Полиморфизм гена белка, связывающего жирные кислоты (H-FABP), и его влияние на хозяйственно-полезные признаки свиней

Арсиенко, Роман Юрьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Полиморфизм гена белка, связывающего жирные кислоты (H-FABP), и его влияние на хозяйственно-полезные признаки свиней
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Полиморфизм гена белка, связывающего жирные кислоты (H-FABP), и его влияние на хозяйственно-полезные признаки свиней"

Учреждение Всероссийский государственный научно-исследовательский институт животноводства российской академии сельскохозяйственных наук

На правах рукописи

АРСИЕНКО РОМАН ЮРЬЕВИЧ

ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА БЕЛКА, СВЯЗЫВАЮЩЕГО ЖИРНЫЕ КИСЛОТЫ (Н-РАВР), И ЕГО ВЛИЯНИЕ НА ХОЗЯЙСТВЕННО-ПОЛЕЗНЫЕ ПРИЗНАКИ СВИНЕЙ

Специальность: 03.00.23 - БИОТЕХНОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Дубровицы-2003

Работа выполнена в отделе биотехнологии учреждения Всероссийский государственный научно-исследовательский институт животноводства РАСХН.

Научный руководитель: доктор биологических наук

Зиновьева Наталия Анатольевна Научный консультант: доктор сельскохозяйственных наук

Шмаков Юрий Иванович Официальные оппоненты доктор биологических наук, профессор

Марзанов Нурбий Сафарбиевич кандидат биологических наук, доцент Новикова Людмила Федоровна

Ведущая организация: Московская сельскохозяйственная академия

имени К.А. Тимирязева

Защита диссертации состоится « <(% » 2003 года, в 10 часов, на

заседании диссертационного совета Д006.013.01 при учреждении Всероссийский государственный научно-исследовательский институт животноводства.

Адрес института: 142132, Московская область, Подольский район, п. Дубровицы, ВИЖ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЖа.

Автореферат разослан ьАД/ 2003 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, к.б н.

В.П. Губанова

2оо5-А

/1. ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность темы.

На формирование продуктивности сельскохозяйственных животных оказывают влияние как генетические, так средовые факторы. В этой связи, при традиционном отборе животных по фенотипическому проявлению признаков оценка истинного генетического потенциала животных может быть занижена. С развитием молекулярной генетики и молекулярной биологии становится возможным идентификация генетических маркеров, напрямую или косвенно связанных с хозяйственно-полезными признаками /Рое^ег, 1997]. Выявление предпочтительных с точки зрения селекции вариантов таких генов позволит дополнительно к традиционному отбору животных, например, по уровню удоя, содержания жира и т.п., проводить селекцию непосредственно на уровне ДНК, то есть по генотипу (маркер-зависимая селекция).

Прежде чем внедрить использование генетических маркеров в селекцию животных, необходимо выполнить ряд мероприятий: (1) Выделить спектр генов-кандидатов, которые могут служить молекулярно-генетическими маркерами локусов количественных признаков - ОН. (2) Разработать тест-системы для анализа их аллельного полиморфизма. (3) Определить частоты встречаемости аллельных вариантов данных генов у различных пород сельскохозяйственных животных. (4) Провести корреляционный анализ с хозяйственно-полезными признаками. (5) Оценить эффективность использования генетических маркеров в селекции.

Одними из важнейших селекционных признаков свиней являются мясная продуктивность и качество мяса. Преимущественная селекция свиней по мясноста приводит к значительному ухудшению качества свинины [Шадю е? а/., 2001, белЬеля е? а/., 1999]. Прямая селекция свиней по качеству мяса и мясной продуктивности традиционными методами затруднена из-за низкого коэффициента наследуемости признака. В этой связи, возникает необходимость в выявлении и использовании в селекции генетических маркеров, напрямую или косвенно связанных с качественными и количественными признаками мясной продуктивности.

В качестве возможных маркеров признаков мясной продуктивности и качества мяса свиней рассматриваются гены семейства белков, связывающих жирные кислоты (РАВР). Одним из генов этого семейства является Н-РАВР, представляющий

большой интерес в качестве маркера содержания внутримышечного жира у свиней /БелЬето в? а/., 1997, Ои7о ef а/., 2000].

Цель и задачи исследования.

Целью диссертационной работы являлось выявление полиморфизма гена белка, связывающего жирные кислоты (Н-РАВР), и установление его влияния на проявление хозяйственно-полезных признаков свиней различных пород.

Для достижения цели диссертационной работы были поставлены и решены следующие задачи:

1. Пополнить банк ДНК свиней различных пород и популяций.

2. Усовершенствовать методику определения полиморфизма гена Н-РАВР свиней на основе анализа ПЦР-ПДРФ.

3. Установить частоты встречаемости аллелей и генотипов гена Н-РАВР у различных пород и популяций свиней России.

4. Провести анализ взаимосвязи генотипов гена Н-РАВР с содержанием внутримышечного жира.

5. Провести анализ взаимосвязи полиморфных вариантов гена Н-РАВР с рядом хозяйственно-полезных признаков свиней.

Научная новизна.

Предложена методика определения аллельных вариантов гена Н-РАВР у различных пород свиней РФ. Определены частоты встречаемости аллелей и генотипов гена Н-РАВР у шести популяций трех пород свиней, разводимых в Российской Федерации. Изучено влияние вариантов исследуемого гена на содержание внутримышечного жира и другое хозяйственно-полезные признаки свиней.

Практическая ценность работы.

Пополнен банк ДНК свиней различных пород и созданы базы данных хозяйственно-полезных признаков свиней трех пород. Предложена методика выявления аллельных вариантов гена Н-РАВР для проведения популяционно-генетических исследований. Показана связь генотипа 00 гена Н-РАВР с большей толщиной шпика и повышенным содержанием жира в тушах свиней. Основные положения, выносимые на защиту.

• Создан банк ДНК свиней трех пород (крупная белая - 6 популяций, белая

короткоухая, уржумская).

• Предложен усовершенствованный метод выявления полиморфных вариантов

гена Н-РАВР свиней.

• Выявлены различия в частотах встречаемости аллелей и генотипов исследуемого гена у свиней трех пород.

• Установлены тенденции влияния генотипов Н-РАВР на проявление хозяйственно-полезных признаков свиней.

Структура и объем работы.

Диссертация написана на 97 страницах, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы. Работа включает 27 таблиц и 11 рисунков.

Публикации результатов исследований.

По материалам диссертации опубликовано 3 научные работы.

Апробация работы.

Материалы диссертационный работы были доложены на конференции аспирантов и молодых ученых, ВИЖ, 2000 год; на международной научной конференции «Актуальные проблемы ДНК-технологий и клеточной инженерии сельскохозяйственных животных», ВИЖ, 2001 год, на международной научной конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных», ВИЖ, 2002 год, на конференции отдела биотехнологии ВИЖ, 2003 год.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводили по схеме, представленной на рисунке 1.

В опытах были использованы 6 популяций свиней крупной белой породы из следующих племенных хозяйств: ГПЗ «Большое Алексеевское», ГПЗ «Никоновское», ГПЗ «Талдом» Московской области, ГПЗ «Соколовка» Кировской области, ГПЗ «Индустрия» Могилевской области и ГПЗ «Заднепровский» Витебской области; белой короткоухой породы ГПЗ «Сампурский» Тамбовской области; уржумской породы ГПЗ «Мухинский» Кировской области.

От животных отбирали пробы ткани (ушной вы щип) или пробы крови. Пробы крови консервировали путем добавления кислого цитратного раствора (АСО), добавляя на каждые 6 объемов крови 1 объем АСО [ви^аузоп е1 а/., 1987, Зиновьева и др., 2000]. Пробы ткани после их взятия замораживали при температуре -20°С и хранили в таком состоянии до момента использования. ДНК выделяли посредством солевой экстракции, лизиса в буфере Кавасаки или перхлоратным методом с модификациями [Зиновьева и др., 1998; Гладырь и др. 2001]. Качество очистки и концентрацию выделенной ДНК определяли по методике Зиновьевой и др. [1998].

Рис. 1. Схема исследований

Отбор проб выделение ДНК

Создание банка ДНК

Создание баз данных

Помесные свиньи, п=41 Белая Короткоухая, п=36 Крупная белая, п=483 Уржумская, п=178

| |

1111 111

1 я

2 ю л о

£ >5 о, о

¡С

<5 8 £2 8. Ей

V© т

1 1 1чЗ

V О

«и §

* ю

В|

и н

V"!

^ с

I *

е- ©

у >я

& О

т и

с!

чО

1 Л С се . * в

8 '5

О §

^ а

в §■

ГО § \

я Ж

I в

~ и

в о

Л иэ

еЗ и С. в

V о

в I

и 2

ПЦР-ПДРФ анализ полиморфизма гена Н-РАВР

ЕИип

Частоты аллелей

Частоты генотипов

Частоты аллелей

Н-тип

Частоты генотипов

-о "в

I Г

Анализ взаимосвязи с признаками продуктивности свиней

Содержание внутримышечного жира

Собственная продуктивность

Толщина шпика

Морфологический состав туш

Вес и процент внутреннего жира

Темпы роста

Выделенную ДНК тестировали по типу А гена H-FABP методом ПЦР-ПДРФ по методике, разработанной Nechtelberger с соавторами [2001], и по типам D и Н по методикам ПЦР-ПДРФ, оптимизированным в ходе выполнения диссертационной работы. Реакции проводили в конечном объеме 25 мкл с 1 х ПЦР буфером (16,6 мМ (NH4)2S04; 67,7 мМ Трис - HCl, pH = 8,8; 0,1 (v/v) Tween 20), 1,5 мМ MgCI2, 200мкМ диоксинуклеозидтрифосфатов, 30 пмоль каждого из праймеров и 1 Ед Taq -полимеразы. Последовательности праймеров, используемых для ПЦР, представлены в таблице 1.

Табл. 1. Последовательности используемых праймеров

Название Ориентация Последовательность 5'—>3' Позиции

Генный банк № Y16180

FABP3 fw ATT ЦАГ ЦТА ЦТЦ АГЦ ТГТ ТТЦ Ц 1615-1636

FABP4 rw ААЦ ААА ЦТЦ ТЦА ГГА АТГ ГГА Г 2204-2225

Генный банк NsX98558

FABP5 fw ААГ АГГ АЦЦ ААГ АТГ ЦЦТ АЦГ 1121-1142

FABP6 rw ТГЦ ТГТ ЦЦА ЦТА ГЦТ ТЦЦ АГГ 1660-1680

Амплификацию исследуемых фрагментов ДНК гена Н-РАВР проводили стандартным методом ПЦР анализа /Ш/гс е{ а1., 1987, Эа/М а/., 1988]. После начальной денатурации при температуре 95°С в течение 5 минут выполняли 35 циклов амплификации в следующем температурном режиме: 95°С -1 мин., 60°С ( Н аллель) и 58°С (Э аллель) -1 мин., 72°С -1 мин.

Полиморфизм по типу Н (5'1)ТЯ) выявляли посредством энзиматического гидролиза с использованием рестриктазы ЯМ с последовательностью узнавания С^АИТС (генный банк № Х98558, позиции 1321-1325). Отсутствие рестрикционного сайта соответствует аллелю И, в то время как его наличие - аллелю Н. Наличие рестрикционого сайта эндонуклеазы НаеШ или ВвиИ! с последовательностью узнавания ввЮС в интроне 2 гена РАВР [генный банк № У16180, позиции 1810-1813) позволяет идентифицировать аллель (1, в то время как его отсутствие соответствует аллелю О.

Для анализа амплифицированных фрагментов ДНК и продуктов рестрикции использовали метод гель-электрофореза. Электрофоретическое разделение проводили при 120В в 1,8% агарозном геле в буфере ТАЕ с добавлением бромистого димидия до конечной концентрации 30 нг/мл, после чего выполняли визуализацию продуктов ПЦР-ПДРФ под ультрафиолетовым светом. Документацию результатов осуществляли, используя программу ВюТей ЗБ.

Статистическую обработку данных проводили по стандартным методикам [Меркурьева и др., 1991]. Расчет средних значений (X) и стандартных отклонений (а) в выборках вели с использованием программы Microsoft Excel. Стандартное отклонение для признаков, выраженных в процентах, находили по формуле cr=V(p*q), где р и q - частоты встречаемости признаков, выраженные в процентах. Ошибку средней находили по формуле М*= сг/л/п, где п - число значений признака. Достоверность разницы между признаками определяли на основании сравнения коэффициента достоверности (Td) с коэффициентами по таблице Стьюдента.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Создание банка ДНК свиней.

В рамках выполнения данной работы нами были собраны пробы и выделена ДНК

из 697 образцов от 8-ми популяций свиней трех пород, которые представлены в таблице 2.

Табп. 2. Характеристика банка ДНК свиней отдела биотехнологии ВИЖ.

Порода Популяция Группа Число голов

Крупная белая ГПЗ «Кораблино» Тульской обл. свиноматки 47

ГПЗ «Константинове» Москов. обл. хряки и матки 195

ГПЗ «Соколовка» К^йвской^бл. Хряки иматк№ 46' *

Крупная белая ГПЗ «Б. Алексеевиче» Москов. обл. хрявд 35

ГПЗ «Никоновское}) Москов. Обл. хрякииматки sei ;

с/х«Заднепровскйй»Вйтеб. обл.. ' >$яки' 47

ПЗ «Индустрия» ШшёйЫй обл. ЯрЙкй 5f "

ГПЗ «Талдом» МоЬковеюй обл. 'фякийматки 2Щ ,

СМ-1 ГПЗ им. Горького Липецкой обл. хряки и матки 76

Бел. короткоух. ГПЗ «Сампурский» Тамбовской обл. свиноматки 36*

Уржумская ГПЗ «Мухинский» Кировской обл. хрякииматки m

Круп, черная ГПЗ «Большевик» Тульской обл. хряки и матки 22

ИТОГО: 1037

Примечание: серым цветом указаны популяции свиней, от которых пробы ДНК были получены в рамках диссертационной работы.

Как следует из данных таблицы 2, в настоящее время банк ДНК свиней насчитывает 1037 проб ДНК племенных хряков и свиноматок 5-ти пород свиней, в том числе: крупная белая (8 популяций) - 725 образцов; крупная черная (1 популяция) -22 образцов; белая короткоухая (1 популяция) - 36 образцов; уржумская (1

популяция) - 178 образцов; скороспелая мясная (1 популяция) - 76 образцов. Образцы ДНК хранятся при температуре -20°С и могут быть использованы для проведения молекулярно-генетических и популяционно-генетических исследований.

3.2. Оптимизация тест-систем для выявления полиморфизма гена Н-РАВР.

Следующим этапом в работе явилась оптимизация тест-систем для анализа аллельного полиморфизма гена Н-РАВР. Недостатком существующих тест-систем является ограниченная длина амплифицируемых фрагментов, а так же относительно близкое расположение участков рестрикции по отношению к одному праймеров, что значительно затрудняет интерпретацию результатов. Существующие тест-системы анализа Н-РАВР требуют проведения электрофореза в высокопроцентном геле длиной не менее 5-7 см, что увеличивает, с одной стороны, расход дорогостоящей агарозы (стоимость 1 грамма агарозы составляет более 20 рублей), с другой стороны, - затраты времени на проведение электрофореза до 30-40 минут.

Как известно, ген Н-РАВР характеризуется тремя типами аллельного полиморфизма, что приводит к наличию аллелей А, а; Б, (3; и Н, Ь. Проведенные нами исследования полиморфизма по топу А в трех популяциях свиней крупной белой породы (ГПЗ «Большое Алексеевское», ГПЗ «Никоновское» Московской области и ГПЗ «Соколовка» Кировской области) не выявили наличия аллеля а. Учитывая это, в дальнейшем оптимизацию тест-системы для диагностики аллельного полиморфизма гена Н-РАВР проводили по двум типам - О и Н.

Предложенный нами дизайн праймеров (последовательности праймеров указаны в разделе «Материалы и методика исследований», предусматривает амплификацию фрагментов оптимальной длины (611 п.о. для типа 0 и 560 п.о. для типа Н) с расположением участков рестрикции приблизительно на расстоянии 1/3 длины от одного из концов амплифицируемых фрагментов.

Предлагаемые нами праймеры позволяют легко идентифицировать, как рестрицированные фрагменты ПЦР, так и нерестрицированный фрагмент амплификации, образующие в результате ПДРФ анализа.

Дизайн праймеров для анализа аллелей 0,с! и Н, Ь гена Н-РАВР с указанием длин амплифицируемых и образующихся в ходе рестрикции фрагментов схематично представлен на рисунке 2.

Как следует из данных, представленных на рисунке 2, при диагностике аллелей О и с! гена Н-РАВР наличие нерестрицированного фрагмента длиной 611 п.о. соответствует генотипу 00, двух фрагментов длиной 414 и 197 п.о. - генотипу с!с1, в то время как наличие трех фрагментов длиной 611, 414 и 197 п.о. соответствует генотипу Ой.

Рис. 2. Схема ПЦР-ПДРФ анализа гена Н-РАВР по типам йиН

611 п. о.

1811/1812

1615 t 2225

Haelll

D 611 п. о.

d 197 п. о. 414 п.о.

560 п. а

1321/1322 1380/1381

1 1

1121 t Í 1680

Hinfl Hinfl

h 260 п.о. 300 п.о.

Н 201 п.о. 59п.о. 300 п.о.

Позиции 5- и З'-концов фрагментов и точек рестрикции указаны в соответствии с ЕМВ1У16180 (й-тип) иХ98558 (Н-тип).

При диагностике аллелей Н и Ь гена Н-РАВР диагностируется общий для обоих аллелей фрагмент длиной 300 п.о. Наличие одного дополнительного фрагмента длиной 260 п.о. соответствует генотипу ЬЬ, двух фрагментов длиной 201 и 59 п.о. -генотипу НН, в то время как наличие трех фрагментов длиной 260, 201 59 п.о. соответствует генотипу НИ.

3.3. Диагностика полиморфизма гена Н-РАВР.

Анализ различных пород популяций свиней (уржумская, крупная белая, белая короткоухая) позволил выявить частоты встречаемости аллелей и генотипов типа О гена Н-РАВР. Результаты анализа суммированы в таблице 3.

Табл. 3. Частоты встречаемости аллелей и генотипов О-типа гена Н-РАВР свиней

Порода Число голов Частоты встречаемости

генотипы, % аллели

ОО 0(1 (1(1 О (1

Крупная белая 381 63,2 28,9 7,9 0,78 0,22

352 20,0 57,1 22,9 0,49 0,51

463 13,0 52,2 34,8 0,39 0,61

Уржумская 1634 41,1 48,47 10,43 0,65 0,35

Белая короткоухая 365 25,0 58,3 16,7 0,54 0,46

ТПЗ "Никоновское" Моск. обл., гГПЗ "Большое Алексеевское" Моск. обл., 3ГПЗ "Соколовка" Кировской обл., 4ГПЗ "Мухинский" Кировской обл., ьгПЗ'&^^г'^' Тамбовской обл.

Как следует из представленных в таблице 3 данных, частоты встречаемости предпочтительного генотипа сМ варьировали у свиней крупной белой породы от 7,9% до 34,8%. В уржумской породе доля животных с генотипом с)(1 была на уровне 10%, белая короткоухая порода занимала промежуточное положение (16,7%).

Следует отметить большие различия в частотах встречаемости генотипа 00 и аллеля 0 в различных популяциях свиней крупной белой породы: соответственно, от 13,0% и 0,39 в ГПЗ "Соколовка" Кировской области до 63,2% и 0,78 в ГПЗ "Никоновское" Московской области. Вероятно, это связано с разными селекционными подходами, применяемыми в хозяйствах, что приводит к накоплению определенных генотипов, иногда даже противоположных, но наиболее хорошо реализующихся в условиях данного хозяйства.

На рисунке 3 представлены данные о частотах встречаемости аллелей локуса О гена Н-РАВР в различных семействах свиней уржумской породы. Как следует из данных рисунка 3, частота встречаемости предпочтительного с точки зрения содержания внутримышечного жира аллеля с1 варьировала в зависимости от семейства от 0,25 до 0,50, при этом максимальная частота аллеля отмечалась в семейства Линзы, а минимальная - в семействе Юбилейной.

Частоты встречаемости аллелей и генотипов по типу Н гена Н-РАВР представлены в таблице 4.

Рис. 3. Частоты встречаемости аллелей Dud гена H-FABP свиней уржумской породы

S 1,00-|

1-о 0,90- А

о 5 0,80- /

ш то 0,70- у

Т ш 0,60-

я. 0,50-

о £В 0,40- ✓

ns i- 0,30- Г-

о 1- 0,20- у'

о (О 0,10- У

т 0,00- А

1Ш11

¿5?

я?

<5^

Семейство

ID Od •

Табл. 4. Частоты встречаемости аллелей и генотипов Н-системы гена Н-ЯЛ8Р у различных пород свиней

Порода Число Частоты встречаемости

голов аллели, % генотипы

НН Hh hh Н h

Крупная белая 32' 71,9 25,0 3,1 0,84 0,16

352 71,4 28,6 0 0,86 0,14

433 100 0 0 1,0 0,0

Уржумская 1724 92,4 7,6 0 0,96 0,04

Белая короткоухая 495 89,8 10,2 0 0,95 0,05

1ГПЗ "Никоновское" Московской обл., 2ГПЗ "Большое Апексеевское" Московской обл., 3ГПЗ "Соколовка" Кировской обл., 4ГПЗ "Мухинский" Кировской обл., 5ГПЗ 1 Тамбовской обл.

Частота предпочтительного по содержанию внутримышечного жира генотипа НН в зависимости от породы составляет 71,4-100%. Наибольший разброс показателей наблюдается внутри крупной белой породы свиней (71,4-100%). Уржумская и белая короткоухая породы занимают промежуточное положение, с частотами встречаемости генотипа НН, соответственно, 92,4 и 89,8%.

На рисунке 4 представлены данные о частотах встречаемости аллелей Н и И гена Н-РАВР у свиней уржумской породы.

Рис. 4. Частоты встречаемости аллелей И и И гена Н-РАВР свиней

уржумской породы

£ ф

«з х Ф о. 1-о ш

о ¡-

и то ГГ

1,00-^ 0,90' 0,800,70 0,604' 0,50 ' 0,40 0,30 0,20 0,10 0,00-

ЗЕвваВВВ 11 Ш 11

л- л

<> .о. ^ <

а- ^ л- ^

г # # 1 ^

Семейство

' Г о

1Н пь

Как следует из данных рисунка 4, частота встречаемости аллеля 11 была наивысшей в семействе Линзы (0,167) и в других семействах варьировала от 0 до 0,083.

3.4. Полиморфизм гена Н-РАВР во взаимосвязи с хозяйственно-полезными признаками.

С целью оценки возможности использования гена Н-РАВР в селекции были выполнены исследования корреляции между генотипами Н-РАВР и признаками продуктивности свиней.

3.4.1. Анализ содержания внутримышечного жира.

С целью установления корреляций между содержанием внутримышечного жира в длиннейшей мышце спины, а также откормочными качествами свиней и генотипами по Н-РАВР был проведен контрольный откорм помесной синтетической популяции животных ГПЗ "Заречье" Кировской области. В таблице 5 суммированы данные о содержании жира в длиннейшей мышце свиней в зависимости от генотипа по Н-РАВР.

Табл. 5. Содержание жира в длиннейшей мышце спины в зависимости от генотипа по гену Н-РАВР

Генотип п Содержание внутримышечного жира Соотношение генотипов Разница та Р

00 3 6,750+0,418 0с1>00 +0,720 1,111 <0,95

Ос! 27 7,470±0,495 ОсМс! +1,028 1,469 <0,95

сМ 11 6,442±0,495 00>с1с1 +0,308 0,475 <0,95

НН 39 7,133±0,374 НИ>НН +0,182 0,179 <0,95

НЬ 2 7,315±0,947

Анализ данных таблицы 5 позволяет сделать вывод об отсутствии достоверной разницы между генотипами по содержанию внутримышечного жира у исследованного поголовья свиней. При сравнении генотипов Ос! и сМ наблюдается тенденция по превосходству животных с гетерозиготным генотипом над животными с генотипом <М.

Исследование сочетаний генотипов выявило 4 из 9 возможных комбинаций. В таблице 6 суммированы данные о взаимосвязи двух типов генотипов по Н-РАВР с содержанием внутримышечного жира

Табл. 6. Содержание жира в длиннейшей мышце спины в зависимости от сочетаний генотипов по гену Н-РАВР.

Генотип п Содержание внутримышечного жира Соотношение генотипов Разница Тс) Р

ННОО 3 6,75±0,418 НН00>ННс1с1 +0,308 0,457 <0,95

ННОс! 25 7,483±0,533 НН0(1>НЬ0с1 +0,168 0,154 <0,95

ННсЮ 11 6,442±0,495 ННМ>ННсИ +1,041 1,431 <0,95

НЬОс) 2 7,315±1,414 НЬ0с1>НН00 +0,556 0,547 <0,95

Как и в случае полиморфизма по типу 0, достоверная разница между различными комбинациями генотипов Н-РАВР отсутствует. В качестве тенденции можно отметить лишь незначительное превосходство гетерозигот над гомозиготами, что соответствует соотношению генотипов й(1>00>с1(1.

3.4.2. Анализ темпов роста.

Проведенные нами исследования не выявили различий в темпах роста различных групп помесных свиней ГПЗ «Заречье» Кировской области (генотипы 00, Ос1, (М) в период от рождения до 9 месяцев. Незначительное превосходство одного из генотипов над другами по живой массе свиней в возрасте 2, 3 и 7,5 месяцев (р>0,05) полностью нивелировалось по достижении животными возраста 9 месяцев. Не было установлено различий в темпах роста свиноматок крупной белой породы в возрасте 14-15 месяцев. Лишь при исследовании хряков уржумской породы в возрасте 12-ти и 24-х месяцев были выявлены незначительные различия между генотипами по темпам роста (00>0Ф>бб) и по возрасту достижения живой массы 100 кг ((/с/>00>0с(). Учитывая, что генотип 00 характеризуются повышенным накоплением жира в туше, увеличение темпов роста хряков в группе 00 можно объяснить тем, что прирост-живой массы происходит, главным образом, за счет отложения жира. Таким образом, влияние полиморфизма гена Н-РАВР на темпы роста свиней проявляется только при сочетании аллелей, свойственных определенным породам и популяциям.

3.4.3. Анализ толщины шпика и состава туш.

Обнадеживающие результаты были получены при исследовании содержания жира в туше помесных свиней ГПЗ «Заречье». Так, по показателю толщины шпика наблюдалось заметное уменьшение толщины шпика у животных, несущих в генотипе аллель с!, по сравнению с животными с генотипом 00, причем данная тенденция сохранялась во всех шести точках, в которых проводилось измерение (рис. 6).

Рис. 6. Зависимость толщины шпика от генотипа по Н-РЛВР

Как показано на рисунке 6, наибольшая толщина шпика в отдельных точках измерения отмечалась у животных с генотипом 00 - 34,0-35,0 мм. У животных с генотипами 0(1 и (М, толщина шпика варьировала, соответственно, от 29,7 до 47,0 мм и от 31,1 до 47,8 мм. Таким образом, наблюдается заметное уменьшение толщины шпика у свиней, несущих в своем генотипе аллель с! по сравнению с группой свиней, имеющих генотип 00: у гетерозиготных животных в зависимости от точки измерения от 3,0 до 5,7 мм, а у свиней с генотипом с№ - от 2,3 до 3,5 мм.

Различия в толщине шпика у свиней, несущих аллель <1 по сравнению с генотипом 00 в абсолютном (мм) и относительном (%) выражении представлены в таблице 7. В среднем по шести измерениям уменьшение толщины шпика у свиней с генотипами Ос! и (1(1 по сравнению с генотипом 00 составляло, соответственно, 4,5 и 3,3 мм (р<0,01).

Табл. 7. Толщина шпика у свиней в зависимости от генотипа по Н-РАВР

Генотип Толщина шпика, мм Разница в %% к 00 Достоверность разницы

мм %

00 40,58+0,53

СМ 36,05+0,46 -4,5 -11,2 йсКОО, р<0,01

(1с1 37,27+0,71 -з,з -8,2 ЛИЮ, р<0,01

Тенденция пониженной жирности свиней с генотипами с!<1 и Рс1 по сравнению с генотипом ОЭ сохранялась и по показателю содержания внутреннего жира (табл. 8). Табл. 8. Изменение содержания внутреннего жира в тушах свиней в

зависимости от генотипа по Н-РАВР

Генотип Содержание внутреннего жира

кг %

в среднем в %% к 00 в среднем в %% к 00

00 2,9+0,2 2,8±0,3

0<1 2,6+0,1 -9,2 2,0±0,1 -28,6*

сМ 2,7±0,1 -7,7 2,5+0,1 -10,0

* №8,0, р<0,01

Таким образом, по показателю толщины шпика и внутреннего жира выявлялась тенденция соотношения генотипов гена Н-РАВР - 00>Л/>М.

Выявленная тенденция пониженной жирности свиней, имеющих в генотипе аллель с], сохранялась и при исследовании содержания сала в туше исследуемых свиней после обвалки (рис. 7). Процентное содержание сала в тушах свиней с генотипами Ос) и с!с1 по сравнению с животными с генотипом 00 было ниже, соответственно, на 8,9 и 11,5% при увеличении доли мяса, соответственно, на 7,0 и 10,9%. Как и предполагалось, по содержанию костей существенных различий между группами выявлено не было.

Рис. 7. Морфологический состав туш свиней в зависимости от генотипа по Н-РАВР

На основании полученных данных можно сделать вывод, что по содержанию сала в туше свиней наблюдается соотношение генотипов 00>0с*>сИ, в то время как по содержанию мяса отмечается противоположная тенденция - сй>М>00.

Исследование взаимосвязи показателя толщины шпика с генотипами по гену Н-РАВР было так же выполнено на свиноматках уржумской породы ГПЗ «Мухинский» Кировской области (табл. 9).

Табл. 9. Изменение толщины шпика у свиней уржумской породы в зависимости от генотипа по Н-РАВР

Генотип Число голов Толщина шпика при живой массе 100 кг, мм

00 15 26,98+0,61

0(1 17 25,95±0,47

(1с) 2 26,70±0,30

р<0,05

Как следует из данных таблицы 9, наибольшая толщина шпика отмечалась у свиней с генотипом 00. У животных, несущих генотипы Ой и сЮ, уменьшение толщины шпика составляло, соответственно, 1,03 и 0,28 мм или 3,8 и 0,8%. Следует отметить, что лишь незначительное уменьшение толщины шпика у животных с генотипом с1с! может быть обусловлено недостаточным числом исследованных животных (п=2), в связи с чем рассчитанная нами толщина шпика не отражает средний показатель толщины шпика у животных с генотипом <М в популяции. На основании полученных результатов можно сделать вывод, что у свиней уржумской породы наблюдалась тенденция, аналогичная выявленным нами данным при исследовании помесных свиней ГПЗ «Заречье»: 00>сй>0с/.

Исследования толщины шпика у хряков уржумской породы в возрасте 12 и 24 месяцев показали, что уменьшение толщины шпика у животных с генотипом 0(1 по сравнению с генотипом 00 в возрасте 24-х месяцев составило 2,3 мм или 8,5% (р<0,05) (табл. 10).

Табл. 10. Толщина шпика у хряков уржумской породы в зависимости от генотипа по гену Н-РАВР в возрасте 12 и 24 месяцев

Показатель Воз- Генотип по гену Н-РАВР

раст, 00 0(1 (И

мес. п М±Мх п М+Мх п М±Мх

Толщина шпика, мм 12 8 27,6+1,2 1 27,0 1 29

24 3 27,0±2,0 3 24,7±2,2 1 29

р<0,05

Результаты анализа толщины шпика у свиноматок крупной белой породы ГПЗ «Никоновское» в возрасте 24-ех месяцев представлены в таблице 11.

Табл. 11. Толщина шпика свиноматок крупной белой породы ГПЗ вНиконовское» Московской обл.

Показатель Генотип по Н-РАВР

00* Ос)* йОНН й<1НН

Число голов 8 5 7 3

Толщина шпика, мм 25,8±1,2 24,7+0,7 26,0±1,6 24,5±1,5

* Группы сформированы без учета генотипа по Н-системе гена Н-РАВР.

Как следует из данных таблицы 11, наличие в генотипе свиноматок аллеля с! приводило к уменьшению толщины шпика на 1,1 мм или 4,2% (без учета генотипа по типу Н) и на 1,5 мм или 5,9% (у свиноматок, гомозиготных по аллелю Н). Таким образом, в данной популяции свиней подтверждалось уже выявленное нами ранее соотношение генотипов гена Н-РАВР по толщине шпика - 0£»Ш.

3.4.4. Анализ развития свиней.

Результаты анализа развития свиноматках крупной белой породы ГПЗ «Соколовка» Кировской области во взаимосвязи с генотипами по Н-РАВР суммированы в таблице 12.

Табл. 12. Развитие свиноматок крупной белой породы ГПЗ «Соколовка» в зависимости от генотипа по Н-РАВР.

Показатель Генотип по Н-РАВР

ЭЭ (п=4) [М (п=11) (И (п=12)

Возраст оценки, мес. 14,0+0,4 15,2±0,3 15,0±0,6

Живой вес, кг 186,8±5,1 188,5±3,3 191,4+2,5

Длина туловища, см 146,5±3,1 150,8+2,1 150,4±1,8

Как следует из данных таблицы 12, достоверных различий по показателям развития свиноматок с различными генотипами И-системы гена Н-РАВР выявлено не было.

В таблице 13 показаны данные развития хряков уржумской породы ГПЗ «Мухинский» в возрасте 12-ти и 24-х месяцев в зависимости от генотипа.

Табп. 13. Развитие хряков уржумской породы в зависимости от генотипа по гену Н-РАВР в возрасте 12 и 24 месяца

Показатель Воз- Генотип по гену Н-РАВР

раст, 00 0(1 (1(1

мес. п М±Мх п М±Мх п М+Мх

Живая масса, кг 12 16 196,2+7,3 8 185,0±5,1 3 183,0±6,7

24 8 310,3±8,0 5 296,0+9,4 2 291,0±9,0

Длина туловища., см 12 16 161,6±1,5 8 159,1+1,8 3 159,3±3,8

24 8 181,6±1,7 5 180,0+1,8 2 177,5±4,5

Возраст 100 кг, дн 19 216,6+3,3 9 240,6±14,6 3 235,4±3,3

Анализ данных таблицы 13 позволяет сделать вывод о тенденции повышения темпов роста хряков с генотипом Ой по сравнению с генотипами йс1 и сМ. Так, в возрасте 12 месяцев хряки с генотипом 00 превосходили хряков с генотипами 0<1 и <1(1, соответственно, на 6,1 и 7,2%, а в возрасте 24 месяцев - соответственно, на 4,8 и 6,6%. Хряки с генотипом 00 достигали живой массы 100 кг, соответственно, на 24 и 19 дней раньше по сравнению с хряками, имеющими генотипы 0(1 и ей.

Характеризуя показатели собственной продуктивности хряков уржумской породы в целом, следует отметить, что по темпам роста хряков в возрасте 12 и 24-х месяцев наблюдается следующее соотношение генотипов: 00>0(>сМ, в то время как по возрасту достижения живой массы 100 кг - сй>О0>Ос1.

3.4.5. Анализ продуктивности свиней.

Как и при исследовании селекционных признаков, описанных выше, однозначной зависимости показателей собственной продуктивности свиней от генотипа по Н-РАВР выявлено не было.

Так, по показателю многоплодия свиней уржумской породы в среднем по трем опоросам наблюдалось превосходство свиноматок с генотипом сМ по сравнению с генотипами 00 и 0с1, соответственно, на 1,4 и 1,5 поросенка на опорос (р<0,01). Хотя у синей крупной белой подобная тенденция сохранялась, различия между группами были менее выражены - соответственно, 0,7 и 0,3 поросенка на опорос (р<0,05).

Если по показателю молочности свиноматок уржумской породы различий между группами выявлено не было, то свиноматки крупной белой породы ГПЗ «Соколовка» с генотипами (1(1 и М имели более высокую молочность по сравнению со свиньями, имеющими генотип 00 - соответственно, на 7,9 и 5,1 кг. Молочность свиноматок с генотипом 0(1 в популяции свиней крупной белой породы из ГПЗ «Никоновское» превышала данный показатель у свиней с генотипом 00 на 5,6 кг (в исследовании участвовали только две группы свиней с генотипами 00 и 0(1).

По показателю веса гнезда в 60 дней, как у свиней уржумской породы, так и крупной белой породы наблюдалось превосходство свиноматок с генотипом с)с) над свиноматками, имеющими генотипы Ос1 и 00: в уржумской породе - соответственно, на 31,4 и 15,6 кг, в крупной белой породе - соответственно, на 6,9 и 8,3 кг. Если у свиней уржумской породы выявленные различия были обусловлены, с одной стороны, большим числом поросят в возрасте 60-ти дней (соответственно, на 1,3 и 0,4 поросенка на опорос), с другой стороны, большим весом одного поросенка (соответственно, на 1,4 и 0,9 кг), то у свиноматок крупной белой породы с генотипом

повышенный вес гнезда в 60 дней достигался, главным образом, за счет большего числа поросят (на 0,9 поросенка).

4. ВЫВОДЫ.

1. Пополнен банк ДНК 697 образцами, полученными от 8-ми популяций свиней трех пород (крупная белая, белая короткоухая, уржумская).

2. С помощью модификации ПЦР-ПДРФ анализа предложена методика диагностики полиморфизма гена белка, связывающего жирные кислоты (Н-РАВР) свиней, что позволило увеличить точность результатов и сократить временные затраты.

3. Выявлен полиморфизм по типам О и Н гена Н-РАВР у пород свиней: крупная белая, уржумская и белая короткоухая. Доли предпочтительных генотипов сМ и НН варьировали в зависимости от породы и составляли у свиней крупной белой породы от 71,9 до 100%, уржумской - 92,4% и белой короткоухой -89,8%.

4. Содержание внутримышечного жира у свиней с генотипом Ос)НН в среднем составляло 7,48±0,53%, в то время как у животных с генотипами ООНН и сМНН - соответственно, 6,75±0,42 и 6,44±0,50%.

5. Установлено снижение жирности туш у свиней, несущих аллель с1 гена Н-РАВР (сИ и Ш < ВО). Снижение толщины шпика, веса и процентного содержания внутреннего жира у помесных свиней с генотипом Ос1 составляло, соответственно, 4,5 мм, 0,3 кг и 0,8%, а у животных с генотипом сЮ -соответственно, 3,3 мм, 0,2 кг и 0,5% по сравнению с генотипом 00. Толщина шпика у свиноматок уржумской породы с генотипом Ос) уменьшилась ия 1,0 мм, а с генотипом сМ - 0,3 мм. Толщина шпика у свиноматок крупной белой породы с генотипом 0<1НН по сравнению с генотипом ООНН снизилась ^ 2,5 мм.

6. Выявлено уменьшение доли сала и увеличение доли мяса в тушах помесных свиней, несущих аллель с! гена Н-РАВР, по сравнению с генотипом 00. У свиней с генотипом 0(1 доля сала уменьшилась на 8,9 %, а доля мяса увеличилась на 7,0%, в то время как у животных с генотипом сМ уменьшение доли сала составило 11,5%, а увеличение доли мяса -10,9%.

7. Установлено превосходство по многоплодию у свиноматок с генотипом сМ по сравнению с генотипами 00 и 0(1. Многоплодие свиноматок уржумской породы с генотипом (М в среднем по трем опоросам было выше, соответственно, на 1,4 и 1,5 поросенка на опорос (р<0,01), а у свиноматок крупной белой породы -соответственно, на 0,7 и 0,3 поросенка на опорос (р<0,05).

8. Выявлена повышенная молочность свиноматок крупной белой породы, несущих аллель (1, по сравнению со свиньями, имеющими генотип 00. Свиноматки ГПЗ «Соколовка» с генотипами (1(1 имели более высокую молочность на 7,9 кг, а животные с генотипом 0(1 - на 5,1 кг. Молочность свиноматок с генотипом 0(1 ГПЗ «Никоновское» превышала данный показатель у свиней с генотипом 00 на 5,6 кг.

9. Установлено, что свиноматки с генотипом (1(1 превосходили по показателю веса гнезда в 60 дней свиноматок, имеющих генотипы Ос! и 00. Свиноматки уржумской породы с генотипом (1(1 имели более высокий вес гнезда по сравнению с животными с генотипами 0(1 и ОЭ, соответственно, на 31,4 и 15,6 кг, а животные крупной белой породы - соответственно, на 6,9 и 8,3 кг.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Лабораториям, занимающимся молекулярно-генетическими исследованиями свиней, рекомендуем использовать созданный нами банк ДНК свиней трех пород.

Для проведения диагностики полиморфизма гена Н-РАВР свиней рекомендуем использовать предложенные нами тест-системы.

6. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ.

1. Гладырь Е.А., Арсиенко Р.Ю., Мичурин В.П., Зыкунов Н.В., Фролкин Д.А., Карамчакова О.Н., Коновалова E.H., Зиновьева H.A. Использование маркерных генов в свиноводстве // Сборник материалов международной научной конференции «ДНК-технологии в клеточной инженерии и маркировании признаков сельскохозяйственных животных». - Дубровицы. - 2001. - С. 64-67.

2. Зиновьева H.A., Гладырь Е.А., Фролкин Д.А., Арсиенко Р.Ю., Зыкунов Н.П., Шмаков Ю.И., Костюнина О.В., Карамчакова О.В., Эрнст Л.К. Применение ДНК-диагностики для анализа генов-кандидатов локусов количественных признаков сельскохозяйственных животных II Сборник научных трудов ВИЖ «Животноводство - XXI век». Дубровицы. - 2001. - Вып. 61. -С. 225-228.

3. Арсиенко Р.Ю., Гладырь Е.А. Исследование полиморфизма гена H-FABP во взаимосвязи с хозяйственно-полезными признаками свиней II Сборник материалов международной научной конференции "Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных". - Дубровицы. - 2002. - С. 94-96.

Издательство РУЦ ЭБТЖ 142132, Московская обл., Подольский р-н, п. Дубровины Тел. (8-27) 65-14-24, (8-27) 65-14-07

Слано в набор 25.05.03. Подписано в печать 25 05.03 Заказ № 14. Уч.-изд л. 1,0. Тираж 100 экз.

гЛ 1 2 6 9

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Арсиенко, Роман Юрьевич

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Локусы количественных признаков (QTL) 8 2.1.1. QTL свиней.

2.2. Генетические маркеры (ДНК-маркеры).

2.3. Гены-кандидаты

2.3.1. Позиционные гены-кандидаты

2.3.2. Функциональные гены-кандидаты

2.4. Генное картирование

2.5. Сравнительное генное картирование

2.6. Маркер-зависимая селекция

2.7. Молекулярная генная диагностика 22 2.7.1. ДНК-диагностика в свиноводстве

2.8. Гены белков, связывающих жирные кислоты, как гены- 28 кандидаты содержания внутримышечного жира у свиней

2.8.1. Внутримышечный жир

2.8.2. Гены белков, связывающих жирные кислоты (FABP)

2.8.3. Полиморфизм генов H-FABP и A-FABP

2.8.4. Влияние полиморфизма генов H-FABP и A-FABP на 33 хозяйственно-полезные признаки свиней

Введение Диссертация по биологии, на тему "Полиморфизм гена белка, связывающего жирные кислоты (H-FABP), и его влияние на хозяйственно-полезные признаки свиней"

Актуальность темы.

На формирование продуктивности сельскохозяйственных животных оказывают влияние как генетические, так и средовые факторы. В этой связи, при традиционном отборе животных по фенотипическому проявлению признаков оценка истинного генетического потенциала животных может быть занижена.

С развитием молекулярной генетики и молекулярной биологии становится возможным идентификация генов, напрямую или косвенно связанных с хозяйственно-полезными признаками (геномный анализ) [Foster, 1997]. Выявление предпочтительных с точки зрения селекции вариантов таких генов позволит дополнительно к традиционному отбору животных, например, по уровню удоя, содержания жира и т.п., проводить селекцию непосредственно на уровне ДНК, то есть по генотипу (маркер-зависимая селекция).

Использование генетических маркеров локусов количественных признаков сельскохозяйственных животных и, в частности, свиней открывает новые перспективы в селекции. Селекция по генотипу имеет ряд преимуществ перед традиционными методами. Она не учитывает изменчивость хозяйственно-полезных признаков, обусловленную внешней средой, делает возможным селекцию в раннем возрасте независимо от пола животных и в конечном итоге повышает эффективность селекции. Селекция по генотипу способствует идентификации и быстрому введению предпочтительных аллелей из ресурсных популяций в популяции реципиентов с целью повышения продуктивности и устойчивости к заболеваниям улучшаемых пород животных. Оценка животных по генетическим маркерам, связанным с локусами количественных признаков (QTL), особенно важна для таких признаков, которые фенотипически выявляются относительно поздно или только у животных одного пола (например, молочная продуктивность), а также для тех признаков, на уровень проявления которых значительное влияние оказывают внешние факторы. [Зиновьева Н.А. и др., 2002].

Прежде чем внедрить использование генетических маркеров в селекцию животных, необходимо выполнить ряд мероприятий, таких как: (1) выделить спектр генов-кандидатов, которые могут служить молекулярно-генетическими маркерами QTL; (2) разработать тест-системы для анализа их аллельного полиморфизма; (3) определить частоты встречаемости аллельных вариантов данных генов у различных пород сельскохозяйственных животных; (4) провести корреляционные исследования и (5) оценить эффективность использования генетических маркеров в селекции.

Было выдвинуто предположение, что на рост и воспроизводство оказывают влияние более 100 локусов, при этом около 10 из них имеют относительно сильное влияние на соответствующий признак. В настоящее время уже установлена хромосомная локализация ряда QTL свиней, обуславливающих такие селекционные признаки, как энергия роста, жирность туши, качество мяса, плодовитость, иммунный ответ [Rothschild, Plastow, 1999].

Одними из важнейших селекционных признаков свиней являются мясная продуктивность и качество мяса. Так как эти признаки характеризуются негативной корреляцией, то преимущественная селекция свиней по мясности приводит к значительному ухудшению качества мяса. Селекция свиней по качеству мяса и мясной продуктивности традиционными методами затруднена из-за низкого коэффициента наследуемости признака. В этой связи, возникает необходимость в выявлении и использовании в селекции генетических маркеров, напрямую или косвенно связанных с качественными и количественными признаками мясной продуктивности.

В качестве возможных маркеров признаков мясной продуктивности и качества мяса свиней рассматриваются гены семейства связывающих белков жирных кислот (FABP). Один из генов этого семейства - H-FABP представляет большой интерес в качестве гена-кандидата содержания внутримышечного жира - важнейшего показателя, определяющего качество мяса, а также в качестве возможного генетического маркера снижения содержания жира в туше свиней [Gerbens et al., 1997].

Цель и задачи исследования.

Целью диссертационной работы являлось выявление полиморфизма гена белка, связывающего жирные кислоты (H-FABP), и установление его влияния на проявление хозяйственно-полезных признаков свиней различных пород.

Для достижения цели диссертационной работы были поставлены следующие задачи:

1. Пополнить банк ДНК свиней различных пород и популяций.

2. Усовершенствовать методику определения полиморфизма гена Н-FABP свиней на основе анализа ПЦР-ПДРФ.

3. Установить частоты встречаемости аллелей и генотипов гена Н-FABP у различных пород и популяций свиней России.

4. Провести анализ взаимосвязи генотипов гена H-FABP с содержанием внутримышечного жира.

5. Провести анализ взаимосвязи полиморфных вариантов гена H-FABP с рядом хозяйственно-полезных признаков свиней.

Научная новизна.

Предложена методика определения аллельных вариантов гена H-FABP у различных пород свиней РФ. Определены частоты встречаемости аллелей и генотипов гена H-FABP у шести популяций трех пород свиней, разводимых в Российской Федерации. Изучено влияние вариантов исследуемого гена на содержание внутримышечного жира и другие хозяйственно-полезные признаки свиней.

Практическая ценность работы.

Пополнен банк ДНК свиней различных пород и созданы базы данных хозяйственно-полезных признаков свиней трех пород. Предложена методика выявления аллельных вариантов гена H-FABP для проведения популяционно-генетических исследований. Показана связь генотипа DD гена H-FABP с большей толщиной шпика и повышенным содержанием жира в тушах свиней.

Основные положения, выносимые на защиту.

• Создан банк ДНК свиней трех пород (крупная белая - 6 популяций, белая короткоухая, уржумская).

• Предложен усовершенствованный метод выявления полиморфных вариантов гена H-FABP свиней.

• Выявлены различия в частотах встречаемости аллелей и генотипов исследуемого гена у свиней трех пород.

• Установлены тенденции влияния генотипов H-FABP на проявление хозяйственно-полезных признаков свиней.

Структура и объем работы.

Диссертация написана на 97 страницах, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методика исследований, результаты исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы. Работа включает 27 таблиц и 11 рисунков. Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 3 научные работы. Апробация работы.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Арсиенко, Роман Юрьевич

5. ВЫВОДЫ.

2. С помощью модификации ПЦР-ПДРФ анализа предложена методика диагностики полиморфизма гена белка, связывающего жирные кислоты (H-FABP) свиней, что позволило увеличить точность результатов и сократить временные затраты.

3. Выявлен полиморфизм по типам D и Н гена H-FABP у пород свиней: крупная белая, уржумская и белая короткоухая. Доли предпочтительных генотипов dd и НН варьировали в зависимости от породы и составляли у свиней крупной белой породы от 71,9 до 100%, уржумской - 92,4% и белой короткоухой - 89,8%.

4. Содержание внутримышечного жира у свиней с генотипом DdHH в среднем составляло 7,48±0,53%, в то время как у животных с генотипами DDHH и ddHH - соответственно, 6,75±0,42 и 6,44±0,50%.

5. Установлено снижение жирности туш у свиней, несущих аллель d гена H-FABP (dd и Dd < DD). Снижение толщины шпика, веса и процентного содержания внутреннего жира у помесных свиней с генотипом Dd составляло, соответственно, 4,5 мм, 0,3 кг и 0,8%, а у животных с генотипом dd - соответственно, 3,3 мм, 0,2 кг и 0,5% по сравнению с генотипом DD. Толщина шпика у свиноматок уржумской породы с генотипом Dd уменьшилась на 1,0 мм, а с генотипом dd - на 0,3 мм. Толщина шпика у свиноматок крупной белой породы с генотипом DdHH по сравнению с генотипом DDHH снизилась на 2,5 мм.

6. Выявлено уменьшение доли сала и увеличение доли мяса в тушах помесных свиней, несущих аллель d гена H-FABP, по сравнению с генотипом DD. У свиней с генотипом Dd доля сала уменьшилась на 8,9%, а доля мяса увеличилась на 7,0%, в то время как у животных с генотипом dd уменьшение доли сала составило 11,5%, а увеличение доли мяса - 10,9%.

7. Установлено превосходство по многоплодию у свиноматок с генотипом dd по сравнению с генотипами DD и Dd. Многоплодие свиноматок уржумской породы с генотипом dd в среднем по трем опоросам было выше, соответственно, на 1,4 и 1,5 поросенка на опорос (р<0,01), а у свиноматок крупной белой породы - соответственно, на 0,7 и 0,3 поросенка на опорос (р<0,05).

8. Выявлена повышенная молочность свиноматок крупной белой породы, несущих аллель d, по сравнению со свиньями, имеющими генотип DD. Свиноматки ГПЗ «Соколовка» с генотипами dd имели более высокую молочность на 7,9 кг, а животные с генотипом Dd - на 5,1 кг. Молочность свиноматок с генотипом Dd ГПЗ «Никоновское» превышала данный показатель у свиней с генотипом DD на 5,6 кг.

9. Установлено, что свиноматки с генотипом dd превосходили по показателю веса гнезда в 60 дней свиноматок, имеющих генотипы Dd и DD. Свиноматки уржумской породы с генотипом dd имели более высокий вес гнезда по сравнению с животными с генотипами Dd и DD, соответственно, на 31,4 и 15,6 кг, а животные крупной белой породы -соответственно, на 6,9 и 8,3 кг.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Для проведения диагностики полиморфизма гена H-FABP свиней рекомендуем использовать предложенные нами тест-системы.

2.9. Заключение.

Приведенный в настоящем разделе анализ литературных данных показывает, что генные карты и карты сцепления сельскохозяйственных животных, и в частности свиней, становятся с каждым годом все более плотными, что уже в ближайшем будущем позволяет прогнозировать идентификацию генетических маркеров и выявление предпочтительных с точки зрения селекции аллелей для каждого QTL. Учитывая преимущества селекции с использованием генетических маркеров, можно предположить, что маркер-зависимая селекция наряду с традиционными методами станет неотъемлемой частью селекционной работы в животноводстве.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Реактивы и оборудование.

Реактивы

Название Фирма Страна

• 1. Агароза LifeTechnologies США

2. Бромид димидия Boehringer Германия

3. Додеци л сульфат натрия (SDS) Serva США

4. Дитиотреитол (ДТТ) Boehringer Германия

5. Изоамиловый спирт Merk Германия

6. Минеральное масло ICN США

7. Протеиназа К Диа-М Россия

8. Смесь дНТФ СибЭнзим Россия

9. Соляная кислота Merk Германия

Ю.Сульфат аммония Merk Германия

11 .Taq-полимераза Диалат Россия

12.Твин-20 Диа-М Россия

13.Трис-НС1 Roth Германия

14.Уксусная кислота Merk Германия

15.Хлорид натрия ДиаМ Россия

16.Хлорид магния Merk Германия

17.Хлороформ Roth США

18.Цитрат натрия ДиаМ Россия

19.Этилендиамидтетрауксусная Amersham Великобритания кислота (ЭДТА)

Оборудование.

Название Фирма Страна

1. Амплификатор Cyclotemp CTM Россия

2. Амплификатор Amply 4L-50 Biokom Россия

3. Бидистиллятор Millipore Франция

4. Водяная баня

5. Источник тока

6. Источник ультрафиолетового света

7. Прибор для горизонтального электрофореза

8. Термостат

9. Центрифуга для пробирок типа Eppendorf

Биоком

Eppendorf

Биоком

Bio-Rad

Биоком

Россия

США

Для работы использовали 0,5 и 1,5 мл пробирки типа Eppendorf фирмы Биоком (Россия), одноразовую пластиковую посуду (Costar, США). Все растворы готовили на бидистиллированной диионизированной воде, очищенной на приборе Millia (Millipore).

3.2. Животные.

Для пополнения банка ДНК были отобраны пробы и выделена ДНК от свиней 6-ти популяций крупной белой породы из следующих племенных хозяйств: ГПЗ «Большое Алексеевское», ГПЗ «Никоновское», ГПЗ «Талдом» Московской области, ГПЗ «Соколовка» Кировской области, ГПЗ «Индустрия» Могилевской области и ГПЗ «Заднепровский» Витебской области; белой короткоухой породы из ГПЗ «Сампурский» Тамбовской области; уржумской породы из ГПЗ «Мухинский» Кировской области.

Исследования проводили по схеме, представленной на рисунке 3.

3.3. Отбор, хранение проб и выделение ДНК.

От опытных животных отбирали пробы кожи уха или пробы крови. Пробы крови консервировали путем добавления кислого нитратного раствора (ACD), добавляя на каждые 6 объемов крови 1 объем ACD [Gustavson et al., 1987, Зиновьева и др., 1998]. Пробы ткани непосредственно после их взятия замораживали при температуре -20°С и хранили в таком состоянии до момента использования.

Рисунок 3. Схема исследований.

Отбор проб выделение ДНК

Создание банка ДНК

Создание баз данных

Помесные свиньи, п=41

Белая Короткоухая, п=36

Крупная белая, п=483

Уржумская, п=178

Частоты аллелей

Частоты генотипов

Частоты аллелей

Частоты генотипов D

Q Q S

ТЗ Н

Анализ взаимосвязи с признаками продуктивности свиней

Содержание внутримышечного жира

Толщина шпика

Собственная продуктивность

Морфологический состав туш

Вес и процент внутреннего жира

РОССИЙСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ БИБЛИОТЕКА

ДНК выделяли посредством солевой экстракции, лизиса в буфере Кавасаки или перхлоратным методом с модификациями [Зиновьева и др., 1998; Гладырь и др. 2001]. Качество очистки и концентрацию выделенной ДНК определяли по методике Зиновьевой и др. [1998].

3.4. ПЦР-ПДРФ анализ гена H-FABP.

Реакции проводили в конечном объеме 25 мкл с 1 х ПЦР буфером (16,6 мМ (NH4)2S04; 67,7 мМ Трис - НС1, рН = 8,8; 0,1 (v/v) Tween 20), 1,5 мМ MgC12, 200мкМ диоксинуклеозидтрифосфатов, 30 пмоль каждого из праймеров и 1 Ед Taq - полимеразы.

Последовательности праймеров, используемых для ПЦР, представлены в таблице 6.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Арсиенко, Роман Юрьевич, п. Дубровицы, Московской обл.

1. Гладырь Е.А., Зиновьева Н.А., Попов А.Н., Марзанов Н.С., Эрнст Л.К., Брем Г. Методические рекомендации по определению вариантов каппа-казеина и бета-лактоглобулина крупного рогатого скота методом ПЦР-ПДРФ анализа // Дубровицы, 2001, 15 с.

2. Дрозденко Н.П., Калинин В.В., Раецкая Ю.И. Методические рекомендации по химическим и биохимическим исследованиям продуктов животноводства и кормов // Дубровицы, 1981, 86 с.

3. Зиновьева Н.А., Попов А.Н., Эрнст Л.К., Марзанов Н.С., Бочкарев В.В., Стрекозов Н.И., Брем Г. Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве // Дубровицы, 1998, 47 с.

4. Зиновьева Н.А., Гладырь Е.А., Эрнст Л.К., Брем Г. Введение в молекулярную генную диагностику сельскохозяйственных животных //ВИЖ, 2002, 112 с.

5. Кольман Я., Рем К.-Г. Наглядная биохимия // М.: Мир, 2000, с. 122.

6. Лабан Н.А., Василюк О.Я., Зиновьева Н.А., Гладырь Е.А. оценка стрессоустойчивости свиней различными методами // Вестник аграрной науки Причерноморья, 2002b, Вып. 3(17), с. 146-150.

7. Марзанов Н.С., Фролкин Д.А., Зиновьева Н.А., Попов А.Н., Данилин А.В., Брем Г. RYRl-ген у свиней отечественных и зарубежных пород // Доклады РАСХН, 2001, № 1, с. 34-36.

8. Меркурьева Е.К., Абрамова З.В., Бакай А.В., Кочиш И.И. Генетика // Учебник для студентов вузов по специальности "Зоотехния" М., Агропромиздат, 1991,446 с.

9. Рыжова Н.В., Калашникова Л.А. Скрининг RYR-гена свиней скороспелой мясной породы // Сборник материалов международной научной конференции «Молекулярно-генетические маркеры животных», Киев, 1999, С. 21-22

10. Рыжова Н.В., Калашникова Л.А. ДНК-диагностика стрессчувствительности свиней скороспелой мясной породы Диагностика полиморфных вариантов RYRl-гена. // Вестник РАСХН, 2000, N1, С. 68-71

11. Рыжова Н.В., Калашникова JI.A., Новиков А.А. Частота встречаемости мутантного аллеля RYRl-гена в популяциях свиней крупной белой породы // Доклады РАСХН, 2001, N 6, С. 31-35

12. Фролкин Д.А. Скрининг гена злокачественного гипертермического синдрома (MHS) у свиней // Автореф. канд. дисс., ВИЖ, 2000.

13. Andersson-Eklund L., Marklund L., Lundstrom K., Haley C.S., Andersson K., Hansson I., Moller M., Andersson L. Mapping quantitative trait loci for carcass and meat quality traits in a wild boar x Large White intercross // J Anim Sci., 1998, 76, 694-700.

14. Band M.R., Larson J.H., Rebeiz M, Green CH.A., Heyen D.W., Donovan J., Windish R., Steining CH., Mahyuddin P., Womack J.E., Lewin H.A. An ordered comparative map of the cattle and human genomes // Genome Res., 2000, 10, 1359-1368.

15. Barendse W., Vaiman D., Kemp S.J., Sugimoto Y., Armitage S.M., Williams J.L., Sun H.S., Eggen A., Agaba M., Aleyasin S.A., Band M., Bishop M.D., Buitkamp J., Byrne K., Collins F., Cooper L., Coppettiers

16. W., Denys В., Drinkwater R.D., Eastereday K., Elduque C., Ennis S., Erhardt G., Li L., Lil L. A medium-density genetic linkage map of the bovine genome // Mamm. Genome, 1997, 8, 21-28.

17. Bishop M.D., Kappes S.M., Keele J.W., Stone R.T., Sunden S.L., Hawkins G.A., Toldo S.S., Fries R., Grosz M.D., Yoo J.A. A genetic linkage map for cattle//Genetics, 1994, 136,619-639.

18. Brem G., Brenig B. Molekulare Genotyp-Diagnostik des Malignen Hyperthermic-Syndroms zur effizienten Zucht stressresistenter Schweine // Wien. Tierarztl. Msch., 1992, 79, 301-305.

19. Brenig В., Brem G. Molecular cloning and analysis of the porcine 'Halothane' gene // Arch. Anim. Breed., 1992, 35, 129-135.

20. Brunner R.M., Henke M., Guerin G., Goldammer Т., Seyfert H.M., Schwerin M. The macrophage expressed variant of the bovine lysozyme-encoding gene maps to chromosome 5q23 // Mamm. Genome 1994, 5, 834.

21. Carey J.O., Neufer P.D., Farrar R.P., Veerkamp J.H., Dohm G.L. Transcriptional regulation of muscle fatty acid-binding protein // Biochem J., 1994, 298, Pt 3, 613-617.

22. Casas E., Prill-Adams A., Price S.G., Clutter A.C., Kirkpatrick B.W. Relationship of growth hormone and insulin-like growth factor-1 genotype with growth and carcass traits in swine // Anim. Genet., 1997a, 28, 88-93.

23. Casas E., Prill-Adams A., Price S.G., Clutter A.C., Kirkpatrick B.W. Mapping genomic regions associated with growth rate in pigs // J. Anim. Sci., 1997b, 75,2047-2053.

24. De Koning D.J., Janss L.L.J., Van Arendonk J.A.M., Van Oers P.A.M., Groenen M.A.M. Mapping major genes affecting meat quality in meishan cross breds using standard linkage software // Proc. 6th World Cong. Genet. Appl. Livest. Prod., 1998, 26, 410.

25. Emnett R., Moeller S., Irvin K., Rothschild M., Plastow G., Goodwin R. Association Studies with Heart Fatty Acid Binding Protein-1 and Calpastatin // The Ohio state university Bulletin: Research and Reviews: Swine 2001, Special Circular 185-01, 2001.

26. Foster M. Genomanalyse // Tierzucht und allgemeine Landwirtschaftslehre fur Tiermediziner. Herausgegeben von KrauBlich H, Brem G., Enke Verlag, 1997, S. 77-109.

27. Fujii J., Otsu K., Zorzato F., De Leon S., Khanna V.K., Weiler J.E., O'Brien P.J., Maclennan D.H. Identification of a mutation in porcine ryanodine receptor associated with malignant hyperthermia // Science, 1991,253,448-451.

28. Geldermann H., Mtiller E., Beeckmann P., Knorr C., Yue G., Moser G. Mapping of quantitative trait loci by means of marker genes in F2 generations of wild boar Pietrain and Meishan pigs // J Anim Breed Genet., 1996, 113,381-387.

29. Georges M., Massey J.M. Velogenetics, or the synergistic use of marker assisted selection and germ-line manipulation // Theriogenology, 1991, 35, 151-159.

30. Gerbens F., Rettenberger G., Lenstra J.A., Veerkamp J.H., Те Pas M.F. Characterization, chromosomal localization, and genetic variation of theporcine heart fatty acid-binding protein gene // Mamm. Genome, 1997, 8, 328-332.

31. Gerbens F., Harders F.L., Groenen M.A., Veerkamp J.H., Те Pas M.F. A dimorphic microsatellite in the porcine H-FABP gene at chromosome 6 // Anim Genet., 1998a, 29(5), 408.

32. Gerbens F., Verburg F.J., Van Moerkerk H.T., Engel В., Buist W., Veerkamp J.H., Те Pas M.F. Associations of heart and adipocyte fatty acid-binding protein gene expression with intramuscular fat content in pigs //J Anim Sci., 2001, 79(2), 347-354.

33. Glatz J.F., van der Vusse G.J. Intracellular transport of lipids // Mol Cell Biochem., 1989, 88(1-2), 37-44.

34. Glatz J.F., Borchers Т., Spener F., van der Vusse G.J. Fatty acids in cell signalling: modulation by lipid binding proteins // Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids, 1995, 52(2-3), 121-127.

35. Glatz J.F., Luiken J.J., van Nieuwenhoven F.A., Van der Vusse G.J. Molecular mechanism of cellular uptake and intracellular translocation of fatty acids // Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids, 1997, 57(1), 3-9.

36. Grindflek E., Szyda J., Liu Z., Lien S. Detection of quantitative trait loci for meat quality in a commercial slaughter pig cross // Mamm. Genome., 2001, 12, 299-304.

37. Grunwald K. A., Schuler K., Ulmen P.J., Lipton B.A., Kaiser M., Buhman K., Attie A. D. Identification of a novel Arg—>Cys mutation in the LDL receptor that contributes to spontaneous hypercholesterolemia in pigs // J. Lipid Res., 1999, 40,475-485.

38. Gu Z.X., Womack J.E., Kirkpatrick B.W. Synteny mapping of four genes from the short arm of human chromosome 19 to bovine chromosome 7 // Cytogenet. Cell Genet., 1997, 79, 225-227.

39. Gustafson S., Proper J.A., Bowie E.J.W., Sommer S.S. Parameters affecting the yield of DNA from human blood // Anal. Biochem., 1987, 165, 294-296.

40. Guthmann F., Hohoff C., Fechner H., Humbert P., Borchers Т., Spener F., Rustow B. Expression of fatty-acid-binding proteins in cells involved in lung-specific lipid metabolism // Eur J Biochem., 1998, 253(2), 430-436.

41. Hasler-Rapacz J., Kempen H.J., Princen H.M., Kudchodkar B.J., Lacko A., Rapacz J. Effects of simvastatin on plasma lipids and apolipoproteins in familial hypercholesterolemic swine // Arterioscler Thromb Vase Biol., 1996, 16(1), 137-143.

42. Hawken R.J., Murtaugh J., Flickinger G.H., Yerle M., Robic A., Milan D., Gellin J., Beattie C.W., Schook L., Alexander L.J. A first-generationporcine whole-genome radiation hybrid map // Mamm. Genome, 1999, 10, 824-830.

43. Henke M., Hobom G., Senft В., Seyfert H.M. Structural deviations in a bovine low expression lysozyme-encoding gene active in tissues other than stomach//Gene, 1996, 178, 131-137.

44. Janss L.L., van Arendonk J.A., Brascamp E.W. Bayesian statistical analyses for presence of single genes affecting meat quality traits in a crossed pig population//Genetics, 1997, 145(2), 395-408.

45. Jefreys A.J., Wilson V., Thein S.L. Individual-specific 'fingerprints' of human DNA, Nature, 1985, 316, 76-79.

46. Jiang Z.H., Gibson J.P. Genetic polymorphisms in the leptin gene and their association with fatness in four pig breeds // Mamm Genome, 1999, 10(2), 191-193.

47. Kijas J.M., Juneja R.K., GafVert S., Andersson L. Detection of the causal mutation for canine leukocyte adhesion deficiency (CLAD) using pyrosequencing // Anim Genet., 2000, 31(5), 326-328.

48. Knorr C., Moser G., Mtiller E., Geldermann H. Associations between GH gene variations with performance traits in F2 generations of European Wild Boar, Pietrain and Meishan Pigs // Anim. Genet., 1997,28, 124-128.

49. Kwok P.Y., Deng Q., Zakeri H., Taylor S.L., Nickerson D.A. Increasing the information content of STS-based genome maps: identifying polymorphisms in mapped STSs// Genomics, 1996, 31, 123-126.

50. Leitch A.R., Schwarzacher Т., Jachson D., Leitch I.J. Microscopy Handbooks 27: In situ hybridization. BIOS Scientific Publishers, Oxford, 1994, 68-70.

51. Lenstra J.A., Van Boxtel J.A., Zwaagstra K.A., Schwerin M. Short interspersed nuclear element (SINE) sequences of the Bovidae. Anim. Genet, 1993, 24,33-39.

52. Lin W.H., Huang L.S., Ren J., Deng S.H., Wang W.J., Liu B.S., Zhou L.H., Chen C. Y. Research on genetic variation of heart fatty acid-binding protein gene in ten pig breeds // Yi Chuan Xue Bao, 2002, 29(1), 12-15.

53. Meadus W.J., Maclnnis R., Robertson W.M. Evaluation of the genetic markers: HFABP and AFABP in the control of marbling fat in pork // Advances in Pork Production, 2001, 12, Abstr. 2.

54. Messer L., Wang L., Yelich J., Pomp D., Geisert R., Rothschild M.F. Linkage mapping of the retinoic acid receptor-gamma gene to porcine chromosome 5 //Anim. Genet., 1996a, 27, 175-177.

55. Messer L., Wang L., Legault C., Rothschild M.F. Mapping and investigation of candidate genes for litter size in French Large White pigs. Anim. Genet., 1996b, 27 (Suppl. 2), 114.

56. Messer L., Wang L., Yelich J., Pomp D., Geisert R., Rothschild M.F. Linkage mapping of the retinol-binding protein 4 (RBP4) gene to porcine chromosome 14 // Mamm. Genome, 1996c, 7, 396.

57. Molenaar A.J., Davis S.R., Wilkins R.J. Expression of alpha-lactalbumin, alpha-S 1 -casein, and lactoferrin genes is heterogeneous in sheep and cattle mammary tissue // J.Histochem. Cytochem., 1992,40, 611-618.

58. Moore S.S., Byrne K., Berger K.T., Barendse W., McCarthy F., Womack J.E., Hetzel D.J. Characterization of 65 bovine microsatellites // Mamm. Genome, 1994, 5, 84-90.

59. Nechtelberger D., Pires V., Soolknet J., Stur I., Brem G., Mueller M., Mueller S. Intramuscular fat content and genetic variants at fatty acidbinding protein loci in Austrian pigs // J Anim Sci., 2001, 79(11), 27982804.

60. Nezer C., Moreau L., Brouwers В., Coppieters W., Dettilleux J., Hanset R., Karim L., Kvasz A., Leroy P., Georges M. An imprinted QTL with major effect on muscle mass and fat deposition maps to the IGF2 locus in pigs // Nat. Genet., 1999, 21, 155-156.

61. Nicholas F.W. Introduction to Veterinary Genetics. Oxford University Press, Oxford, New York, Tokyo, 1996, 19-21, 34, 69-71, 254, 270.

62. Nielsen V.H., Larsen N.J., Ageraard N. Association of DNA polymorphism in the growth hormone gene with basal plasma growth hormone concentration and production traits in pigs. J. Anim. Breeding and Genet., 1995, 112, 205-221.

63. Nielsen V.H., Davoli R., Korsgaard I.R., Thomsen В., Bigi D., Ruso V. Association of a DNA Polymorphism in the aminopepitdase N (ANPEP) locus with production traits in pigs // Anim. Genet., 1996, 27 (Suppl. 2), 115.

64. Ovilo, C.M., Perez-Enciso M., Barragan C., Clop A., Rodriguez C., Oliver M.A., Того M.A., Noguera J.L. A QTL for intramuscular fat and backfat thickness is located on porcine chromosome 6 // Mamm. Genome, 2000b, 11,344-346.

65. Ovilo C., Oliver A., Noguera J.L., Clop A., Barragan C., Varona L., Rodriguez С., Того M., Sanchez A., Perez-Enciso M., Silio L. Test for positional candidate genes for body composition on pig chromosome 6 // Genet Sel Evol., 2002, 34(4), 465-479.

66. Owada Y., Yoshimoto Т., Kondo H. Spatio-temporally differential expression of genes for three members of fatty acid binding proteins indeveloping and mature rat brains I I J. Chem Neuroanat., 1996, 12(2), 113122.

67. Paszek A.A., Wilkie P.J., Flickinger G.H., Rohrer G.A., Alexander L.J., Beattie C.W., Schook L.B. Interval mapping of growth in divergent swine cross//Mamm Genome, 1999,10, 117-122.

68. Prinsen C.F., Veerkamp J.H. Transfection of L6 myoblasts with adipocyte fatty acid-binding protein cDNA does not affect fatty acid uptake but disturbs lipid metabolism and fusion // Biochem J., 1998, 15, 329 (Pt 2), 265-273.

69. Rathje T.A., Rohrer G.A., Johnson R.K. Evidence for quantitative trait loci affecting ovulation rate in pigs // J Anim Sci., 1998, 75,1486-1494.

70. Rebeiz M., Lewin H.A. COMPASS of 47787 cattle ESTs // Anim. Biotechnol., 2000, 11, 75-241.

71. Rexroad C.E., Owens E.K., Johnson J.S., Womack J.E. A 12000 rad whole genome radiation hybrid panel for high resolution mapping in cattle // Anim. Genet., 2000, 31,262-265.

72. Richardson K.K., Crosby R.M., Good P.J., Rosen N.L., Mayfield J.E. Bovine DNA contains a single major family of interspersed repetitive sequences // Eur. J. Biochem., 1986, 154, 349-354.

73. Rohrer G.A. Identification of quantitative trait loci affecting birth characters and accumulation of backfat and weight in a Meishan-White Composite resource population // J Anim Sci., 2000, 78, 2547-2553.

74. Rohrer G.A, Keele J.W. Identification of quantitative trait loci affecting carcass composition in swine: I. Fat deposition traits // J Anim Sci., 1998a, 76, 2247-2254

75. Rohrer G.A, Keele J.W. Identification of quantitative trait loci affecting carcass composition in swine: II. Muscling and wholesale product yield traits //J Anim Sci., 1998b, 76, 2255-2262.

76. Rothschild M.F., Messer L., Day A., Wales R., Short Т., Southwood O., Plastow G. Investigation of the retinol-binding protein 4 (RBP4) gene as acandidate gene for increased litter size in pigs // Mamm. Genome, 2000, 11,75-77.

77. Rothschild M.F., Liu H.C., Tuggle C.K., Yu T.P., Wang L. Analysis of pig chromosome 7 genetic markers for growth and carcass performance traits // J Anim Breed Genet., 1995, 112, 341-348.

78. Rothschild M.F., Plastow G.S. Advances in pig genomics and industry applications // AgBiotechNet 1999, 1, ABN 007

79. Saiki R.K., Gelfand D.H., Stoffel S., Scharf S.J., Higuchi R., Horn G.T., Mullis K.B., Erlich H.A. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA-polimerase // Science, 1988, 239,487-491.

80. Schwerin M. Struktur und Funktion von Genen beim Nutztier // In: 18. Hiilsenberger Gesprache 2000, Weimar, 2000, 28-34.

81. Stancekova K., Vasicek D., Peskovicova D., Bulla J., Kubek A. Effect of genetic variability of the porcine pituitary-specific transcription factor (PIT-1) on carcas traits in pigs // Anim. Genet., 1999, 30(4), 313-315.

82. Steinhoff U.M., Senft В., Seyfert H.M. Lysozyme-encoding bovine cDNAs from neutrophile granulocytes and mammary gland are derived from a different gene than stomach lysozymes // Gene, 1994, 143, 271276.

83. Soumillion A., Erkens J.H., Lenstra J.A., Rettenberger G., Те Pas M.F. Genetic variation in the porcine myogenin gene locus // Mamm. Genome, 1997a, 8(8), 564-568.

84. Soumillion A., Rettenberger G., Vergouwe M.N., Erkens J.H., Lenstra J.A., Те Pas M.F. Assignment of the porcine loci for MYOD1 to chromosome 2 and MYF5 to chromosome 5 // Anim Genet., 1997b, 28(1), 37-38.

85. Tautz D. Hypervariability of simple sequences as a general source for polymorphic DNA markers //Nucleic. Acids. Res., 1989,17, 6463-6471.

86. Те Pas M.F.W., Soumillion A., Rettenberger G., Van Den Bosch T.J., Veninga G., Meuwissen, T.H.E. Characterization of the porcine myogenin gene locus and association between polymorphisms and growth traits // Anim. Genet., 1996, 27 (Suppl. 2), 117.

87. Urban Т., Mikolasova R., Kuciel J., Ernst M., Ingr I. A study of associations of the H-FABP genotypes with fat and meat production of pigs // J. Appl. Genet., 2002,43(4), 505-509.

88. Wada Y., Akita Т., Awata Т., Furukawa Т., Sugai N., Inage Y., Ishii K., Ito Y., Kobayashi E., Kusumoto H., Matsumoto Т., Mikawa S., Miyake M., Murase A., Shimanuki S., Sugiyama Т., Uchida Y., Yanai S., Yasue H.

89. Quantitative trait loci (QTL) analysis in a Meishan x Gottingen cross population I I Anim Genet., 2000, 31, 376-384.

90. Wang L., Yu T.P., Tuggle C.K., Liu H.G., Rothschild M.F. A directed search for quantitative trait loci on chromosomes 4 and 7 in the pig // J Anim Sci., 1998, 76, 2560-2567.

91. Womack J. E., Johnson J.S., Owens E.K., Rexroad C.E., Schlaepfer J., Yang Y.P. A whole-genome radiation hybrid panel for bovine gene mapping // Mamm. Genome, 1997, 8, 854-856.

92. Yu T.-P., Tuggle C.K., Schmitz C.B., Rothschild M.F. Association of PITI polymorphisms with growth and carcass traits in pig // J. Anim. Sci., 1995, 73, 1282-1288.

93. Yu T.-P., Wang L., Tuggle C.K., Rothschild M.F. Mapping genes for fatness and growth on pig chromosome 13: A search in the region close to the pig PITI gene // J. Anim. Breed. Genet., 1998, 116, 269-280.

94. Zhao, Y. F., Li N., Chen Y., Wu Ch. X. Preliminary research on RFLP's of the FSH beta subunit gene // Acta Vet. Zootech. Sinica, 1998, 29, 23-26.

95. Zimmerman A.W., Veerkamp J.H. Members of the fatty acid-binding protein family inhibit cell-free protein synthesis // FEBS Lett., 1998, 437(3), 183-186.

96. Zschiesche W., Kleine A.H., Spitzer E., Veerkamp J.H., Glatz J.F. Histochemical localization of heart-type fatty-acid binding protein in human and murine tissues//Histochem Cell Biol., 1995, 103(2), 147-156.

Информация о работе

Арсиенко, Роман Юрьевич
кандидата биологических наук
п. Дубровицы, Московской обл., 2003
ВАК 03.00.23

Диссертация

Полиморфизм гена белка, связывающего жирные кислоты (H-FABP), и его влияние на хозяйственно-полезные признаки свиней - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы