Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка и оценка медико-биологической эффективности бифидосодержащих биологически активных добавок и кисломолочных продуктов

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Молокеев, Алексей Владимирович

стр.

Список используемых сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ: ДИСБАКТЕРИОЗЫ КИШЕЧНИКА, ПРИНЦИПЫ КОРРЕКЦИИ, ВОПРОСЫ ПРОИЗВОДСТВА

ЭУБИОТИКОВ

1.1. Факторы, определяющие здоровье человека.

1.2. Важнейшие функции нормофлоы кишечника в организме.

1.3. Причины дисбактериозов, их связь с различными заболеваниями.

1.4. Современные представления о принципах коррекции нарушений микробиоценозов кишечника.

1.5. Технологические аспекты производства эубиотиков.

1.5.1. Рецептуростроение эубиотиков.

1.5.2. Производство лекарственных препаратов-эубиотиков.

1.5.3. Производство биологически-активных добавок.

1.5.4. Производство бифидосодержащих кисломолочных продуктов.

1.6. Концепция рационального и сбалансированного питания.

1.8. Основные аспекты, которые учитывались в настоящей работе.

1.9. Резюме.

ГЛАВА 2. СИСТЕМНЫЙ ПОДХОД КАК ОСНОВА ЭФФЕКТИВНОЙ РАЗРАБОТКИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК И ЛЕЧЕБНО

ДИЕТИЧЕСКИХ ПРОДУКТОВ

2.1. Обоснование комплексного подхода, базирующемся на системном анализе.

2.2. Конструирование модельных систем для разработки и исследования эффективности рецептур Б АД.

2.3. Аспекты разработки модельных систем.

2.4. Вопросы оперирования с модельными системами.

2.5. Резюме.

ГЛАВА 3. МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ СОЗДАНИЯ

РЕЦЕПТУР ЛЕЧЕБНО-ДИЕТИЧЕСКИХ ПРОДУКТОВ И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК

3.1. Статистический анализ бактериологических исследований кишечника у здоровых людей различного возраста.

3.2. Эмпирическая аппроксимирующая модель изменения видового состава бифидобактерий в нормофлоре здоровых людей.

3.3. Использование комплексного подхода для разработки и исследования рецептур эубиотиков и диетических продуктов.

3.4. Новые принципы рецептуростроения лечебно- диетических продуктов и

3.5. Классификация лечебно-диетических продуктов и БАД.

3.6. Резюме.

ГЛАВА 4. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ОСНОВА РАЗРАБОТОК

РЕЦЕПТУР ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРОДУКТОВ И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК

4.1. Исследование культуральных и биологических свойств бактерий.

4.2. Исследования процессов накопления биомассы и кислых метаболитов различными штаммами бифидобактерий.

4.3. Исследование сочетаемости штаммов бифидо- и лактобактерий.

4.4. Создание симбиозов бифидобактерий с молочнокислыми бактериями.

4.5. Разработка питательных сред для культивирования бифидобактерий.

4.6. Резюме.

ГЛАВА 5. ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПРОИЗВОДСТВА ЛЕЧЕБНО-ДИЕТИЧЕСКИХ БИФИДОСОДЕРЖАЩИХ ПРОДУКТОВ И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК

5.1. Разработка технологий получения жидкой активной закваски и БАД на основе чистых культур бифидобактерий.

5.2. Краткое описание технологии изготовления "жидкого концентрата бифидобактерий".

5.3. Определение сроков хранения кисломолочных продуктов, полученных с использованием разных культур молочнокислых бактерий.

5.4. Создание микробиологической основы для лечебно-диетических бифидосодержащих продуктов.

5.5. Особенности создания кисломолочных продуктов на основе ацидофильных палочек.

5.6. Краткое описание технологий получения бифидосодержащих кисломолочных продуктов.

5.6.1. «Бифидокефир».;.

5.6.2. «Бифацил».

5.7. Разработка кисломолочных продуктов функционального питания.

5.7.1. «Бифатоник».

5.7.2. «Бифидоряженка».'^

5.8. Резюме.

ГЛАВА 6. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ЭФФЕКТИВНОСТИ РАЗРАБОТАННЫХ ПРОДУКТОВ

6.1. Основные методические подходы к оценке эффективности лечебно-диетических продуктов и Б АД.

6.2. Исследование биологической ценности разработанных продуктов.

6.2.1. Исследование аминокислотного состава БАД жидкого концентрата бифидобактерий».

6.2.2. Исследование аминокислотного состава «Бифидокефира».

6.2.3. Исследования витаминного состава "Бифидокефира".

6.2.4. Исследование биологической ценности комплексного продукта «Бифацил».

6.2.5. Исследование биологической ценности продукта

Функционального питания «Бифатоник».

6.3. О задачах доклинических испытаний разработанных продуктов.

6.3.1. Подходы, принятые в работе, при исследованиях на лабораторных животных.

6.3.2. Лабораторные животные, использованные в экспериментах.

6.4. Исследование функциональной активности «жидкого концентрата бифидобактерий».

6.4.1. Оценка эффектов адаптации мышей.

6.4.2.Исследования изменений в составе нормофлоры желудочно-кишечного тракта.

6.5. Исследование функциональной активности лечебнопрофилактического продукта "Бифацил".

6.6. Исследование функциональной активности лечебнопрофилактического продукта "Бифидокефир".

6.7. Резюме.

ГЛАВА 7. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ КЛИНИЧЕСКОЙ

ЭФФЕКТИВНОСТИ РАЗРАБОТАННЫХ БАД И ПРОДУКТОВ

7.1. О порядке проведения клинических испытаний.

7.2. Методология проведения клинических испытаний.

7.3. Исследование лечебно-профилактических свойств "бифидокефира".

7.4. Исследование лечебно-профилактических свойств "жидкого концентрата бифидобактерий"

7.4.1. Профилактика заболеваний в педиатрии. . . 21Ъ

7.4.2. Исследование клинической эффективности "концентрата бифидобактерий" в комплексном лечении детей раннего возраста.

7.4.3. Исследование клинической эффективности "концентрата бифидобактерий" на больных с эндокринной патологией.

7.5. Исследования коррекции липидного обмена при помощи бифидосодержащих препаратов

7.5.1. Нарушения липидного обмена, атеросклероз и препараты микробного происхождения для его лечения.

7.5.2. Исследования нормализации липидного обмена при приеме жидкого концентрата бифидобактерий".

7.6. Резюме.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка и оценка медико-биологической эффективности бифидосодержащих биологически активных добавок и кисломолочных продуктов"

Актуальность проблемы. За последние сто - сто пятьдесят лет в структуре питания человека произошли негативные изменения, которые выражаются в потреблении недостаточных количеств белков, растительных жиров, пищевых волокон, витаминов и микроэлементов при переизбытке углеводов, причем, значительном, и животных жиров. Дисбаланс питания, нарушающий процессы пищеварения, стрессы, неблагоприятные экологические факторы, а также прием антибиотиков и т.п. приводят к обширным нарушениям в составе микрофлоры кишечника - дисбактериозам. По данным Министерства Здравоохранения РФ в России отмечается рост заболеваемости дисбактериозами, который сегодня достигает 90 % населения. Последствиями дисбактериозов является расстройство ферментных систем, подавление защитных сип организма и развитие функциональных, соматических и неврологических заболеваний.

Данные статистики по общей и детской заболеваемости коррелируют с данными роста дисбактериозов, дисбалансом питания, ухудшением экологической ситуации и социальных условий. В последние 8-10 лет в России регистрируется увеличение смертности от сердечно-сосудистых заболеваний и злокачественных новообразований, прогрессируют атеросклероз и ишемическая болезнь сердца, увеличивается заболеваемость сахарным диабетом, значительно возросло число вторичных иммунодефицитов. Прогноз на ближайшее будущее свидетельствует о нарастающем кризисе здоровья населения России.

Профилактика этих заболеваний стоит в ряду важнейших задач здравоохранения России, в обеспечении которой существенная роль сегодня отводится сбалансированному питанию. В основу концепции сбалансированного питания, разработанной в России в конце 70-х годов, были положены принципы химической адекватности и энергетической сбалансированности пищи потребностям организма. Однако в ней не учитывается состав и состояние ми1фофлоры кишечника, которая существенно влияет на гомеостаз в целом, препятствуя развитию инфекционных заболеваний, заболеваний, связанных с нарушениями обмена, в поддержании иммунного статуса организма. Поэтому для создания эффективных биологически активных добавок (БАД) и лечебно-профилактических продуктов (ЛПП) сегодня необходимо сформулировать дополнительные требования к разработке их рецептур, которые должны быть направлены на коррекцию нарушенных функций нормофлоры кишечника.

Социально-экономический кризис в России предельно обострил данную проблему и диктует необходимость поиска новых подходов с учетом возникших рыночных отношений, позволяющих, с одной стороны, сделать доступными для основной массы населения новые виды БАД и ЛПП, а с другой - обеспечить достаточную рентабельность производства. Таким образом, проблема разработки и внедрения в производство БАД и ЛПП, позволяющих восстановить нормофлору кишечного тракта и нормализовать обмен веществ, становится чрезвычайно актуальной.

Работы Мечникова в начале XX века доказали, что употребление простокваши и кефира, содержащих живые молочнокислые бактерии, является эффективным средством нормализации процессов пищеварения и здоровья человека в целом. В результате исследований последней четверти XX века были разработаны методы выделения и культивирования целого ряда микроорганизмов из состава нормофлоры кишечника, которых на настоящий момент насчитывается около 500 видов, и создали новые перспективы для разработки продуктов и БАД нового поколения. В частности, использование физиологически активных симбиозов из различных видов бактерий представляется одним из перспективнейших направлений создания и исследования медико-биологической эффективности новых продуктов и БАД.

В связи с вышесказанным, цель настоящей работы заключалась в разработке рецептур симбиотических БАД и ЛПП, а также создании технологий их производства, адаптированных к реальным условиям типовых заводов молочной и биотехнологической промышленности.

Задачи исследования

• Исследовать культуральные и технологические свойства перспективных производственных штаммов бифидо- и лактобактерий, оптимизировать условия их культивирования, получить активные симбиозы этих бактерий, позволяющих получать БАД и диетические продукты заданного медико-биологического действия.

• Проанализировать данные бактериологических исследований микрофлоры кишечника россиян различных возрастных групп для определения среднестатистического состава бифидофлоры и динамики ее возрастного изменения в нормофлоре.

• Сконструировать ряд новых перспективных рецептур БАД и лечебно-диетических продуктов и провести лабораторные исследования их биологической ценности in vitro для предварительной оценки возможных эффектов воздействия на организм.

• Провести доклинические испытания на лабораторных животных для экспериментального определения способности новых продуктов стимулировать адаптацию организма к неблагоприятным факторам, корректировать состав индигенной нормофлоры кишечника и вытеснять патогенную микрофлору.

• Провести клинические исследования новых продуктов на больных различного профиля для изучения возможности профилактики и коррекции дисбактериозов, а также связанных с ними функциональных расстройств систем организма;

• Разработать подходы и методы масштабирования технологических процессов с целью создания технологий производства ЛПП как в условиях специализированных производств детских молочных продуктов, так и в условиях типовых молочных заводов.

Положения, выносимые на защиту

1. Комплексные рецептуры, основанные на использовании активных симбиозов из различных видов бифидо-, лактобактерий, пропионовокислых палочек, стрепококков и т.п. позволяют создавать ЛПП и Б АД нового поколения с заданными медико-биологическими свойствами, которые эффективны для массовой профилактики дисбактериозов, а также в качестве диетического питания.

2. Разработка и внедрение в производство новых видов ЛПП и Б АД является сложной многофакторной задачей, решение которой возможно только при условии использования комплексного подхода, включающего системный анализ, математическое моделирование изменения микрофлоры кишечника, а также исследования в области нутрициологии, микробиологии, биотехнологии и медицины.

3. В нормофлоре кишечника людей, в зависимости от возраста и режима питания, происходят закономерные изменения в соотношениях видов индигенной микрофлоры, что позволяет на основе методов статистического и регрессионного анализа данных бактериологических исследований построить эмпирическую аппроксимирующую модель этих изменений в кишечнике человека. Модель может быть использована для разработки рецептур ЛПП и БАД, предназначенных для определенных возрастов, а также оптимизировать схему применения эубиотиков, лечебных продуктов и БАД в клинической практике.

4. Разработка эффективной технологии получения концентрированной биомассы бифидобактерий с повышенной жизнеспособностью в кисломолочных продуктах с высокой кислотностью возможна на основе: 1)селекции кислотоустойчивого штамма бифидобактерий, 2)нейтрализации жирных кислот щелочными агентами, 3)увеличения буферной емкости питательных сред на основе молока. Совокупность этих методов позволяет получать жидкую закваску бифидобактерий с увеличенным сроком хранения и высокой активностью для производства ЛПП.

5. Подбор физиологически совместимых штаммов при соблюдении условий оптимизации соотношений чистых культур бифидобактерий и молочнокислых бактерий является базой для создания активных симбиозов на основе этих бактерий. Симбиозы, в свою очередь, являются "микробиологической основой" для разработки кисломолочных ЛПП, производимых по одностадийной технологии совместного сквашивания молока, что создает методологическую базу для разработки технологий крупнотоннажного производства в условиях типовых молокозаводов.

Научная новизна

1. Методом селекции при культивировании производственных штамма B.bifidum 791 в различных средах, без применения мутагенов, получен новый штамм бифидобактерий B.bifidum 791/БАГ, который по сравнению со штаммами B.bifidum 791 и B.longum 379М, обладает более высокой скоростью роста и устойчивостью к кислым метаболитам в молочных средах.

2. Разработан состав эффективной питательной молочной среды для накопительного синтеза биомассы бифидобактерий, обладающая, по сравнению с гидролизатно-молочной средой, более высокой урожайностью и буферными свойствами, на основе которой можно получать биологические активные добавки с высоким содержанием незаменимых аминокислот и витаминов.

3. Разработан комплексный подход, основанный на системном анализе, который может использоваться для создания и исследования медико-биологической эффективности новых типов БАД лечебных продуктов и препаратов-эубиотиков.

4. Методом статистического анализа установлена корреляция между изменениями в соотношениях различных видов бифидобактерий нормофлоры кишечного тракта, возрастом и характером питания человека, построен "среднестатистический пейзаж" бифидофлоры среднестатистического россиянина на основе аппроксимирующей модели.

5. В испытаниях на лабораторных мышах колонии ICR установлена способность бифидобактерий штаммов B.bifidum 791 и B.bifidum 791/БАГ вызывать адаптацию организма к неблагоприятным внешним факторам, снижать эмбриональную смертность и спонтанную гибель мышей, способствовать восстановлению индигенной микрофлоры, вытесняя из кишечника патогенные микробы.

6. Клиническими исследованиями установлена способность бифидосодержащих кисломолочных продуктов и БАД снижать уровень сахара в крови и снижать гликемический индексу больных сахарным диабетом, а также устранять болевой и диспепсический синдромы.

Практическая значимость работы

1. Разработана эффективная технология получения биомассы бифидобактерий с высоким содержанием активных клелгок без стадии принудительного концентрирования биомассы, которая позволяет производить как БАД, так и активные жидкие закваски с высоким сроком хранения. Технология внедрена в производство в ДГУ ЭПП «Вектор-Биальгам» ГНЦ ВБ «Вектор».

2. Полученный методом селекции новый штамм B.bifidum № 791/БАГ является перспективным продуцентом для создания на его основе комплексных симбиотических кисломолочных продуктов, поскольку обладает высокой скоростью роста в чистом молоке и сохраняет жизнеспособность при высокой кислотности кисломолочных продуктов.

3. Методами дробного культивирования получен ряд технологичных симбиозов бифидо-и лактобактерий с определенными культуральными характеристиками, использование которых позволяет получать диетические кисломолочные продукты с высокими биологическими свойствами.

4. Разработана эмпирическая аппроксимирующая модель изменения состава бифидофлоры кишечника человека в зависимости от его возраста и питания, позволяющая создавать эффективные рецептуры БАД и препаратов-эубиотиков, а также оптимизировать схему применения эубиотиков, лечебных продуктов и БАД в клинической практике.

5. Разработаны адаптированные к условиям типовых молочных заводов технологии получения ряда лечебно-диетических бифидосодержащих кисломолочных продуктов, из которых производство "бифидокефира", "бифидоряженки" и "бифацила" внедрено на ряде крупных молокозаводов в Сибирском регионе.

Апробация работы. Представленные в диссертации результаты работы были доложены на различных конференциях, в том числе: IV Международном симпозиуме "Биологически активные добавки к пище: XXI век" (Санкт-Петербург, 2000), II Российском форуме "Мать и дитя" (Москва, 2000), VIII Международной конференции "Новые информационные технологии в медицине и экологии" (Гурзуф, Украина, 2000), Международной конференции "Спонсируемые биотехнологические разработки и проблемы нераспространения" (Степногорск, Казахстан, 2000), Международной научно-практической конференции "Проблемы стабилизации и развития сельскохозяйственного производства Сибири, Монголии и Казахстана в XXI веке" (Новосибирск, 1999), Научно

13 практической конференции "Сибирский • стандарт жизни: экология питания" (Новосибирск, 1998), II Съезда гомеопатов России, секция биологически активных добавок (Новосибирск, 1999), Всероссийской конференции "Политика здорового питания в России" (Москва, 1998), Всероссийской конф. "Природноочаговые инфекции в России" (Омск, 1998), Новосибирской областной конференции "Питание и здоровье" (Новосибирск, 2000), Научно-практической конференции "О создании единой региональной системы мониторинга окружающей среды" (Новосибирск, 1996), Научно-практической конференции "Сибирского соглашения" - "Здоровье населения России" (Новосибирск, 1997).

За разработку и внедрение лечебно-профилактических продуктов питания и БАД-эубиотиков было получено пять золотых медалей "Сибирской" и "Кемеровской" ярмарок. По материалам исследований опубликовано 12 научных работ, 7 патентов РФ, а также разработано и утверждено 22 нормативно-технических документа (ТУ, ТИ и ЭПР).

Структура работы. Диссертационная работа состоит из введения, литературного обзора, шести глав собственных исследований, заключения, выводов и приложения. Работа изложена на 301 страницах машинописного текста, включая 48 таблиц, 1 схему 27 рисунков. Список цитированных работ содержит 243 наименования.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Молокеев, Алексей Владимирович

9. ВЫВОДЫ

1. Методом селекции при выращивании в различных питательных средах без применения мутагенов получен новый перспективный штамм бифидобактерий В.Ыйс1ит № 791/БАГ, который по сравнению со штаммами-аналогами: В.Ыйс1ит №1, В.ЬШёит №791, ВЛоп^т №379М, обладает повышенной устойчивостью к кислым метаболитам и высокой скоростью роста на простых молочных средах. Новый штамм может быть использован для создания рецептур бифидосодержащих БАД-парафармацевтиков, симбиотических лечебно-профилактических продуктов, а также лекарственных препаратов-эубиотиков.

2. Разработана технологичная и экономически доступная питательная молочная среда с добавлением специфических факторов роста, обладающая по сравнению с гидролизатно-молочными средами, стандартно используемыми для выращивания бифидобактерий, высокой урожайностью и сохранностью при получении биомассы бифидобактерий.

3. Доказана возможность значительного повышения титра и сохранности нативной биомассы бифидобактерий за счет: 1 )получения кислотоустойчивого штамма методом селекции, 2)нейтрализации летучих кислот в культуральной среде щелочами, 3)увеличения буферной емкости питательных сред при помощи белков. Совокупность этих приемов позволяет сохранять активную биомассу бифидобактерий в кисломолочных продуктах с высокой кислотностью, что дает основу для создания симбиотических бифидосодержащих кисломолочных продуктов.

4. Разработана новая эффективная технология получения "жидкого концентрата бифидобактерий", в которой в отличие от разработанной во ВНИМИ технологии, исключены стадии принудительного концентрирования биомассы и внесения дополнительных консервантов, что позволяет существенно упростить производственный процесс и повысить качество продукта.

5. На основе данных бактериологических исследований нормофлоры кишечника здоровых людей построена эмпирическая аппроксимирующая модель изменения состава бифидобактерий в зависимости от возраста человека. Модель позволяет воспроизвести "усредненный пейзаж" бифидофлоры среднестатистического россиянина и с некоторыми ограничениями может быть использована для оценки степени дисбактериозов в отдельных выборках населения, для разработки рецептур

258

БАД и препаратов на основе эубиотнков, а также для оптимизации схем применения химиопрепаратов и антибиотиков в клинической практике.

6. Сформулированы новые подходы к рецептуростроению БАД-эубиотиков и лечебно-профилактических продуктов, в которых определяются требования адекватности процессов нормализации нормофлоры кишечника, вытеснения патогенных и условно-патогенных микроорганизмов и неспецифической стимуляции ферментных систем. Эти требования введены в дополнение к требованиям адекватности химического состава и энергетической ценности рецептур продуктов потребностям ор1атимс! согласно существующей концепции сбалансированного питания.

7. В клинических испытаниях было установлено, что в результате приема комплексных кисломолочных лечебно-профилактических продуктов и бифидосодержащих БАД, таких как: "жидкий концентрат бифидобактерий' и "бифидокефир", нормализуется состав индигенной микрофлоры кишечника, исчезают метеоризм, болевой и диспепсический синдромы, наблюдается положительная динамика в изменениях биохимических показателей крови. Было показано, что данные продукты можно с успехом использовать в лечении детей младшего возраста, больных гастроэнтерологического профиля и с расстройствами эндокринной системы.

8. В доклинических испытаниях доказана способность комплексных спмбиотичсскпх лечебно-профилактических продуктов и БАД, таких как: "жидкий концентрат бифидобактерий", "бифидокефир" и "бифацил", вытеснять из кишечного тракта патогенную микрофлору, уменьшать спонтанную гибель и стимулировать адаптацию мышей к неблагоприятным внешним условиям. Исследованиями иммунокомпетентных органов - тимуса и селезенки, доказаны стимулирующее влияние этих продуктов на функциональную активность иммунной системы.

1 0 . П Р И Л О Ж ЕНИЯ

10.1. БЕЖИ И ИХ ЗНАЧЕНИЕ В ПИТАНИИ

Установлено, что недостаточность белка в питании приводит к формированию и развитию алиментарных заболеваний, нередко имеющих тяжелые, необратимые последствия.Белки обеспечивают структуру и каталитические функции ферментов и гормонов, пластические процессы, связанные с ростом, развитием и регенерацией клеток и тканей организма, выполняют защитные функции, участвуют в образовании иммунных тел, у-глобулинов, гемоглобина, родопсина (зрительный пурпур сетчатки глаза). Белки участвуют в энергетическом балансе организма - в период больших энергетических затрат. Необходимо учесть, что избыток растительной грубой клетчатки в рационе резко снижает усвоение углеводов и других пищевых веществ.

Белки молока:

По характеру белков молоко можно подразделить на казеиновое (казеина 75 % и более) и альбуминовое (казеина 50 % и менее). К казеиновому относится молоко большинства сельскохозяйственных животных, в том числе и коров. Коровье молоко как заменитель женского молока в питании детей раннего грудного возраста не полностью соответствует особенностям детского пищеварения. К альбуминовому относится женское молоко, а также кобылье и ослиное молоко. Особенностями альбуминового молока является лучшая сбалансированность аминокислот, высокое содержание сахара и способностью при скисании образовывать мелкие, нежные хлопья, которые в желудке ребенка легко перевариваются и быстро усваиваются [153, 184].

В молоке представлены три вида белка - казеин, лактоальбумин и лактоглобулин, кроме того в нем содержится небольшое количество белка оболочек жировых шариков. В коровьем молоке казеина содержится 2.7%, лактоальбумина - 0.4% и лактоглобулина - 0.2 % (или 81.9%, 12.1% и 6% соответственно от общего количества белка).

Казеин представляет собой фосфопротеин и связан с кальцием молока. При скисании молока образуется молочнокислый кальций, остающийся в сыворотке, а казеин выпадает в виде крупных и плотных хлопьев.

Лактоальбумин отличается высоким содержанием лизина и фенилаланина. По физико-химическим свойствам кристаллический лактоальбумий близок к альбумину сыворотки крови.

Молочные глобулины по биологическим свойствам относятся к веществам, обладающим антибиотическими свойствами, и являются фракцией сывороточных белков, в которую входят антитела. Носителями иммунных свойств являются эвглобулин и псевдоглобулин, которые близки к глобулинам плазмы крови.

Молочный жир относится к наиболее ценным жирам по пищевым и биологическим свойствам. В составе жирных кислот молочного жира находятся низкомолекулярные кислоты (капроновая, каприловая, каприновая и др.), отличающиеся высокой биологической активностью. Эти кислоты представлены только в молочном жире и частично в пальмовых маслах, в других жирах их нет. Количество таких кислот в молочном жире составляет более 8%.

В молоке содержится молочный сахар - лактоза, углевод, нигде более не встречающийся. Лактоза при гидролизе распадается на глюкозу и галактозу. Расщепление лактозы в кишечнике протекает замедленно, не вызывая интенсивного брожения.

10.2. МОЛОКО, КАК ПИТАТЕЛЬНАЯ И БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОСНОВА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЛЕЧЕБНО-ДИЕТИЧ\ЕСКИХ ПРОДУКТОВ

Факторы, влияющие на жизнедеятельность бактерий в молоке

Согласно литературным данным, а также ранее полученным экспериментальным данным данной работы, можно заключить, что жизнедеятельность бифидобактерий, молочнокислых стрептококков, ацидофильной и болгарской палочек, пропионовокислых бактерий при их развитии в молоке определяется следующими закономерностями:

1. Казеин молока - обладает буферным действием: чем больше казеина, тем больше предельная кислотность, которую могут выдержать бифидо- и молочнокислые бактерии.

2. Пептон - добавление пептона к молоку усиливает рост многих штаммов молочнокислых стрептококков.

3. Пептиды - способствуют росту молочнокислых бактерий и бифидобактерий в значительно большей степени, чем аминокислоты, добавляемые в среды в эквивалентных количествах.

4. Нуклеиновые кислоты - Известно, что в женском молоке содержание этих веществ в десятки раз выше, чем в коровьем молоке, в котором содержание пуриновых и пиримидиновых оснований недостаточно для развития бифидобактерий.

5. Азотистые соединения - без них невозможен рост любых бактерий. Недостаток в молоке азотистых веществ и витаминов возможно возместить следующим путем.

• направленным подбором комбинаций молочнокислых, пропионовокислых и бифидобактерий, а также дрожжей и уксуснокислых бактерий;

• добавлением в молоко аутолизата дрожжей;

• добавлением в молоко продуктов гидролиза белка и других стимуляторов роста.

6. Жирные кислоты - каприловая и каприновая кислоты в концентрациях около 0.1 %, стеариновая кислота - 0.5% могут оказывать токсическое действие на молочнокислые бактерии. Угнетающее действие жирных кислот можно снизить, если повысить количество вносимой закваски [11,18].

7. Молочные ингибиторы - в сыром молоке могут. находиться агглютинины, обусловленные бактериальными антигенами. В присутствии агглютининов нарушается нормальное деление клеток.

8. Антибиотики - наличие антибиотиков недопустимо, поскольку вызывают токсический эффект и процесс сквашивания может быть полностью остановлен.

9. Маститное молоко - при содержании в молоке лейкоцитов порядка 1.2 млн. в 1 мл развитие бифидобактерий и молочнокислых стрептококков будет тормозиться, поэтому недопустимо использовать молоко, содержащее более 0.5 млн. лейкоцитов.

Биологическая ценность молока

Молоко и молочные продукты относятся к незаменимым продуктам питания человека, так как в них в сбалансированном состоянии содержатся все необходимые для организма пищевые и биологически активные вещества. Особо важное значение молоко и молочные продукты имеют в питании людей крайних возрастных категорий (в детском и пожилом возрасте).

Белки молока по сбалансированности аминокислот позволяют значительно улучшить общую сбалансированность аминокислот белков всего пищевого рациона. Жиры молока содержат дефицитную арахидоновую кислоту и встречающийся только в молоке биологически активный белково-лецитиновый комплекс. Углеводы молока представлены своеобразным сахаром - лактозой, ни в каких других продуктах не встречающийся.

Особое значение имеет кальций молока, который можно рассматривать как самый усвояемый кальций в природе. Наконец, в молоке представлены исключительно благоприятно сбалансированный комплекс витаминов, особенно витаминов А и В2, витамина О, каротина, тиамина и аскорбиновой кислоты.

Общая сбалансированность всех веществ молока характеризуется антисклеротической направленностью, которая оказывает нормализующее влияние на уровень холестерина в крови. Таким образом, молоко и молочные продукты относятся к продуктам высокой пищевой, биологической и диетологической значимости, в связи с чем широко используются почти во всех диетах современного лечебного питания.

10.3. АМИНОКИСЛОТЫ И ИХ ЗНАЧЕНИЕ В ПИТАНИИ

Из 80 известных аминокислот в пищевом рационе интерес представляют 22-25 аминокислот, которые используются человеком. Основным критерием в определении биологической ценности и физиологической роли аминокислот является их способность поддерживать рост и обеспечивать синтез белка. Белок считается полноценным, если в нем сбалансированы все незаменимые аминокислоты.

Ь-гистидин в значительном количестве содержится в гемоглобине, а также входит в состав карнозина.

Ь-валин - физиологическая роль выяснена недостаточно. При дефиците валина наблюдается расстройство координации движений, гиперестезия.

Ь-изолейцин - входит наряду с лейцином в состав почти всех белков организма, за исключением гемоглобина. Отсутствие изолейцина в пище приводит к отрицательному азотистому балансу.

Ь-лизин - одна из наиболее важных незаменимых аминокислот (входит в триаду: лизин, триптофан, метионин). Недостаток лизина приводит к нарушениям кровообразования, снижению количества эритроцитов. Потребность в лизине определена в количестве 3-5 г в сутки.

Ь-метионин - играет важную роль в нормализации процессов метилирования, используется для синтеза холина (предупреждает ожирение печени). Установлена связь метионина с обменом витамина В12 и фолиевой кислоты, необходим для синтеза адреналина. Суточная потребность составляет околоЗ г.

Ь-триптофан - необходим для роста и поддержания азотистого равновесия. Играет важную роль в образовании сывороточных белков и гемоглобина. Суточная потребность составляет около 1 г. Белки бобовых продуктов, особенно сои, отличаются высоким содержанием триптофана.

10.4. ЗНАЧЕНИЕ ВИТАМИНОВ В ПИТАНИИ

Витамины - необходимые для нормальной жизнедеятельности низкомолекулярные органические соединения с высокой биологической активностью, которые в организме не синтезируются (или синтезируются в недостаточных количествах). Биологическая роль водорастворимых витаминов определяется их участием в построении различных коферментов. Биологическая ценность жирорастворимых витаминов в значительной степени связана с их участием в контроле функционального состояния мембран клетки. Повышенная потребность организма в витаминах возникает при:

1) интенсивном росте, беременности, грудном вскармливании;

2) особых климатических условиях;

3) интенсивной физической нагрузке;

4) стрессовых состояниях;

5) интоксикациях и инфекционных заболеваниях;

6) заболеваниях внутренних органов.

Возможные причины неадекватной обеспеченности организма витаминами: алиментарная недостаточность - недостаток витаминов в рационе, дисбаланс химического состава пищи и т.п.); угнетение нормофлоры кишечника, продуцирующей ряд витаминов, утилизация витаминов патогенной микрофлорой и паразитами; нарушения ассимиляции витаминов - заболевания кишечника, поражения гепатобилиарной системы, врожденные дефекты транспортных и ферментных механизмов всасывания; антивитаминное действие лекарственных препаратов.

Важнейшие водорастворимые витамины тиамин) - участвует в построении ряда важнейших ферментов (пируватдегидрогеназы, транскетолазы, ос-кетоглуторатдегидрогеназы), а также в биосинтезе важнейшего нейромедиатора - ацетилхолина.

Недостаточность тиамина приводит к значительным биохимическим нарушениям, вызывая возникновение ряда патологических симптомов со стороны нервной системы (головная боль, раздражительность, ослабление памяти) и сердечно-сосудистой системы (одышка, боли в сердце, расширение границ сердца). Суточная потребность человека в тиамине составляет 0.6 мг/1000 ккал.

Одна из важнейших причин недостаточности тиамина - односторонне питание продуктами переработки зерна тонкого помола и избыток углеводов. Высоким содержанием тиамина отличаются телятина и свинина. Содержание тиамина высоко в дрожжах, особенно в пивных. В молоке, овощах и фруктах уровень тиамина весьма низок.

В2 (рибофлавин) - участвует в процессах биологического окисления и энергетического обмена, а также в построении зрительного пурпура. Суточная потребность взрослого человека составляет 0.8 мг/1000 ккал.

Основная причина авитаминозов В2 - резкое снижение потребления молока, заболевания кишечника, прием медикаментов.

В^ (пиридоксины) - участвуют в качестве коферментов в процессах аминокислотного обмена, образования биогенных аминов. Витамины группы В^ также необходимы для реакций углеводного. и липидного обмена. Суточная потребность взрослого человека составляет 0.7 мг/1000 ккал.

Недостаточность Вб сопровождается нарушениями нервной системы (раздражительность, сонливость) кожных покровов и слизистых оболочек. Витамин В^ достаточно широко распространен в продуктах - печень, мясо, гречневая крупа, пшено, картофель.

В}? (кобаломнны) - участвуют в построении ряда ферментов, катализирующих перенос лабильной метильной группы, и биосинтезе нуклеиновых кислот Витамин В12 влияет на процессы кроветворения и синтез белка. Суточная потребность взрослою человека составляет 2 мкг, беременных - 3 мкг.

Авитаминоз В12 вызывает нарушения кроветворения, поражения нервной системы и органов пищеварения. Единственный источник В^ - животные продукты (мясо, рыба, творог). В молоке содержание В12 невысоко.

РР (ниацин, никотиновая кислота) - принимает непосредственное участие в процессах биологического окисления и энергетического обмена. Суточная потребность взрослого человека составляет 6.6 мг/1000 ккал.

При недостаточности ниацина развивается пелларга - тяжелое заболевание, связанное с поражениями желудочно-кишечного тракта (развивается упорная диарея), кожи (дерматит лица и открытых частей тела) и центральной нервной системы (раздражительность, адин7амия, психозы). Наиболее вероятной причиной развития гиповитаминоза РР у жителей России являются хронические заболевания желудочно-кишечного тракта, вызывая нарушения всасывания витамина.

Важнейшие пищевые источники витамина РР - крупы, бобовые, внутренние органы животных (печень, почки, сердце). Очень высоко содержание ниацина в дрожжах.

С (аскорбиновая кислота) - участвует в реакциях гидроксилирования, биосинтезе кортикостероидов и метаболизме холестерина. Витамин С играет важную роль во многих физиологических процессах, способствует регенерации и заживлению тканей, обеспечивает нормальный иммунологический статус, улучшает всасывание железа в кишечнике, способствует нормализации гематологического статуса организма. При гиповитаминозе витамина С отмечаются нарушения общего сотояния, наклонность к кровоточивости десен. Тяжелые формы гиповитаминоза характеризуются резким повышением проницаемости сосудистых стенок, приводящим-к нарушениям гемостаза п множественным кровоизлияниям в кожу, суставы, внутренние органы. Источниками витамина С служат в основном овощи и фрукты. Витамин С крайне неустойчив и кулинарная обработка овощей и фруктов, а также длительное хранение ведет к значительным потерям витамина.

С целью профилактики авитаминозов С, приказом министра здравоохранения СССР № 695 от 24.08.72 рекомендуется проводить витаминизацию блюд в зимне-весенний период. Суточная потребность в витамине С: для взрослых людей - 80 мг, для беременных - 100 мг, для кормящих женщин - 120 мг.

Жирорастворимые витамины

Витамин А - витамины группы А включают значительное количество соединений, важнейшими из которых являются ретинол, ретиналь, ретиноевая кислота и эфиры ретинола. Витамин А необходим для роста, развития тканей, поддержания иммунного статуса. Витамин влияет на структуру и функцию мембран клетки, играет важную роль в процессах метаболизма гликопротеидов. Потребность взрослого человека в витамине А составляет 1.5 мг/сутки.

Недостаточность (как и переизбыток) витамина А ведет к тяжелым нарушениям со стороны многих органов и систем, в основе которых лежит генерализованное поражение эпителия. Особенно характерны поражения кожных покровов, дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта, мочевыводящих путей. Нарушения барьерных свойств эпителия ведет к резкому снижению устойчивости к инфекционным заболеваниям. Причиной авитаминоза А служит резкий дефицит животных продуктов, а также белковая недостаточность. В нашей стране состояния гиповитаминоза А чаще всего возникают из-за поражения слизистых кишечника, вызывающих нарушения процесса всасывания липидов.

Гипервитаминоз А вызывает поражения нервной системы, кожи, развитием диспептических явлений. Основные причины гипервитаминоза - потребление пеменн белого медведя, тюленя, массивная терапия препаратами витамина А, длительное потребление морковного сока.

Витамин А содержится в животных продуктах, однако их перечень ограничен и вюочает печень животных и рыб, сливочное масло, сливки, яичный желток, рыбий жир. Содержание витамина А в молоке невелико.

Витамин Р - связан с метаболизмом кальция - ускоряет всасывание в кишечнике, воздействует на отложение кальция в костной ткани, определяет ряд свойств мембран клетки и субклеточных структур.

Неостаточность витамина Э широко распространена среди детей раннего возраста и характеризуется поражением нервной системы (нарушение сна, раздражитсл^псет:,), костной ткани (задержка прорезывания зубов, размягчение и деформация костей позвоночника и кончностей). Дефицит витамина Э у взрослых развивается только в особых случаях - у лиц пожилого возраста или жителей Крайнего Севера при неправильном построении пищевых рационов.

В последние годы значительно участились , в особенности у детей раннего возраста, случаи гипервитаминоза О, возникающего при нерациональном употреблении концентрированных растворов препаратов витамина О, используемых для лечения и профилактики рахита. Избыток витамина вызывает образование продуктов перекисной природы, ведущих к повреждению клеточных мембран. Чило продуктов, содержащих значительное количество витамина Р, невелико - икра, кета, куриные яйца, рыбий жир, печень морских животных.

Витамин Е - механизм действия связан с антиоксидантными свойствами этого витамина и поддержанием стабильности мембран клеток. Авитаминоз Е у человека не описан Гиповитаминоз Е вызывает обширный гемолиз эритроцитов, который усиливается при потреблении с пищей ненасыщенных жирных кислот (в норме доля эритроцитов, подвергшиеся гемолизу не превышает 2-5%). Потребность взрослого человека в витамине Е составляет 20-30 мг/сутки.

Основными источниками витамина Е являются растительные масла, особенно нерафинированные. Небольшое количество витамина Е содержится в молочных продуктах, рыбе и овощах.

267

Витамин К - необходим для синтеза в печени протромбина (фактор II), проконвертина (фактор VII), фактора IX и фактора X, которые необходимы при свертывании крови. Недостаточность витамина К приводит к замедлению свертывания крови и развитию выраженного геморрагического синдрома. Основная причина возникновения недостаточности витамина К - нарушение его всасывания в желудочно-кишечном тракте. Потребность взрослого человека в витамине К составляет 0.2-0.3 мг/сутки. Витамин К содержится в некоторых овощах (капуста, тыква, томаты), а также в свиной печени, в бобовых и злаковых культурах его содержание не превышает 0.1 мг%.

10.5. ФОРМУЛА СБАЛАНСИРОВАННОГО ПИТАНИЯ ПО А.А. ПОКРОВСКОМУ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ: ВОЗМОЖНОСТИ ТЕРАПИИ БИФИДОСОДЕРЖАЩИМИ ПРОДУКТАМИ И ОРГАНИЗАЦИЯ ИХ ПРОИЗВОДСТВ

8.1. ОСНОВНЫЕ АСПЕКТЫ, КОТОРЫЕ РАССМОТРЕНЫ В НАСТОЯЩЕЙ РАБОТЕ

Здоровье каждого человека только на 20 % определяется наследственностью, остальные 80% определяются факторами "внешней среды" - структурой питания, экологией, социальным устройством общества. Сегодня в России все эти факторы таковы:

В структуре питания выявлены значительные диспропорции, которые нарушают течение обменных процессов, снижают иммунореактивность организма, поражают нормофлору кишечника и других слизистых.

Заболеваемость населения дисбактериозами достигает 90 %, вызывая развитие соматических, неврологических и функциональных расстройств систем организма.

Широкомасштабное загрязнение атмосферного воздуха, водных источников и земель вызывает отравление вредными веществами как из окружающей среды, так и в результате употребления пищи, полученной из "экологически грязных" районов.

По данным Российской Академии Медицинских Наук в настоящий момент воздействие этих факторов и, в особенности, масштабные нарушения структуры питания в значительной степени ответственны за самую высокую в мире смертность от сердечнососудистых заболеваний и злокачественных новообразований, прогрессируют заболевания сахарным диабетом, значительно возросло число ыорнчныл иммунодефицитов. Динамика развития этих заболеваний, выявленные за последнее десятилетие у населения России, позволяет говорить о них как о проблеме национальной безопасности.

Для выхода из критической ситуации необходимо принимать срочные меры, среди которых наиболее эффективными являются мероприятия по стимуляции защитных и адаптационных функций самого организма. Для этих целей наиболее доступным способом является широкомасштабное внедрение в рацион питания населения комплексных симбиотических лечебно-профилактических продуктов (ЛПП) и биологически активных добавок (БАД), предназначенных для коррекция и стимулирование нормофлоры кишечного тракта.

Новые подходы к разработке лечебно-диетических продуктов

До настоящего времени разработчики эубиотиков не учитывали тот важный факт, что соотношение между несколькими видами бифидобактерий, обитающими в кишечнике, сильно изменяется с возрастом человека Среди штаммов, выделенных от людей, различают 5 фенотипов: B.bifídum, B.longum, B.adolescentis, В.breve, B.infantis и 9 геновидов. Вид B.bifídum выявлен у здоровых людей всех возрастных групп, однако у детей, содержащихся на грудном вскармливании, он является преобладающим. С возрастом частота выделения его постепенно снижается. Вид B.longum также характерен и для детей и для взрослых и выделяется у 40-60 % грудных детей и у 70-75 % детей старшего возраста и взрослых. К старости частота обнаружения этого вида снижается до 30 %. Вид B.adolescentis свойственен только взрослым людям и детям старшего возраста и выделяется у них в 50-65 % случаев. У пожилых лиц он становится преобладающим /"по %). Виды В.breve и B.infantis и их биоварианты обнаруживаются только у детей грудного возраста и лишь в небольшом проценте случаев.

В настоящей работе данные по клиническим исследованиям нормофлоры кишечника в различных возрастных группах населения были обработаны методами регрессионного анализа и легли в основу математической модели изменения состава бифидофлоры, описанную в Главе 3. В настоящий момент, используя математическую модель изменения бифидофлоры, ведутся работы над новыми иммобилизованными формами эубиотиков, содержащими комплекс бифидо- и лактобактерий в определенных пропорциях. Применение технологии иммобилизации на энтеросорбентах позволяет защитить бактерии при прохождении через кислую среду желудка. Кроме того, энтеросорбенты, выводя из организма продукты незавершенного метаболизма и токсины, придают иммобилизованным препаратам также антитоксическую активность.

Следует также отметить, что российскими исследователями-микроэкологами было показано: эффективно колонизировать слизистые кишечника бифидобактериями можно г о при создании поверхностной концентрации клеток не менее 10J кл/см . Это условие можно обеспечить на локальном участке толстого кишечника либо вводя иммобилизованные препараты, либо применяя концентрированные формы бифидопрепаратов, содержащих в 1 мл не менее 10 ^ клеток. Препарат, удовлетворяющий последнему условию, был разработан в ГНЦ ВБ "Вектор" около 3 лет назад - это "Жидкий Концентрат Бифидобактерий". Препарат является биологически-активной добавкой для коррекции дисбактериозов. Его эффективность подтверждена доклиническими испытаниями на лабораторных животных (Глава 5) и клиническими испытаниями в условиях стационаров или при амбулаторных наблюдениях (Глава 6). Препарат запатентован и успешно применяется в педиатрии, гастроэнтерологии, гинекологии, в комплексном лечении инфекционных и аллергических заболеваний.

С учетом того, что распространение дисбактериозов в России носит массовый характер, а лечение только лекарственными эубиотиками дорого и малоэффективно, наиболее приемлемым способом поддержания здоровья населения является внедрение в ежедневный рацион ЛПП и БАД. Эти продукты при постоянном употреблении корректируют состав биоценозов кишечника и других слизистых, восстанавливают обменные процессы и т.п. В данной работе при разработке комплексных лечебных и диетических продуктов особое место отводилось научной обоснованности рецептур, которые различаются по санитарно-гигиеническим требованиям, пищевой и биологической ценности, а также по микробиологическому составу симбиозов.

За последние три года, объединив исследования, описанные в Главах 2-7, были разработаны, исследованы и сертифицированы рецептуры и технологии бифидосодержащих кисломолочных продуктов: бифидокефир (детский, диетический и лечебно-профилактический), бифацил (детский и лечебно-профилактический), бифапюпик и бифидоряженка (диетические - как продукты функционального питания). Последние два продукта были сертифицированы недавно, поэтому испытания их медико-биологических свойств продолжается.

Опыт применения лечебно-диетических продуктов

Кисломолочные лечебно-диетические бифидосодержашие напитки имеют некоторые преимущества перед сухими лекарственными эубиотиками: во-первых, содержат бактерии в физиологически активном состоянии, во-вторых, содержат ряд витаминов, незаменимых аминокислот, а также ненасыщенных жирных кислот. Перечень БАД и лечебно-профилактических продуктов, разработанных и сертифицированных на основании исследований, описанных в данной работе, краткая характеристика этих продуктов, а также стадия их внедрения в производство приведены в таблице 46.

Для оценки санирующего воздействия указанных лечебно-диетических продуктов были проведены полевые клинические исследования в различных отделениях Областной и детской больницы № 6 Новосибирска. Исследования проводились по показаниям -дисбактериоз, колит, энтероколит, диспепсия, а также наблюдались больные контрольных групп, не получающих бифидопрепараты. В клинических исследований фиксировались субъективные показатели больных, показатели крови, уровень нормофлоры и условно-патогенной флоры кишечника, содержание иммунноглобулинов и т.п.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Молокеев, Алексей Владимирович, Новосибирск

1. A.c. № 35347 НРБ2. A.c. № 843699 Польша3. A.c. № 1113077 СССР4. A.c. №490814 СССР5. A.c. № 789580 СССР

2. Абрамов H.A. Технологические проблемы обеспечения эубиотиками нужд здравоохранения России. // Тез. Докл. Всероссийской научно-практической конференции "Дисбактериозы и эубиотики", М.: 1996 г., стр. 1

3. Айзерман М.А., Завалишин Н.В., Пятницкий Е.С. Глобальные функции множеств в теории выбора альтернатив. // Автоматика и телемеханика, 1977, №3, стр. 111-125

4. Акимкин В.Г. Дисбактериоз кишечника как фактор риска заболевания нозокоминальным сальмонелезом. // Тез. Докл. Всероссийской научно-практической конференции "Дисбактериозы и эубиотики", М.: 1996 г., стр. 2

5. Бабенко А.И., Крапивко P.E., Мингазов И.Ф., Чернышев В.М. Обзор состояния здоровья населения и службы охраны материнства и детства в Сибири. Межрегиональная Ассоциация. Новосибирск, 1994

6. Банникова Л.А., Королева Н.С., Семенихина В.Ф. // Микробиологические основы молочного производства Справочник под редакцией Костина Я.И. М,: Агропромиздат, 1987, 400 с.

7. Белобородова Н.В. О микрофлоре хозяина и ее участии в ответе на инфекцию // ж. Антибиотики и химиотерапия, 1998, т. 43, № 9, стр.44-48

8. Беляев Е.И. Пути усовершенствования препаратов, нормализующих микрофлору кишечника. // в сб. под ред. Блохиной "Аутофлора человека в норме и патологии и ее коррекция", Горьковский медицинский институт, 1988, с.74-79

9. Бибикова М.В., Бондарева Н.С. Препараты микробного происхожления для лечения атеросклероза. // ж. Антибиотики и химиотерапия, 1998, т. 43, № 8, с.34-39

10. Биохимические методы исследований в клинике./ Под ред. Покровского A.A. -М.: Медицина, 1969, 344 с.

11. Богадельников И.В., Проценко В.А.// Педиатрия, 1981, №7, с.30-34

12. Богданов В.М. Микробиология молока и молочных продуктов. М.: Пищевая пром., 1969, 367 с.

13. Болгов В.Л. и др. Клиника кишечных заболеваний у детей раннего возраста, вызываемых условно-патогенными бактериями.// Тез. Докл. Всероссийской научно-практической конференции "Дисбактериозы и эубиотики", М.: 1996 г , етр 6

14. Бондаренко A.B. и др. Новые подходы к лечению дисбактериозов. // Тез. Докл. Всероссийской научно-практической конференции "Дисбактериозы и эубиотики", М.: 1996 г., стр. 8

15. Бондаренко В.М., Учайкин В.Ф., Мурашова А.О., Абрамов H.A. Дисбактериоз. Современные возможности профилактики и лечения. Москва, 1995 г.

16. Борисова Г.В., Котова О Т. и др.// Тезисы докладов Всесоюзной научно-технической конференции "Пути развития науки и техники в мясной и молочной промышленности" Углич, 1988, ч.2, стр. 43-44

17. Борисов А.Н., Левченков A.C. Методы интерактивной оценки решений. -Рига: Зинатне, 1982

18. Вахромеева С.Н., Денисова С.Н. Частота обнаружения'дисбактериозов у детей с атопическим дерматитом. // Тез. Докл. Всероссийской научно-практической конференции "Дисбактериозы и эубиотики", М.: 1996 г., стр. 9

19. Вельтищев Ю.Э.П Вопросы охраны материнства и детства, №10, 1989, с. 3-12

20. Вееелов А Я Современные представления о нормальной микрофлорепищеварительного тракта взрослого человека и изменения ее в норме и при некоторых заболеваниях органов пищеварения.// ж. Лаб. дело, 1988, № 3

21. Волосникова И.В. Холестеринмодифицирующая активность лактобацилл in vitro. II Сб. Проблемы медицинской биотехнологии и иммунологии инфекционных болезней. МНИГОМ им. Г,Н. Габричевского. М. 1996.

22. Волосникова И.В., Шендеров Б.А. Холестеринмодифицирующая активность лактобацилл и продукта питания направленного действия in vitro и in vivo. // Тез. Докл. Всероссийской научно-практической конференции "Дисбактериозы и эубиотики", М.: 1996 г., стр. 9

23. Временная Фармакопейная Статья ВФС 42-65ВС-86 Бификол-форте

24. Выгодский М.Я. Справочник по высшей математике. М.: Наука, 1975, стр.475-483

25. Вяхирева З.Н. и др. Особенности коррекции дисбактериоза кишечника у новорожденных, перенесших перинатальную гипоксию. // Тез. Докл. Всероссийской научно-практической конференции "Дисбактериозы и эубиотики", М.: 1996 г., стр. 10

26. Габриэлян Н.И. и др. Дисбактериоз у больных с бактериальными эндокардитами. // Тез. Докл. Всероссийской научно-практической конференции "Дисбактериозы и эубиотики", М.: 1996 г., стр. 10

27. Габриэлян Н.И. и др. Дисбактериоз у больных с хронической почечной недостаточностью. // Тез. Докл. Всероссийской научно-практической конференции "Дисбактериозы и эубиотики", М.: 1996 г., стр. 10

28. Габриэлян Н.И. и др. Особенности кишечной микрофлоры у коронарных больных. /7 Тез. Докл. Всероссийской научно-практической конференции "Дисбактериозы и эубиотики", М: 1996 г., стр. 13

29. Геппе H.A., Круглов А.Н., Эрдес С.И., Бабушкина Н.Г. Клинические особенности бронхиальной астмы у детей с дисбактериозом кишечника. // Тез. Докл. Всероссийской научно-практической конференции "Дисбактериозы и эубиотики", М: 1996 г., стр. 11

30. Годованный Б.А. Факторы естественной защиты макроорганизма при дизентерии. Автореф. докт. дис. М., 1974

31. Гончарова Г.И. Бифидофлора человека, ее защитная роль в организме и обоснование сфер применения прапаратов бифидумбактерина. Докторская диссертация, II., 1982 г.

32. Гончарова Г.И. Бифидобактерии и их использование в клинике, медицинской промышленности и сельском хозяйстве. М., 1986 г., с. 10-17.

33. Гончарова Г.И. Бифидофлора человека и необходимость ее оптимизации. //Сб. науч. Тр. Московский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Габричевского. М., 1986, стр. 10-17

34. Гончарова Г.И., Дорофейчук В.Г., Смолянская А.З., Соколова К.Я. Микробная экология кишечника в норме и при патологии // ж. Антибиотики и химиотерапия, т.34, №6, 1989

35. Гончарова, A.M. Лянная, Л.П. Семенова и др. Лечение и профилактика дисбактериоза кишечника бифидумпрепаратами. // Сб. Бактерийные биологические препараты. МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского. М., 1989.

36. Государственный доклад. О состоянии окружающей природной среды РФ в 1993 голу -М.: 1994

37. Григорьев A.B. и др. Иммобилизованный на сорбенте пробиотик "бифидумбактерин-форте'7/ Тез. Докл. Всероссийской научно-практической конференции "Дисбактериозы и эубиотики", М.: 1996 г., стр. 14

38. Гудкова М.Я. Новые кисломолочные продукты "Вита" и "Углический" // Достижения науки и техники АПК. 1884, № 4, стр.53-54

39. Демин А., Демина И. Задачи атласа и некоторые современные проблемы демографической ситуации, здоровья и условий жизни населения в России 1994

40. Демографический ежегодник РФ 1993. Управление демографической статистики и переписи населения и отделение демографии Института статистики и экономических исследований Госкомстата РФ. - М.: 1994

41. Диагностика и диетотерапия пищевой аллергии: Методические рекомендации. -М., 1984

42. Диагностика, клиника и лечение дисбактериоза кишечника у детей. Методические рекомендации. М., 1990 г.

43. Дисбактериоз кишечника и методы его лабораторной диагностики. Методические рекомендации., Хабаровск, 1987

44. Долгушина В.Ф. //Микробиология, Эпидемиология и Иммунология, 1991,№ 4, с.56-5852