Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Получение трансгенных растений табака, экспрессирующих гены глюканаз термофильных бактерий, в качестве моделей для изучения роли полиглюкангидролаз в растениях

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ализаде Хушанг

Содержание

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Молекулярные механизмы устойчивости растений на атаку фитопатогенами 9 1.1.1 Локально индуцированные защитные ответы растений

1.1.2. Системная приобретенная резистетность (SAR)

1.1.3. Патоген-родственные белки растений (PR-белки)

1.1.4. Индуцированная системная устойчивость и другие защитные пути у растений

1.1.5. Существует ли общий путь активации разных защитных ответов?

1.2. Бета-глюканазы растений

1.2.1. (3-1,3-глюканазы

1.2.2. |3-1,3-1,4-глюканазы

1.2.3. Элиситоры защитных ответов растений

1.3. Бактерии родов Thermotoga и Clostridium, их глюканогидролазные комплексы, доменная структура их глюкангидролаз

1.3.1. Структурные особенности Р-1,3-глюканазы (ламинариназы) Thermotoga neapolitana

1.3.2. Структурные особенности Р-1,3 -1,4-глюканазы (лихеназы) Clostridium thermocellum

1.3.3. Использование глюкангидролаз термофильных бактерий в прикладных и фундаментальных исследованиях 43 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 57 3.1. Модификация бактериальных ферментов и сравнительное изучение биохимических свойств делеционных вариантов и полноразмерных белков р-глюканаз

3.1.1. Модификация и свойства делеционного варианта и полноразмерного фермента (3-1,3-глюканазы

3.1.2. Модификация и свойства делеционного варианта и полноразмерного фермента J3-1,3 -1,4-глюканазы

3.2. Конструирование трансгенных растений табака, экспрессирующих бактериальные гены (3-глюканаз

3.2.1. Конструирование экспрессионных векторов для трансформации растений, несущих бактериальные гены (3-1,3-глюканазы и (3-1,3 -1,4-глюканазы

3.2.2. Трансформация растений табака и получение первичных трансформантов

3.3. Молекулярно-биологический анализ первичных трансформантов растений табака, экспрессирующих бактериальные гены [3-глюканаз

3.3.1. Способность листовых дисков первичных трансформантов к каллусообразованию на среде с канамицином

3.3.2. Анализ геномной растительной ДНК на наличие в ее составе последовательностей бактериальных генов (3-глюканаз методом гибридизации по Саузерну

3.3.3. Количественные уровни активности бактериальных (3-глюканаз у трансгенных растений различных линий

3.3.4. Эффективная секреция бактериальных (3-глюканаз в межклеточное пространство трансгенных растений посредством лидерного пептида экстенсина моркови

3.3.5. Метод зимограмм и метод чашечного теста для качественного анализа активности бактериальных |3-глюканаз

3.4. Морфологический, физиолого-биохимический и молекулярно-биологический анализ трансгенных растений табака, экспрессирующих бактериальные гены |3-глюканаз

3.4.1. Морфологические характеристики трансгенных растений, экспрессирующие бактериальные гены (3-глюканаз

3.4.2. Физиолого-биохимические характеристики трансгенных растений, экспрессирующие бактериальные гены (3-глюканаз

3.4.2.1. Морфогенетический потенциал листовых эксплантов трансгенных растений различных линий

3.4.2.2. Фотосинтетические пигменты трансгенных растений табака, экспрессирующих бактериальные (З-глюканазы

3.4.2.3. Спектры основных и кислых полипептидов, экстрагированных из листьев трансгенных растений табака, экспрессирующих бактериальные (3-глюканазы

3.4.2.4. Антигрибная активность экстрактов различных линий трансгенных растений

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Получение трансгенных растений табака, экспрессирующих гены глюканаз термофильных бактерий, в качестве моделей для изучения роли полиглюкангидролаз в растениях"

В настоящее время ведутся интенсивные работы в области изучения защитных ответов растений при воздействии различных факторов окружающей среды. Ни один организм в экосистеме не существует изолированно от своего окружения, взаимодействуя либо с другими живыми существами, либо с внешними абиотическими факторами. Такие взаимодействия не всегда являются выгодными для живого организма. Живые организмы способны приспосабливаться к меняющимся условиям окружающей среды, подключая различные механизмы адаптации или защиты. Центральной проблемой исследований при этом является изучение механизмов внутриклеточной регуляции, которые позволяют организму изменять направленность или интенсивность метаболизма таким образом, чтобы оптимальным образом обеспечить его жизнедеятельность в стрессовых условиях. Растения не являются в этом смысле исключением.

В последние годы огромный интерес ученых связан с проблемой изучения функционирования и принципов регуляции защитной системы растений при действии неблагоприятных стрессовых факторов, среди которых первое место, несомненно, занимает атака фитопатогенов. Растения настолько часто подвергаются действию потенциальных фитопатогенов, что имели бы мало шансов выжить, если бы не тонкие механизмы защитных ответов, незамедлительно включающиеся в ответ на атаку фитопатогенов.

Фитопатогены вызывают значительную перестройку всего клеточного метаболизма под строгим контролем генетического аппарата клетки. Существует три уровня защиты растений от фитопатогенов. Первый уровень представляет собой генетически наследуемые механизмы устойчивости, обеспечивающие конститутивную устойчивость растений к фитопатогенам. Второй уровень защиты активируется в непосредственной близости от места инфекции или поранения. В случае несовместимого взаимодействия между патогеном и растением возникает гиперчувствительный ответ (HR - hypersensitive response). При этом в месте поражения происходит некроз ткани, который препятствует дальнейшему распространению фитопатогенов. Как полагают, на этапе HR происходит и образование сигналов, активирующих защитные механизмы растения-хозяина. Развитие системной приобретенной устойчивости (SAR -systemic required response), заключающейся в повышении устойчивости пораженного растения к последующей атаке широким спектром фитопатогенов, представляет собой третий уровень защиты растения от фитопатогенов. Развитие SAR строго коррелирует с координированной экспрессией набора генов защитных ответов, которые кодируют, прежде всего, различные группы PR-белков (pathogenesis related proteins). Эти белки экспрессируются как часть общего защитного ответа. Среди них особое место в защитных ответах растений против фитопатогенов принадлежит гидролитическим ферментам, таким как (3-глюканазы.

Помимо участия [3-глюканаз в защитных реакциях растений, этим ферментам принадлежит большая роль во многих физиологических процессах растительной клетки, таких как прорастание семян, рост гипокотилей и колеоптилей, флоэмный транспорт и другие.

Предложено несколько моделей участия бета-глюканаз в жизнедеятельности растений. Один из механизмов, посредством которого (3-глюканазы могут осуществлять свои физиологические и/или защитные функции, является высвобождение элиситоров (олигосахаринов) из клеточной стенки либо самого растения, либо фитопатогена.

Несмотря на обилие полученных результатов, относительно участия Р-глюканаз в физиологических и защитных процессах растений, роль и молекулярные механизмы функционирования этих ферментов в этих процессах жизнедеятельности растений остаются еще не полностью выясненными. Если сейчас уже установлен ряд индукторов, которые активируют синтез растительных глюканаз, то мало известно о том, какие дальнейшие изменения в экспрессии растительных генов и, в конечном итоге, метаболизме растительной клетки, происходят при действии этих гидролитических ферментов. Не выявлено, какие сигналы при индуцированной активации растительных (3-глюканаз могут осуществлять взаимосвязь с другими метаболитами растительной клетки. Понимание роли (3-глюканаз в процессах роста и развития растений затруднено еще и по той причине, что в растениях обнаружено несколько изоформ ферментов, которые отличаются клеточной локализацией и индуцибельностью.

В изучении роли растительных ферментов ((3-глюканаз) в защитных механизмах растений также имеются значительные трудности. Прежде всего, следует отметить, что грибные фитопатогены обладают собственными р-глюканазами, которые могут гидролизовать клеточную стенку растений. Поэтому одной из проблем изучения защитных реакций растения при атаке фитопатогенами является "вычленение" ответной реакции инфицированного растения из двухкомпонентной системы хозяин - патоген. Пораженные ткани растения невозможно отделить от фитопатогена. В связи с этим проба, взятая для биохимического анализа, состоит не из однородной ткани больного растения, а из суммы двух взаимодействующих организмов. Это не позволяет точно выявлять соединения, связанные с защитной реакцией растений, а также выяснить механизм их действия.

Приступая к нижеизложенной работе, в качестве рабочей гипотезы нами было выдвинуто предположение, что экспрессия в растениях генов бактериального происхождения, которые кодируют ферменты с активностями, аналогичными или близкими к растительным ферментам, может имитировать действие растительных белков, что позволит моделировать отдельные этапы метаболизма или защитного ответа. В качестве модели для таких исследований мы предполагали получить трансгенные растения табака, которые экспрессируют гены бета-1,3- и бета-1,3-1,4-глюканазы из термофильных бактерий Clostridium thermocellum и Thermotoga neapolitana. Эти ферменты имеют ряд преимуществ по сравнению с р-глюканазами из других источников, в том числе и растений. Основные из них - высокая термостабильность - оптимум температуры для проявления активности составляет 70°С и 95°С и удельная активность - 3000 и 2200 Ед, соответственно для Clostridium thermocellum и Thermotoga neapolitana. Эти свойства позволяют легко тестировать их ферментативную активность в растениях простыми и чувствительными методами на фоне термолабильных растительных глюканаз. Создание таких модельных систем имеет не только академический, но и практический интерес, поскольку позволяет проследить за работой единичных генов растений, оценить их влияние на другие растительные гены, и, в итоге, получить дополнительные сведения о работе и принципах регуляции метаболизма растений в целом.

Цель нашего исследования: получить модельные трансгенные растения табака, экспрессирующие бактериальные гены |3-глюканаз из термофильных бактерий Clostridium thermocellum и Thermotoga neapolitana, и провести их молекулярно-биологический и физиолого-биохимический анализ. Исходя из цели работы, были поставлены следующие задачи:

1. Модифицировать последовательности бактериальных генов, кодирующие термостабильные р-глюканазы с различной субстратной специфичностью, для успешной экспрессии в растениях, и провести сравнительный анализ основных свойств полученных делеционных вариантов и полноразмерных ферментов (термостабильность, активность, субстратная специфичность).

2. Получить экспрессионные вектора для трансформации растений, в которых бактериальные гены (3-глюканаз находятся под контролем различных регуляторных элементов.

3. Получить линии трансгенных растений, которые экспрессируют бактериальные гены бета-глюканаз, и провести молекулярно-биологический анализ (ПЦР, гибридизацию по Саузерну, определение свойств бактериальных ферментов, экспрессированных в растениях, изучение секреции бактериальных ферментов в межклеточное пространство растительной клетки, опосредованной последовательностью лидерного пептида экстенсина моркови).

4. Провести сравнительный физиолого-биохимический анализ различных линий полученных трансгенных растений табака (фитогормональный статус, фотосинтетические пигменты, полипептидный состав, активность растительных ферментов).

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Ализаде Хушанг

ВЫВОДЫ

1. Бактериальные ферменты в растительных клетках не подвергаются модификациям, что свидетельствует о стабильной экспрессии делеционных вариантов бактериальных генов бета-глюканаз в растительных клетках.

2. Делеционные варианты бактериальных глюканаз, образуемые в трансгенных растениях в результате экспрессии бактериальных генов, сохраняют основные свойства полноразмерных белков термостабильность, активность и субстратную специфичность.

3. Сравнительный анализ экспрессии двух бактериальных глюканаз с различной субстратной специфичностью показал, что экспрессия бактериального гена бета-1,3-1,4-глюканазы, в отличие от гена бета-1,3-глюканазы, не оказывает какого-либо существенного влияния на рост и развитие растений.

4. Экспрессия бактериального гена бета-1,З-глюканазы приводит к изменению фитогормонального статуса и фотосинтетической активности у трансгенных растений табака.

5. Лидерный пептид экстенсина моркови осуществляет эффективную секрецию бактериальных ферментов в межклеточное пространство растительной клетки. Секретируемые ферменты проявляют более высокую стабильность в растительной клетке, по сравнению с ферментами, локализованными в цитоплазме, что дает основание рекомендовать лидерный пептид экстенсина моркови для эффективной экспрессии других гетерологичных белков в растениях.

Автор выражает глубокую признательность своему научному руководителю профессору, доктору биологических наук Элеоноре Суреновне ПИРУЗЯН за постоянную поддержку и внимание в ходе выполнения работы. Автор искренне признателен всему коллективу Лаборатории генетической инженерии растений Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН за оказанную помощь и доброе отношение.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ализаде Хушанг, Москва

1. Бутенко Р.Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнология на их основе. М.: ФБК-Пресс,- 1999,-160 с.

2. Гавриленко В.Ф., Ладыгина М.Е., Хандобина Л.М. Большой практикум по физиологии растений. Фотосинтез. Дыхание. Под ред. Б.А. Рубина.- М.: Высшая школа,- 1975,- С.194-196.

3. Кефели В.И. Рост растений// Под ред. М.Х.Чайлахяна,- 2-е изд., пепераб. и доп. М.:Колос, 1984,- 175 с.

4. Кефели В.И. Физиологические основы конструирования габитуса растений// М.: Наука, 1994.- 269 с.

5. Кефели В.И. Фотоморфогенез, фотосинтез и рост как основа продуктивности растений//Пущино: ОНТИ ПНЦ АН СССР, 1991. 133 с.

6. Моисеева Н.А. Молекулярные и клеточные механизмы морфогенеза в культуре клеток растений// В кн. Биология культивируемых клеток и биотехнология растений (под ред. Р.Г.Бутенко). М.: Наука, 1991,- 280 с.

7. Мокроносов А.Т. Фотосинтетическая функция и целостность растительного организма.- М.: Наука. 1983. 356 с.

8. Мокроносов А.Т., Гавриленко В.Ф. Фотосинтез: физиолого-экологические аспекты. М: Изд-во МГУ. 1992,- 320 с.

9. Ю.Монзави-Карбасси Б., Голденкова И.В., Кобец Н.С., Мусийчук К.А., Волкова Л.В., Пирузян Э.С. Гетерологичная экспрессия гена ИсВ Clostridium thermocellum в протопластах табака \\ Генетика. 1997. - Т.ЗЗ, N7. - С.904-910.

10. Пирузян Э.С., Могутов М.А Великодворская Г.А., Зверлов ВВ., Лаптев Д.А., Метт B.JI. Клонирование и некоторые свойства гена lihl, кодирующего новую эндоглюканазу Clostridium thermocellum Ф7// Биотехнология,- 1990.-N4,-С. 18-19.

11. Полевой В.В. Физиология растений. 1989.- М.: Высшая школа. - 464 с.

12. Тарчевский И.А., Максютова Н.И., Яковлева В.Г. Влияние салициловой кислоты на синтез белков в проростках гороха // Физиология растений.-1996.-Т.43, N5.- С.667-670.

13. Akiyama Т., Kaku Н., Shibuya N. Purification and properties of a basic endo-1,3-beta-glucanase from rice (Oryza sativa L.). Plant Cell Physiol.- 1996,- V. 37,- N 5.-P.702-705.

14. Allan A.C., Fluhr R. Two distinct sources of elicited reactive oxygen species in tobacco epidermal cells //Plant Cell. 1997,- V. 9. P. 1559-1572.

15. Anderson-Prouty A.J., Albersheim P. Host-pathogen interactions. VIII. Isolation of pathogen-synthesized fraction rich in glucan that elicits a defence response in pathogen's host // Plant Physiology.- 1975.-V.56. P.286-291.

16. Antoniw J.F., Ritter C.E., Pierpoint W.S., Van Loon L.C. The presence of pathogenesis-related proteins in callus of Xanthi-nc tabacco// Phytopathol.Z.-1980,- V.101.- P.179-184.

17. Asselin A., Grenier J., Cote F. Light- influenced extracellular accumulation of b (pathogenesis- related) proteins in Nicotiana green tissue induced by various chemicals or prolonged floating on water // Can. J. Bot.- 1985.- V.63.- P. 12761283.

18. Baker C.J., Orlandi E.W. Active oxygen in plant pathogenesis // Annu. Rev. Phytopath.- 1995,- V.33.- P.299-321.

19. Baron C., Zambryski P.C. The plant response in pathogenesis, symbiosis, and wounding: variations on common theme? // Annu. Rev. Genetics.-1995.- V.29.-P. 107-129.

20. Bayer E.A., Chanzy H., Lamed R, Shoham Y. Cellulose, cellulases and cellulosomes. Current Opinion in Structural Biology. 1998. V.8. P.548-557.

21. Bednarel S.Y., Railhel N.V. Intracellular trafficking of secretory proteins// Plant Mol. Biol.- 1992,- V.20.- P. 133-150.

22. Beerhues L., Kombrink E. Primary structure and expression of mRNAs encoding basic chitinase and 1,3-beta-glucanase in potato.// Plant Mol. Biol.- 1994,- V. 24.-N2,- P. 353-367.

23. Beguin P. Molecular biology of cellulose degradation// Annu. Rev. Microbiol.-1990,- V.44.- P. 219-248.

24. Bent A.F. Plant disease resistance genes: function meets structure // Plant Cell. 1996,-V. 8.-P. 1757- 1771.

25. Bestwick C.S., Brown I.R., Bennett M.H.R., Mansfield J.W. Localization of hydrogen peroxide accumulation during the hypersensitive reaction of Lettuce cells to Pseudomonas syringae pv phaseolicola II Plant Cell.- 1997. -V. 9. P. 209-221.

26. Bissonnette R.R., Echeverri F., Mahboudi A., Green D.R. Apoptotic cell death induced by c-myc is inhibited by bcl2 // Nature.- 1992,- V.359.- P.552-554.

27. Bohlmann H. The role of thionins in plant protection // Crit. Rev. Plant Sci.- 1994,-V.13.- P.l-16.

28. Bol J.F., Linthorst H.J.M., Cornellissen B.J.C. Plant pathogenesis- related proteins induced by virus infection // Annu. Rev. Phytopathol.-1990,- V.28.- P. 113-138.

29. Bol J.F., Van Kan J.A.L. The synthesis and possible functions of virus-induced proteins in plants//Microbiol. Sci.- 1988.- V.5.- P.47-52.

30. Вошап H.G. Peptide antibiotics and their role in innate immunity // Annu. Rev. Immunol.-1995,- V.13.- P.61-92.

31. Bonas U. hrp-genes of phytopathogenic bacteria I I Curr. Top. Microbial. Immunol.-1994,- V.192.- P.79-98.

32. Bowless D.J. Defense- related proteins in higher plants // Annu. Rev. Biochem.-1990,- V.59.-P.873- 907.

33. Bowling S., Guo A., Cao H., Gordon A.S., Klessig D., Dong X. A mutation in Arabidopsis that leads to constitutive expression of systemic acquired resistance //Plant Cell. -1994,- V. 6. P. 1845-1857.

34. Bradford M.M. A rapid sensitive method for the action of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding// Anal.Biochem.- 1976,-V.72.- P.248-254.

35. Bringar A.C., Stevens A., Fox J.E. Biosynthesis and degradation of a wheat embryo cytokinin-binding protein during embriogenesis and germination// Plant Phys., 1985. V. 19.- P. 706-710.

36. Broekaert W.F., Terras F.R.G., Cammue B.P.A., Osborn RW. Plant defensins: novel antimicrobial peptides as components of the host defense system // Plant Physiol.- 1995,- V.108, N4,- P.1353-1358.

37. Broglie K., Chet I., Holliday M., Cressman R, Biddle P., Knowlton C., Mauvais C.J., Broglie R. Transgenic plants with enchanced resistance to the fungal pathogen Rhizoctonia solani H Science .-1991.- V.254.- P.l 194-1197.

38. Bronnenmeier К., Kern A., Liebl W. and Staudenbauer W. Purification of Thermotoga maritima enzymes for the degradation of cellulolytic materials// Applied and Enviromental Microbiology. 1995. V.61, N 4. - P.1399-1407.

39. Burton J., Wood S.G., Pedyczak A., Siemion I.Z. Conformational preferences of sequential fragments of the hinge region of human IgAl immunoglobulin molecule.//Biophys.Chem. -1989. -Y.33. P. 39-45.

40. Candela M.E., Alcazar M.D., Espin A., Egea C., Almela L. Soluble phenolic acids in Capsicum annuum stems infected with Phytophthora capsici // Plant Pathology.- 1995,-Y.44.-P. 116-123.

41. Cao H. et al. Characterization of an Arabidopsis mutant that is nonresponsive to inducers of systemic acquired resistance I I Plant Cell.- 1994,- V.6. -P. 1583-1592.

42. Cao H., Glazebrook J., Clarke JD., et al. Arabidopsis NPR1 gene that controls Systemic Acquired Resistance encodes a novel protein containing ankyrin repeats //Cell.-1997. -V.88. -P.57-63.

43. Carr J.P., Klessig D.F. The pathogenesis- related proteins of plants. In J.K. Setlow,- ed, Genetic engineering: principles and methods. Plenum Press, new York.- 1989,- V.ll.-P. 65-109.

44. Castresana C., de Carvalho F., Gheysen G., Habets M., Inze D., van Montagu M. Tissue specific and pathogen-induced regulation of Nicotiana plumbaginifolia (3-1,3-glucanase gene// Plant Cell.-1991 .-V.2.- P. 1131-1143.

45. Chang M.M., Hadwiger L.A., Horovitz D. Molecular characterization of a pea beta-1,3- glucanase induced by Fusarium solani and chitosan challenge // Plant Molecular Biology.- 1992,- V.20, N4,- P.609-618.

46. Cline К., Albersheim P. Host-pathogen interactions. XVII. Hydrolysis of biologically active fungal glucans by enzyme isolated from soybean cells// Plant Physiol. -1981,- V. 68,- P. 221-228.

47. Cohen Y. Local and systemic control of Phytophthora infestans in tomato plants by DL-3-amino-n-butanoic acids//Phytopathology.- 1994a. -V.84. -P.55-59.

48. Cohen Y., Gisi U., Mosinger E. Systemic resistance of potato plants against Phytophthora infestans induced by unsaturated fatty acids // Physiological and Molecular Plant Pathology.- 1991.-V.38. -P.255-263.

49. Colilla F J., Rocher A., Mendez E. Gamma- purothionins: amino acid sequence of two polypeptides of a new family of thinins from wheat endosperm // FEBS Lett.-1990,- V.270.- P.191-194.

50. Collinge D.B., Kragh K.M., Mikkelsen J.D., Nielsen K.K., Rasmussen U„ Vad K. Plant chitinases // Plant J., 1993,- V.3.- P.31 40.

