Полиморфные маркеры в геномной дактилоскопии и генетическом анализе ряда мультифакторных заболеваний

Чистяков, Дмитрий Александрович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Полиморфные маркеры в геномной дактилоскопии и генетическом анализе ряда мультифакторных заболеваний
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Полиморфные маркеры в геномной дактилоскопии и генетическом анализе ряда мультифакторных заболеваний"

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЕНЕТИКИ И СЕЛЕКЦИИ ПРОМЫШЛЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

^ На правах рукописи

ЧИСТЯКОВ ДМИТРИИ АЛЕКСАНДРОВИЧ

ПОЛИМОРФНЫЕ МАРКЕРЫ В ГЕНОМНОЙ ДАКТИЛОСКОПИИ И ГЕНЕТИЧЕСКОМ АНАЛИЗЕ РЯДА МУЛЬТИФАКТОРНЫ X ЗАБОЛЕВАНИЙ

03.00.15 - генетика

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва - 2000

Работа выполнена в лаборатории геномной дактилоскопии и молекулярной диагностики Государственного научно-исследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов (Государственный научный цетр Российской Федерации "ГосНИИ генетика")

Научный консультант

Официальные оппоненты

Ведущая организация

доктор биологических наук, 1щ^эессор Носиков В.В.

доктор биологических наук, профессор Фаворова О.О.

доктор биологических наук, профессор Толсторуков И.И.

доктор медицинских наук, профессор Микоткин В.А.

Институт общей генетики РАН

Защита состоится '43" декабря 2000 г. в 1400 часов на заседании Диссертационного Совета Д.103.06.01. при ГНЦ "ГосНИИ генетика" по адресу: 113545, Москиа, 1-й Дорожный проезд, д. I.

С диссертацией ознакомиться^библиотеке ГНЦ "ГосНИИ

генетика".

Автореферат разослан "13" ноября 2000 г.

Ученый секретарь

Диссертационного Совета „ „ { /

гЪ? сО-Н

канд. биол. наук А<Н" ' [' Щербакова В.И.

Е Мб, ъьСуд

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Полиморфные локусы генома человека нашли широкое применение в молекулярной генетике и медицине. Интенсивные работы по расшифровке нуклеотидной последовательности человеческой ДНК привели к созданию нескольких поколений подробных генетических карт с более или менее равномерным распределением по всей хромосоме высокополиморфных маркеров, причем плотность последних на карте возрастала от поколения к поколению. Это позволило привязать к данным маркерам локализованные по соседству гены h упорядочить взаимное расположение последних на хромосоме.

Многие вариабельные локусы, относящиеся к так называемым тандемно повторяющимся последовательностям (минисателлиты, или VNTR - variable number of tandem repeats, и микросателлиты, или STR -short tandem repeats), обладают высокой степенью индивидуального полиморфизма и информативности, что делает их крайне полезными для использования в судебной медицине при идентификации личности на уровне ДНК и разрешении спорного отцовства. Создание идентификационных панелей на основе таких локусов позволило резко повысить разрешающую силу и мощность анализа при проведении в судебно-медицинской экспертизы по сравнению с ранними тест-системами, основанными на белковом полиморфизме.

Полиморфные маркеры, особенно те, что расположены внутри генов, также нашли свое применение и в генетическом анализе мультифакторных заболеваний. К последним относятся разнообразные аутоиммунные, раковые и сердечно-сосудистые патологии, имеющие сложную картину возникновения и развития в результате взаимодействия целого ряда неблагоприятных факторов, включая и генетические. Наличие достоверных различий в распределении частот аллелей и генотипов полиморфного локуса, расположенного внутри или рядом с геном-кандидатом, между группами здоровых лиц и больных свидетельствует об ассоциации полиморфного маркера (и гена-кандидата) с заболеванием. Семейный анализ позволяет выяснить, сцеплен ли изучаемый полиморфный маркер с патологией или нет.

Установление ассоциации и сцепленности гена с заболеванием имеет важное значение для разработки мер по профилактике и лечению данной патологии, дифференцированного подхода при подборе лекарственных препаратов (ингибиторы, блокаторы, стимуляторы), действующих на белковый продукт данного гена (фермент, гормон, рецептор), для пациентов в зависимости от их генотипа, формированию групп риска и прочее. Особое значение это имеет в случае таких комплексных заболеваний, как сахарный диабет и диабетические осложнения, сердечно-сосудистые и аутоиммунные нарушения и прежде всего по причине повсеместного распространения данных патологий и

существенного характера наносимого ими социально-экономического вреда, особенно заметного на территории Российской Федерации.

В настоящее время в России исследования в области генетики мультифакторньрс заболеваний ведутся весьма активно во многих научных центрах, но при этом детальное понимание генетических механизмов развития данных патологий остается неясным, а сами исследования носят разрозненный характер ввиду отсутствия единой централизованной генотипической базы данных по пациентам и контрольным выборкам. Тем не менее, предпринимаются попытки координации общих усилий по лечению и профилактике наиболее распространенных заболеваний. Таким примером" может служить федеральная программа "Сахарный диабет", одной из целей которой является подведение генетического фундамента и обоснования лечебно-профилактических мер по снижению и предотвращению заболеваемости диабетом и его осложнениями. Аналогичная ситуация сложилась и в области отечественной геномной дактилоскопии, где наряду с отсутствием единых генетических баз данных также не разработана унифицированная идентификационная панель, наличие которой позволило бы сделать первые шаги по направлению к созданию централизованного криминалистического банка данных ДНК. Данные задачи уже во многом решены в развитых странах.

В этом свете весьма актуальной является предпринятая в настоящем исследовании попытка разработать тест-систему для идентификации личности на уровне ДНК и определения спорного отцовства, предлагаемую для использования на территории РФ. и ассоциативный анализ ряда мультигенных заболеваний (сахарный диабет и его сосудистые осложнения, Базедова болезнь, сердечно-сосудистые нарушения) в московской популяции.

Цель и задачи исследования. Основная цель настоящей работы заключалась в создании идентификационной тест-системы на основе полиморфных микро- и минисателлитных локусов, предназначенной для проведения судебно-медицинских исследований на территории России, и ассоциативном анализе вышеперечисленных мультифакторных патологий с использованием полиморфных генетических маркеров в популяции Москвы.

В задачи исследования входило: 1) определение частот аллелей и генотипов вошедших в состав панели 8 микро- и 6 минисателлитных локусов в московской и томской популяционных выборках; 2) сравнительный анализ полученных данных с результатами аналогичных исследований по другим популяциям; 3) определение критериев информативности исследованных локусов и их пригодности для идентификационного анализа по эффективности амплификации в зависимости от количества, качества и происхождения используемой гсипмнпй ЛШС: 4) комплексный анализ Базедовой болезни с

использованием полиморфных маркеров, расположенных внутри генов-кандидатов области HLA, CTLA4, LMP2, TSHR и IL1RN; 5) исследование связи генов главного комплекса гистосовместимости класса II (HLA-DQA1 и HLA-DQB1) и антиоксидантной защиты (CAT и SOD2) с сахарным диабетом; 6) ассоциативный анализ диабетических микроангиопатий (нефропатия, ретинопатия) с помощью генов-кандидатов, ответственных за регуляцию кровяного давления (гены ренин-ангиотензиновой системы, NOS3), сорбитолового пути обмена глюкозы (AR2) и антиоксидантной защиты (CAT и SOD2); 7) изучение ассоциации генов CAT и SOD2 с макрососудистыми осложнениями диабета (инфаркт миокарда, гипертония, ишемическая болезнь сердца); 8) анализ связи между генами, отвечающими за регуляцию тонуса сосудов (гены ренин-ангиотензиновой системы, NOS3) и сердечно-сосудистыми нарушениями (ишемическая болезнь сердца, инфаркт миокарда, гипертония).

Научная новизна. До настоящего времени данные по сравнительно-популяционному анализу частот аллелей и информативности исследованных полиморфных локусов в русскоязычных популяциях представлены недостаточно или отсутствуют вообще, что затрудняет проведение исследований по идентификации личности в России. Нами определены частоты аллелей и генотипов шести минисателлитов (D1S80, D1S111, D17S5, АРОВ, IGJH, RB1) в московской и восьми микросателлитов (D6S366, D19S253, HUMACTBP2, HUMF13A01, HUMCYAR04, HUMTH01, HUMvWFII, HUMCD4) в московской и томской популяциях. Впервые в России на основе этих полиморфных локусов создана панель, предлагаемая для идентификации личности и определения спорного отцовства на уровне ДНК, причем для каждого из локусов определены количественные критерии информативности и разрешающей силы и оценена их пригодность для идентификационного анализа с точки зрения эффективности амлификации в зависимости от количества, качества и происхождения тестируемой ДНК.

Впервые в России проведен комплексный анализ Базедовой болезни и показана ассоциация с ней генов CTLA4, LMP2, HLA и ILR1N. Показана связь между генами HLA (DQA1 и DQB1) и сахарным диабетом не только первого, но и второго типа. Обнаружена ассоциация между генами антиоксидантной защиты (CAT и SOD2) и сахарным диабетом -аналогичных исследований в мире не проводилось. Впервые в России проведен комплексный анализ диабетической нефропатии и найдена связь между данной патологией и генами АСЕ и NOS3, что свидетельствует о важной роли генов, контролирующих сосудистый тонус в становлении этой микроангиопатии. Найдена связь между геном AR2 и диабетической ретинопатией, указывающая на важность патологической активации сорбитолового пути метаболизма глюкозы в формировании и прогрессировании поражения микрососудов сетчатки глаз при диабете. Показана роль гена АСЕ как маркера развития гипертонической болезни и инфаркта миокарда при диабете 2-го типа в московской популяции.

Продемонстрирована важная роль генов ренин-ангиотензиновой

системы и N083, регулирующих кровяное давление, в развитии сердечнососудистых заболеваний (ишемическая болезнь сердца, гипертрофическая кардиомиопатия, инфаркт миокарда, гипертония).

Практическая значимость. Разработанная нами идентификационная панель обладает разрешающей силой, гарантирующей точную идентификацию личности в популяции, размеры которой существенно превышают население РФ. Все вошедшие в ее состав полиморфные локусы могут быть успешно применены в судебной медицине для разрешения случаев спорного отцовства, ряд из этих локусов может быть гарантированно использован в криминалистической практике для анализа человеческой ДНК с целью идентификации в условиях дефицита тестируемого биоматериала и его существенной деградации.

Знание генетических факторов риска изученных в работе заболеваний должно помочь в выявлении среди населения на основании результатов анализа ДНК групп риска для последующего проведения профилактических мероприятий, в использовании дифференцированного подхода при подборе лекарственных препаратов (ингибиторы, блокаторы, стимуляторы) в зависимости от генотипа конкретного больного. Результаты данной работы должны углубить имеющуюся сумму знаний о генетических механизмах возникновения и развития мультифакторных заболеваний.

Положения, выносимые на защиту. Полиморфные мини- и микросателлитные маркеры, детектируемые с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), могут быть успешно использованы для быстрой и надежной идентификации личности на уровне ДНК. Разное число аллелей входит в состав полиморфных локусов. Как правило, в популяциях одной расовой принадлежности распределение частот аллелей по какому-либо вариабельному участку ДНК незначительно отличается друг от друга, но в разных расах характер различий часто носит существенный характер. Мини- и микросателлиты, используемые в идентикационном анализе с помощью ПЦР, должны обладать достаточно высокой информативностью и разрешающей силой, а также способностью к одинаково надежной и воспроизводимой амплификации в условиях дефицита и значительной деградации типируемой ДНК независимо от ее происхождения (кровь, слюна, сперма, корень волоса и проч.). Идентификационная панель должна включать несколько таких микро- или минисателлитов и обладать совокупной разрешающей силой, исключающей вероятность случайного совпадения генотипов по данным локусам у двух наугад взятых лиц в исследуемой популяции.

Мультифакторные заболевания возникают по ряду причин, включая и те, что имеют генетическую природу. В развитие комплексных заболеваний, к которым относятся сердечно-сосудистые нарушения, сахарный диабет и его сосудистые осложнения, Базедова болезнь и

множество других патологий, вовлечены многие гены. Для изучения ассоциации определенного гена с конкретной патологией с успехом используют подход с выбором генов-кандидатов, т.е. генов, чей продукт может быть вовлечен в развитие исследуемой патологии. В этом случае для анализа используют подходящий полиморфный маркер, лежащий внутри или рядом с анализируемым геном-кандидатом. Все использованные нами в ассоциативных исследованиях полиморфные маркеры изучены с помощью ПЦР, что обеспечивает быстроту и удобство в проведении генетического анализа. Подобные исследования позволяют определить генетические факторы риска, которые в разных популяциях могут играть заметную или, наоборот, второстепенную роль в развитии одного и того же заболевания и которые важно учитывать при разработке мер по профилактике и лечению данной патологии.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены на ежегодных конгрессах Европейского общества генетики человека (начиная с 1992 г.), Балканских съездах генетиков человека (1994, 1996, 1998 г.г.), ежегодных конференциях Европейской ассоциации диабетологов и Международной федерации изучения диабета (начиная с 1997 г.), на 13-й конференции Международной ассоциации судебной медицины и криминалистики (1993), 37-м съезде биохимиков и молекулярных биологов штатов Среднего Запада (США, 1994), конгрессе HUGO "Геном человека-98", ежегодных конференциях Европейского общества кардиологов (1997, 1999).

Публикации. Основные материалы диссертации изложены в 34 статьях и 6 обзорах (включая 2 зарубежные). По теме исследований также представлено 44 стендовых доклада на международных конференциях.

Структура и объем диссертации. Диссертация включает следующие разделы: введение, обзор литературы (в 5 главах), описание материалов и методов, результаты и их обсуждение (в двух главах), выводы и список литературы, насчитывающий 863 ссылки на отечественные и зарубежные публикации. Работа изложена на 351 странице и содержит 110 таблиц и 19 рисунков.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Популяцнонные выборки н пациенты. Популяционную выборку, использованную для анализа полиморфных локусов, вошедших в идентификационную панель, сформировали из образцов крови, взятых у пациентов травматологических пунктов г.Москвы и Института ревматологии РАМН (Москва). Выборка из неродственных представителей томской популяции была сформированная из здоровых лиц и пациентов

родильных домов г.Томска. Образцы крови удэгейцев были собраны в Пожарском районе Приморского края. Для настоящего исследования были отобраны 50 семей из трех-шести человек, преимущественно проходивших по экспертизе спорного отцовства в московском и казанском бюро суд.-мсд. экспертизы.

В группу популяционного контроля, использованную в генетическом анализе мультифакторных заболеваний, вошли неродственные лица без каких-либо системных нарушений и хронических заболеваний - пациенты травмпунктов и станций переливания крови г.Москвы. Группы больных сахарным диабетом и диабетическими ангиопатиями были сформированы из числа пациентов Эндокринологического центра РАМН. Образцы крови больных артериальной гипертонией при сахарном диабете 2-го типа были собраны на кафедре эндокринологии Российской медицинской академии.

Группы больных гипертонией, гипертрофией левого желудочка (ГЛЖ), и инфарктом миокарда (ИМ) сформированы на базе кардиологического отделения 64-й московской городской больницы. Образцы крови больных ишемической болезнью сердца (ИБС) собраны на базе Медицинского центра Управления делами президента РФ. Образцы крови пациентов с Базедовой болезнью взяты на кафедре эндокринологии и диабетологии Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова.

Методы исследований. Геномную ДНК человека из цельной крови выделяли после инкубации последней с протеиназой К (Sigma) путем последовательной экстракции фенолом-хлороформом (Mathew, 1984). Человеческую ДНК из пятен крови, слюны и корней волос выделяли с помощью хелатного полимера Chelex R-100 (Bio-Rad Laboratories) (Walsh et al, 1991). Нуклеотидную последовательность минисателлитного повтора рЗЗ.6 (локус D1S111) определяли по методу Сэнгера (Sanger et al, 1977) с использованием коммерческого набора для секвенирования фирмы Fermentas (Вильнюс) как рекомендовано поставщиком.

Полиморфные участки ДНК амплифицировали посредством ПЦР на термоциклере РНС-2 (Techne, Великобритания) или PolyChain (Polygen, Австрия). В случае мини- и микросателлитных локусов продукты ПЦР разделяли в 6- и 12%-ном полиакриламидном геле соответственно непосредственно после проведения амплификации. Для детекции нуклеотидных и аминокислотных замен (биаллельные полиморфные участки) использовали метод анализа ПЦР-ПДРФ (полиморфизм длины рестрикционных фрагментов): продукты ПЦР расщепляли соответствующей рестриктазой производства Fermentas (Вильнюс) или "Сибэнзим" (Новосибирск) и электрофоретически разделяли в 2%-ном агарозном либо 8%-ном акриламидном геле. Для визуализации ДНК агарозный гель окрашивали бромистым этидием, а акриламидный -серебром (Budowle et al, 1991). Окрашенные акриламидные гели сушили под вакуумом на приборе GelDryer Model 543 (Bio-Rad Laboratories).

Полиморфизм генов HLA-DQA1 и DQB1 изучали, гибридизуя амплифицированные фрагменты ДНК с олигонуклеотидными зондами, специфическими к определенным аллелям. Для идентификации аллелей использовали набор зондов, разработанных группой Эрлиха (Erlich et al, 1991). Зонды метили в присутствии [у-32Р]АТР с помощью полинуклеотидкиназы фага Т4 (Fermentas, Литва) и гибридизовали с "пятнами" ДНК на нейлоновых фильтрах Hybond N (Amersham) в приборе Hybridiser НВ-1 (Techne, Великобритания). Перенос (дот-блот) амплифицированных фрагментов ДНК на фильтры осуществляли на аппарате Bio-Dot (Bio-Rad Laboratories). Количество включенной метки определяли на счетчике Tracor Analytic 560 (Bio-Rad Laboratories).

Наблюдаемые частоты встречаемости генотипов исследованных локусов проверяли на отклонение от равновесия Харди-Вайнберга по критериям X2 и G-статистики с помощью компьютерной пограммы RxC (Rows X Columns) на основе алгоритма Роффа-Бенцена (Roff & Bentzen, 1989). Эту же программу использовали при сравнении распределения аллелей полиморфных локусов в разных популяциях.

Ожидаемые частоты встречаемости генотипов, наблюдаемый и ожидаемый индексы (Нсхр) (Nei & Roychoudhury, 1974) гетерозиготности и следующие параметры информативности полиморфизма исследованных локусов: вероятность случайного совпадения генотипов двух наугад исследованных неродственных человек (probability of random match, pM) (Sajantila et al, 1991), дискриминационный индекс (discrimination index, или power of discrimination, PD) (Sajantila et al, 1991), средний риск исключения (mean exclusion chance, W) (Kruger et al, 1968), информационное содержание полиморфизма (polymorphism information content, PIC) (Botstein et al, 1980) рассчитывали с помощью компьютерной программы PUPPY, разработанной на основе следующих алгоритмов:

_(1-Ixj2)n н«р П.1

РМ = 1Р,2

PD = 1 - pM

п п-1 п Р1С = 1-2>М 2>2х/ i i j=i+l

W = Xx,3(l-x,)2 + Ix¡(l-x)3 + XxiX/Xi+XjXl-Xi-Xj)2 i i ¡<j

где Xi, Xj - аллельные частоты; n - число аллелей, P¡- частоты встречаемости генотипов.

При разрешении случаев спорного отцовства вероятность истинности отцовства рассчитывали на основе теоремы Байеса, лежащей в основе алгоритмов, рассмотренных в ряде работ (Evett et al, 1989;

Yassouridis &. Epplen, 1991; Alford et al, 1994). Во всех случаях материнство рассматривали как бесспорное, анализируя только предполагаемого отца.

Относительный риск (RR) (Thomson, 1981]) вычисляли по формуле:

(a+0.5)(d+0.5) RR =-,

(b+0.5)(c+0.5)

где а - число лиц с наличием и Ь - с отсутствием данного аллеля (генотипа) среди больных (осложненных) пациентов, с и ё - число лиц, соответственно, с наличием и отсутствием данного аллеля (генотипа) среди здоровых (неосложненных) лиц. ЯЯ-1 рассматривали как отсутствие ассоциации; ЛЛ> 1 как положительную ассоциацию («фактор предрасположенности»), ЛЯ<1 - как отрицательную ассоциацию аллеля или генотипа с заболеванием («фактор устойчивости»).

Попарное сравнение частот аллелей и генотипов исследуемых полиморфных локусов у здоровых лиц и в различных группах больных проводили с помощью точного критерия Фишера. Достоверными считали различия при Р < 0.05.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Идентификационная панель.

В состав идентификационной панели вошли 14 полиморфных локусов, 6 из которых относятся к минисателлитам (VNTR) и 8 - к микросателлитам (STR). Аллели полиморфных локусов нумеровали исходя из числа содержащихся в них копий тандемных повторов, следуя рекомендациям комиссии по стандартизации номенклатуры микросателлитных локусов, которые были приняты на симпозиуме ISFH (International Society of Forensic Haemogenetics), состоявшемся в октябре 1993 г. в Венеции (Италия).

Распределение аллелей минисателлитных локусов в московской популяции. В состав идентификационной панели вошли шесть минисателлитов, распределение аллелей и генотипов которых в московской популяции исследовали на основе случайной выборки размером свыше 100 человек. Основные характеристики данных локусов суммированы в табл. 1.

Таблица 1.

Основные характеристики минисателлитных локусов, вошедших в _идентификационную панель._

Локус Хромосомная локализация Длина повтора, п.н. Число аллелей* Диапазон длин аллелей, п.н.

D1S80 1р36-р35 16 20 398-718

D1S111 lcen-q24 37 14 381-862

АРОВ 2р24-р23 15 14 660-1020

RB1 13ql4 50 9 1200-1650

IGJH 14q32 50 11 370-870

D17S5 17р13.3 70 13 170-1010

(*) для настоящего исследования

прямой праймер

5'->У ЧИСЛО

acaatgtgagtagaggagacctcacatttgaccttggaaagt повторов

tggaggaagggc tggaggagggc tccggaggaagggc 1

tggaggaagggc tggaggagggc tccggaggaagggc 2

tggaggaagggc tggaggagggc tccagaggaagggc 3

tggaggaagggc tggaggagggc tccggaggaagggc 4

tggaggaagggc tggaggagggc tccggaggaagggc 5

tggaggaagggc tggaggagggc tccggaggaagggc 6

tggaggaagggc tggaggagggc cggaggaagggc 7

tggaggaagggc tggaggagggc tccagaggaagggc 8

tggaggaagggc tggaggagggc tccggaggaagggc 9

tggaggagggc tggaggagggc tccggaggaagggcg 10

tggaggaagggc tggaggagggc tccggaggaagggc 11

tggaggaagggc tggaggagggc tccggaggaagggc 12

tggaggaagggc tggaggaaggg tcggaggaagggc 13

tggaggagggc tcaggaggaagggc 14

ggttgctcctcactctgtggt

-5'

обратный праймер

Рис. 1. Нуклеотидная последовательность амплифицированного аллеля D1S111 длиной 566 п.н.

Знание нуклеотидной последовательности позволяет классифицировать аллели VNTR и STR по числу содержащихся в них повторяющихся звеньев с возможностью однозначного межлабораторного сравнения данных без путаницы в нумерации аллелей. Для очень многих минисателлитных локусов, например, для COL2A1 (Pristley et al., 1990), АроВЗ'-VNTR (Hixson et al., 1993), RB1-VNTR (Schärfet al., 1992) показано обусловленное наличием внутренних нуклеотидных вставок и делеций непостоянство длины тандемного повтора.

Не обладая информацией о количестве повторов, содержащихся в любом из амплифицированных аллелей локуса DIS 111, мы определили нуклеотидную последовательность одного из них размером 566 п.н. (по результатам разделения в 6%-ном полиакриламидном геле) с тем, чтобы установить число тандемных повторов в данном аллеле (рис. 1).

Данная последовательность содержит 14 повторов, в основном, длиной по 37 п.н. В свою очередь, эти повторы состоят из трех субповторов. У последних размер изредка различается на 1 - 2 п.н. из-за внутренних делеций и вставок. Повтор 14, в отличие от остальных, включает только 2 субповтора. Таким образом, аллель D1S111 размером 566 п.н. содержит 14 тандемных повторов, и дальнейшая нумерация аллелей для этого локуса осуществлялась исходя из числа содержащихся в них повторяющихся единиц. Ввиду того, что непостоянство длины повторяющегося звена является обычным атрибутом минисателлитов, при определении размера аллелей принято оперировать усредненной длиной тандемного повтора. В случае D1S111 средняя длина повтора равна 37 п.н., но указывая длины аллелей с точностью до 1 п.н., мы учитываем, однако, возможность их дивергенции в пределах нескольких пар нуклеотидов внутри одной аллельной группы из-за нуклеотидных вставок и делеций в повторяющихся единицах.

1057 —

77 О ■—

612 — 495 —

392 ^ ' ' —*

345 ¿¿Ш в

^ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Ю 11 12

Рис. 2. Электрофоретическое разделение в 6%-ном ПААГ амплифицированных аллелей минисателлита рЗЗ.6. 1 и 12 — молекулярный маркер ДНК фХ17 4/Hindi; 2-11 — полный набор аллелей локуса D1S111, полученный в результате генотипироеания 10 неродственных человек. Генотипы по дорожкам: 2 — 9/15; 3 —10/16; 4 — 11/12; 5 — 12/14; 6— 13/13; 7—16/19; 8— 14/18; 9— 17/22; 10— 17/21; 11 — 14/20.

У исследованных минисателлитов обнаружено разное число вариантов генотипов - от 17 (RB1) до 68 (D1S80), что составляло от 29% (D1S111) до 52% (D17S5) от их возможного числа (рис. 2). Во всех случаях

наблюдаемое распределение генотипов подчинялось равновесию

Харди-Вайнберга (Р = 0.5110 - 0.9880 по критерию х2 и Р = 0.6660 -0.9840 по критерию в-статистики).

Таблица 2.

Частоты аллелей шести микросателлитных локусов в московской

популяции

D1S80 АРОВ D17S5

Аллель Час- Аллель Час- Аллель Час-

Номер Длина, тота Номер Длина, тота Номер Длина, тота

п.н. п.н. п.н.

16 398 0.013 26 616 0 1 170 0.041

17 414 0.024 29 661 0.043 2 240 0.103

18 430 0.249 30 676 0.003 3 310 0.147

19 446 0.021 31 691 0.038 4 380 0.356

20 462 0.026 32 706 0 5 450 0.076

21 478 0.034 33 721 0,040 6 520 0.059

22 494 0.108 35 751 0.236 7 590 0.018

23 510 0.087 36 766 0 8 660 0.047

24 526 0.269 37 781 0.327 9 730 0.068

25 542 0.053 39 811 0.070 10 800 0.062

26 558 0.034 41 841 0.068 11 870 0.012

27 574 0.024 43 871 0.008 12 940 0.009

28 590 0.032 45 901 0.028 13 1010 0.003

29 606 0.026 47 931 0.048

30 622 0.005 49 961 0.053

31 638 0.040 51 991 0.035

32 654 0.003 53 1021 0.005

33 670 0.003

34 686 0.005

36 718 0.003

Гетерозиготность 0.725 0.673 0.665

Выборка, чел. 189 199 170

IGJH D1S111 RB1

6 370 0.003 9 378 0.004 21 1200 0.040

7 420 0.109 10 415 0.033 22 1250 0.142

8 470 0.083 11 452 0.017 23 1300 0

9 520 0.363 12 489 0.154 24 1350 0.038

10 570 0,047 13 526 0.029 25 1400 0.008

11 620 0.249 14 563 0.421 26 1450 0.013

12 670 0.065 15 600 0.038 27 1500 0.562

13 720 0.005 16 637 0.096 28 1550 0.021

14 770 0.003 17 674 0.154 29 1600 0.204

15 820 0.070 18 711 0.017 30 1650 0.008

16 870 0.005 19 748 0.013

20 785 0.008

21 822 0.008

22 859 0.008

Гетерозиготность 0.731 0.650 0.583

Выборка, чел. 193 120 120

Среди исследованных минисателлитов наибольшим

числом аллелей (20) обладал локус D1S80, а наименьшим - RB1-VNTR, который насчитывал вдвое меньшее, чем у D1S80, число аллелей (табл. 2). У 4 локусов из 6 преобладали по 2 аллеля. У локусов RB1 и D1S111 наблюдали преобладание одного аллеля, особо заметное в случае RB1-VNTR, у которого доля аллеля 27 превышала 50%. По этой причине данный локус обладал наименьшей гетерозиготностыо (58.3%) среди данных минисателлитов (табл. 2).

Распределение аллелей микросателлитных локусов в московской и томской популяциях. Основные характеристики исследованных в настоящей работе микросателлитных локусов приведены в табл. 3.

Таблица 3.

Основные характеристики микросателлитных локусов, вошедших в _идентификационную панель_

Локус Хромосомная локализация Структура повтора Число аллелей* Диапазон длин аллелей, п.н.

HUMACTBP2 5qter [AAAG]„ 22 238-322

HUMF13A01 6р24-р25 [AAAG]n 9 180-230

D6S366 6q21-qter [AAAT],, 8 142-170

HUMTH01 1 Ipl 5 [AATGjn 6 179-199

HUMvWFII 12р13.3-р13.2 [ATCT]n 7 154-178

HUMCD4 12ql3 [TTTTC]„ 8 115-165

HUMCYAR04 15q21.1 [AAAT]n 7 181-205

D19S253 19р13.1 [CA]n 9 208-240

(*) для настоящего исследования

Семь из восьми исследованных микросателлитов относились к тетрануклеотидным повторам. Локус 0198253 несмотря на наличие динуклеотидного тандемного повтора [СА]П тем не менее состоял из повторяющихся единиц, включающих по два таких повтора, и его аллели различались по длине на 4, 8, 12 п.н. и т.д. (игяиЬай й а], 1995). Микросателлит НИМС04 относился к пентануклеотидным БТИ (табл. 3).

Для точной идентификации аллелей микросателлитов использовали лэддеры (аллельные "лестницы"), представляющие собой полный набор аллелей исследуемого БТЯ (рис. 3). Для синтеза лэддера объединяли амплифицированные образцы ДНК, содержащие полный спектр аллелей, разводили в 105 раз и подвергали повторной амплификации.

Частоты аллелей и генотипов 8ТЛ определяли по результатам генотипирования популяционных выборок из неродственных лиц, проживающих в Москве (более 100 человек) и Томске (75 человек). Полиморфизм локуса НЦМАСТВР2 также изучали в выборке из неродственных удэгейцев (86 человек).

У исследованных микросателлитов обнаружено

разное число вариантов генотипов - от 11 (НЦМС04) до 76 (ГОМАСТВР2), что составило от 12% (НЦМС04) до 79% (НЦМСУАЯ04) от их возможного числа. Во всех случаях наблюдаемое распределение генотипов не обнаруживало отклонений от равновесного Харди-Вайнберга (Р = 0.8020 - 1.0000 по критерию %2 и Р = 0.7350 - 1.0000 по критерию в-статистики). Это свидетельствует об отсутствии внутренней гетерогенности в исследованных выборках, а также о принципиальной пигодности данной панели локусов для прикладных исследований по идентификации личности в русской популяции. Гетерозиготность варьировала от 61.7% (НиМС04) до 87.3% (НЦМАСТВР2).

п.н

ЗОЭ

242 238

217

201

190

Рис. 3. Разделение в 12%-ном ПААГ продуктов амплифицикации локуса D19S253. 1 и 14 - маркерная ДНК (pBR322/Mspl); 2-6- генотипирование пяти неродственных человек: 2 - 5/9, 3 - 7/11, 4-7/17, 5 -13/19, 6 -15/21; 7 - аллельная «лестница»; 8 - 13 - семейный анализ, выявляющий следующие генотипы: 8 - 7/19 (отец), 9 - 5/19 (ребенок 1), 10 - 5/7 (ребенок 2), 11 - 7/17 (ребенок 3), 12 -17/19 (ребенок 4), 12- 5/17 (мать).

Наибольшее число аллелей (22) показано для локуса HUMACTBP2, наименьшее - шесть - обнаружено в случае HUMTH01 (табл. 4). У удэгейцев обнаружены низкомолекулярные аллели HUMACTBP2 длиной 238 и 242 п.н., отсутствовавшие в обеих городских выборках. В локусе HUMF13A01 найдены промежуточные по размеру аллели 14.2 и 15.2 (табл. 4), свидетельствующие о непостоянстве длины повторяющегося звена у микросателлитов, хотя такое встречается и не так часто, как у минисателлитов.

Распределение аллелей у разных микросателлитов носило различный характер. Так, у локусов HUMvWFII, HUMTH01 и HUMCYAR04 преобладали по два аллеля, а у остальных STR (кроме HUMACTBP2) - по три (табл. 4).

Таблица 4.

Частоты аллелей восьми микросателлитных локусов в московской и _томской популяциях__

Аллель Частота Аллель Частота

Номер Длина п.н. Москва Томск Номер Длина, п.н. Москва Томск

019Б253 НиМПЗАО!

5 208 0.028 0.020 3 180 0.028 0.020

7 212 0.234 0.220 4 184 0.092 0.093

9 216 0.037 0.027 5 186 0.252 0.260

11 220 0.005 0.013 6 190 0.280 0.293

13 224 0.014 0.007 7 194 0.271 0.271

15 228 0.089 0.087 8 198 0.018 0.027

17 232 0.229 0.280 11 210 0.009 0.007

19 236 0.234 0.260 14.2 226 0.028 0.020

21 240 0.131 0.087 15.2 230 0.023 0.013

Гетерозиготность 0.794 0.867 Гетерозиготность 0.679 0.667

Выборка, чел. 102 75 Выборка, чел. 102 75

ШМАСТВР2 ШМСУАШМ

17 246 0.023 0.028 5 181 0.386 0.360

18 250 | 0.027 0.066 | 6 185 0.084 0.080

19 254 0.077 0.104 7 189 0.074 0.087

20 258 0.050 0.104 8 1»3 0.089 0.087

21 262 0.032 0.075 9 197 0.035 0.020

22 266 0.059 0.066 10 201 0.267 0.280

23 270 0.050 0.104 11 205 0.064 0.087

24 274 0.032 0.038 Гетерозиготность 0.743 0.733

25 278 0.027 0.019 Выборка, чел. 101 75

26 282 ' 0.045 0.019 НиМСБ4

27 286 0.064 0.019 4 115 0.020 0

28 290 0.109 0.000 6 125 0.010 0.007

29 294 0.068 0.009 7 130 0.466 0.473

30 298 0.032 0.028 8 135 0.265 0.273

31 302 0.055 0.047 9 140 0.005 0.013

32 306 0.100 0.123 12 155 0.196 0.200

33 310 0.086 0.085 13 160 0.025 0.027

34 314 0.045 0.038 14 165 0.015 0.007

35 318 0.014 0.019 Гетерозиготность 0.657 0.627

36 322 0.005 0.009 Выборка, чел. 102 75

Гетерозиготность 0.873 0.830 БбБЗбб

Выборка, чел. 110 53 10 142 0.010 0.007

НЦМТН01 11 146 0.059 0.060

6 179 0.007 0.011 12 150 0.324 0.307

7 183 0.144 0.144 13 154 0.265 0.233

8 187 0.116 0.156 14 158 0.078 0.093

9 191 0.199 0.228 15 162 0.083 0.107

10 195 0.377 0.372 16 166 0.172 0.180

11 199 0.158 0.089 17 170 0.010 0.013

Гетерозиготность 0.814 0.800 Гетерозиготность 0.644 0.617

Выборка, чел. 102 75 Выборка, чел. 90 73

Таблица 4 (продолжение)

Аллель Частота Аллель Частота

Номер Длина Москва Томск Номер Длина, Москва Томск

п.н. п.н.

HUMvWFII

9 154 0.076 0.093 14 174 0.063 0.047

10 158 0.089 0.087 15 178 0.020 0.007

11 162 0.371 0.433

12 166 0.308 0.273 Гетерозиготность 69.5 78.7

13 170 0.073 0.060 Выборка, чел. 142 75

Сравнительный анализ распределения аллелей в разных популяциях.

Частоты аллелей микросателлитов в московской и томской популяционных выборок были близки друг к другу, что видно из табл. 4. Сходство характеров распределения аллелей по целому ряду локусов для таких достаточно удаленных друг от друга популяций позволяет сделать заключение, что при вероятностных расчетах при идентификации личности можно достаточно уверенно экстраполировать аллельные частоты, определенные для одной репрезентативной выборки, на все русскоговорящее население без риска существенно завысить потенциал индивидуализации.

Для всех изученных полиморфных локусов был проведен сравнительный анализ частотного распределения аллелей с аналогичными данными по зарубежным популяциям. Рассмотрим это на примере микросателлитного локуса ОбЭЗбб (рис.4).

0,5 0,4 -

50,з

§0.2 -х

0,1

9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 ' Номер аллеля

i I ЩМосква (п = 102) ШТомск (л = 75)

i I ^Европеоиды CLUAfn = 170) ВНегры США (п = 178) I @Монголоиды США (п = 68)

Рнс.4. Распределение аллелей локуса D6S366 в различных популяциях. Данные по зарубежным популяциям взяты у Hammond et al, 1994.

Во всех трех популяциях европеоидов (москвичи, томичи, белые американцы) преобладали одни и те же аллели (12, 13 и 16), но у американцев присутствовал редкий аллель 18, не обнаруженный в российских выборках (Hammond et al, 1994). У американцев африканского и азиатского происхождения обнаружен низкомолекулярный аллель 9, отсутствующий у европеоидов (рис. 4). У негров США преобладали три аллеля (13, 14 и 15), а у североамериканских монголоидов - два (12 и 13). При этом у последних найдено всего лишь 6 аллелей (Hammond et al, 1994).

Европеоиды США fl-

Москва

Томск

Q-0—

0.8970 5.3556

(0.9910) (0.6350)

0.8990 5.5068

(0.9910) (0.5610)

(Р)

G-статнстика

(Р)

Монголоиды США

Негры США

-О—о

27.2829 29.5871

(0) (0)

29.3376 38.3465

(0) (0)

Рис. 5. Сравнительный анализ распределения аллелей локуса БбБЗбб в различных популяциях.

Как видно из рис. 5, различия в распределении аллелей локуса Б68366 в популяциях европеоидов носят незначительный характер. У представителей других рас (негроиды и монголоиды) частоты аллелей БбБЗбб, напротив, существенно отличаются от подобных значений в московской популяции. Для других полиморфных локусов за некоторыми исключениями также было характерным отсутствие достоверных различий между популяциями одной расовой принадлежности (европеоиды), тогда как при переходе к другим расам эти различия как правило носили заметный характер. Следует отметить, что русские отличаются от североамериканских негров и монголоидов в большей степени, чем европеоиды США (рис. 5). Это различие, очевидно, отражает процесс обмена генами между американскими популяциями.

Пригодность исследованных полиморфных локусов для идентификационного анализа и характеристика идентификационной паиели в целом. Обладая разным числом аллелей и информативностью, изученные нами полиморфные локусы, следовательно, обладали разной разрешающей силой, которая характеризуется величиной рМ (табл. 5).

Среди минисателлитов наибольшей разрешающей силой (наименьшим значением рМ) обладал локус D1S80, среди микросателитов -HUMACTBP2. Эти же локусы были наиболее полиморфными среди изученных нами, насчитывая по 20 аллелей.

Объединенное значение рМ для шести входящих в панель минисателлитов равно 1.03-10"7. Это гарантирует точную идентификацию личности в популяции размером 9.65 млн. человек, что примерно соответствует размерам московской популяции. Комбинированная величина рМ для восьми микросателлитов составляет 5,4-10"10. Это гарантирует точное генотипирование для популяции размером до 1.93 млрд. человек, что существенно превышает численность населения России. Данная величина сопоставима с разрешающей способностью 4-6 монолокусных зондов (Risch & Devlin, 1992) или мультилокусного зонда 33.15 (Jeffreys et al, 1985). Объединенное значение рМ для всей панели равно 5.36-10'17. Среднее значение ожидаемой гетерозиготности составляет 77.8% (табл. 5).

Таблица 5.

Значения критериев полиморфизма 14 полиморфных локусов в популяции

Москвы.

Локус рМ W PIC Hobs нехр

Минисателлиты

D1S80 0.031 1.541 0.653 0.725 0.866

D17S5 0.049 1.115 0.660 0.665 0.821

АроВЗ'-VNTR 0.053 1.115 0.624 0.673 0.818

D1S111 0.081 0.935 0.547 0.650 0.765

IgH5'-VNTR 0.085 0.871 0.544 0.674 0.769

RB1-VNTR 0.187 0.503 0.417 0.583 0.622

Суммарно 1.03-10"7 0.1013 0.574 0.662 0.777

Микросателлиты

HUMACTBP2 0.008 1.411 0.887 0.873 0.935

D19S253 0.062 0.842 0.681 0.794 0.811

D6S366 0.081 0.762 0.626 0.814 0.783

HUMF13A01 0.087 1.005 0.427 0.679 0.774

HUMCYAR04 0.094 0.724 0.565 0.743 0.754

HUMTH01 0.096 0.633 0.658 0.644 0.756

HUMvWFII 0.103 0.678 0.587 0.695 0.747

1IUMCD4 0.160 0.653 0.198 0.657 0.673

Суммарно 5.17-10-'° 0.839 0.576 0.737 0.779

Панель в целом 5.36-10'17 0.914 0.576 0.705 0.778

В табл. 5. не указан биаллельный локус половой принадлежности в гене амелогенина, которым была дополнена наша панель. Он предназначен для определения половой принадлежности тестируемого образца ДНК. Метод ПЦР-детекции амилогенина весьма быстр и прост: с использованием общей пары праймеров амплифицируются два фрагмента

длиной 106 и 112 п.н., специфичные соответственно к Х- и Y-хромосомам. Амплификация данного локуса успешно проходила даже в присутствии небольших (менее 10 пкг) количеств геномной ДНК человека й при наличии в значительной мере деградированной ДНК, выделенной нами из пятен крови 2-х летней давности.

Помимо амелогенина, все вошедшие в состав панели полиморфные локусы были испытаны на эффективность амплификации в зависимости от количества и качества (степени деградации) тестируемой ДНК, а также от ее происхождения (использовали ДНК из крови, пятен крови, слюны и корней волос). Наилучшие результаты при анализе малых (10-20 пкг) количеств ДНК и частично деградированной ДНК из пятен крови были получены среди минисателлитов для локусов D1S80 и АРОВ (в меньшей степени) и всех микросателлитов, за исключением HUMACTBP2. Тестирование деградированной ДНК выявило заметное преимущество микросателлитных локусов над минисателлитами, очевидно, по' причине большей степени сохранности первых. В условиях дефицита и плохого качества анализируемой ДНК при использовании локусов D1S111, RB1, D17S5 и HUMACTBP2 наблюдалась предпочтительная амплификация низкомолекулярных аллелей по сравнению с высокомолекулярными в том случае, если эти аллели значительно отличались по длине. Это приводило к ошибочной идентификации заведомо гетерозиготного генотипа как гомозиготного ("ложная гомозиготность") и тем самым снижало практическую ценность данных локусов для идентификационного анализа. Таким образом, по результатам проверки можно сделать вывод о пригодности всех вошедших в состав панели локусов для разрешения спорного отцовства, когда исследователь имеет дело с достаточным количеством ДНК хорошего качества, получаемой из Цельной крови. При генетической экспертизе сложных криминалистических случаев в условиях дефицита, существенной деградации и загрязнения идентифицируемой ДНК посторонними примесями лучше использовать микросателлитные локусы плюс минисателлиты D1S80 и АРОВ.

В состав многих зарубежных идентификационных панелей входят высокополиморфные динуклеотидные микросателлиты, содержащие свыше 10 аллелей (Urquhart et al, 1995; Zupanic et al, 1998; Carofano et al, 1998). При создании микросателлитной тест-системы мы отдавали предпочтение тетрануклеотидным локусам, поскольку электрофоретически разделять аллели таких STR проще, чем аллели динуклеотидных повторов, и для их идентификации не требуется использование специального дорогостоящего оборудования типа автоматического секвенатора или капиллярного электрофореза. К тому же синтез первых проходит более чисто, без эффекта «раздвоения полос», имеющем место при амплификации димерных мотивов. Поэтому точность идентификации аллелей при использовании тетрануклеотидных локусов выше, чем при применении динуклеотидных микросателлитов.

Многие полиморфные локусы, входящие в тест-систему, имеют одинаковые реакционные и температурные условия амплификации,

поэтому могут быть амплифицированы одновременно и даже в одной пробирке. Это еще один выгодный момент, характеризующий разработанную нами панель.

Данная панель предложена для проведения генетической экспертизы и идентификации личности на территории РФ. В качестве примера практического использования этой тест-системы приведен анализ одного из случаев разрешения спорного отцовства.

Разрешение спорного отцовства. Существуют альтернативные гипотезы F и F). Первая утверждает, что предполагаемый отец является истинным биологическим отцом; гипотеза Fi утверждает противоположное. После анализа отцовской ДНК вероятность P(F/C) рассчитывается согласно теореме Байеса следующим образом:

P(F/C) = P(F) х P(C/F)/ P(F) x P(C/F) + P(F,) x P(C/ F,),

где С означает, что предполагаемый отец имеет весь набор аллелей, который бы передал анализируемому ребенку истинный биологический отец («отцовский» набор).

Полагая в данном алгоритме расчета равенство вероятностей (P(F) = P(Fi)) a priori (т.е. до анализа ДНК) и полную невозможность мутаций (т.е. P(C/F) = 1), получаем

P(F/C) = 1/1 + Р(С/ F|).

Вероятность P(C/Ft) численно равна произведению частот встречаемости аллелей «отцовского» набора по всем исследованным локусам.

Пример экспертизы спорного отцовства с использованием пяти минисателлитных локусов показан на рис. 6. В результате анализа выявлены следующие генотипы: D17S5 12/12 (О), 9/12 (Р), 6/9 (М);

IgH5'-VNTR 10/10 (О), 10/16 (Р), 8/16 (М);

АроВЗ'-VNTR 37/37 (О), 37/43 (Р), 41/43 (М);

D1S80 26/31 (О), 18/26 (Р), 18/23 (М);

D1S111 13/16(0), 12/16 (Р), 12/12 (М).

Вероятность P(C/Fi), численно равная произведению частот аллелей, составляющих "отцовскую" панель по всем исследованным локусам, равна:

P(C/F,) = p(D17S5/a_i.l2) ' p(IgH5'-VNTRAw.l0) ' р(АроВЗ'-УКШал.37) ' p(DlS80Aui.26) p(DlSl 11/ал.116) = 0.019 0.065 0.373 0.053 0.133 = 3.2 10"6.

Вероятность P(F/C) истинности отцовства: P(F/C) = 1/1 + P(C/F,) = 1/1 + 3.2 Ю-6 = 0.9999968, или 99.9997%.

Таким образом, важно обладать экспериментальными данными о частотах аллелей применяемых в генетической экспертизе полиморфных локусов по конкретной популяции, чтобы на основании этих данных проводить вероятностные расчеты по результатам идентификации личности и при разрешении спорного отцовства в группах населения, где был проведен популяционный анализ используемых вариабельных локусов. С помощью входящих в состав идентификационной панели локусов мы проанализировали 40 случаев спорного отцовства. В каждом случае использовали минимум пять полиморфных локусов. Отцовство не исключалось в 90% случаев. Минимальное значение вероятности истинности отцовства составляло 96.9% (рассчитывалось на основе алгоритма Байеса для панели из 6 локусов). В четырех случаях исключения отцовства отсутствие общих аллелей у предполагаемого отца и ребенка было показано по трем локусам при неинформативности двух или трех других.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

Рис. 6. Анализ семьи по пяти минисателлитным локусам (разделение продуктов амплификации в 6%-ном пояиакриламидном геле): 017Б5 (дорожки 1-3), Н5'ШТЯ (4-6), АроВЗ'ШТЯ (8-10), 01Б80 (12-14) и 018111 (16-18) в экспертизе спорного отцовства. О - предполагаемый отец, М-мать, Р-ребенок. 7 - маркерная ДНК (фХ174/НтсП), 11 и 15-ачлельные "лестницы" для АроВЗ 'УНТЕ, (аллели 29, 31, 33, 35, 37, 39, 43, 45, 47, 51) и 01580 (аллели 18, 20, 22, 25, 26, 28, 29, 31) сответственно.

Ассоциативный анализ мультнфакторных заболеваний

Базедова болезнь. ДНК 78 больных Базедовой болезнью, или диффузно-токсическим зобом (ДГЗ) (возраст 39.3 ± 11.6 лет, длительность заболевания 4.1 ± 2.8 лет, мужчины/женщины 14/64) исследовали по шести полиморфным маркерам. Это тетрануклеотидные микросателлиты 0682414 и Б681271, расположенные в локусе НЬА, минисателлит (УЫТ11) в интроне 2 гена ИЛКЫ и мутации, приводящие к аминокислотным заменам А1а17ТЪг, Рго52ТЪг и 116ОН в генах СТЬА4, ТБШ и ЬМР2 соответственно.

Выбор полиморфных маркеров 0682414 и 0681271, расположенных в области НЬА (рис. 7), был основан на том, что находящиеся в ней гены главного комплекса гистосовместимости класса II вовлечены в развитие многих аутоиммунных патологий, к которым относится и Базедова болезнь, поражающая щитовидную железу.

Ш.АРС?А1 НЬАРрВ! ШАРС;ВЗ НЬАР()А2

1)651548 »681271 ЮбЯШ! ГЬб52414

37.401 37.392

37/450

37.508

37565

"37.625

37.680

сМ

37.715

37.449

37.492

37555 37597 37.623 37.673 37.701

Рис. 7. Положение полиморфных маркеров 063127] и £>682414 относительно генов Н1А-П0А1 и &0В1. Внизу приведена усредненная по полу шкала генетического расстояния в сантилюрганидах (сМ), начиная от д-конца хромосомы 6.

Таблица 6. Сравнительный анализ частот аллелей локуса 13682414 и Р631271 у здоровых доноров и больных ДТЗ._

Аллель Частота Р

Номер Длина, п.н. Ко1ггроль (п=153) | ДТЗ (п=78)

Б682414

5 160 0.079 0.006 0.11 0.00035

6 164 0.139 0.038 0.27 0.00043

7 168 0.046 0.096 2.18 0.03044

8 172 0.089 0.173 2.13 0.00652

9 176 0.175 0.237 1.46 нд

10 180 0.199 0.250 1.35 нд

И 184 0.156 0.154 0.99 нд

12 188 0.106 0.026 0.25 0.00131

Аллель Частота Р Ш1

Номер Длина, п.н. Контроль (п=101) ДТЗ (п=78)

0681271

10 184 0.015 0.083 5.36 0.00199

11 188 0.054 0.083 1.57 НД

12 192 0.847 0.821 0.83 НД

13 196 0.084 0.013 0.17 0.00178

В локусе 0681271 обнаружено 4 аллеля, в локусе 0682414 - 8. У обеих локусов имелись достоверные различия в распределении аллелей между группами больных Базедовой болезнью и здоровыми донорами (табл. 6). У больных достоверно повышено содержание аллелей 7 и 8 локуса 0682414 и аллеля 10 в случае Б681271. Доля аллелей 5, 6, 12 (0682414) и 13 (0681271), напротив, существенно снижена у больных по сравнению со здоровыми донорами.

Между данными группами также обнаружены достоверные различия и в распределении генотипов обоих микросателлитов. Так для маркера 0681271 показано существенное увеличение встречаемости генотипа 10/12 у больных ДТЗ (15.4% против 3.0% в контрольной группе, Р = 0.00326, Ш1 = 5.29), тогда как частота генотипа 12/13 у больных достоверно понижена (2.6% против 10.9%, Р = 0.02906, М1 = 0.26). Для микросателлита Б682414 отмечено достоверное увеличение содержания гетерозигот 8/9 (7.7% против 1.9%, Р = 0.04194, = 3.93), 10/11 (7.7% против 1.3%, Р = 0.01920, = 5.54), 8/9 (10.3% против 1.3%, Р = 0.00306, Ю* = 7.45) и 7/8 (8.3% против 0%, Р = 0.03752, ЛЯ = 14.51) у больных Базедовой болезнью по сравнению с контролем. Доля генотипов 6/11 (1.3% против 1.7%, Р = 0.03229, ИИ = 0.22), 5/10 (0% против 5.8%, Р = 0.02260, Ш1 = 0.10) и 6/10 (0% против 7.7%, Р = 0.00612, ИИ = 0.07), наоборот, снижена.

Таким образом, оба полиморфных маркера связаны с развитием ДТЗ в московской популяции. Их ассоциация с ДТЗ также свидетельствует о вовлеченности области, занимаемой генами НЬА в развитии данной патологии. Имеются многочисленные данные зарубежных исследователей, указывающие на выраженную связь между различными генами главного

комплекса гистосовместимости и аутоиммунным поражением

щитовидной железы. При этом главным маркером риска развития Базедовой болезни среди генов НЬА является гаплотип В1Ш!*0304-0дв1*02-0дл1*050! (Heward ега1, 1998).

К сожалению, нет данных о сцепленности аллелей маркеров 0682414 и 06Б1271 с генами НЬА. В дальнейшем было бы интересно провести подобный анализ тех же больных непосредственно по генам НЬА-ОС? и НЬА-ОЯ с тем, чтобы определить как ассоциацию с заболеванием конкретных аллелей НЬА, так и группы сцепления последних с определенными аллелями локусов 0681271 и 0682414.

Также был проведен ассоциативный анализ Базедовой болезни с использованием биаллельных полиморфных маркеров, возникших в результате аминокислотных замен и расположенных в кодирующей области ряда генов-кандидатов. В качестве последних взяли ген СТЬА4, кодирующий эстеразу 4 - специфический поверхностный антиген активированных цитотоксических Т-лимфоцитов, ген субъединицы 2 большой мультифункционалыюй протеосомы (ЬМР2), которая участвует в процессинге антигенов, и ген рецептора к тиреостимулирующему гормону (Т8Ш1), молекулы которого служат главной мишенью связывания аутоантител при аутоиммунном поражении щитовидной железы.

Таблица 7.

Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов полиморфных маркеров Alai 7Thr (ген CTLA4), R60H (LMP2) и Pro52Thr (TSHR) у _здоровых доноров и больных ДТЗ._

Генетический Частота RR Р

маркер

Ген CTLA4 Контроль (п=93) ДТЗ (а = 78)

Аллель Ala 0.527 0.782 3.19 <0.0001

Аллель Thr 0.473 0.218 0.31 <0.0001

Генотип Ala/Ala 0.323 0.641 3.69 0.00003

Генотип Ala/Thr 0.409 0.282 0.57 нд

Генотип Thr/Thr 0.269 0.077 0.24 0.00087

Ген LMP2 Контроль (п=112) ДТЗ(п = 78) RR Р

Аллель Н 0.763 0.679 0.66 НД

Аллель R 0.237 0.321 1.52 НД

Генотип НН 0.589 0.513 0.74 НД

Генотип RH 0.348 0.333 0.94 НД

Генотип RR 0.062 0.154 2.64 0.03540

Ген TSHR Контроль (п=90) ДТЗ(п = 78) RR Р

Аллель Pro 0.744 0.75 1.03 НД

Аллель Thr 0.256 0.25 0.97 НД

Генотип Pro/Pro 0.556 0.590 1.15 НД

Генотип Pro/Thr 0.378 0.321 0.78 НД

Генотип Thr/Thr 0.067 0.090 1.36 НД

Полиморфизм данных генов изучали, расщепляя продукты ПЦР, содержащие вариабельный участок, соответствующими рестриктазами. Так, замену А1а17ТЬг в гене СТЬА4 типировали с помощью рестриктазы

Mbol (аллель Ala не расщеплялся), R60H (LMP2) - с использованием Hin6I (аллель R оставался нерасщепленным), Pro52Thr (TSHR) - в присутствии фермента Psyl (не расщеплялся аллель Thr).

Сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов данных полиморфных маркеров в группах больных ДТЗ и здоровых лиц выявил яркую связь гена CTLA4 с заболеванием, при этом аллель Ala высупал в качестве генетического фактора риска развития Базедовой болезни (табл.

7). Также обнаружена менее выраженная ассоциация между заменой аргинина (R) на гистидин (Н) в кодоне 60 гена LMP2 и ДТЗ, при этом гомозиготное носительство аргинина (генотип RR) связано с повышенным риском развития Базедовой болезни. Не было показано ассоциации между полиморфным участок Pro52Thr в гене TSHR и патологией в московской популяции.

Полученные нами данные находятся в соответствии с результатами многочисленных иследований, показавшими не только ассоциацию, но и сцепление гена CTLA4 с развитием аутоиммунного тиротоксикоза в целом ряде зарубежных популяций (Yanagawa et al, 1995; Kotsa et al, 1997; Sale et al, 1997; Donner et al, 1997; Yanagawa et al, 1997; Awata et al, 1998; Vaidiya et al, 1999). Зарубежными авторами также отмечена предрасполагающая роль аллеля R гена LMP2 в патогенезе не только Базедовой болезни (Heward et al, 1999), но и других аутоиммунных заболеваний (Deng et al, 1995; Undlien et al, 1997). Ассоциативный анализ полиморфного маркера Pro52Thr в гене TSHR свидетельствует о том, что этот вариабельный участок, по всей видимости, не играет существенной роли в прогресссировании ДТЗ [Takeshita et al, 1995; Pearce et al, 1997; Fuhrer et al, 1998], a с развитием данной патологии сцеплены другие полиморфные маркеры в гене рецептора, и прежде всего динуклеотидный микросателлит в интроне 7 [Sale et al, 1997; Tomer et al, 1997].

Базедова болезнь нередко сопровождается воспалительными процессами, опосредуемыми интерлейкином-1 и прочими цитокинами. Поэтому в качестве гена-кандидата мы рассмотрели ген антагониста рецептора интерлейкина-1 (IL1RN) с полиморфным минисателлитом, локализованном во 2-м интроне (Tarlow et al, 1993). Обнаружено 5 аллелей, причем содержание аллеля 2 достоверно повышено у больных ДТЗ (табл.

8). Достоверный характер также носило возрастание у больных доли генотипа 2/4 и снижение встречаемости гомозигот 4/4. Это указывает на наличие ассоциации между данным геном и развитием Базедовой болезни в московской популяции.

Результаты аналогичных исследований роли гена IL1RN в других популяциях носят противоречивый характер: показанная ранее связь с Базедовой болезнью у британцев [Blakemore et al, 1995] не была подтверждена более поздними исследованиями в США (Cuddihy & Bahn, 1996) и Бельгии (Muhlberg et al, 1998). По всей видимости, ген антагониста вряд ли играет ключевую роль в патогенезе ДТЗ и не является строгим маркером этого заболевания. Между тем многочисленные исследования показывают, что аллель 2 связан с повышенным риском очень многих

аутоиммунных заболеваний и воспалительных процессов (de la Concha et al, 1997; Perder et al, 1998; Schrijver et al, 1999; Tountas et al, 1999; Tjerrstrom et al, 1999; Francis et al, 1999]..

Таблица 8.

Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов минисателлита в гене

Генетический маркер Частота RR Р

Номер Длина, п.н. Контроль (п=91) 1 ДТЗ (п=78)

Аллели

2 240 0.280 0.385 1.60 0.02739

3 325 0.033 0.019 0.62 НД

4 410 0.615 0.564 0.81 нд

5 495 0.044 0.019 0.47 нд

6 580 0.027 0.013 0.52 нд

Генотипы

2/2 240/240 0.066 0.051 0.79 нд

2/3 240/325 0.033 0.038 1.17 нд

2/4 240/410 0.374 0.615 2.65 0.00139

2/5 240/495 0.011 0.013 1.17 нд

2/6 240/580 0.011 0 0.38 НД

3/4 325/410 0.033 0 0.16 НД

4/4 410/410 0.363 0.231 0.53 0.04460

4/5 410/495 0.066 0.026 0.43 НД

4/6 410/580 0.033 0.026 0.83 НД

5/6 495/580 0.011 0 0.38 НД

Сахарный диабет. Различают два основных типа сахарного диабета (СД). Диабет 2-го типа, как правило, поражает пожилых людей и в 10 раз более распространен, чем диабет 1-го типа. Последний, напротив, встречается у детей и молодых людей и является ярко враженным аутоиммунным заболеванием. Поэтому вполне обоснованным выглядел выбор нами в качестве кандидатов генов главного комплекса гистосовместимости класса II HLA-DQA1 и DQB1, продукты которых участвуют в инициации иммунного ответа.

Во 2-м экзоне этих генов отмечены множественные нуклеотидные замены, в свою очередь, приводящие к аминокислотным заменам. Ранее показано, что кодон 52 гена DQA1 и триплет 57 в DQB1 имеют важное значение в определении генетической предрасположенности/устойчивости к СД 1-го типа. Аллели DQA1, кодирующие Arg52, и DQB1, кодирующие в положении 57 любую аминокислоту, кроме Asp (ne-Asp57), повышают риск развития диабета (аллели S). Напротив, аллели с He-Arg52 и Asp57 связаны с пониженным риском (аллели Р) [Khalil et al, 1990].

Мы исследовали распределение аллелей этих генов в трех группах лиц: здоровые (n = 113, мужчины/женщины = 78/35, возраст 27.3 ± 9.5 лет), больные диабетом 1-го типа (n = 113, мужчины/женщины = 49/64, возраст 24.6 ± 8.4 лет, длительность диабета 14.4 ± 6.5 лет) и больные СД 2-го типа

(п = 99, мужчины/женщины = 71/28, возраст 53.5 ± 7.7 лет, длительность диабета 10.8 ± 4.5 лет). Сравнительный анализ показал высокодостоверное увеличение содержания предрасполагающих (Б) аллелей 0<ЗА1 и ОС)В 1 у больных диабетом, в то время как доля предохраняющих (Р) аллелей существенно понижалась (табл. 9).

Таблица 9.

Распределение частот аллелей гена НЬА-О0,А1 и Г>0В1 у здоровых

доноров и у больных диабетом.

Аллель Контроль in =113) СДтипа 1 (п = 113) СД типа 2 (п = 99) Р (Фишер)

Частота Частота RR Частота - RR Контроль-СД типа 1 Контроль-СД типа 2

HLA-DQA1

Р 0.541 0.159 0.17 0.409 0.59 <0.00001 <0.00001

S 0.459 0.841 6.16 0.591 1.70 <0.00001 <0.00001

HLA-DQB1

Р 0.541 0.155 0.16 0.334 0.43 <0.00001 0.00001

S 0.459 0.845 6.36 0.666 2.35 <0.00001 0.00001

Таким образом, гены HLA обнаруживают яркую ассоциацию с диабетом 1-го типа в московской популяции, что соответствует результатам многочисленных исследований в зарубежных популяциях европеоидов (Morel et al, 1988, Khalil et al, 1990; Vallet-Colom et al, 1990; Reijonen et al, 1991; Gutierrez-Lopez et al, 1992). Также нами показана достоверная связь между генами DQA1 и DQB1 и СД 2-го типа, хотя и менее выраженная, чем с диабетом 1-го типа. Это свидетельствует о том, что гены HLA могут играть определенную роль в становлении и развитии диабета '2-го типа, хотя это заболевание имеет иные механизмы патогенеза, чем 1-й тип. В ряде исследований показана связь между этими генами и СД 2-го типа (Ghabanbasani et al, 1995; Forsblom et al, 1998). Однако, скорее это касается не классического диабета 2-го типа, а его разновидности, именуемой "диабетом 1 1/2", которая внешне обладает характерными чертами заболевания, но при этом у больных отмечено наличие противоостровковых антител и вялотекущего аутоиммунного процесса (Juneja & Palmer, 1999; Tuomi et al, 1999).

У больных СД 1-го типа наиболее часто встречались генотипы DQA1*0301-DQB 1*0302/ DQA1*04*-DQB 1*0201 (41%, контроль - 4%, Р < 0.00001, RR 14.59). Это показано и в зарубежных популяциях европеоидов, у которых данный генотип выступает в качестве основного фактор риска патологии (Buisch et а!, 1990; Vicario et а), 1992). Следующими по распространенности являлись варианты *01*-*0501/ *0301-*0302 (8% против 2% в контроле, Р = 0.02119, RR 4.35) и *0301-*0302/ *0301-*0302 (6%, в контроле не встречался, Р = 0.00555, RR 17.11). Содержание этих генотипов, включающих четыре «предрасполагающих» аллеля (SS-SS), достоверно выше у больных диабетом типа 1 по сравнению с контролем. При этом они обладают наибольшими значениями

М1 по сравнению с остальными вариантами генотипов, и это говорит о том, что данные комбинации аллелей вносят основной вклад в риск развития СД 1-го типа в популяции Москвы.

Рис. 8. Строение антиген-связывающего участка гетеродгшерной молекулы.

Известно, что белковые продукты генов DQA1 (а-цепи) и DQB1 (ß-цепи) вступают друг с другом во взаимодействие, образуя молекулы так называемых гетеродимеров (рис. 8), которые затем образуют комплекс с процессированным антигеном и рецептором Т-лимфоцитов (стадия распознавания антигена и инициации иммунного ответа) (Nepom et al, 1987). Гаплогенотипы SSSS способны к образованию четырех гетеродимеров, все из которых будут «диабетогенными». Различные варианты, образованные тремя аллелями S и одним - Р, дадут две «диабетогенных» молекулы из четырех возможных, а комбинация PS/PS -одну из четырех.

Из табл. 10 видно, что по мере увеличения доли предрасполагающих молекул в составе гетеродимера риск (RR) развития диабета растет. Особо заметный скачок в величине RR наблюдался у больных СД 1-го типа при переходе от генотипов DQA1/DQB1 SP/SS (3.22) и SS/PS (1.44), способных к образованию двух «диабетогенных» гетеродимеров из четырех возможных, к гомозиготам SS/SS (23.13), у которых все гетеродимеры являются «диабетогенными». Напротив, комбинации, при которых невозможно образование таких комплексов молекул класса II, характеризуются наименьшими значениями RR (0.02-0.16). Аналогичная, хотя и менее выраженная тенденция наблюдается и при 2-м типе диабета. Таким образом, при увеличении «дозы» предрасполагающих аллелей S в

генотипе DQA1/DQB1 возрастает риск развития СД, достигая максимальной величины у гомозигот SS/SS (табл. 10).

Таблица 10.

Распределение «предрасполагающих» (Б) и «предохраняющих» (Р) молекул _DQ в выборке из здоровых индивидов и среди больных СД._

HLA-DQ Возмож- Конт- СД типа 1 СД типа 2 P (Фишер)

ные гете- роль (n = 113) (n = 99) •

ромеры (n=113) Контроль Контроль

а р DQ n(%) n(%) RR n(%) RR СД тип 1 СД тип 2

S S SS SS 5 59 23.13 15 3.89 <0.00001 0.00455

S S SS SS (4.1) (53.8) (15.2)

S S SS SS 10 26 3.22 19 2.57 0.00149 0.01453

Р S PS PS (8.3) (21.4) (19.2)

S S SS SP 14 18 1.44 17 1.57 НД НД

S р SS SP (11.6) (15.9) (17.2)

р S PS PP 24 8 0.32 19 0.96 0.00356 НД

S р SS SP (19.8) (7.1) (19.2)

S р PS PS 10 1 0.14 10 1.25 0.00685 НД

S р PS PS (8.3) (0.9) (10.1)

р S PS PS 9 1 0.16 5 0.69 0.01257 НД

р S PS PS (7.4) (0.9) (5.1)

р S PS PP 20 0 0.02 8 0.46 <0.00001 0.04612

р р PS PP (16.5) (0) (8.1)

S р SP SP 19 0 0.02 5 0.31 <0.00001 0.00909

р р PP PP (15.4) (0) (5.1)

р ' р PP PP 10 0 0.05 1 0.16 0.00113 0.01216

р р PP PP (8.3) (0) (0.9)

О наличии «дозового» эффекта аллелей S свидетельствуют также результаты аналогичных исследований среди больных СД 1-го типа в других популяциях (Khakil et al, 1990, 1992; Gutierrez-Lopez et al, 1992; Vicario et al, 1992); у более чем у 95% пациентов с СД 1-го типа ' образуется не менее одного «диабетогенного» гетеродимера. Максимальный риск заболевания имеется в случае гомозигот DQA-Arg52 /DQB-He-Asp57 (Khalil et al, 1992). Даже наличие одного "диабетогенного" гетеродимера достоверно усиливает предрасположенность к заболеванию (Khalil et al, 1990).

В организме больных сахарным диабетом отмечен неконтролируемый рост содержания свободных радикалов кислорода и продуктов перекисного окисления вследствие развития окислительного стресса и ослабления антиоксидантной защиты. Поэтому мы исследовали возможную связь с патологией генов двух основных антиоксидантных ферментов - каталазы (CAT) и Mn-зависимой митохондриальной супероксиддисмутазы (SOD2). Супероксиддисмутаза инактивирует супероксидный радикал кислорода (О*2) с образованием перекиси

водорода и кислорода. Перекись водорода (Н2О2) далее разлагается с участием каталазы до воды и свободного кислорода (рис. 9).

Огт-

Fe+ +

SOO НгОз

2RSH

•NO

ONOO" ONOOH

■•ОН" +N02

[ CAT

НгО -*-' ^ RSSn •

Рис. 9. Механизмы цитотоксичности, опосредованные О'2

Примечания: NX - любая азотсодержащая молекула; RSH -серусодержащая группа или молекула; CAT - каталаза; SOD -супероксиддисмутаза.

В ассоциативном анализе использовали два микросателлитных маркера (D11S907 и D11S2008), расположенные примерно в 2.0 и 2.2 сМ от гена CAT по направлению к q-концу хромосомы 11 (рис. 10).

ST2

-Н-

CHRM2 CAT

—I—ь-

D11S2008 D11S907

СМ

34310 34525 36.596 36.775

34.759

Рис.10. Положение полиморфных маркеров 0118907 и 182008 относительно гена каталазы (СЛТ). Обозначено положение генов холинэргического мускариновогорецептора 2 (СНЛМ2) и супрессора трансформации 2 (8Т2). Внизу приведена шкала генетического расстояния в сантишрганидах (сМ) начиная от д-конца хромосомы 11.

Достоверные различия в частотах аллелей между больными диабетом-и здоровыми донорами были показаны для обоих маркеров. В обеих диабетических группах наблюдали заметное увеличение содержания аллеля 16 локуса 0118907 на фоне уменьшения доли аллеля 18. У больных диабетом 2-го типа также было достоверно повышена частота аллелей 15 и 20 этого динуклеотидного микросателлита (табл. 10). В обеих группах больных по сравнению с контролем также существенно возрастала доля

гетерозигот 16/18 и 16/19, тогда как встречаемость генотипов 17/18 и 18/18 локуса D11S907, наоборот, достоверно уменьшалась. Кроме того, у пациентов с СД 2-го типа достоверный характер носило снижение содержания гетерозигот 18/19 и увеличение доли гомозигот 15/15.

Таблица 10.

Сравнительный анализ распределения аллелей локусов £>/ 1Б907 и й11Б2008 и полиморфного маркера С1167Тв гене САТу здоровых доноров и больных СД.

Генетический Контроль СД тип 1 СД тип 2 Р (Фишер)

маркер (п = 106) (п=111) (п=1 16)

Номер Длина, Частота Часто- RR Частота RR Контроль Контроль

п.н. та СД тип 1 СД тип 2

D11S907

14 161 0 0.054 25.0 0.052 23.86 0.00029 0.00038

15 163 0.095 0.099 1.04 0.172 1.96 нд 0.01245

16 165 0.129 0.203 1.71 0.216 1.85 0.03298 0.01088

17 167 0.281 0.257 0.89 0.211 0.69 нд нд

18 169 0.333 0.216 0.55 0.134 0.31 0.00432 0.00000

19 171 0.133 0.108 0.83 0.151 1.21 нд нд

20 173 0.029 0.063 2.30 0.065 2.35 нд 0.04668

Генетический Контроль СД тип 1 СД тип2 Р (Фишер)

маркер (п = 132) (п =134) (п = 154)

Номер Длина, Частота Частота RR Частота RR Контроль Контроль

п.н. СД тип 1 СД тип 2

D11S2008

15 120 0.011 0.004 0.42 0.003 0.36 ВД нд

16 124 0.000 0.004 2.97 0.010 6.06 нд нд

17 128 0.042 0.086 2.11 0.110 2.77 0.02765 0.00158

18 132 0.129 0.313 3.06 0.305 2.94 0.01035 <0.00001

19 136 0.333 0.347 1.06 0.299 0.85 нд нд

20 140 0.292 0.187 0.56 0.166 0.48 0.00300 0.00023

21 144 0.152 0.037 0.23 0.094 0.59 0.00000 0.02447

22 148 0.042 0.022 0.55 0.013 0.37 нд 0.02963

Генетический Контроль СД тип 1 СД тип 2 Р (Фишер)

маркер (п = 114) (п = 163) (п = 218)

Частота Частота RR Частота RR Контроль Контроль

СД тип 1 СД тип 2

С1167Т

Аллель С 0.535 0.727 2.31 0.695 1.98 <0.00001 0.00079

Аллель Т 0.465 0.273 0.43 0.305 0.51 <0.00001 0.00079

Генотип СС 0.281 0.534 2.90 0.472 2.27 0.00002 0.00049

Генотип СТ 0.509 0.387 0.61 0.445 0.61 0.02901 0.16077

Генотип ТТ 0.211 0.080 0.33 0.083 0.32 0.00160 0.00102

У локуса D11S917 также обнаружены достоверные различия в частотах аллелей и генотипов. У больных диабетом по сравнению с контролем повышено содержание аллелей 17 и 18, тогда как частота аллелей 20 и 21, напротив, снижена. У пациентов с СД типа 2 к тому же

уменьшалась доля аллеля 22 (табл. 10). В обеих диабетических группах достоверно возрастала частота четырех генотипов (17/18, 17/19, 18/19 и 18/20) при уменьшении распространенности двух (20/20 и 20/21). У больных диабетом 1-го типа существенный характер носило также как увеличение доли гомозигот 18/18, так и уменьшение содержания гетерозигот 19/21. В больных СД 2-го типа к вышеупомянутым различиям в распределении генотипов можно добавить достоверное снижение частоты гетерозигот 19/20 (табл. 10). Таким образом, локусы D11S907 и D11S2008 обнаруживают заметную связь с диабетом в московской популяции.

Помимо данных микросателлитов, расположенных недалеко от гена каталазы, мы изучили ассоциацию с диабетом полиморфного маркера С1167Т, локализованного непосредственно в этом гене и обусловленного нуклеотидной заменой в положении 1167. Данный маркер определяется с помощью рестриктазы BstXI, которая расщепляет ПЦР-продукт при наличии тимидина (Т) в позиции 1167 нуклеотидной последовательности гена.

В обеих группах больных диабетом по сравнению с контрольной выборкой выявлено высокодостоверное возрастание содержания аллеля С и генотипа СС при снижении доли аллеля Т и гомозигот по нему. Таким образом, в популяции Москвы полиморфный участок С1167Т гена CAT строго ассоциирован с СД обоих типов, причем аллель С и генотип СС выступают в качестве факторов риска (табл. 10).

Полученные нами данные о положительной ассоциации трех полиморфных маркеров, один из которых расположен в гене каталазы, свидетельствуют о связи хромосомной области 11р13 с сахарным диабетом. Однако имеющиеся сведения было бы хорошо дополнить результатами семейного анализа, позволившими ответить на вопрос, сцеплена ли данная область с заболеванием или нет. Подобные исследования за рубежом, однако, не показали сцепления полиморфного маркера D11S907 с диабетом 1-го типа в семьях британских (Hashimoto et al, 1994) и североамериканских европеоидов (Davies et al, 1994).

Для оценки связи гена SOD2 с диабетом использован высокополиморфный тетрануклеотидный маркер D6S392, расположенный в 0.037 сМ от гена. У данного маркера обнаружен 31 аллель, ряд из которых обнаруживал достоверные различия в частотах между больными и здоровыми лицами. Так, у больных увеличено содержание высокомолекулярных аллелей 62, 64 и 65, тогда как доля низкомолекулярных аплелей 40 и 41 снижена. У пациентов с диабетом 1-го типа также наблюдали достоверное уменьшение частоты аллеля 47, тогда как у больных диабетом другого типа была значительно понижена встречаемость аллеля 42, в то время как частота аллелей 57 и 63, наоборот, возрастала. Полученные результаты свидетельствуют о строгой связи полиморфного локуса D6S392 с заболеванием, причем аллели 62, 64 и 65 ассоциированы с повышенным риском его развития в московской популяции.

Таблица 11.

Сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов локуса D6S392

Генетический Контроль СД тип 1 СД тип 2 Р (Фишер)

маркер (п = 143) (п = 166) (п = 101)

Номер Длина, Частота Часто- RR Частота RR Контроль- Контроль-

п.н. та СД тип 1 С Д тип 2

37 210 0.003 0 0.29 0 0.47 нд нд

38 214 0.007 0 0.17 0 0.28 нд нд

39 218 0.010 0 0.12 0.005 0.60 нд нд

40 222 0.042 0.003 0.10 0.005 0.16 0.00064 0.00907

41 226 0.045 0.003 0.09 0 0.05 0.00031 0.00086

42 230 0.024 0.006 0.28 0 0.09 нд 0.00023

43 234 0.021 0.012 0.59 0.010 0.54 нд нд

44 238 0.021 0.030 1.41 0.005 0.32 НД нд

45 242 0.052 0.045 0.86 0.020 0.40 нд нд

46 246 0.056 0.036 0.64 0.045 0.81 нд нд

47 250 0.080 0.021 0.26 0.020 0.25 0.00053 нд

48 254 0.070 0.048 0.68 0.054 0.78 нд нд

49 258 0.063 0.069 1.10 0.045 0.71 нд нд

50 262 0.031 0.054 1.72 0.059 1.92 нд нд

51 266 0.045 0.072 1.61 0.059 1.33 нд НД

52 270 0.063 0.084 1.36 0.030 0.48 нд НД

53 274 0.042 0.048 1.15 0.040 0.96 нд нд

54 278 0.066 0.054 0.81 0.050 0.75 нд нд

55 282 0.035 0.054 1.55 0.074 2.18 нд нд

56 286 0.045 0.057 1.26 0.040 0.89 нд НД

57 290 0.045 0.048 1.06 0.104 2.40 нд 0.01065

58 294 0.028 0.057 2.04 0.035 1.26 нд НД

59 298 0.028 0.015 0.55 0.050 1.79 нд НД

60 302 0.028 0.024 0.86 0.050 1.79 нд нд

61 306 0.024 0.027 1.09 0.035 1.43 нд нд

62 310 0.007 0.030 3.71 0.054 6.83 0.03354 0.00162

63 314 0.003 0.021 4.39 0.040 7.30 нд 0.01010

64 318 0.010 0.039 3.42 0.035 3.54 0.00115 0.03477

65 322 0 0.036 22.35 0.035 21.98 0.00053 0.00196

66 326 0 0 0.86 0.005 4.27 НД нд

67 330 0 0.003 2.59 0 1.42 нд нд

Ассоциация локуса D6S392 рядом с геном SOD2 с диабетом 1-го типа не удивительна, поскольку хромосомный участок 6q25.3 вокруг гена Мп-зависимой супероксиддисмутазы входит в состав области предрасположенности IDDM5 (Todd et al, 1995). Но данный полиморфный маркер также ассоциирован и с СД 2-го типа, что не было ранее показано, и в этом смысле полученные нами результаты носят принципиально новый характер. Следует дополнить данные ассоциативного исследования семейным анализом, чтобы ответить на вопрос, сцеплен ли маркер D6S392 с сахарным диабетом или нет. Еще больший интерес будет представлять

анализ с использованием какого- либо полиморфного маркера, расположенного непосредственно в гене SOD2. Ранние исследования с привлечением внутригенного маркера ПДРФ/Taql выявили ассоциацию гена SOD2 с СД типа 1 в датской популяции (Pociot et al, 1993).

Диабетическая нефропатня. Для сахарного диабета характерно наличие так называемых поздних сосудистых осложнений, или диабетических ангиопатий. В зависимости от калибра и локализации поражаемых сосудов последние делятся на микро- и макроангиопатии. Диабетическая нефропатия (ДН), при которой поражаются микрососуды почек, относится к микроангиопатиям.

Основным метаболическим фактором ангиопатий является плохо контролируемая гликемия (Larkins & Dunlop, 1992). В условиях повышенного содержания глюкозы (гипергликемии) в организме больного диабетом происходят многочисленные деструктивные процессы, выражающиеся в неферментативном гликозилировании белков и ферментов, которые тем самым необратимо модифицируются, инактивируются и в дальнейшем окисляются и деградируют (Brownlee, 1994). Окисление белков и липидов, сопряженное с аутоокислением глюкозы, приводит к развитию окислительного стресса, который усугубляется ослаблением антиоксидантной защиты вследствие неферментативного гликозилирования и инактивации ферментов последней (Tesfamarian, 1994).

Накопление в крови высокореактивных свободных радикалов кислорода и перекисей приводит к резкому уменьшению содержания в кровяном русле окиси азота - важнейшего вазодилятора (рис. 9) - и приводит к общей сосудистой дисфункции вследствие нарушения нормального баланса вазоактивных соединений в крови и жизнедеятельности сосудистого эндотелия. Высокие концентрации глюкозы также приводят к усилению экспрессии генов многих структурных белков и ферментов, в частности, альдозоредуктазы (Rand et al, 1985; Ceriello et al, 1996). Последняя катализирует реакцию НАДФН-зависимого восстановления глюкозы до сорбитола, и усиление экспрессии гена AR2 является причиной патологической активации полиолового (сорбитолового) пути обмена глюкозы. Накопление сорбитола в клетках эндотелия приводит к необратимым структурно-функциональным изменениям последних и их гибели, тем самым приводя к разрушению капилляров.

Вышеупомянутые положения объясняют обоснованность выбора нами в качестве кандидатов на связь с ДН следующих генов:

1) гены, ответственные за регуляцию кровяного давления - гены ренин-ангиотензиновой системы (РАС) и системы окиси азота (ген эндотелиальной NO-синтазы, NOS3);

2) сорбитоловый путь обмена глюкозы - ген альдозоредуктазы (AR2);

3) антиоксидантная защита - гены CAT и SOD2.

Чтобы свести к минимуму маскирующее влияние

негенетических факторов риска, при формировании групп больных использовали принцип крайних, максимально выраженных фенотипов и неперекрывающиеся критерии отбора. В группу "ДН+" вошли пациенты с нефропатией, болеющие СД типа 1 менее 15 лет и с клинически выраженной протеинурией (скорость секреции белка в мочу менее 300 мг/сут). Данная группа насчитывала 36 человек (мужчины/женщины = 17/19) в среднем возрасте 22.3 ± 4.5 лет , с длительностью диабета 12.2 ± 2.1 лет и альбуминурией 1371 ± 1115 мг/сут. Контрольную группу ("ДН-") образовали 46 пациентов без признаков нефропатии (26 мужчин и 30 женщин) в возрасте 37.9 ± 9.4 лет, болеющие диабетом свыше 20 лет (средняя длительность 27.5 ± 7.2 лет) и скоростью экскреции менее 200 мг/сут (альбуминурия 26.1 ± 14.8 мг/сут).

| АНГИОТЕНЗИНОГЕН"]

РЕНИН

| АНГИОТЕНЗИН I I

АСЕ

, ХИМАЗА (СЕРДЦЕ) I АНГИОТЕНЗИН H |

СОСУДИСТЫЙ РЕЦЕПТОР

(ТИП 1) IAGT] R)

АДРЕНАЛЬНЫЙ РЕЦЕПТОР (ТИП 2) (AGT2R)

СУЖЕНИЕ СОСУДОВ

ПОСРЕДНИК ПЕРЕДАЧИ СИГНАЛА НЕИЗВЕСТЕН

СЕКРЕЦИЯ АЛЬДОСТЕРОНА

Рис. 11. Компоненты ренин-ангиотензиновой системы и основные биологические эффекты апгиотензина II

Ренин-ангиотензиновая система отвечает за регуляцию тонуса кровеносных сосудов, поддержание водно-солевого гомеостаза, обеспечивает питание и стимулирует пролиферацию клеток гладкой мускулатуры сосудов и миокарда. Помимо общециркуляторной системы существуют достаточно автономные и специфичные локальные РАС (почечная, миокардиальная). Главным действующим агентом РАС является пептид ангиотензин II, который образуется из белкового предшественника ангиотензиногена при последовательном участии карбоксипептидаз ренина и ангиотензин-превращающего фермента (АПФ). Свое действие по отношению к сердечно-сосудистой системе ангиотензин II реализует, связываясь с сосудистым рецептором (тип 1) (рис. 11).

Основными компонентами РАС являются ангиотензипоген, кодируемый геном AGT, АПФ (ген АСЕ) и сосудистый (тип 1) рецептор ангиотензина II (ген AT1R). Во 2-м экзоне гена AGT локализован вариабельный участок Т174М, обусловленный заменой треонина на

метионин в кодоне 174. В 16-м интроне гена АСЕ расположен полиморфный участок типа I/D (insertion/deletion), определяемый наличием или отсутствием вставки ДНК из Alu-повторов. В 1166-м положении гена AT1R отмечена нуклеотидная замена аденина на цитозин (А1166С). Эти полиморфные маркеры были использованы нами в ассоциативном анализе ДН при диабете 1 -го типа.

Среди трех генов РАС ассоциацию с нефропатией обнаружил лишь полиморфный маркер типа I/D гена АСЕ, причем аллель I и особенно гомозиготность по нему связаны со сниженным риском развития данного. сосудистого осложнения в московской популяции (табл. 12). Накоплена обширная сумма данных, касающихся оценки роли гена АСЕ в развитии ДН. Несмотря на их некоторую противоречивость, нельзя не отрицать важной роли гена АСЕ в становлении ДН. Результаты недавних зарубежных исследований подтверждают это, но при этом отмечается не столько предохраняющее действие аллеля I, сколько роль аллеля D как фактора риска (Vlemming et al, 1999; Marre et al, 1999; Kunz et al, 1999; Pernio et al, 1999).

Таблица 12.

Сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов полиморфного маркера типа 1/В гена АСЕ, Т174М гена ЛОТ и А1166С генаАТШу больных СД типа 1 с наличием (ДН+) и отсутствием (ДН-)

Генетический Частота RR Р

маркер «ДН+» (п =36) | «ДН-» (п = 46)

Ген АСЕ (Щ>

Аллель I 0.458 0.625 0.51 0.01923

Аллель D 0.542 0.375 1.96 0.01923

Генотип II 0.139 0.411 0.25 0.00465

Генотип ID 0.639 0.429 2.31 0.03917

Генотип DD 0.222 0.160 1.49 нд

-Ген AGT (Т174М)

Аллель Т 0.696 0.80 0.59 нд

Аллель М 0.304 0.20 1.71 нд

Генотип ТТ 0.514 0.655 0.57 нд

Генотип ТМ 0.371 0.291 1.44 нд

Генотип ММ 0.114 0.055 2.14 нд

AT1R(A1166C)

Аллель А 0.729 0.696 0.85 нд

Аллель С 0.271 0.304 1.18 нд

Генотип АА 0.562 0.500 0.79 нд

Генотип АС 0.333 0.393 1.29 нд

Генотип СС 0.104 0.107 1.09 нд

Таблица 13.

Сравнительный распределения частот аллелей и генотипов полиморфных маркеров ИОБ4а/4Ь и &и298А$р гена N083у больных СД типа 1 с

Генетический Частота RR Р

маркер «ДН+» (п =36) | «ДН-» (п = 46)

Glu298Asp

Аллель Glu 0.819 0.795 1.15 нд

Аллель Asp 0.181 0.205 0.86 нд

Генотип Glu/Glu 0.667 0.625 1.19 нд

Генотин Glu/Asp 0.30S 0.339 0.87 нд

Генотип Asp/Asp 0.028 0.036 0.92 нд

Минисателлит NOS4a/4b

Аллель 4а 0.389 0.223 2.20 0.01246

Аллель 4Ь 0.611 0.777 0.46 0.01246

Генотип 4а/4а 0.083 0.018 3.86 нд

Генотип 4а/4Ь 0.611 0.411 2.21 0.04791

Генотип 4b/4b 0.306 0.571 0.34 0.01085

В гене эндотелиальной NO-синтазы исследовали два биаллельных полиморфных участка - минисателлит ecNOS4a/4b, расположенный в интроне 8, и миссенс-мутацию Glu298Asp (замена глутамата на аспартат в 298-м кодоне). При анализе последнего полиморфизма использовали фермент Mbol, который расщеплял продукт ПЦР при наличии аспартата-298. Достоверные различия между группами «ДН-» и «ДН+» были показаны для частот аллелей и генотипов минисателлита. Таким образом, данный полиморфный участок ассоциирован с ДН при диабете 1-го типа и аллель 4а является генетическим маркером риска (табл. 13).

Наличие связи между генами АСЕ и NOS3 и ДН свидетельствуют об важной роли в становлении данной микроангиопатии, особенно на ранних стадиях, таких вазоактивных агентов противоположного характера, какими являются окись азота и ангиотензин II. Дисбаланс в содержании последних в кровяном русле, активация синтеза ангиотензина II на фоне угнетения выработки NO ведет к развитию внутриклубочковой гипертензии, которая, в свою очередь, является предвестником более серьезных почечных нарушений при диабете (Costerousse et al, 1998). Таким образом, наши результаты как бы подтверждают справедливость гемодинамической концепции патогенеза ДН.

Важно отметить, что полиморфные участки генов АСЕ и NOS3, ассоциированные с ДН, не являются какими-либо анонимными маркерами с неизвестной функцией, а несут определенную физиологическую нагрузку. Так, показана связь полиморфизма I/D с содержанием АПФ в плазме крови, выражающаяся в повышенном содержании данного фермента в кровяном русле у носителей гомозиготного генотипа DD (Tiret et al, 1992). Для минисателлита ecNOS4a/4b показана связь с содержанием

нитратов и нитритов, напрямую отражающим скорость выработки окиси азота эндотелием сосудов: у гомозигот 4а/4а скорость продукции NO понижена (Wang et al, 1997; Tsukada et al, 1998).

Таблица 14.

Сравнительный анализ распределения аллелей полиморфного микросателлита в гене AR2 и вариабельного участка Cl 167Т гена CAT у больных СДтипа 1 с наличием (ДН+) и отсутствием (ЩН-)

диабетической нефропатии.

Генетический маркер Частота RR Р

Номер Длина, п.н. «ДН+» (п =36) «ДН-» (п = 46)

Микросателлит в гене AR2

21 132 0.028 0.027 1.11 пд

22 134 0.028 0.036 0.86 нд

23 136 0.167 0.170 0.99 нд

24 138 0.264 0.348 0.68 НД

25 140 0.250 0.161 1.73 НД

26 142 0.167 0.223 0.71 НД

27 144 0.097 0.036 2.76 НД

CAT (С1167Т)

Аллель С 0.319 0.348 0.88 НД

Аллель Т 0.681 0.652 1.13 НД

Генотип СС 0.528 0.500 1.11 НД

Генотип СТ 0.306 0.304 1.02 НД

Генотип ТТ 0.167 0.196 0.84 НД

В 5'-концевой части гена альдозоредуктазы лежит динуклеотидный микросателлит, насчитывающий 7 аллелей. Не было показано существенных различий в частотах аллелей и генотипов данного маркера между больными с наличием и отсутствием нефропатии, свидетельствующее об отсутствии ассоциации (табл. 14). Результаты ассоциативного анализа по зарубежным популяциям весьма противоречивы: наряду с наличием ассоциации гена AR2 с поражением почек при СД типа 1 (Heesom et al, 1997) и 2 (Moczulski et al, 1999) в других исследованиях подобная связь не подтверждена [Dyer et al, 1999; Maeda et al, 1999; Ichikawa et al, 1999]. По всей видимости, ген альдозоредуктазы не является ярким маркером диабетической нефропатии, что подтверждается нашими данными.

Для оценки возможного вклада антиоксидантных генов в развитие нефропатии использовали комплекс полиморфных маркеров (CI167T, D11S907, D11S2008 и D6S392), расположенных рядом с генами CAT и SOD2, но какой-либо заметной их ассоциации с данным микрососудистым осложнением отмечено не было (табл. 14).

Диабетическая ретинопатия. Диабетическая ретинопатия (ДР) относится к микроангиопатиям. Она поражает микрососуды сетчатки глаза. Генетический анализ ДР при диабете 1-го типа проводили в двух группах

больных. В первую ("ДР+") вошли 30 пациентов (12 мужчин и 18 женщин) с выраженной (пролиферативной) ретинопатией (возраст 21.7 ± 4.1 лет, длительность диабета 13.2 ± 3.8 лет), в другую группу ("ДР-" ) - 44 больных СД типа 1 (23 мужчины и 21 женщина) без признаков ретинопатии (возраст 24.1 ± 6.1 лет, длительность диабета 14.9 ± 6.3 лет). В исследованиях использовали следующие, гены-кандидаты:

1) три основных гена РАС - AGT (полиморфизм Т174М), АСЕ (I/D) и AT1R(A1166C);

2) ген альдозоредутазы (AR2) с полиморфным микросателлитом в 5'-концевой части;

3) гены антиоксидантной защиты САТ и SOD2 с полиморфными маркерами С1167Т, D11S907, D11S2008 и D6S392.

Из них ассоциация с ДР при СД типа 1 была обнаружена лишь для генов AT1R и AR2 (табл. 15). Аллель С1166 гена сосудистого рецептора связана с повышенным риском развития данного сосудистого осложнения в московской популяции. Следует отметить, что в зарубежных популяциях (французы и датчане) ассоциация между геном AT1R и ретинопатией при 1-м типе диабета не показана (Tamow et al, 1996; Marre et al, 1997).

Таблица 15.

Сравнительный анализ распределения аллелей полиморфного микросателлита в гене AR2 и вариабельного участка Al 166С генаАТШ у больных СД типа 1 с наличием (ДР+) и отсутствием (ДР-)

Генетический маркер Частота RR Р

Номер Длина, п.н. «ДР+» (п =30) | «ДР-» (п = 44)

Микросателлит в гене AR2

21 132 0 0.011 0.48 нд

22 134 0.133 0.125 1.09 нд

23 136 0.183 0.159 1.19 нд

24 138 0.317 0.205 1.79 нд

25 140 0.183 0.352 0.42 0.01886

26 142 0.133 0.114 1.21 нд

27 144 0.050 0.034 1.49 нд

AT1R(A1166С)

Аллель А 0.683 0.826 0.03643 0.49

Аллель С 0.317 0.174 0.03643 2.17

Генотип АА 0.500 0.682 нд 0.63

Генотип АС 0.367 0.296 нд 1.38

Генотип СС 0.133 0.023 нд 4.92

У больных ретинопатией по сравнению с группой «ДР-» отмечено достоверное уменьшение встречаемости аллеля 25 динуклеотидного повтора в промоторной области гена альдозоредуктазы (табл. 15). Также у осложненных больных достоверно повышено содержание генотипа 23/24 (23.3% против 4.5%, Р = 0.01988, = 5.42) данного полиморфного

маркера, который связан с повышенным риском развития ДР

при СД типа 1. Между тем исследование больных диабетом 1-го типа в Великобритании не выявило ассоциации между полиморфным микросателлитом на 5'-конце гена АК2 и ретинопатией (Нееэот ег а1, 1997). В то же время у австралийских европеоидов другой полиморфный локус, расположенный в промоторной области гена А112, показал связь с ретинопатией при ИЗСД (Као е1 а1, 1999).

В московской популяции показана ассоциация между геном альдозоредуктазы и ДР при другом типе диабета. Исследовали 59 больных 2-м типом диабета, 27 из которых (двое мужчин и 25 женщин, возраст 58.4 ± 6.0 лет, длительность диабета 12.6 ± 5.5 лет) были осложнены ретинопатией и вошли в группу «ДР+», а остальные (4 мужчин и 28 женщин, возраст 57.3 ± 7.7 лет, длительность диабета 7.9 ± 6.1 лет) образовали контрольную группу «ДР-». Также как и у больных ДР при СД типа 1, у пациентов с диабетом 2-го типа, осложненных ретинопатией, наблюдали достоверное уменьшение частоты аллеля 25 (табл. 16).

Таблица 16.

Сравнительный анализ распределения аллелей полиморфного микросателлита в гене AR2 и вариабельного участка All 66С гена AT 1R у больных СД типа 2 с наличием (ДР+) и отсутствием (ДР-)

Генетический маркер Частота RR Р

Номер Длина, п.н. «ДР+» (п =27) «ДР-» (п = 32)

Микросателлит в гене AR2

21 132 0.019 0.078 0.30 нд

22 134 0.130 0.078 1.71 нд

23 136 0.204 0.156 1.37 нд

24 138 0.259 0.172 1.67 нд

25 140 0.167 0.344 0.39 0.02356

26 142 0.130 0.094 1.42 нд

27 144 0.093 0.078 1.20 нд

Таким образом, аллель 25 микросателлитного маркера в гене альдозоредуктазы связан с пониженным риском развития ретинопатии в популяции Москвы при диабете обоих типов. Исследования в других популяциях наглядно свидетельствуют о вовлеченности гена AR2 в развитие ретинопатии при СД 2-го типа (Ко et al, 1995; Olmos et al, 1999), причем в экспериментах in vitro показано усиление экспрессии альдозоредуктазы в присутствии аллеля 22, что позволило выдвинуть идею о предрасполагающей роли этого аллеля по отношению к ретинопатии (Ikeguchi et al, 1999). Действительно, в японской популяции было показано, что аллель 22 связан с повышенным риском ДР при ИНСД (Ichikawa et al, 1999). По всей видимости, активация сорбитолового пути обмена глюкозы наряду с усилением экспрессии гена альдозоредуктазы в условиях диабетической гипергликемии является одним из основных механизмов

становления ДР, особенно на ранних стадиях развития данной патологии.

Анализ вариабельного участка типа I/D в гене АСЕ и полиморфных маркеров С1167Т, D11S907, DUS2008 и D6S392, расположенных рядом с антиоксидантными генами CAT и SOD2 не выявил каких-либо достоверных различий в частотах аллелей и генотипов между больными СД типа 2 с наличием и отсутствием ретинопатии, что указывает на отсутствие связи между данными полиморфными маркерами и поражением микрососудов сетчатки глаза при СД типа 2 в популяции Москвы.

Диабетические макроангиопатии. Сердечно-сосудистые патологии (гипертоническая болезнь, инфаркт миокарда, ишемическая болезнь сердца) являются типичными сосудистыми осложнениями при диабете 2-го типа. Исследовали 100 пациентов с СД типа 2, 54 из которых перенесли инфаркт миокарда (ИМ) (группа "ИМ+", мужчины/женщины = 31/21, возраст 62.5 ± 7.3 лет, длительность диабета 11.3 ± 5.0 лет). Группу сравнения "ИМ-" образовали 46 остальных пациентов (22 мужчины и 24 женщины) в среднем возрасте 56.5 ± 5.1 лет, болеющие диабетом в среднем 10.1 ± 4.5 лет. В группу "ГБ+" вошли 42 больных диабетом 2-го типа с гипертонией (17 мужчин и 25 женщин, возраст 59.8 ± 7.3. длительность диабета 12.2 ± 5.3 лет), имеющие давление выше 140/100 мм.рт.ст.; контрольную группу "ГБ-" составили 40 пациентов с нормальным кровяным давлением (19 мужчин и 21 женщина, возраст 62.9 ± 7.1 лет, продолжительность диабета 11.8 ± 4.4 лет).

Таблица 17.

Сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов полиморфного маркера типа I/D гена АСЕ у больных СД типа 2 без инфаркта миокарда ("ИМ-") и перенесших инфаркт миокарда ("ИМ+ "), а также с наличием

("ГБ+ ") и отсутствием ("ГБ-") гипертонической болезни.

Генетический Частота RR Р

маркер «ИМ+» (п =54) «ИМ-» (п = 46

Аллель I 0.287 0.424 0.55 0.03049

Аллель В 0.713 0.576 1.82 0.03049

Генотип II 0.093 0.217 0.39 нд

Генотип ГО 0.389 0.413 0.91 нд

Генотип ОБ 0.519 0.370 1.81 нд

Генетический Частота RR Р

маркер «ГБ+» (п =42) «ГБ-» (п = 40)

Аллель I 0.357 0.463 0.65 НД

Аллель Б 0.643 0.538 1.54 НД

Генотип II 0.167 0.150 1.09 нд

Генотип ГО 0.381 0.625 0.38 0.02306

Генотип ЭЭ 0.452 0.225 2.75 0.02577

Показана ассоциация между полиморфным маркером 1/Е) гена АСЕ и инфарктом миокарда, а также гипертонической болезнью при диабете 2-го

типа. У перенесших ИМ достоверные различия обнаружены в распределении аллелей, тогда как у больных гипертонией - в распределении генотипов (табл. 17). В любом случае, аллель D и генотип DD выступают в качестве факторов, повышающих риск возникновения этих макрососудистых осложнений у больных диабетом типа 2.

В зарубежных исследованиях ассоциация полиморфизма типа вставка/делеция гена АСЕ с ИМ (либо коронарными болезнями сердца) при СД 2-го типа показана во многих популяциях, за исключением китайцев о.Тайвань (Chuang et al, 1997). Связь между данным геном и ИМ обнаружена как в европейских популяциях (Ruiz et al, 1994; Keavney et al, 1995; Ukkola et al, 1995; Huang et al, 1998), так и в одной из азиатских (Япония) (Fujisawa et al, 1995). Единодушно отмечается роль аллеля D как независимого фактора риска ИМ и поражения коронарных сосудов при СД 2-го типа, причем у европеоидов предрасполагающая роль этого аллеля наиболее выражена у лиц с низким метаболическим риском (пониженное содержание триглицеридов в плазме крови и холестерина среди липопротеинов низкой плотности) (Keavney et al, 1995). Роль генотипа DD как фактора, усиливающего риск эссенциальной гипертонии при СД 2-го типа, также показана для ряда европейских популяций (Pujia et al, 1994; Ukkola et al, 1995). Исследования в Китае, однако, не обнаружили подобной связи (Chuang et al, 1997; Xiang et al, 1998).

Ассоциативные исследования не выявили связи различных полиморфных маркеров, расположенных рядом с генами антиоксидантных ферментов каталазы и митохондриальной супероксидцисмутазы с развитием гипертонии и ИМ у больных СД типа 2 в популяции Москвы. В то же время была показана ассоциация данных маркеров с другой макроангиопатией - ишемической болезнью сердца (ИБС). Изучали 72 больных 2-м типом диабета с наличием ИБС (57 мужчин и 17 женщин, возраст 58.0 ±7.1 лет, длительность СД 11.0 ± 5.9 лет). В контрольную группу вошли 82 пациента без ИБС (мужчины/женщины = 54/28, возраст 57.1 ± 6.2 лет, длительность СД 10.5 ± 4.7 лет).

У больных ИБС наблюдали достоверное возрастание частоты аллеля 18 локуса D11S907, расположенного недалеко от гена CAT, по сравнению с контрольной группой (22.2% против 14%, Р = 0.04228, RR = 1.74). У осложненных пациентов также достоверно увеличивалось содержание генотипов 17/18 (12.5% против 3.7% в контроле, Р = 0.04004, RR = 3.36) и 18/19 (5.6% против 0% Р = 0.04566, RR = 10.71) данного локуса. У локуса D6S392, расположенного рядом с геном SOD2, достоверные различия были показаны для частот 5 аллелей. Так, у больных ИБС обнаружили существенное накопление аллеля 51 (9.2% против 1.3%, Р = 0.01877, RR = 5.62) и 62 (7.6% против 1.3%, Р = 0.04012, RR = 4.58) по сравнению с контрольной группой. Частоты аллелей 64 (1.7% против 7.5%, Р = 0.01817, RR = 0.24), 45 (0% против 5%, Р = 0.02865, RR = 0.07) и 46 (1.7% против 8.8%, Р = 0.02387, RR= 0.21), напротив, были существенно понижены.

Ассоциация полиморфных маркеров D11S907 и D6S392 с ИБС при СД типа 2 косвенным образом указывает на возможное участие генов CAT

и S0D2 в формировании данной сердечно-сосудистой патологии. В то же время маркер С1167Т в гене каталазы не показал связи с ИБС. Между тем биохимические исследования и опыты на животных моделях свидетельствуют о выраженной негативной роли окислительного стресса и вовлеченности антиоксидантных ферментов в развитие поражения миокарда и сосудов сердца при диабете (Mullarkey et al, 1990; Chace et al, 1991; Curcio & Ceriello, '1992; Tesfamariam & Cohen, 1992; Yokota & Asayama, 1992). Для более полной оценки роли генов антиоксидантной защиты в формировании макрососудистых осложнений при диабете 2-го типа необходим анализ внутренних полиморфных маркеров всех основных антиоксидантных генов.

Сердечно-сосудистые патологии. Изучали четыре патологии, относящихся к сердечно-сосудистым заболеваниям: гипертоническую болезнь, ИМ, ИБС и гипертрофию левого желудочка (ГЛЖ). Анализ проводили с использованием в качестве кандидатов генов, отвечающих за регуляцию сосудистого тонуса - это гены РАС (АСЕ, AGT, AT1R) и эндотелиальной NO-синтазы (NOS3).

Исследовали ДНК 72 больных эссенциальной гипертонией (44 мужчины и 28 женщин) в среднем возрасте 46.3 ± 6.7 лет и давлением 168 ± 15/109 ± 13 мм. рт. ст. Сравнительный анализ показал наличие высокодостоверных различий между группами лиц с повышенным и нормальным кровяным давлением в распределении аллелей и генотипов всех использованных полиморфных маркеров, что свидетельствует о выраженной ассоциации между генами АСЕ, AGT, AT1R и NOS3) с развитием гипертонической болезни в московской популяции (табл. 18). При этом аллели D (АСЕ), М174 (AGT), Cl 166 (ATIR) и 4а (NOS3) усиливают риск патологии.

Исследования в зарубежных популяциях указывают на отсутствие заметного вклада полиморфного участка Т174М гена ангиотензиногена в определение уровня и внутрипопуляционные вариации кровяного давления. Так исследования в Канаде показали, что полиморфизм кодона 174 определяет у мужчин лишь 3.1% внутрипопуляционных различий уровня систолического давления (Hegele et al, 1994). Ассоциативные исследования в большинстве популяций разных рас не выявили связи между данной мутацией и гипертонией (Rotimi et al, 1994; Rutledge et al, 1994; Caulfield et al, 1994; Cooper et al, 1997; Tiret et al, 1998; Niu et al, 1998, 1999; Fernandez-Llama et al, 1998). Лишь y французов, больных ГБ и обладающих индексом массы тела менее 26 кг/м2, показано достоверное накопление аллеля M (Tiret et al, 1995). Гораздо более выраженную связь с гипертонией демонстрируют другие полиморфные участки гена AGT -аминокислотная замена М235Т в экзоне 2 и ряд нуклеотидных замен в промоторной области, определяющие экспрессию и уровень ангиотензиногена в плазме крови (Sato et al, 1997; Ishigami et al, 1997, 1999; Jeunemaitrc et al, 1997; Hegele et al, 1998; Kato et al, 1999).

Таблица 18.

Сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов полиморфного маркера типа 1Ю гена АСЕ, Т174Мгена АОТ, А1166Сгена АТ1В. и минисателлита есЫ084а/4Ь гена Ы085 у больных эссенциальной

Генетический маркер Частота RR Р

Гипертония (п = 72) | Контроль (п = 113)

Ген АСЕ (I/D)

Аллель I Аллель D 0.403 0.597 0.553 0.447 0.55 1.83 0.00328 0.00328

Генотип II Генотип ID Генотип DD 0.111 0.583 0.306 0.310 0.487 0.204 0.29 1.47 1.72 <0.00001 0.01620 нд

Генетический маркер Частота RR Р

Гипертония (п = 72) Контроль (п = 149)

Ген AGT (Т174М)

Аллель Т Аллель М 0.743 0.257 0.883 0.117 0.39 2.59 0.00023 0.00023

Генотип ТТ Генотип ТМ Генотип ММ 0.607 0.292 0.111 0.779 0.208 0.013 0.42 1.57 7.78 нд нд 0.02577

Генетический Частота RR Р

маркер Гипертония (п = 72) | Контроль (п = 100)

AT1R(A1166С)

Аллель А Аллель С 0.687 0.313 0.795 0.205 0.57 1.76 0.01627 0.01627

Генотип АА Генотип АС Генотип СС 0.486 0.403 0.111 0.660 0.270 0.070 0.49 1.81 1.64 0.01670 0.04795 0.25015

Генетический маркер Частота RR Р

Гипертония (п = 51) Контроль (п = 83)

NOS3 (минисателлит ecNOS4a/4b)

Аллель 4а Аллель 4Ь 0.461 0.539 0.193 0.807 3.54 0.28 <0.00001 <0.00001

Генотип 4а/4а Генотип 4а/4Ь Генотип 4b/4b 0.196 0.529 0.275 0.024 0.337 0.639 8.25 2.24 0.22 0.00113 0.02217 0.00004

Наши данные не соответствуют результатам аналогичных исследований, предпринятых в Петербурге и не показавших связи между полиморфизмом I/D гена АСЕ и артериальной гипертонией (Popov et al, 1996). Проведено множество популяционных исследований по оценке связи полиморфного участка I/D гена АСЕ с эссенциальной гипертонией. Несмотря на определенную противоречивость их результатов, можно утверждать, что ген АСЕ не играет значительной роли в обеспечении предрасположенности к ГБ у европеоидов и в исследованных азиатских

популяциях (Япония, Китай), но связан с вариациями кровяного давления у негроидов (Duru et al, 1994; Asamoah et al, 1996; Barley et al, 1996; Forrester et al, 1997).

Напротив, полиморфизм Al 166C гена сосудистого (тип 1) рецептора ангиотензина II ассоциирован с гипертонией в многочисленных популяциях (Bonnardeaux et al, 1994; Hingorani et al, 1995; Wang et al, 1996; Schmidt et al, 1997; Hu et al, 1997; Szombathy et al, 1998; Tiret et al, 1998), и генотип CC усиливает риск возникновения сердечно-сосудистых поражений у больных гипертонией (Benetos et al, 1996; Castellano et al, 1996).

Связь между геном эндотелиальной NO-синтазы, гипертонией и параметрами артериального давления показана также томскими исследователями (Степанов и соавт, 1998). Полиморфный минисателлит ecNOS4a/4b проверен на связь с гипертонией японскими исследователями и получены противоречивые сведения: наряду с отсутствием ассоциации (Yasujima et al, 1998) в другом исследовании показано ее наличие, причем аллель 4а связан с повышенным риском патологии (Uwabo et al, 1998). С гипертонической болезнью ассоциированы и другие полиморфные маркеры в гене NOS3: замена Glu298Asp (Yasujima et al, 1998; Uwabo et al, 1998; Miyamoto et al, 1998; Lacolley et al, 1998; Kato et al, 1999) и динуклеотидный микросателлит (Bonnardeaux et al, 1995; Friend et al, 1996; Nakayama et al, 1997).

В анализе генетической предрасположенности к инфаркту миокарда использовали те же маркеры, что и в случае гипертонической болезни. Исследовали ДНК 45 пациентов, перенесших ИМ (38 мужчин и 7 женщин, возраст 50.2 ± 11.7 лет). Для всех использованных в анализе генов показана выраженная аасоциация с патологией, причем маркеры риска были те же, что и у гипертонической болезни (табл. 19).

Между тем в зарубежных иследованиях (Франция, Китай) не показано связи между полиморфным участком Т174М гена ангиотензиногена и ИМ (Tiret et al, 1995; Ко et al, 1997). По всей видимости, если связь между данным геном и кардиопатиями существует, то она скорее характерна для молекулярных вариантов ангиотензиногена, обусловленных аминокислотной замены в 235-м кодоне нежели в 174-м (Katsuya et al, 1995; Ishigami et al, 1995; Chen et al, 1998; Ludwig et al, 1998).

Напротив, для гена другого компонента РАС (гена АСЕ) в зарубежных популяциях показана более строгая связь с ИМ. Повышенный риск внезапной смерти и ИМ у пациентов с коронарной болезнью сердца, имеющих генотип DD, отмечен еще в первых ассоциативных исследованиях вариабельного участка I/D (Tiret et al, 1993; Bohn et al, 1993; Soubrier et al, 1994; Evans et al, 1994). В ряде популяций обнаружено синэргическое взаимодействие между геном АСЕ и другими генами РАС (AGT, AGT1R): наивысший риск сердечно-сосудистых расстройств характерен для гомозиготных носителей по аллелям D (ген АСЕ), Т235 (AGT) и С1166 (AGT1R) (Tiret et ai, 1994; Ludwig et al, 1997). Генетический анализ, предпринятый в Санкт-Петербурге, также выявил

предрасполагающую роль генотипа DD по отношению к ИМ у нормотензивных пациентов (Жукова и соавт, 1997).

Таблица 19.

Сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов полиморфного

маркера типа 1/й гена АСЕ, Т174Мгена ЛОТ, А1166С гена АТ1К и минисателлита есЫ084а/4Ъ гена КОБЗ у перенесших инфаркт миокарда

Генетический Частота RR P

маркер ИМ (п = 45) Контроль (п = 113)

Ген ACE (I/D)

Аллель I 0.4 0.553 0.54 0.00974

Аллель Б 0.6 0.447 1.84 0.00974

Генотип II 0.156 0.310 0.43 0.03442

Генотип ГО 0.489 0.487 1.01 нд

Генотип БЕ> 0.355 0.204 2.15 нд

Генетический Частота RR p

маркер ИМ (п = 45) | Контроль (п = 149)

Ген AGT (Т174М)

Аллель Т 0.621 0.883 0.43 0.01270

Аллель М 0.379 0.117 2.30 0.01270

Генотип ТТ 0.578 0.779 0.39 0.01221

Генотип ТМ 0.378 0.208 2.31 0.02265

Генотип ММ 0.044 0.013 3.39 нд

Генетический Частота RR P

маркер ИМ (п = 45) Контроль (п = 100)

AT1R(A1166C)

Аллель А 0.589 0.795 0.37 0.00003

Аллель С 0.411 0.205 2.69 0.00003

Генотип АА 0.333 0.66 0.26 0.00024

Генотип АС 0.489 0.27 2.56 0.00289

Генотип СС 0.178 0.07 2.83 НД

Генетический Частота RR P

маркер ИМ (п = 45) | Контроль (п = 83)

NOS3 (минисателлит ecNOS4a/4b)

Аллель 4a 0.411 0.193 2.90 0.00018

Аллель 4b 0.589 0.807 0.34 0.00018

Генотип 4a/4a 0.111 0.024 4.43 НД

Генотип 4a/4b 0.600 0.337 2.89 0.00370

Генотип 4b/4b 0.289 0.639 0.24 0.00014

Роль гена сосудистого рецептора (AT1R) в развитии ИМ и коронарной болезни сердца изучена менее интенсивно. Тем не менее имеющиеся данные свидетельствуют о том, что данный ген может быть вовлечен в развитие коронарного атеросклероза и ИМ и синергически взаимодействовать с полиморфным участком типа вставка/делеция гена в гене АСЕ (Tiret et al, 1994; Berge et al, 1997; Rice et al, 1999), причем у

максимального эффекта взаимодействие достигает у лиц с

низким метаболическим риском ИМ. Ген эндотелиальной NO-синтазы также может играть определенную роль в развитии ИМ и поражения коронарных сосудов сердца, о чем свидетельствуют результаты исследований в ряде популяций, показавших ассоциацию с патологией полиморфных участков ecNOS4a/4b (Wang et al, 1996; Ichihara et al, 1998) и Asp298Glu (Hibi et al, 1998).

Гипертрофия левого желудочка (ГЛЖ) является одной из кардиопатий. При ГЛЖ происходит разрастание (гипертрофия) межжелудочковой перегородки, сопровождающаяся нарушением сократительной функции левого желудочка, закупоркой коронарных сосудов и структурными изменениями в сердечной мышце. Гипертония способствует развитию ГЛЖ, которая нередко перерастает в гипертрофическую кардиомиопатию (ГКМП), и это может резко усилить риск ИМ и внезапной смерти.

Анализ данной патологии проводили на группе из 53 человек (31 мужчина и 22 женщины, возраст 47.1 + 10.1 лет) с наличием гипертрофии левого желудочка сердца на основании результатов эхокардиографического анализа. У 16 пациентов ГЛЖ переросла в ГКМП. Использовали те же полиморфные маркеры и гены-кандидаты, что и при изучении ИМ и гипертонической болезни. Вновь все исследованные маркеры обнаружили ассоциацию с патологией, по наиболее выраженный характер она носила у генов АСЕ и NOS3 (табл. 20). Показаны общие с ИМ и ГБ маркеры риска.

Более яркую по сравнению с остальными генами РАС связь гена АСЕ с ГЛЖ можно объяснить непосредственным участием его продукта (АПФ) в синтезе ангиотензина II, избыток которого способствует гипертрофическому разрастанию сосудистой стенки и миокарда благодаря стимулирующему воздействию на пролиферацию миоцитов и экспрессию различных структурных белков. По сравнению с остальными компонентами РАС связь между геном АСЕ и ГЛЖ изучалась наиболее интенсивно. Несомненно, этот ген играет определенную роль в становлении заболевания, хотя она и не велика и по оценке американских исследователей полиморфизм типа I/D гена АСЕ определяет лишь 3-4% вариации массы левого желудочка и толщины межжелудочковой перегородки (Ghavari et al, 1996). Исследования в семьях североамериканских европеоидов не выявили сцепления данного полиморфного маркера с ГЛЖ (Lindpaithner et al, 1996). По всей видимости, более выраженная и устойчивая связь этого гена с ГЛЖ и ГКМП обнаруживается на фоне различных (и в особенности сосудистых) нарушений, таких гипертония (Oshima et al, 1997; Shen et al, 1998: Celentano et al, 1999; Степанов и соавт., 1998), стеноз аорты (Wong et al 1996) и других.

Таблица 20.

Сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов полиморфного

маркера типа 1Ю гена АСЕ, Т174Мгена А ОТ, А1166С гена Л Т1К и минисателлита есЬ'ОБ4а/4Ь гена ЫОБЗ у больных гипертрофией левого

Генетический Частота RR Р

маркер ГЛЖ (п = 53) | Контроль (п = 113)

Ген ACE (I/D)

Аллель I 0.378 0.553 0.50 0.00201

Аллель D 0.622 0.447 2.00 0.00201

Генотип II 0.132 0.310 0.36 0.00986

Генотип ID 0.491 0.487 1.02 нд

Генотип DD 0.377 0.204 2.36 нд

Генетический Частота RR Р

маркер ГЛЖ (п = = 53) Контроль (п = 149)

Ген AGT (Т174М)

Аллель Т 0.774 0.883 0.45 нд

Аллель М 0.226 0.117 2.20 нд

Генотип ТТ 0.642 0.779 0.51 нд

Генотип ТМ 0.264 0.208 1.38 нд

Генотип ММ 0.094 0.013 6.69 0.01437

Генетический Частота RR Р

маркер ГЛЖ (п = 53) Контроль (п = 100)

AT1R (Al 166С)

Аллель А 0.671 0.795 0.53 нд

Аллель С 0.329 0.205 1.90 нд

Генотип АА 0.447 0.66 0.42 0.01906

Генотип АС 0.447 0.27 2.18 нд

Генотип СС 0.106 0.07 1.63 нд

Генетический Частота RR Р

маркер ГЛЖ (п = = 53) Контроль (п = 83)

NOS3 (минисателлит ecNOS4a/4b)

Аллель 4а 0.358 0.193 2.33 0.00018

Аллель 4Ь 0.642 0.807 0.42 0.00018

Генотип 4а/4а 0.094 0.024 3.70 нд

Генотип 4а/4Ь 0.528 0.337 2.18 0.00370

Генотип 4b/4b 0.377 0.639 0.35 0.00014

Что касается полиморфного маркера Т174М в гене AGT и его ассоциации с ГЛЖ, то эта проблема в других популяциях изучена мало. У испанцев ассоциация не найдена (Fernandez-Llama et al, 1998), но у австралийских европеоидов показано, что полиморфизм Т174М в гене AGT и вариабельный участок I/D в гене АСЕ могут взаимодействовать в определении выраженности гипертрофии сосудистой стенки у лиц со стенозом аорты (Wong et al, 1996). Ген AT1R, судя по имеющимся данным, не играет заметной роли в развитии ГЛЖ (Brugada et al, 1997; Hamon et al,

1997; кЬапоу а1, 1998), хотя у голландцев и отмечено

модулирующее влияние аллеля С1166 на фенотипическое выражение ГЛЖ при ГКМП (ОБ1егор еХ а1, 1998).

В отличие от генов РАС, связь между геном ЫОБЗ и ГЛЖ исследована гораздо менее интенсивно. Тем не менее, ассоциативный анализ в Томске обнаружил достоверно более высокие значения индекса массы левого желудочка у нормотензивных пациентов-носителей аллеля 4а с ГЛЖ и ГКМП, что указывает на предрасполагающую роль данного генетического маркера по отношению к данной патологии (Степанов и соавт, 1998). Эти данные находятся в соответствии с нашими результатами.

Анализ ишемической болезни сердца (ИБС) проводили с использованием трех полиморфных маркеров: А1166С (ген АвТт), С1и298АБр и минисателлита есКОБ4а/4Ь (оба - в гене ИОБЗ). В группу больных ИБС вошли 88 пациентов (средний возраст 59.3 ± 5.2 года, 62 мужчины и 26 женщин). Контрольную группу составили 83 здоровых донора (средний возраст 39.2 ± 7.3 года, 61 мужчина и 22 женщины).

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и полиморфных маркеров в генах N083 и АйТШ у больных болезнью сердца (ИБС) и здоровых доноров.

Таблица 21.

генотипов ишемической

Генетический

маркер

Частота

ИБС (п = 88) Контроль (п = 83)

AT1R(A1166C)

Аллель А Аллель С

0.716 0.284

0.789 0.211

0.68 1.48

НД НД

Генотип АА Генотип АС Генотип СС

0.511 0.409 0.080

0.651 0.277 0.072

0.57 1.79 1.10

0.04549 0.04883 НД_

NOS3 (минисателлит ecNOS4a/4b)

Аллель 4а Аллель 4Ь

0.455 0.545

0.193 0.807

4.14 0.24'

<0.00001 <0.00001

Генотип 4 а/4 а Генотип 4а/4Ь Генотип 4b/4b

0.159 0.591 0.250

0.024 0.337 0.639

6.34 2.80 0.19

0.00199 0.00073 <0.00001

NOS3 (Glu298Asp)

Аллель Asp Аллель Glu

0.267 0.733

0.217 0.783

1.34 0.75

НД НД

Генотип Asp/Asp Генотип Glu/Asp Генотип Glu/Glu

0.034 0.466 0.500

0.024 0.386 0.590

1.33 1.38 0.70

НД НД

Ж.

Ассоциацию с развитием ИБС обнаружили у маркеров ecNOS4a/4b (ген NOS3) и А1166С в гене AT1R (табл. 21). С повышенным риском развития данного сердечно-сосудистого заболевания связаны генотипы СС (AT1R) и 4а/4а (NOS3), причем в случае гена NO-синтазы эта связь ярко

выражена. О существенной роли данного гена в развитии сердечнососудистой патологии свидетельствуют результаты ассоциативных исследований за рубежом, особенно в Японии, показавшие строгую связь различных полиморфных маркеров (Glu298Asp и ecNOS4a/4b) с заболеванием (Ichichara et al, 1998; Shimasaki et al, 1998; Hibi et al, 1999). У европеоидов миссенс-мутация в 298-м кодоне не участвует в регуляции жесткости аорты (фактора, связанного с развитием артериального атеросклероза), но демонстрирует устойчивую ассоциацию с поражением коронарных артерий (Hingorani et al, 1999) и ИМ (Lacolley et al, 1998; Poirier et al, 1999).

В отличие от аминокислотной замены в 298-м положении гена N0-синтазы, мутация в нуклеотиде 1166 связана с жесткостью аорты и проявляет синэргическое взаимодействие с полиморфизмом типа I/D гена АСЕ (Katsuya et al, 1999; Rice et al, 1999) y больных ИБС. Вопрос о характере вклада гена рецептора (прямом или косвенном) в патогенез сердечно-сосудистых нарушений остается спорным. Одно из объяснений указывает на его косвенную роль в формировании патологии. Связывание ангиотензина II с сосудистым рецептором может приводить к увеличению содержания ренина в плазме крови с последующей активацией РАС (Van Geel et al, 1999). Повышенная концентрация ренина в крови может негативно влиять на деятельность миокарда через активацию локальной (сердечной) РАС.

Наличие связи всех основных генов РАС и системы окиси азота с сердечно-сосудистыми нарушениями свидетельствует о важности поддержания в норме баланса в кровяном русле между такими вазоактивными агентами противоположного действия, каковыми являются ангиотензин II и NO. Сдвиг равновесия в сторону увеличения содержания ангиотензина II у генетически предрасположенных индивидов ведет к патологической активации РАС и созданию благоприятных условий для возникновения и развития сосудистой патологии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящем исследовании рассмотрены два испекта использования полиморфных локусов ДНК человека - идентификация личности и генетический анализ различных мультифакторных заболеваний. Разработана идентификационная панель, куда вошли 6 полиморфных минисателлитов и 8 микросателлитов. Определены параметры пригодности этих полиморфных локусов для идентификационного анализа, которые оказались различными. Это позволяет варьировать число и характер используемых локусов в зависимости от конкретных стоящих перед исследователем задач по идентификации. Важно отметить, что все вошедшие в состав панели локусы определяются с помощью ПЦР, что открывает весьма широкие возможности в их практическом использовании при проведении генетической экспертизы и гарантирует высокую вероятность успеха при анализе сложных случаев идентификации.

Также с успехом продемонстрированы

правомочность использования полиморфных маркеров и экспериментального подхода с учетом генов-кандидатов в ассоциативном анализе комплексных заболеваний, что позволяет изначально сузить круг потенциальных генетических маркеров изучаемой патологии. Так, для генов РАС показана более выраженная связь с сердечно-сосудистыми нарушениями, если последние рассматривать сами по себе, а не как сосудистые осложнения сахарного диабета. Гены антиоксидантной защиты не показали яркой ассоциации с диабетическими ангиопатиями, как можно было ожидать, а несколько неожиданно оказались связанными с самим сахарным диабетом. Все полиморфные маркеры, использованные в генетическом анализе мультифакторных болезней, также идентифицируются с помощью ПЦР, и это существенно ускоряет и упрощает проведение анализа.

Важность знания генетических факторов риска, определяемых посредством ассоциативного и семейного анализа популяции, помимо всего прочего, состоит в том, что создает благоприятные предпосылки для более тесной связи генетики и медицины в выборе наиболее качественных и эффективных способов профилактики и лечения, а также для генной терапии, направленной на исправление имеющихся генетических дефектов и нейтрализацию генетических маркеров риска.

Достигнутые в настоящем исследовании результаты не являются окончательными, а напротив, служат отправной точкой для нового витка исследований по дальнейшему углублению имеющихся знаний о генетических корнях и механизмах патогенеза мультифакторных заболеваний.

ВЫВОДЫ

1. Разработана идентификационная панель из 14 локусов (6 мини- и 8 микросателлитов), предлагаемая для разрешения спорного отцовства и идентификации личности на уровне ДНК на территории РФ. Разрешающая способность тест-системы из 6 минисателлитов гарантирует точную идентификацию личности в популяции размером 9.65 млн; чел. Тест-система из 8 микросателлитов гарантирует точное определение для популяции, насчитывающей 1.93 млрд.чел. Общее значение рМ панели из 14 локусов равно 5.56 х 10"17.

2. Показана связь между Базедовой болезнью и генами эстеразы 4 цитотоксических Т-лимфоцитов (CTLA4), антагониста рецептора интерлейкина-1 (IL1RN), субьединицы 2 большой мультифункциональной протеазы (LMP2), а также полиморфных микросателлитов D6S2414 и D6S1271, расположенных среди генов главного комплекса гистосовместимости класса II (HLA).

супероксиддисмутазы (SOD2) с сахарным диабетом 1-го (ИЗСД) и 2-го (ИНСД) типов. Для генов антиоксидантной защиты такая связь показана впервые.

4. Обнаружена связь двух полиморфных маркеров (полиморфизм типа I/D гена ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ) и минисателлит ecNOS4a/4b гена эндотелиальной NO-синтазы (NOS3)) с развитием диабетической нефропатии при сахарном диабете (СД) типа 1. Тем самым подтверждается важная роль дисбаланса между вазоактивными агентами в почечных мнкрососудах, ведущая к возникновению внутриклубочковой гипертензии и последующему развитию нефропатии.

5. Показана ассоциация гена сосудистого (тип 1) рецептора ангиотензина I (полиморфизм А1166С, AT1R) и динуклеотидного микросателлита в гене альдозоредуктазы (AR2) с с развитием диабетической ретинопатии при СД 1-го типа. Ген AR2 ассоциирован с ретинопатией при диабете обоих типов, что указывает на особую роль патологической активации сорбитолового пути обмена глюкозы в становлении диабетической ретинопатии.

6. Обнаружена выраженная связь между геном АСЕ и макрососудистыми осложнениями (инфаркт миокарда (ИМ) и гипертония при СД типа 2). Также показана ассоциация микросателлитных маркеров рядом с генами антиоксидантной защиты (CAT и SOD2) с ишемической болезнью сердца (ИБС) при СД 2-го типа, что свидетельствует о важной роли окислительного стресса в формировании диабетических макроангиопатий.

7. Показана ассоциация полиморфных маркеров, расположенных в основных генах ренин-ангаотензиновой системы (РАС) (гены ангиотензиногена, АСЕ и AGT1R) и системы окиси азота (минисателлит ecNOS4a/4b гена N0S3) с сердечно-сосудистыми патологиями (артериальная гипертония, ИБС, ИМ и гипертрофия левого желудочка), что указывает на причастность патологической активации РАС и нарушения нормальной выработки окиси азота сосудистым эпителием к развитию сердечно-сосудистых заболеваний.

СПИСОК ОСНОВНЫХ СТАТЕЙ И ОБЗОРОВ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Обзоры:

Чистяков Д.А., Туракулов Р.И. Генетические маркеры гипертонической

болезни. Генетика. 1999. Т. 35. No. 5, С. 565-573.

Chistyakov D.A., Savost'yanov K.V., Turakulov R.I., Nosikov V.V. Genetic

determinants of Graves' disease. Mol. Genet. Metab. 2000. V. 71. No. 1-2. P.

66-69.

Статьи:

Чистяков Д.А., Гаврилов Д.К., Овчинников И.В., Носиков В.В. Анализ распределения аллелей четырех гипервариабельных тандемных повторов среди неродственных представителей русской нации, проживающих в Москве, с использованием полимеразной цепной реакции. Мол. биология. 1993. Т. 27. No. 6. С. 1304-1314.

Ефремов И.А., Чистяков Д.А. Носиков В.В. Анализ полиморфизма двух гипервариабельных районов ДНК в русской популяции Москвы с помощью полимеразной цепной реакции. Мол. биология. 1996. Т. 30. No.2. С. 307-318.

Чистяков Д.А., Ефремов И.А., Одинокова О.Н.. Носиков В.В. Анализ аллельного полиморфизма двух тетрануклеотидных повторов в двух городских популяциях России. Мол. биология. 1996. Т. 30. No.6. С. 12741283.

Демуров Л.М., Чистяков Д.А.. Чугунова Л.В.. Шамхалова М.Ш., Кондратьев Я.Ю., Анохин Э.А.. Носиков В.В. Изучение полиморфизма типа вставка/ делеция гена ангиотензин-превращающего фермента у здоровых лиц и пациентов с диабетическими ангиопатиями. Мол. биология. 1997. Т. 31. No.l. С. 60-64.

Чистяков Д.А., Челнокова М.В., Ефремов И.А., Ступакова М.В.. Одинокова О.Н., Носиков В.В. распределение аллелей микросателлитных локусов HUMCYAR04 и D19S253 в двух городских популяциях России. Генетика. 1997. Т. 33. No.2. С. 262-268.

Туракулов Р.И., Чистяков Д.А., Одинокова О.И., Носиков В.В. Аллельный полиморфизм коротких тандемных повторов локусов HUMF13A01 и HUMCD4 в русских популяциях Москвы и Томска. Генетика. 1997. Т. 33. No.7. С. 979-985.

Чистяков Д.А.. Туракулов Р.И., Горашко Н.М., Демуров Л.М., Рачиба Ю.М., Кодратьев Я.Ю., Миленькая Т.М., Шестакова М.В., Дедов И.И., Носиков В.В. Изучение полиморфизма динуклеотидного повтора в гене альдозоредуктазы в норме и у больных инсулинзависимым сахарным диабетом с сосудистыми осложнениями. Мол. биология. 1997. Т. 31. No.5. С. 778-783.

Моисеев B.C.. Демуров Л.М., Кобалава Ж.Д., Чистяков Д.А., Терещенко С.Н., - Коровина Е.А., Носиков в.В. Полиморфизм гена ангиотензин-превращающего фермента у больных эссенциальной гиперетензией. гипертрофической кардиомиопатией и инфарктом миокарда, перенесенном в молодом возрасте: предварительное сообщение. Тер. архив. 1997. Т. 69. No.9. С. 18-23.

Туракулов Р.И., Чистяков Д.А., Одинокова О.Н., Галактионов O.K.. Носиков В.В. Аллелльный полиморфизм тетрануклеотидного тандемного повтора SE33 у удэгейцев и в двух городских популяциях России. Мол. биология. 1997. С.31. No.6, С. 981-987.

Чистяков Д.А., Демуров Л.М.. Кондратьев Я.Ю., Кобалава Ж.Д., Терещенко С.Н., Моисеев B.C.. Носиков В.В. Полиморфизм гена ангиотензин-превращающего фермента у больных артериальной

гипертонией и сердечными нарушениями. Мол. биология. 1998. Т. 32. No.3. С. 410-415.

Чистяков Д.А., Демуров Л.М., Кондратьев Я.Ю., Миленькая Т.М., Мамаева Г.Г., Балаболкин М.И., Носиков В.В. Полиморфизм гена ангиотензин-превра-щающего фермента у больных ИНСД с диабетической ретинопатией и перенесших инфаркт миокарда. Генетика. 1998. Т. 34. No.12. С. 1699-1703.

Чистяков Д.А., Демуров Л.М., Кондратьев Я.Ю., Носиков В.В.. Сравнительный анализ полиморфизма генов HLA-DQA1 и DQB1 в московской популяции и у больных ИЗСД и ИНСД. Мол. биология. 1998. Т. 32. No.6. С. 964-969.

Чистяков Д.А.. Туракулов Р.И.. Моисеев B.C., Носиков В.В., Полиморфизм Т174М гена ангиотензиногена связан с гипертонической болезнью в московской популяции. Мол. биология. 1999. Т. 33. No. 4. С. 592-594. Чистяков Д.А., Туракулов Р.И., Кондратьев Я.Ю., Шестакова М.В., Носиков В.В., Дедов И.И., Дебабов В.Г., Полиморфизм Т174М гена ангиотензиногена и генетическая предрасположенность к диабетической нефропатии при инсу-линзависимом сахарном диабете. Мол. биология. 1999. Т. 33. No. 2. С. 211-213.

Чистяков Д.А.. Чугунова Л.А., Шамхалова М.Ш., Шестакова М.В., Миленькая Т.М., Дедов И.И., Дебабов В.Г., Носиков В.В. Полиморфизм гена сосудистого рецептора ангиотензина II (тип 1) и диабетические ангиопатии. Генетика. 1999. Т. 35. No. 9. С. 1289-1293. Чистяков Д.А., Туракулов Р.И., Терещенко С.Н., Кобалава Ж.Д., Моисеев C.B., Носиков В.В. Полиморфизм Т174М гена ангиотензиногена и сердечные заболевания в московской популяции. Генетика. 1999. Т. 35. No. 8. С. 1160-1164.

Минушкина Л.О.. Затейщиков Д.А.. Кудряшова О.Ю., Чистяков Д.А.. Носиков В.В.. Цимбалова Т.Е.. Баринов В.Г., Носенко Е.М.. Седов В.П., Сидоренко. В.А. Изучение ассоциации гена сосудистого рецептора ангиотензина II (тип 1) с дисфункцией эпителия у пациентов с ишемической болезнью сердца. Кардиология. 2000. Т. 40. No.l. С. 19-23. Чистяков Д.А., Туракулов Р.И., Щербачева Л.Н., Мамаева Г.Г., Балаболкин М.И., Носиков В.В. Полиморфизм локуса D11S2008 рядом с геном каталазы и артериальная гипертония и ишемическая болезнь сердца при инсулиннезависимом сахарном диабете. Генетика. 2000. Т. 36. No. 3. С. 423-426.

Чистяков Д.А.. Савостьянов К.В., Туракулов Р.И., Петунина H.A., Трухина Л.В., Кудинова A.B., Балаболкин М.И., Носиков В.В. Полиморфизм маркера D6S2414, расположенного в области генов HLA (6р21.31) и генетическая предрасположенность к болезни Грейвса в московской популяции. Мол. биология. 2000. Т. 34. No. 1. С. 24-27. Чистяков Д.А.. Кобалава Ж.Д., Терещенко С.Н., Моисеев B.C., Носиков В.В. Полиморфизм сосудистого рецептора ангиотензина II (тип 1) и сердечно-сосудистые заболевания. Тер. архив. 2000. Т. 76. No. 4. С. 27-30.

Chistyakov D.A., Savost'yanov K.V., Turakulov R.I., Petunina N.A., Kudinova A.V., Balabolkin M.I., Nosikov V.V. Complex analysis of Graves' disease using a set of polymorphic markers, Mol. Genet. Metab. 2000. V.70. No. 7. P. 214-218.

Чистяков Д.А., Савостьянов K.B., Туракулов Р.И., Щербачева Jl.H., Мамаева Г.Г., Балаболкин М.И., Носиков В.В. Нуклеотидная замена С1167Т в гене каталазы и расположенные рядом полиморфные маркеры D11S907 и D11S2008 связаны с диабетом типа 2. Мол.биология. 2000. Т. 34.No.5. С. 863-867.

Воронько О.Е., Чистяков Д.А., Кобалава Ж.Д., Терещенко С.Н., Носиков В.В.,МоисеевС.В. Полиморфный минисателлит ecNOS4a/4b в гене эндотелиальной NO-синтазы и сердечно-сосудистые заболевания. Мол. биология 2000. Т. 34. No. 5. С. 875-878.

Чистяков Д.А.. Воронько О.Е.. Савостьянов К.В., Минушкина Л.О., Затейщиков Д.А., Носиков В.В. Полиморфные маркеры генов эндотелиальной NO-синтазы и сосудистого рецептора ангиотензина II (тип 1) и предрасположенность к ишемической болезни сердца. Генетика. 2000. Т. 36. No. 12. (в печати).

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Чистяков, Дмитрий Александрович

генотипов двух наугад взятых индивидов) STR short tandem repeats (короткие тандемные повторы)

SSCP single strand conformation polymorphism (конформационный полиморфизм одноцепочечной ДНК) VNTR variable number of tandem repeats (тандемные повторы с изменяющимся числом копий) TEMED N, N, N', N' - тетраметилэтилеидиамин

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Полиморфные участки ДНК

1.1.1 .Типы полиморфизма

1.1.2. Минисателлиты

1.1.3. Микросателлиты

1.1.4. Методы детекции полиморфизма ДНК

1.2. Полиморфные маркеры в геномной дактилоскопии

1.2.1. Идентификация личности на уровне ДНК

1.2.2. Характеристика локусов, исследованных в настоящей работе

1.2.2.1. 01880 (МСТ113)

1.2.2.2. 011755 (т£22)

1.2.2.3. ароВ-З'уЪГШ.

1.2.2.4. ^Н-5'УЖК

1.2.2.5. 018111 (рЗЗ.6)

1.2.2.6. квьтата

1.2.2.7. НиМу\\<Т

1.2.2.8. ГОМТН01 (ТС11)

1.2.2.9.

1.2.2.10.

1.2.2.11. НимСУАЯ04 (СУР19)

1.2.2.12. НЦМС

1.2.2.13. Н'и'хМР 13АО

1.2.2.14. НЦМАСТБР2 (8ЕЗЗ)

1.2.2.15. Амелогенин и другие локусы половой принадлежности

1.3. Полиморфные генетические маркеры и наследственные заболевания

1.3.1. Построение подробных физических карт хромосом и картирование наследственных и мультифакторных заболевании

1.3.2. Молекулярно-генетические подходы в изучении и диагностике мультифакторных заболеваний

1.4. Характеристика мультифакторных заболеваний, исследованных в настоящей работе

5 1.4.1. Диффузно-токсический зоб (Базедова белезнь) 60 1.4.2. Инсулинзависимый сахарный диабет (ИЗСД, диабет 1-го типа)63 1.4.3. Инсулиннезависимый сахарный диабет (ИЗСД, диабет 2-го типа)66 1.4.4. Сосудистые осложнения диабета 68 1.4.4.1. Диабетическая нефропатия 68 1.4.4.2. Диабетическая ретинопатия 72 1.4.4.3. Макрососудистые осложнения диабета 74 1.4.5. Гипертоническая болезнь

1.4.6. Инфаркт миокарда и прочие сердечно-сосудистые заболевания^

1.4.7. Гипертрофическая кардиомиопатия

1.5. Характеристика исследованных в работе генов и полиморфных маркеров

1.5.1. Ренин-ангиотензиновая система

1.5.1.1. Ангиотензиноген

1.5.1.2. Ангиотензин-превращающий фермент

1.5.1.3. Сосудистый рецептор ангиотензина И (тип 1)

1.5.2. Система окиси азота и зндотелиальная МЗ-синтаза

1.5.3. Альдозоредуктаза и сорбитоловый путь обмена глюкозы

1.5.4. Окислительный стресс и ферменты антиоксидантной защиты катал аза и Мп-зависимая супероксиддисмутаза

1.5.5. Локус главного комплекса гистосовместимости (НЬА)

1.5.5.1. Гены НЬА-ВО

1.5.5.2. Ген р-субъединицы большой мультифункциональной протеосомы (ЬМР2)

1.5.6. Поверхностный антиген цитотоксических Т-лимфоцитов (СТЬА4)

1.5.7. Антагонист рецептора интерлейкина

1.5.8. Рецептор тиреостимулирующего гормона (тиреотропина)

Введение Диссертация по биологии, на тему "Полиморфные маркеры в геномной дактилоскопии и генетическом анализе ряда мультифакторных заболеваний"

В первой половине 90-х исследования, касающиеся поиска и анализа полиморфизма вариабельных участков генома человека, достигли наибольшего размаха и интенсивности. Это позволило создать несколько поколений подробных генетических карт с более или менее равномерным распределением по всей хромосоме высокополиморфных маркеров, причем плотность последних на карте возрастала от поколения к поколению,

Полиморфные маркеры нашли быстрое применение в геномном картировании, позволяя привязать к себе локализованные по соседству гены и упорядочить их взаимное расположение на хромосоме. Использование таких маркеров придало еще больший размах широкомасштабным исследованиям по расшифровке генома человека, которые к настоящему времени уже близки к своему завершению.

Полиморфные локусы также привлекли к себе активное внимание со стороны судебных медиков и биохимиков, занятых биологической экспертизой. Имеющиеся к моменту внедрения ДНК-анализа (середина 80-х годов) идентификационные системы были основаны на существовании множественных форм белков (изоферментный анализ) и обладали недостаточной разрешающей способностью. Использование полиморфных локусов ДНК позволило резко повысить разрешающую силу и мощность идентификационного анализа и получило самое широкое распространение в судебно-медицинской практике.

Однако не каждый вариабельный локус в равной степени пригоден для идентификации личности на уровне ДНК. В геномной дактилоскопии обычно используют мультиаллельные локусы, отличающиеся высоким уровнем полиморфизма и информативности и, следовательно, обладающие существенной разрешающей силой. Аллели таких локусов должны эффективно и с равной интенсивностью амплифицироваться на деградированной ДНК и при наличии очень малых количеств последней, не обнаруживая при этом чересчур сложной гетерогенности по размеру и межаллельной вариабельности - факторов, сильно затрудняющих точность генотипирования.

Подобные жесткие критерии не относятся к полиморфным локусам, применяемым в генетическом анализе наследственных заболеваний. Здесь используются разнообразные маркеры нескольких типов, расположенные как внутри, так и между генами. Генетический анализ с использованием вариабельных локусов подразделяется на ассоциативный и семейный (анализ сцепления). При ассоциативном анализе сравнивают распределение частот аллелей и генотипов полиморфного маркера, расположенного внутри или рядом с кандидатным геном, в группах больных и здоровых доноров. Наличие достоверных различий в распределении свидетельствует об ассоциации полиморфного маркера с заболеванием. При этом внутригенные маркеры имеют предпочтение перед межгенными, т.к. в их случае обнаружение ассоциации однозначно указывает на связь конкретного гена с изучаемой патологией. В анализе сцепления преимущественно используются монолокусные повторы (мини- и микросателлиты), находящиеся внутри генов и по соседству с ними.

Установление ассоциации и сцепленности гена с заболеванием имеет важное значение для разработки мер по профилактике и лечению данной патологии, дифференцированного подхода при подборе лекарственных препаратов (ингибиторы, блокаторы, стимуляторы), действующих на белковый продукт данного гена (фермент, рецептор), для пациентов в зависимости от их генотипа, формированию групп риска и прочее. Особое значение это имеет в случае таких комплексных заболеваний, как сахарный диабет и диабетические осложнения, сердечно-сосудистые и аутоиммунные нарушения и прежде всего по причине повсеместного распространения данных патологий и существенного характера наносимого ими социальноэкономического вреда.

В настоящем исследовании нами рассмотрены два аспекта применения полиморфных маркеров - это геномная дактилоскопия (разработка тест-системы для идентификации личности и определения спорного отцовства на территории РФ) и ассоциативный анализ ряда мультигенных заболеваний (сахарный диабет и его сосудистые осложнения, Базедова болезнь, сердечнососудистые нарушения) в московской популяции.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Чистяков, Дмитрий Александрович

ВЫВОДЫ

1. Разработана идентификационная панель из 14 локусов (6 мини- и 8 микросателлитов), предлагаемая для разрешения спорного отцовства и идентификации личности на уровне ДНК на территории РФ. Разрешающая способность тест-системы из 6 минисателлитов гарантирует точную идентификацию личности в популяции размером 9.65 млн. чел. Тест-система из 8 микросателлитов гарантирует точное определение для популяции, насчитывающей 1.93 млрд.чел. Общее

17 значение рМ панели из 14 локусов равно 5.56 х 10" .

3. Показана ассоциация генов HLADQA1 и DQB1, а также гена каталазы (CAT), полиморфных маркеров D11S917 и D11S2008 рядом с геном CAT и микросателлита D6S392 рядом с геном Мп-зависимой супероксиддисмутазы (SOD2) с сахарным диабетом 1 -го (ИЗСД) и 2-го (ИНСД) типов. Для генов антиоксидантной защиты такая связь показана впервые.

4. Обнаружена связь двух полиморфных маркеров (полиморфизм типа I/D гена ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ) и минисателлит ecNOS4a/4b гена эндотелиальной NO-синтазы (NOS3)) с развитием диабетической нефропатии при сахарном диабете (СД) типа 1. Тем самым подтверждается важная роль дисбаланса между вазоактивными агентами в почечных микрососудах, ведущая к возникновению внутриклубочковой гипертензии и последующему развитию нефропатии.

7. Показана ассоциация полиморфных маркеров, расположенных в основных генах ренин-ангиотензиновой системы (РАС) (гены ангиотензиногена, АСЕ и AGT1R) и системы окиси азота (минисателлит ecNOS4a/4b гена N0S3) с сердечно-сосудистыми патологиями (артериальная гипертония, ИБС, ИМ и гипертрофия левого желудочка), что указывает на причастность патологической активации РАС и нарушения нормальной выработки окиси азота сосудистым эпителием к развитию сердечно-сосудистых заболеваний.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В обзоре литературы дана характеристика полиморфизма ДНК, типов полиморфных участков и различных методических подходов по их обнаружению и исследованию. Рассмотрены аспекты практического использования полиморфных маркеров для идентификации личности, картирования генов и генетического анализа наследственных заболеваний.

В разделе, посвященном идентификационному анализу, подробно рассмотрены тест-системы, созданные в разных странах и состоящие из высокополиморфных маркеров, а также охарактеризованы вариабельные локусы, вошедшие в состав разработанной в настоящем исследовании идентификационной панели.

В другом разделе приведены характеристики и современное состояние генетического анализа наследственных заболеваний, исследованных в настоящей работе. Охарактеризованы использованные в работе гены-кандидаты и расположенные в них или по соседству полиморфные маркеры, суммированы имеющиеся данные по связи этих маркеров с генетическими нарушениями.

Несмотря на сложность, обилие и противоречивость литературного материала, в обзоре литературы предпринята попытка достаточно полно описать объекты исследования, а также систематизировать и обобщить накопленные по теме исследований данные.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 2.1. Реактивы и ферменты.

ДНК-полимераза TaqR получена от НПО «Биотех» (Москва). Рестриктазы AluI, BstXI, Hin6I, Hindi, Mbol, Ncol, Psyl - производства НПО «Fermentas» (Литва), BstDEI - производства НПО «Сибэнзим» (Новосибирск). ДНК-лигаза фага Т4, фрагмент Кленова ДНК-полимеразы I Е. coli, плазмиды pUC19 и pBR322, коммерческий набор для секвенирования - производства НПО «Fermentas» (Литва). Протеиназа К - фирмы «Merck» (Германия) и «Sigma» (США).

Синтез олигонуклеотидов выполнен В. П. Вейко (ГосНИИгенетика, Москва), НПО «Fermentas» (Литва), НПО «Эвиос-Рос» (Москва) и НПО «Синтол» (Москва). dATP, dCTP, dTTP, dGTP - производства НПО «Ферментас» (Литва). Радиоактивные соединения ([a-32P]dATP и [у-32Р]АТР (6000 Ки/ммоль)) получены от ИЯФ (Обнинск).

Дрожжевая тРНК, ДСН, бромистый этидий, формальдегид - фирмы «Serva» (Германия).

Протеиназа К, трис-основание, сахароза, агароза (Type II), БСА, Тритон X-100, Твин-20, минеральное масло, ДТТ, ДМСО, ЭДТА, акриламид, метилен-бисакриламид - фирмы «Sigma» (США).

TEMED и трис-основание - производства фирмы «Реанал» (Венгрия). Xcjisth ы й полимер «Chelex R-100» - фирмы «Bio-Rad Laboratories»

ТЛТТМ у 4w III) \.J .

Фикол, поливинилпирролидон - фирмы «Merck» (Германия). ДНК спермы лосося - фирмы «Calbiochem» (США). NaOH - производства «Chemapol» (Чехия).

Уксусная кислота, трнхлоруксусная кислота, НС1, азотная кислота, борная кислота, трис-основание, фенол, хлороформ, этанол, изопропанол, глицерин, ампициллин - отечественного производства («Реахим») квалификации «осч», «хч»и «чда».

Соли: хлорид магния, сульфат аммония, нитрат серебра фирмы«81|2Д1а» (США), дигидрофосфат натрия, КС1 - производства фирмы «Мегск» (Германия), NaCI - фирмы «Serva» (Германия), персульфат аммония -фирмы «Реанал» (Венгрия), ацетат натрия, карбонат натрия, цитрат натрия -отечественного производства («Реахим») квалификации «осч» и «хч».

Нейлоновые фильтры «Hybond N» - фирмы «Amersham» (Великобритания).

2.2. Буферные растворы.

Буфер ТЕ : 10 мМ Трис-HCl (рН 8.0), 1 мМ ЭДТА. Буфер ТАЕ (1х): 40 мМ Трис-ацетат, 2 мМ ЭДТА. Буфер ТВЕ (1х): 89 мМ Трис-борат, 2 мМ EDTA. SSC (20х) - 3 М NaCI, 300 mM цитрат натрия (рН 7.5).

SSPE (1х) - 180 mM NaCI, 10 mM дигидрофосфат натрия (рН 7.4), 1 мМ ЭДТА.

Раствор Денхардта (5 Ох) - 1%-ный фикол, 1%-ный поливинилпирролидон, 1%-ный БСА.

Буферы для рестрикции (1х):

G - 10 мМ Трис-HCl (рН 7.5), 10 мМ хлорид магния, 50 мМ NaCI; О - 50 мМ Трис-HCl (рН 7.5), 10 мМ хлорид магния, 10 мМ NaCI; R -10 мМ Трис-HCl (рН 8.5), 10 мМ хлорид магния, 100 мМ КС1; Y - 33 мМ Трис-ацетат (рН 7.9), 10 мМ ацетат магния, 66 мМ ацетат калия.

2.3. Популяционные выборки и пациенты.

Популяционную выборку, использованную для анализа полиморфных локусов, вошедших в идентификационную панель, сформировали из образцов крови, взятых у пациентов травматологических пунктов г.Москвы и Института ревматологии РАМН (Москва). Выборка из неродственных представителей томской популяции, сформированная из здоровых лиц и пациентов родильных домов, была любезно представлена сотрудником НИИ медгенетики Томского НЦ РАМН О.Н. Одиноковой. Образцы крови удэгейцев были собраны в Пожарском районе Приморского края и любезно предоставлены сотрудником того же института O.K. Галактионовой. Для настоящего исследования были отобраны 50 семей из трех-шести человек, преимущественно проходивших по экспертизе спорного отцовства в московском и казанском бюро суд.-мед. экспертизы.

В группу популяционного контроля, образцы крови которой были любезно предоставлены Мамаевой Г.И. из Эндокринологического центра (ЭНЦ) РАМН, вошли неродственные лица без каких-либо системных нарушений и хронических заболеваний - пациенты травмпунктов и станций переливания крови г.Москвы. Группы больных сахарным диабетом и диабетическими ангиопатиями были сформированы из числа пациентов ЭНЦ РАМН. Образцы крови больных ДН при ИЗСД собраны сотрудниками ЭНЦ Шестаковой М.В., Шамхаловой М.Ш. и Чугуновой Л.А., ДР при ИЗСД - Миленькой Т.М., ИБС и ИМ при ИНСД -Никитиной Л.О. и Булатовой О.С. Образцы крови больных артериальной гипертонией при ИНСД были собраны на кафедре эндокринологии Российской медицинской академии Аметовым A.C. и Демидовой С.И.

Группы больных ИМ, гипертонией и ГЛЖ сформированы на базе кардиологического отделения 64-й московской городской больницы В.И. Моисеевым, С.Н. Терещенко и Ж.Д. Кобалавой (кафедра внутренних болезней Российского университета дружбы народов). Образцы крови больных ИБС любезно предоставлены Л.О. Минушкиной и Д.А. Затейщиковым из Медицинского центра Управления делами президента РФ. Образцы крови пациентов с ДТЗ предоставлены сотрудниками кафедры эндокринологии и диабетологии Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова Н. А. Петуниной, Л. В. Трухиной и А. В. Кудиновой.

2.4. Выделение геномной ДНК.

2.4.1. Выделение ДНК из цельной крови человека с помощью протеиназы К и экстракции фенолом-хлороформом [463].

200 мкл венозной крови человека смешивали с равным объемом лизирующего буфера (10 мМ Трис-НС1рН 8.0, 0.32 М сахароза, 10 мМ ЭДТА, 100 мМ КтаС1, 0.1%-ный тритон Х-100), добавляли ДТТ, ДСН и протеиназу К в конечной концентрации 0.2%, 40 мМ и 20 мкг/мл соответственно и инкубировали либо при 37°С в течение ночи, либо 2 ч при 60°С. Затем последовательно обрабатывали фенолом, смесью фенол/хлороформ (1:1) и хлороформом (дважды на каждой стадии). ДНК осаждали добавлением 1 мл 96%-ного этанола в присутствии 0.3 М ацетата натрия и тРНК дрожжей (10 мкг/мл) с последующей инкубацией при -70°С. Осадок ДНК промывали 80%-ным этанолом, сушили на воздухе и растворяли в 30 мкл буфера 1хТЕ. Препараты ДНК хранили при -70°С.

2.4.2. Выделение ДНК из цельной крови или пятен крови с использованием хелатного полимера С1ге1ех К-100 [788].

20 мкл крови (пятно крови размером 3 мм2) добавляли к 1 мл бидистиллированной воды, аккуратно перемешивали и центрифугировали в микроцентрифуге 3 мин. Надосадочную жидкость удаляли, к осадку добавляли 200 мкл 5%-ной водной суспензии ох Я-100, активно перемешивали и инкубировали 20 мин при 55°С. После инкубации суспензию встряхивали и помещали в кипящую водяную баню на 8 мин. Затем образец вновь встряхивали и центрифугировали 1 мин. 20 мкл полученного экстракта ДНК (надосадочная жидкость) использовали для ПЦР. Выделенную ДНК хранили при -20°С. При повторном использовании образцы после размораживания встряхивали, осаждали смолу7 СЬе1ех К-100 центрифугированием и отбирали нужное количество супернатанта для проведения ПЦР.

2.4.3. Выделение ДНК из слюны.

20 мкл слюны разбавляли 1 мл деионизованной воды. Далее поступали так же, как в описано в 2.4.2.

2.4.4.Выделение ДНК из луковиц волоса.

Прикорневые фрагменты волос длиной около 1 см (1-3 штуки) инкубировали в 200 мкл 5%-ной водной суспензии СЬе!ех Р.-100 в течение ночи при 55°С. Затем пробирку выдерживали в кипящей водяной бане в течение 8 мин, встряхивали 10 сек и центрифугировали в течение 3 мин. Для проведения ГТЦР брали 20 мкл супернатанта.

2.5. Определение иуклеотидной последовательности тандемного повтора в л оку ce DIS 111.

Нуклеотидную последовательность минисателлитного повтора рЗЗ.6 определяли по методу Сэнгера с использованием коммерческого набора для с ек в е н иро в а н и я [657]. В качестве матрицы использовали одноцепочечную ДНК рекомбинантной плазмиды pUC19 [845], содержащую клонированный фрагмент минисателлита размером 566 п.н. (по результатам разделения в 6%-ном полиакриламидном геле (ПААГ)). У амплифт хЦйрОВНННОРО (^рЗГМCHTä ДНК заполняли концы с помощью фрагмента Кленова ДНК-полимеразы I E.coli в присутствии смеси четырех dNTP и с использованием ДНК-лигазы встраивали в плазм иду, расщепленную рестриктазой HincII. Плазмидную ДНК выделяли, обрабатывали ферментами и электрофоретически разделяли согласно стандартным методам [11]. Продуктами лигирования трансформировали клетки штамма JM109 E.coli [F'traD36, lad0, iacZAM15, proAB/recAÎ, endAl, gyrA96(NaIR), thi, hsdR17 (rK., mK+), supE44, relAl, A(lac-proAB)]. Рекомбинантные клоны отбирали, анализируя выделенные препараты плазмидной ДНК на наличие вставки с помощью ПЦР. Для отбора клонов использовали ЕВ~агар с ампициллином (50 мкг/мкл).

2.6. Амплификация ДНК.

ДНК амплифицировали методом ПЦР на термоциклерах РНС-2 («Techne», Великобр итания) и PolyChain («Polygen», Австрия) в 50 мкл реакционной смеси, содержащей буфер 1 или 2, 0.2 мМ каждого dNTP, по 10 пикомолей каждого из праймеров, 100-200 нг геномной ДНК или 5-20 мкл экстракта ДНК, полученного с использованием Chelex R-100 и 2.0 ед. ДНК-полимеразы Taq. Буфер 1 включал 67 мМ Трис-HCl (pH 8.8), 16.6 шМ сульфат аммония и 0.1%-ный твин-20. Концентрацию хлорида магния варьировали в зависимости от амлифицируемого локуса. Буфер 2 содержал 10 мМ Трис-HCl (pH 8.8), 50 мМ KCl и 1.5 мМ MgCl2. При необходимости в реакционную смесь вносили ДМСО в конечной концентрации 10%.

На начальной стадии ПЦР денатурировали ДНК при 94°С в течение 4 мин, на конечной - проводили синтез второй цепи при 72°С в течение 7 мин. В промежутке между данными стадиями осуществляли 25-40 циклов ПЦР в зависимости от локуса и количества исходной ДНК по трехступенчатой программе, включающей денатурацию ДНК (94°С/1 мин), отжиг праймеров в течение 1 мин и синтез второй цепи (72°С/1 мин). Температуру отжига праймеров варьировали в зависимости от амлифицируемого локуса. Условия ПЦР и последовательности праймеров для амплификации исследованных гтлкх/лгт ппикрпрцы с та Р\п 1 н А

А w А V * v Vv А-* lUVlIli ^ 1 1 1 »

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Чистяков, Дмитрий Александрович, Москва

1. Алексеев Л.П., Дедов И.И., Зилов A.B., Болдырева М.Н., Демидова И.Ю.,

2. Трофимов Д.Ю., Хаитов P.M. Межпопуляционный подход в установлении ассоциированной с HLA генетической предрасположенности к инсулинзависимому сахарному диабету // Сахар, диабет. 1998. No. 1. С. 19-21.

3. Дедов И.И. Сахарный диабет в Российской Федерации: проблемы и пути решения//Сахар, диабет. 1998. No. 1. С. 7-18.

4. Джинчарадзе А.Г., Иванов П.Л., Рысков А.Л. Геномнаядактилоскопия». Характеристика клонированной последовательности, обладающей в составе вектора М13 свойствами высокополиморфного маркера ДНК П Докл. АН СССР. 1987. Т. 295. С. 230-233.

5. Жукова С.П., Фомичева Е.В., Ковалев Ю.П. Роль структурного полиморфизма гена ангиотензин-превращающего фермента в развитии инфаркта миокарда /'/' Клин. Мед. 1997. Т. 75. С. 36-39.

6. Иванов П.Л. Экспертная идентификация останков императорской семьи посредством молекулярно-генетической верификации родословных связей // Суд.-мед. эксп. 1998. Т. 41. С. 30-47.

7. Ишариошкин С.Н., Иванова-Смоленская И.А., Маркова ЕД. Новый механизм мутаций у человека: экспансия тринуклеотидных повторов // Генетика. 1995. Т. 31. С. 1478-1489.

8. Кинцнельсон Л.А. Клинические формы диабетической ретинопатии // Вестник офтальмологии. 1989. Т. 105. С. 43-51.

9. Котлярова С.Э., Масленников А.Б., Коваченко С.П. Полиморфизм 3'-фланкирующей области гена аполипопротеина В в популяции сибирского региона/7 Генетика. 1994. Т. 30. С. 709-712.

10. Овчинников И. В, Исследование аллельного полиморфизма генов и определение пола методом амплификации ДНК / Дисс. канд. биол. наук. М., 1993. 126 с.

11. ХЪ.Стщын В А., Хорт М.В., Погода Т.В., Шадрина М.И., Слонимский П.А., Лимборская С.А. Высокополиморфные участки генов аполипопротеина В и ангиотензин-превращающего фермента в удмуртской популяции //1. Гт 1 АЛП Т' ПО /С Г\енетика. ууу:. i. jj.

12. Ъ.Сунцов Ю.И., Дедов И.И., Кудрякова С.В. Государственный регистр сахарного диабета: эпидемиологическая характеристика инсулиннезависисимого сахарного диабета /7 Сахар, диабет. 1998. No. 1. С. 41-43.

13. Хуснутдинова Э.К, Погода Т.В., Просняк М.И., Хидиятова ИМ., Рафиков Х.С., ЛимСюрская С. А. Анализ аллельных вариантов гипервариабельного локуса аполипопротеина В в популяциях башкир и коми /7 Генетика. 1995. Т. 31. С. 995-1000.

14. Юсупова A.M. Защитное действие каталазы и аскорбиновой кислоты при корректирующем лечении детей, страдающих сахарным диабетом и ожирением //Педиатрия. 1985. Т. 8. С. 43-45.

15. Acton R.T., Rosemcm J.M., Bell D.S., Goldenberg R.L. Tseng M.L., Vanichanan C., Harman L.A., Go R.C. Genes within the major histocompatibility complex predict NIDDM in African-American women in Alabama//Diabetes Care. 1994. V. 17. P. 1491-1494.

16. Adachi Т., Wang X.I,. Association of extracellular-superoxide dismutase phenotype with the endothelial constitutive nitric oxide synthase polymorphism /7 FEBS Lett. 1998. V. 433. P. 166-168.

17. A lb is-Camps M., BlasczykR. Fluorotyping ofHLA-DRB by sequence-specific priming and fluorescent probing // Tissue Antigens. 1999. V. 53. P. 301-307.

18. Alford R.L., Hammond H.A., Goto I., Caskey C.T. Rapid and efficient resolution of paternage by amplification of short tandem repeats /'/' Am. J. Hum. Genet. 1994. V. 55. P. 190-195.

19. Ansari N.H., WangL., ErwinA.A., Church D.F. Glucose-dependent formation of free radical species in lens homogenate // Biochem. Mol. Med. 1996. V. 59. P. 68-71.

20. Ansari-Lari M.A., Muzny D.M., Lu J., 1m F., IAlley C.E., Spanos S.: Malley T., Gibbs R.A. A gene-rich cluster between the CD4 gene and triosephosphate isomerase genes at huamn chromosome 12pl3 // Genome Res. 1996. V. 6. P. 314-326.

21. Armour J.A.L., Wong Z, Wilson W, Royle N.J., Jeffreys A.J. Sequences flanking the repeat arrays of human minisatellites: association with tandem and dispersed repeat elements // Nucleic Ar.ids Res. 1989. V. 17. P. 49254936.

22. Asamoah A., Yanamandra K., Thurmon T.F., Richter R., Green R, Lakin T., Martin C. A deletion in the angiotensin converting enzyme (A.CE) gene is common among African Americans with essential hypertension /7 Clin. Cliim. Acta. 1996. V. 254. P. 41-46.

23. Asayama K., hayashibe H., Dobashi K., Niitsu K., Miyao A., Kato K. Antioxidant enzyme status and lipid peroxidation in various tissues of diabetic and starved rats // Diabetes. 1989. V. 12. P. 85-91.

24. Badenhop R.F., Wang X.L., Wilcken D.E. Aiigiotensin-converting enzyme genotype in children and coronary events in their grandparents /'/' Circulation. 1995. V. 91. P. 1655-1658.

25. Baechtel F.S., Minson K.L., ForsenG.E., Budowle B., Kearney J.J. Tracking the violent crininal offender through DNA typing profiles a national database system concept //EXS. 1991. V. 58. P. 356-360.

26. AO.Baechtel F.S., Smerick J.B., Presley K.W., Budowle B. Multigenerational amplification of a reference ladder for alleles at locus D1S80 // J. Forensic

27. C<* T t O T> 1 1 /" i 1 r> ^

28. Baisch J.M. Weeks T., Giles R. Hoover M. Stastnv P., Caüra J.D. Analysis of HLA-DQ genotypes and susceptibility in insulin-dependent diabetes mellitus /7 N. Engl. J. Med. 1990. V. 322. P. 1836-1841.

29. Balding D.J., Nichols R.A. DNA profile match probability calculation: how to allow for population startification, relatedness, database selection and single bands //Forensic Sci. Int. 1994. v' 64. P. 125-140.

30. AA.Banerji M.A., Norin A.J., Chaiken R.L., Lebovitz H.E. HLA-DQ associations distinguish insulin-resistant and insulin-sensitive variants of NIDDM in black Americans//Diabetes Care. 1993. V.16. P. 429-433.

31. Barbesino G., Tomer Y., Concepción E. S., Davies T. F., Greenberg D. A. Linkage analysis of candidate genes in autoimmune thyroid disease. Selected gender-related genes and the X-chromosome // J. Clin. Endocr. Metab. 1998. V. 83. P. 3290-3295.

32. Bennett P.M., Burch T.A., Miller M. The high prevalence of diabetes in the Pima Indians of Arizona (USA) // Excerp. Med. 1980. V. 221. P. 33-39.

33. Bennett S.T., Todd J. A. Human type 1 diabetes and the insulin gene: principles of mapping polygenes !! Annu. Rev. Genet. 1996. V. 30. P. 343-370.

34. Beohar N., Damarajii S., Prather A., Yu Q,T., Raizner A., Kleiman N.S., Roberts R.Marian A.J. Angiotensin-I converting enzyme genotype DD is a risk factor for coronary aiteiy disease /7 J. Invest. Med. 1995. V. 43. P. 275280.

35. Berta P., Hawkini J.R., Sinclair A.H., Taylor A., Griffiths L., Goodfellow P.N., Fellous M. Genetic evidence equating SRY and the testis-detenning factor//Nature. 1990. V. 348. P. 448-450.

36. Bidwell J.L., Bidwell E.A.,Bradley B.A. HLA class II genes: typing by DNA analysis /7 Bailieres Clin. Haematol. 1990.V. 3. P. 355-384.60 .Biebermann H., Schoneberg T., Krude H., SchidtzG., Gudermann T., Gruters

37. A. Mutations of the human thyrotropin receptor gene causing thyroid hypoplasia and persistent congenital hypothyroidism !! J. Clin. Endocrinol. Metab. 1997. V. 82. P. 3471-3480.61 .Blakemore A.J., Cox A. Gonzalez A.M., Maskil J.K., Hughes M.E., Wilson

38. Blakemore A.I., Watson P.F., Weetman A.P., Duff G.W. Association of Graves' disease with an allele of the interleukin-1 receptor antagonist gene 11 J. Clin. Endocrinol. Metab. 1995. V. 80. P. 111-115.

39. Bloem M.J., Manatunga A.K., Pratt J. H. Racial differences in the relationship of the angiotensin 1-converting enzyme gene polymorphism to serum angiotensin 1-converting enzyme activity // Hypertension. 1996. V. 27. P. 6266.

40. Board P.G., Webb G.C., Mc Kee J., Ischinose A. Localization of the coagulation factor XII A subunit gene (F13A.1) to chromosome bands 6p24-p25 /7 Cytogenet. Cell Genet. 1988. V. 48. P. 25-27.

41. Boehm B.O., Kuhnl P., Manfras B.J., ChenM., LeeJ.C., Holzberger G., Seidl S., Schifferdecker E., Schumm-Draeger P.M., Usadel K.H. HLA-DRB3 gene alleles in Caucasian patients with Graves' disease !! J. Clin. Invest. 1992. V. 70. P. 956-960.

42. Bonnardeaux A., Nadaud S., Charm A., Jeunemaitre X., Corvol P., Soubrier F. Lack of evidence for linkage of the endothelial cell nitric oxide synthase gene to essential hypertension././ Circulation. 1995. V. 91. P. 96-102.

43. Botstein D., White R.L., Skolnick M, Davies R.W. Construction of a genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphisms // Am. J. Hum. Genet. 1980. V. 32. P. 314-331.

44. Braun J., Marz W., Winkelmann B.R., Donner H., Pfenning U.K., Badenhoop K. Tumour necrosis factor beta alleles and hyperinsulinaemia in coronary artety disease /7 Eur. J. Clin. Invest. 1998. V. 28. P. 538-542.

45. Brinkmann B., Junge A., Meyer E., Wiegand P. Population genetic diversity in relation to microsatellite heterogeneity. Hum. Mutat. 1998. V. 11. P. 135-144.

46. Brinkmann B., MoIIer A., Wiegand P. Structure of new mutations in 2 STRj // 7" . y T J . » .1 T nnr r r 7 r\n n ">/17 "»nosystems // mi. j. Leg. ivieu. iyyj. v. iu/. P. zui-zud.

47. Brown D.L., Gorin M.B., Weeks D.E. Efficient strategies for genomic searching using the affected-pedigree-member method of linkage analysis // Am. J. Hum. Genet. 1994. V.54. P. 544-552.

48. BrownleeM. Glycation and diabetic complication /./Diabetes. 1994. V. 43. P. 836-843.

49. Budowle B., Chakraborty R., Giusti A.M., Eisenberg A.J., Allen R.C. Analysis of the VNTR locus D1S80 by the PCR followed by high-resolution PAGE // Am. J. Hum. Genet. 1991. V. 48. P. 137-144.

50. Budowle B., Monson K.L. Greater differences in forensic DNA. profile frequencies estimated from racial groups than from ethnic subgroups /7 Clin. Chim. Acta. 1994. V. 228. P. 3-18.

51. Budowle B., Smerick J.B., Keys KM., Moretti T.R. United States population data on the multiplex short tandem repeat loci HUMTK01, TPX1, and CSF1PO - and the variable number tandem repeat locus D1S80 .// J. Forensic Sci. 1997. V. 42. P. 846-849.

52. SI. Bui ley IV, Popovich B. Jones K.L. Monozygotic twins discordant for the Russell-Silver syndrome // Am. J. Med. Genet. 1995. V. 58. P. 101-105.

53. Butler J.M., Li J., Shaler T.A., Monforle J.A., Becker C.H. Reliable genotyping of short tandem repeat loci without an allelic ladder using time-offlight mass spectrometry // Int. J. Leg. Med. 1999. V. 112. P. 647-652.

54. Capon D., Chen E., Levinson A., SeeburgP., Goeddel D. Complete nucleotide sequences of the 24 human bladder carcinoma oncogene and its normal homologue././Nature. 1883. V. 302. P. 33-37.

55. Carofano L., Pizzamiglio M., Vecchio L,, Lugo G., Floris T., DErrico G., Brembilla G., Romano A., Budowle B. Italian population data on thirteen short tandem tepeat loci /7 Forensic Sci. Int. 1998. V. 97. P. 53-60.

56. S9.Casana P., Martinez F., Aznar J.A., Lorenzo J.I., Jorgiieza J.I. Practical application of three polymorphic microsatellites in intron 40 of the human von Willebrand factor gene // Haemostasis. 1985. V. 25. P. 264-271.

57. CavJ.field M., Lavender P., Farral M., Nunroe P., Lawson M., Turner P., Clark A.J.I. Linkage of the angiotensinogen gene to essential hypertension // N. Engl. J. Med. 1994. V. 330. P. 1629-1633.

58. Caulfi.eld M.t Lavender P., Newell-Price J. Linkage of the angiotensinogen gene locus to human essential hypertension in African Carib'oeans i i J. Clin. Invest. 1995. V. 96. P. 687-692."

59. Cecz J. PGR amplification of large VNTR alleles of D17S5 (YNZ22) locus .// Nucleic Acids Res. 1991. V. 19. P. 5806.

60. C.eriello A.,, dello Rosso P., Amslad. P., Cerutli P. High glucose induces antioxidant enzymedin human endothelial cells in culture. Evidence linking hyperglycemia and oxidative stress //'Diabetes. 1996. V. 45. P. 471-477.

61. Cetani F., Tonacchera M., Pinchera A., Barsacchi R., Basolo F., Miccoli P., Pacini F, Genetic analysis of the TSH receptor gene in differentiated human thyroid carcinomas //J. Endocrinol. Invest. 1999. V. 22. P. 273-278.

62. Chabanbasani M.Z., Buyse L, Legius E., Decorte R., Marynen P., Bouillon II, Cassiman J.-J. Possible association of CD3 and CD4 polymorphisms with insulin-dependent diabetes mellitus // Clin. Exp. Immunol. 1994. V. 97. P. 517-521.

63. Chace K.V., Carubelli R., Nordquist RE. The role of nonenzymatic glycosylation, transition metals, and free radicals in the formation of collagen aggregates //Arch. Biochem. Biophys. 1991. V. 288. P. 473-480.

64. Chakraborty R, Jin L. Heterozygote deficiency, population substructure, and their implications in DNA fingerprinting // Hum. Genet. 1992. V. 88. P. 267-272.

65. Chauffert M, Cis.se A., Chevenne /). You J.F., Michel S., Trivin F. Susceptibility to type 1 diabetes in the Senegalese population is linked to HLA-DQ and not TAP and LMP genes /7 Diabetes Care. 1997. V. 20. P. 1299-1303.

66. Chazi H., Magewm A.N., Gonzales F., Jones P.A. Changes in the allelicpatterns of c-H-ras-1, insulin and retinoblastoma genes in human development/7 Dev. Suppl. 1990. V. 14. P. 115-123.

67. Chen J), Zhang M, Fan W, Shi H., Li Y, Chen Q., Zhang J., Gu X. A molecular variant of angiotensinogen gene is associated with myocardial infarction in Chinese // Chung Hua I Hsueh I Chuan Hsueh Tsa Chili. 1998. V. 15. P. 133-135.

68. Chen G.; Xin J. Li Y., Wu J. Hon Y. Li J., Deng S. Polymorphisms of five short tandem repeat systems in Chinese Han population in Chenghu // Chung Hua I Hsueh Tsa Chih. 1999. V. 16. P. 77-80.

69. Chen S., Besman M.J., Sparkes R.S., Zollman S., Klisuk I., Mohandas 7'., Hall P., Shively J.E. Human aromatase: cDNA cloning, Southern blot analysis and assignment of the gene to chromosome 15 // DNA. 1988. V. 7. P. 27-38.

70. C.hevre J.C., Ham E.H. Boutin PVaxillaire M. Mutation screening in 18 Caucasian families suggest the existence of other MODY genes // Diabetologia. 1998. V. 41. P.1017-1023.

71. Chiu L.L., LaiP.S., Low P.S., Ling Y.L., Cheong P.Y., C.hee C.K., Wong P.K., Lim A.S. Molecular studies of loss heterozygosity in retinoblastoma // Ann. Acad. Sci. Singapore. 1997. V. 26. P. 315-319.

72. ChoongM.L., KoagE.S., KhawM.C., Aw T.C. Apolipoprotein B 5'Ins/Del and 3'VNTR polymorphisms in Chinese, Malay and Indidan Singapooreans // Hum. Hered. 1999. V. 49. P. 31-40.

73. Chowdhury) T.A., Dyer P. H., Kumar S., Barnett A.H., Bain S.C. Genetic determinants of diabetic nephropathy. Clin. Sci. 1999. V. 96. P. 221-230.

74. Chowdhury T.A., Kumar S., Barnett A.H., Bain S.C. Nephropathy in type 1 diabetes: the role of genetic factors // Diabet. Med. 1995. V. 12. P. 10591067.

75. Christian J.C. In: Children's Blood Pressure / Filer J., Lauer R.1VÍ., Eds / Ross Laboratories, Columbus, OH. 1985. pp. 51-55.

76. Chit B.C., Orgel L.E. Detection of specific DNA sequences with short DNA-labelled probes /7 DNA. 1885. V. 4. P. 327-331.

77. Church S.L., Grant J.W., Meese E.U., Trent J.M. Sublocalization of the gene encoding manganese superoxide dismutase (MnSOD/SOD2) to 6q25 by fluorescence in situ hybridization and somatic cell hybrid mapping // Genomics. 1992. V. 14. P. 823-825.

78. Cis.se A., C.hevenne D., Chauffert M, Ndiaye M.R. Wade A. Trivin F. HLA-markers and diabetic retinopathy in the Senegalese population H Dakar Med. 1998. V. 43. P. 29-33.

79. Clock B., Schwartz D.W., Schwartz- Jungl E.M., Thorwartl G.H., Dauber E.M., Mayr W.R. A new allele at the STR locus HUMF13A01 // Int. J. Leg. Med' 1997. V. 110. P. 284-285.

80. Collier P.M., Sauk J.J., Rosenbloom S.J., Gibson C.W. An amelogenin gene defect associated with human X-linked amelogeneis imperfecta // Arch. Oral Biol. 1997. V. 42. P. 235-242.

81. Cooke J.P. , Tsao P. Cellular mechanisms of atherogenesis and the effects of nitric oxide /7 Curr. Opin. Cardiol. 1992. V. 7. P. 799-804.

82. Cooper D.N., Smith B.A.,Cooke N.J., Niemann S., Schmidtke J. An estimate of unique DNA sequence lieterozygosity of human genome /7 Hum. Genet. 1985. V. 69. P. 201-205.

83. Cooper R., McFarlane-Anderson N., Bennett F.l, Wilks R., Puras A., Tewksbury D.,Ward R., Forrester T. ACE, angiotensinogen and obesity: a potential pathway leading to hypertension // J. Hum. Hypertens. 1997. V. 11. P. 107-111.

84. CopeUi S.B., Bergada C, Bilienbeck A.E., Goldberg AC., Kali J., Damiani D., Targovnik H.M. Molecular analysis of sex determination in sex-reversed and true hermaphroditism // Braz. J. Med. Biol. Res. 1996. V. 29. P. 743-748.

85. Costerousse (). Allegrini,/., Huang W.; Alhenc-Gelas F. Angiotensin I-converting enzyme (kininase II) in cardiovascular and renal regulations and diseases//Biol. Res. 1998. V. 31.P. 161-167.

86. Craig S.P., Buckle V.J., Lumouloux A., Mallet J. Localization of the human tyrosine hydroxylase gene at chromosome llpl5 // Cytogenet. Cell. Genet. 1985. V. 40. P. 610.

87. Cuddihy R.M., Bahn R.S., SchaidD.S. A. polymorphism in the extracellular domain of the thyrotropin receptor is highly associated with autoimmune thyroid disease in females // Thyroid. 1995. V. 5. P. 89-95.

88. Cuddihy RM., Bahn R.S. Lack of an association between alleles of interleukin-1 alpha and interleukin-1 receptor antagonist genes and Graves' disease in a North American Caucasian population /7 J. Clin. Endocrinol. Metab. 1996. V. 81. P. 4476-4478.

89. Cuddihy RM.,. Schaid D.S., Bahn R.S. Multivariate analysis of HLA loci in conjunction with a thyrotropin receptor codon 52 polymorphism in conferring risk of Graves' disease // Thyroid. 1996. V. 6. P. 261-265.

90. Dahiyat M., Cumming A,, Harrington C., Wischik C, Xuereb J., Corrigan F., Breen G., Shaw D., St Clair D. Association between Alzheimer's disease and the NOS3 gene /7 Ann. Neurol. 1999. V. 46. P. 664-667.

91. Dariavach P., Mattel M.-G., Golstein P., Lefranc M.-P. Human Ig superfamiiy CTLA-4 gene localization and organization /'/' Cytogenet. Cell Genet. 1989. V. 51: P. 983.

92. Davies J. L., Kawaguchi Y., Bennett S.T., Copeman J.B., Cordell H.J.,

93. Davis G.K., Roberts D.H. Molecular genetics of the renin-angiotensin system: implications for angiotensin II receptor blockade /7 Pharmacol. Ther. 1997. V. 75. P. 43-50.

94. D'Costa S., Petitte J.H. Sex determination of Turkey embryos using a multiplex PCR//Poult. Sei. 1998. V. 77. P. 718-721.

95. Dec orte R., Cuppens H., Marinen P., Cassini an J.-J. Rapid detection of hypervariable regions by the polymerase chain reaction technique /7 DNA Cell Biol. 1990. V. 9. P. 461-469.

96. Deich mann K., Heinzmann A., Bruggenolte E., Forst er J., Kuehr J An Mse I RFLP in the human CTLA4 promoter // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. V. 225. P. 817-818.

97. Deka R., Chakraborty R., De Groo S., Rothhammer F., Barton S.A., Ferrell R.E. Characteristics of polymorphism at a VNTR locus 3' to the apolipoprotein B gene in five human populations // Am. J. Hum. Hered. 1992. V. 51. P. 1325-1333.

98. Deka R., Chakraborty R., Ferrell R.E. A population genetic study of six VNTR loci in three clinically defined populations // Genomics. 1989. V. 5. P. 316-324.

99. Deka R., Chakraborty R., Ferrell R.E. A population genetic study of six VNTR loci in three clinically defined populations // Genomics. 1991. V. 11. P. 83-92.

100. Deka R., De Groo S., Jin /„, MacGarvey S.T., Rothhammer F., Ferrell R.E., Chakraborty R. Population genetic characteristics of the D1S80 locus in seven human populations /7 Hum. Genet. 1994. V. 94. P. 252-258.

101. Deka R., De Groo S., Yu L.M., Ferrell R.E. Variable number of tandem repeats (VNTR) polymorphism at locus D17S5 (YNZ22) in four ethnically defined human populations // Hum. Genet. 1992. V. 90. P. 86-90.

102. DeVOsso (}., Avitabile M, Gciacca G., Lorenti E., Stivala E. A polymorphism study of the DNA extracted from dental tissues // Minerva Stomatol. 1995. V. 44. P. 205-209.

103. Demers D.B., Curry E.T., Egholm M., Sozer A.C. Enchanced PCR amplification of VNTR locus D1S80 using peptide nucleic acid (PNA) // Nucleic Acids Res. 1995. V. 23. P. 3050-3055.

104. Deng G.Y., Jvfuir A., Maclaren N.K., She J.X. Association of LMP2 and LMP7 genes within the major histocompatibility complex with insulin-dependent diabetes mellitus: population and family studies /7 Am. J. Hum. Genet. 1995. V. 56. P. 528-534.

105. De Roux N., Misrahi M., Chatelain N., Gross B., Milgrom E. Microsatellites and PCR primers for genetic studies and genomicsequencing of the human TSH receptor gene .// Mol. Cell. Endocrinol. 1996. V. 25. P. fl7. P. 253-256.

106. De Roidc N., Shields D. C., Misrahi M; Ratanachaiyavong S., McGregor A. M., Mil grow. E. Analysis of the thyrotropin receptor as a candidate gene in familial Graves' disease /7 J. Clin. Endocr. Metab. 1996. V. 81. P. 34833486.

107. De Stefano F., Casarino L,, Costa M.G., Bruni G., Manucci A., Unseld M., Hiesel R., Canale M. Analysis of a short tandem repeat locus on chromosome 19 (D19S253) //Int. J. Leg. Med. 1996. V. 108. P. 256-258.

108. J54. Destro-Bisol G., Presciuttini S., d'Aloia E., Dohosz /V/., Snedini G.,-j j » * ' x '

109. Pascali V.L. Genetic variation at the ApoB 3'HVR, D2S44, and D7S21 loci in the Ewondo ethnic group of Cameroon /7 Am. J. Hum. Genet. 1994. V. 55. P. 168-174.

110. Dew>a K. Haplotype analysis using two tetranucieotide loci within the vWF gene: its frequency in Japanese and application in forensic medicine /7 Nippon Hoigaki Zasshi. 1996. V. 50. P. 349-356.

111. Diabetes Control and Complications Trial Research Group. The effect of intensive treatment of diabetes on the development and progression of long-term complications in insulin-dependent diabetes mellitus /7 N. Engl. J. Med. 1993. V.329. P. 977-986.

112. Ding H., Lu K, Jiang 1)., Chen Z., Lin J., Wang S. The relationship between polymorphism of LMP2 and LMP7 genes and the phenotype of ankylosing spondylitis // Chung Hua I Hsueh I Chuan Hsueh Tsa Chili. 1999. V. lo. P. 242-245.

113. Doria A., Ji L., Warrant J.H., Krolewski -4.5". Ddel polymorphism in the AGTR1 gene/7 Hum. Mol. Genet. 1994. V. 3. P. 1444.

114. DoriaA, Опита У'., Gear in G., Fret re Ad. В., War ram J.H., Krolewski AS. Angiotensinogen polymorphism M235T, hypertension, and nephropathy in insulin-dependent diabetes //Hypertension. 1996. V. 27. P. 1134-1139.

115. Dona А., Опита Т., Warram J.H., Krolewski A.S. Synergistic effect of angiotensin 11 type 1 receptor genotype and poor glycaemic control on risk of nephropathy in IDDM. // Diabetologia. 1997. V. 40. P. 1293-1299.

116. Draper G. Second neoplasms in patients with retinobalstoma // Br. J. Cancer. 1986. V. 53. P. 661-671.

117. Drmic /., SchanfieldM.S., Andjelinovic S., Calavotti R, Gojanovic M.D., Trabeiti E., Marasovic D., Primorac D., Pignatii P.F. Allele frequencies of six highly polymorphic DNA loci in the Croatian population /7 Hum. Biol. 1998. V.Yo. P. 949-957.

118. Dudley C.R., Keavney В., Stratton l.M., Turner R.C., Ratcliffe P.J. U.K. Prospective Diabetes Study. XV: Relationship of renin-angiotensin system gene polymorphisms with microalbuminuria in N1DDM // Kidney Int. 1995. V. 48. P. 1907-1911.

119. Duncan G., Thomas E., Gallo J.S., Baird E.G., Garrison , Herrera R.J. Human phylogenetic relationships according to the D1S80 locus // Genetica. 1996. V. 98. P. 277-287.

120. Dupuy B.M., Olaisen B. A deducated internal standard in fragment length analysis of hyperpolymorphic STRs // Forensic. Sci. Int. 1997. V. 86. P. 207-227.

121. Duru K., Farrow S., Wang J.M., Lockette W., Kurtz T. Frequency of a deletion polymorphism in the gene for angiotensin converting enzyme is increased in African-Americans with hypertension H Am. J. Hypertens. 1994. V. 7. P. 759-762.

122. Economou E., Bergen A., Warren A., Antonarakis S. The polyadenylate tract of Alu-repetitive elements is polymorphic in the human genome // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. V. 87. P. 2951-2954.

