Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Получение перевиваемых культур клеток, адаптированных к росту в питательных средах с пониженным содержанием сыворотки крови КРС

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Анисимова, Любовь Ивановна

на правах рукописи

Анисимова Любовь Ивановна

03.00.23 - биотехнология

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель: доктор биологических наук Юрков С.Г.

ПОКРОВ

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

1. Введение

1.1. Актуальность темы

1.2. Цель работы и основные задачи исследований

1.3. Научная новизна

1.4. Практическая значимость

1.5. Основные положения, выносимые на защиту

1.6. Апробация и публикации результатов

2. Обзор литературы

2.1. Перевиваемые линии клеток в ветеринарной вирусоло- 12 гии и биотехнологии

2.2. Питательные среды и сыворотки крови животных для 15 культивирования перевиваемых линий клеток животных

2.2.1. Питательные среды

2.2.2. Сыворотка крови как компонент питательной среды

2.2.3. Бессывороточные питательные среды

2.3. Методы получения перевиваемых линий клеток 25 животных

2.4. Проблемы биотехнологии перевиваемых линий клеток 29 животных

Введение Диссертация по биологии, на тему "Получение перевиваемых культур клеток, адаптированных к росту в питательных средах с пониженным содержанием сыворотки крови КРС"

1.1. Актуальность темы

Тенденция развития производства современных иммунобиологических препаратов с высокой конкурентоспособностью выдвигает задачу разработки технологий получения культур клеток на основе стандартных и, по возможности, полностью идентифицированных питательных сред без сыворотки крови млекопитающих или с низким ее содержанием.

Недостатки, возникающие при использовании сыворотки крови в составе ростовой питательной среды при производстве биопрепаратов на основе клеточных биотехнологий, хорошо известны. Она нестандартна по составу и является дорогим продуктом. Сыворотка может быть источником не-идентифицированных, атипичных белков и гормонов, являющихся основной причиной дестабилизации цитоморфологических и кариологических характеристик культивируемых клеток, что в итоге приводит к снижению или даже полной утрате чувствительности клеток к адаптированным вирусам. Она является потенциальным источником контаминации клеточных культур бактериями, грибами, микоплазмами и вирусами, содержит специфические и неспецифические ингибиторы вирусной репродукции, повышает реактоген-ность препаратов, полученных в культуре клеток с ее использованием [82, 192, 235].

Проблемы, связанные с применением сыворотки, привели к необходимости разработки бессывороточных питательных сред.

В настоящее время известны десятки прописей бессывороточных питательных сред различного целевого назначения [78, 118, 119, 163, 188, 191, 195, 217, 220], однако нет ни одной универсальной среды такого типа, обеспечивающей пролиферацию подавляющего большинства культур клеток. Как правило, эти среды создаются под определенный вид клеток и обеспечивают реализацию конкретных требуемых клеточных функций у 1-2 популяций клеточных культур [176].

Следует отметить, что и для ветеринарной вирусологии чрезвычайно актуальна проблема получения клеточных систем, способных к росту в химически определенных бессывороточных питательных средах или средах с минимальным содержанием сыворотки крови млекопитающих, особенно для биотехнологии противовирусных препаратов (антирабических препаратов, вакцин против классической чумы свиней, чумы плотоядных).

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Анисимова, Любовь Ивановна

5. Выводы

1. Получена новая сублиния перевиваемых клеток ПС(ВНИИВВиМ) (размах варьирования числа хромосом - от 43 до 56, модальное число - 50, величина модального класса - 40), имеющая индекс пролиферации 3-5 в среде Игла MEM с 5% сыворотки крови КРС.

2. Разработаны оптимальные параметры роллерного выращивания сублинии ПС(ВНИИВВиМ) для биотехнологии культуральных противовирусных вакцин (вращение бутылей с угловой скорости 12 об/час, посадочная концентрация клеток - 120-130 тыс./мл, объем заполнения - 0,15 часть емкости сосуда, температура 37,0±0,5°С).

3. Разработана питательная среда на основе Игла МЕМ/ALPHA с рост-стимулирующими добавками: гидрокортизоном, тироксином и инсулином, жирорастворимыми витаминами А и Е, а также дополнительным количеством аминокислот: гистидина и метионина, обеспечивающая рост клеток ПС в присутствии 0,5% сыворотки крови КРС.

4. Впервые получены три клона (ПС/в4; ПС/с4; ПС/с14) сублинии перевиваемых клеток ПС(ВНИИВВиМ), растущие в разработанной питательной среде, содержащей 0,5% сыворотки крови КРС. Изучены их культуральные, цитоморфологические и кариологические характеристики.

5. Вирусрепродуцирующая активность полученных клонов (ПС/в4; ПС/с4; ПС/ё4) в отношении адаптированных вирусов составляет 7,0-7,2 lg

3 3

МЛД50/см - для вируса бешенства штамм "ТС-80"; 7,0-7,3 lg ТЦД50/см - для вируса парагриппа КРС штамм "ПГ-3".

6. Получена стабильная клональная перевиваемая линия клеток почки сайги ПС/с4 (размах варьирования числа хромосом - от 44 до 55, модальное число - 50, величина модального класса - 80), растущая в среде Игла MEM/ALPHA с ростстимулирующими добавками: гидрокортизоном, тироксином и инсулином, жирорастворимыми витаминами А и Е, а также дополнительным количеством аминокислот: гистидина и метионина с 0,5% сыворотки крови КРС, сохраняющая свои биологические свойства на протяжении 50 пассажей (срок наблюдения).

7. Установлено, что накопление вируса бешенства в клональной перевиваемой линии клеток ПС/с4 составляет 4,5 lg ККИД50/см или 6,5 lg МЛД50/см3 - для штамма "ТС-80" и 4,1 lg ККИД50/см3 или 6,25 lg МЛД50/см3 -для штамма "РБ-71".

8. Показано на примере выращивания клеток перевиваемых линий РК-15(ВНИИВВиМ) и СУ-1(ВНИИВВиМ), что разработанная малосывороточная питательная среда не является универсальной и необходима ее коррекция с параллельной селекцией для клеток других типов.

100

6. Практические предложения

1. Разработаны методические рекомендации по поддержанию и хранению клональной перевиваемой линии клеток ПС/с4, полученной из сублинии перевиваемых клеток ПС(ВНИИВВиМ), утвержденные директором ВНИ-ИВВиМ.

2. Паспортизированы новые стабильные клеточные популяции: сублиния перевиваемых клеток ПС(ВНИИВВиМ) и клональная перевиваемая линия ПС/с4 и оба паспорта включены в разработанный в соавторстве "Каталог коллекции клеточных культур ВНИИВВиМ". Клональная перевиваемая линия клеток ПС/с4 депонирована в СХЖ Россельхозакадемии Национальной коллекции клеточных культур.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Анисимова, Любовь Ивановна, Покров

1. Адаме Р. Методы культуры клеток для биохимиков.- М.: Мир, 1983.-258 с.

2. Андреева М. А., Костина Г. А., Радаева И. Ф., Шмелева С. Б. Изучение возможности использования сывороток, обработанных полиэтиленгликолем, в производстве вирусных препаратов // Цитология.- 1996.- Т. 38, № 2-С. 175-176.

3. Анисимова Л. И., Прилепская Е. П., Юрков С. Г., Закутский Н. И., Конакова Л. Д. Модифицированная питательная среда для выращивания клеток и вирусов // Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии: Материалы науч.-практ. конф. ВНИИВВиМ.- 1995.- С. 191.

4. Балабанов В. А., Сологуб Т. В., Никишин И. В., Белун О. В., Зуев В.

5. B., Курносов А. Н. Выращивание вируса бешенства в культурах клеток различного происхождения // Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии: Тез. докл. науч. конф. ВНИИВВиМ 28-30 ноября 1990г.-Покров, 1990,- С. 120-121.

6. Баландин И. Г., Извекова А. В., Шторм Г. Г., Пугачева М. И. Методы получения, стерилизации и контроля сыворотки крови плодов крупного рогатого скота// Бюллетень ВИЭВ.- 1983.- Вып. 49,- С. 42-45.

7. Балышева В.И., Жестерев В.И. Культура клеток ПСГК-с85 для культивирования вирусов сельскохозяйственных животных // Тез. докл. науч. конф.- Пущино, 1990,- С. 71.

8. Балышева В. И., Чурбанова Г. Н., Вишняков И. Ф., Жестерев В. И. идр. Клеточные культуры в биотехнологии // Науч. основы технологии пром. производства вет. биолог, препаратов: Тез. докл. Всеросс. конф.-Щелково, 1996,-С. 28.

9. Белова О. В., Арион В. Я., Орлова В. Ф., Дворцова В. В. и др. Влияние фракции компонентов кожи на пролиферацию эпидермальных клеток в культуре // Цитология.- 1996.- Т.38, № 2,- С. 179-180.

10. Белун О. В., Сокова В. А., Курносов А. Н. Клонирование перевиваемой линии почки поросенка // Вопр. вет. вирусол., микробиол. и эпизоотол.: Тез. докл.- Покров, 1978.- С. 16.

11. Блинова Т. Н., Валякина Т. И., Несмеянов В. А. Влияние инкубации иммунокомпетентных клеток в бессывороточной питательной среде на их свойства // Тез. IV Всесоюз. конф. по биологии клетки.- Тбилиси, 1985.- С. 81-83.

12. Богомолова Н. Н., Шухмина Н. Р., Анджапаридзе О. Г. Исследование клонов клеток, полученных из перевиваемых культур, отличающихся по чувствительности к вирусу клещевого энцефалита // Вопр. вирусол.- № 1 .С. 71-74.

13. Бородина В. М., Федорова Л. И., Зеленин А. В. Способ культивирования клеток человека и животных // № 1507790, опубл. 1989.- Бюл. 34.

14. Буеверова Э. И., Брагина Е. В., Резникова М. М., Ямскова В. П., Хрущов Н. Г. Стимулирующее влияние адгезивного фактора сыворотки крови КРС на пролиферацию культивируемых клеток млекопитающих // Цитология.- 1983.- Т.25, № 9,- С. 1079.

15. Буреев И. А., Гавриченко В. А., Жестерев В. И., Калантаенко Ю. Ф. Установка промышленного типа для культивирования клеток и вирусов в роллерных бутылях // Материалы науч. конф. ВНИИВВиМ.- Покров, 1994.-С. 76.

16. Витакер А. Среды для культивирования клеток млекопитающих // Новые методы культуры животных тканей / Под ред. Фридлянского.- М.: Мир, 1976.-С. 18.

17. Вишняков И. Ф., Жестерев В. И., Балышева В. И., Горшкова Т. Ф., Никишин И. В. Использование перевиваемой культуры клеток почки сайги в вирусологической практике // Цитология.- 1994.- Т. 36, № 6.- С. 549.

18. Гасанова Б. С. Культивирование клеток млекопитающих с различными видами сывороток и заменителями сывороток: Автореф. дис. канд. биол. наук.- М., 1993,- 8-10 с.

19. Гасанова Б. С. и др. Протеины различных видов сывороток как факторы роста клеток млекопитающих // Цитология.- 1994.- Т. 36, № 6.- С. 61.

20. Герасимов В.Н. Получение постоянных линий клеток из органов козы, свиньи и кролика // Ветеринария.- 1998.- № 3.- С. 27-29.

21. Герасимов В. Н., Куляшбекова Ш. К., Гусев А. А., Герасимова Н. И. и др. Морфологические и кариологические характеристики постоянных линий при длительном пассировании // Цитология.- 1999,- Т. 41, № 3/4.- С. 266.

22. Глинских Н. П., Зусман Ф. Я., Курумчина С. Г., Устьянцев В. П.

23. Штамм перевиваемых клеток HeLa-КД, используемый для вирусологических исследований // A.C. № 1122692 от 7.11.84.

24. Глинских Н. П., Зусман Ф. Я., Устьянцев В. П., Закирова С. Ф. и др. Штамм перевиваемых клеток Hep-2-КД, используемый для вирусологических исследований // A.C. № 1122693 от 7.11.84.

25. Гнуни Г. М., Дзагуров С. Г., Мамоменко А. JL, Миронова Л. JI. Метод выращивания культур ткани и вирусов во вращающихся сосудах // Вопр. Вирусол,- 1966,- № 1,- С. 96-99.

26. Голубев Д. Б., Соминина А. А., Медведева М. Н. Руководство по применению клеточных культур в вирусологии- Л.: Медицина, 1976.- 224 с.

27. Грачев В. П., Завальный М. А., Попова В. Д., Ханина М. К., Миронова Л. Л. Сравнение методов крупномасштабного культивирования клеток и вирусов // Вопр. вирусол.- 1983.- № 4,- С. 44-49.

28. Грачев В. П. Современные аспекты крупномасштабного культивирования клеточных субстратов и вирусов // Культивирование клеток животных и человека: Тез. докл. науч. конф.- Пущино, 1985.- С. 61-64.

29. Дьяконов Л.П., Кущ A.A., Тугизов Ш.М., Майджи Е.В. Получение гибридных клеток сельскохозяйственных животных и исследование их восприимчивости к вирусным инфекциям // Цитология.- 1987,- Т. 9, № 2.-С. 1082.

30. Дьяконов JI. П. Культуры клеток животных. Современные аспекты биотехнологии и взаимодействия клеток с инфекционными патогенами // Цитология,- 1994.- Т.36.- С. 503-504.

31. Дьяконов Л. П., Ситьков В. И. Животная клетка в культуре // Москва.-2000 г.

32. Жарова Н. Н., Калугина Т. М., Оковытый А. С., Сюсикин А. А. Усовершенствование методики контроля сыворотки, используемой для культивирования клеток ВНК-21 // Актуал. вопросы ветер, вирус,- Владимир, 1983.-С. 58-60.

33. Жарова Н. Н. Сравнительное испытание эффективности различных методов обработки сыворотки КРС с целью освобождения ее от микоплазм // Акт. пробл. вет. вирусол.- Владимир, 1987.- С. 15-17.

34. Закутский Н. И., Жестерев В. И., Вишняков И. Ф., Конакова Л. Д., Анисимова Л. И., Шевченко А. А. Культуральная инактивированная вакцина против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота // Ветеринария.- 1997.- № 8,- С. 17-20.

35. Зенин В. В., Никольский Н. Н., Скопичева В. И., Сорокин А. Б. Зависимость пролиферации клеток ЗТ6 от концентрации сыворотки в среде // Цитология,- 1982,- Т. 24, № 8.- С. 947-953.

36. Зуев В. В., Юрков С. Г., Курносов А. Н. Коллекция культур клеток // Вестник Российской Академии сельскохозяйственных наук,- 1997,- № 2,-С. 69-70.

37. Иванов В. С. Перспективы совершенствования технологии изготовления культуральных инактивированных антирабических вакцин // Вирусные болезни с/х животных: Тез. докл. Всеросс. науч.-производ. конф.- Владимир, 1995,- С. 203.

38. Игудин Л. И., Чистова 3. Я., Кацнельсон Н. В., Метревели Г. Д. Исследование комерческой сыворотки КРС на наличие антител к некоторым вирусам // Стандарты, штаммы и методы контроля бактерийных и вирусных препаратов.- М., 1981.- С. 162-165.

39. Игудин Л. И., Орлов С. Д., Кациельсон Н. В., Маркман Г. А. Связь между составом сыворотки КРС и ее способностью стимулировать рост клеточных культур//Цитология.- 1983.-№ 10.-С. 1216-1217.

40. Игудин Л. И., Маркман Г. А., Лобань С. А., Позина И. М., Мигунов В. Н. Полиэтиленгликоли и их использование в биологии и медицине // ЖМЭИ,- 1984,- № 4,- С. 17-21.

41. Индулен Ю. И., Веровский В. Н., Витина А. А., Аугустене И., Капель И. А. Сравнительное изучение влияния различных сывороток на рост клеток в культуре // Культивирование клеток животных и человека: Тез. док. 2 Всесоюз. сов,- Пущино, 1985,- С. 26-27.

42. Исаенко А. А., Немцов Ю. В., Царева А. А. Исследование кариотипа клеток почки африканской зеленой мартышки линии 4647, длительно культивируемых в средах с различными сыворотками // Цитология,- 1990.Т. 32, № 7. с. 736-740.

43. Карпов С. П. Неспецифические сывороточные ингибиторы арбовирусов // В сб. Вопросы эпидемиологии, микробиологии, иммунологии.- Томск, 1971.- Т.22.-С.24.

44. Карпук В. А., Васько В. Е., Поздняков А. А., Иванов В. С. и др. Использование сыворотки КРС, обработанной ПЭГ, для культивирования клеток ВНК-21 // Передовой научно-производств. опыт в биологической промышленности.- 1985.- № 1.- С. 4-6.

45. Карпук В. А., Васько В. Е., Поздняков А. А., Иванов В. С. Культивирование клеток ВНК-21 на средах с различными сыворотками // Культивирование клеток животных и человека: Тез. док. 2 Всесоюз. сов,- Пугцино, 1985,- С. 28.

46. Карпук В. А., Поздняков А. А., Крюков Н. Н. Культивирование перевиваемой линии клеток почки теленка на средах с низким содержанием сыворотки // Культивирование клеток животных и человека: Тез. док. 2 Всесоюз. сов.- Пущино, 1985.- С. 29.

47. Карышева А. Ф., Карышев С. В., Доценко В. В. Эффективная основа питательных сред для культивирования клеток // Ветеринария.- 1995,- №9,-С. 34-37.

48. Кизюн С. М., Афанасенко Г. А. Бессывороточная синтетическая среда на основе факторов роста для высокоэффективного культивирования клеток продуцентов урокиназы линии ЯН-КА // Биотехнология.- 1993.- №10.- С. 22-25.

49. Клесова И. И., Пахальчук Т. И., Бураев В. И. Масштабирование производства питательных сред для культур клеток // Питательные среды и сыворотки для культур клеток: Тез. докл. Всесоюз. конф. 14-17 октября 1991г.- Новосибирск, 1991.- С. 22.

50. Клюкина В. П., Простяков А. П., Бойко А. А., Шкварук Т. Я. Удаление липидных веществ из сыворотки крови свиньи // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности.- 1985.- № 1.-С. 6-9.

51. Ковалева И. А., Худяков Г. А., Кудрявцева Г. А., Манин Б. Л. Исследование кариотипа перевиваемых культур клеток для определения их стабильности // Актуал. проб. вет. вирусол.: Тез. докл. Всесоюз. науч. конф. -Владимир, 1983.-С. 17-18.

52. Колесникова Г. Г. Морфо-физиологическая характеристика и особенности взаимодействия с некоторыми вирусами новых диплоидных штаммов клеток легкого эмбриона человека: Автореф. канд. дис.- М., 1978.- 9-13 с.

53. Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов // Серия технических докладов ВОЗ № 848.- М., 1995.

54. Копровски X. Биологическая проба на мышах // Методы лабораторных исследований по бешенству / Под ред. М. М. Каплан.- Женева, 1975.- С. 85-93.

55. Корнеева А. И. и др. Конструирование бессывороточных питательных сред для культивирования клеток млекопитающих. Сообщение 5 // Биотехнология." 1991.- ? 6.- С. 64-66.

56. Корнеева А. И. Разработка питательной среды для культивирования клеток млекопитающих на основе ферментативного гидролизата казеина: Ав-тореф. дис. канд. биол. наук.- М., 1995.- 8-10 с.

57. Костина Г. А., Андреева М. А., Радаева И. Ф., Шмелева С. Б. Выбор наиболее эффективных сывороток крови различных видов животных как компонента питательной среды для культивирования клеточных линий // Цитология,- 1994.- Т. 36, № 6,- С. 558.

58. Круман И. И., Мякишева С. Н., Гаврилюк Б. К. Исследование возрастного изменения ростстимулирующего влияния сыворотки на клетки ВНК 21 // Цитология,- 1984.- Т. 26, № 9. с. 1043-1047.

59. Курносов А. Н., Шевченко Л. В., Юрков С. Г. и др. Детоксикация сывороток крови свиней, используемых при культиировании клеток // Ветеринария.- № 1.- 1987,- С. 24-26.

60. Курносов А. Н., Зуев В. В., Опарин В. Н., Юрков С. Г. Инструкция по приготовлению питательных сред и клеточных культур // ГУВ Госагро-пром СССР.- М., 1987,- С. 154.

61. Курносов А. Н., Юрков С. Г., Опарин В. Н. и др. Суспензионные культуры клеток животных в ветеринарной вирусологии // Вирусные болезни с/х животных: Тез. докл. Всерос. науч.-практ. конф.- Владимир, 1995.- С. 103.

62. Лакин Г. Ф. Биометрия М., Высшая школа, 1980.

63. Ламберт К. Дж., Берг Дж. Р. Среды для выращивания клеток // Биотехнология клеток животных / Под ред. Р. Е. Спиера.- М., Мир, 1989.- С. 98125.

64. Лисок Т. П., Соминина А. А., Лябина Л. М., Богачев Ю. В. Опыт культивирования клеток в роллерных и суспензионных условиях // Проблемы гриппа и острых респираторных заболеваний.- 1973.- Т.8.- С. 152-157.

65. Лымарь В. Г., Прохор В. Ф., Ялышев М. Р., Сирица И. И. и др. Характеристика постоянной линии клеток ВНК -21 после 20 лет непрерывного хранения при температуре минус 196° // Биотехнология.- 1992.- № 5.- С. 75-77.

66. Мамаева С. Е., Михельсон В. М., Фридлянская И. И. Пролиферация клеток в культуре // В кн. Биология клетки в культуре.- Л.: Наука, 1984.- С. 10-49.

67. Мамаева С. Е. Хромосомный анализ культивируемых клеток. // В кн. Методы культивирования клеток.- Л., 1988.- С.78.

68. Мамаева С. Е. Закономерности кариотипической эволюции клеток в культуре // Цитология.- 1996,- Т.38, № 8.- С. 787-814.

69. Медведев В. В., Волчек Ю. 3., Шустов С. Б., Лянда М. Ю. Краткий справочник по клиническим лабораторным исследованиям- М.: Гиппократ, 2000,- 63-67 с.

70. Методические указания (РД 42-28-10-89) аттестации перевиваемых клеточных линий субстратов производства и контроля медицинских иммунологических препаратов // М., 1989.

71. Миронова Л.Л., Хапчеев Ю.Х. Линия гетероплоидных клеток 4647: изучение, применение, перспективы // М., 1994.- С. 81-82.

72. Миронова Л.Л., Кудинова С.И., Хороших Е.М., Попова В.Д. и др. Линия перевиваемых клеток сердца и языка эмбриона африканской зеленой мартышки и ее применение в вирусологической практике // Цитология.-1994.-Т. 36, №6.-С. 570.

73. Миронова Л. Л., Преображенская Н. К., Козлов В. Г. Тест-система для определения ростовых свойств сыворотки и контроля их на спонтанную вирусную контаминацию // Цитология.- 1994.- Т. 36, № 6.- С. 572-573.

74. Миронова Л. Л., Преображенская Н. К., Шитикова Г. С., Белоусова Р. В. и др. Отечественные линии перевиваемых клеток почек теленка субстрат для биотехнологии // Биотехнология.- 1998.- № 5.- С. 25-31.

75. Мирошников В. М., Вишневский Р. Ф. Способ стимуляции роста культивируемых клеток млекопитающих // A.C. № 1433976 от 30.10.1988.

76. Николаев А. Я. Биологическая химия. М., 2001.- 480 с.

77. Новохатский А. С. Ролерные культуры в вирусологии // Вопр. вирусол.-1969.-№4.-С. 387-392.

78. Новохатский А. С. Клеточные культуры в вирусологии // В кн.: Общая и частная вирусология.- М., Медицина, 1982.- С. 463-493.

79. Новохатский А. С., Михайлова Г. Р., Хижнякова Т. М. Каталог перевиваемых линий // Институт вирусол. АМН.- М., 1985, 85Дп.- 86 с.

80. Новохатский А. С. Ростовые факторы сыворотки крови. Новые возможности получения и применения. // Цитология.- 1994.- Т. 36, ? 6.- С. 506.

81. Ночевный В. Т., Щедрин Е. JL, Каленчук В. У., Осидзе Д. Ф Влияние ростстимулирующих факторов из плаценты коров на пролиферацию культивируемых клеток // Цитология.- 1983.- Т. 25, ? 9.- С. 1090.

82. Ночевный В. Т. Биологический контроль ростовой активности питательных сред и сыворотки крови животных // Питательные среды и сыворотки для культивирования клеток: Тез. докл. Всесоюз. конф. 14-17 окт. 1991 г.- Новосибирск, 1991,- С. 46.

83. Осидзе Д. Ф. Получение культур клеток из тканей животных и их использование в вирусологии- М., 1975.- 31 с.

84. Панкова Г. Е. Селекция клеточных популяций и морфологическая характеристика клонов из перевиваемых линий клеток почек поросенка ПП (PS) и РК-15 //Цитология.- 1976,- № 18.- С. 1036-1038.

85. Панкова Г.Е. Гидролизат мышечных белков как источник питания при культивировании клеток in vitro // Ветеринария.- 1976,- № 1.- С. 98-100.

86. Пинаев Г. А. Культуры клеток животных и биотехнология // Культивирование клеток животных и человека: Тез. докл. науч. конф.- Пущино, 1985.-С. 72-73.

87. Подчерняева Р. Я. и др. Изучение различных ростстимулирующих белков, используемых для культивирования клеток млекопитающих. // Биотехнология,- 1994.- ? 6,- С. 20-23.

88. Подчерняева Р. Я., Мельниченко Е. И., Конду Э. И. Использование ростстимулирующих белков для стандартизации условий культивирования клеток млекопитающих. // Цитология.- 1996.- Т. 38, ? 2.- С. 240-241.

89. Полянская Г. Г., Дьяконов JI. П. Влияние условий культивирования на кариотипическую структуру клеточной сублинии почки кенгуровой крысы//Цитология,- 1988,-Т. 30, № П.- С. 1355-1363.1.l

90. Полянская Г. Г., Ефремова Т. Н. Влияние микоилазменной контаминации на кариотипическую структуру клеточной линии фибробластов кожи индийского муитжака // Цитология.- 1992.- Т. 34, № 3,- С. 82-88.

91. Полянская Г. Г., Сидова JL С., Николаенко Н. С. Кариотипические характеристики линии фибробластов кожи индийского мунтжака при культивировании с различными сыворотками // Цитология.- 1993.- Т. 35, ? 2,- С. 86-96.

92. Пригода А. А. и др. Конструирование бессывороточных питательных сред для культивирования клеток млекопитающих. Сообщение IV // Биотехнология,- 1991.- ? 5,- С. 55-59.

93. Пригода А. А. и др. Конструирование бессывороточных питательных сред для культивирования клеток млекопитающих. Сообщение VI // Биотехнология.- 1993.- ? 7,- С. 21-25.

94. Пригодность клеточных субстратов для производства биологических препаратов. Доклад исследовательской группы // Серия технических докладов ВОЗ № 747,- М., 1988.

95. Прилепская Е. П. Оценка степени цитотоксичности и состояния клеток при культивировании по биохимическим параметрам // Тез. докл. науч. конф., посвящ. 70-летию Великого Октября.- Покров, 1987.- С. 120.

96. Прилепская Е. П., Анисимова JI. И., Недосеков В. В., Юрков С. Г. Культивирование вируса бешенства в культуре клеток ПС с низким содержанием сыворотки // Материалы междунар. науч.-практ. конф.- Покров, 2001.- С. 66.

97. Прокофьева-Бельговская A.A. Хромосомы человека в норме // В кн. Основы цитогенетики человека.- М., 1969.- 64-84 с.

98. Радолицкая JL С., Бужиевская Т. И. Цитологическая характеристика однослойных тканевых культур в зависимости от условий культивирования // Цитология и генетика.- Киев, 1973.- Т.VII, № 2.- С. 154-157.

99. Рингерц Н., Сэвидж Р. Гибридные клетки. М., Мир, 1979.- 11 с.

100. Романюк Е. Н., Буденная Г. Н., Шамгина JI. К., Кураш Т. П., Ходько J1. П. Опыт получения препарата сыворотки эмбрионов коров // Цитология.- 1983,- Т. XXV, № 9,- С. 1093.

101. Рубан Е. А. Оптимизация и масштабирование процессов глубинного культивирования микроорганизмов и клеток животных с использованием методов системного анализа// Диссер. док., Москва.- 1995.- 56 с.

102. Самуйленко А. Я. Современные основы биотехнологии производства биопрепаратов // Диагност., проф. и меры борьбы с особо опасными и эк-зотич. болезнями животных: Материалы междунар. конф., посвященной 40-летию ВНИИВВиМ,- Покров, 1998.- С. 182-184.

103. Самуйленко А. Я., Рубан Е. А. Основы технологии производства ветеринарных биологических препаратов М., 2000.- Т. 1.- 199-202 с.

104. Сергеева С. П. Потребность культур клеток в пластических веществах и некоторые вопросы конструирования питательных сред // Бюллетень ВИЭВ.- М., 1978.- Вып.ЗЗ.- С. 63-66.

105. Сергеев В. А. Репродукция и выращивание вирусов. М.: Колос, 1976.15-125 с.

106. Сергеев В. А. Вирусные вакцины. Киев, Урожай, 1993.- 368 с.

107. Серейна В. И., Лабутинас А. В. Применение роллерной культуры клеток для выращивания энтеровирусов свиней // Вопр. груп. проф. заболев, животных и птиц.: Матер, конф.- Вильнюс, 1986.- С. 71-72.

108. Слободенюк А. В., Колесникова Г. Г. Питательная среда для выращивания первичных и перевиваемых культур клеток // Патент 2036233. Россия, МКИ С 12 № 5/00, опуб. 1995.- Бюл. № 15.

109. Смирнова Т. Д., Литвинчук Л. Ф., Сизова Л. С. Новый способ контроля свойств сыворотки крови КРС // Цитология.- 1996,- Т.38, № 2.- С. 240-250.

110. Сокова В. А. Цитологическое изучение различных клеточных культур в норме и после инфицирования их микоплазмами: Автореф. дис. канд.- Покров, 1973.

111. Сокова В. А., Белун О. В. Влияние трофопаузы на ростовые свойства перевиваемых клеток в однослойных культурах // Акт. вопр. вет. вирусол.-Владимир, 1976,-С. 82-83.

112. Сокова В. А., Курносов А. Н. Изменчивость перевиваемых клеток почки поросенка в процессе их непрерывного пассирования // Вопр. вет. виру-сол., микробиол. и эпизоотол.: Тез. докл. науч. конф.- Покров, 1978.- С. 2324.

113. Сокова В. В., Рожнова О. В., Николаев А. К., Алеева Л. А. и др. Получение и использование клонов клеток ВНК-21 для промышленного выращивания вируса ящура // К новой стратегии борьбы с ящуром: Тез. докл. междунар. конф.- Владимир, 1991.- С. 107-108.

114. Соловьева А. И. Изучение различных типов клеток, длительно культивируемых in vitro: Автореф. дис. канд.- М., 1967.

115. Спиер Р. Е., Гриффите Дж. Б. Биотехнология клеток животных. М., 1989,- 34 с.

116. Тарасов В. Н. Культуры клеток в производстве биопрепаратов // Итоги науки и техники, ВИНИТИ, сер. Вирусология.- М., 1991.- № 21,- С. 172.

117. Требования к перевиваемым линиям клеток для производства инактиви-рованных вирусных вакцин // Серия технических докладов ВОЗ № 673.-М, 1984.- С. 68-74.

118. Требования к перевиваемым линиям клеток, используемых для производства биологических препаратов. Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов // Серия технических докладов ВОЗ № 745.- М., 1988,- С. 85-98.

119. Урмаиова М. А., Тихонов В. Я., Балзовская Е. Г., Кищенко Г. П. Ци-тогенетическая характеристика клеточной линии ВНК 21 (С-13) и трех ее клонов // Цитология.- 1989.- Т. 31, № 7.- С. 799-806.

120. Фаустов В. С., Чугасова В. А., Амбросова С. М., Шепель JL И. Пути и способы создания бессывороточных сред для культивирования клеток млекопитающих (обзор) М., 1985,- 45 с.

121. Фрей-Висслинг А. Сравнительная органеллография цитоплазмы. М., Мир, 1976.- 144 с.

122. Хаертынов С. X., Мамлеева Н. К. Взятие крови с целью получения сыворотки для культивирования клеток // Ветеринария.- 1982.- № 11.- С. 6667.

123. Хапчаев Ю. X., Миронова JI. JI. Культивирование клеток линии 455 в средах различного состава // Культивирование клеток животных и человека.: Тез. док. 2 Всес. сов,- Пущино, 1985.- С. 55.

124. Хижняк JI. И., Ночевный В. Г. Получение и изучение сыворотки крови плодов овец // Цитология.- 1994.- Т. 36, № 6.- С. 585.

125. Хижнякова Т. М., Подчерняева Р. Я., Мельниченко Е. И. Культивирование клеток на пористом макроносителе с использованием различных видов сывороток // Биотехнология,- 1998.- № 5.- С. 38-41.

126. Чермашенцева Н. А. Деконтаминация культуры клеток ППК-666 от персистирующего вируса классической чумы свиней и стабилизация свойств полученных клонов: Автореф. дис. канд.- Покров, 1996,- 23 с.

127. Шевченко JI. В., Курносов А. Н., Юрков С. Г. и др. Тестирование сывороток крови свиней, используемых при культивировании клеток // Ветеринария,- 1986.- №11.- С. 25-28.

128. Шипнлов В. И., Дудников С. А., Смирнов В. И., Беляев Н. Е., Гриценко А. И. Усовершенствование технологии изготовления антирабиче-ской вакцины // Вирусные болезни с/х животных: Тез. докл. науч.-практ. конф.- Владимир, 1995.-С. 149-150.

129. Юрков С. Г., Курносов А. Н., Витина С. А., Зуев В. В., Кушнир С. Д., Анисимова JI. И. Универсальная роллерная технология культивирования перевиваемых клеток животных // Ветеринария.- 1995.- № 9.- С. 29.

130. Barman Н. К., Rajpur Y. S. Serum-free and serum-containing media for hybridoma culture // J. Sci and Ind. Res.- 1993.- Vol. 12, № 52.- P. 803-807.

131. Barnes D., Sato G. Methods for growth of cultured cells on serum-free medium // Anal. Biochem.- 1980,- Vol. 102.- P. 255-270.

132. Barnes D., Sato G. Serum free culture // Cell.- 1980.- Vol. 22,- P. 649.

133. Bertheussen K. Growth of cells in a new defined protein-free medium // Cy-totechnology.- 1993.- Vol. 3, II.- P. 219-231.

134. Bertolero Г., Kaighn M. E., Camalier R. F., Saffoiotti U. Effekts of serum and serum-derived faktors on growth and differentiation of mouse keratino-cytes. // In Vitro.- 1986.- Vol. 22,- P. 423-428.

135. Brandli J. Influence of HTST-sterilization for growth of serum-free cell cultures // Abstract 16 Int. Meet. Products from cells. Cells as products.- Switzerland, 25-29 April 1999.- P. 217.

136. Bryant J. C., Schiling E. L., Early W. R. Massive fluid suspension cultures of certain mammalian tissue cells // Nat. Cancer Inst. (US).- 1958.- Vol. 21.- P. 331.

137. Campbell A.M. Monoclonal antibody technology // Amsterdam, 1985.- 326 P

138. Capstick P. В., Telling R. C., Chapman W. G., Stewart D. L. Growth of a cloned strain of hamster kidney cells in suspended cultures and their susceptibility to the virus foot-and-mouth disease // Nature (London) 1962.- Vol. 195.-P. 1163-1166.

139. Cartaya О. A. Serum-free cell culture media // Пат. СШАб пл. 435/2 (A OIN 1\02) № 4201266 заяв. 14.12.78, № 969590, опуб. 27.05.80.

140. Cereda P. M., Debiaggi M., Mighatti P., Pagani L., Romero E. Bovine leukemia virus inhibiting activity in fetal calf serum // Microbiologica.- 1984.-Vol. 7, №3.-P. 251-256.

141. Chandler J. Cultivation of mamalian cells in serum free medium // Amer. Biotechnol. Lab.- 1990,- Vol. 8, № p. 18-28.

142. Chen Zhaolie, Xiao Chengzy. A novel serum-free medium for the cultivation of Vero cells on microcarriers // Biotechnol. Techn.- 1996.- Vol. 6.- P. 449452.

143. Chouaib A., Kallel H. Adaptation of Vero cells to a serum free medium for the production of rabies virus // Abst. 16 st. Int. Meet. Products from cells. Cell as Products.- Switzerland, 25-29 April 1999.- P. 224.

144. Clark J.M., Gelb C.H., Hirtenstein M.D. High yield microcarrier culture of animal cells in low-serum and serum-free media // Eur. J. Cell Biol.- 1980,- Vol. 22,1.-P. 601.

145. Croce C., Linnenbach A., Dolby Т., Koprowski H. The use of mouse-human hybridomas in human genetics and immunology // Somatic cell genetics. New York; London.- 1982.- P. 55-68.

146. Cunningham D. D., Pardee A. B. Transport changes rapidly initiated by serum addition to "contact inhibited" ST3 cells // Pros. Nat. Acad. Sci., USA,-1969,- Vol. 64.-P. 1049-1056.

147. Czech M.P. Molecular Basis of insulin Action // Ann. Rev. Biochem.- 1977.-Vol. 46.- P. 359-384.

148. Danes B. S. A glass stirrer apparatus for the cultivation of cell suspension // Exp. Cell Res.- 1956.- Vol. 12.- P. 169.

149. Dewelle J., Pirotton S., Raes M. Development of a serum-free medium for a human diploid fibroblast cell line // Abst. 16 st. Int. Meet. Products from cells. Cell as Products.- Switzerland, 25-29 April 1999.- P. 216.

150. Dinter Z. Relationship between bovine viruse diarrhea virus and hog cholera viruse // Zbl. Bact. Paras. I. Orig.- 1963.- Vol. 188.- P. 457-486.

151. Dulbecco R., Freedman G. Plaque production by the polyoma virus // Virology.- 1959,- Vol. 8.- P.396-397.

152. Durham P.J.K., Smith J.R., Johnson R.H. Use of polyethyleneglycol treated sera for virus production in cell culture // Virol. Meth.- 1982.- Vol. 5.- P. 329-334.

153. Eagle H. Media for animal cell culture // Tissue Cult. Assoc. Manual.- 1977.-Vol.3.-P. 517-520.

154. Earle W. R., Bryant J. C., Schilling E. L., Evans V. S. Growth of cell suspension in tissue culture // Ann. N. Y. Acad. Sci.- 1956.- Vol. 63.- P. 666.

155. Eliason J. F., Odartchenco N. Serum-free medium for clonal growth of he-mopoietis progenitoz cell // Experientia.- 1984.- Vol. 40, № 6.- P. 622.

156. Fischer G., Wieser R. I. Hormonally Defined Media. A Tool in Cell Biology.- Berlin, 1983.- 455 p.

157. Ford C.E., Hamerton J.L. A colchicine, hypotonic citrate, squash sequence for mammalian chromosomes // Stain Technol.- 1956,- Vol. 31.- P. 247-251.

158. Forestell S. P., Kalogerakis N., Behie L. A. Low-serum medium development for human-diploid fibroblast microcarrier cultures // App. Microbiol, and Biotechnol.- 1992,- Vol. 38, iss 2,- P. 165-172.

159. Gaillard D., Negrel R., Serrero-Dave G., Cermolasse C., Ailhau D. Growth of preadipocyte cell linea and cell strains from rodents in serum-free hormone-supplemented medium // In vitro.- 1984.- Vol. 20, № 2.- P.79-88.

160. Gary L., Bradshaw and George R. Dubes supplementary factors required for serum-free culture of rat kidney cells of line NRK-49F // In vitro.- 1983.-Vol. 19, № 10,-P. 735-742.

161. Gonze M., Maggeto C. Development of a serum-free medium MRC-5 culture // Abst. 16 st. Int. Meet. Products from cells. Cell as Products.- Switzerland, 25-29 April 1999.- P. 223.

162. Gospodarowicz D., Moran I.C. Optimal conditions for the study of growth control in BALB/c 3T3 fibroblasts // Exp. Cell Res.- 1975.- Vol. 90, № 2,- P. 279-284.

163. Gospodarowicz D., Moran I.C. Growth factors in mammalian cell culture // Ann. Rev. Biochem.- 1976,- Vol. 45.- P. 531-538.

164. Griffiths B. Closing the culture gap // Biofutur.- 1992.- Vol. 1.- P. 30-32.

165. Harris H. Behaviour of differentiated nuclei in heterokaryons of animal cell from different species //Nature.- 1965.- Vol. 206,- P. 583-588.

166. Hoekstra W.G. Biochemical function selenium and its relation to vitamin E // Fed. Proc.- 1975,- Vol. 34.- P. 2083-2089.

167. HoIIey R. W. A Unifying Hypothesis Concening the Nature of Malignant Growth // Proc. Nat. Acad. Sci. US.- 1972.- Vol. 69, 10.- P. 2840-2841.

168. Jayme D., Price P., et al. Serum and serum-free cultivation of mammalian cells used for virus production applications // Abst. 16 st. Int. Meet. Products from cells. Cell as Products.- Switzerland, 25-29 April 1999.- P. 161.

169. Jrjima K., Morimoto K., Koizumi A., Higurashi M., Hirayama M. Bleo-mycine-induced chromosomal aberrations and sister chromatid exchanges in down lymphocyte cultures // Hum. Genet.- 1984.- Vol. 66.- P. 57-61.

170. Kinoshita Y., Fukase M., Takenaka M., Nakada M., et al. Calcitonin-responsive clonal cell line from porcine kidney (PK-15) in serum-free medium // Endocrinol Jpn.- 1985.- Vol. 32(6).- P. 819.

171. Kohler G., Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity//Nature.- 1975.- Vol. 256.- P. 495-497.

172. Kromer E., Scheirer W., Katinger H.W.D. Hormone supplemented cell growth media requring only 2% fetal calf serum for reduced cost of routine cell culture // Dev. Biol. Stand.- 1982.- Vol. 50.- P. 355-359.

173. Lambert K., Pirt S. J. The quantitative requirements of human diploid cells (strain MRC-5) for amino acids, vitamins and serum // Cell Sci.- 1975.- Vol. 17.-P. 397-411.

174. Legrand C., Capiaumont J., Belleville F. Comparison of metabolism of hybridoma cells cultured in media supplemented with whey or fetal calf serum. // Biotechnol. Progr.- 1993.- Vol. 6.- P. 573-579.

175. Ludwig K. W., Lowey B., Niles R. M. Retinoic Acid Increases Cyclic AMP-dependent Protein Kinase Activity in Murine Melanoma Cells // J. Biol. Chem.-1980.-Vol. 255, 13.- P. 5999.

176. Malewicz B., Anderson L. E., Crilly K., Jenkin H. M. Fetal rhesus monkey lung cells can be growth in serum-free medium for the replication of denque-2 vaccine virus // In vitro.- 1985.- Vol. 21, № 8.- P. 470-476.

177. Mather J. P., Saez J. M., Haout F., Dray F. Hormone Hormone and Hormone - Vitamin Interactions in the Control of Growth and Function of Leydig Cells in Vitro // Gold Spring Harbor Conferences on Cell Proliferation.- 1982.-P. 1117-1127.

178. Maurer H. R. Towards chemically-defined, serum-free media for mammalian cell culture // In: Animal cell culture, E. Feshney R.I.- Oxford Washington, 1986.-P. 13-32.

179. Mendonca R., Ioshimoto L., Mendonca R. M., De-Franco M. et al. Preparation of human rabies vaccins in Vero cell culture using a microcarrier system //Braz. J. Med. and Biol. Res.- 1993,-Vol. 12.-P. 1305-1317.

180. Michler-Stuke A., Bottensein J. Defined Media for the Growth of Human and Rat Glial-derived cells // Gold Spring Harbor Conferences on Cell Proliferation." 1982,- P. 959-970.

181. Mohamed S. N. W., Holms R., Hartzell R. A serum-free, chemically defined medium for function and growth of primary neonatal rat heart cell cultures // In vitro.- 1983,- Vol. 19, № 6,- P. 471-478.

182. Morhenn V., Kram R., Hershko A., Tomkins G. M. Studies on amino control of cellular function // Cell.- 1974.- Vol. 1, № 2,- P. 91-94.

183. Morley J. E., Damassa D. A., Gordon G., Pecary A. U., Hershman G. M. Tyroid function and Vitamin A deficiency // Life Sci.- 1978.- Vol. 22.- P. 1901.

184. Nair B. K. Inability of serum to completely reverse density dependent inhibition of cell growth in culture // Nat. Cancer Inst.- 1974,- Vol. 52, № 2,- P. 513517.

185. Nakama A., Yamada A. Serum-free culture of human hepatome Hep-2 cells with egg yolk low densiry lipoprotein // Biosci. Biotechnol. and Biohem.-1993.-Vol. 57, №3.-P. 410-413.

186. Ohno Tadao, Okigaki Tohru. Growth factors // Cell struct, and Funct.-1984.-Vol. 9,- P. 591-596.

187. Ojioto E., Fernander M., Chico E. Low-protein, serum-free medium for the cultivation of CHO cells in suspension culture // Abst. 16 st. Int. Meet. Products from cells. Cell as Products.- Switzerland, 25-29 April 1999.- P. 220.

188. Okada Y., Murayama F. Multinucleated giant cell formation by fusion between cells of two different strains // Exp. Cell Res.- 1965.- Vol. 40.- P. 154158.

189. Pakkanen R., Kanttinen A., Satama L., Aalto J. Bovine colostrum fraction as a serum substiture for the cultivation of mouse hybridomas // Appl. Microbiol. Biotechnol.- 1992,- Vol. 37,- P. 451-456.

190. Paul D., Lipton A., Klinger I. Serum factor requirements of normal and simian virus 40 transformed 3T3 mouse fibroblasts // Proc. Nat. Acad. Sci. USA.-1977.- Vol. 68,- P. 645-648.

191. Paul P.W., Buul van Goudzwaard J.H. Bleomycin-induced structural chromosomal aberrations in spermatogonia and bone-marrow cells of mice // Mut. Res.- 1980.- Vol. 69,- P. 319-324.

192. Petricciani J. Changing attitudes and actions govarning the use of continuous cell lines for the production of biologicals // In: Animal Cell biotechnology.- Vol. 3 (R. Spier, J. Griffiths, eds.), Acad. Press., London.- 1988.

193. Petricciani J. Cells, science and health // Dev. Biol. Stand.- 1989.- Vol. 70.-P. 3-10.

194. Price P. J., Gregory E. A. Relationship between in vitro growth promotion and biophysical and biochemical properties of the serum supplement // In Vitro.- 1982,- Vol. 18,- P. 576-584.

195. Puck T. T., Marcus P. I., Cieciura S. J. Clonal growth of mammalian cells in vitro. Growth characteristics of colonies from single HeLa cells with and without a feeder layer // Exp. Med.- 1956.- Vol. 103.- P. 273-284.

196. Rivedal E., Haddeland U. Role of serum in the morphological transformation of Syrian-Hamster embryo cell-characterization and partial-purification of protein factors in fetal bovine serum // Toxicol, in vitro.- 1996.- Vol. 10.- P. 217.

197. Rudland P.S. Nutrient-dependent arrest of Fibroblast growth is partially reversed by insulin but not fibroblast growth faktor (FGF) // Nature.- 1976.- Vol. 260.-P. 51.

198. Rudland P.S., Limenez de Asua L. Action of growth factors in the cell cycle //Biohem. Biophys. Acta.- 1979.- Vol. 560.- P. 91-133.

199. Sakoda Y., Hikawa M., Tamura T., Fukusho A. Establishment of a serumfree culture cell line, CPK-NS, which is useful for assays of classical swine fever virus // Virol. Methods.- 1998.- Nov., Vol. 75.- P. 59-68.

200. Sakoda Y., Yamaguchi O., Fukusho A. A new assay for classical swine fever virus based on cytopathogenicity in porcine kidney cell line FS-L3 // Virol. Methods.- 1998.- Vol. 70, № 1.-P. 93-101.

201. Sarma G., Kumar S., Lai S.M. Foot-and-mooth virus production in BHK-21 suspension cell cultures using polyethylene glycol treated bovin serum // Indian Vet. Med. I.- 1983,- Vol. 7, № 2,- P. 65-69.

202. Sato G., Gordon H. Divining the role of serum cell culture // Horm. Defined Media, Toll cell Biol. Berlin.- 1982.- P. 2-3.

203. Schroder E. W., Rapaport E., Kabcenell A. K., Black P. H. Growth inhibitory and stimulatory effects of retinoic acid on murine 3T3 cells // Proc. Natl. Acad., USA.- 1982.- Vol. 79,- P. 1549-1552.

204. Seals J.R., Jarett Z. Activation of pyruvate dehydrogenase by direct addition insulin to an isolated plasme membrane/ mitohondia mixture // PNAS.- 1980.-Vol. 11.- P. 77-81.

205. Seganti L., Grassi M., Mastromarino P., Pana A., et. al. Activity of human serum lipoproteins on the infectivity of rhabdoviruses // Microbiologica.- 1983.-Vol. 6, №2.-P. 91-99.

206. Serrero G. R., Mc Clure D. B., Sato G. H. Growth of mouse 3T3 fibroblasts in serum-free, hormone-supplemented media // In. Hormones and cell culture. Cold Spring Harbor, Book B.- 1979.- P. 523-530.

207. Shu-de Jiang, Hampson A.W. A simple endpoint dilution method for evaluating serum used for cell culture // Biol. Stand.- 1985.- Vol. 13, № 4.- P. 303308.120

208. Spier R.E., Crarke J. Variation in the susceptibility of BHK populations and cloned cell lines to three strains of foot-and-mouth disease virus // Arch. Virol.-1980.-Vol. 63.-P. 1-9.

209. Tackzono Т., Sakato K. Agent for stimulating growth of animal cells and serum-free medium containing same // Патент 5318906 США, МКИ С 12 № 5/00, А 61 К 35/14 Опуб. 1994, НКИ 435/2402.

210. Tozzini F., Bandecchi P. Terreno di colture per le cullule animal contenente fattori di crescita e sostanze nutritive in alternativa al siero fetala bovino // Arch. Vet. ItaL- 1985,- Vol. 36, № 5-6,- P. 151-158.

211. Van Wezel A. L., Van der Velder-de Grott С. A. M. Large-scale cultivation of animal cells in microcarrier culture // Process. Biochem.- 1978.- Vol 13, № 3.- P.6-8.

212. Vogel A., Ross R., Raines E. Role of serume components in density-dependend inhibition of growth of cells in culture. Platetet-derived growth factor is the serum determinant of saturation density // Cell Biol.- 1980.- Vol. 85, №2.-P. 377-385.

213. Wolfe R., Yeifetz A. Basal nutrient medium for cell culture. Патент 5232848 США J, МКИ5 С 12 N 5/00. Опубл. 1993, НКИ 435/240.

214. Слано I! набор 26.10.2000г. Подписано в печать 1.1 1.2000г. Форма! бумаги 145x210. Бумага офсетная Компьютерный набор. Заказ № 28. Гарнитура « Times New Roman» Тираж' 50 жз.

215. Отпечатано в типографии Всероссийского НИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии. Лиц. № 02 1 203 от 3 I июля 1998г.У

216. Катал. № 30. ЛО перевиваемая линия клеток легкого эмбриона оленя

217. Линия ЛО выведена во ВНИИВВиМ в 1989 году Зуевым В. В. из эмбриональной И легкого европейского оленя1. ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬТУРЫ:

218. Пассаж:. Клеточная культура поддерживалась в течение 42 пассажей. Заморо-а и хранится в жидком азоте на уровне 9 и 31 пассажа.

219. Среда культивирования. Игла MEM (90%), сыворотка теленка (10%).

220. Способ выращивания. Выращивается в пристеночньк культурах.

221. При пересеве клеточный пласт диспергируется 0,02% раствором версена, подог-М до +37°С.

222. Ростовые свойства. Культуру пересевают с коэффициентом 1:2-1:3. Монослой дируется на 2-3 сутки и сохраняется без смены среды в течение 8-10 дней.

223. Морфология. Клеточный пласт формируют фибробластоподобные элементы.

224. Кариология (2п=68). Варьирование числа хромосом в клетках составляет от 65 9. Модальный класс представлен клетками, содержащими по 68 хромосом, состав-цими в популяции 92%.

225. Среда замораживания. Ростовая среда (90%), глицерин (10%).

226. Восстановление после храпения в лсидком азоте. Жизнеспособность 75-85%. Оология клеток и ростовые свойст ва восстанавливаю гея на 2-3 пассаже.

227. Катал. №31. IIC перевиваемая линия клеток почки сайги

228. Линия ПС получена в 1981 году в НИСХИ Л.П. Кирюхиной и др. В коллекцию ИВВиМ поступила в 1985 году на 330 пассаже. ХАРАКТЕРИСТИКА КУ 'НУТУТЫ:

229. Пассаж. Во ВНИИВВиМ прошла 10 пассажей. Заморожена и хранится в жид-зоте на 335 пассаже.

230. Среда культивирования. 0,25% ФГМС на растворе Эрла (95%), сыворотка КРС рН 7,2-7,5.

231. Способ полдержания. Выращивается в пристеночных культурах. Для дисперги-1ия клеточного пласта при очередном пересеве использует теплыми (+37°С) 0,02% ор версена и 0,25 % раствор трипсина в соотношении 25:1.

232. Ростовые свог/ства. При пересеве с коэффициентом 1:2 монослой формирует-3-5 сутки. Со сменой среды через 5-7 дней сохраняется до 3 месяцев.

233. Морфология. Клетки полигональной формы с четко выраженными границами и лыми мелкими ядрами с 3-5 ядрышками. Цитоплазма не вакуолизирована.

234. Кариология . Клетки обладают стабильным кариотипом. Модальный класс предают клетки с 48 хромосомами, что составляет 32%.

235. Среда замораэ/сивания. 0,5"« ГЛА на растворе Эрла (70%), сыворотка КРС , диметилсульфоксид (10%).

236. Восстановление после хранения в жидком азоте. Жизнеспособность 80- 85%. ;ные ростовые свойства и морфология восстанавливается на 2-3 пассаже.

237. Катал. №31.1. ПС(ВНИ Л В Ни М)—сублиния перевиваемых клеток почки сайги

238. Катал. № 31.2. ПС/с4 — ¡счонильная перевиваемая линия теток почки сайги

239. Клон с4 получен в ¡998 году Л. И. Анисимовой, Е.П.Прилепской и жовым путем клонирования методом предельных разведений сублинии клеток ;айги ПС(ВНИИВВиМ) в малосывороточной среде (0Д% сыворотки крови КРС).

240. ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬ ТУ/ 'Ы:

241. Клетки криоконсервированы в жидком азоте на уровне 7, 10, 15, 19, 25 и 42 ей.

242. Среда культивирования. Игла модификации МЕМ/АЬРНА (99,5%), сыворотка КРС (0,5%), жирорастворимые витамины А и Е, гормоны: тироксин, инсулин, эртизон, рН 7,2-7,4

243. Способ поддерлсания. Выращивается в пристеночных культурах, отделяют от стекла тёплой (37иС) смесыо 0,02% раствора версена (99%) и эаствора трипсина (1 %).

244. Ростовые свойства. При пересеве 1:2-1:3 монослой образуется через 48 -72 часа .няется при 37°С без смены среды в течение 10-12 дней. Урожай клеток с литро-.траса составляет 40-45 млн. клеток.

245. Среда замораживитш. Среда Игла-МЕМ (70%), сыворотка крови КРС (20%), ггилсульфоксид (10%).

246. Восстановление после хранения в ж-идком азоте. Жизнеспособность в пределах )%. Клетки хорошо восстанавливают ростовые свойства на 2-3 пассаже.

247. Чувствительность к вирусам. Чувствительна к вирусу бешенства, парагриппа (ПГ-3), вирусу чумы плотоядных, ИРТ КРС.

248. Катал. № 32. MDCK перевиваемая линия клеток почки собаки (спаниэля)

249. Линия MDCK поступила в коллекцию ВНИИВВнМ в 1975 году на неизвестном пассажа.1. ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬТУРЫ:

250. Пассаж. В институте поддерживалась в течение 73 пересевов. Заморожена и :я в жидком азоте на 15 и 46 пассажах.

251. Среда культивирования. Игла MEM (30%), 0.5%, ГЛА на растворе Эрла (60%), гка КРС (10%), рН 7,4-7,5.

252. Тпособ поддержания. Выращивается в пристеночных культурах.

253. Всероссийский научно-исследовательский УТВЕРЖДАЮинститут ветеринарной вирусологии и микробиологии ВНИИВВиМ1. АКТ^¿Гг. Покрово комиссионной проверке клональной перевиваемой линии клеток почки сайги ПС/с4

254. В качестве ростовой среды для культивирования сублинии перевиваемых клеток (СПК) почки сайги ПС использовали среду Игла MEM с 5% сыворотки крови КРС;1. Директор ВНИИВВиМ2 ' *

255. Для морфологического изучения исследуемые культуры, выращенные на предметных стеклах, фиксировали в жидкости Буэна и окрашивали гематоксилин-эозином.

256. Ростовые характеристики изучаемого клона оценивали на протяжении 20 последовательных пассажей: определяли сроки формирования монослоя, урожай клеток при образовании сплошного клеточного пласта и время его переживания.

257. Культивирование клеток осуществляли в матрасах РУ, чашках Кар-реля, пробирках со стеклянными пластинами и микропанелях в условиях стационарного монослоя.

258. Жизнеспособность клеток определяли методом витального окра-ши-вания 0,5%-ным водным раствором трипановой сини.

259. Изучение кариологических свойств клеток клональной перевиваемой линии почки сайги ПС/с4.

260. На протяжении 20 пассажей отмечена стабильность кариологических показателей.

261. Кариологический контроль исходной культуры клеток ПС(ВНИИВВиМ) показал: размах варьирования числа хромосом в клетках от 43 до 56, модальный класс (40%) составляют клетки, имеющие 50 хромосом.

262. Изучение вирусрепродуцирующих свойств клональной перевиваемой линии клеток почки сайги ПС/с4.

263. Вирусрепродуцирующие свойства определяли путем накопления вируса бешенства в клетках клональной перевиваемой линии ПС/с4 и сублинии почки сайги ПС.

264. Для заражения использовали вакцинные штаммы вируса бешенства ТС-80 и РБ-71, выращенные в культуре клеток ПС 74 и 6 пассажей с активностью 7,3 % МЛД50/мл и 7,0 ^ МЛД50 /мл соответственно.

265. В суспензию клеток клональной линии ПС/с4 и сублинии ПС вносили вирус бешенства, штаммы: ТС-80 и РБ-71 в дозе 0,1-0,01 МЛДзо/клетку.

266. Вирус культивировали четверо суток, после чего путем двукратного замораживания оттаивания разрушали клетки для освобождения внутриклеточного вируса.

267. Титрование вирусного сырья проводили в культуре клеток исходной линии ПС и на белых мышах.

268. Результаты определения инфекционной активности вируса бешенства в исследуемых материалах представлены в таб. 1.