Клетки-сателлиты спинального ганглия L5 в условиях постравматической регенерации седалищного нерва крысы

Архипова, Светлана Сергеевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Клетки-сателлиты спинального ганглия L5 в условиях постравматической регенерации седалищного нерва крысы
ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Клетки-сателлиты спинального ганглия L5 в условиях постравматической регенерации седалищного нерва крысы"

На правах рукописи

Архипова Светлана Сергеевна

КЛЕТЩ-САТЕЛЛИТЫ СПИНАЛЬНОГО ГАНГЛИЯ Ь5 В УСЛОВИЯХ ПОСТТРАВМАТИЧЕСКОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ СЕДАЛИЩНОГО НЕРВА

КРЫСЫ

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

004601018

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Челышев Юрий Александрович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Кругляков Павел Павлович доктор биологических наук, профессор Ермолин Игорь Леонидович

Ведущее учреждение:

ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет)

Защита состоится 10 г. з /£/ часов на заседании Диссертационного

совета Д.212.117.01 при ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева» по адресу: 430000, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарёва»

Автореферат диссертации опубликован на официальном сайте Мордовского государственного университета www.mrsu.ru; E-mail: dsovet@mrsu.ru

Автореферат разослан 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного сове доктор биологических наук, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Одной из актуальных проблем в нейрохирургии является восстановление периферического нерва после различных повреждений. Для поиска новых эффективных подходов в пластике периферических нервов необходимы сведения о механизмах контроля выживания нейронов. Проведены многочисленные исследования по изучению эффектов травмы периферического нерва на нейроны спинальных ганглиев (Shmalbruch H. et al., 1984; Melville S. et al., 1989; Groves M. et al., 1997; Hart A.M. et al., 2008). При этом роль клеток-сателлитов этих ганглиев в посттравматических процессах практически не изучена. Клетки-сателлиты окружают перикарионы чувствительных нейронов и по цитогенезу и фенотипическим признакам рассматриваются как аналоги шванновских клеток (Stewart H. et al., 1995; Челы-шев Ю.А. и др., 2000). Клетки-сателлиты поддерживают выживание и дифференцированное состояние чувствительных нейронов (Рагинов И.С. и др., 2000; Pannese Е. et al., 2003), но лежащие в основе этих процессов механизмы изучены недостаточно. Состояние клеток-сателлитов, в свою очередь, контролируется чувствительными нейронами. В ответ на повреждающий сигнал в нейронах возрастает экспрессия ряда нейротрофических факторов (Shi T. et al., 1998; XianC. et al., 1999), a клетки-сателлиты начинают пролиферировать (Vega J. et al., 1989; Ramer M. et al., 2000). Данные о механизмах функционирования системы «нейрон — клетка-сателлит» в условиях посправматической регенерации немногочисленны. Нейроны спинального ганглия различаются по фенотипическим свойствам, функциональным характеристикам и цитогенезу (LawsonS. et al., 1992; PetruskaJ. et al., 2000). По морфофункцио-нальным критериям различают- три основные популяции нейронов: малые, средние и большие. При травме периферического отростка нейроны, принадлежащие различным популяциям, выживают в разной степени (Ramer M. et al., 2000; Tandrup T. et al., 2000). Это даёт основание полагать, что введение клеток-сателлитов чувствительных нейронов различной спецификации в ответ на нейротравму также будет различаться. Объём популяции гибнущих нейронов зависит or характера травмы нерва и различается при передавливании, перерезке и лигировании (Swett J. et al., 1995; Рагинов U.C. и др., 2001). После передавливания нерва большинство нейронов спинальных ганглиев крысы выживает (Swett J. et al., 1995). После перерезки седалищного нерва в спинальных ганглиях по данным разных авторов гибнет 9-37% нейронов (Shmalbruch H., 1984; Arvidsson J. et al., 1986). Цитирование седалищного нерва вызывает гибель 50% нейронов (Tandrup T. et al., 2000). От степени выживания нейронов зависит успех дальнейшей регенерации нерва и восстановление утраченных функций. Реакции клеток-сателлитов, окружающих чувствительные нейроны конкретных фенотипов, при различных видах повреждений периферического нерва в литературе практически не освещены. В связи с этим представляется актуальным получение новых данных о структуре и количестве клеток-сателлитов чувствительных нейронов конкретных популяций в условиях различных видов травмы периферического нерва. Понимание сути структурно-функциональных перестроек в системе «нейрон — клетка-сателлит», происходящих после травмы, поможет оценить роль клеток-сателлитов в процессе нейрорегенерации. Сведения о взаимоотношениях в системе «нейрон — клетка-сателлит» при различных методах стимулирования регенерации седалищного нерва могут быть использованы в качестве критерия для выбора оптимальной тканеинже-нерной конструкции при формировании кондуита нерва. Для повышения эффективности регенерации периферического нерва разрабатываются кондуиты с использованием новых биосовместимых материалов, клеточных технологий, противоапоптозных

молекул, нейротрофических факторов и фармакологических стимуляторов. Одним из наиболее мощных источников нейротрофических факторов является эмбриональная нервная ткань (Murakami Т. et al., 2003). Имплантация в разрыв седалищного нерва кондуита, содержащего эмбриональный спинной мозг крысы на стадии Е14, сдерживает посттравматическую гибель чувствительных нейронов реципиента и стимулирует регенерацию нервных волокон (Raginov I.S. et al., 2007). Кроме биологических тканей, в качестве содержимого кондуитов используют синтетические биоматериалы. Вопрос о том, что эффективнее для роста аксонов и выживания нейронов, природные биоматериалы или синтетические биосовместимые материалы, активно дискутируется. Однако, как подобное стимулирование регенерации нерва проявляется на уровне клеток-сателлитов, остаётся неизученным. Данные о количестве и реакциях клеток-сателлитов, их взаимоотношениях с чувствительными нейронами спинального ганглия в условиях стимулирования посправматической регенерации, помогут- глубже понять механизмы функционирования этих клеток и их вклад в процесс регенерации. Научная новизна. Впервые показаны различия в посгтравматическом изменении структуры и количества клеток-сателлитов при передавливании, перерезке и дотировании нерва. Установлено, что степень увеличения количества клеток-сателлитов, соответствующих нейронам различных популяций, связана с выраженностью посттравматической гибели этих нейронов. Для более чувствительных к травме малых нейронов установлено максимальное увеличение численности клеток-сателлитов. Впервые на модели формирования кондуита нерва с эмбриональным сшпшым мозгом и биосовместимым гелем на основе карбоксиметилцеллюзы получены структурные и количественные характеристики поведения клеток-сателлитов. Установлено, что более выраженное увеличение количества клеток-сателлитов на ранних сроках после травмы обеспечивает наибольший уровень выживания чувствительных нейронов. Впервые охарактеризованы морфологические перестройки в клетках-сателлитах и усиление взаимодействий между ними и нейронами в условиях регенерации нерва при различных видах травмы, а также при формировании кондуита нерва. Научно-практическая значимость. Полученные результаты значимы для понимания механизмов функционирования системы «нейрон — клетка-сателлит» при травме периферического нерва. Количество и реакция клеток-сателлитов является надёжным критерием для выбора оптиматьной тканеинженерной конструкции для устранения дефекта нерва и стимулирования его регенерации. Полученные в работе данные о реакциях клеток-сателлитов в условиях де- и регенерации чувствительных нервных волокон могут быть учтены в разработке новых методов нервной пластики для повышения эффективности регенерации периферического нерва.

Цель и задачи исследования. Цель работы — изучение реакции клеток-сателлитов и их взаимоотношений с чувствительными нейронами спинального ганглия в ходе посттравматической регенерации периферического нерва крысы. В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

1. Провести сравнительный анализ количества и структуры клеток-сателлитов больших, средних и малых нейронов спинального ганглия L5 крысы в условиях передавливания, перерезки и лигирования седалищного нерва.

2. Оцепить количество и структуру клеток-сателлитов спинального ганглия крысы в условиях преодоления диастаза нерва при помощи тубуляции с эмбриональным спинным мозгом.

3. Исследовать структурные особенности и количество клеток-сателлитов в условиях реконструкции тканевого матрикса в потенциальном пространстве роста

регенерирующих нервных волокон с номощыо тубуляции с биосовместимым материалом карбоксиметилцеллюлозой. Положения, выносимые на защиту

1. Изменения в количестве и структуре клеток-сателлитов спинального ганглия Ь5 различаются для популяций больших, средних и малых чувствительных нейронов при псредавливании, перерезке и лигировании седалищного нерва и служат надёжным критерием для оценки эффективности его регенерации.

2. Реконструкция тканевого матрикса в потенциальном пространстве роста афферентных нервных волокон и нейротрофическое стимулирование их регенерации влияет на структуру и количество клеток-сателлитов, и их коммуникации с нейронами.

Апробация работы. Материалы работы доложены на международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых учёных «Ломоносов» (Москва, 2005); II межрегиональной межвузовской научной конференции молодых учёных и студентов «Актуальные вопросы биологии и медицины» (Ижевск, 2005); II международном междисциплинарном конгрессе «Нейронаука для медицины и психологии» (Судак, 2006); 10-й Путинской школе-конференции молодых учёных «Биология — наука XXI века» (Пущино, 2006); Всероссийской научной конференции «Нейробиологические аспекты морфогенеза и регенерации» (Оренбург, 2008). Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, из них 2 статьи в журналах рекомендованных ВАК.

Структура и объём диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 193 источника. Работа изложена на 130 страницах машинописного текста, иллюстрирована 44 рисунками и 10 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕРАБОТЫ Материалы и методы

Эксперименты проведены на 140 крысах-самцах массой 150-200 г. Для получения эмбрионального материала использовано 5 самок. Содержание и использование лабораторных животных и работа с эмбриональным материалом проведены в соответствии с правилами, установленными в Казанском государственном медицинском университете и одобренными комитетом по этическим вопросам при министерстве здравоохранения Республики Татарстан (протокол №2 от 13.03.2007). Операции на седалищном нерве осуществляли под уретановым наркозом (600 мг/кг, внутрибрю-шинно) в асептических условиях. Контролем служили интактные животные того же возраста (14 крыс).

В ходе операций на седалищном нерве у опытных животных рассекали кожу и мышцы на уровне середины бедра, освобождали левый седалищный нерв для дальнейших манипуляций. Передавливанис нерва проводили при помощи микрохирургического кровоостанавливающего зажима типа "москит" длительностью 30 секунд по стандартной методике (Ое Коптя Р. е! а1., 1986; Эе Angelis С. а а!., 1994). Длина передавленного фрагмента нерва составляла 2 мм. При перерезке животным рассекали нерв с последующим сшиванием проксимального и дистального участков «конец в конец» при помощи четырех эпиневральных швов мононитью 8,0 с атравматической иглой (Целита, Россия).

Таблица 1. Экспериментальные группы животных.

№ Количество животных на указанных сроках после операции

7 суток 30 суток 90 суток

1 Передавливание седалищного нерва - 14 14

2 Перерезка седалищного нерва - 14 14

3 Лигирование седалищного нерва 14 14 14

4 Тубуляция с эмбриональной нервной тканью 7 7 -

5 Тубуляция с карбоксиметилцеллюлозой 7 7 -

Цитирование нерва проводили мононитью 5,0 с последующим иссечением проксимального отрезка длиной 5 мм. При тубуляции нерва иссекали фрагмент нерва, формируя диастаз длиной 5 мм. Центральный и периферические концы нерва соединяли силиконовой трубкой (НИИРП, Россия) длиной 7 мм и внутренним диаметром 2,2 мм. Трубку на каждом конце фиксировали при помощи четырех эпиневральных швов к периферическому и центральному отрезкам нерва. Предварительно в трубку вводили депонирующую среду — 8% водный раствор Na-карбоксиметилцеллюлозы (Pierre Fabre, Франция). Имплантацию в нерв кондуита с эмбриональным спинным мозгом проводили под уретановым наркозом (600 мг/кг, в/б). У самок с датированной 14 дневной беременностью, выделяли эмбрионы, которые помещали в оксигенированный раствор Рингера-Кребса (95% 02 + 5% С02), охлажденный до 4°С. У эмбриона выделяли фрагмент спинного мозга на грудинно-поясничном уровне. Формировали диастаз нерва путём иссечения фрагмента длиной 5 мм. Эмбриональный спинной мозг помещали в силиконовую трубку, дистальный конец которой закрывали гслевой массой на основе 8% карбоксиметшщеллюлозы. Проксимальный конец трубки подшивали к центральному отрезку седалищного нерва, обеспечивая плотный контакт между эмбриональным материалом и центральным отрезком нерва. Показатели в группах с тубуляцией нерва сопоставляли с соответствующими показателями в группах с его лигированием на тех же сроках.

Забор материала проводили у животных на сроках 7, 30 и 90 суток. Под уретановым наркозом (600 мг/кг, впутрибрюшинпо) выделяли спинальный ганглий L5 па стороне операции, фиксировали в 2,5% глютаровом альдегиде или 3,7% парафор-мальдегиде. В экспериментах с тубуляцией забирали содержимое кондуита и также фиксировали в 2,5% глютаровом альдегиде. Для электронномикроскопических исследований фиксированный в 2,5% глютаральдегиде материал дофиксировали в 2% че-тырехокиси осмия, дегидратировали в спиртах, ацетоне, оксипропилене и заключали в эпон (Sigma). Полутонкие и ультратонкие срезы получали на ультрамикротоме LKB. Ультратонкие срезы контрастировали водным раствором уранилацетата, цитратом свинца и исследовали с помощью трансмиссионного электронного микроскопа Jeol 1200SX. Материал, фиксированный в 4% параформальдегиде, дегидратировали в спиртах, хлороформе и заливали в парафин. Для конфокальной микроскопии срезы толщиной 7 мкм депарафинировали. Ядра клеток окрашивали специфическим красителем ДНК - 4',6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI). Для визуализации ядрышек и тел нейронов применяли пропидиум йодид. Мембраны клеток визуализировали с помощью 2-(4-диэтиламиностерил)-М-метилперидиниум йодида (4-Di-2-ASP). Изображения получали с помощью лазерного конфокального сканирующего микроскопа LS M 510 МЕТА (Carl Zeiss, Германия).

Количество клеток-сателлитов больших, средних и малых нейронов оценивали на полутонких срезах толщиной 2 мкм. В каждом десятом срезе подсчитывали коли-

чество клеток-сателлитов вокруг больших (>50 мкм), средних (32-50 мкм) и малых (12-32 мкм) нейронов с видимым ядрышком (Lawson S. et al., 1992). Количество нейронов каждой популяции в ганглии оценивали на парафиновых срезах. Для этого срезы депарафинировали, подвергали регидратации и окрашивали метиленовым синим. На каждом 5-м срезе толщиной 7 мкм подсчитывали нейроны с видимым ядрышком (Lawson S. et al., 1992). Диаметр нейронов оценивали с помощью встроенной окулярной сетки с использованием микроскопа Jenamed (Германия). Площади клеток-сателлитов и нейронов оценивали на полутонких срезах с использованием программы AxioVision (Carl Zeiss, Германия). Результаты подсчётов подвергали статистической обработке с использованием критерия ANOVA.

Результаты и их обсуждение

Структура клеток-сателлитов и их взаимоотношения с нейронами в спи-нальном ганглии L5 крысы. В интактных ганглиях клетки-сателлиты окружают пе-рикарионы нейронов всех популяций, образуя узкую однослойную оболочку, состоящую из тел клеток и их отростков (Рис. 1А). Часть поверхности интактных нейронов может оставаться «открытой» и находиться в контакте с поверхностью другого нейрона. Клетки-сателлиты одного нейрона в интактном ганглии не вступают в контакт с клетками-сателлитами соседних нейронов. Структура клеток-сателлитов, а также характер их взаимодействия с нейронами после передавливания седалищного нерва незначительно отличаются от соответствующих показателей у интактных животных. Клетки-сателлиты вокруг нейронов располагаются в 1-2 слоя (Рис. 1Б). Мембраны соприкасающихся клеток-сателлитов и нейронов образуют небольшие инвагинации. В месте инвагинации мембран обнаруживаются структуры, по морфологическим признакам напоминающие контакты, подобные щелевым, Морфофункциональная характеристика клеток позволяет заключить, что некоторые нейроны и клетки-сателлиты находятся в состоянии повышенной активности. После перерезки нерва на 30-е и 90-е сутки клетки-сателлиты преимущественно больших и средних нейронов начинают располагаться в 2-3 слоя (Рис. 1В). При этом отростки клеток-сателлитов ветвятся и направляются к клеткам-сателлитам соседних нейронов. Состояние органелл в цитоплазме клеток-сателлитов указывает на активацию синтеза белка.

Таким образом, клетки-сателлиты реагируют на передавливание нерва увеличением количества, что не сопровождается значительными морфологическими перестройками. Вероятно, это связано с тем, что при передавливании нерва дегенерация нервных волокон проявляется слабее, чем при перерезке и лигировании, нейроны выживают и быстро восстанавливают свои функции (SwettJ., 1995; РагиновИ.С., 2000). В условиях перерезки нерва в месте контакта нейрона с клеткой-сателлитом образуются многочисленные глубокие инвагинации плазматических мембран соседних клеток, в области которых имеются контакты, подобные щелевым, и определяются мелкие электронопрозрачные везикулы.

По-видимому, эти инвагинации, образуются для увеличения площади контакта между нейроном и прилежащими клетками-сателлитами. Таким образом, перерезка седалищного нерва приводит к более значимым перестройкам в системе «нейрон — клетка-сателлит», коммуникации между клетками-сателлитами и нейронами более выражены, чем при передавливании нерва. У части нейронов на 90 сутки после перерезки нерва выявлены признаки дегенерации.

Рис. 1. Клетки спинального ганглия Ь5: А — в норме клетки-сателлиты (0АР1) располагаются в один слой (обведено овалом) вокруг чувствительных нейронов; Б — к 90-м суткам после передавли-вания нерва клетки-сателлиты образуют оболочку вокруг перикариона нейрона, состоящую из 1-2 слоев; В — в условиях перерезки седалищного нерва к 30 суткам нейроны окружены оболочкой из 2-3 слове многочисленных клеток-сателлитов. Стрелка — ядро клетки-сателлита, Н — нейрон. Масштаб: А — 60 мкм, Б—20мкм, В — 50 мкм.

Клетки-сателлиты таких нейронов образуют тонкий слой, не проявляют признаков гипертрофии, ядра клеток уплощённые, содержат пристеночные скопления ге-терохроматина, митохондрии сильно увеличены в размерах, с просветлённым мат-риксом и единичными кристами. Межклеточные взаимоотношения в системе «нейрон — клетка-сателлит» для выживающих и гибнущих нейронов различаются.

■ М М

'Ж

Иг» Ч >. • _

Рис. 2. Клетки-сателлиты спинального ганглия ¿5 на 90-е сутки после лигирования седалищного нерва. А — сформированная клетками-сателлитами (КС) многослойная оболочка вокруг перикариона нейрона (Н). Масштаб 5 мкм. Б — контакт между нейроном и прилегающей клеткой-сателлитом. Масштаб 0,5 мкм. Стрелки — тонкие отростки клеток-сателлитов; В — клетки-сателлиты образуют несколько слоёв вокруг перикариона нейрона. Стрелки — ядро клеток-сателлитов. Масштаб 50 мкм.

Перерезка седалищного нерва приводит к гибели путём апоптоза части нейронов. По данным разных авторов, популяция гибнущих нейронов на разных сроках после травмы составляет от 9 до 50% (Атёзвоп I. е1 а!., 1986, Рагинов И.С. и др., 2000; ТапёгирТ. й а1., 2000). По аналогии с поведением шванновских клеток, клетки-сателлиты на заключительной стадии дегенерации и апоптоза нейронов фагоцитируют фрагменты их перикарионов и аксонов (ВшсИ \¥. е1 а]., 1992; Ьо А. е1 а!., 1995; Раппеве Е. & а1., 1996; ЯозэИег.!. & а!., 1996).

Лигирование нерва приводит к ещё более выраженному изменению во взаимоотношениях между клетками-сателлитами и нейронами, но сравнению с передавлива-нием и перерезкой. Отростки клеток-сателлитов части больших и средних нейронов образуют множество тонких, плотно прилегающих слоев. Толщина «капсулы», образованной отростками клеток-сателлитов, увеличивается (Рис. 2А, Б). Поверхность соприкосновения клеток-сателлитов и нейронов становится глубоко инваппшрованной, с большим количеством контактов, подобных щелевым, в области которых выявлены секреторные везикулы двух видов: более многочисленные электроннопрозрачные малого диаметра и редкие большого диаметра с тёмной сердцевиной и светлым ободком. Эти особенности структурной организации характерны для клеток-сателлитов тех нейронов, которые находятся в состоянии активности. Структура цитоплазмы этих нейронов свидетельствует об интенсивном синтезе белка, в том числе, по-видимому, некоторых нсйротрофических факторов. Прилежащие к поверхности нейронов клетки-сателлиты имеют меньшую электронную плотность, чем в норме. В цитоплазме этих клеток чётко определяется развитый шероховатый эндоплазматический ретикулюм (ЭПР). Между цистернами ЭПР располагаются свободные рибосомы и иолисомы. Митохондрии имеют овальную, иногда вытянутую форму с развитой системой крист. Встречаются отдельные везикулы с прозрачным содержимым. Все это свидетельствует о реализации процессов активного метаболизма в цитоплазме клеток-сателлитов. Ядро клеток-сателлитов овальное, содержит рибонуклеопротеидные (РНП) гранулы по периферии, кариолемма с расширенными порами, что указывает на активную экспрессию генов. Выявленные нами функциональные перестройки в клетках-сателлитах после лигирования нерва во многом сходны с патологическими изменениями в клетках-сателлитах, которые отмечены Сесе Я. й а1. (1995) при нейронопа-тии, вызванной цисплатином.

Клетки-сателлиты внешних слоев имеют ядра вытянутой, часго неправильной формы, с чёткой кариолеммой и плотным гетерохроматином по периферии и в центральных частях ядра Клетки-сателлиты выживающих нейронов в условиях лигирования могут находиться как в состояниях активации, так и в состоянии покоя.

Выявлены нейроны в стадии поздней дегенерации. Структура и пространственное расположение клеток-сателлитов вокруг таких нейронов отличается от таковых в выживающих нейронах. Клетки-сателлиты окружают перикарион дегенерирующего нейрона многочисленными сильно разветвлёнными отростками.

Количество клсток-сателлнтов спиналышго ганглия 1,5 в условиях передавли-вания, перерезки и лигирования седалищного нерва.

На 30-е сутки после передавливания нерва количество клеток-сателлитов больших, средних и малых нейронов возрастает соответственно в 2,6 (р<0,05), 2,5 (р<0,05) и 1,1 (р<0,05) раза К 90-м суткам их количество увеличивается соответственно в 1,9 (р<0,05), 2,5 (р<0,05) и 3,3 (р<0,05) раза по сравнению с интакгными животными (Рис. 3).

На 30-е сутки после перерезки нерва количество клеток-сателлитов больших, средних и малых нейронов возрастает соответственно в 1,1 (р<0,05), 1,6 (р<0,05) и 2,1 (р<0,05) раза, а на 90-е сутки их количество увеличивается соответственно в 2,3 (р<0,05), 2,2 (р<0,05) и 2,9 (р<0,05) раза (Рис. 3). Клетки-сателлиты реагируют на перерезку седалищного нерва более выраженным увеличением количества, по сравнению с передавливанием нерва

К 30-м суткам после лигирования нерва количество клеток-сателлитов боль-

ших, средних и малых нейронов возрастает соответственно в 2,3 (р<0,05), 3,3 (р<0,05) и 2,5 (р<0,05) раза. На 90-е сутки их количество увеличивается соответственно н 3,1 (р<0,05), 4,1 (р<0,05) и 4,0 (р<0,05) раза (Рис. 3).

КС

|f jпередавливание

количество КС

I [перерезка [Г ^передавливание ■■■ лигирование

ВВ

Рис. 3. Количество клеток-сателлитов больших (А), средних (Б) и малых (В) нейронов спи-нального ганглия L5 на разных сроках после различных видов травмы седалищного нерва. (*) --р<0,05 при сравнении с интактпыми животными; (**) —р<0,05 при сравнении с соответствующей группой на 30 сутки после травмы. Пунктирная линия — количество клеток-сателлитов у интактных животных.

Таким образом, при всех изученных видах травмы периферического нерва количество клеток-сателлитов всех популяций нейронов спинального ганглия L5 возрастает. По мнению ряда авторов, увеличение количества клеток-сателлитов происходит за счёт пролиферации (Perry V. et al., 1993), причём, пик пролиферативной активности приходится на первую неделю после травмы (Fried R.L., Johnstone М.А., 1967; Lu X., Richardson P.M., 1991). Среди окружающих нейроны клеток пролифери-руют тванновские клетки, моноциты и макрофаги (Smith M.L., Adrian Е.К., 1971). Увеличение количества клеток-сателлитов конкретных типов нейронов, вероятно, может происходить не только путём пролиферации, но и за счёт клеток-сателлитов соседних погибших нейронов. Подобный феномен был описан для центральной нервной системы (Александровская ММ. и др., 1968; Ройтбак А.И., 1993). Авторы показали, что при стрессе клетки глии в нервном центре мигрируют в область перикарио-на нейрона из удалённых мест. Подобное перемещение клеток-сателлитов в спиналь-ных ганглиях в литературе не описано, хотя и представляется весьма вероятным.

Нами показано, что увеличение количества клеток-сателлитов после цередавли-вания, перерезки и лигирования седалищного нерва сопровождается увеличением количества их слоев вокруг отдельных нейронов. Подобное увеличение количества сло-ёв клеток-сателлитов ранее описано после лигирования нерва для больших нейронов со светлым лерикарионом (Shinder V, et al., 1999). Данные о подобных структурных перестройках в ганглиях в условиях других видов травмы в литературе отсутствуют. Одно из основных, установленных нами, морфологических отличий спинальных ганглиев в условиях регенерации седалищного нерва от интактных, заключается в характере коммуникаций между клетками-сателлитами и нейронами. В наших экспериментах травма нерва приводит к увеличению количества и глубины инвагинаций мембраны нейронов, в области которых определяются контакты подобные щелевым, полностью отсутствующие в интактных ганглиях. Подобное усиление коммуникаций после повреждения седалищного нерва описано у мышей (LcddaM. et al., 2009). Авторами с использованием электронной микроскоиии обнаружены щелевые контакты между нейронами и клетками-сателлитами. В ганглиях тройничного нерва крысы в ответ на повреждение установлено усиление коммуникаций между нейронами и клетками-сателлитами через щелевые контакты, что сопровождалось увеличением экспрессии коннексинов Сх26, СхЗб и Сх40 (Garrett F.G., Durham P.L., 2009; Damada-

ram S. et al., 2009). Нами отмечено, что структурные перестройки в спинальных ганглиях сопровождаются изменением цитоархитектоники клеток-сателлитов. Их отростки ветвятся и растут по направлению к клеткам-сателлитам других нейронов. Это наблюдение согласуется с данными о том, что после аксотомии клетки-сателлиты отдельных нейронов формируют щелевые контакты с клетками-сателлитами других нейронов (Hanani N., Pannese Е., 2002). Представляется весьма вероятным что, клетки-сателлиты реагируют на травму нерва как единая глиальная сеть, понятие о которой было сформулировано Raisman G. et al. (1991).

Количество клеток-сателлитов и выживание нейронов конкретных популяций при различных видах травмы нерва. Различия в посттравматическом изменении количества клсток-сателлитов на моделях передавливания, перерезки и лигирования нерва могут быть связаны с разным количеством гибнущих нейронов в конкретных популяциях (Рис. 4). После перерезки и передавливания нерва на всех изученных сроках увеличение количества клеток-сателлитов малых нейронов наиболее выражено. Этот эффект может быть связан с наиболее активной выработкой митогенов для клеток-сателлитов переживающими нейронами данной популяции, таких как TGF-P, TNF-a или CGRP (Miao P. et а!., 2008). Уменьшение количества клеток-сателлитов после лигирования нерва на тех же сроках, по-видимому, прямо связано со значительной гибелью чувствительных нейронов. В спинальном ганглии L5 крысы перс-давливание седалищного нерва не приводит к гибели нейронов ни в одной из иссле-довэдшых нами популяций. Это подтверждает имеющиеся данные литературы о том, что большинство нейронов спинальных ганглиев взрослой крысы выживает после передавливания нерва (Swett J. et al., 1995). Согласно нашим данным, при перерезке нерва количество малых, средних и больших нейронов снижается на 30% (р<0,05), 28% (р<0,05) и 35% (р<0,05), соответственно. Дотирование седатащного нерва вызывает выраженное уменьшение количества больших, средних и малых нейронов соответственно на 40,8 %(р<0,05), 69% (р<0,05) и 67,5% (р<0,05) (Рис. 4). Численность гибнущих нейронов всех исследованных нами популяций зависит от характера травмы нерва и различается при его нередавливании, перерезке и дотировании. В заключительной стадии апоптоза нейроны и их фрагменты фагоцитируются макрофагами, гранулоцитами и клетками-сателлитами (Bursch W., et al. 1992; Lo A. et al., 1995; Pannese E. et al., 1996; Rossiter J. et al., 1996).

Реакция перикариона нейрона и окружающих его клеток-сателлитов на травму аксона зависит от степени сохранности аксонов, возможное™ их прорастания и регенерации, в частности, от возможностей для ретроградного транспорта нейротрофиче-ских факторов, продуцируемых щвшпювекими клетками и другими клетками иннер-вируемой ткани-мишени.

При повреждении аксона активированный в той или иной степени нейрон инициирует изменения в соответствующих клетках-сателлитах (Pannese Е. et al., 1994). Полученные нами данные позволяют констатировать различную степень выживания нейронов конкретных популяций и, соответственно, неодинаковую степень реакции окружающих их клеток-сателлитов. Согласно нашим данным, малые нейроны гибнут в наибольшем количестве при перерезке и дотировании, по сравнению со средними и большими нейронами, что подтверждается данными литературы (Рагинов И.С. и др., 2003). В условиях различных типов травмы перва прирост количества клеток-сателлитов, выживших больших нейронов меньше, чем у средних и малых нейронов.

ДБ В

Рис. 4. Количество выживающих нейронов (Н) различных популяций и окружающих их клеток-сателлитов (КС) в спиналъном ганглии Ь5 крысы к 90-м суткам после передавливания (А), перерезки (Б) и лигирования (В) седалищного нерва. М — малые нейроны, С — средние нейроны, Б — большие нейроны.

Принимая во внимание, что увеличение количества клеток-сателлитов максимально в случае с лигированием нерЬа, когда гибнет наибольшее количество нейронов во всех популяциях, и минимально при передавливании, когда практически все нейроны выживают, можно полагать, что клетки-сателлиты стимулируют нейрорегенерацию, поддерживая посттравматическое выживание чувствительных нейронов. Величина перикарионов нейронов и клеток-сателли гов при травме седалищного нерва. При передавливании и перерезке седалищного нерва площадь перикарионов выживших нейронов и клеток сателлитов на 30 и 90 сутки после травмы достоверно не изменяется. К 30 суткам после лигирования седалищного нерва площадь псрика-риона больших, средних и малых нейронов уменьшается соответственно на 36% (р<0,05), 13% (р<0,05) и 11% (р<0,05), а к 90-м суткам эксперимента, соответственно, на 8% (р<0,05), 6% (р<0,05), и 4% (р<0,05) по сравнению с контролем. При этом на 30 сутки площадь клеток-сателлитов средних и малых нейронов увеличивается на 10% (р<0,05) и 25% (р<0,05), соответственно, и на 90 сутки после операции на 23% (р<0,05) и 19% (р<0,05), соответственно, по сравнению с интактными клетками. Площадь клеток-сателлитов больших нейронов в условиях лигирования к 30-м суткам увеличивается на 7% (р<0,05) и к 90-м уменьшается на 5% (р<0,05). Изменение величины перикарионов нейронов в условиях лигирования ещё раз указывает на наиболее значительные морфологические перестройки при этом виде травмы нерва, которые проявляются у переживающих нейронов при невозможности удлинения отростков. При этом реакция клеток-сателлитов различается для нейронов различных популяций, в том числе и по критерию величины перикариона, что согласуется с данными по количеству клегок-сателлитов нейронов, принадлежащих различным популяциям, полученными в ходе нашей работы.

Реакция клеток-сателлитов в условиях преодоления диастаза седалищного нерва путём тубуляции е эмбриональной нервной тканыо. В условиях тубуляции нерва с эмбриональной нервной тканью на всех изученных сроках клетки-сателлиты располагаются вокруг нейронов в один-два слоя, образуя тонкую оболочку (Рис. 5А). Вблизи перикарионов нейронов отмечено большое количество безмиелиновых и мие-линовых волокон, что может быть связано со стимулирующим влиянием эмбриональной нервной ткани на ветвление центральных и периферических отростков чувствительных нейронов (ЭЫЫег V. е( а1., 1999). Возможно, что безмиелиновые волок-

на в данном случае - это ранняя стадия регенерации миелиновых афферентных волокон. Появление безмиелиновых волокон вокруг нейронов можно объяснить также ветвлением симпатических волокон и образованием корзинчатых структур вокруг пе-рикарионов больших нейронов, что было описано на модели лигирования седалищно-

Рис. 5. Клетки спинального ганглия 15 при тубуляции седалищного нерва с эмбриональным спинным мозгом: А — на 7 сутки клетки-сателлиты располагаются в 1-2 слоя вокруг нейрона. Масштаб 50 мкм. Б — инвагинации плазмолеммы клетки-сателлита и увеличение площади контакта с нейроном на 30 сутки. Масштаб 1 мкм. Н — нейрон, КС — клетка-сателлит, стрелка — контакты, подобные щелевым.

Реакция клеток-сателлитов в условиях преодоления диастаза седалищного нерва путём тубуляции с карбоксиметилцеллюлозой. В условиях тубуляции нерва с карбоксиметилцеллюлозой клетки-сателлиты становятся ещё более гипертрофированными, а цитоплазма большинства из них менее электронноплотной (Рис. 6), чем при тубуляции с эмбриональной нервной тканью. При этом все органеллы клеток-сателлитов чёткие и хорошо идентифицируются. Форма клеток-сателлитов в условиях тубуляции с карбоксиметилцеллюлозой неправильная с изрезанной, сильно инва-гинированной плазмолеммой. Между клетками-сателлитами и безмиелиновыми волокнами в большом количестве присутствуют контакты, подобные щелевым.

Морфофункциональные показатели нейронов к 30-м суткам свидетельствуют о происходящих транскрипционных процессах. В цитоплазме нейронов выявляется большое количество структур цитоскелета и везикул, указывающих на активизацию внутриклеточного транспорта секретируемых молекул. Периферическая зона перика-риона нейронов в некоторых случаях не занята органеллами. Отростки клеток-сателлитов располагаются вокруг нейрона тонким слоем. Коммуникации между нейроном и клеткой-сателлитом в условиях тубуляции с карбоксиметилцеллюлозой осуществляются за счёт контактов, подобных щелевым. В цитоплазме нейрона в области более электронноплотных и утолщённых мембран имеются везикулы двух типов: многочисленные мелкие электроннопрозрачные и редкие крупные с тёмной сердцевиной и светлым ободком.

Таким образом, клетки-сателлиты и нейроны при стимулировании регенерации нерва с помощью тубуляции с карбоксиметилцеллюлозой находятся преимущественно в состоянии активации и уровень коммуникаций между ними чрезвычайно высок. Стимулирование регенерации в этих условиях обеспечивается за счёт создания адек-

ватного матрикса для роста нервных волокон. При этом в отростках нейронов обеспечивается быстрое восстановление аксонного транспорта (Челышев Ю.А., Богов А.А., 2008; Shin R.H., et al. 2009).

Рис. 6. Гипертрофированная клетка-сателлит (.КС) с нейроном (Н) в условиях тубуляции седалищного нерва с карбокси-метипцеллюлозой через 30 суток. Я — ядро. Масштаб 5 мкм.

Количество клеток-сателлитов в условиях преодоления диастаза нерва путём тубуляции с эмбриональным спинным мозгом, карбоксиметилцеллюлозой, а также при лигировании нерва. Во всех экспериментальных группах количество клеток-сателлитов больших, средних и малых нейронов достоверно возрастает по сравнению с интактными животными как на 7-е, так и на 30-е сутки после операции (Рис. 7). На 7-е сутки после тубуляции с эмбриональным материалом количество клеток-сателлитов больших нейронов не отличается от их количества в группе с карбоксиметилцеллюлозой, а количество клеток-сателлитов средних и малых нейронов больше соответственно на 112% (р<0,05) и 134% (р<0,05). В тоже время, разница в общем количестве клеток-сателлитов к 7-м суткам в группах с эмбриональной нервной тканью и карбоксиметилцеллюлозой менее выражена, чем в группах с трансплантацией и лигированием. Это может указывать на важность формирования адекватного тканевого матрикса для роста регенерирующих аксонов. К 30-м суткам количество клеток-сателлитов больших, средних и малых нейронов в группе с эмбриональным материалом снижается, по сравнению с этим показателем на 7-е сутки соответственно на 54%(р<0,05), 137% (р<0,05) и 122% (р<0,05). Можно полагать, что на отдалённых сроках (30 суток) фактор матрикса более значим, чем нейротрофические сигналы с периферии.

В группе животных, которым проводили лигирование нерва, в качестве контроля, когда регенерацию нерва не стимулировали, количество клеток-сателлитов больших, средних и малых нейронов к 7-м суткам возрастало, соответственно, на 38% (р<0,05), 131% (р<0,05) и 188% (р<0,05) и к 30-м суткам , соответственно, на 102% (р<0,05), 225% (р<0,05) и 177% (р<0,05). При этом в отсутствии формирования матрикса для роста волокон, а также влияния эмбриональной ткани, общее количество клеток-сателлитов выше, чем в остальных группах. Таким образом, клеткам-сателлитам принадлежит основная нейропротекторная роль в регенерирующих ганглиях. На 7-е сутки в группе с эмбриональным материалом, общее количество клеток-сателлитов для всех популяций нейронов возрастает в большей мере (на 165% (р<0,05)), чем на 30-е сутки (на 83,5% (р<0,05)) по сравнению с интактными животными. На 7-е сутки при лигировании нерва общее количество клеток-сателлитов меньше, чем при тубуляции с эмбриональной нервной тканью и при формировании

кондуита с карбокеиметилцеллюлозой на 55% (р<0,05) и 28% (р<0,05). соответственно. К 30-м сугкам, наоборот, в группе с дотированием этот показатель наибольший, по сравнению с группами с эмбриональной нервной тканью и карбокеиметилцеллюлозой соответственно па 84,5% (р<0,05) и 44,3% (р<0,05).

| 7 суток 30 суток — -интактные

* * * * * ** **

* ***

*** Ж =

ИЭМ ЫаКМЦ Лигиров.

малые нейроны

Рис. 7. Количество клеток-сателлитов в спинальном ганглии Ь5 при тубуляции седалищного нерва крысы с эмбриональной нервной тканью (ТЭМ), с карбокеиметилцеллюлозой (ЫаКМЦ) и после лигирования нерва (Лигиров.) Пунктирная линия — количество клеток-сателлитов в спинапыюм ганглии ¿5 интактных животных; р<0,05 при сравнении с показателем в группе на 30 сутки (*), с карбокеиметилцеллюлозой (**), и лигированием нерва (***).

Различия в увеличении количества клеток-сателлитов при изученных видах стимулирования регенерации нерва соответствует различной выживаемости нейронов в этих условиях. Посттравматическое выживание нейронов после имплантации эмбрионального материала в нерв возрастает существенно больше, чем при тубуляции с карбокеиметилцеллюлозой, и значительно выше, чем при лигировании нерва. К 30-м суткам после тубуляции с эмбриональной нервной тканью количество выживающих больших нейронов увеличивается на 234,1%, средних на 134,2%, а малых не изменяется, по сравнению с группой животных, которым проводили тубуляцию нерва с карбокеиметилцеллюлозой (Мав^оу Я.Б. е! а1., 2009). В тоже время, при лигировании седалищного нерва выживание чувствительных нейронов ниже, чем при тубуляции с карбокеиметилцеллюлозой. Подобный эффект, по-видимому, является результатом действия многочисленных нейротрофических факторов, факторов роста и других

биостимуляторов, уровень синтеза которых в эмбриональной нервной ткани чрезвычайно высок (Farinas I. et al., 1996; Liebl D. et al., 2000). В ряде работ показано, что к 14-м суткам эмбрионального развития (Е14) в спинальных ганглиях уже прошла спецификация нейронов практически всех популяций. К моменту забора трансплантата в наших экспериментах, то есть к 14-м суткам эмбрионального развития, чувствительные нейроны уже продуцируют нейротрофические факторы NGF и GDNF (Molliver D.C. et al., 1997; GillJ.S., Windebank A.J., 1998). В наших экспериментах с эмбриональным спинным мозгом выживание и поддержание дифференцированного состояния клеточных партнеров в системе «нейрон - клетка-сателлит»: может быть связано с влиянием вышеупомянутых нейротрофических факторов.

Состояние тканевого матрикса в пространстве роста аксонов в условиях тубуляции нерва. При исследовании к 7-м суткам содержимого трубки в условиях ту-буляции с эмбриональной нервной тканью на уровне прикрепления трубки к проксимальному отрезку нерва зарегистрирована дегенерация всех клеточных типов. В центральной части трубки среди прорастающих безмиелиновых волокон, фибробластов и шванновских клеток обнаружены осгровки отростчатых клеток, которые контактируют между собой, образуя сеть. В их цитоплазме имеются резко расширенные разветвленные цистерны ЭПР, с более электрониоплотным, чем цитоплазма, содержимым. Выявляются крупные просветлённые митохондрии с немногочисленными кри-стами. Весьма вероятно, что эти клетки являются источником нейротрофических факторов, стимулирующих процесс регенерации. Между нервными волокнами имеются синаптические и щелевые контакты. Согласно данным литературы, трансплантация эмбриональных клеток в нерв приводит к их дифференцировке в нейрогенном направлении (Cuevas et al., 2002). A. Schwabegger и H. Hussl (2001) через 10 недель после аллотрансплантации эмбрионального спинного мозга в периферический нерв половозрелой крысы обнаружили присутствие в трансплантате асгроцитов, способных формировать направляющие пути для роста регенерирующих аксонов. Через 30 суток после аллотрансплантации спинного мозга 14-дневных эмбрионов крысы в седалищный нерв половозрелого животного показана дифференцировка нейронов, формирование синапсов и миелиновых волокон (Чумасов Е.И., 1990). Миелиновые волокна в центральной части трубки к 30-м суткам после операции мы не выявили. Выявленные нами отростчатые клетки в составе островков в трансплантате эмбриональной нервной ткани потенциально способны дифференцироваться в нейральном направлении и в таком качестве активно и пролонгировано продуцировать нейротрофические и ростовые факторы, поддерживающие выживание нейронов и рост аксонов. На электрон-номикроскопическом уровне выявленные клетки отличаются от всех описанных в литературе для периферического нерва структур и клеток (Ceballos D. et al., 1999). В условиях тубуляции нерва без эмбриональной нервной ткани подобные клетки не выявлены. На 7-е сутки после тубуляции нерва с карбоксиметилцеллюлозой в центральной и периферической части трубки наблюдали только процессы дегенерации волокон. В условиях тубуляции нерва с карбоксиметилцеллюлозой к 30-м суткам, во всех областях трубки наблюдали среди безмиелиновых нервных волокон, фибробластов и шванновских клеток разрозненно расположенные тонкие миелиновые волокна. Реконструкция в потенциальном пространстве роста аксонов адекватного тканевого матрикса на основе карбоксиметилцеллюлозы обеспечивает к 30-м суткам после операции рост и миелипизадию регенерирующих нервных волокон.

Выводы

1. Клетки-сателлиты больших, средних и малых нейронов спинального ганглия

Ь5 реагируют на передавливание, перерезку и лигированис седалищного нерва увеличением количества и структурными перестройками.

2. Максимальное увеличение численности популяции клеток-сателлитов отмечено для более чувствительных к травме нерва малых нейронов.

3. Изменения в структуре и количестве клеток-сателлитов чувствительных нейронов зависят от вида травмы периферического нерва. Наиболее выраженные изменения структуры и количества клегок-сателлитов выявлены при лигирова-нии нерва, что связано с более массированной гибелью нейронов.

4. Морфологические изменения нейронов и их клеток-сателлитов свидетельствуют об активных коммуникациях между клетками спиналыюго ганглия в условиях регенерации седалищного нерва.

5. Преодоление разрыва седалищного нерва путём тубуляции с эмбриональной нервной тканью характеризуется выраженным увеличением количесгва клеток-сателлитов на ранних сроках после повреждения нерва и последующим увеличением количества выживающих чувствительных нейронов.

6. При реконструкции тканевого матрикса в пространстве роста регенерирующих аксонов при помощи биосовместимого материала карбоксиметилцеллюлозы усиливаются коммуникационные взаимодействия между клетками-сателлитами и нейронами.

7. Состояние и количество клеток-сателлитов в спинальных ганглиях служит надёжным критерием в оценке эффективности регенерации периферического нерва.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Архипова, С.С. Анализ состояния клеток-сателлитов спиналыюго ганглии крысы в условиях разрешённой и запрещённой регенерации седалищного нерва / С.С. Архипова, И.С. Ратинов // Материалы II Межрегиональной научной конференции молодых учёных и студентов «Актуальные вопросы биологии и медицины». Ижевск 25-28 апреля, 2005, стр. 29-30.

2. Архипова, С.С. Изменение количества клеток-сателлитов вокруг нейронов различных популяций в спинальном ганглии крысы при разрешённой и запрещённой посттравматической регенерации. / С.С. Архипова, И.С. Ратинов // XII Международная научная конференция молодых учёных «Ломоносов»: Тез. докл-М„ 2005, — С. 504.

3. Архипова, С.С. Количественный анализ клеток-сателлитов спиналыюго ганглия Ь5 крысы в условиях разрешённой и запрещённой регенерации. / С.С. Архипова, И.С. Рагинов, Ю.А. Челышев // Материалы II Международного междисциплинарного конгресса «Нейронаука для медицины и психологии» -Судак, Крым, - 2006 - С. 46-47.

4. Архипова, С.С. Анализ количества клеток-сателлитов спиналыюго ганглия Ь5 крысы в условиях разрешённой и запрещённой посттравматической регенерации. / С.С. Архипова, И.С. Рагинов, Ю.А. Челышев // Материалы 10-й Пущин-ской школы-конференции молодых учёных «Биология — наука XXI века» -Пущино - 2006 - С. 59.

5. Архипова, С.С. Клетки-сателлиты чувствительных нейронов в условиях симулирования посттравматической регенерации седалищного нерва крысы. / С.С. Архипова, Г.А. Масгутова, Р.Ф. Масгугов, Ю.А. Челышев // Материалы Всероссийской научной конференции «Нейробиологические аспекты

морфогенеза и регенерации» - Оренбург - 2008 - С. 53.

6. Архипова, С.С. Клетки-сателлиты спинального ганглия крысы после имплантации эмбриональной нервной ткани в разрыв седалищного нерва. / С.С. Архипова, И.С. Рагинов, Г.А. Фомина, Р.Ф. Мастугов, А.И. Маломуж, Ю.А. Челышев // Морфологические ведомости - 2007 - № 3-4 - С. 8-12.

7. Архипова, С.С. Клетки-сатсллиты чувствительных нейронов при различных типах травм седалищного нерва крысы. / С.С. Архипова, И.С. Рагинов, А.Р. Мухитов, Ю.А. Челышев// Морфология - 2009 - т. 135 - №3 - С. 29 - 34.

Сокращения:

КС - клетки-сателлиты Н - нейрон

РНП - рибонуклеопротеид

ТЭМ - тубуляция с эмбриональным материалом

ЭПР - эндоплазматический ретикулум

Я - ядро

NaKMЦ - натрий карбоксиметилцеллюлоза Сх 22 — коннексин 22 Сх 36 - коннексин 36 Сх 40 - коннексин 40

Подписано в печать 03.03. Юг. Форм. бум. 60x80 1/16. Печ. л.1,25.

Тираж 100. Заказ №196. Отпечатано с готового оригинал - макета в ООО «Весгфалика» г. Казань, ул. Б. Красная, 67. Тел.: 236-62-72

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Архипова, Светлана Сергеевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Клетки-сателлиты чувствительных нейронов крысы

1.1.1. Морфология и фенотипическая характеристика клеток-сателлитов и их взаимоотношения с нейронами спинального ганглия

1.1.2. Пластичность клеток-сателлитов спинального ганглия после повреждения нерва

1.1.3. Роль клеток-сателлитов в предотвращении гибели нейронов в ответ на действие повреждающего сигнала

1.2. Фенотипические характеристики и классификация нейронов спинального ганглия крыс

1.3. Влияние различных видов травмы седалищного нерва на выживание нейронов спинального ганглия крысы

1.4. Стимулирование регенерации путём преодоления дефекта нерва при помощи вставки в разрыв нерва различных кондуитов

1.4.1 Биосовместимые и биодеградируемые материалы

1.4.2 Биоструктуры для создания стенки кондуита

1.4.3 Содержимое кондуита нерва как матрикс для роста регенерирующих нервных волокон

1.4.4 Стимуляция постгравматической регенерации нерва путём тубуляции с эмбриональной нервной тканью

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Экспериментальные группы

2.2. Операции на седалищном нерве

2.3. Забор материала

2.4 Гистологические и микроскопические исследования

2.5 Морфометрия и статистическая обработка

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Структура клеток-сателлитов и их взаимоотношение с 50 чувствительными нейронами в интактных спинальных ганглиях

3.2. Клетки-сателлиты нейронов различных популяций в условиях 53 передавливания и перерезки седалищного нерва на 30 и 90 сутки после травмы

3.3. Клетки-сателлиты нейронов различных популяций в условиях 63 лигирования седалищного нерва на 30 и 90 сутки после травмы

3.4 Количество клеток-сателлитов и выживание нейронов различных 71 популяций при различных видах травмы нерва

3.5 Площадь перикарионов нейронов и клеток-сателлитов в условиях 73 регенерации нерва в условиях различных типов травмы седалищного нерва

3.6 Реакция клеток-сателлитов в условиях стимулирования 75 регенерации седалищного нерва путем тубуляции с эмбриональной нервной тканью

3.7 Реакция клеток-сателлитов на стимуляцию регенерации нерва, 78 путем тубуляции с карбоксиметилцеллюлозой

3.8 Количество клеток-сателлитов в условиях тубуляции 85 периферического нерва

3.9 Состояние тканевого матрикса в пространстве роста аксонов в 89 условиях тубуляции нерва

4 ОБСУЖДЕНИЕ

4.1 Клетки-сателлиты чувствительных нейронов всех популяций 94 реагируют на травму нерва увеличением количества и структурными перестройками

4.2 Постгравматические изменения в количестве клеток-сателлитов 100 различаются для чувствительных нейронов конкретных популяций и зависят от вида травмы афферентных проводников^ а также, могут быть связаны с различным количеством гибнущих нейронов, принадлежащих конкретным популяциям 43 Морфофункциональное состояние нейронов и клеток-сателлитов

4.4 Реакция клеток-сателлитов на стимулирование регенерации 106 путём реконструкции тканевого матрикса при помощи тубуляции с карбоксиметилцеллюлозой

4.5 Стимуляция регенерации нерва путём тубуляции с 107 эмбриональной нервной тканью

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Клетки-сателлиты спинального ганглия L5 в условиях постравматической регенерации седалищного нерва крысы"

Одной из актуальных проблем в нейрохирургии является восстановление периферического нерва после различных повреждений. Для поиска новых эффективных подходов в пластике периферических нервов необходимы сведения о механизмах контроля выживания нейронов. Проведены многочисленные исследования по изучению эффектов травмы периферического нерва на нейроны спинальных ганглиев (Shmalbruch Н. et al., 1984; Melville S. et al., 1989; Groves M. et al., 1997; Hart A.M. et al., 2008). При этом роль клеток-сателлитов этих ганглиев в посттравматических процессах практически не изучена. Клетки-сателлиты окружают перикарионы чувствительных нейронов и по цитогенезу и фенотипическим признакам рассматриваются как аналоги шванновских клеток (Stewart Н. et al., 1995; Челышев Ю.А. и др., 2000). Клетки-сатсллиты поддерживают выживание и дифференцированное состояние чувствительных нейронов (Рагинов И.С. и др., 2000; Pannese Е. et al., 2003), но лежащие в основе этих процессов механизмы изучены недостаточно. Состояние клеток-сагеллитов, в свою очередь, контролируется чувствительными нейронами. В ответ на повреждающий сигнал в нейронах возрастает экспрессия ряда нейротрофических факторов (Shi Т. et al., 1998; Xian С. et al., 1999), а клетки-сателлиты начинают пролиферировать (Vega J. et al., 1989; RamerM. et al., 2000). Данные о механизмах функционирования системы «нейрон — клетка-сателлит» в условиях посттравматической регенерации немногочисленны. Нейроны спинального ганглия различаются по фенотипическим свойствам, функциональным характеристикам и цитогенезу (Lawson S. et al., 1992; PetruskaJ. et al., 2000). По морфофункциональным критериям различают три основные популяции нейронов: малые, средние и большие. При травме периферического отростка нейроны, принадлежащие различным популяциям, выживают в разной степени (Ramer М. et al., 2000; Tandrup Т. et al., 2000). Это даёт основание полагать, что поведение клеток-сателлитов чувствительных нейронов различной спецификации в ответ на нейротравму также будет различаться. Объём популяции гибнущих нейронов зависит от характера травмы нерва и различается при персдавливании, перерезке и лигировании (Swett J. et al., 1995; Рагинов И.С. и др., 2001). После передавливания нерва большинство нейронов спинальных ганглиев крысы выживает (Swett J. et al., 1995). После перерезки седалищного нерва в спинальных ганглиях по данным разных авторов гибнет 9-37% нейронов (Shmalbruch Н., 1984; Arvidsson J. et al., 1986). Лигирование седалищного нерва вызывает гибель 50% нейронов (Tandrup Т. et al., 2000). От степени выживания нейронов зависит успех дальнейшей регенерации нерва и восстановление утраченных функций. Реакции клеток-сателлитов, окружающих чувствительные нейроны конкретных фенотипов, при различных видах повреждений периферического нерва в литературе практически не освещены. В связи с этим представляется актуальным получение новых данных о структуре и количестве клеток-сателлитов чувствительных нейронов конкретных популяций в условиях различных видов травмы периферического нерва. Понимание сути структурно-функциональных перестроек в системе «нейрон — клетка-сателлит», происходящих после травмы, поможет оценить роль клеток-сателлитов в процессе нейрорегенерации. Сведения о взаимоотношениях в системе «нейрон — клетка-сателлит» при различных методах стимулирования регенерации седалищного нерва могут быть использованы в качестве критерия для выбора оптимальной тканеинженерной конструкции при формировании кондуита нерва. Для повышения эффективности регенерации периферического нерва разрабатываются кондуиты с использованием новых биосовместимых материалов, клеточных технологий, противоапоптозных молекул, нейротрофических факторов и фармакологических стимуляторов. Одним из наиболее мощных источников нейротрофических факторов является эмбриональная нервная ткань (Murakami Т. et al., 2003). Имплантация в разрыв седалищного перва кондуита, содержащего эмбриональный спинной мозг крысы на стадии Е14, сдерживает посттравматическую гибель чувствительных нейронов реципиента и стимулирует регенерацию нервных волокон (RaginovI.S. et al., 2007). Кроме биологических тканей, в качестве содержимого кондуитов используют синтетические биоматериалы. Вопрос о том, что эффективнее для роста аксонов и выживания нейронов, природные биоматериалы или синтетические биосовместимые материалы, активно дискутируется. Однако, как подобное стимулирование регенерации нерва проявляется на уровне клеток-сателлитов, остаётся неизученным. Данные о количестве и реакциях клеток-сателлитов, их взаимоотношениях с чувствительными нейронами спинального ганглия в условиях стимулирования постгравматической регенерации, помогут глубже понять механизмы функционирования этих клеток и их шел ад в процесс регенерации.

Научная новизна.

Впервые показаны различия в постгравматическом изменении структуры и количества клеток-сателлитов при передавливании, перерезке и лигировании нерва. Установлено, что степень увеличения количества клеток-сателлитов, соответствующих нейронам различных популяций, связана с выраженностью постгравматической гибели этих нейронов. Для более чувствительных к травме малых нейронов установлено максимальное увеличение численности клеток-сателлитов. Впервые на модели формирования кондуита нерва с эмбриональным спинным мозгом и биосовместимым гелем на основе карбоксиметилцеллюзы получены структурные и количественные характеристики поведения клеток-сателлитов. Установлено, что более выраженное увеличение количества клеток-сателлитов на ранних сроках после травмы обеспечивает наибольший уровень выживания чувствительных нейронов. Впервые охарактеризованы морфологические перестройки в клетках-сателлитах и усиление взаимодействий между ними и нейронами в условиях регенерации нерва при различных видах травмы, а также при формировании кондуита перва. Научно-практическая значимость.

Полученные результаты значимы для понимания механизмов функционирования системы «нейрон — клетка-сателлит» при травме периферического нерва. Количество и реакция клеток-сателлитов является надёжным критерием для выбора оптимальной тканеинженерпой конструкции для устранения дефекта нерва и стимулирования его регенерации. Полученные в работе данные о реакциях клеток-сателлитов в условиях де- и регенерации чувствительных нервных волокон могут быть учтены в разработке новых методов нервной пластики для повышения эффективности регенерации периферического нерва. Цель и задачи исследования.

Цель работы — изучение реакции клеток-сателлитов и их взаимоотношений с чувствительными нейронами спинального ганглия в ходе постгравматической регенерации периферического нерва крысы.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

2. Оценить количество и структуру клеток-сателлитов спинального ганглия крысы в условиях преодоления диастаза нерва при помощи тубуляции с эмбриональным спинным мозгом.

3. Исследовать структурные особенности и количество клеток-сателлитов в условиях реконструкции тканевого матрикса в потенциальном пространстве роста регенерирующих нервных волокон с помощью тубуляции с биосовместимым материалом карбоксиметилцеллюлозой.

Положения, выносимые на защиту

1. Изменения в количестве и структуре клеток-сателлитов спинального ганглия L5 различаются для популяций больших, средних и малых чувствительных нейронов при передавливании, перерезке и лигировании седалищного нерва и служат надёжным критерием для оценки эффективности его регенерации.

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Архипова, Светлана Сергеевна

выводы

Клетки-сателлиты чувствительных нейронов спинального ганглия L5 реагируют на травму седалищного нерва увеличением количества и структурными перестройками.

Посттравматические изменения в структуре и количестве клеток-сателлитов различаются для чувствительных нейронов конкретных популяций. Максимальное увеличение численности популяции клеток-сателлитов отмечено для более чувствительных к травме нерва малых нейронов.

Изменения в структуре и количестве клеток-сателлитов зависят от вида травмы периферического нерва. Максимально выраженное изменение структуры и увеличение количества клеток-сателлитов обнаружено при лигировании нерва? что сопровождается более массированной гибелью нейронов.

Перестройки структуры нейронов и их клеток-сателлитов свидетельствуют об активных коммуникациях между клетками спинального ганглия в условиях регенерации периферического нерва. Преодоление разрыва седалищного нерва путем тубуляции с эмбриональной нервной тканью характеризуется выраженным увеличением количества клеток-сателлитов на ранних сроках после операции и последующим увеличением выживания чувствительных нейронов.

При реконструкции тканевого матрикса в пространстве роста регенерирующих нервных волокон при помощи биосовместимого материала карбоксиметил целлюлозы уровень коммуникационных взаимодействий клеток-сателлитов с нейронами повышается и увеличивается выживание нейронов.

Состояние и количество клеток-сателлитов в спинальных ганглиях служит надежным критерием в оценке эффективности регенерации периферического нерва.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Архипова, Светлана Сергеевна, Саранск

1. Александровская, М.М. Морфологическая перестройка нейроглии в условиях усиленного функционирования нервных центров. /Александровская М.М., Бразовская Ф.А., Гейнисман Ю.А. и др. // Докл. АН СССР. - 1968. - Т. 180. - вып. 3. - с.719-725.

2. Алиев, М.А. Микрохирургические реконструктивно-восстановительные операции при травматических повреждениях периферических нервов / М.А. Алиев, К.К. Ахметов, В.И. Ченцов, О.В. Горгоц // Вопросы нейрохирургии им. Бурденко 1989. - №6. - с. 15-16.

3. Григорович, К. А. Хирургическое лечение повреждений нервов / К.А. Григорович // Медицина. — 1981. — с. 154-157.

4. Гришин, А.В. Нейрохирургическая практика при различных повреждениях нервного волокна / А.В. Гришин // Вопросы нейрохирургии им. Бурденко. — 1993.-№4.-с. 128-135.

5. Ермолин, И.Л. Структурные основы пластичности спинномозгового узла при его аутопластике в спинной мозг / Ермолин, И.Л. // Нижегородский мед. журналю 2004. — №4. — с. 30-35.

6. Рагинов, И.С. Влияние ксимедона на посттравматическое выживание чувствительных нейронов / Рагинов И.С., Челышев Ю.А. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2000. Т. 129. - №3. — с. 256259.

7. Рагинов И.С. Посттравматическое выживание чувствительных нейронов различных субпопуляций / И.С. Рагинов, Ю.А. Челышев // Морфология. — 2003. Т. 124. - №4. - с. 47-50.

8. Ройтбак, А.И. Глия и ее роль в нервной деятельности. / Ройтбак А.И // СПб.:.Наука.- 1993.-351 с.

9. Челышев, Ю.А. Факторы поддержания регенерации периферических нервов / Челышев Ю.А. // Успехи физиологических наук. 1995. — Т.26. — с.57-77.

10. Челышев, Ю.А. Развитие, фенотипическая характеристика и коммуникации шванновских клеток / Ю.А.Челышев, К.И. Сайткулов // Успехи физиологических наук. 2000. — Т. 31. - с. 54-69.

11. Челышев, Ю.А. Экспериментальное обоснование применения кондуитов нерва. / Ю.А. Челышев, А.А. Богов // Неврологический вестник (журнал им. В.М.Бехтерева) 2008. - Т. 40. - №4. - с. 101-109.

12. Чумасов, Е.И. Имплантация эмбриональных закладок неокортекса и спинного мозга в поврежденный седалищный нерв взрослой крысы / Е.И. Чумасов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1990.-Т. 121. №8.-с. 198-201.

13. Шидловский, Ю.В. Генетика / Шидловский Ю.В., Набирочкина Е.Н. // Наука-2005.-Т. 41.-№7.-с. 884-892.

14. Ярыгин, В.Н. Тканевые клеточные системы основа медицинских клеточных технологий нового поколения: контуры идеологии / Ярыгин В.Н. // Вестник рос. Акад. Мед. Наук. - 2004. - Т. 9. - с. 12-19.

15. Acheson, A. A BDNF autocrine loop in adult sensory neurons prevents cell death. / Acheson A., Conover J., Fandl J., DeChiara T. // Nature. 1995. - Vol. 374.-P. 450-453.

16. Ahmed, Z. Nerve growth factor enhances peripheral nerve regeneration in non-human primates / Z. Ahmed, R.A.Brown, C. Wiberg , G. Terenghi // Plast. Reconstr. Surg. Hand Surg. 1999. - Vol. 33. - P. 393-401.

17. Membrane potential oscillations in dorsal root ganglion neurons: role in normal electrogenesis and neuropathic pain / RJ. Amir, M. Michaelis, M. Devor // Neurosci.- 1999-Vol. 19-№19-P. 8589-8596.

18. Arvidsson, J. A quantitative study of the effects of neonatal capsaicin treatment and of subsequent peripheral nerve transection in the adult rat / Arvidsson J., Ygge J. //Brain Res. 1986. - Vol. 5397 -№1. - P. 130-136.

19. Averill, S. Immunocytochemical localization of trkA receptors in chemically identified subgroups of adult rat sensory neurons / Averill S., McMahon S., Clary D. et al. // Eur. J. Neurosci. -1995. Vol. 7. - P. 1484-1494.

20. Baez, J.C. Embryonic cerebral cortex cells retain CNS phenotypes after transplantation into peripheral nerve / J.C. Baez, S. Gajavelli, C.K. Thomas, R.M. Grumbles, B. Aparicio, D. Byer, P. Tsoulfas // Exp. Neurol. 2004. - Vol. 189.-№2.-P. 422-425.

21. Bakshi, A. Mechanically engineered hydrogel scaffolds for axonal growth and angiogenesis after transplantation in spinal cord injury / A. Bakshi, O.Fisher, T. Dagci, B.T. Himes, I. Fischer, A. Lowman // Neurosurg. Spine 2004. - Vol. 1 -P. 322-329.

22. Bisby, M.A. Dependence of GAP43 (B50, Fl) transport on axonal regeneration in rat dorsal root ganglion neurons / M.A. Bisby // Brain Res. — 1988. — Vol. 16. -№1.-P. 157-161.

23. Brandt, K. The effects of cisplatinum and vincristine on peripheral nerve regeneration. / K. Brandt, G.R. Evans, M. Johnson, A. Giirlek, R. Lohman, A.

24. Nabawi, J. Williams, J. Hodges, C.W. Patrick // Plast. Reconstr. Surg. 1999 -Vol. 104.-P. 464-469.

25. Bradbury, E.J. The expression of P2X3 purinoreceptors in sensoiy neurons: effects of axotomy and glial-derived neurotrophic factor. / E.J. Bradbury, G. Burnstock , S.B. McMahon //Mol Cell Neurosci. 1998. - Vol. 12 - № 4-5 -P. 256-268.

26. Bunting, S. Bioresorbable glass fibres facilitate peripheral nerve regeneration / S. Bunting, L. Di Silvio, S. Deb, S. Hall, J. Hand Surg // J. Hand Surg. 2005. -Vol. 30. - №3. - P. 242-247.

27. Bursch, W. Cell death by apoptosis and its protective role against disease. / W. Bursch, F. Oberhammer, R.Schulte-Hermann // Trends Pharmacol. Sci. — 1992. — Vol. 13.-P. 245-251.

28. Campana, W.M. Identification of PINCH in Schwann cells and DRG neurons: shuttling and signaling after nerve injury / W.M Campana ., R.R. Myers, A. Rearden // Glia. 2003. - Vol. 41 - P. 213-223.

29. Cardenas M. Molecular mechanisms of immunosuppression by cyclosporine, FK506, and rapamycin / M. Cardenas, D. Zhu, J. Heitman // Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 1995. - Vol. 4. - №6. - P. 472-477.

30. Ceballos, D. Morphometric and ultrastructural changes with ageing in mouse peripheral nerve / D J. Ceballos, E.Cuadras, X.Verdu, Navarro // J. Anat. 1999. -Vol. 195.-P. 563-576.

31. Cece, R. Ultrastructural aspects of DRG satellite cell involvement in experimental cisplatin neuronopathy / R.Cece, M.G. Petruccioli, G. Pizzini , G. Cavaletti , G. Tredici // J Submicrosc Cytol Pathol. 1995. - Vol.27. - № 4. - P. 417-425.

32. Chalfoun, С. T. Tissue engineered nerve constructs: where do we stand? / G. A. Wirth, G. R. D. Evans // J. Cell. Mol. Med. 2006 - Vol. 10 - № 2 - P. 309-317.

33. Chen, С. A P2X purinoceptor expressed by a subset of sensory neurons /Chen C., Akopian A., Sivilotti L., Colquhoun D., Burnstock G., Wood J. // Nature. 1995. -Vol. 377.-P. 428-431.

34. Chen, Z.Y. Glial cell line-derived neurotrophic factor enhances axonal regeneration following sciatic nerve transection in adult rats / Y.F.Chai, L.Cao, C.L. Lu, C.He // Brain Res. 2001. - Vol. 1. - №902. - P. 272-276.

35. Chen, H.H. The use of collagen polymer tube and fibrin clot in peripheral nerve repair / H.H. Chen, H.M. Liu // Proc. Natl. Sci. Counc. Repub. China B. 1994. -Vol. 18.-P. 58-63.

36. Cherkas, P.S. The effects of axotomy on neurons and satellite glial cells in mouse trigeminal ganglion / P.S. Cherkas, T.Y. Huang , T. Pannicke, M. Tal , A. Reichenbach, M. Hanani // Pain. 2004. - Vol. 110. - №1-2. - P. 290-298.

37. Chessell, I.P. Disruption of the P2X7 purinoceptor gene abolishes chronic inflammatory and neuropathic pain / I.P. Chessell., J.P. Hatcher, C. Bountra, A.D. Michel // Pain. 2005. - Vol. 114. - №3. - P. 386-396.

38. Chiang, H. Reinnervation of muscular targets by nerve regeneration through guidance conduits / Hou-Yu Chiang, H. Chien, H. Shen, J. Yang, Y. Chen, J. Chen, S. Hsieh // J. Neuropathol Exp Neurol. 2005. - Vol. 64. - P. 576-587.

39. Choi, B.H. Autologous fibrin glue in peripheral nerve regeneration in vivo / B.H. Choi, S.G. Han, S.II. Kim, S.J Zhu, J.Y. Huh, J.H. Jung, S.H. Lee, Kim B.Y.// Microsurgery. 2005. - Vol. 25. - P. 495-499.

40. Chopra B. Cyclooxygenase-1 is a marker for a subpopulation of putative nociceptive neurons in rat dorsal root ganglia / B. Chopra, S. Giblett, J. Little // Eur. J. Neurosci. 2000. - Vol. 12. - P. 3911-3920.

41. Clavijo-Alvarez, J.A. Comparison of biodegradable conduits within aged rat sciatic nerve defects / J.A. Clavijo-Alvarez, V.T.Nguyen, L.Y. Santiago, J.S. Doctor , W.P. Lee , K.G. Marra // Plast. Reconstr. Surg. 2007. - Vol. 119. - P. 1839-1851.

42. Colomar, A. The immune status of Schwann cells: what is the role of the P2X7 receptor? / Colomar A, Marty V., Combe C., Medina C., Pamet P.J. // Soc Biol. -2003.-Vol. 197.-№2.-P. 113-122.

43. Corsetti, G. Ultrastractural study of the alterations in spinal ganglion cells of rats chronically fed on ethanol / Corsetti G., Rezzani R., Rodella L., Bianchi R. // Ultrastruct. Pathol. 1998. - Vol. 22. - №4. -P. 309-319

44. Cuevas, P. Peripheral nerve regeneration by bone marrow stromal cells /Р. Cuevas, F. Carceller, M. Dujovny, I. Garcia-Gomerz, B. Cuevas, R. Gonzar-lez-Corrochano, D. Gonzarlez, D. Reimers // NeurolRes. — 2002. — Vol. 24. — P. 634-638.

45. Dahlin, L.B., Tissue response to silicone tubes used to repair human median and ulnar nerves / L.B. Dahlin, L. Anagnostaki, G. Lundborg // Scand. J. Plast. Reconstr. Surg. Hand Surg. 2001. - Vol. 35.-P. 29-34.

46. Damodaram, S Tonabersat inhibits trigeminal ganglion neuronal-satellite glial cell signaling / S. Damodaram, S. Thalakoti, S.E. Freeman, F.G. Garrett, P.L. // Headache. 2009. - Vol. 49. - №1. - P. 5-20.

47. Dezawa, M. Sciatic nerve regeneration in rats induced by transplantation of in vitro differentiated bone-marrow stromal cells / M. Dezawa, I. Takahashi, M. Esaki, M. Takano, H. Sawada // Eur. J. Neurosci 2001. - Vol. 14. - P. 17711776.

48. Dublin, P. Satellite glial cells in sensory ganglia: their possible contribution to inflammatory pain / Dublin P., Hanani M. // Brain Behav. Immun. 2007. - Vol. 21.-№5.-P. 592-598.

49. Ekstrom, P. Neurones and glial cells of the mouse sciatic nerve undergo apoptosis after injury in vivo and in vitro / P.Ekstrom // Neuroreport. 1995. — Vol. 9.-P. 1029-1032.

50. English, A.W. Enhancing axon regeneration in peripheral nerves also increases functionally inappropriate reinnervation of targets / A.W. English // Сотр. Neurol. 2005 - Vol. 3. - P. 427-441.

51. Farinas I. Severe sensory and sympathetic deficits in mice lacking neurotrophin-3 /1. Farinas et al. // Nature. 1994. - Vol. 369. - P. 658-661.

52. Friede, R.L. Responses of thymidine labeling of nuclei in gray matter and nerve following sciatic transection / R.L.Friede, M.A. Johnstone // Acta Neuropathol -1967.-Vol. 7.-P. 218-231.

53. Garrett ,F.G. Differential expression of connexins in trigeminal ganglion neurons and satellite glial cells in response to chronic or acute joint inflammation / F.G. Garrett, P.L. Durham . // Neuron Glia-Biol. 2009. - Vol. 13. - P. 1-12.

54. Gill, J.S. Paracrine production of nerve growth factor during rat dorsal root ganglion development / J.S. Gill, A.J. Windebank // Neurosci Lett. 1998. -Vol. 251.-№3.-P. 149-152.

55. Goldberg, J. The relationship between neuronal survival and regeneration / J.Goldberg, B.Barres // Annu. Rev. Neurosci. 2000. - Vol. 23. - P. 579-612.

56. Gosk, J. The use of the fibrin glue in the peripheral nerves reconstructions / J. Gosk, M. Knakiewicz, R.Wiacek, P. Reichert // Polim. Med. 2006. - Vol. 36. -P. 11-15.

57. Groves, M. Axotomy-induced apoptosis in adult rat primary sensory neurons / M. Groves, T. Christopherson, B. Giometto, F. Scaravilli // J. Neurocytol. 1997. -Vol. 26.-P. 615-624.

58. Grumbles, R.M. Neurotrophic factors improve motoneuron survival and function of muscle reinnervated by embryonic neurons / R.M. Grumbles, S. Sesodia , P.M. Wood , C.K. Thomas // J Neuropathol Exp Neurol. 2009. - Vol. 68. - №7. - P. 736-746

59. Hammarberg, H. GDNF mRNA in Schwann cells and DRG satellite cells after chronic sciatic nerve injury / Hammarberg H., Piehl F., Cullheim S., Fjell J., Hokfelt Т., Fried K. // Neuroreport. 1996. - Vol. 7. - P. 857-860.

60. Hanani, M. Glial cell plasticity in sensory ganglia induced by nerve damage / M. Hanani ., T.Y. Huang , P.S. Cherkas , M. Ledda , E. Pannese // Neuroscience. -2002. Vol. 114. - №2. - P. 279-283.

61. Hanani, M. Satellite glial cells in sensory ganglia: from form to function / M. Hanani // Brain Res. Rev. 2005. - Vol. 48. - №3. - P. 457-476.

62. Haro, J.Immunohistochemical study of sensory nerve formations in human glabrous skin / J. Haro, J.Vega, M. Del Valle, B. Calzada, D. Zaccheo, L. Malinovsky // European J. Morphology. 1991. - Vol. 29. - № 4. - P. 271-284.

63. Hart, A.M. Terenghi G, Wiberg M. Neuronal death after peripheral nerve injury and experimental strategies for neuroprotection. / A.M. Hart, Terenghi G, Wiberg M.//Neurol Res. 2008. - Vol. 30.-№ 10.-P. 999-1011.

64. He, M.L. Role of nucleotide P2 receptors in calcium signaling and prolactin release in pituitary lactotrophs / He M.L., Gonzalez-lglesias A.E., Stojilkovic S.S. // J Biol Chem. 2003. - Vol. 278. - №47. - P. 46270-46277.

65. Heine, W. Transplanted neural stem cells promote axonal regeneration through chronically denervated peripheral nerves / W. Heine, K. Conant., J.W.Griffin // Exp.Neurol. 2004. - Vol. 189. - №2. - P. 231-240.

66. Hide, I. Extracellular ATP triggers tumor necrosis factor-alpha release from rat microglia / I. Hide ,M. Tanalca ,A. Inoue et al. // J Neurochem. 2000. - Vol. 75. -№3. - P. 965-972.

67. Hollins, В. Heterologous expression of a P2x-Purinoceptor in rat chromaffin cells detects vesicular ATP release / Hollins B, Ikeda SR // J Neurophysiol. 1997. -Vol. 78.-P. 3069-3076.

68. Hood, B.Transplantation of autologous Schwann cells for the repair of segmental peripheral nerve defects / B. Hood, H.B. Levene, A.D. Levi // Neurosurg Focus. 2009. - Vol. 26. - №2. - P. 4.

69. Huai-Zhen, R. Localization of P2X and P2Y receptors in Dorsal Root Ganglion of the cat / Huai-Zhen R., Lori В., William C. et al. // J. Histochem. End Citochem.-2005.-Vol. 53.-№10.-P. 1273-1282.

70. Huang, T. Morphological and electrophysiological changes in mouse dorsal root ganglia after partial colonic obstruction / T. Huang, M. Hanani // Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2005. - Vol. 289 - P. 670-678.

71. Huang, T.Y. Aging is associated with an increase in dye coupling and in gap junction number in satellite glial cells of murine dorsal root ganglia / T.Y. Huang, M. Hanani , Ledda M.De. et al. // Neuroscience. 2006. - Vol. 137. -№4.-P. 1185-1192.

72. Ibragimov Sh.L, Ogleznev K.Ya., Khalikov V.A. // In Book: Abstracts 9th European Congress of Neurosurgery. — Moscow. — 1991. — P. 271.

73. Inoue, K. ATP receptors in pain sensation: Involvement of spinal microglia and P2X(4) receptors. / K. Inoue, M. Tsuda, S. Koizumi // Purinergic Signal. 2005. -Vol.1.-№2.-P. 95-100.

74. Inoue, K. ATP receptors in the pain signaling: glial contribution in neuropathic pain. In: Interaction Between Neurons and Glia in Aging and Disease / K. Inoue // Springer Science. 2007. - P. 464-477.

75. Jo, Y.H. Coordinate Release of ATP and GAB A at In Vitro Synapses of Lateral Hypothalamic Neurons / Y.H. Jo, L.W. Role // J Neurosci Vol. 200222.1. Р.4794-4804.

76. Jubran, M. Repair of peripheral nerve transections with fibrin sealant containing neurotrophic factors / M. Jubran, J. Widenfalk // Exp. Neurol. — 2003 Vol. 181. - P. 204-212.

77. Kameda, Y. Immunoelectron microscopic localization of vimentin in sustentacular cells of the carotid body and the adrenal medulla of guinea pigs / Y. Kameda // J. Histochem. Cytochem. 1996. - Vol. 44. - №12.- - P. 1439-1449.

78. Kawasaki, Y. Distinct roles of matrix metalloproteases in the early- and late-phase development of neuropathic pain / Y. Kawasaki , Z.Z. Xu , X. Wang , J.Y. Park , et al. // Nat Med. -'2008. Vol. 14. - №3. - P. 331-336.

79. Kelleher, M. The use of conventional and invaginated autologous vein grafts for nerve repair by means of entubulation / M. Kelleher, R. Al Abri, M. Eleuterio et al. //Br. J. Plast. Surg. 2001. - Vol. 54.-№l.-P. 53-57.

80. Kishi M. Morphometry of dorsal root ganglion in chronic experimental diabetic neuropathy / M. Kishi // Diabetes. 2002. - Vol.51. - P.819-824.

81. Kobayashi, S. Development of unmyelinated fibers in peripheral nerve an immunohistochemical and electronmicroscopic study / S. Kobayashi, K.Suzuki // Brain Dev 1990. - Vol. 12. - №2. - P. 237-246.

82. Langone, F. Peripheral nerve repair using a poly(organo)phosphazene tubular prosthesis /F. Langone, S. Lora, F.Veronese, P. Caliceti, P. Parnigotto, F. Valenti, G. Palma // Biomaterials. 1995. - Vol. 16. - №5. - P. 347-353.

83. Lawson, S. Morphological and biochemical cell types of sensory neurons / S. Lawson // New York, Oxford Univ. Press. 1992. - P. 27-59.

84. Ledda, M. Augmentation in gap junction-mediated cell coupling in dorsal root ganglia following sciatic nerve neuritis in the mouse /Ledda M, Blum E, De Palo S, Hanani M //Neuroscience. 2009. - Vol. 164. -№4. - P. 1538-1545.

85. Lekan, H. Loss of dorsal root ganglion cells concomitant with dorsal root axon sprouting following segmental nerve lesions / H. Lekan, K. Chung, Y. Yoon, J. Chung, R. Coggeshall //Neuroscience. 1997. - Vol. 81. - P. 527-534.

86. Lee, S. Expression of nerve growth factor in the dorsal root ganglion after peripheral nerve injury / S. Lee, H. Shen, G. Taglialatela, J. Chung, K. Chung // Brain. Res. 1998. - Vol. 796. - P. 99-106.

87. Lewis, C. Coexpression of P2X2 and P2X3 receptor subunits can account for ATP-gated currents in sensory neurons / C. Lewis, S. Neidhart, C. Holy, R. North, G. Buell, A. Surprenant // Nature. 1995. - Vol. 377. - P. 432-435.

88. Li C. Distinct ATP-activated currents in different types of neurons dissociated from rat dorsal root ganglion / C. Li et al. // Neurosci. Lett. 1999. - Vol. 263, — №1. — P. 57-60.

89. Liebl D. Loss of brain-derived neurotrophic factor-dependent neural crest-derived sensory neurons in neurotrophin-4 mutant mice / D. Liebl et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - Vol. 97. - P. 2297-2302.

90. Lo, A. Ciliary neurotrophic factor promotes the survival of spinal sensory neurons following axotomy but not during the period of programmed cell death / A. Lo, L. Li, ROppenheim, et al. // Exp. Neurol. 1995. - Vol. 134. - №1. - P. 49-55.

91. Liu, W. The occurrence of nitric oxide synthase-containing axonal baskets surrounding large neurons in rat dorsal root ganglia after sciatic nerve ligation / W. Liu , K. Hirata , M. Kawabuchi // Arch Histol Cytol. 2005. - Vol. 68. - №1. -P. 29-40.

92. Lu, X. Inflammation near the nerve cell body enhances axonal regeneration / X. Lu , P.M. Richardson // J Neurosci. 1991 - Vol. 11 - №4 - P. 972-978.

93. Lu, P. BDNF-expressing marrow stromal cells support extensive axonal growth at sites of spinal cord injury / P. Lu, L.L. Jones, M.H. Tuszynski // Exp. Neurol. — 2005.-Vol. 191.- №2. -P. 344-360.

94. Ma, Q. Vanilloid receptor homologue, VRL1, is expressed by both A- and C-fiber sensory neurons / Q. Ma // Neuroreport. 2001. - Vol. 2. - №17. - P. 36933695.

95. Ueda, Т. Nakamura, К. Endo, Y.Shimizu // Brain Res. 2000. - Vol. 868. -P. 315-328.

96. McKay, II.A. Primary sensory neurons and satellite cells after peripheral axotomy in the adult rat: timecourse of cell death and elimination / H.A. McKay, T. Brannstrom, M. Wiberg et al. // Exp. Brain. Res. 2002. -Vol. 42.-P. 308-318.

97. McMahon S. Expression and coexpression of Trk receptors in subpopulations of adult primary sensory neurons projecting to identified peripheral targets / S. McMahon, et al. // Neuron. 1994.-Vol. 12. - P. 1161-1171.

98. Melville, S. Preservation of transected nerve in an impermeable tube / S. Melville, T. Sherburn, R. Coggeshall // Exp. Neurol. 1989. - Vol. 105. - P. 311315.

99. Miao, P. Axotomy-induced up-regulation of tumor necrosis factor-alpha in the dorsal root ganglia / P. Miao , K. Madec , Y. Gong , H. Shen , D. Eisenstat et al. // Neurol Res. 2008. - Vol. 30. - №6. - P. 623-631.

100. Millesi, H. The interfascicular nerve grafting of the median and ulnar nerves / H. Millesi, G. Meissl, A. Berger// Bone and Joint Surg. 1972. - Vol. 54a. -№4. - P. 727-750.

101. Miyagi, M. Up-regulation of TNFalpha in DRG satellite cells following lumbar facet joint injury in rats / M. Miyagi , S. Ohtori , T. Ishikawa , Y. Aoki // Eur Spine J. 2006. - Vol. 29. - P. 953-958.

102. Molliver, D.C. IB4 binding DRG neurons switch from NGF to GDNF dependence in early postnatal life / D.C. Molliver, D.E. Wright, M.L. Leitner // Neuron 1997.-Vol. 19.-№4.-P. 4849-4861.

103. Morrison, S.J. Prospective identification, isolation by flow cytometry, and in vivo self-renewal of multipotent mammalian neural crest stem cells / S.J. Morrison,

104. P.M. White, С. Zock, D.J. Anderson// Cell. 1999. - Vol. 96. - №5. - P. 737749.

105. Mu X. Neurotrophin receptor genes are expressed in distinct patterns in developing dorsal root ganglia / X. Mu // J. Neurosci. 1993. - Vol. 13. - P. 4029-4041.

106. Murinson, B. C-fiber (Remak) bundles contain both isolectin B4-binding and calcitonin gene-related peptide-positive axons / B. Murinson // J. Сотр. Neurol. 2005. - Vol. 484. - №4. - P. 392-402.

107. Murphy, A. Bcl-2 potentiates the maximal calcium uptake capacity of neural cell mitochondria / A. Murphy, D. Bredesen, G. Cortopassi, E. Wang, G. Fiskum // PNAS of the United States of America. 1996. - Vol. 93. - P. 9893-9898.

108. Murakami, T. Transplanted neuronal progenitor cells in a peripheral nerve gap promote nerve repair / T. Murakami , Y. Fujimoto, Y. Yasunaga. et al. // Brain Research. 2003. - Vol. 974. - P. 17-24.

109. Nakayama, K. Enhancement of peripheral nerve regeneration using bioabsorbable polymer tubes packed with fibrin gel / K. Nakayama, K.Takakuda, Y.Koyama S. Itoh, W. Wang, T. Mukai, N.Shirahama // Artificial Organs. -2007.-Vol. 31.-P. 500-508.

110. Neuberger, T. Transient modulation of Schwann cell antigens after peripheral nerve transection and subsequent regeneration / T. Neuberger, C. Cornbrooks // J. Neurocytol.- 1989.-Vol. 18.-P. 695-710.

111. Nogradi, A. Transplantation of embryonic neurones to replace missing spinal motoneurones / A. Nogradi, A. Szabo // Restor Neurol Neurosci. — 2008. -Vol.26. №2-3. - P. 215-223.

112. Ohtori, S. TNF-alpha and TNF-alpha receptor type 1 upregulation in glia and neurons after peripheral nerve injury: studies in murine DRG and spinal cord / S. Ohtori ., K. Takahashi ., H. Moriya ., R. Myers // Spine. 2004. - Vol. 29. -№10-P. 1082-1088.

113. Pankratov, Y. Quantal release of ATP in mouse cortex / Y. Pankratov, U. Lalo, A. Verkhratsky, R. A. North // Pflugers. 2006. - Vol. 452. - P. 589-597.

114. Pannese, E. Number and structure of perisomatic satellite cells of spinal ganglia under normal conditions orhuring axon regeneration and neuronal hypertrophy / Pannese E. // Z.Zellforsch. 1964. - Vol. 63. - P. 568-592.

115. Pannese, E. The satellite cells of the sensory ganglia / E. Pannese // Adv Anat Embryol Cell Biol. 1981. - Vol. 65.-P. 1-111.

116. Pannese, E. Age-related reduction of the satellite cell sheath around spinal ganglion neurons in the rabbit / E. Pannese, P. Procacci, M. Ledda, V. Conte // J. Neurocytol. 1996. - Vol. 25. - №2. - P. 137-146.

117. Pannese E. Perikaryal surface specializations of neurons in sensory ganglia / E. Pannese // Int Rev Cytol. 2002.- Vol. 220. - P. 1-34.

118. Pannese, E. Ultrastructural localization of NGF receptors in satellite cells of the rat spinal ganglia / E. Pannese, P. Procacci // J Neurocytol. 2002. - Vol. 31.-№8-9.-P. 755-763.

119. Perry, V. Macrophage responses to central and peripheral nerve injury. / V.Perry, M.Brown, P. Andersson // Adv. Neurol. 1993. - Vol. 59. - P. 309-314.

120. McQuarrie, I.G. Retardation in the slow axonal transport of cytoskeletal elements during maturation and aging / I.G. McQuarrie, Brady ST, Lasek RJ // Neurobiol Aging. 1989.-Vol. 10.-№4.-P. 359-365.

121. Pittier, R. Neurite extension and in vitro myelination within three-dimensional modified fibrin matrices / R. Pittier, F. Sauthier, J.A. Hubbell, H. Hall // J. Neurobiol. 2005. - Vol. 63. - P. 1-14.

122. Raginov, I. Embryonic tissues allotransplanted to transected sciatik nerve in the rat. / Raginov I., Fomina G., Masgutov R. et al. // 2nd congress of International society Reconstructive Neurosurgery. — Taivan. — 2007. P. 210.

123. Raisman, G. Glia, neurons, and plasticity / G. Raisman // Ann N Y Acad Sci. — 1991.-Vol.633.-P. 209-213.

124. Ramer, M. Functional regeneration of sensory axons into adult spinal cord / M. Ramer, J. Priestley, S. McMahon // Nature. 2000. - Vol. 403. - P. 312-316.

125. Richardson, P.M. Influence of nerve growth factor on neurofilament gene expression in mature primary sensory neurons / P.M. Richardson, Verge V.M., Tetzlaff W., Bisby M.A. // J Neurosci. 1990. - Vol. 10. - №6. - P. 2018-2025.

126. Rossiter, J. Axotomy-induced apoptotic death of neonatal rat facial motoneurons: time course analysis and relation to NADPH-Diaphorase activity / J. Rossiter, R. Riopelle, M. Bisby // Exp. Neurol. 1996. - Vol. 138. - P. 33-44.

127. Sakai, Y. Prevention and treatment of amputation neuroma by an atelocollagen tube in rat sciatic nerves / Y. Sakai, M. Ochi, Y. Uchio, K. Ryoke, S. Yamamoto // Biomed. Mater. Res. Part B: Appl. Biomater. 2005. - Vol. 73B. - P. 355-360.

128. Scaravilli, F. Macrophages in human sensory ganglia: an immunohistochemical and ultrastructural study / F. Scaravilli, B. Giometto, L. Chimelli, E. Sinclair // J. Neurocytol.- 1991.-Vol. 20.-P. 609-624.

129. Shen, H. Expression of neurotrophin mRNAs in the dorsal root ganglion after spinal nerve injury / H. Shen., J. Chung., K. Chung // Brain. Res. Mol. 1999. -Vol. 64.-P. 186-192.

130. Shi, T. Effect of peripheral nerve injury on cGMP and nitric oxide synthase levels in rat dorsal root ganglia: time course and coexistence / T. Shi., K. Holmberg, Z. Xu., H. Steinbusch, J. de Vente, T. Hokfelt // Pain. 1998. - Vol. 78 - P. 171-180.

131. Shinder, V. Structural basis of sympathetic-sensory coupling in rat and human dorsal root ganglia following peripheral nerve injury. / V. Shinder, C. Govrin-Lippmann, S. Cohen et al. // Journal of Neurocytology. 1999. - Vol. 28. - P. 743-761

132. Silverman J. Selective neuronal glycoconjugate expression in sensory and autonomic ganglia: relation of lectin reactivity to peptide and enzyme markers / J. Silverman, L. Kruger//J. Neurocytol. 1990. - Vol. 19.-P. 789-801.

133. Schmalbruch, H. Motoneuron death after sciatic nerve section in newborn rats. / H. Schmalbruch // J. Сотр. Neurol. 1984. - Vol. 224. - P. 252-258.

134. Schwabegger, A. Fetal spinal-cord allograft as a substitute for peripheral-nerve reconstruction: a preliminary experimental and histologic study / A. Schwabegger, H. Hussl // Reconstr. Microsurg. 2001. - Vol. 17. - №1. -P. 45-50.

135. Smith, M.L. On the presence of mononuclearleucocytes in dorsal root ganglia following transection of the sciatic nerve / M.L. Smith , E.K. Adrian // Anat Ret.- 1971.-Vol. 172.-P. 581-588.

136. Sterne, G.D. Neurotrophin-3 delivered locally via fibronectin mats enhances peripheral nerve regeneration / G.D. Sterne, R.A.Brown, C.J. Green, G.Terenghi // Eur. J. Neurosci. 1997. - Vol. 9. - P. 1388-1396.

137. Suadicani, S.O. P2X7 receptors mediate ATP release and amplification of astrocytic intercellular Ca2+ signaling / S.O. Suadicani , C.F. Brosnan , E. Scemes // J Neurosci. -2006. Vol. 26. - №5. - P. 1378-1385.

138. Sundback, C.A. Biocompatibility analysis of poly(glycerol sebacate) as a nerve guide material / C.A.Sundback, J.Y. Shyu, Y. Wangb, W.C. Faquin, R.S. Langer, J.P. Vacanti, T.A. Hadlock // Biomaterials. 2005. - Vol. 26. - P. 5454-5464.

139. Suzuki, T. Production and release of neuroprotective tumor necrosis factor by P2X7 receptor-activated microglia / T. Suzuki , I. Hide , K. Ido , S. Kohsaka , K. Inoue , Y. Nakata // J Neurosci. 2004. - Vol. 24. - №1. - P. 1-7.

140. Swett J. Most dorsal root ganglion neurons of the adult rat survive nerve crush injury / J. Swett, C. Hong, P. Miller // Somatosens. Motor Res. 1995. - Vol. 12, -№3-4.-P. 177-189.

141. Takeda, M. Contribution of the activation of satellite glia in sensory ganglia topathological pain / M. Takeda, M. Takahashi, S. Matsumoto // Neurosci Biobehav Rev. 2009. - Vol. 3. - №6. - P. 784-792.

142. Taylor, S.J. Delivery of neurotrophin-3 from fibrin enhances neuronal fiber sprouting after spinal cord injury / S.J. Taylor, E.S. Rosenzweig, J.W. McDonald, S.E. Sakiyama-Elbert // Control Release. 2006. - Vol. 113. - P. 226-235.

143. Tandrup T. Delayed loss of small dorsal root ganglion cells after transection of the rat sciatic nerve / T. Tandrup, C. Woolf, R. Coggeshall // J. Сотр. Neurol. -2000. Vol.422. - P. 172-180.

144. Thippeswamy, T. Bax and caspases are inhibited by endogenous nitric oxide in dorsal root ganglion neurons in vitro / T. Thippeswamy., J.S. McKay, R. Morris //Eur. J. Neurosci.-2001. Vol.14. -№8.-P. 1229-1236.

145. Thippeswamy, T. Nitric oxide-NGF mediated PPTA/SP, ADNP, and VIP expression in the peripheral nervous system / T. Thippeswamy , M.R. Howard , A.S. Cosgrave , D.K. Arora, J.S. McKay , J.P. Quinn // J Mol Neurosci. 2007.- Vol. 33. №3. - P. 268-277.

146. Tohill, M. Rat bone marrow mesenchymal stem cells express glial markers and stimulate nerve regeneration / M. Tohill, C. Mantovani, M. Wiberg, G. Terenghi // Neuroscience Letters. 2004. - Vol. 362. - P. 200-203.

147. Vega, J. Expression of cytoskeletal proteins in glial cells of dorsal root ganglia / J. Vega, C. Rodriguez, M. Medina, M. del Valle-Soto, L. Hernandez // Cell Mol. Biol. 1989. - Vol.35. - №6. - P.635-641.

148. Vit, J.P. Satellite glial cells in the trigeminal ganglion as a determinant of orofacial neuropathic pain / J.P. Vit, L. Jasmin, A. Bhargava, P. T. Ohara // Neuron Glia Biol. 2006. - Vol. 2. - № 4. - P. 247-257.

149. Wang, S. A new nerve guide conduit material composed of a biodegradable poly(phosphoester) / A.C. Wan, X. Xu , S. Gao, H.Q. Mao, K.W. Leong, H.Yu // Biomaterials. 2001. -Vol. 22.-P. 1157-1169.

150. Wang, X. P2X7 receptor inhibition improves recovery after spinal cord injury / X. Wang , G. Arcuino , T. Takano , J. Lin , W.G. Peng // Nat Med. 2004. -Vol.10.-№8.-P.821-827.

151. Wang, H. Stem cell and repair of injury in central nervous system / Wang X., Zheng R. // Sheng Wu Yi Xue Gong Cheng Xue Za Zhi. 2006. - Vol.23. -P.1359-1362.

152. Wang, Z. Blockade of hexokinase activity and binding to mitochondria inhibits neurite outgrowth in cultured adult rat sensory neurons / Z. Wang , N.J. Gardiner, P. Femyhough //Neurosci Lett. 2008. - Vol.34. - №1. - P.6-11.

153. Wetmore, C. Neuronal and nonneuronal expression of neurotrophins and their receptors in sensory and sympathetic ganglia suggest new intercellular trophic interactions / C. Wetmore, L. Olson // J. Сотр. Neurol. 1995. - Vol. 27. - P. 143-159.

154. Whitworth I.H., et al. Nerve growth factor enhances nerve regeneration through fibronectin grafts / P. Anand , C.J. Green , G. Terenghi, R.A. Brown, C.J.Dore // Hand Surg. Br. 1996.-Vol. 21.-P. 514-522.

155. Xian, С. Neuronal-glial differential expression of TGF-alpha and its receptor in the dorsal root ganglia in response to sciatic nerve lesion / C. Xian, X. Zhou // Exp. Neurol. 1999. - Vol.157. -P.317-326.

156. Xu, X.Y. Expression of Bax, Bcl-2 and caspase-3 in spared dorsal root ganglion after partial dorsal root rhizotomy / X.Y. Xu , X. Zhou , Т.Н. Wang , L.S. Zhang, X.J. Zhao // Sichuan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 2005. - Vol 36. - №2. -P.180-183.

157. Yoshii, S. Peripheral nerve regeneration along collagen filaments / S. Yoshii, M. Oka//Brain Res.-2001.-Vol. 888.-P. 158-162.

158. Zhang, X.F. Functional expression of P2X7 receptors in non-neuronal cells of rat dorsal root ganglia. / X.F. Zhang, P. Han, C.R. Faltynek // Brain Res. 2005. -Vol.1052.-№l.-P.63-70.

159. Zhang, X. Neuronal somatic ATP release triggers neuron-satellite glial cell communication in dorsal root ganglia / X. Zhang , Y. Chen , C. Wang , L.Y. // Proc Natl Acad Sci USA.- 2007. Vol.104. - №23. - P.9864-9869.

160. Zhou, X. Injured primary sensory neurons switch phenotype for brain-derived neurotrophic factor in the rat / X. Zhou., E. Chie., Y. Deng., J. Zhong et al. //

161. Neuroscience. 1999. - Vol.92. -1

Информация о работе

Архипова, Светлана Сергеевна
кандидата биологических наук
Саранск, 2010
ВАК 03.03.04

Диссертация

Клетки-сателлиты спинального ганглия L5 в условиях постравматической регенерации седалищного нерва крысы - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы