Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Полиморфизм гена MDR1: популяционные и фармакогенетические аспекты

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Полиморфизм гена MDR1: популяционные и фармакогенетические аспекты"

00305эт8в

па правах рукописи

ИГНАТЬЕВ ИЛЬЯ ВЛАДИМИРОВИЧ

Полиморфизм гена MDR1: популяционные и

фармакогенетические аспекты

03.00.15. - генетика АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ IIA СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК

1 7 мдп 2007

- Москва 2007 -

003059788

Работа выполнена в лаборатории лекарственного мониторинга филиала «Клиническая фармакология» ГУНЦ Биомедицинских технологий РАМН, г Москва

Научный руководитель:

Доктор медицинских наук, доцент Сычев Д А

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук Поляков А В

Кандидат биологических наук Аксенова М Г

Ведущая организация Российский Государственный Медицинский Университет (РГМУ)

Защита диссертации состоится «29» мая 2007 г в 4 заседании

Диссертациошю1 о совета Д 217013 01 при Государственном научно-исследовательском институте генетики и селекции промышленных микроорганизмов по адресу 117545, г Москва, 1-й Дорожный проезд, д 1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУП «ГосНИИ генетика»

Автореферат разослан апреля 2007 г

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат биологических наук

Заиграева Г Г

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Прогресс в медицине ведет к усложнению и детализации методологии По мере увеличения количества лекарственных средств (JIC), усложняются подходы к их применению Современная стратегия разработки ЛС сводится к поиску первопричины заболевания и воздействия на нее, препараты становятся узконаправленными, специфичными

Фармакокинетические процессы находятся под генетическим контролем Большинство JIC воспринимаются организмом как ксенобиотики В геноме человека с биотрансформацией ксенобиотиков связано от 500 до 1200 различных генов [Sakaeda et al , 2004] Поэтому индивидуальные генетические различия между людьми являются серьезным фактором, способствующим развитию многих нежелательных лекарственных реакций (НИР), в том числе приводящих к гибели или инвалидизации пациентов (кровотечения, поражения печени, почек, костного мозга и тд) Изучение таких различий приобретает первостепенное значение для оптимизации фармакотерапии

Индивидуализация фармакотерапии, которой занимается фармакогенетика, заключается в выявлении полиморфных маркеров, ассоциированных с изменением реакции организма на ЛС, разработке методов генотипирования больных (определение аллельных вариантов полиморфных маркеров) и внедрении этого подхода в практическую медицину

Транспортный белок гликопротеин Р, кодируемый геном MDR1, играет ключевую роль в выведении целого ряда ЛС, включая дигоксин Исходя из этого, влияние генетического полиморфизма гликопротеина Р на фармакокинетику дигоксина должно приводить к важным клиническим последствиям [Hoffmeyer et al , 2000, Marsohni, Kim, 2002, 2004] В

настоящее время изучено много полиморфных маркеров в гене MDR1

(

[Woodahl et al, 2004], но предпочтения по исследованию ассоциаций отдаются трем из них С1236Т, G2677T/A и С3435Т Остальные, как правило, встречаются с низкой частотой, которая не позволяет объяснить широко распространенные нарушения «работы» гликопротеина Р Полагают, что полиморфные маркеры С3435Т н С1236Т приводят к снижению экспрессии гена MDR1, а «кажущееся» влияние полиморфного маркера G2677T/A объясняют эффектом сцепления [Sai et al, 2003]

Субстрат гликопротеина Р, дигоксин, широко применяется в клинической практике В настоящее время дигоксин назначается больным хронической сердечной недостаточностью (ХСН), с постоянной формой мерцательной аритмии (ПФМА), эффективность его доказана в мультицентровом исследовании DIG Являясь JIC с узкой терапевтической широтой, дигоксин вызывает НЛР в виде гликозидной интоксикации в 1030% случаев [Bertilsson, Kalow, 1993] Таким образом, существует реальная потребность в оптимизации фармакотерапии дигоксшюм, которую можно осуществить путем индивидуализации выбора его режима дозирования с помощью генотипирования

Известно, что представители различных этнических групп могут отличаться друг от друга характером ответа на лекарственное воздействие [Wielandt et al, 2004] Поскольку существенная роль в развитии НЛР принадлежит генетическим факторам [Kewal, 2002], многие авторы полагают, что главной причиной возникновения вариаций при ответе на фармакотерапию являются генетические межпопуляционные различия Начиная с первой работы, в которой изучались межэтнические различия в частотах аллелей и генотипов полиморфных маркеров гена MDR1 [Ameyaw et al, 2000], исследования полиморфизма данного гена стали проводиться сначала среди европеоидов [Gascorbi et al, 2001], а потом и среди представителей других рас [Chelule et al, 2003, Li et al, 2006]

В России этот вопрос практически не разработан Изучены частоты аллелей и генотипов ряда полиморфных маркеров гена MDRI только у

русских [Goreva et al, 2004], причем авторы сосредоточили свое внимание, в первую очередь, на вопросах канцерогенеза Поэтому для внедрения результатов изучения зависимости возникновения HJIP от генотипа пациента необходимо дальнейшее исследование частот аллелей и генотипов гена MDR1 в различных этносах нашей страны

Изучение ассоциации полиморфных маркеров с нарушениями фармакокинетических процессов, сопряженное с выявлением межэтнических различий в распределении аллелей и генотипов данных маркеров, позволит оптимизировать фармакотерапию, что будет способствовать повышению эффективности и безопасности таковой

Цели и задачи работы Целью данной работы явилось изучение ассоциации полиморфных маркеров С1236Т и С3435Т гена MDR1, кодирующего гликопротеин Р, с развитием дигитаписной интоксикации и повышением равновесной концентрации дигоксина в крови у больных мерцательной аритмией при терапии дигоксином, а также выявление межэтнических различий в частотах аллелей и генотипов данных полиморфных маркеров в четырех различных этнических группах

В ходе работы были решены следующие задачи

1 Оценена ассоциация полиморфных маркеров С1236Т и C3435I гена MDR1 с развитием гликозидной интоксикации у больных с постоянной формой мерцательной аритмии, длительно принимающих дигоксин

2 Сопоставлена равновесная концентрация дигоксина в плазме крови больных с носительством аллепеи или генотипов полиморфного маркера С3435Т гена MDR1

3 Изучено распределение аллелей и генотипов полиморфных маркеров С1236Ти С3435Т гена MDRI в случайных выборках коренного и некоренного населения Чукотского Автономною Округа и этнических казахов, сопоставлены межэтнические различия

Научная новизна работы В данной работе впервые в России изучается полиморфизм гена МВШ, кодирующего гликопротеин Р, как фактор, влияющий на безопасность фармакотерапии дигоксином Выявлена ассоциация полиморфного маркера С3435Т и отсутствие таковой для полиморфного маркера С1236Т с развитием симптомов гликозидной интоксикации Обнаружена ассоциация полиморфного маркера С3435Т с изменением равновесной концентрации дигоксина в плазме крови у больных ХСН с ПФМА, проживающих в Москве Впервые в России изучены межэтнические различия в распределении аллелей и генотипов двух полиморфных маркеров данного гена

Практическая ценность работы. В результате проведенных исследований дается рекомендация проводить генотипирование по полиморфному маркеру С3435Т гена МйК1 всем больным, которым планируется назначение дигоксина Для повышения безопасности фармакотерапии разработан алгоритм выбора начальной дозы дигоксина в зависимости от результатов генотипирования по полиморфному маркеру С3435Т гена МОШ

Результаты данной работы в области изучения межэтнических различий в частотах аллелей и генотипов гена МИШ могут послужить основой для региональных рекомендаций по применению дигоксина

Апробация работы Основные результаты доложены и обсуждены на совместной научно практической конференции филиала «Клиническая фармакология» ГУ НЦ БМТ РАМН и кафедры клинической фармакологии и пропедевтики внутренних болезней ММА им И М Сеченова (сентябрь 2006 г), V Международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств» (ноябрь 2005 г), VII Ежегодной конференции Общества специалистов по сердечной недостаточности «Сердечная недостаточность» (Москва, декабрь 2005 г), IV Съезде Российских

ревматологов (Казань, май 2005 г), II Всероссийском съезде фармацевтических работников (Сочи, июнь 2005 г), I Съезде клинических фармакологов Сибирского округа (Барнаул, май 2006 г), Конференции «Проблемы клинической фармакологии и моделирования в фармакологии и биомедицине» (Ростов-на-Дону, сентябрь 2006 г )

Публикации. По материалам работы опубликовано 10 печатных работ в журналах и сборниках материалов конференций

Структура и объем диссертации Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания использованных материалов и методов, результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы Материал диссертации изложен на 108 страницах машинописного текста и содержит 22 таблицы и 8 рисунков

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Описание клинической группы В исследование включено 103 больных ХСН с ПФМА Критерии включения давность мерцательной аритмии > 1 года, прием дигоксина (0,25 мг/сутки) > 1 месяца, наличие ХСН функционального класса 1-Ш, стабильность состояния не менее месяца, фракция выброса левого желудочка ниже 40% (rio данным эхокардиографии), подписанное информированное согласие об участии в исследовании Критерии исключения нарушения функции печени, почек, гипокалиемия, ХСН IV функционального класса, пороки сердца (кроме относительной митральной и/или трикуспидальной недостаточности, но не более 2 степени), острые коронарные синдромы в предшествующее 3 месяца, тяжелые сопутствующие заболевания, сахарный диабет, наличие противопоказаний к назначению дигоксина

Описание популяционных групп. Популяционные группы набирали из подростков, содержащихся в школах-интернатах Чукотского Автономного Округа, во время планового медицинского осмотра в 2004 году, а также из студентов Карагандинской медицинской академии в 2005 году на добровольной основе Группа чукчей включала в себя 77 человек, группа эвенов - 48 человек, группа русских - 124 человека и группа казахов - 100 человек

Выделение ДНК. ДНК выделяли стандартным фенольным методом с протеиназой К [Budowle, Baechtel, 1990]

Определение равновесной концентрации дигоксина Венозная кровь для определения концентрации дигоксина отбиралась в количестве 10 мл в сухие пробирки с гепарином, утром натощак, перед плановым приемом очередной дозы дигоксина Концентрацию дигоксина определяли методом поляризационного флуоресцентного иммунного анализа на приборе и с помощью реактивов фирмы Abbot Inc (США)

Генотипированнс. Генотипирование проводили методом ПЦР-ПДРФ (полимеразная цепная реакция и полиморфизм длин рестрикционных фрагментов) На первой стадии фрагменты гена, содержащие полиморфные участки, амплифицировали на программируемом термостате «Терцик МС2», производства НПФ ДНК-Технология (Россия) Затем продукты ПЦР подвергали обработке эндонуклеазами рестрикции П типа (рестриктазами) Специфичные праймеры и рестриктазы для каждого полиморфного маркера приведены в таблице 1 Праймеры для ПЦР подобраны с помощью программы PrimerSelect 4 05©1993-2000 DNASTAR Inc и синтезированы в ЗАО «Синтол» (Россия) Рестриктазы закуплены у ЗАО «Хеликон» (Россия) Промежуточные и окончательные результаты выявляли с помощью электрофореза в вертикальных акриламидных гелях (5% гель длиной 5 см

для продуктов амплификации и 10% гель длиной 15 см для продуктов расщепления рестриктазами при напряженности электрического поля 10 В/см). Время, необходимое для разделения фрагментов ДНК подбирали экспериментально Длины фрагментов анализировали путем сравнения с маркерной ДНК После окончания фореза гели окрашивали раствором бромистого этидия (50 нг/мл) и анализировали в ультрафиолетовом свете (312 нм)

Таблица 1

Лраймерм и рсстриктазы для идентификации полиморфных маркеров гена

МОГИ

Замена Последовательность прлимеров Рестрик- таза Размеры продуктов рестрикции

С1236Т М1236-1 (прямой) 5'-CCACCGTCTGCCCACTCTGC-3' М1236-2 (обратный) 5'-GCCCAl СТАТССАСС ГАТС Г\А-3' НаеШ 426 и и + 35 п п

С3435Т MDRlfor (прямой) 5'-GATGGCAAAGAAATAAAGCGACTG-3' MDRlrev (обратный) 5'-ACCAGCCCCTTA ГАААТСАААСТА-3' Mbol 147 п и + 133 п и

Статистическая обработка результатов Статистический анализ проводился с использованием статистической программы Past, version 1 34 (http //folk uio no/ohammer/past) Для определения статистической значимости различий частот аллелей и генотипов в группах больных применялся критерий для аллелей применялась поправка Иейтса на непрерывность (вводилась вручную) Относительные риски рассчитывались с помощью программы-калькулятора [Bland, Douglas, 2000] Статистическую значимость концентрационных различий определяли с помощью непараметрического

метода Манна-Уитни Значения чувствительности, специфичности, предсказательной ценности положительного (РРУ) и отрицательного (МРУ) результатов теста рассчитывались по общепринятым формулам [Флетчер Р, 1998].

Проведение исследования одобрено этическим комитетом ГКБ № 23 им «Медсантруд» г Москвы, комитетом по этике Департамента здравоохранения и социального развития ЧАО и признано легитимным Комитетом по этике Ассоциации медицинских и фармацевтических вузов

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 1. Взаимосвязь полиморфизма гена МОЮ с возникновением НЛР при приеме дигокенна у больных с постоянной формой мерцательной аритмии

Изучалась группа больных с ПФМА, которым была показана терапия дигоксином Симптомы гликозидной интоксикации (снижение аппетита, тошнота, рвота, желудочковая экстрасистолия) выявлены у 26 пациентов (25%)

Частоты аллелей и генотипов полиморфного маркера (таблица 2) С1236Т достоверно не различались между группами больных с гликозидной интоксикацией и без таковой

Иная картина наблюдалась при анализе частот аллелей и генотипов полиморфного маркера С3435Т (Таблица 3) Из таблицы 3 видно, что имеется четкая ассоциация генотипа ТТ и аллеля Т полиморфного маркера С3435Т с развитием гликозидной интоксикации

Была определена равновесная концентрация дигоксина в плазме крови у 29 случайно выбранных больных Из них генотип СС имели 6 пациентов, СТ - 18 пациентов, ТТ-5 пациентов Наиболее высокая концентрация дигоксина наблюдалась у пациентов с генотипом ТТ по сравнению с пациентами, имеющими генотипы СС и СТ (2,03 ± 0,14 уб 1,09 ± 0,15, р = 0,008 и 2,03 ±

0,14 vs 1,54 ± 0,23, p = 0,001 соответственно), при этом пациенты с генотипом CT занимали промежуточное положение и достоверно отличались от пациентов с генотипом СС (1,54 ± 0,23 vs 1,09 а= 0,15, р - 0,001) [рисунок 1]

Таблица 2

Частоты аллелей и генотипов полиморфного маркера С1236Тгена MDR1 в группах больных с симптомами гликозидной интоксикации (СГИ+) и бед тлковых

(СГИ-)

Аллель / генотип СГИ+ п = 20 сги- п =65 z2 Р

С 21 78

т 19 52 0,401 0,515

СС 4 23

CT 13 32 1,860 0 395

TT 3 10

Глбиицл 3

Частоты аллечей и генотипов ионшорфнот маркера С3435Т гена Л/ОЛ/ в группах больных с симптомами гликозидной интоксикации (СГ11+) и бе! таковых

(СГИ-)

Ал цель / генотип СП1+ n =26 сги- n = 77 P

С 12 83 13,643 <0,001

Т 40 71

СС 2 18 20,897 <0,001

CT 8 47

TT 16 12

Можно предположить, что повышение концентрации дигоксина в крови пациентов было главной причиной, приводящей к развитию гликозидной интоксикации

Генотип ТТ достоверно чаще встречался в группе пациентов, у которых развивалась гликозидная интоксикация, по сравнению с группой без таковой (61% уз. 16%, р«0,05). Это позволяет говорить об ассоциации между полиморфным маркером С3435Т и развитием гликозидной интоксикации, т.е. генотип ТТк аллель ^являются генетическими факторами риска (ОН - 8,67 и 3,90 при доверительных, интервалах 3,18-23,60 и 1,90-8,00, соответственно), предрасполагающими к развитию гликозидной интоксикации при у больных ХСН с ПФМА, длительно принимающих дигоксин.

Рисунок 1.

Зависимость средней равновесной концентрации дигокенна в плазме крови от генотипа пациента по полиморфному маркеру С3435Т гена М1)Я1

Была изучена возможная эффективность выявления носительства генотипа ТТ для прогнозирования развития симптомов гликозидной интоксикации. Чувствительность выявления генотипа ТТ для прогнозирования развития симптомов гликозидной интоксикации составила 30%, специфичность - 94%. Прогностическая ценность (РРУ) положительного результата в случае выявления генотипа 1Т составила 42%.

Прогностическая ценность отрицательного результата (NPV) в случае выявления генотипов СС и СТ составила 80%

Таким образом, у больных с генотипом ТТ чаще возникали симптомы гликозидной интоксикации, кроме того именно у этой группы больных регистрировались более высокие концентрации дигоксина в плазме крови, по сравнению с пациентами с генотипами СС и СТ

Связь между концентрацией дигоксина в плазме крови и возникновением симптомов гликозидной интоксикации очевидна и доказана в мультицентровом исследовании DIG Полученные результаты можно объяснить уменьшением количества гликопротеина Р в клеточных мембранах у пациентов с генотипом ТТ, что является следствием снижения стабильности и срока жизни мРНК А это, в свою очередь, приводит к тому, что дигоксин плохо выводится почками и поэтому накапливается в кровотоке Результаты проведенного исследования хорошо согласуются с данными ряда авторов [Hoffmeyer et al, 2000, ICurata et al, 2002, Veistuyft et al, 2003], которые, анализируя фармакокинетику дигоксина после его однократного приема в исследованиях у здоровых добровольцев, показали, что максимальная концентрация дигоксина в плазме крови пациентов с генотипом ТТ достоверно выше по сравнению с индивидуумами, имеющими генотип СС В отличие от перечисленных исследований, в нашей работе участвовали пациенты, длительно применяющие дигоксин Объем клинической выборки позволил включить сравнительно небольшое число пациентов с выявленными симптомами гликозидной интоксикации, мы не изучали другие широко распространенные полиморфные маркеры гена MDR1, и кроме того, концентрация дигоксина в плазме крови определялась не у всех пациентов Тем не менее, полученные данные позволяют выдвинуть предположение о необходимости назначать дигоксин пациентам с генотипом 7Тв более низкой дозе (0,125 мг/сутки) и корректировать ее под контролем данных терапевтического лекарственного мониторинга Для подтверждения этого предположения следует провести клинические исследования, в

которых сравнивались бы эффективность и безопасность дигоксина при его назначении в средней терапевтической дозе (0,25 мг/сутки) с учетом генот ипа по полиморфному маркеру О^.ЪТгена МОЯ].

2. Межэтнические различия в частотах аллелей и генотипов полиморфного маркера С1236Тгена МОЯ!.

Были изучены частоты аллелей и генотипов полиморфного маркера С1236Т гена МОИ} в случайных выборках из четырех этнических групп: чукчей, эвенов, русских и казахов. Данные по частотам аллелей и генотипов полиморфного маркера С1236Т гена МОЯ!, приведены на рисунках 2 и 3, а также в таблице 4.

Частоты генотипов данного полиморфного маркера не различались во всех изученных группах. Частоты аллелей различались между коренным (чукчи) и некоренным (русские) населением Чукотского АО, а также между русскими и казахами, причем эти различия были на грани статистической достоверности.

Таблица 4.

Рач.'шчпи и частотах аллелей и генотипов полиморфного маркера С1236Т гепз МОЙ/ мсоду щученными иыйоркинн

Русски« Чукчи Эвены |

«Л Р * 1 Р т Р

Чукчи генотипы 4,261 0,042

аллели 5,802 ■ 0,055

Эвены генотипы 0,8 2й 0,345 0,402 0,496

аллели 1,100 0,577 2,093 0,351

Казахи ГС НОГИ 11 ы 4,962 0,029 0,008 0,915 0,440 | 0,493

аллели 5,384 (1,068 0,351 0,839 1,197 0,550

Поскольку полиморфный маркер С1236Т, согласно нашим результатам, не влияет на эффективность «работы» гликопротеина Р, можно

предположить, что носительство того или иного генотипа никак не отражается на приспособительных способностях индивида.

Чукчи <10,9М /(

эвемы

ц^=77 к 2

54,3 Н

11= <13 % 1

п=ш %г

Кшшн

60

45

30

15

Рисунок 2 Частоты аллелей полиморфного маркера С1236Т гена М1Ш1 в щученных выборках

- 1236 СС Ш - 1236 СТ

- 1236 ТТ

Рисунок 3

Частоты [биотипов полиморфного маркера С1236Т геаяМОЮ в щученных

выборках

11=1 к

Русские П=124

Казах* 11=100

Чукчи с эвенами принадлежат к монголоидной расе. Русские же являются европеоидами. Казахи представляют собой смешанный монголоидно-европеоидный этнос. Именно этими фактами можно объяснить наблюдаемые различия в частотах аллелей данного полиморфного маркера,

3, Межэтнические различия частот аллелей и генотипов полиморфного маркера С3435Т гена ¡\1DR1.

Сравнение частот аллелей и генотипов полиморфного маркера С3435Т гена МИШ дало несколько иные результаты, чем в случае полиморфного маркера С1236Т, Данные приведены в таблице 5 и на рисунках 4 и 5.

Наблюдаемые распределения частот аллелей носят практически зеркальный характер. Значительные различия выявляются у коренных жителей Чукотки по сравнению с русскими и с казахами. Соответственно, существенных отличий в этом между русскими и казахам и не найдено.

Частота аллеля Т практически в полтора раза выше у коренных жителей Чукотки (63,6%) по сравнению с русскими (49,6%) и с казахами (44,0%).

Также и генотип 1Т встречается у них почта в два раза чаще (42,4%). чем у русских (26,6%) и у казахов (25,0%),

Таблица 5,

Различия в частотах аллелей и генотипов полиморфного маркера С3435Т гена \IDRI между изученными выборками

Русские Чукчи j "Зйеин j

il Р X Р f Р

Чукчи генотип ы 4, <>09 0,032

аллели 5,048 | 11,080

'jEtHM генотипы 8,438 (1.004 0,866 0,316

аллели 1 0,011 3,010 0,222

Казахи генотипы 1.178 0,281 9,435 0,002 13.670 0,0002

аллели 2,487 0,288 8,259 0.016 14,063 0,001

С популяцмошой точки зрения этот феномен можно объяснить, по всей видимости, тем, что условия жизни (распространенные инфекции, климат, водный режим, температурный режим, инсоляция И пр.) на территориях проживания русских и казахов схожи в большей степени, чем па Чукотке. Вероятно условия, в которых на протяжении многих поколений выживали коренные народы Крайнего Севера, настолько экстремальны, что происходил отбор по иным признакам, чем в более мягком климате.

Чук'ш Эк сны Русские

J9.0H J2.3Í6 fc>t 50,4W

fsc

Шиш 1е

п=П х 2 п=48 х 2 П=124Х2

Казахи

Рисунок-4

с ' Частоты аллелей полиморфного

44,озд маркера С3435Т гена MORI о

изученных выборках

П=100 х г

Для детального объяснения данного феномена необходимо дальнейшее изучение частот аллелей И генотипов полиморфного маркера С3435Т гена АЮЮ в различных этнических группах.

Почти двукратное преобладание генотипа 77'по полиморфному маркеру С3435Т гена МОК! среди коренного населения Чукотского АО по сравнению с русскими и казахами позволяет предположить, что риск развития симптомов гликозидной интоксикации при приеме дигоксина у чукчей и эвенов значительно выше, чем у русских с казахами, что необходимо учитывать при составлении региональных рекомендаций ио использованию данного ЛС.

Чукчи Эвены Русские Казахи

ti=77 11=4 S п=124 п=100

Ц - 3435СС Hg - 3435СТ j | - 3435ТГ

Рисунок 5

Часготы генотипов полиморфного маркера С3435Т гена MDRI в изученных

выборках

ВЫВОДЫ

1) Обнаружена ассоциация полиморфного маркера С3435Т гена MDR1 с возни кновеняе м симптомов гл и коз ид ной интоксикации при приеме дигоксина у больных с ПФМА; генотип 77' и аллель Т являются генетическими факторами риска {OR равен 8,67 и 3,90 при доверительных интервалах 3,18-23,60 и 1,90-8,00, соответственно).

2) Полиморфный маркер С3435Т гена MDR] ассоциирован с повышением уровня равновесной концентрации дигоксина в крови; концентрация дигоксина достоверно выше у пациентов с генотипом ТТ по сравнению с пациентами, имеющими генотипы СС и СТ. Данная ассоциация позволяет предположить, что в основе развития

is

нежелатечьных лекарственных реакций при применении дигоксина действительно лежат генетические особенности пациентов

3) Прогностическая ценность генотипирования по полиморфному маркеру С3435Т гена MDR1 для прогнозирования гликозидной интоксикации составила 42% для положительного результата в случае выявления генотипа 77' и 80% для отрицательного результата в случае выявления генотипов СС или СТ Найденные значения позволяют рекомендовать проведение генотипирования по полиморфному маркеру С3435Т гена MDR1 для повышения эффективности и безопасности терапии дигоксином

4) Различия в частотах аллелей полиморфного маркера С1236Т гена MDR1 наблюдались между казахами и русскими и между русскими и чукчами, различий в частотах генотипов по данному полиморфному маркеру в изученных группах не наблюдалось, что косвенно подтверждает отсутствие влияния данного полиморфного маркера на эффективность «работы» гликопротеина Р

5) Частоты аллелей и генотипов полиморфного маркера С3435Т гена MDR1 не различались между русскими и казахами, но существенно различались между русскими и коренным населением Чукотского АО, а также между казахами и коренным населением Чукотского АО, полученные результаты могут быть использованы при составлении региональных рекомендаций по использованию дигоксина

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Сычев Д А , Игнатьев И.В., Раменская Г В , Колхир С В , Кукес В Г Значение полиморфизма гена MDR1, кодирующего гликопротеин-Р, для индивидуализации фармакотерапии // Клиническая фармакология и терапия -2005 -т 14 №1 -с 92-96

2 Игнатьев И.В., Сычев Д А , Андреев Д А , Жукова Э Э , Колхир С В , Кукес В Г. Ассоциация полиморфного маркера С3435Т гена MDR1, кодирующего гликопротеин-Р, с развитием симптомов дигиталисной интоксикации и повышением концентрации дигоксина в плазме крови пациентов с постоянной формой мерцательной аритмии // Медицинская генетика -2005 -т4 №12 - с 568-572

3 Сычев Д А , Игнатьев И.В., Андреев Д А, Пошукаева Л Г, Колхир П В , Жукова Э Э , Кукес В Г Значение фармакогенетических исследований гликопротеина-Р для индивидуализации фармакотерапии дигоксином новый подход к старой проблеме // Российский кардиологический журнал -2006 №4 (60) - с 64- 68

4 Сычев Д А , Андреев Д А , Игнатьев И.В., Жукова Э Э, Суслов Л С, Семенов А В , Кукес В Г Влияние генетического полиморфизма гликопротеина-Р (MDR1) на уровень дигоксина в плазме крови больных хронической сердечной недостаточности и постоянной формой мерцательной аритмии // V ежегодная конференция общества специалистов по сердечной недостаточности «Сердечная недостаточность 2004» Материалы докладов -2004 - с 33

5 Сычев Д А , Андреев Д А , Игнатьев И.В., Жукова Э Э , Суслов Л С , Семенов А В , Кукес В Г Уровень дигоксина в плазме крови у больных постоянной формой мерцательной аритмии в зависимости от носительства полиморфного аллеля гена гликопротеина-Р (MDR1) С3435Т результаты фармакогенетического исследования // XII российский национальный конгресс «Человек и лекарство» Материалы докладов - 2005 - с 256

6 Кукес В Г , Сычев Д А , Раменская Г В , Игнатьев И.В., Казаков Р Е Показания для использования генотипирования пациентов по ферментам биотрансформации и транспортерам при проведении клинических исследований новых лекарственных средств // Материалы II Всероссийского съезда фармацевтических работников (Сочи, 5-7 июня 2005) - Сочи, 2005 -с 93

7 Сычев Д А , Игнатьев И.В., Андреев Д А , Жукова Э Э , Пошукаева JIГ , Кукес В Г Роль полиморфного маркера С3435Т гена MDR1 в прогнозировании развития гликозидной интоксикации у больных постоянной формой мерцательной аритмии, длительно принимающих дигоксин // IV международный конгресс Доказательная медицина - основа современного здравоохранения Материалы докладов - 2005 - с 250-251

8 Игнатьев И.В., Коман И Э, Сычев Д А, Казаков Р Е, Фалынскова И Н, Кукес В Г Сравнительный анализ распределения частот 1енотипов полиморфного маркера С3435Т гена MDRJ, кодирующего транспортер лекарственных средств гликопротеин-Р, в трех этнических группах чукотского АО // V международная конференция «Клинические исследования лекарственных средств» Материалы конференции - 2005 -с 82-83

9 Сычев Д А , Игнатьев И В., Андреев Д А , Жукова Э Э, Пошукаева JIГ, Кукес В Г Носительство полиморфного маркера С3435Т гена MDR1 как фактор риска развития гликозидной интоксикации у больных хронической недостаточностью, длительно принимающих дигоксин // VI ежегодная конференция общества специалистов по сердечной недостаточности «Сердечная недостаточность 2005» Материалы докладов -2005 -с9-10

10 Сычев ДА , Игнатьев И.В., Кукес В Г Значение генетических исследований для повышения эффективности и безопасности фармакотерапии кардиотропными лекарственными средствами // Материалы научной программы XII Международной специализированной выставки «Аптека 2005» (Москва, 25-28 октября 2005) - 2005 - с 4

Список сокращений

ХСН - хроническая сердечная недостаточность ПФМА - постоянная форма мерцательной аритмии ЛС - лекарственное средство НЛР - нежелательные лекарственные реакции

СГИ - симптомы гликозидной интоксикации («+» — наличие, «-» -отсутствие)

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ПДРФ - полиморфизм длин рестриктазных фрагментов

п н - пара нуклеотидов - мера длины фрагмента двунитевой ДНК

Подписано в печать 24 04 2007 г Исполнено 24 04 2007 г Печать трафаретная

Заказ Ш 445 Тираж 100 экз

Типография «11-и ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш, 36 (495) 975-78-56 www autoreferat ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Игнатьев, Илья Владимирович

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Гликопротеин Р: структура, роль в организме, тканевая локализация

1.2. Выведение ЛС гликопротеином Р из организма, его 11 участие в развитии нежелательных лекарственных реакций

1.3. Полиморфизм гликопротеина Р. Аминокислотные замены

1.4. Общая характеристика гена MDR

1.5. Полиморфные маркеры гена MDR

1.6. Исследования клинической значимости полиморфных маркеров С1236Т, G2677T/A и С3435Т гена MDR

1.7. Полиморфный маркер Т-129С гена MDR

1.8. Полиморфный маркер G1199A гена MDR

1.9. Этнические особенности распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера С3435Т гена MDR

1.10. Этнические различия в частотах гаплотипов гена MDR

1.11. Влияние полиморфизма гена MDR1 на фармакокинетику 32 дигоксина

1.12. Влияние полиморфизма гена MDR1 на фармакокинетику 36 фексофенадина

1.13. Ассоциация гена MDR1 с эффективностью химиотерапии у 37 пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями

1.14. Гликопротеин Р и фармакокинетика иммуносупрессоров у больных с трансплантациями внутренних органов

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ

3.1. Ассоциация полиморфных маркеров гена MDR1 с нежелательными лекарственными реакциями при длительном приеме дигоксина у пациентов с постоянной формой фибрилляции предсердий

3.2. Анализ этнических различий в распределении частот аллелей и генотипов полиморфных маркеров гена MDR

Введение Диссертация по биологии, на тему "Полиморфизм гена MDR1: популяционные и фармакогенетические аспекты"

Актуальность проблемы.

Стремительный прогресс в области медицинских знаний привел в настоящее время к тому, что многие заболевания, от которых большое количество людей страдали и умирали в прошлом, стали относительно легко и быстро излечиваться. В результате ослабления давления естественного отбора заболеваний у людей теряется естественная устойчивость к ним.

В силу того, что устойчивость к одним заболеваниям зачастую связана с устойчивостью к другим, складывается парадоксальная ситуация. Чем больше людей вылечивает медицина, тем больше людей заболевает. Растет число неизвестных ранее заболеваний. Возрастает также количество осложнений при заболеваниях. Кроме того, увеличение средней продолжительности жизни людей в развитых странах приводит к тому, что медики все чаще сталкиваются с болезнями пожилых, которые ранее в силу своей редкости не попадали в поле зрения специалистов.

Все вышесказанное приводит к усложнению медицинской методологии. И, в первую очередь, речь идет о фармакотерапии, так как данный метод требует от врача значительно меньше времени, необходимого для каждого пациента, чем в случае, например, хирургии. Происходит неуклонное увеличение количества лекарственных средств, усложняются подходы к их применению. Современная стратегия поиска новых лекарственных форм сводится к выявлению первопричины заболевания и узконаправленного воздействия на неё. Препараты становятся все более специфичными, зачастую они имеют узкий терапевтический диапазон [4].

Несмотря на явные внешние различия между людьми, все они относятся к одному биологическому виду и имеют один и тот же набор хромосом и генов. Однако гены разных людей несколько различаются. Это явление носит название генетического полиморфизма. В создании генетического полиморфизма участвует всего 0,1% материала человеческого генома, однако эта малая часть и воспроизводит все то фенотипическое разнообразие, которое наблюдается в человеческих популяциях. Оно сводится к тому, что конкретный ген у разных людей, осуществляя по сути одну и ту же функцию, может по-разному отвечать на какие-либо воздействия, и/или эффективность его работы будет различна [3].

Вместе с тем, современные лекарства подчас имеют такую высокую специфичность, что оказывают воздействие на конкретные гены. Кроме того, выведение лекарств или их метаболитов также находится под генетическим контролем. В силу этих причин, индивидуальные генетические различия между людьми становятся все более серьезным фактором, выступающим в качестве причины многих нежелательных лекарственных реакций (HJIP).

Поэтому изучение индивидуальных генетических различий, приводящих к различиям в ответе организма на тот или иной препарат, в современной медицине приобретает первостепенное значение [151,156].

Основным фактором, лежащим в основе генетических различий между людьми, является множественный аллелизм, обусловленный полиморфными маркерами. Поэтому индивидуализация фармакотерапии, которой занимается фармакогенетика, сводится, в первую очередь, к выявлению полиморфных маркеров, ассоциированных с изменением реакции организма на лекарственные средства, разработке методов генотипирования больных (выявлению аллельных вариантов полиморфных маркеров) и внедрению этой методологии в практическую медицину [4].

До недавнего времени фармпроизводители по тем или иным причинам игнорировали фармакогенетику, но крупные финансовые скандалы последних лет изменили ситуацию. Они были связаны с отзывом из продажи ряда препаратов, поскольку в ходе доклинических испытаний не учитывались генетические особенности пациентов, что повлекло за собой развитие многочисленных HJIP и, как следствие, судебные претензии.

В силу того, что частоты аллельных вариантов многих полиморфных маркеров различаются между популяциями, принято говорить об этнических особенностях при индивидуализации фармакотерапии. Один и тот же аллельный вариант в разных этносах может вносить различный вклад в развитие HJIP или даже полностью компенсироваться другими аллельными вариантами. Поэтому выявление частот аллельных вариантов в различных этнических группах, которое раньше представляло исключительно академический интерес для популяционной генетики, сегодня является неотъемлемым атрибутом фармакогенетических исследований [146].

Цели и задачи работы

Целью данной работы явилось изучение ассоциации полиморфных маркеров гена MDR1, кодирующего гликопротеин Р, с уровнем лекарственного средства дигоксина (сердечного гликозида) в плазме крови и с развитием HJIP при применении данного препарата, а также расчет прогностической значимости генотипирования для больных. Предполагается, что в силу того, что гликопротеин Р играет важную роль во всасывании и выведении из организма целого ряда ксенобиотиков в т.ч. и лекарственных средств, однонуклеотидные замены, приводящие к различным функциональным нарушениям в кодирующим его гене, имеют одинаково высокую значимость в различных этнических группах. Для уточнения этого проводилось генотипирование четырех различных этнических групп Российской Федерации.

Для достижения обозначенных целей были поставлены следующие задачи:

1. Изучить распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера С3435Т гена MDR1, кодирующего гликопротеин Р, в группе больных с постоянной формой мерцательной аритмии, длительно принимающих дигоксин;

2. Определить концентрацию дигоксина в плазме крови выборочно взятых пациентов изучаемой группы и провести статистический анализ распределений аллелей и генотипов полиморфного маркера С3435Т гена MDR1 среди подгрупп изучаемой группы, выделенных на основе концентрационных различий;

3. Изучить ассоциацию аллелей и генотипов полиморфного маркера С3435Т гена MDR1 с развитием HJIP при применении дигоксина у больных с постоянной формой мерцательной аритмии.

4. Изучить распределение аллелей и генотипов полиморфных маркеров С1236Т и С3435Т гена MDR1 в случайных выборках из трех этнических групп Чукотского автономного округа: чукчей, эвенов и русских, а также среди казахов;

5. Провести статистический анализ распределений аллелей и генотипов изученных полиморфных маркеров гена MDR1 в вышеуказанных группах, рассмотреть статистическую достоверность выявленных различий.

Научная новизна и практическая значимость работы

В данной работе первые изучено распределение аллелей и генотипов полиморфных маркеров гена MDR1 среди нескольких различных этнических групп, проживающих на территории России. Также впервые изучена ассоциация между данными полиморфными маркерами и развитием гликозидной интоксикации при терапии дигоксином у больных с постоянной формой мерцательной аритмии в выборке из Московской популяции. Разработаны быстрые и четкие методики генотипирования для вышеназванных маркеров на основе ПЦР-ПДРФ (полимеразная цепная реакция - полиморфизм длин рестрикционных фрагментов). Полученные данные могут быть использованы для внедрения методов генотипирования в клиническую практику в Российской Федерации для минимизации ущерба от НДР в будущем.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Игнатьев, Илья Владимирович

выводы

1) Обнаружена ассоциация полиморфного маркера С3435Т гена MDR1 с возникновением симптомов гликозидной интоксикации при приеме дигоксина у больных хронической сердечной недостаточностью с постоянной формой мерцательной аритмии; генотип 3435ТТ и аллель 3435Т являются генетическими факторами риска (OR равен 8,67 и 3,90 при доверительных интервалах 3,18-23,60 и 1,90-8,00, соответственно).

2) Полиморфный маркер С3435Т гена MDR1 ассоциирован с повышением уровня равновесной концентрации дигоксина в крови; концентрация дигоксина достоверно выше у пациентов с генотипом 3435ТТ по сравнению с пациентами, имеющими генотипы 3435СС и 3435СТ. Наличие подобной ассоциации позволяет предположить, что в основе развития нежелательных лекарственных реакций при применении дигоксина действительно лежат генетические особенности пациентов.

3) Прогностическая ценность генотипирования больных по полиморфному маркеру С3435Т гена MDR1 для прогнозирования гликозидной интоксикации составила 42% для положительного результата в случае выявления генотипа 3435ТТ и 80% для отрицательного результата в случае выявления генотипов 3435СС или 3435СТ. Найденные значения позволяют рекомендовать проведение генотипирования больных по полиморфному маркеру С3435Т гена MDR1 для повышения эффективности и безопасности терапии дигоксином.

4) Различия в частотах аллелей полиморфного маркера С1236Т гена MDR1 наблюдались между казахами и русскими и между русскими и чукчами; различий в частотах генотипов данного полиморфного маркера в изученных группах не наблюдалось, что косвенно подтверждает отсутствие влияния данной однонуклеотидной замены на эффективность «работы» гликопротеина Р.

5) Частоты аллелей и генотипов полиморфного маркера С3435Т гена MDR1 не различались между русскими и казахами, но существенно различались между русскими и коренным населением Чукотского АО, а также между казахами и коренным населением Чукотского АО; полученные результаты могут быть использованы при составлении региональных рекомендаций по использованию дигоксина.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведено детальное обследование группы больных хронической сердечной недостаточностью (ХСН) с постоянной формой мерцательной аритмии (ПФМА), длительно принимавших дигоксин. Симптомы гликозидной интоксикации (снижение аппетита, тошнота, рвота, желудочковая экстрасистолия) отмечены у 26 пациентов (25%).

Для изучения ассоциации гена MDR1 с развитием симптомов гликозидной интоксикации исследовали частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров С1236Т и С3435Т данного гена. Частоты аллелей и генотипов полиморфного маркера С1236Т достоверно не различались между подгруппами больных с гликозидной интоксикацией и без таковой. При измерении равновесной концентраций дигоксина в плазме крови у 29 случайно выбранных больных была обнаружена корреляция генотипа ТТ полиморфного маркера С3435Т гена MDR1 с повышением равновесной концентрации данного лекарственного средства (ЛС).

Генотип 3435ТТ достоверно чаще встречался в группе пациентов, у которых развивалась гликозидная интоксикация, по сравнению с группой без таковой. Это позволяет предположить наличие ассоциации между полиморфным маркером С3435Т и развитием гликозидной интоксикации. Генотип 3435ТТи аллель 3435Т являются генетическими факторами риска (OR = 8,67 и 3,90 при доверительных интервалах 3,18-23,60 и 1,90-8,00, соответственно), предрасполагающими к развитию гликозидной интоксикации при длительном приеме дигоксина у больных ХСН с ПФМА.

Была исследована возможность использования выявления генотипа ТТ для прогнозирования развития симптомов гликозидной интоксикации. Чувствительность выявления генотипа ТТ для прогнозирования развития симптомов гликозидной интоксикации составила 30%, специфичность -94%. Иными словами, при наличии генотипа 3435ТТ, вероятностью

81 развития гликозидной интоксикации составляет 30%, а при наличии генотипа 3435СТ или 3435СС вероятность того, что гликозидная интоксикация не разовьется, составляет 94%. Прогностическая ценность (PPV) положительного результата в случае выявления генотипа ТТ составила 42%. Прогностическая ценность отрицательного результата (NPV) в случае выявления генотипов СС или СТ составила 80%. Это означает, что пациент с симптомами гликозидной интоксикации с вероятностью 42% является носителем генотипа 3435ТТ. А пациент без гликозидной интоксикации с вероятностью 80% является носителем генотипа 3435СТ или 3435СС.

Для анализа применимости полученных результатов в различных популяциях были также изучены частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров С1236Т и С3435Т гена MDR1 в случайных выборках из четырех этнических групп: чукчей, эвенов, русских и казахов. Частоты генотипов полиморфного маркера С1236Т не различались во всех изученных группах. Частоты аллелей различались между русскими и чукчами, а также между русскими и казахами, причем эти различия были на грани достоверности.

Полученные результаты можно объяснить отсутствием ассоциации полиморфного маркера С1236Т с эффективностью «работы» гликопротеина Р. Поэтому носительство того или иного генотипа никак не отражается на приспособительных способностях индивида.

Чукчи и эвены являются монголоидами. Русские - европеоидами. Казахи представляют собой смешанный европеоидно-монголоидный этнос. Именно этим фактом можно объяснить наблюдаемые различия в частотах аллелей данного полиморфного маркера.

Наблюдаемые распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера С3435Т гена MDR1 носят зеркальный характер. Значительные различия наблюдаются у коренных жителей Чукотки по сравнению с русскими и с казахами. Различий между русскими и казахами не наблюдается.

Частота аллеля 3435Т практически в полтора раза выше у коренных жителей Чукотки (63,6%) по сравнению с русскими (49,6%) и с казахами (44,0%). Генотип 3435ТТ встречается у них почти в два раза чаще (42,4%), чем у русских (26,6%) и у казахов (25,0%). С популяционной точки зрения этот феномен можно объяснить, тем, что условия жизни (распространенные инфекции, климат, водный режим, температурный режим, инсоляция и пр.) на территориях проживания русских и казахов схожи в большей степени, чем на Чукотке. Вероятно условия, в которых на протяжении многих поколений выживали коренные народы Крайнего Севера, настолько экстремальны, что происходил отбор по иным признакам, чем в более мягком климате.

Для детального объяснения данного феномена необходимо дальнейшее изучение частот аллелей и генотипов полиморфного маркера С3435Т гена MDR1 в различных этнических группах.

Почти двукратное преобладание генотипа 3435ТТ полиморфного маркера С3435Т гена MDR1 среди коренного населения Чукотского АО по сравнению с русскими и казахами позволяет предположить, что риск развития симптомов гликозидной интоксикации при приеме дигоксина у чукчей и эвенов значительно выше, чем у русских с казахами. Это необходимо учитывать при составлении региональных рекомендаций по использованию данного J1C.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Игнатьев, Илья Владимирович, Москва

1. Гааль Э., Медьеши Г., Верецкеи Л. Электрофорез в разделении биологических макромолекул. М.: "МИР". 1982-448 с.

2. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: ИД "Практика". 1999.-459 с.

3. Кайданов Л.З. Генетика популяций. М.: "Высшая школа". 1996. -320 с.

4. Ляхович В.В., Вавилин В.А., Гришанова А., Макарова С.Л., Коваленко С.П. Фармакогенетика и современная медицина. // Вестник Российской Академии Медицинских Наук. 2004. Т. 10. С. 40-45.

5. Новиков Д.А., Новочадов В.В. Статистические методы в медико-биологическом эксперименте (типовые случаи). Волгоград: Издательство ВолГМУ, 2005. 84 с.

6. Шабарова З.А., Богданов А.А., Золотухин А.С. Химические основы генетической инженерии. М.: Издательство московского университета. 1994. 224 с.

7. Allabi А.С., Horsmans Y., Issaoui В., Gala J.L. Single nucleotide polymorphisms of ABCB1 (MDR1) gene and distinct haplotype profile in a West Black African population.// Eur. J. Clin. Pharmacol. 2005. Vol. 61(2). P. 97-102.

8. Ambudkar S.V., Kimchi-Sarfaty C., Sauna Z.E., Gottesman M.M. P-glycoprotein: from genomics to mechanism.// Oncogene. 2003. Vol. 22(47). P. 7468-7485.

9. Babaoglu M.O., Bayar В., Aynacioglu A.S., Kerb R., Abali H., Celik I., Bozkurt A. Association of the ABCB1 3435C>T polymorphism with antiemetic efficacy of 5-hydroxytryptamine type 3 antagonists.// Clin Pharmacol Ther. 2005. Vol. 78(6). P. 619-26.87

10. Balram С., Sharma A., Sivathasan C., Lee E.J. Frequency of C3435T single nucleotide MDR1 genetic polymorphism in an Asian population: phenotypic-genotypic correlates.// Br. J. Clin. Pharmacol. 2003. Vol. 56(1). P. 78-83.

11. Barnard J.B., Richardson S., Sheldon S., Fildes J., Pravica V., Hutchinson I.V., Leonard C.T., Yonan N. The MDR1/ABCB1 gene, a high-impact risk factor for cardiac transplant rejection.// Transplantation. 2006. Vol. 82(12). P. 1677-1682.

12. Baron J.M., Goh L.B., Yao D., Wolf C.R., Friedberg T. Modulation of P450 CYP3A4-dependent metabolism by P-glycoprotein: implications for P450 phenotyping.// J Pharmacol Exp Ther. 2001. Vol. 296(2). P. 351358.

13. Bastone L., Reilly M., Rader D.J., Foulkes A.S. MDR and PRP: a comparison of methods for high-order genotype-phenotype associations.// Hum. Hered. 2004. Vol. 58(2). P. 82-92.

14. Bauer В., Hartz A.M.S., Flicker G., and Miller D.S. Modulation of P-glycoprotein transport function at the blood-brain barrier.// Exp. Biol. Med. 2005. Vol. 230. P. 118-127.

15. Bebek N., Qine N., Oner G.O., E§kazan E., Ozbek U. Genotype and allele frequencies of MDR-1 C3435T polymorphism in Turkish population.// Journal of Neurological Sciences Turkish. 2005. Vol. 22(3). P. 261-266.

16. Beringer P.M., Slaughter R.L. Transporters and their impact on drug disposition.// Ann. Pharmacother. 2005. Vol. 39(6). P. 1097-1108.

17. Bernal M.L., Sinues В., Fanlo A., Mayayo E. Frequency distribution of C3435T mutation in exon 26 of the MDR1 gene in a Spanish population.//

18. Ther. Drug. Monit. 2003. Vol. 25(1). P. 107-111.

19. Bodor M., Kelly E.J., Ho R.J. Characterization of the human MDR1 gene.//AAPS J. 2005. Vol. 7(1). P. 1-5.

20. Borst P., Evers R., Kool M., Wijnholds J. A family of drug transporters: the multidrug resistance-associated proteins.// J. Natl. Cancer Inst. 2000. Vol. 92. P. 1295-1302.

21. Brenner S.S., Klotz U. P-glycoprotein function in the elderly.// Eur. J. Clin. Pharmacol. 2004. Vol. 60(2). 97-102.

22. Brinkmann U. Functional polymorphisms of the human multidrug resistance (MDR1) gene: correlation with P glycoprotein expression and activity in vivo.// Novartis Found Symp. 2002. Vol. 243. P. 207-210.

23. Brinkmann U., Eichelbaum M. Polymorphisms in the ABC drug transporter gene MDRl.il Pharmacogenomics J. 2001. Vol. 1(1). P. 59-64.

24. Brumme Z.L., Dong W.W., Chan K.J., Hogg R.S., Montaner J.S., O'Shaughnessy M.V., Harrigan P.R. Influence of polymorphisms within the CX3CR1 and MDR1 genes on initial antiretroviral therapy response.// AIDS. 2003. Vol. 17(2). P. 201-208.

25. Calado R.T., Falcao R.P., Garcia A.B., Gabellini S.M., Zago M.A., Franco R.F. Influence of functional MDR1 gene polymorphisms on P-glycoprotein activity in CD34+ hematopoietic stem cells.// Haematologica. 2002. Vol. 87. P. 564-568.

26. Cavaco I., Gil J.P., Gil-Berglund E., Ribeiro V. CYP3A4 and MDR1 alleles in a Portuguese population.// Clin. Chem. Lab. Med. 2003. Vol. 41(10).P. 1345-1350.

27. Chelule P.K., Gordon M., Palanee Т., Page Т., Mosam A., Coovadia HM, Cassol S. MDR1 and CYP3A4 polymorphisms among African, Indian, and white populations in KwaZulu-Natal, South Africa.// Clin. Pharmacol. Ther. 2003. Vol. 74(2). P. 195-196.

28. Chen C., Hanson E., Watson J.W., and Lee J.S. P-glycoprotein limits the brein penetration of nonsedating but not sedating HI-antagonists.// Drug Metabolism and Disposition. 2003. Vol. 31(3). P. 312-318.

29. Chinn L.W., Kroetz D.L. ABCB1 pharmacogenetics: progress, pitfalls, and promise.// Clin Pharmacol Ther. 2007. Vol. 81(2). P. 265-269.

30. Choudhuri S., Klaassen C.D. Structure, function, expression, genomic organization, and single nucleotide polymorphisms of human ABCB1 (MDR1), ABCC (MRP), and ABCG2 (BCRP) efflux transporters.// Int. J. Toxicol. 2006. Vol. 25(4). P. 231-259.

31. Chowbay В., Li H., David M., Cheung Y.B., Lee EJ. Meta-analysis of the influence of MDR1 C3435T polymorphism on digoxin pharmacokinetics and MDR1 gene expression.// Br. J. Clin. Pharmacol. 2005. Vol. 60(2). P. 159-171.

32. Chowbay В., Zhou S., Lee E.J. An interethnic comparison of polymorphisms of the genes encoding drug-metabolizing enzymes and drug transporters: experience in Singapore.// Drug. Metab. Rev. 2005. Vol. 37(2). P. 327-378.

33. Collins J.F., Egan D., Yusuf S., Garg R., Williford W.O., Geller N; DIG Investigators. Overview of the DIG trial.// Control Clin Trials. 2003. Vol. 24 (6 Suppl). P. 269-276.

34. Crouthamel M.H., Wu D., Yang Z., Ho R.J. A novel MDR1 G1199T variant alters drug resistance and efflux transport activity of P-glycoprotein in recombinant Hek cells.// J. Pharm. Sci. 2006. Vol. 95(12). P. 2767-77.

35. Drenou В., Fardel D., Amiot L., Fauchet R. Detection of P-glycoprotein activity on normal and leucemic CD 34+ cells.// Leuc. Res. 1993. Vol. 17(12). P. 1031-1035.

36. Drescher S., Schaeffeler E., Hitzl M., Hofmann U., Schwab M., Brinkmann U., Eichelbaum M., Fromm M.F. MDR1 gene polymorphisms and disposition of the P-glycoprotein substrate fexofenadine.// Br. J. Clin. Pharmacol. 2002 Vol. 53(5). P. 526-534.

37. Dresser M.J. The MDR1 C3435T polymorphism: effects on P-glycoprotein expression/function and clinical significance.// AAPS Pharm. Sci. 2001. Vol. 3(3). P. 1-3.

38. Eckford P.D., Sharom FJ. P-glycoprotein (ABCB1) interacts directly with lipid-based anti-cancer drugs and platelet-activating factors.// Biochem Cell Biol. 2006. Vol. 84(6). P. 1022-1033.

39. Eichelbaum M., Fromm M.F., Schwab M. Clinical aspects of the MDR1 (ABCB1) gene polymorphism.// Ther. Drug. Monit. 2004. Vol. 26(2). P. 180-185.

40. Evans W.E., McLeod H.L. Pharmacogenomics Drug Disposition, Drug Targets, and Side Effects.// The New England Journal of Medicine. 2003. Vol. 348(6). P. 538-549.

41. Fromm M.F. The influence of MDR1 polymorphisms on P-glycoprotein expression and function in humans.// Adv Drug Deliv Rev. 2002. Vol. 54(10). P. 1295-1310.

42. Gaikovitch E.A., Cascorbi I., Mrozikiewicz P.M., Brockmoller J., Frotschl92

43. R., Корке К., Gerloff Т., Chernov J.N., Roots I. Polymorphisms of drug-metabolizing enzymes CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, CYP1A1, NAT2 and of P-glycoprotein in a Russian population.// Eur. J. Clin. Pharmacol. 2003. Vol. 59(4). P. 303-312.

44. Gerloff Т., Schaefer M., Johne A., Oselin K., Meisel C., Cascorbi I., and Roots I. MDR1 genotypes do not influence the absorption of a single oral dose of 1 mg digoxin in healthy white males.// J. Clin. Pharmacol. 2002. Vol. 54. P. 610-616.

45. Gervasini G., Vizcaino S., Gasiba C., Carrillo J.A., Benitez J. Differences in CYP3A5*3 genotype distribution and combinations with other polymorphisms between Spaniards and Other Caucasian populations.// Ther. Drug. Monit. 2005. Vol. 27(6).P. 819-821.

46. Gwee P.C., Tang K., Chua J.M., Lee E.J., Chong S.S., Lee C.G. Simultaneous genotyping of seven single-nucleotide polymorphisms in the MDR1 gene by single-tube multiplex minisequencing.// Clin Chem. 2003. Vol. 49(4). P. 672-676.

47. Hamdy S.I., Hiratsuka M., Narahara K., Endo N., El-Enany M., Moursi N., Ahmed M.S., Mizugaki M. Genotype and allele frequencies of TPMT, NAT2, GST, SULT1A1 and MDR-1 in the Egyptian population.// Br. J. Clin. Pharmacol. 2003. Vol. 55(6). P. 560-569.

48. Ieiri I., Takane H„ Otsubo K. The MDR1 (ABCB1) gene polymorphism and its clinical implications.// Clin. Pharmacokinet. 2004. Vol. 43(9). P. 553-576.

49. Jamroziak К., Balcerczak E., Mlynarski W., Mirowski M., Robak T. Distribution of allelic variants of functional C3435T polymorphism of drug transporter MDR1 gene in a sample of Polish population.// Pol. J. Pharmacol. 2002. Vol. 54(5). P. 495-500.

50. Jamroziak K., Robak T. Pharmacogenomics of MDR1/ABCB1 gene: the influence on risk and clinical outcome of haematological malignancies.// Hematology. 2004. Vol. 9(2). P. 91-105.

51. Kafka A., Sauer G., Jaeger C., Grundmann R., Kreienberg R., Zeillinger R., Deissler H. Polymorphism C3435T of the MDR1 gene predicts response to preoperative chemotherapy in locally advanced breast cancer.// Int J Oncol. 2003. Vol. 22(5). P. 1117-1121.

52. Kajinami K., Brousseau M.E., Ordovas J.M., Schaefer E.J. Polymorphisms in the multidrug resistance-1 (MDR1) gene influence the response to atorvastatin treatment in a gender-specific manner.// Am. J. Cardiol. 2004. Vol. 93(8). P. 1046-1050.

53. Kang H.A., Cho H.Y., Lee Y.B. The effect of MDR1 G2677T/A polymorphism on pharmacokinetics of gabapentin in healthy Korean subjects.// Arch Pharm Res. 2007. Vol. 30(1). P. 96-101.

54. Kerb R., Aynacioglu A.S., Brockmoller J., Schlagenhaufer R., Bauer S., Szekeres Т., Hamwi A., Fritzer-Szekeres M., Baumgartner C., Ongen H.Z., Guzelbey P., Roots I., Brinkmann U. The predictive value of MDR1,

55. CYP2C9, and CYP2C19 polymorphisms for phenytoin plasma levels.// Pharmacogenomics J. 2001. Vol. 1(3). P. 204-210.

56. Kerb R., Hoffmeyer S., Brinkmann U. ABC drug transporters: hereditary polymorphisms and pharmacological impact in MDR1, MRP1 and MRP2JI Pharmacogenomics. 2001. Vol. 2(1). P. 51-64.

57. Kim R.B. MDR1 single nucleotide polymorphisms: multiplicity of haplotypes and functional consequences.// Pharmacogenetics. 2002. Vol. 12(6). P. 425-427.

58. Kimchi-Sarfaty C., Oh J.M., Kim I.W., Sauna Z.E., Calcagno A.M., Ambudkar S.V., Gottesman M.M. A "silent" polymorphism in the MDR1 gene changes substrate specificity.// Science. 2007. Vol. 315(5811). P. 525-528.

59. Li D., Zhang G.L., Lou Y.Q., Li Q., Wang X., Bu X.Y. Genetic polymorphisms in MDR1 and CYP3A5 and MDR1 haplotype in mainland Chinese Han, Uygur and Kazakh ethnic groups.// J Clin Pharm Ther. 2007. Vol. 32(1). P. 89-95.

60. Li Y., Wang Y., Sun J., Li Y., Yang L. Distribution of the functional MDR1 C3435T polymorphism in the Han population of China.// Swiss Med. Wkly. 2006. Vol. 136(23-24). P. 377-382.

61. Lee S.S., Kim S.Y., Kim W.Y., Thi-Le H., Yoon Y.R., Yea S.S., Shin J.G. MDR1 genetic polymorphisms and comparison of MDR1 haplotype profiles in Korean and Vietnamese populations.// Ther. Drug. Monit. 2005. Vol. 27(4). P. 531-535.

62. Liu Y., Ни M. P-glycoprotein and bioavailability-implication of polymorphism.// Clin ChemLab Med. 2000. Vol. 38(9). P. 877-881.

63. Mai I., Stormer E., Goldammer M., Johne A., Kruger H., Budde K., Roots I. MDR1 haplotypes do not affect the steady-state pharmacokinetics ofcyclosporine in renal transplant patients.// J. Clin. Pharmacol. 2003. Vol. 43(10). P. 1101-1107.

64. Marzolini C., Paus E., Buclin Т., Kim R.B. Polymorphisms in human MDR1 (P-glycoprotein): Recent advances and clinical relevance.// Clin. Pharmacol. Ther. 2004. Vol. 75(1). P. 13-33.

65. McLeod H.L., Evans W.E. Pharmacogenomics: unlocking the human genome for better drug therapy.// Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2001. Vol. 41. P. 101-121.

66. Mealey K.L. Therapeutic implications of the MDR1 gene.// J. Vet. Pharmacol. Therap. 2004. Vol. 27. P. 257-264.

67. McDevitt C.A., Callaghan R. How can we best use structural information on P-glycoprotein to design inhibitors? Pharmacol Ther. 2007. Vol. 113(2). P. 429-41.

68. Meisel P., Giebel J., Kunert-Keil C„ Dazert P., Kroemer H.K., Kocher T. MDR1 gene polymorphisms and risk of gingival hyperplasia induced by calcium antagonists.// Clin. Pharmacol. Ther. 2006. Vol. 79(1). P. 62-71.

69. Meisel C., Roots I., Cascorbi I., Brinkmann U., Brockmoller J. How to manage individualized drug therapy: application of pharmacogenetic knowledge of drug metabolism and transport.// Clin Chem Lab. 2000. Vol. 38(9). P. 869-876.

70. Morita N., Yasumori Т., Nakayama K. Human MDR1 polymorphism: G2677T/A and C3435T have no effect on MDR1 transport activities.// Biochem. Pharmacol. 2003. Vol. 65(11). P. 1843-1852.

71. Moriya Y., Nakamura Т., Horinouchi M., Sakaeda Т., Tamura Т., Aoyama N., Shirakawa Т., Gotoh A., Fujimoto S., Matsuo M., Kasuga M., and

72. Okumura К. Effects of Polymorphisms of MDR1, MRP1, and MRP2 Genes on Their mRNA Expression Levels in Duodenal Enterocytes of Healthy Japanese Subjects.// Biol. Pharm. Bull. 2002. Vol. 25(10). P. 1356-1359.

73. O'Kane D.J., Weinshilboum R.M., Moyer T.P. Pharmacogenomics and reducing the frequency of adverse drug events.// Pharmacogenomics. 2003. Vol. 4(1). P. 1-4.

74. Oselin K., Gerloff Т., Mrozikiewicz P.M., Pahkla R., Roots I. MDR1 polymorphisms G2677T in exon 21 and C3435T in exon 26 fail to affect rhodamine 123 efflux in peripheral blood lymphocytes.// Fundam. Clin. Pharmacol. 2003. Vol. 17(4). P. 463-469.

75. Ostrovsky O., Nagler A., Korostishevsky M., Gazit E., and Galski H. Genotype and Allele Frequencies of C3435T Polymorphism of the MDR1 Gene in Various Jewish Populations of Israel.// Ther Drug Monit. 2004. Vol. 26(6). P. 679-684.

76. Owen A., Goldring C., Morgan P., Chadwick D., Park B.K., Pirmohamed M. Relationship between the C3435T and G2677T(A) polymorphisms in the ABCB1 gene and P-glycoprotein expression in human liver.// Br. J. Clin. Pharmacol. 2005. Vol. 59(3). P. 365-370.

77. Park H.J., Shinn H.K., Ryu S.H., Lee H.S., Park C.S., Kang J.H. Genetic polymorphisms in the ABCB1 gene and the effects of fentanyl in Koreans.// Clin Pharmacol Ther. 2007. Vol. 81(4). P. 539-546.

78. Pauli-Magnus C., Feiner J., Brett C., Lin E., Kroetz D.L. No effect of MDR1 C3435T variant on loperamide disposition and central nervous system effects.// Clin. Pharmacol. Ther. 2003. Vol. 74(5). P. 487-498.

79. Pauli-Magnus C., Kroetz D.L. Functional implications of genetic polymorphisms in the multidrug resistance gene MDR1 (ABCBl).ll Pharm. Res. 2004. Vol. 21(6). P. 904-913.

80. Peer D., Dekel Y., Melikhov D., Margalit R. Fluoxetine inhibits multidrug resistance extrusion pumps and enhances responses to chemotherapy in syngeneic and in human xenograft mouse tumor models.// Cancer Res. 2004. Vol. 64(20). P. 7562-7569.

81. Ramasamy K., Sisy Sam S., Chandrasekaran A. Allele and genotype frequency of MDR1 C3435T in Tamilian population.// Drug Metab Pharmacokinet. 2006. Vol. 21(6). P. 506-508.

82. Rathore S.S., Wang Y., Krumholz H.M. Sex-based differences in the effect of digoxin for the treatment of heart failure.// N Engl J Med. 2002. Vol. 347(18). P. 1403-1411.

83. Relling M.V., Hoffman J.M. Should pharmacogenomic studies be required for new drug approval?// Clin Pharmacol Ther. 2007. Vol. 81(3). P. 425428.

84. Romiti N., Tramonti G., Donati A., Chieli E. Effects of grapefruit juice on the multidrug transporter P-glycoprotein in the human proximal tubular cell line HK-2.// Life Sciences. 2004. Vol. 76(3). P. 293-302.

85. Ryu H.C., Kwon H.Y., Choi I.K., Rhee D.K. Analyses of single nucleotide polymorphisms and haplotype linkage of the human ABCB1 (MDR1) gene in Korean.// Arch Pharm Res. 2006. Vol. 29(12). P. 1132-1139.

86. Sakaeda T. MDR1 genotype-related pharmacokinetics: fact or fiction?// Drug Metab. Pharmacokinet. 2005. Vol. 20(6). P. 391-414.

87. Sakaeda Т., Nakamura Т., Okumura K. MDR1 genotype-related pharmacokinetics and pharmacodynamics.// Biol. Pharm. Bull. 2002. Vol. 25(11). P. 1391-1400.

88. Sakaeda Т., Nakamura Т., Okumura K. Pharmacogenetics of MDR1 and its impact on the pharmacokinetics and pharmacodynamics of drugs.// Pharmacogenomics. 2003. Vol. 4(4). P. 397-410.

89. Sakaeda Т., Nakamura Т., Okumura K. Pharmacogenetics of drug transporters and its impact on the pharmacotherapy.// Curr. Top. Med. Chem. 2004. Vol. 4(13). P. 1385-1398.

90. Schaeffeler E., Eichelbaum M., Brinkmann U., Penger A., Asante-Poku S., Zanger U.M., Schwab M. Frequency of C3435T polymorphism of MDR1 gene in African people.// Lancet. 2001. Vol. 358. P. 383-384.

91. Schwab M., Eichelbaum M., Fromm M.F. Genetic polymorphisms of the human MDR1 drug transporter.// Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2003. Vol. 43. P. 285-307.

92. Scotto K.W. and Johnson R.A. Transcription of the Multidrug Resistanse Gene MDR1: a Therapeutic Target.// Molecular interventions. 2001. Vol. 1(2). 117-125.

93. Seo Т., Ishitsu Т., Ueda N., Nakada N., Yurube K., Ueda K., Nakagawa K. ABCB1 polymorphisms influence the response to antiepileptic drugs in Japanese epilepsy patients.// Pharmacogenomics. 2006. Vol. 7(4). P. 551561.

94. Somogyi A.A., Barratt D.T., Coller J.K. Pharmacogenetics of opioids.//104

95. Clin Pharmacol Ther. 2007. Vol. 81(3). P. 429-444.

96. Takane H., Kobayashi D., Hirota Т., Kigawa J., Terakawa N., Otsubo K., Ieiri I. Haplotype-oriented genetic analysis and functional assessment of promoter variants in the MDR1 (ABCB1) gene.// J. Pharmacol. Exp. Ther. 2004. Vol. 311(3). P. 1179-1187.

97. Tang K., Wong L.P., Lee E.J., Chong S.S., Lee C.G. Genomic evidence for recent positive selection at the human MDR1 gene locus.// Hum. Mol. Genet. 2004. Vol. 13(8). P. 783-797.

98. Tsai K.Y., Tsao H. Primer on the human genome.// J Am Acad Dermatol. 2007. Vol. 56(5). P. 719-735.

99. Tsujimura S., Saito K., Nakayamada S., Tanaka Y. Relevance of multidrug resistance 1 and P-glycoprotein to drug resistance in patients with systemic lupus erythematosus.// Histol Histopathol. 2007. Vol. 22(4). P. 465-468.

100. Vaalburg W., Hendrikse N.H., Elsinga P.H., Bart J., van Waarde A. P-glycoprotein activity and biological response.// Toxicol. Appl. Pharmacol. 2005. Vol. 207(2). P. 257-260.

101. Verstuyft C., Schwab M., Schaeffeler E., Kerb R., Brinkmann U., Jaillon P., Funck-Brentano C., Becquemont L. Digoxin pharmacokinetics and MDR1 genetic polymorphisms.// Eur. J. Clin. Pharmacol. 2003. Vol. 58(12). P. 809-812.

102. Wang D., Johnson A.D., Papp A.C., Kroetz D.L., Sadee W. Multidrug resistance polypeptide 1 (MDR1, ABCB1) variant 3435C>Taffects mRNA stability.// Pharmacogenet. Genomics. 2005. Vol. 15(10). P. 693-704.

103. Woodahl E.L., Ho R.J. The role of MDR1 genetic polymorphisms in interindividual variability in P-glycoprotein expression and function.// Curr. Drug. Metab. 2004. Vol. 5(1). P. 11-9.106

104. Woodahl E.L., Yang Z., Bui Т., Shen D.D., and Ho R.J.Y. Multidrug Resistance Gene G1199A Polymorphism Alters Efflux Transport Activity of P-Glycoprotein.// The J. of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 2004. Vol. 310. P. 1199-1207.

105. Wunderlich K., Zimmermann C., Gutmann H., Teuchner В., Flammer J., Drewe J. Vasospastic persons exhibit differential expression of ABC-transport proteins.// Molecular Vision. 2003. Vol. 9. P. 756-761.

106. Yamaguchi H., Yano I., Saito H., Inui K. Pharmacokinetic role of P-glycoprotein in oral bioavailability and intestinal secretion of grepafloxacin in vivo.// J Pharmacol Exp Ther. 2002. Vol. 300(3). P. 1063-1069.

107. Yi S.Y., Hong K.S., Lim H.S., Chung J.Y., Oh D.S., Kim J.R., Jung H.R., Cho J.Y., Yu K.S., Jang I.J., Shin S.G. A variant 2677A allele of the MDR1 gene affects fexofenadine disposition.// Clin. Pharmacol. Ther. 2004. Vol. 76(5). P. 418-427.

108. Zheng H., Schuetz E., Zeevi A., Zhang J., McCurry K., Webber S., Iacono A., Lamba J., Burckart G.J. Sequential analysis of tacrolimus dosing in adult lung transplant patients with ABCB1 haplotypes.// J. Clin. Pharmacol. 2005. Vol. 45(4). P. 404-410.

109. Zheng H., Webber S., Zeevi A., Schuetz E., Zhang J., Lamba J., Bowman P., Burckart G.J. The MDR1 polymorphisms at exons 21 and 26 predictsteroid weaning in pediatric heart transplant patients.// Hum Immunol. 2002. Vol. 63(9). P. 765-770.