Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Получение антигена МРВ83 Mycobacterium bovis для диагностики туберкулеза животных методом ИФА

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Аракелов, Армен Борисович

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Эпизоотическая ситуация по туберкулёзу в России.

1.2. Современные методы диагностики туберкулёза животных.

1.3. Иммуногенетический аспект противотуберкулезного гуморального ответа.

1.4. Применение моноклональных антител в диагностике туберкулеза животных.

1.5. Антигены, применяемые в лабораторной диагностике туберкулеза животных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1.1. Материалы.

2.1.2. Методы.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2.1. Получение хроматографических фракций микобактерий разных видов и исследование их белкового состава.

2.2.2. Получение моноклональных антител против антигена МРВ83 Mycobacterium bovis и изучение их иммунобиологических свойств.

2.2.3. Выявление в хроматографических фракциях микобактерий разных видов антигена МРВ83 с помощью моноклональных антител S2H6G4.

2.2.4. Определение видоспецифичности антигена МРВ для микобактерий.

2.2.5. Разработка тест-системы ИФА для диагностики туберкулеза животных.

2.2.6. Оценка специфичности и чувствительности разработанной тест-системы ИФА с использованием сывороток крови здоровых и больных туберкулезом коров.

2.2.7. Расчет себестоимости приготовления тест-системы ИФА для диагностики туберкулеза животных и определение экономической эффективности ее применения в сравнительном аспекте.

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4. ВЫВОДЫ.

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ

НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Получение антигена МРВ83 Mycobacterium bovis для диагностики туберкулеза животных методом ИФА"

Актуальность темы. Ветеринарная фтизиатрия имеет дело более чем с сотней видов земной фауны, различными возбудителями болезней у млекопитающих, птиц, холоднокровных и большой группой атипичных микобакте-рий (58).

Ученые и ветеринарные специалисты изучают, в основном, проблемы туберкулеза сельскохозяйственных животных, особенно, вопросы, касающиеся туберкулеза крупного рогатого скота, вследствие огромного эпизоотического и экономического значения болезни для животноводства, а также возможности передачи возбудителя человеку (38).

Туберкулез, вызываемый Mycobacterium bovis, является серьезной проблемой в России и за рубежом. По данным многих отечественных и иностранных специалистов (27, 64, 89, 95, 112), туберкулез крупного рогатого скота широко распространен в мире, причем борьба с ним значительно затрудняется все возрастающей интенсификацией сельскохозяйственного производства.

Несмотря на активное и неуклонное проведение национальных и международных программ по борьбе с туберкулезом, а также постоянный контроль со стороны правительственных и межправительственных органов, по данным Международного эпизоотического бюро, только 24 страны мира полностью свободны от этого заболевания (58).

Как считает Bothamley G. (116), основополагающие принципы всех программ по борьбе с туберкулезом - строго поставленный учет, аттестация стад, карантинирование, своевременная диагностика болезни, убой больных животных (а при необходимости всего стада) и др.

По сообщениям Овдиенко (69-71), Найманова А.Х. (65), Н.П. Колычева Н.М. (48), Куликовской Н.В. (55) и др., значительных успехов в оздоровлении России от туберкулеза достигла отечественная ветеринарная медицина.

Однако, существующая в большинстве случаев разобщенность медицинских и ветеринарных организаций в проведении противотуберкулезных мероприятий значительно снижает их эффективность и тормозит успешное решение проблемы ликвидации туберкулеза.

Перед ветеринарными исследователями стоят важнейшие задачи в самых различных областях биологии возбудителей и эпизоотологии туберкулеза. Огромное значение имеет расшифровка механизма видовой восприимчивости животных к микобактериям, антигенная структура возбудителя и усовершенствование методов диагностики болезни (15).

В настоящее время в России широко используемым методом для диагностики туберкулеза животных является туберкул и низация (48, 51).

Однако, по последним статистическим данным, количество ложно положительных туберкулиновых проб составляет около 17 %, что связано с ги-перчувствительностыо организма животных в отношении непатогенных атипичных микобактерий и возбудителей некоторых инфекционных и инвазионных болезней (17, 58, 64, 78, 95).

Для дифференциации специфических и неспецифических реакций при туберкулезе используют комплексный аллерген из атипичных микобактерий, птичий туберкулин или сенситины, однако, последние весьма дороги, а результаты не всегда достоверны (7, 15, 28, 79).

В изучении роли гормонов, интерлейкинов, антител при туберкулезе чередовались периоды, когда главное внимание исследователей, занимавшихся проблемами противотуберкулезного иммунитета, было приковано к разным группам таких веществ (139, 144).

После того, как было установлено, что главное звено в защите организма от туберкулеза - взаимодействие Т-лимфоцитов и макрофагов, силы исследователей были сконцентрированы на изучении факторов, способствующих дифференцировке иммунокомпетентных клеток, и межклеточном взаимодействии. Однако, как считает Черноусова J1.H. и др. (93, 95), определение современными методами уровня и спектра противотуберкулезных антител далеко не исчерпало себя в качестве средства иммунодиагностики и характеристики особенностей течения туберкулеза, а сами препараты противотуберкулезных антител, в том числе моноклональных, еще не в достаточной степени используются для характеристики микобактериальных антигенов, приготовления диагностикумов и других целей не только у нас в стране, но и за рубежом.

Кроме того, по мнению Авдиенко В.Г. (4), действие антител не обязательно должно быть направлено непосредственно на сами микобактерии, существуют более обширные возможности для балансировки противотуберкулезного иммунитета, например, путем идиотип - антиидиотипических взаимодействий.

Некоторые антигены M.bovis приобрели особые иммунологические свойства, позволяющие возбудителю выживать в макрофагах хозяина. Одним из таких антигенов, по данным Lin М. (165), Morris J. (175) и др., является антиген МРВ83, препятствующий фаголизосомальному слиянию. Поэтому, обнаружение антигена МРВ83 у микобактерий разных видов является важной исследовательской задачей.

По мнению Лысенко A.M. (59), Маслова Е.В. (63), Andersen А. (108), Armbrust А. (109), Lightbody К. (164) и др., для диагностики туберкулеза животных наиболее удобен иммуноферментный анализ, т.к. этот метод позволяет ставить диагноз на туберкулез в лабораторных условиях одновременно у большого количества животных в отличие от туберкулинизации, прост в применении, обладает высокой чувствительностью и специфичностью.

В связи с этим, получение и изучение иммунологических характеристик микобактериальных антигенов, возможности их использования для диагностики туберкулеза животных методом ИФА являются актуальной задачей не только для ветеринарной, но и для медицинской практики.

Цель и задачи исследований. Цель настоящих исследований - получение антигена МРВ83 M.bovis для диагностики туберкулеза животных методом ИФА.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Получить хроматографические фракции из микобактерий разных видов и исследовать их белковый состав.

2. Получить моноклональные антитела, направленные против антигена МРВ83 M.bovis, и изучить их иммунобиологические свойства.

3. Исследовать хроматографические фракции микобактерий разных видов на наличие антигена МРВ83 с помощью моноклональных антител S2H6G4.

4. Создать тест-систему для диагностики туберкулеза животных методом ИФА.

5.Определить специфичность и чувствительность разработанной тест-системы ИФА с использованием сывороток крови здоровых и больных туберкулезом коров.

6. Рассчитать себестоимость приготовления тест-системы ИФА для диагностики туберкулеза животных и определить экономическую эффективность ее применения в сравнительном аспекте.

Научная новизна.

1. Впервые на основе антигена МРВ83 и моноклональных антител S2H6G4 создана тест-система ИФА для диагностики туберкулеза животных.

2. Разработан способ получения антигена МРВ83 M.bovis, который входит в состав белковых фракций патогенных микобактерий.

3. Предложен метод получения моноклональных антител S2H6G4, которые специфически связываются с антигеном МРВ83.

4. Установлено, что антиген МРВ83 является видоспецифичным для патогенных микобактерий M.bovis, M.tuberculosis и М.avium.

5. Исследован спектр антимикобактериальных антител в сыворотке крови здоровых и больных туберкулезом коров, и показано, что у больных животных иммунодоминантными являются антитела к антигенам M.bovis с молекулярной массой 22-25 KDa, в диапазоне которой находится антиген МРВ83.

6. Создана высокочувствительная тест-система ИФА на основе антигена МРВ83, позволяющая диагностировать туберкулез крупного рогатого скота в 89,3 % случаев.

Практическая значимость.

1. Для диагностики туберкулеза разных видов животных получены антиген МРВ83 и моноклональные антитела S2H6G4, которые были использованы для приготовления тест-системы ИФА.

2. Разработаны «Инструкция по получению антигена МРВ83 для диагностики туберкулеза животных», «Инструкция по получению моноклональных антител S2H6G4 для диагностики туберкулеза животных», утвержденные ректором ФГОУ ВПО МГАВМиБ им К.И.Скрябина 24 ноября 2005 г.

3. Совместно с лабораторией биотехнологии Центрального научно-исследовательского института туберкулеза (ГУ ЦНИИТ РАМН) получены тест-системы для диагностики туберкулеза разных видов животных методом ИФА, которые прошли контроль на чувствительность и специфичность.

4. Высокая специфичность и чувствительность разработанной тест-системы ИФА доказана в опытах с сыворотками крови здоровых, подозреваемых в заражении и больных туберкулезом коров, принадлежащих ОПХ «Победа», Ртищевского района Саратовской области и ЗАО «Медвежьи озера», Щелковского района Московской области, что подтверждено актами, утвержденными руководителями хозяйств.

5. На тест-систему ИФА получено заключение из отдела кинологической и ветеринарно-санитарной службы Управления охраны уголовно-исполнительной системы Министерства Юстиции, в котором указывается о востребован-ности разработанной тест-системы ИФА для диагностики туберкулеза у служебных собак.

6. Результаты исследований по созданию технологии приготовления антигена МРВ83 и моноклональных антител S2H6G4 для диагностики туберкулеза животных методом ИФА используются в учебном процессе на кафедре биотехнологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ имени К.И. Скрябина.

Личный вклад соискателя. Автору принадлежат непосредственное осуществление исследований по приготовлению антигена МРВ83 и моноклональных антител S2H6G4, создание тест-системы ИФА и оценка ее специфичности и чувствительности с использованием сывороток крови лабораторных и сельскохозяйственных животных, анализ и теоретическое обобщение полученных данных.

В работе использованы материалы, полученные лично автором, а также в соавторстве с канд. мед. наук, ст. науч. сотр. лаборатории биотехнологии ЦНИИ туберкулеза РАМН Авдиенко В.Г., которому выражаю глубокую благодарность за помощь и поддержку.

Апробация результатов диссертации. Основные результаты исследований изложены в 4 печатных работах, научных отчетах «Получение антигена МРВ83 M.bovis и его диагностическая оценка» (утвержден 02.11.2005 г) и «Иммунохимическая характеристика моноклональных антител S2H6G4, направленных против антигена МРВ83 M.bovis» (утвержден 15.11.2005 г) и доложены на международной научной конференции «Современные достижения и проблемы клеточной биотехнологии и иммунологии в ветеринарной медицине» (Москва, 2003), международной научной конференции «Актуальные проблемы развития животноводства» (Львов, 2003), международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 85-летию МГАВМиБ им. К.И. Скрябина (Москва, 2004).

Публикации. По результатам диссертации опубликованы 4 научные работы в сборниках статей международных конференций.

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 152 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, выводы, данные о практическом использовании научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список литературы (223 источника, из которых 106 отечественных и 117 зарубежных авторов). Работа содержит 18 таблиц, 18 рисунков и 14 страниц приложений.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Аракелов, Армен Борисович

4. ВЫВОДЫ

1. Для получения очищенных и стабильных по составу антигенов микобактерий разных видов использована ДЕАЕ-хроматография на основе сорбента из ДЕАЕ-Toyopearl HW650, которая позволяет получить фракции микобактерий M.bovis 8 массой 110-150 шМ, обогащенные антигеном МРВ83.

2. Ультразвуковые дезинтеграты патогенных микобактерий M.bovis 8, M.bovis BCG, M.bovis 4C1, M.bovis Vallee, M.tuberculosis H37Rv, M.tuberculosis Erdman, M.avium 1D3, M.avium E10C8, M.aviumlA9, M.avium E10E2, M.avium E10H4, M.avium E10D1, M.avium E10E10 содержат гомогенные белки с молекулярной массой 22-25 кДа, в диапазоне которых был обнаружен антиген МРВ83. У атипичных микобактерий M.smegmatis 2Н10, M.smeg-matis ЗС10, M.kansassii, M.phlei, M.fortuitum, M.scrofulaceum, M.intracellulare, M.marinum белки с такой молекулярной массой не были обнаружены.

3. Антиген МРВ83 является углеводсодержащим эпитопом, в состав которого входят мукополисахариды и белки, и обладает видоспецифичностыо к патогенным микобактериям, ингибирует фагосомо-лизосомальное слияние и внутриклеточный киллинг в фагоцитах.

4. Получены устойчивые гибридомы S2H6G4, продуцирующие монокло-нальные антитела S2H6G4 против антигена МРВ83 M.bovis 8, относящиеся к подклассу иммуноглобулинов IgG2b. Моноклональные антитела S2H6G4 обладают высокими константами диссоциации (2,5x10"9) и распознают специфическую антигенную детерминанту на антигенах микобактерий туберкулезного комплекса, оставаясь нейтральными к антигенам микобактерий MAIS -группы.

5. Моноклональные антитела S2H6G4 максимально связывают ДЕАЕ-фракцию 130тМ ультразвукового дезинтеграта M.bovis 8, подтверждая локализацию в этой фракции антигена МРВ83, что позволяет проводить обогащение и разделение комплексного антигена ультразвуковых дезинтегратов патогенных микобактерий методом ДЕАЕ-хроматографии.

6. При анализе спектра антител в крови больных туберкулезом и здоровых коров^выявлены антигены M.bovis с молекулярной массой 22-25 кДа, являющиеся иммунодоминантными (100 %-ная встречаемость) в антительном ответе у больных животных. Антигены с молекулярной массой 10-18, 2850 и 52-72 кДа, к которым определялись антитела как у больных, так и у здоровых коров, содержат перекрестные антигенные детерминанты и «белки теплового шока», что свидетельствует о сенсибилизации животных атипичными микобактериями.

7. Антиген МРВ83 обладает 96,43 %-ной специфичностью и 89,29 %-ной чувствительностью при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота методом ИФА.

8. Затраты труда на диагностику туберкулеза методом ИФА в расчете на 1 пробу сыворотки крови составляют 1,4 руб., а себестоимость диагностики с использованием разработанной тест-системы составляет 29 руб., что в 5,3 раза дешевле, чем применение аллергического метода.

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

1. Для диагностики туберкулеза разных видов животных получены антиген МРВ83 и моноклональные антитела S2H6G4, которые используются для приготовления тест-систем ИФА.

2. Разработаны «Инструкция по получению антигена МРВ83 для диагностики туберкулеза животных», «Инструкция по получению моноклональных антител S2H6G4 для диагностики туберкулеза животных», утвержденные в установленном порядке.

3. На базе лаборатории биотехнологии Центрального научно-исследовательского института туберкулеза (ГУ ЦНИИТ РАМН) получены тест-системы для диагностики туберкулеза разных видов животных методом имму-ноферментного анализа, которые прошли контроль на чувствительность и специфичность.

4. В опытах с сыворотками крови здоровых и больных туберкулезом коров дана оценка специфичности и чувствительности разработанных тест-систем, что подтверждено актами, утвержденными руководителями хозяйств.

5. Результаты исследований по созданию технологии приготовления антигена МРВ83 и моноклональных антител S2H6G4 для диагностики туберкулеза животных методом ИФА используются в учебном процессе на кафедре биотехнологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ.

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Полученные хроматографические фракции антигенов М. bovis 8 с молекулярной массой 22-25 кДа, в диапазоне которых находится антиген МРВ83, а также моноклональные антитела S2H6G4 можно использовать для диагностики туберкулеза методом иммуноферментного анализа у разных видов животных и птиц.

2. Тест-системы ИФА на основе антигена МРВ83 рекомендуются ветеринарным лабораториям для диагностики туберкулеза.

3. Моноклональные антитела S2H6G4 можно использовать для выявления и очистки антигена МРВ83 в DEAE-фракциях микобактерий.

4. ДЕАЕ-хроматография на основе сорбента из ДЕАЕ- Toyopearl HW650 рекомендуется для получения очищенных антигенов микобактерий как наиболее стабильный и воспроизводимый метод ионообменной хроматографии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Аракелов, Армен Борисович, Москва

1. Авдиенко В.Г. Анализ специфичности антимикобактериальных моно-клональных антител и химической природы их антигенных детерминант /Авдиенко В.Г., Кондратов С.Ю., Ляшенко С.М. //Пробл. туберк. 1996. - № 1.-С. 40-44.

2. Авдиенко В.Г. Тканеповреждающее действие антимикобактериальных антител /Авдиенко В.Г., Кондрашов С.Ю. //Тез. докл. мат. научно-практич. конференции Российского НИИ Фтизиопульмонологии.- М.: Российская туб. ассоциация, 1995.-С. 1-2.

3. Авдиенко В.Г. Серологические и иммунохимические свойства угле-водсодержащей фракции из Mycobacterium tuberculosis H37Rv /Авдиенко В.Г., Кондрашов С.Ю., Куликовская Н.В. //Пробл. туберк. 1998. - № 6. - С. 54-57.

4. Авдиенко В.Г. Повышение эффективности иммунодиагностики туберкулеза путем применения моноклональных антител против IgG класса иммуноглобулинов человека /Авдиенко В.Г.; Кондрашов С.Ю.; Куликовская Н.В. //Клин. лаб. диагн. 1999. -№ 6. - С. 22-24, 33-35.

5. Авербах М. М. Иммунология и иммунопатология туберкулеза /Авербах М. М. //М.: Медицина. 1976. - С. 30.

6. Аликаева А.П. Методика исследования кормов, фекалий, почвы и другого материала из внешней среды для выявления микобактерий /Аликаева А. П. //Бюллетень ВИЭВ. 1979. - Вып. 34. - С. 29-30.

7. Андросова М.В. Иммунологический метод идентификации M.tuberculosis и M.bovis BCG на основе применения моноклональных антител /Андросова М.В., Владимирский М.А., Алексеева Г.И. //Проблемы туберкулеза. -1989.-№6.-С. 12-16.5

8. Бардисявичене И.А. Сравнительная эффективность ВАСТЕС 460 ТВ и ИФА в диагностике туберкулеза легких /Бардисявичене И.А., Сосновская A.M. //Сб.науч.тр.: Проблемы ускоренной бактериологической диагностики туберкулеза.- Обнинск.- 1996.-С.35.

9. Басыбеков С.Д. Животные источники микобактериозов у человека /Басыбеков С.Д., Благодарный Я.А., Жанузаков Н.Ж. //Алма-Ата: Кайнар. -1985.- 78 с.

10. Безгин В.М. Изучение иммунобиологических свойств растворов туберкулина при длительном хранении /Безгин В.М. //Сб. науч. тр. ВИЭВ. -вып.73. 1990.-375 с.

11. Беклемишев Н.Д. Иммунитет и аллергия /Беклемишев Н.Д. //Иммунология. 1983,-№6.-С. 78-81.

12. Билько И.П., Матусевич В.Г. Современные представления об ультраструктуре и функции клеточной стенки микобактерий туберкулеза /Билько И.П., Матусевич В.Г. //Пробл. туберк.- 1986. №9. - 93 с.

13. Благодарный Я.А. Источники туберкулеза и меры профилактики /Благодарный Я. А. //Алма-Ата: Казахстан. 1980. - 173 с.

14. Вдовий Б.П. Изучение антигенных свойств некоторых фракций туберкулезных микобактерий в РСК и РДСК /Вдовий Б.П., Журнакова М.А. //Труды Ленинградского ветеринарного института. 1967.- Вып.5.- 28 - 39 с.

15. Вейсфейлер Ю.К. Биология и изменчивость микобактерий туберкулеза и атипичные микобактерии /Вейсфейлер Ю.К. //Будапешт: Академия наук Венгрии. 1975. - 115 с.

16. Вишневская Е.Б. Особенности выделения ДНК для ПЦР при туберкулезе внелегочных локализаций /Вишневская Е.Б. //Проблемы туберкулеза. -1998. № 5.-С.23-26.

17. Вишневская Е.Б. Проблемы ПЦР-диагностики внелегочного туберкулеза/ Вишневская Е.Б. //В сб.: Генодиагностика в современной медицине.-Материалы 3-ей Всероссийской конференции,- М.- 2004.-С.281-282.

18. Вишневский Б.М. Чувствительность и специфичность теста, основанного на полимеразной цепной реакции, при диагностике туберкулеза периферических лимфатических узлов /Вишневский Б.М., Мирлина Е.Д. //Проблемы туберкулеза. 1998. - № 4.-С.25-28.

19. Вишневский П.П. Туберкулез крупного рогатого скота /Вишневский П.П. //М.: Сельхозгиз. 1937. - 97-99 с.

20. Владимирский М.А. Иммунологические и биотехнологические методы в повышении эффективности диагностики и лечения туберкулеза /Владимирский М.А. //Автореф. дисс. доктора мед. наук. М. - 1993.

21. Дзадзиева М.Ф. Диагностическая ценность ПЦР при туберкулезе /Дзадзиева М.Ф., Жербутович Н.В. //Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1997. - № 5.-С.10-13.

22. Драбкина P.O. Микробиология туберкулеза /Драбкина P.O. //М.: Мед-гиз. 1963.-255 с.

23. Здродовский П.Ф. Проблемы инфекции, иммунитета и аллергии /Здродовский П.Ф. //М.: Медицина. 1969. - 178 с.

24. Земскова З.С. Скрыто протекающая туберкулезная инфекция /Зем-скова З.С, Дорожкова И.Р. //М.: Медицина. 1984. - 256-258 с.

25. Зыков М.П. Микробиология туберкулеза /Зыков М.П. //JL: Медицина. 1976.-38-41 с.

26. Зыков М.П. Потенциально патогенные микобактерии и лабораторная диагностика микобактериозов /Зыков М.П., Ильина Т.Б. //М.: Медицина. -1978.- 87 с.

27. Кадочкин A.M. Атипичные микобактерии и их роль в сенсибилизации животных к туберкулину /Кадочкин A.M., Ткачев-Кузьмин А.В. //Бюллетень ВИЭВ. 1983.-Вып. 51 -22 с.

28. Каграманов А.И. Учение о возбудителе туберкулеза /Каграманов А.И. //Проблемы туберкулеза. 1967. - № 11. - 57 с.

29. Каграманов А.И. О взаимосвязи туберкулеза человека и сельскохозяйственных животных /Каграманов А.И. //Проблемы туберкулеза. 1968. -№ 2. - 94 с.

30. Калюк А.Н. Комплексные бактериологические исследования в диагностике туберкулеза /Калюк А.Н. //Туберкулез и экология. 1995. - № 3.-С.28-31.

31. Кассич Ю.Я. Иммунизация животных против туберкулеза с применением различных вакцин /Кассич Ю.Я., Дикий И.Л., Шаров А.Н., Новиков Г.П., Сегал Л.С. //Вестник с.-х. науки. 1981. - №3. - С. 113-116.

32. Кассич Ю.Я. Пастеризация молока при туберкулезе методом инфракрасного электронагрева /Кассич Ю.Я., Позднякова В.Н., Хоменко В.И. //Ветеринария. 1986. - № 12. - 118 с.

33. Качалова С.П. Меры борьбы и профилактики туберкулеза крупного рогатого скота /Качалова С.П. //Ветеринария. 1987. - № 8. - 125 с.

34. Козлов B.C. Биологические свойства микобактерий разных видов, выделенных из почвы /Козлов B.C. //Проблемы туберкулеза. 1982. - №3. -79 с.

35. Козлов Н.Н. Изменения у свиней при поражении атипичными мико-бактериями /Козлов Н.Н., Пыльдвере К.И. //Ветеринария. 1982. - № 6. - 87 с.

36. Козулицыпа Т.И. Генетические процессы у микобактерий /Козули-цына Т.И., Козлова Н.В. //Проблемы туберкулеза. 1983. - № 11. - 133 с.

37. Козулицына Т.И. Микробиологические исследования /Козулицыпа Т.И. //В руководстве для врачей: Туберкулез органов дыхания.- М.-1981.-С.136-149.

38. Колычев Н.М. Атипичные микобактерии показатель качества дезинфекции /Колычев Н.М. //Ветеринария. - 1982. - № 7. - 147 с.

39. Колычев Н.М. О сохранении вирулентности микобактерий во внешней среде /Колычев Н.М. //Ветеринария. 1987. - №5. - 58 с.

40. Колычев Н.М. Дезинфекция почвы при туберкулезе /Колычев Н.М., Сухотина В.П. //Ветеринария. 1983. - №4. - 34 с.

41. Коромыслов Г.Ф. Состояние системы Т- и В-лимфоцитов при туберкулезе /Коромыслов Г.Ф., Солодовников B.JI. //Ветеринария. 1982. - №7. -47-49 с.

42. Коромыслов Г.Ф. Состояние и перспективы научных разработок по туберкулинодиагностике крупного рогатого скота /Коромыслов Г.Ф., Овди-енко Н.П., Устинова Г.И. //Бюллетень ВИЭВ. 1983. - Вып. 51. - 18с.

43. Косенко В.И. Влияние обработки патологического материала на высе-ваемость микобактерий туберкулеза. /Косенко В.И., Кадочкин A.M., Тажга-лиев Н.М. //Ветеринария. 1984. - №5. - 34 с.

44. Кузин А.И. Оздоровление животноводческих хозяйств от туберкулеза /Кузин А.И. //М.: Россельхозиздат. 1987. - 67-72 с.

45. Кузина J1.H. К вопросу взаимосвязи туберкулеза человека и животных /Кузина JI.H., Беличенко С.А. //Проблемы туберкулеза. 1984. - № 12. -78 с.

46. Куликовская Н.В. Получение и характеристика моноклональных антител к микобактериям smegmatis и kansassii /Куликовская Н.В.; Капица М.А.; Калинина О.А.; Черноусова JI.H. //Пробл.Туберк. 1996. -№1. - С.43-46.

47. Лакман Э.Д. РСК с антигеном Сибирского НИВИ в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота /Лакман Э.Д., Шлыгин И.В. //Труды Сибирского н.-и. ветеринарного института Омск: СНИВИ. - 1975. - В. XXII. -С. 58-61.

48. Лакман Э.Д. РСК при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота /Лакман Э.Д. //Ветеринария. 1981. - №4. - С. 31-32.

49. Латышев А.С. Опыт борьбы с туберкулезом /Латышев А.С, Шаповалов М.Б. //Ветеринария. 1985. - №10. - С. 24-27.

50. Лысенко А.П. Иммунохимический анализ хроматографических фракций М. bovis и М. tuberculosis /Лысенко А.П. //Ветеринария. 1987.- № 12. -С. 17-19.

51. Мирлина Е.Д. Диагностические возможности метода ПЦР при гени-тальном туберкулезе у женщин /Мирлина Е.Д., Ланцов В.А. //Проблемы туберкулеза. 1998. - № 1.-С.22-26.

52. Мартма О.В. Характеристика и патогенность для крупного рогатого скота микобактерий, выделенных из торфа /Мартма О.В. //Ветеринария. -1967.- №6. С.59.

53. Мартма О.В. Современное состояние проблемы атипичных микобактерий в ветеринарии. /Мартма О.В. //Ветеринария. 1982. - №5. -С. 60-61.

54. Маслов Е.В. Оптимизация непрямого иммуно-ферментного анализа для выявления антител к М. bovis /Маслов Е.В., Бойко А.А., Хорьков И.А. //Ветеринария. 1986. - №10. - С.89-92.

55. Меве Е.Б. Туберкулинодиагностика /Меве Е.Б. //Минск: Беларусь.197. -220-247 с.

56. Найманов А.Х. Туберкулинизация крупного рогатого скота /Найма-нов А.Х. //ветеринария. 1980. - № 6. - С. 37.

57. Нечваль И.Т. Туберкулез свиней: диагностика и меры борьбы /Неч-валь И.Т. //ветеринария. 1982. - № 6. - С.40.

58. Никаноров Б.А. Роль микобактерий человеческого и птичьего типов в эпизоотологии туберкулеза маралов /Никаноров Б.А. //Ветеринария. -1969. -№ 1. С.56-57.

59. Овдиенко Н.П. Применение РНГА для дифференциальной диагностики неспецифических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота /Овдиенко Н.П., Козин И.А. //Труды ВИЭВ. -1979. -Т. 43. -С.147-152.

60. Овдиенко Н.П. О кратности введения туберкулина крупному рогатому скоту /Овдиенко Н.П., Щуревский В.Е., Найманов А.Х., Якушева О.В. //Ветеринария. -1987. -№8. -С. 52-53.

61. Овдиенко Н.П. Пальпебральная проба при туберкулезе крупного рогатого скота /Овдиенко Н.П., Нуратинов Р.А., Найманов А.Х., Кочаров П.Э. //Ветеринария. -1987. -№8. -С. 21-22.

62. Поддубский И.В. Эпизоотология туберкулеза животных и организационные формы борьбы с ним /Поддубский И.В. //Вопросы эпидемиологии, эпизоотологии и дезинфекции при туберкулезе М.: Медицина. - 1968. -С. 69-94.

63. Прокопьева Н.И. Выживаемость микобактерий туберкулеза в почве и методы ее обеззараживания в условиях Якутии /Прокопьева Н.И. //Туберкулез крупного рогатого скота и меры борьбы с ним /Сб. науч. трудов Новосибирск. -1986. -С. 124-128.

64. Ротов В.И. Туберкулез сельскохозяйственных животных /Ротов В.И., Кокуричев П.И., Савченко П.Е., Трач Ю.А. //Киев: Урожай. -1978. -С. 117.

65. Рубцова И.Н. Измененные формы микобактерий в организме животных и их значение в бактериологической диагностике туберкулеза /Рубцова И.Н. //Бюллетень ВИЭВ. -1983. -Вып. 51. -С. 13-14.

66. Савенков В.И. Место генодиагностики в лабораторных методах исследования туберкулеза /Савенков В.И., Шишхов Д.М., Ященко В.В. //В сб.: Генодиагностика в современной медицине.- Материалы 3-ей Всероссийской конференции.- М.- 2000.-С.287-290.

67. Сафин М.А. Современные методы диагностики и меры борьбы с туберкулезом животных /Сафин М.А., Индрисов Г.З. //Казань татарское книжное издательство. -1992. -С. 189-240.

68. Сафин М.А. Вакцинация БЦЖ и противотуберкулезные мероприятия /Сафин М.А. //Ветеринария. -1982. -№ 11. -С. 17-18.

69. Свиридов В.Д. Изучение иммуногенных свойств атипичных микобактерий в сравнении с БЦЖ/Свиридов В. Д. //Ветеринария. -1989. -№1. -С.27.

70. Тузова Р.В. Туберкулез сельскохозяйственных животных и птицы /Тузова Р.В. //Минск: Ураджай. -1983. -С. 14-20.

71. Туркебаева К.А. Патологическая анатомия туберкулеза млекопитающих и виды микобактерий /Туркебаева К.А., Благодарный Я.А. //Алма-Ата: Наука.-1981.-С.214.

72. Урбан В.П. О природе повторных вспышек туберкулеза /Урбан В.П. //Ветеринария. 1982. - №10. - С. 19.

73. Урбан В.П. О кратности туберкулиновой пробы у крупного рогатого скота в неблагополучных хозяйствах /Урбан В.П., Хайкин Б.Я., Ходун J1.M. //Ветеринария. -1988. -№12. -С.31-32.

74. Фадеева Н.И. Значение состава внутриклеточных белков в таксономии микобактерий туберкулеза /Фадеева Н.И., Дыхно М.М., Кочемасова З.Н //Пробл. Туберк. -1981. -№3. -С.43-44.

75. Федосеев B.C. Противотуберкулезные мероприятия в мараловодстве /Федосеев В.С, Рубцова И.П., Омарбеков Е.О., Кириленко Н.Г. //Ветеринария. -1982. -№4. -С.23.

76. Федосеев B.C. Изменчивость возбудителя туберкулеза и ее связь с эпизоотическим состоянием /Федосеев B.C. //Бюллетень ВИЭВ. -1983. -Вып. 51.-С.29.

77. Филимонов А.В. Причины повторного возникновения туберкулеза крупного рогатого скота в оздоровленных хозяйствах /Филимонов А.В. //Бюллетень ВИЭВ. -1981. -Вып.43. -С. 16-17.

78. Хазипов Н.З. Туберкулез крупного рогатого скота /Хазипов Н.З., Са-фин М.А., Идрисов Г.З. //М.: Агропромиздат. -1985. -47-88 с.

79. Хайкин Б.Я. Туберкулез пушных зверей /Хайкин Б.Я. //Омск: Западно-Сибирское книжное изд-во, Омское отделение. -1976. -С.31.

80. Хоменко А.Г., Ерохин В.В. Современные представления о строении микобактерий туберкулеза /Хоменко А.Г., Ерохин В.В. //Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1982. -№12. -С.39-40.

81. Черноусова J1.H. Аффинное выделение микобактериальных антигенов на моноклональных антителах /Черноусова J1.H.; Суранова Е.Д.; Калинина О.А. //Пробл. туберк. -1995. -№2. -С.39-42.

82. Черноусова Л.Н. Исследование характеристик антигенной структуры различных микобактерий /Черноусова Л.Н.; Голышевская В.И.; Калинина О.А. //Бюл. эксп. биол. мед. -1998. -№125. -С. 329-331.

83. Шаров А.Н. К вопросу диагностики туберкулеза /Шаров А.Н. //Ветеринария. -1982. -№9. -С. 40-44.

84. Шаров А.Н. Интрапальпебральная туберкулиновая проба у мелкого рогатого скота /Шаров А. Н. //Ветеринария. -1986. -№ 8. -С. 19.

85. Щуревский В.Е. О научных основах борьбы с туберкулезом /Щуревский В.Е., Плотников Э.С. //Ветеринария. -1973. -№1. -С.39-41.

86. Щуревский В.Е. Атипичные микобактерии и их патогенность для сельскохозяйственных животных /Щуревский В.Е., Овдиенко Н.П., Кадочкин A.M. //Ветеринария. -1978. -№4. -С. 17-20.

87. Щуревский В.Е. Патологоанатомическая диагностика туберкулеза /Щуревский В.Е., Якушева О.В., Овдиенко Н.П., Шаров В.А. //Ветеринария.-1980. -№10. -С.27-30.

88. Щуревский В.Е. Быстрорастущие атипичные микобактерии и их значение в патологии крупного рогатого скота /Щуревский В.Е., Овдиенко Н.П., Кадочкин J1.M. //Ветеринария.- 1984.- №9.- С.37.

89. Юдин Г.А. Причины, распространение, дифференциация и профилактика неспецифических реакций на туберкулин /Юдин Г.А. //Ветеринария.1987.- № 12.- С.34.

90. Юсковец М.К. Туберкулез домашних животных и методы борьбы с ним /Юсковец М.К. //М.: Сельхозгиз.- 1976.- С.143.

91. Ярных B.C. Санитарные мероприятия в системе противоэпизоотиче-ской защиты /Ярных B.C. //Ветеринария.- 1985.- №11.- С.23-25.

92. Armbrust A. Development of an ELISA for detecting antibodies in monkeys infected with M.bovis /Armbrust A.; Thoen C.; Bruner J. //Proc. Annu. Meet. US Anim. Health Assoc. -Vol.24. -1980.- P.522-527.

93. Baird P. A major antigen from Mycobacterium tuberculosis which is homologous to the heat shock proteins groES from E. coli and the htpA gene product of Coxiella burneti /Baird P.; Hall L.; Coates A. //Nuclei.Acids.Res. -1988. -Vol.16. -P.9047.

94. Barbolini G. Immunohistologic analysis of mycobacterial antigens by monoclonal antibodies in tuberculosis and mycobacteriosis /Barbolini G.; Bisetti A.; Colizzi V.; Damiani G.; Migaldi M.; Vismara D. //Hum.Pathol. -1989. -Vol.20. P.1078-1083.

95. Beagley K.W. The Mycobacterium-Tuberculosis 71-kDa Heat-Shock Protein Induces Proliferation and Cytokine Secretion by Murine Gut Intraepithelial Lymphocytes /Beagley K.W.; Fujihashi K.; Black P.A.; Lagoo A.S.; Yamamoto

96. M.; Mcghee J.R.; Kiyono H. //Eur.J.Immunol. 1993. - Vol.238. - P.2049-2052.

97. Bothamley G. Serodiagnostic value of the 19 kilodalton antigen of Mycobacterium tuberculosis in Indian patients /Bothamley G.; Batra H.; Ramesh V.; Chandramui A.; Ivanyi J //Eur.J.Clin.Microbiol.Infect.Dis. -1992. -Vol.11. P.912-915.

98. Bothamley G. Association of tuberculosis and M. tuberculosis-specific antibody levels with HLA /Bothamley G.H.; Beck J.S.; Schreuder G.M.; D'Amaro J.; de Vries R.R.; Kardjito Т.; Ivanyi J. //J.Infect.Dis. -1989. -Vol.159. -P.549-555.

99. Bothamley G. Clinical value of the measurement of Mycobacterium tuberculosis specific antibody in pulmonary tuberculosis /Bothamley G.; Rudd R.; Festenstein F.; Ivanyi J. //Thorax. -1992. -Vol.47. -P.270-275.

100. Bothamley G. Clinical evaluation of a serological assay using a monoclonal antibody (TB72) to the 38 kDa antigen of Mycobacterium tuberculosis /Bothamley G.; Rudd R. //Eur.Respir.J. -1994. -Vol.7. -P.240-246.

101. Bradford M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding /Bradford M. //Anal.Biochem. Vol.72.- 1976.- P.248-254.

102. Carriere J. An apprasial of the bentonite flocculation test in the detection of bovine tuberculosis /Carriere J.; Wallace R.; Diena B. //Can.J.Comp. -Vol.37.- 1973.- P.421-423.

103. Closs O. The antigens of Mycobacterium bovis, strain BCG, studied by crossed immunoelectrophoresis: a reference system /Closs O.; Harboe M.; Axelsen N. //Scand.J.Immunol. -Vol.12 (3). -1980.- P.249-263.

104. Collins F. Biological activity of protein antigens isolated from Mycobacterium tuberculosis culture filtrate. /Collins F.; Lamb J.; Young D. //Infect.Immun. Vol.565.- 1988.- P.1260-1266.

105. Damiani G. Generation and characterization of monoclonal antibodies to 28-, 35-, and 65-kilodalton proteins of Mycobacterium tuberculosis /Damiani G.; Biano A.; Beltrame A.; Vismara D.; Mezzopreti M. //Infect.Immun. -1988.-Vol.56.- P.1281-1287.

106. Daniel T. The use of immunoabsorbents for the purification of mycobacterial antigens /Daniel Т.; Anderson P. //J.Lab.Clin.Med. -1977. -Vol.90. -P.354-360.

107. De Bruyn J. The 32 kDa protein antigen of M. bovis BCG and M. tuberculosis H37Rv /De Bruyn J.; Huygen K.; Van Vooren J.; Content J.; Turneer M. //Trop.Med.Parasitol. Vol.41.- 1990.- P.331-332.

108. De Bruyn J. Purification, characterization and identification of a 32 kDa protein antigen of Mycobacterium bovis BCG /De Bruyn J.; Huygen K.; Bosmans R.; Fauville M.; Lippens R. //Microb.Pathog. 1987. - Vol.2. - P.351-366.

109. Deshpande R. Immunological evaluation of a 12-kilodalton protein of Mycobacterium tuberculosis by enzyme-linked immunosorbent assay /Deshpande R.; Khan M.; Navalkar R. //Tuber.Lung Dis. 1993. - Vol.74. - P.382-387.

110. Drowart A. Antibody levels to whole culture filtrate antigens and to purified P32 during treatment of smear-positive tuberculosis /Drowart A.; Huygen K.; De Bruyn J.; Yernault J.; Farber P.M.; Van Vooren J.P. //Chest. 1991. - Vol.100.- P.685-687.

111. Espitia C. A 38-kD Mycobacterium tuberculosis antigen associated with infection. Its isolation and serologic evaluation /Espitia C.; Cervera I.; Gonzalez R.; Mancilla R. //Clin.Exp.Immunol. Vol.77 (3).- 1989.- P.373-377.

112. Fifis T. Purification and characterization of major antigens from a Mycobacterium bovis culture filtrate /Fifis Т.; Costopoulos C.; Radford A.J. //Infect.Immun. Vol.59.- 1991.- P.800-807.

113. Fifis T. Purification of a Major Mycobacterium bovis antigen for diagnosis of bovine tuberculosis /Fifis Т.; Plackett P.; Corner L.A.; Wood P. //Scand. J. Immunol. Vol.29.- 1989.- P.91-101.

114. Fujiwara T. Epitope mapping of twelve monoclonal antibodies against the phenolic glycolipid-I of M. Leprae /Fujiwara Т.; Minagawa F.; Sakamoto Y.; Douglas J. //Int.J.Lepr.Other Mycobact.Dis. 1997. - Vol.65. - P.477-486.

115. Gaylord H. Most Mycobacterium leprae carbohydrate-reactive monoclonal antibodies are directed to lipoarabinomannan /Gaylord H.; Brennan P.; Young D.; Buchanan T. //Infect.Immun. 1987. - Vol.55. - P.2860-2863.

116. Gupta S. Analysis, expression and prevalence of the Mycobacterium tuberculosis homolog of bacterial virulence regulating proteins /Gupta S.; Jain S.; Tyagi A. //FEMS Microbiol.Lett. 1999. - Vol.172. - P. 137-143.

117. Haga S. Purification of MPB70 and production of specific monoclonal antibodies /Haga S.; Nakagawa M.; Nagai S.; Miura K.; Honda M. //Hybridoma

118. Vol.11 (4).- 1992.- P.483-492.

119. Hajeer A. Monoclonal antibody epitopes of mycobacterial 65-kD heat-shock protein defined by epitope scanning /Hajeer A.; Worthington J.; Morgan K.; Bernstein R. //Clin.Exp.Immunol. 1992. - Vol.89. - P.l 15-119.

120. Нага I. Development of monoclonal antibodies reacting against mycobacterial 65 kDa heat shock protein by using recombinant truncated products /Нага I.; Sato N.; Matsuura A.; Cho J.; Qi W.; Torigoe T. //Microbiol.Immunol. 1991. -Vol.35. -P.995-1007.

121. Harboe M. B-cell epitopes and quantification of the ESAT-6 protein of Mycobacterium tuberculosis /Harboe M.; Malin A.; Dockrell H.; Wiker H. //Infect.Immun. 1998. - Vol.66. - P.717-723.

122. Harboe M. Immunological and biochemical characterization and classification of mycobacterial antigens /Harboe M.; Wiker H. //Lepr.Rev. 1986. -Vol.57 Suppl 2. - P.33-37.

123. Harboe M. The 38-kDa protein of Mycobacterium tuberculosis: a review /Harboe M.; Wiker H. //J.Infect.Dis. 1992. - Vol.166. - P.874-884.

124. Harboe M. Protein G-based enzyme-linked immunosorbent assay for anti-MPB70 antibodies in bovine tuberculosis /Harboe M.; Wiker H.; Duncan J.; Garcia M.; Dukes T. //J.Clin.Microbiol. 1990. - Vol.28. - P.913-921.

125. Harboe M. Homology between the MPB70 and MPB83 proteins of Mycobacterium bovis BCG /Harboe M.; Nagai S.; Wiker H.; Sletten K.; Haga S. //Scand.J.Immunol. Vol.42 (1).- 1995.- P.46-51.

126. Harboe M. Generation of antibodies to the signal peptide of the MPT83 lipoprotein of Mycobacterium tuberculosis /Harboe M.; Whelan A.; Ulvund G. //Scand.J.Immunol. Vol.55 (1).- 2002.- P.82-87.

127. Harboe M. MPB70 and MPB83 as indicators of protein localization in mycobacterial cells /Harboe M.; Wiker H.; Ulvund G. //Infect.Immun. Vol.66 (1).- 1998.- P.289-296.

128. Harboe M. Cross-reactions between mycobacteria. II. Crossed immu-noelectrophoretic analysis of soluble antigens of BCG and comparison with other mycobacteria /Harboe M.; Mshana R.; Closs O. //Scand.J.Immunol. Vol.9 (2).-1979.- P. 115-124.

129. Hewinson R. Molecular characterization of MPT83: a seroreactive antigen of Mycobacterium tuberculosis with homology to MPT70 /Hewinson R.; Michell S.; Russell W. //Scand.J.Immunol. Vol.43 (5).- 1996.- P.490-499.

130. Hutchings D. Evaluation of lymphocyte stimulation tests for diagnosis of bovine tuberculosis in elk (Cervus elaphus) /Hutchings D.; Wilson S. //Am.J.Vet.Res. Vol.56 (1).- 1995.- P.27-33.

131. Jackett P. Specificity of antibodies to immunodominant mycobacterial antigens in pulmonary tuberculosis /Jackett P.; Bothamley G.; Batra H.; Mistry A.; Young D.; Ivanyi J. //J.Clin.Microbiol. 1988. - Vol.26. - P.2313-2318.

132. Janicki B. A reference system for antigens of Mycobacterium tuberculosis /Janicki В.; Chaparas S.; Daniel T. //Am.Rev.Respir.Dis. Vol.104 (4).- 1971.-P.602-604.

133. Kadival G. Production, characterization and species specificity of five monoclonal antibodies to Mycobacterium tuberculosis /Kadival G.; Chaparas S. //J.Clin.Microbiol. 1987. - Vol.25. - P.76-76.

134. Kolk A. Production and characterization of monoclonal antibodies to Mycobacterium tuberculosis, M. bovis (BCG) and M. leprae. /Kolk A.; Ho M.; Klatser P.; Eggelte T. //Clin.Exp.Immunol. 1984. - Vol.58. - P.511-521.

135. Kox L. More reliableble PCR for detection of M.tuberculosis in clinical samples /Кох L., Rhienthong D., Medo Miranda A. //J.Clin.microb.- 1994.-32.-P.672-678.

136. Laemmli U. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 /Laemmli U. //Nature Vol.227 (259).- 1970.- P.680-685.

137. Lassence A. Detection of mycobacterial DNA from patients with tuberculosis pleurisy by means of the PCR:comarison of two protocols /Lassence A., Leccossier D. //Thorax.- 1992.- 47.- P.265-269.

138. Lee B. Characterization of the major membrane protein of virulent Mycobacterium tuberculosis /Lee В.; Hefta S.; Brennan P. //Infect.Immun. 1992. -Vol.60. - P.2066-2074.

139. Ljungqvist L. Affinity purification, biological characterization and serological evaluation of defined antigens from Mycobacterium tuberculosis /Ljungqvist L.; Andersen A.; Andersen P.; Haslov K. //Trop.Med.Parasitol. 1990. - Vol.41.-P.333-335.

140. Ljungqvist L. Antibody responses against Mycobacterium tuberculosis and production of monoclonal antibodies in mice /Ljungqvist L.; Worsaae A.; Heron I. //Acta Leprol. 1989. - Vol.7 Suppl 1. - P. 184-185.

141. Lowrie D. Genetic vaccination against tuberculosis /Lowrie D.; Silva P.; Tascon R.E. //Springer Semin.Immunopathol. 1997. - Vol.19. - P.161-173.

142. Lightbody K. Mycobacterial antigen-specific antibody responses in bovine tuberculosis: an ELISA with potential to confirm disease status In Process Citation. /Lightbody K.; Skuce R.; Neill S.; Pollock J. //Vet.Rec. Vol.142 (12).-1998.- P.295-300.

143. Lind A. Immunologically based diagnostic tests, Humoral antibody methods. In: The Mycobacteria.; Kubica G.; Wayne L. /Lin M.; Sugden E.; Jolley M.; Stilwell K. //New York.- 1984.- P. 221-248.

144. Lyashchenko K. Novel monoclonal antibodies against major antigens of Mycobacterium bovis /Lyashchenko K.; Wiker H.; Harboe M. //Scand.J.Immunol. Vol.53 (5).- 2001.- P.498-502.

145. Manjunath N. Evalution of a PCR for the diagnosis of tuberculosis /Man-junath N., Shankar P., Rajan L. //Tubercle.- 1991.-72.- P.21-27.

146. Mann P. Clinicopathological correlations of tuberculosis in large zoo mammals /Mann P.; Bush M.; Janssen D. //J.Am.Vet.Med.Assoc. Vol. 179.1981.- P.l 123-1129

147. Mason P. The use of monoclonal antibodies to identify mycobacteria grown in culture in Zimbabwe /Mason P.; Gwanzura L.; Lowe O.; Kolk A. //Tuber.Lung Dis. 1993. - Vol.74. - P. 195-199.

148. McNair J. Characterization of the early antibody response in bovine tuberculosis: MPB83 is an early target with diagnostic potential /McNair J.; Corbett D.; Girvin R. //Scand.J.Immunol. Vol.53 (4).- 2001.- P.365-371.

149. Michell S. The MPB83 antigen from mycobacterium bovis contains O-linked mannose and (1,3) mannobiose moieties /Michell S.; Whelan A.; Wheeler P. //J.Biol.Chem. Vol.278(4).- 2003.- P.l815-1820.

150. Minden P. Immunological evaluation of a component isolated from Mycobacterium bovis BCG with a monoclonal antibody to M. bovis BCG /Minden P.; Kelleher P.; Freed J.; Nielsen L. //Infect.Immun. 1984. - Vol.46. - P.519-525.

151. Moraes M. Cellular immune responses to Mycobacterium tuberculosis in a patient with Takayasu's arteritis /Moraes M.; Ordway D.; Oliveira L.; Costa I. //Rev.Port.Cardiol. 1999. - Vol.18. - P.359-367.

152. Morris J. The identification of antigenic determinants on Mycobacterium bovis using monoclonal antibodies /Morris J.; Thorns P.; Woolley J. //J. Gen. Microbiol. 1985. - Vol.131. - P.1825-1831.

153. Morris J. A pilot study to assess the usefulness of ELISA in detecting tuberculosis in badgers /Morris J.; Stevens A.; Stuart P.; Little T. //Vet.Rec. -Vol.104.- 1979.- P.14-18.

154. Morris J. Evidence for the reaction of bovine autoantibodies with Mycobacterium bovis /Morris J.; Thorns C. //Vet.Rec. Vol. 117 (8).- 1985.- P. 169.

155. Newell D. The kinetics of serum antibody responses to natural infections with Mycobacterium bovis in one badger social group /Newell D.; Clifton-Hadley R.; Cheeseman C. //Epidemiol.Infect. Vol.118 (2).- 1997.- P. 173-180.

156. O'Connor S. Nucleotide sequence of the gene encoding the 35-kDa protein of Mycobacterium tuberculosis /O'Connor S.; Rumschlag H.; Mayer L. //Res.Microbiol. 1997. - Vol.141. - P.407-423.

157. Orme I. T-Cell Response to Mycobacterium-Tuberculosis /Orme I.; Andersen P.; Boom W. //Inf.Dis. 1993. - Vol.l676. - P. 1481-1497

158. Radford A. Epitope mapping of the Mycobacterium bovis secretory protein MPB70 using overlapping peptide analysis /Radford A.; Wood P.; Billman J. //J.Gen.Microbiol. Vol.136.- 1990.- P.265-272.

159. Rambukkana A. Identification of a novel B-cell epitope of restricted specificity on the hsp 65-kDa protein of Mycobacterium tuberculosis /Rambukkana A.; Yong S.; Das P. //FEMS Microbiol.Immunol. 1991. - Vol.3. - P.39-45.

160. Ranadive S. Prevalence of HIV-1 antibodies in patients attending tuberculosis clinics in Pune /Ranadive S.; Thakar M.; Kulkarni S.; Sukumaran K. //J.AssoP.Physicians.India. 1991. - Vol.39. - P.427-427.

161. Richards W. The stimulating effect of tuberculin skin tests on precipitin levels in cattle /Richards W.; Ellis E.; Wright H.; van Deusen R. //Am.Rev. Respir. Dis. Vol.93.- 1966.- P.912-919.

162. Ritacco V. Assessment of sensitivity and specificity of ELISA for the detection of mycobacterial antibodies in bovine tuberculosis /Ritacco V.; de Kantor I.; Barrera L. //J.Vet.Med. Vol.39.- 1987.- P.l 19-125.

163. Rumschlag H. Immunologic characterization of a 35-kilodalton recombinant antigen of Mycobacterium tuberculosis /Rumschlag H.; Yakrus M.; Cohen M.; Glickman S.; Good R. //J.Clin.Microbiol. 1990. - Vol.28. - P.591-595.

164. Schou P. Production and partial characterization of monoclonal hybri-doma antibodies to Mycobacterium tuberculosis /Schou P.; Yuan Z.; Andersen A.; Bennedsen J. //Acta Pathol.Microbiol.Immunol.Scand.C. 1985. - Vol.93. - P.265-272.

165. Shankar P. Rapid diagnosis of tuberculosis meningites by PCR /Shankar P., Manjunath N., Mohan K. //Lancet.- 1991.-387.- P.5-7.

166. Shinnick T.M. The 65-kilodalton antigen of Mycobacterium tuberculosis /Shinnick T. //J.Bacterid. 1987. - Vol.169. - P. 1080-1088.

167. Seibert F. Isolation of three different proteins and two polysaccharides from tuberculin by alcohol fractionation: their chemical and biological properties /Seibert F. //Am.Rev.Tuberc. Vol.59.- 1949.- P.86-101.

168. Smith R. Evaluation of diagnostic tests, and Use of diagnostic tests. In: Veterinary Clinical Epidemiology: A problem-oriented Aproach /Smith R. //Anonymous Batterworth-Heinemann: Boston.-1991,-P. 29-56.

169. Sorensen A. Purification and characterization of a low-molecular-mass T-cell antigen secreted by Mycobacterium tuberculosis /Sorensen A.; Nagai S.; Houen G.; Andersen P.; Andersen A. //Infect.Immun. 1995. - Vol.63. - P. 17101717.

170. Sugden E. Competitive and indirect enzyme-linked immunosorbent assays for Mycobacterium bovis infections based on MPB70 and lipoarabinomannan antigens /Sugden E.; Stilwell K.; Rohonczy E.; Martineau P. //Can.J.Vet.Res. -Vol.61 (1).- 1997.-P.8-14.

171. Surujballi О. A fluorescence polarization assay for the detection of antibodies to Mycobacterium bovis in cattle sera /Surujballi O.; Romanowska A.; Sugden E. //Vet.Microbiol. Vol.87 (2).- 2002.- P. 149-157.

172. Thoen C. Detection of mycobacterial antibodies in sera of cattle experimentally exposed to M.bovis by use of a modified ELISA /Thoen C.; Hall M.; Petersburg Т.; Harrington R. //Am. Assoc. Vet. Lab. Diagn. Vol. Proc. Ann. Meet.- 1983.- P.25-38.

173. Thoen C. Use of ELISA for detecting mycobacterial antigens in tissues of M.bovis infected cattle /Thoen C.; Malstrom C.; Himes E.; Mills K. //Am.J.Vet.Res. - Vol.42.- 1981.- P. 1814-1815.

174. Towbin H. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications /Towbin H.; Staehelin Т.; Gordon J. //Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. Vol.76 (9).- 1979.- P.4350-4354.

175. Tsuyuguchi T. Production of monoclonal antibodies for Mycobacterium tuberculosis Aoyama-B and immunological activity of the affinity-purified antigens/Tsuyuguchi T. //Kekkaku. Vol.64 (12).- 1989.- P.761-775.

176. Ulstrup J. Relationship of secretion pattern and MPB70 homology with osteoblast- specific factor 2 to osteitis following Mycobacterium bovis BCG vaccination /Ulstrup J.; Jeansson S.; Wiker H.; Harboe M. //Infect.Immun. Vol.63 (2).- 1995.- P.672-675.

177. Vardamann T. The complement-fixation test for detecting tuberculosis in cattle /Vardamann Т.; Larsen A. //Am.J.Vet.Res. Vol.25.- 1964.- P.690-692.

178. Vismara D. Identification of a 35-kilodalton Mycobacterium tuberculosis protein containing B- and T-cell epitopes /Vismara D.; Mezzopreti M.; Gilardini M.; Del Porto P. //Infect.Immun. 1990. - Vol.58. - P.245-251.

179. Vordemeier H. Identification of T cell stimulatory peptides from the 38-kDa protein of Mycobacterium tuberculosis /Vordemeier H.; Harris D.; Roman E.; Lathigra R. //J.Immunol. 1991. - Vol.147. - P.l023-1029.

180. Vordermeier H. T cell repertoire in tuberculosis: selective anergy to an immunodominant epitope of the 38-kDa antigen in patients with active disease /Vordermeier H.; Harris D.; Friscia G.; Roman E. //Eur.J.Immunol. 1992. -Vol.22.-P.2631-2637.

181. Vordermeier H. Development of diagnostic reagents to differentiate between Mycobacterium bovis BCG vaccination and M. bovis infection in cattle /Vordermeier H.; Cockle P.; Whelan A. //Clin.Diagn.Lab.Immunol. Vol.6 (5).-1999.- P.675-682.

182. Vosloo W. Characterisation of a lipoprotein in Mycobacterium bovis (BCG) with sequence similarity to the secreted protein MPB70 /Vosloo W.; Tip-poo P.; Hughes J.; Harriman N.; Emms M. //Gene. 1997. - Vol.188. - P. 123-128.

183. Wadee, A. A 25-kDa fraction from Mycobacterium tuberculosis that inhibits leukocyte bactericidal activity: reversal by gamma interferon and clofazimine/Wadee A.//Res.Microbiol. 1990. - Vol.141. - P.249-252.

184. Wadee A. A 25-kilodalton fraction from Mycobacterium tuberculosis that inhibits hexose monophosphate shunt activity, lysozyme release, and H202 production: reversal by gamma interferon /Wadee A.; Clara A. //Infect.Immun. -1989.-Vol.57.-P.864-869.

185. Wallis R. Identification of antigens of Mycobacterium tuberculosis using human monoclonal antibodies /Wallis R.; Aide S.; Havlir D.; Amir-Tahmasseb M. //J.Clin.Invest. 1989. - Vol.84. - P.214-219.

186. Wiker H. Immunochemical characterization of the MPB70/80 and MPB83 proteins of Mycobacterium bovis /Wiker H.; Lyashchenko K.; Aksoy A. //Infect.Immun. 1998. - Vol.66. - P. 1445-1452.

187. Wilkins E. Potential value of serology for diagnosis of extrapulmonary tuberculosis see comments. /Wilkins E.; Ivanyi J. //Lancet Vol.336 (8716).-1990.- P.641-644.

188. Wilcke J. Clinical evaluation of MPT-64 and MPT-59, two proteins secreted from Mycobacterium tuberculosis, for skin test reagents /Wilcke J.; Jensen В.; Ravn P. //Tuber.Lung Dis. 1996. - Vol.77. - P.250-256.

189. Wilkins E. A rapid, simple enzyme immunoassay for detection of antibody to individual epitopes in the serodiagnosis of tuberculosis /Wilkins E.; Bothamley G.; Jackett P. //Eur.J.Clin.Microbiol.Infect.Dis. 1991. - Vol.10. -P.559-563.

190. Wood P. Production and characterization of monoclonal antibodies specific for Mycobacterium bovis /Wood P.; Ripper J.; Radford A. //J.Gen.Microbiol. 1988. - Vol.134. - P.2599-2599.

191. Wood P. In vitro immunodiagnostic assays for bovine tuberculosis /Wood P.; Rothel J. //Vet.Microbiol. Vol.40 (1-2).- 1994.- P. 125-135

192. Worsaae A. Monoclonal antibodies produced in BALB.B10 mice define new antigenic determinants in culture filtrate preparations of Mycobacterium tuberculosis /Worsaae A.; Ljungqvist L.; Heron I. //J.Clin.Microbiol. 1988. -Vol.26.-P.2608-2614.

193. Wurche T. Differentiation of M. tuberculosis and M. avium complex using various monoclonal antibodies. /Wurche Т.; Wagner S.; Mauch H. //Pneu-mologie. 1990. - Vol.44 Suppl 1. - P.455-457.

194. Wiker H. A family of cross-reacting proteins secreted by Mycobacterium tuberculosis /Wiker H.; Nagai S.; Harboe M.; Ljungqvist L. //Scand.J.Immunol. -Vol.36 (2).- 1992.- P.307-319.

195. Yokomizo Y. A method for avoiding false-positive reactions in an ELISA for the diagnosis of bovine paratuberculosis /Yokomizo Y.; Yugi H.; Merkal R. //Jap.J.Vet.Sci. Vol.47.- 1987.- P.l 11-119.

196. Yugi H. Serologic diagnosis of bovine tuberculosis /Yugi H.; Nozaki C.//Am.J.Vet.Res. Vol.33.- 1972.-P.1377-1384.

197. Young D.B. The immune response to mycobacterial heat shock proteins /Young D. //Autoimmunity. 1990. - Vol.7. - P.237-244.1ЪЭ

198. Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина»

199. УДК 619:616.98:579.873.21 (06)

200. ЗТВЕРЖДАЮ Ректор ФЩУ^ПО МГАВМиБ, • ^академик^АСХН, профессор ; £ Е.С. Воронинtjf' ■ << Ш^ФйМяМ 2005 г.4;v * if1. ОТЧЕТо научно-исследовательской работе

201. ПОЛУЧЕНИЕ АНТИГЕНА МРВ83 M.bovis И ЕГО ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА

202. Проректор по научной работе ФГОУ ВПО МГАВМиБ, д.в.н., профессоргМ

203. Зав. кафедрой биотехнологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ, д.б.н., профессор

204. Руководитель НИР: доцент кафедры биотехнологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ, д.б.н.

205. Ответственный исполнитель: аспирант кафедры биотехнологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ1. И.В. Тихонов

206. А? » 01?Л11.Я/Г1Я / 2005 г1. Т.Н. Грязнева/Л» QtcrjfpJ 2005 г1. А.Б. Аракелов/Оу> о a- 2005 г

207. Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина»1. УДК 619:616-097.3 (06)

208. УТВЕРЖДАЮ» Ректор ФГОУ ВПаЬгАВМиБ,1. Воронин2005 г.1. ОТЧЕТо научно-исследовательской работе

209. ИММУНОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ S2H6G4, НАПРАВЛЕННЫХ ПРОТИВ АНТИГЕНА МРВ83 M.bovis

210. Проректор по научной работе ФГОУ ВПО МГАВМиБ, д.в.н., профессор Ж ^А.А. Сидорчук/0 » ihbSdlU,2005 г

211. Зав. кафедрой биотехнологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ, д.б.н., профессод^^Г^^ /И.В. Тихонов» 0К/тЛ(рУ 2005 г

212. Руководитель НИР: доцент кафедры биотехнологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ, д.б.н.

213. Ответственный исполнитель: аспирант кафедры биотехнологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ1. Т.Н. Грязнева1. Яд » Q itTJfpJ 2005 г1. А.Б. Аракелов 2005 г