123. Edwards M.C., Clemens P.R., Tristan M., Pizzuti A., Gibbs R.A. Pentanucleotide repeat length polymorphism at the human CD4 locus // Nucleic Acids Res. 1991. V. 19. P. 4799.

124. Edwards A, Hammond EL.A., Jin E., Caskey С.Т., Chakraborty R. DNA typing and genetic mapping with trimeric and tetrameric tandem repeats // .4m. J. Hum Genet. 1991. V. 49. P. 746-756.

125. Edwards A., Hammond H.A., Jin L., Caskey C.T., Chakraborty R. Genetic variation at five trimeric and tetrameric tandem repeat loci in four human population groups // Genomics. 1992. V. 12. P. 241-253.

126. Eizirik D.L. Beta-cell defence and repair mechanisms in human pancreatic islets //Horm. Metab. Res. 1996. V. 28. P. 302-305.

127. Elgawish A., Glomb M., Friedlander M, Monnier V.M. lnvolvment of hydrogen peroxide in collagen cross-linking by high glucose in \itro and in vivo/7 J. Biol. Chem. 1996? V. 271. P. 12964-12971.~

128. Entrala C., Lorente M., Lorente J.A., Alvarez J. C., Moretii T., Budowle B., Villamieva E. Fluorescent multiplex analysis of nine STR loci: Spanish population data /7 Forensic Sci. Int. 1998. V. 98. P. 179-183.

129. Erlich H., Bugawan T., Begowich A.B., Scharf' S., Griffin R., Saiki R., Higiichi R., Walsh F.S. HLA-DR, DQ and DP typing using PGR amplification and immobilized probes /7 Eur. J. Immunogenet. 1991. V. 18. P. 33-35.

130. Evans A.E., Foirier O., Kee F., Lecerf L., McCrurn E., Falconer T., C.ambien F. Polymorphism of the ACE gene in subjects who die from coronary heart disease // Quenn. Med. J. 1994. V. 87. P. 211-214.

131. Eveii /., Werreti D., Buckleion J. Paternity calculations from DNA multflocus profiles //J. Forens. Sci. Soc. 1989. V. 29. P. 249-254.

132. Faerman M., Filon D., Kahila G., Greenblatt C.L., Smith P., Oppenheim A. Sex determination of archaelogical human remains based on amplification of the X and the Y amelogenin alleles // Gene. 1995. V. 167.n 7TJ iti r. JZ. / -JJZ.

133. Fang X.M., Schroder S., Hoeft A., Stuber F. Comparison of two polymorphisms of the interleukin-1 gene family: interleukin-1 receptor antagonist polymorphism contributes to susceptibility to severe sepsis /7 Grit. Care Med. 1999. V. 27. P. 1330-1334

134. Finch J.L., Hope R.M., van Daal A. Human sex determination of forensic samples using multiplex PCR /7 Sci. Justice. 1996. V. 36. P. 93-95.

135. Fincham G., Simmer 1.P. Amelogenin proteins of developing dental enamel

136. Ciba Found. Syinp. 1997. V. 205. P. 118-130.

137. Flavigny J., Richard P., Isnard R., Carrier L., Char ran P., Bonne G.,

138. Forissier J.F., Desnos M, Duboiirg O., Komajda M, Schwartz K.,

139. Hainaue B. Identification of two novel mutations in the ventricular j.regulatory myosin light chain gene (MYL2) associated with familial and classical forms of hypertrophic cardiomyopathy /7 J. Mol. Med. 1998. V. /o. r. zu6-zi4.

140. Fogarty D.G., Harron J.C., Hughes A.E., Nevin N.C., Doherty C.C., Maxwell A.P. A molecular variant of angiotensinogen is associated with diabetic nephropathy in IDDM// Diabetes. 1996. V. 45. P. 1204-1218.

141. Folsberg L., de Faire U., Ivlorgenstem R. Low yield of polymorphisms from EST Blast searching: analysis of genes related to oxidative stress and verification of the P197L polymorphism in GPX1 // Hum. Mutat. 1999. V. 13. P. 294-300.

142. J 93. Forrester T., McFarlane-Anderson N., Bennett F.I., Wilks R., Cooper R., Roiimi C., Morrison L, Ward R. The angiotensin converting enzyme and blood pressure in Jamaicans // Am. J. Hypertens. 1997. V. 10. P. 519-524.

143. Franco B., J ml W., Patterson D., Ledbetter D.H., Trask B.J., van den Endh G., lomiaccone S., Frances S., Patel P.I., Eupski J.R. Molecular characterization of patient with del(l)(q23-q25) 11 Hum. Genet. 1991. V.r%m r\ r\ jrr\5/. r. ZOV-Z/ /.

144. Freedman B.I., Yu H., Spray B.J., Rich S.S., Rothschild C.B., Bowden D.W. Genetic linkage analysis of growth factor loci and end-stage renal disease m African Americans /7 Kidney Lnt .1997. V. 51. P. 819-825.

145. Freire M.B., Ji L., Onuma T., Orban T, Warram J.H., Krolewski A.S. Gender-specific association of M235T polymorphism in angiotensinogen gene and diabetic nephropathy in NIDDM // Hypertension. 1998. V. 31. 896-869.

146. Fridovich J. Superoxide dismutases: regularities and irregularities // Harvey Lect. 1985. V. 79. P. 51-75.

147. Friend L.R., Morris B.J., Gaffiiey P.T., Griffiths L.R. Examination of the role of nitric oxide synthase and renal kailikrein as candidate genes for essential hypertension // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 1996. V. 23. P. 564-656.

148. Frossard P. M.: Lestringant G. G. Association between a dimorphic site on chromosome 12 and clinical diagnosis of hypertension in three independent populations /7 Clin. Genet. 1995. V. 48. P. 284-287.

149. Fuhrer D., Kubisch C., Scheibler U., Lamesch P., Krohn K., Paschke R. The extracellular thyrotropin receptor domain is not a major candidate for mutations in toxic thyroid nodules /7 Thyroid. 1998. V. 8. P. 997-1001.

150. Furedi S., Woller J., Padar Z. Hungarian population data for the STR systems TH01 and VWA//int. J. Leg. Med. 1995. V. 108. P. 48-49.

151. Gabay C, Smith M. F., Jr., Eidlen D., Arend W. P. Interleukin 1 receptor antagonist (IL-lRa) is an acute-phase protein // J. Clin. Invest. 1997. V. 99: P. 2930-2940.

152. Gambino R, Scaglione L., Alemanno N., Pagano G., Cassader M. Human lipoprotein lipase Hindlll polymorphism in young patients with myocardial infarction // Metabolism. 1999. V. 48. P. 1157-1161.

153. I 1 IT/J//S/#/4Wf I | T/ /#///*•/// I l\li\.i/ntll/l r f I A<n«MJi'l / ii J i T r / »» » / J A-f

154. XM' . VJ W.OI/ V^« , Vt VI/ MVfl « «- » t ^ Jl. . ) wu C'M^i. I wt J. . J wi Xi * I * X w V^i . , X »VI ^ J . j

155. JL/l£tUClUJL. 1770, V. JJ. 1*. U'lO.

156. S C /—----US 77.™.„j 77 J r JJ C7---------A ---L„77~ 7ij. Kjtznc iw., iiuguct iz., ivjuranu jr., ¡juncriez k.-., ^uittL-tuu st., ^.ut u<cnu ,j. Dnmilofinn c+iirl\r /\i' tliii QTP UT T\iiTUni / i n 111 / i 11111 'i \ "ii-i 'in + \ 'ii w i

157. A Vj^UlOtlUll Oiuuj VI U1V UJLIV 1 IVJIYAlilV 1 ^lliViUUiiLl^ U JLXWV VCUiUliiy CtllVi

158. Vf O 7-A r^ 7.-„7-1ST -------J T A .-„ D nJ.^JJjT> A1.. vjrturuvi ±jlfjn.UYVU4 IVl.l^., uiunivnu J./1., ^.riu/nit; rv., rmtllJJS /V.yi.

159. Amhulatorv blood nressnre monitoring for detecting the relation between------------^ ------ £--------- -----------^ — ^

160. HilglOtcIlSlIlOgcIl gclic pulyillOrpiilSIIi Slid hypcrtcilSiOii // AlTi. J. HypcitcIiS. 1997. V. 10. P. 687-691.

161. OIO /~llll>V f~i T li*l/7/-lUllV^ A yi O nV/irwyiM/7 T A TbtS^MJ-*- T C O

162. JL . \JI(U/Uf> jLjtyi\,KjrVtli. iKi.l)., </.ya., t/riurig ,y.kf., i ((Hftpo iV./l.

163. Q IJs^.ns,» V D i//«™.,!./!« T/ T Tfs*.}s> T1 ^ 77i, C

164. J. . XJfUJOri k)., (J UiU/IUt/t- il, 1 Y±. , JiUHJU iV., y L4U t- J., 1V114 1 V i I C. Xj. , X^IVIWO t f r> T./„ijr1 7^1 D~7 7 7. A 17. . r\ O ^7.- 7">iW. J^UtlgtjeiU DUIUW J., jr., Silly LJ. O., l^U/UUItlUKl IV. i^fllfltZS I'.,

165. Birznieks G. Type 2 diabetes: evidence for linkage on chromosome 20 inti r?::„i„ ://T»A3 c- i nnn \7 T> ^IOO1U rilUllMl ¿tiiCULCU. ML> pcllis // I iUU. IN ell. .rtUclU. OCl. V . ^U. 1'. ¿170"2203.

166. C. Pfitzinper H. Rand S. Sahaiier M. Scheithauer R. Schmiller H.o„r.-. „. j„. r> cl.-jt t '. -J- \ t f t->----i. „£-4.1, „ t---------mi a -

167. OL/ltlCIUtr r., OtillLU. I., f ILIC iW.L. xvcpuil U1 UiC J3UlUpCcUl I'lUUlillg

168. Group (EDNAP) an investigation of the hypervariable SIR lociiPTnm innAn3 rM 1 O C C /!---3 il- „---„-----3 1--TM1CTA1---3ntlDl'i, .tti'W.ttJ.J., CU1U LlUOJJt ¿Ilia UIC UUllipUUllU 1UC1 clllU

169. D1S1656 //Forensic Sci. Int. 1998. V. 21. P. 193-200.

170. Holgesson S., Johnson V., Kloostermcm A.D., Lareu M.V. Report of the

171. T-mi * T)CM /T?Ti\T A Tl\ x-------J 3M-LJjDuiupcaii noiiimg vjiuup ) — luwiuus sicuiuaiuisauun uishort tandem (SIR) loci // Forensic Sci. Int. 1994. V. 65. P. 51-59.

172. Y) T177YiU O 7 T T? 1 V.-77--77 O T~J1-J.Zj.' C r

173. S.A., Orkin S.H. Human von Willebrand factor (vWE); isolation of complementary E>NA (cDNA) clones and clironiosonial localization // Science. 1985. V. 228. P. 1401-1406.

174. Griffiths L.R. Nyholt D.R. Curtain R.P. Goadsby P.J., Brimage P.J.

175. JJ. KJU AA., OpuCjjeri IV1., KJUU ( ruguru JX., Sitnery Si., J^l/flCIl r., ^,U.-)M!FIUH

176. J J, Lack of association between the I/D polymorpliism of the angiotensin-converting enzyme gene and essential hypertension in a Belgian population

177. J. Hum. Hypertens. 1994. V. 8. P. 683-685.r-< rr---J 77 7 D---1--- n 7 7A^-.-lD„1, J. jf

178. Jt. Kjunerrtzz vanureit u., rusiur i\., mur i^., stguiiur l^., vruL/i ivi.,

179. Richart C. Angiotensin I-convertmg enzyme and angiotensmogen gene polymorphisms in non-insulin-depcndent diabetes mellitus. Lack of relationship with diabetic nephropathy and retinopathy in a Caucasian

180. A JT^J—i—i*--mm A c T? c\nc nonlvicuneiTcincaii pupumuuu // lviciauuiiMii. 1 yy i. v. <+u. r. y/v-yo\J.

181. Gva.nav G., Morisseie. J Vivrio.l ,4, Dib C The 1993-94 Genethon hnm^n-------A.' .-. Z/M.Jr^ 1 Cif\4 T T n T> 1 A /:gciicuu milage map // iNaiuic vjciici. i^yt. v. /. r. ztu-jji'.

182. Hahn AA., AÀatzen S.E Serih J., Pingoud A. Semiautomated quntitative detection of loss of heterozygosity in the tuinor supressor gene p53 //

183. Biotechniques. 1995. V. 18. P. 1040-1047.no rr,.77 75 „».-.,. , 1 / TS--.1. T C~ : J. . S f CV . 11 r>zjo. nutrtuuu ii., rttrniv ivi., ixuKH.'iuga i., oeturriun ivi., oiuiiur u.

184. T/Î1 /.il ^ Y jim^mf i-' J • i Z^1 l'. ■ /VI* / J J / / A /, /. / / ^ > A Z' A / /. /-"/.', 17/ ) T ^•ti. liLWHjn ivi., fLtiiLiin i;uui&f J v. ., iuwiu; u i i jc-it/c-L-y uc- jy,, jfiw uwuwi

185. J. J ! • ?. J,. 3 / T.71 / I^-jTiï:. 7x^fz. nunui (./., txicnurus ivi., i rommsuurjj ivi., ranger e., oirnanuinan J.,

186. T/M 2------ T LJ A 7\., 7------ ^ Cr . ,. n r .t4. liunzsvn u.ii., jseiàuri-rr miurtu-) ou^uni 11., ot-rinu i^., orurnntiù iv., ±jU

187. Canessa C., Ewasaki T., Rossier B., Liflon R.P. Hypertension caused by a truncated epithelial sodium channel gamma subunit: genetic heterogeneityr ri ; jji . j j. 1 ^ 7 il n nz: o->

188. UI i^iUUlC byiiuiuilic/,' iNai. OCilCl. lyyj. V. 11. r. /u-oz.

189. Harbo H.F., C<?//i/\ i:. G., Vartdal F., Spurkland A. CTLA4 promoter and exon i umiuipmsiiis in niuiupie sciciusis // iissue /\iiugens. iyyy. v. js>. P. 106-110.

190. T4Q 777} I^ T-:77 WZr A T" 7.„ T>zto. rlUllOfl K., oust iV., JZIZUWU n., iyUtilgU £Y., Siuyumu i., lriuue5\nvrri>/iryin S! Kmmni C Vni V \/fi\!nhnrn f(' ^¡tnirfnrv^ jinrl fiitn-ficw r\f

191. CWAJ H^)' J f I'VI • ^ 11M " V« I ' ■ | 1 H I- X • I ,1 ► »- V Vtl < Wt f V« Z Xl M VI MV L lt-1 V U"VI A l> V/ijl W Xiiitnc oxide synthases // Int. J. Cardiol. 1994. V. 47. Suppl. 1. P. S7I-75.

192. Haus-Rochholz H., Weiler G. Additional primer set for amelogenin gene

193. Tipn J mi a ait! t„j- t t ^ Tii^J i nm u i in q inrv^iv-0il5cu LS1VS\ iCA ICM // 1111. J. LvCg. iVXCU. 177/. V. 11U. 1. Jli'OlJ.

194. Hegele R.A., Brunt J.H., Connelly P.V/. A polymorphism of the angiotensinogen gene associated with variation in blood pressure in a gciicuu lsuiaic // v^licuiauoii. iV^h. v. w. r. zzu/-^2iz.

195. T.'O L7„--7") L7. 7 O 1T„ .,7.----1 r> 157, y—' 73 D7 T'sjo. negate n.yi., nuung i^.-o., nerutzn r.i\., uiurri ^.D., During j.iz.,

196. TA J A 7 1 /,77.,- 7 7.,7. J ^ 1 /„• „7. ,1 J., r>.J., 7zuu. ncinuni i.uuiy ivieiKl j., ¿.ilncr ivi., iviunmcn a., tie ixeeunuu j.

197. Clinical and genetic heterogeneity of Charcot-Marie-Tooth disease // Genomics. 1992. V. 12. P. 155-157.

198. Hingorani A.D., Brown M.J. A simple molecular assay for the 1166 variant of the angiotensin II type 1 receptor gene // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. V. 15. P. 725-729.

199. Hingorani A.D., Jia //., Stevens P.A., Hopper R., Dickerson J.E., Brown M.J. Renin-angiotensin system gene polymorphisms influence blood pressure and the response to angiotensin converting enzyme inhibition // J. Hypertens. 1995. V. 13. P. 1602-1609.

200. HLxson J.E., Powers P.K., McMahan C.A. The human apolipoprotein B 3'hypervariahle region: detection of eight new alleles and comparisons of allele frequences in blacks and whites // Hum. Genet. 1993. V. 91. P. 475479.

201. Hochmeister M.N., Budowle B., Borer O.V., Dimhofer R. Effects of nonoxinol-9 on the ability to obtain DNA profiles from postcoital vaginal swabs././ J. Forensic Sci. 1993. V. 38. P. 442-447.

202. Hochmeister M.N., Budowle B., Borer U.V., Eggmenn U., Comey C.T., Dirnhofer R. Typing of deoxyribonucleic acid (DNA) extracted from compact bone from human remains // J. Forensic. Sei. 1991. V. 36. P. 1649-1661.

203. Hochmeister M.N., Budowle B., Jung J., Borer O.V., Comey C.T., Dirnhofer R. PCR-based typing of DNA extracted from cigarette butts /7 Int. J. Leg. Med. 1991. V. 104. P. 229-233.

204. Hohler F., Schneider P.M., Rittner C., Hasenclever P., Meyer zum Buschenfelde K.H., Marker-Hermann E. LMP polymorphisms do not influence disease expression in psoriatic arthritis // Clin. Exp. Rheumatol. 1996. V. 14. P. 661-664.

205. Holland MM., Fisher D.E., Mitchell E.G., Rodriguez W.O., Canic J J., Merrill C.R., Weedn V. W. Mitochondrial DNA sequence analysis of human sceletal remains: identification of remains from the Vietnam War // J. Forensic. Sei. 1993. V. 38. P. 542-553.

206. Honda K., Harihara S., Gomoseki Y., Nakamura T., Masturbata T., Hirai M., Misawa S. Sex determination by analysis of DNA extracted from hard tissues // Nippon Hoigaki Zasshi. 1990. V. 44. P. 293-301.

207. Hu A., Zhou X., Ren X., Cut Z., Hui R., Liu L, Genetic linkage of polymorphisms of type I angiotensin II receptor gene to Chinese Han hypertension /7 Chung Hua I Hsueh I Chuan Hsueh Tsa Chili. 1999. V. 16. P. 81-84.

208. Huang IX, Yang O., Mei K. Genetic polymorphism of STR loci D19S253 and D8S1179 for Han population in Wuhan /7 Chung Hua I Hsueh Tsa Chih. 1998. V. 15. P. 228-231.

209. Huang F., Li ¥., WuJJin Z., Chen L., Hou Y. Genetic polymorphisms of TH01 and VWA loci in Tibetans in China /7 Chung Hua I Hsueh I Chuan Hsueh Tsa Chin. 1998. V. 15. P. 293-296.

210. Ichihara S., Yarnada Y., Fujimura T., Nakashima N., Yokota M. Association of a polymorphism of the endothelial constitutive nitric oxide synthase gene with myocardial infarction in the Japanese population // Am. I Cardiol. 1998. V. 81. P. 83-86.

211. Ichinose A., Davie E.W. Characterization of the gene for the a subunit A hitman factor XIII (plasma transglutaminase), a blood coagulation factor H Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1988. V. 85. P. 5829-5833.

212. Ikeda Y, Suehiro T., Inoue M, Nakauchi Y, Morita T, Arii K., Ito LI.,

213. Kumon Y., Hashimoto К. Semm paraoxonase activity and its relationship to diabetic complications in patients with non-insulin-dependent diabetes mellitus. Metabolism. 1998. V. 47. P. 598-602.

214. Ikegishi Y., TawalaM., Aida К., Onaya T. Niunber of (C-A)n repeat in the upstream of aldose reductase gene correlates with diabetic retinopathy. The sorbinil retinopathy trial: neuropathy results // Neurology. 1993. V. 43. P. 1141-1149.

215. Isa M.N., Boyd E., Morrison N. Assignment of the human angiotensinogen gene to chromosome Iq42-q43 by nonisotopic in situ hybridization // Genomics. 1990. V. 8. P. 598-600.

216. Ishanov A., Okamoto H, Watanabe M., Yoneya K., Nakagawa I., Kumamoto H., Chiba S., Hat a A., Kawaguchi H, Kilabalake A. Angiotensin II type 1 receptor gene polymorphisms in patients with cardiac hypertrophy!! Jpn. Heart J. 1998. V. 39. P. 87-96.

217. Ishigarni T., Umemura S., Iwamoio T., Tamura K., Hibi K., Yamaguchi S., Nyitui N.,Kimura K., Miyazaki N., Ishii M. Molecular variant of angiotensinogen gene is associated with coronary atherosclerosis /7 Circulation. 1995. V. 91. P. 951-954.

218. Ishiham M, Ohno S., Mizuki N., Yamagata N, Ishida T, Naruse T., Kuwaia S., Inoko H. Genetic polymorphisms of the major histocompatibility complex-encoded antigen-processing genes TAP and LMP in sarcoidosis /7 Hum. Immunol. 1996. V. 45. P. 105-110.

219. IwaiN., Shimoike H., Ohmichi N., Kinoshita M. Angiotensinogen gene arid blood pressure in the Japanese population // Hypertension. 1995. V. 25. p. 688-693.

220. Jarcho ./., McKenna W. Mapping a gene for familial hypertrophic cardiomyopathy to chromosome 14ql // N. Engl. J. Med. 1989. V. 321. P. 1372-1378.

221. Jeffreys A.J., Macleod A., Neumann R., Povey S., Royle N.J. «Major niinisatellite loci» detected by niinisatellite clones 33.6 and 33.15 correspond to the cognate loci D1S111 and D1S437 /./ Genomics. 1990. V. 7. P. 449-452.

222. Jeffreys A.J., Neumann R, Wilson V. Repeat unit sequence variation in minisatellites: a novel sourse of DNA polymorphism for studying variation and mutation by single molecule analysis /7 Cell. 1990. V. 60. P. 473-485.

223. Jeffreys A J,, Royle N> Wilson W,, Wong Z. Spontaneous mutation rates to new length alleles at tandem-repeatitive hvpervariable loci in human DNA // Nature. 1988. V. 332. P. 278-281.

224. Jeffreys A J., Turner M., Debenham P. The efficiency of multilocus DNA fingerprint probes for individualization and establishment of family relationships, determined from extensive casework // Am. J. Hum. Genet. 1991. V. 48. P. 824-840.

225. OO Ts>-T-Ti*s-> i >c< A T Т/Г'**/ 1 с- bi Tf Tli л i п С Т ,-о fx ** + Vf^ О J ГЛ1Л С IT"*

226. Ji.i. J I rl.O.y rrttrtvri Г Attain L ij p^i YCUICIIAIV Illllll ¿>ОЛ Vlli 1С iCgiLUih ill

227. Т*""ч ТА //IT i -i ЛП e T T А Г ТЛ S ^numan JJINM.// iNamre. iyô5, v. jio, г. о/-jo.

228. Jeffreys A J. Wilson V. Them S.L. Weatherall D J. Ponder B. A J. DNA1. У.У s ■> ' 'fingerprints' and segregation analysis of multiple markers in human1 ' A T T T О , 1 ЛЛ T T -Л Г» -1-1

229. Deaisrees. /ми. j. num. Genet. Ivôo. v. jy. r. ii-z4.

230. Jelinek W., Schmid C. Repetitive sequences in eukaryotic DNA. and their expression/7 Ann. Rev. Biochem. 1982. V. 51. P. 813-844.

231. Jeng J.R. Left ventricular mass, carotid wall thickness, and angiotensinogen gene polymorphism in patients with hypertension /7 Am. J. Hypertens. 1999. V. 12. P. 443-450.

232. Jenkins D., Mijovic C, Fletcher J., Jacobs K., Bradwell A.R., Barnetl A.M. Identification of suspectibility loci for Type 1 (insulin-dependent) diabetes bv trans-racial eene maDDine /7 Diabetoloeia. 1990. V. 33. P. 3871. W X J . С/395.

233. Jeunemaitre X., Inoue I, Williams C., Charru A., Ticket J., Powers M., Sharma A.M., Gimenez-Roqueplo A.P., Hala A., Corvol P., Lalouel J.M. Haplotypes of angiotensinogen in essential hypertension // Am. 3. Hum. Genet. 1997. V. 60. P. 1448-1460.

234. Jeunemaitre X, Soubrier F., Koielevisev Y. V., Lift on R. P., Williams C. S., Charru A., Hunt S. C., Hopkins P. N., Williams R. R.; Lalouel J.-M., Corvol P. Molecular basis of human hypertension: role of angiotensinogen //Cell. 1992. V. 71. P. 7-20.

235. Johannesen ./., Vejijela R, Hansen P.M. Analysis of polymorphism in the interferon-y gene in Danmsh and Finnish IDDM patients and control subjects/7 Diabetologia. 1997. V. 40. P. 29.

236. Johnson A.G., Simons L.A., Friedlander Y., Simons J., Davis D.R.,

237. McCallum J. M235—>T polymorphism of the angiotensinogen genepredicts hypertension in the elderly /7 J. Hypertens. 1996. V. 14. P. 10611 r\ г гluo5.

238. Josephi E., Teifel-Greding J., Tutsch-Bauer E., Schuller E., Liebhardt E.

239. Sé»v rif»tf=>r<=»rmncitir»ri Q+ tnp T^llVi Л Arc nii~F/=»r<=>rir4=>c in

240. W/l UVLV1 VlimiUUUU Ut LI 14. i .y i II 1 IV. • V. I . / XX V UllVl 111UI T 1UUUI UXXX VI VXX VVkJ 111male sex-specific quotients to be expected? Beitr. Gerichtl. Med. 1989. V. 41. P. 551-555.

241. Jouquand S., Cheron A., Galibert F. Microsatellite analysis using tw;o-step procedure for fluorescent labeling of PCR products // Biotechniques. 1999. V. 26. P. 902-905.

242. Juneja R., Palmer J.P. Type 1 1/2 diabetes: myth or reality? Autoimmunity. 1999. V. 29. P. 65-83.

243. Kaczur V., Szalai C., Fahis A., Nagy Z., Krai czar G., Balazs C. Polymorphism of the 52 triplet gene (nucleotide 253) of the TSH receptor in Basedow-Graves patients and in healthy controls /7 Orv. Hetil. 1997. V. 138. P. 1625-1628.

244. Kadasi L., Bohusova T. A. new extremely large allele at the D1S80 (MCT118) locus .//J. Forensic Sci. 1995. V. 40. P. 906-907.

245. Kamatci K., Kobayashi T. Changes in superoxide dismutase mRNA expression by streptozonin-induced diabetes // Br. J. Pharmacol. 1996. V. 119. P. 583-589.

246. Kamitcini A., Rakugi //., Higaki J., Yi Z., Mikami H., MikJ T., Ogihara T. Association analysis of a polymorphism of the angiotensinogen gene with essential hypertension in Japanese // J. Hum. Hypeitens. 1994. V. 8. P. 521-524.

247. Kanai Y, Hui A.M., Sun L., Yshijima S., Sakamoto M., Tsuda H., Hirohashi S. DNA hypermethylation at the D17S5 locus and reduced HIC-1 mRNA expression are associated with hepatocarcinogenesis /7 Hepatology. 1999. V. 29. P. 703-709.

248. Kanai Y., Yshijima S., Eguchi K, Hui A.M., Hirohashi S. DNA hypermethylation at the D17S5 locus is associated with gastric carcinogenesis/7 Cancer Lett. 1998. V. 9. P. 135-141.

249. Kanysadulumpai S., Coggan M., Caglayan S.H., Akiuglu G., Board P. G. Application of HUMF13A01 (AAAG)n STR polymorphism to the genetic diagnosis of coagulation factor XIII deficiency // Thromb. Haemost. 1996. V. 76. P. 89-882°

250. Kao Y.L., Donaghue K., Chan A., Knight J., Silink M. A novel polymorphism in the aldose reductase gene promoter region is strongly associated with diabetic retinopathy in adolescents with type 1 diabetes /7 Diabetes. 1999. V. 48. P. 1338-1340.

251. Karjalainen J., Kujala U.M., Stolt A., Maniysaari M., Viitasalo M., Kainulainen K, Kontula K. Angiotensinogen gene M235T polymorphismpredicts left ventricular hypertrophy in endurance athletes // J. Am. Coll. Cardiol. 1999. V. 34. P. 494-499.

252. Karvonen M., Tuomilehto J., Libman I., LaPorte R. A review of recent epidemiological data on the worldwide incidence of Type 1 (insulin-dependent) diabetes meiiitus /7 Diabetologia. 1993. V. 36. P. 883-892.

253. Kasai K., Nakamura 7., White R. Amplification of variable number of tandem repeats (VNTR) locus (pMCTII8) by the polymerase chain reaction (PCR) and its application to forensic science /7 J. Forensic Sci. 1990. V. 35. P. 1196-1200.

254. Kasha D.E., van Oorschot R.A., Mitchell R.J. Variation at three short tandem repeat (STR) loci in Australians: forensic and ethnic considerations //Electrophoresis. 1997. V. 18. P. 1620-1623.

255. Kato N., Sugiyama Т., Morila H., Kurihara H., Yamori 7, Yazaki 7. Angiotensinogen gene and essential hypertension in the Japanese: extensive association study and meta-analysis on six reported studies 7/ J. Hypertens. 1999. V. 17. P. 757-763.

256. Kato N, Sugiyama Т., Morila H., Nab ilea Т., Kurihara п., Yamori Y., Yazaki 7. Lack of evidence for association between the endothelial nitric oxide synthase gene and hypertension // Hypertension. 1999. 33. P. 933r\ "4 S1. У30.

257. Katsuya Т., Higaki ,/., Ogihara T. Gene loci and polymorphisms of angiotensin II receptor //Nippon Rinsho. 1999. V. 57. P. 1020-1027.

258. Katsuya Т., Koike Ст., Yee T.W., Sharpe N., Jackson R, Norton R., Horiuchi M., Pratt R.E., Dzau V.J., MacMahon S. Association of angiotensinogen gene T235 variant with increased risk of coronary heart disease //LancetЛ995. V. 345. P. 1600-1603.

259. KaumaH, Ikaheimo M., Savolainen M.J., Kiema T.R., Rantala A.O., Lilja M., Reunanen A., Kesaniemi Y.A. Variants of renin-angiotensin system genes and echocardiography left ventricular mass //Eur. Heart. J. 1998. V. 9. P. 1109-1117.

260. Miura I., Mukoyama R., Aboshi H., Komuro T. Sex determination fromripntal V»v oniT/mArqcA fiiQin rpo^hnn ii T\jir»r»n" T-I/^iftoL-i 7pcciii

261. VJ*^- (( (ct i V/LAiVci-At.^ Li y yvl ilUViUJV Vill-ll.ll lVuvllUll // * I y yj KJ: 1 iiV/i^UJVi ^ O. • I i .1. OO'n \J AO l> 105 1QQiyy^. V . -ty. ■ . IyJ-i?U.

262. Kelly A., Powis S. K, Glynne R., Radley E., Beck S., Trowsdale J. Second proteasome-related gene in the human MHC class II region /7 Nature. 1991. V. 353: P. 667-668.

263. Kennedy G.C., German M.S., Putter W.J. The minisatellite in the diabetes suspectibility locus IDDM2 regulates insulin transcription /7 Nature Genet. 1995. V. 99. P. 293-298.

264. Kennon B., Peine J.R., Small M., Connell JM. Angiotensin-converting enzyme gene and diabetes mellitus /7 Diabet. Med. 1999. V. 16. P. 448548.

265. Khanna P., Wang L., Perez-Polo R.J., Ansari N.H. Oxidative defence enzyme activity and mRNA levels in lenses of diabetic rats ii J. Toxicol. Health. 1997. V. 51. P. 541-555.

266. Kijcts J.M.H., Fowler J.C.S., Vandaat A. PCR amplification of alleles at

267. PllC — riAf Ar»fir\"n r\"F -npw «ann r^rp 1 /^Ti t 7-1 f^Ti (rt n Q H\: nninnrnKirxr

268. VUi^ ± t UVIWU V/J. ± VI liV T V LUiU X LU V -I vyii^j iwil^lli LtilViVJ CJ Vli V L/liX^in a survey od Australian population ii Hum. Biol. 1994. V. 66. P. 329-337.

269. Kim plan C.P., GUI P., Walton A., Urquhart A., Millican E.S., Adams M.

270. TN-V T * * 1 ' t . ' "» 1 • JV . * n 1

271. Automated jjin a proiumg empioymg multiplex ampimcation or snort tandem repeat loci //PCR Methods Appl. 1993. V. 3. P. 13-22.

272. Kimpton C., Walton A., GUI P. A fuiher tetranucleotide repeat polymorphism in the vWF gene // Hum. Mol. Genet. 1992. V,l. P. 287.

273. King B.L., Lichtensiein A., Berenson J., Kalinski B.M. A polymerase chain reaction-based microsatellite typing assay used for tumor cell line identification /7 Am. J. Pathol. 1994. V. 144. P. 486-491.

274. King H, Rewers M. Global estimates for prevalence of diabetes mellitus and impaired glucose tolerance in adults /7 Diabetes Care. 1993. V. 16. P. 157-177.

275. Kinoshita J.H. Mechanisms initiating cataract formation /7 Invest. Ophtalmoi. 1974. V.I3. P. 713-714.

276. Kitchens C.S., Newcomb T.F. Factor FXIII /7 Medicine. 1979. V. 58. P.1. Л 1 i ЛЛ4 I^-4/y.

277. Klemme L., Fish A.J., Rich S., Greenberg В., Senske В., Segal M. Familial ureteral abnormalities syndrome: genome mapping, clinical findings /7 Pediatr. Nenhroi. 1998. V. 12. P. 349-356.

278. Klintschar M, Kozma S., al Hammadi N., Abdul Fatah M., Nohammer G.

279. Д ctiirl\r rvr> QTP c\;ctpm T-iiim IТТЛ1 anr? НчтГмТ^Р A ini A L'tVtX.^ Uil U11V JJ JIVlii 1, J-^LUll J. Л AV 1 LU1U t 1 Hi 1 11 д. illpopulation samples from Yemen and Egypt H Int. J. Leg. Med. 1998. V. 111. P. 107-109.

280. Knowles R.G., Moncada S. Nitric oxide synthases in mammals /7 Biochem. J. 1994. V. 298. P. 249-258.

281. Ко B.C., Lam K.S., Wat N.M., Chung S.S. An (A-C)n dinucleotide repeat polymorphic marker at the 5' end of the aldose reductase gene is associated with early-onset diabetic retinopathy in NIDDM patients // Diabetes. 1995. у 44 p 727-732

282. I JyT 17 T 7>' T7 О TI7, О » V S~<1-. . П TT Tl^O 17 T

283. JOJ. i\0 l.L,., л 6» I.l\, wurig Ci.lVl., KAVU Г.П., leng lVl.O., к Jiang jV. ,/., ^ nen

284. Köhler H.P., Filters T.S., Grant P.J. Prevalence of three common polymorphisms in the A-subunit gene of factor XTTT in patients with coronary artery disease // Thromb. Haemost. 1999. V. 81. P. 511-515.

285. VULSJU VI IL11 Ull^lVlVUJJll V/V/XXTVl Llii^ Vili-J HIW iiilUt/ilVl J . J. liii. iTit-VA. X .1. V. 106. P. 544-549.

286. Kolb II., Koib-Bachofen V., Roep B.O. Autoimmune versus inflammatory type 1 diabetes: a controversy? // Immunol. Today. 1995. V. 16. P. 170172.

287. Kölsa K., Watson P.F., Weetman A.P. A CTLA-4 gene polymorphism is

288. Qccnnatpn ii7i+n r»r»th iTrQ"w£»c nicpocp Qnr! Quinimmnnp m/r>r»tn\/rr>irlicivi //

289. UO^WIULVU »V Ilil I^UIII VJit-tVWO VA-l.JWCt.JV U11U UULUJLllJLLlltUlV lij jJVLllj 1 UlVOtJUX //

290. Clin Endocrinol. 1997. V. 46. P. 551-554.

291. Kowluru R.A., Kern T.S., Engerman R.L. Abnormalities of retinal metabolism in diabetes or experimental galactosemia. IV. Antioxidant defense system. //'Free Radic. Biol. Med. 1997.22. P. 587-592.

292. Kristiansen O.P,, Zamani M.G., Johannesen J. , Mandrup-Poulsen T>, Cassiman J.-J., Nerup J., Pociot F. Linkage and association between a

293. TnI <ri=»np r>r>l\rmr»rr\tiicrp inn TTYTYN/i in Flqnien TTYTYN/i TTjfiV>riic // T^ii a r><=>t<=»i:¿V11V ^". ij. lllV'l 1 11 .J 111 1111VI 11' 1.' ^ . 1 111 vi-lt 1 -J 11 I'llll V1 K.l // I^IUUWIVJ.1998. V. 47. P. 281-283.

294. Kruger J., Puhrman W., Lichte K.M., Steffens C. Zur Verwendung des Polymorphisms der sauren Eryihiocytenphospatase bei der

295. Va^rci-'nafts^miaf-lntiirjcr // ntcr-li 7 fWiVntl Tv/i^r} ! GAR V f>A P 1

296. UkVJt lUig / 1 IS uvii. £—i. VI lV^lti 4 J.*J.V\J, ^ VU . » , v I i J~ * Ii. /146.

297. Kumar J.S., Menon V.r. Peroxidative changes in experimental diabetes mellitus /7 Indian J. Med. Res. 1992. V. 96. P. 176-181.

298. Kupferschmid T.D., Callichio T., Budowle B. Maine Caucasian population database using twelve short tandem loci /7 J. Forensic Sei. 1999. V. 44. P. 392-395.

299. Kurosaki K., Saito H., Oota H., Watanabe X., Hiuchi M., Ueaa S. Combined polymorphism associated with a 3-bp deletion in the 5'-flanking region at the tetrameric short tandem rapeat at the CYP19 locus /7 Nippon Hoigaki Zasshi. 1997. V. 51. P. 191-195.

300. Larkins R.G., Dunlop M.E. The link between hyperglycemia and diabetic nephropathy /7 Diabetoiogia. 1992. V. 35. P.499-504.

301. La Spada A.R., Wilson E.M., Fischbeck K.H. Meiotic stability and genotype-phenotype correlation of the expanded trinucleotide repeat sequence in X-Iinked spinal and bulbular muscular atrophy /7 Nature Genet. 1992. V. 2. P. 301-304.

302. Lebedev N., Kuraeva 71, Sergeev A., Gubanov N., Dedov I. Epidemiology of type I and type 2 diabetes in the young population of Moscow /7

303. Lee D.H., Han JS, Lee W.G., Lee S.W, Rho H.M. Quadruplex amplification of polymorphic STR loci in a Korean population // Int. J. Leg. Med. 1998. V.lll. P. 320-322.

304. Lee J.C., Chen C.H., Tsai L.C., Linacre A., Chang J.G. The screening of 13 short tandem repeat loci in the Chinese population /7 Forensic Sci. Int. 1997. V. 87. P. 137-144.

305. Lenzen S., Drinkgern J., Tiedge M. Low antioxidant enzyme gene expression in pancreatic islets compared with various other tissues /7 Free Radic. Biol. Med. 1996. V. 20. P. 463-466.

306. Lester S., Heatley., Bardy P., Bahnisch J., Bannister K., Faull R., Clarkson A, The DD genotype of the angiotensin-converting enzvme gene occurs in very low frequency in Australian Aboriginals // Nephrol. Dial.

307. Troncnlonr 10OO V 14 P SQ72Gf>

308. A. L UiiiJL'iUill. X y y" . r . JL I . 1 . UU / V .

309. Levine F., Mack B., Long E., Erlich H., Pious D. Mapping in the HLA-jj region with deletion variants and cloned genes // Cytogenet. Cell Genet. 1984. V. 37. P. 523.

310. Levinson G., Guiman G.A. Slipped-strand niispairing: a major mechanism for DNA sequence evolution/7 Mol. Biol. Evol. 1987. V. 4. P. 203-221.

311. Li H., Gyllensien U.B., Gui X., Saiki P.K., Erlich H.A., Arncheim N. Amplification and analysis of DNA sequences in single human sperm and diploid cells /7 Nature. 1988. V. 335. P. 414-417.

312. Li Y,, Wu Jin Z„ Huang F„ Hon F. Genetic polymorphisms of FABP2 and F13A1 loci in Han population H Chung Hua I Hsueli I Chuan Tsa Chin.1998. V. 15. P. 24-26.

313. Liao Y.L., Saku K., Ou J., Jimi S., Zhang B., Shirai IC, Arakawa K. A missense mutation of the nitric oxide synthase (eNOS) gene (G!u298Asp) in five patients with coronary artery disease—case reports /7 Angiology.1999. V. 50. P. 671-676.

314. Lift on P.P. Genetic determinants of human hypertension H Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. V. 92. P. 8545-8551.

315. Lift on P.P. Molecular genetics of human blood pressure variation // Science. 1996. V. 272. P. 676-680.

316. Lifion P.P., Dluky R.G., Powers M., Rich G.M., Cook S., Ulick S., Lalouel J.M. A chimaeric Hbeta-hydroxylase/aldosterone synthase gene causes glucocorticoid-remidiable aldosteronism (GRA) and human hypertension /7 Nature. 1992. V. 355. P. 262-265.

317. Ligers A., He B., Fogdell-Hahn A., Olerup O.JHUlert J. No linkage or association in the junction region of the immunoglobulin heavy chain genes in multiple sclerosis.// Eur. J. Immunogenet. 1997. V. 24. P. 259-264.

318. Lin Z., Konao T., Minamino T., OhtsujiM., Nishigami J., Takayasu T., Sun R., Oh shim a T. Sex determination by polymerase chain reaction on mummies discovered at Taklamakhan desert in 1912 /7 Forensic Sci. Int. 1995. V. 75. P. 197-205.

319. Lins A.M., Micka M.A., Sprecher C.J., Taylor J A., Backer J.W., Rabbach D.R., Sever R.A., Creacy S.D., Shumm J.W. Development and population studies of an eight-locus STR multiplex system /7 J. Forensic. Sci. 1998. V. 43. P. 1168-1180.

320. Lins A.M., Sprecher C.J., Puers C., Schumm J.W. Multiplex sets for theamplification of polymorphic SIR loci-silver-stain and fluorescence detection /7 Biotechniques. 1996. V. 20. P. 882-889.

321. Liu J., Lissens W, Devroey P., van Steirteghem A., Lie bars I. Amplification of X-and Y-chromosome specific regions from single human blastomeres by PCR for sexing of preimplantation embryos /7 Hum. Reprod. 1994. V. 9. P. 716-720.

322. Liu Z.H., Cheng Z.H., Yu Y.S., Tang Z., Li L.S. Interleukin-l receptor antagonist allele: is it a genetic link between Henoch-Schonlein nephritis and IgA nephropathy?/7 Kidney Int. 1997. V. 51. P. 1938-1942.

323. Liu Z.H., Guan T.J., Chen Z.H., Li L.S. Glucose transporter (GLUT1) allele (Xbal-) associated with nephropathy in non-insulin-dependent diabetes mellitus //Kidney Int. 1999.V. 55. P. 1843-1848.

324. Liyou N. Davis D., James K., Simons L.t Friedlander Y., Simons J., McCallum J., Johnson A. The A1166C mutation in the angiotensin II type I receptor and hypertension in the elderly // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 1999. V. 26. P. 525-526.

325. Lund J.A., Bostock C., Leth-Bak A. Chromosome-specific subfamilies within human alphoid repeatitive DNA /7 J. Mol. Biol. 1986. V. 187. P. 185-196.

326. MacLeod M.J., Dahiyat M.T., Gumming A., Meiklejohn D., Shaw D., Si Clair D. No association between GIu/Asp polymorphism of NOS3 gene and ischemic stroke /7 Neurology. 1999. V. 53. P. 418-420.

327. Maeda ¥., Ikeda U., Ebola H., Hojo ¥., Seino Y., Hayashi ¥., Kuroki S., Shimada K. Angiotensin-converting enzyme gene polymorphism in hypertensive individuals with stroke // Stroke. 1996. V. 27. P.1521-1523.

328. Maha G.C., Mason J.Mi., Siuhmiller G.M., Heine U. Reply to Pena !i Am. J. Hum. Genet. 1995. V. 56. P. 1505-1506.

329. Maksymowych W.P., Aalam N., Lind I J., Russell A.S. Polymorphism of the LMP2 gene and disease phenotype in ankylosing spondylitis: no association with disease severity //' Clin. Rheumatol. 1997. V. 16. P. 461-465.

330. Mandel J.-L, Questions of expansion //Nature Genet. 1994. V. 4. P. 8-9.

331. Mannucci A., Sullivan H.M., Ivanov P.L., Gill P. Forensic application of a rapid and quantitaive DNA sex test by amplification of the X-Y homologous gene amelogenin //'Int. J. Leg. Med. 1994. V. 106. P. 190-193.

332. MansfieldM.W., SticklandM.H., Carter A.M., Grant P.J. Polymorphisms of the plasminogen activator inliibitor-1 gene in type 1 and type 2 diabetes, and in patients with diabetic retinopathy // Thromb. Haemost. 1994. V. 71. P. 731-736.

333. Mansfield M. IV, Stickland M.H., Grant P.J. Plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) promoter polymorphism and coronary artery disease in non-insulin-dependent polymorphism // Thromb. Haemostat. 1995. V. 74. P. 1032-1034.

334. Manz W., Ruzicka V., Fisher E., Russ A.P., Schneider IV., Gross IV. Typing of the 3'hypervariable region of the apolipoprotein B gene: approaches, pittfalls, and applications //Electrophoresis. 1993. V. 14. P. 169-173.

335. Manz W., Ruzicka V., Fisher E., Russ A.P., Schneider W., Gross W. 3'hypervariable region of the apolipoprotein B gene and coronary artery disease /7 Electrophoresis. 1993. V. 14. P. 173-176.

336. Margaglione M., Colaizzo D., Cappucci G., del Popolo A., Vecchione G., Grandone E., Di Minno G. Genetic polymorphism of 5,10-MTHFR reductase gene in offspring of patients with myocardial infarction // Thromb. Haemost. 1999. V. 82. P. 19-23.

337. Marklund S. Expression of extracellular superoxide dismutase by human cell lines // Biochem. J. 1990. V. 299. P. 213-219.

338. Markus M.S., Ruigrok Y., Ali N., Powell J.F. Endothelial nitric oxide synthase exon 7 polymorphism, ischemic cerebrovascular disease, and carotid atheroma /./ Stroke. 1998. V. 29. P. 1908-1911.

339. Marre M. Genetics and the prediction of complications in type I diabetes /7 Diabetes Care. 1999. V. 22. Suppl. 2. P. B53-58.

340. Marre M., Bouhanick B., Beirut G., Gallois Y, Le Jeime J.J, Chatellier G., Menard J., Alhenc-Gelas F. Renal changes on hyperglycemia and angiotensin-converting enzyme in type 1 diabetes /7 Hypertension. 1999. V. 33. P. 775-780.

341. MarronM. P., Raffel L. J., Garchon H.-J., Jacob C. G., Serrano-Rios, M, Martinez M. T. Insulin-dependent diabetes mellitus (IDDM) is associated with CTLA4 polymorphisms in multiple ethnic groups H Hum. Mol. Genet. 1997. V. 6. P. 1275-1282.

342. Martin J.K., Hamev M.S. Andotensin-convertine enzvine sene polymorpliism: is there a link to nephropathy in patients with type I diabetes? /7 Ann Pharmacother. 1999. V. 33. P. 474-479.

343. Masters C, Pegg M., Crane D. On the multiplicity of the enzyme catalase in mammalian liver//Mol. Cell. Biochem. 1986. V. 70. P. 113-120.

344. Matcovicz B., Koiorman M., Varga I.S., Hai D.Q., Salgo L., Novak Z. Pro, antioxidant and rneologic studies in the blood of type 2 diabetic patients /7 Acta Physiol. Hung. 1997. V. 85. P. 107-112.

345. Mathew C.G.P. The isolation of high molecular weight eucaryotic DNA /' In: Methods of Molecular Biology / Walker J., Ed. . vol. 2 / Humana Press, 1984, p. 31-34.

346. Mallei M.-G., Hubert C, Alhenc-GelasF. Angiotensin converting enzyme gene polymorphism is on chromosome 17 /7 Cytogenet. Cell. Genet. 1989. V. 51. P. 1041.

347. M'Buyamba-Kabangu J.R., Amery A., Lijnen P. Differences between black and white persons in blood pressure and related biological variables // J. Hum. Hypertens. 1994. V. 8. P. 163-170.

348. McEwen J.E. Forensic DNA data banking by state crime laboratories /7 Am. J. Hum. Genet. 1995. V. 56. P. 1487-1492.

349. McGinnis R.E., Spielman R.S. Insulin gene 5' flanking polymorpliism length of class 1 alleles in number of repeat units ii Diabetes. 1995. V. 44. P. 1296-1302.

350. Mentens G., Mommens N. Hey I en H., GielisM. Miglle L. Vanderbergbye473474475476477478479480481482,483.484.485.486.

351. A. Allele frequencies of nine STR systems in the Flemmish population and application in paternage testing // Int. J, Leg. Ivied, 1997. V. 110. P. 177180.

352. Merriman T.R., Todd J A. Genetics of autoimmune disease /7 Ciirr. Opin. Immunol. 1995. V. 7. P. 786-792.

353. Miesfield R., Krystal M., Amheim N. A member of new repeated sequence family which is conserved eucaryotic evolution is found between the human delta- and beta-globin genes /7 Nicleic Acids Res. 1981. V. 9. P. 59315947.

354. Misrahi M., Loosfelt H., Atger M., Sar S., Guiochon-Mantel A., Milgrom E. Cloning, sequencing and expression of human TSH receptor /7 Biochem. Biophys. Res. Commun. 1990. V. 166. P. 394-403.

355. Moncada S., Palmer R.M.J., and Higgs E.A. Nitric oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology. Pharmacol. Rev. 1991. V. 4310943142. ~

356. Montgomery H.E., Clarkson P., Dollery C.M. Association of angiotensin-coiiveriing enzyme gene I/D polymorphism with change in left ventricularmass in response to physical training // Circulation. 1997. V. 96. P. 741747.

357. Morel P.A., Dorman J.S., Todd J.A., McDeviit H.O., Trucco M. Aspartic acid at position 57 of the HLA-DQ beta chain protects against type I diabetes: a family study /7 Proc. Natl. Acad. Sei. USA,. 1988. V. 85. P.8111 r\ -t -% ri-öii5.

358. Morris B.J., Monaghan J.C., Perich R., Stokes G.S., Jackson B., Schräder A.P. Genotypic influence on plasma dipeptidyl carboxypeptidase-1 activity7 in hypertensives /7 Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 1994. V. 21. P. 343-346.

359. Morris B.J., Zee R.Y., Schräder A.P. Different frequencies of angiotensin-converting enzyme genotypes in older hypertensive individuals /7 J. Clin. Invest. 1994. V. 94. P. 1085-1089.

360. Morris B.J., Zee R.Y., Ying L.H., Griffiths L.R. Independent, marked associations of alleles of the insulin receptor and dipeptidyl carboxypeptidase-I genes with essential hypertension /7 Clin. Sei. 1993. V. 85. P. 189-195.

361. Mullarkey C.J., Edelstein D., Brown lee M. Free radical generation by early glycalion products: a mechanism for accelerated atherogenesis in diabetes .//Biochem. Biophys. Res. Commim.1990. V. 173. P. 932-939.

362. Midler G., Schempp W. Mapping the human ZFX locus to Xp21.3 by in situ hybridization. Hum. Genet. 1989. V. 82:. P. 82-84.

363. Mime. T., Rogerson F. M., Nikkila H., Agamm A. K., W)lite P. C. Human hypertension caused by mutations in the kidney isozyme of 11-beta-hydroxysteroid dehydrogenase //Nature. Genet. 1995. V. 10. P. 394-399.

364. Murata M, Imada M, Inoue S., Kawanishi S. Metal-mediated DNA damage induced by diabetogenic alloxan in the presence of NADH /7 Free Radic. Biol. Med. 1998. V. 25. P. 586-595.

365. Muzcicka-SliwkaF)., GrzybowskiT., WozniakM. Optimization of hexaplex DNA amplification from short tandem repeat and amelogenin loci /7 Electrophoresis. 1997. V. 18. P. 1627-1632.

366. Muzsicka-Sliwka D., Grzybowski T. High microvariation sequence polymorphism at short tandem repeat loci: human beta-actin related pseudogen as an example //Electrophoresis. 1997. V. 18. P. 1613-1619.

367. Nadaud S., Bonnardeaux A., Lathrop M., Soubrier F. Gene structure, polymorphism and mapping of the hnman endothelial nitric oxide synthase gene //Biochem. Biophys. Res. Commun.1994. V. 198. P. 1027-1033.

368. Nagahara T., Ishigami T, Sano T, Ikeda Y, Hibi K., Uneda S., Umemura S., Ishii. M. Angiotensin-Converting enzyme gene insertion/deletion polymorphism and left ventricular hypertrophy in hemodialysis patients //' Jpn. Heart J. 1997. V. 38. V. 821 -830.

369. Nagi D.K., Mansfield M.W., Siickland M.H., Grant P.J. Angiotensin converting enzyme (ACE) insertion/deletion (I/D) polymorphism, and diabetic retinopathy in subjects with IDDM and NIDDM /7 Diabet. Med. 1995. V. 12. P. 997-1001.

370. Nagi D.K., McCormack L.J. Mohamed-Ali V., Yadkin J.S., Knowler W.C., Grant P.J. Diabetic retinopathy, promoter (4G/5G) polymorphism of PAI-1 gene, and PAI-1 activity in Pima Indians with type 2 diabetes /7 Diabet. Care. 1997. V. 20. P. 1304-1309.

371. Naito E., Dewa K., Yamanouchi K, Kominami R. Sex typing of forensic DNA samples using male and female specific probes // J. Forensic Sci. V. 39. P. 1009-1017.

372. Nakai K., Itoh C., Miura Y, Nakai K., Syo T., Musya T., Hiramori K. Deletion polymorphism of the angiotensin I-converting enzyme gene associates with increased risk for ischemic heart diseases in the Japanese // Rinsho Byori 1995. V. 43. P. 347-352.

373. Nakano Y, Oshima T., Hiraga H, Matsuura H., Kajiyama G., Kambe M. DD genotype of the angiotensin I-converting enzyme gene is a risk factor for early onset of essential hypertension in Japanese patients /7 J. Lab. Clin. Med. 1998. V. 131. P. 502-506.

374. Nakajima S., Hamada H., Ready P., Kakunaga T. Molecular structure of the human cytoplasmic beta-actin gene: interspecies homology of sequences in the introns /7 Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1985. V. 82. P. 6133-6137.

375. Nakajima-Taniguchi C., Matsui H, Fujio Y., Nagata S., Kishimoto T., Yamauchi-Takihara K. Novel missense mutation in cardiac troponin T gene found in Japanese patient with hypertrophic cardiomyopathy /7 J. Mol. Cell. Cardiol. 1997. V. 29. P. 839-843."

376. Nakamura Y., Ballard L, Leppert M., O'Connell P., Lathrop G.M., Lalouel J.M., White R. Isolation and mapping of a polymorphic DNA. sequence (pYNZ22) on chromosome 17 D17S30. .// Nucleic Acids Res. 1988. V. 16. P. 5707.

377. Nakamura Y., Carlson M., Khapcho K., White R. Isolation and mapping of a polymorphic DNA sequence, pMCT118, on chromosome lp (D1S58) /7 Nucleic Acids Res. 1988. V. 16. P. 9364.

378. Nakamura Y., Leppert M, u'Conneli P., Wolff P., Holm T., Culver M., Martin C., Fujimoto E., HoffM., Kumlin E, White P. Variable number of tandem repeats (VNTR) markers for human genome mapping /7 Science. 1987. V. 235. P. 1616-1622.

379. Naaayama T., Soma M., Takahashi /., Izumi Y., Kanmatsuse K., Esumi Ivl. Association analysis of CA repeat polymorphism of the endothelial nitric oxide synthase gene with essential hypertension in Japanese // Clin. Genet. 1997. V. 51. P. 26-30.

380. National Research Council. DNA Technology in Forensic Science // Natl. Acad. Press: Washington, 1992.

381. National Research Council NRC Committee on DNA Forensic Science: An Update: Statement of Task//Natl. Acad. Press: Washington, 1994.

382. National Research Council. The Evaluation of Forensic DNA Evidence /7 Natl. Acad. Press: Washington, 1996.

383. Net M., Roychouldhury A.K. Sampling variances of heterozygosity and genetic distance II Genetics. 1974. V. 76. P. 379-390.

384. Nepom G.T. A unified hypothesis for the complex genetics of HLA associations with IDDM /7 Diabetes. 1990. V. 39. P. 1153-1157.

385. Cliromosome 7 assignment of the human beta-actin functional gene

386. ACTB) and the chromosomal dispersion of pseudogenes /7 Cyiogenet. Cell Genet. 1985. V. 40: P. 712.

387. Ni X., Guo J., Xia J., Li L. Investigation on VNTR in intron 40 of vWF gene in Chinese Han population /7 I Chuan Hsueh Pao. 1996. V. 23. P. 110.

388. NIH/CEPH Collaborative Mapping Group. A comprehensive genetic linkage map of the human genome // Science. 1992. V. 258. P. 67-86.

389. Nikiforov YE., Nikiforova M., Fagin J.A. Prevalence of minisatellite and microsatellite instability in radiation-induced post-Chernobyl pediatric thyroid carcinomas/7 Oncogene. 1998. V. 17. P. 1983-1988.

390. Nishikawa K., Nakaki T., Marumo 71, Hayashi M., Suzuki H., Kato R., Saruia T. Pressure promotes DNA synthesis in vascular smooth muele cells //J. Clin. Invest. 1994. V. 93. P. 1975-1980.

391. Nishimura C., Graham C., Hohman T.C. Characterization of mRNA and genes for aldose reductase in rat /7 Biochem. Biophys. Res. Conniiim. 1988. V. 153. P.1051-1059.

392. Nishiuma S., Kario K., Kayaba K. Effect of the angiotensinogen gene Met235Thr variant on blood pressure and other cardiovascular risk factors in two Japanese populations // J. Hypertens. 1995. V. 13. P. 717-722.

393. Niu T., XuX., Rogus J., Zhou Y, Chen C., Yang J., Fang Z., Schmitz C., Zhao J.,Rao V.S., Lindpaintner K. Angiotensinogen gene and hypertension in Chinese // J. Clin. Invest. 1998. V. 101. P. 188-194:

394. Niu T., XuX., Zhou Y., Yang J., Fang Z., Schmitz C., Zhao J., Rao VS., Lindpaintner K. Polymorphism at exon 2 of angiotensinogen gene and essential hypertension in Han Chinese and Taiwanese // J. Clin. Invest .1999. V. 102. P. 194-197.

395. Odawara IvL, Tachi Y., Yamashita K. Paraoxonase polymorphism (Gin 192-Arg) is associated with coronary heart disease in Japanese noninsulin-dependent diabetes mellitus // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1997. V. 82. P. 2257-2260.

396. Ohnashi A., Aoki T, Mcitsugo S., Simataki C. PCR-based typing of human buccal cell's DNA extracted from whole saliva and saliva stains .// Nippon Hoigaki Zasshi. 1993. V. 47. P. 108-118.

397. Okazaki K., Kishida T., Wang W., Nakamura Ivl., Tamaki Y. STR typing of buccal swabs for paternity testing with reference to Japanese population /7 Nippon Hoigaki Zasshi. 1996. V. 50. P. 404-411.

398. Orisio S. Gene polymorphism of the renin-angiotensin system and progression of diabetic nephropathy // J. Nephrol. 1999. V. 12. P. 9-17.

399. O'Rourke M. Mechanical principles in arterial disease /7 Hypertension. 1995. V. 26. P. 2-9.

400. Page D. C., Mosher R., Simpson E. M., Fisher E. M. C., Mcirdon G., Pollack J., McGiilivray B. de la Chapelle A., Brown L. G. The sexdetermining region of the human Y chromosome encodes a finger protein // Cell. 1987. V. 51. P. 1091-1104.

401. Pai C.Y., Chiu S.L., Tang Т.К., Wei Y.H., Yany C.H. Prevention of false results from preferential PCR amplification of VNTR alleles // J. Formos. Med. Assoc. 1996. V. 95. P. 69-72.

402. Paimberg P., Smith M., Waltman S.The natural history of retinopathy in insulin-dependent juvenile-onset diabetes // Opthalmology. 1981. V. 88. P. 613-618.

403. Palmer R.M.J., Ferrige A.G., Moncada S. Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium-derived relaxing factor /7 Nature. 1987. V. 327. P. 524-526.

404. Palmer R.M., R.ees D.D., Ashton D.S., Moncada S. L-Arginine is the physiological precursor for the formation of nitric oxide in endothelium-dependent relaxation. Biochem. Biophys. Res. Comimm. 1988. V. 153. P. 1251-1256.

405. Pan J.P., CMang A.N., Chou C.Y., Chan W.L., Tai J.J. Polymorphisms of the apolipoprotein В 3' number of tandem repeats region associated with coronary artery disease in Taiwanese /7 J. Formos. Med. Assoc. 1998. V. 97. P. 233-238.

406. Panzer S.W., Hammond H.A., Stephens L., Chai A., Caskey C.T. Tetranucleotide repeat polymorphism at D6S366 /7 Hum. Mol. Genet. 1993. V. 2. P. 151 i.

407. Park S.J., Lee W.G., Lee S. W., Kim S.H., Koo B.S., Budowle В., Rho N.H. Genetic variation at four tetrameric tandem repeat loci in Korean population /7 J. Forensic Sci. 1997. V. 42. P. 125-129.

408. Parving H.H., Tamow L., RossingP. Genetics of diabetic nephropathy /7 J. Am. Soc. Nephrol. 1996. V. 7. P. 2509-2517.

409. Pat el A., Raianachaiyavong S., Millward В A., Demaine A.G. Polymorphisms of the aldose reductase locus (ALR2) and susceptibility to diabetic microvascular complications /7 Adv. Exp. Med. Biol. 1993. V. 328. P. 325-332.

410. Patterson В., Jones C., Hart I., Bleskan ./., Berger R., Geyer В., Eisenberg S. P., Smith M. F., Jr., Arena W. P. The human interleukin-I receptor antagonist (IL1RN) gene is located in the chromosome 2ql4 region //' Genomics. 1993. V. 15. P. 173-176.

411. Pearce S.H., Foster D.J., Imrie H., Myerscough N, Beckett G.J., Thoday K.L., Kendall-Taylor P. Mutational analysis of the thyrotropin receptor gene in sporadic and familial thyrotoxicosis /7 Thyroid. 1997. V. 7. P. 923927.

412. Pena S.D.J. Pitfalls of paternity testing based solely on PCR typing of minisatellites and microsatellites .// Am. J. Hum. Genet. 1995. V. 56. P. 1503-1504.

413. Pena S.D.J., Chakraborty R. Paternity testing in the DNA era. /7 Trend. Genet. 1994. V. 10. P. 204-209.

414. Pena S.D.J., de Souza K.T., de Andrade M., Chakraborty R. Allelic associations of two polymorphic microsateílites in intron 40 of the human von Willebrand factor gene /7 Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. V. 91. P. 723-727.

415. Perez-1.ezaun A., Calateu F., Mateu F., Comas D., Bosch F., Bertranpetit J. Allele frequencies for 2u microsatellites in a worldwide population survey//Hum. Hered. 1997. V. 47. P. 189-196.

416. Perrier S., Coussediere C, Dubost J.J., Albuisson E., Sauvezie B. IL-1 receptor antagonist (IL-1 RA) gene polymorphism in Sjogren's syndrome and rheumatoid arthritis /7 Clin. Immunol, Lnmunopathoi. 1998. V.87. P. 309-313.

417. Pfitzinger H., Ludes B., Mangin P. Sex determination of foprensic samples: co-amplification and simultaneous detection of an Y-specific and a X-specific DNA sequence // Int. J. Leg. Med. 1993. V. 105. P. 213-216.

418. Pfohi M., Koch M., Enderle M.D., Kuhn R., FuUhase ., Karsch K.R., Raring H.U. Paraoxonase 192 Gln/Arg gene polymorphism, coronary artery disease, and myocardial infarction in type 2 diabetes /7 Diabetes. 1999. V. 48. P. 623-627.

419. Pfohl M., Koch M., Prescod S., Haase K.K., Haring H.U., Karsch K.R. Angiotensin I-converting enzyme gene polymorphism, coronary artery disease and myocardial infarction. An angiographicaily controlled study // Eur. Heart. J. 1999. V. 20. P. 1318-1325.

420. Phillips S.M., Barton CM., Lee S.J., Morton D.G., Wallace DM., Lemoine N.R., Neoptolemos J.P. Loss of the retinoblastoma suspectibility gene (RBI) is frequent and early event in prostatic tumorogenesis /7 Br. J. Cancer. 1994. V. 70. P. 1252-1257.

421. Pickering G. Noraiotension and hypertension: the mysterious viability of the false // Am. J. Med. 1978. V. 65. P. 561-563.

422. Pieper GM. Superoxide dismutase plus catalase improves post-ischaemic recovery in the diabetic heart /7 Cardiovasc. Res. 1988. V. 22. P. 916-926.

423. Pieper G.M., Langensiroer P., Siebeneich W. Diabetic-induced endothelial dysfunction in rat aorta: role of nydroxyl radicals // Cardiovasc. Res. 1997. V. 34. P. 145-156.

424. Pieper G. M., Siebeneich W. Use of nitronyl nitroxide to discriminate the contribution of nitric oxide radical in endothelium-dependent relaxation of control and diabetic bloodvessels /7 J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997. V. 283. P. 138-147.

425. Pietruck F. Selectively enhanced cellular signaling by G-l proteins in essential hypertension: G-alpha-12, G-alpha-13, G-beta-2 are not mutated // Circ. Res. 1996. V. 79. P. 974-983.

426. Pietropaolo M., Hutton J.C., Eisenbarth G.S. Protein tyrosine phospatase-like proteins: link with IDDM // Diabet. Care. 1996. V. 20. P. 208-214.

427. Pociot F., Norgaard K, Nobolth N., Andersen O., Nerup J. A nationwide population-based study of the familial aggregation of Type 1 (insulin-dependent) diabetes mellitus in Denmark /7 Diabetologia. 1993. V. 36. P. 870-875.

428. Polymeropoulos M.H., Xiao H., Rath D.C., Merril C.R. Tetranucleotide repeat polymorphism at the human aromatase cytochrome P-450 gene (CYP19)//Nucleic Acids Res. 1991. V. 19. P. 195.

429. Polymeropoulos M.H., Xiao H.,Rath D.S., Merrill C.R. Tetranucieotide repeat polymorphism at the human tyrosine hydroxylase gene /7 Nucleic Acids. Res. 1991. V. 19. P. 3753.

430. Polymeropoulos M.H., Xiao /7., Rath D.S., Merril C.R. Dinucleotide repeat polymorphism at the human CTLA4 gene /7 Nucleic Acids Res. 1991. V. 25. P. 4018.

431. Polymeropoulos M.H., Rain D.S., Xiao H., Merril C.R. Tetranucieotide repeat polymorphism at the human coagulation factor XIII A subunit gene (F13A1) //Nucleic Acids Res. 1991. V. 19. P. 4306.

432. Polymeropoulos M.H., Rath D.S., Xiao /7., Merril C.R. Tetranucieotide repeat polymorphism at the human beta-actin related pseudogene H-beta-psi-2 (ACTBP2) //Nucleic Acids Res. 1992. V. 20. P. 1432.

433. Popov V., Fomicheva E. Kovalev J., Schwartz E. Absence of association between the angiotensin-converting enzyme gene polymorphism and borderline hypertension in men of St Petersburg, Russia /7 J. Hum. Hypertens. 1996. V. 10. P. 557-559.

434. Pristley L., Kumar D., Sykes B. Amplification of the COL2A1 3'-variable region used for segregation analysis in a family with the stickler syndrome //Hum. Genet. 1990. V. 85. P. 525-526.

435. Proudoff N.J., Gill A., Maniatis T. The structure of the human zeta-globin gene and a closely linked, nearby identical pseudogene // Cell. 1982. V. 31.1. X . w

436. Puccini A.,Waierkamp K., Meyer E. Short tandem repeats HumACTBP2 (SE33) and HumVWA: population genetic study on a north Italian population/7 Int. J. Leg. Med. 1997. V. 110. P. 292-294.

437. Pujia A., Gnasso A., Irace C., Dominijanni A, Zingone A., Perroiti N., Colonna A., Mattioli P.L. Association between ACE-D/D polymorphism and hypertension in type II diabetic subjects /7 J. Hum. Hypertens. 1994. V. 8. P. 687-691.

438. Rabensteiner E>., Abrahamian H., Irsigler K., Hermann KM., Kiener HP., Mayer G., Kaider A., Prager R. ACE gene polymorphism and proliferative retinopathy in type 1 diabetes: results of a case-control study // Diabetes Care. 1999. V.22. P. 1530-1535.

439. Rand L.I., Krolewski A.S., Aiello L.M. Multiple factors in the prediction of risk of proliferative diabetic retinopathy //N. Engl. J. Med. 1985. V.313. P.1433-1438.

440. Rand S., Puers C., Skowasch K, V/iegand P., Budowle B., Brinkmann B. Population genetics and forensic efficiency data of 4 AMPFLP's // Int. J. Leg. Med. 1992. V. 104. P. 329-333.

441. Rands D.M. Ripping and RAPping at Berkeley /7 Genetics. 1992. V. 132. P. 1223-1224.

442. Rantamaki T., Lonquist J,., Karttunen L., Kainulainen K., Peltonen L. DNA diagnostics of the Marfan syndrome: application of amplifiable polymorphic markers // Eur. L. Hum. Genet. 1994. V. 2. P. 66-75.

443. RappJ., CsokayB., Bozce P., Zalay Z., Join J., Ponder B., Olah E. Allele loss from large regions of chromosome 17 is common only in certain hysiological subtypes of ovarian carcinomas /7 Br. J. Cancer. 1996. V. 74. P. 15924597.

444. Raianachaiyavong S., Fleming D., Janer M., Demaine A.G., Willcox N., Newsom-Davis J., McGregor A.M. HLA-DPB1 polymorphisms inpatients with hyperthyroid Graves' disease and early onset myasthenia gravis /7 Autoimmunity. 1994. V. 17. P. 99-104.

445. T r\r\in T ^^ r T^V rnn /-A 1l^oomun, lyyi. V. ¿3D. r. 3V5-0U1.

446. Reddy P.H., Williams M., Tagle DA. Recent advances and understanding the pathogenesis of Huntington's disease /7 Trends Neurosci. 1999. V. 22. P. 248-255.

447. ReedP.W., DaviesJ.ICopeman J.B. Chromosome-specific microsatellite sets for fluorescence based, semi-automated genome mapping // Nature Genet. 1994. V. 7. P. 390-395.

448. Reguero J.R., Cubero G.I., Batalla .A., Alvarez V., Hevia S., Cortina A., Coio E Apolipoprotein AI gene polymorphisms and risk of early coronary disease/7 Cardiology. 1998. V. 90. P. 231-235.

449. Reijonen H., Fionen J., Knip IvL, Akerblom H.K. HLA-DQB1 alleles and absence of Asp 57 as susceptibility factors of IDDM in Finland /7 Diabetes. 1991. V. 40. P. 1640-1644.

450. RemaM., Mohan V., Bhaskar A., Shanmugasundaram K.R. Does oxidant stress play a role in diabetic retinopathy? // Indian J. Ophthalmol. 1995. V. 43. P. 17-21.

451. Rewers M., Kamboh M.I., Hoag S., Sheiierly S.M., Ferrell R.E., Hamman R.F. ApoA-IV polymorphism associated with myocardial infarction in obese NIDDM patients. The San Luis Valley Diabetes Study /7 Diabetes. 1994. V. 43. P. 1485-1489.

452. Rewers M., LaPorte R.E., King H., Tuomilehto J. Trends in the prevalence and incidence of diabetes: insulin-dependent diabetes mellitus in childhood // World Health Stat. 1988. V. 41. P. 179.

453. Reyniers E., Vits L., De Boiule K. The full mutation in the FMR-1 gene of male fragile X patients is absent in their sperm /7 Nature Genet. 1993. V. 4.1. P 143.1461. JL . i I w' X IV/.

454. Rice G.I., Foy C.A., Grant P.J. Angiotensin converting enzyme and angiotensin II type 1-receptor gene polymorphisms and risk of ischaemic heart disease /7 Cardiovasc. Res. 1999. V.41. P. 746-753.

455. RJgat B., Hubert C., AJhenc-Gelas F. An insertion-deletion polymorphism in the angiotensin I-converting enzyme gene accounting for half the variance of serum enzyme levels // J. Clin. Invest. 1990. V. 86. P. 13431346.

456. Rigat B., Hubert C., CorvoI P., Soubrier P. PCR detection of insertion/deletion polymorphism of the human angiotensin converting enzyme (DCPI) (dipeptidyl carboxypeptidase 1) /7 Nucleic Acids Res. 1992. V. 20. P. 1433.

457. Riggins G. J., Lokey L. K., ChastainJ. L., Leiner H. A., Sherman S. L., Wilkinson K. D., Warren S. T. Human genes containing polymorphic trinucleotide repeats /7 Nature Genet. 1992. V. 2. P. 186-191.

458. Science. 1992. V. 255. P. 717-720.

459. Robinson LJ,, Weremowicz S,, Morton C.C., Michel T, Isolation and chromosomal localization of human endothelial nitric oxide synthase (NOS3) gene /7 Genomics. 1994. V. 19. P. 350-357.

460. Roff DA., Beutzen P. The statistical analysis of mitochondrial DNA. polymorphisms: %2 and the problem of small samples // Mol. Biol. Evol. 1989. V. 6. P. 539-545.

461. Rolf B., Horst B., Eigel A., Sagansermsri T., Brinkmann B., Horst J. Microsatellite profiles reveal an unexpected genetic relationship between Asian populations //Hum. Genet. 1998. V. 102. P. 647-652.

462. Romero R.L., Juston A.C., Ballantyne J., Herry B.E. The applicability of formalin fixed paraffin embedded tissues in forensic DNA analysis // J. Forensic Sei. 1997. V. 42. P. 708-714.

463. Ronningen K.S., Gjertsen H.A., Iwe T., Spurkland A., Hansen T., Thorsby E. Particular HLA.-DQ aiphabeta heterodimer associated with IDDM suspectibility in both DR4-DQw4 Japanese and DR4-DQw8/DRw8-DQw4 Whites /7 Diabetes. 1991. V. 40. P. 759-763.

464. Ronningen K.S., Iwe T., Halst en sen T.S., Spurkland A., Thorsby E. The amino acid at position 57 of the HLA-DQ beta chain and susceptibility to develop insulin-dependent diabetes mellitus /7 Hum. Immunol. 1989. V. 26. P. 215-225.

465. Rogus J.J., Moczulski D., Frei re M.B., Yang Y., Warram J.H., Krolewski A.S. Diabetic nephropathy is associated with AGT polymorphism T235: results of a family-based study /7 Hypertension. 1998. V. 31. P. 627-631.

466. Rosenblum J.S., Gitula N.B., Lerner R.A. On signal sequence polymorphisms and diseases of distribution // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.1996. V" 93. P. 4471-4473.

467. Rousselet F., Pjitzinger H., Ivfangin P. French Caucasian population data obtained from fluorescently detected HUMvWAJ i /A and HUMF13Aui short tandem repeat loci // Int. J. Leg. Med. 1996. V. 109. P. 5-9.

468. Royle N., C.larkson E., Wong Z, Jeffreys A. Clustering of hypervariable minisatellites in the preterminal regions of human autosomes /7 Genomics. 1988. V. 3. P. 352-360.

469. Ruiz J., Blanche H., James R.W., Gar in M.C., Vaisse C., Charpeniier G., Cohen N., Morabia A., Passa P., Froguel P. Gln-Argl92 polymorphism of paraoxonase and coronary heart disease in type 2 diabetes /7 Lancet. 1995. V. 30. P. 346. P. 869-872.

470. Ryskov A.P., Jincharadze A.G., Prosnyak M.L, Ivanov P.L., Limborska SA. M13 phage DNA as an universal marker for DNA imgerprinting of animals, plants and microorganisms /7 FEES Lett. 1988. V. 233. P. 388392.

471. Rutledge D.R., Browe C.S., Kubi!is P.S., Ross E.A. Analysis of two variants of the angiotensinogen gene in essential hypertensive African-Americans /7 Am. J. Hypertens. 1994. V. 7. P. 651-654.

472. Rutledge D.R., Kubilis P., Browe C.S., Ross E.A. Polymorphism of the angiotensin I converting enzyme gene in essential hypertensive patients /7 Biochem. Mol. Biol. Int 1995. V. 35. P. 661-668.

473. Sadler J.E., Ginsburg D. A database of polymorphisms in the von Willebrand factor gene and pseudogene // Thromb. Haemostat. 1993. V. 69. P. 185-191.

474. Saiki R.K., Scharf S., Faloona F., Mullis KB., Horn G.T., Erlich H.A., Arnheim N. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for sickle cell anemia ii Science. 1985. V. 230. P. 1350-1354.

475. Saiki R.K., Bugawan T.L., Horn G.T., Mullis K.B., Erllich HA. Analysis of enzymatically amplified beta-globin and HLA DQ alpha DNA with allele specific oligonucleotide probes .//Nature. 1986. V. 324. P. 163-166.

476. Sajantila A., Puomilahti S., Johnsson V., Ehnholm C. Amplification of reproducible allele markers for amplified fragment length polymorphism analysis//Biotechniques. 1992. V. 12. P. 16-22.

477. Sajithal G.B., Chithra P., Chandrakasan G. The role of metal-catalyzed oxidation in the formation of advanced glycation end products: an in vitro study of collagen /7 Free Radic. Biol. Med. 1998. V. 25. P. 265-269.

478. Sakane N., Yoshida T., Yoshioka K., Nakamura Y., Umekawa T., Kogure A., Takakura Y, Kondo M. Beta 3-adrenoreceptor gene polymorphism: a newly identified risk factor for proliferative retinopathy in NIDDM patients //Diabetes. 1997. V. 46. P. 1633-1636.

479. Sal a A., Penachino G., Gorach D. Comparison of allele frequences of eight STR loci from Argentinian Ajnerindian and European populations ii Hum. Biol. 1998. V. 70. P. 937-947.

480. Sale M.M., Akamizu T., Howard T.D., Yokota T., Nakao K., Mori T., Iwasaki H., Rich S.S., Jennings-Gee J.E., Yamada M., Bowden D.W.

481. Association of autoimmune thyroid disease with a microsatellite marker for the thyrotropin receptor gene and CTLA-4 in a Japanese population /7 Proc. Assoc. Am. Physicians. 1997. V. 109. P. 453-461.

482. Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain terminating inhibitors /7 Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977. V. 77. P. 54635467.

483. Santos S.M., Budowie B., Smerick J.B., Keys K.M., Moretti T.R. Portuguese population data on six short tandem repeat loci (CSF1PO, TPOX, THOI, D3S1358, VWA and FGA) /7 Forensic Sci. Int. 1996. V. 83. P. 229-235.

484. Santoso S., Kunicki T.J., KroH H., Haberbosch W., Gardemann A. Association of the platelet glycoprotein la C807T gene polymorphism with nonfatal myocardial infarction in younger patients /./ Blood. 1999. V. 93. P. 2449-2453.

485. ScharfSJBowcock AJvL, McClure G., Klitz W., Yandell D.W., Erhch H.A. Amplification and characterization of the retinoblastoma gene VNTR by PGR /7 Am. J. Hum. Genet. 1992. V. 50. P. 371-381.

486. Schleicher E.D., Wagner E., Nerlich A.G. Increased accumulation of the glycoxidation product N(epsilon)-(carboxymethyl)lysine in human tissued in diabetes and aging /7 J. Clin. Invest. 1997. V. 99. P. 457-468.

487. Schmalzing D., KoulhyL., Chisholm D., Adorian A., Malsudaira P., Erlich D. Two-color multiplexed analysis of eight STR loci with aneiectrophoretic microaevice/7 Anal. Biocnem. 1999. V. 15. P. 148-152.

488. Schmidt S., Beige J., Walla-Friedel M., Michel Ivf.C., Sharma'A.M., Ritz E. A polymorphism in the gene for the angiotensin II type 1 receptor is associated with hypertension // J. Hypertens. 1997. V.15. P. 1385-1358.

489. Schmidt S., Sharma A.M., Zilch O., Beige J., Walla-FriedelM., Ganten D., Distler A., Ritz E. Association of M235T variant of the angiotensinogen gene with familial hypertension of early onset /7 Nephrol. Dial.Transplant. 1995. V. 10. P. 1145-1148.

490. Schmidt S., van Hooft I.M., Groubee D.E., Ganten D., Ritz E. Polymorphism of the angiotensin I converting enzyme gene is apparently not related to high blood pressure: Dutch Hypertension and Offspring Study //J. Hypertens. 1993. V. 11. P. 345-348.

491. Schmitt C., Benecke AT. Five cases of forensic short tandem repeat DNA typing //Electrophoresis. 1997. V. 18. P. 690-694.

492. Schnee-Griese J., Teifel-Greding J. (1991) DNA length polymorphism of the ApoB 3! region: frequency distribution of the alleles in the German population/7 Forensic Sei. Lnt. 1995. V. 51 P. 173-178.

493. Schneider H.R., Rand S., Schmitter H., Weichhold G. ACTBP2-nomenclature recommendation of GEDNAP // Int. J. Leg. Med. 1998. V. 111. P. 97-100.

494. Schonfeld G. Genetic variation of apolipoprotein B can produce both low-ana high levels of apoB-containing lipoproteins in plasma /7 Can. J. Cardiol. 1995. V. II. Suppl. G. P. 85G-92G.

495. Schrijver H.lvL, Cmsius J.B,, Uitdehaag B,M., Garcia Gonzalez M.A., Kostense P.J., Polman C.H., Rena A.S. Association of interleukin-lbeta and interleukin-1 receptor antagonist genes with disease severity in MS /7 Neurology. 1999. V. 52. P. 595-599.

496. Schriver IvI.D., Jin L., Chakraborty R, Boenvinkle E. VNTR allele frequency distributions under the stepwise mutation model: a computer simulation approach //'Genetics. 1993. V, 134. P. 983-993.

497. Schroeder W.T., Saunders G.F. Localization of the human catalase and apoplipoprotein A-I genes to chromosome 11 /'/' Cytogenet, Cell. Genet. 1987. V.*44. P. 231-233.

498. Scowach H, Wiegand P., Brinkmann B. pMCT118: a new allelic ladder and an improved electrophoretic separation lead to demonstration of 28 alleles /7 Int. J. Leg. Med. 1992. V. 105. P. 165-168.

499. SeidlC., Dormer H., Fischer B., Usadel K.H., SeifrieaE., KctlmasserJ.P.,rruifj vikfjstn it r'TT A a r>r»r!r>n 1*7 fiimnrnnicin jn ?Tjfii»ntc vsntn rppnmatAifi

500. II t''''j' it. V l t/I i | WWXJV^iX X ' I I I I V' I j't 1 ' 1 I I > I I j' t( L > 1 11V * IV. 1 , , I w t 11(1. » ( farthritis /7 Tissue Antigens. 1998. V. 51. 62-66.

501. Semba S., Yamamoto Y., Ishizu FL Sex determination from blood and blooustams bv polymerase chain reaction /7 Nippon Hoigaki Zasshi. 1994. V. 48. P. 716-720.

502. Serrat A., Garsia H.A. Gender verification in sports by PGR amplification of SRY and DYZ1 Y chromosome specific sequences: presence of DYZ1 repeat in female athletes //Br. J. Sports Med. 1996. V. 30. P. 310-312.

503. Shelley C., Sharpe C., Baralle F., Shouldes C. Comparison of the human apolipoprotem genes // J. Mol. Biol. 1985. V. 186. P. 43-51.

504. Shen D., Ha D., Bai C. Relationship between genotype of angiotensin converting enzyme gene and left ventricular hypertrophy in Chinese hypertensives // Chung Hua I Hsueh I Chuan Hsueh Tsa Chih. 1998. V. 15. P. 364-366.

505. Shiono H. Personal identification using DNA polymorphisms- the identification of forensic biological materials /7 Nippon Hoigaki Zasshi.1996. V. 50. P. 320-330.

506. Siegelman-Danieli N., Buetow K.H. Constitutional genetic variation at the human aromatase gene (Cyp 19) and breast cancer risk /7 Br. J. Cancer. 1999. V. 79. P. 546-463.

507. Siegmimd T., Usadel K.H. Dormer H., BraunJ., Walfish E.G., Badenhoop K. Interferon-gamma gene microsatellite polymorphisms in patients with Graves' disease/7 Thyroid. 1998. V. 8. P. 1013-1017.

508. Siffert Vv., Rosskopf Z). Siffert G„ Bunch SMoritz A., Erbel R, Sharma A. M., Riiz E., Wichmann H.-E., Jakobs K. H., Horsthemke B. Association of a human G-protein heta-3 subunit variant with hypericiision // Nature Genet. 1998. V. 18. P. 45-48.

509. Suva A., Johnson J., White R. Characterization of a highly polymorphic region 5' to Jh in the human immunoglobulin heavy chain /7 Nucleic Acids Res. 1987. V. 15. P. 3845-3857.

510. Silva F., Gusmao E., AJves C., Peruca R., David L., Amorim A. Tetra- and pentanucleotide short tandem instability in gastric cancer // Electrophoresis.1997. V. 18. P. 1633-1686.

511. Singer M. Highly repeated sequences in mammalian genomes /7 Int. Rev. Cytol. 1982. V. 76. P. 67-112.

512. Skillem P.G. Genetics of Graves' disease //Mayo Clin. Proc. 1972. V. 47. p. 848-849.

513. Soma Ivf., Nakayama T., Kanrnatsuse K. Nitric oxide synthase gene polymorphism and its influence on cardiovascular disease /7 Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 1999. V. 8. P. 83-87.

514. TOE Somerville E.E., Wang K. The ultrasensitive silver «protein» stain also detects nanograms of nucleic acids /7 Biochem. Bioohvs, Res. Commun. 1981. V. 102. P. 53-58.

515. Soubrier F. The angiotensin I-converting enzyme gene polymorphism: implication in hypertension and myocardial infarction /7 Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 1994. V. 3. P. 25-29.

516. Sparkes R., Sparkes M., Wilson M. Regional assignment of genes for human esterase D ana retinoblastoma to chromosome band 13ql4 // Science. 1980. V. 208. P. 1042-1044.

517. Spigelman M. Ancient DNA /7 Ann. R. Coll. Surg. Engl. 1994. V. 76. P. 351.

518. Stacks B., Witte Ivf.fvf. Sex determination of dried blood stains using the polymerase chain reaction (PGR.) with homologous X-Y primers of the zinc finger protein gene /7 J. Forensic Sci. 1996. V. 41. P. 287-290.

519. Siaessen J.A., Knznetsova T., Wang J.G., Emetianov D., vlietinck R., Fagard R. M235T angiotensinogen gene polymorphism and cardiovascular renal risk H J. Hypertens. 1999. V. 17. P. 9-17.

520. Stajszczyk M., Gminski J. The role of DNA polymorphism in the renin-angiotensin system and the pathogenesis of cardiovascular diseases /7 Postepy Hig. Med. Dosw. 1997. V.51. P. 171-183.

521. Stallings R. L. Distribution of trinucleotide microsatellites in different categories of mammalian genomic sequence: Implication for human genetic diseases // Genomics. 1994. V. 21. P. 116-121.

522. Standen G.R., Bignell P., Bower D.J., Peake I.R., Bloom A.L. Family studies in von Willebrand's disease by analysis of RFLPs and intragenic VNTR sequence /7 Br. J. Haematol. 1990. V. 76. P. 242-249.

523. Stein C., Lange T., Ferencik S., Grosse-Wilde H., Henssge C. German population data of three short tandem repeat loci D3S1744, D13S1090 and D18S849 /7 Forensic Sci. Int. 1998. V. 91. P. 103-107.

524. Staffers D.A., Ferrer J., Clarke W.L., Kaberer J.F. Early-onset type II-diabetes mellitus (MODY4) linked to IPFI // Nat. Genet. 1998. V. 17. P. 138-139.

525. Sullivan KM., Mannucci A., Kimpton C.P., Gill P. A rapid and quantitative DNA sex test: fluorescent-based PGR. analysis of X-Y homologous gene amelogenin/7 BioTechniques. 1993. V. 15. P. 636-641.

526. Summers KM., West J.A., Huggard P.R., West M.J. Angiotensin-converting enzyme and regulation of blood pressure in a large Australian family /7 Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 1993. 20. P. 320-323.

527. Simthomthepvarakul T., Hayashi Y., RefetoffS. Polymorphism of a variant human thyrotropin receptor (liTSHR) gene /7 Thyroid. 1994. V. 4. P. 147149.

528. Szombathy T., Szalai C., Katalin B., Palicz T., Romics L., Csaszar A. Association of angiotensin II type 1 receptor polymorphism with resistant essential hypertension /7 Clin. Chim. Acta.1998. V. 269. P. 91-100.

529. Tagliabracci A., Busceni L., Bianchi F., Sassardi C., Ricci U., Neri P.M., Rodriguez D. Polymorphism and sequence variations of the HumCD4pentameric microsatellite in an Italian population sample // J. Forensic Sei. 1998. V. 43. P. 841-844.

530. Takami S.f Rakugi //,, Sato N., Katsuya 77 Higaki J,, Ogihara 7' Angiotensin II type 1 receptor gene polymorphism is associated with familial hystory of hypertrophic cardiomyopathy in Japanese patients // Am. J. Hypertens. 1998. P. 11.321-325.

531. Takanashi M., Kato Y., Miyakawa S., Kurosu A., Kamiyama S. Allele detection and population study in Japanese using two STR loci (CYP19 and HUMTH01) /7 Int. J. Leg. Med. 1996. V. 108. P. 321-322.

532. Tarlow J. K, Blakemore A. I. F, Lennard A., Solari R., Hughes H, Steinkasserer A., Duff G. W. Polymorphism in human LL-l receptor antagonist gene intron 2 is caused by variable numbers of an 86-bp tandem repeat//Hum. Genet. 1993. V. 91. P. 403-404,

533. Tarnow L., Cambien F., Rössing P., Nielsen F.S., Hansen B.V., Ricard S., Poirer G., Parving H.H. Angiotensinogen gene polymorphisms in IDDM patients with diabetic nephropathy /7 Diabetes. 1996. V. 45. P. 367-369.

534. Tarnow L. Cambien F., Rössing P., Nieisen F.S., Hansen B.V. Ricard S. Poirer O., Parving H.H. Angiotensin-II type 1 receptor gene polymorphism and diabetic microangiopathy //Nephrol. Dial. Transplant. 1996. P. 11. P. 1019-1023.

535. Tas S., Abdella N.A. Blood pressure, coronary artery disease, and glycaemic control in type 2 diabetes mellitus: relation to apolipoprotein-CIII gene polymorphism /7 Lancet. 1994. V, 343. P. 1194-1195.

536. Tautz D., Renz M. Simple sequences are ubiquitous repeatitive components of eucaryotic genomes // Nucleic Acids Res. V. 12. P. 4127-4138.

537. Terwilliger J.D., uti J. Handbook of human genetic linkage /7 Baltimor: John Hopkins University Press, 1994.

538. Tesfamariam B. Free radicals in diabetic endothelial cell disfunction /7 Free Radical Biol. Med. 1994. V. 16. P. 383-391.

539. Tesfamariam B., Cohen R.A. Free radicals mediate endothelial cell dysfunction caused by elevated glucose /7 Am. J. Physiol. 1992. V. 263. Pi 2. P. H321-H326.71.---- 77 r>-„7,JT n r> » . .i /1J s~tT

540. JJ. les^un r., rticrturu r., ^natron r., muiftieu />., K^ruciuu e. currier ju., Dubourg O.,Laurie N., Desnos M, Miilaire A., Isnard R., Hagege A.A.,fts)1/hs)1Jl* T i? ?lA l-irtivt/in/J R ("hlis'tl/JllW P ^/'hlAinvt-r

541. S-* KS 11! I <S tl t .J , i^V-i 1/ J J.Y Jt • ) / MM/ M- HA' 1 ' . , • ' M ' V.' ( V f I I jt . , , . . . II.

542. Komajda M. Genotype-phenotype analysis in four families with mutations in beta-myosin heavy chain gene responsible for familial hypertrophic cardiomyopathy /7 Hum. Mutat. 1998. V. 2. P. 385-392.

543. Thomson G. A review of theoretical aspects of HLA and disease associations /7 Tneor. /7 Popul. Biol. I98l. V. 20. P. 168.

544. Thomson G. Mapping disease genes: family-based association studies /7 Am. J. Hum. Genet. 1995. V.57. P. 487-498.

545. Thorsby E. HLA-associated disease suspectibility: which genes are primarily involved? // Immunologist. 1995. V. 3. P. 51-58.

546. Tikkanen M.J. Genetic variants of apolipoprotein B gene: relation to serum lipid levels and coronary artery disease among the Finns /7 Ann. Med. 1992. V. 24. P. 357-361.

547. Tiret L. Deletion polymorphism in angiotensin-converiing enzyme gene associated with parental history of myocardial infarction /7 Lancet. 1993. V. 343. P. 1991-1992.

548. Qn(nntpm;iní,nnv<1'+inií *»TT7vm/=» ann cmmo^nciri-TT 'vn^ 1 rp/r>(=»r»fo'" (rpnp

549. Ull^lV IVilDn t VW11> VI llllg V^l u j mv ujiu Cui^ivivixulli -Li IJ pv A iVw^/tVi ^viivpoiymorpiiisms on risk of myocardial infarction /7 Lancet. 1994. V. 344. P. 910-913.

550. Todd J. A. Genetic control of autoimmunity in type 1 diabetes i I Immunol. Today. 1990. V. 11. P. 122-129.

551. Todd J.A. Genetic analysis of type 1 diabetesusiük wíioíc ferióme approaches//Proc.Natl. Acad. Sci. USA. 1995. V. 92. P. 8560-8565.

552. Todd J.A., Bell J.L., McDevitt H.O. HLA-DQP gene contributes to suspectibility and resistance to insulin-dependent diabetes mellitus /7 Nature. 1987. V. 329. P. 599-604.

553. Tomer Y., Barbesino G., Greenberg D. A., Concepción E., Davies T.F. A new Graves disease-susceptibility7 locus maps to chromosome 20ql 1.2 // Am. J. Hum. Genet. 1998. V. 63. P. 1749-1756.

554. Tomer Y, Barbesino G., Keddache M., Greenberg D. A., Davies T. F. Mapping of a major susceptibility locus for Graves' disease (GD-1) to chromosome I4q31. J. Clin. Endocr. Metab. 1997. V. 82. P. 1645-1648.

555. Tuomiiehto J., Podar T., Brigis G. Comparison of the incidence of insulin-dependent diabetes mellitus in childhood among five Baltic populations during 1983-1988 //Int. J. Epidemiol. 1992. V. 21. P. 518-527.

556. Ukkola O., 'Savolainen M.J., SaimelaP.L, von Dickhoff K., Kesaniemi Y.A. Apolipoprotein B gene DNA polymorphisms are associated with macro-and microangiopathy in non-insulin-dependent diabetes mellitus /7 Clin. Genet. 1993. V. 44. P. 177-184.

557. Umeisu K., Yuasa L, Watanabe G., Suzuki T. A simple technique for the genotyping of TH01 locus /7 Nippon Hoigaki Zasslii. 1997. V. 51. P. 433437.

558. Unalien D.E., Akselsen H.E., Joner Ст., Dahl-Jorgensen K., Sovik ()., Ronningen K.S., Thorsby E. No independent associations of LMP2 and LMP7 polymorphisms with susceptibility to develop IDDM // Diabetes. 1997. у. 46. P. 307-312.

559. Uwabo J., Soma Ivl., Nakayama Т., Kanmatsuse K. Association of a variable number of tandem repeats in the endothelial constitutive nitric oxide synthase gene with essential hypertension in Japanese /7 Am. J. Hyperiens. 1998 V. 11.P. 125-128.

560. Vafiadis P., Bennett S.T., Todd J A., Nadeau ,/., Grabs R,Goodyer C.G., Wickramasinghe S., Golle E., Polychronakos C. Insilin expression in human thymus is modulated by INS VNTR alleles at the IDDM2 locus /7 Nature Genet. 1997. V. 15. P. 289-292.

561. Vaidya В., Emrie H., Perros P., Young E.T., Kelly W.F., Carr D., Large D.lvL, Toft A.D., McCarthy M.I., Kendall-Taylor P., Pearce S.H. The cytotoxic T lymphocyte antigen-4 is a major Graves' disease locus /7 Hum .Mol. Genet. 1999. V. 8. P. 1195-1199.

562. Vallet-Colom L, Leve-Marchal E., Elton M. HLA-DQB 1 codon 57 and genetic susceptibility to type I (insulin-dependent) diabetes mellitus in French children // Diabetoiogia. 1990. V. 33. P. 174-176.

563. Van Amstel H.K., Reitsma P.H. Tetranucleotide repeat polymorphism in the vWF gene // Nucleic Acids Res. 1990. V. 18. P. 4957.

564. Van Endert P.M., Liblau R.S., Patel S.D., Eugger L., Lopez Т., Pociot F., Nerup J., IvlcDevitt H.O. Major histocompatibility complex-encoded antigen processing gene polymorphism in IDDM // Diabetes. 1994. V. 43:110-117.

565. Van Geel P.P., Pinto Y.M., Buikema H., van Gilst W.H. Is the AI166C polymorphism of the angiotensin II type I receptor involved in cardiovascular disease? // Eur. Heart J. 1998. V. 19. Suppl G. P. G13-G17.

566. Van Oorschott R.A., Gutowski S.J., Robinson S.L. HUlvITHOl: amplification, species specifity, population genetics, and forensicapplications />'Int. J. Leg. Med. ¡994. V. ¡07. P. ¡2¡-¡26.

567. Van Oorschott P.A., Gutowski S.J., Robinson S.L., Hedley JA., Andrew LR. HUMTH01 validation studies: effect of substrate, environment, and mixtures // J. Forensic Sei. 1996. V. 41. P. 142-145.

568. Vinasco J., Fraile A., Nieto A., Beraun Y., Pareja E., Ivfataran L., Martin J. Analysis of LMP and TAP polymorphisms by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorplhsm in rheumatoid arthritis // Ann. Rheum. Dis. 1998. 57. P. 33-37*.

569. Volz A., Fonatsch C., Ziegler A. Regional mapping of the gene for autosomal dominant spinocerebellar ataxia (SCA1) by localizing the closely linked D6S89 locus to 6p24.2—-p23.5 //Cytogenet. Cell. Genet. 1992. V. 60. P. 37-39.

570. Von Eggeling F., Michel S., Gunther M., Schimmel B., Claussen U. Determination of the origin of single nucleated cells in maternal circulation by means of random PCR and set of polymorphic length polymorphisms /7 Hum. Genet. 1997. V. 99. P. 266-270.

571. Von Willebrand E.A., Jürgens R. Ueber eine neue Bhiterkranlieit: die konstitutionelle Thrombopathie //Klin. Wschr. 1933. V. 12. P. 414-417.

572. Walsh P.S., Erlich H.A., Higuch; R. Preferential PCR amplification of alleles: mechanisms and solutions ii PCR Methods Appl. 1992. V. 4. P. 241-250.

573. Walsh P.S., Metzger D., Higuchi R. ChelexR 100 as a medium for simple extarction of DNA for PCR-basea typing from forensic material // BioTechniques. 199¡. V 10. P. 506-513.

574. Wang S., Sun C.E.,Walczak CA., Ziegle J.S., Kipps B.R., Goldin L.R., Diehl S.R. Evidence for a suspectibility locus for schizophrenia on chromosome 6pter-p22 /7 Nature Genet. 1995. V. 10. P. 41-46.

575. Almasy L., Badenhop R.B., Wilcken D.E. Genetic contribution of the endothelial constitutive nitric oxide synthase gene to plasma nitric oxide levels// Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 1997. V.I7. P. 3147-3153.

576. Wang X.L., Sim A.S., Badenhop R.E., McCredie R.M., Wilcken D.E. A smoking-dependent risk of coronary artery disease associated with a polymorphism of the endothelial nitric oxide synthase gene /7 Nat. Med. 1996. V. 2. P. 41-45.

577. Warhurton P.E., Willard H.F. Genomic analysis of sequence variation in tandemly repeated DNA. Evidence for localized homogenious sequence domain within arrays of alpha-satellite DNA. /7 J. Mol. Biol. 1990. V. 216. P. 3-16.

578. Ward R. Familial aggregation and genetic epidemiology of blood pressure /7 In; Hypertension: pathophysiology, diagnosis, and management / Laragh J.H., Brenner B.M., Eds./ Vol.1. New York: Raven Press. 1990. pp. 81100.

579. Warne D., Warkins C., Bodfish P., Nyberg K, Spurr N.K. Tetranucleotide repeat polymorphism at the human beta-actin related pseudogene 2 (ACTBP2) detected using the poivmrease chain reaction /7 Nucleic Acids Res. 1991. V. 19. P. 6980.

580. Watanahe G., Umetsu K., Suzuki T. On the origin of extra bands at MCT118 typing /7 Nippon Hoigaku Zaschi. 1996. V. 50. P. 10-16.

581. Watanabe G., Umetsu K,, Suzuki T. Determination of the HUMTH01 alleles by APLP method//Int. J. Leg. Med. 1999. V. 112. P. 134-135.

582. Watanahe G., Umetsu K. Yuasa /. Suzuki T. Simultaneous determination of STR polymorphism and a new nucleotide substitution in its flanking region at the CD4 locus /7 J. Forensic Sei. 1998. V. 43. P. 733-737.

583. Weber J. Iriformativeness of human (dC-dA)n (dG-dT)n polymorphisms /7 Genomics. 1990. V. 7. P. 524-530.

584. Weissenbach J. Genethon 1994 linkage map. Genetically mapped polymorphic STSs //Nature. 1994. V. 371. P. 1-56. Weissenbach J., Gyapay G., Dib C. A second-generation linkage map of the human genome /7 Nature. 1992. V. 359. P. 794-801.

585. Weiler P., Jeffreys .A.J., Wilson V, Blanchetot A. Organization of thehuman myoglobin gene /7 EM BO J. 1984. P. 439-446.

586. Werle E., Fiehn W., Hasslacher C. Apolipoprotein E polymorphism andrenal function in German type I and type 2 diabetic patients /7 Diabetes.

587. Care. 1998. V. 21. P. 994-998.

588. Wllite P.C., Hautamn A., KupaH M. Aldosterone synthase (CYP11B2) polymorphisms and cardiovascular function // J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 1999. V. 69. P. 409-412.

589. Wiegand P.,Budowle B., Rand S., Brinkmann B. Forensic validation of the STR systems SE33 and TC11 // Int. J. Leg. Med. 1993. V. 105. P. 315320.

590. Wiegand P., Kleiber M. DNA typing of epithelial ceils after stargulation H Int. J. Leg. Med. 1997. V. 110. P. 181-183

591. Winegraa A.I. Does a common mechanism induce the diverse complications of diabetes? //Diabetes. 1987. V. 36. P. 396-406.

592. Winkelmann B.R., Russ A.P., Nauck M., Klein B., Böhm B.O., Maier V, ZoizR., Matheis G., Wolf A., Wieland H., Gross W., Gallon DJ., Marz W

593. Angiotensinogen M235T poiymorphism is associated with plasma angiotensinogen and cardiovascular disease // Am. Heart. J. 1999. V. 137. P. 698-705.

594. Witt M., Erickson R.P. A rapid method for detection of Y-chromosomal DNA from dried blood speciments by the PCR /7 Hum. Genet. 1989. V. 82. P. 271-274.

595. Wonaeib S.A., Godin D.V. H Alterations in free radical tissue-defence mechanisms in sterptozonin-induced diabetes in rat. Effects of insulin treatment/7 Diabetes. 1987. V. 36. P. 1014-1018.

596. Wong K.K., Summers K.M., Bur stow D.J., West M.J. Angiotensin-converting enzyme and angiotensinogen genes in patterns of left ventricular hypertrophy and in diastolic dysfunction /7 Clin. Exp. Pharmacol.Physiol. 1995. V. 22. P. 438-440.

597. Wong K.K., Summers K.fvf., Burstow D.J., West M.J. Genetic variants of proteins from the renin angiotensin system are associated with pressure load cardiac hypertrophy // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 1996. 23. P. 587-590.

598. Wong Z., Royle N., Jeffreys A. A novel human DNA poiymorphism resulting from transfer of DNA from chromosome 6 to chromosome 16 /7 Genomics. 1990. V. 7. P. 222-234.

599. Wong Z., Wilson W., Pat el I., Povey S., Jeffreys A.J. Characterization of a panel of highly variable minisatellites cloned from human DNA // Ann. Hum. Genet. 1987. V. 51. P. 269-288.

600. Wordsworth P. Genes and arthritis /7 Br. Med. Bull. 1995. V. 51. P. 249266.

601. V/right J.M. Mutation at VNTRs: are minisatellites the evolutionary progeny of microsatellites // Genome. 1994. V. 37. P. 345-347.

602. Wyman A.R., White R. A highly polymorphic locus in human DNA /7 Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1980. V. 77. P. 6754-4758.

603. Xiang K., Zheng T., Sun I)., Li J. The relationship between angiotensin II type 1 receptor gene and coronary heart disease, hypertension and diabetes nieiliius in Chinese /7 Chung Hua I Hsueh I Chuan Hsueh Tsa Cnih. 1998. 15. P. 9-12.

604. Xu X., Rogus J. J., Terwedow H. A., Yang J., Wang Z., Chen C., Niu T., Wang B., Xu H., Weiss S., Schork N. J., Fang Z. An extreme-sib-pair genome scan for genes regulating blood pressure /7 Am. J. Hum. Genet. 1999. V. 64. P. 1694-1701.

605. Yanagawa T, Hidaka Y., Guimaraes V., Soliman M., DeGroot L.J. CTLA-4 gene polymorphism associated with Graves' disease in a Caucasian population /7 J. Clin. Endocrinol. Metab. 1995. 80. P. 41-45.

606. Yanagawa T,, Taniyama M., Enomolo S,, Gomi K, Maruyama H, Ban Y., Sanaa T. CTLA4 gene polymorphism confers susceptibility to Graves' disease in Japanese //Thyroid. 1997. V. 7. P. 843-846.

607. Yahashi I, Kario K., Shimada K., Matsuo M. Tlie 27-bp repeat polymorphism of the endothelial cell nitric oxide synthase gene and ischemic stroke in a Japanese population //Blood Coagul. Fibrinolysis. 1998. V. 9. P. 405-409.

608. Yamagata K, Oda N., Kaisaki P.J. Menzel S., Furuta H., Vaxillaire M. Mutation in the hepatocyte nuclear factor-1-alpha gene in maturity-onset diabetes mellitus (MODY3) //'Nature. 1996. V. 384. P. 455-457.

609. Yamaguchi H., Takizawa H., Shimasaki C. Frequency of the three STR loci (TPOX, CSF IPO, THOI), in a Japanese population determined using a Gene Print STR multiplex kit /7 Nippon Hoigaku Zasshi. 1996. V. 50. P. 163-167.

610. Yamamoto T., uchichi R., Kojima T., Kozcrwa H., Huang X.L., Tamaki K., Hatsumata Y. Maternal identification from sceletal remains of an infant kept by the alleged mother for 16 year with DNA typing /7 J. Forensic Sei. 1998. V. 43. P. 701-705.

611. I 1 • //TT"' • C ' 1 r\r\r\ A A T"\ 1 1 1Aeiectropnoresis // J. rorensic Sei. ivyy. v. 44. r. 10/-1 /u.

612. Yamauchi-Takihara K., Nakajima-Taniguchi C., Matsui II., Fujio Y., Kunisada K., Nagata S., Kishimoto T. Clinical implications of hypertrophic cardiomyopathy associated with mutations in the alpha-tropomyosin gene /7 Heart .1996. V. 76. P. 63-65.

613. Y an n., Harding J.J. Gîycation-induced inactivation and loss of antigenicity of catalase and superoxide dismutase /7 Biochem. J. 1997. V. 328. P. 599-605.

614. Yahashi Y, Kario K., Shimada K., Matsuo M. The 27-bp repeat polymorphism in intron 4 of the endothelial cell nitric oxide synthase gene and ischemic stroke in a Japanese population /7 Blood Coagul. Fibrinolysis. 1998. V. 9. P. 405-409.

615. Yanagawa T., Taniyama M., Enomoto S., G ownK., Maruyama H., Ban Y., Sarula T. CTLA4 gene polymorphism confers susceptibility to Graves' disease in Japanese /7 Thyroid. 1997. V. 7. P. 843-846.

616. Yanagawa T., Yoshida Y., Saito Y., Niimi H., Inoue /., Tahara K. CTLA-4 gene polymorphism associated with Graves' disease in a Caucasian population/7 J. Clin. Endocrinol. Metab. 1995. V. 80. P. 41-45.

617. Yanish-Perron C., Vieira J., Messing J. Improved M13 phage cloning vectors and host strains: nucleotide sequences of M13mpl8 and pUC19 vectors // Gene. 1985. V. 33. P. 103-119.

618. Yokota S., Asayama K. Proliferation of myocardial peroxisomes in experimental rat diabetes: a biochemical and immunocytochemical study // Virchows Arch .B. Cell. Pathol. Inch Mol. Pathol. 1992. V. 63. P. 43-49.

619. Yoshida H, Sekiguchi K., Mizuno N., Kalai K., Sakai /., Sato H., Seya S. The modified method of two-step differential extraction of sperm and vaginal epithelial cell DNA from vaginal fluid mixed with semen // Forensic Sci. Int. 1995. V. 72. P. 25-33.

620. Yoshii T. Takeda E,, Shimada K,5 Akivama K,, Ishiyama T. Structural polymorphism of ACTBP2 STR region //Nippon Hoigaki Zasshi. Î997. V. 51. P. 18-25.

621. Yassouridis A., Epplen J.T. On paternity determination from multiiocus DNA profiles H Electrophoresis. 1991. Y. 18. P. 221-226.

622. Yasujima M., Tsutaya S., Shoji M. Endothelial nitric oxide synthase gene polymorphism and liypertension /7 Rinsho Byori. 1998. V. 46. P. 11991204.

623. Yu H., Bowden D.W., Spray B.J., Rich S.S., Freedman B.I. Identification of human plasma kallikrein gene polymorphisms and evaluation of their role in end-stage renal disease // Hypertension. 1998. V. 31. P. 906-911.

624. Zago M.A. Interpopulational and intraracial genetic diversity of Amerindians as revealed by six variable number of tandem repeats /7 Hum. Hered. 1996. V. 46. P. 274-289.

625. Zamani M.G., Dehert M, Spaepen M, Hermans M, Marynen P., Cassiman J.-J., Peuskens J. Study of the possible association of HLA class 11, CD4, and CD3 polymorph!sins with schizophrenia /7 Am. J. Med. Genet. 1994. V. 15. P. 372-377.

626. Zee R.Y., Bennett C.L., Schroder A.P., Morris B.J. Frequencies of variantsf> 1 1 * 1 • rv , /"» 1 ♦ II /—* -I—I T\1or candidate genes m aiirerent groups or Hypertensives // umi. txp. Pnann. Physiol. 1994. V. 21. P. 925-930.

627. Zee R.Y., Lou Y.K., Griffiths L.R., Morris B.J. Association of a polymorphism of the angiotensin I-converting enzyme gene with essential hypertension /7 Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. V.184. P. 9-15.

628. Zehner R., Banner U. DYS19 and amelogenin in artificial blood stains with defined amounts of male and female cells /7 Int. J. Leg. Med. 1998. V. III. P. 340-342.

629. Zhang H, Agardh C.D., Agardh E. Retinal nitro blue tetrazolium staining and catalase activity in rat models of diabetes /7 Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 1996. V. 234. P. 324-330.

630. Zhang N., Yeung E.S. Genetic typing by capillary electrophoresis with the allele ladder as an absolute standard /7 Anal. Chem. 1996. V. 68. P. 29272931.

631. Zimmett P., mwehouse S., Kiss J. Ethnic variability in the plasma insulin response to oral glucose in Polynesian and Micronesian subjects /7 Diabetes. 1979. V. 29. P. 624-628.

632. Zupanic 1, Balazic J., Romel R. Analysis of nine short tandem repeat (STR) loci in the Slovenian population /7 Int. J. Leg. Med. 1998. V. 111. P. 248250.

633. Zujaczek S., Gorski B., Debniak T., Podolski J., Lubinski J., Krzysiolik Z., Iwanichka 7'., Sagan Z. VNTR-PCR in diagnosis of inherited Rb-geiie mitation /7 Klin. Oczna. 1994. V. 96. P. 290-292.

Информация о работе

Чистяков, Дмитрий Александрович
доктора биологических наук
Москва, 2000
ВАК 03.00.15

Диссертация

Полиморфные маркеры в геномной дактилоскопии и генетическом анализе ряда мультифакторных заболеваний - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы