Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Ассоциации полиморфных вариантов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков, протеолиза-антипротеолиза и цитокинов с хронической обструктивной болезнью легких
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Ассоциации полиморфных вариантов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков, протеолиза-антипротеолиза и цитокинов с хронической обструктивной болезнью легких"

На правах рукописи

ЯНБАЕВА ДИЛЯРА ГУМАРОВНА

АССОЦИАЦИИ ПОЛИМОРФНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНОВ ФЕРМЕНТОВ БИОТРАНСФОРМАЦИИ КСЕНОБИОТИКОВ, ПРОТЕОЛИЗА-АНТИПРОТЕОЛИЗА И ЦИТОКИНОВ С ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНЬЮ ЛЕГКИХ

03.00.15 — генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

УФА-2004

Работа выполнена в Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук

доктор медицинских наук Викторова Татьяна Викторовна доктор медицинских наук, профессор Загидуллин Шамиль Зарифович

доктор биологических наук Иващенко Татьяна Эдуардовна доктор медицинских наук Фархутдинов Усман Раульевич

Российский государственный медицинский университет

Защита диссертации состоится «^Л» июня 2004 г. в часов на заседании Регионального диссертационного совета КМ 002.133.01 при Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН по адресу: 450054, Уфа, просп. Октября, 69.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Уфимского научного центра РАН, по адресу: 450054, Уфа, просп. Октября, 71.

Автореферат разослан мая 2004 г.

Ученый секретарь

Регионального диссертационного совета Гималов Ф.Р.

Научный руководитель:

Научный консультант:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) - заболевание дыхательной, системы, характеризующееся ограничением скорости воздушного потока, которое необратимо или не полностью обратимо (GOLD Workshop Report, 2003). Основными клиническими симптомами ХОБЛ являются хронический кашель, отделение мокроты и экспираторная одышка. Заболевание сопровождается прогрессирующим нарушением вентиляции и газообмена легких по обструктивному типу с формированием эмфиземы, легочной гипертензии и хронического легочного сердца (Чучалин А., 1999, GOLD Workshop Report, 2003). Эпидемиологические исследования показывают, что 4-10% взрослого населения страдают ХОБЛ (World Health Report, 2000, European Lung White Book, 2003,). В России количество людей с признаками заболевания составляет около 11 миллионов человек (Хронические обструктивные болезни легких. Федеральная программа, 1999). По экспертным оценкам, диагностируются только 25% от всех случаев ХОБЛ, причем, в основном, на стадиях, когда болезнь приняла клинически выраженную форму (Coultas D. et al., 2003).

ХОБЛ является классическим примером многофакторного заболевания, в развитии которого важную роль играют как внешнесредовые (курение, экспозиция профессиональных и бытовых поллютантов), так и генетические факторы (Redline S. et al., 1989, Silverman E. et al., 1996, Hoidal J., 2001, Joos L., Pare P., Sanford A., 2002, Teramoto S., Ishii Т., Matsusc Т., 2002, Trupin L. et al., 2003).

Для выяснения роли конкретных генов, задействованных в формировании ХОБЛ, в современной генетике многофакторных заболеваний широко используется метод, основанный на исследовании ассоциаций полиморфных вариантов генов, продукты которых потенциально вовлечены в развитие и регуляцию тех или иных звеньев патогенеза заболевания (Silverman E., Palmer L., 2000, Lomas D., Silverman E., 2001, Hall I., 2002). ХОБЛ характеризуется хроническим персистирующим воспалением всех отделов дыхательных путей, которое развивается под влиянием различных факторов риска (курение, атмосферные и бытовые поллютанты). Нейтрофилы, макрофаги и Т-лимфоциты выделяют избыточные количества активных форм кислорода и провоспалительных медиаторов (фактор некроза опухоли а -ФНОа, интерлейкин-8 - ИЛ8, лейкотриен - LTB« и др.), что приводит к сдигу равновесия в системе оксиданты-антиоксиданты и нарушению баланса между процессами протеолиза и антипротеолиза в легких (Chung К., 2001, Barnes P., Shapiro S., Pauwels R., 2003). Повышенная активность протеазного пула (эластазы

нейтрофилов, металлопротеиназ) способствует деградации белков

экстрацеллюлярной мембраны, что вызывает- разрушение легочной ткани и формирование эмфиземы (GOLD Workshop Report, 2003, Shapiro S., 2003).

Персистенция воспаления и снижение функции внешнего дыхания в результате обструкции дыхательных путей является гипертрофией воспалительного ответа на воздействие патогенных частиц, которая может быть следствием - генетических дефектов ферментов детоксикации, эндогенных противовоспалительных и антипротеазных механизмов (Barnes P., 2000, GOLD Workshop Report, 2003). Исходя из звеньев патогенеза ХОБЛ, целесообразным представляется изучение полиморфизма генов-кандидатов, белковые продукты которых относятся к системам биотрансформации ксенобиотиков, протеолиза-антипротеолиза и цитокиновой сети.

Цель исследования:

Оценка роли полиморфных вариантов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков, протеолиза-антипротеолиза и цитокинов в формировании наследственной предрасположенности к хронической обструктивной болезни легких. Задачи:

1. Изучить распределение частот аллелей и генотипов полиморфных локусов системы ферментов биотрансформации ксенобиотиков (CYP1A1, CYP2E1, ЕРНХ, GSTM1, GSTT1, GSTP1, NAT2) у больных ХОБЛ и у практически здоровых индивидов.

2. Определить частоты аллелей и генотипов полиморфных локусов цитокиновой сети у больных ХОБЛ и у практически здоровых индивидов.

3. Провести анализ полиморфизма генов ферментов протеолиза-антипротеолиза (P, AACT, MMP1) у больных ХОБЛ и у практически здоровых индивидов.

4. Исследовать ассоциации полиморфных вариантов генов-кандидатов и их сочетаний с предрасположенностью к ХОБЛ, клиническими стадиями заболевания, а также статусом курения больного.

5. Охарактеризовать патогенетическую значимость полиморфных вариантов генов-кандидатов в развитии ХОБЛ.

Научная новизна.

Впервые у больных ХОБЛ изучена взаимосвязь сочетаний генотипов полиморфных локусов генов, кодирующих ферменты биотрансформации ксенобиотиков, протеолиза-антипротеолиза и цитокинов, с предрасположенностью к ХОБЛ, тяжестью клинического течения и статусом курения. Впервые оценена роль

полиморфизмов G590A, С481Т и G857A гена NAT2, С3539Т гена/ZlS, G-174C гена IL6 и С-627А гена ILIO в развитии предрасположенности к ХОБЛ.

Научно-практическая значимость

На основании полученных результатов показана целесообразность определения полиморфных вариантов генов ЕРНХ1 и NAT2, TNF, LTA и IL1RNи ММР1 с целью профилактики развития ХОБЛ в группах риска (злостные курильщики, рабочие вредных производств и др.) и прогнозирования вариантов клинического течения ХОБЛ на ранних стадиях заболевания.

Материалы работы могут быть использованы в учебном процессе на биологических и медицинских факультетах ВУЗов,, а также на. курсах последипломного образования врачей.

Положения, выносимые на защиту:

1. Выборка больных ХОБЛ статистически достоверно отличается по распределению частот генотипов генов ЕРНХ1 и NAT2, LTA и IL1RN и ММР1 от контрольной группы практически здоровых индивидов.

2. Полиморфные варианты генов. ЕРНХ1, IL1RN, LTA, MMP1, а также сочетания генотипов по генам NAT2, CYP1AI/EPHX1/GSTP1 и EPHX1/NAT2 являются генетическими маркерами предрасположенности к ХОБЛ.

3. Аллельные варианты генов ЕРНХ1, LTA и комбинации генотипов по генам EPHX/NAT2и TNF/LTA вносят вклад в развитие тяжелой и крайне тяжелой стадий заболевания у больных ХОБЛ.

4. Только у курящих больных ХОБЛ выявлена комбинация генотипов глутатион^-трансфераз, характеризующаяся отсутствием фермента GSTM1, нормальной активностью GSTT1 и пониженной активностью GSTP1 (делеция гена GSTM1, нормальный генотип GSTTJ, гетерозиготный генотип GSTP1).

5. Установлено, что полиморфные варианты генов CYPJA1, ЕРНХ1, GSTM1, GSTP1, NAT2, IL1RN, TNF, LTA, MMP1 являются важной составной частью генетической структуры подверженности к ХОБЛ.

Апробация работы.

Основные положения диссертации были представлены на Human Genome Meeting (HGM, Shanghai, 2002, Berlin, 2004); European Human Genetics Conference (ESHG, Strasbourg, 2002, Birmingham, 2003); 78"1 Annual Scientific Assembly of the American College of Chest Physicians (San-Diego, 2002); European Respiratory Society 13й1 Annual Congress (Vienna, 2003), 17th Asia-Pacific Congress on Diseases of the Chest (Istanbul, 2003), Conference for young scientists, PhD students and students on molecular biology and genetics (Kyiv, 2003), VII всероссийском форуме «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2003); 13 Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Санкт-Петербург, 2003); X и XI международных научных конференциях студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» (Москва, 2003, 2004).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 20 печатных работ, в том числе 8 статей.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 167 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 27 рисунками и 23 таблицами. Список литературы включает 245 источников, из них 25 - на русском языке и 220 - на иностранном.

Благодарности. Автор выражает глубокую признательность заведующим пульмонологическими отделениями больницы скорой медицинской помощи, ГКБ №13, №18, №21 г. Уфы, клиническому ординатору Байнак О.В. и всем сотрудникам отделений за содействие в организации подбора и клинического обследования больных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Генетический анализ проведен у 240 больных ХОБЛ в возрасте от 17 до 89 лет (средний возраст находившихся на стационарном лечении в

пульмонологических отделениях клинических больниц г. Уфы (№21, №13, №18, БСМП), в период с 2001 по 2003 год. У всех больных было получено информированное согласие на участие в исследовании. Диагноз был выставлен в соответствии с международной классификацией GOLD пересмотра 2003 года (Global Initiative for Chronic Obstructive Pulmonary Disease Workshop Report, 2003). Клиническое обследование проведено врачами отделений, которое включало в себя сбор жалоб и анамнеза, физикальные, лабораторные и инструментальные методы диагностики. Всем больным было проведено спирометрическое исследование

функций внешнего дыхания (ЖЕЛ, ФЖЕЛ, ОФВ), ОФВ^/ЖЕЛ) и рентгенография органов грудной клетки. Наличие симптомов атопии или онкологических заболеваний являлось критерием исключения больных из исследования. Согласно классификации GOLD (GOLD Workshop report, 2003), все больные в соответствии с тяжестью течения заболевания были разделены на три группы (табл. 1).

Таблица 1

Распределение больных ХОБЛ по степени тяжести заболевания согласно

классификации GOLD

Стадия Признаки Кол-во человек. (абс., %) Пол (м:ж) (абс, %) Статус курения (курящие: некурящие) (абс., %)

Средне-тяжелая' «П» ОФВ 1/ФЖЕЛ<70% от должного; 50% ОФВ 1 <80% от должного; • Наличие или отсутствие хронических симптомов (кашель, мокрота, одышка). 94 61:33 64,9:35,1 55:39 58,5:41,5

Тяжелая «га» ОФВ1/ФЖЕЛ<7<)% от должного; 30% ЮФВ1<50% от должного; Наличие или отсутствие хронических симптомов (кашель, мокрота, одышка). 54 42:12 77,8:22Д 32:22 59,3:40,7

Крайне тяжелая «IV» ОФВ1/ФЖЕЛ<70% от должного; ОФВ1 Й0% от должного или ОФВ1<50% от должного в сочетании с хронической дыхательной недостаточностью или клиническими признаками недостаточности правых отделов сердца. 92 83:9 90,2:9,8 75:13 81,5:18,5

Всего 240 186:54 77,5:22,5 162:78 67,5:32,5

Контрольная группа была сформирована случайным образом из 227 практически здоровых неродственных индивидов (64,3% мужчин и 35,7% женщин), проживающих в Уфе и не имеющих в анамнезе хронических заболеваний, в том числе патологии дыхательной системы. Средний возраст индивидов контрольной группы составил 46,12±8,57 лет.

ДНК выделяли из лейкоцитов периферической крови стандартным методом фенольно-хлорофомной экстракции (Matthew С, 1984). Делеционный полиморфизм генов GSTM1 и GSTT1, VNTR-полиморфизм гена IL1RN изучали методом полимеразной цепной реакции. Аллельные варианты генов CYP1A1, CYP2E1, ЕРНХ, GSTP1, NAT2, PI, ЛАСТ, TNF, LTA, IL1, IL6, ILIO исследовались методом рестрикционного анализа. Амплифицированные фрагменты ДНК разделяли электрофоретически в 7-8%-ном полиакриламидном геле. После окончания

электрофореза гель окрашивали раствором бромистого этидия и анализировали в проходящем ультрафиолетовом свете на трансиллюминаторе.

Анализ ассоциаций полиморфных локусов генов-кандидатов с ХОБЛ проводили по схеме, отвечающей современным требованиям приложения метода ассоциаций к исследованию предрасположенности к ХОБЛ (Silverraan E., Palmer L., 2000, Hall I., 2002). Во-первых, с целью выявления генотипов повышенного и пониженного риска формирования предрасположенности к ХОБЛ общую выборку больных сравнивали с контрольной группой индивидов, не имеющих хронических заболеваний органов дыхания и других органов («маркеры предрасположенности и устойчивости»). Во-вторых, для выявления генотипов, ассоциированных с тяжестью течения ХОБЛ («маркеры степени тяжести»), проводили сравнение внутри общей выборки больных ХОБЛ в группах с различной степенью тяжести ХОБЛ (стадии II, Ш, IV согласно последней редакции GOLD). Кроме того, чтобы оценить влияние курения (генотип «чувствительного курильщика») во взаимодействии с определенной генетической конституцией на развитие ХОБЛ, отдельно сравнивали курящих больных ХОБЛ с некурящими больными.

Математическую обработку результатов исследования осуществляли с использованием пакетов статистических программ Statistica v. 5.0, RxC, Microsoft Excel и Microsoft Access. Разницу в распределении частот генотипов между группами рассчитывали с использованием критерия х* с поправкой Йетса (RoffD., Bentzen P., 1989). При попарном сравнении частот аллелей и генотипов применяли точный критерий Фишера (Животовский Л. А., 1991). Силу ассоциаций гено- и фенотипических характеристик изученных генов ферментов и цитокинов с риском развития и клиническими особенностями ХОБЛ оценивали по значениям показателя отношения шансов (odds ratio, OR). OR>1 рассматривали как положительную ассоциацию заболевания с аллелем или генотипом («фактор риска»), OR<1 — как отрицательную ассоциацию («фактор устойчивости»), OR=1 считали отсутствием ассоциации (Schlesselman J., 1982).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Полиморфизм генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков у

больных ХОБЛ.

Нами проанализированы полиморфизмы генов ферментов биотранеформации ксенобиотиков, включая фазу I (цитохромы Р450 - CYP1A1 и CYP2E1, микросомальная эпоксидгидролаза - ЕРНХ1) и . фазу II (глутатионтрансферазы -GSTM1, GSTT1 и GSTP1, ариламин- -ацетилтрансфераза NAT2). По полиморфным

локусам генов СУР1Л1, СУР2Е1, 08ТМ1, 08ТТ1 и 08ТР1) существенных различий между общей выборкой больных ХОБЛ и контрольной группой (табл. 2), а также при сравнительном анализе групп больных разной степени тяжести и статусом курения не обнаружено.

Таблица 2

Распределение генотипов генов СУР1Л1, СУР2Е1, 08ТМ1, 08ТТ1 и 08ТР1 у больных ХОБЛ и в контрольной группе

Генотипы ХОБЛ Контроль Р

Абс. 1 Частота Абс. 1 Частота

А4ШОС YP1AI

АА 223 0,929 192 0,955 0,341

AG 16 0,067 8 0,040 0,305

GG 1 0,004 1 0,005 1.000

С-1091Т CYP2E1

СС 220 0,936 207 0,958 0,403

ст 14 0,060 9 0.042 0.515"

Деления tiSTMl

ТТ 1 0,004 0 0,000 0,676

Норма 132 0,550 133 0,621 0,148

Деления " 108" 0.450 81 0,379

Деления 1STTI

Норма 194 0,80» 159 0,772 0,408

Деления 46 0,192 ■ 47 0.228

A313G GSTPI

АА 166 0,695 142 0,692 1,000

АО 62 0,259 59 0,288 0,573

СО 11 0.046 4 0.020 0,451

Анализ полиморфизма Т337С 3 экзона гена ЕРНХ1 выявил значительные различия в распределении частот генотипов между группами больных ХОБЛ и здоровыми индивидами (табл. 3). Показано, что генотипы ТС и СС, чаще встречающиеся у больных ХОБЛ, являются факторами риска развития ХОБЛ (OR=1,68; 95%CI 1,14-2,47 и OR=3,88; 95%CI 1,00 -17,53, соответственно). Генотип ТТ выявлен как фактор устойчивости к формированию заболевания (OR=0,52; 95%CI 0,35-0,76).

Исследование полиморфизма A415G 4 экзона гена ЕРНХ1 показало, что генотип AG достоверно чаще встречался в группе больных ХОБЛ (28,5% против 19,5%), маркируя повышенный риск развития заболевания (OR=1,64; 95%CI 1,042,60) (табл.3).

Сравнительный анализ полиморфизмов 3 и 4 экзонов гена ЕРНХ1 в зависимости от клинической стадии заболевания и статуса курения не показал статистически значимых различий.

Исследованные полиморфизмы 3 и 4 экзонов гена ЕРНХ1 четко коррелируют с уровнем ферментативной активности микросомальной эпоксидгидролазы in vitro (Hassett С. et al., 1994). Различные комбинации генотипов по двум локусам

Таблица 3

Распределение генотипов и фенотипов микросомальной эпоксидгидролазы у больных ХОБЛ и в контрольной группе

Генотипын фенотипы ХОБЛ Контроль Р

Абс, 1 Частота Абс, 1 Частота

Т337С ЗэкзонЕРНХ1

тг 110 0,458 139 0,620 0,001, ОК==0,52

тс 11S 0,492 82 "0,366 0,009, OR=l,68

сс 12 0,050 3 " 0,014 0,049, OR=3,88

A415G 4 зюон ЕРЮ 7

и 166' 0,695 168 0,764 0,120

АО ~68' " 0,585 43 0,195 ' 0,035, OR-1.64

GG 5 0,020 9 0,041 0332

Фенотипы ЕРНХ1

Нормальный^) 106 0,443 119 0,566 0,015, OR=l,5l

Ьыстрый(г) 37 0,155 31 0,145 ' 0,903

Медленный (S) 87 0,364 58 0,275 0,055, Oft=ft,62

Очень медленный iSS) 9 0,038. 3 0,014 0,213

формируют разный уровень активности фермента. Описано 4 фенотипа фермента: быстрый (F, fast), нормальный (N, normal), медленный (S, slow) и очень медленный (SS, very slow) (Hassett С. et al., 1994). При анализе распределения частот фенотипов эпоксидгидролазы у больных ХОБЛ и у практически здоровых индивидов нами выявлено, что медленная форма фермента встречалась чаще в группе больных ХОБЛ (36,4% против 27,5% в контроле, ^==3,68, р=0,05), повышая риск формирования ХОБЛ в 1,5 раза (OR=1,51; 95%CI 0,99-2,30). Вместе с тем, нормальный фенотип эпоксидгидролазы среди здоровых индивидов встречается чаще (56,6%), чем у больных ХОБЛ (44,3%), и является фактором устойчивости к развитию заболевания (OR=0,62; 95%CI 0,42-0,91).

При сравнительном анализе распределения частот фенотипов фермента среди больных различными стадиями ХОБЛ обнаружены существенные различия (рис. 1). Так, у больных II стадией ХОБЛ частота быстрой формы составила 24,7%, тогда как у больных III и IV стадиями только 9,2% и 9,8%, соответственно (р=0,004). Можно предположить, что быстрая форма ЕРНХ1 является фактором устойчивости, снижающим риск развития ХОБЛ тяжелого и крайне тяжелого течения (стадии Ш и IV) в 3,1 раза (OR=0,31; 95%CI 0,10-0,94). Доля нормальных метаболизаторов среди бальных ХОБЛ увеличивается с нарастанием тяжести клинического течения: II -33,3%, Ш -46,3%, IV- 54,3% (OR=2,38; 95%CI 1,26-4,56).

Частоты фенотипов микросомальной эпоксидгидролазы в группе курящих не отличались от таковых в группе некурящих (х*=0,98, р=0.803).

|hn df as »ss

60/1 OR=031

■238

II

III

Стадии ХОБЛ

IV

Рис. 1. Распределение фенотипов микросомальной эпоксидгидролазы в группах больных ХОБЛ различной тяжести течения

Таким образом, нами показано, что медленный фенотип ЕРНХ1 является фактором риска развития ХОБЛ, тогда как нормальный фенотип - фактором устойчивости, что согласуется с результатами других исследований (Xiao D. et al., 2003). Впервые обнаружено, что быстрый фенотип является маркером устойчивости к развитию тяжелых стадий ХОБЛ.

Анализ полиморфных вариантов локусов G590A, С481Т, G857A гена NAT2 показал достоверные различия только для генотипа ТТ полиморфного локуса С481Т, который существенно реже встречался в группе больных ХОБЛ (13,1% против 21,2% в контроле, ^=3,94, р=0,047). Предположительно, генотип ТТ является маркером устойчивости к развитию ХОБЛ (OR=0,56; 95% CI 0,31-0,99). Для полиморфизмов G590A и G857A гена NAT2 различий между группами обнаружено не было.

При сравнительном анализе комбинаций генотипов по трем полиморфным, локусам гена NAT2 (G590A, С481Т, G857A) у больных ХОБЛ и в контрольной группе обнаружено, что распределение частот комбинаций генотипов гена NAT2 существенно отличалось между изученными группами (х?=19,66, р=0,020) (рис. 2). У больных ХОБЛ достоверно чаще встречалось сочетание генотипов (отсутствие мутаций в гене NAT2) и *4*5. Риск развития ХОБЛ у индивидов с комбинацией *4*5 составил 1,71 (95%С1 0,98-2,98), а с комбинацией *4*4 - повышался до 3,65 (95%С1 1,29-11,10). Сочетание генотипов *5*5 существенно реже встречалась в группе больных (8,3%) против 15,7% в контроле, OR=0,49 (95% CI 0,25-0,97). Различные сочетания полиморфных аллелей гена NAT2 ассоциированы с разной активностью

Рис. 2. Распределение комбинаций генотипов гена NAT2 в выборке больных ХОБЛ и контрольной группе

ацетилирования. По фенотипам NAT2 все индивиды делятся на две группы - быстрые и медленные ацетиляторы (Cascoibi I. et al., 1995). Согласно полученным результатам, фенотип быстрых ацетиляторов чаще встречался в группе больных ХОБЛ (51,1%, против 36,6% в контрольной группе, )^=7,48; р=0,007), являясь маркером риска формирования ХОБЛ, OR=1,83 (95%CI 1,18-2,84). Напротив, медленное ацетилирование является фактором устойчивости к развитию заболевания.

Причина относительно низкой доли медленных ацетиляторов в группе больных ХОБЛ, с нашей точки зрения, может быть связана с нарушением детоксикации лекарственных препаратов у индивидов с медленным фенотипом по гену NAT2, что ведет к более медленному связыванию и выведению из организма лекарств, и, в конечном итоге, может сопровождаться лучшим терапевтическим эффектом. Напротив, у больных ХОБЛ с фенотипом быстрых ацетиляторов метаболизм лекарственных соединений происходит быстрее, что может приводить к лекарственной резистентности и хронизации заболевания. С другой стороны, возможно, ацетилирующая способность NAT2 может играть важную роль в процессах ремоделирования легочной ткани, так как NAT2 принимает участие в метаболизме протеогликанов и других компонентов внеклеточного матрикса (Чекмазов ИЛ., 2002, Shapiro S., 2003).

Нами изучены различные комбинации генотипов по генам CYP1A1, ЕРНХ1 и GSTP1, что соответствует метаболическому пути утилизации полиароматических углеводородов (ПАУ). Только в группе больных ХОБЛ с частотой 2,1% встречалась комбинация AG/F/AA, характеризующаяся высокой активацией ПАУ (генотип AG

гена СУР1Л1), быстрым фенотипом ЕРНХ1 и низкой активностью фермента детоксикации GSTP1. Риск развития ХОБЛ у индивидов с этим редким сочетанием генотипов повышен почти в 8 раз (OR=7,88; 95% И 1,05-166,13).

Сравнительный анализ распределения» сочетаний генотипов глутатион^-трансфераз ОБТМ1, ОБ1Т1, ОБТР1 в зависимости от стадии ХОБЛ показал значительные различия между II и Ш-]У стадиями. У больных Ш-ГУ стадиями' частота комбинации генотипов N/N/^4 увеличена до 45,3% и 32,6%, соответственно, по сравнению с 24,4% у больных стадией II (^=3,61, р=0,057). Риск развития тяжелых стадий ХОБЛ у индивидов с данным сочетанием генотипов оказался повышен почти в 2 раза ^=1,84; 95%а 0.98-3.46).

При анализе полиморфизма генов ОБТМ1, ОБТТ1 и ОБТР1 только у курящих больных ХОБЛ с частотой 7,5% выявлена комбинация генотипов 0/N/AG, характеризующаяся отсутствием фермента GSTM1, нормальной активностью GSTT1 и пониженной активностью GSTP1 (делеция гена ОБТМ1, нормальный генотип 081Т1, гетерозиготный генотип 08ТР1), OR=11,96 (95% а 1,71-242,13). Данный вариант не встречался у некурящих больных ХОБЛ.

Для определения совместного влияния генов ЕРНХ1 (I фаза) и МЛТ2 (II фаза) на предрасположенность и тяжесть течения ХОБЛ нами проанализированы комбинации фенотипов микросомальной эпоксидгидролазы и ариламин-^ ацетилтрансферазы 2 у больных и в контрольной группе (рис. За).

а) б)

Рис. 3. Распределение комбинаций фенотипов микросомальной эпоксидгидролазы и ацетилтрансферазы 2 у больных ХОБЛ: а) по сравнению с контрольной группой, б) в зависимости от тяжести клинического течения ХОБЛ

Распределение сочетаний фенотипов ЕРНХ1 и МЛТ2 значительно отличалось между группой больных ХОБЛ и выборкой- здоровых индивидов. Частота комбинации фенотипов N-8 (нормальный, фенотип ЕРНХ1 и медленное ацетилирование) была существенно ниже у больных ХОБЛ, чем в контрольной группе (21,8% против 35,1%, ^==7,40, р=0,007, 0Я=0,52; 95%С1 0,32-0,84). Напротив, сочетание медленного фенотипа ЕРНХ1 и фенотипа быстрого ацетилирования • (в-Я) чаще встречалось в группе больных ХОБЛ (17,9% против 9,5% в контроле, =4,49, р=0,03), что, соответственно, ассоциировалось. с повышенным риском • развития ХОБЛ, 0Я=2,09 (95%С1 1,05-4,20).

При сравнительном анализе распределения комбинаций фенотипов ЕРНХ1 и NAT2 в зависимости от тяжести клинического течения.заболевания.обнаружено статистически достоверное увеличение частоты комбинации (нормальный

фенотип ЕРНХ1 и быстрый фенотип NAT2) у больных IV стадией ХОБЛ до 33,3% по сравнению с группами больных И-Ш стадиями, где частота этой комбинации, оказалось равной 17,4% и 12,5%, соответственно (^=8,69, р=0,004) (0Я=2,72; 95%С1 1,37-5,42). Индивиды с сочетанием быстрых фенотипов по обоим ферментам (Б-Я) практически не встречаются в группе больных с крайне тяжелой стадией (2,5%), тогда как в группах больных Н-Ш стадиями их частота составляет 13,0% и 14,3%, соответственно. С другой стороны, было выявлено значительное снижение частоты комбинации быстрого фенотипа ЕРНХ1 в сочетании с медленным ацетилированием (Б-8) у больных III и IV стадий (3,6% и 1,2%, соответственно) по сравнению с больными II стадией (12,0%) (0Я=0,16; 95%а 0.04-0.65) (рис. 36). Таким образом, сочетания- фенотипов ЕРНХ1 и NAT2 Б-Я и Б-8 можно рассматривать как генетические маркеры более благоприятного течения ХОБЛ.

2. Полиморфизм генов цитокинов у больных ХОБЛ

Дисбаланс противо- и провоспалительных цитокинов в пользу последних может приводить к нарушению адекватного течения - воспалительного ответа и распространению воспаления с местного на системный уровень (Симбирцев А.С., 2002, Wouteгs Е., 2002). Нами проанализированы полиморфизмы генов провоспалительных и противовоспалительных цитокинов (фактор некроза опухоли - TNF, лимфотоксин а - LTA, интерлейкин 1 - Я,I и рецепторный антагонист интерлейкина 1 - интерлейкин 6 -Ян,терлейкин 10 --Ь/&тветственно)

в общей выборке больных ХОБЛ и контрольной группе, а также у больных с разной тяжестью течения заболевания и с различным статусом курения. По полиморфным

локусам генов TNF, IL1B (С-511Т И С3953Т), IL6 К ILIO статистически достоверных различий между общей выборкой больных ХОБЛ и контрольной группой (табл. 4),

Таблица 4

Распределение генотипов генов TNF, JL1B, IL6И ILIO у больных ХОБЛ и в

контрольной группе

Генотипы ХОБЛ Контроль Р

Абс 1 Частота Абс. | Частота

G-ЗОвл TNF

GG 163 0,679 127 0,648 0,556

GA 77 0,321 64 0,327 0,888

АЛ 0 0,000 5 0,025 0,004

C-SHi IL1B

сс 79 0,335 54 0,267 0,155

CT 121 0,513 105 0,520 6,959

IT 36 0,152 43 0,213 0,131

С3953', 1L1B

сс 146 0,621 114 0,582 0,460

CT 80 0,341 71 0,362 0,710

тг 9 0,038 11 0.056 0,518

G-174CIL6

GG 78 0,361 77 0,450 0,094

GC 118 0,546 82 0,480 0,230

СС 20 0,093 12 0,070 0,542

С-627/ ILIO

СС 131 0,565 127 0,638 0,146

CA 91 0,392 67 0,337 0,275

АА 10 0,043 5 0,025 0,453

также при сравнительном анализе групп больных разной степени тяжести и статуса курения между собой не обнаружено.

Впервые у больных ХОБЛ нами проведено изучение полиморфизмов G-174C гена IL6 и С-627А гена ILIO Распределение частот генотипов между группами больных ХОБЛ и здоровыми индивидами достоверно не различалось (табл. 4).

Таблица 5

Распределение генотипов генов у больных ХОБЛ и в контрольной

группе

Генотипы ХОБЛ Контроль Р

Абс, | Частота Abc, | Частота

AI 52GLTA

АА 107 0,450 114 0,545 0,261

AG 113 0,475 89 0,426 0,347

GO 18 0,075 6 0,029 0,047, OR=i,77

VNTI S6 пн 1Ы ■N

AIAI 114 0,485 " 85..... 0,443 0,438

А1А2 87 0,370 93 " 0,483 0,023, ÖR=ft,63

А2А2 23 0,098 7 0,036 0,023, OR=2,63

А2АЗ 4 0,017 2 "0,011 0,871

А/A3 7 0,030 5 ' 0,027' 1,000

Распределение частот аллелей и генотипов полиморфизма первого интрона A252G гена LTA значительно различалось между группой больных ХОБЛ и выборкой здоровых индивидов (табл. 5). Гомозиготы GG чаще встречались среди больных ХОБЛ, чем в контроле (7,5% против 2.9%, Х*'=3,94, р=0,047). Риск развития ХОБЛ у индивидов с генотипом GG был повышен почти в 3 раза (OR=2,77; 95%CI 1.01-7.96).

При сравнительном анализе полиморфизма у больных ХОБЛ разных стадий оказалось, что риск развития крайне тяжелой стадии ХОБЛ у больных с генотипом GG в гене LTA был повышен почти в 3 раза (OR=2,73, 95%CI 0,93-8,17). В то же время, генотип AG является маркером более благоприятного течения заболевания' (^=6,73, р=0,010 для IV стадии по сравнению со П-Ш стадиями) и снижает риск развития тяжелой формы ХОБЛ в 2 раза (OR= 0.48; 95С1% 0,27-0,85) (рис. 5а).

Поскольку продукты генов TNF и LTA функционально относятся к одной системе медиаторов воспаления, нами проведен анализ ассоциаций сочетаний генотипов изученных генов с риском развития ХОБЛ.

Показано, что комбинация GA-AG по генам TNF/LTA является маркером более благоприятного течения ХОБЛ (OR=0,41; 95%CI 0,18-0,92). Наряду с этим, риск развития крайне тяжелого течения заболевания почти в 4 раза повышен у индивидов с сочетанием генотипов GA-GG (OR=3,97; 95%CI 0,89-19,99) (рис. 56).

комбинации генотипов TNF/LT А

а) б)

Рис. 5. Распределение генотипов полиморфного локуса первого шггрона A252G гена ЬТЛ (а) и комбинаций генотипов ТЫР/ЬТА (б) в зависимости от тяжести клинического течения

Таким образом, для каждой стадии ХОБЛ можно выделить комбинацию генотипов ШРЛТА, которая является маркерной для нее. Оба полиморфизма

повышают уровень экспрессии генов, тем самым способствуя повышенной секреции провоспалительных цитокинов (Messer G. et al., 1993, Wilson A. et al, 1998). Полиморфизм A2S2G гена LTA ассоциирован с более высокой секрецией не только лимфотоксина О, но и фактора некроза опухоли а, поскольку гены LTA и TNF сцеплены (Abraham L. et al., 1993).

Кроме того, гены TNF и LTA расположены между кластерами генов комплекса гистосовместимости (HLA) I и Ш классов. Вполне вероятно, что аллели генов TNF и LTA находятся в неравновесном сцеплении с некоторыми аллелями генов HLA (около 200 генов), влияющими на развитие аутоиммунных и воспалительных реакций (Recalde H. et al., 1999, Klein J., Sato A., 2000).

При изучении минисателлитного полиморфизма во 2 интроне гена IL1RN показаны статистически достоверные различия в распределении частот генотипов между группой больных ХОБЛ и контролем (Х^=9,73 р=0,05). Выявлено существенное увеличение частоты редкого генотипа А2А2 в группе больных ХОБЛ, на долю которого приходилось 9,8% по сравнению с контрольной группой, где частота данного генотипа оказалась равной 3,6% (х*=5.1978, р=0.0231). Таким образом, у индивидов с генотипом А2А2 риск развития ХОБЛ оказался повышен почти в 3 раза (OR=2,87; 95%CI 1,14-7,53), а у гетерозигот А1А2 риск формирования заболевания снижен (0R=0,63; 95%CI 0,42-0,94) (табл. 5).

3. Полиморфизм генов ферментов протеолиза-антипротеолиза у больных

ХОБЛ

Нарушение равновесия в системе протеолиз-антипротеолиз, обусловленное врожденным дефицитом антипротеолитичесеих ферментов (ингибиторов протеаз) может привести к избыточному действию протеаз (Hogg J., Senior R.., 2002). Вместе с тем, гиперпродукция протеолитических ферментов может повлечь еще более интенсивное разрушение коллагенов, эластина и других компонентов внеклеточного матрикса, усугубляя деструкцию легочной ткани и способствуя развитию эмфиземы (Parks W., Shapiro S.., 2001, Shapiro S., 2003).

Нами проанализированы мутации и полиморфизмы генов ингибиторов протеаз (<Х]-антитрипсина - PI, Oti-антихимотрипсина - ААСТ) и протеолитического фермента интерстициальной коллагеназы (ММР1) в общей выборке больных ХОБЛ и контрольной группе (табл. 6), а также у больных с разной тяжестью течения заболевания и с различным статусом курения.

Таблица 6

Распределение генотипов генов ферментов протеолиза-антипротеолиза у больных ХОБЛ и в контрольной группе

Генотипы ХОЕЛ Контроль P

Abe, | Частота Абс, | Частота

Glu342Lys PI (Z-мутация)

Glu/Glu 237 0,992 207 0,977 0,283

G\ul Lys 2 0,008 5 0,023

Lysl Lys 0 0,000 0 " 0,000

Glu264Vm PI (S-мутация)

Glu/Glu 235 0,983 214 1,000 0,140

Glut VaI 4 0,017 0 0,000

VaUVal" 0 0,000 0 0,000

GI237A PI

GG 209 0,871 183 0,929 0,067

GA 31 0,129 14 0,071

AA 0 0,000 0 0,000

Ala-l SThr AACT

Ala/Ala 70 0,300 63 0.280 0.705

Ala/Thr 1U 0,489 116 0,515 0,639

Thrrihr 49 0,210 46 0.205 0,969

G-16 47GGMMPI

G/G 37 0,206 25 0,195 0,940

G/2G 88 0,488 80 0,625 0,0«, 6R=I,M

2G/2G 55 0,305 " 23 "0,180 0,018. OR==0,57

При изучении распределения генотипов Z- и S-мутаций гена PI, приводящих к тяжелому дефициту Cti-антитрипсина, в зависимости от клинического течения ХОБЛ достоверных различий между исследуемыми группами обнаружено не было. По результатам отечественных скрининговых исследований (Генофонд и геногеография народонаселения, 2000) частота аллеля Z составляет в среднем 0,1-0,8%, а аллеля S 0,3-1,4%, что хорошо согласуется с результатами, полученными в нашем исследовании. Вместе с тем, в гене PI обнаружено более 120 различных мутаций и полиморфизмов, в том числе так называемые «нулевые» аллели Возможно, в исследованной выборке больных патогенетическое значение имеют именно редкие аллели гена PI, для выявления которых требуется полное секвенирование гена PL

Распределение генотипов полиморфизм G1237A в 3'- нетранслируемой области гена PI, влияющего на функциональные свойства белка, различалось между исследуемыми группами. В целом, в группе больных ХОБЛ наблюдалась тенденция к повышению частоты генотипа GA (12,9% против 7,1%, ^=3,35, р=0,067 для генотипа GA). In vitro, этот полиморфизм ассоциирован с нарушением связывания фактора транскрипции NF-IL6 и пониженной экспрессией гена PI (Morgan К. et al., 1997). Возможно, этот полиморфизм вызывает такое нарушение острофазного ответа и

взаимодействия di-антитрипсина с интерлейкином 6, которое предрасполагает к нейтрофильному механизму воспаления, характерному для ХОБЛ.

Анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфизма Ala-15Thr гена Ctj-антихимотрипсина ААСТ показал отсутствие статистически значимых различий между группой больных ХОБЛ и группой здоровых индивидов.

Интерстициальная коллагеназа специфически гидролизует коллагены I, II и Ш типов - основные компоненты соединительнотканного матрикса. При исследовании инсерциошюго полиморфизма гена ММР1 нами выявлены статистически значимые различия в распределении частот генотипов между группой больных ХОБЛ и здоровыми индивидами 0^=7,26, р=0,02). У больных ХОБЛ по сравнению с группой контроля достоверно выше оказалась частота генотипа 2G/2G (30,6% против 18,0% в контроле, %2=5,61, р=0,018). Показатель отношения шансов, указывающий на риск развития ХОБЛ у индивидов с генотипом 2G/2G составил OR=2,00 (95%CI 1,12-3,63). Вместе с тем, в группе больных ХОБЛ снижена частота гетерозигот G/2G за счет увеличения частоты гомозигот по мутации 2G/2G. Риск формирования ХОБЛ у гетерозигот понижен (OR=0,57; 95%CI 0,35-0,94) (табл. 6).

Инсерция G в положении -1607 в промоторе гена ММР1 создает обязательный участок для фактора транскрипции ETS-1. Показано, что аллель -1607GG ассоциирован с более высоким уровнем генной экспрессии, что способствует интенсивному разрушению матрикса ферментом (Rutter J. et al. 1998). Гиперэкспрессия коллагеназы, вероятно, может оказывать существенное влияние на прогрессирование ХОБЛ. Подтверждением высказанному предположению может послужить исследование Segura-Valdez G. et al. (2000), в котором установлено значительное повышение экспрессии этого фермента в тканях легких, взятых от

больных ХОБЛ, по сравнению с тканями, полученными от здоровых доноров.

***

Таким образом, присутствие определенных генотипов и их комбинаций по полиморфным локусам генов, белковые продукты которых принимают непосредственное участие в патогенетических механизмах формирования ХОБЛ (ферменты биотрансформации ксенобиотиков, протеолиза-антипротеолиза и цитокины) может оказать существенное влияние на предрасположенность к ХОБЛ и тяжесть течения заболевания. Полученные результаты раскрывают некоторые генетические аспекты ХОБЛ и свидетельствуют о целесообразности дальнейшего изучения полиморфизма генов, вовлеченных в патогенез заболевания, с целью выявления генетических маркеров предрасположенности к ХОБЛ. Всесторонний анализ генов-кандидатов и их сочетаний, составляющих «генные сети», позволит

разработать комплекс профилактических мероприятий для конкретного пациента. Тестирование генов биотрансформации ксенобиотков открывает перспективы подбора индивидуальной дозировки лекарств, и тем самым, будет способствовать оптимизации терапии заболевания. Выяснение молекулярных основ патогенетических механизмов формирования ХОБЛ открывает новые направления фундаментальных и клинических исследований этого широко распространенного заболевания.

ВЫВОДЫ

1. Обнаружено достоверное повышение частот генотипов ТС и СС 3 экзона и генотипа AG 4 экзона гена микросомальной эпоксидгидролазы ЕРНХ1 (I фаза биотрансформации кснобиоткиков) у больных ХОБЛ по сравнению с контрольной группой. Генотип ТТ полиморфного локуса С481Т гена ариламин-^ацетилтрансеразы (II фаза биотрансформации кснобиоткиков) ШТ2 существенно реже встречался в группе больных ХОБЛ.

2. У больных ХОБЛ показано достоверное увеличение частоты генотипа GG гена лимфотоксина О! LTЛ и генотипа А2А2 гена рецепторного антагониста ИЛ1 IL1RN по сравнению с группой практически здоровых индивидов.

3. Установлено, что у больных ХОБЛ повышена частота генотипа 2G/2G инерционного полиморфизма гена интерстициальной коллагеназы ММР1.

4. Выявлены генетические маркеры предрасположенности к формированию ХОБЛ по фенотипам ЕРИХ1(Б) и ШТ2 а также сочетаниям генотипов и фенотипов по генам ШТ2 (*4*4 и *4*5), СУР1Л11ЕРИХ1/О8ТР1 ^^/ЛЛ), ЕРИХШМЛТ2 (8^).

5. Показано, что нормальный фенотип ЕРНХ1, генотип GG гена LTЛ и комбинации генотипов по генам ЕРИХ^ЛТ2 (N-R), ТШ^ТЛ (ОЛ-ОО) являются молекулярно-генетическими маркерами тяжелого и крайне тяжелого течения заболевания.

6. Определено увеличение риска развития ХОБЛ у курильщиков с комбинацией генотипов О/^ДО по генам ОЗТМиО8ТТ1/О8ТР1 ^=1 1,96).

7. Установлено, что полиморфные варианты генов цитохрома Р450 СУР1Л1, микросомальной эпоксидгидролазы ЕРНХ1, глутатионтрансфераз М1 и Р1 ОБТМ1, ОБТР1, ариламин-^ацетилтрансферазы ШТ2, рецепторного антагониста ИЛ11Ъ1КЫ, фактора некроза опухожДлимфотоксинааЬТА, интерстициальной коллагеназы ММР1 являются важной составной частью генетической структуры подверженности ХОБЛ.

Практические рекомендации

1. У лиц, относящихся к группам риска развития ХОБЛ (злостных курильщиков, работников

вредных производств) и индивидов, родственники которых страдали ХОБЛ, целесообразно тестирование генов-кандидатов (ЕРНХ1 и NAT2, TNF, LTA и IL1RN и MMPI) для профилактики действия факторов риска (отказ от курения, переход на другую работу).

2. Для выбора своевременных и адекватных методов терапии ХОБЛ, рационально генотипировать маркеры тяжести течения заболевания.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Yanbaeva D., Korytina G., Macarova О., Victorova Т., Khusnutdinova E. Molecular-genetic analysis of polymorphic variants of GSTM1, CYP1A1 gene and CFTR gene mutations in patients with chronic pulmonary disease from Bashkortostan (P0297) // Abstracts of European Human Genetics Conference - Strasburg, 2002. - P. 136-137.

2. Yanbaeva D., Korytina G., Macarova O., Victorova Т., Khusnutdinova E. Molecular-genetic analysis of polymorphic variants of GSTM1, CYP1A1 gene and CFTR gene mutations in

, patients with chronic pulmonary disease from Bashkortostan (P377) // Abstracts of Human Genome Meeting - Shanghai, 2002 - P. 178.

3. Yanbaeva D., Korytina G., Victorova T. Cytochrome P4501A1 (CYP1A1) polymorphism in patients with chronic obstructive pulmonary disease // Abstracts of 78th Annual Scientific Assembly ofthe American College of Chest Physicians - San-Diego, 2002. - P. 105.

4. Япбаева Д.Г., Корытина Г.Ф., Едиханова ФХ, Викторова T.B. Молекулярно-генетический анализ полиморфных вариантов гена TNF-a у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких // Цитокины и воспаление. - 2002. - №2, Т. 1. -С. 54.

5. Yanbaeva D., Korytina G, Edihanova F., Victorova T. Detoxifying enzymes genes (mEPHX, CYP1A1 and GSTP1) genotypes and risk ofchronic obstructive pulmonary disease // Abstracts ofEuropean Human Genetics Conference.-Birmingham, 2003. - P. 370.

6. Викторова. Т.В., Корытина Г.Ф., Янбаева Д.Г. Взаимодействие генетических и внешнесредовых факторов в процессе развития хронических обструктивных болезней легких // Медицинская генетика. - 2003. - №2. - С. 50-59.

7. Викторова Т.В., Корытина Г.Ф., Янбаева Д. Г., Макарова О.В., Якупова Э.В., Хуснутдинова Э.К.. Анализ полиморфизма гена N-ацетилтрансферазы 2 в популяциях Волго-Уральского региона и у больных хроническими обструктивными болезнями легких//Генетика.- 2003.- Т39.№6.- С. 855-857.

8. Макарова О.В., Викторова Т.В., Янбаева Д.Г., Корытина, Г.Ф. Якупова Э.В., Каримова Л.К.. Полиморфизм генов метаболизма ксенобиотиков у рабочих нефтехимических производств // Генетика. - 2003. - Т. 39. №. 9. - С. 1268-1274.

9. Корытина Г.Ф., Янбаева Д. Г., Викторова Т.В. Роль полиморфных вариантов генов цитохромов Р450 (CYP1A1, CYP2E1) и микросомальной эпоксидгидролазы (mEPHX) в патогенезе муковисцидоза и хронических заболеваний дыхательной системы // Молекулярная Биология. - 2003. - Т.37. №5. - С.784-792.

Ю.Викторова Т.В., Корытина Г.Ф., Макарова О.В., Янбаева Д.Г., Якупова Э.В., Шангареева ЗЛ., Хуснугдинова Э.К. Полиморфизм гена N-ацетилтрансферазы 2 у народов Волго-Уральского региона // Молекулярная биология. - 2003. - том 37. № 6. - С. 971-974.

11. Корытина Г.Ф., Янбаева Д. Г., Бабенкова Л. И., Викторова Т.В. Ассоциация полиморфных вариантов в генах биотрансформации ксенобиотиков с тяжестью легочной патологии у больных муковисцидозом // Медицинская генетика. - 2003. - 12. №5. -С.227-232.

12. Yanbaeva D.GM Koritina G.F., Victorova T.V. The gene polymorphism of lymphotoxin A, but not tumor necrosis factor A, is associated with prognosis of COPD // Abstract book of conference for young scientists, PhD students and students on molecular biology and genetics -Kyiv,2003.-P.275.

13. Yanbaeva DG, Korytma GF, and Victorova TV. Detoxifying enzymes genes (EPHX1, CYP1A1 and GSTP1) genotypes and risk of chronic obstructive pulmonary disease // 13* European Respiratory Society Annual Congress, Vienna, 2003: European Respiratory Journal. Book of abstracts. - V22, Supl. 45. - P. 196.

14. Yanbaeva D.G., Kontina G.F., Victorova T.V. Tumor Necrosis Factor Gene Superfamily Polymorphisms (TNF and LTA) are associated with prognosis of COPD // 17th Asia-Pacific Congress on Diseases ofthe Chest Abstract Suppl. ofChest (Turkey Edition). - Istanbul, 2003. - P. 156.

15. Янбаева Д.Г., Корытина Г.Ф., Викторова T.B. Роль полиморфных генов метаболизма ксенобиотиков в патогенезе ХОБЛ // Сборник резюме 13 национального конгресса по болезням органов дыхания - Санкт-Петербург, 2003. - С. 139.

16. Загидуллин Ш.З, Байнак О В., Янбаева Д.Г., Корытина Г.Ф., Викторова Т.В. Полиморфизм генов факторов некроза опухолей при хронической обструктивной болезни легких // Сборник резюме 13 национального конгресса по болезням органов дыхания - Санкт-Петербург, 2003 - С. 327.

17. Викторова Т.В., Корытина Г.Ф., Янбаева Д.Г., Макарова О.В., Якупова Э.В. Полиморфизм гена N-ацетилтрансферазы 2 в популяциях Волго-Уральского региона и у больных хроническими обструкгивными болезнями легких // Материалы конференции «Актуальные проблемы генетики-Москва, 2003-С.52-54

18. Корытина Г.Ф., Янбаева Д. Г., Викторова Т.В. Полиморфизм генов глутатион-S-трансфераз у больных муковисцидозом и хроническими заболеваниями дыхательной системы//Генетика.-2004. №3.-С. 401-408.

19. Янбаева Д.Г., Корытина Г.Ф., Викторова T.B. Аллельные варианты генов суперсемейства TNF как маркеры тяжести течения хронической обструктивной болезни легких и бронхоэктатической болезни // Генетика. - 2004. №4.- С. 545-551.

20.Yanbaeva D.G., Korytina GF., Victorova T.V. Association between matrix metalloproteinase-1 promoter polymorphism 1G/2G and susceptibility to chronic obstructive pulmonary disease (P1 22) //Abstracts of Human Genome Meeting - Berlin, 2004. - P. 76.

ЯНБАЕВА ДИЛЯРА ГУМАРОВНА

АССОЦИАЦИИ ПОЛИМОРФНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНОВ ФЕРМЕНТОВ БИОТРАНСФОРМАЦИИ КСЕНОБИОТИКОВ, ПРОТЕОЛИЗА-АНТИПРОТЕОЛИЗА И ЦИТОКИНОВ С ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНЬЮ ЛЕГКИХ

03.00.15 - генетика Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Лицензия № 0177 от 10.06.96 г. Подписано к печати 19.05.2004 Бумага офсетная. Отпечатано на ризографе. Формат 60x84 '/[6. Усл.-печ. л. 1,5. Уч.-изд. 1,7. Тираж 100 экз. Заказ № 302.

450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3, Башкирский государственный медицинский университет

»M8 46

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Янбаева, Диляра Гумаровна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Общая характеристика и эпидемиология ХОБЛ.

1.2 Иммунно-биохимические маркеры ХОБЛ.

1.3 Патогенез и генетические факторы формирования ХОБЛ.

1.3.1 Гены ферментов биотрансформации ксенобиотиков.

1.3.2 Гены цитокиновой сети.

1.3.3 Гены ферментов протеолиза-антипротеолиза.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Объект исследования.

2.2 Выделение ДНК. ш 2.3 Проведение полимеразной цепной реакции и ПДРФ-анализа.

2.4 Проведение электрофореза и визуализация результатов.

2.5 Статистические методы обработки результатов исследования.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1 Анализ ассоциаций полиморфных ДНК-локусов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков с предрасположенностью к ХОБЛ.

3.1.1 Полиморфизм генов цитохромов Р450 1А1 и 2Е1 у больных ХОБЛ.

3.1.2 Полиморфизм гена микросомалъной эпоксидгидролазы у больных ХОБЛ.

3.1.3 Полиморфизм генов глутатион-Б-трансфераз у больных ХОБЛ.

3.1.4 Полиморфизм гена ариламин-Ы-ацетилтрансферазы 2 у больных ХОБЛ.

3.1.5 Анализ ассоциаций сочетаний генотипов генов ФБК с предрасположенностью к ХОБЛ.

3.2 Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов цитокинов с предрасположенностью к ХОБЛ.

3.2.1 Полиморфизм генов фактора некроза опухоли а и лимфотоксина а у больных ХОБЛ.

3.2.2 Полиморфизм генов семейства интерлейкина 1 у больных ХОБЛ.

3.2.3 Полиморфизм гена интерлейкина 6 у больных ХОБЛ.

3.2.4 Полиморфизм гена интерлейкина 10 у больных ХОБЛ.

3.3 Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов ферментов протеолиза-антипротеолиза с предрасположенностью к ХОБЛ.

3.3.1 Полиморфизм гена а ¡-антитрипсина у больных ХОБЛ.

3.3.2 Полиморфизм гена щ-антихимотрипсина у больных ХОБЛ.

3.3.3 Полиморфизм гена интерстициальной коллагеназы у больных ХОБЛ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Ассоциации полиморфных вариантов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков, протеолиза-антипротеолиза и цитокинов с хронической обструктивной болезнью легких"

Актуальность проблемы

Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) - заболевание дыхательной системы, характеризующееся ограничением скорости воздушного потока, которое необратимо или не полностью обратимо. (Pauwels R. et al., 2001). Основными клиническими признаками заболевания являются симптомы хронического кашля, отделение мокроты, экспираторная одышка. Заболевание сопровождается прогрессирующим нарушением вентиляции и газообмена легких по обструктивному типу с формированием эмфиземы, легочной гипертензии и хронического легочного сердца (Чучалин А., 1999, GOLD Workshop Report, 2003). Эпидемиологические исследования показывают, что 4-10% взрослого населения страдают от ХОБЛ (European Lung White Book, 2003, World Health Report, 2000). В России количество людей с признаками заболевания составляет около 11 миллионов человек (Хронические обструктивные болезни легких. Федеральная программа, 1999).

ХОБЛ является классическим примером многофакторного заболевания, в развитии которого важную роль играют как внешнесредовые (курение, экспозиция профессиональных и бытовых поллютантов), так и генетические факторы. Традиционно главным фактором риска формирования ХОБЛ считается курение. Однако, ХОБЛ развивается только у 15-20% курильщиков (Fletcher С., Peto R., 1977, Beck G., Doyle С., Schachter E., 1981, Sandford A., Silverman E., 2002). Многочисленные генетико-эпидемиологические исследования установили важную роль наследственности в детерминации показателей функции внешнего дыхания и накоплении случаев ХОБЛ в семьях (Tager I. et al., 1978). У монозиготных близнецов конкордантность функции внешнего дыхания составляет 72%. Кроме того, обнаружено преобладание случаев ХОБЛ в группе родственников пробандов, страдающих ХОБЛ, по сравнению с группой родственников контрольных лиц и снижение степени корреляции показателей функциональных исследований легких с увеличением генетической дистанции (Higgins М, Keller J., 1975, Speizer F., Rosner В., Tager I., 1976, Kueppers F. et al., 1977, Redline S. et al., 1989, Silverman E. et al., 1996).

Для выяснения роли конкретных генов, задействованных в развитии ХОБЛ, в современной генетике многофакторных заболеваний широко используется метод, основанный на исследовании ассоциации полиморфных вариантов генов, продукты которых потенциально задействованы в развитии и регуляции тех или иных звеньев патогенеза заболевания (Silverman Е., Palmer L., 2000, Lomas D., Silverman E., 2001, Hall I., 2002). ХОБЛ характеризуется хроническим персистирующим воспалением всех отделов дыхательных путей, паренхимы и сосудов легких. Под влиянием различных факторов риска (курение, атмосферные и бытовые поллютанты) активируются и участвуют в воспалительной реакции практически все клеточные элементы респираторной системы (нейтрофилы, макрофаги, фибробласты, Т-лимфоциты и др.). Активированные клетки выделяют большие количества активных форм кислорода (АФК), что приводит к сдигу равновесия в системе оксиданты-антиоксиданты; АФК инактивируют ингибиторы протеаз, что, влечет за собой нарушение баланса между процессами протеолиза и антипртеолиза в легких. Повышенная активность протеазного пула (эластазы нейтрофилов, металлопротеиназ) способствует деградации белков экстрацеллюлярной мембраны, что вызывает разрушение легочной ткани и формирование эмфиземы (Чучалин А., 1999, Chung К., 2001, GOLD Workshop Report, 2003). Нейтрофилы наряду с выделением ряда провоспалительных медиаторов (фактор некроза опухоли, интерлейкин-8, лейкотриен В4 и др.), секретируют целый спектр протеолитических ферментов (эластаза, катепсины, металлопротеиназы). В комплексе все эти процессы приводят к нарушению мукоцилиарного клиренса, бактериальной колонизации дыхательных путей, хронической гиперсекреции слизи, отделению мокроты, хроническому воспалению и развитию эмфиземы легких.

Персистенция воспаления и снижение ФВД в результате обструкции дыхательных путей является гипертрофией нормального протективного воспалительного ответа на воздействие патогенных частиц, которая может быть следствием генетических дефектов ферментов детоксикации, эндогенных противовоспалительных и антипротеазных механизмов (Barnes Р., 2000, GOLD Workshop Report, 2003). Поэтому, для анализа генетических ассоциаций, исходя из звеньев патогенеза, нами были выбраны гены, белковые продукты которых относятся к системам ферментов биотрансформации ксенобиотиков, антипротеолиза-протеолиза и цитокиновой сети.

Ранее показано, что генетические факторы риска ХОБЛ представляют собой совокупность нескольких генов, каждый из которых вносит незначительный вклад в развитие симптомов заболевания (Devor Е., Crawford М, 1984, Silverman Е. et al., 1996, Joos L., Pare P., Sanford A., 2002).

Поскольку в патологическом повреждении легочной ткани, развитии хронического воспаления и обструкции дыхательных путей участвуют разнообразные медиаторы и ферменты, программа молекулярно-генетических исследований природы ХОБЛ является наиболее полной и всесторонней, когда в анализ включается множество генов, эффект которых во многом определяется- внешнесредовыми факторами, в том числе курением.

Цель исследования:

Оценка роли полиморфных вариантов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков, протеолиза-антипротеолиза и цитокиновой сети в формирование наследственной предрасположенности к ХОБЛ.

Задачи:

1. Изучить распределение частот аллелей и генотипов полиморфных локусов системы ферментов биотрансформации ксенобиотиков (<CYP1A1, CYP2EI, ЕРНХ, GSTM1, GSTT1, GSTP1, NAT2) у больных ХОБЛ и у практически здоровых индивидов.

2. Определить частоты аллелей и генотипов полиморфных локусов цитокиновой сети (TNF, LTA, IL1, IL1RN, IL6, ILIO) у больных ХОБЛ и у практически здоровых индивидов.

3. Провести анализ полиморфизма генов ферментов протеолиза-антипротеолиза (PI, ААСТ, ММР1) у больных ХОБЛ и у практически здоровых индивидов.

4. Исследовать ассоциации полиморфных вариантов генов-кандидатов и их сочетаний с предрасположенностью к ХОБЛ, клиническими стадиями заболевания, а также со статусом курения больного.

5. Охарактеризовать патогенетическую значимость полиморфных вариантов генов-кандидатов в развитии ХОБЛ.

Научная новизна

Впервые у больных ХОБЛ изучена взаимосвязь сочетаний генотипов полиморфных локусов генов, кодирующих ферменты биотрансформации ксенобиотиков, протеолиза-антипротеолиза и цитокинов, с предрасположенностью к ХОБЛ, тяжестью клинического течения и со статусом курения. Впервые оценена роль полиморфизмов G590A, С481Т и G857A гена NAT2, С3539Т гена IL1B, G-174C гена IL6 и С-627А гена ILIO в развитии предрасположенности к ХОБЛ.

Практическая значимость

На основании полученных результатов показана целесообразность определения полиморфных вариантов генов ЕРНХ1 и NAT2, TNF, LTA, IL1RN и MMPI с целью профилактики развития ХОБЛ в группах риска (злостные курильщики, рабочие вредных производств и др.) и прогнозирования вариантов клинического течения ХОБЛ на ранних стадиях заболевания.

Материалы работы могут быть использованы в учебном процессе на биологических и медицинских факультетах ВУЗов, а также на курсах последипломного образования врачей.

Положения, выносимые на защиту:

1. Выборка больныу ХОБЛ статистически достоверно отличается по распределению частот генотипов генов ЕРНХ1 и NAT2, LTA и IL1RN и ММР1 от контрольной группы практически здоровых индивидов.

2. Полиморфные варианты генов ЕРНХ1, IL1RN, LTA, ММР1, а также сочетания генотипов по генам NAT2, CYP1A1/EPHX1/GSTP1 и EPHX1/NAT2 являются генетическими маркерами предрасположенности к ХОБЛ.

3. Аллельные варианты генов ЕРНХ1, LTA и комбинации генотипов по генам EPHX/NAT2 и TNF/LTA вносят вклад в развитие тяжелой и крайне тяжелой стадий ХОБЛ.

4. Только у курящих больных ХОБЛ выявлена комбинация генотипов глутатион-Э-трансфераз, характеризующаяся отсутствием фермента GSTM1, нормальной активностью GSTT1 и пониженной активностью GSTP1 (делеция гена GSTMJ, нормальный генотип GSTTJ, гетерозиготный генотип GSTP1).

5. Установлено, что полиморфные варианты генов CYP1A1, ЕРНХ1, GSTM1, GSTP1, NAT2, IL1RN, TNF, LTA, ММР1 являются важной составной частью генетической структуры подверженности к ХОБЛ.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Янбаева, Диляра Гумаровна

ВЫВОДЫ f

1. Обнаружено статистически достоверное повышение частот генотипов ТС и СС 3 экзона и генотипа AG 4 экзона гена микросомальной эпоксидгидролазы (I фаза биотрансформации ксенобиотиков) ЕРНХ1 у больных ХОБЛ по сравнению с контрольной группой. Генотип TT полиморфного локуса С481Т гена ариламин-М-ацетилтрансферазы (II фаза биотрансформации кснобиотиков) NAT2 существенно реже встречался в группе больных ХОБЛ.

2. У больных ХОБЛ показано достоверное увеличение частоты генотипа GG гена лимфотокоина a LT А и генотипа А2А2 гена рецепторного антагониста ИЛ1 IL1RN по сравнению с группой практически здоровых индивидов.

3. Установлено, что у больных ХОБЛ увеличена частота генотипа 2G/2G инерционного полиморфизма гена интерстициальной коллагеназы ММР1.

4. Выявлены генетические маркеры предрасположенности к формированию ХОБЛ по фенотипам EPHX1(S) и NAT2 (R), а также сочетаниям генотипов и фенотипов по генам NAT2 (*4*4 и *4*5), CYP1A 1/EPHX1/GST°1 (AG/F/AA), EPHXln NAT2 (S-R).

5. Показано, что нормальный фенотип ЕРНХ1, генотип GG гена LT А и комбинации генотипов по генам EPHX/NAT2 (N-R), TNF/LTA (GA-GG) являются молекулярно-генетическими маркерами тяжелого и крайне тяжелого течения заболевания.

6. Определено увеличение риска развития ХОБЛ у курильщиков с комбинацией генотипов 0/N/AG по генам GSTM1/ GSTT1/GSTP1 (OR= 11,96).

7. Установлено, что полиморфные варианты генов цитохрома Р450 CYP1A1, микросомальной эпоксидгидролазы ЕРНХ1, глутатионтрансфераз М1 и PI GSTM1, GSTP1, ариламин-Nацетилтрансеразы NAT2, рецепторного антагониста ИЛ1 IL1RN, фактора некроза опухоли a TNF, лимфотоксина a LTA, интерстициальной коллагеназы ММР1 являются важной составной i

частью генетической структуры подверженности ХОБЛ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. У лиц, относящихся к группам риска развития ХОБЛ (злостных курильщиков, работников вредных производств) и индивидов, родственники которых страдали ХОБЛ, целесообразно тестирование генов-кандидатов (ЕРНХ1 и NAT2, TNF, LTA и IL1RN и ММР1) для профилактики действия факторов риска (отказ от курения, переход на другую работу).

2. Для выбора своевременных и адекватных методов терапии ХОБЛ, рационально генотипировать маркеры тяжести течения заболевания.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Янбаева, Диляра Гумаровна, Уфа

1. Баранов B.C., Баранова Е.В., Иващенко Т.Э., Асеев М.В. Геном человека и гены «предрасположенности» (Введение в предиктивную медицину). СПб.: Интермедика. 2000. - 272 с.

2. Вавилин В.А., иасовникова О.Б., Ляхович В.В., Гавалов С.М., Рябова O.A. Генетический полиморфизм глутатион-8-трансферазы Ml и Т1 у детей, больных бронхиальной астмой // Вопросы медицинской химии. 2000. - Т.46. - С. 388-397.

3. Викторова Т.В., Корытина Г.Ф., Макарова О.В., Янбаева Д.Г., Якупова Э.В., Шангареева З.А., Хуснутдинова Э.К. Полиморфизм гена N-ацетилтрансферазы 2 у народов Волго-Уральского региона // Молекулярная биология. 2003. - Т. 37. - С. 971-974.

4. Генофонд и геногеография народонаселения // Под ред. Ю.Г. Рычкова: Т.1 Гег.офонд населения России и сопредельных стран. 2000. СПб.: Наука. - 611 с.

5. Гинтер Е.К. Популяционная генетика и медицина // Вестник РАМН. 2001. -№ 10.-С. 25-31.

6. Животовский Л.А. Популяционная биометрия. — М.: Наука. — 1991. — 272 с.

7. Калинина Е.П., Исаченко Е.В., Цывкина Г.И. Цитокиновый дисбаланс у больных хроническим обструктивным бронхитом // Клиническая медицина. №7. - 2003.

8. Кузьмина Л.П. Гонетико-биохимические исследования в медицине труда // Вестник РАМН. 2001. - С. 89-91.

9. Мхеидзе М.О., Ивчик Т.В., Кокосов А.Н., Фридлянд А.К. Генетические маркеры и хронические болезни органов дыхания // Пульмонология. 1994. - Т.4. - С. 42-46.

10. Ю.Опредление генетической предрасположенности к некоторым мультфакториальным заболеваниям. Генетический паспорт. Методические рекомендации // Под ред. B.C. Баранова и В.Х. Хавинсона. СПб.: ИКФ «Фолиант». - 2001. - 48 с.

11. Пузырев В.П. Генетика мультифакториальных заболеваний: между прошлым и будущим // Медицинская генетика. Т. 2. - №12. - 2003. - С. 498-508.

12. Райс Р.Х., Гуляева Л.Ф. Биологические эффекты токсических соединений: курс лекций. Новосибирск. 2003. - 203с.

13. Н.Ройт А., Брюстофф Дж., Мейл Д. Иммунология. М.: Мир. 2000. -592 с.

14. Саблирова Ж.Х.,' Харина Е.А. Быстрый тип ацетилирования — возможный маркер предрасположенности к заболеваниям органов мочевой системы // Нефрология и диализ. Т. 1. - № 1. - 1999.

15. Самильчук Е.И., Гаспарян A.B., Лактионов К.К.,Чучалин А.Г. Taq I-полиморфизм в 3'-фланкирующей области гена Pi при хронической патологии органов дыхания и раке легкого // Пульмонология. №4. -С. 17-21.- 1996.

16. Сибиряк C.B., Вахитов В.А., Курчатова H.H. Цитохром Р450 и иммунная система: факты, гипотезы, перспективы. — Уфа: Гилем. -2003.-211 с.

17. Симбирцев A.C. Цитокины — новая система регуляции защитных реакций организма // Цитокины и воспаление. №1. — 2002.

18. Соколов Е.И., Маев И.В., Бусарова Г.А. Эмфизема легких. М.:ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ. - 2000. - 432 с.

19. Хронические обструктивные болезни легких. Федеральная программа // Под ред. А.Г. Чучалина. М. - 1999. - 40 с.

20. Чекмазов И.А. Этиология и патогенез спаек брюшной полости // Consilium medicum. Т.4. - 2002.

21. Чучалин А.Г. Пульмонология в России и пути ее развития // Пульмонология. Т.8. -1998. - С. 6-22.

22. Чучалин А.Г. Хронические обструктивные болезни легких. М.: БИНОМ.-1999.-512 с.

23. Яковлева О.А., Косован А.И., Царук В.В. Прогностические фармакогенетические аспекты индивидуальной лекарственной переносимости — нерешенные проблемы и перспективы // Украинский химиотерапевтический журнал. №1. - 2000. - С.63-70.

24. Abraham L., French М., Dawkins R. Polymorphic МНС ancestral haplotypes affect the activity of tumour necrosis factor-a // Clin. Exp. Immunol. 1993. - V. 92. - P. 14-18.

25. Adamkiewicz G., Ebelt S., Syring M., Slater J., Speizer F., Schwartz J., Suh H., Gold D. Association between air pollution exposure and exhaled nitric oxide in an elderly population // Thorax. 2004. - V. 59(3). P. 204-209.

26. Ambudkar S., Kimchi-Sarfaty C., Sauna Z., Gottesman M. P-glycoprotein: from genomics to mechanism // Oncogene. — 2003. — V. 22(47). P. 7468-7485.

27. Attfield M., Hodus T. Pulmonary function of US coalminers related to dust exposure estimates // Am. Rev. Respir. Dis. 1992. V. 145. P. 605609.

28. Autrup H. Genetic polymorphisms in human xenobiotica metabolizing enzymes as susceptibility factors in toxic response // Mutat. Res. — 2000. V. 464(1). P. 65-76.

29. Barnes P.J. Chronic obstructive pulmonary disease // N. Engl. J. Med. -2000. V. 343(4). - P. 269-80.

30. Barnes P.J. Genetics and pulmonary medicine. 9. Molecular genetics of chronic obstructive pulmonary disease // Thorax. 1999. - V. 54(3). P. 245-252.

31. Barnes P.J. Mechanisms in COPD: differences from asthma // Chest. -2000. V. 117 (2 Suppl). - 10S-14S.

32. Barnes P.J., Shapiro S.D., Pauwels R.A. Chronic obstructive pulmonary disease: molecular and cellular mechanisms // Eur. Respir. J. 2003. 22(4).-P. 672-688.

33. Bartsch H., Nair U., Risch A. et al. Genetic polymorphism of CYP genes, alone or in combination, as a risk modifier of tobacco-related cancers // Cancer Epidemiol, Biomarkers Prev. 2000. - V. 9(1). - P. 3-28.

34. Bascom R. Differential susceptibility to tobacco smoke: possible mechanisms // Pharmacogenetics. 1991. - V. 1. - P. 102-106.

35. Bazzoni F., Beutler B. The Tumor Necrosis Factor Ligand and Receptor Families //N. Engl. J. Med. 1996. - V. 334. - P. 1717-1725.

36. Beck G.J., Doyle C.A., Schachter E.N. Smoking and lung function // Am. Rev. Respir. Dis. 1981. -V. 123(2). - P. 149-155.

37. Becklake M.R. Occupational exposures: evidence for a causal association with chronic obstructive pulmonary disease // Am. Rev. Respir. Dis. 1989.-V. 140. S85-S91.

38. Behera D., Jindal S.K. Respiratory symptoms in Indian women using domestic cooking fuels // Chest. 1991. - V. 100. - P. 385-388. u 42.Blanco I., Fernandez E., Bustillo E.F. Alpha-1-antitrypsin PI phenotypes

39. S and Z in Europe«1 an analysis of the published surveys // Clin. Genet. -2001.-V. 60(1).-P. 31-41.

40. Brantly M.L, Wittes J.T., Vogelmeier C.F., Hubbard R.C., Fells G.A., Crystal R.G. Use of a highly purified a 1-antitrypsin standard to establish ranges for the common normal and deficient a 1-antitrypsin phenotypes // Chest.-1991.-V. 100.-P. 703-708.

41. Brinkman B.M., Zuijdees D., Kaijzel E.L. et al. Relevance of the tumor necrosis factor alpha (TNF alpha) -308 promoter polymorphism in TNF alpha gene regulation // J. Inflamm. 1995. - V. 46. - P. 32-41.

42. Bucchioni E., Kh.'j-itonov S.A., Allegra L., Barnes P.J. High levels of interleukin-6 in the exhaled breath condensate of patients with COPD // Respir. Med. 2003. - V. 97(12). P. 1299-1302.

43. Budhi A., Hiyama K., Isobe T., Oshima Y., Hara H., Maeda H., Kohno N. Genetic susceptibility for emphysematous changes of the lung in Japanese // Int. J. Mol. Med. 2003. -V. 11(3). P. 321-329.

44. Cajas-Salazar N., Au W.W., Zwischenberger J.B., Sierra-Torres C.H., Salama S.A., Alpard S.K., Tyring S.K. Effect of epoxide hydrolasef polymorphisms on chromosome aberrations and risk for lung cancer //

45. Cancer Genet. Cytogenet. 2003. - V. 145(2). - P. 97-102.

46. Cantlay A.M., Lamb D., Gillooly M., Norrman J., Morrison D., Smith

47. C.A. et al. Association between the CYP1A1 gene polymorphism and susceptibility to emphysema and lung cancer. — J. Clin. Pathol. Mol. Pathol. - 1995. - V. 48. - P. 210-214.

48. Cantlay A.M., Smith C.A., Wallace W.A., Yap P.L., Lamb D., Harrison

49. D.J. Heterogeneous expression and polymorphic genotype of glutathione i S-transferases in human lung // Thorax. 1994. - V. 49(10). - P. 10101014.

50. Capelli A., Di Stefano A., Gnemmi I., Balbo P., Cerutti C.G., Balbi B., et al. Increased MCP-1 and MlP-lbeta in bronchoalveolar lavage fluid of chronic bronchitics // Eur. Respir. J. 1999. - V. 14. P. 160-165.

51. Cascorbi I., Brockmoller J., Mrozikiewicz P.M., Bauer S.,1.ddenkemper R., Roots I. Homozygous rapid arylamine Nracetyltransferase (NAT2) genotype as a susceptibility factor for lung cancer//Cancer Res. 1996.-V. 56(17).-P. 3961-3966.

52. Chalmers G.W., Macleod K.J., Sriram S., Thomson L.J., McSharry C., Stack B.H., et al. Sputum endothelin-1 is increased in cystic fibrosis and chronic obstructive pulmonary disease // Eur. Respir. J. 1999. — V. 13. P. 1288-1292.

53. Chen J.C., Mannino M.D. Worldwide epidemiology of chronic obstructive pulmonary disease // Current Opinion in Pulmonary Medicine // 1999. V. 5.-P. 93-99.

54. Churg A., Hobson J., Wright J. Functional and morphologic comparison of silica and elastase-induced airflow obstruction. Exp. Lung Res. "-1989.-V. 15. - P. 813-822.

55. Coggon D., Taylor A.N. Coal mining and chronic obstructive pulmonary disease: a review of the evidence // Thorax. 1998. V. 53. - P. 398-407.

56. Cosma G., Crofts F., Taioli E., Toniolo P., Garte S. Relationship between genotype and function of the human CYP1A1 gene // J. Toxicol. Environ. Health. 1993. - V. 40. - P. 309-316.

57. Coultas D.B., Mapel D.W. Undiagnosed airflow obstruction: prevalence and implications // Curr. Opin. Pulm. Med. 2003. V. 9. - P. 96-103.

58. Day C., Grove J., Daly A. et al. Tumour necrosis factor-alpha gene promoter polymorphism and decreased insulin resistance // Diabetologia. 1998.-V. 41.-P. 430-434.

59. Dayal H.H., Khuder S., Sharrar R., Trieff N. Passive smoking in obstructive respiratory disease in an industrialized urban population. Environ. Res. 1994.-V. 65. P. 161-171.

60. De Boer W.I. Cytokines and therapy in COPD: a promising combination? // Chest. 2002. - V. 121(5 Suppl). -P. 209S-218S.

61. DeMeo D.L., Silverman E.K. Alpha 1-antitrypsin deficiency. 2: genetic aspects of alpha (l)-antitrypsin deficiency: phenotypes and genetic modifiers of emphysema risk // Thorax. 2004. - V. 59. - P. 259-264.

62. Devor E.J., Crawford M.H. Family resemblance for normal pulmonary function //Ann. Hum. Biol. 1984. - V. 11. - P. 439-448.

63. Di Giovine F.S., Takhsh E., Blakemore A.I. et al. Single base polymorphism at -511 in the human interleukin-lP gene (ILlP) // Hum Mol. Genet. 1992. - V. 1. - P. 450.

64. Dinarello C.A., Wolff S.M. The role of interleukin-1 in disease // N. Engl. J. Med. 1993. - V. 328. - P. 106-113.

65. Dossman J., Cotton D., Graham B. Sensitivity and specificity of early diagnostic of lung function in smokers // Chest. 1981. - V. 79. — P. 6— 11.

66. E1-Zein R, Zwischenberger J.B., Wood T.G., Abdel-Rahman S.Z., Brekelbaum C., Au W.W. Combined genetic polymorphism and risk for development of lung cancer // Mutat. Res. 1997 - V. 381. - P. 189-200.

67. Eskdale J., Gallagher G., Verweij C.L., Keijsers V., Westendorp R. G. J., Huizinga T. W. J. Interleukin 10 secretion in relation to human IL-10 locus haplotypes // Proc. Nat. Acad. Sci. 1998. - V. 95. - P. 9465-9470.

68. European Lung White Book // Under R. Loddenkemper reduction. -2003.

69. Faber J.P., Poller W., Olek K., Baumann U., Carlson J. et al. The molecular basis of alpha 1- antichymotrypsin defciency in a heterozygote with liver and lung disease//J. Hepatol. 1993. -V. 18. P. 313-321.

70. Feng D., Ishibashi H., Yamamoto S., Hosoi T., Orimo H., Machida T., Koshihara Y. Association between bone loss and promoterpolymorphism in the IL-6 gene in elderly Japanese women with hip fracture // Bone Miner. Metab. 2003. -V. 21. - P. 225-228.

71. Ferrarotti I., Zorzetto M., Beccaria M. et al. Tumour necrosis factor family genes in a phenotype of COPD associated with emphysema // Eur. Respir. J. 2003. - V. 21(3). - P. 444-449.

72. Gabay C., Kushner I. Acute-phase proteins and other systemic responses to inflammation // N. Engl. J. Med. 1999. - V. 340. - P. 448-454.

73. Goetz F.W., Planas J.V., MacKenzie S. Tumor necrosis factors // Dev. Comp. Immunol. 2004. -V. 28. - P. 487-497.

74. GOLD Workshop Report: Global Strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive pulmonary disease. Updated 2003. Available from: URL: www.goldcopd.com.

75. Grove J., Daly A. K., Bassendine M. F., Gilvarry E., Day C. P. Interleukin 10 promoter region polymorphisms and susceptibility to advanced alcoholic liver disease // Gut. 2000. - V. 46. - P. 540-545.

76. Hall I. Candidate gene studies in respiratory disease: avoiding the pitfalls // Thorax. 2002. - V. 57(5). P. 377-378.

77. Hall I. P. Pharmacogenetics, pharmacogenomics and airway disease // Respir. Res. 2002. - V. 3. - P. 10.

78. Halpin D. M. Chronic Obstructive Pulmonary Disease. Mosby, London. -2001.-136 p.

79. Hankins D., Drag- C., Zamel N., Kronenberg R. Pulmonary function in identical twins raised apart // Am. Rev. Respir. Dis. 1982. -V. 125. - P. 119- 121.

80. Harrison D.J., Cantlay A.M., Rae F., Lamb D., Smith C.A. Frequency of glutathione S-transferase Ml deletion in smokers with emphysema and lung cancer// Hun. Exp. Toxicol. 1997. V. 16. - P. 356-60.

81. Hassett C., Aicher L., Sidhu J.S., Omiecinski C.J. Human microsomal epoxide hydrolase: genetic polymorphism and functional expression in vitro of amino acid variants // Hum. Mol. Genet. 1994. — V. 3(3). - P. 421-428.

82. Hatagima A. Genetic polymorphisms and metabolism of endocrine disruptors in cancer susceptibility // Cad. Saude Publica. 2002. -V. 18(2). P. 357-77.

83. Hayashi S., Watanabe J., Kawajiri K. Genetic polymorphisms in the 5'-flanking region change transcriptional regulation of the human cytochrome P450IIE1 gene // J. Biochem. (Tokyo). 1991. V. 110. -P. 559-655.

84. Hayashi S.I., Watanabe J., Nakachi K., Kawajiri K. PCR detection of an A/G polymorphism within exon 7 of the CYP1 Al gene // Nucleic Acids Res. 1991.-V. 19. P. 4797.

85. He J.Q., Ruan J., Connett J.E., Anthonisen N.R., Pare P.D., Sandford A J. Antioxidant gene polymorphisms and susceptibility to a rapid decline in lung function in smokers // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2002. - V. 166. P. 323-328.

86. Hein D.W., Doll M.A., Fretland A.J. et al. Molecular genetics and epidemiology of the NAT1 and NAT2 acetylation polymorphisms // Cancer Epidemiol. Biomark. Prev. 2000. -V. 9. - P. 29-42.

87. Higgenbottam T., Shipley M., Clark T. Lung function and symptoms of cigarette smokers related to tar yield and number of cigarettes smoked // Lancet.-1980.-V. l.-P. 409-412.

88. Higgins M., Keller J. Familial occurrence of chronic respiratory disease and familial resemblance in ventilatory capacity // J. Chron. Dis. — 1975. V. 28.-P. 239-251.

89. Higham M.A., Pride N.B., Alikhan et al. Tumor necrosis factor-a gene promoter polymorphism in chronic obstructive pulmonary disease // Eur. Respir. J. 2000. - V. 15. - P. 281-284.

90. Hnizdo E., Baskind E., Sluis-Cremer G.K. Combined effect of silica dust exposure and tobacco smoking on the prevalence of respiratory impairments among gold miners // Scand. J. Work Environ. Health. -1990. -V. 16. P. 411^122.

91. Hogg J.C., Senior R.M. Chronic obstructive pulmonary disease part 2: pathology and biochemistry of emphysema // Thorax. - 2002. —V. 57. -P. 830-834.

92. Hoidal J.R. Genetics of COPD: present and future // Eur. Respir. J. -2001.-V. 18.-P. 741-743.

93. Home S.L., Cockroft D.W., Lovegrove A., et al. ABO, Lewis and secretor status and relative incidence of airflow obstruction // Dis. Markers. 1985. V. 3. P. 55-62.

94. Hoshi H., Ohno I., Honma M., Tanno Y., Yamauchi K., Tamura G., et al. IL-5, IL-8 and GM-CSF immunostaining of sputum cells in bronchial asthma and chronic bronchitis // Clin. Exp. Allergy. 1995. V. 25. P. 720-728.

95. Hozumi A., NishimuraY. Nishiuma T., Kotani Y., Yokoyama M. Induction of MMP-9 in normal human bronchial epithelial cells by TNFvia NF-kB-mediated pathway // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2001. - V. 281. - P. L1444-L1452.

96. Huang S.L., Su C.H., Chang S.C. Tumor necrosis factor-a gene polymorphism in chronic bronchitis // Am. J. Respir. Crit. Care Med. -1997.- V. 156.- P. 1436-1439.

97. Hubert H.B., pabsitz R.R., Feinleib M., Gwinn C. Genetic and environmental influences on pulmonary function in adult twins //Am. Rev. Respir. Dis. 1982. V. 125. P. 409-415.

98. Hull J., Ackerman H., Isles K., Usen S., Pinder M., Thomson A., Kwiatkowski D. Unusual haplotypic structure of IL8, a susceptibility locus for a common respiratory virus // Am. J. Hum. Genet. 2001. V. 69.-P. 413-419.

99. Hull J., Thomson A., Kwiatkowski D. Association of respiratory syncytial virus bronchiolitis with the interleukin 8 gene region in UK families // Thorax. 2000. - V. 55. - P. 1023-1027.

100. Hurme M., Santtila S. IL-1 receptor antagonist (IL-1RA) plasma levels are co-ordinately regulated by both IL-1RA and IL-lP genes // Eur. J. Immunol. 1998. - V. 28. - P. 2598-2602.

101. Imai K., Dalai S.S., Chen E.S., Downey R., Schulman L.L., Ginsburg M., D'Armiento J. Human collagenase (matrix metalloproteinase-1) expression in the lungs of patients with emphysema // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2001. - V. 163. - P. 786-791.

102. Ishihara K., Hirano T. IL-6 in autoimmune disease and chronic inflammatory proliferative disease // Cytokine Growth. Factor Rev. -2002.-V. 13.-P. 357-368.

103. Ishii T., Fujishiro M., Masuda M., Nakajima J., Teramoto S,. Ouchi Y., Matsuse T. Depletion of glutathione S-transferase PI induces apoptosis in human lung fibroblasts // Exp. Lung Res. — 2003. V. 29. -P. 523-536.

104. Ishii T., Matsuse T., Igarashi H., Masuda M., Teramoto S., Ouchi Y. Tobacco smoke reduces viability in human lung fibroblasts: protective effect of glutathione S-transferase PI // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. -2001. V. 280. - P. LI 189-95.

105. Ishii T., Matsuse T., Teramoto S., Matsui H., Hosoi T., Fukuchi Y., Ouchi Y. Association between alpha- 1-antichymotrypsin polymorphism and susceptibility to chronic obstructive pulmonary disease // Eur. J. Clin. Invest. 2000. - V. 30. - P. 543-548.

106. Ishii T., Matsuse T., Teramoto S., Matsui H., Miyao M., Hosoi T., Takahashi H., Fukuchi Y., Ouchi Y. Glutathione S-transferase PI (GSTP1) polymorphism in patients with chronic obstructive pulmonary disease // Thorax. 1999. - V. 54. - P. 693-696.

107. Ito I., Nagai S., Hoshino Y., Muro S., Hirai T., Tsukino M., Mishima M. Risk and severity of COPD is associated with the group-specific component of serum globulin IF allele // Chest. 2004. - V. 125.- P. 63-70.

108. Joos L., He J.Q., Shepherdson M.B., Connett J.E., Anthonisen N.R., Pare P.D., Sandford A.J. The role of matrix metalloproteinase polymorphisms in the rate of decline in lung function // Hum. Mol. Genet. 2002. - V. 11. - P. 569-576.

109. Joos L., Mclntyre L., Ruan J., Connett J.E., Anthonisen N.R., Weir T.D., Pare P.D., Sandford A.J. Association of IL-lbeta and IL-1 receptor antagonist haplotypes with rate of decline in lung function in smokers // Thorax. 2001. - V. 56. - P.863-866.

110. Joos L., Pare P., Sanford A. Genetic risk factors for chronic obstructive pulmonary disease // SWISS MED. WKLY. 2002. - V. 132.- P. 27-37.

111. Kalsheker N.A., Watkins G.L., Hill S., Morgan K., Stockley R.A,. Fick R.B. 1990. Independent mutations in the flanking sequence of the a 1-antitrypsin gene are associated with chronic obstructive airways disease//Dis. Markers. V. 8.-P. 151-157.

112. Karjalainen J., Hulkkonen J., Hurme M. IL-1 haplotypes and lungfunction decline // Thorax. 2002. - V. 57. - P. 561-562.

113. Kasuga I., Paré P., Rúan J., Connett J., Anthonisen N., Sandford A. Lack of association of group specific component haplotypes with lung function in smokers // Thorax. 2003 - V. 58. - P. 790-793.

114. Kauffmann F., Kleisbauer J.P., Cambon-De-Mouzon A., et al. Genetic markers in chronic airflow limitation. A genetic epidemiologic study // Am. Rev. Respir. Dis. 1983. - V.127. - P. 263-269.

115. Kauffmann F., Tager I.B., Muñoz A., Speizer F.E. Familial factors related to lung function in children aged 6-10 years // Am. J. Epidemiol. 1989.-V. 129.-P. 1289- 1299.

116. Keatings V.M., Cave S.J., Henry M.J. et al. A polymorphism in the tumor necrosis factor-alpha gene promoter region may predispose to a poor prognosis in COPD // Chest. 2000. - V. 118. - P. 971-975.

117. Kleeberger S.R. Genetic aspects of susceptibility to air pollution // Eur. Respir. J. 2003 - V. 21: Suppl. 40. - P. 52s-56s.

118. Kü9ükaycan M., Van Krugten M., Pennings H-J. et al. Tumor Necrosis Factor-a +489G/A gene polymorphism is associated with chronic obstructive pulmonary disease // Respir. Res.- 2002. V. 3. - P. 29.

119. Kueppers F., Miller R.D., Gordon H., Hepper N.G., Offord K. Familial prevalence of chronic obstructive pulmonary disease in a matched pair study // Am. J. Med. 1977. -V. 63. P. 336- 342.

120. Landi M.T., Bertazzi P.A., Shields P.G., Clark G., Lucier G.W., Garte S.J., Cosma G., Caporaso N.E. Association between CYP1A1 genotype, mRNA expression and enzymatic activity in humans // Pharmacogenetics. 1994. V. 4. - P. 242-246.

121. Lange P., Groth S., Nyobe J. Effect of smoking and changes in smoking habits on the decline of FEV 1 // Eur. Respir. J. 1989. — V. 2. — P. 811-816.

122. Laurell C.C., Eriksson S. The electrophorectic alpha-1-globulin pattern of serum in alpha-1-antitrypsin deficiency I I Scand. J. Clin. Lab.1.vest.- 1963. -V. 15. -P. 132-140.i

123. Laurenzana E.M., Hassett C., Omiecinski C.J. Post-transcriptional regulation of human microsomal epoxide hydrolase // Pharmacogenetics. 1998.-V. 8.-P. 157-167.

124. Lieberman J., Winter B., Sastre A. a 1-antitrypsin Pi-types in 965 COPD patients // Chest. 1986. - V. 89. - P. 370-373.

125. Lin H.J., Han C.-Y., Lin B.K., Hardy S. Slow acetylator mutations in the human polymorphic N-acetyltransferase gene in 786 Asians, blacks, Hispanics, and whites: application to metabolic epidemiology // Am. J. Hum. Genet. 1993. - V. 52. - P. 827-834.

126. Lomas D., Mahadeva R. Alpha 1-antitrypsin polymerization and the serpinopathies: pathobiology and prospects for therapy // J. Clin. Invest. -2002. V. 110.-P. 1585-1590.

127. Lomas D.A., Silverman E.K. The genetics of chronic obstructive pulmonary disease // Respir. Res. 2001. - V. 2. - P. 20-26.

128. Luisetti M., Seersholm N. «^-Antitrypsin deficiency. 1: Epidemiology of a 1-antitrypsin deficiency // Thorax. 2004. - 59. - P. 164-169.

129. Lyon H., Lange C., Lake S., Silverman E., Randolph A., Kwiatkowski D, Raby B., Lazarus R., Weiland K., Laird N., Weiss S. IL10 gene polymorphisms are associated with asthma phenotypes in children // Genet. Epidemiol. 2004 - 26. - P. 155-165.

130. Mace K., Bowman E.D., Vautraverrs P. et al. Characterisation of xenobiotic-metabolising enzyme expression in human bronchial mucosa and peripheral lung tissues // Eur. J. Cancer. 1998. - V. 34. - P. 914920.

131. MacNee W. Oxidants/antioxidants and COPD // Chest. 2000. V. 117(5 Suppl 1). - P. 303S-317S.

132. Mahadeva R., Lomas D.A. Genetics and respiratory disease. 2. Alpha 1-antitrypsin deficiency, cirrhosis and emphysema // Thorax. 1998. - V. 53.-P. 501-505.

133. Marzolini C., Paus E., Buclin T., Kim R.B. Polymorphisms in human MDR1 (P-glycoprotein): recent advances and clinical relevance // Clin. Pharmacol. Ther. 2004. - V. 75. - P. 13-33.

134. Mathew C.C. The isolation of high molecular weight eucariotic DNA // Methods in Molecular Biology. Ed. Walker J.M. N.Y., L.: Human Press. - 1984. - V. 2. - pp. 31-34.

135. Matrisian L. Metalloproteinases and their inhibitors in matrix remodeling // Trends Genet. 1990. - V. 6. P. 121-125.

136. McCachren S.S. Expression of metalloproteinases and metalloproteinase inhibitor in human arthritic synovium // Arthritis Rheum. 1991.-V. 34.-P. 1085-1093.

137. Minematsu N., Nakamura H., Iwata M., Tateno H., Nakajima T., Takahashi S., Fujishima S., Yamaguchi K. Association of CYP2A6 deletion polymorphism with smoking habit and development of pulmonary emphysema // Thorax. 2003. - V. 58. - P. 623-628.

138. Moolgavkar S.H. Air pollution and hospital admissions for chronic obstructive pulmonary disease in three metropolitan areas in the United States // Inhal. Toxicol. 2000. - V. 12 Suppl 4. - P. 75-90.

139. Murray C.J., Lopez A.D. Evidence-based health policy—lessons from the Global Burden of Disease Study // Science. 1996. - V. 274. - P. 740-743.

140. Murray C.J., Lopez A.D., Jamison D.T. The global burden of disease in 1990: summary results, sensitivity analysis and future directions // Bull. World Health Organ. 1994. - V. 72. - P. 495-509.

141. Nagase H., Woessner J.F. Matrix Metalloproteinases // The journal of biological chemistry. 1999. V. 274.-P. 21491-21494.

142. Nebert D.W., Carvan M.J. 3rd. Ecogenetics: from ecology to health // Toxicol Ind Health. 1997. - V. 13. P. - 163-192.

143. Oyama T., Mitsudomi T., Kawamoto T., et al., Detection of CYP1A1 Polymorphism Using Designed RFLP and Distributions of CYP1A1 Genotypes in Japanese // Int. Arch. Occup. Environ. Health. 1995. - V. 67. - P. 253-256.

144. Parks W.C., Shapiro S.D. Matrix metalloproteinases in lung biology // Respir. Res. 2001. -V. 2. -P. 10-19.

145. Patuzzo C., Gije L.S., Zorzetto M. et al. Tumor necrosis factor gene complex in COPD and disseminated bronchiectasis // Chest. 2000. - V. 117.-P. 1353-1358.

146. Peto R., Chen Z.M., Boreham J. Tobacco the growing epidemic // Nat Med. - 1999. - V. 5. - P. 15-17.

147. Poller W., Faber J.P., Scholz S., Weidinger S., Bartholome K., Olek K., et al. Mis-sense mutation of al-antichymotrypsin gene associated with chronic lung disease // Lancet. 1992. - V. 339. - P. 1538.

148. Poller W., Meisen C., Olek K. DNA polymorphisms of the al-antitrypsin gene region in patients with chronic obstructive pulmonary disease // Eur. J. Clin. Invest. 1990. - V. 20. - P. 1-7.

149. Posch P.E., Cruz I., Bradshaw D., Medhekar B.A. Novel polymorphisms and the definition of promoter 'alleles' of the tumor necrosis factor and lymphotoxin alpha loci: inclusion in HLA haplotypes // Genes Immun. 2003. - V. 4. - P. 547-558.

150. Rahman I., MacNee W. Lung glutathione and oxidative stress: implications in cigarette smoke-induced airway disease // Am. J. Physiol. 1999. - V. 277. - P. L1067-L1088.

151. Redline S., Tishler P.V., Lewitter F.I., Tager I.B., Munoz A. Speizer F.E. Assessment of genetic and nongenetic influences on pulmonary function: a twin study // Am. Rev. Respir. Dis. 1987. - V. 135. P. 217-222.

152. Redline S., Tishler P.V., Rosner B., et al. Genotypic and phenotypic similarities in pulmonary function among family members of adult monozygotic and dizygotic twins // Am. J. Epidemiol. 1989. V. 129. P. 827- 836.

153. Ricciardolo F. L. Multiple roles of nitric oxide in the airways // Thorax. -2003.-V. 58.-P. 175-182.

154. Riva A., Kohane I. SNPper: retrieval and analysis of human SNPs // Bioinformatics. 2002. -V. 18.-P. 1681-1685.

155. Rizzi M., Sergi M., Andreoli A., Pecis M., Bruschi C., Fanfiilla F. Environmental tobacco smoke may induce early lung damage in healthy male adolescents // Chest.- 2004. V. 125. - P. 1387-1393.

156. Roberts-Thomson I.C., Ryan P., Khoo K., Hart W.J., McMichael A., Butler R.N. Diet, acetylator phenotype, and risk of colorectal neoplasia // Lancet. 1996. - V. 347. - P. 1372-1374.

157. Rocha L., Garcia C., de Mendonca A., Gil J.P., Bishop D.T., Lechncr M.C. N-acetyltransferase (NAT2) genotype and susceptibility of sporadic Alzheimer's disease // Pharmacogenetics. 1999 - V. 9. - P. 9-15.

158. Roff D.F., Bentzen P. The statistical analysis of mitochondrial DNA:

159. X and problem of small samples // Mol. Biol. Evol. 1989. - V. 6. - P. 539-545.

160. Roger M. Influence of host genes on HIV-1 disease progression // FASEB. J. 1998. - V. 12. - P. 625-632.

161. Sakao S., Tatsumi K., Igari H. et al. Association of tumor necrosis factor alpha gene promoter polymorphism with the presence of chronicobstructive pulmonary disease // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2001. -V. 163.-P. 420-422.

162. Samet J.M., Marbury M., Spengler J. Health effects and sources of indoor air pollution // Am. Rev. Respir. Dis. 1987 - V. 136. - P. 14861508.

163. Samilchuk E.I., Chuchalin A.G. Mis-sense mutation of alpha-1-antichymotrypsin gene and chronic lung disease. (Letter) // Lancet. -1993.-V. 342.-P. 624.

164. Sandford A.J., Chagani T., Spinelli J.J., Pare P.D. a 1-antitrypsin genotypes and the acute-phase response to open heart surgery // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1999. -V. 159. - P. 1624-1628.

165. Sandford A.J., Chagani T., Weir T.D., Connett J.E., Anthonisen N.R., Pare P.D. Susceptibility Genes for Rapid Decline of Lung Function in the Lung Health Study // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2001. - V. 163. -P. 469-473.

166. Sandford A.J., Chagani T., Weir T.D., Para P.D. al-antichymotrypsin mutations in patients with chronic obstructive pulmonary disease // Dis. Markers. 1998. - V. 13. - P. 257-260.

167. Sandford A.J., Silverman E.K. Chronic obstructive pulmonary disease. 1: Susceptibility factors for COPD the genotype-environment interaction // Thorax. 2002. - V. 57. - P. 736-741.

168. Sandford A.J., Spinelli J.J., Weir T.D., Pare P.D. Mutation in the 3' region of the a 1-antitrypsin gene and chronic obstructive pulmonary disease // J. Med. Genet. 1997. - V. 34. - P. 874-875.

169. Sandford A.J., Weir T.D., Pare P.D. Genetic risk factors for chronic obstructive pulmonary disease // Eur. Respir. J. 1997. - V. 10. P. 13801391.

170. Schellenberg D., Pare D., Weir T.D. et al. Vitamin D binding protein variants and the risk of COPD // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1998. -V. 157.-P. 957-961.

171. Schlesselman J., Case-control studies. Design, conduct, analysis. -New York, Oxford: Oxford University Press. 1982. - P. 58-96.

172. Schwartz D.A. The Genetics of Innate Immunity // Chest. 2002. V. 121.- P. 62S-68S;

173. Seersholm N., Wilcke J.T., Kok-Jensen A., Dirksen A. Risk of hospital admission for obstructive pulmonary disease in alpha (1)-antitrypsin heterozygotes of phenotype PiMZ // Am. J. Respir. Crit. Care. 2000.-V. 161.-P. 81-84.

174. Segal S., Hill A.V. Genetic susceptibility to infectious disease // Trends Microbiol. 2003. - V. 11. - P. 445-448.

175. Segura-Valdez L., Pardo A., Gaxiola M., Uhal B.D., Becerril C., Selman M. Upregulation of gelatinases A and B, collagenases 1 and 2, and increased parenchymal cell death in COPD // Chest. 2000. — V. 117.-P. 684-694.

176. Shapiro S.D. Proteolysis in lung // Eur. Respir. J. 2003. - V. 22. Suppl. 44. — P. 30-32.

177. Silverman E. K. Genetic Epidemiology of COPD // Chest. 2002. -V. 121.-P. 1S-6S.

178. Silverman E.K., Chapman H., Drazen J., et al. Early-onset chronic obstructive pulmonary disease (COPD): preliminary evidence for genetic factors other than Pi type // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1996. -V. 153.-P. 48.

179. Silverman E.K., Palmer L.J. Case-control association studies for the genetics of complex respiratory diseases // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2000. - V. 22. - P. 645-648.

180. Smith C.A, Harrison D.J. Association between polymorphism in gene for microsomal epoxide hydrolase and susceptibility to emphysema // Lancet. -1997. V. 350. - P. 630-633.

181. Song W., Zhao J., Li Z. Interleukin-6 in bronchoalveolar lavage fluid from patients with COPD // Chin. Med. J. 2001. - V. 114. - P. 11401142.

182. Speizer F.E., Rosner B., Tager I. Familial aggregation of chronic respiratory disease: use of national health interview survey data for specific hypothesis testing // Int. J. Epidemiol. 1976. - V. 5. - P. 167172.

183. Stockley R.A. Neutrophils and the pathogenesis of COPD // Chest. -2002. V. 121.-P. 151S-155S.

184. Strieter R.M., Belperio J.A., Keane M.P. Cytokines in innate host defense in the lung // Clin. Invest. 2002. - V. 109. - P. 699-705.

185. Tager I., Tishler P.V., Rosner B., Speizer F.E., Litt M. Studies of the familial aggregation of chronic bronchitis and obstructive airways disease //Int. J.Epidemiol.- 1978-V. 7. P. 55-62.

186. Tager I.B., Rosner B., Tishler P.V., Speizer F.E., Kass E.H. Household aggregation of pulmonary function and chronic bronchitis // Am. Rev. Respir. Dis. 1976. - V. 114. - P. 485-492.

187. Tager I.B., Segal M.R., Speizer F.E., Weiss S.T. The natural history of forced expiratory volumes. Effect of cigarette smoking and respiratory symptoms // Am. Rev. Respir. Dis. 1988. - V. 138. - P. 837-849.

188. Takanashi S., Hasegawa Y., Kanehira Y., Yamamoto K., Fujimoto K., Satoh K. Okamura K. Interleukin-10 level in sputum is reduced in bronchial asthma, COPD and in smokers // Eur. Respir. J. 1999. — V. 14. - P. 309-314.

189. Tao X., Hong C.J., Yu S., Chen B., Zhu H., Yang M. Priority among air pollution factors for preventing chronic obstructive pulmonary disease in Shanghai // Sci. Total Environ. 1992. V. 127. - P. 57-67.

190. Tarlow J.K., Blakemore A.I., Lennard A., Solari R., Hughes H., Steinkasserer A., Duff G.W. Polymorphism in human IL-1 receptor antagonist gene intron 2 is caused by variable numbers of an 86-bp tandem repeat // Hum. Genet. 1993. - V. 91. - P. 403-404.

191. Taylor J.J., Preshaw P.M., Donaldson P.T. Cytokine gene polymorphism and immunoregulation in periodontal disease // Periodontol. 2004 - V. 35 - P. 158-182.

192. Teramoto S., Ishii T. No association of tumor necrosis factor-alpha gene polymorphism and COPD in Caucasian smokers and Japanese smokers // Chest. 2001. - V. 119. - P. 315-316.

193. Teramoto S., Ishii T., Matsuse T. Genetic susceptibility to tobacco smoke toxicity and chronic obstructive pulmonary disease // Geriatrics and Gerontology International. 2002. - V. 2. - P. 1-7.

194. The Collaborative Study on the Genetics of Asthma (CSGA). Genome-wide search for asthma susceptibility loci in ethnically diverse populations // Nat. Genet. 1997. - V. 15. - P. 389-392.

195. Thompson J. Pathogenesis and prevention of adhesion formation // Dig. Surg. 1998. - V. 15. - P. 153-157.

196. Trupin L., Earnest G., San Pedro M., Balmes J.R., Eisner M.D., Yelin E., Katz P.P., Blanc P.D. The occupational burden of chronic obstructive pulmonary disease'// Eur. Respir. J. 2003. - V. 22(3). - P. 462-469.

197. Uglialoro A.M., Turbay D., Pesavento P.A. et al. Identification of three new single nucleotide polymorphisms in the human tumor necrosis factor-a gene promoter // Tissue Antigens. 1998. - V. 52. - P. 359-367.

198. Vatsis K.P., Martell K.J., Weber W.W. Diverse point mutations in the human gene for polymorphic N-acetyltransferase // Proc. Nat. Acad. Sei. -1991.-V. 88. P. 6333-6337.

199. Vatsis K.P., Weber W.W., Bell D.A. Dupret J.M., Evans D.A., Grant D.M., Hein D.W., Lin H.J., Meyer U.A., Relling M.V., et al. Nomenclature for N-acetyltransferases // Pharmacogenetics. 1995. —V. 5(1). - P. 1-17.

200. Venter J.C., Adams M.D., Myers E.W. et al. The sequence of the human genome//Science.-2001.-V. 291. P. 1304-1351.

201. Warzocha K., Ribeiro P., Bienvenu J. et al. Genetic polymorphisms in the tumor necrosis factor locus influence non-Hodgkin's lymphoma outcome// Blood. 1998. - V. 91. - P. 3574-3581.

202. Webster P.M., Lorimer E.G., Man S.F., Woolf C.R., Zamel N. Pulmonary function in identical twins: comparison of nonsmokers and smokers // Am. Rev. Respir. Dis. 1979. -V. 119. - P. 223- 228.

203. Wedzicha J.A., Seemungal T.A., MacCallum P.K., et al. Acute exacerbations of chronic obstructive pulmonary disease are accompanied by elevations of plasma fibrinogen and serum IL-6 levels // Thromb. Haemost. 2000. - V. 84. P. 210-215.

204. Wilson A.G., Symon J.A., McDowel T.L. et al. Effects of a polymorphism in the human tumor necrosis factor alpha promoter on transcriptional activation // Proc. Natl. Acad. Sci. 1997. - V. 94. - P. 3195-3199.

205. Woessner J. Matrix metalloproteinases and their inhibitors in connective tissue remodeling // Faseb. J. 1991. - V. 5. - P. 2145-2154.

206. Wong J.M., Okey A.B., Harper P.A. Human aryl hydrocarbon receptor polymorphisms that result in loss of CYP1A1 induction // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. -V. 288. - P. 990-996.

207. World Health Organization Report. Alpha-1-antitrypsin deficiency. -1996.

208. World Health Report. World Health Organization, Geneva. 2000. -Available from URL: http://www.who.int/whr/2000/en/statistics.htm.

209. Wouters E.F. Chronic obstructive pulmonary disease • 5: Systemic effects of COPD // Thorax. 2002. - V. 57. - P. 1067-1070.

210. Yamaguchi E., Itoh A., Hizawa N. et al. The gene polymorphism of tumor necrosis factor-13, but not that of tumor necrosis factor-**, is associated with the prognosis of sarcoidosis // Chest. 2001. - V. 119.-P. 753-761.

211. Yamamoto C., Yoneda T., Yoshikawa M., Fu A., Tokuyama T., Tsukaguchi K., Narita N. Airway inflammation in COPD assessed by sputum levels of interleukin-8// Chest. 1997.-V. 112. - P. 505-510.

212. Yang M., Coles B.F., Delongchamp R., Lang N.P., Kadlubar F.F. Effects of the ADH3, CYP2E1, and GSTP1 genetic polymorphisms on their expressions in Caucasian lung tissue // Lung Cancer. 2002. — V. 38.-P. 15-21.

213. Yim J.J., Yoo C.G., Lee C.T., Kim Y.W., Han S.K., Shim Y.S. Lack of association between glutathione S-transferase PI polymorphism and COPD in Koreans // Lung. 2002. V. 180. -P. 119-125.

214. Yoshikawa M., Hiyama K., Ishioka S., Maeda H., Maeda A., Yamakido M. Microsomal epoxide hydrolase genotypes and chronic obstructive pulmonary disease in Japanese // Int. J. Mol. Med. — 2000. -V.5.-P. 49-53.

215. Zhang R., Zhang A., He Q., Lu B. Microsomal epoxide hydrolase gene polymorphism and susceptibility to chronic obstructive pulmonary disease in Han nationality of North China // Zhonghua Nei Ke Za Zhi.-2002.-V. 41.-P. 11-14.

Информация о работе
  • Янбаева, Диляра Гумаровна
  • кандидата биологических наук
  • Уфа, 2004
  • ВАК 03.00.15
Диссертация
Ассоциации полиморфных вариантов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков, протеолиза-антипротеолиза и цитокинов с хронической обструктивной болезнью легких - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно
Автореферат
Ассоциации полиморфных вариантов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков, протеолиза-антипротеолиза и цитокинов с хронической обструктивной болезнью легких - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации