Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Полиморфизм генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков и его роль в проявлении и течении профессионального бронхита и хронической обструктивной болезни легких

ВАК РФ 03.02.07, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Полиморфизм генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков и его роль в проявлении и течении профессионального бронхита и хронической обструктивной болезни легких"

КОНОНЫХИНА НАТАЛЬЯ ВЛАДИМИРОВНА

ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ ФЕРМЕНТОВ БИОТРАНСФОРМАЦИИ КСЕНОБИОТИКОВ И ЕГО РОЛЬ В ПРОЯВЛЕНИИ И ТЕЧЕНИИ ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО БРОНХИТА И ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ

03.02.07 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 0Е8 Ш

Москва - 2012

005008843

Работа выполнена на базах научно-исследовательской лаборатории «Генетика» Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Курский государственный университет» и лаборатории медицинской генетики кафедры биологии, медицинской генетики и экологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор, академик РАЕН, заслуженный деятель науки РФ

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

кандидат медицинских наук, доцент

Иванов Владимир Петрович

Асанов Алий Юрьевич Прытков Александр Николаевич

Ведущая организация: Федеральное государственное автономное

образовательное учреждение высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет»

Защита диссертации состоится <у?.9 2012 г. в часов

на заседании диссертационного совета Д 212.203.05 в ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, дом 8.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, дом 6.

Автореферат размещен на сайте УЛу\у.уак.еа.^оу.ш

Автореферат разослан « ^» _____________ 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук, доцент О.Б. Гигани

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ)

- распространенное среди взрослого трудоспособного населения заболевание бронхолегочной системы, приводящее к инвалидности, снижающее качество и продолжительность жизни (Чучалин А.Г., 2000) и занимающее 4-е место в списке нозологических форм, определяющих летальные исходы (Murray J.L., Lopes A.D., 1996). В литературе накоплено уже достаточно данных, чтобы говорить о влиянии генетических, физиологических, социальных, экологических, культурных и других особенностей личности на течение заболевания (Овчаренко С.И., 2009). Смертность от ХОБЛ растет быстрее смертности от других причин, за исключением СПИДа (Сеитова Г.Н. и др., 2002). Важным шагом в стратегии профилактики и терапии любой болезни, в том числе и ХОБЛ, является определение факторов риска заболевания. Многочисленные исследования показали, что курение табака, профессиональная вредность (пыль, химикаты), частые инфекции респираторного тракта, а также социально-экономический статус пациента являются важными экзогенными факторами в развитии ХОБЛ (Malaiyandi et al.,2005; Schoedel К.A. et al., 2004). Однако в современной пульмонологии ХОБЛ рассматривается как многофакторное заболевание (МФЗ), в манифестации которого наряду с внешнесредовыми факторами существенную роль играет генетическая компонента (Чучалин А.Г., 2000; Barnes P.J., 2003). Проблема поиска генетических маркеров чувствительности-толерантности к генотоксическим эффектам среды обитания человека стоит особенно остро в связи с тем фактом, что механизм самозащиты организма состоит из множества метаболических путей и ферментативных систем* имеющих сложные механизмы регуляции и саморегуляции. Большое значение в исследовании таких взаимосвязей имеет изучение полиморфных вариантов генов, продукты которых обеспечивают различные звенья одной и той же или близко сопряженных метаболических цепей, т.е. входящих в одну генную сеть. Такой системный подход позволяет более адекватно оценить роль соответствующего полиморфного аллеля в формировании функционального статуса организма (Hirvonen А., 2009). ,В этой связи наиболее подходящими генетическими маркерами для экогенетических исследований МФЗ являются полиморфные варианты генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков (ФБК), экспрессия которых, в отличие от других классов генов, непосредственно

регулируется влияниями средовых; факторов химической природы (Сап-рин А.Н., 1999; Янбаева Д.Г., 2005). В настоящее время накоплено значительное число данных о вовлеченности различных полиморфных генов в формирование предрасположенности к мультифакториальной патологии (ШэсИ N.1., 2000; НцзсЫюгп .Ш. й а1., 2002). Однако, несмотря на достигнутые успехи мирового научного сообщества в области изучения генома человека и в разработке высокоразрешающих методов анализа ДНК, по-прежнему известно относительно небольшое число генов, которые в совокупности только частично объясняют некоторые звенья патогенеза МФЗ (Кулинский В.И., 1999; Сеито-ваГ.Н.,2002). '

Вышеизложенное определило проведение настоящего исследования.

Цель исследования: молекулярно-генетическое исследование

вовлеченности полиморфизма генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков группы цитохромов СУР1А1 (1462V, Т6235С), СУР1В1 (У432Г-); группы эпоксидгидролаз ЕРНХ1 (У113Н, 1113911) и группы глютаминтрансфераз ОБТР1 (1105У), С8ТМ1 (+/0) и (757 77 (+/0) в патогенез профессионального бронхита и хронической обструктивной болезни легких.

Задачи исследования

1. Провести комплексную оценку распространенности полиморфизмов генов системы биотрансформации ксенобиотиков среди здоровых жителей Курской области и страдающих профессиональным бронхитом и ХОБЛ.

2. Провести анализ ассоциаций полиморфизмов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков с предрасположенностью к развитию заболевания и установить степень риска возникновения профессионального бронхита и ХОБЛ с учетом полового диморфизма.

3. Через взаимодействия между генами системы биотрансформации ксенобиотиков оценить предрасположенность к развитию профессионального бронхита и ХОБЛ у больных с различными сочетаниями генотипов.

4. Изучить особенности социально-биологических и клинических характеристик больных, характер взаимодействия генотип-среда и его роль в возникновении предрасположенности к развитию клиникопатогенетических вариантов хронической патологии легких.

5. Разработать статистические модели прогнозирования риска

возникновения профессионального бронхита и ХОБЛ с учетом полового диморфизма.

Научная новизна. Впервые среди жителей Курской области Центральночерноземного региона Российской Федерации, страдающих профессиональным бронхитом и хронической обструктивной болезнью легких, произведен молекулярно-генетический анализ полиморфизмов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков с предрасположенностью к развитию заболевания. Впервые как в общей популяции, так и отдельно среди мужчин и женщин - жителей Курской области с различными клинико-патогенетическими вариантами хронической патологии легких выявлены различия в ассоциациях исследуемых генов с риском развития заболевания. Установлены специфические взаимодействия генотип-среда, определяющие предрасположенность к возникновению профессионального бронхита и ХОБЛ.

Научно-практическая значимость. На оснований полученных данных показана целесообразность тестирования полиморфизмов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков СУР1А1 (1462У, Т6235С), СУР1В1 (У432Ь), ЕРНХ1 (УПЗН, Н13911), СОТРУ (Н05У), СБТМ1 (+/0) и вБТИ (+/0) для определения степени риска возникновения профессионального бронхита и ХОБЛ. Разработаны статистические модели вероятностного прогнозирования риска развития заболевания. Полученные модели позволяют врачам прогнозировать риск развития заболевания на доклиническом уровне, определять тяжесть и характер течения, подбирать наиболее подходящую тактику ведения и профилактики у таких пациентов, используя индивидуальный подход. Результаты настоящего исследования могут быть использованы при изучении курсов клинической и медицинской генетики студентами медицинских вузов, интернами и ординаторами.

Положения, выносимые на защиту

1. Выявлены существенные различия в распределении частот аллелей и полиморфных вариантов изучаемых генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков между патогенетическими вариантами хронической патологии легких с учетом полового диморфизма.

2. Установлены ассоциации генотипа 139НН гена ЕРНХ1, делеционного генотипа гена ОБТТ1 с развитием профессионального бронхита у мужчин и делеционным генотипом гена ОЯТТ! у женщин.

3. Особенности течения заболевания среди мужчин группы профессионального бронхита ассоциировались с генами ферментов 1-й фазы биотрансформации, а среди мужчин группы ХОБЛ - с полиморфизмами генов 1-й и 2-й фаз биотрансформации ксенобиотиков. Среди женщин обеих групп - с полиморфизмами генов 1-й и 2-й фаз биотрансформации ксенобиотиков.

4. Наибольшее влияние на риск развития заболевания среди обеих групп оказывали парные сочетания генотипов генов ФБК 1-й и 2-й фаз биотрансформации ксенобиотиков.

5. Повышает риск развития профессионального бронхита у курящих мужчин полиморфизм del/del гена GSTT1, у мужчин, бросивших курить,

- генотип 432VL гена CYP1B1.

6. Повышает риск развития профессионального бронхита среди мужчин носителей генотипа 432VL гена CYP1B1 действие инертной и смешанной пыли (у носителей генотипа 139HR гена ЕРНХ1 и генотипа 105IV гена GSTP1).

Апробация работы. Основные положения диссертационного исследования были представлены на Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медикобиологических и технико-экономических сфер жизни общества» (Курск,

2008 г.); 75-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых' ученых с международным участием «Молодежная наука и современность», посвященная 75-летию КГМУ (апрель 2010 г., г. Курск); VI съезде Российского общества медицинских генетиков (Ростов-на-Дону, 2010 г.); 76-й

Всероссийской научной сессии сотрудников Курского государственного медицинского университета и Центрально-Черноземного научного Центра РАМН и отделения РАЕН (февраль 2011 г., г. Курск); 2-й Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Медикобиологические аспекты мультифакториальной патологии» (май, 2011 г., г. Курск).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 печатных работ, в том числе 4 статьи в журналах, определенных ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертационное исследование изложено на 143 страницах машинописного текста, состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов

собственного исследования и их обсуждения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Работа иллюстрирована 36 таблицами, включает 3 приложения. Список литературы включает 233 источника литературы, 101 из которых отечественный и 132 иностранные.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал исследования. Материалом исследования послужила популяционная выборка (п=660) не родственных между собой русских жителей Курской области Центрально-Черноземного района Российской Федерации в возрасте от 28 до 85 ' лет. Формирование экспериментальных групп осуществлялось сплошным методом.

В конечном итоге были сформированы 3 группы для исследований. В первую группу с диагнозом профессиональный хронический бронхит были включены 162 человека со стажем работы во вредных условиях труда от 7 до 38 лет. Верификация диагноза производилась специалистами Центра профессиональных болезней г. Курска на основании приказа М3 РФ № 90 от 14.03.1996 г. Во второю группу больных с диагнозом ХОБЛ вошли 156 человек, находившихся на стационарном лечении в пульмонологических отделениях клинических больниц г. Курска (№ 6, ОКБ № 1). Диагноз ХОБЛ ставился врачами-клиницистами в соответствии с международной классификацией. В третью, контрольную группу вошли 342 относительно здоровых жителя Курской области, отобранных в лечебно-профилактических заведениях в соответствии по полу, возрасту и отсутствию патологии со стороны бронхолегочной системы. Группы были уравновешены по полу и возрасту, группы больных не отличались от контрольной группы (р>0,05).

Методы исследования. Диагностика заболеваний проводилась на базе терапевтических отделений клинических больниц г. Курска (№ 6, ОКБ № 1) и центра профессиональных болезней г. Курска. Клиническое обследование включало в себя сбор жалоб, анамнеза жизни и анамнеза заболевания, физикальные, инструментальные и лабораторные методы обследования. Всё исследование проводилось по единому алгоритму. У обследуемых проводился забор венозной крови из локтевой вены в количестве 10-15 мл, с целью экстракции ДНК перед забором крови проводилось анкетирование.

Анкетирование больных и здоровых обследованных проводилось при непосредственном общении с использованием оригинальных анкет, разработанных на кафедре биологии, медицинской генетики и экологии КГМУ.

С помощью анкетирования исследовали совокупность средовых факторов, включающих профессиональные вредности, наличие вредных привычек, образ жизни, социально-биологические характеристики, клинические характеристики, эффективность лечения и многое другое.

Молекулярно-генетические методы Выделение геномной ДНК из лимфоцитов периферической крови производилось стандартным двухэтапным методом фенол-хлороформной экстракции из замороженной венозной крови по Маниатис (Маниатис, Т., 1984).

Амплификация фрагментов ДНК методом полимеразной цепной реакции.

Рестрикционный анализ. В рамках проводимого исследования изучали 8 полиморфизмов 6 генов ФБК: CYPJA1 (I462V, Т6235С), CYP1B1 (V432L), EPHXI (Y113H, H139R), GSTM1 (+/0), GSTT1 (+/0), GSTP1 (I105V).

Выбор полиморфизмов проводился на основе изучения литературных данных об их ассоциации с развитием бронхолегочной патологии.

Анализ полиморфных локусов CYP1A1 (I462V, Т6235С), CYP1B1 (V432L), EPHXI (Y113H, H139R), GSTP1 (I105V) проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК, методом мультиплексной ПЦР изучали полиморфизмы GSTM1 (+/0), GSTT1 (+/0). Реакция проходила с использованием Taq ДНК-полимеразы Thermus aquaticus в стандартных условиях. Гидролиз амплифицированных фрагментов ДНК проводили ферментами Bspl9 I, Msp I, PstI, EcoR V, Rsal, BstMA I производства «Сибензим» (Россия). Делеционный полиморфизм генов GSTMJ, GSTT1 исследовали в стандартных условиях по ранее описанной методике.

Г енетико-статистичсские методы Формирование базы данных осуществлялось с использованием программы Statistica 6.0. Обработка результатов осуществлялась по стандартным методикам вариационной статистики (Пирузян JI.A., 2000; Кукес В:Г, 2004; Esson К., 2004; Amoli К., 1998). Математические расчеты проводились с помощью пакетов прикладных программ Statistica 6.0, MS Excel 2002. ,

Все полученные результаты проверяли на нормальность распределения с помощью критерия Колмогорова-Смирнова.

Для оценки соответствия распределений генотипов ожидаемым

значениям при равновесии Харди-Вайнберга (РХВ) в выборке проводили с помощью критерия х2 Пирсона, при условии, что объем выборки не превышал

10 случаев, использовали критерий %2 с поправкой Йетса. Относительное отклонение ожидаемой гетерозиготности от наблюдаемой (D) рассчитывали по формуле:

D=(Ho - Не)/Не,

где Но и Не - наблюдаемая и ожидаемая гетерозиготность соответственно.

Ассоциации аллелей и генотипов изученных ДНК-маркеров с предрасположенностью к профессиональному бронхиту и ХОБЛ оценивали с помощью анализа таблиц сопряженности 2x2 с расчетом критерия %2 (df= 1) и отношения шансов (OR) с 95% доверительными интервалами (Cl) (Schlessel-man J., 1982; Pearce N., 1993; Реброва О.Ю., 2003). Для сравнения распределения частот аллелей и генотипов между группами больных и контрольной группой использовали показатель %2 Пирсона, при условии, что объем выборки не превышал 10 случаев, использовали критерий %2 с поправкой Йетса. Границы 95%-го доверительного интервала (С1) для OR вычисляли методом В. Woolf.

Межгенные взаимодействия изучали методом сопоставления частот парных сочетаний генотипов в группах больных и здоровых с расчетом критерия х2 и OR.

Анализ взаимодействий генотип-среда проводился методом сопоставления величин отношения шансов (OR), рассчитанных для индивидуальных генотипов в группах, сформированных по критерию наличия (ORf+) или отсутствия (ORf_) средового фактора риска (Pearce N., 1993).

Метод логистической регрессии использовался для оценки влияния исследуемых генетических маркеров на риск развития заболеваний, их клинические симптомы, особенности их течения и развитие осложнений. В случае анализа влияния на дихотомические зависимые переменные использовали бинарную логистическую регрессию, а если зависимая переменная имела более двух категорий, то использовали мультиномиальную логистическую регрессию (Hosmer D.W., Lemeshow S., 2000). При оценке уравнений регрессии использовался метод пошагового включения предикторов, который ранжировал признаки в соответствии с их вкладом в модель. В качестве критерия согласия реального распределения наблюдений

использовался процент правильной переклассификации. Относительный вклад отдельных предикторов оценивали величиной статистики х2 Вальда.

Статистическая обработка данных проводилась на персональном компьютере с использованием программных пакетов Statistics 6.0 ("StatSoft") и MS Excel 2002.

Личный вклад автора в получении научных результатов.

Диссертационная работа представляет собой законченное, самостоятельно выполненное исследование. Все представленные в диссертации результаты получены автором лично. Работа выполнена на базах научноисследовательской лаборатории «Генетика» КГУ и лаборатории медицинской генетики кафедры биологии, медицинской генетики и экологии ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития РФ. Проведена работа по анализу отечественных и зарубежных источников литературы по теме диссертационного исследования. Проведена статистическая обработка и анализ полученных данных, обобщены результаты исследования. В работах, выполненных в соавторстве, использованы результаты исследований с долей личного участия автора 75-95%. •

Результаты и обсуждение собственных исследований

1. Анализ ассоциации полиморфизма генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков с предрасположенностью к развитию профессионального бронхита и ХОБЛ.

Распределения генотипов в исследованных выборках для большинства изученных ДНК-маркеров находились в равновесии Харди-Вайнберга (РХВ), о чем свидетельствовало значение р>0,05, исключение составили полиморфизм Y113H гена ЕРНХ1 (выявлено отклонение от РХВ за счет уменьшения наблюдаемой гетерозиготности как в контрольной группе, так и в группах больных), полиморфизм V432L гена CYP1B1 (выявлено отклонение от РХВ в группе профессионального бронхита за счет увеличения наблюдаемой гетерозиготности, а в группе ХОБЛ и контрольной группе соответствовало ожидаемому). Проверку распределения генотипов по генам GSTT1 и GSTM1 на соответствие РХВ провести невозможно, т.к. не определяли гетерозиготное носительство. Видно, что полиморфизм генов ФБК характеризовался широким аллельным разнообразием: уровень наблюдаемой гетерозиготности колебался

от Н„=0,1437 для полиморфизма 1462У гена СУР1А1 до Но-0,5741 полиморфизма У432Ь гена СУР1В1. Сравнительный анализ частот аллелей изучаемых полиморфных генов контрольной группы с группой профессионального бронхита и ХОБЛ позволил установить ассоциации отдельных аллельных вариантов с предрасположенностью к развитию профессионального бронхита. В обобщенной группе больных (группа профессионального бронхита и ХОБЛ вместе) частота встречаемости мутантного аллеля 113Н гена ЕРНХ1 выше, нежели в контрольной группе (011=1,29; 95%С1 1,03-1,6; р=0,02). При раздельном анализе клиникопатогенетических вариантов хронической патологии легких, исследуемой нами, было выявлено, что профессиональный бронхит ассоциировался с повышением частоты мутантного аллеля 113Н гена ЕРНХ1 (011=1,41; 95%С1 1,08-1,85; р=0,01) и мутантного аллеля 13911 гена ЕРНХ1 (011=1,49; 95%С1 1,072,09; р=0,02).

Также у представленной группы больных частота мутантного аллеля т2 полиморфизм Т6235С гена СУР1А1 встречалась реже, нежели в контрольной группе (011-0,63; 95%С1 0,39-0,99; р=0,05). Напротив, в группе больных ХОБЛ статистически значимых ассоциаций выявлено не было.

Таким образом, наиболее выраженные различия в распределении частот аллелей генов ФБК встречались в группе профессионального бронхита.

2. Проявление полового диморфизма в ассоциации генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков с предрасположенностью к развитию хронической патологии легких.

Хорошо известно, что мультифакториальные заболевания обнаруживают половые различия по распространенности в популяции (Фогель Ф., Мотуль-ски А., 1990). В этой связи исследование ассоциаций ДНК-маркеров с болезнями с учетом полового диморфизма подверженности к ним является важным элементом в изучении генетической природы МФЗ (Полоников А.В., 2006), такого как профессиональный бронхит и ХОБЛ. Анализируя полученные результаты настоящего исследования, нами был установлен выраженный половой диморфизм в чувствительности бронхолегочной системы к влиянию генов ФБК на развитие хронической патологии легких профессионального и непрофессионального генеза. Так, среди мужчин группы профессионального бронхита были выявлены следующие закономерности (табл. 1): развитие заболевания ассоциировалось с

увеличением частоты делеционного генотипа гена 08ТТ1 среди мужчин обобщенной группы больных и группы профессионального бронхита, снижение частоты встречаемости генотипа дикого типа 139НН гена ЕРНХ1 среди мужчин группы профессионального бронхита (р=0,05); представленные результаты свидетельствуют о вовлеченности анализируемых полиморфизмов генов ФБК в развитие заболевания. Необходимо отметить тенденцию к снижению частоты встречаемости генотипа 139НН гена ЕРНХ1 в обобщенной группе больных (р=0,08).

Таблица!

Проявления полового диморфизма в ассоциации генов ферментов бнотрансформацнн ксенобиотиков с предрасположенностью к развитию ___________________хронической патологии легких______________

Ген . Генотипы Отношение шансов (Ж (р<0,05)

Обобщенная группа больных Профбронхнт ХОБЛ

муж. жен. муж. жен. муж. жен.

ЕРНХ1 113НН - 2,13 - , 235 - -

ЕРИХ1 139НН - - 1,75 - - .

С5ТП + •>59 - Х22 2ДЗ - -

сЫ 13 - 202 2,13 - -

Среди женщин показатели распределились несколько иначе: мутантный генотип 113НН гена ЕРНХ1 значительно чаще встречался среди женщин обобщенной группы больных и группы профессионального бронхита (р<0,05) в сравнении с контрольной группой. Также делеционный генотип гена 05777 достоверно чаще встречался среди женщин группы профессионального бронхита (р<0,05), а частота функционально полноценного генотипа (75777 значительно снижена среди женщин группы профессионального бронхита (р<0,05).

В группе больных ХОБЛ статистически значимых результатов одиночного влияния полиморфизмов генов ФБК с учетом полового диморфизма на риск развития заболевания получено не было, однако необходимо отметить тенденцию к накоплению мутантного генотипа 113НН гена ЕРНХ1 в группе больных по сравнению с контролем (р=0,08). Фактически наблюдалась картина специфической дифференциации мужчин и женщин в отношении генетической компоненты подверженности к

обструктивной патологии легких профессионального и непрофессионального генеза (Солодилова М.А., 2009).

С практической точки зрения оценка влияния генетических факторов на развитие мультифакториального заболевания — профессионального бронхита и ХОБЛ с помощью логистического регрессионного анализа является наиболее важной, поскольку позволяет выявить ДНК-маркеры с высокой предиктивной значимостью, которые необходимы для прогнозирования осложненного характера течения болезни и своевременного назначения необходимых лечебно-профилактических мероприятий (Мингазова С.Р., 2011).

В таблице 2 представлены результаты взаимодействия полиморфизмов генов ФБК с клиническими проявлениями заболевания при уровне р<0,05: среди мужчин группы профессионального бронхита особенности течения заболевания ассоциировались с полиморфизмами генов 1-й фазы биотрансформации ксенобиотиков (СУРИН (1462У), ЕРНХ1 (У113Н) и ЕРНХ1 (Н139Я)), а среди мужчин группы ХОБЛ - с полиморфизмами генов 1-й (СУР1А1 (Т6235С), ЕРНХ1 (УИЗН) и ЕРНХ1 (Н139Я)) и 2-й (СБТР! (1105 V) и ОБТАП (+/0)) фаз .биотрансформации ксенобиотиков.

Таблица 2

Влияния полиморфизмов генов ферментов биотрансформации ксенобиогнков на клинические проявления и течение обструктивных ________________заболеваний легких среди мужчин_______________

Клшшческие Полиморфизмы генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков

признаки СУР1А1 Т6235С СУР1В1 У432Ь ЕРНХ1 УПЗН ЕРНХ1 Н139Я вЯТР! І105У С,5ТМ1 +/0

Кашель 0,052 - - 0,0022 - -

Одышка - 0,03і 0,03* © О «о - -

дн - - - - ' - -

Поражение ССС - од2 - . - - -

Эмфизема - - 0,02і - 0,042 -

Пневсклероз О О СЛ_ - - 0,01і 0,02і

1 - у мужчин группы профессионального бронхита 2 - у мужчин группы ХОБЛ уровни значимости р различий частот генотипов между группами (р<0,05; <1Г=1)

Среди женщин группы профессионального бронхита особенности течения заболевания ассоциировались с влиянием полиморфизмов генов ФБК 1-й (СУР!А! (Т6235С)) и 2-й (05777 (+/0)) фаз, а среди женщин из группы

ХОБЛ - 1-й (ЕРНХ1 (УИЗН)) и 2-й (0$ТР1 (1105У) и СБТМ1 (+/0)) фаз биотрансформации ксенобиотиков (уровень значимости р<0,05) (табл. 3).

Таблица 3

Влияния полиморфизмов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков на клинические проявления и течение обструктивных ________________заболеваний легких среди женщин________________

Клинические признаки Полиморфизмы генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков

СЇР1А1 1462V СУР1А1 Т6235С СЇР1В1 У432Ь ЕРНХ1 У113Н ЕРНХ1 Н139Я вЯТМ! +/0 05777 +/0 ОБТРІ 1105 V

Кашель - - ' - - - - - -

Одышка 0,08і 0,05і - - - 0,022 - -

ДН 0,1і - - - - - 0,03і -

Поражение ССС - - - 0,09 і 0,062 0,12 0,008і 0,052

Эмфизема - - - - - 0,04і 0,006і -

Пневмосклероз - ■ - 0,06і 0,052 - 0,032 0,12 -

1 - у женщин группы про( 2 - у женщин группы ХОЕ уровни значимости р разл >ессионалыюго бронхита Л 1чий частот генотипов между группами (р<0,05; <ЛГ-1)

3. Межгенные взаимодействия при хронической патологии легких с учетом полового диморфизма.

Для полной оценки вовлеченности генов ФБК в развитие патологии дыхательной системы, такой как профессиональный бронхит и ХОБЛ, нам представилось необходимым проанализировать ассоциации парных межгенных сочетаний генотипов. Анализ ассоциации отдельных полиморфных генов с мультифакториальной патологией не дает полного представления о характере их взаимодействий в формировании предрасположенности к патогенетически различным заболеваниям. Посредством анализа парных межгенных сочетаний генотипов изучены особенности взаимодействий полиморфных генов ферментов различных фаз биотрансформации ксенобиотиков между собой (Полоников А.В., 2006). Имело смысл данное взаимодействие

проанализировать сразу с учетом выявленного полового диморфизма. Из проведенного анализа видно, что в обобщенной группе больных мужчин предрасположенность к развитию хронической патологии легких ассоциировалась с 14-ю парными сочетаниями генотипов полиморфных генов ХОБЛ, но только 7 из них достигали статистического уровня значимости

(р<0,05). Наиболее значимыми для развития заболевания являются взаимодействия между собой следующих генотипов полиморфных генов: CYI’lAl ml/mlxGSTTl del/del (OR=l,89; 95%CI 1,10-3,22; р=0,002), CYP1B1 432VVxGST77 del/del (OR=2,66; 95%C1 1,04-6,80; p-0,05), EPHX1

139RRxGSTM +/+ (OR=14,12; 95%C1 0,79-252,58; p=0,03), EPHX1

139HR xGSTTl del/del (OR=4,77; 95%C1 1,83-12,40; p=0,009), GSTP1

\Q5\\y-GSTTI del/del (OR=2,41; 95%C1 1,20-4,86; p=0,01) и GST MI del/delxGST77 del/del (OR=2,17; 95%C1 1,05-4,51; p=0,03). Наоборот, протективными

свойствами в отношении риска развития хронической патологии легких обладали взаимодействия между собой CYPIBI 432VVxGST77 +/+ (0R=0,55; 95%С1 0,31-1,00; р=0,05).

Среди женщин обобщенной группы больных развитие хронической патологии легких ассоциировалось с 15-ю парными сочетаниями генотипов полиморфных генов хронической патологии легких, но только 10 из них достигали статистического уровня значимости (р<0,05). Наиболее значимыми для развития заболевания являются взаимодействия между собой следующих генотипов полиморфных генов: CYP1A1 462IIxE/V/A7 113НН (OR=2,24; 95%С1 1,23-4,06; р=0,01), CYP1A1 ml/mlxEPHXl 113НН (OR=2,42; 95%CI 1,27-4,60; р=0,01), CYPIBI 432LLxGSTTl del/del (OR=9,65; 95%C1 1,75-53,37; p-0,003), EP1IX1 milHxGSTMl del/del (OR=2,88; 95%CI 1,19-6,95; p=0,02), EPHX1 U3HHxG57T7 +/+ (OR=2,16; 95%C1 1,15-4,07; p=0,02), EPHX1 139HRxGS777 del/del (OR=3,43; 95%C1 1,15-10,25; p=0,03), GSTM1 +/+xGSTTl del/del

(OR=2,21; 95%C1 1,10-4,43; p=0,02). Наоборот, сочетание генотипов CYPIAI mMmlxCYPlBl 432VL (OR=0,33; 95%C1 0,14-0,79; p=0,015), CYPIBI

432VL xEPHXI 113YY (OR=0,48; 95%C1 0,26-0,89; p-0,02) и EPHX1

113YH xGSTTl +/+ (OR=0,57; 95%C1 0,34-0,96; p=0,03) обладали

протективными свойствами в отношении развития хронической патологии легких среди женщин обобщенной группы больных.

При раздельном анализе клинико-патогенетических вариантов хронической патологии легких, исследуемой нами, с учетом полового диморфизма были установлены иные закономерности. Развитие

профессионального бронхита среди мужчин ассоциировалось с 22 парными

сочетаниями генотипов полиморфных генов ХОБЛ, 16 из которых достигали статистического уровня значимости (р<0,05). Наиболее значимыми для

развития заболевания являются взаимодействия между собой следующих генотипов: CYP1A1 mUmlxEPHXl 113НН (OR=l,88; 95%С1 1,0-3,54; р=0,05), CYP1A1 462IIxGS777 del/del (OR=l,98; 95%С1 1,10-3,55; р=0,02), CYP1A1 mVmlxGSITI del/del (OR=2,77; 95%C1 1,50-5,12; p=0,009), CYP1B1

432VVxGSTTl del/del (OR=3,39; 95%C1 1,21.-9,52; p=0,03), CYP1B1

432VLxGS777 del/del (C>R=1,90; 95%C1 0,98-3,70; p=0,05), EPHX1

113HHxGST77 del/del (OR=2,83; 95%C1 1,15-6,97; p=0,04), EPHX1

139HRxGSTTl del/del (OR=5,97; 95%C1 2,14-16,66; p=0,004), EPHX1

139RRxGSTT1 del/del (OR=15,43; 95%C1 0,79-302,09; p=0,05), GSTP1 \05WxGSTTJ del/del (OR=3,24; 95%CI 1,50-7,02; p=0,002) и GSTM1

del/delxGS777 del/del (OR=3,05; 95%C1 1,36-6,83; p=0,005). В то же время взаимодействия между собой генотипов ЕРНХ1 139ННxGSTPl 105II (OR=0,54; 95%С1 0,31-0,95; р=0,03), CYP1A1 462IIxGS777 +/+ (OR=0,57; 95%С1 0,34-0,96; р=0,03), CYP1B1 432VVxGS777 +/+ (OR=0,35; 95%С1 0,14-0,83; р=0,02) и ЕРНХ1 139HHxGS777 +/+ (OR=0,57; 95%С1 0,34-0,95; р=0,03) снижают риск развития профессионального бронхита среди мужчин.

Развитие профессионального бронхита среди женщин ассоциировалось с 25 парными сочетаниями генотипов полиморфных генов ФБК, 15 из которых достигали статистического уровня значимости (р<0,05). Наиболее значимыми для развития заболевания являются взаимодействия между собой следующих генотипов: CYP1A1 462IIxEPHXl 113НН (OR=2,61; 95%С1 1,32-5,15; р=0,005), CYP1A1 т\/т\хЕРНХ1 113НН (OR=2,87; 95%С1 1,39-5,93; р=0,003), CYPIBI 432LLxEPHXl 113НН (OR=3,36; 95%С1 1,11-10,2; р=0,05), ЕРНХ1

mmxGSTPI 105VV (OR=19,09; 95%С1 1,01-359,38; р=0,02), CYPlAl ml/mlxGSm del/del (OR=2,36; 95%C1 1,17-4,76; p=0,01), CYPIBI

AlTLLxGSTTl del/del (OR=10,85; 95%C1 1,84-64,13; p=0,004), EPHX1

113HHxGSTA// del/del (OR=3,05; 95%C1 1,14-8,14; p=0,04), EPHX1

113YHxGS777 del/del (OR=2,39; 95%C1 0,97-5,92; p=0,05), EPHXl

139HRxG5,m del/del (OR=5,16; 95%C1 1,64-16,16; p=0,01), GSTP1

105VVxGSTTl del (OR=7,73; 95%C1 1,24-48,08; p=0,03) и GSTM1 +/+xGSTTl del/del (OR=3,05; 95%C1 1,42-6,56; p=0,003). В то же время сочетания генотипов CYPIBI АШЬхЕРНХ! 113YY (OR=0,47; 95%С1 0,22-1,01; р=0,05), EPHXl 113YY xGSTPl 105IV (OR=0,37; 95%C1 0,14-0,97; p=0,049), GSTPI

miVxGSTTl +/+ (OR=0,50; 95%C1 0,26-0,96; p=0,04) и GST Ml +/+xGSTTJ +/+

(OR-0,43; 95%Cl 0,24-0,78; p=0,005) снижают риск развития

профессионального бронхита среди женщин.

Развитие ХОБЛ среди мужчин ассоциируется с четырьмя парными сочетаниями генотипов полиморфных генов ХОБЛ, только одно из которых достигало статистического уровня значимости (р<0,05): ЕРНХ1 139HRxGST77 del/del (OR=3,84; 95% Cl 1,30-11,33; p=0,02). Сочетаний генотипов, обладающих протектнвными свойствами в отношении развития ХОБЛ у мужчин, не выявлено.

Развитие ХОБЛ среди женщин ассоциируется с 14 парными

сочетаниями генотипов полиморфных генов ХОБЛ, 8 из которых достигали статистического уровня значимости (р<0,05): повышают риск развития заболевания сочетания CYP1A1 ml/m2xCi'PIBl 432LL (OR=4,I4; 95%С1 1,2413,90; р=0,03), CYP1B1 432LLxEPHXl 113YY (OR=2,46; 95%CI 1,08-5,59; р=0,03), ЕРНХ1 1 \3HHxGSTPJ 105II (OR=2,95; 95%С1 1,23-7,11; р=0,01), CYPIB1 432LLxGS7T7 del/del (OR=9,03; 95%С1 1,45-56,30; р=0,02) и ЕРНХ1 1 13ННхСЛ’77У +/+ (OR=2,59; 95%С1 1,23-5,45; р=0,01). Наоборот, сочетания CYP1A1 462IIУ.ЕРНХ1 113YH (OR=0,53; 95%С1 0,28-1,01; р=0,05), ЕРНХ1 113YHxGSTP/ 105II (OR=<),25; 95%С1 0,09-0,71; р=0,008), CYP1B1

432VLxG.STA/y del/del (OR=0,41; 95%С1 0,18-0,97; р=0,05) обладают

протектнвными свойствами в отношении развития непрофессионального

бронхита у женщин. .

Таким образом, наибольшее число статистически значимых ассоциаций выявлено для сочетаний генотипов ферментов двух фаз бнотрансформацни ксенобиотиков и характеризуется преимущественным накоплением среди больных как функционально активных аллелей генов ферментов 1-й фазы, так и низко активных аллелей генов ферментов 2-й фазы биотрансформации ксенобиотиков, что не противоречит ранее проведенным исследованиям (Полоннков А.В., 2006; Солодилова М.А., 2009).

4. Анализ влиянии курения на формирование предрасположенности и развитию профессионального бронхита и хронической обструктнвнон болезни легких с учетом полового диморфизма

Известно, что состояние здоровья человека обусловлено не только генетическими, но и средовыми факторами. В настоящее время в связи с интенсивной промышленной деятельностью с каждым годом усиливается

загрязнение окружающей среды и увеличивается число лиц, контактирующих с вредными веществами (Ахматьянова В.Р. и др., 2008). В этой связи особо актуальным является изучение генов ферментов биотрансформации-ксенобиотиков. Данную группу генов называют генами «внешней среды», т.к. они играют основную роль в метаболизме • химических соединений, поступающих в организм человека из внешней среды. Гены, ответственные за детоксикацию и выведение химических соединений, вносят вклад в определение ответной реакции организма и играют роль в формировании индивидуальной чувствительности человека к воздействию генотоксических агентов (Ахматьянова В.Р. и др., 2008).

Важным элементом проведенной работы было изучение взаимосвязи полиморфных вариантов генов ФБК и факторов окружающей среды. Так, среди мужчин группы профессионального бронхита, которые курили, но бросили, повышенный риск развития заболевания наблюдался у носителей гетерозиготного генотипа 432VL гена CYP1BI, а среди курящих мужчин этой группы - у носителей полиморфизма del/del гена GSTT1, что не противоречит многочисленным исследованиям. Это свидетельствует о модифицирующем влиянии курения у носителей генотипов GSTM1 ”0/0” на предрасположенность к ХОБЛ, а также указывает на более высокий риск заболевания РЛ курящих пациентов с ХОБЛ (Васильева М.В., 2006). Частота встречаемости делеции 16-25% в европеоидных популяциях. Результаты нашего исследования говорят от том, что среди некурящих людей, страдающих ХОБЛ, делеционный полиморфизм GSTT1 составляет 34,3%, у лиц, ранее куривших, но отказавшихся от пагубной привычки, - 40%, а у курящих - 45,5%. Из этого следует, что повышение процента функционально неактивного полиморфизма гена GSTTJ прямо пропорционально воздействию курения на организм человека, работающего во вредных условиях труда. У мужчин, которые курили, но бросили, из группы ХОБЛ носителей генотипа ml/ml гена CYP1A1 отмечается тенденция к снижению риска развития хронического бронхита. Цитохром 1А1 (CYP1A1) является одним из ферментов системы детоксикации организма от ксенобиотиков, переводит полициклические ароматические углеводороды в канцерогенные полупродукты. В нашем случае активность фермента снижена, т.к. преобладает количество диких гомозигот. У носителей гетерозиготного генотипа 432VL гена CYP1B1 отмечается тенденция к увеличению риска развития хронического бронхита.

Среди некурящих женщин, носителей мутантного генотипа 113НН гена ЕРНХ1, установлена ассоциация, повышающая риск развития профессионального бронхита. В то же время среди некурящих женщин из группы ХОБЛ определяется тенденция к увеличению риска развития заболевания у носителей мутантного генотипа 432LL гена CYP1B1

Таким образом, курение повышает риск развития хронической патологии легких у мужчин носителей del/del генотипа гена GSTT1 в группе профессионального бронхита. Анализ влияния курения на риск развития ХОБЛ среди мужчин и женщин на молекулярно-генетическом уровне статистически достоверных различий не выявил.

5. Анализ влияния контакта с вредными профессиональными факторами на формирование предрасположенности к развитию профессионального бронхита с учетом полового диморфизма.

В группе профессионального бронхита имеет смысл проанализировать влияние контакта с вредными профессиональными факторами и типами пыли, способствующими развитию заболевания. В группе больных ХОБЛ контакта с вредными профессиональными факторами не установлено. Так, среди мужчин группы профессионального бронхита повышает риск развития заболевания действие инертной пыли у носителей гетерозиготного генотипа 432VL гена CYP1B1 (OR=6,61; 95%С1 1,79-24,34; р=0,005) и смешанной пыли (у носителей гетерозиготного генотипа 139HR гена ЕРНХ] (OR=13,8; 95%С1 0,73-259,22; р=0,05), а также носителей гетерозиготного генотипа 105IV гена GSTP1 (OR=5,45; 95%С1 1,12-26,57; р=0,05). Токсическая и органическая пыль оказывает наименьшее влияние на организм работающих мужчин, показатели этого влияния не достигают статистически достоверного уровня значимости р>0,05. Анализ действия пыли на представительниц женского пола статистически значимых различий не выявил.

Полученные результаты подтверждают большое значение взаимодействия геногип-среда в формировании генетической предрасположенности к развитию профессионального бронхита.

С практической точки зрения представляет интерес проведение комплексной оценки результатов генотипирования полиморфизма генов ФБК и средовых факторов риска для определения критериев прогнозирования риска развития профессионального бронхита и ХОБЛ с учетом полового диморфизма и внедрения полученных результатов в практическое здравоохранение.

Полученные результаты могут быть включены в работу врачей-генетиков, терапевтов, пульмонологов с целью раннего выявления лиц, имеющих предрасположенность к развитию профессионального бронхита и ХОБЛ. В-практике профпатологов полученные результаты могут быть использованы при принятии на работу сотрудников с целью выявления лиц, имеющих предрасположенность к развитию профессионального бронхита, которым противопоказана работа во вредных условиях труда, оказывающих пагубное действие на бронхолегочную систему, и отбора людей, которые обладают устойчивостью к возникновению профессионального бронхита.

Оценка влияния полиморфизмов исследуемых генов ФБК и средовых факторов риска на возникновение хронического бронхита проводилась методом бинарной логарифмической регрессии, позволяющей строить статистическую модель для прогнозирования вероятности наступления события по имеющимся данным (например, факторам риска). Нами были составлены 5 моделей прогнозирования риска развития заболевания с процентом правильной классификации больных в пределах от 74,5-94,6%. Правильная классификация здоровых людей - в пределах от 34-69%. Необходимо отметить, что при составлении моделей прогнозирования риска одним из значимых показателей являлся полиморфизм генов ФБК.

Среди всех полученных моделей, подлежащих оценке, были отобраны модели, обладающие наибольшей прогностической ценностью в отношении риска развития профессионального бронхита среди мужчин. Первая модель включала следующие предикторы: полиморфизм Н139Я гена ЕРНХ1, наличие длительного (более 8 лет) контакта с вредными производственными факторами, наличие аллергии (уровень значимости модели в целом р=0,00094 (х2= 16,394; (И5=3)). Правильная классификация больных 79,5%, здоровых - 34%. Приведем несколько примеров применения на практике представленных моделей с целью определения степени риска развития заболевания.

Пример 1. Пациент мужчина: генотип 139НК гена ЕРНХ1 (Х1=1), работает во вредных условиях труда более 8 лет (Х2=1), страдает бронхиальной астмой (Х3=2). Внесем эти значения в уравнение регрессии, получим:

У= - 3,19 + (0,84x1) + (0,04x1) + (2,29x2) = 2,27

Р= 2,72 ,27/ (1 + 2,722’27) = 0,91, т.е. риск развития профессионального бронхита у данного пациента равен 91%.

Пример 2. Пациент мужчина: генотип 139НН гена ЕРНХ1 (Х1=0), работает во вредных условиях труда более 8 лет (Х2=1), не страдает аллергическими зэболеваними (Х3=1). Внесем эти значения в уравнение регрессии, получим:

У= - 3,19 + (0,84x0) + (0,04x1) + (2,29x1) = -0,86

Р= 2,72"°’86/ (1 + 2,7241,86) = 0,3, т.е. риск развития профессионального бронхита у данного пациента равен 30%.

Вторая модель включала следующие предикторы: полиморфизм Т6235С гена СУР1А1, сопутствующая патология ССС, наличие аллергических заболеваний (уровень значимости модели в целом р=0,000001 (^= 50,302; ёГ=3)). Правильная классификация больных 74,4%, здоровых - 69%.

Наибольшей прогностической ценностью в отношении риска развития профессионального бронхита среди женщин обладала модель, включающая следующие факторы риска: полиморфизм У113Н гена ЕРНХ 1, сопутствующая патология ССС. Уровень значимости модели в целом р=0,00009 (х2^! 8,679; с1(ь2). Правильная классификация больных 89%, здоровых - 39%.

Для мужчин из группы ХОБЛ наибольшей прогностической ценностью в отношении риска развития заболевания обладала модель, включающая следующие факторы риска: полиморфизм У113Н гена ЕРНХ1, курение и сопутствующая патологи ССС. Уровень значимости модели в целом р=0,00001 (^= 26,716; с1Г~3). Правильная классификация больных 75,3%, здоровых -59%.

Параметры логистической регрессионной модели среди женщин группы ХОБЛ включают следующие факторы риска: полиморфизм У432Ь гена СУР1В1 и уровень АД. Уровень значимости модели в целом р=0,00405 (Х= 11,019; <11=2). Правильная классификация больных 82%, здоровых - 42%.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Изучение механизмов возникновения и развития хронической патологии легких является наиболее актуальным в связи с увеличением числа людей, страдающих этой патологией. В современной пульмонологии ХОБЛ является мультифакториальным заболеванием, которое формируется в комплексе генетических и средовых факторов. Токсический эффект многих вредных факторов окружающей среды (включая и вредные профессиональные факторы) проявляется в первую очередь на молекулярном уровне развития организма. Изучение роли полиморфных вариантов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков, экспрессия которых, в отличие от других классов генов,

непосредственно регулируется влияниями средовых факторов химической природы, является наиболее оправданной в возникновении и проявлении хронической патологии легких профессионального и непрофессионального генеза. .

Все вышеизложенное заставило нас обратиться к проведению настоящего исследования, в ходе которого впервые в популяции жителей Курской области Центрально-Черноземного района Российской Федерации был проведен комплексный молекулярно-генетический анализ вовлеченности генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков в проявление и течение профессионального бронхита и ХОБЛ.

В ходе проведенной работы были установлены значимые различия в распространенности полиморфных вариантов генов ФБК как в группах больных, так и в контрольной группе. Определены гены, оказывающие влияние на развитие клинических симптомов заболевания с, учетом полового диморфизма. Показана наибольшая значимость влияния парных сочетаний генотипов, нежели их одиночное влияние на этиопатогенез хронической патологии легких. Установлены специфические ассоциации взаимодействия генотип - среда.

Полученные результаты настоящего исследования вносят вклад в понимание механизмов развития и течения хронической патологии легких профессиональной и непрофессиональной этиологии.

ВЫВОДЫ

1. Установлены ассоциации полиморфных вариантов генов ФБК с риском развития профессионального бронхита - с накоплением полимофных вариантов генов 2-й фазы биотрансформации ксенобиотиков, таких как ЕРНХ1 и С6777. В группе больных ХОБЛ статистически значимых результатов одиночного влияния полиморфизмов генов ФБК на риск развития заболевания не получено.

2. Выявленные ассоциации изученных полиморфизмов генов ФБК с возникновением профессионального бронхита и ХОБЛ проявляют выраженный половой диморфизм в развитии заболевания: среди мужчин обобщенной группы больных риск развития заболевания ассоциировался с делеционным генотипом гена <35777, среди мужчин группы профессионального бронхита - с генотипом дикого типа 139НН гена ЕРНХ1 и с делеционным генотипом гена 05777. Среди женщин

обобщенной группы больных - с мутантным генотипом 113НН гена ЕРНХ1. Среди женщин группы профессионального бронхита - с

' мутантным генотипом 113НН гена ЕРНХ1 и делеционным генотипом гена GSTT1. ,

3. Обнаружены статистически " значимые результаты взаимодействия полиморфизмов генов ФБК с особенностями клинических проявлений заболевания: среди мужчин группы профессионального бронхита с полиморфизмами генов 1-й фазы детоксикации, а среди мужчин группы ХОБЛ - с полиморфизмами генов 1-й и 2-й фаз детоксикации. Среди женщин обеих групп с полиморфизмами генов 1-й и 2-й фаз детоксикации.

4. Анализ) парных межгенных взаимодействий доказал, что развитие профессионального бронхита среди мужчин ассоциировалось с полиморфизмами генов 2-й фазы биотрансформации ксенобиотиков, среди женщин - с полиморфизмами обеих фаз биотрансформации ксенобиотиков. На развитие ХОБЛ среди мужчин оказывает влияние единственное сочетание генотипов EPHXI \39HRxGSTTl del. Среди женщин влияние оказывает полиморфизм генов обеих фаз биотрансформации ксенобиотиков.

5. Курение повышает риск развития профессионального бронхита среди мужчнн, носителей del полиморфизма гена GSTT1. Среди мужчин, которые курили, но бросили, повышенный риск развития заболевания наблюдался у носителей гетерозиготного генотипа 432VL гена CYP 1В1 432.

6. Увеличивает риск развития хронического бронхита профессиональной этиологии среди мужчин действие инертной пыли (у носителей гетерозиготного генотипа 432VL гена CYP 1В1) и смешанной пыли (у носителей гетерозиготного генотипа 139HR гена ЕРНХ 1 и носителей гетерозиготного генотипа 105IV гена GSTP1).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Полякова, Н.В. Роль ферментов биотрансформации ксенобиотиков в этиологии и патогенезе ХОБЛ / Н.В. Полякова, О.Н. Бачинский / Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медикобиологических и технико-экономических сфер жизни общества: материалы междунар. науч.-практ. конф. (Курск, 20-21 марта 2009 г.). -Курск, 2009. - С. 227-228.

2. Полякова, Н.В. Система генов детоксикации и ее вовлеченность в формирование хронической обструктивной патологии легких / Н.В. Полякова, О.Н. Бачинский // Молодежная наука и современность: материалы 74-й итог. науч. межвуз. конф. студентов и молодых ученых, посвящ. Году молодежи в России (21-22 апр. 2009 г.). - Курск, 2009. -

Ч. 1,-С. 71-72.

3. Полякова, Н.В. Структурный полиморфизм генов детоксикации в популяции жителей Курской области с диагнозом профессиональная хроническая обструктивная болезнь легких / Н.В. Полякова // Актуальные проблемы биологии, нанотехнологии и медицины: сб. тр. 3-й междунар. конф. (Ростов-на-Дону, 3-4 окт. 2009 г.). - Ростов н/Д, 2009. - С. 171-172.

4. Полякова, Н.В. Структурный полиморфизм генов семейства микросомальных эпоксид гидролаз (ЕРНХ 113, ЕРНХ 139) среди пациентов с профессиональным бронхитом / Н.В. Полякова, О.Н. Бачинский // Материалы V Международной (XIV Всероссийской) Пироговской научной медицинской конференции студентов и молодых ученых (Москва, 18 марта 2010 г.). - М., 2010. - С. 361. - (Прил. к журн. «Вестник РГМУ»; спец. вып. № 2).

5. Полякова, Н.В. Хроническая обструктивная болезнь легких. Современное состояние проблемы / Н.В. Полякова // Современные технологии в медицине и педагогике: сб. науч., учеб. и учеб.-метод. тр. -Курск, 2010.-С. 102-103.

6. Полякова, Н.В. К оценке полиморфизма Т6235С гена СУР1А1 в развитии хронической обструктовной болезни легких профессиональной этиологии / Н.В. Полякова, О.Н. Бачинский // Достижения, инновационные направления, перспективы развития и проблемы современной медицинской науки, генетики и биотехнологий: материалы

I Междунар. науч.-практ. конф. (31 марта 2011 г.). - Екатеринбург, 2011.

. -С. 150-151.

7. Проблема профессиональных заболеваний дыхательной системы на территории Курской области / О.Н. Бачинский, В.И. Бабкина,

A.В. Корнев, Н.В. Полякова, А.В. Храмцов // Здоровье населения и среда обитания. - 2011. - Ха 2 (215). - С. 40-43.

8. Системное воспаление при хронической обструктивной патологии легких профессиональной и непрофессиональной этиологии / О.Н. Бачинский, В.И. Бабкина, С.А. Прнбылов, В.П. Иванов, Е.В. Трубникова, Н.В. Полякова // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». - 2011. - X» 1. - С. 26-30.

9. Кононыхина, Н.В. Гены II фазы системы детоксикации организма и их вовлеченность в развитие профессионального бронхита / Н.В. Кононыхина, О.Н. Бачинский, В.В. Анцупов // Медикобиологические аспекты мультифакториальной патологии: сб. материалов

II Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием (Курск, 17-19 мая 2011 г.).-Курск, 2011.-С. 66-67.

10. Поиск генетических маркеров при профессиональной бронхолегочной патологии у человека / В.П. Иванов, Н.В. Кононыхина, О.Н. Бачинский, И.И. Барт // Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии: сб. материалов II Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием (Курск, 17-19 мая 2011 г.).-Курск,2011.-С. 56-58.

11. Анализ взаимосвязи ассоциативной активности хромосом и экспрессии рибосомных генов у больных ХОБЛ / Е.А. Климова, Е.В. Трубникова, Н.В. Стабровская, А.В. Храмцов, О.Н. Бачинский, А.С. Белоус, Н.В. Кононыхина // Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии: сб. материалов II Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием (Курск, 17-19 мая 2011 г.). - Курск, 2011. - С. 62-63.

12. Вовлеченность полиморфных вариантов гена ЕРНХ1 в возникновении хронической патологии легких профессионального и непрофессионального генеза в популяции жителей Курской области / Н.В. Кононыхина, О.Н. Бачинский, В.И. Бабкина, Е.В. Трубникова,

B.П. Иванов // Пульмонология. - 2011. - X® 5 . - С. 25-28.

13. Хронический бронхит профессиональной этиологии: история развития проблемы, патогенетические особенности, перспективные направления исследований (обзор литературы) / О.Н. Бачинский, В.И. Бабкина, В.П. Иванов, Е.В. Трубникова, Н.В. Полякова // Медицина труда и промышленная экология. - [2012? - готовится к выпуску].

Кононыхина Наталья Владимировна

Полиморфизм генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков и его роль в проявлении и течении профессионального бронхита и хронической обструктивной болезни легких

Исследование посвящено изучению вовлеченности генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков в этиопатогенез хронической патологии легких, такой как профессиональный бронхит и хроническая обструктивная болезнь легких. Изучение вовлеченности генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков проводится на образцах ДНК, выделенных из лимфоцитов периферической крови стандартным двухэтапным методом фенол-хлороформной экстракции из замороженной венозной крови по Маниатис. В работе показаны данные, отражающие вовлеченность генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков в проявление и течение профессионального бронхита и хронической обструктивной болезни легких. Показана тесная взаимосвязь генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков и факторов окружающей среды с риском развития заболевания. Составлены модели прогнозирования риска развития профессионального бронхита и ХОБЛ. Работа решает проблему прогнозирования и течения профессионального бронхита и ХОБЛ.

Kononykhina Natalya Vladimirovna “Xenobiotic biotransformation enzyme gene polymorphism and its role in the manifestation and course of professional bronchitis and chronic obstructive . pulmonary disease”

The study of the xenobiotic enzyme biotransformation genes is carried out on DNA samples isolated from peripheral blood lymphocytes in a standard two-step method of phenol-chloroform extraction from frozen venous blood by Maniatis.

The research presents data reflecting the xenobiotic enzyme biotransformation genes involvement into the manifestation and course of professional bronchitis and chronic obstructive pulmonary disease.

A close relationship of the xenobiotic enzyme biotransformation genes and environmental risk factors of development of the disease are shown

Models of the risk of occupational bronchitis and COPD prediction are made. The research solves the problem of predicting the outgoing of the professional and bronchitis and COPD.

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г.

Сдано в набор 10.01.2012 г. Подписано в печать 13.01.2012 г. Формат 30х42’/8 Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Уел. печ. л. 1,0.

Тираж 100 экз. Заказ № 184"А".

Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.