Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Получение и изучение физико-химичских свойств копьюгатов моноклональных антител с фотосенсибилизатором

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Получение и изучение физико-химичских свойств копьюгатов моноклональных антител с фотосенсибилизатором"

РОССИЙСКАЯ АКЛ2ЕКИЯ К А 1' К ОРДЕНА ЛЕНИНА ИНСТИТУТ БИОХИМИК км. А.Н. БАХА

На правах окаписи

ЛОПАТИН КОНСТАНТИН ВАСИЛЬЕВИЧ

УДК 57?. 5*4. 3 « 615. 032

получение и изучение физико-химических свойств копыогатов ноноклоналышх антител с «отосенсибиднэаторали

03. 00. оч - биологическая хтта

АВТОРЕФЕРАТ

'аиссертааии на соискание ученой степени кандидата биологически* наук

Г

мг-:к£а - : 852

Работа выполнена в лазораторик молекулявноа иммунологии института биохимии ин. а. н. Багв ан ссср.

научны» руководитель: доктор химических наук

А. п. сазипкии.

Официальные оппоненты: доктор химически* наук

Б. Б. дэантиеЕ кандидат Физико-математических наук А. ю. "¡икигоев

ветшая организация: всесоюзный оккколсгический научный аектр АМН.

зашита состоится ^ л992 г. в __ час. нз

заседании специализированного совета к оог. ?б. л; но присуждению ученой степени кандидата наж з институте ьхохимии им. а. н. Бахе ран. Адрес: И707:, косква. • ленинский' пгоспект, гг. корпус г

с диссертацией мсхно ознакомиться г библиотеке ьиологическая литературы РАК /11707«, Москва, ленинский проспект, 32. корпус 1/.

Автореферат разослан *

ученый секретарь специзлиэкрсвснного совета, доктор биологических ту::__;______я. и. Молчанов

JlAdUjUJl

1 »92 г.

Актуальность проблемы. Нетод фотодинамическои терапии, применяемый для лечения опухолей, использует свойстве некоторых Фотосенсибилизаторов избирательно накапливаться в злокачественных новообразованиях и вызывать повреждение клеточных структур при облучении опухоли видимым светом, препараты на основе производных гематопорфирине, использующиеся б клинической практике, имеют неоптиналыши для облучения тканей спектр поглощения, неопределенный химический состав, невысокую туноротропность и избыточное накоплегие в кохь.

3 настоящее время в качестве потенциальных Фотодинамических агентов рассматриваются различные красители, среди котсгых большое внимание уделяется Фталонианинам. эти вещества имеют высокий коэффициент экстинкции (> ю5 н_1см~1:. з красной области спектра (650-700 нмь что необходимо для Фотодинамического агента; для лекоторых из них показана способность генерировать синглетчый кислород, который, вероятно. обусловливает фотодинамическое действие: некоторые Фталоцианины демонстрировали высокую■фотодинамическую активность в экспериментах in vitro и m vjvo, Kpo.-te того, Фтали-циаккны могут иметь различные боковые группировки, елиякхике . на химические свойства и позволявшие присоединение к ' других вешеств, например, белков, exorne во многом свойства имеют наФталоиианины - менее изученная группа красителеи с максимумом поглощения 750 - аоо ни.

Увеличения туморотропности могно добиться, применяя принцип направленного транспорта при помощи антител к специфическим антигенан злокачественных клеток, известные по литературным данным коныогагы антител с гвматопорфирином к с -хлорином еа дозволили снизить эффективную дозу Фотосенсибилизатора примерно в loo раз. снижение эффективной дозы фотодинамического агента приведет к уменьшен!® его неспеаифк-чеекого накопления, например, в коже и печени больного, к снизит риск повреждения здоровых тканек.

сокращения: рс - Фталопианин; кс - нафталонианин; • znCPc -карбсксифталоцианин пинка; AlSPc - сульфофталопианин алюминия; GaSNc нафталоцианин галлия; мат - моноклональные антитела; igG - иммуноглобулин G; Fab, F- - фрагменты антитела.

з

Цепи и задачи исследования. Целью настоящая работы было исследование возможности получения иммунологически ектибных аогоиммунотоксиаов на основе коньюгатов мсноквонаяышх антител с фталснианинзми & нафтадоцианинами.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи;

- выбор и оптимизация способов синтеза коньюгатов моноклинальных антител с различными фталоаиаиияами и настало-пиааинамк;

- разработка схемы очистки подученных коьыогатоБ,

- определение характера связи между компонентами конь-югага;

- определение оотофкзических характеристик коньюгатоь.

Научная новизна работы. Получены хоиьюгаты фталоциа.чи-

:шв я наФталоцианинов с моьоклоналышми антителами, сохраняющие иммунологическую активность.

Проведен скриннинг способов коиьюгировакия.

Разработана методика очистки коньюгатов от несвязавше-гося белка, использующая хроматографию на гидрофобном носителе фенил-сефарозе; Предложена полная схема очистки длй белковые коньюгатов.

Проведено детальное исследование рн-зависимости поглощения и флуоресценции сульФоФталодианина алюминия и его кзныигата с антителами, получены рк для различных форм Фс>-тосенсибилизатоса. определена их возможная природа-

Проведено изучение фотофизических свойств коньюгата фталоцианина алюминия поляризационным методом.

Практическая значимость работы. Диссертационная работа выполнялась-в рамках ГНТП "Борьба с наиболее распространен-ками болезнями" по направлению о. г "изучить основные меха-кчзмы формирования злокачественной клетки и разработать на ?той основе новые принципы лечения онкологических заболеваний" (задание ог. оз. ог. е "Ра-Работка научных основ создания г'эепаратов для фотодинамической терапии злокачественных ог.у-тчлея") полученные результаты могут быть использованы б научно-исследовательских организациях и медицинских учреждениям, где проводятся исследования в области фотодинамическои терапии опухолей.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы били представлены на III конгрессе Фотобиологического обществе (Будапешт, )9в9), международной конференции по Фотодинамической терапии (София, 1969), го-н конгрессе Федерации Европейских биохинических обществ (Будапешт, 1990), vi конгрессе Фотобиологического общества (Амстердам. 1991).

публикации, по теме диссертации опубликовано i печатные работы.

рбьен работы, диссертация состоит чз обзора литературы (главы i и 2), методической части (глава 3), обсуждения полученных результатов (глава 4), выводов, списка литературы, вкшпаюшего 228 наименовании и приложение • полный оьъем диссертации 134 страниц, включая г? рисунков и 5 таблиц

эксперимента/ ->ная часть

Реактивы, i-циклогексил-з-(морфолиноэтил) карбодиимил мето-л-толуолсульфонат. цетилтриметиламмоний-бромиь.

трис-(оксиметшп-аминометан (грис) ¡Siema, cea). бычий сывороточный альбумин (Serva, ФРГ), тритон х-юо и твим-го (Регак, зап. Берлин), 2, г-аэино-ди-1, з-этилбензилтиа-о-лин-сульфонат (АЕТС) (Boearinger. фрп. изотиоиианатное производное ДТПА-Eu(III), усиливающий раствор (WaUac, Финляндия), пероксидаза хрена (Олаяна, Латвия», обезвоженные диие тилсульфоксид и диметилформамид. кислоты, телочи. соли -компоненты буферных растворов - марки о. с. ч. или ч. д. а. отечественного пооизводства.

эксперименты по колоночной хроматографии проводили hú носителях .Toyopeari HW-so и HW-ьб (Toyo Soda, Япония), sepnadex G-50, 'Septiarose CL-бВ, ' Phenyl-Sepnaros* cl-4E, и octyi-Sepbarose ch-че (Ptiarmacia, Ввеаия).

Фталоцианины и нафталовианины были подучены из лаборатории профессора Лукьянаа Е. А, научно-исследовательского института органически* полупродуктов и красителей <г. Москва).

Ноноклональные антитела были предоставлены к, б. н. че-редниковои т. в. (институт биохимии им. А. Н. Баха РАН!

Приборы и нетояы. для хроматотрафичес№Гс> разделения использовалась хроматографическая сг тема, включаюаая насос

ь

p-i, УФ-детектор Uvicord Sil, самописка rec-i (Pbarmacia, лвепия). Сйектгь; поглощения записывали на спектрофотометре хитачи 55? (Япония), спектры Флуореснеьпии и поляризации Флуоресценции регистрировали на спектрофлуориметре LS-5C (PerKin Eimer, Великобритания).

кинетику затухания анизотропии флуоресценции измеряли на флуоресцентной установке, собранной на физическом факультете гумбольдтского университета доц. Б. Редер и д. неизе.

Иммунологическую активность коньюгатоь коноклонглыых антител с Фотосенсибилизаторами определяли непрямым иммуно-Фегментным методом либо иммунофлуоресцектнын методом (delfia). оптическую плотность растворов на микропланшетах измеряли на автоматическом адсорбпиометрг (ßynattcK, сша) на длине вол>ш но им. для детектирования Флуореспспили в методе delfia бил использован Флуоринетр для микропланшетов "Арку с 123г" (Wailac, Финляндия).

основные результат» и обсуждение

синтез и очистка кокыргатос. для определения оптимального варианта получения коньюгатов были проведены синтез* с активацией кареодиимидом, с сульфохлоридными производными Рс и кс. с предварительным хлорированием карсоновои кислоты, с ангидридом фталоцианина. в указанных методах Фотосенсибилизатор присоединялся к свободной аминогруппе ьелка, в частности антитела.

в первом приближении результаты синтеза коныогата оценивались пс отсутствию или наличию агрегации ка основании спектральных данных. Результаты применения различных методов получения коньюгатов для разных соотношения исходных реагентов приведены в таблице :.

из рассматриваемых методов синтеза наилучшие результаты оыли получены для реакции с сульоохлоридами. метод активирования гионил-хлоридсн менее удобен из-за нестойкости получаемых в этой реакции карбонил-хлоридов. В реакции с ангидридом Фталоцианина степень агрегации была высокой дахе при ризке.ч соотношении меченая Активирование карбодиимшшм было неудобно вследствие пониженной раствошкости и склонности к

б

агрегации актис-ируекш: красителей в условиях ланной решат

таблица 1.

Сенсибилизатор

способ кгшью-гацин

соотношение белок/сенси-билкзатог в синтезе

с.осткоиение белок/сенсибилизатор в конызгате

Агрегэщ'ч сенсибилизаторе к коньюгате (пс спьктру;

гг.сгс керсоли-

ИМИЛНЫЯ I 10 ; 1. 5 ' *

гперс активирование

тиснил-хлориясн 1 10 Ч

А1ЭРС реакция с

СУЛЬФОГЛОРИГПМ 1 4 1 X

А^Рс _ я „ 1 ! 3 -

А1 £Рс . « _ 1 75 2 .»

Са£К; - - - 1 50 1 и. +

реакция с

ангкерилсн • 1 1 50 < 0. т

и.

Очигткз кон№гагов. Изучение хрокатограеичегжого поведения маресксигтзлоаианииз ::икка на гель^ильтрэционнпм носителе Тсуугеаг! н*-ьо показало, чго время его удерживания возрастает при уменьшении рн и увеличении ионной-силы з ои-руюшего буфера, т.е. определяется- ггцрофсеншш вэвико-деяствияни (сн. табл. г).

Таелипе г.

1 рк 1 1 Содержание НаС1 (К) I Время удерживания (кик; Полуширина пика.(мин) 1 Ныл 01 1.

1 ! т. г _ 11 • 1. 3 1 СО 1

| 6. е 11. г. к ?с I

| 5. 3 11 13. 0 70 ;

! б. 0 - 2 1 с 0 5 0 '

1 ^ 0. 03 и - 1. г. ! 90 !

1 7. а 0. 09 и 3. с 40 !

! 7. г 0. 15 11 6 3. 0 го !

! '-г 0. 2С 13 б. 0 ю ;

I 7. 0 1 0. 50 1 5 11.

| 6.3 0. 15 1!? 11. 0 е- !

. б. 5 0. 5 0

1 б. 8 о. г н каргод 0

га;;, в фосфйтцом буфере о. сч м, рн 6.5, содержать о. 5 к, nací, фталоцианин прочно связывается с носителем, тогда как белковый коньюгат фталоиианина элюируется. эти услс-ьия удоокы для отделения коньюгата. Использование колонки с носителем toyopeari ну-55 или комбинированной колони;, состоящей из двух гелея - сечадекс G-50 и сефароза CL-6B. позволило отделить от коньюгата не только свободный ' краситель, не и высокомолекулярные белковые агсегата, которые мс-гут образовываться в процессе коньюгирсвакия.

для удаления неконьюгированккх антител использовалась колонка с гидрофобным носителем фенил-се<рарозой. меченный Фталоцианинэм белок удерживался на колонке при элюированин буфером с высокой и низкой ионной силок, so v: этиленглико-лем, i v. раствором твин-го, но зяюирспглся раствором тритона х-юс. свободна белок злюировался р исходном бу«"»ре fO. о: к фосфат, рн б. 6, содержащий о. £ н сульфата натрия). тритон х-100, содержащийся во Фракции коньюгата. удалялся гельфиль-трацией. '

оптимальный протокол полной очистки коныогатов включает хроматографию на коленке с фенил-сефарозси с последующей гельфильтраиией- в том случае, когда для экспериментов с коныогатами не требуется отведение кесвязавтегося белка, достаточна хроматография на гельФильтрационных носителях-

спектральные и Флуоресцентные свойства. Анализ спгктров поглощения показал, чти фталопианин цинка, a тазсже нафтало-цианины иинка, галлия и алюминия присутствуют в составе коньюгата в димерной 'форме, оь этом же свидетельствует ■отсутствие у этих коныогатов флуоресценции, в ти же сремя коныогат Фталоцианина алюминия при невысокой степени мечения (< ь> имел спектр поглощения, типичный для кономерной формы (рис.1, кривая и, и демонстрировал высокий квантозык выход флуоресценции, снижающийся при увеличении степени мечеиия (см. табл. 3), при неизменном Флуоресцентном времени жизни о возбужденном состоянии, представленные данные указывает на статический тип тушение, о наличии агрегации судили по исчезновению пика на 613 нм. Флуоресцентный спектр показан на рис. ! (кривая г;.

б

Отггггчегкля плотногп.

таблица з.

соотношение МАт ': А1СРс относительный квантовый выход Флуоресценции Бремя жизни В вс35ухд. состоянии (нс) Аггегация а13?с в коныогэте (по спектру поглощения)

кеконьюгкро- В311НЫЙ А15РС 4 1 00 4. 90

1 •. 1. 4 О. 79 ■>. ог -

1 : г 06 4. 96

■ 3 О. 91 4. 57

1 : 3. 5 О. 51 4. 59 -

4. 3 О. 7о 4. 67 -

» •• О. 26 4.64 4

Ей. -зависимость поглощения и флуоресценции. Исслеяопанкя

изменений в спектрах поглощения и флуоресценции сульфофтало-пианина алюминия и его коньыгата с антителами (степень кече-ния 4.-1.4) при варьировании рн в различных буферных растворах покасали, что эти соединения присутствуют в растворе в

нескольких спектральных «юрках.

измерения интенсивности «рлуореспеншда а диапазоне • о*10 - н лри рн 5, е и п. а также измерения оптичес-

кой плотности V диапазоне' ч х Ю"7 - 4 х м показали линейность этих зависимостей, что лозво$&е.т говорить оч отсутствии агрегации.

вследствие того, что увеличение к&ндентрацш ионов хлора приблизительно в 10е" раз не в значительной степени на кислстную диссоциацию в н^игальног и шелочнос области рн, _ естественно- определить переходы как деяро!они-розание аксиально координированное вот.. Это подтверждается тем, что Форма кривых титрования не зависит от природы буфера. Изменения максимума и интенсивности флуоресценции конь-¡огата-А1ер=, а так=е время ж#з.ни флуоресценции приведены на рис. г (1 - длина волны максимума, г - интенсивное/ь на длине волны 660 нм, з - вреня жизни Флуоресценции)

в

р «1 е | и

к

V.

Хтах (км) Флуоресценция (бои нк/

6В/ ;

! 682 Г

680'

I

673

-■1 ! (ги:!; | 676 ь

I

.. — /

•! И

! ^

I Г•

А И

I в

! г5

г-к:

е?4 -----1---

4 5 6

е э ю и РН

1с

ранее б работ® Фергаулк-и соавт. Реггаиех е1. а:, //Phoiocii-iic. Pnotot.ioi.- 19бв. Voi.l^7.' р.657-660) грег^".'':-гзлось. что одна из мол=кул ^оордлиированноя воды депро-гг.к:;-руртся при ра 2 ■ ч. однако г.о нашим данным в этой области происходит гидролиз связи с;- с а;, что подтверждают гэнные по слиянии концентрации ионов /лор«..

для определения рК переходов по изменений положения мччскьума била выведена следующая Формула

рг. - г.-рн ■ ¡g —

а{ и л2 - максимальная и миндаальяак длима волны положения максимума спектра слуоресиеипии. соответственно, X -положение ьаксикума спектра флуоресценции, г. - число лгисое-

ДКНлемЫХ прс-тс.чоь.

Таблица ч.

П<

РК;

г> г

i

i А 1 Si'C

i

)

| AISPc-MAT

i ÁlZPC

i .

i AiSPc-M/.T

|дК$ег:. з i

; AISPc iE'/Фер ч

! A) SP;

Флуоресцентные __H3ítec?i:ffa

íik. o ñ4j< о. г~ ft."UO. 20

o 6 6 ♦ O. • 2 ь. ¡?

!. 1 S »0 13

1. £5

0. 9 МО. t 5 G. 5 1*0. 17 C. 9fl*C. 1С

1. Q'i*(j. £1 í.. 74*0. 12 0. 96*0, измерена* оптическая плотности

1.47*4. ?C 6. 44 »0: ¡b 0. 51Ю. !!

•O. i!

6. «6 + 0. 14

PK2

9. 76»0. 1 5 ;

9. 78.-0. 18' í

¡

9. C.ñ*0. I? !

o. 95 <0. 2:

10. 19-0 Г;Л|

буфер i - фосфатный буфер о. oí не о. ic к Nací, буфе* г - карбонзттьЖ буфер о. г л с о. 15 н Кае:, буфер з - фосфатный буфер о. oí- н е о. 5 к H-ci, буфер 4. - - фосфатный буфр.р о. oí м с о. г к

ii

Аналогичная формула применялась для вычисления рк по интенсивности флуоресценции и оптической плотности, вычисленные значения рк приведены в таблице 4. Е соответствии с полученными данными можно предположить, что а водном растворе А1£РС справедливы следуюсие уравнения:

НзО ОН" с1г

I рК:6. 7 I р£ = 9. 7 |

к 1 ■'•ил т * 1 ¿.т?*. Ш А 1

Таким образок, рк 6. 7 как для свободного aispc, так и для коныогата в первую очередь связано с заменой одной координированной молекулы Н-о на он", а рк 9. 7 - с з меной второй молекулы 1ЬО ка он-.

Поляризационные свойства. Форма связи Фитосенсибили-затора с антителом в со го ичн у н о т о кс и н * будет влиять на целый ряд Фотосизических свойств кокьюгьта. Возможны две крайние мидели такси связи. В первом случае Фотосенсибилизатор сзя-заь с антителом лишь ковалентнои связью и обладает собственной подвижностью (рис. 3). Во втором случае молекула фотосенсибилизатора как бы "налипает" ка поверхность антитела, не имея собственной подвижности, но обладая глобальной подвижностью; антитела, либо его Фрагмента Fat, или Fc. можно предложить, что Фотоиммунотоксин с такой формой связи будет менее Фотостабипек (в отличии от первой модели), поскольку Молекули таких коньюгатов могут с большой вероятностью стать мишенью длл внутримолекулярного разрушения синглотным кислородом. •

измерения кинетики затухания поляризации флуоресценции позволило выявить наличие двухзкспгщенииального затухания

r(t) ïrofijexpl-t/»! ) +f£;exp(-t/ç£j ]

А1>Р

aispc

H»0

для кокьюгата сульфофталоьианкне алюминия, причем время вращательной корреляции для быстрой компоненты со.чз не) близка

12

к таковому для свободного Фталопианина, тогда как медленная составляема (»6 но. видимо, обусловлена подвижностью ¡гргг-мента антитела, это свидетельствует в пользу перзоа модели данные представлены в таблице ь. времена врашательноя корреляции для каь-фрагмента антител взяты из литературы.

;р4Ь| ' 0

■■■ ''Л; . -'Л*

Рс-Ж ! Ж

■■ - —■

СЛ?с

рис. 5.

7с ; ^

(й)

.'ДЬ

I . • 1 \

у \

\ :

II

Таллина ь.

*>! (нс) f2

• (нс)

'1 А1ГГС ■ |

I

i л1срс-1вс

|

{ А12РС | А1СРс-1сС | ГаЬ

I___

0. 43 0. .<£

О. 13 о. бе О. 15 О. 43

13- ;е

О. 87-

о. ее

» в

63-105

го

о. го !

I

о. се !

I

о. 17 | О. 07 |

О. 32

иммунологические свойства, синтезированные коньюгзты, очищенные от непрореагировавшил антител и от белковых агрегате-. подвергались иммунологическим тестам, на рис. 4 шмму-ноферментный анализ) и 5 ¡иммуноллуоресцентник анализ) приведены данные по специфическому связыванию коньюгатое с им-

муноссрбентои.

в первой случае был использован коньюгат тетракар-боксифталопианинь аинка с соотношением антитела:сталоцианик - 1:4. кривая i - последоаагельное развздение коныогата не микротитровальном планшете с адсорбированным раково-эмбриональным антигеном <» нкг/нл); кризая г - контроль без рако-зоэмбрионального антигена, коньюгат определяли методом непрямой Elisa с помоаыо антител (кролик против мгдеи) . меченных лерэксидазок.

во втором случае использовался коньюгат сульфофталопм-анина алюминия z соотношением i:г. i - последовательное разведение коныогата от начальной концентрации i мкг белка/»:л и г - исходных - антител (i мкг/мл) на кикротитроьальном планшете с адсорбированной пероксиааэой хрена (Ю мкг/нд); кривые з, - 4 - контроль беа пероксидазы. Коньюгат определяли методом непрямого иммунофлуоресцентного анализа с поможыо антител (кролик против мши), меченных европием.

Оптическая плотность

1.41.2 -

1.0-

■ !

0.6 0.6 0.4^ 0.2 j-

\

\ 1

V! \

—i

'i

J

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Легарифи разиепенккя

РИС. ч

Интенсивность

1С#-

».1 1 1« !«• ни 1Н0« >••»•• 1Св»*«»

РИС. ^

данные анализов показываю?, что коныогаты антител к соответствующему антигену с Фотосенсиьилизаторами сохраняют способность связываться с антигеном, адсорбированном на полистироле.

ВЫБОДЫ

1. Для использования в методе фотодинамическоя терапии •злокачественных опухолей предложен коньюгат Фталоиианина алюминия с моноклональнымя антителами против раковгэнорио-нального антигена, обладающий свойствами фотпсексибилизатора и иммунологической активностью исходных антител.

г. разработаны методики ковалеьтного связывания водорастворимых оталопианинов и наФталопианинов с белками.

з. разработана оригинальная схема очистки белковы:: коньюгатов Фталоцианинов и нафталопианинов, использующая гельфильтраиию и гидрофобную хроматографию-

ч-. исследована спектральные и флуоресцентные свокстаа белковых коньюгатов. Показано, что фталоиианин цинка, на^>Т£-лоцианикы галлия и с*ика присутствуют в составе ксньюгатг в димерной форме, а фталопиачин алюминич - в мономерной.

1.5

5. Изучена рН-зависимость флуоресценции и поглощения сульфофталоиианина алюминия и его коньюгата с антителами. Обнаружена группа с рк 6.7, предположительно относящаяся к ионизации координированной с алюминием воин.

0. на основании исследования кинетики затухания поляризации Флуоресценции определена подвижность молекул свободного Фталоцианина алюминия и связанного с антителами. Предложена модель связи молекулы фотосе.чсибилизатора с антителом, согласно которой фталоиианин контактирует с белком только в точке ковалентного присоединения и обладает достаточно высокий свободой вращения вокруг этой связи.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. SavitsKy А. , Lcpatin К. , Cherednicova Т. , LuKyanets Е. , Galpern Н. , Solovyeva L. Photoimmunotoxlns on the base of phtalocyanine »nd naphtalocyanme for selective destruction of tumor cells.// Third Congress of the European Society for Photobiology: BooK of abstracts. - Budapest, Hungary, 27 August - a September, 1965. - p. 267.

2. SavltsKy A. P. , Lopatin К. V. , CherednlKova Т. V. , LuKyanets E. A. , Galpern M. G. , Solovyeva 'L.I. Photoiwnunotoacins on the base of Phthalocyanmes and Haphthaiocyanines. //international Conference en Phot »dynamic Therapy. Abstracts. --Sofia, October 3-5, 1969. -p. 67.

3. SavitsKy, A. P., PapKovsKy, D. B. , Krylova. S. M. , and Lopatin. K. Monoclonal antibody conjugates for diagnostics and terapy. // 20th Meeting of the federation of European biochemical Societies. - Budapest. Hungary, August 19-24, 1990. - p. 66.

4.' SavitsKy A. P. , Lopatin t. V. , CheredniKova Т. V. Goiubeva H. A. , Poroshma M. Yu. . Chernyaeva ■ E. B. , Solovieva L. I. , LuKyanets E. A. , Natber D. Tbe protein conjugates of Phthalocyanine for use in photоdynamic therapy. pH-dependence of fluorescence spectrum and polarisation properties of the free AlSPc and its conjugate with

- 16 -

monoclonal antibody. // Fourth Congress of tbe European Socaety for Fliotoblology. Amsterdam, Ccptember 1-6, 199;. -p. 16

5. SavitsKy a. P. . Lopatin e.V. Golube'.ra N. a. , Porosliina M. Yu. , Solovieva L. I. , LuKyanets E. a. pH-dependence of ^fluorescence and absorbance spectra cf free alsi-c and its conjugate y/itb. monoclonal antibodies. .</ о. Photocben, рпоюы.о!. В: Bio:. - 19S2. - в печати.

ЛОПАТИВ КОНСТАНТИН ВАСИЛЬЕВИЧ

ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ КОНЫХ'АТОБ НОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ С ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРАНИ

Подписано к печати

60x90 1/16. Объем п. л.

Бесплатно.

Печать офсетная. Формат Тираж -/оо экз. заказ 1Л

Институт биохимии им. А. Н. Наха РАН. 117071, носква, ленинский проспект, зз. отпечатано на ротапринте