Полиморфизм генов системы детоксикации и НLA II класса супружеской пары на этапах экстракорпорального оплодотворения

Липин, Михаил Александрович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Полиморфизм генов системы детоксикации и НLA II класса супружеской пары на этапах экстракорпорального оплодотворения
ВАК РФ 03.02.07, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Полиморфизм генов системы детоксикации и НLA II класса супружеской пары на этапах экстракорпорального оплодотворения"

На правах рукописи

005054952

Липин Михаил Александрович

ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ СИСТЕМЫ ДЕТОКСИКАЦИИ И НЬАII КЛАССА СУПРУЖЕСКОЙ ПАРЫ НА ЭТАПАХ ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОГО ОПЛОДОТВОРЕНИЯ

03.02.07 — генетика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 5 НОЯ 2012

Москва 2012

005054952

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научные руководители:

Фетисова Ирина Николаевна доктор медицинских наук,

ГБОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, профессор кафедры акушерства, гинекологии и медицинской генетики

Малышкина Анна Ивановна

Официальные оппоненты: Петрин Александр Николаевич

Щипков Валерий Петрович

доктор медицинских наук

ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, директор

доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет»

Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, профессор кафедры медицинской генетики

доктор медицинских наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов», и.о. зав. кафедрой биологии и общей генетики

Ведущая организация: ГУ «Научно-практический центр медицинской помощи детям с пороками развития черепно-лицевой области и врожденными заболеваниями нервной системы» Департамента здравоохранения г. Москвы

Защита состоится «#» 2012 г. в часов на заседании

диссертационного совета Д 212.203.05 при ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГБОУ ВПО «Российский университет Дружбы народов» по адресу: 117198, г.Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6.

Автореферат разослан « 2Ь » охть^рЬ 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент

Гигани Ольга Борисовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования

Актуальность проблемы обусловлена ухудшающимися показателями репродуктивного здоровья населения и увеличением процента бесплодных супружеских пар, нуждающихся во вспомогательных репродуктивных технологиях (ВРТ). Несмотря на достигнутые в последние годы значительные успехи в развитии методов ВРТ, основу которых составляют экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) и перенос эмбриона в полость матки (ПЭ), эффективность методик остается недостаточно высокой. По данным разных авторов частота наступления беременности после ЭКО и ПЭ колеблется от 20% до 40%. Исход каждого этапа программы экстракорпорального оплодотворения зависит от множества средовых и наследственных факторов. Генотипы супругов в определенной степени определяют ход гаметогенеза, качество половых клеток и эмбрионов, процесс имплантации и плаценгации, все стадии эмбриогенеза. Однако данных о значении полиморфных вариантов генов разных систем в реализации ВРТ в доступной литературе крайне мало. Изучение полиморфизма генов системы детоксикации и главного комплекса гистосовместимости в супружеских парах, участвующих в программе ЭКО и ПЭ, позволит уточнить механизмы, определяющие неудачи на разных этапах процедуры, и разработать прогностические критерии различных исходов программы ЭКО, что будет способствовать более тщательному отбору семей для лечения бесплодия с помощью применения вспомогательных репродуктивных технологий.

Цель исследования Изучить полиморфизм генов системы детоксикации и главного комплекса гистосовместимости НЬА II класса супружеских пар, участвующих в программе экстракорпорального оплодотворения в связи с трубно-перитонеальным бесплодием, и оценить их значение на этапе культивирования эмбрионов и связанных с ним процедурах получения гамет, оплодотворения и переноса в полость матки.

Задачи исследования. Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи: 1. Изучить особенности полиморфизма генов системы детоксикации (С8ТМ1, (75777) и главного комплекса гистосовместимости НЬА II класса (£>ЙВ/, БдА1,

DQB1) в супружеских парах, участвующих в программе ЭКО и ПЭ в связи с женским трубно-перитонеальным бесплодием.

2. Изучить особенности полиморфизма генов системы детоксикации (GSTM1, GSTT1) и комплекса HLA II класса (DRB1, DQA1, DQB1) класса в группах женщин с различным ответом на контролируемую овариальную стимуляцию.

3. Изучить особенности полиморфизма генов системы детоксикации (GSTM1, GSTT1) и комплекса HLA II класса (DRB1, DQA1, DQB1) в супружеских парах, у которых в ходе программы ЭКО получены эмбрионы различного качества.

4. Изучить особенности полиморфизма генов системы детоксикации (GSTM1, GSTT1) и комплекса HLA II класса (DRB1, DQA1, DQB1) в группах женщин с наличием и отсутствием беременности после переноса эмбриона в полость матки.

Научная новизна исследования

Впервые выявлены особенности полиморфизма генов семейства глутатион-S-трансфераз и главного комплекса гистосовместимости у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием: установлено накопление в генотипе пациенток низкофункционального варианта гена GSTT1 при отсутствии делеции в гене GSTM1, аллеля HLA-DRB1 * 10, генотипа HLA-DRB1*01/* 11.

Впервые выявлена связь между особенностями генотипа женщины в генах главного комплекса гистосовместимости и качеством овариального ответа. Показано, что присутствие аллеля HLA-DQA1*0201 повышает риск снижения овариального ответа. Доказано, что носительство аллеля HLA-DQB1*030\ ассоциируется с увеличением шанса адекватного овариального ответа на фоне нормального фолликулярного резерва. Роль генов семейства глутатион-8-трансфераз при различных исходах стимуляции суперовуляции не подтверждена.

Впервые показано достоверное увеличение частоты встречаемости низкофункционального аллеля гена GSTM1 в генотипе женщин из пар, у которых получены эмбрионы преимущественно низкого качества. Установлена ассоциация между присутствием в генотипе женщины аллелей HLA-DRB1* 13, HLA-DQB1*Об, HLA-DRB1*\1 и HLA-DQB1*0201 и повышением шанса получения эмбрионов высокого качества. Роль генотипа мужчины по изученным группам генов в контроле качества эмбрионов не подтверждена.

Впервые показано, что присутствие в генотипе женщины аллеля НЬА-ОШ1* 15 снижает риск неудачного исхода переноса эмбриона в полость матки (отсутствие наступления беременности). Наличие у женщины аллеля Н1Л-0(2В1*0501 и гаплотипа НЬА-ООА1*0\01 /2-0()В1 *0501/2 повышает риск неудачного исхода переноса эмбриона в полость матки.

Практическая значимость исследования Полученные результаты указывают на целесообразность исследования особенностей аллельного полиморфизма генов семейства глутатион-8-трансфераз и системы НЬА II класса у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием, планирующих проведение процедуры ЭКО и ПЭ.

Анализ аллельного полиморфизма генов комплекса НЬА II класса И0А1, Б()В]) женщины, направляемой на прохождение программы ЭКО, можно рекомендовать в качестве прогностического теста для оценки качества культивируемых эмбрионов, а также для оценки риска неудачного исхода переноса эмбриона в полость матки, определяемого по факту отсутствия наступления беременности. Разработанные способы прогнозирования эффективности этапов ЭКО предлагаются к применению в практической работе центров ВРТ.

Основные положения, выносимые на защиту Гены главного комплекса гистосовместимости у женщин причастны к формированию сниженного фолликулярного резерва и качеству овариального ответа при индукции суперовуляции.

Качество эмбрионов, получаемых в ходе программы экстракорпорального оплодотворения, ассоциировано с особенностями генотипа женщины в генах семейства глутатион-8-трансфераз и комплекса НЬА II класса.

Исходы процедуры переноса эмбриона в полость матки (факт наступления беременности) ассоциированы с особенностями генотипа женщины в генах комплекса НЬА II класса.

Результаты анализа полиморфизма генов НЬА II класса женщины могут использоваться в прогнозировании качества культивируемых эмбрионов и исхода процедуры ПЭ.

Внедрение результатов исследования

На основании результатов исследования поданы заявки на получение патентов РФ на изобретения: «Способ прогнозирования качества эмбрионов в программе экстракорпорального оплодотворения» (приоритетная справка № 2011139006 от 26.09.2011, положительное решение от 20.09.2012) и «Способ прогнозирования исхода экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов» (приоритетная справка № 2011139004 от 26.09.2011, положительное решение от 14.09.2012). Способы прошли предрегистрационные испытания в центре планирования семьи и репродукции ФГБУ «Ивановский НИИ МиД им. В.Н. Городкова» Минздравсоцразвития России.

Апробация результатов исследования

Материалы диссертации представлены и доложены на конференции сотрудников ФГБУ «Ивановского НИИ материнства и детства им. В.Н.Городкова» (Иваново, 2012 г.); на VI Российском съезде медицинских генетиков (Ростов-на-Дону, 2010); на Республиканской конференции «Иммунология репродукции. Теоретические и клинические аспекты» (Иваново, 2012); на научно-практической конференции молодых учёных ФГБУ «Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н.Городкова» (Иваново, 2012 г.), на научно-практических конференциях студентов и молодых учёных Ивановской государственной медицинской академии «Неделя науки» (2009, 2010, 2011,2012 гг.).

Публикации результатов исследования

По теме диссертации опубликовано 12 печатных работ, из них 3 в журналах, включенных в перечень изданий, рекомендованных ВАК РФ.

Личное участие автора

Диссертационная работа представляет собой самостоятельный труд автора. Автор участвовал в клиническом ведении больных, включая обследование и клиническое динамическое наблюдение. Автором лично выполнено молекулярно-генетическое обследование пациентов, статистическая обработка полученных результатов.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, 6 глав собственных исследований, обсуждения

результатов, выводов и практических рекомендаций. Библиографический список использованной литературы включает 255 источников (33 отечественных и 222 иностранных). Текст иллюстрирован 24 таблицами 2 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования

Работа выполнена на базе консультативно-диагностической поликлиники, центра планирования семьи и репродукции, лаборатории клинической биохимии и генетики ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (г. Иваново), директор - д.м.н. А.И. Малышкина.

Основную группу составили 141 супружеская пара, направленная на прохождение программы ЭКО и ПЭ в связи с женским бесплодием, обусловленным непроходимостью или отсутствием маточных труб;

Контрольную группу составили 57 супружеских пар, имеющих одного и более здорового ребенка при указании на нормально протекавшие беременность и роды (контрольная группа). В анамнезе у женщин контрольной группы не было случаев невынашивания беременности, перинатальной смертности, рождения детей с врожденными пороками развития, периодов бесплодия, указаний на применение методов ВРТ.

Для выполнения поставленных задач исследование было разделено на четыре

этапа.

На первом этапе проводилось молекулярно-генетическое обследование супружеских пар, участвующих в программе ЭКО и ПЭ в связи с женским трубно-перитонеальным бесплодием. Отбор супружеских пар проводился на основании результатов комплексного общеклинического, биохимического, иммунологического, патоморфологического, инструментального, андрологического обследования пациентов с нарушенной репродуктивной функцией. С целью исключения хромосомной патологии проводилось цитогенетическое обследование супружеских пар.

На втором этапе работы проводился анализ полиморфизма генов семейства глутатион-8-трансфераз и HLA II класса у бесплодных женщин в подгруппах,

сформированных в соответствии с типом овариального ответа при индукции суперовуляции. Подгруппу А-1 составили женщины со сниженным овариальным ответом (3 и менее ооцита, так называемый «бедный» ответ), подгруппу А-2 - с умеренным овариальным ответом (4-7 ооцитов), подгруппу А-3 - с хорошим овариальным ответом (8-11 ооцитов), подгруппу А-4 - с максимальным овариальным ответом (12 и более ооцитов).

На третьем этапе работы проводился анализ полиморфизма генов семейства глутатион-8-трансфераз и HLA II класса в супружеских парах, у которых в процессе оплодотворения in vitro и культивирования эмбрионов были получены эмбрионы различного качества.

Изначально супружеские пары основной группы были подразделены на четыре подгруппы на основании соотношения полученных эмбрионов высокого и низкого качества по морфологическим критериям (учитывалось наличие фрагментации и вакуолизации бластомеров). Подгруппу В-1 составили супружеские пары, у которых было получено более 75,0% эмбрионов высокого качества; подгруппу В-2 - пары, у которых число эмбрионов высокого качества составляло более 50,0%, но не превышало 75,0%; критерием включения в подгруппу В-3 было получение свыше 25,0%, но более 50,0% эмбрионов высокого качества; подгруппу В-4 составляли пары с минимальным количеством эмбрионов высокого качества (0,0%-25,0% включительно).

Кроме того супружеские пары основной группы были подразделены на четыре подгруппы на основании соотношения полученных эмбрионов с высокой и низкой скоростью дробления. Подгруппу С-1 составили супружеские пары, у которых было получено более 75,0% эмбрионов с высокой скоростью дробления; подгруппу С-2 -пары, у которых число быстро дробившихся эмбрионов составляло более 50,0%, но не превышало 75,0%; критерием включения в подгруппу С-3 было получение свыше 25,0%, но более 50,0% эмбрионов высокой скорости дробления; подгруппу С-4 составляли пары с минимальным количеством быстро дробящихся эмбрионов (0,0%-25,0% включительно).

Далее бесплодные пары основной группы были подразделены на две подгруппы в соответствии с качеством полученных эмбрионов, которое оценивалось по двум составляющим: морфологии и скорости дробления. Подгруппа D-1 включала

семьи, в которых удалось получить один и более эмбрионов высокого качества по морфологическим критериям и скорости дробления; в подгруппу D-2 входили пары, у которых ни один из полученных эмбрионов не соответствовал высокой оценке качества одновременно по двум составляющим.

На четвертом этапе работы проводился анализ полиморфизма генов семейства глутатион-8-трансфераз и HLA II класса у женщин основной группы в подгруппах, сформированных по факту наступления (подгруппа Е-1) или отсутствия (подгруппа Е-2) беременности после переноса эмбриона в полость матки.

Цитогенетическое исследование. Препараты метафазных хромосом получали из лимфоцитов периферической крови, культивируемых в условиях in vitro, в соответствии со стандартной процедурой [Hungerford D.A., 1965]. G-окраску хромосом проводили по общепринятому методу Seabright (1971) в модификации [Захаров А.Ф., 1982]. Отбор метафазных пластинок и анализ хромосом проводили по общепринятым критериям [Кулешов Н.П., 1979]. Для выявления структурного гетерохроматина использовали модифицированную методику Arrighi F.E and Hsu Т.С. (1971). Результаты цитогенетического исследования приводились согласно Международной системе номенклатуры цитогенетики человека (ISCN, 2005).

Молекулярно-генетнческое исследование. Кровь для проведения молекулярно-генетнческого исследования получали методом венепункции в одноразовые пластиковые пробирки с консервантом. В качестве консерванта использовали 0,5М раствор ЭДТА в соотношении консервант: кровь - 1:10. Выделение ДНК из лейкоцитов периферической крови выполняли с помощью набора реактивов для выделения DLAtom DNA Prep 100 по протоколу производителя (Изоген, Россия). На полученных образцах ДНК проводили аллель-специфическую ПЦР генов семейства глутатион-8-трансфераз (GSTM1, GSTT1) и HLA II класса (DRBJ, DQA1, DQB1). Продукты амплификации анализировали в акриламид-бисакриламидном геле с окраской амплификатов бромистым этидием и визуализацией в проходящем ультрафиолетовом свете.

Статистический анализ полученных данных проводился на ПК с использованием прикладных программ Statistica 6.0 фирмы StatSoft Inc. и Microsoft Excel 2003. Для сравнения распределения частот аллелей, генотипов, гаплотипов и их сочетаний использовался критерий хи-квадрат Пирсона и тест Фишера. Для

выявления связи между выраженностью овариального ответа при индукции суперовуляции и частотой носительства определенного аллеля использовался корреляционный анализ с оценкой непараметрического коэффициента ранговой корреляции Кендалла т. За достоверный принимали 95%-ный уровень значимости (р<0,05).

Результаты исследования и их обсуждение

Все обследованные супружеские пары находились в активном репродуктивном возрасте.

По сравнению с контрольной группой, в которой все женщины принадлежали к категории служащих, в основной группе 15,6% женщин были заняты на производстве (р < 0,01). В 4,3% случаев по роду своей профессиональной деятельности пациентки основной группы подвергались воздействию неблагоприятных факторов при отсутствии таковых в контроле (р > 0,05).

У пациенток основной группы по сравнению с контрольной достоверно чаще в анамнезе встречались указания на детские инфекции (31,9% и 14,0% в основной группе и в контроле соответственно, р<0,05), на аппендэктомии (16,3% и 5,3% соответственно, р < 0,05); воспалительные заболевания органов малого таза (87,2% и 5,3% соответственно, р < 0,01).

Соматическая патология у женщин с бесплодием отмечалась несколько чаще, чем у женщин контрольной группы (43,3% и 38,6% соответственно, р>0,05). У женщин обеих групп наиболее часто отмечались заболевания мочевыделительной системы, органов дыхания, желудочно-кишечного тракта, хронический тонзиллит.

Характер становления менструальной функции у женщин в обследуемых группах не имел значимых отличий. Нарушение менструальной функции (НМФ) среди пациенток основной группы наблюдалось несколько чаще, чем в контрольной группе (12,8% и 5,3% соответственно, р>0,05). НМФ по типу олигоменореи отмечалось в 2,5% случаев в основной группе при отсутствии в контроле, альгодисменорея в основной и контрольной группах имела место соответственно в 7,1% и 5,3% случаев, меноррагии - в 8,5% и 5,3% случаев соответственно (р>0,05 для всех типов НМФ).

Средний возраст начала половой жизни у женщин основной и контрольной группы составил соответственно 18,9 ± 0,6 и 20,5 ± 0,6 лет. На раннее начало половбй жизни (до 18 лет) указали 34 женщины с бесплодием (24,1%). В контрольной группе у всех обследованных возраст начала половой жизни приходился на 18 лет и старше.

Гинекологические заболевания в анамнезе бесплодных женщин по сравнению с женщинами с нормальной репродукцией встречались чаще с высокой степенью достоверности (100,0% и 19,3% соответственно, р < 0,01). Значительно превалировали указания на острый и хронический аднексит (87,2% и 5,3% соответственно, р < 0,01), эктопическую беременность (46,1% и 0,0% соответственно, р < 0,01), спаечный процесс в малом газу (42,6% и 0,0% соответственно, р < 0,01). Несколько чаще у бесплодных женщин, чем у женщин с ненарушенной репродукцией в анамнезе отмечались заболевания шейки матки (8,5% и 5,3% соответственно, р > 0,05) и миома матки (7,1% и 3,5% соответственно, р>0,05). Указания на наружный генитальный эндометриоз (НГЭ) I-II степени в анамнезе было у 18 бесплодных женщин (12,8%) при отсутствии таковых в контроле (р < 0,05). Перед вступлением в программу ЭКО очаги эндометриоза у этих женщин были санированы.

Средняя продолжительность бесплодия у женщин основной группы составляла 8,4 ± 1,6 лет. Первичное и вторичное бесплодие имело место соответственно у 25,5% и 75,5% женщин. Медицинские аборты в анамнезе были у 32,6% и 57,9% женщин основной и контрольной групп соответственно. Одни роды в анамнезе были у 8,5% женщин основной группы.

Наличие инфекционного фактора выявлено у 24,8% женщин с бесплодием. На момент обследования у всех женщин с бесплодием определялись только иммуноглобулины класса G (IgG), что свидетельствовало об отсутствии острого инфекционного процесса. Среди возбудителей инфекционного процесса выявлялись: вирус простого герпеса (ВПГ) I, II типа (11,3%), Cytomegalovirus (5,6%), Ureaplasma urealyticum (4,2%), Chlamydia trachomatis (8,5%), Candida albicans (1,4%), Mycoplasma genitalium (2,8%) и Trichomonas vaginalis (1,4%).

На основании результатов обследования по тестам функциональной диагностики, гормонального и ультразвукового исследований, морфологического исследования эндометрия нарушение менструальной функции установлено у 19,1% пациенток с бесплодием. НМФ по типу недостаточности лютеиновой фазы цикла

отмечалось у 6 пациенток с нарушенной репродукцией (4,3%)- Гиперпролактинемия была выявлена у 12 женщин с бесплодием (8,5%). У женщин основной группы в большом количестве отмечалась гиперандрогения (24,1%). Увеличение содержания сывороточного пролактина в сочетании с гиперандрогенией было отмечено у 6 бесплодных женщин (4,3%). На момент вступления в программу ЭКО гормональные нарушения у женщин основной группы были скорректированы.

Суммируя полученные в настоящем исследовании данные, нужно отметить, что пациентки основной группы были несколько моложе женщин контрольной группы, в ряде случаев имели более тяжелые условия труда и по роду своей профессиональной деятельности подвергались действию неблагоприятных факторов, по данным анамнеза чаще переносили детские инфекции, аппендэктомии. Группу бесплодных женщин отличала высокая частота гинекологической патологии, связанной с воспалительными процессами в органах малого таза, и наличие инфекционного фактора в патогенезе заболеваний репродуктивной системы.

У мужчин обеих групп отягощенность анамнеза, частота и спектр соматической патологии были сопоставимы. В основной группе мужчины чаще, чем в контрольной группе занимались физическим трудом со средними и тяжелыми нагрузками (73% и 36,8% соответственно, р < 0,05), в 3,5% случаев были отмечены профессиональные вредности при отсутствии таковых в контроле.

Нормозооспермия у мужчин основной группы имела место в 39,0% случаев. Наиболее распространенным типом патозооспермии у пациентов основной группы являлась астенозооспермия (60,3%), в 3,5% случаев имела место олигозооспермия I степени. В 2,8% случаев олигозооспермия сочеталась с астенозооспермией; в 5,7% случаев у больных наблюдалось сочетание нарушения подвижности и формы гамет. Повышенная агглютинация сперматозоидов имела место у 4 пациентов, у всех 4 мужчин она сочеталась с астенозооспермией. Тяжелых нарушений сперматогенеза не было обнаружено ни у одного обследованного.

Суммируя полученные данные, можно сделать вывод, что наиболее значимыми факторами риска нарушения репродуктивной функции у мужчин являются инфекционно-воспалительные заболевания и действие неблагоприятных средовых факторов, связанных с профессиональной деятельностью.

Анализ сочетания нарушения фертильности у женщины и мужчины в паре показал, что в большинстве случаев в семьях с бесплодием нарушение репродуктивной функции имеется у обоих супругов. Так, сочетанное наличие «женского» и «мужского» факторов определялось в 61,0% случаев. Нарушение фертильности только у женщины имело место в 39,0% случаев.

Все обследуемые имели нормальный кариотип.

У женщин из бесплодных семей не было отмечено достоверных отличий от здоровой выборки в характере распределения отдельных аллелей и генотипов в генах семейства глугатион-8-трансфераз. Однако у пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием достоверно чаще, чем у здоровых женщин, наблюдалось сочетание генотипа 0/0 и отсутствия делеции в гене Сл$ТМ1 (10,6% и 1,8%

соответственно, р== 0,043, ОШ = 4,5 (1,1 - 18,9)). Данные литературы о роли генов семейства глутатион-Б-трансфераз при нарушении репродуктивной функции у женщин противоречивы. Результаты настоящего исследования подтверждают мнение ряда авторов о возможной ассоциации между носительством женщиной низкофункциональных аллелей в генах глутатион-8-трансфераз и нарушением её репродуктивной функции.

У мужчин из бесплодных супружеских пар отмечалось увеличение частоты встречаемости сочетания генотипов С,БТМ10Ю и СБПЮЮ по сравнению со здоровыми мужчинами, однако разница не достигала уровня статистической значимости (13,0% и 5,4% соответственно, р = 0,195, ОШ = 2,3 (0,8 - 6,9)). Полученные нами результаты не противоречат данными предыдущих исследований, подтверждающих неслучайность ассоциации функционально неполноценных аллелей генов системы детоксикации с развитием патологии репродукции в супружеской паре.

У женщин с трубно-перитонеальным бесплодием достоверно чаще, чем у здоровых женщин встречался аллель НЬА-ОКВ1* 10 (4,7% и 0,0% соответственно, р = 0,024 ОШ= 10,8(1,4-84,9)), в то же время частота встречаемости аллеля НЬА-Б(2В1*0302 была значимо ниже, чем в контроле (4,4% и 10,6% соответственно, р = 0,031 ОШ = 0,4 (0,2-0,9)).

Анализ частот генотипов показал, что среди пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием по сравнению со здоровыми женщинами достоверно

чаще встречается генотип НЬЛ-ПЯВ1*01/* 11 (10,9% и 1,9% соответственно, р = 0,047, ОШ = 4,3 (1,0- 18,5)).

Перераспределение частоты встречаемости определенных аллелей и генотипов по генам НЬА II класса у женщин с трубно-перитонеальным фактором бесплодия, по-видимому, связано с особенностями иммунной реактивности. В литературе имеются указания на то, что носительство определенных аллелей и генотипов по генам комплекса НЬА ассоциируется с изменением иммунного статуса со смещением в сторону меньшей или наоборот большей выраженности реакции иммунокомпетентных клеток и формированием соответственно вялотекущего воспалительного процесса или сильного ответа с преобладанием аутоиммунного компонента. Возможно, накопление «функционально слабых» аллелей НЬЛ-ОИВ1* 10 приводит к развитию хронического воспалительного процесса в ответ на инфекционное поражение органов малого таза с последующим формированием спаечного процесса, непроходимости маточных труб и бесплодия.

С другой стороны, повышение частоты встречаемости генотипа Н1Л-£>ЛВ7*01/*11, включающего аллель Н1А-ВШ\*01, ассоциированного с развитием ряда заболеваний с аутоиммунным компонентом, может быть связано с вовлечением брюшины и органов малого таза в патологический процесс даже при отсутствии значимого патогенного инфекционного фактора, например при хирургических манипуляциях в полости малого таза. Таким образом, группа женщин-носительниц генотипа ЖА-ОЛВ1* 01/* 11 может быть угрожаема по развитию трубно-перитонеального бесплодия после проведения полостных операций или иных вмешательств в области малого таза.

Достоверных различий в частотах совпадений по локусам III,Л II класса у супругов основной и контрольной групп в нашем исследовании выявлено не было.

У женщин основной группы в результате контролируемой овариальной стимуляции в среднем сформировалось 9,2 ± 1,1 и было пунктировано 9,1 ± 1,1 преовуляторных фолликулов. При этом было получено 7,3 ± 1,0 ооцитов. По результатам микроскопического анализа 5,3 ± 0,7 (74,5 ± 3,7%) ооцитов получили положительную оценку по критериям зрелости и качества и использовались в дальнейшем в процедуре ЭКО.

Так называемый «бедный» овариальный ответ имел место у 34 женщин (25,0%), которые составили подгруппу А-1; подгруппу А-2 составила 51 женщина (37,5%) с умеренным овариальным ответом; хороший овариальный ответ имел место у 27 пациенток (19,9%) - подгруппа А-3; подгруппу А-4 составили 24 женщины (17,6%) с максимальным овариальным ответом. Средний возраст, анамнестические данные и результаты клинического обследования женщин всех четырех подгрупп были сопоставимы.

Достоверно значимых отличий в частотах распределения аллелей и генотипов в генах семейства глутатион-Я-грансфераз в подгруппах бесплодных женщин с различным овариальным ответом на индукцию суперовуляции при сравнении их между собой и с контрольной группой в настоящем исследовании получено не было.

Анализ полиморфизма генов главного комплекса гистосовместимости, проведенный в пределах сформированных подгрупп показал следующее.

У женщин со сниженным и умеренным овариальным ответом (подгруппы А-1 и А-2) достоверно чаще, чем у пациенток с максимальным овариальным ответом (подгруппы А-4), в генотипе присутствовал аллель ИЬА-ООА! *020\ (16,2% и 2,1% в подгруппах А-1 и А-4 соответственно, р=0,013, ОШ = 6,3 (1,5 - 27.7); 18,6% и 2,1% в подгруппах А-2 и А-4 соответственно, р=0,003, ОШ = 7,4 (1,8 - 30,3)).

Сравнение первой подгруппы женщин с контролем показало значимое повышение частоты встречаемости аллеля ЖА-ОЯВ1* 10 у пациенток с «бедным» овариальным ответом (7,4% и 0,0% в подгруппе А-1 и контроле соответственно, р = 0,005, ОШ=18,1 (2,4-136,8)). Дополнительно проведенный корреляционный анализ Кендалла выявил наличие обратной статистически достоверной сильной связи между частотой встречаемости в генотипе женщины аллеля ША-1ЖВ1* 10 с одной стороны и количеством полученных при индукции суперовуляции ооцитов с другой (коэффициент корреляции т = -0,95, р=0,042).

Вместе с тем, у женщин контрольной группы достоверно чаще, чем у пациенток подгрупп А-1 и А-2 основной группы в генотипе отмечается присутствие аллеля НЬА-0()В]*03 (41,3%, 22,1% и 22,5% в контрольной группе, подгруппе А-1 и А-2 соответственно, р = 0,009 для подгруппы А-1, р = 0,004 для подгруппы А-2). В результате проведенного корреляционного анализа Кендалла была показана прямая

достоверная корреляционная связь между частотой встречаемости аллеля НЬА-0()В1*03 и овариальным ответом (коэффициент корреляции т=0,95, р=0,042).

Установлена повышенная частота аллеля НЬА-В<2В1*0301 у пациенток с максимальным ответом яичников на стимуляцию суперовуляции по сравнению с женщинами с умеренным овариальным ответом (25,0% и 11,8% соответственно, р = 0,008), а также у женщин контрольной группы по сравнению с бесплодными пациентками с умеренным овариальным ответом (24,0% и 11,8% соответственно, р = 0,022).

Более высокая частота встречаемости аллеля НЬА-0<2А1*0201 и наоборот пониженная НМ-0()В1*0301 при слабом ответе яичников на стимуляцию может быть обусловлена особенностями иммунного статуса женщин-носительниц указанных аллелей. Так, имеются указания, что на выраженность овариального ответа могут влиять циркулирующие ингибиторы связывания ФСГ и антитела к ФСГ. Учитывая наличие предрасположенности к развитию заболеваний с аутоиммунным компонентом патогенеза у носителей аллеля НЬА-0£>А1*0201, можно предположить возможность формирования у этих пациентов клона иммунокомпетентных клеток, синтезирующих антитела к ФСГ и его рецепторам. Последнее обусловливает отсутствие адекватного ответа на индукцию суперовуляции при использовании стандартных дозировок препаратов. Таким образом, исследование антител к ФСГ у женщин-носительниц аллеля НМ-В()А1*0201 может стать эффективным методом при планировании протокола стимуляции. Наоборот, наличие в генотипе аллеля НЬА-0257*0301 имеет протективное значение в отношении развития аутоиммунных процессов. Вероятно, это обуславливает снижение риска образования антител к ФСГ у пациенток-носительниц указанного аллеля.

Кроме патологического изменения иммунореактивности с выработкой антител к гормонам и их рецепторам причиной сниженного овариального ответа может быть истощенный фолликлярный резерв. Последнее может быть следствием перенесенного воспалительного процесса с выраженным аутоиммунным компонентом как следствие инфекции или оперативного вмешательства в области малого таза.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о возможной ассоциации между выявленными особенностями полиморфизма генов системы НЬА II класса и состоянием фолликулогенеза. Установленные особенности генотипа женщин с

нормальным и сниженным овариальным ответом могут использоваться как генетические маркеры предрасположенности к формированию различного потенциала для последующего эмбрионального развития. Раннее генетическое тестирование пациенток, нуждающихся в лечении бесплодия с помощью ВРТ, позволит более взвешенно решать вопрос о возможное™ и целесообразности применения данных технологий.

В общей сложности для проведения 136 процедур оплодотворения in vitro, проанализированных в нашем исследовании, было отобрано 705 зрелых ооцитов, имевших высокое качество в соответствии с действующими стандартами. 267 ооцитов не соответствовали критериям зрелости (МИ) и/или морфологии и не участвовали в оплодотворении. Доля яйцеклеток, пригодных для оплодотворения, таким образом, составила 72,5% (705 из 972).

Стандартный метод ЭКО использовался в 45,6% (62 из 136) процедур. ICSI применяли в 54,4% (74 из 136) случаев. Всего в результате оплодотворения in vitro сформировалось 542 зиготы. Частота оплодотворения соответственно составила 76,9% (542 из 705). Нормальное оплодотворение с формированием двух пронуклеусов имело место в 92,6% (502) случаев. 40 зигот (5,7%) имели аномальное число пронуклеусов (полиплоидия) и были исключены из последующего статистического анализа. 494 зиготы (98,4%) вступили в фазу дробления.

Высокое качество по морфологическим критериям имели 69,4% (343 из 494) эмбрионов, эмбрионы низкого качества составляли 30,6% (151 из 494) от общего числа дробящихся зародышей.

Всего эмбрионы удалось получить у 129 супружеских пар. В зависимости от соотношения количества полученных эмбрионов высокого и низкого качества в соответствии с морфологическими критериями (учитывалось наличие фрагментации и вакуолизации бластомеров) супружеские пары основной группы были разделены на четыре подгруппы.

Более 75,0% эмбрионов высокого качества было получено у 76 семей (58,9%, подгруппа В-1), вторую подгруппу (В-2) составили 22 пары (17,1%), у которых количество эмбрионов высокого качества было больше 50,0%, но не превышало 75,0%; третья подгруппа (В-3) включала 17 семей (13,2%), где высокое качество имели более 25,0% и в то же время не более 50,0% эмбрионов; четвертую подгруппу

(В-4) составили 14 пар (10,9%) с минимальным количеством эмбрионов высокого качества (от 0,0% до 25,0% включительно).

Нами был проведен анализ результатов культивирования с учетом скорости дробления эмбрионов. Было обнаружено, что раннее начало и высокая скорость дробления отмечалась у 140 эмбрионов (28,3%).

У 13 пар (10,1%) более 75,0% эмбрионов имели высокую скорость дробления (подгруппа С-1), у 7 пар (5,4%) количество эмбрионов, имевших высокую скорость дробления, было больше 50,0%, но не превышало 75,0% (подгруппа С-2); у 24 пар (18,6%) количество эмбрионов, имевших высокую скорость дробления, было больше 25,0%, но не превышало 50,0% (подгруппа С-3); 85 пар (65,9%) имели не более 25,0% эмбрионов с высокой скоростью дробления (подгруппа С-4).

Также была проведена оценка качества эмбрионов одновременно по морфологическим критериям и скорости дробления бластомеров. Всего эмбрионов правильной морфологии и высокой скорости дробления было получено 23,5% (116 из 494).

У 51 семьи имело место наличие одного и более эмбрионов высокого качества (подгруппа 0-1); у 78 (60,5%) супружеских пар не удалось получить ни одного эмбриона высокого качества по морфологии и скорости дробления одновременно (подгруппа 0-2).

При сравнительном анализе данных сформированных подгрупп с учетом возраста пациентов, особенностей анамнестических и клинических данных статистически значимых различий выявлено не было.

Анализ полиморфизма генов системы детоксикации не выявил достоверных отличий в частотах низкофункционального аллеля гена СЗТА// у женщин контрольной группы и женщин из супружеских пар, у которых было получено более 50% эмбрионов высокого качества по морфологическим критериям (44,7%, 45,5% и 49,1% в подгруппах В-1, В-2 и контроле соответственно). Некоторое повышение частоты встречаемости делеционного аллеля ОЯТМ1 было отмечено у женщин из семей, в которых были получены преимущественно эмбрионы низкого качества (58,8%, 57,1% и 49,1% в подгруппах В-3, В-4 и контроле соответственно). Сравнение частот встречаемости аллелей «дикого» типа и делеционных вариантов по гену СЯТТ1 не выявило существенных отличий между сформированными подгруппами и

контролем (19,7%, 18,2%, 17,6% и 21,4% и 14,5% в подгруппах В-1, В-2, В-3, В-4 и контроле соответственно).

Исследование частоты встречаемости аллелей и генотипов генов семейства глутатион-8-трансфераз не выявило наличия статистически значимых различий между подгруппами основной группы, сформированными с учетом скорости дробления эмбрионов.

Анализ полиморфизма генов детоксикации в подгруппах, сформированных с учетом скорости дробления и морфологии эмбрионов, показал, что у женщин из пар, у которых не удалось получить ни одного эмбриона высокого качества достоверно чаще, чем у женщин из семей, где были получены эмбрионы высокого качества, в генотипе присутствует низкофункциональный аллель вБТМ! (58,8% и 39,3% в подгруппах 0-2 и 0-1 соответственно, р = 0,036, ОШ =2,2 (1,1 - 4,3)).

Таким образом, носительство женщиной делеционного полиморфизма гена (75Ш/, может быть ассоциировано со снижением качества эмбриона. Последнее утверждение требует подтверждения на основании результатов детального изучения роли перекисного окисления на этапах гаметогенеза, оплодотворения и дробления.

Частоты встречаемости аллелей и генотипов по генам семейства глутатион-8-трансфераз у мужчин контрольной группы и сформированных подгрупп основной группы были сопоставимы. Таким образом, в нашем исследовании не было подтверждено причастности полиморфных вариантов генов системы детоксикации отцовского генотипа к качеству получаемых эмбрионов.

Следует отметить, что факторы, определяющие качество эмбриона по морфологическим критериям и скорости дробления бластомеров, изучены в настоящее время не в полной мере. Несмотря на то, что активация эмбрионального генома у человека происходит на стадии 4-8 клеток, транскрипционная активность на ранних этапах дробления является минимальной. Последнее обстоятельство делает эмбрион зависимым от потенциала, накопленного в период созревания яйцеклетки.

В настоящее время доказана ведущая роль цитоплазмы яйцеклетки в детерминации развития. В незрелой яйцеклетке (ооците) экспрессируются практически все гены, и в цитоплазме ооцита накапливается большое количество материнских белков и мРНК, которые и управляют первыми этапами дробления зародыша. В этом заключается эффект материнской ооплазмы.

Логично предположить, что наличие в генотипе женщины функционально неполноценных вариантов генов семейства глутатио н-S-Tpai гсф ераз негативно сказывается на процессе детоксикации ксенобиотиков, что в условиях современного средового прессинга на организм, способствует накоплению патологических метаболитов и, вследствие этого, обусловливает нарушение нормального хода созревания женской гаметы и ограничивает потенциал дальнейшего эмбрионального развития.

Анализ полиморфизма генов главного комплекса гистосовместимости у женщин и мужчин в подгруппах В-1 - В-4 и С-1 - С-4 основной группы не выявил статистически значимых различий в характере распределения аллелей, генотипов и гаплотипов HLA II класса при сравнении подгрупп между собой и с контрольной группой.

В то же время женщины из семей, у которых удалось получить один и более эмбрионов высокого качества по морфологии и скорости дробления (подгруппа D-1), достоверно чаще, чем пациентки из пар, у которых ни один эмбрион не соответствовал высокому качеству по указанным критериям (подгруппа D-2), имели в генотипе аллели HLA-DRBI* 13 (19,6% и 3,8% и соответственно, р = 0,001, ОШ = 5,9 (2,6-13,6)), HLA-DQB1*06 (36,3% и 16,9% и соответственно, р = 0,002, OUI = 2,8 (1,6-4,9)), HLA-DRB1* 17 (10,8% и 4,4% соответственно, р = 0,046, ОШ = 2,6 (1,06,5)), HLA-DQB1*0201 (21,6% и 11,3% соответственно, р = 0,024, ОШ = 2,3 (1,14,2)).

По данным ряда авторов присутствие в генотипе человека аллелей HLA-DQB1*06 и/или HLA-DRB1* 13 ассоциировано с более высокой точностью распознавания чужеродных антигенов клетками иммунной системы, что определяет у этих лиц, в частности, хороший противовирусный иммунитет. Возможно, в силу хорошей распознаваемости своих и чужеродных антигенов клетками иммунной системы при наличии указанных аллелей происходит меньшее повреждение ооцитов, что в дальнейшем способствует оптимальной морфологии эмбрионов.

Кроме хорошего противовирусного иммунитета носительство аллеля HLA-DRBI* имеет протективное значение в отношении развития ряда заболеваний с аутоиммунным компонентом, в том числе сахарного диабета и ревматоидного

артрита. Нельзя исключать и значения аллеля НЬЛ-0<2В1*06 в связи с широкой распространенностью гаплотипов, включающих оба указанных аллеля.

Можно предположить, что повышенный шанс получения эмбрионов высокого качества у женщин-носительниц аллелей НЫ-ВдВ1*06 и НЫ-ПЯВ1* 13 ассоциирован с эффективной регуляцией иммунного ответа в условиях перенесенного инфекционно-воспалительного процесса в области малого таза, имевшего место в анамнезе большинства обследованных. Последнее, возможно, обеспечило невовлечение паренхимы яичников в воспаление и сохранение потенциала ооцитов и их окружения для полноценного созревания, оплодотворения и развития с формированием эмбрионов высокого качества.

Из 494 дробившихся эмбрионов было перенесено в полость матки 238, все переносившиеся эмбрионы имели высокую оценку по критериям морфологии бластомеров. 81 перенесенный эмбрион кроме положительной морфологической оценки имел также высокую скорость дробления.

Всего перенос эмбрионов был выполнен в 119 случаях (119 из 136 процедур, 87,5%). У всех женщин осуществлялся перенос 2 эмбрионов. Беременность, подтвержденная измерением в крови уровня хорионического гонадотропина человека через 2 недели после переноса эмбриона, была зарегистрирована в 20 случаях, что составило 14,7% в расчете на одну попытку лечения и 16,8% в расчете на перенос эмбрионов.

Факт наступления беременности после процедуры ПЭ был выбран в качестве критерия разделения женщин на подгруппы на завершающем этапе исследования. Из 119 женщин, которым был выполнен перенос эмбриона в полость матки, беременность наступила у 20 пациенток (16,8% - подгруппа Е-1), отсутствие наступления беременности имело место у 99 женщин (83,2% - подгруппа Е-2).

Анализ возрастного состава указанных подгрупп, клинических данных, результатов культивирования эмбрионов и особенностей проведения процедуры переноса не выявил достоверных различий между указанными подгруппами.

Достоверных отличий в частотах распределения аллелей и генотипов в генах семейства глутатион-8-трансфераз в подгруппах женщин с различным исходом процедуры переноса эмбриона при сравнении их между собой и с контрольной группой в настоящем исследовании получено не было.

Анализа полиморфизма генов HLA II класса в подгруппах женщин, сформированных с учетом исходов процедуры ПЭ, показал следующее. У женщин с наступившей беременностью после ПЭ достоверно чаще, чем у женщин с неблагоприятным исходом процедуры в генотипе присутствовал аллель HLA-DRB1* 15 (17,5% и 6,1% соответственно, р = 0,015, ОШ = 3,34 (1,3-8,8)), и реже аллель HLA-DQB1*0501 (2,5% и 15,7% соответственно, р = 0,026 ОШ = 0,6 (0,3 - 0,8)).

Анализ распределения гаплотипов по генам системы HLA II класса в подгруппах женщин с различными исходами ПЭ показал, что среди пациенток с наступившей беременностью по сравнению с женщинами с ненаступившей беременностью имело место достоверное снижение частоты встречаемости гаплотипа HLA-DQA / *0101H-DQB1 *0501 /2 (2,5% и 17,2% соответственно, р = 0,014 0111 = 0,2 (0,1 - 0,7)).

Известно, что процесс имплантации находится под контролем множества регуляторных молекул, синтезируемых эмбрионом и эндометрием. Большое значение имеют стероидные гормоны, гистамин, простагландиньг, факторы адгезии, а также специфичные для эндометрия и эмбриона цитокины.

На сегодняшний день имеются данные о том, что носительство аллелей HLA-DQA1*0101 и HLA-DQB1*0501 ассоциировано с предрасположенностью к атопии. Можно предположить, что носительство указанных аллелей, а также содержащих их гаплотипов обуславливает повышение выработки и высвобождения гистамина и других цитокинов тучными клетками эндометрия под действием гистамин-высвобождающий фактора эмбриона (embryo-derived histamine-releasing factor, EHRF) и иммуноглобулина Е материнского организма и как следствие способствует усилению воспалительной реакции в эндометрии в ответ на имплантацию. С учетом условий, которые имеют место при выполнении процедуры ПЭ (механическое воздействие катетера, резкий всплеск уровня эмбриональных цитокинов), иммунная реакция с выраженным атопическим компонентом может привести к повреждению эмбриона и невозможности последующего развития.

Полученные в нашем исследовании результаты позволяют сделать вывод о наличии ассоциации между присутствием у женщины аллеля DQB1*0501, гаплотипа DQA 7*0101 H-DQB1 *0501/2 и повышением риска неудачного исхода процедуры переноса эмбриона, связанного с усилением выраженности воспалительной реакции в

ответ на имплантацию и токсическим повреждением эмбриона. В то же время наличие в генотипе женщины аллеля ОКВ1* 15 как маркера умеренного иммунного ответа ассоциируется с достаточной толерантностью материнского организма и повышением шанса удачного исхода процедуры ПЭ и наступлением беременности.

Выводы

1. У пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием имеет место повышенная частота встречаемости сочетания генотипа ООТ7 0/0 и отсутствия делеции в гене

аллеля ШЛ-ОЯВ!* 10, генотипа НЬ4-ОЯВ1*01/* 11.

2. Установлена ассоциация между наличием в генотипе женщины аллеля НЫ-DQA1*0201 и сниженным овариальным ответом при индукции суперовуляции. У женщин с хорошим овариальным ответом имеет место повышенная частота встречаемости в генотипе аллеля ШЛ-О0Й/*0301. Распределение аллелей генов системы детоксикаци.: не отличается у женщин с различными ответами на индукцию суперовуляции.

3. Установлена ассоциация между наличием в генотипе женщины низкофукционального аллеля гена СБТМ1 и низким качеством полученных в ходе программы ЭКО эмбрионов. У женщин с высоким качеством полученных эмбрионов имеет место повышенная частота встречаемости аллелей ША-ОЯВ!* 13, ОКВ1* 17,

0201, £>0Я/*О6. Не выявлено достоверных отличий в характере распределения аллелей, генотипов и гаплотипов систем гистосовместимости и детоксикации у мужчин в супружеских парах с различным качеством полученных эмбрионов.

4. У женщин с неблагоприятным исходом процедуры переноса эмбриона в полость матки (отсутствие наступления беременности) имеет место повышенная частота встречаемости аллеля НЬ4-ОдВ1* 0501 и гаплотипа 0101/2-£>2^7*0501/2. У женщин с благоприятным исходом процедуры ПЭ установлена повышенная частота встречаемости в генотипе аллеля НЫ-ОШ1* 15.

Публикации

Публикации в изданиях, рекомендованных ВАК России:

1. Прогнозирование качества эмбрионов в программе экстракорпорального оплодотворения / М.А. Липин, И.Н. Фетисова, Ж.А. Дюжев, С.Ю. Ратникова, Е.В.

Полумискова // Российский иммунологический журнал. - 2012. - Т. 6 (14), № 2 (1). -С. 102-103.

2. Прогнозирование исхода экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбриона / М.А. Липнн, И.Н. Фетисова, Ж.А. Дюжев // Российский иммунологический журнал. - 2012. - Т. 6 (14), № 2 (1). - С. 103-104.

3. Значение генов главного комплекса гистосовместимости в программе экстракорпорального оплодотворения / М.А. Липин, А.И. Малышкина, И.Н. Фетисова, Ж.А. Дюжев, С.Ю. Ратникова // Вестник Ивановской медицинской академии. - 2012. - Т. 17, № 2. - С. 21-24.

Публикации в журналах, сборниках, материалах конференций:

4. Липин М.А., Дюжев Ж.А. Полиморфизм генов HLA II класса в бесплодных супружеских парах, поступивших на прохождение стандартной процедуры экстракорпорального оплодотворения // Неделя науки-2009: сб. матер. 89-й ежегодной науч. - практ. конф. студентов и молодых ученых ИвГМА. - Иваново, 2009.-С. 28.

5. Полиморфизм генов HLA II класса в бесплодных супружеских парах, поступивших на прохождение стандартной программы экстракорпорального оплодотворения / М.А. Липин, И.Н. Фетисова, Ж.А. Дюжев, М.В. Веденеева, С.С. Семененко, Д.А. Тихонова // Проблемы перинатальной медицины: сб. матер. I Дальневосточного симпозиума. - Хабаровск, 2009. - С. 110-111.

6. Полиморфизм генов системы главного комплекса гистосовместимости II класса у женщин с различными результатами стимуляции суперовуляции / М.А. Липин, И.Н. Фетисова, H.A. Сурикова, Т.Г. Конева // Репродуктивное здоровье нового поколения: сб. науч. трудов / под ред. А.И. Малышкиной. - Иваново: Изд-во «Иваново», 2010. - С. 231-234.

7. Липин М.А., Тихонова Д.А. Ассоциация полиморфизма генов HLA II класса и эффективности индукции суперовуляции у бесплодных женщин, участвующих в программе экстракорпорального оплодотворения // Неделя науки-2010: сб. матер. 90-й юбилейной науч. - практ. конф. студентов и молодых ученых ИвГМА, посвященной 80-летию Академии. - Иваново, 2010. - С. 29.

8. Липин М.А., Гордеева A.B. Ассоциация полиморфных вариантов генов главного комплекса гистосовместимости и результатов экстракорпорального

оплодотворения II Неделя науки-2011: сб. матер. 91-й ежегодной науч. - практ. конф. студентов и молодых ученых ИвГМА. - Иваново, 2011. - С. 218.

9. Л ияин М.А., Тихонова Д.А. Ассоциация полиморфизма генов глутатион-Б-трансфераз и качества эмбрионов, полученных в программе экстракорпорального оплодотворения // Неделя науки-2011: сб. матер. 91-й ежегодной науч. - практ. конф. студентов и молодых ученых ИвГМА. - Иваново, 2011.-С. 219.

10. Малышкина А.И., Фетисова И.Н., Липин М.А. Генетические маркеры различия качества эмбрионов, полученных в программе ЭКО // Проблемы репродукции. - Спец. выпуск. -2012.-С. 137-138.

11. Липин МЛ., Гордеева А.В. Значение аллелей DQA1*0201 и DQB1*03 главного комплекса гистосовместимости в программе экстракорпорального оплодотворения // Неделя науки-2012: сб. матер. 92 ежегодной науч. - практ. конф. студентов и молодых ученых ИвГМА. - Иваново, 2012. - С. 42.

12. Малышкина А.И., Фетисова И.Н., Липин М.А. Полиморфизм генов системы детоксикации в супружеских парах, участвующих в программе экстракорпорального оплодотворения // Детская медицина Северо-Запада. - 2012. - Т. 3, №2.-С. 24-26.

Список условных сокращений

ВРТ - вспомогательные репродуктивные технологии

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

НМФ - нарушение менструальной функции

ОШ - отношение шансов

ПЭ — перенос эмбрионов

ЭКО — экстракорпоральное оплодотворение

HLA - Human Leukocyte Antigen

Лнпнн Михаил Александрович (Россия) Полиморфизм генов системы детоксикации и HLAII класса супружеской пары на этапах экстракорпорального оплодотворения

В работе представлены результаты исследования полиморфизма генов системы детоксикации и HLA II класса 141 супружеской пары, участвовавшей в программе экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) и переноса эмбрионов (ПЭ) в связи с женским трубно-перитонеальным бесплодием. Показано, что гены главного комплекса гистосовместимости у женщин причастны к формированию сниженного фолликулярного резерва и качеству овариального ответа при индукции суперовуляции. Установлено, что качество эмбрионов, получаемых в ходе программы экстракорпорального оплодотворения, ассоциировано с особенностями генотипа женщины в генах семейства глутатион-8-трансфераз и комплекса HLA II класса, исходы процедуры переноса эмбриона в полость матки ассоциированы с особенностями генотипа женщины в генах комплекса HLA II класса.

Lipin Mikhail Alexandrovich (Russia) Polymorphism of detoxication system and HLA class II genes at couple on in-vitro

fertilization stages

The study included results of detoxication and HLA class II genes research from 141 couples which were participating in in-vitro fertilization (IVF) and embryo transfer (ET) program due to female tuboperitoneal infertility. It has been revealed that female's major histocompatibility complex genes play the role in reduced follicular reserve formation and quality of ovarian response to superovulation inducing. It has been also revealed that female's glutation-S-transferase and HLA class II genotypes affect the quality of embryos gotten in in-vitro fertilization program. There is a relationship between female's HLA class II genotype and outcome of embryo transfer.

Липин Михаил Александрович

ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ СИСТЕМЫ ДЕТОКСИКАЦИИ

И НЬА II КЛАССА СУПРУЖЕСКОЙ ПАРЫ НА ЭТАПАХ

ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОГО ОПЛОДОТВОРЕНИЯ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 25.10.2012. Формат 60x84 1/16 Печать плоская. Усл. печ. л. 1,62. Тираж 100 экз. Заказ № 129. ГОУ ВПО «Ивановский государственный энергетический университет им. В.И. Ленина» 153003, Иваново, ул. Рабфаковская, 34. Отпечатано в УИУНЛ ИГЭУ.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Липин, Михаил Александрович

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. РЕГУЛЯЦИЯ ФОЛЛИКУЛОГЕНЕЗА В СТИМУЛИРОВАННОМ ОВАРИАЛЬНОМ ЦИКЛЕ.

1.2. ПОЛИМОРФНЫЕ ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ, ОКАЗЫВАЮЩИЕ ВЛИЯНИЕ НА ОВАРИАЛЬНЫЙ ОТВЕТ НА ФОНЕ КОНТРОЛИРУЕМОЙ ОВАРИАЛЬНОЙ СТИМУЛЯЦИИ.

1.3. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ПРОЦЕССАХ СОЗРЕВАНИЯ ООЦИТА Ш-У1УО И Ш-У1ТЯО.

1.4. ЗНАЧЕНИЕ АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЫ И ГЕНОВ ДЕТОКСИКАЦИИ В МЕТАБОЛИЗМЕ ООЦИТА И ЭМБРИОНА.

1.5. ЗНАЧЕНИЕ ВОСПАЛЕНИЯ И ИММУННОЙ СИСТЕМЫ МАТЕРИ ДЛЯ

ИМПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНА.

1.6 ОРГАНИЗАЦИЯ ГЛАВНОГО КОМПЛЕКСА ГИСТОСОВМЕСТИМОСТИ

У ЧЕЛОВЕКА.

Глава 2. ОБЪЕМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 3. КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЖЕНЩИН И МУЖЧИН В РЕПРОДУКТИВНО ЗДОРОВЫХ СУПРУЖЕСКИХ ПАРАХ И БЕСПЛОДНЫХ ПАРАХ, УЧАСТВУЮЩИХ В ПРОГРАММЕ ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОГО

ОПЛОДОТВОРЕНИЯ.

Глава 4. ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ СИСТЕМЫ ДЕТОКСИКАЦИИ И НЬА II КЛАССА В РЕПРОДУКТИВНО ЗДОРОВЫХ СУПРУЖЕСКИХ ПАРАХ И БЕСПЛОДНЫХ ПАРАХ, УЧАСТВУЮЩИХ В ПРОГРАММЕ

ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОГО ОПЛОДОТВОРЕНИЯ.

Глава 5. ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ СИСТЕМЫ ДЕТОКСИКАЦИИ И НЬА II КЛАССА И РЕЗУЛЬТАТЫ КОНТРОЛИРУЕМОЙ ОВАРИАЛЬНОЙ СТИМУЛЯЦИИ.

Глава 6. ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ СИСТЕМЫ ДЕТОКСИКАЦИИ И НЬА II КЛАССА И РЕЗУЛЬТАТЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЭМБРИОНОВ В

ПРОГРАММЕ ЭКО.

Глава 7. ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ СИСТЕМЫ ДЕТОКСИКАЦИИ И НЬА II КЛАССА И ИМЛАНТАЦИЯ ЭМБРИОНА ПОСЛЕ ПЕРЕНОСА В ПОЛОСТЬ

МАТКИ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Полиморфизм генов системы детоксикации и НLA II класса супружеской пары на этапах экстракорпорального оплодотворения"

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Настоящая работа посвящена изучению особенностей полиморфизма генов системы детоксикации (С8ТМ1, (75777) и главного комплекса гистосовместимости НЬА II класса (ИЯВ!, DQA1, И()В1) у супружеских пар, участвующих в программе экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) и переноса эмбриона (ПЭ) в связи с женским трубно-перитонеальным бесплодием. Основная часть работы была направлена на поиск ассоциаций между особенностями генотипов супругов по указанным группам генов и эффективностью этапов ЭКО: получения на фоне индукции суперовуляции различного количества ооцитов, различного качества культивируемых т-укго эмбрионов, исходом процедуры переноса эмбриона в полость матки по факту наступления беременности.

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Актуальность проблемы обусловлена ухудшающимися показателями репродуктивного здоровья населения. Так, по результатам эпидемиологических исследований в Российской Федерации частота бесплодия достигает 8-29% [21]. Ведущими причинами бесплодия по данным ФГБУ «Научного центра акушерства, гинекологии и перинаталогии им. В.И. Кулакова» Минздравсоцразвития РФ являются: трубно-перитонеальный фактор - 40-50%, эндокринные нарушения - 15-30%, эндометриоз - 20-30%, мужской фактор -20-40%, в 5-10% имеет место бесплодие неясного генеза. Почти в половине случаев отмечается сочетание 2-5 и более факторов, нарушающих репродуктивную функцию [22, 24].

Приоритетность проблемы бесплодия в репродуктивной медицине обусловливает рост интереса к развитию вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ). Применение ВРТ возможно при различных формах женского и мужского бесплодия. В соответствии с приказом №67 Минздрава РФ показанием к ЭКО является «бесплодие, не поддающееся терапии, или п

J> ? а

V < вероятность преодоления которого с помощью ЭКО выше, чем другими методами. При отсутствии противопоказаний ЭКО может проводиться по желанию супружеской пары (женщины, не состоящей в браке) при любой форме бесплодия» [25]. Наиболее частым показанием к применению методов

ЭКО и ПЭ в настоящее время является диагноз женского трубно1 перитонеального бесплодия [152].

Несмотря на достигнутый к настоящему времени опыт в проведении методики, частота наступления беременности после ЭКО и ПЭ остается невысокой и по данным разных авторов колеблется от 20% до 40% [11, 86, 158, 178]. По мнению ряда авторов, не приходится говорить о существенном росте эффективности ЭКО и ПЭ [19, 49].

Среди факторов, влияющих на исходы программы ВРТ прежде всего следует выделить возраст женщины [38, 39, 42, 52, 186, 199, 204, 216, 222, 234], продолжительность бесплодия [38, 52, 199], его тип (первичное, вторичное) [38, 52, 222], показания к проведению ЭКО (трубно-перитонеальное бесплодие, эндометриоз, мужской фактор, идиопатическое бесплодие) [38, 52, 199, 222], базальный уровень фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) [39, 52, 57, 186, 199, 204, 223], ответ на стимуляцию суперовуляции (количество полученных ооцитов) [38, 39, 216, 222], качество сперматозоидов [183], метод оплодотворения (стандартное или ICSI) [199, 222], количество эмбрионов высокого качества [199, 222], число перенесенных в полость матки эмбрионов [216, 247], состояние эндометрия [12, 27, 97, 125, 155].

Поиск причин неудач и совершенствование методик ВРТ проводится сегодня специалистами из самых разных областей медицинской науки. Всё больше внимания уделяется разработке индивидуального подхода к использованию разных программ стимуляции овуляции, контроля развития фолликулов и культивирования эмбрионов. Появляются новые методы прогнозирования результатов ВРТ на основе генетической и иммунологической совместимости супругов [28]. Возрастает значение принципов «персонифицированной медицины» в области репродуктологии. Развитие современных методов исследования позволяет существенно расширить представление о генетической составляющей таких процессов как гаметогенез, оплодотворение и ранние стадии эмбрионального развития. При этом учитываются не только эффекты генных и хромосомных мутаций, определяющих блок на том или ином этапе реализации репродуктивной функции человека, но и генетические факторы предрасположенности, которые при взаимодействии со средовыми, обусловливают риск развития патологического состояния, ограничивающего фертильность женщины и(или) мужчины, что приобретает особую значимость при решении вопроса о возможной профилактике или коррекции патологии.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: изучить полиморфизм генов системы детоксикации и главного комплекса гистосовместимости HLA II класса супружеских пар, участвующих в программе экстракорпорального оплодотворения в связи с трубно-перитонеальным бесплодием, и оценить их значение на этапе культивирования эмбрионов и связанных с ним процедурах получения гамет, оплодотворения и переноса в полость матки.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Изучить особенности полиморфизма генов системы детоксикации (GSTM1, GSTT1) и главного комплекса гистосовместимости HLA II класса (DRB1, DQA1, DQB1) в супружеских парах, участвующих в программе ЭКО и ПЭ в связи с женским трубно-перитонеальным бесплодием.

2. Изучить особенности полиморфизма генов системы детоксикации ОGSTM1, GSTT1) и комплекса HLA II класса (DRBJ, DQA1, DQB1) класса в группах женщин с различным ответом на контролируемую овариальную стимуляцию.

3. Изучить особенности полиморфизма генов системы детоксикации (|GSTM1, GSTT1) и комплекса HLA II класса (DRB1, DQA1, DQB1) в супружеских парах, у которых в ходе программы ЭКО получены эмбрионы различного качества.

4. Изучить особенности полиморфизма генов системы детоксикации (С7£ГМ7, (ШТ7) и комплекса НЬА II класса {ЖВ1, 0()А1, 0()В1) в группах женщин с наличием и отсутствием беременности после переноса эмбриона в полость матки.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

Впервые выявлены особенности полиморфизма генов семейства глутатион-Б-трансфераз и главного комплекса гистосовместимости у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием: установлено накопление в генотипе пациенток низкофункционального варианта гена (75Т77 при отсутствии делеции в гене вБТИ!, аллеля 771Л-7Ш?/* 10, генотипа #7^-7)7г£7*01/*11.

Впервые выявлена связь между особенностями генотипа женщины в генах главного комплекса гистосовместимости и овариальным ответом. Показано, что присутствие аллеля НЬА-И()А 1*0201 повышает риск сниженного овариального ответа. Доказано, что носительство аллеля НЬА -ВОВ7*0301 ассоциируется с увеличением шанса адекватного овариального ответа. Роль генов семейства глутатион-Б-трансфераз при различных исходах стимуляции суперовуляции не подтверждена.

Впервые показано достоверное увеличение частоты встречаемости низкофункционального аллеля гена С£ГМ7 в генотипе женщин из пар, у которых получены эмбрионы преимущественно низкого качества. Установлена ассоциация между присутствием в генотипе женщины аллелей 7/7^4-7ЖВ7* 13, НЬА-ОдВ1*06, НЬА-ОЯВ!* 17 и Я7Л-£>0£7*0201 и повышением шанса получения эмбрионов высокого качества. Роль генотипа мужчины по изученным группам генов в контроле качества эмбрионов не подтверждена.

Впервые показано, что присутствие в генотипе женщины аллеля НЬА-7Ж57* 15 снижает риск неудачного исхода переноса эмбриона в полость матки (отсутствие наступления беременности). Наличие у женщины аллеля НЬА-1)257*0501 и гаплотипа Я1Л-ОД47*01О1/2-£0Я7*О501/2 повышает риск неудачного исхода переноса эмбриона в полость матки.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Полученные результаты указывают на целесообразность исследования особенностей аллельного полиморфизма генов семейства глутатион-8-трансфераз и системы НЬА II класса у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием, планирующих проведение процедуры ЭКО и ПЭ.

Анализ аллельного полиморфизма генов комплекса НЬА II класса (ИЯВ!, DQA1, 0()В1) женщины, направляемой на прохождение программы ЭКО, можно рекомендовать в качестве прогностического теста для оценки качества культивируемых эмбрионов, а также для оценки риска неудачного исхода переноса эмбриона в полость матки, определяемого по факту отсутствия наступления беременности. Разработанные способы прогнозирования эффективности этапов ЭКО предлагаются к применению в практической работе центров ВРТ.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

Гены главного комплекса гистосовместимости у женщин причастны к формированию сниженного фолликулярного резерва и качеству овариального ответа при индукции суперовуляции.

-л 1 ЕЮ

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

АПРОБАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

ПУБЛИКАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

ОБЪЁМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Липин, Михаил Александрович

I выводы 9

И 1. У пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием имеет место

Щ повышенная частота встречаемости сочетания генотипа СБТТ! 0/0 и отсутствия

Щ.

Щ делеции в гене бЗТМ/; аллеля НЬА-ОКВ1 * 10, генотипа НЬА-ОЯВ1* 01/* 11. Ш щ 2. Установлена ассоциация между наличием в генотипе женщины аллеля Р

Ц HLA-DQA1* 0201 и сниженным овариальным ответом при индукции суперовуляции. У женщин с хорошим овариальным ответом имеет место £ повышенная частота встречаемости в генотипе аллеля HLA-DQB1*0301. щ

1| Распределение аллелей генов системы детоксикации не отличается у женщин с различными ответами на индукцию суперовуляции.

-л

4 3. Установлена ассоциация между наличием в генотипе женщины I низкофукционального аллеля гена (7£ТМ/ и низким качеством полученных в ходе программы ЭКО эмбрионов. У женщин с высоким качеством полученных I эмбрионов имеет место повышенная частота встречаемости аллелей НЬА

I Ш1 * 13, ОЯВ1 * 17, ОдВ1*0201, И(2В1*06. Не выявлено достоверных отличий в характере распределения аллелей, генотипов и гаплотипов систем гистосовместимости и детоксикации у мужчин в супружеских парах с различным качеством полученных эмбрионов.

4. У женщин с неблагоприятным исходом процедуры переноса эмбриона з

I в полость матки (отсутствие наступления беременности) имеет место а повышенная частота встречаемости аллеля НЬА-ОО^В7*0501 и гаплотипа НЬА-И()А1*010 \f2-DQB 1*0501/2. У женщин с благоприятным исходом процедуры ПЭ установлена повышенная частота встречаемости в генотипе аллеля НЬА

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Выявленные в настоящем исследовании ассоциации можно использовать в качестве генетических маркеров предрасположенности к различным исходам этапов вспомогательных репродуктивных технологий: индукции суперовуляции, культивирования эмбрионов и переноса эмбрионов в полость матки. Генетическому тестированию с выполнением молекулярно-генетического анализа полиморфизма генов системы детоксикации и комплекса НЬАII класса подлежат все женщины, направляемые на прохождение процедур ЭКО и ПЭ по поводу трубно-перитонеального бесплодия.

Рекомендуется использование способа прогнозирования качества эмбриона в программе ЭКО у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием путем исследования периферической венозной крови, отличающийся тем, что до начала овариальной стимуляции в лейкоцитах определяют полиморфизм генов НЬА II класса и при обнаружении носительства аллелей 7}£?7?7*06 и/или 7ЖВ7* 13 прогнозируют высокое качество эмбрионов, а при отсутствии носительства аллелей 1)£)7?7*06 и 7Ж5/*13 прогнозируют низкое качество эмбрионов.

Рекомендуется использование способа прогнозирования исхода программы экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов у женщин с бесплодием путем исследования периферической венозной крови, отличающийся тем, что до начала овариальной стимуляции в лейкоцитах определяют полиморфизм генов НЬА II класса и при обнаружении носительства гаплотипов ££Ш*0101-£>£>57*0501 или 7*0\02-DQBl*0502 прогнозируют неблагоприятный исход, а при отсутствии носительства гаплотипов £>£Ш*0101-££Ш*0501 и Л0у47*О1О2-£>0£7*О5О2 благоприятный исход программы ЭКО и ПЭ.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Липин, Михаил Александрович, Москва

1. Акопян А.В., Алексеев Л.П. , Хаитов P.M. Иммунологические и иммуногенетические аспекты периодической болезни // Иммунология. -1998.-№1.-С. 4-6.

2. Ахмедова Ш.У. , Рахимова Д.А. Полиморфизм генов HLA II класса у больных инсулин-зависимым сахарный диабетом в узбекской популяции // Иммунология. 2002. - №5. - С. 298-300.

3. Бескоровайная Т.С. Влияние некоторых генетических факторов на нарушение репродукции у человека: Дис. . канд. мед. наук. Москва, 2005. -89 с.

4. Болдырева М.Н. HLA (класс II) и естественный отбор, «функциональный» генотип, гипотеза преимущества «функциональной» гетерозиготности: Дис. . д-ра. мед. наук. Москва, 2007. - 224 с.

5. Боярский К.Ю. Клиническое значение тестов определения овариального резерва в лечении бесплодия: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Ст-Петербург, 2000. - 26с.

6. Вахитова Ю.В., Султанаева З.М. , Викторова Т.В. Анализ полиморфизма гена глутатион-Б-трансферазы Ml в популяциях волго-уральского региона // Генетика. 2001. - № 37(2). - С. 268-270.

7. Габибуллаева З.Г. Клинико-генетическая характеристика больных с преждевременной недостаточностью яичников: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Москва, 2008. - 27с.

8. Геном человека и гены «предрасположенности» (введение в предиктивную медицину) / B.C. Баранов, Е.В. Баранова, И.Н. Иващенко и др. СПб.: Интермедика, 2000. - 272 с.

9. Говалло В.И. Иммунология репродукции. М.: Медицина, 1987. - 304 с.

10. Гришенко В.И., Петрушко М.П., Пиняев В.И. Результативность программы эко в зависимости от количества и качества переносимых эмбрионов // Проблемы репродукции. 2000. - № 1. - С. 44-47.

11. Дюжева Е.В. Гормональная подготовка эндометрия у пациенток с неэффективными попытками эко в анамнезе: Дис. . канд. мед. наук. -Москва., 2010. 119 с.

12. Жорданидзе Д.О., Назаренко Т.А., Фанченко Н.Д. Влияние овариального резерва на параметры индуцированного цикла // Проблемы репродукции. 2011. - №. 2. - С. 63-68.

13. Захаров А.Ф., Побединский Н.М. Генетические исследования в акушерстве и гинекологии // Вест. АМН. СССР. 1982. - № 6. - С. 18-24.

14. Зенков Н.К., Лапкин В.З., Меныцикова Е.Б. Окислительный стресс, биохимические и патофизиологические аспекты. М.: Наука, Интерпериодика, 2001. - 343 с.

15. Иващенко Т.Э., Швед Н.Ю., Крамарева Н.Л. Анализ полиморфных аллелей генов, кодирующих ферменты 1-й и 2-й фазы детоксикации, у больных эндометриозом // Генетика. 2003. - №.39(4). - С. 525-529.

16. Иммунологическая загадка беременности. / Под ред. Сотниковой Н.Ю. -Иваново: МИК, 2005. 276 с.

17. Коненков В.И. Медицинская и экологическая иммуногенетика. -Новосибирск, 1999. 250 с.

18. Корсак B.C. ВРТ в россии. отчет за 2008 г. // Проблемы репродукции. -2010.-№. 6.-С. 15-16.

19. Кулаков В.И. Экстракорпоральное оплодотворение и его новые направления в лечении женского бесплодия (теоретические и практические подходы): руководство для врачей. Москва, 2001. - 782 с.

20. Кулаков В.И. Репродуктивное здоровье населения россии // Акушерство и гинекология. 2002. - №. 2. - С. 4-7.

21. Кулаков В.И., Назаренко Т.А., Волков Н.И. Бесплодный брак, современные подходы к диагностике и лечению (серия "библиотека врача-специалиста"). / Под ред. Сухих Г.Т., Назаренко Т.А. ГЭОТАР-Медиа, 2010. - 774 с.

22. Кулешов Н.П. Частота возникновения и судьба хромосомных аномалий в популяциях человека: Дис. . д-ра. мед. наук. М.,1979. - 312с.

23. Назаренко Т.А., Дуринян Э.Р., Перминова С.Г. Современные подходы к диагностике и лечению бесплодия у женщин // Гинекология. 2004. - Том 6, №6.

24. Приказ №67 Минздрава РФ от 26 февраля 2003 года "О применении вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) в терапии женского и мужского бесплодия". 2003.

25. Райе С.Х., Тулеева Л.Ф. Курс лекций биологические эффекты токсических соединений. - Новосибирск, 2003. - 208 с.

26. Роль PAI-1 в повторных неудачах ВРТ / Охтырская Т.А., Яворовская К.А., Шуршалина A.B. и др. // Проблемы репродукции. 2011. - №. 4. - С. 4548.

27. Роль антигенов и класса главного комплекса гистосовместимости в привычном невынашивании беременности / Бескоровайная Т.С., Полтавец Н.В., Близнец Е.А. и др. // Проблемы репродукции. 2006. - № 2. - С. 46-54.

28. Серова Л.Д. Иммунологический HLA-статус у женщин с привычным невынашиванием и бесплодием неясного генеза пособие для врачей. - М., 1997.

29. Сидельникова В.М. Привычная потеря беременности. М.: Триада-Х, 2002. - 304 с.

30. Фетисова И.Н. Наследственные факторы при различных формах нарушения репродуктивной функции супружеской пары: Дис. . д-ра. мед. наук. Москва, 2007. - 277с.

31. Фетисова И.Н., Посисеева JI.B., Поляков А.С. Наследственные факторы при различных формах нарушения репродуктивной функции супружеской пары. Иваново, 2009. - 238 с.

32. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М.: Медицина, 1999. - С. 216-217.

33. A basis for differentiating among the multiple human mu-glutathione S-transferases and molecular cloning of brain GSTM5 / Takahashi Y., Campbell E.A., Hirata Y. et al. // J. Biol. Chem. 1993. - Vol. 268. - P. 8893-8898.

34. A factor secreted by human embryo stimulates cytokine release by uterine mast cell / Cocchiara R., Lampiasi N., Albeggiani G. et al. // Mol. Hum. Reprod. -1996.-Vol. 2.-P. 781-791.

35. A maternal factor affecting mouse blastocyst formation / Renard J.P., Baldacci P., Richoux-Duranthon V. et al. // Development. 1994. - Vol. 120. - P. 797-802.

36. A prospective randomized sibling-oocyte study of two media systems for culturing cleavage-stage embryos-impact on fertilization rate / Hambiliki F., Sandell P., Yaldir F. et al. // J. Assist. Reprod. Genet. 2011. - Vol. 28. - P. 335341.

37. A systematic review of tests predicting ovarian reserve and ivf outcome / Broekmans F.J., Kwee J., Hendriks D.J. et al. // Hum. Reprod. Update. 2006. -Vol. 12.-P. 685-718.I

38. Allelic estrogen receptor 1 (ESR1) gene variants predict the outcome of ovarian stimulation in in vitro fertilization / Altmae S., Haller K., Peters M. et al. // Mol. Hum. Reprod. 2007. - Vol. 13. - P. 521-526.

39. Alpay Z., Saed G.M., Diamond M.P. Female infertility and free radicals: potential role in adhesions and endometriosis // J. Soc. Gynecol. Investig. 2006. -Vol. 13.-P. 390-398.

40. Aluvihare V.R., Kallikourdis M., Betz A.G. Regulatory T cells mediate maternal tolerance to the fetus // Nat. Immunol. 2004. - Vol. 5. - P. 266-271.

41. Alviggi C., Humaidan P., Ezcurra D. Hormonal, functional and genetic biomarkers in controlled ovarian stimulation: tools for matching patients and protocols // Reprod. Biol. Endocrinol. 2012. - Vol. 10. - P. 9.

42. Arrighi F.E. , Hsu T.C. Localization of heterochromatin in human chromosomes // Cytogenetics. 1971. - Vol. 10. - P. 81-86.

43. Assisted reproductive technology in europe, 2008: results generated from european registers by eshre / Ferraretti A.P., Goossens V., de Mouzon J. et al. // Hum. Reprod. -2012.

44. Association between human leukocyte antigen class ii alleles and human papillomavirus-mediated cervical cancer in indian women / Kohaar I., Hussain S., Thakur N. et al. // Hum. Immunol. 2009. - Vol. 70. - P. 222-229.

45. Associations between alleles of the major histocompatibility complex and type 1 autoimmune hepatitis / Czaja A.J., Strettell M.D., Thomson L.J. et al. // Hepatology. 1997. - Vol. 25. - P. 317-323.

46. Basal follicle-stimulating hormone levels are of limited value in predicting ongoing pregnancy rates after in vitro fertilization / Bancsi L.F., Huijs A.M., den Ouden C.T. et al. // Fertil. Steril. 2000. - Vol. 73. - P. 552-557.

47. Bavister B.D. Culture of preimplantation embryos: facts and artifacts // Hum. Reprod. Update. 1995. - Vol. 1. - P. 91-148.

48. Biggers J.D., Whittingham D.G., Donahue R.P. The pattern of energy metabolism in the mouse oocyte and zygote // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. -1967.-Vol. 58.-P. 560-567.

49. Blastocyst development and birth after in-vitro maturation of human primary oocytes, intracytoplasmic sperm injection and assisted hatching / Barnes F.L., Crombie A., Gardner D.K. et al. // Hum. Reprod. 1995. - Vol. 10. - P. 32433247.

50. Blondin P., Coenen K., Sirard M.A. The impact of reactive oxygen species on bovine sperm fertilizing ability and oocyte maturation // J. Androl. 1997. - Vol. 18.-P. 454-460.

51. Body mass index, follicle-stimulating hormone and their predictive value in in vitro fertilization / Ferlitsch K., Sator M.O., Gruber D.M. et al. // J. Assist. Reprod. Genet. 2004. - Vol. 21. - P. 431-436.

52. Bosch E., Ezcurra D. Individualised controlled ovarian stimulation (icos): maximising success rates for assisted reproductive technology patients // Reprod. Biol. Endocrinol. 2011. - Vol. 9. - P. 82.

53. Braude P., Bolton V., Moore S. Human gene expression first occurs between the four- and eight-cell stages of preimplantation development // Nature. 1988. -Vol. 332.-P. 459-461.

54. Brinster R.L. Oxidation of pyruvate and glucose by oocytes of the mouse and rhesus monkey//J. Reprod. Fertil. 1971.-Vol. 24. - P. 187-191.

55. Bulla R., Bossi F., Tedesco F. The complement system at the embryo implantation site: friend or foe? // Front Immunol. 2012. - Vol. 3. - P. 55.

56. CXCL12 expression by invasive trophoblasts induces the specific migration of CD 16- human natural killer cells / Hanna J., Wald O., Goldman-Wohl D. et al. //Blood. 2003. - Vol. 102. - P. 1569-1577.

57. Cha K.Y., Chian R.C. Maturation in vitro of immature human oocytes for clinical use // Hum. Reprod. Update. 1998. - Vol. 4. - P. 103-120.

58. Chen C.L., Liu Q., Relling M.V. Simultaneous characterization of glutathione S-transferase Ml and T1 polymorphisms by polymerase chain reaction in american whites and blacks // Pharmacogenetics. 1996. - Vol. 6. - P. 187-191.

59. Chromosomal abnormalities & oxidative stress in women with premature ovarian failure (POF) / Kumar M., Pathak D., Venkatesh S. et al. // Indian J. Med. Res. 2012. - Vol. 135. - P. 92-97.

60. Cleavage speed and implantation potential of early-cleavage embryos in IVF or ICSI cycles / Lee M„ Lee R.K., Lin M. et al. // J. Assist. Reprod. Genet. 2012.

61. Combelles C.M.H., Albertini D.F. Assessment of oocyte quality following repeated gonadotropin stimulation in the mouse // Biol. Reprod. 2003. - Vol. 68. -P. 812-821.

62. Comparison of ivf outcomes using conventional insemination and icsi in ovarian cycles in which only one or two oocytes are obtained / Fang C., Tang J., Huang R. et al. // J Gynecol Obstet Biol Reprod (Paris). 2012.

63. D.L. et al I I Dev. Genet. 1989. - Vol. 10. - P. 318-323.s

64. Constitutive expression of tnf-alpha and -beta genes in mouse embryo: rolesIof cytokines as regulator and effector on development / Kohchi C., Noguchi K.,

65. Tanabe Y. et al. // Int. J. Biochem. 1994. - Vol. 26. - P. 111-119.I

66. Coulam C. Update on recurrent pregnancy loss // Am. J. Reprod. Immunol.2004.-Vol. 51.-P. 459-460.

67. Proc.Natl. Acad. Sci. U.S.A.-2010.-Vol. 107.-P. 11918-11923.

68. Cummins I., Cole D.J., Edwards R. A role for glutathione transferaseshlygrass // Plant J. 1999. - Vol. 18. - P. 285-292.

69. Decidual NK cells regulate key developmental processes at the human fetalt1.maternal interface / Hanna J., Goldman-Wohl D., Hamani Y. et al. // Nat. Med. 2006. Vol. 12. - P. 1065-1074.•r

70. Dirr H., Reinemer P. , Huber R. X-ray crystal structures of cytosolic1.Sglutathione s-transferases. implications for protein architecture, substrateirecognition and catalytic function // Eur. J. Biochem. 1994. - Vol. 220. - P. 645I661. »

71. Downs S.M., Humpherson P.G. , Leese H.J. Meiotic induction in cumulus1.cell-enclosed mouse oocytes: involvement of the pentose phosphate pathway //1.

72. Biol. Reprod. 1998. - Vol. 58. - P. 1084-1094.

73. Dry eye signs and symptoms in women with premature ovarian failure / Smith

74. J.A., Vitale S., Reed G.F. et al. // Arch. Ophthalmol. 2004. - Vol. 122. - P. 1511.?

75. ESR1, NK3 and BRSK1 gene variants are associated with both age at natural menopause and premature ovarian failure / Qin Y., Sun M., You L. et al. // Orphanet J Rare Dis. 2012. - Vol. 7. - P. 5.

76. Edwards R.G. Maturation in vitro of human ovarian oocytes // Lancet. 1965. - Vol. 2. - P. 926-929.

77. Edwards R.G., Bavister B.D. , Steptoe P.C. Early stages of fertilization in vitro of human oocytes matured in vitro // Nature. 1969. - Vol. 221. - P. 632-635.

78. Edwards R.G. Physiological and molecular aspects of human implantation // Hum. Reprod. 1995. - Vol. 10 Suppl 2. - P. 1-13.

79. Edwards R.G., Beard H.K. Is the success of human ivf more a matter of genetics and evolution than growing blastocysts? // Hum. Reprod. 1999. - Vol. 14.-P. 1-4.

80. Effect of cysteamine on glutathione level and developmental capacity of bovine oocyte matured in vitro / de Matos D.G., Furnus C.C., Moses D.F. et al. // Mol. Reprod. Dev. 1995. - Vol. 42. - P. 432-436.

81. Effect of follicle size on bovine oocyte quality and developmental competence following maturation, fertilization, and culture in vitro / Lonergan P., Monaghan P., Rizos D. et al. // Mol. Reprod. Dev. 1994. - Vol. 37. - P. 48-53.

82. Effect of follicular size on meiotic and developmental competence of porcine oocytes / Marchai R., Vigneron C., Perreau C. et al. // Theriogenology. 2002. -Vol. 57.-P. 1523-1532.

83. Effect of tumour necrosis factor alpha on rat blastocyst growth and glucose metabolism / Pampfer S., Moulaert B., Vanderheyden I. et al. // J. Reprod. Fertil. -1994.-Vol. 101.-P. 199-206.

84. Effective detection of human leukocyte antigen risk alleles in celiac disease using tag single nucleotide polymorphisms / Monsuur A.J., de Bakker P.I.W., Zhernakova A. et al. // PLoS ONE. 2008. - Vol. 3. - P. e2270.

85. Elder K.T., Avery S., Mills C. IVF laboratory procedures. Bourn-Hallam Group. Broadwater Press Ltd., 1990. - 23 p.

86. Eleven X chromosome breakpoints associated with premature ovarian failure (POF) map to a 15-mb yac contig spanning Xq21 / Sala C., Arrigo G., Torri G. et al. // Genomics. 1997. - Vol. 40. - P. 123-131.

87. Embryo morphology or cleavage stage: how to select the best embryos for transfer after in-vitro fertilization / Ziebe S., Petersen K., Lindenberg S. et al. // Hum. Reprod. 1997. - Vol. 12. - P. 1545-1549.

88. Endometrial vascularity and ongoing pregnancy after ivf / Maugey-Laulom B., Commenges-Ducos M., Jullien V. et al. // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 2002. - Vol. 104. - P. 137-143.

89. Evidence for immune cell involvement in decidual spiral arteriole remodeling in early human pregnancy / Smith S.D., Dunk C.E., Aplin J.D. et al. // Am. J. Pathol. 2009. - Vol. 174. - P. 1959-1971.

90. Evidence of gonadal and gonadotropin antibodies in women with a suboptimal ovarian response to exogenous gonadotropin / Meyer W.R., Lavy G., DeCherney A.H. et al. // Obstet Gynecol. 1990. - Vol. 75. - P. 795-799.

91. Evidence that meishan and large-white hybrid preovulatory follicles may differentially affect oocyte in vitro maturation and fertilization / Xu X., Faillace L.S., Harding R.T. et al. // Anim. Reprod. Sci. 1998. - Vol. 51. - P. 307-319.

92. Exogenous luteinizing hormone in controlled ovarian hyperstimulation for assisted reproduction techniques / Ferraretti A.P., Gianaroli L., Magli M.C. et al. // Fertil. Steril. 2004. - Vol. 82. - P. 1521-1526.

93. FSH receptor gene polymorphisms have a role for different ovarian response to stimulation in patients entering ivf/icsi-et programs / Loutradis D., Patsoula E., Minas V. et al. // J. Assist. Reprod. Genet. 2006. - Vol. 23. - P. 177-184.

94. Familial idiopathic premature ovarian failure: an overrated and underestimated genetic disease? / van Kasteren Y.M., Hundscheid R.D., Smits A.P. et al. //Hum. Reprod. 1999. - Vol. 14. - P. 2455-2459.

95. Farin C.E., Yang L. Inhibition of germinal vesicle breakdown by 5,6-dichlorobenzimidazole riboside in bovine oocytes matured in vitro // Theriogenology. 1992. - Vol. 37. - P. 208.

96. Fauser B.C. Interference with follicle stimulating hormone regulation of human ovarian function // Mol. Hum. Reprod. 1996. - Vol. 2. - P. 327-334.

97. Fiedler K., Wiirfel W. Effectivity of heparin in assisted reproduction // Eur. J. Med. Res. 2004. - Vol. 9. - P. 207-214.

98. First N.L., Leibfried-Rutledge M.L., Sirard M.A. Cytoplasmic control of oocyte maturation and species differences in the development of maturational competence //Prog. Clin. Biol. Res. 1988. - Vol. 267. - P. 1-46.

99. Follicle-stimulating hormone receptor gene polymorphism and ovarian responses to controlled ovarian hyperstimulation for ivf-et / Jun J.K., Yoon J.S., Ku S. et al. // J. Hum. Genet. 2006. - Vol. 51. - P. 665-670.

100. Follicle-stimulating hormone receptor gene polymorphisms are not associated with ovarian reserve markers / Mohiyiddeen L., Newman W.G., McBurney H. et al. // Fértil. SteriL 2012. - Vol. 97. - P. 677-681.

101. Follicle-stimulating hormone receptor polymorphism and ovarian function / Théron-Gérard L., Pasquier M., Czernichow C. et al. // Gynecol Obstet Fértil. -2007.-Vol. 35.- P. 135-141.

102. Fragile x premutation screening in women with premature ovarian failure / Conway G.S., Payne N.N., Webb J. et al. // Hum. Reprod. 1998. - Vol. 13. - P. 1184-1187.

103. Frequencies of GSTM1, GSTT1, and GSTP1 polymorphisms in a brazilian population / Rossini A., Rapozo D.C.M., Amorim L.M.F. et al. // Genet. Mol. Res. -2002.-Vol. l.-P. 233-240.

104. Gardner D.K. Changes in requirements and utilization of nutrients during mammalian preimplantation embryo development and their significance in embryo culture // Theriogenology. 1998. - Vol. 49. - P. 83-102.

105. Gardner D.K., Pool T.B., Lane M. Embryo nutrition and energy metabolism and its relationship to embryo growth, differentiation, and viability // Semin. Reprod. Med. 2000. - Vol. 18. - P. 205-218.

106. Gene expression regulating blastocyst formation / Watson A.J., Westhusin M.E., De Sousa P.A. et al. // Theriogenology. 1999. - Vol. 51. - P. 117-133.

107. Genetic polymorphisms influence the ovarian response to rFSH stimulation in patients undergoing in vitro fertilization programs with ICSI / Boudjenah R., Molina-Gomes D., Torre A. et al. // PLoS ONE. 2012. - Vol. 7. - P. e38700.

108. Genetic aspects of premature ovarian failure: a literature review / Cordis E.B., Christofolini D.M., Dos Santos A.A. et al. // Arch, Gynecol. Obstet. 2011. -Vol. 283.-P. 635-643.

109. Genetic predictors of controlled ovarian hyperstimulation: where do we stand today? / Altmae S., Hovatta O., Stavreus-Evers A. et al. // Hum. Reprod. Update. -2011.-Vol. 17.-P. 813-828.

110. Glutathione s-transferase Ml and T1 polymorphisms and the risk of recurrent pregnancy loss / Sata F., Yamada H., Kondo T. et al. // Mol. Hum. Reprod. -2003.-Vol. 9.-P. 165-169.

111. Glutathione concentration during maturation and after fertilization in pig oocytes: relevance to the ability of oocytes to form male pronucleus / Yoshida M., Ishigaki K., Nagai T. et al. // Biol. Reprod. 1993. - Vol. 49. - P. 89-94.

112. Goodman C., Jeyendran R.S., Coulam C.B. P53 tumor suppressor factor, plasminogen activator inhibitor, and vascular endothelial growth factor gene polymorphisms and recurrent implantation failure // Fertil. Steril. 2009. - Vol. 92. - P. 494-498.

113. Growth differentiation factor-9 is required during early ovarian folliculogenesis / Dong J., Albertini D.F., Nishimori K. et al. // Nature. 1996. -Vol. 383.-P. 531-535.

114. Grupen C.G., Nagashima H., Nottle M.B. Cysteamine enhances in vitro development of porcine oocytes matured and fertilized in vitro // Biol. Reprod. -1995.-Vol. 53.-P. 173-178.

115. Guo X., Ni P., Li L. Association between asthma and the polymorphism of hla-dq genes // Zhonghua Jie He He Hu Xi Za Zhi. 2001. - Vol. 24. - P. 139-141.

116. Guerin P., El Mouatassim S., Menezo Y. Oxidative stress and protection against reactive oxygen species in the pre-implantation embryo and its surroundings // Hum. Reprod. Update. 2001. - Vol. 7. - P. 175-189.

117. HIV controllers with hla-drbl*13 and hla-dqbl*06 alleles have strong, polyfunctional mucosal cd4+ T-cell responses / Ferre A.L., Hunt P.W., McConnell D.H. et al. // J. Virol. 2010. - Vol. 84. - P. 11020-11029.

118. HLA class I (a, b) and II (dr, dq) gene and haplotype frequencies in blood donors from wales / Darke C., Guttridge M.G., Thompson J. et al. // Exp. Clin. Immunogenet. 1998. - Vol. 15. - P. 69-83.

119. HLA class II allele frequencies in type la diabetes mellitus slovak patients / Shawkatova I., Michalkova D., Barak L. et al. // Bratisl Lek Listy. 2006. - Vol. 107.-P. 76-79.

120. HLA class II associations in juvenile graves' disease: indication of a strong protective role of the drbl*0701,dqal*0201 haplotype / Lavard L., Madsen H.O., Perrild H. et al. // Tissue Antigens. 1997. - Vol. 50. - P. 639-641.

121. HLA class II genotypic frequencies in atopic asthma: association of drbl*01-dqb 1*0501 genotype with artemisia vulgaris allergic asthma / Torio A., Sánchez-Guerrero I., Muro M. et al. // Hum. Immunol. 2003. - Vol. 64. - P. 811-815.

122. HLA-associated phenotypes in youth with autoimmune diabetes / Black M.H., Lawrence J.M., Pihoker C. et al. // Pediatr Diabetes. 2012.

123. HLA-drb, -dqa, and dqb alleles and haplotypes in iranian patients with diabetes mellitus type I / Rabbani A., Abbasi F., Taghvaei M. et al. // Pediatr Diabetes. 2012.

124. HLA-class II haplotype associations with ovarian cancer / Kübler K., Arndt P.F., Wardelmann E. et al. // Int. J. Cancer. 2006. - Vol. 119. - P. 2980-2985.

125. Haig D. Maternal-fetal interactions and MHC polymorphism // J. Reprod. Immunol. 1997. - Vol. 35. - P. 101-109.

126. Harvey A.J., Kind K.L., Thompson J.G. Redox regulation of early embryo 3 development // Reproduction. 2002. - Vol. 123. - P. 479-486.

127. Hereditary differences in the expression of the human glutathione transferase active on trans-stilbene oxide are due to a gene deletion / Seidegárd J., Vorachek W.R., Pero R.W. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1988. - Vol. 85. - P. 72937297.4

128. Hoek A., Schoemaker J. , Drexhage H.A. Premature ovarian failure and ovarian autoimmunity//Endocr. Rev. 1997. - Vol. 18. - P. 107-134.

129. Human controlled ovarian hyperstimulation outcome is a polygenic trait / de Castro F., Moron F.J., Montoro L. et al. // Pharmacogenetics. 2004. - Vol. 14. - P. 285-293.

130. Human decidual tissue contains differentiated cd8+ effector-memory T cells with unique properties / Tilburgs T., Schonkeren D., Eikmans M. et al. // J. Immunol. 2010. - Vol. 185. - P. 4470-4477.

131. Human first-trimester trophoblast cells recruit cd56brightcdl6- NK cells into decidua by way of expressing and secreting of cxcl 12/stromal cell-derived factor 1 / Wu X., Jin L., Yuan M. et al. // J. Immunol. 2005. - Vol. 175. - P. 61-68.

132. Human trophoblast invasion and spiral artery transformation: the role of pecam-1 in normal pregnancy, preeclampsia, and fetal growth restriction / Lyall F., Bulmer J.N., Duffie E. et al. // Am. J. Pathol. 2001. - Vol. 158. - P. 1713-1721.

133. Hungerford D.A. Leukocytes cultured from small inocula of whole blood and the preparation of metaphase chromosomes by treatment with hypotonic KC1 // Stain Technol. 1965. - Vol. 40. - P. 333-338.

134. Hunt J.S. , Langat D.L. HLA-G: a human pregnancy-related immunomodulator // Curr Opin Pharmacol. 2009. - Vol. 9. - P. 462-469.

135. Hunter A.G., Moor R.M. Stage-dependent effects of inhibiting ribonucleic acids and protein synthesis on meiotic maturation of bovine oocytes in vitro // J. Dairy Sci. 1987. - Vol. 70. - P. 1646-1651.

136. ISCN 2005. a system of human cytogenetic nomenclature. / Shaffer L.G., Tommerup N. (Eds.). Basel: Karger, 2004. - 130 p.

137. Identification of genes encoding mouse oocyte secretory and transmembrane proteins by a signal sequence trap / Tail R.A., Denegre J.M., Pendola F.L. et al. // Biol. Reprod. 2002. - Vol. 67. - P. 953-960.

138. Immunogenetic risk and protective factors for the idiopathic inflammatory myopathies: distinct hla-a, -b, -cw, -drbl, and -dqal allelic profiles distinguish european american patients with different myositis autoantibodies / O'Hanlon T.P.,

139. Carrick D.M., Targoff I.N. et al. // Medicine (Baltimore). 2006. - Vol. 85. - P. 111-127.

140. Indications for in vitro fertilization and embryo transfer / Campana A., Baierna M., Pescia G. et al. // J Genet Hum. 1984. - Vol. 32. - P. 235-241.

141. Inflammation and pregnancy: the role of the immune system at the implantation site / Mor G., Cardenas I., Abrahams V. et al. // Ann. N. Y. Acad. Sei. 2011. - Vol. 1221. - P. 80-87.

142. Interaction between hla-g and monocyte/macrophages in human pregnancy / Shakhawat A., Shaikly V., Elzatma E. et al. // J. Reprod. Immunol. 2010. - Vol. 85. - P. 40-46.

143. Investigation and treatment of repeated implantation failure following ivf-et / Margalioth E.J., Ben-Chetrit A., Gal M. et al. // Hum. Reprod. 2006. - Vol. 21. -P. 3036-3043.

144. Keramitsoglou T. Hla-dqal allele sharing between partners in different groups of subfertile couples // Am. J. Reprod. Immunol. 2004. - Vol. 51. - P. 494-495.

145. Krisher R.L., Bavister B.D. Enhanced glycolysis after maturation of bovine oocytes in vitro is associated with increased developmental competence // Mol. Reprod. Dev. 1999. - Vol. 53. - P. 19-26.

146. Krisher R.L. The effect of oocyte quality on development // J. Anim. Sei. -2004. Vol. 82 E-Suppl. - P. E14-23.

147. Kumänovics A., Takada T., Lindahl K.F. Genomic organization of the mammalian mhc // Annu. Rev. Immunol. 2003. - Vol. 21. - P. 629-657.

148. Lalioti M.D. Impact of follicle stimulating hormone receptor variants in fertility // Curr. Opin. Obstet. Gynecol. 2011. - Vol. 23. - P. 158-167.

149. Lane M. Mechanisms for managing cellular and homeostatic stress in vitro // Theriogenology. 2001. - Vol. 55. - P. 225-236.

150. Li L., Zheng P. , Dean J. Maternal control of early mouse development // Development. 2010. - Vol. 137. - P. 859-870.

151. Low oxygen tension during in vitro maturation is beneficial for supporting the subsequent development of bovine cumulus-oocyte complexes / Hashimoto S., Minami N., Takakura R. et al. // Mol. Reprod. Dev. 2000. - Vol. 57. - P. 353-360.

152. Levesque J.T., Sirard M.A. Effects of different kinases and phosphatases on nuclear and cytoplasmic maturation of bovine oocytes // Mol. Reprod. Dev. 1995. -Vol. 42.-P. 114-121.

153. MHC class II proteins and disease: a structural perspective / Jones E.Y., Fugger L., Strominger J.L. et al. // Nat. Rev. Immunol. 2006. - Vol. 6. - P. 271282.

154. Macrophages and apoptotic cell clearance during pregnancy / Abrahams V.M., Kim Y.M., Straszewski S.L. et al. // Am J Reprod Immunol. 2004. - Vol. 51. - P. 275-282.

155. Metabolic gene polymorphism frequencies in control populations / Garte S., Gaspari L., Alexandrie A.K. et al. // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2001. -Vol. 10.-P. 1239-1248.

156. Mikkelsen A.L., Smith S., Lindenberg S. Impact of oestradiol and inhibin a concentrations on pregnancy rate in in-vitro oocyte maturation // Hum. Reprod. -2000,-Vol. 15.-P. 1685-1690.

157. Milner C.M., Campbell R.D. Genes, genes and more genes in the human major histocompatibility complex// Bioessays. 1992. - Vol. 14. - P. 565-571.

158. Molecular and cytogenetic studies of an x;autosome translocation in a patient with premature ovarian failure and review of the literature / Powell C.M., Taggart R.T., Drumheller T.C. et al. // Am. J. Med. Genet. 1994. - Vol. 52. - P. 19-26.

159. Molecular characterization of the follicle defects in the growth differentiation factor 9-deficient ovary / Elvin J.A., Yan C., Wang P. et al. // Mol. Endocrinol. -1999.-Vol. 13.-P. 1018-1034.

160. Moor R. , Dai Y. Maturation of pig oocytes in vivo and in vitro // Reprod. Suppl. 2001. - Vol. 58. - P. 91-104.

161. Multi-marker assessment of ovarian reserve predicts oocyte yield after ovulation induction / Al-Azemi M., Killick S.R., Duffy S. et al. // Hum. Reprod. -2011.-Vol. 26.-P. 414-422.

162. Menezo Y., Guerin P. Gamete and embryo protection against oxidative stress during medically assisted reproduction // Bull. Acad. Natl. Med. 2005. - Vol. 189. - P. 715-26; discussion 726-8.

163. Nebert D.W., Carvan M.J. Ecogenetics: from biology to health // Toxicol. Indust. Hlth. 1997. - Vol. 13. - P. 163-192.

164. Nelson L.M. Clinical practice. Primary ovarian insufficiency // N. Engl. J. Med. 2009. - Vol. 360. - P. 606-614.

165. Novel strategy with potential to identify developmentally competent IVF blastocysts / Jones G.M., Cram D.S., Song B. et al. // Hum. Reprod. 2008. - Vol. 23.-P. 1748-1759.

166. Ober C. Studies of HLA, fertility and mate choice in a human isolate // Hum. Reprod. Update. 1999. - Vol. 5. - P. 103-107.

167. Oocyte maturation / Trounson A., Anderiesz C., Jones G.M. et al. // Hum. Reprod. 1998. - Vol. 13 Suppl 3. - P. 52-62; discussion 71-5.

168. Orsi N.M. , Leese H.J. Protection against reactive oxygen species during mouse preimplantation embryo development: role of edta, oxygen tension, catalase, superoxide dismutase and pyruvate // Mol. Reprod. Dev. 2001. - Vol. 59.-P. 44-53.I

169. Outcomes of ivf-et and percentage of morphologically normal sperm before and after swim-up treatment / Zhou Y., Pan B., He L. et al. // Zhonghua Nan Ke Xue. 2012. - Vol. 18. - P. 527-530.

170. Ovarian reserve evaluation: state of the art / de Carvalho B.R., Rosa e Silva A.C., Rosa e Silva J.C. et al. // J. Assist. Reprod. Genet. 2008. - Vol. 25. - P. 311-322.

171. Ovarian response to follicle-stimulating hormone (FSH) stimulation depends on the FSH receptor genotype / Perez Mayorga M., Gromoll J., Behre H.M. et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 2000. - Vol. 85. - P. 3365-3369.

172. Ovarian volume may predict assisted reproductive outcomes better than follicle stimulating hormone concentration on day 3 / Syrop C.H., Dawson J.D., Husman K.J. et al. // Hum. Reprod. 1999. - Vol. 14. - P. 1752-1756.

173. Pacifici GV. Advances in drug metabolism in man. Brussels; Luxembourg: Europ. Comis., 1995. - 834 p.

174. Pandey M.K., Saxena V., Agrawal S. Characterization of mixed lymphocyte reaction blocking antibodies (mlr-bf) in human pregnancy // BMC Pregnancy Childbirth. 2003. - Vol. 3. - P. 2.

175. Park D., Yang K. Hormonal regulation of uterine chemokines and immune cells // Clin Exp Reprod Med. 2011. - Vol. 38. - P. 179-185.

176. Pavlok A., Lucas-Hahn A., Niemann H. Fertilization and developmental competence of bovine oocytes derived from different categories of antral follicles // Mol. Reprod. Dev. 1992. - Vol. 31. - P. 63-67.

177. Pemble S.E., Taylor J.B. An evolutionary perspective on glutathione transferases inferred from class-theta glutathione transferase cdna sequences // Biochem. J. 1992. - Vol. 287 ( Pt 3). - P. 957-963.

178. Pepper M.S. Role of the matrix metalloproteinase and plasminogen activator-plasmin systems in angiogenesis // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2001. - Vol. 21.-P. 1104-1117.

179. Pharmacogenetics in ovarian stimulation—current concepts / Loutradis D., Vlismas A., Drakakis P. et al. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2008. - Vol. 1127. - P. 1019.

180. Pijnenborg R., Vercruysse L., Hanssens M. The uterine spiral arteries in human pregnancy: facts and controversies // Placenta. 2006. - Vol. 27. - P. 939958.

181. Plaisier M. Decidualisation and angiogenesis // Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. 2011. - Vol. 25. - P. 259-271.

182. Polymorphisms in biotransformation enzymes and the risk for recurrent early pregnancy loss I Zusterzeel P.L., Nelen W.L., Roelofs H.M. et al. // Mol. Hum. Reprod. 2000. - Vol. 6. - P. 474-478.

183. Possible role for tnf-alpha in early embryopathy associated with maternal diabetes in the rat / Pampfer S., Vanderheyden I., Wuu Y.D. et al. // Diabetes. -1995.-Vol. 44.-P. 531-536.

184. Pregnancy prediction models and eset criteria for ivf patients do we need more information? / Ottosen L.D.M., Kesmodel U., Hindkjaer J. et al. // J. Assist. Reprod. Genet. - 2007. - Vol. 24. - P. 29-36.

185. Proportion of the GSTM1 0/0 genotype in some Slavic populations and its correlation with cystic fibrosis and some multifactorial diseases / Baranov V.S., Ivaschenko T., Bakay B. et al. // Hum. Genet. 1996. - Vol. 97. - P. 516-520.

186. Protein synthesis and phosphorylation patterns of bovine oocytes maturing in vivo / Kastrop P.M., Bevers M.M., Destree O.H. et al. // Mol. Reprod. Dev. 1991. -Vol. 29.-P. 271-275.

187. Quinn P., Wales R.G. The relationships between the atp content of preimplantation mouse embryos and their development in vitro during culture // J. Reprod. Fertil. 1973. - Vol. 35. - P. 301-309.

188. Reconstructing an ancestral mammalian immune supercomplex from a marsupial major histocompatibility complex / Belov K., Deakin J.E., Papenfuss A.T. et al. // PLoS Biol. 2006. - Vol. 4. - P. e46.

189. Relevance of basal serum FSH to IVF outcome varies with patient age / Sabatini L., Zosmer A., Hennessy E.M. et al. // Reprod. Biomed. Online. 2008. -Vol. 17. - P. 10-19.

190. Rescue of IVF cycles by hmg in pituitary down-regulated normogonadotrophic young women characterized by a poor initial response to recombinant FSH / De Placido G., Mollo A., Alviggi C. et al. // Hum. Reprod. -2001.-Vol. 16.-P. 1875-1879.

191. Rhodes D., Trowsdale J. Genetics and molecular genetics of the MHC. -Combridge, 1998.

192. Rieger D., Loskutoff N.M. Changes in the metabolism of glucose, pyruvate, glutamine and glycine during maturation of cattle oocytes in vitro // J. Reprod. Fértil. 1994. - Vol. 100. - P. 257-262.

193. Robertson S.A., Lavranos T.C., Seamark R.F. The molecular and cellular immunobiology of the maternal-fetal interface. Oxford University Press, New York, 1991.-P. 191-206.

194. Robertson S.A., Brannstrom M., Seamark R.F. Cytokines in rodent reproduction and the cytokine-endocrine interaction // Curr. Opin. Immunol. -1992. Vol. 4. - P. 585-590.

195. Role of follicle-stimulating hormone receptor ser680asn polymorphism in the efficacy of follicle-stimulating hormone / de Castro F., Ruiz R., Montoro L. et al. // Fértil. Steril. 2003. - Vol. 80. - P. 571-576.

196. Salamonsen L.A. Role of proteases in implantation // Rev. Reprod. 1999. -Vol. 4.-P. 11-22.

197. Salmon A.B., Richardson A. , Pérez V.I. Update on the oxidative stress theory of aging: does oxidative stress play a role in aging or healthy aging? // Free Radie. Biol. Med. 2010. - Vol. 48. - P. 642-655.

198. Schultz R.M. Molecular aspects of mammalian oocyte growth and maturation // Experimental Approaches to Mammalian Embryonic Development. J. Rossant and R. A. Pedersen. 1986. - P. 195-237.

199. Selection based on morphological assessment of oocytes and embryos at different stages of preimplantation development: a review / Ebner T., Moser M., Sommergruber M. et al. // Hum. Reprod. Update. 2003. - Vol. 9. - P. 251-262.

200. Self/nonself perception, reproduction and the extended mhc / Ziegler A., Santos P.S.C., Kellermann T. et al. // SelfNonself. 2010. - Vol. 1. - P. 176-191.

201. Sharma V., Allgar V., Rajkhowa M. Factors influencing the cumulative conception rate and discontinuation of in vitro fertilization treatment for infertility // Fertil. Steril. 2002. - Vol. 78. - P. 40-46.

202. Shelling A.N. X chromosome defects and premature ovarian failure // Aust N Z J Med. 2000. - Vol. 30. - P. 5-7.

203. Sterneck E., Tessarollo L., Johnson P.F. An essential role for c/ebpbeta in female reproduction // Genes Dev. 1997. - Vol. 11. - P. 2153-2162.

204. Stewart C.L. Leukaemia inhibitory factor and the regulation of preimplantation development of the mammalian embryo // Mol. Reprod. Dev. 1994. -Vol. 39.-P. 233-238.

205. Stimulation of glutathione synthesis of in vitro matured bovine oocytes and its effect on embryo development and freezability / de Matos D.G., Furnus C.C., Moses D.F. et al. // Mol. Reprod. Dev. 1996. - Vol. 45. - P. 451-457.

206. Strandell A., Bergh C., Lundin K. Selection of patients suitable for one-embryo transfer may reduce the rate of multiple births by half without impairment of overall birth rates // Hum. Reprod. 2000. - Vol. 15. - P. 2520-2525.

207. Stressful life events are associated with a poor in-vitro fertilization (IVF) outcome: a prospective study / Ebbesen S.M.S., Zachariae R., Mehlsen M.Y. et al. // Hum. Reprod. 2009. - Vol. 24. - P. 2173-2182.

208. Structural changes in bovine oocytes during final maturation in vivo / Kruip T.A.M., Cran D.G., van Beneden T.H. et al. // Gamete Res. 1983. - Vol. 8. - P. 29-47.

209. Structure, function and evolution of glutathione transferases: implications for classification of non-mammalian members of an ancient enzyme superfamily / Sheehan D., Meade G., Foley V.M. et al. // Biochem. J. 2001. - Vol. 360. - P. 116.

210. Suboptimal response to gnrha long protocol is associated with a common lh polymorphism / Alviggi C., Clarizia R., Pettersson K. et al. // Reprod. Biomed. Online. 2009. - Vol. 18. - P. 9-14.

211. Successful in vitro maturation of human oocytes not exposed to human chorionic gonadotropin during ovulation induction, resulting in pregnancy / Liu J., Katz E., Garcia J.E. et al. // Fertil. Steril. 1997. - Vol. 67. - P. 566-568.

212. Synthesis, purification and structural and functional characterization of recombinant form of a common genetic variant of human luteinizing hormone / Manna P.R., Joshi L., Reinhold V.N. et al. // Hum. Mol. Genet. 2Û02. - Vol. 11.-P. 301-315.

213. Tarin J.J. Potential effects of age-associated oxidative stress on mammalian oocytes/embryos // Mol. Hum. Reprod. 1996. - Vol. 2. - P. 717-724.

214. Temporal patterns of embryonic gene expression and their dependence on oogenetic factors / De Sousa P.A., Caveney A., Westhusin M.E. et al. // Theriogenology. 1998. - Vol. 49. - P. 115-128.

215. The FMR1 premutation and reproduction. / Wittenberger M.D., Hagerman R.J., Sherman S.L. et al. // Fertil Steril. 2007. Vol. 3. - P. 456-465.

216. The GSTM1 null genotype confers an increased risk for solar keratosis development in an australian caucasian population / Carless M.A., Lea R.A., Curran J.E. et al. // J. Invest. Dermatol. 2002. - Vol. 119. - P. 1373-1378.

217. The effects of oxidative stress on female reproduction: a review / Agarwal A., Aponte-Mellado A., Premkumar B.J. et al. // Reprod. Biol. Endocrinol. 2012. -Vol. 10.-P. 49.

218. The impact of the woman's age on the success of standard and donor in vitro fertilization / Stolwijk A.M., Zielhuis G.A., Sauer M.V. et al. // Fertil. Steril. -1997.-Vol. 67.-P. 702-710.

219. The nature of selection on the major histocompatibility complex / Apanius V., Penn D., Slev P.R. et al. // Crit. Rev. Immunol. 1997. - Vol. 17. - P. 179-224.

220. Therman E., Laxova R., Susman B. The critical region on the human xq // Hum. Genet. 1990. - Vol. 85. - P. 455-461.

221. Thompson J.G. Comparison between in vivo-derived and in vitro-produced pre-elongation embryos from domestic ruminants // Reprod. Fertil. Dev. 1997. -Vol. 9.-P. 341-354.

222. Timing of nuclear progression and protein synthesis necessary for meiotic maturation of bovine oocytes / Sirard M.A., Florman H.M., Leibfried-Rutledge M.L. et al. //Biol. Reprod. 1989. - Vol. 40. - P. 1257-1263.

223. Trophoblast- and vascular smooth muscle cell-derived mmp-12 mediates elastolysis during uterine spiral artery remodeling / Harris L.K., Smith S.D., Keogh R.J. et al. // Am. J. Pathol. 2010. - Vol. 177. - P. 2103-2115.

224. Trophoblast-macrophage interactions: a regulatory network for the protection of pregnancy / Fest S., Aldo P.B., Abrahams V.M. et al. // Am J Reprod Immunol. 2007. - Vol. 57. - P. 55-66.

225. Trounson A., Wood C., Kausche A. In vitro maturation and the fertilization and developmental competence of oocytes recovered from untreated polycystic ovarian patients // Fertil. Steril. 1994. - Vol. 62. - P. 353-362.

226. Trounson A., Anderiesz C., Jones G. Maturation of human oocytes in vitro and their developmental competence // Reproduction. 2001. - Vol. 121. - P. 5175.

227. Tumour necrosis factor alpha inhibits in-vitro decidualization of human endometrial stromal cells / Inoue Т., Kanzaki H., Iwai M. et al. // Hum. Reprod. -1994.-Vol. 9.-P. 2411-2417.

228. Ultrastructural studies of implantation sites from mice deficient in uterine natural killer cells / Greenwood J.D., Minhas K., di Santo J.P. et al. // Placenta. -2000,-Vol. 21.-P. 693-702.

229. Ultrastructure of in-vitro oocyte maturation in cattle / Hyttel P., Xu K.P., Smith S. et al. // J. Reprod. Fertil. 1986. - Vol. 78. - P. 615-625.

230. Use of serum inhibin a and human chorionic gonadotropin measurements to predict the outcome of in vitro fertilization pregnancies / Hauzman E., Fedorcsak P., Klinga K. et al. // Fertil. Steril. 2004. - Vol. 81. - P. 66-72.

231. Van Blerkom J., Davis P.W., Lee J. Atp content of human oocytes and developmental potential and outcome after in-vitro fertilization and embryo transfer // Hum. Reprod. 1995. - Vol. 10. - P. 415-424.

232. Van der Auwera I., D'Hooghe T. Superovulation of female mice delays embryonic and fetal development // Hum. Reprod. 2001. - Vol. 16. - P. 12371243.

233. Welt C.K. Primary ovarian insufficiency: a more accurate term for premature ovarian failure // Clin. Endocrinol. (Oxf). 2008. - Vol. 8(4). - P. 499-509.

234. Wickramasinghe D., Albertini D.F. Cell cycle control during mammalian oogenesis // Curr. Top. Dev. Biol. 1993. - Vol. 28. - P. 125-153.

235. Wiebel F.A., Dommermuth A., Thier R. The hereditary transmission of the glutathione transferase hgsttl-1 conjugator phenotype in a large family // Pharmacogenetics. 1999. - Vol. 9. - P. 251-256.

236. Wilce M.C., Parker M.W. Structure and function of glutathione S-transferases // Biochim. Biophys. Acta. 1994. - Vol. 1205. - P. 1-18.j^ y

237. Zech N., Zech H. Controlled ovarian stimulation in IVF program // Probl. of Reprod. 1998. - Vol. 5. - P. 59-65.

Информация о работе

Липин, Михаил Александрович
кандидата медицинских наук
Москва, 2012
ВАК 03.02.07

Диссертация

Полиморфизм генов системы детоксикации и НLA II класса супружеской пары на этапах экстракорпорального оплодотворения - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы