Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Полиморфизм гена RYR1 в популяциях свиней мясной пород

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Рыжова, Наталья Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

Раздел I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Синдром стресса у свиней.

1.1.1. Физиолого-биохимические параметры стресса у свиней.

1.1.2. Роль ионов кальция в развитии стресса у свиней.

1.1.3. Молекулярно-генетическая природа стресса у свиней.

1.2. Методы диагностики стрессчувствительности свиней.

1.2.1. Генетический метод диагностики стрессчувствительности свиней.

1.2.2. Альтернативные методы определения предрасположенности свиней к стрессу.

Раздел II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

2.1 .МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИИ.

2.2 .РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2.1. Оптимизация метода ДНК-диагностики генотипов свиней по локусу гена RYR1.

2.2.2. Полиморфизм гена RYR1 и генетическая структура популяций свиней мясных пород.

2.2.3. Продуктивные и воспроизводительные качества гетерозиготных свиней - носителей мутантного аллеля гена RYRI.

2.2.4. Наличие аллелей А- и Н-систем групп крови у свиней различных генотипов по локусу гена RYR1.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Полиморфизм гена RYR1 в популяциях свиней мясной пород"

Для удовлетворения спроса населения на мясную свинину уже три десятилетия применяются селекционные программы, направленные на разведение свиней с хорошим развитием спинной части и окорока и одновременным уменьшением содержания жира в туше. За эти годы в мире создан и апробирован целый ряд новых типов, линий, пород свиней. В нашей стране разводят такие новые типы мясных свиней, как: ДМ-1, КМ-1, ПМ-1, ММ-1, ЭКБ-1, УКБ-1, БКБ-1 (Кабанов В.Д. и др, 1983). Необходимо отметить, что при выведении новых отечественных мясных типов свиней в той или иной мере использовали генофонд зарубежных супермясных пород (пьетрен; датский, бельгийский, голландский ландрас; гемпшир; уэлльс и т.д.).

Свиньи новых мясных пород в целом характеризуются хорошими откормочными и мясными качествами. Между тем, в популяциях свиней новых мясных пород постоянно присутствует определенный процент животных, сочетающих в себе хорошие мясные кондиции с плохим качеством мяса и недостатками в конституции. Было установлено, что селекция по созданию пород свиней с мясным типом продуктивности сопровождается определенными негативными последствиями. Исследования показали наличие положительной корреляции между селекцией на мясную продуктивность и плохими адаптационными качествами свиней; животные с высокой долей мяса в туше и хорошими мясными кондициями имели повышенную чувствительность к стрессам (Булла Й. и др., 1984; Максимов Г.В.,1985; Никитченко И.Н.,1987; Плященко С.И., Сидоров В.Т.,1987; Максимов Г.В. и др., 1990).

Предрасположенность свиней к стрессам имеет генетическую природу, затрагивающую галотановый локус. В нем расположен комплекс генов, кодирующих информацию о белках и ферментах, синтезирущихся в организме свиньи в ответ на действие наркоза галотана или различных стрессфакторов.

Исследования галотанового локуса с помощью различных методов молекулярной биологии, в том числе метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) и метода полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ), позволили выявить мутацию в рианодин - рецепторном гене (RYRl-ген), входящем в этот локус. Показано, что мутация в RYR-гене является причиной чрезмерно острой реакции свиней на стресс - злокачественного гипертермического синдрома (MHS - malignant hyperthermia syndrome).

Общие потери поголовья свиней от стресса определить трудно. Однако ясно, что он может вести к экономическому ущербу за счет плохого качества свинины и внезапной смерти (Тарасов И.И., 1982). Основные потери животных наблюдаются при транспортном стрессе (Van Den Hende, 1979). Свиноводство США ежегодно из-за ухудшения качества свинины теряет 32 млн. долларов (Максимов Г.В., 1995). Различия в уровне потерь между странами зависят не только от условий транспортировки, но и от генетического состава животных.

В Европе принята новая классификация убойных туш свиней (SEUROP), в которой уделяется пристальное внимание качеству мяса в связи с предрасположенностью к стрессам свиней мясных пород. Согласно требованиям SEUROP хряки-производители мясных пород, используемые в целях селекции и воспроизводства, не должны быть носителями мутантного аллеля reHaRYRl.

В связи с этим, проблема отбора свиней мясного направления продуктивности по признаку генетической устойчивости к стрессам с помощью методов молекулярной генетики является актуальной.

Одним из современных и адекватных методов изучения предрасположенности животных к стрессу является генетический тест, работающий непосредственно на уровне молекулярной основы наследственности - структуры дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК). Этот тест позволяет выявить мутацию в гене RYR1, связанную с предрасположенностью свиней к стрессам.

Целью настоящей работы является оценка полиморфизма гена RYR1 в популяциях свиней мясного направления продуктивности, разводимых в разных регионах Российской Федерации, с помощью ДНК- диагностики. Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Повысить эффективность ДНК-диагностики и адаптировать метод поли-меразной цепной реакции к требованиям массового анализа;

2. Определить полиморфизм гена RYR1 и особенности генетической структуры популяций свиней мясных пород в различных регионах Российской Федерации;

3. Дать оценку полиморфизма RYRl-гена в популяциях свиней мясного типа продуктивности в зависимости от пола и возраста;

4. Выявить связь между аллелями систем групп крови А- и Н- и генотипами животных по локусу гена RYR1;

5. Оценить продуктивные и воспроизводительные качествам свиней различных генотипов по локусу гена RYR1.

Научная новизна. Все представленные в диссертации данные были получены впервые. Выявлен полиморфизм гена RYR1 в популяциях свиней скороспелой мясной породы (СМ-1), крупной белой породы эстонской селекции мясного направления, разводимых в Липецкой и Ивановской областях, в республике Чувашия Российской Федерации, а также свиней цивильской породы в республике Чувашия. Дана оценка частоты встречаемости мутантного аллеля гена RYR1 в исследованных популяциях свиней. Частота встречаемости мутантного аллеля п определена для свиней разного пола и разных возрастных групп. Проведен сравнительный анализ продуктивности и воспроизводительных качеств гетерозиготных свиней - носителей мутантного аллеля гена RYR1 и гомозиготных нормальных животных по гену RYR1. Сопоставлены результаты иммуногенетического и молекулярно-генетического метода по определению стрессчувствительности у свиней породы крупная белая эстонской селекции мясного направления продуктивности.

Практическая значимость. Материалы исследований включены в методические рекомендации по использованию ДНК-технологий для оценки генома сельскохозяйственных животных (Калашникова JI.A. и др., 1999).

Полученные данные о полиморфизме гена RYR1 в популяциях свиней мясных пород служат основой разведения свиней, генетически устойчивых к действию стрессфакторов. Проведённые исследования позволили определить продуктивные возможности животных - носителей дефектного аллеля гена RYR1 в составе гетерозиготного генотипа. Информацию о частоте мутантно-го аллеля п гена RYR1 и генотипах конкретных животных можно эффективно использовать для отбора и подбора свиней с целью создания стад мясных животных, свободных от груза злокачественного гипертермического синдрома.

Результаты научных исследований используются для решения конкретных селекционных задач в хозяйствах Ивановской области при формировании стад мясного направления продуктивности.

На защиту выносятся следующие положения:

- модификации метода ДНК-диагностики, повышающие его эффективность и адаптацию для массового анализа;

- новые данные о полиморфизме гена RYR1 и генетической структуре популяций свиней мясных пород различных регионов Российской Федерации. Оценка полиморфизма RYR1 гена у свиней мясного типа продуктивности в зависимости от пола и возраста;

- данные анализа продуктивных и воспроизводительных качеств свиней различных генотипов по гену RYR1 свидетельствуют о том, что гетерози7 готные носители мутантного аллеля не уступают нормальным гомозиготным животным по изученным показателям; - сравнительный анализ эффективности иммуногенетического и молекуляр-но-генетического тестов показал преимущества метода ДНК-диагностики при определении стрессчувствительности у свиней;

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены на ежегодных отчетах лаборатории биохимической генетики; на заседаниях Учёного Совета ВНИИплем в 1995-2001гг.; на 2-й Международной конференции по молекулярно-генетическим маркерам (Киев, 1996 г.); на Международной научно-практической конференции по повышению эффективности ведения свиноводства (Быково, 1999 г.); на 3-й Международной конференции по актуальным проблемам животноводства (Боровск, 2000 г.); на Международной ежегодной конференция ЕАЖ (Гаага, 2000 г.); на Всероссийском совещании по координации селекционно-племенной работы в породах сельскохозяйственных животных (ВНИИплем, 2001 г.);

Публикации результатов исследований. По результатам диссертационной работы опубликовано 11 статей в материалах Международных конференций, журналах "Доклады РАСХН", "Вестник РАСХН" и сборниках научных трудов ВНИИплем.

Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных", Рыжова, Наталья Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Оптимизация параметров ПЦР-ПДРФ (температура отжига - 60°) позволяет с высокой степенью эффективности выявлять мутантный аллель RYR1-гена. Модификации метода, направленные на снижение количеств дорогостоящих реактивов (выделение ДНК из крови без использования протеиназы, РНКазы и снижение концентрации праймеров в 2 раза), существенно снижают затраты на реактивы (на 20%).

2. Популяции животных скороспелой мясной породы СМ1, крупной белой породы эстонской селекции мясного направления и ландрас являются полиморфными по локусу гена RYR1. Ген представлен двумя аллелями: N -нормальный аллель, и п - аллель с точечной мутацией в позиции 1843 (замена нуклеотида С на Т). Во всех исследованных стадах обнаружены животные - носители мутантного аллеля RYRl-гена в составе гетерозиготного генотипа.

3. Частота встречаемости дефектного аллеля у животных скороспелой мясной породы составляет в среднем 0,042. Для свиней крупной белой породы эстонской селекции мясного направления частота аллеля п достигает того же уровня и составляет в среднем 0,040. Для породы ландрас эта величина в среднем равна 0,025. Анализ генетической структуры популяций показал, что у свиней скороспелой мясной породы частота генотипа Nn в среднем - 8,43%, у животных крупной белой породы мясного направления - 8,08%, ландрас - 5,26% соответственно. Гомозиготные мутантные генотипы не выявлены. У животных цивильской породы мутантный аллель гена RYR1 не обнаружен, все животные обладали генотипом NN.

4. Установлены существенные различия частоты встречаемости мутантного аллеля гена RYRly животных крупной белой породы эстонской селекции мясного направления в разных стадах и регионах Российской Федерации. Частота встречаемости дефектного аллеля у свиней в Чувашской республике 0,012 , в то время как в хозяйствах Ивановской области она колеблется от 0,033 до 0,059 .

5. Выявлены различия частоты встречаемости мутантного аллеля в зависимости от пола животных. У хряков породы СМ1 частота мутантного аллеля в 2,6 раза выше таковой у свиноматок этой же породы. У хряков породы крупная белая наблюдалась частота мутантного аллеля в 4 раза выше таковой у свиноматок. Анализ генотипов животных разных возрастных групп показал, что частота встречаемости мутантного аллеля сохраняется в последующих поколениях и примерно соответствует среднему значению по породе в целом. У племенного молодняка породы СМ1 она равна 0,034, крупной белой- 0,042 .

6. Показана возможность широкого распространения мутации RYRl-гена в стаде при интенсивном использовании хряка - скрытого носителя генетического дефекта в составе гетерозиготного генотипа. Хряк Тайка №1785 в течение двух лет использования в одном стаде произвел более 400 потомков, из которых половина являются носителями мутантного аллеля. Установлены факты передачи дефектного аллеля от родителей потомкам.

7. Гетерозиготные хряки - производители по показателям оценки экстерьера, продуктивным качествам не отличаются от хряков-производителей, имеющих гомозиготный доминантный генотип NN по гену RYR1.

8. Наличие мутантного аллеля n RYR1- гена не оказало отрицательного влияния на показатели роста поросят и воспроизводительные способности свиноматок с генотипом Nn.

9. Генотип NN, определяющий стрессустойчивый фенотип свиней, более всего связан с экспрессией белков, определяющих локус А (74,07% животных), а также с отсутствием экспрессии белков системы Н групп крови (59,25%). У 10% свиней с генотипом NN наблюдали генотип а/- Н-системы групп крови. У 74,07% свиней с генотипом NN наблюдали сочетания А- и Н- систем групп крови с экспрессией белков. У 26,93% животных генотипа NN отсутствовала экспрессия белков как А- так и Н - систем групп крови. Среди них 2,47% свиней обладало сочетанием генотип -/- системы А-групп крови и генотип а/- системы Н групп крови.

10. Невозможно отличить свиней с генотипом Nn по RYRl-гену от свиней с генотипом NN, по А- и Н- системам групп крови групп крови, а также по их сочетаниям.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Предложенный вариант метода ДНК-диагностики предрасположенности свиней к стрессу удобен для массового анализа и рекомендуется для генетической оценки племенных животных.

Поскольку RYRl-ген связан не только с предрасположенностью свиней к стрессу, но и с качеством мяса, информация об изменчивости гена RYR1 в популяциях свиней должна быть положена в основу селекционных программ по выведению стрессустойчивых пород свиней мясного направления.

1.

2.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В течение последнего десятилетия был достигнут значительный прогресс в определении участков генома и генов свиней, связанных с такими продуктивными качествами животных, как рост, развитие, качество мяса, параметры туши. Первые успехи в генетическом картировании данных локусов описаны в работе Andersson L. и др.(1994). Несколько лет спустя был опубликован перечень генов-кандидатов и результаты сравнительного картирования генов, кодирующих хозяйственно полезные признаки свиней (Rotshchild M.F.,1998). Наиболее изученные из них в настоящее время является ген RYR1.

В России продолжается работа по созданию пород свиней мясного типа продуктивности, закупаются животные мясных пород за рубежом. При отборе свиней для этих целей, в группу животных с хорошими мясными кондициями отбираются не только здоровые свиньи, но и те, у которых постное мясо обусловлено наследственным дефектом - мутацией в ген RYR1. Установлено, что 95% свиней с гомозиготным рецессивным генотипом nn по гену RYR1 проявляют признаки MHS и имеют плохое качество мяса.

Эта мутация измейяет рианодин-рецепторный белок. В результате при действии стресса в организме свиньи с наследственным заболеванием начинают протекать реакции, характеризующиеся повышенным метаболизмом. Свиньи, склонные к MHS, отличаются постным мясом с низким содержанием жира.

Одним из современных методов, выявляющим мутацию в гене RYR1 или полиморфизм данного гена и вместе с тем предрасположенность животных к стрессу, является генетический тест, работающий непосредственно на уровне молекулярной основы наследственности - структуры дезоксирибонук-леиновой кислоты (ДНК).

Во всех исследованных нами популяциях свиней, разводимых в различных регионах РФ, был обнаружен полиморфизм гена RYR1. Ген представлен двумя аллелями: N - нормальный аллель, и п - аллель с точковой мутацией в позиции 1843 (замена нуклеотида С на Т). Во всех исследованных стадах обнаружены животные - носители мутантного аллеля RYRl-гена в составе гетерозиготного генотипа. Выявлено 8,43% гетерозиготных носителей мутантного гена RYR1 в породе СМ1, при этом частота аллеля п составила 0,042. В породе крупной белой мясного направления селекции таких животных в среднем 8,08%, частота п - 0,040. Для породы ландрас эти величины оказались равными в среднем 5,26% и 0,026, соответственно. Такое количество животных - носителей мутантного аллеля гена RYR1 достаточно, чтобы он проявился у последующих поколениях свиней.

Известно, что свиней с гетерозиготным генотипом Nn по гену RYR1 нельзя выявить с помощью фенотипических тестов (Никитченко И.Н., 1987; Свинтицкий Н.К., 1985; Kyril J., 1992). К таким тестам относятся: галотановый, иммуногенетический и биохимический - по полиморфным системам белков крови, для которых установлена связь с чувствительностью животных к стрессу. Определяют генотипы систем Аи Н групп крови, генотипы полиморфных белков Phi,Po?; Pgd, а затем делают заключение о предрасположенности свиней к стрессу (Kyril J., 1992).

По нашим данным оказалось, что животные с генотипом Nn имеют а/генотип системы А групп крови и генотип -/- системы Н групп крови, как и 40,74% животных с генотипом NN (Рыжова Н.В., Калашникова JI.A.,2001).

ДНК - диагностика позволяет точно выявить гетерозиготный генотип

Nn.

По зарубежным источникам (M.Simon, Т. Hardge и др.,1997; Hardge Т. и Gregor G.,1994) и по нашим данным (Рыжова Н.В., Калашникова JI.A.,2001) гетерозиготные хряки и свиноматки имеют хорошие экстерьерные и продуктивные показатели, которые не отличаются от таковых показателей хряков и свиноматок с генотипом NN. Следовательно, животные с гетерозиготным генотипом и хорошими экстерьерными и продуктивными показателями будут беспрепятственно отбираться в группу основных хряков и свиноматок и участвовать в воспроизводстве стад. Это приведет к увеличению количества животных - носителей мутантного аллеля гена RYR1 в популяциях свиней мясных пород. Нашими исследованиями установлено, что один хряк - производитель, обладающий генотипом Nn, может произвести в стаде за короткий срок более 400 потомков, половина из которых будут являться носителями аллеля гена RYR1 с мутацией. При этом все гетерозиготные потомки имеют высокий шанс выжить, так как наши исследования не показали отрицательного влияния аллеля п на их физическое развитие.

Мониторинг племенных животных на полиморфизм гена RYR1 с помощью ДНК- тестирования поможет остановить этот процесс и регулировать количество животных с желательным стрессустойчивым генотипом.

Установлена связь гена RYR1 с-тус прото-онкогеном (Reiner G. и др, 1999). Это фактор, участвующий в пролиферации, дифференциации различных тканей, в том числе и в развитии мышечного волокна. Две посреднические системы связаны с активацией с-шус: ионы кальция и цАМФ. Стресс-чувствительные свиньи показывают высокий уровень бета-саркоплазматических рецепторов, цАМФ и увеличение уровня ионов кальция в саркоплазме. Существует связь между с-тус и RYR1 генотипами, которая имеет характер эпистаза.

Работа с геном RYR1 будет развиваться в направлении определения его взаимосвязи с другими генами и совместного их влияния на количественные и качественные признаки животных.

Кроме картирования генов, другим подходом к изучению генома свиней является выявление профилей экспрессии и дальнейшее изучение генов, ответственных за искомые фенотипические признаки. В основе такого подхода лежит метод RT-PCR (обратной транскриптазно-полимеразной реакции), впервые описанный Liang P., Pardee А.В. (1992), который уже позволил установить ряд участков генома свиней, экспрессирующих белки, связанные с такими продуктивными признаками, как площадь мышечного глазка (Li M.D.h др. 1996; Clouscard-Mastinato С. и др., 1998).

Количество известных генов-кандидатов и анонимных участков генома, связанных с хозяйственно-полезными признаками свиней, растет. По мере изучения данных генов и участков генома, они могут быть использованы для ведения селекционных работ в популяциях свиней.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Рыжова, Наталья Владимировна, п. Лесные Поляны, Московской обл.

1. Безенко С.П. Методические рекомендации по определению происхождения свиней на основе анализа наследственных антигенов эритроцитов // Дубровицы ,-ВИЖ,- 1974г.-25С.

2. Брэм Г., Бренинг Б. Использование в селекции свиней молекулярной генной диагностики злокачественного гипертермического синдрома (MHS) // Генетика,- 1993,- т 29,- № 6,- С. 1009-1013.

3. Булла Е., Полтарскы Я., Зленик Я., Маерчьяк П. Диагностирование синдрома вредной гипертермии свиней // Свиноводство.- 1984.- №9,- С.35-36.

4. Голиков А.Н., Базанова Н.У., Кожебеков З.К. и др. Физиология с.-х. животных // М,- Агропромиздат.-1991.

5. Дунин И.М., Калашникова Л.А., Глазко В.И., Голубина Е.П., Рыжова Н.В. ДНК-технологии оценки сельскохозяйственных животных // Изд. ВНИИплем, 1999,- 147 С.

6. Кабанов В.Д., Корнеев П.Н., Горин В.В. и др. Откормочные и мясосаль-ные качества свиней новых специализированных типов // Свиноводство. -1983. -12,- С.16-17.

7. Калашникова Л.А., Рыжова Н.В., Гупалов Н.В. Генная диагностика стрессчувствительности свиней // Тезисы докладов 2-й Международной конференции "Молекулярно-генетические маркеры животных",- Киев,-1996,- С.10.

8. КнязевВ.Д., Хардге Т., Жучаев К.В. Молекулярно-генетический скрининг сибирских популяций свиней: местные породы не отягощены наследственным грузом злокачественной гипертеримии // Генетика.-1996.-Т. 32,-С. 1423-1425.

9. Ковальчикова М., Ковальчик К. Адаптация и стресс при содержании и разведении с.-х. Животных // М.: "Колос",- 1978,- С.66-80.

10. Ленинджер А. Основы биохимии // М.: "Мир",- 1985,- т.З.- С.756-758.

11. Ладан П.Е., Степанов В.И., Максимов Г.В. Подверженность организма свиней действию некоторых стрессовых факторов // Докл. ВАСХНИЛ,-1977.- 10,- С. 26-28.

12. Максимов Г.В. Качество мясной продукции и стрессустойчивость свиней в связи с селекцией на мясность // Сельскохозяйственная биология /серия биология животных/.- 1995.-2,- С. 13-33.

13. Максимов Г.В. и др. Влияние транспортировки на интерьерные показатели и качество продукции у чистопородных и помесных свиней // В сб.; Приемы и методы интенсификации свиноводства.- Персиановка,- 1990,- С. 22-29.

14. Малышев Б.Т., Новиков А.А. Совершенствование свиней цивильской породной группы // Рекомендации.-ВНИИплем,- 1988,-с.65.

15. Марзанов Н.С., Фролкин Д.А., Зиновьева Н.А., Попов А.Н., Данилин А.В. RYR1 ген у свиней отечественных и зарубежных пород // Доклады РАСХН,- №1,- 2001.- С.34-37.

16. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование // М.: "Мир",- 1984,- 480 с.

17. Никитченко И.Н. Гетерозис в свиноводстве // Л,- "Агропромиздат".-1987,-216 с.

18. Никитченко И.Н., Джумков В.А. Метод оценки стрессов у свиней // Животноводство.- 1983,- №5,- С.37-39.

19. Никитченко Н.И., Романов Ю.Д., Трощенкова Л.В. Новый метод оценки свиней по устойчивости к стресс-синдрому // Материалы XXXIII ежегодной конференции Евопейской ассоциации по животноводству,- JL- 1982-С.1-15.

20. Плященко С.И., Сидоров В.Т. Стрессы у сельскохозяйственных животных //М.: Агропромиздат- 1987,- 192 с.

21. Петухов B.JL, Жигачев А.И., Назарова Г. А. Ветеринарная генетика с основами вариационной статистики // М: Агропромиздат,- 1985,- 369 с.

22. Свинтицкий Н.К. Комплексный метод выявления стрессчувствительно-сти у свиней с целью повышения их продуктивности // Автореф. дис.канд.с.-х. наук Персиановка,- Ростов.обл.-1985. -18с,- табл.- В над-заг,- Дон СХИ.

23. Рыжова Н.В., Калашникова J1.A. ДНК-диагностика стрессчувствитель-ности свиней // Тезисы докладов 7-ой международной конференции «Повышение эффективности ведения свиноводства»,- Быково,- 1999,- С.176.

24. Рыжова Н.В., Калашникова JI.A. Скрининг RYR-гена свиней скороспелой мясной породы // Тезисы докладов 3-ей международной конференции «Молекулярно-генетические маркеры животных»,- Киев,-1999,- С.21-22.

25. Рыжова Н.В., Калашникова JI.A. Генотипирование свиней различных пород по локусу RYRl-гена // Тезисы докладов 3-й международной конференции «Проблемы биологии в животноводстве",- Боровск,- 2000,- С. 422423.

26. Рыжова Н.В., Калашникова Л.А. Продуктивные качества свиней различных генотипов по гену RYR1 // Тезисы докладов 8-ой международной конференции «Перспективы развития свиноводства в XXI веке».- Быково.-2001.-С.111.

27. Рыжова Н.В, Калашникова JI.A. ДНК-диагностика стрессчувствительно-сти свиней скороспелой мясной породы // Вестник РАСХН- 2000,- №1,-С.68-71.

28. Рыжова Н.В, Калашникова JT.A., Новиков А.А. Частота встречаемости мутантного аллеля RYR1 гена в популяциях свиней крупной белой породы // Доклады РАСХН,- №6.-2001.-С.31-34.

29. Селье Г. На уровне целого организма // М.: "Наука",-1972.-122 с.

30. Р. Саики, У. Гиленстен, Г. Эрлих. Полимеразная цепная реакция // В книге: Анализ генома,- Методы,- Москва "Мир",- 1990,- С. 176-190.

31. Тарасов И.И. Стрессовый синдром у свиней // Сельское хозяйство за ру-бежом.-1982.-4.-С. 47-49.

32. Устинов Д.А. Использование методики определения содержания эозино-филов в 1 мм3 периферической крови для тестирования стрессовых состояний у поросят // Метод, реком. по изучению поведения с.-х. животныхю-1975,-вып.1,-С. 66-74.

33. Устинов Д.А. Стрессы у поросят// В кн.: Поведение животных в условиях промышленных комплексов,- М.- 1979.-С. 152-164.

34. Фролкин Д.А. Скрининг гена злокачественного гипертермического синдрома (MHS-гена) у свиней // Автореф. дис. канд. биол. наук Дуброви-цы,- ВИЖ.-1985. -19 с.

35. Якушик В.Н. Использование стрессиндрома у свиней // Докл.ВАСХНИЛ,-1984,- №10.-С.44-45.

36. Яблонски Ц., Големанов Д. Халотанов тест при свине //Животновъдство. 1983.12. С.48-51.

37. Allen W.M. Experimentally induced acute Stress Syndrome in Pietrain // Pigs. Vet.Rec.- 1970.- 87,-P. 64-69.

38. Archibald A.L. and Imlah P. The halothane sensitivity locus and its relationships // Anim.Blood Groups and Biochem. Genetics.-16,- 1985.- P.253-263.

39. Andersen E., Jensen P., Jonsson P., Staun H. Malignant hyperthermia sindrome (MHS) in pigs // Z. Tierz.Clcht. und Zuchtungsbiol.-1980.-N.97.-P.210-216.

40. Brening В., Jurs S., Brem G. The porcine PHI cDNA linked to the halothane gene defects a Hindlll and Hsal RFLP in normal and malignant hyperthermia suseltible pidgs// Nucl. Acids Res.-1990.- v.18.- P. 388.

41. Brening В., Brem G. Genomic organization and analysis of the 5! end of the porcine ryanodine receptor gene (ryrl) // FEBS Letters.- 1992,- V.298.- P. 277-279.

42. Brening В., Brem G. Molecular cloning of the porcine " halothane" gene // Arch. Tierzucht.- 1992,- B. 35,- P.129-135.

43. Bulla J., Eikelenboom G., Zelnik J., Poltarsky J. Halotane test in early diagnosis of stress susceptibility // Acta Agriculturae Scandinavica.- 21,- 1977/-P.608-609.

44. Blin N., Stafford D.W. A general method for isolation of high molecular weigh DNA from eukaryotes. // Nucl.Acids Res.- 1976.-V.3.- P.2303-2308.

45. Chean K.S., Chean A.M. Mitochondrial calcium efflux and porcine stress susceptibility //Experientia.- 35.-1976,-P. 1001-1003.

46. Chean K.S. Skeletal muscle mitochondria and phospholipase A2 in vflignant hiperthermia // Biochemical Society Transactions.-12,- 1984.-Р.356-360.

47. Dvorak J., Hradil R., Nebola M. Frequency of genotypes and alleles of halo-thane locus in pigs of the large white breed in the Czech Republic // Zivocisna vyroba. 1995. - V.40 (3). - P.103-107.

48. Dvorak J. Frequency of genotypes and alleles of halothane locus (Hal) in pigs in breeding landrase // Pol'nohospodarstvo. 1992. - V.38 (7). - P.512-515.

49. Davies W., Harbitz I.,Fries R. et.al. Porcine malignant hyperthermia carrier detection and chromosomal assignment using a linked prode // Anim.Genet.-1988.-v.19.- P.203-212.

50. D7Allaire S., De Roth I. Phisiological responses to treadmill exercise and ambient temperature in normal and malignant hyperthermia susceptible pigs // Can.J.Vet. Res.-1986.-50.-1 .-P.78-83.

51. Eikelenboom G., Van Der Bergh S.G. Abberant mitochondrial energy metabolism in stress-susceptible pigs // In: Condition and meat of pigs 2,- Ed. Symesba W.- Pudoc. Wageningen. -1978,- P.66-72

52. Fujii J., Otsu K., Zorzato F. et.al. Identification of a mutation in porcine ryanodine receptor associated with malignant hyperthermia // Science.-1991,- № 253,-P.448-451.

53. Fill M., Ma J.J., Imagawa N., Campbell K.P., Knudson C.M., Coronado R. Role of the ryanodine receptor of skeletal muscle in excitation-contraction coupling // Annuals of the New York Academy of Science.- 1990.-560.-P.155-162.

54. Gronert G.A. Malignant hyperthermia // In: Engel AG, Ed. Banker B.Q., Myology New York, Mc Graw-Hill.- 1986,- P.1763-1784.

55. Gronert G.A., Mott J., Lee J. Aetiology of malignant hyperthermia // Brit.J.Anaesth.- 60,- 1988,- P. 253-267.

56. Hall G.M., Lucke J.N., Lister D. Porcine malignant hyperthermia metabolic and physiological changes // Brit.J.Anaesth.- 48.-1976,- P.297.

57. Haley Ch., Archibald A. Pamphlet The Pig Gene Mapping Project (PigMap) // CEC, DG XII, Biotechnology Division.- 1992,- P.4.

58. Hardge Т., Gregor G. The influence of RYR 1-genotype on male fertility in pigs // 46th Annual Meeting of the EAAP.- Praha.- September 4-7,- 1994,- P. 1-5.

59. Hardge Т., Scholtz A. The influence of RYR1-genotype and breed on fattening performance carcass value and meat quality // 45th Annual Meeting of the EAAP.- Edinburg.- September 5-8,- 1994,- P.340.

60. Hefron J.J.A. Calcium releasing systems in mitochondria and sarcoplasmic reticulum with respect to the aetology of malignant hyperthermia // A rewiev. In:

61. Evaluation and control of meat quality in pigs.- Ed. Tarrant P.V., Eikelenboom G., Monin G., Martinus Nijoff Dordrecht.- 1987,- P. 17-26.

62. Imagawa N., Smith J.S., Coronado R., Campbell K.P. Purified ryanodine receptor from skeletal muscle sarcoplasmic reticulum is the Ca2+ permeable pore of the calcium channel // J. Biol. Chem.- 262,- 1987,- P.16636-16643.

63. Jorgensen P. Halothane sensitivity, the H blood group system and phosphohex-ose isomerase (PHI) in pigs. A linkage study of physiological importance// Acta Vet. Scand.- 1978,- Vol.-19.- P.856-862.

64. Knorr C. Calcium-release-channel genotypes in several pig populations associations with halothane and CK reactions // J.Anim.Breed.Genet.- 111.- 1994.-P.243-252.

65. Kuryl J. Wykorzystanie markerow genetycznych w hodowli trzody chlewnej // Przeglad hodowlany.- №12,- 1992,- P.6-8.

66. Knudson C.M., Miskelson J.R., Louis C.F., Cambell K.P. Distinct immunopep-tide maps of the sarcoplasmic reticulum Ca2+ release channel in malignant hyperthermia // J.of Biolog. Chem.-1990.- 265,- P.2421-2424.

67. Lai F.A., Meissner G. Structure of the calcium release channel of the skeletal muscle sarcoplasmic reticulum and its regulation by calcium // Advances in Ex-perim. Medicine and Biology.-1990.-262.-P. 16636-43.

68. Li M.D., Matteri R.L., MacDonald G.I., Wise Т.Н., Ford J.J. Overexpression of ft- subunit of thyroid-stimulating hormone in Meishan swine identified by differential display // J. Anim. Sci.-74.- 1996,- P.2014-2111.

69. Liang P., Pardee A.B. Differential display of eukaryotic messenger RNA by means of the PCR // Science.- 1992.-257,- P.-967-971.

70. Louis C.F., Gallant E.M., Remple E.A., Mickelson J.R. Malignant hyperthermia and porcine stress syndrome: a tale of two species // Pig News and Informations.-! 1,- 1990,- P.341-344.

71. Mariani P., Johansson M., Ellegren H., Harbitz I., Juneja R.K. Multiple restriction fragment length polymorphism in the porcine release channel gene (CRC): assignment to the halothane (Hal) linkage group // Anim.Gen.-1992.- 23.- P.257-262.

72. Minkema D., Eikelenboom G., Van Eldik P. Inheritance of MHS susceptibility in pigs // Proceedings of Third International Conference on Production Disease in Farm Animals.- Wageningen, Holansko.- 13-16 sept.- 1976,- Pudoc Wageningen.- P. 144-150.

73. Meller Z. Jakosc miesa w zaleznosci ad stopnia umesniemia I otluscenia tuc-znikow // Zootechnika.-1978.- 14,- P.3-48.

74. Mickelson J.R., bitterer L.A., Gallant E.M., Johnson K.M., Remple E.A., Louis C.F. Abnormal sarcoplasmic reticulum ryanodine receptor in malignant hyperthermia//J. of Biolog. Chem.-1988.- 263,- P.9310-15.

75. Meller Z. Przeglad wazniejszech teotii doticzaeych etiologii syndromov PSE // Med. Weter.-34.-9.-1978.- P.554-557.

76. Mc LennanT.V., Phillips M.S. Malignant hyperthermia // Science.-256,- 1992,-P.789-794.

77. Mc LennanT.V., Duff С., Zorzato F., Fujii J., Phillips M.S. et.al. Ryanodine receptor gene is a candidate for predisposition to malignant hyperthermia // Nature.- 1990,-343,-P.559-561.

78. Otsu K., Khanna V.K., Archibalad A.L., McLennan D.N. Cosegregation of porcine malignant hyperthermia and a probable cause mutation in the skeletal muscle ryanodine receptor gene in backcross families // Genomics.- 1991,- V.ll.-P.744-750.

79. Otsu K., Khanna V.K., Phillips M.C., McLennan D.N. Refinement of diagnostic assays for a probable causal mutation for porcine and human malignant hyperthermia // Genomics.-1992.-13.-P.835-837.

80. Rasmusen В., Cliristian L. H blood types in pigs as predictors of stress susceptibility // Science.-1976.-vol.191,- P. 947-948.

81. Reiner G., Mozer G., Geldermann H., Dzapo V. Association between the c-myc proto-oncogene and carcass quality traits in the pig: evidence for epistatis with the Ryrl-gene // J.Anim.Genet.- 116,- 1999,- P.253-261.

82. Russo V. Study of halothnane locus by PCR-typing of CRC gene in pig breeds rearded in Italy // In: Abstr. XXIV. Int. Conf. Anim. Genetics.- Praha.-1994.-P.137.

83. Rempel W.E., Lu M.Y., Kandelgy S.E., Kennedy C.E.N., LouisC.F., et.af. Relative accuracy of the halothane challenge test and a molecular genetic test in detecting the gene for porcine stress syndrome // J.Anim. Sci.- 71.-1993,-P.1395-1399.

84. Schreiber V. Stress patofyziologie, endokrinologie, klinika // Avicenum Praha.- 1985,- 121 p.

85. Simon M., Hardge Т., Кбррке К., Leuthold G., Nitzshe G., Huck M. The influence of RYR 1-genotype on fertility traits of breeding sows // Stocarstvo.-1997.-V.21.-№2.- P.129-137.

86. Sardelli A.D.Amplifications // The Perclin-Elmer Corp.-Norwalk.- USA.-1993.-P.1-6.

87. Takeshima H., Nishi M., Iwabe N. et al. Isolations and characterization of a gene for ryanodine receptor/ calcium release channel in Drosophila melanogaster // Mammalian Genome .- 7,- 1994,- P.42 46.

88. Topel D., Laurenl C., Ball R.A. Porcine stress sindrome // In: Diseases in Swine.- 1975,- 4ed.- P.970-977.

89. Van Den Hende. Isometric contraction of skeletal muscles of MH susceptible and resistant Belgian Landrac pigs // Acta Agric. Scand.-1979.- Suppl. 21,- P. 322-499.

90. Vogeli .P., SchwOrer D., Kuhne R., Wysshaar M. Trends in economic traits, halothane sensitivity, blood group and enzyme systems of Swiss Landrase and Large White pigs // Anim.Blood Groups and Biochem. Genetics.- 16,- 1985,-P.285-296.

91. Weeb A.J., Garden A.E., Smith C., Imlah P. Porcine stress sindrome in pig breeding // Proceeding of the 2nd World Congress jn Genetics Applied to Livestock Production.- Vol.5.-Editorial Carsi, Madrid.-1982.- P.588-608.125

92. Weeb A.J., Simpson S.P.Performance of british landrase pigs selected for high and low incidence of halothane sensitivity // Anim. Prod.- 43,- 1986,- P: 493-503.

93. Weeb A.J., Southwood O.L.,Simpson S.P. The halothane test in improving meat quality in pigs // Ed: Tarrant P.V., Eikelenboom G., Monin G.- Martinus Nijhoff.-Boston, Massachusetts.- 1987,- P.297-315.

94. Zorzato F., Otsu K., Fujii J. Molecular cloning of cDNA encoding human and rabbit forms of the Ca2+ -release channel (ryanodine receptor) of the skeletal muscle sarcoplasmic reticulum // J. of Biolog. Chem.-1994.- 265,- P.2244-56.

95. Zorzato F., SacchettoR., Margreth A. Identification of two ryanodine receptor transctipts in neonatal, slow- and fast twitch rabbit skeletal muscles // Biochem. And Biophisic. Resear. Communications.- 1994.-203,-P.1725-30.