Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Поиск генетических маркеров, определяющих предрасположенность к сахарному диабету типа 2

ВАК РФ 03.01.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Поиск генетических маркеров, определяющих предрасположенность к сахарному диабету типа 2"

00460УЫ?

На правах рукописи

ПОТАПОВ ВИКТОР АНДРЕЕВИЧ

ПОИСК ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ, ОПРЕДЕЛЯЮЩИХ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТЬ К САХАРНОМУ ДИАБЕТУ ТИПА 2

03.01.03 - Молекулярная биология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

3 О СЕН 2010

Москва-2010

004609619

Научный руководитель:

доктор биологических наук, Чистяков Дмитрий Александрович

профессор

Научный консультант: доктор биологических наук, Носиков Валерий Вячеславович

профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Московский государственный медико-стоматологический университет

доктор биологических наук, профессор Институт молекулярной генетики РАН

Бирюкова Елена Валерьевна

Сломинский Петр Андреевич

Ведущая организация: Медико-Генетический Научный

Центр РАМН

Защита состоится октября 2010 г. в часов на заседании

Диссертационного совета Д.217.013.01 при Государственном научно-исследовательском институте генетики и селекции промышленных микроорганизмов по адресу: 117545, Москва, 1-й Дорожный проезд, д.1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУП «ГосНИИ генетика». Автореферат разослан «

сентября. 2010 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета кандидат химических наук

Т.Л. Воюшина

Актуальность проблемы. На рубеже XX-XXI веков был отмечен существенный рост заболеваемости сахарным диабетом типа 2 (СД типа 2). Особенно резкое увеличение количества людей с этим заболеванием наблюдается в промышленно развитых странах. В России количество больных СД типа 2 составляет около 9-ти миллионов человек. Основную массу больных этим типом диабета (более 98%) составляют пациенты, у которых диабет развивается сравнительно поздно, в основном, после 35-летнего возраста. Главная проблема СД типа 2 заключается в том, что это заболевание приводит к развитию ряда сосудистых осложнений, что является одной из основных причин инвалидизации и смертности у пациентов.

Изучение сахарного диабета имеет многолетнюю историю, но до сих пор факторы, приводящие к этому заболеванию, и их взаимодействие между собой до конца не изучены. Также до сих пор не ясно, почему, при одинаковых условиях внешней среды и образа жизни у одних людей имеет место развитие диабета, а у других не возникает никаких нарушений. В связи с этим, изучение генетической предрасположенности к сахарному диабету имеет огромное значение. При этом, наряду с полными геномными поисками, одним из наиболее эффективных подходов является использование полиморфных маркеров различных генов-кандидатов, то есть тех генов, чьи белковые продукты (ферменты, регуляторные белки и пептиды, структурные белки) могут быть потенциально вовлечены в развитие этого заболевания.

Цель н задачи исследования. Целью данной работы было изучение ассоциации ряда полиморфных маркеров генов-кандидатов с развитием СД типа 2 и с несколькими метаболическими характеристиками в русской популяции. В соответствии с указанной целью нами были поставлены следующие задачи:

1. Определить в выборках больных (п = 387) и здоровых (п = 290) индивидов частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров генов, кодирующих: субъединицу белка Кйб.2 канала транспорта ионов калия (KCNJ11), рецептор к сульфонилмочевине (АВСС8), транскрипционный фактор 7 (TCF7L2), белок адипонектин (ADIPOQ), рецепторы типа 1 и 2 к адипонектину (ADIPORI и 2), рецептор, активируемый пролифератором пероксисом типа у2 (PPARG2), регуляторную субъединицу белка, ассоциированного с ингибированием сигнальной циклинзависимой протеинкиназы CDK5 (CDKAL1), переносчик ионов цинка

(5ЬС30А8), инсулиноподобный фактор роста типа 2 (/GF2^?P2), продукт гена ассоциированного с ожирением (/ТО). Кроме того нами была изучена ассоциация с СД типа 2 полиморфных маркеров в хромосомных областях, где расположены гены СйШ2А/2В и ННЕХ/ЮЕ.

2. Провести сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов полиморфных маркеров данных генов-кандидатов в исследованных выборках для выявления ассоциации изученных маркеров с развитием болезни и определения вклада данных генов в наследственную предрасположенность к патологии.

3. Провести сравнительный анализ распределения генотипов полиморфных маркеров данных генов-кандидатов в исследованных выборках больных и здоровых индивидов для выявления корреляции между изученными полиморфными маркерами и рядом метаболических показателей, таких как, базальный уровень глюкозы, уровень глюкозы через 2 часа после ППТГ (пероральный глюкозо-толерантный тест), базальный уровень инсулина в крови, уровень инсулина через 2 часа после ППТГ, индексы НОМА-Ж и НОМА-р.

Научная новизна работы. В данной работе впервые исследована ассоциация с СД типа 2 полиморфных маркеров «5279 гена КСМЛ1, п1 799859 гена АВСС8, п13266634 гена 5ЬС30А8, п'7903146 и «/2255372 гена ТС1~712, п7756992, ^9465871, п7754840 и к10946398 гена СИКАИ, п10811661 в области генов СИШ2А/2В, п4402960 гена ЮР2ВР2, п8050136 гена ПО, «1Ш875 в области генов ННЕХ/ЮЕ, п1801282 гена РРАКС2, к1501299 гена АШРОд, п2275738 гена АО!РОК1, гз!1061971 и г$16928751 гена АП!РОЯ2 в русской популяции. Также впервые была изучена корреляция между носительством определенных генотипов и рядом метаболических характеристик у больных с СД типа 2.

Обнаружена ассоциация полиморфных маркеров г55219 гена КСШП, гз1799859 гена АВСС8, п13266634 гена 8ЬС30А8, п7903146 гена ТСР712, г$10811661 в области генов СОШ2А/2В, к1801282 гена РРАЯв2, п11061971 гена /Ш/РОД2, г$7756992, г¡9465871 и Ы0946398 гена СйКАИ с СД типа 2.

С изменением базального уровня глюкозы были ассоциированы полиморфные маркеры: гя12255372 гена ТСР7Ь2 и 1501299 гена А01Р0д. С изменениями уровня глюкозы через 2 часа после ППТГ были ассоциированы следующие полиморфные маркеры: к1799859 гена АВСС8, 12255372 и п7903146 гена ГС/712, т13266634 гена

БЬС30А8, «1501299 гена АГ>1РО<2, гб2275738 гена АБ1РОК1 и п9465871 гена СБКЛЫ.

2

С изменением базального уровня инсулина были ассоциированы полиморфные маркеры: rsl799859 гена АВСС8, rsI2255372 и rs7903¡46 гена TCF7L2, rs!1061971 и rsl6928751 гена ADIPOR2, rs946587I гена CDKAL1. С изменениями уровня инсулина через 2 часа после ППТГ были ассоциированы следующие полиморфные маркеры: rs5219 гена KCNJ11, rsl799859 гена АВСС8, rs 12255372 и rs7903146 гена TCF7L2, rsl3266634 гена SLC30A8, rs!6928751 гена ADIPOR2, rs7756992 и rs9465871 гена CDKAL1 nrsl0811661 в области генов CDKN2A/2B.

С изменением индекса НОМА-Р были ассоциированы полиморфные маркеры rsl799859 гена АВСС8, rsl2255372 и rs7903146 гена TCF7L2, rsl3266634 гена SLC30A8, rsl501299 гена AD1POQ, rs7756992 гена CDKAL1, rsl081166! в области генов CDKN2A/2B. С изменением индекса НОМА-IR: маркеры rs2275738 гена ADIPORI, rsl6928751 и rsl 1061971 гена ADIPOR2, rs8050136 гена FTO.

Практическая ценность работы. Выявление ассоциации полиморфных маркеров генов KCNJ11, TCF7L2, области CDKN2A/2B, PPARG2, АВСС8, ADIPOR2, SLC30A8, CDKALI может способствовать выявлению групп с высоким риском развития СД типа 2, а также использоваться для более точного прогноза течения заболевания и для выбора индивидуальной терапии при СД типа 2.

Апробация работы. Диссертационная работа была представлена на заседании Секции молекулярной биологии Ученого Совета ФГУП "ГосНИИ генетика" от 25 мая 2010 г. Результаты настоящей работы доложены автором диссертации на V-ом съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров (г. Москва, 2009), V-om Всероссийском диабетологическом конгрессе (г. Москва, 2010) и VI-ом Съезде Российского общества медицинских генетиков (г. Ростов-на-Дону, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 статей, а также тезисы докладов и сообщений на отечественных конференциях.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, описания использованных материалов и методов, результатов и их обсуждения, выводов и списка литературы. Материалы диссертации изложены на 107 страницах машинописного текста и содержат 38 таблиц, 6 рисунков и 2 схемы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Выборка образцов и методы исследования. Для исследования ассоциации полиморфных маркеров генов-кандидатов был использован метод ПЦР с последующим анализом длины рестриктазных фрагментов ДНК в акриламидном или агарозном геле. Основные статистические методы: для сравнения частот аллелей и генотипов исследуемых полиморфных маркеров в группах с наличием и отсутствием заболевания нами использовался критерий х2- В исследованиях типа «случай-контроль» относительный риск развития заболевания оценивается с помощью показателя соотношения шансов (odds ratio, OR).

Для проведения исследования использовали две группы пациентов. В исследования было включено 376 пациентов с установленным диагнозом СД типа 2 («СД2+») на основании клинических и биохимических исследований. Контрольная группа («СД2-») представляла собой случайную выборку из 210 пациентов без признаков заболевания (табл. 1).

Таблица 1.

Метаболические характеристики СД2+ (п = 376) СД2- (п = 210)

Базальный уровень глюкозы (моль/л) 9,9 ±1,7 5,7 ± 0,5

Уровень глюкозы через 2 часа после ППГТ* (моль/л) 12,4 ±1,2 6,8 ±0,7

Базальный уровень инсулина (мЕд/л) 14,8 ±7,7 10,2 ±6,2

Уровень инсулина через 2 часа после ППГТ (мЕд/л) 84,0 ±32,1 48,2 ± 19,9

НОМА-Ь 46,2 ± 22,4 92,7 ± 46,3

НОМ/Ш 6,5±1,6 2,6±0,6

* ПГТТ- пероральный глюкозо-толерантный тест

У всех пациентов были измерены следующие параметры: базальная концентрация глюкозы и инсулина в крови, концентрация глюкозы и инсулина в крови через 2 часа после ППГТ, а также рассчитаны индексы HOMA-IR (Homeostasis model assessment-insulin resistance) и HOMA-fS (homeostasis model assessment of [i-cell function), необходимые соответственно для оценки функционирования р-клеток и оценки инсулинорезистентности тканей (Matthews et al, 1985).

Исследуемые группы формировались из числа пациентов Эндокринологического Научного Центра (г. Москва) и Тюменской Государственной Медицинской Академии (г. Тюмень). Выборки были этнически однородны и составлены из русских (на основании индивидуального опроса).

2. Описание изучаемых генов и полученные результаты.

2.1 Ген белка Kir6.2 (KCNJ11). Ген KCNJ11 расположен на хромосоме 2q36. Продукт гена - белок Kir6.2 - является одной из двух субъединиц (вторая - рецептор к сульфонилмочевине), которые образуют канал для транспорта ионов калия. Белок Kir6.2 состоит из четырех субъединиц и образует пору для транспорта ионов калия (Aguilar-Bryan et al, 1999). При низком уровне глюкозы в крови и при низкой концентрации АТФ внутри (З-клеток, канал транспорта ионов калия открыт, за счет чего создается мембранный потенциал, который препятствует проникновению в клетку ионов кальция, необходимых для секреции гранул, содержащих инсулин (Slinderlands et al, 2007). Мутации в гене KCNJ11 приводят к изменениям в структуре белка Kir6.2 и нарушениям функционирования канала. Канал не закрывается в присутствии АТФ, мембрана остается поляризованной и секреции инсулина не происходит. В ряде работ было показано, что полиморфный маркер rs52I9 (Gly23Lys) этого гена ассоциирован с СД типа 2 и с некоторыми нарушениями в работе канала транспорта ионов калия.

При анализе распределения частот аллелей и генотипов этого маркера в группах «СД2+» и «СД2-» были обнаружены статистически достоверные различия (табл. 2). Легко видеть, что носительство аллеля Lys и генотипа Glu/Lys и Lys/Lys повышало риск развития СД типа 2 (OR = 1,35, 1,07 и 1,53, соответственно). В то же время носительство аллеля Glu и генотипа Glu/Glu уменьшало риск развития заболевания (OR = 0,74 и 0,63, соответственно). При анализе ассоциации данного полиморфного маркера со значениями метаболических показателей глюкозотолерантности и функции р-клеток также были обнаружены статистически достоверные различия. У носителей генотипов Glu/Lys и Lys/Lys в группе "СД2+" наблюдалась более низкая концентрация инсулина через 2 часа после ППТГ.

Таблица 2.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов

полиморфного маркера rs5219 гена KCNJ11 в группах «СД2+» и «СД2-».

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение х2 Уровень значимости Р OR

СД2+ п = 376 СД2-п = 210

Значение Cl 95%

Аллель Gly 360 /0,434 235 / 0,560 6,15 0,013 0,74 0,58 - 0,94

Аллель Lys 384/0,516 185/0,440 1,35 1,07-1,72

Генотип Glu/Glu 71/ 0,202 60/0,286 7,05 0,029 0,63 0,43 - 0,93

Генотип Glu/Lys 212/0,565 115/0,548 1,07 0,76-1,51

Генотип Lys/Lys 81 / 0,234 35/0,167 1,53 0,59 - 2,36

2.2. Геи рецептора к сульфонилмочевине (АВСС8). Ген АВСС8 расположен на хромосоме 11р15.1. Кодируемый им рецептор к сульфонилмочевине (SURI) является компонентом канала транспорта ионов калия, зависимого от АТФ. Этот канал регулирует секрецию инсулина из р-клеток посредством изменения мембранного потенциала. Повышение уровня глюкозы в крови приводит к повышению уровня АТФ и к уменьшению проницаемости этого канала, мембранный потенциал снижается, а поступление ионов Са2+ в клетку увеличивается, что в свою очередь приводит к увеличению секреции гранул с инсулином (Seino et al, 2003).

При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера rsl799859 гена АВСС8 в группах «СД2+» и «СД2-» были обнаружены статистически достоверные различия (табл. 3).

Таблица 3.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного

маркера rsl799859 гена АВСС8 в группах «СД2+» и «СД2-»

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение хг Уровень значимости Р OR

СД2+ п = 376 СД2-п = 210

Значение С! 95%

Аллель в 512/0,681 323 / 0,769 10,23 0,001 0,64 0,49 - 0,84

Аллель А 240/0,319 97/0,231 1,56 1,19-2,05

Генотип Св 174/0,463 126/0,600 10,56 0,005 0,57 0,41 - 0,81

Генотип вА 164(0,436 7110,338 1,51 1,07-2,15

Генотип АА 38/0,101 13/0,062 1,70 0,89 - 3,28

Легко видеть, что носительство аллеля С и генотипа 00 уменьшает риск развития (ОД = 0,64 и 0,57, соответственно), а наличие аллеля А и генотипов йА и АЛ наоборот повышает риск развития СД типа 2 (ОД = 1,56,1,51 и 1,70, соответственно).

При анализе ассоциации данного полиморфного маркера со значениями метаболических показателей глюкозотолерантности и функции р-клеток были обнаружены статистически достоверные различия. В группе «СД2+» у пациентов с генотипами АА и Ай наблюдался повышенный уровень глюкозы и инсулина через 2 часа после ППГТ, а также повышение уровня базального инсулина по сравнению с пациентами с генотипом СО. В группе "СД2-" у носителей генотипов АА и АО (по сравнению с носителями генотипа (7(7) была обнаружена корреляция с пониженным базальным уровнем инсулина, понижением уровня инсулина через 2 часа после ППГТ и с уменьшением индекса НОМА-р.

2.3 Ген транскрипционного фактора 7 (TCF7L2). Ген TCF7L2 расположен на хромосоме 10q25.3 и кодирует транскрипционный фактор, который является составной частью сигнального пути Wnt. Данный сигнальный путь задействован в регуляции механизмов роста, развития и функционирования различных клеток, в том числе и [S-клеток поджелудочной железы (Jin et al, 2008).

При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера rs7903146 гена TCF7L2 в группах «СД2+» и «СД2-» нами были обнаружены статистически достоверные различия (табл. 4).

Таблица 4.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера т$7903146 гена ТСР7Ь2 в группах «СД2+» и «СД2-»

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение х2 Уровень значимости Р OR

СД2+ П = 376 СД2-п = 210

Значение CI 95%

Аллель С 405 / 0,539 268 / 0,638 10,92 0,001 0,66 0,52-0,85

Аллель 7 347 / 0,461 152 / 0,362 1,51 со to G>

Генотип СС 120/0,319 82 / 0,390 14,13 0,001 0,73 0,51 - 1,04

Генотип СТ 165/0,439 104/0,495 0,80 0,57- 1,12

Генотип ТТ 91 / 0,242 24/0,114 2,47 1,52 - 4,02

Легко видеть, что носительство аллеля 7 и генотипа ТТ повышало риск развития СД типа 2 (ОЯ = 1,51 и 2,47, соответственно). В то же время носительство аллеля С, генотипов СТ и СС уменьшало риск развития заболевания (ОН = 0,66, 0,73 и 0,80, соответственно).

При анализе ассоциации данного полиморфного маркера со значениями метаболических показателей глюкозотолерантности и функции ^-клеток также были обнаружены статистически достоверные различия. Для носителей генотипов СТ и ТТ в группе "СД2+" и в группе "СД2-", наблюдалось снижение базального уровня инсулина и уровня инсулина через 2 часа после ППТГ, а так же увеличение уровня глюкозы через 2 часа после ППТГ и уменьшение индекса НОМА-р.

При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера к12255372 гена ТСР7Ь2 в группах «СД2+» и «СД2-» нами не было найдено статистически значимых различий (табл. 5).

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение х2 Уровень значимости р

СД2+ п = 376 СД2-п = 210

Аллель в 504/0,670 296 / 0,705 1,48 0,223

Аллель Т 248/0,330 124 / 0,295

Генотип СБ 162/0,431 97/0,462 2,85 0,240

Генотип йТ 180/0,479 102/0,486

Генотип ТТ 34/0,090 11/0,052

При анализе ассоциации данного полиморфного маркера со значениями метаболических показателей глюкозотолерантности и функции р-клеток были обнаружены статистически достоверные различия. В группах «СД2+» и «СД2-» у носителей генотипов GT и ТТ по сравнению с носителями генотипа GG наблюдались снижение базального уровня инсулина через 2 часа после ППГТ, повышение уровня глюкозы через 2 часа после ППГТ, а также снижение индекса НОМА-р.

Таким образом, полиморфный маркер rs7903146 гена TCF7L2 ассоциирован с СД типа 2 в русской популяции, а полиморфный маркер rsl2255372 не показал связи с заболеванием. Однако оба эти полиморфных маркера оказались ассоциированы с изменением метаболических показателей глюкозотолерантности и функции Р-клеток как у больных, так и у здоровых людей.

2.4. Ген трансмембранного переносчика цинка типа 8 (SLC30A8). Ген расположен на хромосоме 8q24.ll и кодирует трансмембранный белок-транспортер ионов цинка типа 8 (ZnT-8). Наибольший уровень экспрессии этого гена наблюдается именно в панкреатических р-клетках. ZnT-8 выполняет функцию канала, через который ионы Zn2+ поступают в секреторные везикулы. Внутри везикул ионы Zn2+ образуют комплекс с инсулином, в результате чего инсулин образует гексамерную структуру (Luizzi et al, 2004). Таким образом, каналы транспорта ионов цинка играют важную роль в регуляции созревания, хранения и секреции инсулина р-клетками (Sladek et al, 2007).

При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера rsl3266634 гена SLC30A8 в группах «СД2+» и «СД2-» были обнаружены статистически достоверные различия (табл. 6).

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Х2 Уровень значимости Р OR

СД2+ п = 376 СД2-п « 210

значение CI 95%

Аллель С 5831 0,775 299 /0,712 5,81 0,016 1,40 1,06-1,83

Аллель Т 169/0,225 121 / 0,288 0,72 0,55 - 0,94

Генотип СС 226 / 0,601 109/0,519 6,15 0,046 1,40 0,99-1,96

Генотип СТ 131 / 0,348 81 / 0,386 0,85 0,60-1,21

Генотип ТТ 19/0,051 20 / 0,095 0,51 0,26 - 0,97

Легко видеть, что носительство аллеля С и генотипа СС повышает риск развития СД типа 2 (ОК = 1,40). В то же время носительство аллеля Г, генотипов СТ и ТТ уменьшает риск развития заболевания (ОЯ = 0,72, 0,51 и 0,85, соответственно).

При анализе ассоциации данного полиморфного маркера со значениями метаболических показателей глюкозотолерантности и функции р-клеток также были обнаружены статистически достоверные различия. В группе «СД2+» только уровень инсулина через 2 часа после ППТГ у носителей генотипов СТ и ТТ оказался выше чем у носителей генотипа СС. В группе «СД2-» у носителей генотипов СТ и ТТ уровень инсулина после ППГТ и индекс НОМА-Р оказался выше, а уровень глюкозы ниже, чем у носителей генотипов СС.

Таким образом, полиморфный маркер rsl3266634 гена SLC30A8 ассоциирован с СД типа 2 и со значениями метаболических показателей функции р-клеток в русской популяции.

2.5. Ген белка, ассоциированного с регуляторнон субъединицей-1 циклинзависимой киназы типа 5 (CDKAL1). Ген CDKAL1 расположен на хромосоме 6р22.3. Продукт данного гена имеет значительную гомологию с ингибитором CDK5RAP1 киназы CDK5. Предполагается, что CDKAL1 также играет роль ингибитора активности киназы CDK5, которая играет существенную роль в эффективности секреции гранул инсулина в кровоток (Ubeda et al, 2006; Wei et al, 2005). Для изучения ассоциации гена CDKAL1 с СД типа 2 мы использовали четыре полиморфных маркера, расположенных в нитроне 5 этого гена.

Таблица 7.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера «7756992 гена СйКАЫ в группах «СД2+» и «СД2-»

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Х2 Уровень значимости Р OR

СД2+ п = 376 СД2-п = 210

значение CI95%

Аллель А 434/0,643 302/0,719 7,03 0,003 0,70 0,54-0,91

Аллель ё 268 / 0,357 118/0,281 1.42 1,10-1,84

Генотип АД 170/0,452 111/0,529 7,15 0,028 0,74 0,52- 1,03

Генотип Аб 144/0,382 80/0,381 1,01 0,71 - 1,42

Генотип вв 62/0,166 19 / 0,090 2,00 1,16-3,44

Легко видеть, что носительство аллеля А и генотипа АА снижает риск развития СД типа 2 (OR - 0,70 и 0,74, соответственно), в то же время у носителей аллеля G и генотипа GG риск развития СД типа 2 увеличен (OR = 1,42 и 2,00).

При анализе ассоциации данного полиморфного маркера со значениями метаболических показателей глюкозотолерантности и функции (i-клеток были обнаружены статистически достоверные различия. В группах «СД2+» и «СД2-» обнаружена корреляция между генотипами AG и GG и снижением уровня инсулина через 2 часа после ППГТ, а также снижением индекса НОМА-р.

При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера rs9465871 гена CDKAL1 в группах «СД2+» и «СД2-» были обнаружены статистически достоверные различия (табл. 8).

Таблица 8.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов

полиморфного маркера rs9465871 гена CDKALI в группах «СД2+» и «СД2-»

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Х2 Уровень значимости Р OR

СД2+ п = 376 СД2-п = 210

значение CI 95%

Аллель С 430 / 0,572 277/0,660 8,66 0,003 0,69 0,54 - 0,88

Аллель Т 322 / 0,428 143 / 0,340 1,45 1,13-1,86

Генотип СС 113/0,301 90 / 0,429 10,25 0,006 0,57 0,40-0,81

Генотип СГ 204 / 0,543 97 / 0,462 1,38 0,98-1,94

Генотип 7Т 59 / 0,157 23/0,110 1,51 0,90 - 2,53

Легко видеть, что у носителей аллеля С и генотипа СС понижен риск развития СД типа 2 {ОЯ = 0,69 и 0,57, соответственно), в то время у носителей аллеля Т и генотипов СТ и 7Т риск развития СД типа 2 увеличен (ОЯ = 1,45, 1,38 и 1,51, соответственно).

При анализе ассоциации данного полиморфного маркера со значениями метаболических показателей глюкозотолерантности и функции [¡-клеток были обнаружены статистически достоверные различия. В группах «СД2+» и «СД2-» обнаружена корреляция между генотипами СТ и 7Ти снижением уровня инсулина через 2 часа после ППГТ, а также снижением индекса НОМА-р. Кроме того и группе «СД2+» обнаружена корреляция между генотипами СТ и 7Т и снижением базального уровня инсулина, а также увеличением концентрации глюкозы в крови

При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера «10946398 гена СЗКАЫ в группах «СД2+» и «СД2-» также были обнаружены статистически достоверные различия (табл. 9). Легко видеть, что у носителей аллеля А понижен риск развития СД типа 2 (ОЯ = 0,70), в то время у носителей аллеля С риск развития СД типа 2 увеличен (ОЯ = 1,44).

При анализе ассоциации данного полиморфного маркера со значениями метаболических показателей глюкозотолерантности и функции Р-клеток были обнаружены статистически достоверные различия. В группах «СД2+» и СД2-» наличие генотипа АС или СС было ассоциировано с более низкой концентрацией инсулина через 2 часа после ППГТ по сравнению с носителями генотипа АА. Также наблюдалось снижение индекса НОМА-р в группе «СД2+» у обладателей генотипов АС или СС.

Таблица 9.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов

полиморфного маркера г$10946398 гена СБКАЫ в группах «СД2+» и «СД2-»

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Х2 Уровень значимости Р ОЯ

СД2+ П = 376 СД2-п = 210

значение С| 95%

Аллель А 564/0,750 341/0,812 5,87 0,015 0,70 0,52 - 0,93

Аллель С 188/0,250 79/0,188 1,44 1,07-1,93

Генотип А/А 218/0,580 141/0,671 5,38 0,068 0,68 0,47 - 0,96

Генотип А/С 128 / 0,340 59 / 0,281 1,32 0,91 - 1,91

Генотип С/С 30 / 0,080 10/0,048 1,73 0,83 - 3,62

п

Таблица 10.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера г$7754840 гена СОКАЫ в группах «СД2+» и «СД2-»

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение %2 Уровень значимости Р

СД2+ п = 376 СД2- П ~ 210

Аллель С 548 / 0,730 295 / 0,702 1,00 0,316

Аллель Б 202/0,270 125/0,298

Генотип СС 192/0,511 97 / 0,462 1,28 0,526

Генотип Св 161/0,438 101/0,481

Генотип вв 19 / 0,051 12/0,057

При анализе ассоциации данного полиморфного маркера со значениями метаболических показателей глюкозотолерантности и функции р-клеток также не было обнаружено статистически достоверных различий.

2.6. Хромосомная область CDKN2A/CDKN2B. Ингибиторы циклинзависимых киназ входят в семейство белков, участвующих в регуляции клеточного цикла, пролиферации и дифференциации клеток. В различных исследованиях было показано, что нарушения функций ингибиторов циклинзависимых киназ приводят к нескольким видам рака, развитию ишемической болезни сердца и сахарному диабету (Fajas et al, 2010).

Гены CDKN2A и 2В расположены рядом на хромосоме 9р21. Продукты этих генов участвует в контроле пролиферации р-клеток. Гены CDKN2A и 2В кодируют несколько продуктов (Sato et al, 2010) - белки pl6INK4A и pl4ARF (белковые продукты альтернативного сплайсинга гена CDKN2A), pl5INK4B (продукт гена CDKN2B -ингибитор клеточного цикла) и ANRIL (некодирующая регуляторная РНК, синтезирующаяся с противоположной цепи ДНК).

Один из продуктов гена CDKN2A, pl6INK4A, участвует в контроле пролиферации р-клеток. Было показано, что с возрастом происходит накопление в клетках р16МК4а/в. Это приводит к ингибированию киназы Cdk4 и к нарушению пролиферации р-клеток (Krishnamurthy et al, 2006). Вероятно, CDKN2A вовлечен в развитие сахарного диабета типа 2 вследствие уменьшения количества и регенеративного потенциала Р-клеток при

старении, что приводит к общему снижению эндокринной функции панкреаса (ТсзсЬсп Л а1, 2009).

В исследованиях на мышах было показано, что продукт гена СОШ2В влияет на секрецию инсулина посредством регуляции экспрессии гена Е2Р1 (БЬсгг й а1, 2001). Транскрипционный фактор £2F^ непосредственно контролирует экспрессию гена КСШП. В разных линиях мышей с нарушением функции одного из генов СйКК-Е2Р1-КСШ11, наблюдалось ухудшение секреции инсулина (Лапе й а1,1999).

При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера п10811661, расположенного между генами СОКМ2Л и 2В, в группах «СД2+» и «СД2-» были обнаружены статистически достоверные различия (табл. 11). Легко видеть, что у носителей аллеля Т и генотипа Т/Т понижен риск развития СД типа 2 (ОН = 0,60 и 0,55, соответственно), в то время как у носителей аллеля С и генотипов ТС и СС риск развития СД типа 2 увеличен (ОН - 1,66, 1,20 и 2,14, соответственно).

Таблица 11.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов

полиморфного маркера rsl0811661 гена CDKN2A в группах «СД2+» и «СД2-»

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение 12 Уровень значимости Р OR

СД2+ П = 375 СД2- П ~ 210

значение CI 95%

Аллель Т 424 / 0,565 287 / 0,683 15,72 0,0001 0.60 0,47 - 0,77

Аллель С 326 / 0,435 133/0,317 1,66 1,29-2,13

Генотип ГТ 124/0,331 99 / 0,471 14,98 0,0006 0,55 0,39-0,78

Генотип СТ 176 / 0,469 89/0,424 1,20 0,86-1,69

Генотип СС 75/0,200 22/0,105 2,14 1,28-3,55

2.7. Ген белка, связывающего мРНК инсулиноподобного фактора роста 2 (IGF2BP2). Ген расположен на хромосоме 3q27.2. В семейство генов IGFBP входят 6 структурно схожих белков. Часть из них связываются с высоким сродством с инсулиноподобными факторами роста 1 и 2 (IGF-1, 2) (Bach et al, 2002; Firth et al, 2002). В 99% случаев продукт гена IGF2BP2 образует комплекс с мРНК гена IGF2, что резко ускоряет деградацию молекул мРНК гена IGF2 (Rajaram et al, 1997) и что, таким образом, регулирует уровень его трансляции. Предполагается, что ген IGF2 непосредственно влияет на выживание Р-клеток (Petriketal, 1998).

При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера rs4402960 гена IGF2BP2 в группах «СД2+» и «СД2-» достоверных статистических

13

различий обнаружено не было (табл. 12). При анализе ассоциации данного полиморфного маркера со значениями метаболических показателей глюкозотолерантности и функции Р-клеток также не было обнаружено статистически достоверные различий.

Таблица 12.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера п4402960 гена ЮПВ2 в группах «СД2+» и «СД2-»

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Уровень значимости р

СД2+ (п = 376) СД2- (п = 210)

Аллель G 480 / 0,638 284 / 0,676 1.71 0,192

Аллель Т 272 / 0,362 136 / 0,324

Генотип GG 143/0,380 91 / 0,433 1,92 0,382

Генотип GТ 194/0,516 102/0,486

Генотип 7Т 39/0,104 17/0,081

2.8. Хромосомная область HHEX-IDE. Одним из итогов нескольких масштабных геномных поисков стало обнаружение хромосомной области 10q24, включающей гены ННЕХ и IDE, ассоциированной с развитием СД типа 2. Ген ННЕХ кодирует транскрипционный фактор, экспрессия которого наблюдается на эмбриональной стадии в вентролатеральной части передней кишки, из которой в дальнейшем образуются поджелудочная железа и печень (Bort al, 2004). Ген IDE кодирует белок инсулиназу, представляющую собой фермент, расщепляющий инсулин, который участвует в процессах деградации инсулина и других пептидных гормонов (Duckworth et al, 1998).

При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера rsIHI875 расположенного в области HHEX-IDE в группах «СД2+» и «СД2-» достоверных статистических различий обнаружено не было (табл. 13).

При анализе ассоциации данного полиморфного маркера со значениями метаболических показателей глюкозотолерантности и функции р-клеток также не было обнаружено статистически достоверных различий.

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение %2 Уровень значимости р

СД2+ (п = 376) СД2-(п = 210)

Аллель в 478/0,636 269/0,641 0,03 0,871

Аллель А 274/0,364 151/0,359

Генотип вв 148 / 0,395 84/0,398 0,05 0,976

Генотип вА 182/0,483 103/0,485

Генотип АА 46 / 0,123 24/0,117

2.9. Ген белка адипонектина (ADIPOQ). Белок адипонектин - продукт гена ADIPOQ, который расположен на хромосоме 3q27. Адипонектин вырабатывается клетками белой жировой ткани и относится к семейству коллектинов. Частично гомологичен с коллагеном VIII и X и комплементом Clq (Hotta et al, 2000). Имеются данные, что повышение концентрации эндогенного (Spranger et al, 2003), а также введение экзогенного рекомбинантного адипонектина, увеличивает чувствительность клеток к инсулину, а пониженная концентрация адипонектина является одной из причин развития инсулшюрезистентности (Gu et al, 2004).

При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера rs224¡766 гена ADIPOQ в группах «СД2+» и «СД2-» достоверных статистических различий обнаружено не было (табл. 14).

Таблица 14.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов

полиморфного маркера rs2241766 гена ADIPOQ в группах «СД2+» и «СД2-»

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение jl Уровень значимости р

СД2+ (п = 376) СД2- (п = 210)

Аллель Т 692/0,920 385/0,917 0,05 0,831

Аллель 6 60 / 0,080 35/0,083

Генотип 7Т 327/0,870 181 / 0,862 0,10 0,949

Генотип Тв 38 / 0,101 23 / 0,110

Генотип вй 11 / 0,029 6/0,029

При анализе ассоциации данного полиморфного маркера со значениями метаболических показателей глюкозотолерантности и функции Р-клеток были обнаружены статистически достоверные различия. В группах «СД2+» и «СД2-» уровень глюкозы через 2 часа после ППТТ оказался выше у носителей генотипов СС и Ю. В группе «СД2+» генотипы йй и Ю коррелируют с повышенным уровнем инсулина.

2.10. Гены рецепторов к адипонектину типа 1 и 2 (АО!РОЛ1 и 2). Существуют два вида рецепторов к адипонектину. Рецепторы типа 1 преимущественно располагаются в скелетной мускулатуре, а типа 2 экспрессируются преимущественно в печени. Ген АО!РОЯ1 расположен на хромосоме Ц32, а ген АО!РОЯ2 на хромосоме 12р13.33 (УатаисЫ е1 а1, 2003).

При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера к2275738 гена АВ1РОН1 в группах «СД2+» и «СД2-» достоверных статистических различий обнаружено не было (табл.15). В тоже время при анализе ассоциации данного полиморфного маркера со значениями метаболических показателей глюкозотолерантности и функции р-клеток были обнаружены статистически достоверные различия.

Таблица 15.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов

полиморфного маркера г$2275738 гена АЫРОМ в группах «СД2+» и «СД2-»

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение х2 Уровень значимости р

СД2+ (п = 376) СД2- (п = 210)

Аллель Т 393 / 0,523 205 / 0,486 1,47 0,226

Аллель С 359/0,477 215/0,514

Генотип 7Т 122/0,324 58/0,274 1,65 0,437

Генотип СГ 149/0,396 99/0,425

Генотип СС 105/0,279 63/0,302

В группе «СД2+» наблюдался пониженный уровень базального инсулина, инсулина через 2 часа после ППТГ и увеличение индекса НОМА-Ш у носителей генотипов АС и СО по сравнению с АА. В группе «СД2-» у носителей генотипов СТ и 7Тбыл повышен уровень концентрации глюкозы через 2 часа после ППТГ.

При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера п!1061971 гена АЭ1РОЯ2 в группах «СД2+» и «СД2-» были обнаружены статистически достоверные различия (табл.16). Легко видеть, что носительство аллеляЛ ассоциировано со снижением риска развития СД типа 2 (ОК = 0,76), в то время как у носителей аллеля Г риск развития СД типа 2 был существенно выше (ОН = 1,31).

полиморфного маркера п11061971 гена А01Р0112 в группах «СД2+» н «СД2-»

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Х2 Уровень значимости р ОК

СД2+ п = 376 СД2-п = 210

значение С1 95%

Аллель А 452 / 0,601 279 / 0,664 4,59 0,032 0,76 0,59-0,98

Аллель Т 300/0,339 141 / 0,336 1,31 1,02-1,69

Генотип АА 139/0,370 92 / 0,438 4,72 0,094 0,75 0,53-1,06

Генотип АТ 174 / 0,463 95/0,452 1,04 0,74-1,46

Генотип ТТ 63 / 0,168 23/0,110 1,64 0,98 - 2,73

При анализе ассоциации данного полиморфного маркера со значениями

метаболических показателей глюкозотолершггности и функции р-клеток были обнаружены статистически достоверные различия. В группах «СД2+» и «СД2-» наблюдается повышение базалыюго уровня инсулина для генотипов А Т и ТТ по сравнению с генотипом АА. В группе «СД2+» индекс НОМА-Ш у носителей генотипов АТн 7Токазался также повышенным.

При анализе распределения частот аллелей и генотипов другого полиморфного маркера (гз16928751) гена АЫРСЖ2 в группах «СД2+» и «СД2-» достоверных статистических различий обнаружено не было (табл. 17).

Таблица 17.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов

полиморфного маркера 6928751 гена Ай1Р0112 в группах «СД2+» и«СД2-»

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение %2 Уровень значимости р

СД2+ (п = 376) СД2- (п = 210)

Аллель в 621/0,826 360/0,857 1,94 0,164

Аллель А 131/0,174 6010,143

Генотип Св 258/0,686 154/0,733 2,05 0,359

Генотип йА 105 / 0,279 52 / 0,248

Генотип АА 13 / 0,035 4/0,019

Однако при анализе ассоциации данного полиморфного маркера со значениями

метаболических показателей глюкозотолершгпюсти и функции Р-клеток были обнаружены статистически достоверные различия. Для носителей генотипов СО и ОА характерно повышение базалыюго уровня инсулина и индекса НОМА-1Я в обоих исследуемых группах. В группе «СД2+» уровень инсулина через 2 часа после ППГТ был выше у носителей генотипов ОС и ОА.

2.11. Ген, ассоциированный с ожирением и увеличением массы жировой ткани (РТО). Ген ПО расположен на хромосоме 16ql2.2. До сих пор остается не совсем ясна функциональная роль этого гена в развитии ожирения. Экспрессия гена РТО наблюдается в различных тканях особенно в гипоталамусе, печени, мышечной ткани, адипоцитах и р-клетках поджелудочной железы (81га^орои1оз й а1, 2008). При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера Г58050136 гена РГО в группах «СД2+» и «СД2-» достоверных статистических различий обнаружено не было (табл. 18).

Таблица 18.

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов

полиморфного маркера rs80S0136 гена FTO в группах «СД2+» и «СД2-»

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение х2 Уровень значимости р

СД2+ (п = 376) СД2- (п = 210)

Аллель С 612(0,809 346 / 0,824 0,39 0,533

Аллель А 144/0,191 74/0,176

Генотип СС 253 / 0,668 145/0,690 0,36 0,835

Генотип ДС 106/0,281 56 / 0,267

Генотип АА 19 / 0,050 9 / 0,043

Однако при анализе ассоциации данного полиморфного маркера со значениями метаболических показателей глюкозотолерантности и функции р-клеток нами удалось обнаружить статистически достоверные различия. В группе «СД2+» индекс HOMA-IR был увеличен у носителей генотипов АС и АА.

2.12. Рецептор активируемый пролифератором перексисом типа у2 (PPARG2). Рецептор PPARy2 кодируется геном PPARG2, расположенным на хромосоме Зр25. PPARy2, образующий гетеродимер с ретиноидным рецептором, вовлечен в контроль экспрессии генов, участвующих в регуляции обмена жирных кислот и адипогенез (Cecil et al, 2006). Мутации в гене PPARG2 приводят к развитию синдрома, который проявляется как комплекс клинических симптомов: для него характерны инсулинорезистентность, дислипидемия, гипертензия. Все это приводит к нарушению действия инсулина на ткани, увеличению массы тела и нарушению гомеостаза глюкозы (Yen et al, 1997).

При анализе распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера rsI801282 гена PPARG2 в группах «СД2+» и «СД2-» были обнаружены статистически достоверные различия (табл.19).

полиморфного маркера rs!801282 гена PPARG2 в группах «СД2+» и «СД2-»

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Значение Х2 Уровень значимости р OR

СД2+ п = 376 СД2-п = 210 Значение CI 95%

Аллель А 673 / 0,395 358 / 0,852 4,61 0,0317 1,48 1,03-2,11

Аллель С 79/0,105 62/0,148 0,68 0,47 - 0,97

Генотип АА 301 / 0,801 153 / 0,729 4,64 0,0982 1,50 1,01-2,22

Генотип АС 71/0,189 52 / 0,248 0,71 0,47- 1,06

Генотип СС 4/0,011 5/0,024 0,44 0,12-1,66

Легко видеть, что у носителей аллеля С понижен риск развития СД типа 2 (OR = 0,67), в то время у носителей аллеля А риск развития СД типа 2 был увеличен (OR = 1,50).

При анализе ассоциации данного полиморфного маркера со значениями метаболических показателей глкжозотолерантности и функции р-клеток также были обнаружены статистически достоверные различия. В группе «СД2-» наблюдалось уменьшение базального уровня инсулина и глюкозы, уровня глюкозы через 2 часа после ППТГ в случае носителей генотипов АС и СС. В группе «СД2+» наблюдалось уменьшение уровня инсулина через 2 часа после ППТГ и снижение индекса НОМА-Ш у носителей генотипов СС и АС.

Заключение

На основании полученных нами данных, можно сделать вывод о том, что в русской популяции основную роль в развитии СД типа 2 играют гены, влияющие на уровень синтеза и секреции инсулина в р-клетках поджелудочной железы (АВСС8, КСШ11, ТСЕ7Ь2, ЗЬСЗОАЗ). В то же время гены, определяющие пониженную чувствительность периферических тканей к действию инсулина (PPARG2, Ай1РОО, ADIPORl и АО!РОН2), в гораздо меньшей степени ассоциированы с развитием СД типа 2. Ряд генов (\GF2RP2, ННЕХ/ЮЕ, РТО, АШРОО), для которых была обнаружена ассоциация с СД типа 2 в других популяциях, в русской популяции не были ассоциированы с этим заболеванием. В тоже время следует отметить, что один из полиморфных маркеров гена АИ1РОК2 показал ассоциацию с развитием СД типа 2 в

русской популяции, хотя в полных геномных поисках ассоциация этого гена с СД типа 2 не была обнаружена.

Все эти данные говорят о важности исследования предрасполагающих генетических факторов, вклад которых в развитие заболевания существенно изменяется в зависимости от популяции. Выявление генетических маркеров риска СД типа 2 позволяет лучше понять основной патологический механизм развития этого заболевания и в соответствии с этим выбрать оптимальную терапию заболевания, а также использовать полученные данные для профилактики СД типа 2 у здоровых людей.

Выводы

1. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера rsl 799859 гена АВСС8 с СД типа 2 в русской популяции. Было показано, что наличие аллеля А, генотипа GA и АА повышало риск развития СД типа 2.

2. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера rs5219 гена KCNJ11 с СД типа 2 в русской популяции. Было показано, что наличие Lys и генотипа Glu/Lys и Lys/Lys повышало риск развития СД типа 2.

3. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера rsl2255372 гена TCF7L2 с СД типа 2 в русской популяции. Было показано, что наличие аллеля Т и генотипа ТТ повышало риск развития СД типа 2.

4. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера rs!3266634 гена SLC30A8 с СД типа 2 в русской популяции. Было показано, что наличие аллеля С и генотипа СС повышало риск развития СД типа 2.

5. Обнаружена ассоциация полиморфных маркеров rs7756992, rsl0946398 и rs9465871 гена CDKALI с СД типа 2 в русской популяции. У носителей аллеля G (rs7756992) и генотипа GG, С (rsl0946398) и генотипов АС и СС, аллеля Т (rs9465871) и генотипов СТ и ТТ риск развития СД типа 2 был увеличен.

6. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера rsl0811661 в области генов CDKN2B/2A с СД2 в русской популяции. Было показано, что у носителей аллеля С и генотипов Т/С и С/С риск развития СД типа 2 был увеличен.

8. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера rsl801282 гена PPARG2 с СД типа 2 в русской популяции. Было показано, что у носителей аллеля А риск развития СД типа 2 был увеличен.

9. Полиморфные маркеры rs!799859 гена АВСС8, rsl2255372 и rs7903146 гена TCF7L2, rsl3266634 гена SLC30A8, rs7756992, rsl0946398 и rs9465871 гена CDKALI и rsl0811661 в области генов CDKN2B/2A ассоциированы с понижением индекса НОМА-р. Варианты генов связанные с пониженным индексом НОМА-Р вовлечены в развитие СД типа 2 через нарушения функции (3-клсток. Полиморфные маркеры rsl 1061971 и rsI6928751 гена ADIPOR2, rs2275738 гена ADIPOR1, rsl801282 гена PPARG2 и rs8050136 гена FTO ассоциированы с повышением индекса HOMA-IR. Варианты генов связанные с повышенным индексом HOMA-IR участвуют в патогенезе СД типа 2 через развитие устойчивости к инсулину в периферических тканях.

Список опубликованных автором работ:

1. Poiapov V.A., Chistiakov D.A., Dubinina A., Shamkhalova M.S., Shestakova M.V., Nosikov V. V. "Adiponectin and adiponectin receptor gene variants in relation to type 2 diabetes and insulin resistance-related phenotypes." Review Diabetes Research, 5(1), 2837 (2008).

2. Potapov V.A., Chistiakov D.A., Shamkhalova M.S., Shestakova M.V., Nosikov KV." TCF7L2 rsl2255372 and SLC30A8 rsl3266634 confer susceptibility to type 2 diabetes in a Russian population." Diabetes and Metabolic Syndrome Clinical Research Review,3(4), 219-223 (2009).

3. Chistiakov D.A., Potapov V.A., Khodirev D.S., Shamkhalova M.S., Shestakova M.V., Nosikov V.V. "The PPARy Prol2Ala variant is associated with insulin sensitivity in Russian normoglycaemic and type 2 diabetic subjects." Diabetes Vascular Disease Research, 7(1), 56-62 (2010).

4. Потапов, В.А., Шамхалова, М.Н., Сметанина, С.А., Бельчикова, JI.H., Суплотова, Л.А., Шестакова, М.В., Носиков, В.В. (2010) Полиморфные маркеры rsI2255372 и rs13266634 генов TCF7L2 и SLC30A8 связаны с развитием сахарного диабета типа 2 в русской популяции. Генетика, 46(8), 1123-1231 (2010).

5. Chistiakov D.A., Potapov V.A., Khodirev D.C., Shamkhalova D.S., Shestakova M.V., Nosikov V. V. "Replication of association between polymorphisms of the pancreatic ATP-sensitive potassium channel and susceptibility to type 2 diabetes in two Russian urban populations." Central European Journal of Biology, 5(1), 67-77 (2010).

6. Потапов B.A, Фесенко Д.О., Ходырев Д.С., Никитин А.Г., Чистяков Д.А., Наседкина Т.В., Носиков В.В. Молекулярно-генетическая диагностика подтипов сахарного диабета типа 2 с использованием биологического чипа. Материалы V-ого съезда Вавиловского общества генетиков и селекционеров, стр. 483, Москва, Россия (21-28 июня 2009 г.).

7. Потапов, В.А., Чистяков, Д.А., Шамхалова, М.Ш., Шестакова, М.В., Суплотова, JI.A., Носиков, В.В. Изучение ассоциации полиморфных маркеров генов АВСС8, KCNJ1I, TCF7L2, SLC30A8 и PPARG2 с сахарным диабетом типа 2. Материалы VI-ого Съезда Российского общества медицинских генетиков, стр. 147, г. Ростов-па Дону, Россия (14-18 мая 2010 г.).

8. Потапов, В.А., Чистяков, Д.А., Железнякова, А.А., Сметанина, С.А., Суплотова, J1.A., Шестакова, М.В., Носиков, В.В. Достижения и перспективы молекулярной генетики сахарного диабета типа 2. Материалы V-ого Всероссийского диабетологического конгресса, стр. 85, Москва, Россия (23-26 мая 2010 г.).

Подписано в печать: 08.09.2010

Заказ № 4080 Тираж - 90 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Потапов, Виктор Андреевич

ВВЕДЕНИЕ.:.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Полиморфные маркеры.

1.1.1. Типы полиморфизмов и методы их исследования.

1.1.2. Использование полиморфных маркеров в исследовании генетики многофакторных заболеваний.

1.2. Сахарный диабет типа 2.

1.2.1. Эпидемиология и классификация СД.

1.2.2. Этиология и патогенез сахарного диабета типа 2. .•.

1.3. Характеристика используемых в работе генов и полиморфных маркеров.

1.3.1. Ген рецептора к сульфонилмочевине (АВСС8).

1.3.2. Ген белка Kir6.2 ( KCNJ11).

1.3.3 Ген транскрипционного фактора 7 (TCF7L2).

1.3.4. Ген трансмембранного переносчика цинка типа 8 (SLC30A8).

1.3.5 Ген белка, ассоциированного с регуляторной субъединицей-1 циклинзависимой кинназы типа 5 (CDKAL1).

1.3.6. Хромосомная область CDKN2A/CDKN2B.

1.3.7. Ген белка, связывающего мРНК инсулиноподобного фактора роста 2 (.IGF2BP2).

1.3.8. Хромосомная область HHEX-IDE.

1.3.9. Ген белка Адипонектина (ADIPOQ).

1.3.10. Гены рецепторов к адипонектину (ADIPOR).

1.3.11. Ген ассоциированный с ожирением и увеличением жировой ткани СFTO).

1.3.12. Рецептор активируемый пролифератором перексиса типа у

PPARG2).:.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Реактивы и ферменты.

2.2. Буферы для рестрикции.

2.3. Формирование групп обследованных.

2.4. Выделение геномной ДНК человека методом фенол/хлороформной экстракции.

2.5 Амплификация ДНК.

2.6. Расщепление продуктов амплификации рестриктазами.

2.7. Электрофоретическое разделение продуктов амплификации.

2.8. Статистическая обработка результатов.

2.8.1. Сравнение выборок по частотам аллелей и генотипов.

2.8.2. Оценка относительного риска. Odds ratio. Доверительный интервал.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Исследование ассоциации генов, влияющих на секрецию инсулина, с сахарным диабетом 2-го типа.

3.1.1. Исследование ассоциации полиморфного маркера rsl 799859 гена АВСС8.

3.1.2. Исследование ассоциации полиморфного маркера rs5219 гена KCNJU.

3.1.3. Исследование ассоциации полиморфных маркеров rsl2255372 и гs7903146 гена TCF7L2.

3.1.4. Исследование ассоциации полиморфного маркера rsl3266634 гена SLC30A8.

3.1.5. Исследования ассоциации полиморфных маркеров rs7756992, rs9465871, rs7754840 и rsl0946398 гена CDKALl.

3.1.6. Исследование ассоциации полиморфного маркера rsl0811661 в области генов CDKN2B/2A.

3.2. Исследование ассоциации генов, влияющих на чувствительность клеток к инсулину, с сахарным диабетом 2-го типа.

3.2.1. Анализ ассоциации полиморфного маркера rsllll875 области HHEX-IDE.

3.2.2. Анализ ассоциации полиморфного маркера rs2241766 гена ADIPOQ.*.

3.2.3. Анализ ассоциации полиморфного маркера rs2275738 гена ADIPOR1.

3.2.4. Анализ ассоциации полиморфных маркеров rsll061971 и rs16928751 гена ADIPOR2.

3.2.5. Анализ ассоциации полиморфного маркера rs8050136гена-РГ0.

3.2.6. Анализ ассоциации полиморфного маркера rsl801282 гена PPARG2.

3.2.7. Анализ ассоциации полиморфного маркера rs4402960 гена IGF2BP2.*.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Поиск генетических маркеров, определяющих предрасположенность к сахарному диабету типа 2"

Одним из главных результатов изучения генома человека стало появление и развитие нового раздела медицинской науки - молекулярной медицины [1]. Существуют множество быстро развивающихся направлений молекулярной медицины: диагностика наследственных заболеваний, генная терапия, фармакогенетика, активно разрабатываются основы профилактической (предиктивной) медицины.

Предиктивную медицину можно рассматривать как наиболее ранний этап воздействия на организм человека, с целью предупреждения развития возможной патологии или патологического процесса.

Наиболее распространённые болезни человека относят к многофакторным заболеваниям, т.е. они развиваются в результате взаимодействия генетических факторов, факторов окружающей среды и условий жизни индивида. Многие из таких заболеваний являются причинами смертности в современных популяциях человека. Пример таких заболеваний огромен, например: атеросклероз, бронхиальная астма, артериальная гипертензия, ревматоидный артрит, различные формы рака, сахарный диабет и многие другие заболевания.

На рубеже XX-XXI веков был отмечен существенный рост заболеваемости сахарным диабетом. По данным Международной Федерации Диабета (IDF), в настоящее время сахарным диабетом болеют более 246 млн. человек. Основную часть этих пациентов составляют больные сахарным диабетом 2 типа (СД типа 2). Длительное время считалось, что это более легкая форма диабета, при которой осложнения могут и не возникать, что цели терапии могут быть не столь жесткими, а ожирение лучше всего игнорировать. В настоящее время ученые твердо убежденны, что речь идет о тяжёлом, хроническом и постоянно прогрессирующем заболевании, составляющем 8590% от общего количества больных диабетом. Это заболевание, при котором в момент установления диагноза более 50% больных уже имеют поздние осложнения диабета [2].

Особенно резкое увеличение количества людей с этим заболеванием будет происходить в развивающихся странах. В России количество больных СД типа 2 составляет около 9 миллионов человек. Основную массу больных СД типа 2 (более 98%) составляют пациенты, у которых диабет развивается сравнительно поздно, в основном, после 35-летнего возраста. Сахарный диабет со временем может привести к развитию ряда сосудистых осложнений, что является одной из основных причин инвалидизации и смертности. Клиническими проявлениями поражения сосудов являются нейропатия, нефропатия, инфаркт миокарда, инсульт и гангрена нижних конечностей.

Исследование полиморфных маркёров генов-кандидатов позволяет определить, существует ли вообще для данной патологии в конкретной популяции предрасполагающие или предохраняющие генетические факторы (маркёры) и можно ли с помощью этих генетических маркёров предсказать развитие болезни и её осложнений задолго до появления симптомов. Установление ассоциации гена с заболеванием и последующая оценка индивидуального генетического риска имеют важное значение для разработки дифференцированного подхода к профилактике и лечению данной патологии, и ее осложнений в зависимости от наследственной предрасположенности конкретного пациента. Поэтому в настоящее время одним из наиболее прогрессивных подходов является разработка стратегии ранней диагностики, прогнозирования и превентивной терапии заболевания с использованием генетических маркеров.

Наличие значительной генетической составляющей в развитии этой формы сахарного диабета доказывается различиями его частот встречаемости в различных этнических группах и более высокой конкордантностью в развитии заболевания у однояйцовых близнецов по сравнению с разнояйцовыми близнецами [3]. Эти данные позволяют сделать вывод о том, что СД типа 2 относится к многофакторным заболеваниям, возникающим в результате неблагоприятного воздействия внешних факторов на организм генетически предрасположенных людей. По современным представлениям, СД типа 2 - это полигенное заболевание, причем каждый из генов, вовлеченных в его развитие, определяет сравнительно небольшой риск, что затрудняет выявление этих генов и часто приводит к тому, что результаты, полученные на одной популяции, плохо воспроизводятся на других популяциях [4, 5].

Цель и задачи исследования. Целью данной работы было изучение ассоциации ряда полиморфных маркеров генов-кандидатов с развитием СД типа 2 и с несколькими метаболическими характеристиками в русской популяции. В соответствии с указанной целью нами были поставлены следующие задачи:

1. Определить в выборках больных (п = 387) и здоровых (п = 290) индивидов частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров генов, кодирующих: субъединицу белка Kir6.2 канала транспорта ионов калия (.KCNJ11), рецептор к сульфонилмочевине (АВСС8), транскрипционный фактор 7 (TCF7L2), белок адипонектин (ADIPOQ), рецепторы типа 1 и 2 к адипонектину (ADIPOR1 и 2), рецептор, активируемый пролифератором пероксисом типа у2 (PPARG2), регуляторную субъединицу белка, ассоциированного с ингибированием сигнальной циклинзависимой протеинкиназы CDK5 (CDKAL1), переносчик ионов цинка (SLC30A8), инсулиноподобный фактор роста типа 2 (IGF2BP2), продукт гена ассоциированного с ожирением (FTO). Кроме того, нами была изучена ассоциация с СД типа 2 полиморфных маркеров в хромосомных областях, где расположены гены CDKN2A/2B и HHEX/IDE.

2. Провести сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов полиморфных маркеров данных генов-кандидатов в исследованных выборках для выявления ассоциации изученных маркеров с развитием болезни и определения вклада данных генов в наследственную предрасположенность к патологии. 3. Провести сравнительный анализ распределения генотипов полиморфных маркеров данных генов-кандидатов в исследованных выборках больных и здоровых индивидов для выявления корреляции между изученными полиморфными маркерами и рядом метаболических показателей, таких как, базальный уровень глюкозы, уровеньглюкозы через 2 часа после ППТГ (пероральный глюкозо-толерантный тест), базальныи^уровень инсулина в крови, уровень инсулина через 2 часа после ППТГ, индексы HOMA-IR и ЫОМА-р.

Научная повита работы. В данной работе впервые исследована ассоциация с СД типа 2 полиморфных маркеров rs52I9 гена KCNJ11, rs1799859 гена АБСС8, rs13266634 гена SLC30A8, rs7903146 и rs12255372 гена TCF7L2, rs7756992, rs9465871, rs7754840 и rs10946398 гена,CDKALl, rs10811661 в области генов CDKN2A/2B, rs4402960 гена IGF2BP2, rs8050136 гена FTO, rsllllS75 в области генов ННЕХ/ЮЕ, rs1801282 гена PPARG2, rsl501299 гена AD1POO, rs2275738 гена ADIPOR1, rsl 1061971 и rsl6928751 гена ADIPOR2 в русской популяции. Также впервые была изучена корреляция между носительством определенных генотипов и рядом метаболических характеристик у больных с СД типа 2.

Обнаружена ассоциация полиморфных маркеров rs5219 гена KCNJ11, rs1799859 гена ABCCS, rsl3266634 гена SLC30A8, rs7903146 гена TCF7L2, rs10811661 в области генов CDKN2A/2B, rs 1801282 гена PPARG2, rsl 1061971 гена ADIPOR2, rs7756992, rs9465871 и rs10946398 гена CDKALl с СД типа 2.

С изменением базального уровня глюкозы были ассоциированы полиморфные маркеры: rsl2255372 гена TCF7L2 и rsl501299 гена AD1POQ. С изменениями уровня глюкозы через 2 часа после ППТГ были ассоциированы следующие полиморфные маркеры: rs1799859 гена АВСС8, rs12255372 и rs7903146 гена TCF7L2, rs13266634 гена SLC30A8, rs1501299 гена ADIPOQ, rs2275738 renaADIPORl и rs9465871 гена CDKALl.

С изменением базального уровня инсулина были ассоциированы полиморфные маркеры: rs1799859 гена АВСС8, rsl2255372 и rs7903146 гена TCF7L2, rsl 1061971 и rsl6928751 гена ADIPOR2, rs9465871 гена CDKALL С изменениями уровня инсулина через 2 часа после ППТГ были ассоциированы следующие полиморфные маркеры: rs5219 гена KCNJ11, rs1799859 гена АВСС8, rsl2255372 и rs7903146 гена TCF7L2, rsl3266634 гена SLC30A8, гs16928751 гена ADIPOR2, rs7756992 и rs9465871 гена CDKALl и rsl0811661 в области генов CDKN2A/2B.

С изменением индекса НОМА-р были ассоциированы полиморфные маркеры rs1799859 гена АВСС8, rs12255372 и rs7903146 гена TCF7L2, rsl3266634 гена SLC30A8, rsl501299 гена ADIPOQ, rs7756992 гена CDKALl, rsl0811661 в области генов CDKN2A/2B. С изменением индекса HOMA-IR: маркеры rs22 75738 гена ADIPOR1, rsl6928751 и rsl 1061971 гена ADIPOR2, rs8050136 гена FTO.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Потапов, Виктор Андреевич

выводы

1. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера rs1799859 гена АВСС8 с СД типа 2 в русской популяции. Было показано, что наличие аллеля А, генотипов GA и АА повышало риск развития СД типа 2.

2. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера rs5219 гена KCNJ11 с СД типа 2 в русской популяции. Было показано, что наличие аллеля Lys и генотипов Glu/Lys и Lys/Lys повышало риск развития СД типа 2.

3. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера rsl2255372 гена TCF7L2 с СД типа 2 в русской популяции. Было показано, что наличие аллеля Т и генотипа ТТ повышало риск развития СД типа 2.

4. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера rsl3266634 гена SLC30A8 с СД типа 2 в русской популяции. Было показано, что наличие аллеля С и генотипа С С повышало риск развития СД типа 2.

5. Обнаружена ассоциация полиморфных маркеров rs7756992, rs№946398 и rs9465871 гена CDKAL1 с СД типа 2 в русской популяции. У носителей аллеля G (rs7756992) и генотипа GG, С (rs10946398) и генотипов АС и СС, аллеля Т (rs9465871) и генотипов СТ и ТТ риск развития СД типа 2 был увеличен.

6. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера rsl0811661 в области генов CDKN2B/2A с СД типа 2 в русской популяции. Было показано, что у носителей аллеля С и генотипов Т/С и С/С риск развития СД типа 2 был увеличен.

7. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера rs11061971 гена ADIPOR2 с СД типа 2 в русской популяции. Было показано, что у носителей аллеля Г риск развития СД типа 2 был увеличен.

8. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера rs1801282 гена PPARG2 с СД типа 2 в русской популяции. Было показано, что у носителей аллеля А риск развития СД типа 2 был увеличен.

9. Полиморфные маркеры rsl799859 гена АВСС8, rs12255372 и rs7903146 гена TCF7L2, rsl3266634 гена SLC30A8, rs7756992, rsl0946398 и гs9465871 гена CDKALl и rs10811661 в области генов CDKN2B/2A ассоциированы с понижением индекса НОМА-(3. Варианты генов связанные с пониженным индексом НОМА-р вовлечены в развитие СД типа 2 через нарушения функции Р-клеток. Полиморфные маркеры rsl 1061971 и rsl6928751 гена ADIPOR2, rs2275738 гена ADIPOR1, rsl801282 гена PPARG2 и rs8050136 гена FTO ассоциированы с повышением индекса HOMA-IR. Варианты генов связанные с повышенным индексом HOMA-IR участвуют в патогенезе СД типа 2 через развитие устойчивости к инсулину в периферических тканях.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На основании полученных нами данных, можно сделать вывод о том, что в русской популяции основную роль в развитии СД типа 2 играют гены, влияющие на уровень синтеза и секреции инсулина в Р-клетках поджелудочной железы (АВСС8, KCNJ11, TCF7L2, SLC30A8). В то же время гены, определяющие пониженную чувствительность периферических тканей к действию инсулина (PPARG2, ADIPOQ, ADIPOR1 и ADIPOR2), в гораздо меньшей степени ассоциированы с развитием СД типа 2. Ряд генов (IGF2BP2, HHEX/IDE, FTO, ADIPOQ), для которых была обнаружена ассоциация с СД типа 2 в других популяциях, в русской популяции не были ассоциированы с этим заболеванием. В тоже время следует отметить, что один из полиморфных маркеров гена ADIPOR2 показал ассоциацию с развитием СД типа 2 в русской популяции, хотя в полных геномных поисках ассоциация этого гена с СД типа 2 не была обнаружена.

Все эти данные говорят о важности исследования предрасполагающих генетических факторов, вклад которых в. развитие заболевания существенно изменяется в зависимости от популяции. Выявление генетических маркеров риска СД типа 2 позволяет лучше понять основной патологический механизм развития этого заболевания и в соответствии с этим выбрать оптимальную терапию заболевания, а также использовать полученные данные для профилактики СД типа 2 у здоровых людей.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Потапов, Виктор Андреевич, Москва

1. Collins F.S., McCusick V.A.: Implication of Human Genome Project for

2. Medical Science. JAMA, 2001, №5.

3. Аметов A.C.: Секреция инсулина в норме и при сахарном диабете 2 типа.p-KJIETKA: СЕКРЕЦИЯ ИНСУЛИНА В НОРМЕ И ПАТОЛОГИИ, 2009, №2.

4. Rich SS. Mapping genes in diabetes. Genetic epidemiological perspective.

5. Diabetes. 1990. 39(11): p.1315-1319.

6. Altshuler et al.: The common PPAR-gamma Pro 12Ala polymorphism isassociated with decreased risk of type 2 diabetes. Nat. Genet., 2000. 26: p. 7680.

7. Gloyn A.L., Weedon M.N., Owen K.R., Turner M.J., Knight B.A., Hitman G.,

8. Иванов, В.И. Геномика медицине под ред. В. И. Иванова и JI. JI.

9. Киселева., с.392. Медицина, 2005.

10. Щипков, В.П., Г.Н. Кривошеина. Общая и медицинская генетика : Учеб.пособие для студентов высш. мед. учеб. заведений. 252 стр., М.: Медицина, 2003.

11. Гинтер, Е.К. Медицинская генетика : Учеб. для студентов мед. вузов. 446е., М.: Медицина, 2003.

12. Brookes, A.J. The essence ofSNPs. Gene, 1999. 234(2): p. 177-86.

13. Cargill, M., D. Altshuler, J. Ireland, P. Sklar, K. Ardlie, N. Patil, N. Shaw, C.R.1.ne, E.P. Lim, N. Kalyanaraman, J. Nemesh, L. Ziaugra, L. Friedland, A.

14. Rolfe, J. Warrington, R. Lipshutz, G.Q. Daley, and; E.S. Lander, Characterization of single-nucleotide polymorphisms in coding regions of human genes. Nat Genet, 1999. 22(3): p.231-8.

15. The International HapMap Consortium. A haplotype map of the humangenome. Nature, 2005. 431(7063): p.1299-1320.

16. Lander, E.S., The new genomics: global views of biology. Science, 1996.274(5287): p.536-9.

17. Бочков, Н.П., Медицинская генетика : Учеб. для студентов мед. училищ иколледжей. Среднее профессиональное образование. 2001, М.: Мастерство. 190 с.

18. Saiki, R.K., S. Scharf, F. Faloona, K.B. Mullis, G.T. Horn, H.A. Erlich, and N.

19. Arnheim, Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. Science, 1985. 230(4732): p.1350-4.

20. Schumm, J.W., R.G. Knowlton, J.C. Braman, D.F. Barker, D. Botstein; G.

21. Akots, V.A. Brown, T.C. Gravius, C. Helms, K. Hsiao, and et al., Identification of more than 500 RFLPs by screening random genomic clones. Am J Hum Genet, 1988. 42(1): p. 143-59.

22. Thomson, G., Analysis of complex human genetic traits: an ordered-notationmethod and new tests for mode of inheritance. Am J Hum Genet, 1995. 57(2): p.474-86.

23. Пузырев В. П., Степанов В. А. Патологическая анатомия геномачеловека. 223 с Новосибирск: Наука. Сибирское предприятие РАН, 1997.

24. Дедов И.И., Мельниченко Г.А., Фадеев В.В. Эндокринология. Изд.1. Медицина, 2000.

25. Зефирова Г. С. Современные представления об этиологии и патогенезесахарного диабета. Изд. Медицина, 1989.

26. ОстаповаВ. В. Сахарный диабет. Изд. Медицина, 1994:

27. Строев Ю.И. Сахарный диабет : Учеб.пособие, Спб, 1992.

28. Hemang Р, Lyssenko V, Groop LC. Prioritizing genes for follow-up from genome wide association studies using information on gene expression in tissues relevant type 2 diabetes mellitus. BMC Med. Genomics., 2009. 2: p.72-80

29. Grant RW, Moore AF, Florez JC. Genetic Architecture of Type 2 Diabetes: Recent Progress and Clinical Implications. Diabetes Care, 2009. 32(6): p.l 107-1114

30. Robertson RP. Chronic oxidative stress as a central mechanism for glucosetoxicity in pancreatic islet beta cells in diabetes ^ J.Biol.Chem., 2004. 279(41):42351-42354.

31. Seino S, Miki T Physiological and pathophysiological roles of ATP-sensitive K+ channels. Prog Biophys. Mol. Biol. 2003. 8: p. 133-176.

32. Dean, M., Rzhetsky, A., Allikmets R. The human ATP-binding cassette (ABC)transporter superfamily. Genome.Res., 2001. 11: p. 1156-1166

33. Babenko, A. P., Bryan, J. A conserved, inhibitory and differential stimulatoryaction of nucleotides on K(IR)6.0/SUR complexes is essential for excitation-metabolism coupling by K(ATP) channels. J.Biol.Chem., 2001. 276: p.49083-49092.

34. Seghers V, Nakazaki M, DeMayo F, Aguilar-Bryan L, Bryan J () Surl knockout mice: a model for KATP channel-independent regulation of insulin secretion. J Biol Chem 2000. 275: p.9270- 9277

35. Shiota C, Larsson O, Shelton KD et al. Sulfonylurea receptor type 1 knockoutmice have intact feeding-stimulated insulin secretion despite marked impairment in their response to glucose. J. Biol Chem. 2002. 277: p.37176— 37183

36. Doliba NM, Qim W, Vatamaniuk MZ et al. Restitution of defective glucose-stimulated insulin release of sulfonylurea type 1 receptor knockout mice by acetylcholine. Am J Physiol Endocrinol Metab., 2004. 286: p.E834-E843

37. Florez JC, Jablonski KA, Kahn SE et al. Type 2 diabetesassociated missense polymorphisms KCNJ11 E23K and ABCC8 A1369S influence progression to diabetes and response to interventions in the Diabetes Prevention Program. Diabetes, 2007. 56: p.531-536

38. Sakamoto Y, Inoue H, Keshavarz P, et al. SNPs in the KCNJ11- ABCC8 genelocus are associated with type 2 diabetes and blood pressure levels in the Japanese population. Hum Genet., 2007. 52: p.781-793

39. Florez JC, Burtt N, de Bakker PIW, et al. Haplotype structure and genotype-phenotype correlations of the sulfonylurea receptor and the islet ATP-sensitivepotassium channel gene region. Diabetes, 2004. 53: p.1360-136

40. Rissanen J, Markkanen A, Karkkainen P et al. Sulfonylurea receptor 1 genevariants are associated with gestational diabetes and type T diabetes but not with altered secretion of insulin. Diabetes Care, 2000. 23: p.70—73

41. Laukkanen O, Pihlajamaki J, Lindstrom J et al. Polymorphisms of the SUR1

42. ABCC8) and Kir6.2 (KCNJ11) Genes predict theconversion from impaired glucose tolerance to type 2 diabetes. The Finnish Diabetes Prevention Study. J Clin Endocrinol Metab, 2004. 89: p.6286-6290

43. Reis AF, Ye WZ, Dubois-Laforgue D et al. Association of a variant in exon 31of the sulfonylurea receptor 1 (SUR1) gene with type 2 diabetes mellitus in French Caucasians. Hum Genet, 2000. 107: p.138-144

44. Kilpelainen TO, Lakka ТА, Laaksonen DE et al. Physical activity modifies theeffect of SNPs in the SLC2A2 (GLUT2) and ABCC8 (SUR1) genes on the risk of developing type 2 diabetes. Physiol Genomics, 2007. 31: p.264-272

45. Goksel DL, Fischbach K, Duggirala R et al. Variant in sulfonylurea re ceptor-1gene is associated with high insulin concentrations in non-diabetic Mexican Americans: SUR1 gene variant and hyperinsulinemia. Hum.Genet., 1998. 103: p.280-285

46. Aguilar-Bryan L, Bryan J. Molecular biology of adenosine triphosphatesensitivepotassium channels. Endocr.Rev., 1999. 20: p.101—135

47. Annabelle S. Slingerland. Monogenic diabetes in children and young adults:

48. Challenges for researcher, clinician and patient Rev. Endocr. Metab. Disord., 2006. 7: р.171-185е

49. Slinderlands A.S., Hatterslay A.T. Mutations in the Kir6.2. submit of the K-ATP channel and permanent neonatal diabetes: new insights and new treatment Ann Med., 2005. 37(3), p.186-195

50. Smith AJ, Taneja TK, Mankouri J, Sivaprasadao A. Molecular cell biology of

51. KATP channels: implications for neonatal diabetes. Expert Rev. Mol. Med., 2007. 9: p.1-17

52. Nichols CG, Koster JC, Remedi MS. fi-cell hyper excitability: fromhyperinsulinism to diabetes. Diabetes Obes. Metab., 2007. 9: p.81-88

53. Nielsen E-M.D., Hansen L., Carstensen B. et al. The E23K variant of Kir6.2associates with impaired post-OGTT serum insulin response and increased risk of type 2 diabetes. Diabetes, 2003. 52: p.573-577

54. Schwanstecher C, Meyer U, Schwanstecher M. KIR6.2 polymorphism predisposes to type 2 diabetes by inducing overactivity of pancreatic b-cell ATP-sensitive К channels. Diabetes, 2002. 51: p.875-879

55. Hani EH, Boutin P, Durand E, Inoue H, Permutt MA, Velho G, Froguel P.

56. Missense mutations of the pancreatic islet beta cell inwardly rectifying K+ channel gene (KIR6.2/BIR): a metaanalysis suggests a role in the polygenic basis of type II diabetes mellitus in Caucasians. Diabetologia, 1998. 41: p.1511-1515

57. Doi Y, Kubo M, Ninomiya T, Yonemoto К et al. Impact of Kir6.2 E23K polymorphism ^ on the development of type 2 diabetes in a general Japanese population: the Hisayama Study. Diabetes, 2007. 56: p.2829-2833

58. Shaat N, Ekelund M, Lernmark A et al. Association of the E23K polymorphismin the KCNJ11 gene with gestational diabetes mellitus. Diabetologia, 2005. 48: p.2544-2551

59. Nielsen EM, Hansen L, Carstensen B, Echwald SM et al. The E23K variant of

60. Kir6.2 associates with impaired post-OGTT serum insulin response and increased risk of type'2 diabetes. Diabetes, 2003. 52: p.573-577

61. Florez JC. Newly identified loci highlight beta cell dysfunction as a key causeof type 2 diabetes: where are the insulin resistance genes? Diabetologia, 2008. 51: p.l 100-10

62. Jin T, Liu L. The Wnt signaling pathway effector TCF7L2 and type 2 diabetesmellitus. Mol. Endocrinol, 2008. 22: p.2383-92.

63. Kenneth Maiese; Faqi Li, Zhao Zhong Chong, and Shang Yen Chen. THE

64. WNT SIGNALING PATHWAY: AGING GRACEFULLY AS A PROTECTIONIST? Pharmacol Ther., 2008. 118(1): p. 58-81.

65. Grant SF, Thorleifsson G, Reynisdottir I et al. Variant of transcription factor 7-like 2 (TCF7L2) gene confers risk of type 2 diabetes. Nat. Genet., 2006. 38: p.320-3

66. Cauchi S, Meyre D, Dina C, Choquet H, Samson C, Gallina S. Transcription factor TCF7L2 genetic study in the French population: expression in human beta-cells and adipose tissue and strong association with type 2 diabetes. Diabetes, 2006. 55: p.2903-8

67. Saxena R, Gianniny L, Burtt NP, Lyssenko V, Guidicci C, SjoEgren M.

68. Common single nucleotide polymorphisms in TCF7L2 are reproducibly associated with type 2 diabetes and reduce the insulin response to glucose in nondiabetic individuals. Diabetes, 2006. 55: p:2890-5

69. Scott LJ, Bonnycastle LL, Wilier CJ, Sprau AG, Jackson AU,. Narisu N. Association of transcription factor 7—like 2 (TCF7L2) variants with type 2 diabetes in a Finnish sample. Diabetes, 2006. 55: p.2649-53

70. Zhang C, Qi L, Hunter DJ, Manson JE, van Dam RM, Hu FB. Variant oftranscription factor 7—like 2 (TCF7L2) gene and the risk of type 2 diabetes in large cohorts of U.S. women and men. Diabetes, 2006. 55: p.2645-8

71. Chandak GR, Janipalli CS, Bhaskar S et al. Common variants in the TCF7L2 gene are strongly associated with type 2 diabetes mellitus in the Indian population. Diabetologia, 2007. 50: p.63-7

72. Marzi C, Huth C, Kolz M, Grallert H, Meisinger C, Wichmann HE, et al.:

73. Variants of the transcription factor 7-like 2 gene (TCF7L2) are strongly associated with type 2 diabetes but not with the metabolic syndrome in the MONICA/KORA surveys. Horm.Metab.Res., 2007. 39: p.46-52.

74. Bodhini D, Radha V, Dhar M, Narayani N, Mohan V. The rsl2255372 (G/T)and rs7903146 (C/T) polymorphisms of the TCF7L2 gene are associated with type 2 diabetes mellitus in Asian Indians. Metabolism, 2007. 56: p. 1174-8

75. Horikoshi M, Нага K, Ito C, Nagai R, Froguel P, Kadowaki T. A geneticvariation of the transcription factor 7—like 2 gene is associated with risk of type 2 diabetes in the Japanese population. Diabetologia, 2007.50: p.747—51

76. Ng MC, Tam CH, Lam VK, So WY,Ma RC, Chan JC. Replication andidentification of novel variants at TCF7L2 associated with type 2 diabetes in Hong Kong Chinese. J.Clin.Endocrinol.Metab., 2007. 92: p.3733-7

77. Humphries, SE, Gable D, Cooper JA et al. Common variants in the TCF7L2gene and predisposition to type 2 diabetes in UK European Whites, Indian Asians and Afro-Caribbean men and women. J.Mol.Med.2006. 84: p. 1—10*

78. Lewis JP, Palmer ND, Hicks PJ et al. Association analysis in African

79. Americans of European-derived type 2 diabetes single nucleotide polymorphisms from whole-genome association studies. Diabetes, 2008. 57: p.2220-5

80. Helgason A, Pat lsson S, Thorleifsson G. et al. Refining the impact ofTCF7L2gene variants on type 2 diabetes and adaptive evolution. Nat.Genet., 2007. 39: p.218-25.

81. SchaE fer SA, Tschritter O, Machicao F, Thamer С et al. Impaired glucagonlike peptide-1-induced insulin secretion in carriers of transcription factor 7-like 2 (TCF7L2) gene polymorphisms. Diabetologia, 2007. 50: p.2443-50.

82. Kirchhoff K, Machicao F, Haupt A et al. Polymorphisms in the TCF7L2,

83. CDKALl and SLC30A8 genes are associated with impaired proinsulin conversion. Diabetologia, 2008. 51: p.597-601.

84. Chimienti, F., Devergnas, S., Pattou, F. et al. In vivo expression and functionalcharacterization of the zinc transporter ZnT8 in glucose-induced insulin secretion. J.Cell Sci., 2006. 119: p.4199-4206.

85. Dunn, M. F. Zinc-ligand interactions modulate assembly and stability of theinsulin hexamer—a review. Biometals, 2005. 18: p.295-303.

86. Chimienti F, Favier A, Seve M.: ZnT-8, a pancreatic beta-cell-specific zinctransporter. Biometals, 2008. 18: p.313-317.

87. Luizzi, J. P. and Cousins, R. J. Mammalian zinc transporters. Ann. Rev.

88. Nutr.,2004. 24: p. 151-172.

89. Sladek R., Rocheleau G., Rung J. et al. A genome-wide association studyidentifies novel risk loci for type 2 diabetes // Nature., 2007. V. 445. P. 881885

90. Saxena R., Voight B.F., Lyssenko V. et al. Genome-wide association analysisidentifies loci for type 2 diabetes and triglyceride levels. Science, 2007. 316: p.1331-1336.

91. Scott L.J., Mohlke K.L., Bonnycastle L.L. et al. A genome-wide association study of type 2 diabetes in Finns detects multiple susceptibility variants. Science, 2008. 316: p.1341-1345.

92. Zeggini E., Weedon M.N., Lingren C.M. et al. Replication of genome-wideassociation signals in UK samples reveals risk loci for type 2 diabetes. Science, 2007. V. 316: p.1336-1341.

93. Horikawa Y., Miyake K., Yasuda K. et al. Replication of genome-wideassociation studies of type 2 diabetes susceptibility in Japan. J.Clin.Endocrinol.Metab., 2008. V. 93: p.3136-3141.

94. Ng M.C., Park K.S., Oh B. et al. Implication of genetic variants near TCF7L2,

95. SLC30A8, HHEX, CDKALl, CDKN2A/B, IGF2BP2, and FTO in type 2 diabetes and obesity in 6,719 Asians. Diabetes., 2008. V, 57: p.2226-2233

96. Boesgaard T.W., Zilinskaite J., Vanttinen M. et al. The common SLC30A8

97. Arg325Trp variant is associated with reduced first-phase insulin release in 846 non-diabetic offspring of type 2 diabetes patients the EUGENE2 study. Diabetologia, 2008. V, 51: p.816-820.

98. Carolyn D. Hurst, Darren C. Tomlinson, Sarah V. Williams et al. Inactivationof the Rb pathway and overexpression of both isoforms of E2F3 are obligate events in bladder tumours with 6p22 amplification. Oncogene, 2008. 27(19): p.2716-2727.

99. Steinthorsdottir V, Thorleifsson G, Reynisdottir I et al. A variant in CDKALlinfluences insulin response and risk of type 2 diabetes. Nat.Genet.,2007. 39: p.770 —775.

100. Ubeda M, Rukstalis JM, Habener JF. Inhibition of cyclin-dependent kinase 5activity protects pancreatic beta cells from glucotoxicity. J. Biol. Chem. 2006. 281: p.28858-28864.

101. Wei FY, Nagashima K, Ohshima T, Saheki Y et al. Cdk5-dependent regulationof glucose-stimulated insulin secretion. Nat.Med., 2005. 11: p. 1104-1108.

102. Benavides DR, Quinn JJ, Zhong P et al. Cdk5 modulates cocaine reward,motivation, and striatal neuron excitability. J.Neurosci., 2007. 27: p. 12967— 12976.

103. Hawasli AH, Benavides DR, Nguyen C. et al. Cyclin-dependent kinase 5governs learning and synaptic plasticity via regulation of NMDA receptor degradation. Nature Neuroscience, 2007. 10: p.880-886.

104. Marina Mapelli, Andrea Musacchio: The Structural Perspective on CDK5.

105. Neurosignals, 12:164-172, 2003.

106. Mariano Ubeda, Daniel M. Kemp and Joel F. Habener: Glucose-Induced

107. Expression of the Cyclin-Dependent Protein Kinase 5 Activator p35 Involved in Alzheimer's Disease Regulates Insulin Gene Transcription in Pancreatic fi-Cells. (2004) Endocrinology 145, 3023-3031

108. Dehwah MA, Wang M, Huang QY. CDKALl and type 2 diabetes: a global meta-analysis. Genet Mol Res. 2010 Jun 15;9(2):1109-20

109. Pascoe L, Tura A, Patel SK, Ibrahim IM, Ferrannini E, Zeggini E et al. Type 2

110. Diabetes Genetics Consortium: Common variants of the novel type 2 diabetes genes CDKALl and HHEX/IDE are associated with decreased pancreatic beta-cell function. Diabetes 56:3101-3104, 2007

111. Jie Wen, Tina Ronn, Anders Olsson et all: Investigation of Type 2 Diabetes

112. Risk Alleles Support CDKN2A/B, CDKALl, and TCF7L2 As Susceptibility Genesin a Han Chinese Cohort. February 2010. Volume 5. Issue 2. e9153

113. Cheng Hu, Rong Zhang, Congrong Wang et all. PPARG, KCNJ11, CDKALl,

114. CDKN2A-CDKN2B, IDE-KIF11- HHEX, IGF2BP2 and SLC30A8 Are Associated with Type 2 Diabetes in a Chinese Population. October 2009. Volume 8. Issue 10. e7643

115. Ste'phane Cauchi, David' Meyre, Emmanuelle Durand et all: Post Genome

116. Wide Association Studies of Novel Genes Associated with Type 2 Diabetes Show Gene-Gene Interaction and High Predictive Value. May 2008, Volume 3, Issue 5, e2031

117. Mandy van Hoek, Abbas Dehghan, Jacqueline C.M. Witteman et all:

118. Predicting Type 2 Diabetes- Based on Polymorphisms From Genome-Wide Association Studies. DIABETES, 2009. VOL. 57.

119. Ying Wu, Huaixing Li, Ruth J.F. Loos et all. Common Variants in CDKAL1,

120. CDKN2A/B, IGF2BP2, SLC30A8, and HHEX/IDE Genes Are Associated With Type 2 Diabetes andlmpaired Fasting Glucose in a Chinese Han Population. DIABETES, 2008, VOL. 57.

121. Joshua P. Lewis, Nicholette D. Palmer, Pamela J. Hicks *et all. Association

122. Analysis in African Americans of European-Derived Type 2 Diabetes Single Nucleotide Polymorphisms From Whole-Genome Association Studies. DIABETES, 2008, VOL. 57.

123. Yasuharu Tabara, Haruhiko Osawa, Ryuichi Kawamoto- et all: Replication

124. Study of Candidate Genes Associated With Type 2 Diabetes Based On Genome-Wide Screening. DIABETES, 2009, VOL. 58.

125. Rong Rong, Robert L. Hanson et al. Association Analysis of Variation in/Near FTO, CDKALl, SLC30A8, HHEX, EXT2, IGF2BP2, LOC387761, and CDKN2B With Type 2 Diabetes and Related Quantitative Traits in Pima Indians. DIABETES, 2009, VOL. 58.

126. Cunnington MS, Santibanez Koref M, Mayosi BM, Burn J, Keavney В.: Chromosome 9p21 SNPs Associated with Multiple Disease Phenotypes Correlate with ANRIL Expression. PLoS Genet., 2010. 6(4): el000899

127. Zhao J, Li M, Bradfield JP, Wang К et al. Examination of type 2 diabetes loci implicates CDKALl as a birth weight gene. Diabetes. 2009 Oct;58(10):2414-8

128. Fajas L, Blanchet E, Annicotte JS. CDK4, pRB and E2F1: connected to insulin. Cell Div., 2010. 5(1): p.6.

129. Sherr CJ. The INK4a/ARF network in tumour suppression Nat.Rev.Mol.Cell.Biol., 2001. p.2731-737.

130. Sato K,.Nakagawa H, Tajima A, Yoshida K, Inoue I. ANRIL is implicated in the regulation of nucleus and potential transcriptional target of E2F1. Oncol.Rep., 2010. 3: p.701-7.

131. A Ferru, G Fromont, H Gibelin, J Guilhot et al. The status of CDKN2A alpha (pl6INK4A) and beta (pl4ARF) transcripts in thyroid tumour progression. Br.J.Cancer, 2006. 95(12): p. 1670-1677.

132. Serrano M, Hannon GJ, Beach D. A new regulatory motif in,cell-cycle control causing specific inhibition of cyclin D/CDK4. Nature, 1993. 366: p.704-707.

133. Kubbutat MH, Jones SN, Vousden KH. Regulation of p53 stability by Mdm2. Nature, 1997. 387: p.299-303.

134. Rane SG, Dubus P, Mettus RV et al. Loss of Cdk4 expression causes insulin-deficient diabetes and* Cdk4 activation results in, -islet cell hyperplasia. Nat.Genet., 1999. 22: p.44J-52.

135. Krishnamurthy J, Ramsey MR, Ligon KL, Torrice С et al. pl6INK4a induces an age-dependent decline in islet regenerative potential Nature, 2006. 443: p.453-457.

136. Tschen SI, Dhawan S, Gurlo T, Bhushan A. Age-dependent decline in beta-cell proliferation restricts the capacity of beta-cell regeneration in mice. Diabetes. 2009 Jun;58(6): 1312-20.

137. Shintaro Omori, Yasushi Tanaka, Atsushi Takahashi, et al. Association of CDKALl, IGF2BP2, CDKN2A/B, HHEX, SLC30A8, and KCNJ11 With Susceptibility to Type 2 Diabetes in a Japanese Population. DIABETES, VOL. 57, MARCH 2008

138. Yisraeli J.K. VICKZ proteins: A multi-talented family of regulatory RNA-bindingproteins. Biol. Cell. 2005;97:87-96.

139. Bach LA, Rechler MM. Insulin-like growth factor binding,proteins. Diabetes Rev 1995;3:38-61.

140. Firth SM, Baxter RC. Cellular actions of the insulin-like growth factor binding proteins. Endocrine Reviews 2002;23:824-54.

141. Rajaram S, Baylink DJ, Mohan S. Insulin-like growth factor-binding proteins in serum and other biological fluids: regulation and functions. Endocr Rev 1997;18:801-31.

142. Nielsen J, Christiansen J, Lykke-Andersen J et al. A family of insulin-like growth factor II mRNAbinding proteins represses translation in late development. Mol Cell Biol 1999; 19: 1262-1270.

143. Petrik J, Arany E, McDonald TJ, Hill DJ. Apoptosis in the pancreatic islet cells of the neonatal rat is associated with a reduced expression of insulin-like growth factor II that may act as a survival factor. Endocrinology 1998. 139: p.2994-3004.

144. Xuan SH, Kitamura T, Nakae J, et al. Defective insulin secretion in pancreatic beta cells lacking type 1 IGF receptor. J.Clin.Invest., 2002. 110: p.1011-9.г

145. George M, Ayuso E, Casellas A, Costa C, DevedjianJC, Bosch F. Beta cell expression of IGF-I leads to recovery from type 1 diabetes. J Clin Invest 2002;109:1153-63

146. Scott LJ, Mohlke KL, Bonnycastle LL, et al.: A genome-wide association study of type 2 diabetes in Finns detects multiple susceptibility variants. Science, 2007. 316: p.1341-1345.

147. Konsta Duesing, Ghazaleh Fatemifar, Guillaume Gharpentier et al. Evaluation of the Association of IGF2BP2 Variants With Type 2 Diabetes in French Caucasians. Diabetes, 2008, vol. 57.

148. Ng MC, Park KS, Oh B, et al.: Implication of genetic variants near TCF7L2, SLC30A8, HHEX, CDKAL1, CDKN2A/B, IGF2BP2, and FTO in type 2 diabetes and obesity in 6,719 Asians. Diabetes 57:2226 -2233, 2008

149. Omori S, Tanaka Y, Takahashi A, et al.: Association of CDKAL1, IGF2BP2, CDKN2A/B, HHEX, SLC30A8, and KCNJ11 with susceptibility to type 2 diabetes in a Japanese population. Diabetes, 2008. 57: р.79.Г-795.

150. Bort R, Martinez-Barbera JP, Beddington RS, Zaret KS. Hex homeobox gene-dependent tissue positioning is required for organogenesis of the ventral pancreas. Development, 2004. 131: p.797- 806.

151. Duckworth WC, Bennett RG, Hamel FG (1998) Insulin degradation: progress and potential. Endocr.Rev., 1998. 19: p.608-624.

152. Seta KA, Roth RA: Overexpression of insulin degrading enzyme: cellular localization and effects on insulin signalling. Biochem.Biophys.Res.Commun., 1997. 231: p. 167 -171.

153. Misbin RI, Almira EC, Cleman MW: Insulin degradation in serum of a patient with apparent insulin resistance. J.Clin.Endocrinol.Metab., 1988. 52: p. 177-180.

154. Kurochkin IV: Insulin-degrading enzyme: embarking on amyloid destruction. Trends.Biochem.Sci., 2001. 26: p.421 -425.

155. Fawcett J, Permana PA, Levy JL, Duckworth WC. Regulation of protein degradation by insulin-degrading enzyme: analysis by small interfering RNA-mediatedgene silencing. Arch.Biochem.Biophys., 2007. 468: p.128-133.

156. Hamel FG, Bennett RG, Upward JL, Duckworth WC. Insulin inhibits peroxisomal fatty acid oxidation in isolated rat hepatocytes. Endocrinology, 2001. 142: p:2702—2706.

157. Kuo WL, Montag AG, Rosner MR. Insulin-degrading enzyme is differentially expressed and developmentally regulated in various' rats tissues. Endocrinology, 1993. 132: p.604-611.

158. Farris W, Mansourian S, Chang Y, Lindsley L et al. Insulin-degrading enzyme regulates the levels of insulin, amyloid beta-protein, and the beta-amyloid precursor protein intracellular domain in vivo. Proc.Natl.Acad.Sci., 2003. 100: p.4162-4167

159. Furukawa Y, Shimada T, Furuta H, et al.: Polymorphisms 'in the IDE-KIF11-HHEX gene locus are reproducibly associated with type 2 diabetes in a Japanese population. J Clin Endocrinol Metab 93:310 -314, 2008

160. Harald Staiger, Fausto Machicao, Norbert Stefan et al. Polymorphisms within Novel Risk Loci for Type 2 Diabetes Determine b-Cell Function. September2007 | Issue 9 | e832

161. Mark I McCarthy and Eleftheria Zeggini: Genome-wide association studies in type 2 diabetes. Curr Diab Rep. 2009 April; 9(2): 164-171.

162. Harald Staiger, Alena Stancva'kova' , Jone Zilinskaite et all: A Candidate Type 2 Diabetes Polymorphism HHEX Locus Affects Acute Glucose- Release in European Populations. DIABETES, VOL. 57, FEBRUARY 2008

163. Groenewoud MJ, Dekker JM, Fritsche A et al. Variants of CDKALl and IGF2BP2 affect first-phase insulin secretion during hyperglycaemic clamps. Diabetologia.2008 Sep;51(9): 1659-63

164. Zhao J, Bradfield JP, Zhang H, Annaiah К et al. Examination of all type 2 diabetes GWAS loci reveals HHEX-IDE as a locus influencing pediatric BMI. Diabetes. 2010 Mar;59(3):751-5)

165. Maeda К, Okubo К, Shimomura I, Funahashi T, Matsuzawa Y, Matsubara K. cDNA cloning and expression of a novel adipose specific collagen-like factor, apMl (adipose most abundant gene transcript 1). Biochem Biophys Res Commun 221:286-289. 1996

166. Diez JJ, Iglesias P (March 2003). The role of the novel adipocyte-derived hormone adiponectin in human disease. Eur. J. Endocrinol.-148 (3): 293-300

167. Hotta K, Funahashi T, Arita Y, Takahashi M et al. Plasma concentrations of a novel, adiposespecific protein, adiponectin, in type 2 diabetic patients. Arterioscler Thromb Vase Biol 20:1595-1599. 2000

168. Statnick MA, Beavers LS, Conner LJ et al. Decreased expression of apMl in omental and subcutaneous adipose tissue of humans with type 2 diabetes. Int J Exp Diabetes Res 1:81-88. 2000

169. Ни E, Liang P, Spiegelman BM. AdipoQ is a novel adipose specific gene dysregulated in obesity. J Biol Chem 271:10697-10703. 1996

170. Spranger J, Ristow M, Otto В, Heldwein W et al. Post-prandial decrease of human plasma ghrelin in the absence of insulin. J Endocrinol Invest.;26(8):RC19-22. 2003

171. Gu HF, Abulaiti A, Ostenson CG, Humphreys К et al. Single nucleotide polymorphisms in the proximal promoter region of the adiponectin (APM1) gene are associated with type 2 diabetes in Swedish Caucasians. Diabetes. ;53 Suppl 1:S31-5. 2004

172. Kubota N, Terauchi Y, Yamauchi T et al. Disruption of adiponectin causes insulin resistance and neointimal formation. J Biol Chem. 277(29):25863-6. 2002

173. Vasseur F, Meyre D, Froguel P. Adiponectin, type 2 diabetes and the metabolic syndrome: lessons from human genetic studies. Expert Rev Mol Med 8:1-12. 2006

174. Kadowaki Т., Yamauchi Т.: Adiponectin and adiponectin receptor., Endocrine Rev., 26:430-451,2005.

175. Yamauchi T, Kamon J, Ito Y, Tsuchida A et al; Cloning of adiponectin receptors that mediate antidiabetic metabolic effects. Nature 423:762-769. 2003.

176. Yamauchi Т., Kamon J., Waki H.: The fat-derived hormone adiponectin reverses insulin resistance associated with both lipoatrophy and obesity., Nat.Med., 7: 941-946, 2001.

177. Civitarese A.E., Jenkinson C.P., Richardson D. Adiponectin receptor gene expression and insulin sensitivity in non-diabetic Mexikan Amerikans with or without a family history of type 2 diabetes., Diabetologia, 47: 816-820, 2004

178. Debard C., Laville M., Berde V. Expression of key genes of fatty-acid oxidation, including adiponectin receptor, in skeletal muscle of type 2 diabetic patients., Diabetologia, 47: 917-925, 2004

179. Inukai K, Nakashima Y, Watanabe M^ Takata N et al. Regulation of adiponectin receptor gene expression in diabetic mice. Am* J Physiol Endocrinol Metab 288:E876-E882. 2005

180. Yamauchi T, Nio Y, Maki T, Kobayashi M et al. Targeted disruption of AdipoRl and AdipoR2 causes abrogation of adiponectin binding and metabolic actions. Nat Med 13:332-339. 2007

181. Damcott C.M., Ott S.H., Pollin T.I., Reinhart L.J. et al. Genetic variation in adiponectin receptor 1 and adiponectin receptor 2 is associated with type 2 diabetes in the Old Order Amish. : Diabetes, Jul; 54(7): 2245-2250, 2005

182. Siitonen N, Pulkkinen L, Mager U, Lindstrom J et al.: Association of sequence variations in the gene encoding adiponectin receptor 1 (ADIPOR1) with body size and insulin levels. The Finnish Diabetes Prevention Study. Diabetologia 49:1795-1805. 2006

183. Richardson DK, Schneider J, Fourcaudot MJ et al. Association between variants in the genes for adiponectin and its receptors with insulin resistance syndrome (IRS)-related phenotypes in Mexican Americans. Diabetologia 2006. 49:2317-2328.

184. Vaxillaire M, Dechaume A, Vasseur-Delannoy V et al. Genetic analysis of DIPOR1 and ADIPOR2' candidate polymorphisms for type 2 diabetes in the Caucasian population. Diabetes 2006. 55:856-861.

185. Qi L, Doria A, Giorgi E, Hu FB. Variations in adiponectin receptor genes and susceptibility to type 2' diabetes in women: a tagging-single nucleotide polymorphism haplotype analysis. Diabetes, 2007. 56: p. 1586-1591.

186. Stratigopoulos G, Padilla SL, Leduc CA, et al.: Regulation of Fto/Ftm gene expression in mice and humans. Am J.Physiol.Regul.Integr.Comp.Physiol., 2008. 294: R1185-1196

187. Kloting N, Schleinitz D, Ruschke K, et al. Inverse relationship between obesity and FTO gene expression in visceral adipose tissue in humans. Diabetologia, 2008. 51: p.641-647.

188. Fredriksson R, Hagglund M, Olszewski PK et al. The obesity gene, FTO, is of ancient origin, upregulated during food deprivation and expressed in neurons of feeding-related nuclei of the brain. Endocrinology, 2008. 149 (5): p.20622071.

189. Sanchez-Pulido L, Andrade-Navarro MA. The FTO (fat mass and obesity associated) gene codes for a novel member of the поп-heme dioxygenase superfamily. BMC Biochem., 2009. 8: p.23.

190. Gerken T, Girard CA, Tung YC, et al. The obesity-associated FTO gene encodes a 2-oxoglutaratedependent nucleic acid demethylase. Science, 2007. 30: p.1469-1472.jl <■

191. Andreasen СИ, Stender-Petersen KL, Mogensen MS, et al. Low physical activity accentuates the effect of the FTO rs9939609 polymorphisms on body fat accumulation. Diabetes, 2008. 57: p.95-101.

192. Wahlen K, Sjolin E, Hoffstedt J. The common rs9939609 gene variant of the fat mass- and obesityassociated gene FTO is related to fat cell lipolysis. J Lipid.Res.,2008. 49: p.607-611.

193. Berentzen T, Kring SII, Hoist C, et al. Lack of association of fatness-related FTO gene variants with energy expenditure or physical activity. J Clin Endocrinol Metab., 2008.

194. Dina C, Meyre D, Gallina S, et al. Variation in FTO contributes to childhood obesity and severe adult obesity. Nat. Genet2007. 39: p.724 -726.

195. Scuteri A, Sanna S, Chen WM, et al. Genome-wide association scan shows genetic variants in the FTO gene are associated with obesity-related traits. PLoS Genet., 2007. 3: el 15.

196. Hinney A, Nguyen TT, Scherag A et al. Genome wide association? (GWA) study for early onset extreme obesity supports the roleoffat mass and obesity associated gene (FTO) variants. PloS ONE, 2007. 2: el361.

197. Chang YC, Liu PH, Lee WJ, et al. Common variation in the fat mass and obesity-associated (FTO) gene confers risk of obesity and modulates BMI in the Chinese population. Diabetes, 2008. 57: p.2245-2252

198. Marvelle AF, Lange LA, Qin L, et al. Association of FTO with obesityrelated traits in the Cebu Longitudinal Health and Nutrition Survey (CLHNS) Cohort. Diabetes, 2008. 57: p.1987-1991,

199. Hotta K, Nakata Y, Matsuo T, et al. Variations in the FTO gene are associated with severe obesity in the Japanese. J.Hum.Genet., 2008. 53: p.546 -553.

200. Cecil JE, Watt P, Palmer CN, Hetherington M. Energy balance and food intake: the role of PPARG gene polymorphisms. Physiol Behav, 2006; 88: p.227-223.

201. Beaven SW, Tontonoz P. Nuclear receptors in lipid metabolism: targeting the heart of dyslipidemia. Ann.Rev.Med., 2006. 57: p.3313-29.

202. Berger J., Moller D.E. The mechanisms of action ofPPARs. Ann.Rev.Med., 2002.53:409-35;

203. Rosen ED, Hsu CH, Wang X et all. C/EBPUinduces adipogenesis through PPARG unified pathway. Genes Dev., 2002. 16: p.22-26.

204. Yen CY, Beamer В A, Negri G. Molecular scanning of the human peroxisome proliferator activated receptor PPARG2 gene in diabetic Caucasians: identification of a Pro 12Ala PPARG2 missens mutation. Biochem Biophis Res Commun., 1997. 241: p.270-274.

205. Deeb SS, Fajas L, Nemoto M, et al. A Prol2Ala substitution in PPARy2 associated with decreased receptor activity, lower body mass index and improved insulin sensitivity. Nat. Genet., 1998. 20: p.284-287.

206. Masugi J, Tamori Y, Mori H et aL Inhibitory effect of a proline-to-alanine substitution at codon 12 of peroxisome proliferator activated receptor-y2 onthiazolidinedione-induced adipogenesis. Biochem. Biophys. Res. Commun., 2000. 268: p.178-182.

207. Lindi VI, Uusitupa MI, Lindstrom J, et al. Association of the Pro 12Ala polymorphism in the PPAR-y2 gene with 3-year incidence of type 2 diabetes and body weight change in the Finnish Diabetes Prevention Study. Diabetes 2002. 51:p.2581-2586.

208. Tonjes A, Stumvoll M. The role of the Pro 12Ala polymorphism in peroxisome proliferator-activated receptor у in diabetes risk. Curr. -Opin. Clin. Nutr. Metab. Care, 2007. 10: 410-414.

209. Stumvoll M, Haring H. The peroxisome proliferator— activated receptor-y2 Pro 12Ala polymorphism. Diabetes, 2002. 51: p.2341-2347.

210. Matthews et al. Homeostasis model assessment: insulin resistance and B-cell function from fasting plasma glucose and insulin concentrations • in man. Diabetologia, 1985. 28: p.412-9.

211. Le C.T. Introductory biostatistics. Hoboken, 2003. NJ.: Wiley- Interscience. xvi, 536 p.

212. Sham, P.C. and D. Curtis, Monte Carlo tests for associations between disease and alleles at highly polymorphic loci. Ann Hum Genet, 1995. 59(1): p. 97105.

213. Герасимов, A.H., Медицинская статистика : учебное пособие для студентов медицинских вузов. 2007, Москва: Мед. информ. агентство (МИА). 475 с.

214. Лукьянова, Е.А., Медицинская статистика : Учеб. пособие. 2. изд., испр. ed. 2003, М.: Изд-во Рос. ун-та дружбы народов. 245 с.

215. Медик, В.А. and М.С. Токмачев, Математическая статистика в медицине и биологии. 1998, Новгород. 242 с.

216. Реброва, О.Ю., Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ Statistica. 2002, М.: Изд-во Медиа Сфера. 305 с.

217. Salonen JT, Uimari Р, Aalto JM, et al. Type 2 diabetes whole-genome association study in four populations: the DiaGen consortium. American Journal of Human Genetics 2007. 81: p.338-345.

218. Freathy RM, Timpson NJ, Lawlor DA et al. Common variation in the FTO gene alters diabetes-related metabolic traits to the extent expected, given its effect on ВШ. Diabetes 2008. 57: p. 1419-1426.

219. Pearson ER, Donnelly LA, Kimber C, Whitley A et al. Variation in TCF7L2 influences therapeutic response to sulfonylureas: A GoDARTs study. Diabetes 2007. 56: p.2178-2182.

220. Lyssenko V, Lupi R, Marchetti P, Del Guerra S et al. Mechanisms by which common variants in the TCF7L2 gene increase risk of type 2 diabetes. The Journal of Clinical Investigation 2007. 117: p.2155-2163.

221. Scott LJ, Mohlke KL, Bonnycastle LL et al. A genome-wide association study of type 2 diabetes in Finns detects multiple susceptibility variants. Science 2007. 316: p.1341-1345.