Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Постстрессовая иммунноморфология периферических лимфоидных органов в возрастном аспекте

ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Постстрессовая иммунноморфология периферических лимфоидных органов в возрастном аспекте"



На правах рукописи

Шефер Елизавета Глебовна

ПОСТСТРЕССОВАЯ ПММУНОМОРФОЛОГИЯ ПЕРИФЕРИЧЕСКИХ ЛИМФОИДНЫХ ОРГАНОВ В ВОЗРАСТНОМ

АСПЕКТЕ

03.03.04 клеточная биология, цитология, гистология 14.03.01 анатомия человека

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 8 АВГ 2011

Волгоград - 2011

4852240

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития России (ГОУ ВПО ВолгГМУ Минздравсоцразвития России)

Научные руководители:

- член-корр. РАМН, профессор Кузнецов Сергей Львович;

- доктор медицинских наук, профессор Краюшкин Александр Иванович

Официальные оппоненты:

- доктор медицинских наук, профессор Павлов Алексей Владимирович

- доктор медицинских наук, профессор Коробкеев Александр Анатольевич

Ведущая организация - Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Саратовский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Зашита состоится «__8_»_сентября__2011 г. в_10.00_час. на

заседании Диссертационного совета Д 208.008.01 при ГОУ ВПО «Волгоградском государственном медицинском университете» Минздравсоцразвигия РФ по адресу: 400131 Волгоград, гш. Павших борцов, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Волгоградского государственного медицинского университета (400131 Волгоград, пл. Павших борцов, 1).

2011 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета,

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. В последние годы классическая теория Ганса Селье, рассматривавшего стресс как системную реакцию организма, получила новое развитие в работах современных ученых, обогативших ее представлениями об индивидуальной переносимости стресса, антистрессорных факторах, роли первичных мозговых механизмов в развитии эмоционального стресса [И.Г.Акмаев и др., 2003; С.С.Исрцов и др., 2006, 2009; К.В.Судаков, 2008; C.Kiank е.а., 2009; V.S.Nade е.а., 2010]. Иммобилизационный стресс также относится к эмоциональному стрессу, и переносимость его связана со многими факторами, среди которых особое место занимает возраст [D.L.AUen е.а., 2010; C.T.Collier е.а., 2011; S.Thyaga Rajan е.а., 2011]. Несмотря на множество работ в литературе по данной тематике, ранний постнатальный онтогенез остается наименее изученным периодом жизни по совокупности исследований влияния хронического стресса на иммунную систему[М.Р.Сапии, 2008; М.Ю.Капитокова к др., 2009; I.C.Weaver, 2009|.

Известно, что сложный характер взаимодействия между центральной нервной, эндокринной и иммунной системами обуславливает влияние стрессоров на иммуногенез, оказывающее серьезное негативное воздействие на здоровье человека [М.Р.Сапин, 2007; С.С.Перцов и др., 2011; R.GIaser, 2005; M.E.Kemeny, 2009; A.Sommershof е.а., 2011]. Исследования последних показали, что стресс оказывает на иммунитет неоднозначный эффект: острое воздействие бывает как иммуностимулирующим, так и иммуносуппрессивным; хроническое воздействие чаще всего оказывается иммуносуппрессивным, при этом параметры стрессорного воздействия (сила, продолжительность, избегаемость и др.,) вносят свой вклад в суммарный иммуномодуляционный стресс-эффект [Е.А.Иванова и др., 2009; F.N.Nazar е.а., 2011]. Подавляющее большинство проведенных исследований сосредоточено на оценке немедленных последствий стресса, позволяющей

з

охарактеризовать глубину иммуносупрессии в первые часы или дни после окончания стрессорного воздействия, что вероятно, связано с тем обстоятельством, что стресс-ассоциированные сдвиги в органах иммуногенеза считаются обратимыми, и с течением времени морфология лимфоидной ткани практически полностью восстанавливается [L.Dominguez-Gerpe е.а., 1997; N.M.Curtin е.а., 2009; A.Warner е.а., 2010; A.Y.Han е.а., 2010]. При этом во многих работах не учитывается то обстоятельство, что эффективность иммунного ответа в этот восстановительный период оказывается значительно сниженной, что может иметь критические последствия для любого возраста, когда защитные реакции на действие канцерогенов, инфекционных агентов, аутоантигенов и других болезнетворных иммуномодуляторов существенно ослаблены, однако больше всего - для детского возраста с его высокой чувствительностью к инфекциям, физическим, химическим факторам и прочим интервенциям [О.В.Федорова, 2005; Н.А.Мураева, 2006; V.Sterlemann е.а., 2008; J.Shen е.а., 2009; S.Jacobson-Piek е.а., 2011 ].

Адаптационные изменения, развивающиеся в иммунной системе по окончании стрессорного воздействия, во многом определяются эффективностью взаимодействия между стромальными и паренхиматозными клеточными взаимодействия в лимфоидной ткани [М.Ю.Капитонова и др., 2009; T.Kaneko et al., 2006; A.C.Soloff е.а., 2010], которые влияют на активность, дифференцировку, транспорт, пролиферацию и апоптоз лимфоидных клеток [N.D.Powell е.а., 2009; B.J.Kim е.а., 2010; N.Li е.а., 2010J. Известно, что стресс вызывает деплецию лимфоидных клеток как в центральных, так и в периферических органах иммуногенеза, а также разрушение их стромы, что во многом объясняется нарушением стромально-паренхиматозных взаимоотношений, механизмы которых являются не до конца выясненными, а их динамика на протяжении постстрессового периода различной продолжительности в ходе раннего постнатального онтогенеза до

сих пор не нашла отражения в литературе [А.А.Нестерова, 2007; С.С.Перцов и др., 2011; Ь.Оогш^иег-Сегре, 20071.

В последние годы интерес к периферическим органам иммуногенеза, которые считаются органами-маркерами стресса, значительно поднялся из-за бурного развития трансплантационных технологий и поднимающейся в связи с этим проблемой необходимости преодоления трансплантационного иммунитета. Спленэктомия бывает достаточно эффективным методом предотвращения отторжения трансплантатов, однако четкие критерии к проведению данного вмешательства, основанные на морфо-функциональном состоянии лимфоидных органов, и в первую очередь селезенки как крупнейшего из них, отсутствуют [М.А.Ауа1а-Сата е.а., 2010; [Ы.Сге\у е.а., 2010]. Существует мнение о том, что способность селезенки реагировать на антигенный стресс, в частности дифференцировкой В-лимфоцитов в антиген-продуцирующие клетки и тенденцией накапливать последние, которая доступна оценке морфологическими методами исследования, может быть использована для определения показаний к ее удалению при пересадке органов [В.Кар1ап е.а., 2010]. В этой связи, изучение возрастных аспектов иммуномодуляционных сдвигов в периферических иммунных органах при различных видах стресса могло бы способствовать отбору наиболее информативных критериев для оценки их диапазона и способности поддерживаться.

Все выше изложенное побудило нас предпринять данное исследование, направленное на выяснение глубины и продолжительности персистирования иммуномодуляционных изменений в периферических органах иммуногенеза в возрастном контексте проблемы.

Цель исследования Определить закономерности динамики реадаптационных изменений в периферических органах иммунной защиты неполовозрелых экспериментальных животных на разных сроках после прекращения хронического действия стресса.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1 .Исследовать влияние хронического стресса на гистофизиологию селезенки и лимфатических узлов экспериментальных животных в грудном и инфантном периодах раннего постнатального онтогенеза. 2.Определить особенности постстрессовых изменений в периферических иммунных органах через 1, 7, 14, 30 и 60 дней по окончании стрессорного воздействия

3.Выявить соотношение изменений лимфоидных и стромальных клеток периферических иммунных органов в различные сроки после окончания хронического стрессорного воздействия.

Научная новизна исследования. В данном исследовании впервые показаны особенности реадаптационных изменений в периферических иммунных органах в динамике постстрессового периода у экспериментальных животных разных возрастных групп раннего постнатального онтогенеза.

Теоретическое значение работы заключается в определении механизмов иммуномодуляционных сдвигов в различных компартментах периферических лимфоидных органов в их постстрессовой реадаптационной динамике.

Практическая значимость работы заключается в установлении возрастных особенностей постстрессового периода в периферических органах иммуногенеза для последующего применения этих данных в практической медицине при ведении пациентов, подверженных различным видам стрессорных воздействий.

Внедрение в практику: полученные в ходе данного исследования данные используются в учебном процессе на кафедрах анатомии человека, иммунологии и аллергологии ВолгГМУ и гистологии, эмбриологии, цитологии Ставропольской государственной медицинской академии.

«Фундаментальные и прикладные исследования в медицине», Сочи, сентябрь

2010 г.; научной конференции «Современные проблемы экспериментальной и клинической медицины», Паттайя, февраль 2011 г.; международной научной конференции «Фундаментальные исследования», Доминиканская республика, апрель 2011 г.; заседании Волгоградского отделения Всероссийского научного общества анатомов, гистологов и эмбриологов, май,

2011 г.; на 2-ой Малазийской анатомической конференции, Шах Алам, июнь 2011 г.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Хронология реадаптационных изменений в компартментах селезенки и лимфатических узлов в различные сроки после хронического стресса, перенесенного в раннем постнатальном онтогенезе, определяется возрастным периодом, на которое приходится начало стрессорного воздействия.

2. На разных этапах постстрессового периода стромально-паренхиматозные взаимоотношения в периферических органах иммуногенеза модулируются возрастными закономерностями динамики клеточных популяций в их Т- и В-зонах.

Объем и структура диссертации. Текст диссертации изложен на 121 странице машинописного текста и состоит из введения, части I - обзора литературы, в котором изложены современные взгляды на взаимодействие нейроэндокринной и иммунной систем в постстрессовой адаптации организма в различные физиологические периоды жизни человека и экспериментальных животных, и части II, содержащей главы, описывающие материал и методы исследования, результаты, их обсуждение и выводы. Диссертация снабжена 3 таблицами и 25 рисунками, включая микрофотографии гистологических препаратов. Библиографический указатель содержит 156 источников, в том числе 22 отечественных и 134 -зарубежных авторов.

Содержание работы

Материалы и методы исследования.

Исследование выполнено на 152 крысах-самцах породы Sprague Dawley в исходном возрасте 14 и 30 дней (по классификации Poole, 1970, соответствующем грудному и инфантному периоду соответственно). Экспериментальные животные подвергались хроническому действию пронационного стресса (R.Kvetnansky е.а., 1970) ежедневно в течение 7 дней по одной 5-часовой сессии в день. По окончании стрессорного воздействия животные и забивались под анестезией через 1,7,14,30 и 60 дней после окончания стрессорного воздействия. Таким образом, на момент забоя возраст животных исходного грудного возраста составлял 21, 27, 34, 50 и 80 дней, а животных инфантного возраста - 37, 43, 50, 66 и 96 дней. Каждой экспериментальной группе подбиралась группа возрастного контроля. Поскольку возраст грудных животных 4-ой экспериментальной подгруппы и инфантных животных 3-ей экспериментальной подгруппы совпадал, составляя 50 дней, для них использовалась одна группа возрастного контроля. Таким образом, общее количество экспериментальных животных составило 80 (по 40 каждую возрастную группу, по 8 на каждую экспериментальную подгруппу каждого возраста), а контрольных - 72 (40 и 32 грудного и инфантного возраста соответственно, по 8 на каждую подгруппу за исключением 3-ей подгруппы инфантного возраста). В конце эксперимента животные взвешивались, забивались под анестезией, у них извлекались селезенка и брыжеечные лимфатические узлы, а также тимус и надпочечники (а именно - правый надпочечник как более стресс-чувствительный) для последующего гистологического исследования, Определялась взвешиванием масса селезенки. Органы фиксировались формалином и заливались в парафин. Серийные гистологические срезы толщиной 3 мкм, изготовленные на микротоме Leica (Германия), окрашивались гематоксилин-эозином, по Ван Гизону и моноклональными антителами с применением стрептавидин-биотин-пероксидазного метода. Иммуногистохимичеекое исследование

8

проводилось только для вторичных органов иммуногенеза. Состояние слизистой оболочки желудка оценивалось макроскопически на предмет стресс-ассоциированных изменений (кровоизлияния, изъязвления).

Панель первичных антител для иммуногистохимического окрашивания включала в себя антитела для выявления популяций лнмфоидных клеток (CD3, клон 1F4, Serotec - против Т-клеточных рецепторов; CD4, клон W3/25, Serotec - против Т-хелперов и макрофагов; CD8a, клон MRC 0X8, Serotec -против Т-супрессоров/цитотоксических лимфоцитов; CD20, клон RLN-9D3, Serotec - против B-лимфоцитов; CD90, клон HIS51, BD Pharmingen - против недавних тимусных иммигрантов; CD45RC, клон MRC 0X22, Serotec -против В-лимфоцитов, CDS+T-лимфоцитов, наивных С04+Т-лимфоцитов); стромальных клеток (0X6, клон MRC 0X62, Serotec, против интердигитирующих клеток; белок S100, DAKO - против фолликулярных дендритных клеток]; макрофагов (CD68, клон EDI, Serotec - против зрелых макрофагальных клеток), а также каспазы-3 (Sigma), для выявления клеток, гибнущих апоптозом и PCNA (клон РС10, Serotec) - против ядерного антигена пролиферирующих клеток, всего 11 иммуногистохимических реакций. Вторичные антитела (противомышиные и прогивокроличьи в зависимости от типа первичного антитела), стрептавидин-пероксидазный комплекс, а также диаминобензидин также применялись от компании Serotec (Великобритания).

Гистологические срезы, окрашенные иммуногистохимически, анализировались морфометрически с использованием программы Leica QWin (Великобритания). Программа была сопряжена с программой Excel, куда данные замеров транспортировались автоматически с использованием специально разработанного для селезенки и лимфатических узлов алгоритма. В программе Excel вычисляли среднюю арифметическую, среднеквадратическое отклонение, ошибку репрезентативности, необходимое число исследований, коэффициент корреляции Пирсона, t-критерий Стьюдента.

Полученные результаты и их обсуждение.

На диаграмме 1 показана динамика массы тела экспериментальных и контрольных животных на разных сроках эксперимента. Как показывает диаграмма, хронический стресс не приводил к снижению массы тела растущих животных, однако достоверные различия с группой возрастного контроля сохраняются у животных грудного возраста вплоть до 2-х недельного срока после окончания стрессорного воздействия, а у животных исходного инфантного возраста-до 7-дневного.

Ввиду малых размеров выделение брыжеечных лимфатических узлов для определения их массы представляется сложным. Динамика относительной массы селезенки у контрольных и экспериментальных животных отражена на диаграмме 2. Как следует из диаграммы, у контрольных животных исходной группы грудного возраста имело место незначительное уменьшение данного органометрического показателя вплоть до 34-го дня жизни, после чего темпы его снижения несколько увеличивались и к 50-му дню оно становилось значимым' (р<0,05) по сравнению с исходным уровнем, в последующем снижаясь незначительно. У экспериментальных животных через 1 сутки после окончания стрессорного воздействия масса селезенки была достоверно ниже, чем у контрольных, в обеих возрастных группах. Эта тенденция сохранялась и через неделю после стресса. Через две недели после стресса данный показатель снижался больше у экспериментальных животных в исходной группе грудного возраста (р<0,05) по сравнению с инфантным (р>0,05). К концу эксперимента относительная масса селезенки контрольных и экспериментальных животных различалась мало, оставаясь несколько ниже у последних.

ю

Оценка триады стресса показала, что через сутки по окончании

Диаграмма 1. Распределение массы тела экспериментальных и контрольных животных (М+/-т), г

1

Ш

г±-

^га-

гэ

]-1 день I 1-7

дней

14 дней

30 дней

ГК - грудной возраст, контроль; ГЭ - грудной возраст, эксперимент; ИК - инфантный возраст, контроль; ИЭ - инфантный возраст, эксперимент

Диаграмма 2. Распределение относительной массы селезенки экспериментальных и контрольных животных (М+/-ш), (%)

I,

I

I.

.е&мак

1

№1

Г

?

А

гэ

1 !- 1 день 1 I-7 дней ГК - грудной возраст, контроль;

14 дней

1-30 дней

п

последнего сеанса стресса у животных обеих возрастных групп отмечались признаки хронического стресса: акцидентальная инволюция тимуса и гипертрофия коры надпочечников, подтвержденные гистологически, а также точечные кровоизлияния на слизистой оболочке желудка.

Через неделю после окончания стрессорного воздействия изменения на слизистой оболочке желудка отсутствовали, однако гистологические признаки инволюции тимуса сохранялись, причем они были более выраженными у животных исходного грудного возраста. Через 2 недели на качественном уровне изменения в тимусе были заметными лишь у животных исходного грудного возраста. Через месяц на качественном уровне гистологически тимус и надпочечники экспериментальных и контрольных животных различались незначительно.

В Т- и В-зонах селезенки и лимфатических узлов через сутки после прекращения стрессовой экспозиции отмечались лимфодеструктивные и лимфодегенеративные изменения, которые по истечении одной недели обнаруживали тенденцию к обратному развитию. Для объективизации наблюдений был проведен цифровой анализ изменений в лимфоидной ткани селезенки в эти и последующие сроки наблюдений, позволивший выявить наиболее информативные критерии оценки постстрессовой динамики различных клеточных популяций.

Как следует из диаграммы 3, стресс вызывал высоко достоверное снижение удельной площади С08-иммунореактивных клеток в обеих возрастных группах, с большим уровнем значимости в младшей возрастной группе. Через 7 дней после окончания стресса удельная площадь С08-1 клеток несколько увеличивалась, однако оставалась достоверно сниженной по сравнению с возрастным контролем. Через 14 дней после окончания стрессорного воздействия отмечалось дальнейшее повышение удельной площади иммунореактивных клеток, при этом в младшей возрастной группе она оставалась достоверно сниженной по сравнению с контрольной подгруппой, в то время как в старшей возрастной группе это различие

утрачивало уровень значимости. К 30-му дню на фоне дальнейшего увеличение удельной площади этих клеток различие между контрольными и экспериментальными подгруппами становилось недостоверным в обеих возрастных группах.

Иная закономерность отмечена в динамике клеточной популяции интердигитирующих клеток (диаграмма 4). Как следует из рисунка, удельная площадь иммунореактивных клеток снижалась после стресса, что показал анализ, проведенный по истечении 1-х суток после окончания стрессорного воздействия, причем с большим уровнем значимости в инфантной возрастной группе. К концу 1-ой недели различия утрачивали уровень значимости также в обеих возрастных подгруппах. К концу 1-го месяца показатель оставался недостоверно сниженным в группах грудного и инфантного исходного возраста по сравнению с возрастным контролем.

Таким образом, данные диаграмм 3 и 4 показали, что в постстрессовой динамике стромальных и гемопоэтических элементов для данной 'Г-клеточной линии параллелизм отсутствует, во всяком случае в изучаемых возрастных группах.

Диаграмма 5 предоставляет информацию относительно динамики еще одной Т-клеточной линии - недавних тимусных иммигрантов - в белой пульпе селезенки. Как следует из рисунка, через сутки после перенесенного стресса отмечается снижение интенсивности трафика Т-лимфоцитов из тимуса в периартгриальные лимфоидные влагалища селезенки: достоверное и высоко достоверное в младшей и старшей возрастных группах соответственно. Через неделю после последнего стрессорного воздействия это снижение остается значимым лишь в младшей возрастной группе, через две недели и один месяц оно оказывается незначимым в обеих возрастных группах. Таким образом, анализ Т-клеточного компонента лимфоидной ткани селезенки и его стромальных элементов показал, что динамика последних напрямую не связана с постстрессовым представительством лимфоидных клеточных популяций, и что стресс, перенесенный в грудном возрасте,

Диаграмма 3. Распределение Т-супрессоров/цитотоксических лимфоцитов в селезенке экспериментальных и контрольных животных

н-

** ** рЬ

Г ю о а© 2 *

+

1 ГЧ

день

| - 7 дней

ОГК - грудной возраст, контроль; ГЭ — грудной возраст, эксперимент; ИК - инфантный возраст, контроль; ИЭ - инфантный возраст, эксперимент

Диаграмма 4. Распределение интердигитирующих клеток (ОХ-62) в селезенке экспериментальных и контрольных животных

оказывает более продолжительное угнетающее действие на некоторые виды Т-лимфоцитов, чем в инфантном возрасте.

На диаграмме 6 показано, как стресс через сутки после окончания воздействия провоцирует высоко достоверное снижение доли В-лимфоцитов. Через неделю после воздействия достоверно более низкое значение показателя сохраняется в обеих экспериментальных группах, а начиная со 2-ой недели снижение псрсистирует, не достигая уровня значимости различий.

Сходная динамика отмечается в популяции фолликулярных дендритных клеток (диаграмма 7), уровень которых высоко достоверно снижается в обеих возрастных группах после стрессорного воздействия. Через неделю после окончания стресса уровень достоверности различий уменьшается, а начиная со 2-ой недели различия становятся недостоверными для обеих возрастных групп.

Таким образом, для В-клеточкой линии и ее стромальных элементов отмечается относительный параллелизм динамики в белой пульпе селезенки. Продолжительность персистирования этих изменений совпадает в группах животных исходного грудного и инфантного возраста, в отличие от Т-клеточных популяций, которым у животных, перенесших хроническое стрессорное воздействие в грудном возрасте, требуется большее время для восстановления своей численной плотности.

Особый интерес представляют данные относительно пролиферативной активности спленоцитов и их гибели апоптозом на разных сроках постстрессового воздействия (диаграммы 8, 9).

Как следует из диаграммы 8, стресс вызывал достоверное снижение удельной площади клеток, экспрессирующих РСОД, в обеих возрастных группах (р<0,05 в группе инфантного возраста и р<0,01 - грудного). В последующем в группе животных грудного возраста она несколько увеличивалась к 7-ым суткам, оставаясь при этом ниже, чем у контрольных животных, затем к 14-ым суткам увеличивалась и становилась при этом несколько выше, чем у контрольных животных, сохраняясь более высокой до

Диаграмма 5. Распределение недавних тимусных иммигрантов в селезенке экспериментальных и контрольных животных (М+/-т), %.

гк гэ им иэ

I ! -1 день I 1-7 дней I 1-14 дней ЦЩ-30 дней ГК - грудной возраст, контроль; ГЭ - грудной возраст, эксперимент; ИК - инфантный возраст, контроль; ИЭ - инфантный возраст, эксперимент

Диаграмма 6. Распределение 1 В-лимфоцитов в селезенке экспериментальных и контрольных животных (М+/-т), %.

! 1 - 1 день 1__1 - 7 дней ! ! - 14 дней [53 - 30 дней

ГК - грудной возраст, контроль; ГЭ - грудной возраст, эксперимент; ИК - инфантный возраст, контроль; ИЭ - инфантный возраст, эксперимент

Диаграмма 7, Распределение фолликулярных дендритных клеток в селезенке экспериментальных и контрольных животных (М+/-ш), %.

|_] - 1 день С__1 -1 дней

ГК - грудной возраст, контроль;

14 дней

§ - 30 дней

ГЭ - грудной возраст, эксперимент; ИК - икфантный возраст, контроль; ИЭ - инфантный возраст, эксперимент

Диаграмма 8. Распределение клеток, экспреесирующих ядерный антиген пролиферируадщах клеток, в селезенке экспериментальных и контрольных животных (М+/-т), %

□ -1

ИК

день

□ -7

днеи

Г_14 дней

■ 30 дней

конца эксперимента. У животных инфантного возраста данный показатель неуклонно повышался, начиная с 7-ых суток после окончания стрессорного воздействия, оставаясь при этом несколько ниже контрольных значений на всех сроках эксперимента. Все описанные изменения, начиная с 7-ых суток после стресса, не достигали уровня значимости различий и прослеживались на уровне тенденций.

Иная картина наблюдалась при определении апоптотического индекса в селезенке экспериментальных и контрольных животных (диаграмма 9). У контрольных животных этот индекс имеет тенденцию к несущественному увеличению с возрастом. Он достоверно повышается через сутки после стресса у экспериментальных особей грудного (р<0,01) и инфантного (р<0,05) возраста. Далее в группе грудного возраста данный показатель продолжает повышаться еще больше к концу 1-ой недели после стресса, после чего несколько снижается, оставаясь не достоверно выше по сравнению с кон-фольной группой до конца эксперимента (р<0,05 после 7 дней, р>0,05 после 14 и 30 дней). В группе инфантногб возраста после

Диаграмма 9. Распределение клеток, эксирессирующих каспазу-3, в

селезенке экспериментальных и контрольных животных (М+/-т), %.

гк гэ ик из

I I- 1 день I 1- 7 дней I |- 14 дней В811- 30 дней ГК - грудной возраст, контроль; ГЭ - грудной возраст, эксперимент; ИК - инфантный возраст, контроль; ИЭ - инфантный возраст, эксперимент

достоверного повышения через сутки после перенесенного стресса он начинает неуклонно снижаться, оставаясь не значимо выше, чем в контроле, на сроке 7 и 14 дней. К концу эксперимента этот показатель оказывается даже несколько ниже, чем у контрольных животных.

Полученные нами результаты согласуются с данными других исследователей относительно активной роли стромальн ых клеток лимфоидной ткани в поддержании ее функциональной активности [А.А.Нестерова, 2007; A.C.Soloff е.а., 2010] и об особенностях стресс-ассоциированных иммуномодуляционных изменений в раннем возрасте [Н.А.Мураева, 2006; C.Kiank е.а., 2009], дополняя их информацией о постстрессовон динамике различных стромальных и гемопоэтических клеточных элементов вторичных органов иммуногенеза.

Таким образом, проведенное исследование показало, что хроническое действие жесткого стрессора (пронационной иммобилизации) приводит к развитию иммуносуппрессивных сдвигов в лимфоидной ткани периферических иммунных органов (лимфатических узлов и селезенки), которые достаточно продолжительно персистируют в белой пульпе селезенки, в корковом веществе и паракортикальной зоне лимфатических узлов. Полученные нами данные в целом согласуются с данными других исследователей (L.Dominguez-Gerpe е.а., 1997, 2007) относительно постстрессовой динамики органометрических параметров (массы и относительной массы) лимфоидных органов в различные периоды после окончания стрессорного воздействия. Однако мы имели возможности провести свое исследование на более высоком методическом уровне, с применением иммуногистохимии и имидж-анализа, что позволило нам не просто констатировать поддержание иммуносуппрессии на разных этапах постстрессового периода, но и показать ее возможные механизмы в динамике возрастных изменений, накладывающихся на постстрессовые лимфодегенеративные и лимфодеструкгивные сдвиги. Кроме того, нам удалось показать более продолжительное персистирование

иммуносупрессивных сдвигов в периферическом звене иммуногенеза, чем в работах у данных авторов, что с одной стороны может быть связано с большей чувствительностью примененных нами методик, а с другой стороны - включением в исследование групп животных в раннем постнатальном онтогенезе, который характеризуется большей подверженностью стресс-ассоциированным иммунодегенеративным состояниям. Количественный анализ белой пульпы селезенки показал, что угнетение Т-клеточной линии сохраняется по меньшей мере на протяжении 3-х недель по окончании стрессорного воздействия, по истечении которых В-клеточный листок обнаруживает лишь незначительные признаки депрессии, что показывает дивергенцию динамики В- и Т-клеточных популяций в постстрессовом периоде раннего постнатального онтогенеза. Стромальные элементы Т-клеточных зон обнаруживают меньшую чувствительность к действию хронического стресса и более высокий восстановительный потенциал в динамике постстрессового периода по сравнению с В-клеточными зонами. Кроме того, восстановление В-клеточной линии отражает реадаптационные изменения соответствующей стромальной клеточной популяции, в то время как депрессия Т-клеточных линий сохраняется после относительного восстановления соответствующих стромал ьных элементов. Различие полученных нами данных с другим авторским коллективом (С.С.Соп^оп е.а., 1996) о продолжительности персистирования иммуносупрессивных сдвигов в постстрессовом периоде (более длительного в нашем исследовании) также связаны, вероятно, с особенностями изучаемых нами возрастных периодов, а также применением иных моделей стрессорного воздействия. Отмеченные изменения свидетельствуют о чрезвычайной сложности реадапгационных процессов в периферических органах иммуногенеза в постстрессовом периоде, объяснимой, в частности, продолжающимися гистогенетическими процессами в лимфоидной ткани в раннем постнатальном онтогенезе и обуславливающей серьезные

иммуномодуляционные изменения в растущем организме в динамике постстрессового периода,

ВЫВОДЫ.

1. Перенесенный в раннем постнатальном онтогенезе жесткий хронический стресс вызывает обратимые изменения иммуноархитектоники периферических лимфоидных органов, глубина и продолжительность лерсистирования которых определяется возрастом, на который приходится начало стрессорного воздействия.

2.При экспозиции экспериментальных животных хроническому действию жесткого стрессора (пронационной иммобилизации) в грудном возрасте в лимфоидной ткани селезенки и лимфатических узлов по окончании стрессорного воздействия отмечается редукция Т- и В-клеточных зон и уменьшение удельной площади большинства лимфоидных и стромапьных клеток в них, которое сохраняется по меньшей мере на протяжении 3-х недель после прекращения стрессорного воздействия. При этом в периартериапьных зонах селезенки иммуносупрессивные сдвиги, характеризующиеся представительством Т-клеточных популяций, отличаются большим угнетением по сравнению с В-клеточными зонами как по диапазону, так и по длительности персистирования.

3.При начале хронического стрессорного воздействия в инфантном возрасте, гипоплазия лимфоидной ткани селезенки и лимфатических узлов выражена меньше, чем в грудном возрасте, и сохраняется в течение, по меньшей мере, двух недель после окончания стресса.

4. Количественные изменения В-клеточных популяций в селезенке характеризуются параллелизмом с изменениями стромальных клеток (фолликулярных дендритных) в группах животных грудного и инфантного возраста, в то время сдвиги в популяциях Т-клеток характеризуются относительной независимостью от постстрессовой динамики стромальных клеток (интердигитирующих), что показывает различный характер стресс-

ассоциированных модуляций стромально-гемопоэтических взаимоотношений для Т- и В-клеточных листков.

5. Пролиферативная активность спленоцитов, сниженная после хронического стресса, восстанавливается достаточно быстро у животных, перенесших хронический стресс, начиная с грудного или инфантного возраста: до конца первой недели, в то время как усиление апоптоза лимфоидных клеток, спровоцированная стрессом, сохраняется дольше (по меньшей мере, па протяжении первой недели у животных грудного возраста).

6.Среди Т-клеточных популяций в белой пульпе селезенки у животных исходного грудного возраста снижение численности СЭ8+клеток персистирует продолжительнее, чем С090+лимфоцитов, что свидетельствует о более раннем постстрессовом восстановлении процессов транспорта лимфоцитов из тимуса, чем их созревания/дифференцировки в данной возрастной группе.

Практические рекомендации

1.Высокая информативность показателей динамики клеток, иммунореактивных по С1)8+, С090+, белок 8100+, С020+ соответственно в Т- и В-зонах селезенки и лимфатических узлов на различных этапах постстрессового периода, позволяет использовать их при внедрении новых методов профилактики постстрессовой нммуносупрессии.

2.Стрессорные воздействия в период грудного вскармливания и последующего перехода на самостоятельное питание вызывают наиболее продолжительные по сравнению с другими периодами раннего постнатального онтогенеза изменения иммуноархитектоники периферических иммунных органов, что необходимо учитывать в клинической практике при ведении пациентов соответствующего возраста в постстрессовом периоде.

СПИСОК РАКОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Шефер Е.Г. Постстрессовая иммуноморфология селезенки в раннем постнатальном онтогенезе / Е.Г.Шефер, Ю.В.Дегтярь, Д.И.Краюшкин // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований.-

2010,- N11. - С.47-49.

2.Шефер, Е.Г. Постстрессовая модуляция органов иммуногенеза / О.В.Федорова, Н.Г.Краюшкина, Е.Г.Шефер, Е.Н.Фокина, Ю.В.Дегтярь, И.Л. Демидович // Вестник ВолГМУ.-2010.- Ю (35).- Р.8-14.*

3. Шефер Е.Г. Динамика клеточной популяции недавних тимусных иммигрантов в периферических лимфоидных органах у крыс различного возраста в постстрессовом периоде / А.И.Краюшкин, Е.Г.Шефер, Ю.В.Дегтярь, И.Л.Демидович // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований.- 2010.- N11. - С.41-42.

4.Shefer E.G. Postress structure of the lumphoid organs in rat pups / Ullah M., Kuznetsov S.L., Nor-Ashikin M.N.K., Shefer E.G., Fokina E.N., Demidovich I.L., Morozova Z.Ch., Fedorova O.V., Krayushkina N.G., Khlebnikov Yu.V. // In: Materials of the 2nd Malaysian Anatomical Conference, Shah Alam, Malaysia, 8th -9lh June, 2011, P.101.

5.Шефер Е.Г. Влияние различных видов стресса на иммуноморфологию лимфоидных органов / Е.Г.Шефер, Е.Н.Фокина, Ю.В.Дегтярь, А.С.Кузнецов, Ю.В.Хлебников // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований.- 2011.- N5.-C.78-79.

6.Шефер, Е.Г. Изменение иммуноархитектоникн периферических лимфоидных органов в постстрессовом периоде 1 Е.Г.Шефер // Вестник ВолГМУ.-2011.- N2 (38).- Р.103-106.*

7.Шефер Е.Г. Иммуноморфология центральных и периферических лимфоидных органов в постстрессовом периоде / Е.Г.Шефер, Е.Н.Фокина, Ю.В.Дегтярь, И.Л.Демидович, Ю.В.Хлебников, А.В.Холодов, О.Н.Снигирева // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований.-

2011,- N8. - С.41-42.

* - издания, рекомендованные ВАК РФ для опубликования материалов диссертаций.

!

Шефер Елизавета Глебовна

ПОСТСТРЕССОВАЯ ИММУНОМОРФОЛОГИЯ ПЕРИФЕРИЧЕСКИХ ЛИМФОИДНЫХ ОРГАНОВ В ВОЗРАСТНОМ АСПЕКТЕ 03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология 14.03.01 - анатомия человека

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать «_»_2011 года

Волгоград, 2011

Формат 60x90 1/16. Печать трафаретная. Бумага офсетная № 65. Гарнитура «Тайме». Тираж 100 экз. Заказ № 2559. Отпечатано в ООО «Бланк». Лиц. №3550. 400131, г. Волгоград, ул. Скосырева, 2а.

Текст научной работыДиссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Шефер, Елизавета Глебовна, Волгоград

ГБОУВПО

Волгоградский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития РФ

На правах рукописи

04201103513 Шефер Елизавета Глебовна

ПОСТСТРЕССОВАЯ ИММУНОМОРФОЛОГИЯ ПЕРИФЕРИЧЕСКИХ ЛИМФОИДНЫХ ОРГАНОВ В ВОЗРАСТНОМ

АСПЕКТЕ

03.03.04 клеточная биология, цитология, гистология 14.03.01 анатомия человека

диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Научные руководители: член-корреспондент РАМН, профессор Кузнецов Сергей Львович; доктор медицинских наук, профессор Краюшкин Александр Иванович

Волгоград 2011

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГГНО - гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковая ось

ГКГ - главный комплекс гистосовместимости

Г.-Э. - гематоксилин-эозин.

ДАБ - диаминобензидин

КРФ - кортикотропин-рилизинг-фактор

АКТГ - адренокортикотропный гормон

РСЫА - ядерный антиген пролиферирующих клеток

ПВЯ - паравентрикуляроное ядро гипоталамуса

ЦНС - центральная нервная система

Оглавление

Список сокращений.................................................................. 2

Введение................................................................................. 5

Глава, 1. Обзор литературы: Нейдоиммунология' стресса, и 10

иммуноморфологияпериферических органов.иммунной защиты....

1.Г. Новые концепции- стресса в современных научных и. 10

социальных- условиях 1-.2 Гистофизиология и иммунофенотип селезенки и 12

лимфатических узлов при действии иммуномодуляторов 1.3. Воздействие различных видов стресса на иммунный статус

организма и иммуноморфологию лимфоидных органов 13

1.3.1 Воздействие-стресса на гемопоэтические и стромальные клетки 28 периферических органов иммуногенеза

1.3.2 Немедленные и отдаленные последствия перенесенного стресса 33 для периферических лимфоидных органов

1.3.3 Онтогенетические аспекты действия стресса на периферические лимфоидные органы. 36

1.3.4 Механизмы иммуномодулирующего действия стресса в 38 организме человека и экспериментальных животных

1.3.5 Механизмы воздействия стресса на иммуноморфологию периферических органов иммуногенеза 45

1.4 Клиническое значение оценки иммуноморфологии 47

периферических лимфоидных органов с применением Глава 2. Материал и методы исследования 55

Глава 3. Результаты исследования 62

3.1. Органометрические показатели контрольных и 62 экспериментальных животных различного возраста на разных сроках после перенесенного хронического стресса1

3.2. Имидж анализ селезенки экспериментальных животных на 64 разных сроках после перенесенного хронического

3.3 Возрастная структурно-функциональная характеристика 73 периферических лимфоидных органов контрольных и экспериментальных животных на разных сроках после перенесенного хронического стресса

Глава 4. Обсузвдение результатов............................................................95

ВЫВОДЫ............................................................................ 101

Список литературы.................................................................. 103

В последние годы классическая теория Ганса Селье, рассматривавшего стресс как системную реакцию организма, получила новое развитие в работах современных ученых, обогативших ее- представлениями об индивидуальной переносимости стресса, антистрессорных факторах, роли первичных мозговых механизмов в развитии эмоционального стресса [И^Г.Акмаев шдр., 2003; С.С.Перцов и др., 2006, 2009; К.В:Судаков; 2008; Н.О.Иванникова и др., 2009; Е.А.Иванова и др., 2009; C.Kiank е.а:, 2009; V.S.Nade е.а.,. 2010]. Иммобилизационный стресс также относится к эмоциональному стрессу, и переносимость его связана со многими факторами, среди которых особое место занимает возраст [D.L.AlIen е.а., 2010; C.T.ColIier е.а., 2011; S.Thyaga Rajan е.а., 2011]! Несмотря на множество работ в литературе по данной тематике, ранний постнатальный онтогенез остается наименее изученным* периодом жизни по совокупности исследований влияния* хронического стресса на иммунную систему [М.Р.Сапин, 2007; М.Ю.Капитонова и др., 2009; I.C.Weaver, 2009;, A.Y.Han е.а., 2010]i

Известно, что сложный характер взаимодействия, между центральной нервной, эндокринной и иммунной системами обуславливает влияние стрессоров на иммуногенез, оказывающее серьезное негативное воздействие на здоровье человека [И.И.Бобынцев 2007; С.С.Перцов и др., 2011; R.Glaser, 2005; M.E.Kemeny, 2009; K.Kour е.а., 2009; W.M.Quinteiro-Filho е.а., 2009; A.Sommershof е.а., 2011]. Исследования последних показали, что стресс оказывает на иммунитет неоднозначный эффект: острое воздействие бывает как иммуностимулирующим, так и иммуносупрессивным; хроническое воздействие чаще всего оказывается иммуносупрессивным, при этом параметры стрессорного воздействия (сила, продолжительность, избегаемость и др.,) вносят свой вклад в суммарный иммуномодуляционный стресс-эффект [Е.А.Иванова и др., 2009; Б.А.Умарова и др., 2009; K.M.Grebe е.а., 2009; K.Kour е.а., 2011; Nazar е.а., 2011; S.H.Tang е.а.,

20Г1]. Подавляющее большинство проведенных исследований сосредоточено на оценке немедленных последствий стресса, позволяющей охарактеризовать глубину иммуносупрессии в первые часы или дни после окончания стрессорного воздействия, что; вероятно, связано с тем обстоятельством; что стресс-ассоциированные сдвиги в. органах иммуногенеза считаются обратимыми, и с течением времени морфология лимфоидной ткани практически полностью* восстанавливается [Е.А.Лавин и др.,, 2007; L.Dominguez-Gerpe е.а., 1997; N.M.Curtine.a., 2009; А.Warner е.а., 2010; A.Y.Hair е.а., 2010; K.Kour е.а., 2011]. При этом во многих работах не учитывается то обстоятельство, что эффективность иммунного ответа в этот восстановительный период оказывается значительно сниженной, что может иметь критические последствия для любого возраста, когда защитные реакции на действие канцерогенов, инфекционных агентов, аутоантигенов и других болезнетворных иммуномодуляторов существенно ослаблены, однако больше всего - для детского возраста с его высокой чувствительностью к инфекциям, физическим, химическим факторам и прочим интервенциям [О.В.Федорова, 2005; Н.А.Мураева, 2006; V.Sterlemann е.а., 2008; J.Shen е.а., 2009; W.M.Quinteiro-Filho е.а., 2009; S.Jacobson-Pick е.а., 2011].

Адаптационные изменения, развивающиеся в иммунной системе по окончании стрессорного воздействия, во многом определяются эффективностью взаимодействия между стромальными и паренхиматозными клеточными взаимодействия в лимфоидной ткани [М.Ю.Капитонова и др., 2009; M.Y.Tomiyoshi е.а., 2009; A.C.Soloff е.а., 2010], которые влияют на активность, дифференцировку, транспорт, пролиферацию и апоптоз лимфоидных клеток [N.D.Powell е.а., 2009; B.J.Kim е.а., 2010; N.Li е.а., 2010]. Известно, что стресс вызывает деплецию лимфоидных клеток как- в центральных, так и в периферических органах иммуногенеза, а также разрушение их стромы, что-во многом объясняется нарушением стромально-паренхиматозных взаимоотношений, механизмы которых являются не до конца выясненными, а их динамика на протяжении постстрессового периода

различной продолжительности в ходе раннего постнатального онтогенеза до сих пор не нашла отражения в литературе [А.А.Нестерова, 2007; С.С.Перцов и др., 2011; ЬЛЭопи^иег-Сегре, 2007].

В' последние годы интерес к периферическим органам иммуногенеза, которые считаются органами-маркерами стресса, значительно поднялся,из-за бурного развития трансплантационных технологий и поднимающейся,в связи с этим проблемой необходимости преодоления трансплантационного-иммунитета. Спленэктомия- бывает достаточно эффективным методом, предотвращения отторжения трансплантатов, однако четкие критерии к проведению данного вмешательства, основанные на морфо-функциональном состоянии лимфоидных органов, и в первую очередь селезенки как крупнейшего из них, отсутствуют [М.А.Ауа1а-Оагс1а е.а., 2010;' К.Л.Сге'«' е.а., 2010]. Существует мнение о том, что способность селезенки реагировать на антигенный стресс, в частности дифференцировкой В-лимфоцитов в антиген-продуцирующие клетки и тенденцией накапливать, последние, которая доступна* оценке морфологическими методами исследования, может быть использована для определения показаний к ее удалению при пересадке органов [В.Кар1ап е.а:, 2010]*. В этой связи, изучение возрастных аспектов иммуномодуляционных сдвигов в периферических иммунных органах при различных видах стресса могло бы способствовать отбору наиболее информативных критериев' для оценки их диапазона и способности поддерживаться.

Все выше изложенное побудило нас предпринять данное исследование, направленное на выяснение глубины и продолжительности персистирования иммуномодуляционных изменений в периферических органах иммуногенеза в возрастном контексте проблемы.

Цель исследования. Определить закономерности динамики реадаптационных изменений в периферических органах иммунной защиты

неполовозрелых экспериментальных животных на разных сроках после прекращения хронического действия стресса.

Для достижения данной цели былипоставлены следующие задачи: 1.Исследовать »влияние хронического стресса' на-гистофизиологию селезенки' и лимфатических», узлов экспериментальных- животных в грудном- и-инфантном периодах раннего постнатального онтогенеза. 2.Определить! особенности постстрессовых изменений^ в периферических^ иммунных органах через 1, 7, 14, 30 и 60 дней' по> окончании стрессорного воздействия

3.Выявить соотношение изменений лимфоидных и стромальных клеток периферических иммунных органов в различные сроки после окончания хронического стрессорного воздействия.

Научная новизна исследования. В данном исследовании впервые показаны особенности реадаптационных изменений в периферических иммунных органах в динамике постстрессового периода у экспериментальных животных разных возрастных групп раннего постнатального онтогенеза.

Теоретическое значение работы, заключается в определении механизмов иммуномодуляционных сдвигов в различных компартментах периферических лимфоидных органов в их постстрессовой реадаптационной динамике.

Практическая значимость работы, заключается в установлении возрастных особенностей постстрессового периода в периферических органах иммуногенеза для последующего применения, этих данных в практической медицине при ведении пациентов, подверженных различным видам стрессорных воздействий.

Внедрение в практику: полученные в ходе данного исследования-данные используются в учебном процессе на кафедрах анатомии человека,

Публикации и апробация материалов диссертации. Материалы диссертации докладывались на 3-ей общероссийской научной конференции «Фундаментальные и прикладные исследования, в медицине», Сочи, сентябрь 2010* г.; научной конференции «Современные проблемы экспериментальной и клинической медицины», Паттайя, февраль 2011' г.; международной научной конференции «Фундаментальные исследования», Доминиканская республика, апрель 2011 г.; заседании Волгоградского отделения Всероссийского научного общества анатомов, гистологов и эмбриологов, май, 2011 г.; на 2-ой Малазийской анатомической конференции, Шах Алам, июнь 2011 г.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Хронология реадаптационных изменений в компартментах селезенки и лимфатических узлов в различные сроки после хронического стресса,

. перенесенного в раннем постнатальном онтогенезе, определяется возрастным периодом, на которое приходится начало стрессорного воздействия.

2. На разных этапах пострессового периода1 стромально-паренхиматозные взаимоотношения в периферических органах иммуногенеза модулируются возрастными закономерностями динамики клеточных популяций в их Т- и В-зонах.

Существуют сложные двусторонние взаимодействия между центральной нервной системой (ЦНС), эндокринной и иммунной системами^ [G.J.Alves е.а., 2007;, A.Azpiroz е.а., 2008; R.Couto-Moraes е.а;, 2009; M.E.Kemeny е.а., 2009; F.A.Costa-Pinto е.а., 2010; K.Kour е.а., 2011].

Существование этих взаимодействий позволяет жизненным стрессам влиять на иммунную систему, воздействуя на нее через нервную* и эндокринную систему и оказывая при этом серьезное влияние на здоровье человека. Хотя механизмы этих взаимодействий еще не до конца выяснены, исследования в области психонейроиммунологии показали, что стресс может вызывать дизрегуляцию иммунной системы через гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальную и симпато-адреномедулярную оси. В частности было показано, что психологический стресс может влиять на течение инфекционного процесса и заживление ран [E.V.Yang е.а., 2002]. В данном обзоре представлены современные представления о

нейроиммуноэндокринологии стресса в контексте респонсивности периферических иммунных органов, и особое внимание уделено психологическому стрессу, используемому в наших экспериментах.

1.1 Новые концепции стресса в современных научных и социальных условиях

Стресс - это неспецифическая, универсальная, приспособительная адаптационная реакция целостного организма на сильное воздействие внутренней или внешней среды [Т.Н.Горобец, 2008]. Когнитивные процессы играют важную роль в формировании физиологического ответа на изменение социальной среды, прежде всего в стрессовом контексте.

Эмпирически о вреде для здоровья различных потрясений было известно давно. В 1974 году Ганс Селье определил стресс как «неспецифический ответ организма на любое требование, предъявленное

ему" [H.Selye, 1972]. Это определение стресса позже было модифицировано [G.P.Chrousos е.а., 1992], а на смену понятию «неспецифический» пришла гипотеза о том, что любой стрессор, действуя с интенсивностью, выше пороговой, будет вызывать «стресс-синдром». Стресс бывает различных видов: физический или психологический, острый или хронический. Вероятно, что разные виды стресса оказывают различное влияние на выработку гормонов стресса и соответственно на иммунную систему. Стресс, как известно, вызывают выделение нескольких гормонов стресса, прежде всего глюкокортикоидов через активацию гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы и катехоламинов через активацию симпатической нервной системы, которые влияют как на врожденный, так и на приобретенный иммунный ответ.

Новый аспект классической' теории Селье о стрессе представлен в статье патриарха отечественной стрессологии [К.В.Судаков, 2008]. Стресс рассматривается как системный ответ организма. В последние годы теория-пересматривалась в аспекте эмоционального стресса. В. контексте теории функциональных систем эмоциональный стресс развивается в конфликтных ситуациях, в которых субъекты не способны достигнуть полезных адаптивных целей. Особый интерес представляют первичные мозговые механизмы эмоционального стресса и роль нейромедиаторов и нейропептидов, в них. Динамика повреждения различных функциональных систем при стрессе рассматривается с позиций индивидуальной переносимости стресса и роли олигопептидов (субстанция Р), дельта сон-индуцирующего пептида, бета-эндорфина и семакса в качестве антистресс-факторов, повышающих резистентность к действию стрессорных агентов.

В современном мире именно дети все чаще становятся жертвами различных катаклизмов. Посттравматический стресс оказывает на растущий детский организм тяжелое воздействие с глубокими отдаленными последствиями для различных систем, однако одной из первых в стресс-реакции втягивается иммунная система [Ж.Ч.Цуциева, 2009; C.R. Pfeffer,

2007]. В настоящем обзоре, описывающем современное состояние вопроса о влиянии стресса на иммунную систему, особое внимание уделено данным о возрастных аспектах проблемы, и прежде' всего* в отношении раннего постнатального онтогенеза.

1.2, Гистофизиология* и иммунофенотип селезенки» ш лимфатических узлов при действии иммуномодуляторов

В. литературе имеется множество работ, касающиеся* различных аспектов гистофизиологии органов иммуногенеза, в том числе вторичных. Большинство из них касается гемопоэтических клеточных элементов иммунной системы. Лишь в последнее время стали появляться работы, фокусирующиеся на стромальных клетках или на взаимодействии5 стромально-паренхиматозных элементов в гемопоэтических органах. В основном, это работы, касающиеся центральных органов, иммуногенеза (тимуса, красного костного мозга), значительно меньше исследований по этой проблеме выполнены на вторичных иммунных органах: селезенке и лимфатических узлах.

Наночастицы двуокиси титана (ТЮ(2)), как показали недавние исследования, способны снижать иммунный статус у мышей [N.Li е.а., 2010]. Однако о сопутствующих повреждениях селезенки, участвующей в этой иммуномодуляции, а также о молекулярных механизмах, лежащих в ее основе, информация практически отсутствует. Для понимания природы повреждения селезенки титановыми наночастицами, их вводили внутрибрюшинно ежедневно на протяжении 45 дней. Исследованы патологические изменения в селезенке, уровень апоптоза, экспрессии апоптотических генов и их белков, а также окислительный стресс в селезенке. Результаты проведенного исследования показали, что наночастицы двуокиси титана накапливаются в селезенке мыши, ведя к застою и пролиферации лимфоидных узелков, а также усилению апоптоза спленоцитов. Эти частицы эффективно активирова