51. Creelman R.A., Mullet J.E. Biosynthesis and action of jasmonates in plants // Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol.- 1997.-V.48.-P.425-449.

52. Cutt J R., Harpster M.H., Dixon D.C., Carr J.P., Dunsmuir P., Klessig D.F. Disease response to tobacco mosaic virus in transgenic tobacco plants that constitutively express the pathogenesis- related PR-lb gene // Virology.- 1989,- V.173.- P.89- 97.

53. De Loose M., Gheysen G., Tire C., Gielen J., Villarroel R., Genetello C., Van Montagu M., De Picker A., Inze D. The Extensin Signal Peptide Allows Secretion of a Heterologous Protein from Protoplasts// Gene.-1991. V.99. - P.95-100.

54. De Wit P.J.G.M., Spikman G. Evidence for the Occurrence of Race and Cultivar-Specific Elicitors of Necrosis in Intercellular Fluid of Compatible Interactions of Cladosporium fulvum and Tomato// Physiol Plant Pathol. -1982. -V.21. -P. 1-11.

55. Deblaere R, Reynaerts A, Hofte H, Hernalsteens JP, Leemans J, Van Montagu M. Vector for cloning in plant cells. Meth Enzymol.- 1987,- V. 153,- P.277-292.

56. Delaney Т., Friedrich L., Ryals J. Arabidopsis signal transduction mutant defective in chemically and biologically induced disease resistance// Proc.Natl.Acad.Sci.-1995.-V.92,- P.6602-6606.

57. Delaney T.P. Genetic dissection of acquired resistance to disease // Plant Physiol. -1997.-V. 113.-P. 5-12.

58. Delaney T.P., Uknes S., Vernooij В., Friedrich L., Weymann K., Negrotto D., Gaffney Т., Gut Rella M., Kessmann H., Ward E., Ryals J.A. A central role of salicylic acid in plant disease resistance // Science. -1994. -V. 226. -P. 12471250.

59. Deroles S.C., Gardner R.C. Analysis of the T-DNA structure in a large number of transgenic petunias generated by Agrobacterium-mediated transformation// Plant Mol Biol. 1988b.-V. 11.-P.365-377.

60. Deroles S.C., Gardner R.C. Expression and inheritance of kanamycin resistance in a large number of transgenic petunias generated by Agrobacterium-mediated transformation//Plant Mol Biol. 1988,-V. 11,-P.355-364.

61. Dietrich A., Mayer IE., Hahlbrock K. Fungal elicitor triggers rapid, transient, and specific protein phosphorylation in parsley cell suspension cultures // J. Biol. Chem.- 1990,- V.265.- P.6360-6368.

62. Dietrich R.A., Delaney T.P., Uknes S.J., Ward E.R., Ryals J.A., Dangl J.L. Apabidopsis mutants simulating disease resistance response I I Cell.- 1994,- V.77.-P.565-577.

63. Dixon R.A., Lamb C.J. Molecular communication in interactions between plants and microbial pathogens // Annu.Rev.Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 1990. - V. 41.-P. 339-367.

64. Domingo C., Conejero V., Vera D. Genes encoding acidic and basic class III (3-1,3-glucanases are expressed in tomato plants upon viroid infection// Plant Mol. Biol. 1994. -V.14. - P. 725-732.

65. E.S.Piruzian, B.Monzavi-Karbassi, N.S.Darbinian, I.V.Goldenkova, N.S.Kobets, A.V.Mochulsky. The use of thermoactive P-glucanase gene from Clostridium thermocellum as a reporter gene in plants//Mol.Gen.Genet. 1998. - V.257. -P.561-567.

66. Ebel J., Mithofer A. Early events in the elicitation of plant defence// Planta. -1998. -V.206. P.335-348.

67. Enyedi A.J., Yalpani N., Silverman P., Raskin I. Signal molecules in systemic plant resistance to pathogens and pests // Cell. -1992. V.70. - P. 879-886.

68. Felix G., Meins JF. Developmental and hormonal regulation of (3-1,3-glucanase in tobacco// Planta.- 1987,- V.172.- P.386-392.

69. Fincher G.B. and Stone B.A., Metabolism of noncellulolosic polysacharides// End Plant Physiol. New Series. -1981. 13B. - P.68-132.

70. Fincher G.B. Molecular and cellular biology associated with endosperm mobilization in germinating cereal grains// Ann. Rev. Plant Physiol. Plant Mol Biol. 1989.-P.305-346.

71. Fire A. RNA-triggered gene silencing// Trends in Biotechnology. 1999.- V. 15, N 9,- P. 358-363.

72. Fischer W., Christ U., Baumgartner M., Erismann K.H., Mosinger E. Pathogenesis-related proteins of tomato. 2. Biochemical and immunological characterization // Physiol. Mol. Plant Pathol.- 1989,- V.35.- P.67- 83.

73. Flor H.H. Current status of the gene-for-gene concept // Annu. Rev. Phytopathol. -1971.-V. 9.-P. 275-296.

74. Fraser R.S.S. Evidence for the occurrence of the "pathogenesis-related" proteins in leaves healthy tobacco plants during flowering // Physiol. Plant Pathol.- 1981,-V.19.- P.69-76.

75. Frey M., Chomet P., Glawischnig E. Analysis of a chemical plant defense mechanism in grasses // Science.- 1997.-V.277,- P.696-699.

76. Friedrich L. A benzothiadiathole derivate induces systemic acquired resistance in tobacco // Plant J.-1996.-V.10.-P.61-70.

77. Frye C.A., Innes R.W. An Arabidopsis mutant with enhanced resistance to powdery mildew // Plant Cell.- 1998,- V. 10.- P.947-956.

78. Gaffney Т., Friedrich L., Vernooij В., Negrotto D., Nye G., Uknes S., Ward E., Kessmann H., Ryals J. Requirement of salicylic acid for the induction of systemic acquired resistance // Science. 1993. - V.261. - P. 754-756.

79. Gassab G.I., Varner J.E. Cell wall proteins// Ann. Rev. Plant Physiol, and Plant Mol. Biol.- 1988,- V. 39,- P.321-353.

80. Gheysen G., Inze D., Soetaert P., Van Montagu M., Castresana C. Sequence of a Nicotiana plumbaginifolia beta( 1,3)-glucanase gene encoding a vacuolar isoform// Nucleic Acids Res. 1990,- V.18, N22,- P.6685.

81. Gilbert H.J. and Hazlewood G.P. Bacterial cellulases and xylanases// J. of General Microbiology. 1993. - V. 139. - P. 187-194.

82. Gilbert H.J. and Hazlewood G.P. Bacterial cellulases and xylanases// J. of General Microbiology.- 1993,-V.139. P. 187-194.

83. Gilkes N.R., Henrissat В., Kilburn D.G., Miller R.C. and Warren R.A.J. Domains in microbial J3-l,4-glycanases: sequence conversation, function and enzyme families//Microbiol. Rev. 1991,- V. 55. P. 303-315.

84. Gilkes NR., Kilburn D.G., Miller R.C. and Warren R.A.J. Structural and functional analysis of bacterial cellulase by proteolysis// J. Biol. Chem.- 1989.- V. 264,- P. 17802-17808.

85. Gilkes N.R., Warren R.A.J., Miller R.C. and Kilburn D.G. Precise excision of the cellulose binding domains from two Cellulomonas fimi cellulases by a homologous protease and the effect on catalysis// J. Biol. Chem., 1988. V.263. -P. 10401-10407.

86. Glazebrook J., Zook M., Mert F. et al. Phytoalexin-deficient mutants of Arabidopsis reveal that PAD4 encodes a regulatory factor and that four PAD genes contribute to downy mildew resistance // Genetics.- 1997.-V.146.-P.381-392.

87. Gopalan S., He S.Y. Bacterial genes determining basic compatibility between plants and necrogenic bacteria // Plant Dis.- 1996.-P. 156-162.

88. Gorlach J. et al. Benzothiadiathole: a novel class of inducers of systemic acquired resistance in wheat// Plant Cell.- 1996.-V.8.- P.629-643.

89. Greenberg J.T., Ailan G., Klessig D.F., Ausubel F.M. Programmed cell death in plants: A pathogen-triggered response activated coordinately with multiple defense functions // Cell.- 1994,- V.77.- P.551-563.

90. He S.Y., Gopalan S., Wei W., Yuan J. Molecular biology of plant-bacterial interactions. In MSU-DOE Plant Research Laboratory. Thirtieth Annual Report. Michigan State University, USA.- 1995,- PP. 29-34.

91. He S.Y., Huang H.C., Collmer A. Pseudomonas syringae pv syringae 61 harpin Pss , a protein that is secreted via the Hrp pathway and elicits the hypersensitive response in plants // Cell.- 1993,- V.73.- P. 1255-1266.

92. Hedrick S.A., Bell J.N., Boiler Т., Lamb С J. Chitinase cDNA cloning and mRNA induction by fungal elicitor, wounding and infection // Plant Physiol. -1988,- V.86.- P.182-186.

93. Helleboid S., Bauw G., Belingheri L., Vasseur J., Hilbert J.-L. Extracellular 1,3-glucanases are induced during early somatic embryogenesis in Cichoriumll Planta. 1998. - V. 205. - P.56-63.

94. Hill C.P., Yee J., Selsted M.E., Eisenberg D. Crystal structure of defensin HNP-3, an amphiphilic dimer. Mechanism of membrane permeabilization // Science.-1991,- V.251.- P.1481- 1485.

95. Hinton DM., Pressey R. Glucanases in fruits and vegetables// J.Am.Soc.Hort Sci.-1980,- V.105.- P.499-502.

96. Hlatt A., Cafferkey R., Bowdich K. Production of antibodies in transgenic plants//Nature.- 1989,- V.342.- P.76-79.

97. Hoj P.B., Hertman D.J., Morrice N.A., Doan D.N.P., Fincher G.B. Purification of (l,3)-(3-glucan endoglucanase isoenzyme II from germinated barley and determination of its primary structure from a cDNA clone// Plan Mol Biol.- 1989.-V.13.-P. 31-42.

98. Hoj PB., Fincher GB. Molecular evolution of plant beta-glucan endohydrolases// Plant J.- 1995,- V.7, N3,- P.367-379.

99. Huang H.C., He S.Y., Bauer D.W., Collmer A. The Pseudomonas syringae pv syringae 61 hrpH product: an envelope protein required for elicitation of the hypersensitive response in plants I I J. Bacteriol.- 1992,- V.174.- P.6878- 6885.

100. Huber DJ., Nevins DJ. (3-D-Glucan hydrolase activity in Zea coleoptile cell walls// Plant Physiol.- 1980,- V.65.- P. 768-773.

101. Huber R., Langworthy Th.A., Konig H., Thomm M., Woese C., Sleytr U., Stetter K. Thermotoga maritima sp.nov. represents a new genus of unique extremely thermothilic eubacteria growing up to 90°C// Arch.Microbiol. 1986. -V. 144.-P. 324-333.

102. Hunt M., Ryals J. Systemic acquired resistance signal transduction // Crit Rev. Plant Sci. 1996. - V. 15. - P. 583-606.

103. Huub J.M., Linthorst Ph.D. Pathogenesis-related proteins of plants// Cri Rev in Plant Sci.-1991.-V.10, N2,- P. 123-150.

104. Inze D., Van Montagu M. Oxidative stress in plants // Curr. Opin. Bacteriol. -1995.-V. 6.-P. 153- 158.

105. Iturriaga G., Jefferson R.A., Bevan M.W. Endoplasmic Reticulum Targeting and Glycosylation of Hybrid Proteins in Transgenic Tobacco// Plant Cell. 1989. -V.l. -P.381-390.

106. Joosten M.H.A.J., De Wit P.J.G.M. Identification of several pathogenesis-related proteins in tomato leaves inoculated with Cladosporium fulvum (syn. Fulvia fulva) as (3-1,3 glucanases and chitinases // Plant Physiol.- 1989,- V.89.- P.945-951.

107. Joosten M.H.A.J., Vogelsang R., Cozijnsen T.J., Verberne M., De Wit P.J.G.M. The biotrophic fungus Cladosporium fulvum circimvents cf-4-mediated resistance by producing unstable AVR4 elicitors// Plant Cell. 1997. - V.9. -P.367-379.

108. Jung J.-L., Fritig В., Hahne G. Sunflower (Helianthus annuus L.) pathogenesis- related proteins // Plant Physiol.- 1993,- V. 101, N3,- P.873-880.

109. Kauffmann S., Legrand M., Geoffroy P., Fritig B. Biological function of pathogenesis-related proteins: four PR proteins of tobacco have l,3-(3-glucanase activity // EMBO J.- 1987,- V.6.- P.3209- 3212.

110. Kawaoka A., Kawamoto Т., Ohta H. et al. Wound-induced expression of horseradish peroxidase // Plant Cell Rep.-1994.-V.13.-P.149-154.

111. Keen N.T. Gene-for-gene complementarity in plant-pathogen interactions // Annu. Rev. Genet.- 1990.- V.24.- P.447-63.

112. Keen N.T. The molecular biology of disease resistance // Plant Molecular Biology. 1992. - V. 19. - P. 109-122.

113. Kiem T.T.V., Toubart P., Cousson A., Darvill A.G., Golin D.J., Chelf P., Albersheim P. Manipulation of the morphogenetic pathway of tobacco explants by oligosacharins//Nature.- 1985,- V. 314. P. 615-617.

114. Kononowicz A.K., Nelson D.E., Singh N.K., Hasegawa P.M., Bressan R.A. Regulation of the osmotin gene promoter // Plant Cell.- 1992,- V.4.- P.513-524.

115. Kooter J.M., Matzke M.A., Meyer P. Listening to the silent genes: transgene silencing, gene regulation and pathogen control// Trends in Plant Science.- 1999.-V.4, N 9,- P. 340-347.

116. Kozarov E., Kaliev A., Andrianov V., Piruzian E. Construction of plant expression vector active in prokaryotic cells// Dokl. Bulgarian Academy of Sciences.- 1988,- V.41.- N.9.- P. 117-118.

117. Kuchitsu K., Kikuyama M., Shibuya N. N- acetylchito-oligosacharides, biotic elicitor for phytoalexin production, induce transient membrane depolarization in suspension- cultured rice cells // Protoplasma.- 1993,- V.174.- P.79-81.

118. La Rosa P.C., Chen Z., Nelson D.E., Singh N.K., Hasegawa P.M., Bressan R.A. Osmotin gene expression is posttranscriptionally regulated // Plant Physiol.- 1992.-Y.100.- P.409-415.

119. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head bacteriophage T4// Nature.-1970,- V.227.- P.680-685.

120. Lamb C., Dixon R.A. The oxidative burst in disease resistance // Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 1997. - V.48. - P. 251-275.

121. Lamb C.J. Plant disease resistance genes in signal perception and transduction //Cell.- 1994,-V.76.-P.419-422.

122. Lawton K. et al. Benzothiadiathole induces disease resistance in Arabidopsis by activation of the systemic acquired resistance signal transduction pathway // Plant J.-1996.-V.10.-P.71-82.

123. Legrand M., Kauffmann S., Geoffroy P., Fritig B. Biological function of pathogenesis- related proteins: four tobacco pathogenesis- related proteins are chitinases //Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1987,- V.84.- P.6750- 6754.

124. Leon J., Lawton M.A., Raskin I. Hydrogen peroxide stimulates salicylic acid biosynthesis in tobacco//Plant Physiol. 1995. -V. 108 - P. 1673-1678.

125. Lerbs S„ Lerbs W., Klyachko N.L., Kulaeva O.N., Wollgiehn R., Parthier B. Gene expression in cytokinin- and light-mediated plastogenesis of Cucurbita cotyledons: ribulose-l,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase// Planta.- 1984. -V.162. -P.289-298.

126. Levine A., Pennell R.I., Alvarez M.E., Palmer R., Lamb C. Calcium-mediated apoptosis in a plant hypersensitive disease resistance response // Curr. Biol.-1996. -V. 4. -P. 427-437.

127. Levine A., Tenhaken R, Dixon R., Lamb C. H202 from the oxidative burst orchestrates the plant hypersensitive disease resistance response // Cell.- 1994,-V.79.- P.583- 593.

128. Liebl W., Stemplinger I., Ruile P. (1997) Properties and gene structure of the Thermotoga maritima alpha-amylase AmyA, a putative lipoprotein of a hyperthermophilic bacterium//J. Bacteriol. 1997. - V. 179, N 3. - P. 941-948.

129. Linthorst H.J.M. Pathogenesis-related proteins of plants // Crit. Rev. Plant Sci.-1991,- V.10.- P.123- 150.

130. Linthorst H.J.M., Melchers L.S., Mayer A., van Roekel J.S.C., Cornelissen B.J.C., Bol J.F. Analysis of gene families encoding acidic and basic (3-1,3-glucanases of tobacco// Proc.Natl Acad Sci USA.- 1990a.-V.87,- P. 8756-8760.

131. Linthorst H.J.M., Meuwissen R.L.J., Kauffmann S, Bol J.F. Constitutive expression of pathogenesis-related proteins PR-1, GRP, and PR-S in tobacco has no effect on virus infection // Plant Cell.- 1989,- V. 1.- P.285- 291.

132. Lifts J.C., Simmons C.R., Karrer E.E., Huang N., Rodriguez R.L. The isolation and characterization of a barley 1,3-1,4-P-glucanase gene// Eur J Biochem.- 1990,- V.-194.- P.831-838.

133. Liu D., Raghothama KG., Hasegawa P.M., Bressan R.A. Osmotin overexpression in potato delays development of disease symptoms // Proc. Natl. Acsd. Sci. USA.- 1994,-V.91.-P. 1888-1892.

134. Lotan Т., Ori N., Fluhr R. Pathogenesis-related proteins are developmentally regulated in tobacco flowers // Plant Cell.- 1989.- V. 1.- P. 881-887.

135. Low P.S., Merida J.R. The oxidative burst in plant defense: Function and signal transduction //Physiol. Plant. 1996. V. 96. P. 532-542.

136. Lund P., Lee R.Y., Dunsmyir P. Bacterial chitinase is modified and secreted in transgenic tobacco// Plant Physiol.- 1989,- V.91.- 130-135.

137. Lyon G.D. Plant/pathogen interactions at the cellular level: A summary and model//1999.- http:www.scri.sari.ac.uk/bpp/celltext.htm

138. Lyon G.D., Reglinski Т., Newton A.C. Novel disease control compounds: the potential to "immunize" plants against infection // Plant Pathology. -1995.- V.44, N3.- P.407- 427.

139. MacKintosh C., Lyon G.D., MacKintosh R.W. // Plant J.- 1994.- V.5.-P.137-147.

140. Mailhos C., Howard M.K., Latchman D.C. Heat shock proteins neuronal cells from programmed cell death by apoptosis // Neuroscience.- 1993.-V.55.-P.621-627.

141. Maleck K., Dietrich R.A. Defense on multiple fronts: how do plants cope with diverse enemies? // Trends in plant science.- 1999.-V.4, N6.-P.215-219.

142. Mansfield J.W., Hargneaves J.A., Boyle F.C. Phytoalexin production by live cells in broad bean leaves infected with Botrytis cinerea II Nature.- 1974,- V.252, N5481.-P.316-327.

143. Matern U., Kneusel R.E. Phenolic compounds in plant disease resistance // Phytoparasitica.- 1988,-V.16.-P. 153-170.

144. Matthysse A.G., Yarnall H., Boles S.B., McMahan S. A region of the Agrobacterium tumefaciens chromosome containing genes required for virulenceand attachment to host cells// Biochimica et Biophysica Acta. 2000.- V. 1490,- P. 208-212.

145. Mauch F., Staehelin LA. Functional implications of the subcellular localization of ethylene-induced chitinase and |3-l,3-glucanase in bean leaves// Plant Cell.- 1989,- V.I.- P.447-457.

146. Mehdy M.C. Active oxygen species in plant defense against pathogens // Plant Physiol. 1994. - V. 105. - P. 467-472.

147. Memelink J., Linthorst H.J.M., Schilperoort R.A., Hoger J.H.C. Tobacco genes encoding acidic and basic isoforms of pathogenesis-related proteins display different expression patterns// Plant Mol Biol.-1990.- V. 14,- P. 119-126.

148. Metzler M.C., Cutt J.R., Klessig D.F. Isolation and characterization of gene encoding a PR-l-like protein from Arabidopsis thaliana I I Plant Physiol.- 1991,-V.96, N1.- P.346-348.

149. Miller G.L., Blum R., Glenon W.E., Burton A.L. Measurment of carboxymethylcellulase activity// Anal Biochem. 1960. -V. 2.- P. 127-132.

150. Mittler R., Lam E. Identification, characterization, and purification of tobacco endonuclease activity induced upon hypersensitive response cell death // Plant Cell.- 1995b.- V.7, N11,- P.1951-1962.

151. Mittler R., Shulaev V., Lam E. Coordinated activation of programmed cell death and defense mechanisms in transgenic tobacco plants expressing a bacterial proton pump // Plant Cell.- 1995a.- V.7.- P.29-42.

152. Mlodzianowski F., Gesela E. Effect of kinetin and chloramphenicol on chlorophyll synthesis and chloroplast development in detached lupine cotyledons under low light intensivity// Acta Soc Bot Poland. -1974,- XLIII.- P.149-160.

153. Molina A., Hunt M.D., Ryals J.A. Impaired fungicide activity in plants blocked in disease resistance signal transduction // Plant Cell. 1998. - V. 10. - P. 1903-1914.

154. Moskalenko A.A., Karapetyan N.V. The structural role of caroteinoids in photosynthetic membranes//Z.Naturforsch.- 1996.-V. 51,-P. 763-771.

155. Mur LAJ., Naylor G., Warner SAJ. et al. Salicylic acid potentiates defense gene expression in tissue exhibiting acquired resistance to pathogen attack // Plant J.-1996.-V.9.-P.559-571.

156. Murashige Т., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture// Ibid.- 1962.-Y.15,- P.473-497.

157. Napier R.M. & Venis M.A. Receptors for plant growth regulators: Recent advances// J. Plant Growth Regul. 1990,- V.9.- P. 113-126.

158. Neale AD., Wahleithner JA., Lund M., Bonnett HT., Kelly A., Meeks-Wargner DR., Peacock WJ., Dennis ES. Chitinase, (3-1,3-glucanase, osmotin and extensin are expressed in tobacco explants during flower formation// Plant Cell.-1990,- V.2.- P.673-684

159. Nelson D.E., Raghothama K.G., Singh N.K., Hasegawa P.M., Bressan R.A. Analysis of structure and transcriptional activation of an osmotin gene // Plant Mol. Biol.- 1992,- V.19.- P.577-588.

160. Neuenschwander U., Lawton K., Ryals J. Systemic acquired resistance // Plant-microbe interactions. V.l/ Ed. §tancey G. and Keen N.T. New York: Chapman and Hall, 1996. P. 81-106.

161. Olsen O., Thomsen K.K., Weber J., Duus J.O., Svendsen I., Wegener C., von Wettstein D. Transplanting two unique beta-glucanase catalytic activities into one multienzyme, which forms glucose// Biotechnology (NY).- 1996.- V. 14, N 1. P. 71-76.

162. Payane G., Waed E., Gaffney Т., Ahl-Goy P., Moyer M., Harper A., Meins F.Jr., Ryals J. Evidence for a third structural class of (3-1,3-glucanase in tobacco// Plant Mol. Biol. 1990. - V.15. - P.797-808.

163. Pennell R.I., Lamb C. Programmed cell death in plants // Plant Cell. 1997. -V. 9,-P. 1157-1168.

164. Pieterse C.M.J, et al. A novel signaling pathway controlling induced systemic resistance in Arabidopsis/I Plant Cell.- 1998,-V.10.-P.1571-1580.

165. Pieterse C.M.J., vanWees S.C.M., Hoffland E. et al. Systemic resistance in Arabidopsis induced by biocontrol bacteria is independent of salicylic acid accumulation and pathogenesis-related gene expression // Plant Cell.- 1996.- V.8.-P. 1225-1237.

166. Prassad Т.К., Anderson M.D., Martin B.A., Stewart C.R. Evidence for chilling-induced oxidative stress in maize seedlings and a regulatory role for hydrogen peroxide//Plant Cell. 1994,- V. 6,- P. 65-74.

167. Renetl A., Colling C., Hahlbrock K., Nurnberger Т., Parker J.E., Studies on elicitor recognition and signal transduction in plant defense // J. Exp. Bot. (Suppl.).- 1993.- V.44.- P.257-268.

168. Richard L., Montserrat A., Hoebeke J., Meeks-Wagner D.R., Tran Than Van K. // Plant Physiol.- 1992,- V.98.- P.337-342.

169. Rogers EE., Ausubel FM. Arabidopsis enhanced disease susceptibility mutants exhibit enhanced susceptibility to several bacterial pathogens and alterations of PR-1 gene expression // Plant Cell.-1997.-V.9.-P.305-316.

170. Rushton P. J., Somssich I.E. Transcriptional control of plant genes responsive to pathogens // Curr. Opin. Plant Biol.- 1998.-V. 1 .-P.311-315.

171. Ryals J., Uknes S., Ward E. Systemic acquired resistance // Plant Physiol.-1994,-V.104.-P.1109-1112.

172. Ryals J., Weymann K., Lawton K. et al. The Arabidopsis NIM1 protein shows homology to the mammalian transcription factor inhibitor IkB // Plant Cell.- 1997.-V.9.-P.425-439.

173. Ryals J.A., Neuenschwander U.H., Willits M.G., Molina A., Steiner H-Y., Hunt M.D. Systemic acquired resistance // Plant Cell. 1996. - V. 8. - P. 18091819.

174. Ryan C. Oligosaccharide signalling in plants// Ann. Rev.Cell Biol. 1987,-V.4.-P. 295-317.

175. Ryan C. Protease inhibitors in plants: genes for improving defenses against insects and pathogens //Annu. Rev. Phytopathol.- 1990.-V.28.-P.425-449.

176. Ryan C.A. The search for the proteinase inhibitor- inducing factor, PIIF // Plant Mol.Biol.- 1992,- V.19,N1.-P.123-133.

177. Ryerson D.E., Heath M.C. Cleavage of nuclear DNA into oligonucleosomal fragments during cell death induced by fungal infection or by abiotic treatments // Plant Cell.- 1996,- V.8, N3,- P.393-402.

178. Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. Molecular cloning: A laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor NY. 1989.

179. Schimming S, Schwarz WH, Staudenbauer WL. Properties of a thermoactive P~ 1,3-1,4-glucanase (lichenase) from Clostridium thermocellum expressed in Escherichia colill Biochem Biophys Res Commun.-1991.- V.177.- P.447-452.

180. Schimming S., Schwarz W.H., Staudenbauer W.L. Structure of the Clostridium thermocellum gene licB and the encoded (3-1,3-1,4-glucanase// Eur.J.Biochem.-1992,- V. 204,- P. 13-19.

181. Schlumbaum A., Mauch F., Vogeli U., Boiler T. Plant chitinase inhibitors of fungal growth //Nature.- 1986,- V.324.- P. 365- 367.

182. Schwarz WH, Bronnenmeier K, Grabritz F, Staudenbauer WL. Activity staining of cellulose in polyacrilamide gels contaioning mixed linkage P-glucans// Analytical Biochemistry.- 1987,- V.164.- P.72-77.

183. Shinshi H., Neuhaus J-M., Ryals J., Meins f. Structure of a tobacco endochitinase gene: evidence that different chitinase genes can arise by transposition of sequences encoding a cystein-rich domain // Plant Mol. Biol.-1990,-V.14.-P.357-368.

184. Simmons CR., Litts JC., Huang N., Rodriguez RL. Structure of rice P-glucanase gene regulated by ethelene, cytokinin, wounding, salicylic acid and fungal elicitors// Plant Mol. Biol.- 1992,- V.18.-P.33-45.

185. Singh N.K., Nelson D.E., Kuhn D., Hasegawa P.M., Bressan R.A. Molecular cloning of osmotin and regulation of its expression by ABA and adaptation to low water potential // Plant Physiol.- 1989,- V.90.- P.1096-1101.

186. Slakeski N., Baulcombe CC., Devos KM, Ahluwalia В., Doan DNP, Fincher GB. Structure and tissue specific regulation of genes encoding barley (l,3;l,4-p-glucan endohydrolases//Mol.Gen.Genet.- 1990,- V. 224,- P. 437-449.

187. Stichter L., Mauch-Mani B.N., Metraux J.P. Systemic acquired resistance // Annu. Rev. Phytopathol.- 1997.-V.35.-P.235-270.

188. Stintzi A., Heitz Т., Prasad V., Wiedermann-Merdinoglu S., Kauffmann S., Geoffroy P., Legrand M., Fritig B. Plant "pathogenesis-related" proteins and their role in defense against pathogens // Biochimie.- 1993,- V.75.- P.687- 706.

189. Stuart I.M. , Loi L., Fincher G.B. Immunological comparison of (l-3,l-4)-P-glucan endohydrolases in germinating cereals// J. Cereal Sci.- 1987,- V.6.- P.45-52.

190. Sutherland M.V. The generation of oxygen radicals during the host plant responses to infection // Physiol. Mol. Plant Pathol.- 1991,- V.39.- P.79- 93.

191. Szybiak-Strozycka U., Lescure N., Cullimore J.V., Gamas P. A cDNA encoding a PR-1-like protein in the model legume Medicago truncatula II Plant Physiol.- 1995,- V.107, N1,- P.273-274.

192. Tague B.W., Chispeel M.I. The plant vacuolar protein, phytohemagglutinin is transported to the vacuole of transgenic yeast// J. Cell. Biol.- 1987,- V.105.-P.1971-1979.

193. Teather R.W., Wood P.J. Use of Congo Red Polysaccharide Interactions in Enumeration and Characterization of Cellulolytic Bacteria from the Bovine Rumen// Appl. Environ.Microbiol. - 1982. - V.43. - P.777-780.

194. Tenhaken R., Levine A., Brisson L.F., Dixon R.A., Lamb C. Function of the oxidative burst in hypersensitive disease resistance // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1995.-V. 92.-P. 4158-4163.

195. Tenhaken R., Rubel C. Salicylic acid is needed in hypersensitive cell death in soybean but does not act as s catalase inhibitor // Plant Physiol.-1997.-V.l 15.-P.291-298.

196. Teyssendier de la Serve В., Axelos M., Peaud-Lenoel C. Cytokinins modulate the expression of genes encoding the protein of the light-harvesting chlorophyll a/b complex//Plant Mol. Biol.- 1985. V. 5,- P. 155-163.

197. Tomme P., Warren R.A.J. and Gilkes N.R. Cellulose Hydrolysis by Bacteria and Fungi// Advances in Microbial Physiology.- 1995. V. 37.- P. 1-81.

198. Topfer R., Matzeit V., Gronenborn В., Schell J., Steinbiss H.-H. A set of plant expression vectors for transcriptional and translational fusions// Nucleic Acids Research.- 1987,- V.15, N14,- P.5890.

199. Van Lijsebettens M., Valvekens D. Tobacco Leaf Disk Infection with Agrobacterium tumefaciens/An EMBO Practical Course on Plant Molecular Biology, Gent, Belgium, 1987. P. 15-18.

200. Van Loon L.C. Pathogenesis-related proteins// Plant Mol. Biol. .- 1985,- V.4, PP. 111-116.

201. Van Loon L.C., Gerritsen Y.A.M., Ritter C.E. Identification, purification, and characterization of pathogenesis-related proteins from virus-infected Samsun NN tobacco leaves// Plant Mol. Biol. 1987. - V.9. - P.593-609.

202. Van Loon L.C., Pierpoint W.S., Boiler Т., Conejero V. Recommendations for naming plant pathogenesis-related proteins// Plant Mol. Biol.Reporter. 1994. -V.12. -P.245-264.

203. Van Loon L.C., Van Strien E.A. The families of pathogenesis-related proteins, their activities, and comparative analysis of PR-1 type proteins// Physiol, and Mol.Plant Pathology.-1999. -V.55. -P.85-97.

204. Van Parijs J., Broekaert W.F., Goldstein I.J., Peumans W.J. Hevein: an antifungal protein from rubber-tree (Hevea brasiliensis) latex I I Planta.- 1991.- V. 183,- P.258- 264.

205. Van Wees S.C.M., Pieterse C.M.J., Trijssenaar A. Differential induction of systemic resistance in Arabidopsis by biocontrol bacteria I I Mol. Plant Microbe Interact.- 1997.- V.10.- P.716-724.

206. Varghese JN., Garrett ТР., Colman PM., Chen L., Hoj PB., Fincher GB. Three-dimensional structures of two plant beta-glucan endohydrolases with distinct substrate specificities// Proc Natl Acad Sci.- 1994,- V.91, N7,- P.2785-2789.

207. Vaux D.L., Strasser A. The molecular biology of apoptosis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1996.- V.93, N6.- P.2239-2244.

208. Verner K., Schatz G. Protein Translocation Across Membranes// Science. -1988. V.241. - P.1307-1313.

209. Vidal S., Ponce de Leon I., Denecke J. et al. Salicylic acid and the plant pathogen Erwinia caratovora induce defense genes via antagonistic pathways I I Plant J.- 1997,-V.ll.-P.l 15-123.

210. Vigers A.J., Roberts W.K., Selitrennikoff C.P. A new family of plant antifungal proteins // Mol. Plant Microbe Interact.-1991,- V.4.- P.315-323.

211. Vigers A.J., Wiedemann S., Roberts W.K., Legrand M., Selitrennikoff C P., Fritig B. Thaumatin-like pathogenesis-related proteins are antifungal // Plant Sci.-1992,- V.83.- P.155-161.

212. Vitae A., Strum A., Bollim R. Regulation of process of plant glycoprotein in tha Goldi-complex: a compare study using Xenopus oocytes// Planta.- 1986.- V.169.-P.108-116.

213. Vogelsang R., Barz W. Purification, characterization and differential hormonal regulation of a beta-l,3-glucanase and two chitinases from chickpea (Cicer arietinum L.)// Planta.- 1993,-V. 189,N 1.-P.60-69.

214. Vogelsang R., Barz W. Purification, characterization and differential hormonal regulation of a p-l,3-glucanase and two chitinases from chickpea (Cicer arietinum L.) //Planta.- 1993,- V.189.- P.60-69.

215. Wagif E.E., Coutts R.H.A. // Plant Sci. Lett.- 1981.-V.21,- P.61-69.

216. Walbot V., Hoisington D.A., Neuffer M.G. Disease lesion mimics in maize // Genetic engineering of plants. / Ed. Kosuge T. and Meredith C. New York: Plenum Publishing, 1983. P. 431- 442.

217. Walter P., Lingappa V.P. Mechanism of protein translocation across the endoplasmatic reticulum membrane// Ann.Rev.Cell. Biol. 1986.- V.2.- P.499-516.

218. Wang X., Zaflan P., Choudhary M., Lawton M. The PR5K receptor protein kinase from Arabidopsis thaliana is structurally related to a family of plant defense proteins // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1996,- V.93.- P.2598-2602.

219. Ward E.R., Uknes S., Williams S.C., Dincher S.S., Wiederhold D.L., Alexander D.C., AhlGoy P., Metraux J.P., Ryals J.A. Coordinate gene activity in response toagents that induce systemic acquired resistance // Plant Cell.- 1991.-V.3.- P. 10851094.

220. Watanabe Т., Kasahara N., Aida K. and Tanaka H. Three N-terminal domains of P-1,3-glucanase A1 are involved in binding to insoluble (3-1,3-gJucan// J. of Bacteriology. 1992,-V.174,N.1.-P.186-190.

221. Wei Z.M., Laby J.R., Zumoff C.H, Bauer D.W., He S.Y., Collmer A., Beer S.V. Harpin, elicitor of the hypersensitive response produced by the plant pathogen Erwinia amylovora // Science.-1992,- V.257.- P.85-88.

222. Woloshuk C.P., Meulenhoff J.S., Sela-Buurlage M.B., Van den Elzen P.J.M., Cornellissen B.J.C. Pathogen-induced proteins with inhibitory activity toward Phytophthora infestans II Plant Cell.-1991,- V.3.- P.619-628.

223. Wu G., Shortt B.J., Lawrence E.B., Elaine E.B., Fitzsimmons K.C., Shah D.M. Disease resistance conferred by expression of a gene encoding Н2Ог-generating glucose oxidase in transgenic potato plants // Plant Cell. 1995. - V. 7.-P. 1357-1368.

224. Wyllie A.H., Morris R.G., Smih A.L., Dunlop D. Chromatin cleavage in apoptosis: Association with condensed chromatin morphology and dependence on macromolecular synthesis // J. Pathol.- 1984,- V.142.- P.67-77.

225. Xu P., Wang J., Fincher GB. Evolution and differential expression of the 1,3-beta-gluccan endohydrolase-encoding gene family in barley, Hordeum vulgare// Gene.- 1992,- V.120, N2,- P.157-165.

226. Yalpani N., Leon J., Lawton M.A., Raskin I. Pathway of salicylic acid biosynthesis in healthy and virus-inoculated tobacco // Plant Physiol.-1993.-V.103.- P.315-321.

227. Zhu В., Chen T.H.H., Li P.H. Activation of two osmotin-like protein genes by abiotic stimuli and fungal pathogen in transgenic potato plants // Plant Physiol.-1995b.- V.108.- P.929-937.

228. Zhu В., Chen T.H.H., Li P.H. Expression of an ABA-responsive osmotin-like gene during the induction of freezing tolerance in Solanum commersonii II Plant Mol. Biol.- 1993,- V.21.- P.729-735.