Исследование роли GSTP1,MDR1 и MRP1 в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и в формировании устойчивости к химиотерапии

Горева, Ольга Борисовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Исследование роли GSTP1,MDR1 и MRP1 в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и в формировании устойчивости к химиотерапии
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Исследование роли GSTP1,MDR1 и MRP1 в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и в формировании устойчивости к химиотерапии"

На правах рукописи

Горева Ольга Борисовна

ИССЛЕДОВАНИЕ РОЛИ СвТРГ, МИШ И МИР1 В ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К ХРОНИЧЕСКИМ ЛИМФОПРОЛИФЕРАТИВНЫМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ И В ФОРМИРОВАНИИ УСТОЙЧИВОСТИ К ХИМИОТЕРАПИИ

03 00 04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск - 2007

003060797

Работа выполнена в ГУ Научно-исследовательском институте молекулярной биологии и биофизики СО РАМН (Новосибирск, Россия)

Научный руководитель:

кандидат биологических наук, доцент Гришанова А Ю Научный консультант:

академик РАМН, доктор биологических наук, профессор Ляхович В В Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Поспелова Т И доктор медицинских наук Душкин М И

Ведущая организация:

ГУ Научно-исследовательский институт цитологии и генетики СО РАН (Новосибирск)

Защита состоится "_" _ 2007 г в _ часов на заседании

диссертационного совета Д 001 034 01 в ГУ Научно-исследовательском институте биохимии СО РАМН (630117, г Новосибирск, ул академика Тимакова, 2, тел 8-(383)333-54-81)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ Научно-исследовательского института биохимии СО РАМН

Автореферат разослан " //" asfiíUtf 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук,

старший научный сотрудник Русских Г С

Актуальность темы. В последние десятилетия проблема онкологических заболеваний становится все более актуальной В структуре смертности населения Земного шара смертность от злокачественных новообразований занимает 2-4-ое место, в высокоразвитых странах этот показатель выходит на 1-2-ое место (Якубовская, 2000), а по данным Госкомстата за 2005 год в России — 2-ое место, уступая только заболеваниям системы кровообращения (http //www gks ru/free_doc/2006/b06_l 3/04-27 htm) Число людей с впервые выявленными злокачественными новообразованиями неуклонно растет (Чиссов и соавт, 1995, Заридзе и соавт, 1998) Новосибирская область и г Новосибирск входят в число административных территорий, неблагоприятных по заболеваемости злокачественными новообразованиями, в том числе опухолями клеток крови

(http //www sibstat gcom ru/Sitr/press21 html. 2006) Опережая по темпам общую онкологическую заболеваемость, заболеваемость опухолями клеток крови с 1987 года по 2005 год увеличивалась примерно в 4,5 раза (с 3,2 до 14,2 на 100 тысяч населения), преимущественно за счет лейкозов и лимфом (Ковынев и соавт , 2006)

Такой рост связывают с всевозрастающим загрязнением окружающей среды чужеродными для организма веществами (ксенобиотиками), и, как следствие, увеличением их поступления в организм человека (Карпенко, 1999, Гуляева и соавт, 2000) Исследование причин повышения заболеваемостью опухолями клеток крови показало, что оно обусловлено неблагоприятной экологической ситуацией в г Новосибирске и Сибирском федеральном округе в целом и совпадает с пиками промышленных выбросов с отсрочкой эффекта на 7-10 лет (Ковынев и соавт, 2006)

Разная предрасположенность к заболеванию может быть обусловлена генетическими факторами, в том числе межиндивидуальными различиями в биоактивации проканцерогенов и выведении канцерогенных веществ из организма Установление взаимосвязи между определенным генотипом и формой заболевания может приблизить к пониманию механизмов развития различных форм рака, а с учетом предрасполагающих факторов (курение, загрязнители окружающей среды) позволит выявить группы риска, обладающие повышенной чувствительностью к данным заболеваниям

Рост случаев онкологических заболеваний выводит на передний план проблему их лечения Основным методом лечения онкогематологических заболеваний является интенсивная полихимиотерапия Однако, несмотря на высокий процент ремиссий (до 80%) после начальной терапии, рецидив бывает очень часто, и только 20% пациентов достигают долгосрочного выживания (Подцубная, 2001, Thomas, 2003) Кроме того, интенсивная химиотерапия является причиной тяжелых побочных эффектов, особенно у пожилых пациентов (Robak, 2004) То есть недолгосрочная эффективность химиотерапии и токсичность лечения являются главными проблемами, которые необходимо решать Одним из препятствий для успешной химиотерапии опухолей является множественная лекарственная

устойчивость (МЛУ) - невосприимчивость популяции клеток опухоли одновременно к целому ряду химиотерапевтических препаратов разного химического строения и с разным механизмом действия на клетку Феномен МЛУ может быть обусловлен различными механизмами, в частности, снижением накопления лекарственного препарата в клетке, связанным с функционированием Р-гликопротеина, белка множественной лекарственной устойчивости и обезвреживанием препаратов в клетке, обусловленным функционированием систем ферментов метаболизма ксенобиотиков, в частности фермента глутатион-8-трансферазы (Ставровская, 2000)

Основными механизмами в метаболизме и распределении ксенобиотиков является функционирование ферментов первой и второй фазы биотрансформации ксенобиотиков, а также АТФ-зависимых транспортных белков Фермент второй фазы глутатион-8-трансфераза класса Р участвует в процессах детоксикации широкого спектра электрофильных соединений, включая мутагены и канцерогены окружающей среды (Salmas, 1999, Tsuchida, 1992) Многие цитостатики, такие как алкилирующие агенты, антрациклины, препараты платины, стероидные гормоны также являются субстратами глутатион S-трансфераз (Clandmm, 1994, Pemble, 1994, Ставровская, 2000, Hayes, 2000) Ген GSTP1 является полиморфным в кодирующем регионе обнаружено две мутации Известно, что различные полиморфные варианты гена GSTP1 могут обладать различной субстрат-специфичной каталитической активностью (Coles et al, 2000, Allan et al, 2001) Полиморфизм в 5 экзоне гена GSTP1 приводит к замене аминокислоты в активном участке Н-сайта, который отвечает за субстратную специфичность фермента В связи с этим, межиндивидуальные различия в ферментативной активности GST, опосредуемые полиморфными вариантами генами, могут лежать в основе различной предрасположенности к онкологическим заболеваниям, связанным с влиянием окружающей среды Нет данных, связан ли полиморфизм гена GSTP1 с предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и устойчивостью к химиопрепаратам

АТФ-зависимые транспортные белки Р-гликопротеин и MRP1 (белок ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью) -продукты генов MDR1 и MRP1 осуществляют транспорт веществ из клетки Их физиологическая роль заключается в защите клеток от токсических соединений Гены MDR1 и MRP1 являются высокополиморфными, но несмотря на то, что Р-гликопротеин и MRP широко изучаются, пока непонятна функциональная и клиническая значимость открываемых вариантов полиморфизмов этих генов для биодоступности и распределения лекарств в организме человека и, как следствие, формирования лекарственной устойчивости опухолей Функциональная активность MRP изучена мало и нет сведений о его активности у больных онкологическими заболеваниями

Целью настоящей работы было исследование полиморфных вариантов генов GSTP1, MDR1, MRP1 и анализа взаимосвязи полиморфизмов этих генов с предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и устойчивостью к химиотерапии у больных с такими заболеваниями, а также исследование связи полиморфизмов генов MDR1 и MRP1 с функциональной активностью кодируемых ими белков Р-гликопротеина и MRP

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать распределение полиморфных вариантов гена GSTP1 в 5 (A313G) и 6 (С341Т) экзонах у здоровых европеоидов Западной Сибири и больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями

2. Исследовать распределение полиморфных вариантов гена MDR1 в б интроне (Ехб+139С/Т), 12 (С1236Т), 21 (G2677T), 26 (С3435Т) экзонах у здоровых европеоидов Западной Сибири и больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями

3. Исследовать распределение полимофрных вариантов гена MRP1 в 13 экзоне (Т1684С), 9 (A1218+8G), 18 (C2461-30G) интронах у здоровых европеоидов Западной Сибири и больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями

4. Проанализировать взаимосвязь полиморфизмов исследуемых генов с предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям у европеоидов западной Сибири в исследованиях «случай-контроль»

5. Провести анализ взаимосвязи полиморфизмов исследуемых генов с риском развития лекарственной устойчивости у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями

6. Определить функциональную активность Р-гликопротеина и MRP в лимфоцитах здоровых европеоидов Западной Сибири и больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями и оценить связь с результатами химиотерапии

7. Исследовать роль полиморфизмов генов MDR1 и MRP1 в функциональной активности Р-гликопротеина и MRP соответственно

Научная новизна

Впервые охарактеризована частота встречаемости полиморфизмов A313G и С341Т гена GSTP1, С6+139Т, С1236Т, G2677T, С3435Т гена MDR1, Т1684С, A1218+8G и C2461-30G гена MRP1 в популяции европеоидов Западной Сибири Показано, что распределение частот генотипов и аллелей полиморфных вариантов генов GSTP1, MDR1 и MRP1 у европеоидов Западной Сибири соответствуют частотам в других европеоидных популяциях

Впервые показано, что полиморфные варианты 341СС гена GSTP1 и 3435ТТ гена MDR1 ассоциированы с устойчивостью к хроническим

лимфопролиферативным заболеваниям, а 341СТ и 3435СС генотипы - с предрасположенностью

Впервые показано, что полиморфные варианты 313АО гена СБТР] и 2677ТТ, 3435ТТ гена МОЯ1 ассоциированы с устойчивостью, а генотипы 313АА, 3435СТ — с чувствительностью к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями Комбинация генотипов 2677ТТ/3435ТТ в 21 и 26 экзонах гена МОШ у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями увеличивает в 17 раз риск возникновения лекарственной устойчивости к проводимой химиотерапии в сравнении с больными, имеющими другие генотипы

При исследовании полиморфизмов Т1684С, А1218+8С и С2461-3(Ю гена МКР1 не выявлено достоверно значимых ассоциаций полиморфных вариантов гена с риском возникновения лимфопролиферативных заболеваний и развитием устойчивости к химиотерапии у больных с этими заболеваниями

Впервые показано, что функциональная активность Р-гликопротеина у больных неходжкинскими лимфомами ассоциирована со степенью злокачественности опухоли достоверно более высокий уровень активности показан для больных с высокой степенью злокачественности Показано также, что уровень функциональной активности Р-гликопротеина в лимфоцитах периферической крови не зависит от применяемых химиопрепаратов и не является показателем для прогноза устойчивости к химиотерапии у больных неходжкинскими лимфомами

Показано, что уровни функциональной активности Р-гликопротеина и М11Р1 не связаны с полиморфизмами С6+139Т, С1236Т, 02677Т, С3435Т гена МЛШ и Т1684С, А1218+8С, С2461-3(Ю гена МЯР1 соответственно ни у здоровых европеоидов Западной Сибири, ни у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями

Научная и практическая значимость работы

Настоящая работа вносит вклад в развитие фундаментальных знаний о роли полиморфизмов генов МИШ, MR.P1, СБТР1 и функциональной активности транспортных белков Р-гликопротеина и МИР1 в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и в формировании лекарственной устойчивости у больных с такими заболеваниями

Полученные данные могут быть использованы для оценки как индивидуального, так и популяционного риска развития онкогематологических заболеваний, а так же разработки дифференцированных программ их первичной профилактики

Выявление полиморфных вариантов генов, ассоциированных с устойчивостью к химиотерапии, позволит выработать рекомендации по оптимизации химиотерапии

Основные положения, выносимые на защиту:

1 С предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям связаны полиморфизмы С341Т в 6 экзоне гена GSTP1 и С3435Т в 26 экзоне гена MDR1

2 С формированием устойчивости к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями связаны полиморфизмы A313G в 5 экзоне гена GSTP1, G2677T в 21 экзоне и С3435Т 26 экзонах гена MDR1

3 Уровень функциональной активности Р-гликопротеина в лимфоцитах периферической крови у больных неходжкинскими лимфомами связан со степенью злокачественности опухоли

4 Эффективность химиотерапии у больных лимфопролиферативными заболеваниями не зависит от уровня функциональной активности Р-гликопротеина

5 Уровни функциональной активности Р-гликопротеина и MRP1 у здоровых европеоидов Западной Сибири и у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями не связаны с полиморфными вариантами генов MDR1 (С6+139Т, С1236Т, G2677T и С3435Т) и MRP1 (Т1684С, A1218+8G и C2461-30G) соответственно

Апробация работы. Результаты работы были представлены на следующих конференциях 17th Meeting of Europe Association for Cancer Research, Granada, Spam, 2002, 1 Международный симпозиум «Стресс и экстремальные состояния», Феодосия, Украина, 2002, 18th International Cancer Congress, Oslo, Norway, 2002, European Scientific Conference Understanding the Genome Scientific Progress and Microairay Technology, Genova, Italy, 2002, 37thAnnual Scientific Meeting European society for clinical investigation The pathophysiology of diseases from bench to bedside, Verona, Italy, 2003, 8th Congress of the European Hematology Association, Lyon, France, 2003, Российско-Норвежская конференция по вопросам гематологии, Санкт-Петербург, 2003, III Конференция молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины», Москва, 2004, 8-ая Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология - наука XXI века», Пущино, 2004, 9th Congress of the European Hematology Association, Geneva, Switzerland, 2004, 15th European Students' Conference for future doctors and young scientists, Berlin, Germany, 2004, XII Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов», Москва, 2005, Региональная конференция молодых ученых-окологов «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии», Томск, 2006, 13th International Student Congress of Medical Sciences, Groningen, the Netherlands, 2006, Совместная российско-американская конференция по проблемам гематологии и трансплантации костного мозга, 2006

Публикации. По материалам диссертации имеется 18 печатных работ (из них 3 в рецензируемой печати)

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 147 страницах машинописного текста с полуторным интервалом, содержит 22 таблицы и 28 рисунков и состоит из шести разделов введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, а также списка цитируемой литературы, включающего 206 ссылок

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Описание клинического материала. Работа выполнена на образцах периферической крови пациентов, которые наблюдались в гематологическом кабинете Новосибирской областной консультативной поликлиники и проходили лечение в отделении гематологии Государственной Новосибирской областной клинической больницы с 1998 по 2006 гг Исследовано 240 больных, из них 79 хроническим лимфолейкозом (ХЛЛ), 161 больной неходжкинскими лимфомами (HXJI) Группа больных включала 135 мужчин (56,0%) и 105 женщин (44,0%) в возрасте от 17 до 86 лет (средний возраст 56,64) Лечение больных проводилось по протоколам, которые включали следующие препараты циклофосфамид, лейкеран, адриамицин, онковин, винкристин, преднизолон Эффективность химиотерапии оценивалась врачами ГНОКБ через 6 месяцев после установления диагноза и начала лечения Наличие ответа на лечение определялось при полной или частичной клинико-гематологической ремиссии у больных НХЛ и ХЛЛ и в случае стабилизации у больных ХЛЛ Отсутствие ответа на лечение определялось при прогрессировании заболевания или в случае смерти больного

Контрольную группу составили пациенты травматологического отделения 3-й Муниципальной клинической больницы скорой помощи в период проведения контрольных анализов перед выпиской Она включала 100 человек, из них 54 мужчины (54,0%) и 46 женщин (46,0%) в возрасте от 17 до 86 лет (средний возраст 53,47) Основным критерием отбора в контрольную группу было отсутствие каких бы то ни было онкологических заболеваний

Методы исследования. Выделение ДНК из цельной крови проводили с помощью стандартного набора производства ООО «Лаборатория Медиген» (г Новосибирск) Анализ полиморфных вариантов специфических участков генома проводился с использованием методов полимеразной цепной реакции и анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов, используя структуру праймеров и соответствующие ферменты рестрикции, которые были описаны в литературе (Harries et al , 1997, Harris et al, 1998, Cascorbi et al, 2001, Ito et al, 2001) Подбор эндонуклеаз рестрикции для гена MRP1 проводился с спользованием программы Vector NTI 8 0 Для обнаружения

полиморфных вариантов MRP1 использовали следующие эндонуклеазы рестрикции Т1684С - AspS9I, A1218+8G - AspLEI, C2461-30G - Btrl («СибЭнзим», Россия) Продукты ферментативного гидролиза разделяли вертикальным электрофорезом в 7% полиакриламидном геле в трис-боратном буфере Визуализацию бандов и сканирование геля проводили в проходящем УФ свете с помощью видеосистемы «DNA Analyzer» (Москва)

Функциональная активность Р-гликопротеина была определена на проточном цитофлюориметре FACS Cahbur фирмы «Becton Dickinson» с использованием субстрата родамина 123 и ингибитора верапамила в лимфоцитах в контрольной группе, которая включала здоровых европеоидов (п=49), и у больных HXJI (п=76) Активность Р-гликопротеина (Е мшз, отнед) оценивали по выбросу родамина 123, определяемому как отношение геометрических средних флюоресценции родамина 123 в присутствии верапамила и без него (Huet et al, 1998) Исследование функциональной активности MRP проводилось у здоровых (п=29) и больных HXJI (п=31) с использованием 5(6)-диацетат карбоксифлюоресцеина в присутствии ингибитора циклоспорина A (Dogan et al, 2003) Активность MRP1 (Ecfda, oth ед ) оценивали по выбросу карбоксифлуоресцеина, определяемому как отношение геометрических средних флюоресценции карбоксифлуоресцеина в присутствии циклоспорина А и без него

Статистическую обработку данных проводили с использованием пакета прикладных статистических программ «Statistica v 6» (StatSoft Inc, 1995) и программы Epilnfo 6 (1993) Распределение генотипов исследованных полиморфных локусов проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга с помощью точного теста Фишера (Вейр, 1995) Об ассоциации аллелей, генотипов и комбинаций генотипов с лимфопролиферативными заболеваниями и устойчивостью к лечению судили по величине отношения шансов (ОШ) (Флетчер и др, 1998) Достоверность различий в частотах встречаемости изучаемых признаков между анализируемыми группами оценивали по критерию %2 с поправкой Йетса на непрерывность или двухстороннему точному критерию Фишера, когда в группе сравнения было менее 5 наблюдений

Для оценки достоверности различий между выборками с различными физиологическими и клиническими параметрами по уровню, функциональной активности Р-гликопротеина и MRP использовались непараметрический критерий Манна-Уитни В случае сравнения более чем двух групп, для оценки использовали критерий Крускалля-Уоллиса с последующим попарным сравнением по критерию Манна-Уитни, в случае, если уровень значимости различий р<0,05 Корреляцию между возрастом и уровнем функциональной активности оценивали по критерию Спирмена

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Распределение частот генотипов и аллелей генов GSTP1, MORI и MB.Pl у здоровых европеоидов Западной Сибири н у больных хроническими лимфопролнферативными заполеван ними

Полиморфизм A313G в 5 экзоне гена GSTP1, приводящим к замене UclOSVal, был исследовав в контрольной группе (п~57) и у больных ХЛПЗ (п=163). Анализ распределения частот полиморфных вариантов гена и аллелей GSTPI в 5 экзоне в группе контроля и у больных хроническими лимфопролнферативными заболеваниями показал отсутствие статистически значимых различий. В группе без онкоггатологии частота мутант но го аллеля (0.30) была сопоставима с описанными частотами для других европеоидов 0,28-0,36 (Harries et al., 1997; Landi, 1998), ниже, чем у афроамериканцсв 0,420,45, но выше, чем у африканцев (//43,89, р=0,003), азиатов 0,14-0,27 (Harries et al., 1997).

Полиморфизм С341Т в 6 экзоне гена GSTP1, приводящий к замене Alai 14Val, был исследован у 60 индивидуумов контрольной группы и 146 больных ХЛПЗ. Анализ распределения частот полиморфных вариантов гена GSTPI в 6 экране в конгрииьнок rpyuÉB и у больных ХЛПЗ СНЗКЗЗ&Я статистически значимые различия: х2=6,79, р-0,03 для ХЛПЗ, ;(2=6,00, p=0,Q5 для НХЛ и X ;6,40, р-0,04 для ХЛЛ (рис. 1). Частота встречаемости T34IT генотипа не отличалась у больных ХЛПЗ и НХЛ от контрольной группы, а в группе больных ХЛЛ этот генотип отсутствовал.

р=0,03 p=0r05 Р=0,(М p=0r055 ¡2=0,043 пт

Контрогь ХППЗ ЬКП ХЛЛ Кснгрогь ХЛПЗ hXn хпл

Генаптъ! >>rrrv

Рнс. 1. Распределение генотипов и частот аллелей полиморфного варианта С341Т гена ОБТР] у больных ХЛПЗ и в контрольной группе.

Частота встречаемости мутантного Т аллеля была выше в общей группе больных ХЛПЗ но сравнению с группой контроля (р -0,055) и

статистически достоверно выше у больных НХЛ (р=0,049) В группе ХЛЛ также наблюдалось более высокая частота валинового аллеля, но эти различия не являлись статистически достоверными (рис 1)

Сравнение частот генотипов С341Т гена GSTP1 в нашей контрольной выборке с частотами, описанными в различных популяциях и этнических группах, не выявило достоверных отличий от австралийских европеоидов и индийской популяции (Harris et al, 1998) Частота мутантного аллеля в контрольной группе (0,11) была сопоставима с таковой у австралийских европеоидов (0,07) и индийцев (0,05), но достоверно выше, чем у других среди азиатов (0,0-0,01) (Ishii et al, 1999, Hams et al, 1998)

К настоящему времени открыты и охарактеризованы более 50 однонуклеотидных замен в гене MDR1, большинство из которых является молчащими мутациями или расположены в интронных областях (Mickley et al, 1998, Ito et al, 2001, Kerb et al, 2001, Saito et al, 2002, Marzolmi, 2004) Мы исследовали наиболее часто встречающиеся полиморфизмы в гене MDR1 в 6 интроне (Ех6+139С/Т), 12 (С1236Т), 21 (G2677T) и 26 (С3435Т) экзонах Полиморфизм G2677T приводит к замене Ala893Ser, а мутации С1236Т и С3435Т, являются синонимичными

Анализ распределения полиморфных вариантов гена MDR1 в 6 интроне, 12 и 21 экзонах в группе контроля и у больных ХЛПЗ не выявил статистически достоверных различий в частотах встречаемости генотипов и аллелей В группе без онкопатологии частоты мутантных аллелей в 6 интроне (0,44), 12 экзоне (0,47) и 21 экзоне (0,43) значимо не отличались от описанных в литературе для европеоидов Германии и России (Cascorbi et al 2001, Hoffmeyer et al, 2000, Siegmund et al, 2002, Gaikovitch et al 2003)

Анализ распределения полиморфных вариантов гена MDR1 в 26 экзоне показал, что частоты распределения генотипов статистически значимо отличаются от контрольных в группе ХЛПЗ (%2=7,15, р=0,03) и ХЛЛ (%2=5,93, р=0,05), в группе ХНЛ эти отличия не достигают значимого уровня (рис 2) Частота встречаемости мутантного аллеля в группах больных ниже по сравнению со здоровыми, причем эти различия являются статистически достоверными для всех групп (р=0,02 для ХЛЛ и НХЛ и р=0,006 для ХЛПЗ)

Частоты встречаемости мутантного аллеля в группе без онкопатологии (0,65) в 26 экзоне близки к частотам генотипов в популяции России (0 54) (Gaikovitch et al, 2003), европеоидов Англии (0 52), Португалии (0,57) (Ameyaw et al, 2001), но значительно превышают частоты мутантного аллеля у европеоидов Польши (0 38) (Jamroziak et al, 2002), Германии (0 48) (Hoffmeyer et al, 2000)

Рис. 2. Распределение генотипов и частот аллелей полиморфного варианта С3435Т гена МОК! у больных ХЛПЗ и и контрольной группе.

При Исследовании частот генотипов и аллелей МИР1 в 13 экзоне (Т1684С), а также в 9(А1218+8С)и 18 (С2461-30С) нитронах в контрольной группе и у больных ХЛПЗ не было выявлено статистически значимых отличий. Частота встречаемости мутантного аллеля ] 684С в 13 экзоне в группе без ошсопатологин (0,83) была достоверно выше частоты этого аллеля в японской популяции 0.19 (Ио 3. е! а1., 2001) и незначительно выше частоты I684С аллеля европеоидов Германии 0.80 (ОвеНл К. а!., 2003). Частоты встречаемости мутантного аллеля в группе без опкопатологии в 9 нитроне (0,33) совпали с частотой данного аллеля в японской популяции (0.34) (Но 3. е! а1„ 2001) и европеоидов Германии (0.35) (Окейп К. е! а!., 2003). Частота Встречаемости мутантного аллеля в контрольной группе в 18 интропе (0,78) была достоверно выше частоты данного аллеля к японской популяции 0.30 (Ио 3. е1 а!., 2001 ).

Роль полиморфизмов генов ОЪ'ТР1, МОЕ! и МКР1 к предрасположенности к хроническим лимфопролнферативным

заболеваниям

При анализе полиморфизма А313Й гена О0ТР1 у здоровых и больных ХЛПЗ не выявлено статистически значимых ассоциаций различных генотипов с риском развития ХЛПЗ (табл. 1). Это свидетельствует о том, что ни один из генотипов Л313С не является фактором предрасположенности к ХЛПЗ. Наши данные согласуются с опубликованными ранее исследованиями больных с НХЛ и ХЛЛ, где не было выявлено ассоциаций полиморфных вариантов А313С гена ОБТР/ с риском развития заболеваний (Запшпюуа е( а!., 2001).

При анализе ассоциации разных генотипов С34!Т СНТР1 с риском развития ХЛПЗ выявлено, что носители «дикого» генотипа 341СС 2,44 раза более устойчивы к возникновению ХЛПЗ (0111=0,41, р-0,02), в частности к

НХЛ носители данного генотипа будут устойчивее других индивидуумов в 2,5 раза (ОШ=2,5, р=0,03) (табл 1) Для ХЛЛ также показана ассоциация дикого генотипа с вероятностью устойчивости к заболеванию в 2,38 раза, однако необходимая статистическая достоверность не показана (р=0,09) Это можно объяснить малой выборкой исследованных больных с ХЛЛ Генотип 341СТ ассоциирован с предрасположенностью к лимфопролиферативным заболеваниям риск заболеть ХЛПЗ у носителей этого генотипа по сравнению с остальными индивидуумами повышен в 2,78 раза (р=0,014), риск заболеть НХЛ - в 2,68 раза (р=0,026), а ХЛЛ - в 3,05 раза (р=0,037) (табл 1) Это свидетельствует о том, что генотип 341СТ является фактором предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям, а «дикий» генотип - фактором устойчивости к ХЛПЗ, в частности к НХЛ

Анализ ассоциаций генетических вариантов МОШ с предрасположенностью к лимфопролиферативным заболеваниям показал, что в 6 интроне, 12 и 21 экзонах статистически значимых ассоциаций наличия мутантного аллеля с риском развития ХЛПЗ не выявлено, т е полиморфизмы С6+139Т, С1236Т и в2677Т в 6 интроне не являются предрасполагающими факторами к развитию этих заболеваний (табл 1)

При анализе ассоциаций полиморфных вариантов гена МБШ с риском развития ХЛПЗ для мутации в 26 экзоне С3435Т было установлено, что индивидуумы с 2 аллелями «дикого» типа в 26 экзоне в 2,26 раза более чувствительны к ХЛПЗ (р=0,035), а носители 2 мутантных аллелей более устойчивы к развитию ХЛПЗ по сравнению с другими индивидами (р=0,04), а по сравнению с гомозиготами дикого типа в 2,86 раза (р=0,01) Для НХЛ и ХЛЛ прослеживается аналогичная связь (табл 1) Гомозиготные по «дикому» аллелю индивиды в 2,24 раза более чувствительны к НХЛ (р=0,046) ив 3,36 раза — к ХЛЛ по сравнению с другими индивидами Однако для ХЛЛ этот риск не является достоверным (р=0ДЗ), и вероятнее всего это обусловлено маленькой выборкой Статистическая достоверность ассоциации мутантного генотипа с НХЛ достигается только по сравнению с «дикими» гомозиготами (0ш=0,38, р=0,03) Для ХЛЛ устойчивость к заболеванию в 3,23 раза выше у индивидов с мутантным генотипом по сравнению с остальными (р=0,04) и в 4,55 раза выше по сравнению с индивидами с диким генотипом (р=0,03) Таким образом, полиморфизм С3435Т гена МВК1 является значимым фактором, предрасполагающим к лимфопролиферативным заболеваниям

При анализе ассоциаций разных генотипов МКР1 в 13 экзоне, 9 и 18 интронах с риском развития ХЛПЗ было показано отсутствие статистически значимых ассоциаций Следовательно, полиморфизмы Т1684С, А1218+8С и С2461-300 гена МКР1 не являются факторами предрасположенности к развитию этих заболеваний (табл 1)

Таблица 1

Ассоциация полиморфных вариантов ОЯТР1, МБЯ! и МКР1 ____с предрасположенностью к ХЛПЗ _

Генотип К Общая группа ХЛПЗ НХЛ хлл

п п | ОШ | р п I ОШ | р п | ОШ | р

А3130 (экзон 5 гена ОЗТРГ)

АА 26 77 1,07 0,95 59 1,07 0,97 18 1,07 0,97

Ав 28 71 0,8 0,57 52 0,56 0,16 19 1,04 0,89

во 3 15 1,82 0,41 14 2,27 0,32 1 0,49 0,65

С341Т (экзон 6 в8ТР1)

сс 49 94 0,41 0,02 68 0,4 0,03 26 0,42 0,09

ст 9 48 2,78 0,014 34 2,68 0,026 14 3,05 0,037

тт 2 4 0,2 0,21 4 1Д4 1 0 0,73 0,73

С6+139Т (нитрон 6 МИШ )

СС 28 47 1.15 0,74 33 0,95 0,98 14 2,35 0,09

СТ 43 71 1,17 0,66 62 1,41 0,29 9 0,53 0,25

ТТ 18 18 0,6 0,23 14 0,58 0,23 4 0,69 0,73

С1236Т (экзон 12 МОЮ )

СС 23 35 1,05 0,99 25 0,9 0,87 10 1,79 0,31

СТ 49 76 1,13 0,77 64 1,27 0,49 12 0,7 0,56

ТТ 17 20 0,76 0,57 16 0,76 0,6 4 0,77 0,78

С2677Т (экзон 21 МОЮ )

28 42 0,88 0,77 32 0,82 0,63 10 1,15 0,94

вт 45 82 1,25 0,48 67 1,31 0,41 15 1,05 0,92

ТТ 16 22 0,81 0,69 18 0,83 0,76 4 0,73 0,78

С3435Т (экзон 26 МОЮ )

СС 12 36 2,26 0,035 29 2,24 0,046 7 3,36 0,13

СТ 38 61 1,06 0,93 47 0,97 0,97 14 1,15 0,93

ТТ 39 41 0,54 0,04 36 0,61 0,12 5 0,31 0,04

ТТ/СС 0,35 0,01 0,38 0,03 0,22 0,03

А1218+8в (интрон 9 МНР!)

АА 39 43 0,63 0,14 34 0,6 0,13 9 0,77 0,77

Ав 37 68 1,58 0,14 56 1,61 0,14 12 1,44 0,58

10 14 0,96 0,9 12 1,01 0,84 2 0,72 1

Т1684С (экзон 13 МЯР1)

ТТ 0 0 0 0

ТС 30 38 0,75 0,4 30 0,81 0,61 8 0,57 0,35

СС 56 95 1,34 0,4 69 1,23 0,61 26 1,74 0,32

С2461-3(Ю (интрон 18 МЯР1)

СС 2 0 0,34* 0,56 0* 0,39 0,58 0* 2,47 0,98

се 34 49 0,99 0,92 44 1,05 0,98 5 0,64 0,62

во 50 76 1,12 0,81 64 1,05 0,99 12 1,73 0,49

К - контрольная группа, п - число наблюдений, *- ОШ при допущении единицы в ячейке «дикой» гомозиготы

Роль полиморфизмов генов GSTP1, MDR1, МКР1 в формировании устойчивости к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями

Об ассоциации разных генотипов с устойчивостью к химиотерапии судили по величине отношения шансов, показывающей во сколько раз выше вероятность быть устойчивым к химиотерапии (ОШ>1), чем чувствительным (ОШ<1) для индивида с данным генотипом Данные по ассоциации различных генотипов GSTP1, MDR1 и MRP1 с устойчивостью к химиотерапии представлены в таблице 2

При анализе взаимосвязи между полиморфным вариантом гена GSTP1 в 5 экзоне и эффектом от лечения в общей группе больных ХЛПЗ было выявлено, что дикий генотип 313АА ассоциирован с чувствительностью к проводимому лечению Вероятность не иметь эффекта от лечения у больных с этим генотипом ниже по сравнению с другими больными (0111=0 43, р=0,04) (табл 2) Для генотипа 313AG выявлена обратная ассоциация наличие данного генотипа приводит к увеличению шанса в 2,39 раза не отвечать на химиотерапию (р=0,04) (табл 2) Поэтому A313G генотип можно считать фактором устойчивости к лечению

Для полиморфизма в 6 экзоне гена GSTP1 не было выявлено достоверных ассоциаций различных полиморфных вариантов с устойчивостью к химиотерапии (таблица 2)

Анализ ассоциаций генетических вариантов MDR1 с ответом на химиотерапию представлен в таблице 2 Для полиморфизмов в интроне 6 и экзоне 12 у больных ХЛПЗ не было выявлено достоверных ассоциаций полиморфных вариантов С6+139Т и С1236Т с эффектом от химиотерапии (табл 2) Больные ХЛПЗ с генотипом 2677ТТ в 21 экзоне имеют вероятность формирования устойчивости к химиотерапии в 6 8 раза выше по сравнению с больными, имеющими один или оба аллеля 2677G (р=0,008) Аналогичная связь прослеживается для больных с генотипом 3435ТТ вероятность устойчивости к химиотерапии у них в 6 3 раза выше (р=0,02), чем у больных с генотипом 3435СС и еще более высокая по сравнению с больными, имеющими один или оба аллеля 3435С в генотипе (0111=10,08, р=0,002) Кроме того, если больной имеет гаплотип 2677ТТ/3435ТТ, то риск быть устойчивым к лечению у него в 10 5 раз выше (р=0,007), чем у больных с комбинацией генотипов 2677GG/3435CC, а по отношению к больным с другими комбинациями генотипов - в 17 раз (ОШ=17,73, р=0,00045) (табл

Известно, что полиморфизм С3435Т в 26 экзоне находится в неравновесии по сцеплению с полиморфизмами 21 экзонах, который в свою очередь приводит к аминокислотной замене (Кип et al, 2001) Поэтому выявленные различия в формировании устойчивости к химиотерапии у больных ХЛПЗ с разными генотипами в 26 экзоне могут быть результатом сцепления с полиморфизмами, приводящими к изменению структуры и функции белка

Таблица 2

Ассоциация полиморфных вариантов С$ТР1, МИШ и МЯР1 с эффектом от _лечения у больных ХЛПЗ_

Полиморфизм Генотип НО* на ХТ, п ЕО* на ХТ, п ОШ Р

А3130 (экзон 5) АА 19 36 0.43 0.04

Ав 26 19 2,39 0,04

вв 5 6 1,02 1

С341Т (экзон 6) СС 18 32 0.88 0.95

СТ 6 11 0,92 0,88

ТТ 1 0 1,79** 1

С6+139Т (интрон 6) СС 4 5 3.6 0,18

СТ 5 14 1,38 0,74

ТТ 3 22 0,29 0,16

С1236Т (экзон 12) СС 4 5 3.6 0.18

СТ 5 14 1,38 0,74

ТТ 3 22 0,29 0,16

02677Т (экзон 21) ее 4 18 0.64 0.74

йТ 1 16 0,14 0,08

ТТ 7 7 6,8 0,0084

ТТ/ОО 0,92 0,99

С3435Т (экзон 26) СС 4 18 0.64 0.74

СТ 1 18 0,12 0,04

ТТ 7 5 10,08 0,002

ТТ/СС 6,3 0,02

А1218+8С (интрон 9) АА 5 5 2.4 0,42

Ай 5 11 0,55 0,68

йй о** 1 1,6 1

Т1684С (экзон 13) ТТ 0 0

тс 1 6 0,26 0,37

сс 9 14 3,86 0,37

С2461-3(Ю (интрон 18) СС 0 0

со 2 6 0,58 0,68

ее 8 14 1,71 0,68

* - НО на ХТ - нет ответа на химиотерапию, ЕО на ХТ - есть ответ на химиотерапию, **- ОШ при допущении единицы в ячейке мутантной гомозиготы в группе чувствительных к химиотерапии больных

Таблица 3

Ассоциация комбинации генотипов С2677Т и С3435Т гена МОТ?./ с

устойчивостью к химиотерапии больных ХЛПЗ (п=53)

Комбинация генотипов Комбинации генотипов, относительно которых считалось ОШ ОШ Р

2677ТТ/3435ТТ 2677вО/3435ТТ 10,50 0,007

Все, кроме 2677ТТ/3435ТТ 17,73 0,00045

Частоты исследованных аллелей гена MRP1 достоверно не отличались в группе с наличием ответа на лечение и в группе больных, устойчивых к лечению При анализе ассоциации различных генотипов с формирование устойчивости к лечению у больных ХЛПЗ не было выявлено каких-либо достоверно значимых ассоциаций (табл 2)

На сегодняшний день существуют лишь предположения о том, каким образом однонуклеотидные замены могут влиять на развитие предрасположенности к онкологическим заболеваниям Одной из гипотез является предположение о том, что аллель - специфические различия в укладке РНК могут влиять на экспрессию генов, участвуя, например, в транскрипции, сплайсинге или процессинге (Le Hir H, et al, 2003) Возможно, также, что некоторые однонуклеотидные замены повышают стабильность мРНК, что в последствие приводит к повышенной экспрессии белка Но, тем не менее, молекулярные механизмы влияния однонуклеотидных замен на функцию Р-гликопротеина и MRP до сих пор остаются неизвестными

Однако, полиморфизм в индивидуальных генах незначительно увеличивает риск развития заболевания или формирования устойчивости к химиотерапии Комбинация вариантов аллелей, в том числе и с аллелями других генов, участвующих в детоксификации ксенобиотиков, вероятно, увеличит эффективность оценки риска Такой пример увеличения риска не ответить на лечение был продемонстрирован для комбинации генотипов 21 и 26 экзона гена MDR1 Кроме того, неправильно было бы рассматривать полиморфизм гена как единственный механизм формирования различной чувствительности к заболеваниям Также нужно исследовать экспрессию генов и функциональную активность изучаемых белков, таким образом формируя системный подход к проблеме

Функциональная активность Р-гликопротеина в лимфоцитах контрольной группы и у больных неходжкинскими лимфомами и анализ ассоциации с полиморфизмом гена MDR1

Была проанализирована связь функциональной активности Р-гликопротеина с различными физиологическими и клиническими параметрами полом, возрастом, степенью злокачественности, схемами лечения, чувствительностью к химиотерапии, а также с наиболее распространенными полиморфизмами гена MDR1

Не было получено статистически достоверной ассоциации функциональной активности Р-гликопротеина с полом и корреляции с возрастом ни в контрольной группе (г=0 03, р=0 86), ни у больных НХЛ (i=-0 07, р=0 56)

При анализе активности Р-гликопротеина у больных НХЛ выявлена достоверно (р=0,02) более высокая активность по сравнению с группой здоровых

9 8 7

ч 6

аг

2 5

£ 4

са

ш 3 2 1 О

Рис. 3. Функциональная активность Р-гликопротеина (ЕИ112з) в лимфоцитах в контрольной группе (п=49) и у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями (п=7 6)

При анализе активности Р-гликопротеина у больных НХЛ с разной степенью злокачественности, определенной на основании результатов гистологического исследования биоптатов лимфоузлов, была выявлена связь повышения уровня функциональной активности с увеличением степени злокачественности опухоли (р=0,01) (рис 4) Попарное сравнение групп показало, что в группе больных с высокой степенью злокачественности уровень активности Р-гликопротеина достоверно (р=0,009) выше, по сравнению с группой больных с низкой степенью злокачественности

7 -

р = о 01 • НСЗ - низкая степень

злокачественности,

5 • _____

4 • ПСЗ - промежуточная

| * степень

1 3 „_„.. злокачественности,

ш р = О 07 >

V \

I--, | | | • ВСЗ - высокая степень

1 '—-—' ' злокачественности

■ Медиана

^^ р = О 009^— 25% 75%

о ------- I Мт-Мах

НСЗ ПСЗ ВСЗ

Рис. 4. Функциональная активность Р-гликопротеина (ЕК),|2з) в лимфоцитах больных неходжкинскими лимфомами с разной степенью злокачественности опухоли

Данные об активности Р-гликопротеина у леченых больных НХЛ были проанализированы в зависимости от схемы лечения Была выявлена тенденция к увеличению функциональной активности Р-гликопротеина при усилении агрессивности химиотерапии (рис 5)

р = 0,02

Контроль НХЛ

р = О 07 ^ \

1 - алкилирующие агенты (циклофосфан и/или лейкеран),

2- алкилирующие агенты и винкристин,

. медиана 3- алкилирующие агенты,

525% 75%

мш мах винкристин и

Рис. 5. Функциональная активность Р-гликопротеина (Е];|1Ш) У больных лимфопролиферативными заболеваниями в зависимости от схемы лечения

При анализе взаимосвязи между активностью Р-гликопротеина и эффектом от лечения больные были разделены по клиническим признакам на две группы В группу больных, чувствительных к химиотерапии, были включены больные НХЛ, у которых наблюдалась стабилизация, частичная ремиссия или продолжительная ремиссия В группу больных, устойчивых к химиотерапии, были включены больные НХЛ, у которых ответ не достиг уровня стабилизации (имелось прогрессирование) Больные, чувствительные к химиотерапии, имеют более низкий уровень функциональной активности Р-гликопротеина по сравнению с больными, которые устойчивы к химиотерапии (рис 6), хотя различия не были достоверными

Уст к ХТ - группа больных, устойчивых к химиотерапии, п=13

Чувств к ХТ - группа больных, чувствительных к химиотерапии, п=38

Чувств кХТ

■ Медиана

325% 75% М|П Мах

Рис. 6. Функциональная активность Р-гликопротеина (Е№12з) у больных лимфопролиферативными заболеваниями в зависимости от эффекта от лечения (в группах чувствительных и устойчивых к химиотерапии)

При анализе связи функциональной активности Р-гликопротеина и полиморфизмов гена МИШ не было выявлено достоверных ассоциаций ни с одним генотипом ни у больных НХЛ, ни в контрольной группе здоровых (рис 7-10) Интересно отметить, что, несмотря на отсутствие достоверных связей, все носители гетерозигот как здоровые, так и больные НХЛ имели более низкий уровень активности Р-гликопротеина

" Медиана I I 25%.75% М1П Мах

Рис. 7. Ассоциация полиморфизма С6+129Т гена МОШ с функциональной активностью Р-гликопротеина в контрольной группе и у больных неходжкинскими лимфомами

у//ук уу/т т/т

Рис. 8 Ассоциация полиморфизма С1236Т гена МОШ с функциональной активностью Р-гликопротеина в контрольной группе и у больных неходжкинскими лимфомами

р = 0,37

1. : 1 Ьи

I 5

I 1

Р = 0,27

Медиана 1 I 25% 75%

р = 0,22

1 : 1г ■ 1

я Медиана | |25% 75% ~Т~ М!п Мах

Рис. 9. Ассоциация полиморфизма в2677Т гена МОШ с функциональной активностью Р-гликопротеина в контрольной группе и у больных неходжкинскими лимфомами

Рис. 10. Ассоциация полиморфизма С3435Т гена МОЯ! с функциональной активностью Р-гликопротеина в контрольной группе и у больных неходжкинскими лимфомами

Функциональная активность MRP в лимфоцитах контрольной группы и у больных неходжкинскими лимфомами и анализ ассоциации с полиморфизмом

гена MRP1

Анализ функциональной активности MRP не выявил ассоциации активности с полом, а также показал отсутствие достоверных корреляций с возрастом как в контрольной группе так и у больных неходжкинскими лимфомами

Не было получено статистически достоверной ассоциации функциональной активности MRP1 с полом и корреляции с возрастом ни в контрольной группе г=-0 002, р=0 99 (п=29), ни у больных НХЛ г=0 12, р=0 51 (n=31)

Анализ функциональной активности MRP1 в контрольной группе и у больных НХЛ показал достоверно (р=0,01) более высокий уровень активности в группе больных (рис 11)

Изучить связь уровня функциональной активности MRP с эффектом от лечения и прогрессией опухоли не представлялось возможным, так как большую часть исследованных больных составляли нелеченые больные

При анализе связи функциональной активности MRP1 и полиморфизма гена MRP1 ни с одним генотипом не было выявлено достоверных ассоциаций ни у больных, ни в контрольной группе (рис 12-14), хотя было выявлено, что уровень функциональной активности белка снижается с увеличением количества мутантных аллелей в гене MRP1 во всех изученных полиморфизмах

Таким образом, результаты исследования показали, что генетический полиморфизм может быть важным фактором, определяющим как предрасположенность к лимфопролиферативным заболеваниям, так и устойчивость к лекарственной терапии Различные однонуклеотидные замены в гене могут приводить к изменению уровня экспрессии генов, структуры и функции белков, поэтому важно изучать связь полиморфизмов генов GSTP1, MDR1 и MRP1 с функциональной активностью белков, кодируемых этими генами В нашем исследовании не было выявлено достоверной ассоциации уровня активности Р-гликопротеина и MRP с исследованными полиморфизмами их генов Также не получено связи активности Р-гликопротеина с ответом на лечение Известно, что в формировании лекарственной устойчивости принимают участие и другие транспортные белки Совместное функционирование нескольких белков может приводить к увеличению выведения химиопрепаратов из клетки и, как следствие, к возникновению устойчивости к лечению Сочетание различных механизмов лекарственной устойчивости в одних и тех же клетках, влияние индивидуального генотипа больного и разнообразие методов исследования определяют необходимость дальнейших исследований роли различных механизмов в возникновении множественной лекарственной устойчивости опухолей различной этиологии Выделение групп риска по устойчивости к химиотерапии в соответствии с полученными данными может быть полезным при разработке индивидуализированных схем фармакологической терапии с учетом известной устойчивости к используемым лекарственным средствам

■ Медиана I 125%-75% 1 Min-Max

Контроль НХЛ

Рис. 11. Функциональная активность MRP (Ecfda) в лимфоцитах в контрольной группе и у больных неходжкинскими лимфомами

Рис. 12. Ассоциация полиморфизма A1218+8G гена MRP1 с функциональной активностью MRP в контрольной группе и у больных неходжкинскими лимфомами

р = 0 зв

Рис. 13. Ассоциация полиморфизма Т1684С гена MRP1 с функциональной активностью MRP в контрольной группе и у больных неходжкинскими лимфомами

Рис. 14. Ассоциация полиморфизма C2461-30G гена MRP1 с функциональной активностью MRP в контрольной группе и у больных неходжкинскими лимфомами

ВЫВОДЫ:

1 У европеоидов Западной Сибири полиморфизмы гена GSTP1 в 6 экзоне (С341Т) и гена MDR1 в 26 экзОне (С3435Т) связаны с хроническими лимфопролиферативными заболеваниями

- с предрасположенностью к развитию заболеваний ассоциированы генотипы 341 CT (0111=2 78, р=0 01) и 3435СС (ОШ=2 26, р=0 04),

- с устойчивостью к заболеванию ассоциированы генотипы 341СС (0111=0 41, р=0 02) и 3435ТТ (ОШ=0 54, р=0 04)

2 Для формирования лекарственной устойчивости у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями значимыми являются полиморфизмы в 5 (A313G) экзоне гена GSTP1, 21 (G2677T) и 26 (С3435Т) экзонах гена MDR1

- с устойчивостью к химиотерапии ассоциированы генотипы 313AG (ОШ=2 39, р=0 04), 2677ТТ (ОШ=6 8, р=0 008) и 3435ТТ (ОШ=Ю 08, р=0 002), и комбинация генотипов 2677ТТ/3435ТТ (ОШ=17 73, р=0 00045),

- с чувствительностью к химиотерапии ассоциированы генотипы 313АА (ОШ=0 43, р=0 04) и 3435СТ (ОШ=0 12, р=0 04)

3 Уровни функциональной активности Р-гликопротеина и MRP в лимфоцитах периферической крови у больных неходжкинскими лимфомами выше, чем в контрольной группе, и активность Р-гликопротеина связана со степенью злокачественности опухоли достоверно более высокий уровень активности имеют больные с высокой степенью злокачественности

4 Уровень функциональной активности Р-гликопротеина в лимфоцитах периферической крови не является показателем для прогноза устойчивости к химиотерапии у больных лимфопролиферативными заболеваниями результат химиотерапии не зависит от активности Р-гликопротеина

5 Ассоциации уровней функциональной активности Р-гликопротеина и MRP1 с полиморфизмами С6+139Т С1236Т, G2677T, С3435Т гена MDR1 и Т1684С, A1218+8G, C2461-30G гена MRP1 соответственно не выявлены ни в контрольной группе и ни у больных неходжкинскими лимфомами

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Воронцова Е В , Гришанова А Ю , Горева О Б , Сафронова О Г , Мухин О В , Домникова H П, Ляхович В В Полиморфизм гена GSTP1 у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями оценка связи с экспрессией GSTm и лекарственной устойчивостью // Бюлл эксп биол мед -2002 - Прил 1 - С 65-67

2 Горева О Б , Гришанова А Ю , Мухин О В , Домникова H П , Ляхович В В Возможный прогноз эффективности химиотерапии больных лимфопролиферативными заболеваниями в зависимости от G2677T и С3435Т полиморфизмов генаMDR1 //Бюлл экспер биол мед —2003 -Т 136 - №8 -С 209-212

3 Горева О Б , Гришанова А Ю , Мухина О В , Домникова H П , Ляхович В В «Полиморфизмы С1236Т и С6+139Т гена MDR1 в Российской популяции исследование ассоциаций с предрасположенностью к лимфопролиферативным

заболеваниям и устойчивостью к химиотерапии» // Бюлл экспер биол мед -2004 -Т 138 - № 10 - С 454-457

4 Gnshanova AY, Vorontsova EV, Goreva О, Lyakhovich VV GSTP1 gene polymorphism and expression m patients with lymphoproliferative disease relation to drug resistance //International J Cancer -2002 -Suppl 13 -P 403-404

5 Воронцова E В , Гришанова А Ю , Горева О Б Полиморфизм и экспрессия гена GSTP1 у больных лимфопролиферативными заболеваниями // Труды 1 международного симпозиума «Стресс и экстремальные состояния», Сателлитный симпозиум «Новые технологии в медицине и биологии третьего тысячелетия» Кара-Даг, Феодосия (Крым), Украина, 5-14 июня 2002 года, с 99-100

6 Gnshanova A Yu , Vorontsova EV, Goreva OB, Lyakhovich VV GSTP1 gene polymorphism and expression in patients with lymphoproliferative disease relation to drug resistance // Abstracts of 180i International Cancer Congress, Oslo, Norway, 30 June - 5 July 2002, Abstr N 854

7 Goreva О, Gnshanova A, Vorontsova E, Lyakhovich V GSTP1 gene polymorphism and expression m patients with non-Hodgkm's lymphoma and chronic lymphocytic leukaemia relation to drug resistance // Abstracts of European Scientific Conference Understanding the Genome Scientific Progress and Microarray Technology, Genova, Italy, November 29 - December 1 2002

8 Goreva О , Gnshanova A , Vorontsova E , Lyakhovich V Genetic polymorphism of glutathione S-transferase PI and sensitivity to chemotherapy of patient with lymphoid malignances // Abstracts of 37thAnnual Scientific Meeting European society for clinical investigation The pathophysiology of diseases from bench to bedside, Verona, Italy, 2-5Apnl 2003

9 Goreva О В , Gnshanova A Yu , Lyakhovich V V Allelic frequency of single nucleotide polymorphisms m MDR1 gene m patients with Non Hodgkm's Lymphomas // Abstracts of 8th Congress of the European Hematology Association, Lyon, France, 12-15 June 2003, http //eurocongres com/eha2003/ eha scientific html. Poster session 1 Non Hodgkm's Lymphoma, abstract nr 0330

10 Горева О Б , Гришанова А Ю , Мухин О В , Домникова Н П, Ляхович В В Полиморфизмы G2677T и С3435Т гена MDR1 и устойчивость к химиотерапии больных лимфопролиферативными заболеваниями // Сборник тезисов Российско-Норвежской конференции по вопросам гематологии, г Санкт-Петербург, 4-7 сентября 2003 года, с 71-72, 133-134

11 Горева О Б , Гришанова А Ю , Мухин О В , Домникова Н П , Ляхович В В Генетический полиморфизм MDR1 у здорового населения Западной Сибири и у больных лимфопролиферативными заболеваниями // Сборник тезисов III конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины», Москва, 20-24 января 2004, с 75

12 Горева О Б , Гришанова А Ю Анализ полиморфизма гена MRP1 у европеоидов Западной Сибири // Сборник тезисов 8-ой Международной Пущинской школы-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века», Пущино, 17-21 мая 2004, с 7

13 Goreva, О В , Gnshanova A Yu , Mukhm О V , Domnikova N P , Lyakhovich, V V Association of MDR1 polymorphisms with drug resistance risk m patients with lymphoproliferative disorders // Abstracts of 9th Congress of the European Hematology Association, Geneva, Switzerland, 10-13 June, 2004, http //eurocongres com/ eha2004/eha scientific html. Poster session 1 Non Hodgkm's Lymphoma, abstract nr 517

14 Goreva, О В , Gnshanova A Yu , Lyakhovich, V V Frequency of MRP1 genetics polymorphisms m Russian population // Abstracts of 15th European Students' Conference for future doctors and young scientists, http //esc-berlin com. Berlin, Germany, 19-23 October 2004, p 97

15 Шмелева А В , Горева ОБ Роль генетического полиморфизма GSTP1, MDR1, MRP1 в предрасположенности к острому лимфобластному лейкозу у детей // Международный молодежный научный Форум «Ломоносов-2005», Москва, 1215 апреля 2005, сборник тезисов XII Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» - Т II — С 494 - 495

16 Горева ОБ, Мельникова ЕВ, Шмелева А В «Полиморфизм GSTP1, MDR1, MRP1 и функциональная активность Р-гликопротеина и MRP у детей с острым лимфолейкозом» // Сборник материалов региональной конференции молодых ученых-онкологов «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии», Томск, 20 апреля 2006, с 14-15

17 Goreva OB, Gnshanova, AY, Shmeleva AV, Lyakhovich, VV Genetic polymorphism of glutathione S-transferase PI in childhood acute lymphoblastic leukemia // 13th International Student Congress of Medical Sciences, Gromngen, the Netherlands, 14-17 June 2006, p 232

18 Goreva О В , Gnshanova A Yu , Lyakhovich V V Genetic polymorphism of GSTP1, MDR1, MRP1 and susceptibility to lymphoid malignancies // Сборник тезисов совместная российско-американской конференции по проблемам гематологии и трансплантации костного мозга, 21-23 июня 2006, рабочее совещание по проблемам клеточной терапии, 24 июня 2006, с 92

Список используемых сокращений:

GSTP1 - ген, кодирующий глу тати о н-S -тран с ф ераз у Р1 MDR1 - ген, кодирующий Р-гликопротеин

MRP1 — белок, ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью

MRP1 - ген, кодирующий белок MRP1

р - уровень значимости различий

ABC - семейство АТФ связывающих белков

АТФ - аденозинтрифосфат

МЛУ - множественная лекарственная устойчивость НХЛ - неходжкинские лимфомы ОШ - отношение шансов

ПАУ - полициклические ароматические углеводороды ХЛЛ - хронический лимфобластный лейкоз ХЛПЗ - хронические лимфопролиферативные заболевания XT - химиотерапия

Автор выражает глубокую благодарность научному консультанту, директору НИИ молекулярной биологии и биофизики СО РАМН, академику РАМН Ляховичу Вячеславу Валентиновичу и руководителю Гришановой Алевтине Юрьевне за руководство работой на всех ее этапах

Автор благодарит Мельникову Евгению Владимировну и Воронцову Елену Владимировну за помощь в проведении экспериментальной части работы, а также зав гематологического отделения с блоком асептических палат для трансплантации костного мозга Новосибирской областной клинической больницы Мухина Олега Викторовича и д м н, проф НМГУ Домникову Наталью Петровну за предоставление клинического материала, а также весь коллектив НИИ молекулярной биологии и биофизики СО РАМН

Соискатель

Горева О.Б.

Подписано к печати 27 апреля 2007 г. Тираж 100 экз. Заказ № 545. Отпечатано "Документ-Сервис", 630090, Новосибирск, Институтская 4/1, тел. 335-66-00

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Горева, Ольга Борисовна

Оглавление.

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Множественная лекарственная устойчивость.

1.1.1. Возникновение лекарственной устойчивости.

1.1.2. Механизмы лекарственной устойчивости.

1.2. Транспортные белки семейства ABC.

1.2.1. Р-гликопротеип.

1.2.2. MRP1 - белок ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью.

1.3. Ферменты биотрансформации ксенобиотиков.

1.3.1. Семейство глутатион -S- трансфераз.

1.4. Хронические лимфопролиферативные заболевания.

1.4.1. Хронический лимфолейкоз.

1.4.2. Неходэюкинские лимфомы.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Реактивы.

2.2. Материал исследования.

2.3. Методы исследования.

2.3.1. Анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов.

2.3.1.1. Выделение геномной ДНК.

2.3.1.2. Определение концентрации ДНК в образце.

2.3.1.3. Полимеразная цепная реакция.

2.3.1.4. Анализ продуктов ПЦР.

2.3.1.5. Ферментативный гидролиз.

2.3.1.6. Анализ продуктов рестрикции.

2.3.2. Определение функциональной активности Р-гликопротеина и MRP.

2.3.3. Статистическая обработка.

Глава 3. Результаты.

3.1. Роль полиморфизмов гена GSTP1 в 5 (A313G) и 6 (С341Т) экзонах в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям.

3.2. Роль полиморфизмов гена GSTP1 в 5 (A313G) и 6 (С341Т) экзонах в формировании устойчивости к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

3.3. Роль полиморфизмов гена MDR1 в 6 интроне (Ех06+139С/Т), 12 (С1236Т), 21 (G2677T) и 26 (С3435Т) экзонах в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям.

3.4. Роль полиморфизмов гена MDR1 в 6 интроне (Ех06+139С/Т), 12 (С1236Т), 21 (G2677T) и 26 (С3435Т) экзонах в формировании устойчивости к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

3.5. Роль полиморфизмов reimMRPl в 13 экзоне (Т1684С), 9 (A1218+8G) и 18 (С2461-30G) интронах в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям.

3.6. Роль полиморфизмов гена MRP1 в 13 экзоне (Т1684С), 9 (A1218+8G) и 18 (С2461-30G) интронах в формировании устойчивости к химиотерапии у больных лимфопролиферативными заболеваниями.

3.7. Функциональная активность Р-гликопротеина в лимфоцитах контрольной группы и у больных неходжкинскими лимфомами и анализ ассоциации с полиморфизмом гена MDR1.

3.8. Анализ ассоциации полиморфизмов гена MRP1 с функциональной активностью MRP в лимфоцитах контрольной группы и у больных ХЛПЗ.

Глава 4. Обсуждение результатов.

4.1. Роль полиморфизмов гена GSTP1 в 5 (A313G) и 6 (С341Т) экзонах в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям.

4.2. Роль полиморфизмов гена GSTP1 в 5 (A313G) и 6 (С341Т) экзонах в формировании устойчивости к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

4.3. Роль полиморфизмов гена MDR1 в 6 интроне (Ех06+139С/Т), 12 (С1236Т), 21 (G2677T) и 26 (С3435Т) экзонах в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям.

4.4. Роль полиморфизмов гена MDR1 в 6 интроне (Ех06+139С/Т), 12 (С1236Т), 21 (G2677T) и 26 (С3435Т) экзонах в формировании устойчивости к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

4.5. Роль полиморфизмов reHaMRPl в 13 экзоне (Т1684С), 9 (A1218+8G) и 18 (С2461-30G) интронах в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям.

4.6. Роль полиморфизмов гена MRP1 в 13 экзоне (Т1684С), 9 (A1218+8G) и 18 (С2461-30G) интронах в формировании устойчивости к химиотерапии у больных лимфопролиферативными заболеваниями.

4.7. Функциональная активность Р-гликопротеина в лимфоцитах периферической крови контрольной группы и у больных лимфопролиферативными заболеваниями.

4.8. Анализ ассоциации полиморфизмов генов MDR1 и MRP1 с функциональной активностью белков Р-гликопротеина и MRP1 в лимфоцитах контрольной группы и у больных ХЛПЗ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование роли GSTP1,MDR1 и MRP1 в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и в формировании устойчивости к химиотерапии"

Актуальность проблемы. В последние десятилетия проблема онкологических заболеваний становится все более актуальной. В структуре смертности населения Земного шара смертность от злокачественных новообразований занимает 2-4-ое место, в высокоразвитых странах этот показатель выходит на 1-2-ое место (Якубовская Р.И., 2000), а по данным Госкомстата за 2005 год в России - 2-ое место, уступая только заболеваниям системы кровообращения http://www.gks.ru/freedoc/2006/b0613/04-27.html, 2006). Число людей с впервые выявленными злокачественными новообразованиями неуклонно растет (Чиссов В.И. и соавт., 1995; Заридзе Д.Г. и соавт, 1998). Новосибирская область и г. Новосибирск входят в число административных территорий, неблагоприятных по заболеваемости злокачественными новообразованиями, в том числе опухолями клеток крови (http://www.sibstat.gcom.ru/Sitr/press21.html, 2006). По данным Новосибирского облкомстата за 20 лет число онкологических больных в Новосибирской области возросло вдвое, и в 2005 году заболеваемость злокачественными новообразованиями составила 378 случаев на 100 тысяч населения, тогда как средний показатель по России — 328 человек на 100 тысяч (http://www.sibstat.gcom.ru/Sitr/press21.html, 2006). Опережая по темпам общую онкологическую заболеваемость, заболеваемость опухолями клеток крови с 1987 года по 2005 год увеличивалась примерно в 4,5 раза (с 3,2 до 14,2 на 100 тысяч населения), преимущественно за счет лейкозов и лимфом. Одна из особенностей этих опухолей — высокий удельный вес лиц молодого, трудоспособного возраста (57.5% больных имеют возраст до 40 лет) с преобладанием у них высокоагрессивных HXJI (Ковынев И.Б. и соавт., 2006).

Такой рост связывают с возрастающим загрязнением окружающей среды чужеродными для организма веществами (ксенобиотиками), и, соответственно, увеличением их поступления в организм человека (Карпенко Л.Г., 1999; Гуляева Л.Ф. и соавт., 2000). Исследование причин повышения заболеваемости опухолями клеток крови показали, что оно обусловлено неблагоприятной экологической ситуацией в г. Новосибирске и Сибирском федеральном округе в целом и совпадает с пиками промышленных выбросов с отсрочкой эффекта на 7-10 лет (Ковынев И.Б. и соавт., 2006).

Разная предрасположенность к заболеванию может быть обусловлена генетическими факторами, в том числе межиндивидуальными различиями в биоактивации проканцерогенов и выведении канцерогенных веществ из организма. Установление взаимосвязи между определенным генотипом и формой заболевания поможет приблизить к пониманию механизмов развития различных форм рака, а с учетом предрасполагающих факторов (курение, загрязнители окружающей среды) позволит выявить группы риска, обладающие повышенной чувствительностью к данным заболеваниям.

Рост случаев онкологических заболеваний, выводит на передний план проблему их лечения. Основным методом лечения онкогематологических заболеваний является интенсивная полихимиотерапия. Однако несмотря на высокий процент ремиссий (до 80%) после начальной терапии, рецидив бывает очень часто, и только 20% пациентов, достигают долгосрочного выживания (Поддубная И.В., 2001; Thomas X. et al., 2003). Кроме того, интенсивная химиотерапия является причиной тяжёлых побочных эффектов, особенно у пожилых пациентов (Robak Т., 2004). Поэтому, недолгосрочная эффективность химиотерапии и токсичность лечения - главные проблемы, которые необходимо решить. Одним из препятствий для успешной химиотерапии опухолей является множественная лекарственная устойчивость (МЛУ) - невосприимчивость популяции клеток опухоли одновременно к целому ряду химиотерапевтических препаратов разного химического строения и с разным механизмом действия на клетку. Феномен МЛУ может быть обусловлен различными механизмами: снижением накопления лекарственного препарата в клетке, связанным с функционированием Р-гликопротеина, белка множественной лекарственной устойчивости MRP; изменением мишеней препаратов, определяемым топоизомеразой II; обезвреживанием препаратов в клетке, обусловленным функционированием систем ферментов метаболизма ксенобиотиков, в частности фермента глутатион-S-трансферазы (GST); отменой апоптоза или блокированием клеточного цикла, возникающими в результате мутаций гена р-53 и активации контролирующих апоптоз генов (Ставровская A.A., 2000).

Функционирование ферментов первой и второй фаз биотрансформации ксенобиотиков и выведение чужеродных соединений из клеток с помощью АТФ-зависимых транспортных белков - основные механизмы метаболизме и распределении ксенобиотиков (Sipes I.G., Gandolfi A J., 1986). Фермент второй фазы биотрансформации ксенобиотиков глутатион S-трансфераза класса Р участвует в процессах детоксикации широкого спектра электрофильиых соединений, включающих мутагены и канцерогены окружающей среды (например, дихлорметан (побочный продукт синтеза пластиков), дибромэтан (образуется при сгорании бензина), галометан и метилбромид (пестициды)) (Tsuchida S. et al., 1992; Clandinin M.T. et al., 1994; Pemble S. et al, 1994; Salinas A.E. et al, 1999; Hayes J.D. 2000). Многие цитостатики, такие как алкилирующие агенты, антрациклины, препараты платины, стероидные гормоны также являются субстратами глутатион S-трансфераз (Clandinin M. et al, 1994; Pemble S. et al, 1994; Ставровская A.A, 2000; Hayes J.D. et al, 2000). Ген GSTP1 является полиморфным: в кодирующем регионе обнаружено две мутации. Известно, что полиморфные варианты глутатион-Б-трансферазы Р1 в 5 экзоне проявляют разную каталитическую активность в отношении полициклических ароматических углеводородов (Zimniak P. et. al, 1994; Coles В. et al, 2000; Allan et al, 2001). Полиморфизм в 5 экзоне гена GSTP1 приводит к замене аминокислоты в активном участке Н-сайта, который отвечает за субстратную специфичность фермента (Katoh T. et al, 1999). В связи с этим, межиндивидуальные различия в ферментативной активности GST, опосредуемые полиморфными вариантами генами, могут лежать в основе различной предрасположенности к онкологическим заболеваниям, связанным с влиянием окружающей среды (Harries L.W. et al, 1997; Harris M.J, et al, 1998). Нет данных, связан ли полиморфизм гена GSTP1 с предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и устойчивостью к химиопрепаратам.

АТФ-зависимые транспортные белки Р-гликопротеин и MRP1 (белок ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью) -продукты генов MDR1 и MRP1 осуществляют транспорт веществ из клетки. Их физиологическая роль заключается в защите клеток от токсических соединений. Гены MDR1 и MRP1 являются высокополиморфными, но несмотря на то, что Р-гликопротеин и MRP широко изучаются, пока непонятна функциональная и клиническая значимость открываемых вариантов полиморфизмов этих генов для биодоступности и распределения лекарств в организме человека и, как следствие, формирования лекарственной устойчивости опухолей. Функциональная активность MRP изучена мало и нет сведений о его активности у больных онкологическими заболеваниями.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

2. Исследовать распределение полиморфных вариантов гена MDR1 в 6 интроне (Ех6+139С/Т), 12 (С1236Т), 21 (G2677T), 26 (С3435Т) экзонах у здоровых европеоидов Западной Сибири и больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

7. Исследовать роль полиморфизмов генов MDR1 и MRP1 в функциональной активности Р-гликопротеина и MRP соответственно.

Научная новизна

Впервые охарактеризована частота встречаемости полиморфизмов A313G и С341Т гена GSTP1, С6+139Т, С1236Т, G2677T, С3435Т гена MDR1, Т1684С, A1218+8G и C2461-30G гена MRP1 в популяции европеоидов Западной Сибири. Показано, что распределение частот генотипов и аллелей полиморфных вариантов генов GSTP1, MDR1 и MRP1 у европеоидов Западной Сибири соответствуют частотам в других европеоидных популяциях.

Впервые показано, что полиморфные варианты 341СС гена GSTP1 и 3435ТТ гена MDR1 ассоциированы с устойчивостью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям, а 341СТ и 3435СС генотипы - с предрасположенностью.

Впервые показано, что полиморфные варианты 313AG гена GSTP1 и 2677ТТ, 3435ТТ гена MDR1 ассоциированы с устойчивостью, а генотипы 313АА, 3435СТ -с чувствительностью к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями. Комбинация генотипов 2677ТТ/3435ТТ в 21 и 26 экзонах гена MDR1 у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями увеличивает в 17 раз риск возникновения лекарственной устойчивости к проводимой химиотерапии в сравнении с больными, имеющими другие генотипы.

При исследовании полиморфизмов Т1684С, A1218+8G и C2461-30G гена MRP1 не выявлено достоверно значимых ассоциаций полиморфных вариантов гена с риском возникновения лимфопролиферативных заболеваний и развитием устойчивости к химиотерапии у больных с этими заболеваниями.

Впервые показано, что функциональная активность Р-гликопротеина у больных неходжкинскими лимфомами ассоциирована со степенью злокачественности опухоли: достоверно более высокий уровень активности показан для больных с высокой степенью злокачественности. Показано также, что уровень функциональной активности Р-гликопротеина в лимфоцитах периферической крови не зависит от применяемых химиопрепаратов и не является показателем для прогноза устойчивости к химиотерапии у больных неходжкинскими лимфомами.

Показано, что уровни функциональной активности Р-гликопротеина и МЛР1 не связаны с полиморфизмами С6+139Т, С1236Т, 02677Т, С3435Т гена МОШ и Т1684С, А1218+80, С2461-3(Ю гена MR.P1 соответственно ни у здоровых европеоидов Западной Сибири, ни у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

Научная и практическая значимость работы

Настоящая работа вносит вклад в развитие фундаментальных знаний о роли полиморфизмов генов МЭШ, М11Р1, С8ТР1 и функциональной активности транспортных белков Р-гликопротеина и М11Р1 в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и в формировании лекарственной устойчивости у больных с такими заболеваниями.

Выявление полиморфных вариантов генов, ассоциированных с устойчивостью к химиотерапии, позволит выработать рекомендации но оптимизации химиотерапии.

Основные положения, выносимые на защиту:

С предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям связаны полиморфизмы С341Т в 6 экзоне гена С8ТР1 и С3435Т в 26 <- экзоне гена МОЯ 1.

С формированием устойчивости к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями связаны полиморфизмы А3130 в 5 экзоне гена ввТРЬ 02677Т в 21 экзоне и С3435Т 26 экзонах гена МОШ.

Уровень функциональной активности Р-гликопротеина в лимфоцитах периферической крови у больных неходжкинскими лимфомами связан со степенью злокачественности опухоли. и

Эффективность химиотерапии у больных лимфопролиферативными заболеваниями не зависит от уровня функциональной активности Р-гликопротеина

Уровни функциональной активности Р-гликопротеина и MRP1 у здоровых европеоидов Западной Сибири и у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями не связаны с полиморфными вариантами генов MDR1 (С6+139Т, С1236Т, G2677T и С3435Т) и MRP1 (Т1684С, A1218+8G и C2461-30G) соответственно.

Апробация работы

Результаты работы были представлены на следующих конференциях: 17th Meeting of Europe Association for Cancer Research, Granada, Spain, 2002; 1 Международный симпозиум «Стресс и экстремальные состояния», Феодосия, Украина, 2002; 18th International Cancer Congress, Oslo, Norway, 2002; European Scientific Conference: Understanding the Genome: Scientific Progress and Microarray Technology, Genova, Italy, 2002; 37thAnnual Scientific Meeting: European society for clinical investigation. The pathophysiology of diseases: from bench to bedside, Verona, Italy, 2003; 8th Congress of the European Hematology Association, Lyon, France, 2003; Российско-Норвежская конференция по вопросам гематологии, Санкт-Петербург, 2003; III Конференция молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины», Москва, 2004; 8-ая Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология -наука XXI века», Пущино, 2004; 9th Congress of the European Hematology Association, Geneva, Switzerland, 2004; 15th European Students' Conference for future doctors and young scientists, Berlin, Germany, 2004; XII Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов», Москва, 2005; Региональная конференция молодых ученых-окологов «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии», Томск, 2006; 13th International Student Congress of Medical Sciences, Groningen, the Netherlands, 2006; Совместная российско-американская конференция по проблемам гематологии и трансплантации костного мозга, 2006.

Автор благодарит Мельникову Евгению Владимировну и Воронцову Елену Владимировну за помощь в проведении экспериментальной части работы, а также зав. гематологического отделения с блоком асептических палат для трансплантации костного мозга Новосибирской областной клинической больницы Мухина Олега Викторовича и д.м.н., проф. НМГУ Домникову Наталью Петровну за предоставление клинического материала, а также весь коллектив НИИ молекулярной биологии и биофизики СО РАМН.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Горева, Ольга Борисовна

126 Выводы:

1. У европеоидов Западной Сибири полиморфизмы гена GSTP1 в 6 экзоне (C341T) и гена MDR1 в 26 экзоне (C3435T) связаны с хроническими лимфопролиферативными заболеваниями:

- с предрасположенностью к развитию заболеваний ассоциированы генотипы 341CT (0111=2.78, р=0.01) и 3435CC (ОШ=2.26, р=0.04);

- с устойчивостью к заболеванию ассоциированы генотипы 341CC (0111=0.41, р=0.02) и 343 5ТТ (0111=0.54, р=0.04).

2. Для формирования лекарственной устойчивости у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями значимыми являются полиморфизмы в 5 (A313G) экзоне гена GSTP1, 21 (G2677T) и 26 (C3435T) экзонах гена MDR1:

- с устойчивостью к химиотерапии ассоциированы генотипы 313AG (0111=2.39, р=0.04), 2677ТТ (0111=6.8, р=0.008) и 3435ТТ (0Ш= 10.08, р=0.002), и комбинация генотипов 2677ТТ/3435ТТ (0111=17.73, р=0.00045);

- с чувствительностью к химиотерапии ассоциированы генотипы 313АА (0111=0.43, р=0.04) и 3435CT (ОШ=ОЛ2, р=0.04).

3. Уровни функциональной активности Р-гликопротеина и MRP в лимфоцитах периферической крови у больных неходжкинскими лимфомами выше, чем в контрольной группе, и активность Р-гликопротеина связана со степенью злокачественности опухоли: достоверно более высокий уровень активности имеют больные с высокой степенью злокачественности.

4. Уровень функциональной активности Р-гликопротеина в лимфоцитах периферической крови не является показателем для прогноза устойчивости к химиотерапии у больных лимфопролиферативными заболеваниями: результат химиотерапии не зависит от активности Р-гликопротеина.

5. Ассоциации уровней функциональной активности Р-гликопротеина и MRP1 с полиморфизмами С6+139Т C1236T, G2677T, С3435Т гена MDR1 и Т1684С, A1218+8G, C2461-30G гена MRP1 соответственно не выявлены ни в контрольной группе и ни у больных неходжкинскими лимфомами.

Заключение

В настоящей работе был изучен вклад полиморфизма генов СБТР!, МЭМ и МЯР1 в возникновение хронических лимфопролиферативных заболеваний и формирование устойчивости к химиотерапии у больных с этими патологиями, а также исследовано влияние полиморфизмов на функциональную активность Р-гликопротеина и МИР.

Проведено исследование распределения полиморфных вариантов генов МОЯ1, MR.P1, С5ТР1 у здоровых людей и больных гематологическими онкопатологиями (хроническими лимфопролиферативными заболеваниями, включающими хронический лимфолейкоз и неходжкинские лимфомы). Исследованы наиболее часто встречающиеся однонуклеотидные замены в генах СБТРЦАЗЖ, С341Т), МОЮ (С6+139Т, С1236Т, С2677Т, С3435Т), MRP1 (Т1684С, А1218+80, С2461-3(Ю). Показано, что частоты генотипов и аллелей изученных генов в здоровой популяции европеоидов Западной Сибири значимо не отличаются от частот в других европеоидных популяциях. Исследование распределения однонуклеотидных замен выявило достоверные отличия частот генотипов. во всех группах больных от частот в контрольной группе для полиморфизма С341Т в 6 экзоне гена СБТР1, а в гене MDR1 для полиморфизма С3435Т в 26 экзоне показаны различия в частотах аллелей всех групп больных по сравнению с группой контроля. Частоты встречаемости генотипов и аллелей гена MRP1 в группах больных не отличались от частот в контрольной группе.

Проанализированы ассоциации исследованных генотипов с предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям. Показано, что полиморфизмы гена СБТР1 (С341Т) в 6 экзоне и гена MDR1 (С3435Т) в 26 экзоне ассоциированы с риском развития этих заболеваний. При этом протективными генотипами для хронических лимфопролиферативных заболеваний и неходжкинских лимфом являются С341С и Т3435Т генотипы, а для хронических лимфолейкозов - только Т3435Т. Генотипы С341Т и С3435С являются факторами чувствительности к хронических лимфопролиферативным заболеваниям, в частности неходжкинским лимфомам; для развития хронического лимфолейкоза критичным является наличие только С341Т генотипа. Анализ распределения полиморфных вариантов гена МЯР1 не выявил статистически достоверных ассоциаций с предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям.

Выполнен анализ ассоциаций между исследованными полиморфными вариантами генов и формированием лекарственной устойчивости у больных лимфопролиферативными заболеваниями. Показана значимость полиморфизмов гена GSTP1 (A313G) в 5 экзоне и гена MDR1 (G2677T) в 21 экзоне и (С3435Т) в 26 экзоне для формирования устойчивости к химиотерапии. При этом риск устойчивости выше для больных с генотипами A313G, Т2677Т, Т3435Т, и ниже при наличии А313А и С3435Т генотипов. Кроме того, 17-ти кратное повышение риска устойчивости к химиотерапии имеют больные хроническими лимфопролиферативными заболеваниями с комбинацией генотипов Т2677Т Т3435Т по сравнению с больными, имеющими иные комбинации полиморфных вариантов гена MDR1 в 21 и 26 экзонах. Также было выявлено, что все изученные полиморфизмы гена MRP1 (Т1684С, A1218+8G, C2461-30G) не вносили вклад в формирование лекарственной устойчивости.

В лимфоцитах здоровых людей и больных онкогематологическими заболеваниями исследован уровень функциональной активности Р-гликопротеина и MRP. Сравнение уровня функциональной активности Р-гликопротеина и MRP в контрольной группе и у больных неходжкинскими лимфомами показало достоверно более высокий уровень активностей этих белков у больных. Проведеный анализ связи уровня активности Р-гликопротеина и MRP с исследованными полиморфизмами генов MDR1 (С6+139Т, С1236Т, G2677T, С3435Т) и MRP1 (Т1684С, A1218+8G, C2461-30G), соответственно, не выявил достоверных ассоциаций ни в контрольной группе, ни у больных лимфопролиферативными заболеваниями.

Проведенный анализ зависимости уровня активности Р-гликопротеина от применяемых химиопрепаратов не выявил достоверных различий между группами, получающими химиотерапию разной степени агрессивности. Показано, что функциональная активность Р-гликопротеина ассоциирована со степенью злокачественности опухоли: достоверное более высокий уровень активности показан для больных НХЛ с высокой степенью злокачественности.

Было обнаружено, что у больных чувствительных к химиотерапии наблюдается более низкий уровень функциональной активности по сравнению с уровнем активности у больных устойчивых к химиотерапии. Однако эти различия был недостоверными, поэтому уровень функциональной активности Р-гликопротеина в периферической крови не является показателем для прогноза устойчивости к химиотерапии у больных лимфопролиферативными заболеваниями.

Таким образом, результаты исследований показали, что генетический полиморфизм может быть важным фактором, определяющим чувствительность к лекарственной терапии. Выделение групп риска по устойчивости к химиотерапии в соответствии с полученными данными поможет разработать альтернативные схемы фармакологической терапии с учетом известной устойчивости к используемым лекарственным средствам. Однако было бы неверно пытаться объяснить все взаимосвязи только участием фермента в8ТР1 и АТФ-зависимых транспортных белков в метаболизме ксенобиотиков. Возможен вклад других генетических маркеров в развитие лимфопролиферативных заболеваний и формирование лекарственной устойчивости. Поэтому необходим поиск факторов риска среди других полиморфизмов изучаемых генов, а также других генов (в первую очередь СУРЗА4), участвующих в процессах биотрансформации ксенобиотиков, с целью расширения перечня потенциальных генов-кандидатов и выявления сочетания генотипов, которые будут основой для формирования групп риска.

Помимо этого, различные однонуклеотидные замены в гене могут приводить к изменению уровня экспрессии генов, структуры и функции белков. Поэтому важно продолжить изучение совместного влияния полиморфизмов генов 08ТР1, МОШ и МЮЧ, уровня экспрессии белков и их функциональной активности как на предрасположенность к заболеваниям, так и на формирование лекарственной I устойчивости. В нашем исследовании не было выявлено достоверной ассоциации уровня активности Р-гликопротеина с ответом на лечениеу больных неходжкинскими лимфомами, однако в формировании лекарственной устойчивости принимают участие и другие транспортные белки. Совместное функционирование нескольких белков может приводить к увеличению выведения химиопрепаратов из клетки и, как следствие, к возникновению устойчивости к лечению. Сочетание различных механизмов лекарственной устойчивости в одних и тех же клетках, влияние индивидуального генотипа больного и разнообразие методов исследования определяют необходимость дальнейших исследований роли различных механизмов в возникновении множественной лекарственной устойчивости опухолей различной этиологии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Горева, Ольга Борисовна, Новосибирск

1. Анализ генома. Методы. / Под ред. Дейвиса. М: Мир, 1990. - 247 с.

2. Владимирская Е.Б., Кисляк Н.С., Румянцев А.Г. Причины и пути преодоления лекарственной резистентности при лейкозах и лимфомах у детей. // Гематол. и трансфузиол. 1998. - Т.43. - №6. - С3-1.

3. Волкова М.А. Полвека в терапии хронического лимфолейкоза. // Гематол. и Трансфузиол. 1998. - Т.43. - №5. - С. 6-11.

4. Волкова М.А. Хронический лимфолейкоз // В кн.: Клиническая онкогематология. Под ред. Волковой М.А. — М.: Медицина, 2001. — С. 376392.

5. Горбунова В.Н. Молекулярные основы медицинской генетики. СПб: Интермедика, 1999. - 212 с.

6. Горбунова В.Н., Баранов B.C. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний. СПб: Специальная литература, 1997.-287 с.

7. Гуляева Л.Ф., Вавилин В.А., Ляхович В.В. Фермнты биотрансформации ксенобиотиков в химическом канцерогенезе. Аналит. обзор. Новосибирск, 2000. - 85 с.

8. Заридзе Д.Г., Мень Т.Х. Эпидемиология и первичная профилактика злокачественных опухолей. // Вестник онкологического научного центра им. H.H. Блохина РАМН. 1998. - №1. - С. 84-96.

9. Ю.Карпенко Л.Г. Особенности формирования онкологической патологии у населения Республики Татарстан под влиянием некоторых факторов внешней среды. // Автореф. дис. канд. мед. наук. Уфа, 1999.

10. Ковригина A.M., Богатырев В.Н. R.E.A.L.-классификация: возможности цитоморфологической диагностики неходжкинских лимфом (анализ литературных и клинических данных). Т-клеточные опухоли. // Новости клинической цитологии России. 1997.-Т.1.-№4.-С. 166-175.

11. Ковынев И.Б., Поспелова Т.Н., Агеева Т.А. и др. Частоты и структура неходжкинских злокачественных лимфом в Новосибирске, НСО и городах Сибирского федерального округа. // Бюллетень СО РАМН. 2006. - №4 -С.175-181.

12. Ли Ч. Введение в популяционную генетику. М: Мир, 1978. - 555 с.

13. Переводчикова Н.И. Место химиотерапии в системе лечения онкологических больных и выбор терапевтической тактики. // Современная онкология. 2001. -Том 3-С. 18-22.

14. Поддубная И.В. Неходжкинские лимфомы. // В кн.: Клиническая онкогематология. Под ред. Волковой М.А. — М.: Медицина, 2001. — С. 336375.

15. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTCA. М.: Медиа Сфера, 1998. - 312 с.

16. Ставровская А.А. Клеточные механизмы множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток. // Биохимия. 2000. - Т.65, вып. 1. - С. 112126.

17. Ставровская А.А. Резистентность больных гемобластозами к лекарственной терапии. // В кн.: Клиническая онкогематология. Под ред. М.А. Волковой. М.: Медицина, 2001.

18. Флетчер Р., Флетчер С., Вагнер Э. Клиническая эпидемиология. Основы доказательной медицины. // Пер. с англ. М.: Медиа Сфера, 1998. - 352 с.

19. Чехун В.Ф., Шишова Ю.В. Современные взгляды на механизмы формирования лекарсивенной устойчивости опухолей. // Онкология. 2000. - Т.2. - №1-2. - с. 11-15.

20. Чиссов В.И., Киселева Е.С., Антошечкина Е.Т., Асс Н.Я. и др. Комбинированное и комплексное лечение больных со злокачественными опухолями.: Руководство для врачей. / (под ред. Чиссова В.И.). М: Медицина, 1989.-560 с.

21. Чиссов В.И., Сидоренко Ю.С., Старинский В.В. и др. Проблемы организации онкологической помощи на современном этапе. // Вопросы онкологии. 1995. -Т. 41.-№2.-С. 11-18.

22. Шишова 10. В. Современные взгляды на механизмы формирования лекарственной устойчивости опухолей // Онкология 2000. - Т. 2. - № 1-2. - с. 11-15.

23. Штиль А. А. Эпигенетическая регуляция множественной лекарственной устойчивости в опухолевых клетках: передача сигналов, транскрипционная активация и возможности профилактики. // Успехи совр. биологии. 2001. - Т. 121.-№ 6.-С. 563-575.

24. Якубовская Р.И. Современные представления о молекулярных механизмах канцерогенеза и опухолевой прогрессии, как основа для разработки новых методов терапии злокачественных заболеваний. // Российский онкологический журнал. 2000. - №6. - С. 42-50.

25. Allan J.M., Wild С.Р., Rollinson S. Polymorphism in glutathione S-transferase PI is associated with susceptibility to chemotherapy-induced leukemia. // Proc. Natl. Acad. Sci. -2001. V. 98.-P. 11592-11597.

26. Ambudkar S.V., Dey S., Hrycyna C.A. et al. Biochemical, cellular, and pharmacological aspects of the multidrug transporter. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1999. - V. 39. - P. 361-398.

27. Ambudkar S.V., Kimchi-Sarfaty C., Sauna Z.E. et al. P-glycoprotein: from genomics to mechanism. // Oncogene. 2003. - V. 22. - P. 7468-7485.

28. Ameyaw M.M., Regateiro F., Li T. et al. MDR1 pharmacogenetics: frequency of the C3435T mutation in exon 26 is significantly influenced by ethnicity. // Pharmacogenetics. -2001. V. 3. - P. 217-221.

29. Armstrong R.N. Mechanistic imperatives for the evolution of glutathione transferases. // Current Opinion in Chemical Biology. 1998. - V. 2. - P. 618-623.

30. Armstrong R.N. Structure, catalytic mechanism, and evolution of the glutathione transferases // Chem. Res. Toxicol. 1997. - V. 10. - P. 2-18.

31. Beale P.J., Rogers P., Boxall F. et al. BCL-2 family protein expression and platinum drug resistance in ovarian carcinoma. // Br. J. Cancer. 2000. - V. 82. - P. 436-440.

32. Beckett G.J., Hayes J.D. Glutathione S-transferases: biomedical applications. // Adv. Clin. Chem. 1993. - V. 30. - P. 281-380.

33. Berhane K., Hao X.Y., Christensson B. et al. The expression of glutathione transferase isoenzymes in human malignant lymphoma biopsies. // Acta Oncol. -1995.-V. 34.-P. 35-41.

34. Bernal M. L.,. Sinues B, Fanlo A. et al. Frequency distribution of C3435T mutation in exon 26 of the MDR1 gene in a Spanish population // Ther. Drug monitoring. 2003. -V. 25.-P. 107-111.

35. Black S., Beggs J.D., Hayes J.D. et al. Expression of human glutathione S-transferases in Saccharomyces cerevisiae confers resistance to the anticancer drugs adriamycin and chlorambucil. // Biochem. J. 1990. - V. 268. - P. 309-315.

36. Bodo A., Bakos E., Szeri F. et al. The role of multidrug transporters in drug availability, metabolism and toxicity. // Tox. Lett. 2003. - V. 140-141. - P. 133143.

37. Borst P , Evers R., Kool M. et al. A family of drug transporters: the multidrug resistance-associated proteins. // J. Natl. Cancer. Inst. 2000. - V. 92. - P. 1295— 1302.

38. Borst P., Elfererink R.O. Mammalian ABC transporters in health and disease. // Annu. Rev. Biochem. 2002. - V. 71. - P. 537-592.

39. Bradley G., Juranka P.F., Ling V. Mehanism of multidrug resistance. // Biochim. Biophys. Acta. 1998. - V. 948. - P. 87-128.

40. Casale F., D'Angelo V., Addeo R. et al. P-glycoprotein 170 expression and function as an adverse independent prognostic factor in childhoot acute lymphoblastic leukemia//Oncology Reports.-2004.-V. 12.-P. 1201-1207.

41. Chan H. S., Haddad G., Zheng L. et al. Sensitive immunofluorescence detection of the expression of P-glycoprotein in malignant cells. // Cytometry. 1997. - V. 29. -P. 65-75.

42. Chen C.J., Clark D., Ueda K. et al. Genomic organization of the human multidrug resistance (MDR1) gene and origin of P-glycoproteins. // J. Biol. Chem. 1990. - V. 265. P. 506-514.

43. Chen Y., Simon S.M. In situ biochemical demonstration that P-glycoprotein is a drug efflux pump with broad specificity. // J. Cell Biology. 2000. - V. 148. - P. 863-870.

44. Clandinin MT, Jumpsen J., Miyoung S. Relationship between fatty acid accretion, membrane composition, and biologic functions // J Pediatr-1994 V.125 - P .25-32.

45. Cole S.P.C., Deeley R.G. Multidrug resistance mediated by the ATP-bindning cassette transporter protein MRP. // Bioessays. 1998. - V. 20. - P. 931-940.

46. Coles B., Wilson I., Wardman P. et al. The spontaneous and enzymic reaction of N-acetyl-p-benzoquinonimine with gluthation: A stopped-flow cinetic study // Arch. Biochem. Biophys. 1988. - V. 264. - P. 253-260.

47. Coon J. S., Wang Y. Z., Bines S. D. et al. Multidrug resistance activity in human lymphocytes. // Hum. Immunol. 1991. - V. 32 (2). - P. 134-140.

48. Curran J.E., Weinstein S.R., Griffiths L.R. Polymorphisms of glutathione S-transferase genes (GSTM1, GSTP1 and GSTT1) and breast cancer susceptibility. // Cancer Lett.-2000.-V. 153.-P. 113-120.

49. Daly, A. K. Pharmacogenetics of the major polymorphic metabolizing enzymes. // Black. Pub. Fund, and CI. Pharm. -2003. -V. 17. P. 27-41.

50. Dandara C., Sayi J., Masimirembwa C.M. et al. Genetic polymorphism of cytochrome P450 1A1 (CyplAl) and glutathione transferases (Ml, T1 and PI) among Africans. //Clin. Chem. Lab. Med. 2002. - V. 40. - P.952-957.

51. Danielson U.H., Esterbauer H., Mannervik B. Structure-activity relationships of 4-hydroxyalkenals in the conjugation by mammalian gluthation S-transferase. // Biochem. J. 1987. - V. 247. - P. 707-713.

52. D'Arpa P., Liu L. F. Topoisomerase-targeting antitumor drugs. // Biochim. Biophys. Acta.- 1989.-V. 989.-P. 163-177.

53. Dean M., Hamon Y., Chimini G. The human ATP-binding cassette (ABC) transporter superfamily. // Jour, of Lipid Res. 2001. - V. 42. - P. 1007-1017.

54. Dean M., Rzhetsky A., Alliknets R. The human ATP-binding cassette (ABC) transporter superfamily. // Genome Res. 2001. - V. 11. - P. 1156-1166.

55. Dhooge С., Moerloose В., Laureys В. et al. P-glycoprotein is an independent prognostic factor predicting relapse in childhood acute lymphoblastic leukaemia: results of a 6-year prospective study. // British Jour, of Haem. 1999. - V. 105. - P. 676-683.

56. Di Paola R.S., Aisner J. Overcoming bcl-2 and p53-mediated resistance in prostate cancer. // Semin. Oncol. 1999. - V. 26. - P. 112-116.

57. Di Simone D., Testi R., Caracciolo F. et al. Glutathione-S-transferase activity and multidrug resistance phenotype in chronic lymphocytic leukemia: do they have any clinical relevance? // Haematologica. 1995. - V. 80. - №2 . - P. 103-107.

58. Dogan A.L., Legrand 0., Faussai A.M. et al. Evaluation and comparison of MRP1 activity with three fluorescent dyes and three modulators in leukemic cell lines. // Leuk Res. 2004. - V. 28. - P. 619-622.

59. Donelly J.G. Pharmacogenetics in cancer chemotherapy: balancing toxicity and response. // Ther. Drug. Monit. 2004. - V. 26 - P. 231-235.

60. Drescher S., Schaeffeler E., Hitzl M. et al. MDR1 gene polymorphisms and disposition of the P-glycoprotein substrate fexofenadine. // Br. J. Clin. Pharmacol. -2002.-V. 53.-P. 526-534.

61. Elce J.S. Metabolism of gluthathion conjugate of 2-hydroxioestradiol-17beta in adult male rat.//Biochem. J.-1972.-V. 126.-P. 1067-1071.

62. Fairchild C.R., Moscow J.A., O'Brien E.E. et al. Multidrug resistance in cells transfected with human genes encoding a variant P-glycoprotein and glutathione S-transferase-pi. // Mol. Pharmac. 1990. - V. 37. - P. 801-809.

63. Goto S., Iida T., Cho S. et al. Overexpression of glutathione S-transferase pi enhances the adduct formation of cisplatin with glutathione in human cancer cells. // Free. Radie. Res. 1999. - V. 31. - P. 549-558.

64. Gottesman M.M., Fojo T., Bates S.E. Multidrug Resistance in cancer: role of ATP-dependent transporters. // Nat. Rev. Cancer. 2002. - V. 2. - P. 48-58.

65. Gottesman M.M., Pastan I., Ambudkar V. P-glycoprotein and multidrug resistance. // Curr. Opin. Genet. Dev. 1996. - V. 6. - P. 610-617.

66. Greenbaum M, Letourneau S, Assar H. et al. Retrovirus mediated gene transfer of rat glutathione-5-transferase Yc confers alklyating drug resistance in NIH3T3 mouse fibroblasts. // Cancer Res. 1994. - V. 54. - P. 4442-4447.

67. Grogan T, Spier C.M, Salmon S.E. et al. P-glycoprotein expression in human plasma cell myeloma: correlation with prior chematotherapy. // Blood. 1993. - V. 81. - P. 49(M95.

68. Grulois I. Fardel 0, Drenou B. et al. Multidrug resistance in B-cell chronic lymphocytic leukemia. // Act. Haematol. 1995. - V. 94. - P. 78-83.

69. Harbottle A, Daly A.K, Atherton K. et al. Role of glutathione S-transferase PI, P-glycoprotein and multidrug resistance-associated protein 1 in acquired doxorubicin resistance. // Int. J. Cancer. 2001. - V. 92. - P. 777-783.

70. Harris M.J, Coggan M, Langton L. et al. Polymorphism of the Pi class glutathione S-transferase in normal populations and cancer patients. // Pharmacogenetics. 1998. -V. 8.-P. 27-31.

71. Harrison D.J, Cantly A.M., Rae F. et al. Frequency of glutatione S-transferase Ml deletion in smokers with emphysema and lung cancer. // Hum. Exp. Toxicol. 1997. -V. 17.-P. 356-360.

72. Hayes J.D, Pulford D.J. The glutathione S-transferase supergene family: regulation of GST and the contribution of the isoenzymes to cancer chemoprotection and drug-resistance. // Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 1995. - V. 30. - P. 445-600.

73. Hayes J.D, Strange R. Glutathione S-transferase polymorphisms and their biological consequences. // Pharmacology. 2000. - V. 61. -P. 154-166.

74. Helzlsouer K.J, Selmin O, Huang H.Y. et al. Association between glutatione S-transferase Ml, PI, and T1 genetic polymorphisms and development of breast cancer. // J. Natl. Cancer. Inst. 1998. - V. 90. - P. 512-518.

75. Hill K.E., Hunt R.W., Jones R. et al. Metabolism of nitroglycerin by smooth muscle cells. Involvement of gluthation and gluthation S-transferases. // Biochem. Pharmacol. 1992. -V. 43.-P. 561-566.

76. Hipfner D.R., Deeley R.G., Cole S.P. Structural, mechanistic and clinical aspects of MRP1. //Biochim. Biophys. Acta. 1999. -V. 1461. P. 359-376.

77. Hitzl M., Drescher S., Kuip H.et al. The C3435T mutation in the human MDR1 gene is associated with altered efflux of the P-glycoprotein substrate rhodamine 123 from CD56+ natural killer cells. // Pharmacogenetics. 2001. - V. 11 - P. 293-298.

78. Houlston R.S., Tomlinson I.P. Polymorphisms and colorectal tumor risk. // Gastroenterology.-2001.-V. 121.-P. 282-301.

79. Hu X., Xia H., Srivastava S.K. et al. Activity of four allelic forms of glutathione S-transferase hGSTPl-1 for diol epoxides of polycyclic aromatic hydrocarbons. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997. - V. 238. - P. 397^102.

80. International Workshop on Chronic Lymphocytic Leukemia: Recommendation for diagnosis, staging, and response criteria. // Ann. Intern. Med. 1989. - V. 110. - P. 236-243.

81. Ishii T., Matsuse T., Teramoto S. et al. Glutatione S-transferase PI (GSTP1) polymorphism in patients with chronic obstructive pulmonary disease. // Thorax. -1999.-V. 54.-P. 693-696.

82. Ito S., I. Ieiri, M. Tanabe Polymorphisme of ABC transporter genes MDR1, MRP1, MRP2/cMOAT, in healthy Japanese subjects // Pharmacogenetics. 2001. - V. 2. -P. 175-84.

83. Iyer L., Ratain M.J. Pharmacogenetics and cancer chemotherapy. // Eur. J. Cancer. -1998.-V. 34.-P. 1493-1499.

84. Jamroziak K, Robak T. Pharmacogenomics of MDR1/ABCB1 gene: the influence on risk and clinical outcome of haematological malignancies. // Hematology. 2004. -V. 9.-P. 91-105.

85. Jamroziak K., Balcerczak E., Cebula B. et al. Multi-drug transporter MDR1 gene polymorphism and prognosis in adult acute lymphoblastic leukemia.// Pharmacol. Rep. 2005. - V.57. - P. 882-888.

86. Jamroziak K., Balcerczak E., Mlynarski W. et al. Distribution of allelic variants of functional C3435T polymorphism of drug transporter MDR1 gene in a sample of Polish population. // Pol. J. Pharmacol. 2002. -V. 54. - P. 495-500.

87. Jamroziak K., Balcerczak E., Smolewski P. et al. MDR1 (ABCB1) gene polymorphism C3435T is associated with P-glycoprotein activity in B-cell chronic lymphocytic leukemia. // Pharmacol. Rep. 2006. V. 58. -P. 720-728.

88. Jamroziak K., Mlynarski W., Balcerczak E. et al. Functional C3435T polymorphism of MDR1 gene: an impact on genetic susceptibility and clinical outcome of childhood acute lymphoblastic leukemia. // Eur. J. Haematol. 2004. -V. 72.-P. 314-321.

89. Kafka A., Sauer G., Jaeger C., Grundmann R. et al. Polymorphism C3435T of the MDR-1 gene predicts response to preoperative chemotherapy in locally advanced breast cancer. // Int. J. Oncol. 2003. - V. 22. - P. 1117-1121.

90. Katoh T., Kaneko S., Takasawa S. et al. Human glutathione S-transferase PI polymorphism and susceptibility to smoking related epithelial cancer; oral, lung, gastric, colorectal and urothelial cancer. // Pharmacogenetics. 1999. - Vol. 9. - P. 165-169.

91. Kerb R., Hoffmeyer S., Brinkmann U. ABC drug transporters: hereditary polymorphisms and pharmacological impact in MDR1, MRP1 and MRP2. // Pharmacogenomics. 2001. - V.2. - P. 51-64.

92. Ketley J.N., Habig W.N., Jacoby W.B. Binding of nonsubstrate ligands to the gluthation S-transferases. // J. Biol. Chem. 1975. - V. 259. - P. 8670-8673.

93. Ketterer B. Glutathione S-transferases and prevention of cellular free radical damage. // Free. Radic. Res. 1998. - V. 28. - P. 647-658.

94. Kim RB. MDR1 single nucleotide polymorphisms: multiplicity of haplotypcs and functional consequences. // Pharmacogenetics. 2002. -V. 12. - P. 425-427.

95. Kioka N., Tsubota J., Kakehi Y. et al. P-glycoprotein gene (MDR1) cDNA from human adrenal: normal P-glycoprotein carries Glyl85 with an altered pattern of multidrug resistance. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1989. - V. 162. - P. 224-231.

96. Klimecki W.T., Futscher B.W., Grogan T. M. et al. P-glycoprotein expression and function in circulating blood cells from normal volunteers. // Blood. 1994. - V. 83. -P. 2451-2458.

97. Klone A., Weidner U., Hussnatter P. et al. Decreased expression glutathione S-transferase alpha and pi genes in human renal cell carcinoma. // Carcinogenesis. -1990.-V. 11.-P. 2179-2183.

98. Kunkel L.M., Smith K.D., Boyer S.H. et al. Analisis of human Y-chromosome -specific reiterated DNA in chromosome variants // Proc. Nat. Acad. Sci. 1977. - V. 74.-P. 1245-1249.

99. Le Hir H., Nott A., Moore M. J. How introns influence and enhance eukaryotic gene expression. // Trends Biochem. Sci.- 2003.- V. 28 P. 215-220.

100. Legrand O., Simonin G. Pgp and MRP activities using Calcein-AM arc prognostic factors in adult acute myeloid leukemia patients. // Blood. 1998. - V. 91. - P. 44804488.

101. Leonard G.D., Fojo T. The role of ABC transporters in clinical practice. // The Oncologist. 2003. - V. 8. - P. 411-424.

102. Lieberman D.A., Hoffman B., Steinmann R.A. Molecular controls of growth arrest and apoptosis: p53-dependent and independent pathways. // Oncogene. 1995. - V. 11.-P. 199-210.

103. Lockhart A.C., Tirana R.G., Kim R.B. Pharmacogenetics of ATP-binding cassette transporters in cancer and chemotherapy. 2003. - V. 2. - P. 685-698.

104. Loe U.W., Deeley R.O., Cole S.P.C. Biology of the multidrug resistance-associated protein, MRP. // Eur. J. Cancer. 1996. - V. 32A. - P. 942-957.

105. Mannervik B. The isoenzymes of glutathione transferase. // Adv. Enzymol. Relat. Areas. Mol. Biol. 1985. - V. 57. - P. 357-417.

106. Mannervik B. The isoenzymes of glutathione transferase. // Adv. Enzymol. Relat. Areas. Mol. Biol. 1985. - V. 57. - P. 357-417.

107. Mannervik B., Awasti Y.C., Board P.G. et al. Nomenclature for human glutathione transferases. // Biochem. J. 1992. - V. 282. - P. 305-306.

108. Marie J. P-glycoprotein in adult haemotological malignancies. // Hematol. Oncol. Clin. N. Am. 1995. - V. 9. - P. 239-250.

109. Marie J.P., Simonin G., Legrand O. et al. Glutathione-S-transferases pi, alpha, mu and mdrl mRNA expression in normal lymphocytes and chronic lymphocytic leukemia. // Leukemia. 1995. - V. 9. - P. 1742-1747.

110. Marie J.P., Zhou D.C., Gurbxani S. et al. MDR/P-glycoprotein in haematological neoplasms. //Eur. J. Cancer.- 1996.- V. 32A-P. 1034-1038.

111. Marzolini C., Paus E., Buclin T. et al. Polymorphisms in human MDR1 (P-glycoprotein): Recent advances and clinical relevance. // Clin. Pharmacol. Ther. -2004.-V. 75.-P. 13-33.

112. Mickley L.A., Lee J.S., Weng Z. et al. Genetic polymorphism in MDR-1: a tool for examining allelic expression in normal cells, unselected and drug-selected cell lines, and human tumors. // Blood. 1998. - V. 91. - P. 1749-1756.

113. Miller M.S., McCarver D.G., Bell D.A. et al. Genetic polymorphisms in human drug metabolic enzymes. // Fundam. Appl. Toxicol. 1997. - V. 40. - P. 1-14.

114. Montserrat E., Roynan C. Current approaches to the treatment and management of chronic lymphocytic leukaemia. // Drugs. 1994. — V. 47. - P. 1-9. /

115. Morgenstern R., DePierre J.W. Microsomal glutathione S-transferase. // Rev. Biochem. Toxicol. 1985.-V. 7.-P. 67-103.

116. Morgenstern R., Wallin H., DePierre J.W. Mechanisms of activation of microsomalgluthation transferase. // In "Gluthation S-transferases and carcinogenesis" (Mantle T.J., Pickett C.B., Hayes J.D. eds) Taylor&Francis, London, 1987.

117. Morgenstern R., Wallin H., DePierre J.W. Mechanisms of activation of microsomalgluthation transferase. // Glu- S-tr. and carcinogenesis. 1987. - V. 1-P. 23-35.

118. Moscow J.A., Fairchild C.R., Madden M.J. et al. Expression of anionic glutatione S-transferase and P-glycoprotein genes in human tissue and tumors. // Cancer Res. -1989.-V. 49.-P. 1422-1428.

119. Moscow J.A., Fairchild C.R., Madden M.J. et al. Expression of anionic glutatione S-transferase and P-glycoprotein genes in human tissue and tumors. // Cancer Res. -1989.-V. 49.-P. 1422-1428.

120. Moscow J.A., Townsend A.J., Cowan K.H. Elevation of pi class glutathione S-transferase activity in human breast cancer cells by transfection of the GSTP1 gene and its effect on sensitivity to toxins. // Mol. Pharmac. 1989. - Vol 36. - P. 22-28.

121. Moskaluk C.A., Duray P.H., Cowan K.H. et al. Immunohistochemical expresión of Pi-class glutathione S-transferase is down-regulated in adenocarcinoma of the prostate. // Cancer. 1997. - V. 79. - P. 1595-1599.

122. Mulder T.P.J., Peters W.H.M., Wobbes T. et al. Measurement of glutatione S-transferase P1-1 in plasma. // Cancer. 1997. - V. 80. - P. 873-880.

123. Nakagawa K., Saijo N., Tsuchida S. et al. Glutathione S-transferase pi as a determinant of drug resistance in transfectant cell lines. // J. Biol. Chem. 1990. - V. 265.-P. 4296-4301.

124. Nebert D.W. Genetic differences in susceptibility to chemically induced myelotoxicity and leukemia. // Envir. Health persp. 1981. - V. 39. - P. 11-22.

125. Norgaard J.M., Bukh A., Langkjer S.T. et al. MDR1 gene expression and drug resistance of AML cells. // British Jour, of Haem. 1998. - V. 100. - P. 534-540.

126. Nuessler V., Stotzer O., Gullis E. et al. Bcl-2, bax and bcl-xL expression in human sensitive and resistant leukemia cell lines. // Leukemia. 1999. - V. 13. - P. 1864-1872.

127. Ollikainen T., Hirvonen A., Norppa H. Influence of GSTT1 genotype on sister chromatid exchange induction by styrene-7,8-oxide in cultured human lymphocytes. // Environ. Mol. Mutagen. 1998. - V. 31. - P. 311-315.

128. Oselin K., Mrozikiewicz P.M., Gaikovitch E. et al. Frequency of MRP1 genetic polymorphisms and their functional significance in Caucasians: detection of a novel mutation G816A in human MRP1 gene. // Eur. J. Clin. Pharmacol. 2003. - V. 59. -P.347-350.

129. Pal A., Desalt D.H., Amin S. et al. Location of the epoxide function determines specificity of the allelic variants of human glutathione transferase Pi toward benzoc.chrysene diol epoxide isomers. // FEBS Letters. 2000. - V. 486. - P. 163166.

130. Park J.Y., Schantz S.P., Stern J.C. et al. Association between glutathione S-transferase pi genetic polymorphisms and oral cancer risk. // Pharmacogenetics. -1999.-V. 9.-P. 497-504.

131. Parkinson A. Biotransformation of xenobiotics // In: Casarett and Doull's Toxicology. //Eds. Klaassen C.D., 1996.-P. 114-184.

132. Parraga A., Garcia-Saez I., Walsh S.B. et al. The three-dimension structure of a class-Pi glutathione S-transferase complexed with glutathione: the active site provides insights into the reaction mechanism // Biochem. J. 1998. - V. 333. - P. 811-816.

133. Pastan I, Gottesman M Multiple-drug resistance in human cancer. // N. Engl. J. Med. 1987. - V. 316. -P. 388-1393.

134. Pauli-Magnus C., Kroetz D.L. Functional implications of genetic polymorphisms in the multidrug resistance gene MDR1 (ABCB1). // Pharm. Res. 2004. - V. 21. -P. 904-913.

135. Pearse N. What does the odds ratio estimate in case-control study? // Int. J. Epidemiol. 1993. - V. 22. - P. 1189-1192.

136. Pearson W.R., Vorachek W.R., Xu S.J. et al. Identification of class-mu glutathione transferase genes GSTM1-GSTM5 on human chromosome lpl3. // Am. J. Hum. Genet. 1993. - V. 53. - P. 220-233.

137. Pemble S., Schroeder K.R., Spencer S.R. et al. Human glutathione S-transferase Theta (GSTT1): cDNA cloning and the characterization of a genetic polymorphism. // Biochem. J. 1994. - V. 300. - P. 271-276.

138. Peters W.H., Wormskamp N.G., Thies E. Expression of glutathione S-transferases in normal gastric mucosa and in gastric tumors. // Carcinogenesis. 1990. - V. 11.-P.1593-1596.

139. Potochik U., Ravnik-Glavac M., Glavak D. Functional MDR1 polymorphisms (G2766T and C3435T) and TCF-4 mutations in colorectal tumors with high microsatellite instability. // Cell Mol. biol. Lett. 2002. - V. 7. - P. 92-95.

140. Rai K.R., Sawitsky A., Cronkite E.P. et al. Clinical staging of chronic lymphocytic leukemia. // Blood. -1975. V. 46. - P. 219-34.

141. Randolph G. J., Beaulieu S., Pope M. et al. A physiologic function for p-glycoprotein (MDR-1) during the migration of dendritic cells from skin via afferent lymphatic vessels. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1998. - V. 95. - P. 6924-6929.

142. Ribrag V., Massade L., Faussat A.M. et al. Drug resistance mechanisms in chronic lymphocytic leukemia. // Leukemia. 1996. - V. 10. - P. 1944-1949.

143. Robak T. Acute lymphoblastic leukemia in elderly patients. // Drugs Aging. -2004.-V. 21.- P. 779-791.

144. Roddilla V., Benszie A.A., Veitch J.M. et al. Glutathione S-transferases in human renal cortex and neoplastic tissue: enzymatic activity, isoenzyme profile and immunohistochemical localization. // Xenobiotica. 1998. - V. 28. - P. 443^156.

145. Rodriguez C., Commes T., Robert J. et al. Expression of P-glycoprotein and anionic glutathione S-transferase genes in non-Hodgkin's lymphoma. // Leuk. Res. -1993.-V. 17.-P. 149-156.

146. Rollinson S. Roddam P., Kane E. Polymorphic variation within the glutathione S-transferase genes and risk of adult acute leukaemia // Carcinogenesis. 2000. - V. 21. -P. 43-47.

147. Roninson , I. B. and other. Molecular and cellular biology of multidrug resistance in tumor cells- Plenum Press, N. Y. London, 1990. - P. 556-600.

148. Ross V.L., Board P.G., Webb G.C. Chromosomal mapping of the human Mu class glutathione S-transferases to lpl3 // Genomics. 1993. - V. 18. - P. 87-91.

149. Saito S., Iida A., Secine A. et al. Three hundred twenty-six genetic variations in genes encoding nine members of ATP-binding cassette, subfamily B (ABCB/MDR/TAP), in the Japanese population. // J. Hum. Genet. 2002. - V. 47. -P. 38-50.

150. Sakaeda T., Nakamura T., Okomura K. MDR1 genotype-related pharmacokinetics and pharmacodynamics / // Biol. Pharm. Bull. 2002. - V. 25. - P. 1391-1400.

151. Salinas A.E., Wong M.G. Glutathione S-transferases-a review. // Curr. Med. Chem. 1999. - V. 6. -P. 279-309.

152. Sarmanova J., Benesova K., Gut I. et al. Genetic polymorphisms of biotransformation enzymes in patients with Hodgkin's and non-Hodgkin's lymphomas. // Hum. Mol. Genet. 2001. -V. 10. -P.1265-1273.

153. Sarmanova J., Tynkova L., Susova S. et al. Genetic polymorphisms of biotransformation enzymes: allele frequencies in the population of the Czech Republic. // Pharmacogenetics. 2000. - V. 10. - P. 781-788.

154. Satoh T., Nishida M., Tsunoda H., Kubo T. Expression of glutatione S-transferase pi (GST-pi) in human malignant ovarian tumors. // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 2001. - V. 96. - P. 202-208.

155. Schisselbauer J.C., Silber R., Papadopoulos E. et al. Characterization of glutathione S-transferase expression in lymphocytes from chronic lymphocytic leukemia patients. // Cancer Res. 1990. - V. 50. - P. 3562-3568.

156. Schwab M., Eichelbaum M., Fromm M. F. Genetic polymorphisms of the human MDR1 drug transporter. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol.- 2003.-V. 43. P. 285307.

157. Seidegard J., Vorachek W.R., Pero R.W. et al. Hereditary differences in the expression of the human glutathione transferase active on trans-stilbene oxide are due to a gene deletion. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1988. - Vol .85. - P. 7293-7297.

158. Sheehan D., Meade G., Foley V.M. et al. Structure, function and evolution of glutatione transferases: implications for classification of non-mammalian members of an ancient enzyme superfamily. // Biochem. J. 2001. - V. 360. - P. 1-16.

159. Siegmund W., Ludwig K., Giessmann T. et al. The effects of the human MDR1 genotype on the expression of duodenal P-glycoprotein and disposition of the probe drug talinolol. // Clin. Pharmacol. Ther. 2002. - V. 72. P.572-583.

160. Sikic B. Pharmacologic approaches to reversing multidrug resistance. // Seminars in Hematology. 1997. - V. 34. - P. 40^7.

161. Sipes I.G., Gandolfi A.J. Biotransformation of toxicants // Casarett and Doull's toxicology / Eds C.D. Klaassen, M.O.Admur, J. Doul. N. Y.: Macmillan.Publishing Company, 1986.-P. 99-173.

162. Soucek P., Sarmanova J., Kristensen V.N. et al. Genetic polymorphisms of biotransformation enzymes in patients with Hodgkin's and non-Hodgkin's lymphomas. // Int. Arch. Occup. Environ. Health. 2002. - V.75.Suppl. P. S86-S92.

163. Sparreboom A., Danesi R., Ando Y. et al. Pharmacogenomics of ABC transporters and its role in cancer chemotherapy. // Drug Resist.Updat. 2003. - V. 266. - P. 114.

164. Stam R.W., van den Heuvel-Eibrink M.M., den Boer M.L. et al. Multidrug resistance genes in infant acute lymphoblastic leukemia: Ara-C is not a substrate for the breast cancer resistance protein. / // Leukemia. 2004. - V. 18. - P. 78-83.

165. Strange R., Jones P.W., Fryer A.A. Glutathione S-transferase: genetics and role in toxicology .// Toxicol, lett. 2000. - V. 112-113. - P. 357-363.

166. Sweeney C., McClure G.Y., Fares M.Y. et al. Ambrosone C.B. Association between survival after treatment for breast cancer and glutathione S-transferase PI Ilel05Val polymorphism. // Cancer Res. 2000. - V. 60. - P. 5621-5624.

167. Tan K.L., Board P.G. Purification and characterization of a recombinant human Theta-class glutathione transferase (GSTT2-2). // Biochem. J. 1996. - V. 315. - P. 727-732.

168. Tew K.D. Glutathione-associated enzymes in anticancer drug resistance. // Cancer. Res. 1994. - V. 54. - P. 4313-4320.

169. Thomas IT, Coley H.M. Overcoming multidrug resistance in cancer: an update on the clinical strategy of inhibiting P-glycoprotein. // Cancer Control. 2003. - V. 10. -P.159-165.

170. Thomas X, Quoc-Hung L. Prognostic factors in adult acute lymphoblastic leukemia. // Hematology. 2003 - V. 8. - P. 233-242.

171. Thottassery J.V., Zambetti J. P., Arimori K. p53-dependent regulation of MDR1 gene expression causes selective resistance to chemotherapeutic agents. // Pharmacology. 1997.-V. 94.-P. 11037-11042.

172. Toffoli G., Viel A., Tumiotto L. et al. Expression of glutathione S-transferase-pi in human tumours. // Eur. J. of Cancer. 1992. -V. 28A. - P1441-1446.

173. To-Figueras J., Gene M., Gomez-Catalan J. et al. Genetic polymorphism of glutathione S-transferase PI gene and lung cancer risk. // Cancer Causes Control. -1999. -V. 10.-P. 65-70.

174. Tsuchida S, Sato K. Glutathione transferases and cancer. // Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 1992. - V. 27. - P. 337-384.

175. Ueda K, Taguchi H, Morishima M. How does P-glycoprotein recognize its substrates? // Cancer Biology. 1997. - V. 8. - P. 151-159.

176. Watson M.A, Stewart R.K, Massey T.E. et al. Human glutathione S-transferase PI polymorphisms: relationship to lung tissue enzyme activity and population frequency distribution. // Carcinogenesis. 1998. - V. 19. - P. 275-280. <

177. Webb G, Vaska V, Coggan M. et al. Chromosomal localization of the gene for the human theta class glutathione transferase (GSTT1) // Genomics. 1996. - V. 33. -P. 121-123.

178. Webb M. Brun M, McNiven M, Le Couteur D. et al. MDR1 and MRP expression in chronic B-cell lymphoproliferative disorders. // Br. Jour, of Haem. 1998. - V. 102.-P. 710-717.

179. Welfare M, Adeokun A.M., Bassendine M.F. et al. Polymorphism in GSTP1, GSTM1, and GSTT1 and susceptibility to colorectal cancer. // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 1999. - V. 8. - P. 289-292.

180. Xu S, Wang Y, Roe B. et al. Characterization of the human class Mu glutathione S-transferase gene cluster and the GSTM1 deletion. // J. Biol. Chem. 1998. - V. 273.-P. 3517-3527.

181. Yuille M., Condie A., Hudson C. et al. Relationship between glutathione S-transferase Ml, Tl, and PI polymorphisms and chronic lymphocytic leukemia. // Blood. 2002. - V. 99. - P. 4216-4218.

182. Zhan Z., Sandor V. A., Gamelin E. et al. Expression of the multidrug resistance-associated protein gene in refractory lymphoma: quantitution by a validated polymerase chain reaction assay. // Blood. -1997. Vol 89. - P. 3795-3800.

183. Zimniak P., Nanduri B., Pikula S. et al. Naturally occuring human glutathione S-transferase GSTP1-1 isoforms with isoleucine and valine in position 104 differ in enzymic properties // Eur. J. Biochem. 1994. - V. 224. - P. 893-899.

Информация о работе

Горева, Ольга Борисовна
кандидата биологических наук
Новосибирск, 2007
ВАК 03.00.04

Диссертация

Исследование роли GSTP1,MDR1 и MRP1 в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и в формировании устойчивости к химиотерапии - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы