моль/л В седалищных нервах не обнаружено спектров, типичных для

комплекса Ж)-Ре(П)ДЭТК2, ни у интактных животных, ни у животных через 3

суток после перерезки нерва

Нарушение баланса между про- и антиоксидантной системой в ткани

приводит к окислительному стрессу в результате окислительной модификации

биомолекул (Подколзин и др , 2000, О]0гфеУ1С, 2004) Активные формы кислорода нарушают функцию митохондрий и активирую! каспазы (Коуасэ е1 а1 , 2002, Blssonnette е1 а1, 2004) Эти изменения сопровождаются гибелью нейронов, что предотвращается введением антиоксидантов Защитой от нейродеге-нервативных изменений служит антиоксидантная система, в состав которой входит ряд функционально важных ферментов, в юм числе См/Хп-супероксиддисмутаза Уветичение концентрации Си-содержаших соединений в центральном отрезке седалищного нерва спустя 24 часа после травмы может свидетельствовать об их учааии в реакциях антиоксидантной защиты структур нерва в 01вет на повреждение

ВЫВОДЫ

1. Выражснноаь посттравматичсской гибели нейронов чувствительною узла спинномозговою нерва Ь5 крысы нарастает в ряду лширование нерва —> перерезка нерва —> центральная аксотомия + лигирование нерва —> центральная ак-сотомия + перерезка нерва

2 К 30-м суткам после центральной аксотомии в чувствительном узле количество №200 -нейронов уменьшается на 50,0% (Р<0,05), а 1В4 -нейронов — на 17,7% (Р<0,05) Общее количество нейронов в ганглии при этом не меняется

3 К 60-м су1кам после центральной аксотомии в чувствительном узле количество ОТ200+-нейронов уменьшается на 60,6% (Р<0,05), а количество ТВ4+-нейронов не отличается от уровня у интактных животных

4 К 30-м суткам после перерезки седалищного нерва в чувствительном узле

+ +

количество №200 -нейронов уменьшается на 44,4% (Р<0,05), а 1В4 -нейронов — на 53,6% (Р--0,05)

5 К 60-м с\!кам посте перерезки седалищного нерва в чувствительном узле количесшо 1В4 -нейронов уменьшается на 60,5% (Р<"0,05), при этом численность субпопуляции ЫР200 -нейронов достоверно не отличается от аналогичного показателя у итактных животных

6 Лигирование седалищного нерва вызывает уменьшение количсс!ва ЫР200 -и 1В4 -нейронов в чувствительном узле

• к 30-м суткам их количество уменьшается еоо1ветственно на 23,8% (Р<0,05) и 64,8% (Р<0,05),

• к 60-м суткам их количество уменьшается ответственно на 75,5% и 65,9% (Р<0,05)

7 Центральная аксогомия в комбинации с перерезкой седалищного нерва вызывает уменьшение количества ЫР200+- и ТВ4+-нейронов в чувствительном узле.

• к 30-м суткам их количество уменьшается соответственно на 47,5% и 79,3% (Р<0,05),

• к 60-м суткам их количество уменьшается соответственно на 62,4% и 79,2% (Р<0,05)

8 Центральная аксотомия в комбинации с лигированием седалищного нерва приводит к значительному снижению количества NF200 - и 1В4+-нейронов в чувствительном узле

• к 30-м су1кам их количество уменьшается ответственно на 69,7% и 78,1% (Р<0,05),

• к 60-м суткам их количество уменьшается соответственно на 66,3% и 76,2% (Р<0,05)

9 К 30-м суткам после ценфальной аксотомии в чувствительном узле количество нейронов с осадком конечного продукта иммуногистохимической реакции на касназу-9 в ядре возрастает на 50,5% (Р^0,05) при сравнении с ишакгными животными При этом на 29,2% (Р-"0,05) увеличивается количество нейронов с осадком конечного продукта иммуногистохимической реакции па касиазу-9 в ядре и циюплазме

10 К 30-м суткам после центральной аксотомии в чувствительном узле количество IB4 -нейронов, экспрессируюших каспазу-9, увеличивается на 62,2% (Р<0,05) Увеличение экспрессии каспазы-9 в IB4 -нейронов не является однозначным свидетельством вступления этих нейронов в апошоз.

11 В интакгном седалищном нерве концентрация комплекса Си(П)ДЭТК2 составляет (20,1±0,2} 10 7 моль/л Через 24 часа после перерезки нерва концентрация комплекса Си(П)ДЭ1К2 в периферическом отрезке составляет

(29,6+3,0) 10 моль/л, а в центральном отрезке увеличивается на 138% (Р-^0,05) и составляет (47,9+5,5) 10 1 моль/1

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Гусева Д С Влияние центральной ити периферической аксотомии на обь-ем пон\ ляций 1В4+- и ЫР200+-нейронов //Международный молодежный научный Форум «Ломоносов-2005» Тез докт 12-15 апреля 2005 i -М , 2005 -С 505

2 Гусева Д С , Рагинов И С , Чс тышев IO А Активация каспазы-9 в нейронах спитталытых ганглиев крысы после центральной аксотомии //Сборник научных трудов VII Всероссийской конференции по патологии клетки -М . 2005 -С 46

3 Агапов А В , Гусева Д С , Зверев Д Г , Силкип Н И , Штырлин В Г , Челы-шев Ю А ЭПР парамагнитных коми тексов NO-Fc(II^ETK2 и СиОЦДЯТКг в структурах нервной системы //Юбилейная научная конференция физического факультета Тез докл 10 ноября 2004 г -Казань, 2004 -С 59

4 Гусева Д С Нейроны спинальных ганглиев крысы после центральной аксотомии связывание с IB4 и экспрессия NF200 //V общероссийский съезд анатомов, гистологов и эмбриологов Тез докл 17-18 сентября 2004 -Казань, 2004 -С 30

5 Чс 1ышсв ЮЛ, Рагинов И С, Гусева ДС Пос! фавмашческие реакции чувствитстьных нейронов //Бабухинские чтения в Op ie Тездокт 3-5 июня 2004 -Ореч -С 52-53

6 Гусева Д С Фенотипическис маркеры в нейронах спинальных ганглиев крысы после центральной аксотомии //«Молодые у ченыс в медицине»' I ез докл IX Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 190-летию Казанского государственного метипинского университета 20-21 апреля 2004 i -Казань, 2004 -С 124-125

7 Челышев Ю А , Рагинов И С , Гусева Д С , Масгутов Р Ф Гибель чувстви-icibHbix нейронов при периферической и центральной аксотомии //«Фундаментальные и прикладные проблемы гистологии Гиао1енез и регенерация тканей» Тез докл научной конференции 7-8 апреля 2004 г -Санкт-Петербург, 2004-С 16-17

8 Челышев 10 А , Ра1инов И С, Гусева ДС, Мастуюв РФ Выживание и фенотипическая характеристика аксотсшированных нейронов спинальных ганглиев //Морфология -2004 -Т 125 -№3 -С 45-49

9 Гусева ДС, Рагинов ИС, Масгутов РФ, Чечышев ЮА Реакция №200+-нсйропов в ответ на травму центрального и периферическою огростков //Международная научная конференция, посвященная 100-летию со дня рождения академика П Я 1 ерке Тез докл -Минск, Белоруссия, 2004 С 38-40

10 Шаймардапова Г Ф , Гусева Д С , Масгутов Р Ф , Козлова М В , Ильичев А А, Петровская Л Г Посттравматическое выживание чувствительных нейронов //«Реактивность и пластичность гистологических структур в норма тьных, экспериментальных и патологических усювиях» Тез токл Всероссийской научной конференции 18-20 ноября 2003 т -Морфология -Оренбур! -2003 -С 81

11 Гусева Д С , Зверев ДГ О возможности исследования содержания оксида азота в спинальных ганглиях крысы меюдом ЭПР //«Актуальные проблемы магнитною резонанса и его приложений»/труды VII Российской молодежной научной шко 1ы 11-13 ноября 2003 г -Казань -2003 -С 146-151

12 Guseva D S Phenotypic cliaiactei i->tic of the dorsal root ganglion neurons after dorsal rhizotomy //4th Forum of European Neuroscience, Federation of European Neuroscience Societies (FENS) Abstracts July 10-14 2004 -Lisbon, Portugal -2004 -P 473

13 Guseva D S The posttraumatic survival of L4 and L5 DRG neurons after dorsal rhizotomy //83th Annual Meeting Deutsche Physiologischc Gesellschaft Abstracts 14 ] 7th March 2004 -Leipzig, Germany -2004 -P S82

Гусева Дарья Сергеевна (Россия) «Посттравматическое выживание нейронов чувствительного узла спинномозгового нерва крысы»

В работе проведена оценка количес!ва нейронов различных субпопуляций в чувствительном узле спинномозговою нерва L5 крысы после центральной аксогомии и/или травмы их периферических отростков, а также уровня Cu-содсржащих соединений в чувствительных у ¡лах L4-L5 и седа-тищном нерве при его перерезке Получены новые данные о различной динамике численности нейронов конкретных субпопуляций в ходе регенерации после травмы центральных и периферических отростков Впервые показано, что концентрация Cu(II) увеличивается в центральном отрезке седалищного нерва после его перерезки Данные работы значимы для понимания механизмов пластичности периферических нейронов, зависимости их выживания и фенотипа от действия нейротрофических сиг налов, поступающих в перикарион из ЦНС и из иннервируемой ткани-мишени Полученные данные о динамике посттравматической гибели нейронов чувствитечьного узла позволяют оценить перспективы полноты восстановления сенсорной функции периферического нерва в клинической практике Данные об уровне Cu-содержащич соединений в периферическом нерве имеют значение для анализа молекулярных и клеточных механизмов антиоксидантной защиты клеток

Daria S. Guseva (Russia) «The posttraumatic survival of Dorsal Root Ganglion neurons in the rat»

The evaluation of different subpopulations neurons number of L5 Dorsal Root Ganglion (DRG) after central axotomy and/or peripheral processes injury in adult rat has been studied The level of Cu-contained compounds in the L4 L5 DRG and in the sciatic nerve after its transection was estimated The new data denote different dynamics of number of definite subpopulation neurons during the regeneration after their central and peripheral processes injury For the first time the increase of Cu(IT) concentration in the central processes of sciatic nerve after transection has been shown Obtained data are important for understanding of mechanisms of peripheral neurons plasticity, their survival and phenotype dependences on the neurotrophic signals influence which arrive to the perikaryon from the CNS and from innervated target tissues Obtained results allow evaluating of the perspective of fullness regeneration of the sensory function of peripheral nerve in clinical practice and are important for analysis of the molecular and cellular mechanisms of the antioxidant cells protection

'-91 5

РНБ Русский фонд

2006А

5446

11одписано в печать 28 04 05 г Форм буч 60x 84 1'6 Печ I 1 Тираж 100 ж( Заказ 511 Отпечатано с ,'ошвою оригинал-макеаа Миншшюграфия ООО НПО «Обра!оваге1ьные 1ехноло1ии» 420087, Камнь, ул Л Стрелков, 3- 46 Тел 94-73-68

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гусева, Дарья Сергеевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Классификация и маркеры нейронов чувствительного узла спинномозгового нерва.

1.2. Реакции чувствительных нейронов на повреждение их центральных и периферических отростков.

1.2.1. Посттравматическое выживание чувствительных нейронов и регенерация их отростков.

1.2.2. Экспрессия нейротрофических факторов в чувствительных нейронах в условиях дегенерации и последующей регенерации.

1.3. Апоптоз в нервной системе.

1.4. Роль антиоксидантной системы в посттравматической ней-ропротекции и регенерации периферического нерва.

1.4.1. Активные формы кислорода.

1.4.2. Участие свободных радикалов в окислительном стрессе.

1.4.3. Ферменты, участвующие в антиоксидантной защите клетки.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Экспериментальные группы.

2.1.1. Центральная аксотомия и травма периферического отростка нейронов чувствительных узлов спинномозговых нервов L4-L5.

2.1.2. Морфометрический и иммуногистохимический методы.

2.2. Определение концентрации Cu(II) и NO в чувствительных узлах спинномозговых нервов L4-L5 и седалищном нерве методом ЭПР.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Характеристика нейронов чувствительного узла спинномозгового нерва L5 интактной крысы.

3.2. Количественные и фенотипические характеристики субпопуляций нейронов чувствительного узла L5 после центральной аксотомии, травмы периферического нерва и их комбинации.

3.3. Экспрессия каспазы-9 в нейронах чувствительного узла спинномозгового нерва L5.

3.4. Анализ уровня Cu-содержащих соединейий и NO в чувствительных узлах спинномозговых нервов L4-L5 и седалищном нерве.

ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Посттравматическое выживание нейронов чувствительного узла спинномозгового нерва крысы"

Актуальность. Успех регенерации периферического нерва в значительной мере определяется способностью нейронов выживать после травмы. Феномен посттравматической дегенерации и гибели чувствительных нейронов детально описан в работах с повреждением их периферического отростка (Cajal, 1928; McKay et al., 2002). Имеются единичные работы, свидетельствующие о том, что фенотип регенерирующих чувствительных нейронов существенно различается при травме центрального или периферического отростков (Broude et al., 1997; Smith, Skene, 1997; Gavazzi et al., 2000). Данных о поведении чувствительных нейронов при нарушении целостности их центральных отростков явно недостаточно. Сравнительные исследования посттравматической гибели нейронов при повреждении центрального или периферического отростков практически отсутствуют.

При анализе поведения нейронов следует учитывать характер травмы. Становится очевидным, что чувствительные нейроны по-разному реагируют на перерезку и лигирование периферического отростка. .В первом случае регенерация отростка разрешена, а при лигировании нерва она запрещена, что сказывается на способности этого нейрона к выживанию (Челышев, Рагинов, 2002, 2003). При центральной аксотомии регенерирующие аксоны псевдоуниполярных нейронов не могут проникнуть в спинной мозг через барьер в зоне входа задних корешков, образованный глиальными клетками,1 и в результате действия здесь ингибиторов роста аксонов (Fournier et al., 2001; Grimpe, 2005). Для преодоления этого барьера представляется принципиально важным исследование молекулярных и клеточных механизмов, контролирующих регенерацию центральных отростков чувствительных нейронов.

Количество псевдоуниполярных нейронов, вступающих в посттравматический апоптоз после повреждения периферического отростка, зависит от их принадлежности к конкретной субпопуляции (Рагинов, Челышев, 2003). Перерезка седалищного нерва у половозрелых крыс вызывает гибель части нейронов в поясничных чувствительных узлах (McKay et al., 2002; Рагинов, Челышев,

2003). При этом раньше и в наибольшем количестве гибнут малые нейроны с темным перикарионом и безмиелиновым отростком (В-клетки) и в меньшей мере большие нейроны со светлым перикарионом и миелинизированным отростком (А-клетки) (Tandrup et al., 2000). При лигировании седалищного нерва уменьшение количества малых непептидергических нейронов, связывающихся с изолектином В4 (IB4), более выражено, по сравнению с NF200 -нейронами (проприоцептивные нейроны большого диаметра и тактильные нейроны среднего диаметра) (Рагинов, Челышев, 2003). Однако, до сих пор остается неясной реакция чувствительных нейронов, принадлежащих конкретным субпопуляциям, в ответ на центральную аксотомию.

Большое значение для цитопротекции и восстановления функции травмированных нейронов имеют свободные радикалы и антиоксидантная система клетки (Rosenfeld et al., 1997; Borchelt et al., 1998). Молекулы свободных радикалов, таких как NO, обладают значительной реакционной способностью (Реутов и др., 1997). NO выступает в роли ключевого регулятора функций клетки, в том числе процесса апоптоза (Брюне и др., 1998). Травма нейронов и нейроде-генеративные нарушения сопровождаются окислительным стрессом. На модели хронической травмы седалищного нерва установлено, что активные формы кислорода ухудшают микроциркуляцию в иннервируемой ткани-мишени и замедляют восстановление функции нерва (Khalil, Khodr, 2001). Антиоксидантная система, в состав которой входит ряд функционально важных ферментов, защищает структуры нерва от повреждения. В последние годы активно исследуют роль Cu/Zn-супероксиддисмутазы (Cu/Zn-СОД) в антиоксидантной защите нейронов в центральной и периферической нервной системе, включая ее проти-воапоптозное действие (Rothstein et al., 1994; Sanvicens et al., 2004; Vaziri et al.,

2004). Учитывая немногочисленные данные о влиянии Cu-содержащих соединений на регенерацию в периферической нервной системе, представляется ак туальным изучение содержания меди (Си) в чувствительных узлах и в седалищном нерве после травмы.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является оценка количества нейронов различных субпопуляций в чувствительном узле спинномозгового нерва крысы после центральной аксотомии и/или травмы их периферических отростков, а также уровня Cu-содержащих соединений в чувствительных узлах и седалищном нерве при его повреждении. В работе были поставлены следующие задачи:

1. Оценить общее количество нейронов в чувствительном узле спинномозгового нерва L5, а также количество NF200+- и 1В4+-нейронов на 30-е и 60-е сутки после:

-перерезки задних корешков (центральная аксотомия); -перерезки седалищного нерва; -лигирования седалищного нерва;

-центральной аксотомии в комбинации с перерезкой седалищного нерва; -центральной аксотомии в комбинации с лигированием седалищного нерва.

2. Исследовать экспрессию каспазы-9 для оценки вероятности вступления в посттравматический апоптоз нейронов чувствительного узла спинномозгового нерва L5 на 30-е сутки после центральной аксотомии.

3. Определить уровень Cu-содержащих соединений в чувствительных узлах спинномозговых нервов L4—L5 и седалищном нерве крысы на 1-е сутки после его перерезки методом электронного парамагнитного резонанса (ЭПР).

Научная новизна. Впервые экспериментально обосновано представление о том, что посттравматическая гибель нейронов чувствительного узла спинномозгового нерва более выражена при повреждении периферического, а не центрального отростка. Впервые установлено, что поведение чувствительных нейронов, принадлежащих конкретным субпопуляциям, различается в ответ на центральную аксотомию: количество NF200+-HefipoHOB уменьшается в большей степени по сравнению с 1В4+-нейронами. Получены новые данные о различной динамике численности нейронов этих субпопуляций в ходе регенерации после травмы периферических отростков и при центральной аксотомии. Новые результаты по исследованию динамики экспрессии каспазы-9 позволяют высказать предположение о том, что увеличение уровня этого фермента в клетке не может расцениваться как признак необратимого вступления клетки в апоптоз. Впервые показано, что после травмы периферического нерва концентрация Cu(II), входящей в состав молекул антиоксидантной защиты клетки, увеличивается в центральном отрезке нерва и не изменяется в периферическом отрезке.

Научно-практическая значимость. Данные работы значимы для понимания механизмов пластичности периферических нейронов, зависимости их выживания и фенотипа от действия нейротрофических сигналов, поступающих в пери-карион по различным каналам из ЦНС и из иннервируемой ткани-мишени. Полученные данные о динамике посттравматической гибели нейронов чувствительного узла позволяют оценить перспективы полноты восстановления сенсорной функции периферического нерва в клинической практике. Результаты исследований, свидетельствующие о различном поведении NF200+- и

1В4+-нейронов при центральной аксотомии и повреждении периферического ' отростка, имеют практическое значение для прогноза восстановления функции афферентных волокон различной сенсорной модальности (болевая, температурная, тактильная чувствительность, проприорецепция). Полученные результаты обосновывают целесообразность использования модели стандартной травмы нейронов чувствительного узла спинномозгового нерва в качестве тест-системы для эффективного скрининга новых фармакологических нейро-протекторов и особенно тех, которые способны избирательно поддерживать выживание чувствительных нейронов конкретных су^популяций. Данные об уровне Cu-содержащих соединений в периферическом нерве имеют значение для анализа молекулярных и клеточных механизмов антиоксидантной защиты клеток, взаимоотношений между антиоксидантной и контролирующей апоптоз системами, что важно для предотвращения гибели нейронов при нейродегене-ративных заболеваниях и травмах.

Положенияу выносимые на защиту.

1. Посттравматическая гибель нейронов чувствительного узла спинномозгового нерва более выражена при повреждении периферического, а не центрального отростка.

2. Характер изменения количества NF200- и 1В4-иммунопозитивных нейронов чувствительного узла спинномозгового нерва различен при центральной аксотомии и при травме их периферических отростков. При центральной аксотомии в большей мере уменьшается количество №200-иммунопозитивных нейронов.

3. Уровень важных для антиоксидантной защиты процесса регенерации Cu-содержащих соединений в центральном отрезке нерва возрастает через 1 сутки после его перерезки.

Апробация работы. Материалы работы доложены на Международном молодежном научном Форуме «Ломоносов-2005» (Москва, 2005), Всероссийской научной конференции «Реактивность и пластичность гистологических структур в нормальных, экспериментальных и патологически^ условиях» (Оренбург, 2003), 83-й ежегодной конференции немецкого физиологического общества (Лейпциг, 2004), международной научной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения академика П.Я. Герке (Минск, 2004), научной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы гистологии. Гистогенез и регенерация тканей» (Санкт-Петербург, 2004), IX Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине», посвященной 190-летию Казанского государственного медицинского университета (2004),

Бабухинских чтениях в Орле (2004), 4-м форуме европейского неврологического общества (FENS) (Лиссабон, 2004), V Общероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Казань, 2004), VII Российской молодежной научной школе «Актуальные проблемы магнитного резонанса и его приложений» (Казань, 2004), юбилейной научной конференции физического факультета, посвященной 200-летию Казанского государственного университета (2004), VII Всероссийской конференции по патологии клетки (Москва, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 182 источников. Работа изложена на 103 страницах машинописного текста, иллюстрирована 30 рисунками и 10 таблицами.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Гусева, Дарья Сергеевна

ВЫВОДЫ

1. Выраженность посттравматической гибели нейронов чувствительного узла спинномозгового нерва L5 крысы нарастает в ряду: лигирование нерва —> пере, резка нерва —> центральная аксотомия + лигирование нерва —> центральная аксотомия + перерезка нерва.

2. К 30-м суткам после центральной аксотомии в чувствительном узле количество №200+-нейронов уменьшается на 50,0% (Р<0,05), а 1В4+-нейронов — на 17,7% (Р<0,05). Общее количество нейронов в чувствительном узле при этом не меняется.

3. К 60-м суткам после центральной аксотомии в чувствительном узле количество NF200+-HefipoHOB уменьшается на 60,6% (Р<0,05), а количество 1В4+-нейронов не отличается от уровня у интактных животных.

4. К 30-м суткам после перерезки седалищного нерва в чувствительном узле количество NF200+-HefipoHOB уменьшается на 44,4% (Р<0,05), а 1В4+-нейронов — на 53,6% (Р<0,05).

5. К 60-м суткам после перерезки седалищного нерва в чувствительном узле количество 1В4+-нейронов уменьшается на 60,5% (Р<0,05); при этом численность субпопуляции NF200+-HefipoHOB достоверно не отличается от аналогичного показателя у интактных животных.

6. Лигирование седалищного нерва вызывает уменьшение количества NF200+-и 1В4+-нейронов в чувствительном узле:

• к 30-м суткам их количество уменьшается соответственно на 23,8% (Р<0,05) и 64,8% (Р<0,05);

• к 60-м суткам их количество уменьшается соответственно на 75,5% и 65,9% (Р<0,05).

7. Центральная аксотомия в комбинации с перерезкой седалищного нерва вызывает уменьшение количества NF200+- и 1В4+-нейронов в чувствительном узле:

• к 30-м суткам их количество уменьшается соответственно на 47,5% и 79,3% (Р<0,05);

• к 60-м суткам их количество уменьшается соответственно на 62,4% и 79,2% (Р<0,05).

8. Центральная аксотомия в комбинации с лигированием седалищного нерва приводит к значительному снижению количества NF200+- и 1В4+-нейронов в чувствительном узле:

• к 30-м суткам их количество уменьшается соответственно на 69,7% и 78,1% (Р<0,05);

• к 60-м суткам их количество уменьшается соответственно на 66,3% и 76,2% (Р<0,05).

9. К 30-м суткам после центральной аксотомии в чувствительном узле количество нейронов с осадком конечного продукта иммуногистохимической реакции на каспазу-9 в ядре возрастает на 50,5% (Р<0,05) при сравнении с интактными животными. При этом на 29,2% (Р<0,05) увеличивается количество нейронов с осадком конечного продукта иммуногистохимической реакции на каспазу-9 в ядре и цитоплазме.

10. К 30-м суткам после центральной аксотомии в чувствительном узле количество 1В4+-нейронов, экспрессирующих каспазу-9, увеличивается на 62,2% (Р<0,05). Увеличение экспрессии каспазы-9 в 1В4+-нейронов не является однозначным свидетельством вступления этих нейронов в апоптоз

11. В интактном седалищном нерве концентрация комплекса Си(П)ДЭТК2 соу ставляет (20,1 ±0,2)-10 моль/л. Через 24 часа после перерезки нерва концен-• трация комплекса Си(П)ДЭТК2 в периферическом отрезке составляет (29,6±3,0)-10~7 моль/л, а в центральном отрезке увеличивается на 138% (Р<0,05) 7 и составляет

47,9±5,5)-10 моль/л.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гусева, Дарья Сергеевна, Москва

1. Брюне Б., Сандау К., фон Кнетен А. Апоптотическая гибель клеток и оксид азота: механизмы активации и антагонистические сигнальные пути //Биохимия.-1998.-Т. 63.7.-С. 996.

2. Ванин А.Ф. Динитрозильные комплекса железа и S-нитрозотиолы — две возможные формы стабилизации и транспорта оксида азота в биосистемах //Биохимия.-1998.-Т. 63.-Ж7.-924-938.

3. Подколзин А.А., Мегреладзе А.Г., Донцов В.И., Арутюнов С.Д., Мрикаева О.М., Жукова Е.А. Система антиоксидантной защиты организма и старение // Профилактика старения.-2000.-З.С. 23-27.

4. Проскуряков С.Я., Габай B.JL, Конопляников А.Г. Некроз — активная управляемая форма программируемой клеточной гибели //Биохимия.-2002.-Т. 67(4).-С. 467-491.

5. Рагинов И.С., Вафин А.Ю., Хафизьянова Р.Х., Челышев Ю.А. Влияние лекарственных препаратов ксимедон и ноотропил на регенерацию периферического нерва //Российские морфологические ведомости.-1997.-№ 1(6).-С. 120-126.

6. Рагинов И.С., Челышев Ю.А. Чувствительные нейроны и шванновские клетки при фармакологической стимуляции регенерации нерва //Морфология.-2000.-Т. 118.-С. 36-40.

7. Рагинов И.С., Челышев Ю.А., Хафизьянова Р.Х. Влияние ксимедона на посттравматическое выживание чувствительных нейронов //Бюлл. эксп. биол. мед.-2000.-Т. 129.-С. 256-259.

8. Рагинов И.С., Челышев Ю.А., Шагидуллин Т.Ф. Взаимодействие чувствительных нейронов и клеток-сателлитов при стимуляции регенерации нерва //Морфология.-2002.-Т. 122.- №4.С. 37-39.

9. Рагинов И.С., Челышев Ю.А. Выживание чувствительных нейронов различных субпопуляций после травмы нерва// Морфологические ведомости.-2002.-№1—2.С. 151-152.

10. Рагинов И.С, Челышев Ю.А. Посттравматическое выживание чувствительных нейронов различных субпопуляций //Морфология.-2003.-Т. 124(4).С. 47-50.

11. Реутов В.П, Сорокина Е.Г, Охотин В.Е, Косицын Н.С. Циклические превращения оксида азота в организме млекопитающих.-М.: Наука, 1997.-159с.

12. Цапин А.И, Степаничев М.Ю, Либе М.Л., Гуляейа Н.В. Определение активности NO-синтазы в мозгу (новый метод)// Бюлл. эксп. биол. мед.-1994.-№ 1.-С. 39-41.

13. Челышев Ю.А, Рагинов И.С. Посттравматическое выживание нейронов спинальных ганглиев при стимуляции регенерации.нерва // Бюлл. эксп. биол. мед. эксп.-2002.-Т. 134.-№5.-С. 690-692.

14. Челышев Ю.А, Хафизьянова Р.Х, Рагинов И.С, Вафин А.Ю. Стимуляция регенерации периферического нерва лекарственными средствами //Экспериментальная и клиническая фармакология.-2000а.-Т. 63.-С. 17-19.

15. Челышев Ю.А, Сайткулов К.И. Развитие, фенотипическая характеристика и коммуникации шванновских клеток //Успехи физиологических наук.-20006.-Т. 31.-№3.C. 54-69.

16. Ярилин А.А. Апоптоз и его место в иммунных процессах.-Иммунология.-1996.-№6.-С. 10-23.

17. Abbadie С, Basbaum A.I. The contribution of capsaicin-sensitive afferents to the dorsal root ganglion sprouting of sympathetic axons after peripheral nerve injury in the rat //Neurosci. Lett.-1998.-V. 253(3).-P. 143-146.

18. Acheson A, Conover J.C, Fandl J.P, DeChiara T.M, Russell M, Thadani A, Squinto S.P, Yancopoulos G.D, Lindsay R.M. A BDKfF autocrine loop in adult sensory neurons prevents cell death//Nature.-1995.-V. 374(6521).-P. 450-453.

19. Andoh T, Chock P.B, Chiueh C.C. Preconditioning-mediated neuroprotection: role of nitric oxide, cGMP, and new protein expression //Ann. N. Y. Acad. Sci.-2002.-V. 962.-P. 1-7.

20. Arvidsson J., Yagge J., Grant G. Cell loss in lumbar dorsal root ganglia and transganglionic degeneration after sciatic nerve resection in the rat //Exp. Brain Res.-1986.-V. 373.-P. 15-21.

21. Averill S., McMahon S.B., Clary D.O., Reichardt L.F., Priestley J.V. Immunocytochemical localization of trkA receptors^ in chemically identified subgroups of adult rat sensory neurons //Eur. J. Neurosci.-1995.-V. 7(7).-P. 1484-1494.

22. Avraham K.B., White C.W., Shanley P.F., Groner Y. Transgenic mice with expression of elevated levels of copper-zinc superoxide dismutase in the lungs are resistant to pulmonary oxygen toxicity //J. Clin. Invest.-199l.-V. 87(6).-P. 2162-2168.

23. Bancher C., Lassmann H., Breitschopf H., Jellinger K.A. Mechanisms of cell death in Alzheimer's disease //J. Neural. Transm. Suppl.-1997.-V. 50.-P. 141-52.

24. Bao F., Liu D. Peroxynitrite generated in the rat spinal cord induces neuron death and neurological deficits //Neuroscience.-2002.-V. 115(3).-P. 839-849.

25. Barde Y.A. Trophic factors and neuronal survival //Neuron.-1989.-V. 2.-P. 1525-1534.

26. Barouch R., Appel E., Kazimirsky G., Brodie C. Macrophages express neurotrophins and neurotrophin receptors. Regulation of nitric oxide production be NT-3 //J. Neuroimmunology.-2001 .-V. 112(l-2).-P. 772-778.

27. Belyantseva I., Lewin G. Stability and plasticity of primary afferent projections following nerve regeneration and central degeneration //Eur. J. Neurosci.-1999.-V. 11.-P. 2457-2468.

28. Bergman E., Johnson H., Zhang X., Hokfelt Т., Ulfhake B. Neuropeptides and neurotrophin receptor mRNAs in primary sensory neurons of aged rats //J. Сотр. Neurol.-1996.-V. 375(2).-№l l.-P. 303-319. "

29. Bissonnette C.J., Klegeris A., McGeer P.L., McGeer E.G. Interleukin 1 alpha and interleukin 6 protect human neuronal SH-SY5Y cells from oxidative damage //Neurosci. Lett.-2004.-V. 361(l-3).-P. 40-43.

30. Bradbury E., Burnstock G., McMahon S. The expression of P2X3 purinoreceptors in sensory neurons: effects of axotomy and glial-derived neurotrophic factor //Mol. Cell Neurosci.-1998.-V. 12.-P. 256-268.

31. Bredesen D.E. Genetic control of neural cell apoptosis //Perspect Dev. Neurobiol.-1996.-V. 3(2).-P. 101-109.

32. Broude E., McAtee M., Kelley M.S., Bregman B.S. c-Jun expression in adult rat dorsal root ganglion neurons: differential response after central or peripheral axotomy //Exp. Neurol.-1997.-V. 148(1).-P. 367-77.

33. Buonanno A., Fischbach G.D. Neuregulin and ErbB receptor signaling pathways in the nervous system //Curr. Opin. Neurobiol.-2001 .-V. 11(3).-P. 287-296.

34. Gass P., Herdegen T. Neuronal expression of AP-1 proteins in excitotoxic-neurodegenerative disorders and following nerve fiber lesions //Progress in Neurobiology.-1995.-V. 47(4-5).-P. 257-290.

35. Chalmers-Redman R.M., Fraser A.D., Ju W.Y., Wadia J., Tatton K.A., Tatton W.G. Mechanisms of nerve cell death: apoptosis or necrosis after cerebral ischaemia //Int. Rev. Neurobiol.-1997.-V. 40.-P. 1-25.

36. Chen M.S., Huber A.B., van der Haar M.E., Frank M., Schnell L., Spillmann A.A., Christ F., Schwab M.E. Nogo A is a myelin-associated neurite outgrowthinhibitor and an antigen for monoclonal antibody 'IN-1 //Nature.-2000.-V. 403(6768).-P. 434-439.

37. Chen X.D., Cheng G.M., Shi Y.F. Expression and tissue localization of hemeoxygenase in human placenta //Zhonghua Fu. Chan. Ke. Za. Zhi.-2003.-V. 38(9).-P. 534-537.

38. Cheng C., Zochodne D.W. Sensory neurons with activated caspase-3 survive long-term experimental diabetes //Diabetes.-2003.-V. 52. P. 2363-2371.

39. Chopra В., Giblett S., Little J.G., Donaldson L.F., Tate S., Evans R.J., Grubb B.D. Cyclooxygenase-1 is a marker for a subpopulation of putative nociceptive neurons in rat dorsal root ganglia //Eur. J. Neurosci.-2000.-V. 12(3).-P. 39113920.

40. Coggeshall R.E., Lekan H.A., Doubell T.P., Allchorne A., Woolf C.J. Central changes in primary afferent fibers following peripheral nerve lesions //Neuroscience.-1997.-V. 77(4).-P. 1115-1122.

41. Cotman C.W., Su-J.H. Mechanisms of neuronal death in Alzheimer's disease //Brain Pathol.- 1996.-V. 6(4).-P. 493-506.

42. Crowley C., Spencer S.D., Nishimura M.C. et al. Mice lacking nerve growth factor display perinatal loss of sensory and sympathetic neurons yet develop basal forebrain cholinergic neurons //Cell.-1994.-V. 76.-P. 10001-10011.

43. Curran Т., Franza B.R.Jr. Fos and Jun: the AP-1 connection //Cell.-1988.-V. 55(3).-P. 395-397.

44. Dai X, Galligan J.J, Watts S.W, Fink G.D, Kreulen D.L. ncreased 02*~ production and upregulation of ETB receptors by sympathetic neurons in DOCA-salt hypertensive rats //Hypertension.-2004.-V. 43(5).-P. 1048-1054.

45. Deng Y, Zhong J, Zhou X. Effects of endogenous neurotrophins on sympathetic sprouting in the dorsal root ganglia and allodynia following spinal nerve injury//Exp. Neurol.-2000.-V. 164.-P. 344-350.

46. Djordjevic A, Spasic S, Jovanovic-Galovic A, Djordjevic R, Grubor-Lajsic G. Oxidative stress in diabetic pregnancy: SOD, CAT and GSH-Px activity and lipid peroxidation products //J. Matern. Fetal. Neonatal. Med.-2004.-V. 16(6).-P. 367-372.

47. Dodge M.E, Rahimtula M, Mearow K.M. Factors contributing to neurotrophin-independent survival of adult sensory neurons //Brain Research.-2002.-V. 953.-P. 144-156.

48. Donnerer J. Regeneration of primary sensory neurons //Pharmacology.-2003.-V. 67(4).-P. 169-181.

49. Ebadi M, Bashir R.M, Heidriclc M.L, Hamada F.M, Refaey H.E, Hamed A, Helal G, Baxi M.D, Cerutis D.R, Lassi N.K. Neurotrophins and their receptors in nerve injury and repair //Neurochem. Int.-1997.-V. 30(4-5).-P. 347-374.

50. Eiserich J.P, Vliet A, O'Neill C.A, Halliwell B, Cross C.E. Tyrosine modification by reactive nitrogen species: a closer look //Arch. Biochem. Biophys.-1995.-V. 319(2).-P. 341-349.

51. Ekstrom P.A.R, Svensson B, Edstrom A. Increased levels of mitogen activated protein kinase (MAP-K) detected in the injured adult mouse sciatic nerve //Neuroscience Letters.-1995.-V. 200(1).-P. 33-36.

52. Ernfors P, Lee K.F, Jaenisch R. Mice lacking brain-derived neurotrophic factor develop with sensory deficits //Nature.-1994.-V. 368,-P. 147-150.

53. Ernst A.F, Gallo G, Letourneau P.C, McLoon S.C. Stabilization of growing retinal axons by the combined signaling of nitric oxide and brain-derived neurotrophic factor //J. Neurosci.-2000.-V. 20(4).-P. 1458-1469.

54. Farinas I., Cano-Jaimeza M., Bellmunta E., Soriano M. Regulation of neurogenesis by neurotrophins in developing spinal sensory ganglia //Brain Research Bulletin.-2002.-V. 57(6).-P. 809-816.

55. Fiskum G., Starkov A., Polster B.M., Chinopoulos C. Mitochondrial mechanisms of neural cell death and neuroprotective interventions in Parkinson's disease //Ann. N.Y. Acad. Sci.-2003.-V. 991.-P. 111-119.

56. Fournier A., GrandPre Т., Strittmatter S. Identification of receptor mediating Nogo-66 inhibition of axonal regeneration //Nature.-200l.-V. 409.-P. 341-346.

57. Friedman В., Kleinfeld D., Ip N.Y., Verge V.M., Moulton R., Boland P., Zlotchenko E., Lindsay R.M., Liu L. Neurotrophic. influence on injured adult spinal motor neurons//J. Neurosci.-1995.-V. 15(2).-P. 1044-1056.

58. Fulle S.5 Mariggio M.A., Belia S. et al. Nerve growth factor inhibits apoptosis induced by S-100 binding in neuronal PC 12 cells //Neuroscience.-1997.-V. 76.-P. 159-166.

59. Galleano M., Aimo L., Virginia Borroni M., Puntarulo S. Nitric oxide and iron overload. Limitations of ESR detection by DETC //Toxicology.-200l.-V. 167(3).-P. 199-205.

60. Gil J., Almeida S., Oliveira C.R., Rego A.C. Cytosolic and mitochondrial ROS in staurosporine-induced retinal cell apoptosis //Free Radic. Biol. Med.-2003.-V. 35(11).-P 1500-1514.

61. Goldberg J., Barres B. The relationship between neuronal survival and regeneration //Annu. Rev. Neurosci.-2000.-V. 23.-P. 579-612.

62. Grimpe В., Pressman Y., Bunge M.B., Silver J. The role of proteoglycans in Schwann cell/astrocyte interactions and in regeneration failure at PNS/CNS interfaces //Molecular and Cellular Neuroscience.-2005.-V. 28(1).-P. 18-29.

63. Groves M.J., Christopherson Т., Giometto В., Scaravilli F. Axotomy-induced apoptosis in adult rat primary sensory neurons //J. Neurocytol.-1997.-V. 26(9).-P. 615-624.

64. Gupta S. Apoptosis/programmed cell death. A historical perspective //Adv. Exp. Med. Biol.-1996.-V. 406.-P. 1-9.

65. Gustafsson H., Soderdahl Т., Jonsson G., Bratteng J.O., Forsby A. Insulin-like growth factor type 1 prevents hyperglycemia-induced uncoupling protein 3 down-regulation and oxidative stress //J. Neurosci. Res.-2004.-V. 77(2).-P. 285291.

66. Hanafy K.A., Krumenacker J.S., Murad F. NO, nitrotyrosine, and cyclic GMP in signal transduction//Med. Sci. Monit.-2001.-V. 7(4).-P. 801-819.

67. Henken D.B., Battisti W.P., Chesselet M.F., Murray M., Tessler A. Expression of beta-preprotachykinin mRNA and tachykinins in rat dorsal root ganglion cells following peripheral or central axotomy//Neuroscience.-1990.-V. 39(3).-P. 73342.

68. Higuchi Y. Chromosomal DNA fragmentation in apoptosis and necrosis induced by oxidative stress //Biochemical Pharmacology.-2003.-V. 66.-P.1527-1535.

69. Ho P.I., Ashline D., Dhitavat S., Ortiz D., Collins S.C., Shea T.B., Rogers E. Folate deprivation induces neurodegeneration: roles of oxidative stress and increased homocysteine //Neurobiol. Dis.-2003.-V. 14(1).-P. 32-42.

70. Honda Т., Talcahashi M., Sugiura Y. Co-localization of the glial cell-line derived neurotrophic factor and its functional receptor c-RET in a subpopulation of rat dorsal root ganglion neurons //Neuroscience Letters.-1999.-V. 8.-P. 45-48.

71. Horie H., Sakai I., Akahori Y., Kadoya T. IL-1 beta enhances neurite regeneration from transected-nerve terminals of adult rat DRG //Neuroreport.-1997.-V. 8(8).-P. 1955-1959.

72. Horie H., Akahori Y. Three-dimensional cell aggregation enhances growth-promoting activity of NGF in adult DRG //Neuroreport.-1994.-V. 6(1).-P. 37-40.

73. Houenou L J., Li L., Lei M., Kent C.R., Tytell M. Exogenous heat shock cognate protein Hsc 70 prevents axotomy-induced death of spinal sensory neurons //Cell. Stress. Chaperones.-1996.-V. 1(3).-P. 161-166.

74. Ikeguchi R., Kakinoki R., Okamoto Т., Matsumoto Т., Hyon S.H., Nakamura T. Successful storage of peripheral nerve before transplantation using green tea polyphenol: an experimental study in rats //Exp Neurol.-2003.-V. 184(2).-P. 688-696.

75. Jellinger K.A, General aspects of neurodegeneration //J. Neural. Transm. Suppl.-2003.-V. 65.-P. 101-144.

76. Jones M., Munson J., Thompson S. A role for nerve growth factor in sympathetic sprouting in rat dorsal rootganglia //Pain.-1999.-V. 79.-P. 21-29.

77. Kermer P., Krajewska M., Zapata J.M., Takayama S., Mai J., Krajewski S., Reed J.C. Bagl is a regulator and marker of neuronal differentiation //Cell Death Differ.-2002.-V. 9.-P. 405-413.

78. Kermer P., Digicaylioglu M.N., Kaul M., Zapata J.M:, Krajewska M., Stenner-Lieven F., Takayama S., Krajewski S., Lipton S.A., Reed J.C. BAG1 overexpression in the mouse brain protects against stroke //Brain Pathol.-2003.-V. 13.-P. 495-506.

79. Kerr J.F, Wyllie A.H, Currie A.R. Apoptosis: A basik biologucal phenomen with wide-ranging implications in tissue kinetics //Br. J. Cancer.-1972.-V. 26.-P. 239-257.

80. Khalil Z, Khodr B. Modulation of inflammation by reactive oxygen species: implications for aging and tissue repair //Free Radic. Biol. Med.-2001.-V. 30(1).-P. 1-8.

81. Kiatipattanasakul W, Nakamura S, Hossain M.M. et al. Apoptosis in the aged dog brain //Acta Neuropathol. Berl.-1996.-V. 9(3).-P. 242-48.

82. Kishi M, TanabeJ, Schmelzer J.D, Low P.A. Morphometry of dorsal root ganglion in chronic experimental diabetic neuropathy //Diabetes.-2002.-V. 51.-P. 819-824.

83. Kirkland R.A, Franklin J.L. Bax, reactive oxygen, and cytochrome с release in neuronal apoptosis //Antioxid. Redox. Signal.-2003.-V. 5(5).-P. 589-596.

84. Klein R, Silos-Santiago I, Smeyne R.J. et al. Distribution of the neurotrophin-3 receptor gene trkC eliminates la muscle afferents and results in abnormal movement //Nature.-1994.-V. 368.-P. 249-251.

85. Kovacs R, Schuchmann S, Gabriel S, Kann O, Kardos J, Heinemann U. Free radical-mediated cell damage after experimental status epilepticus in hippocampal slice cultures //J. Neurophysiol.-2002.-V.,88(6).-P. 2909-2918.

86. Kroemer G, Reed J.C. Mitochondrial control of cell death //Nat. Med.-2000.-V. 6.-P. 513-519.

87. Leclere P., Ekstrom P., Edstrom A. P., Priestley J., Averill S., Tonge D. Effects of glial cell line-derived neurotrophic factor on axonal growth and apoptosis in adult mammalian sensory neurons in vitro //Neuroscience.-1997.-V. 5(82).-P. 545-558.

88. Lee Y.S., Sindhu R.K., Lin C.Y., Ehdaie A., Lin V.W., Vaziri N.D. Effects of nerve graft on nitric oxide synthase, NAD(P)H oxidase, and antioxidant enzymes in chronic spinal cord injury //Free Radic. Biol. Med.-2004.-V. 36(3).-P. 330339.

89. Lekan H.A., Chung K., Yoon Y.W., Chung J.M., Coggeshall R.E. Loss of dorsal root ganglion cells concomitant with dorsal root axon sprouting following segmental nerve lesions//Neuroscience.-1997.-V. 81(2).-P. 527-534.

90. Lewis C., Neidhart S., Holy C., North R.A., Buell G., Surprenant A. Coexpression of P2X2 and P2X3 receptor subunits can account for ATP-gated currents in sensory neurons //Nature.-1995.-V. 377(6548).-P. 432-435.

91. Li C., Peoples R.W., Lanthorn Т.Н., Li Z.W., Weight F.F. Distinct ATP-activated currents in different types of neurons dissociated from rat dorsal root ganglion//Neurosci. Lett.-1999.-V. 263(1).-P. 57-60.

92. Li P., Nijhawan D., Budihardjo I., Srinivasula S.M.,- Ahmad M., Alnemri E.S., Wang X. Cytochrom с and dATP-dependent formation of Apaf-l/caspase-9 complex initiates an apoptotic protease cascade //Cell.-1997.-V. 91.-P. 479-489.

93. Lindsay R. Nerve growth factors (NGF, BDNF) enhance axonal regeneration but are not required for survival of adult sensory neurons //Nature.-1996.-V. 351.-P. 395-403.

94. Liuzzi F.J., Laselc R.J. Astrocytes block axonal regeneration in mammals by activating the physiological stop pathway //Science.-1987.-V. 237(4815).-P. 642-645.

95. Ma Q. Vanilloid receptor homologue, VRL1, is expressed by both A- and C-fiber sensory neurons//Neuroreport.-2001.-V. 12.-№17.-P. 3693-3695.

96. Ma W., Bisby M. Partial sciatic nerve ligation induced more dramatic increase of neuropeptide Yimmunoreactive axonal fibers in the gracile nucleus of middle-aged rats than inyoung adult rats //J. Neurosci.-2000.-V. 60.-P. 520-530.

97. Macaya A. Apoptosis en el sistema nervioso //Rev. Neurol.-1996.-V. 24(135).-P. 1356-1360.

98. Martin L.J. Neuronal cell death in nervous system development, disease, and injury//Int. J. Mol. Med.-2001.-V. 7.-P. 455-478.

99. Mattson M.P. Apoptosis in neurodegenerative disorders // Nat. Rev. Mol. Cell Biol.-2000.-V. l.-P. 120-129.

100. Mattson M.P., Lindvall O. Neurotrophic factor and cytokine signaling in the aging brain //Greenwich. JAI Press.-1997.-P. 299-345.

101. McCollum A.T., Jafarifar F., Chan R., Guttmann R.P. Oxidative stress inhibits ionomycin-mediated cell death in cortical neurons //J. Neurosci. Res.-2004.-V. 76(1).-P. 104-109.

102. McMahon S.B., Armanini M.P., Ling L.H., Phillips H.S. Expression and coexpression of Trk receptors in subpopulations of adult primary sensory neurons projecting to identified peripheral targets //Neuron.- 1994.-V. 12(5).-P. 1161-1171.

103. McKay H.A., Brannstrom Т., Wiberg M., Terenghi G. Primary sensory neurons and satellite cells after peripheral axotomy in the adult rat: timecourse of cell death and elimination//Exp. Brain. Res.-2002.-V. 142.-P. 308-18.

104. Melville S., Sherburn Т., Coggeshall R. Preservation of transected nerve in an impermeable tube //Exp. Neurol.-1989.-V. 105.-P. 311-315.

105. Michailov G.V., Sereda M.W., Brinkmann B.G., Fischer T.M., Haug В., Birchmeier C., Role L., Lai C., Schwab M.H., Nave K.A. Axonal neuregulin-1 regulates myelin sheath thickness //Science.-2004.-V., 304(5671).-P. 700-703.

106. Mohanakumar K.P., Thomas В., Sharma S.M., Muralikrishnan D., Chowdhury R., Chiueh C.C. Nitric oxide: an antioxidant and neuroprotector //Ann N. Y. Acad. Sci.-2002.-V. 962.-P. 389-401.

107. Molliver D.C., Wright D.E., Leitner M.L., Parsadanian A.S., Doster K., Wen D., Yan Q., Snider W.D. IB4-binding DRG neurons switch from NGF to GDNF dependence in early postnatal life //Neuron.-1997.-V. 19(4).-P. 4849-4861.

108. Mordvintcev P, Mulsch A, Busse R, Vanin A. On-line detection of nitric oxide formation in liquid aqueous phase by electron paramagnetic resonance spectroscopy//Anal. Biochem.-1991.-199(l).-P. 142-146.

109. Olasode B.J. Dying by default, the biology of apoptosis: a review see comments. //East Afr. Med. J.-1997.-V. 74(2).-P. 108-111.

110. Oppenheim R.W, Flavell R.A, Vinsant S, Prevette D, Kuan C.Y, Rakic P. Programmed cell death of developing mammalian neurons after genetic deletion of caspases //J. Neurosci.-2001 .-V. 21 .-P. 4752-4760.

111. Pannese E, Procacci P, Ledda M, Conte V. Age-related reduction of the satellite cell sheath around spinal ganglion neurons in the rabbit //J. Neurocytol.-1996.-V. 25(2).-P. 137-146.

112. Patel MN. Metalloporphyrins improve the survival of Sod2-deficient neurons //Aging Cell.-2003.-V. 2(4).-P. 219-22.

113. Petruska J.C, Napaporn J, Johnson R.D, Gu J.G, Cooper B.Y. Subclassifled acutely dissociated cells of rat DRG: histochemistry and patterns of capsaicin-, proton-, and ATP-activated currents //J. Neurophysiol.-2000.-V. 84(5).-P. 236579.

114. Portera-Cailliau C, Price D.L, Martin L.J. Excitotoxic neuronal death in the immature brain is an apoptosis-necrosis morphological continuum /Я. Сотр. Neurol.-1997.-V. 378.-P. 70-87.

115. Ramer M., Priestley J., McMahon S. Functional regeneration of sensory axons into adult spinal cord //Nature.-2000.-V. 403.-P. 312-316.

116. Reed J.C. Cytochrome c: Can't live with it Can't live without it //Cell.-1997.-V. 91.-P. 559-562.

117. Reed J.C. Bcl-2 family proteins//Oncogene.-1998.-V. 17.-P. 3225-3236.

118. Reed J.C. Mechanisms of apoptosis //Am. J. Pathol.-2000.-V. 157.-P. 14151430.

119. Reed J.C. Apoptosis-based therapies //Nat. Rev. Drug Discov.-2002.-V. 11.-P. 111-121.

120. Reutov V.P., Sorokina E.G. NO-synthase and nitrite-reductase components of nitric oxide cycle //Biochemistry (Mosc).-1998.-V. 63(7).-P. 874-84.

121. Reynolds A.J., Bartlett S.E., Hendry I.A. Molecular mechanisms regulating the retrograde axonal transport of neurotrophins //Exp. Brain Res.-2000.-V. 33(2-3).-P. 169-178.

122. Rosenblum W.I. Histopathologic clues to the pathways of neuronal death following ischemia/hypoxia //J. Neurotrauma.-1997.-V. 14.-P. 313-326.

123. Rosenfeld J., Cook S., James R. Expression of Superoxide Dismutase Following Axotomy//Experimental Neurology.-1997.-V. 147(1).-P. 37-47.

124. Roth W., Kermer P., Krajewska M., Krajewski S., Reed J.C. Bifunctional apoptosis regulator (BAR) protects neurons from diverce cell death pathways //Cell Death Differ.-2003.-V. 10.-P. 1178-1187.

125. Rothstein J.D., Bristol L.A., Hosier В., Brown R.H.Jr., Kuncl R.W. Chronic inhibition of superoxide dismutase produces apoptotic death of spinal neurons //Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1994.-V. 91(10).-P. 4155-4159.

126. Schmalbruch H. Motoneuron death after sciatic nerve section in newborn rats //J. Сотр. Neurol.-1984.-V. 224.-P. 252-258.

127. Schmeichel A.M., Schmelzer J.D., Low P.A. Oxidative injury and apoptosis of dorsal root ganglion neurons in chronic experimental diabetic neuropathy //Diabetes.-2003.-V. 52.-P. 165-171.

128. Shen H., Chung J., Chung K. Expression of neurotrophin mRNAs in the dorsal root ganglion after spinal nerve injury //Brain Res. Mol.-1999.-V. 64.-P. 186192.

129. Sheu F.S., Zhu W., Fung P.C. Direct observation of trapping and release of nitric oxide by glutathione and cysteine with electron paramagnetic resonance spectroscopy //Biophys. J.-2000.-V. 78(3).-P. 1216-122.6.

130. Shi T.J., Holmberg, K., Xu Z.Q., Steinbusch H., de Vente J., Hokfelt T. Effect of peripheral nerve injury on cGMP and nitric oxide synthase levels in rat dorsal root ganglia: time course and coexistence //Pain.-1998.-V.78.-P. 171-180.

131. Siegal J.D., Kliot M., Smith G.M., Silver J. A comparison of the regeneration potential of dorsal root fibers into gray or white matter of the adult rat spinal cord//Exp. Neurol.-1990.-V. 109(1).-P. 90-97.

132. Silverman J., Kruger L. Selective neuronal glycoconjugate expression in sensory and autonomic ganglia: relation of lectin reactivity to peptide and enzyme markers //J. Neurocytol.-1990.-V. 19.-P. 789-801.

133. Smith D.S., Skene J.H. A transcription-dependent switch controls competence of adult neurons for distinct modes of axon growth //J. Neurosci.-1997.-V. 17(2).-P. 646-658.

134. Souchard J.P., Barbacanne M.A., Margeat E., Maret A., Nepveu F., Arnal J.F.

135. Strijbos P., Rothwell N. Interleukin-1 beta attenuates excitatory amino acid-induced neurodegeneration in vitro: Involvement of nerve growth factor //J. Neurosci.-1995.-V. 15(5).-№5.-P. 3468-3474.

136. Sun Y., Landis S., Zigmond R. Signals triggering the induction of leukemia inhibitory factor in sympathetic superior cervical ganglia and their nerve trunks after axonal injury//Mol. Cell. Neurosci.-1996.-V. 7.-P. 152-163.

137. Swett J., Hong C., Miller P. Most dorsal root ganglion neurons of the adult rat survive nerve crush injury //Somatosens. Motor Res.-1995.-V. 12.-P. 177-189.

138. Takadera Т., Ohyashiki T. Apoptotic cell death and caspase 3 (CPP32) activation induced by calcium ionophore at low concentrations and their prevention by nerve growth factor in PC 12 cells //Eur. J. Biochem.-1997.-V. 249(1).- P. 8-12.

139. Takayama S., Reed J.C. Molecular chaperone targeting and regulation by BAG family proteins//Nat. Cell Biol.-2001.-V. З.-Р. E237-E241.

140. Takumida M., Anniko M. Simultaneous detection ,pf both nitric oxide and reactive oxygen species in guinea pig vestibular sensory cells //ORL J. Otorhinolaryngol. Relat. Spec.-2002.-V. 64(2).-P. 143-147.

141. Tandrup Т., Woolf C., Coggeshall R. Delayed loss of small dorsal root ganglion cells after transection of the rat sciatic nerve //J. Сотр. Neurol.-2000.-V. 422(2).-P. 172-180.

142. Titmus M., Faber D. Axotomy-induced alterations in the electrophysiological characteristics of neurons //Prog. Neurobiol.-1990.-V. 35(1).-P. 1-51.

143. Thippeswamy Т., McKay J.S., Morris R. Bax and caspases are inhibited by endogenous nitric oxide in dorsal root ganglion neurons in vitro //Eur. J. Neurosci.-2001.-V. 14(8).-P. 1229-1236.

144. Thompson S.W., Majithia A.A. Leukemia inhibitory factor induces sympathetic sprouting in intact dorsal root ganglia in the adult rat in vivo //J. Physiol.-1998.-V. 506(3).-P. 809-816.

145. Tsukada S., Keino-Masu K., Masu M., Fukuda J. Activation of protein kinase A by nitric oxide in cultured dorsal root ganglion neurites of the rat, examined by a fluorescence probe, ARII //Neurosci. Lett.-2002.-V. 318(1).-P. 17-20.

146. Tuttle R., Matthew W. Neurotrophins affect the pattern of DRG neurite growth4in a bioassay that presents a choice of CNS and PNS substrates //Development.-1995.-V. 121(5).-№5.-P. 1301-1309.

147. Vaziri N.D., Y.S., Sindhu R.K., Lin C.-Y., Ehdaie A., Lin V.W. Effects of nerve graft on nitric oxide synthase, NAD(P)H oxidase, and antioxidant enzymes in chronic spinal cord injury //Free Radical Biology "and Medicine.-2004.-V. 36(3).-P. 330-339.

148. Van Wangenen S., Rehder V. Regulation of neuronal growth cone fflopodia by nitric oxide depends on soluble guanylyl cyclase// J. Neurobiol.-2001-V.- 46.-P. 206-219.

149. White D., Mansfield K. Vasoactive intestinal polypeptide and neuropeptide Y act indirectly to increase neurite outgrowth of dissociated dorsal root ganglion cells //Neuroscience.-1996.-V. 73(3).-№8.-P. 881-887.

150. Williams К.A, Coster D.J. Rethinking immunological privilege: implications for corneal and limbal stem cell transplantation //Molecular Medicine Today.-1997.-V. 3.-P. 495-501.

151. Wootz H, Hansson I, Korhonen L, Napanlcangas U., Lindholm D. Caspase-12 cleavage and increased oxidative stress during motoneuron degeneration in transgenic mouse model of ALS //Biochem. Biophys* Res. Commun.-2004.-V. 322(1).-P. 281-286.

152. Yoneda T, Inagaki S, Hayashi Y, Nomura T, Takagi H. Differential regulation of manganese and copper/zinc superoxide dismutases by the facial nerve transection //Brain Res.-1992.-V. 582(2).-P. 342-345.

153. Yu W.H. Spatial and temporal correlation of nitric oxide synthase expression with CuZn-superoxide dismutase reduction in motor neurons following axotomy //Ann. N. Y. Acad. Sci.-2002.-V. 962.-P. 111-121.

154. Yuan J, Yankner B.A. Apoptosis in the nervous system //Nature.-2000.-V. 407.-P. 802-809.

155. Zhang X, Shi Т., Holmberg K, Landry M, Huang W, Xiao H, Ju G, Hokfelt T. Expression and regulation of the neuropeptide Y Y2 receptor in sensory andautonomic ganglia//Proc. Nat. Acad. Sci. USA.-1997.-V. 94(2).-P. 729-734.

156. Zhang D, Xiong J, Hu J, Li Y, Zhao B. Improved method to detect nitric oxide in biological systems //Appl. Magn. Reson.-2001.-V. 20.-P. 354-356.

157. Zhou H, Li Y, Liu X., Wang X. An APAF-1 cytochrome с multimeric complex is a functional apoptosome that activates procaspase-9 //J. Biol. Chem.-1999a.-V. 274.-P. 11549-11556.

158. Zhou X.F, Chie E.T., Deng Y.S, Zhong J.H, Xue Q, Rush R.A, Xian C.J. Injured primary sensory neurons switch phenotype for brain-derived neurotrophic factor in the rat //Neuroscience.-1999b.-V. 92(3).-P. 841-853.

159. Zhu P, DeCoster MA, Bazan NG. Interplay among platelet-activating factor, oxidative stress, and group I metabotropic glutamate receptors modulates neuronal survival //J. Neurosci. Res.-2004.-V. 77(4).-P. 525-31.

Информация о работе

Гусева, Дарья Сергеевна
кандидата биологических наук
Москва, 2005
ВАК 03.00.25

Диссертация

Посттравматическое выживание нейронов чувствительного узла спинномозгового нерва крысы - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы