Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Поиск новых штаммов молочнокислых и бифидобактерий, эффективных при лечении дисбактериоза

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Поиск новых штаммов молочнокислых и бифидобактерий, эффективных при лечении дисбактериоза"

НАЦИОНАЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ЯБСТЙТУТ ЖШРОШОЛОГШ Я ВИРУСОЛОГИИ

РГ б

Л

^ Ей правах рукописи

ГОРЕЛОВА ВИКТОРИЯ ВЛАДИМИРОВЕ*

ПОИСК НОВЫХ ШТАММОВ МОЛОЧНОКИСЛЫХ И БИФИДОБАКТЕРИИ» ЭФФЕКТИВНЫХ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ДИСБАКТЕРИОЗА

03.00.0? - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Алматы - 1994

Работа выполнена в Институте микробиологии и вирусологии HAH PK. Отдельные этапы работы проведены в Национальном центре региональных проблем питания HAH PK.

Научные руководители: доктор биологических наук -ЕЕ Гаврилова доктор медицинских наук - Л. Е, Калаыкарова

Ведущая организация: Алматинский вооветеринарвый институт

Официальные оппоненты: доктор биологических наук - И. Г. Саубенова кандидат медицинских наук - к. И. Бела лова

Эаияа диссертации состоится _" ■ 1994 г.

в _ часов на заседании специализированного совета

Л 5а 24.01 при институте микробиологии и вирусологии HAH PK по адресу: 480100, Алмазы, уд Вогенбай батыра, 10&

С диссертацией дояно ознакомиться в библиотеке Института микробиологии и вирусологии HAH PK.

Авгорефэрат разослан "_и _ 1994 г.

Ученый секретарь специализированного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблем В настоящее время все чаде наблюдаются нарушения нормального соотношения микроорганизмов аутсфю-ры человека, вызванный тагами неблагоприятными факторами, как загрязнение окружавдэй среды, возрастание стрзссовых вовдейс-твий, широкое и бесконтрольное использование антибиотиков и хи-миогерапевтических препаратов, нерациональное питание и др.

Еалячда дисбактериоза создает неблагоприятный фон для течения различных заболеваний инфекционной и неинфекционной природы, отрицательно сказывается на эйюгегквносги лечения и становится причиной эндогенных и внутрибольничных кпфекдай, сепсиса

В связи с возрастающей частотой выделения лекарегвеняоус-тойчивых фэрм патогенных микроорганизмов клиницисты все чацэ обращается к схемам терапии желудочно-кишечных заболеваний с максимальным ограничением антибиотиков. Ш сиену последки« приходят средства, регулирупцие кишечный микробиоценоз. Наиболее физиологичными средствами коррекционного воздействия по праву считаются бактерийные биопрепараты из нивых микроорганизмов, являющихся облигатной флорой желудочно-кишечного тракта (Ш) эдорового человека и обвадащих выраженной антагонистической активность» в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Эубиотическиэ препараты, изготовляемые на основе молочнокислых бактерий и других симбионтов Ж5Т. в отличие от хкмиоте-рапевтичзских препаратов, осуществляю биологическую регуляцию микробиоценоза и не вызывает вредных побочных явлений.

Эубиотики по характеру воздействия на организм человека можно условно разделить на лечебно-профилактические и физиологические. Препараты физиологического действия готовят на основе микроорганизмов - продуцентов витаминов,. незаменимых аминокислот, гидролитических ферментов, органических кислот.

Наиболее изучены препараты лечебно-профилактического действия. Однако в последнее время заметно изменилась структура желудочно-кишечных заболеваний, возросло количество инфекций сметанной этиологии. В связи с этим возникла необходимость сойда-

пия зубкотиков широкого спектра действия.

Применяете е настоящее время бактерийные препараты обладает рядом недостатков, одним из которых является недостаточно широкий спектр антимикробного действия. Не всегда определена способность входящих в препарат микроорганизмов прикрепляться к слизистой оболочке кишечника и предупреждать его колонизацию патогенными микроорганизмами.

Анализ теоретических и прикладных исследований показал актуальность разработки новых бактерийных препаратов, предназначенных в качестве зубиотиков физиологического и лечебно-профилактического действия.

Дель и задачи исследования. Целью настоящей работы было создание на основе молочнокислых бактерий новых лечебно-профилактических препаратов для лечения различных форм дисбактерио-вов.'

Исходя из поставленной цели определены следующие задачи:

- изолировать из желудочно-кишечного тракта здоровье людей невирулектные высокоактивные штаммы микроорганизмов с ва-данндаи свойствами: обладающих антагонистической активностью в отношении энтеропатогеншх шкроорганиаыов и их ассоциаций; устойчивостью к яегарственньм препаратам; способностью к адгезии,, а также синтезу витаминов, гидролитических ферментов. органических кислот;

- создать на основе отобранных штаьшов лечебно-профилактические препараты, эффективные против дисбактеркозов различной этиологии;

- одределить условия культивирования, лисфшгаавдн и хранения микроорганизмов, с цельэ получения активных сухих препаратов; __ ____________

- провести апробацию разраббтаннызГэуШэтшШГпри лечении

гастроэнтерологических и гинекологических заболеваний, Протека«™» т дилЛяитрртясгая.

Ваучная вовкана.

!& шлудочно-кишчного тракта вворовьве людей выделены новь» пгамыы молочнокислых и бифидобактерий с повышенной способностью к адгезии, антагонисты к энтеропатогеккым микроорганиз-

ьгш и их ассоциациям, продуценты витамшов группы В и гидролитических ферментов, которь» могут быть использовали при создании новых эубиоткков лечебно-прсф^астичзсгаго и физиологического действия.

Установлена высокая ¡-етаболпеская активность ассоциаций бактерий Lactobacillus fernwntua 27 и L plantarum 22„ L. aeido phi 1 us 2?w«L. curvatus 18gc обусловливаицвя широкий спектр пх антимикробной активности.

Установлена взаимосвязь адгезивной и антагонистической активностей молочнокислых бактерий и зависимость адгезивной способности от типа колоний микроорганизмов.

Установлено влияние источников азота (дроагевсй п шсеой экстракты, казеин, пентоя, шашноиислий йа^онкй), угхзрола (глшоза, сахароза, лактоза» крахмая, it?.imms меласса, уксуснокислый натрий) и неорганических солей (KttgPO^, К2НР04 » i.'jSO^ , C0CI2 , NaCl) на направленность антагонистической активности молочнокислых бактерий к определенным энтеропатогея-ннм микроорганизмам.

Практическая значимость. Созданы новье бактерийные сухие препараты плафецин и вагинор, которые апробированы при лэчзшш гастроэнтерологических и гинекологических заболеваний, где получены положительные результаты.

На звдгту выносится положит:

- необходимость направленного отбора микрооргснизшв-сим-бионтов мелудочно-кшечного тракта здорового человек для создании эубиотиков направленного действия;

- создание новых бактерийных лечебно-профилактических препаратов плафецин и Еагинор, предназначенных: для лечения дисбактериозов различной этиологии, созданных на основе ассоциаций лактобацилл L fermentum 27 с L plantarum 22 и L acidopfilus 27v с L curvatus 18g, обладашях антагонистической и адгезивной активностью, способностью продуцировать витамины группы В, гидролитические ферменты

Апробация работы. Результаты исследований были доииэны на III Всесоюзном семинаре "Актуальные направления в технологии получения антибиотиков и других биологически активные соединений микробного происхождения", Степногорск, 1991;

Биологической межвузовской конференции молодых учияж

КазГУ (1093. 1954).

Структура к объем работы. Диссертация состоит из введения. обзора литературы, раздела, включавдего описание объектов и методов исследования, 5 разделов, содержащих описание экспе-римеюаямшх работ, заключения, выводов, списка цитированной литературы, содержащего 329 наименований работ отечественных и зарубежных авторов. Диссертация изложена на 182 страницах машинописного текста, содержит 45 таблиц.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты и методы исследования

• Объектами исследования служили 117 аспорогенных, грампо-ложительных бактерий, выделанных из ГОТ здоровых людей. Бактерии выделяли на средах сусло и MPC; в дальнейшем культивировали на средах MPC, Rogtsa. гидролизатно-молочной, а тага» сахаро-минеральных с кукурузным экстрактом.

Идентификацию микроорганизмов до вида проводили по определителю Берги (Берги, 1974; Bergs, 1980) и справочнику "The procaryotes" (1981).

Антагонистическую активность и содержание витаминов группы В определяли методом диффузии в агар (Одинцова, 1959; Егоров. 1986); адгезивную способность - по методу, разработанному С. С. Гизагуллиной (1989),

. Наличие протеолитической, -пептолитической, ашволитичес-кой. гемолитической и ДНКазной активности устанавливали по зонам гидролиза каззуша. пектина« крахмала, эритроцитов, ДНЕ на твердых питательных средах; цзвлшюволнтнческой акянвкостн -по степени разлогзння цздлшоеы в среде Гетчинсона и чашэчшм меуодом по зонам гидролиза На - КЩ, Амилолитическую активность определяли такяэ йодометричеекш штодоы.

Содержание органических кисло? устанавливали по методу Вагнера, кислотность - титрованием 0.1 N N&0H и выражали в градусах Тернера. .

Анткбнотшоустойчивость бактерий определяли автолом предельных разведений лекарственного препарата в питательной сре-

де с последующим культивированием микроорганизма

Оптимизация микробного состава препаратов , питательной среды и защитных компонентов для дкофшшзоции и хранения бактерий осуществляли методом математического планирования эксперимента (Бирюков, 1975).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. АНТАГОНИСТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ МОЛОЧНОКИСЛЫХ И БШЩОБАКТ ЕРйЯ КИШЕЧНИКА ЗДОРОВЫХ ЛКЩЕЯ

В предварительных исследованиях изучали антимикробную активность 117 штаммов аспорогенных. грамположктельных бактерий, выделенных из желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) здоровых людей, в отношении наиболее часто всгречавдихся возбудителей кишечных заболеваний.

По результатам исследований отобраны наиболее сильные антагонисты, у которых изучены морфологические и фиэиолого-био-химические свойства, определена их видовая принадлежность. Антагонистически активная молочнокислая флора (сишечшяса адорсвьгх людей на 69 I представлена дшсгобацдллами и на 31 % - стрептококками. Преобладающими видами являются L plantarum. L. fermentum, L. cellobicsus, L brevis, L casei, S. lactta, также встречается виды L acidophilus, L curvatus, L. homochiohi, S. salivarius, SL thornophilus, S. faecalis, S. faecium, S. cremoris. Удается выделить В. longum.

Исследование антагонистической активности отобранных штаммов в отношении энтеробакгерий родов Salmonella, Shigella, Escherichia, Citrobacter, Enterobacter. Serracia, Klebsiella, Hafnia, Edvardsiella, Proteus, Yersinia, а такте P. aeruginosa. В. subtilis, S. aureus и Sarcina sp. показало, «по выраженной антимикробной способностью обладает 30,5 Z лактоба-шлл. 26,6 X стрептококков и 40 X бифндобактерий. Около 40 Z штаммов молочнокислых и бифидобактерий являются слабыми антагонистами, подавляющими рост ограниченного числа тест-организмов. Наиболее широкий спектр активности характерен для задов L plantarum, L fermentun, S. lactis. S. faecalis, a lonjum Активными штаммами представлены такке виды L curvatus. L.

Таблица 1

Влияние молочнокислых бактерий на развитие эихеропатогенных микроорганизмов, растущих в монокультуре и ассоциациях

Тест- ! Средние значения зоны подавления роста тест-организмов молочнокислыми бактериями, мм

органиемы}-----------------------------------------------------------------------------------

J в мрно! ^ в ассоциации о _____

!куль- fS. typ-lE. tCltro-1E. BSS-1b. mar-1Kleb- !Haf-!P. m-! У. ente-!Sar-f S. au-! B. sub-Irype fhimu- Scolifbacter!lome- fees- Isiellafnia írabi-froco- Icinaíreus Jtilis 1 trium t f sp. !ranee leans ! sp.Isp. flis flitica !sp. ! !

S. typhi- 10.2 12.4 11.9 11.7 8.0 10.3 12.2 12.6 12,6 11.9 12.4 13,8

murium 13,6 11,5 10,9

E. coli 13.6 12,4 16,7 11,7 12.4 15.4 15,6 15,1 14.0

Citro- -

baster 13» 8

SP.' 11,5 13,0 16.4 14.8 14.1 14,6 13,7 15,6 14,2 13,1 15,4

E. agglo- 9.6 11,1

raerance 13,5 10,4 14,6 15,2 10.7 15.0 12.0 11,9 12.4 14,9

S. norce-

scens 16.3 12,1 13,1 13.2 11,5 16,8 17.1 13,1 14.6 17.8 13.9 14.7

Klebsi- 16,7

ella sp. 13,8 10,0 10.9 12,1 11,4 11.8 13,7 16.1 16,0 14,0 15,3

Hafnsa 12,3 16,8

sp. 13,0 10.6 11,3 14.7 11.1 14.3 11.1 15.9 12,4 16.2

P. mira-' 12.7 12.9

bills 14,0 10,6 11.1 12,1 13,6 14.1 12.9 15.8 17,0 16,2

Y. entero- 12.5 16.3

colitica 15,1 9,5 14.8 16.0 16.3 11,1 13.2 16.7 16.3 17.0

acidophilus, S. faocium, S, thernophilus, S. cremoris.

Изучение тагибирующэго воздействия активных штаммов лак-тобацилл и стрептококков на развитие энтеробактерий, растущих в ассоциациях, показало, что энгеропатогенлье микроорганизмы при совместном культивировании различным образом воздействуя-друг на друга. S. typhi muri um и EL agglomerates увеличивав» устойчивость большинства энтеробактерий к воздействии молочнокислых бактерий. В ряде случаев резистентность энтеробактерий возрастает в присутствии Е. coli. S. mrcescons, Klebsiella sp., Hafnia sp. , Y. enterocolitica. В то еэ зреья в присутствии грамположительных ^ткроорганкзков устойчивость энтеробактерий снижается.

Максимальных значений ангагонкстическая шжвзкссть побочно кислых бактерий в отношении Е. ag^lomerance, S. mrcescans, Hafnia sp.» P. mirabilis, Sarcina sp. достигает к 72 ч культивирования; в отношении S. typhimurium, Y. enterocolitica» Cirtobacter sp., Е. coli, S. aureus, В. subtilis - к 48 ч и в отношении Klebsiella sp. - к 24 ч.

Исследование влияния источников азота, углерода я неорганических солей на антагонистическую активность молочнокислых бактерий показало, что бактерии - антагонисты обладают высокой ингибирувдей способностью при росте на средах с казеином, лпе-шшкжислым аммонием, глюкозой, сахарозой, уксуснокислым натрием, КН2Ю4 и CoClg. В ряде случаев совместное использование компонентов среды усиливает их стиыулирукоув активность. В частности, наиболее выракэннсе ингибирукзэе воздействие на представленные тест-организш молочнокислые беетерии оказывают при росте на средах, вклпчающих следующие сочетания веществ.-дроизевой, ?,пеней экстракты и лимоннокислый аммоний; глгкоза, маннит и крахьэд а такие в сочетают с КН2РО4 и I&SQ4 или с NaCl. Источится азота, углерода, неорганические сода и их сочетания оказывает влияние на направленность антагонвете-честой активности молочнокислых бактерий, что указывает яа возможность при добавлении их в питательные среды регулировать иягибирувдее воздействие бактерий-антагонистов в отношении отдельных тест-организмов.

В дальнейшие исследованиях было установлено, что прямзй зависимости мету антагонистической активностью и ккслотообра-

эувдэй способностью молочнокислых и бифвдобактерий не наблюдается. Антагонистические иташы представлены культурами с энергией ютслотообразования 7&-1680 Т. Микроорганизмы различных &рмэктыкених групп в отношении большинства представленных 5й'Херопатогенньк бактерий обладает близкими значениями антимикробной активности, хотя развитие S. typhimuri um преимущественно ингибмровали гоыоФ&рлкнтативные микроорганизм, а Е. coli и S. aureus - бифидобактерии.

Изучение роди активной кислотности среды в антагонистической активности молочнокислых и Сифидобактерий показало, что штаммы, оказывающие наиболее сильное антагонистическое действие на Е. coli, Citrobacter sp. , Klebsiella sp., Hafnia sp., P. aeruffinosa, S. aureus имели pH культуральной жидкости 5,49-5,14; на S. typhliruxium, Р. mirabllls, Y. enterooolltloa, S. nkrcescenз, E subtilis - 5,39-4,12; на E. agglorrerance и Sarcina sp. - 6,46-3,78.

В большинстве случаев при нейтрализации культуральной жидкости молочнокислых бактерий их активность снижалась, хотя полная потеря активности вдавлена только у L plantarum 3g в отношении Hafnia sp. и L plantaruM 17g 1 - в отношении Р. aeruginosa и Sarcina sp.

В ряде случаев нейтрализация культуральной шдкосги приводила к повышению антагонистической активности. Так. например, у шешов, имевших pH культуральной иидкостк 4,38-3,16, после нейтрализации активность возрастала в отношении Salmonella, EL coli, Citrobacter sp., В. subtilis и S. aureus. Все это .свидетельствует о том, что антагонизм молочнокислых и бифвдобакторий обусловлен пе только активной кислотности) срады» но и синтезом специфических веществ с оптимумом действия в определенных диапазонах pH.

2. АДГЕЗИВНАЯ СООСОШОСТЬ ШЮЧЕОМОШК БАКТЕРМ

Однш ез решоднх фагаороз, обеспечивающих ващиту шкро-органмзш от патогенных бактерий,- является.наличие в кшечнике высоко адгезивных шташоа» активно, конкурируидих с патогенной флорой за прикрепление к слизистой оболочке.

Способность к адгезии обнаружена преикувюственно у ютам-

- il -

uob. образующих гладкие колонии, что характерно для 81 Z стрептококков и 47 X лактобацилл.

Лнтагояястическая активность адгезивных итаммов в отною-нии энтеробактерий превышала таковую у штаммов, неспособных к адгезии. В то да время развитие грамположительных микроорганизмов ингибировали, в основном, адгезивно нейтральные аггамш.

а БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПЕРСПЕКТИВНЫХ ШТАММОВ МОЛОЧНОКИСЛЫХ И БИЗДОБШЕРИЯ

Do результатам исследований отобраны наиболее сильные антагонисты в отношении широкого спектра энтеробактерий и грамположительных микроорганизмов (L fermentum 16 и 27, L. plantarum 22, L acidophilus 27*, L curvatus 18g, L brovia

4, S. cremoris 1м, S. therrophilus Зг5, S. lactis 7 4 и 94, a longum 31. Бд. 53 И 7w).

Изучение ингибирувдего воздействия различных разведений культуральных жидкостей отобранкых иташов на развитие энтеро-патогедиых микроорганизмов выявило, что наибольшей активностью' обладают L acidophilus 27* н L fernantum 27, оказывающие ин-гибируидзе воздействие на большинство гест-организмов при разведении куль-хуралъной аищкос7Н 1:1000. При данном разЕздоили остальные итвмш молочнокислых бактерий ингибировали развитие отдельная тест-органкзшв. Среди бифлдобактерий такой активностью обладал кгакы Bl longum 31 в • отношения Y. enterocolitica, В. subtil!s и S. aureus.

Установлено, что антагонистическая активность отобранных rarmsm юлочиокислых и бкфидобактерий в относеши болымгегва гаученянх энтеропатогенных микроорганизмов превышала таковую у известных препаратов лакгобоктерип и бифадумбактерив.

Кроме того, отобранные игаыш молочнокислых бактерий, ингибировали развитие P. mirabilis, EL asfflortsoraricû, Klebsiella sp., P. aeruginosa и В. subti lis, устойчивых к воздействию лактобшсгерина, а новые штаммы бифвдобектерий подавляла рост'

5. dublin, P. mirabilis и Sercina sp. „ устойчетьк к ЕоздеЯс-твию бифтаумбактерина.

Исследование способности молочнокислых бактерий синтезировать биологически активные вещества показало, что больанпс-

ТЕО отобранных ктамыов продуцируют протеолитические, целлххпо-волитические. ашлолетические, пектолитические, сахаролитичес-кие ферменты, синтезируют цианокоболамия, палтотеновую кислоту, инозит. Кгашы L brevts 4 и S. lactis 74 синтезирует никотиновую кислоту.

Большинство отобранных штаммов обладают устойчивостью к вовдействию полшиксина, ампициллина, мономицина, иеомицина, карбенициллина, рифаыпицина, норсульфазола, фталазола.

Ыолочяокисль» бактерии, ва исключением L fermentum 16 и 27, S, lactis 74, обладали выраженной адгезивной способностью.

Исследование потенциальной пагогенносги молочнокислых бактерий показало, что отобранные шташы гемолизины и ДНКазы не образуют, фи внутрибркяшнном и лероральном введении белым мыты заболеваний и морфопатологических изменений органов и тканей у кивотных не вызывает.

Таким образом, в ходе исследований отобраны штаммы, обда-даадда биологическими свойствами, способствувдими нормализации мшфобиоцэноза кишечника. Данные культуры целесообразно использовать для разработки эуОдатических препаратов.

4. ВОВЭТРУЙРОВАШЕ ЛЕЧЕББО- ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ

В ходе изучения антагонистической активности лактобацилл при кх совместном культивировании были отобраны ассоциации L. fermentum 27 с L plantanrai 22 и L acidophilus 27* с L. curvatus 18с, обладающие высоким ингибирувдим потенциалом в отношении широкого спектра энтеропатогенных микроорганизмов.

Дзнкие ассоциащш лактобацилл использовали в качестве основы препаратов плафзцин и вагинор, соответственно.

Отобранные штаАйсы культивировали на средах МРС, Rogosa, иолока, гвдролизатно-шлочной (ГМС) и кукурузна- сахарных средах. Наиболее интенсивное развитие шкрооргакизмов обеспечивала FH3, хотя наиболее выраженное ингибирушэе воздействие на энтеропатогеаные микроорганизмы лактобациллы oita3Usami при росге яа МРС.

1{зучение протекторных свойств широкого ряда Сахаров и солей при высушивании молочнокислых бактерий показало, что ыак-

симальное сохранение антагонистической активности лактобздага при лиофилизации обеспечивают сахароза, глшова, а такмэ сочетание сахарозы с тиомочевиной или M?S04 и сочетание глюкозы с жеяатозой или (NH4)2SO4.

Оптимальным протектором при сушке является сахароза иди сочетание глюкозы с хедатозой, так как в присутствии данных веществ наиболее полно сохраняется активность лиофилизироваа-ных культур при хранении в холодильнике в течение 12 ыес.

Сухие препараты, представляодна собой смешанные культуры дактобацилл, лиофиливированные в среде MPC с добавлением одной из защитных сред: сахарозной или глшозо-яелатозяой, обладают шроким спектром антагонистического действия, ингибируя развитие грамотрицательньос, грамюлолмтельных бактерий, дрозкей (табл. 2).

Испытание препаратов в гастроэнтерологических и гинекологических клиниках показало эффективность их использования прз> лечении детей и взрослых, больных гастроэнтеритами, энтероколитами, панкреотигами, холециститами, протекащиш на фоле стафилококкового, протейного и кандидозного дисбактериозов. • Выраюнный терапевтический эффект препараты оказывают при ла-чения зэенщнн. больных тзьпюет различной этиологии, в том числе трихомонадаым и кандвдозныы, а таете при санации звага-лшда перед диатермокоагуляцней шейки матки. î

ВЫВОДЫ

1. Иэучен видовой состав антагонистически активных штаммов молочнокислых и бифвдобагаерий геяввчниге*. здоровых людей. Установлено, что преобладающими видами являются р1шЬапот, [>. ГдгпвпЦда» L саПоЫозиз» L ЬгеуАз, I- сазе!, Б. 1еюЬ1з, в. 1опгт.

2. Установлено, что выраязнной антагонистической аг?тив~ ностью в отношении энтеропагогенных микроорганизмов обладает 30,5 X штаммов лактобашлл, 26,6 Л штаммов стрептококков, 40 X ит&мшв бифидобагегерий. Сколо 40 X ¡вташов молочнокислых и 61т-фидобактерий являются слабыми антагонистами о узкиы спектров кягибярукдего воздействия." Ш выявлено прямой вавшзссти

Таблица 2

Спектр антимикробного действии препаратов "плафецин" и "вагинор"

Тесг-органивмы ?3эны подавления роста тесг-орагизмов. мм I плафеция t вагинор

S» typhimuriura 15,33+0,88 15,50+1,50

S« dublin 17,65+0.33 17,00+0,00

Е. coli 18,33+0,88 17,50+0,50

Citrobacter sp. 16,66+0,33 17.00+0,00

E. агг1овагапс& 14,00+0,57 16,50+0,50

S. marcoscens 25,00+0,00 18,00+0,00

Klebsiella sp. 21,66+0,88 21,50+0,50

Hafnia sp. 24,00+1.00 23,50+0,50

£. tarda 14,33+0,88 12,00+0,00

P. mirabilis 19,33+0,33 19,50+0,50

У. onterocolitica 12,00+0,00 16,60+1,50

P. aeruginosa 17,OÖ+O,00 17,00+0.00

S. шгеиз 17,00+0,00 17,00+0,00

Sarcina sp. 17,65+0,60 18,00+1,00

5. lutea 12.33+0,88 16,00+0,00

U luteits 14,53+0.33 11,00+1,00

a subtiüs 21,00+0.00 22,00+1,00

B. Eücoides 19,66+0,33 20,00+0,00

E citreum 19.00+0,00 19,00+0,00

& mssentericus 21.33+0,88 20,50+0,БО

C. utilis 10,66+0,88 12,00+1,00

C. albicans 14,33+0,33 17,00+0,00

ду антагонистической активностью и кислотообразутией способ-, ностыо, тогда как рН среды оказывает влияние яа иягябируюесго способность молочнокислых и бифидобачтерий.

3. Установлено влияние различных сочетаний казеина, пептона, лимоннокислого аммония, дрожжевого и мясного экстрактов, гакозы. сахарозы, крахмала, макнита, мелассы, уксуснокислого натрия, КН2РО4, МгБО^, ЫЬБ04, МаС1 на направленность антагонистической активности молочнокислых и бифидобакгерий к определенным энтеропатогенным микроорганизмам.

Установлено, что способностью к адгезии-обладали преимущественно штаммы молочнокислых бактерий, образующие гладкие колонии, что характерно для 81 X штаммов стрептококков и 47 I штаммов лактобацилл. Антагонистическая активность адгезивных штаммов в отношении энтеробактерий лревыдала таковую у штаммов, не способных к адгезии. В то яе время грамполохительные микроорганизмы нягибировали, в основном, адгезивно нейтральные шшш.

б. При исследовании микрофлоры желудочно-кишечного тракта здоровых людей выявлены невирулентны» штаммы молочнокислых и бифидобакгерий, обладание выраженной адгезивной способность» и антагонистической активностью в отношении энтеропатогенных шкроорагнизмов и их ассоциаций, характеризующиеся также способностью продуцировать гидролитические ферменты и витамины группы В. устойчивые к действию лекарственных препаратов.

6. На основе ассоциаций лактобацилл I*. ГегшгЛда 27 с Ь. р1ап1агип1 22 н асШорШиз 27» о I. сигуа1из 18г - антагонистов к широкому спектру граиотрицательных и грамполояитель-ннх микроорганизмов, дрохшюдобных грибов, продуцентов витаминов я гидролитически* фер1©нтов получены новьв бактерийные препараты плафеция и вагинор и подобраны ус.говня юс получения в сухом виде.

7. Опытныэ испытания на волэнтераж погашает, «ко препараты плвфещш я вагннор оказывал? выраженный терапевтический ьф-фект при лечении гастроэнтерологический заболеваний, протекающих на фоне дисбактериоэов различной аткологии, а таю» в гинекологической практике яря лечении кольпитов и санации влагалищ при дивтерыокоагулядан вейки штки.

РАБОТЫ, ОПШШЮВАННЬЕ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИЙ

1. Гаврилова Е Е , Дукакева ЛИ,. Горелова Е Е Антагонистически активность молочнокислых бактерий в откошзшш возбудителей кишечных инфекции //Актуальна направления в технологии получения антибиотиков и других биологически активных соединений микробного происхождения, Степногорск. - 1991. - С. 36.

2. Горелова а Е , Гаврилова Е Е Влияние ыолочкогазслых бактерий на ассоциации энтеропатогенных микроорганизмов.

Рус. деп. в КазгосИНГЙ 14 04.94 регист. ноыер 4788/К94.

а Горелова Е Е , Ратшкава И. А., Гаврилова Е Е Антагонистическая активность « шлочкокислых бактерий в отношении эн-теробактерий. - Рус. деп. в КазгосИНГЙ 27.04.94 регист. ноиэр 4817/К94

4- Каламкарова Л. Е , Багряяцзва О. Е , Иданова Р. & „ Г&шх-шв Р. Ф., Гаврилова Е Е , Горелова Е Е , Бурлакова И. Е Шкро-Сиологические аспекты формирования дисбиоза кишечника у детей раннего возраста шзни и разработка путей его корреляции //Вопросы питания и регуляции гошоетава, Душанбе. - 1994. -С. 134-137.

5. Гаврилова Е Е , Горелова Е Е , Каламкарова X Я , Га-расенко Т. Г. Егаш I» р1ап1агит £2 - антагонист в отношении патогенных и условно-па-гогенных внгеробаетерий. исполь8уешй в составе лечебно-профилактического препарата против келудоч-но-кишечных ваболеваний. Заявка 11 940462.1, приоритет 22.04 94.

6. Гаврилова Е Е , Горелова Е Е , Калашарова X И., Та-расенко Т. Г. Штамм I. азкЗорЬПиз 27»/ - антагонист против возбудителей кшечных заболеваний, используемый для приготовления лечебно-диетических препаратов и продуктов. Заявка 940461.1, приоритет 22.04.94.

7. Гаврилова Е Е , Горелова Е Е. Каламкарова Л. И., Та-расенко Т. Г. Штамм Е 1ог>ет 7у - антагонист в отношении возбудителей желудочно-кишечных ваболеваний. Заявка 940463.1, приоритет 22.04.94.

Siiivrop* Dfla.v^iiposK.i FopeiOBs:■ "lnoCiKTSpnoa aypyiai «M-Avys.it nojusaityra tfojaTUH C^.HAoSaKTepniUap CJT »;vni$biJi« daftTep.maapkmnn jsana uiiMM^ap'.-'H laaey"

Zzy ju-i^A^i^uH lsen-iv-puH xtauHA'.ru aHTaroKHorix da.ioeH-AL.'uri ooi'i« oyt ^aa^JJja Cap opTaxan ii.oaorviKj.utv «'en

Typ'tc^a TOK Kypavt 3'pTT»wUu EMAiK-npo^iuaKTHKa/ma; SOHC $»3HO-aori.a-suKi ooB.pl 6ap xaiv* ayOAor/KTepAi *acayjua na^as." a 6o.".a-tuu 3-roiyii'JH B^raManA'iplHlH, npoayueHTT^pl msh rv>zpoji/,.rrlx <J<}p-mchtt^pm nAru3viafa *o?apra ivadussT'tiairl Cap, aH?ar0HACT«p, k<jk. cn'iKTpjil 3HTiponaTore»AiK jr,iKpooprann3Maep hch .oiapib'n tecouwa-uvifiCH <?ap «MKpoopraHHOMAep CojiIhIh assHAU.

Cyr Kfizrjjsu CaRTcpwdJiapuHUH shtsjohuctIk dejcenalilrv a3o?-TUH vierijacprs, KOMipT^rlH". X3H>? H<opraHviKRji«K, (CM»C) Tyanapfa d?raTTa.if3HAVfH KopseTljireH,

2p Typ.il aTo.TornHiary aacdaxTeps«» aypuu <5t<Aeyr<! apHarja« uarroiaurtsj aocounaunac«,, n?rl3lH<?K nd\\s. tSarTeptMJiwi; np^napar-

Tap„ niaVuHH S3H<! 3arnnop .aaliuHAaysa aowe orapAU xypraK xyTlHAf:

wyva. «XHMorw! aaoarafrjH.

V.V. Oorelova " Search for new strains of lactic-acid and bifidus bacteria effective in disbacteriosis treatment

Spscies composition and biological properties of the antagonistically active lactic-acid flora of the Gastrointestinal tract of healthy people have been studied. Microorganisms Tilth an increased capability for aohosloa, antagonists to a wide spectrum of cnteropatho-jeriic nicroorganisas nnd their .a?so-cie*"ions, yroiucers of vitaaiaa 3 anr" cnz^j.tu tV-oh

esc be Hi«d t- produce nrr cul'io':'. vt -vi-.i a treatr>ent~ar.d~pro-phjlactic and physiological actios .have.been revealed. The ciiect of nitroces, carbon and ir.cr-,f-r.ic Edit sources on the ■liricticr.olity cf the antagonistic ictivit;- of lactic-acid bacteria haa beer, shorn,

?aned pa associations oj. I&ctcbasllli bacterial preparations, plaphecin and va^inor, i-jai^ned for treatr.i-nt oC di-.-ibacterioces of different etialr-.Ty hive been produced c^d \ te^hiolo r- *r,r- the'.i prof-i-stlon itdry for.-; ha. t-rr. >v»lcpcJ.