Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Перекисное окисление липидов в структурно-функциональных нарушениях различных мембран при гипоксии и ишемии

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Перекисное окисление липидов в структурно-функциональных нарушениях различных мембран при гипоксии и ишемии"

1 .и

5 ^ ^'РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ОБЩЕЙ ПАТОЛОГИИ И ПАТОФИЗИОЛОГИИ

На правах рукописи

МАГОМЕДОВ НУРАДДИН МУСА оглы

ПЕРЕКИСНОЕ ОКИСЛЕНИЕ ЛИПИДОВ В СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ НАРУШЕНИЯХ РАЗЛИЧНЫХ МЕМБРАН ПРИ ГИПОКСИИ И ИШЕМИИ

03.00.13—физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва—1993

Работа выполнена в лаборатории биофизики рецепции Института физиологии им. А. И. Караева Академии Наук Азербайджанской Республики и в отделе атересклероза Института клинической кардиологии им. А. Л. Мясникова Научного центра кардиологии Российской Академии медицинских наук.

Научные консультанты—

доктор биологических наук, профессор, Лауреат Гос. премии Азерб. Республики А. И. Джафаров доктор биологических наук, профессор В. 3. Ланкин

Официальные оппоненты—

доктор биологических наук Н .А. Медведева академик Международной Академии информатизации и член корр. Академии косманавтики доктор медицинских наук, профессор Е. А. Коваленко доктор медицинских наук Е. В. Никушкин

Ведущее учреждение—Российский государственный Медицинский университет Минздрава Российской Федерации

^ /V п г

Защита диссертации состоится «./>•» ^у/) 1993 г. в часов на заседании Специализированного совета Д.

001.03.01 при Научно-исследовательском институте общей патологии и патофизиологии Российской АМН

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке.

Автореферат разослан «

1993 г.

Ученый секретарь Специализированного совета кандидат медицинских наук

Л. Н. Скуратовская

ОПЦАЯ XAFAiCTiiPHCTHKA РАБОТЫ

Актуальность-темы.- В последние году значительно возрос интерес к изучен.;» ■¡ызнхо-хи^лчеокого механизма повреждающего действия гипоксии л и-лемяп. Это арвзде всего связано с тем, что патогенез многих заболеваний человека является следствием возникновения в органах нарушения кислородного обеспечения, Всестаронеа лзучение этих вопросов позволили заключить, что в'физико-химическом механизме структурно-функциональных нарушений з тканях при .ииемии н гипоксии особое место занимает усиление интенсивности зервкисного окисления липвдов (ПОЛ), которое тагом является универсальным патогенетическим фактором при таких заболеваниях, как пучевое поражения, воспалительные процессы и т.д. (Бурлакоза, 1971; Владимиров, 1973; Ланкин и др., 1982; Меерсон, 1984; Би-пенко, 1988; irootor et al. ; 1984; Path et al. ,1984; Slater, 1986 и др.).

В Последние годы внимание исследователей направлено на те задачи проблемы, которые связаны с определением места локализации а физико-химических механизмов интенсификации ПОЛ, структурно-функциональных последствий накопления'радикальных интермедиатоа в клетке, путей регуляции этого процесса в различных мембранных образованиях и т.д.

Анализ современного состояния данного вопроса показывает, что несмотря на наличие многочисленных исследований, имеется ряд спорных и нерешенных вопросов. Наиболее важными из них являются изучение физико-химических механизмов интенсификации ПОЛ, определение роли ПОЛ в структурно-функциональных нарушениях, а также стабилизация биологических мембран действием различных биологически активных веществ при' ишемии и гипоксии. Для разрешения этой проблема необходимо выяснить следующие вопросы:

1. Сравнительное исследование структурно-функциональных нарушений сотчапш и зрительной области коры мозгам при действии различных форм гипоксии («токсической, гкпароксической, гиперкапни-

Ческой, влияние СО, С02» А?02 к нитрита натрия) и вмявяениз специфических механизмов их повреждающего действия;

2. Имеются лишь единичные данные р причинах нарушения функционального состояния изолированных органов, хотя кординаяьпый про« грес в трансплантологии во многом зависит именно от изученности этого вшроиа; •

3. Не до конца понятно участие отдельных клеточных органелл и их мембранных образований в пусковом механизме интенс;-пикании.

' ПОЛ при гипоксии и ишемии;

. 4. Остаются нерешенными вопроса физико-химических механизмов 'интенсификации ПОЛ в биологических мембранах при действии различных форм гипоксии и ишемии. В частности, не понятна роль моноами! оксидазной системы а интенсификации ПОЛ при ишемии;

5. Отсутствуют данные об изменении активности антиоксидантны: ферментов (AA¿), участвующих в регуляции свобободнорадикалшых (CP) процессов в различных органах (сердце, печень и мозг) при о трий шпоксии и адреналиновом некрозе миокарда;

6. Мало изучен физико-химкческий механизм защитного действии нейромедиаторов и меланина при вг.иянии стресс факторов, в том чл яз гипоксии и ишемии;

7. Не найдены элективные методы регуляции интенсивности ПОЛ и структурно-функциональных нарушений при действия гипоксия и ш мли. Детально не исследована взаимосвязь природных и синтетических антиоксидантов различной природы, что очень важно для профилактики и лечения гяпоксическлх и итемических повреждений ыепбра

- ' Цель и-задачи исследований. Для достижения поставленной цели необходимо было: • .

-исследовать взаимосвязь между накоплением продуктов ПОЛ и подавлением электрических ответов сетчатка глаза (электроретино-гра.'.:ма - ЭРГ) и отдельных областей «<ора мозга (вызванный потенщ ал - ВП) при действии различных форм гипоксии (гипоксической, п парокскческой, ганеркалнкческой, влияние СО,Н0¿ и нитрита натр;

~ определить возможность икгенаифлкацяя ПОЛ сетчатка при подавлении анаэробного и аэробного гликолиза;

- выявить роль отдельных клеточных органелл и их мембранных образований в накоплении продуктов ПОЛ при гипоксия и ишемии;

- изучить возможную причастность моноаминсксидазной системы в интенсификации ПОЛ при адреналиновом некрозе миокарда;

- выявить связь меаду интенсивностью CP состояний, активное' тью транспортных АТФаз и содержанием различных типов сульфгидри ных групп в отдельных областях мозга и их синаптосомальной и ж тохондриальиой фракциях при острой гипоксии;

- установить ьоз;лояное участие меланина и нейромедиаторов в регуляция CP процессов в различных органах пр:: гипоксии и пшеми

- исследовать изменения ААФ (супероксилдасмутаза - СОД, глу тайюнпероксидаза - ШО и глутатиои-трансХерзза ~ ITs) в се ¿иг, пзчеки а мозга при'гипоксии и адреналиновом некрозь;

- выявить наиболее эффективные методы стабилизации физико-химических и функциональных нарушений в изолированных и интактних органах"путем регуляции СР состонш.Л "при гипоксия и 1жмии.

Научная новизна. Впервые были получены следующие результаты:

- Показано, что все формы гипоксии (гипоксическая, гиперокси-чес1сап, гиперкашшческая, влияние СО, МО2 и нитрита натрия) вызывают подавление компонентов ЭРГ сетчатки глаза; и Щ зрительной и сенсомоторноИ коры мозга. Однако, перекисный механизм в структурно функциональных нарушениях имеет место только при действии ги-поксической и гипероксической гипоксиях; при'действии СО, С02.

л нит^та натрия функциональные нарушения обуславливается другими механизмами;

- Установлено усиление ПОЛ в сетчатка при подавления аэробного и анэробного гликолиза, вызванного введением в организм моно-йодуксусной кислоты, т.е. интенсификация ШЛ при гипоксии и ишемии осуществляется не только за счёт накопления восстановленных метаболитов в результате усиления гликолиза, как приняти считать, но за счет возникновения в клетке знергодефйцитного состояния, которое в результате глубоких .физико-химических 'и структурно-функциональных нарушен.:;*! способствует усилению интенсивности ПОЛ;

- Показано, что при острой гипоксии меланопротеиновые гранулы (!,Га) участвуют в регуляции интенсивности ПОЛ пигментного эпителия (Ю) глаза и, тем самым, предотвращают структурно-функциональные нарушения. Однако, в отличие от сильного освещения, при гипоксии антпрадикальные свойства меланина не могут захватывать другие слои сетчатки;

- Установлено, что селеновые соединения повышают антирадикальную активность МИГ ЛЗ при реоксигенаши, что осуществляется за счет усиления способности меланина аккумулировать активные радикальные пнтермедиатов а своей матрице в виде стабильных радикалов;

- шяв-.чно,, что как интенсивность ПОЛ, так и активность 1110 ь сетчатках различных позвоночных животных по. мере их эволюции су- . ществеш'.о уменьшается. Причем, чем выые класс позвоночных заводных, тем меньше чувствительность сетчатки к постдокаязтацяонной паеглил на фоне совещания;

- Обнаружено существенное иаколдение продуктов ¡ЮЛ а надкос-нице, кости и костном мозге при пере ламах трубчатых костей и в коже кролика при ауто- и гомопересадке. Динамика накопления продуктов ПОЛ при аутопересадке характеризуется одним максимумом, а при гомопересадке имеет два максимума. Усиление накопления про-

дуктов ПОЛ при поре поме костей и адтопересадке происходит за счет ишемии, а второй 'максимум при гомоперееадке за счет иммунной несовместимости донора и реципиента;

Обнаружено, что в иврскисном механизме поврезденая органов и тканей ври ишемии и пшокски наружная мембрана мигохоадршЧ принимает более активное участие, чем внутреняя. Введение антиокси-дантов как в организм, так и в модельные система, одновременно с подавлением ПОЛ, предотвращает лабилизашш лизосом, а введение ингибиторов фосфолипазы Акроме стабилизации лизосом, подавляет интенсивность 110Л, что свидетельствует о тесной взаимосвязи переписного и фос.ролипазного механизмов повреждения органов и тканей при гипоксии и ишемии; ".''■■"■■

- Получены экспериментальные данные о роли ¡шцоаминоксидазной системы в интенсификации ПОЛ при адреналиновом кекрозе, что осуществляется за счет чрезмерного усиления дезамикирования'моноаминов, способствующей накоплению в клетке активной формы кислорода-перекиси водорода;

- Показано значительное увеличение интенсивности ПОЛ в отдельных областях мозга (продолговатый мозг, мозжечок, зрительная и сенсомоторная кора) и их сйнаптоссмальной и митохондриальней фракциях при острой гапоксаи, что приводит к подавлению активности АТ\2азных ферментов и уменьшении содержания различных типов сульфгидрилькых групп. Предварительное введение, животным различных природных и синтетических антиоксидантов, подавляя накопление продуктов ПОЛ, способствует сохранению .структурно-функнаональ-ных свойств мезга;

- Установлено, что.защитный механизм нейромедиаторов при действии стрессфакторов, в том числе, гипоксии л'шпемж, не только связан с изменением функционального состоянии соответствующих центров мозга, но и элективным ингибирозаикем ПОЛ, которое выражается б предотвращении накопления продуктов ПОЛ я сохранении АА4 в отдельных органах к их клеточных структурах;

- Показано, что характер изменения АА*> (СОД, ГПО и ГГ^} в сердце, печени и мозга при гипоксии существенно' отличается: во-первых, степень изменения ААФ в мозгу по сравнении с сердцем и песенью несущественна, во-вторых, в отличие от двух других органов, острая глнсхсия в мозгу вызывает достоверное .увеличение активности ГПО и Ш>;

- Установлено уменьшение № при адреналиновом некрозе {/до-карда; по сравнению с ионолом и СОД более сильной антиокислитель-

н'ол активностью ооладает Ь - токоферол.

Теор-тпчсской" значение работы. В Представленной'работе впервые-----

исследованы упзлко-хцмические механизмы повреждающего действии различных форм гипоксии («токсической» ишероксичосксй, гааеркшши-ческой, влияние 00, ¿/О,, и нитрита натрия). Показано, что интенсификация 1ЮЛ ¡> мембрана/, и.леет 1/еото только при действии гииоксичес-кой и гдлероксиче^коя пшоксиях;" в остальных случаях наблюдаемые & пкшммаяисыи наружная обусловливются другими $43ико-хи№<чески~ IV. механизмами. Изучена последовательность .физико-химических нару-ялний я- биологических мембрянах ийх взаимосвязь со структурно-

сдвиг»«™. Установлен зш.*?ный'"шх£»я«1зм ноародидаа-' торов ь отдельных областях мозга'при действии острой гипоксии. Изучена эффективность отдельных природных и синтетических антиоксидан-тов и других стабилизаторов лкпидного компонента мембраны при действии ияеша.и гипоксии.

Практическая значимость результатов работы. Выявлена последовательность •уиэико-халйческлх и структурно-функциональных нарушений г.р:; действ:« из оргяшпи различных £орм гипоксии и ишемии. Уста-

н'И; аг-'^ь;'" '.и1: -1 гипоксии И ;к:а:ааат

ап.а, ала. Л/..» г;: илл ¡1С.'!, увеличение пктааасс:.!

а а аа, _лл:.аа^.ин аи л '.'.Д. Ьсе от;'. ;.::з:!;;о-:^:'".:ч-ас:с..;а

ана а лода>>/.л,;.:ь «.йл^'/зиид ^й-груял '■'- ан.мьлеетл ••ран-

с»:г>рг:;их А*, и, те и сссроиоадастся наруывиием функ.мСгЯапы:о;5 ак-тиьноил оргыша и ткало;!. Поэтому о*.-» данные иу-еют суцест^нвое праит/чйс-сос* злачии/.е как дли профилактики, «ак и дг,я разработки »{^зь-./.ыах методов /.-;чо}шя нря шшксичосках и ивегмческих оздей-ствипх, т.к. применение разумных антаоксидангаа и других стаоплп-зптог'о« пипиднпгп компонента мембраны предотвращает указан}ше фц-зиг. а;а;а;а л с г;гурно-Ьуякцзоиа лыше наруиешя ири гвкокока

Основные положения, выносимые на защиту;

- установление взаимосвязи иоздг 'фйзшиьхийи'геегшми и струк-ту^.а-.луплананзаиаал, лаауаоциама а мембранных образованных лай дцд.-.'ала на эргши&: различных форм шеакк а остра:'; гаиокз&:;

- валэзегсге г.5лз;тгз:.-от'кятсссгфйаща ПОЛ в отделы*« мембранных образованиях клеточках органедп при ниам.-ы и гкпоксий;

- установление физико-химического механизма зашги

аторов {серото'ннна, дофамина, норадренгйшна и ГАЖ) в отдельных областях мозга и их мембранных образованиях при действии острой

гипоксии;

- выявление возможности стабилизации липидного компонента мембраны влиянием различных антиоксидантов и друга биологически активных веществ при действии ишемии и гипоксии;

-.установление роли антноксидаитных ферментов (СОД, ШО и Ш) в отдельных органах в регуляции интенсивности ЛОЛ и возможность предотвращения усиления свободнорадикальных процессов и их физико-химических и структурно-функциональных последствии действием различных антиоксидантов,

. Апрбаиия работы.Материалы диссертации обсуадены на XI Научной сосни, посвященной итогам научно-,.сследовагсльских работ Ali Азерб. ССР за 1973 г, конференциях "Селен в биологии" (г.Баку, 1974, 1977 гг.), Всесоюзном симпозиуме "Свободнорадикачьног окисление аипидов в норме и патологии" (г.Москва, 1976 г.), Сессии "Электрон ный резонанс в физике, химии и биологии" (г.Тбплиси, 1977 г.). Юбилейной конференции А31Ш оф тальма л эгии (г.Баку, 1977 г.). ill конференции молодых физиологов Закавказья (г.Ереван, 1981 г.), I Всесоюзном биофизическом съезде (г.Москва, 1982 г.), II Всесоюзной конференции "Биоантиоксвдант" (г.Уосква, IS86 г.),'У! Всесоюзной школе "Мыщечная активность и яизнодеятелыгость организма" (г.Москва, 1986 г.), Всесоюзном симпозиум;; "¡.¡ех&низлш сенсорной рецепции" (г.Москва, 1967 г.),. Всесоюзном симпозиуме "Био>:е;.шм>-минесиениия в медицине и сельском хозяйстве" (г.Ташкент, 1986 г.), X Всесоюзной конференция по биохимии нервной системы (г.Горький, 1987 г.), ХУ съездз Всесоюзного общества км.И.П.Павлова (г.Клиин-еа, 1987 г.), III Всесоюзной конференции "Биоаптиоксидант" (г.Москва, 1939 г.), Всесоюзном симпозиуме "Реконструкция, стабилизация и репарация биологических мембран"' (г.Благовещенск, 1989 г.), Мзвдиароднсй конференции "Регуляция свободкорадихалышх реакций" (г.Варна, Больгария, 1989 г.).

Структура диссертации. Работа состоит из введения, 7 глав (материалы и методы исследовании, 5-глав результаты собственных исследований: роль ПОЛ в структурно-функциональных нарушениях сет> чатки глаза при гипоксии; особенность ПОЛ в различных органах и их клеточных оргакеллах при гипоксии и пиемии, роль ПОЛ в струк-турко-<функиаональнах нарушениях мозга при острой гипоксии, участие нейремедиатороз в регуляции свободнорадикальпых процессов при Х'ипоксии, обсуждение розу.пьтатов), практическая рекомендация, выводов й списка использованной литературы.

- у -

Диссертация содержит 326 страниц машинописного текста, илюс-трирована 6& рисунками-и 23 таблицами. Библиография вклпчает 429 наименований литературных источников, включал работы автору; из них 237 отечественных л 19- аиостршших.

М Й Т О Л К К А

Ii работе использовались органы и ткани различных позвоночных хлиоишх: саза.-ia, лягушки, черепахи,. голубя, крис, морской свинки, кролика, а также сетчатки крупного рогатого скота.

?я»-»лая степень гипоксии' создавалась двумя способами: путем ,!'\,!нп'.,о чр.««»!л»нин юрдухн азотом в рермътичиой камере в 'печение 16-18 :.шк и путем прокачивания через камеру газов, с предварительно заданны.» соотношением компонентов. Реоксигенация осуществлялась продувкой камеры воздухом или кислородом. Различные концентрации СО и iV0j> создавали непосредственным .добав-знием расчетного количества газа в камеру объемом 240 л. ЦитотоксическиЙ тип гипоксии создавали внутрпбрщиннкм введением нитрита натрия в Дозе 60-80 иг/кг к. в.

Изкиш ;кгчо!:и годшжшде лигатуры на сосудистую но;--

<v .".-.ч.;;;/. ь тлини. ?еокопгена,цпд осуществлялась ьсссга-

кт<,-а.л' ■>:::. ь .-счонни I часа. Дегенерацию сетчатки ыед'лже! .'.г-н-Ху-уксусно? кислоты (¡¿Ii/K) в укную вену кролика I ;:- ■'* " С-г-4 'л'/кг s.i» сипдешея различной тяжести зкеперк-:!i;H'U-j:..[! ,,! д« •«¡К'раЦЯГ. ОбУЧаТКИ ¡.id'k адорилаы. от I ДО 4 ра:» с Ui:';ep!4i;;i.M ь С-7

и iu.voitc:a.iw образу пересаживались в виде полвослейкого южно:»; л ic;'.;/Ta размер-.л,: 3x4 см. Перелом трубчатых костей кролика осуществлялся путем создания давления на вторую метаторзальную V. стз,.

'iu:t!..r. мп^лфкь -'а кргюахсалцах ьизыьали Енутртаышечги:; введением 0,1% солянокислого адреналина в дозе 0,2 мл/100 г ж.в. Для измерения зонн повреждения миокарда использовали реакцию в нитросипе.м тетразоли": на дегидрогеаазе о последущей. морфометрк-

м k.jüi. некроза.

«шотадм з\л/дил?сь сведущие антиоксиданты: колол в дозе СО' 100 чг/кр -.е.; пятгтг Е з "озз 100-300 мг/йр г..з.,фвйозак ка-лгл и ап;1<ен натрия в дозе 20 мг/кг м.ь. Eheothkc кеяепитирош-дись через I6-IS часов после введения отих соеданопИи» L-JiOwA в дозе 20,40 и 60 мг/кг к.в.,5-охситрип?офан (5—ОТ) в дозе 10 мг/кг

я. в. и натрий оксибутират ( Иа-ОБ) в доза 100 мг/кг ж.в. вводились за час до гипоксического воздействия. Из селенсодержащих веществ исползовались селенит натрия в дозе 0,1-1,5 мг/кг я.п., сепенсемикарбазид в дозе 4 мг/кг а.в. и хлоргидрат-1-фенилселе-но-4~фенил-4-гексаметиленимуиобутин-2.

Из различных органов и тканей выделялись митохоидриальныв и лизосомальные фракции, ядра, синаптосомы, меланопротеиновыс гранулы и др. субклеточные структуры.

Для регистрации ВП кроликов и крнс использовались хронически укрепленные электроды из ш¡-хромовой проволоки 0,3 мм. Установка и погружение электродов в срительную область осуществлялась в соответствии с координата:.« стереотаксического атласа. Регистрация электрических потенциалов сетчатки и мозга осуществлялась на катодном осциллографе CI-69 через усилители биопо- ' текциалов. Лля регистрации ЭРГ изолированной сетчатки лягушки и морских свинок использовали соответствующие растворы Ринге-ра для теплокровных и холоднокровных животных.

Об интенсивности ПОЛ судили по изменению хемалюминесценции (ХЛ) и продуктов ПОЛ (диеновых конъюгатов, гидроперекисей (ПЦ и малонового диальдегида (ЬША)). Изучение ЭПР поглощения ПЗ и его (ШГ осуществлялось на серийнем радиоспектрометре РЬ-1301 и усовершенственном варианте ЭПР-2,И ffiOi АН СССР, позволяющем регистрировать спектр ЭПР в водосодержащих образцах. ¡/икровол-новая фотопроводимость (ШП) в сетчатке и ПЭ глаза осуществлялась при частотах порядка Ю*°Гц, что позволяет устранить влияние,-гетерогенности биологической система.

Изменение тиолового обмена исследовалось определением содержания певерхностнорасположенных $I¡-групп,(IIP £П-групп), структурно-замаскированных белковых ¿'Н-групп (СЗБ 6'Н-групп) и глутатиона.

Для решения различных задач были определены активности /Vq—К - а ш i ~АТ*>азы, моноашнокевдазы (МАО), сукцияатдегадро-геназы (СДГ), кислой фосфогазы, суиероксщщисмутаза (СОД), глу-татионперокевдазы (ГПО), глугатион-^-трансфсразы (ГК>) и т.д.

Определение содержания МЖ осуществлялось путем электрофореза на бумаге, а дофамина (ДА), иорадренадкяа (НА) и серо-тоноаа (СГ) универсальным флюриметричесюм методом. -

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

I. Роль ПОЛ в структурно-функциональных нарушениях

сетчатки глаза при гипоксия.

Важнейшими показателя!,и функции и хизнедетельности клеток сетчатки и мозга является их биоэлектрическая активность Поэтому для изучения структурно-функциональных нарушений сетчатки и мозга попользуются различные способы регистрации биопотенциалов. Однако, большинство злектрсфизлологических исследований по данное вопросу связана с изучением влияния гипоксии на постоянный потенциал, световой пик и с-волну ЭРГ, скорее о*раяая«и* нарушение метаболизма в дистальных слоях сетчатки и недостаточно характеризующих работоспособность органа зрения. Вместе с там, а.опытах по одновременной регистрации ЭРГ и ВП зрительной коры была показана четкая корреляция мсяду ыядггудоЗ в-йо;пш' ЗРГ и *ВП,.'с одной стороны, и нарушением поведенческих актов, свидетельствующих об ухудшении зрения подопытных животных - с другой. Поэтому считается, что для выявления патофизиологических изменений в отдельных органах зрительной системы человека в современной клинике необходимо включение в комплекс диагностических приемов электрофизиологических методов. Учитывая это, нами была поставлена задача по изучению электрофизиологических ответов сетчатки и Ш зритеаьнсй обаасти корм мо»гн кролика при действии па организм различных форм гпиг.к-

¡Цлйизакяв лпвотных в сред« с пониженным содержанием каспорода ;;; :¡>s шикздгс достоверных изменений в параметрах yPf сетчатки и ь.1 зрительной области кори. Зтотфакт позволяет предположить, что структурно-й'нкшюнальные нарушения з сенсорных и це,-»-тралыкН об ластах мозга имеют при понижении концентрации кислорода ниже 8"'. Быстрое снижение концентрации кислорода до 5% шочза-ло существенное изг.-енение всех компонентов исследуемых нами отье-тов сетчатки и мозга. Через 10 мин после пребывания животных при дате? кэ::2т:тра1Ш кислорода наблюдалось частичное подавление а-волни ¿Pi', которая в течение 30 мин не изменялась. Однако, ото снижение было временным и через 60 мин ответ возвращался к контрольному уровню, что,по-видимому, связано с авторегуляторными процессами. Дальнейшее увеличение времени экспозиции до SO мин зизаваго cyuiot? конное подавление как á-волны, таки в-волны ЭРГ.

Подашншш амплитуды первичного ответа BII зрительной кори при указанных условиях гипоксии носило более существенный характер я через 6(! мин после экспозиции он почги полностью исчез. Сразу после рсоксагеяаши наблюдалось полное восстановлена ш-литуды в-волны и ВП. Однако, если в сетчатке это изменение пропс-

ходило через 5-10 или, то в мозгу через 30 или; за это время восстановление амплитуды а-волны носило несущественны;: характер. 'Дальнейшая рсогссигенаиад кивотных вызывала повторное подавление амплитуды ЭРГ и Ш. Причем кислородный "парадокс" пил более существенный характер в зрительной коры, чем в сетчатке. Скорости восстановления компонентов ЭРГ и Ifl при реоксигенации резко отличались: если ЭРГ возвращалась к контрольному уровни через I а после реоксигенации, то ИП лиаь через 28-30 часов. Это различие свидетельствует о болев высоко;' чувствительности ШС к гипоксии.

Предварительное введение з^;бот:ш;> об -токоаерола к ионола в значительной степени преотвращало подавление компонентов ЭРГ сетчатки и BIT зрительной области кору, как при гипоксии, так и последующей реоксигенации. Ути ракты даыт основание предположить, что интенсификация ПОД монет играть с.ущоственнуп роль в структурно-функциональных нарушениях сетчатки и мозга при действии острой гипоксии.

Зияние других форм гипоксии (СО, С02, NOo и нитрита натрия) .такзе вызывает подавление электрических отвзтоп сетчатки и мозга. Однако, в отличие от гипокспческоЛ гипоксии, при действий этих форм гипоксии существенных' кзменегмй в а-вэлне ЭРГ не наблюдалось. Это интересный факт свяде.теяьсгйуег о том,. что действие СО, С02, NOg и нитрита натрия вызывает структурно-функциональные нарушения преимущественно в нейрональкых слоях сетчатки, а не в фотороцелторных. С Другой сторо;ш, в отличие от гипоксической гипоксии при действии этих факторов усугубление структурно-фуик-циональных нарушений при реоксигенации не наблюдалось и с uo.v.ch-'та подачи кислорода качалось восстановление электрических ответов как в сетчатке, так и мозге.

Известно, что система активного транспорта ионов принимает участке в формировании электрических ответов. Поэтому можно предположить, что подавление компонентов ЭРГ сетчатки и Ш зрительной области коры при гипоксии связано с нарушением АТ«>азных систем. В связи с этим нами исследованы изменения активности f/а.К-АТ^азы сетчатки и ПЭ глаза при острой гипоксической гипоксии. Действие острой гипоксии в обоих исследуемых нами структурах приводило к подавлении активности ?м>азы. Однако, в ИЗ ингибирование активности фермента.при гипоксии обнаружено более чем в 3 раза (у отдельных кивоткых наблюдалось полное по-дазяенг.е активности фермента), в сетчатке подавление активности N а,К-АТ¿азы составило 18*5.

- 13л настоял си цс:-« лшсотени шшгочяелсиныо данные ой усален;«: 5 ду.^тгп«;. гллокти; к лад-дли поело рссксигеиацлн, что, " -алалла лу, льмлала с ¡лее существенной аятенса&лкацаей НОЛ. •'•!..•.•:<••.!.! нала: исследовано взмено.чао актазностл А1'*>азы в отдельных тканях сетчатки морских срикоя после рготссхго-лаилл. Усгацгалоно, чго в сетчатке реокенгенация усугубляет пола:'.:: ,.:•.• {.'Однако, в ¡¡3 этот не ...а. .. :ла: а:л. ла-л.а.и\:о:лу, связано' со структур.ш-аункцаональ-а .• : :■:.: ,.<а:а: .а .., ... ткани.

Предваратзльное введение животным витамина Е почти полностью ""Дллла::;;; ь евхчахчш, н и

"'' ...........прс-юааяа коатроаышн уроьонъ. Сравнительны;; анализ полученных результатов по изменению актишости IIа|К-АТ.'ааа и эжаагричаских ответов сетчатки позволяет предположить, что одной из причин подавления компонентов с)РГ сетчатки при гипоксии является нарушение работы ^а,К-насоса.

Как известно, длительная гипоксия или ишемия органов приводит к усиления гликолиза, что способствует накоплению в клетке восстановленных метаболитов (АД^,'НАД№, металлы перрменний ва->ч..•••.•• гл. -м-.- алла ала л т.д.), которое я наявуся либо субатра-л-.а... а-а 1 ала ;а:а,„аа.:а ироиесса ПОЛ. Иоэтсиу »о аредлада-.. • -)ааа л.л,а; нарушения в формировании бкжо'.чгниаа--л:т, лал де^а'-ла различных форм гипоксии валяются ро~ •• . аа лллалллаллаалл ИОЛ. Учитывая это, мы поставил]! парад •' Л.а: л .да л. аа . ал аашш накоплен.« дийновух кешогаю» и « ал.; :.-л: .х.:ьсгныХ лай. действии различных форм гипоксии,

кмых-анпл, что лошшшае в среде с ода ржания кислород:: ,аа ъИ аи анзааало ^з.-ддхюя продуктов КОД а сетчатке. Однако, выдергивание животных в среде, содержащей 5$ кислорода в течение ■.»л •. ала, а:лаа :•: ^лаалаша в сетчатке ¡1 113 как диеновых коиъл-ааал,.), ала: а. а.':',. что подавление компонентов ЭРГ сет-

чатки также присходило при аналогичных условиях действия гипокси-ческой гипоксии, можно подтвердить взаимосвязи между функциональными и физико-химическими свойствами сетчатки при гипоксии. Пос-лодуа:'•:: р.. алааалшил,. а течение 20 мин способствовала более су-■Ласлаалл'лл;:,' у велич'анил накопления продуктов ПОЛ. Рескслгшшия ь та*:?:;::-" 1,С-2 ч приводила к возвращении содержания диеновых кснъ-¡огаюв и ,улд. ¡¡¡лдаарааельное введение животным витамина ;.] а помола полностью.предотвращало увеличение продуктов ПОЛ как при гипоксии, так и при рооксигенации.

Нормобарическая пшероксия также приводила к значительному накоплению продуктов ПОЛ в сетчатке: через 4 ч после начала ги~ пероксического действия наблюдалась тенденция к увеличению продуктов -ПОЛ, а через 8-10 ч достоверное увеличение. Б этих опытах также предварительное введение животным витамина Е значительной степени оказывало стабилизирующий эффект на липидный компонент мембран сетчатки. В отличие от гипоксической- к гипсроксической гипоксий достоверного накопления продуктов ПОЛ в сетчатке при дег сгвки других форм гипоксии (гплеркапническач, влияние СО, и нитрита натрия) не наблюдалось, что 1-озволяет предположить о причастности перекисного механизма я с тру ктурно-функци опальных нарушениях только при гипоксической и пгаерок.сическои гипоксиях.

Как нами было отмечено, интенсификация НОЛ при гипсксии и ишемии объясняется накоплением в клетке восстановленных метаболитов, которые создают условия для протекания СР процессов. Однако при таком подходе не учитывается роль такого не менее ваглого фактора, как создание в клетке энергодефицг.тного состояния, кото рре может привести к нарушению фактически всех основных метабола ческих процессов, включая синтез различных метаболитов антиокси-дантного действия. Поэтому'можно предположить, что в усилении ин тенсификацпи ПОЛ при гипоксии и ишемии наряду с накоплением восстановленных метаболитов, которые являются продуктами чрезмерног усиления гликолиза, существенную роль может играть создавшееся £ клетке знергедз^пццткое состояние. Для решения зтоп задачи необходимо было создать энергодефпцитное состояние путем подавления как аэробного, так к анаэробного гликолиза, что способствовало с ке увеличению, наблюдающегося при гипоксии и ишемии, а наоборот, уменьшению в клетке восстановленных метаболитов. С этой чел и» нг было использовано внутривенное введение шноиодуксусной кислоты (МЛУК), которая путем подавления обоих типов гликолиза, вызывает дегенеративные изменения в сетчатке. Следует отметить, что тако( повреждение сетчатки считается веема перспективной моделью для изучения механизма патогенеза дистрофических заболеваний чолсво: Поэтому поставленная задача с одной стороны могг.ст помочь более глубокому пониманию причины интенсификации ПОЛ при гипоксии и и мни, с-другой стороны, определению роли перекисни/ продуктов в дегенеративных заболеваниях сетчатки.

Опыте! показали, что введение ЫЛ'К приводит к интенсификации ПОЛ в сетчатке, и этот просес подвергается ан-нокеидаптной стаб ллзашга. Поэтому могло продполокить, что накопление продуктов I; ;:г.и дегоноравии евтчатем ,газ/1»г-л;ой этиологии кокзх сыграть сувд

тьенную роль в ризико-химических и структурно-доикционалышх нарушениях, а включение комплексной терапии антиоксидантов может способствовать более элективному лечению пигментной дегенерации сетчатки. Что касается усиления.интенсивности ПОЛ. то она мокет иметь место как при усилиям, так и при подавлении гликолиза.

Как нами било показано выше, если в сетчатке меланинсодержа-щих животных реоксигенация усугубляет подавление активности

а.К-АТ.-ази, то в Г1Э сразу после ре.оксигенацяи активность {ер-мента значительно восстанавливается. Полученные данные по накоплению продуктов ПОЛ сразу после реоксигенации, свидетелствуют о том, что изменен*« активности Лн,1{-Х£*ааи а сетчатке и ПО кела-нинсодеряащих животных отрицательно коррелирует с изменением интенсивности ПОЛ. По-видимому, ускорение нормализации СР процессов, сопровождающихся более сильной защитой структурно-функциональной активности (в данном случае рктивнооти //а.К-АГ^азы) в меланинеодерхащих ПЭ при реоксигенации связано с наличием меланина, являющегося "перехватчиком" радикальных интермедиатов, что мохет привести к изменению ЭПР поглощения ПЭ. Учитывая это, наки были исследоьаны ЭПР поглощения ПЭ при гипоксии я реоксигенации.

Острая гипоксия вызывала увеличение интенсивности ЭПР иоглашения на 31л. Однако, ^орма и другие параметры сигнала при этом не изменялись. 20-и минутная реоксигенация вызывала незначительное подавление интенсивности ЭПР сигнала. Введение в организм витамина К, конола и ^еиозана калия в разной степени предотвращало пошл-ение интенсивности ПОЛ сетчатки и ПЭ как при гипоксии, так и при реоксигенации. Однако, ЭПР поглощение ПЭ под действием этих антиоксидантов не изменилось. Только введение животным селенита натрия вызывало изменение интенсивности как переписных радикалов, так и стабильных радикалов меланина. При этом ЭПР поглощение ПЭ посяе гипоксии на фоне действия селенита натрия увеличивалось более 2,5 раза и всего 20-и минутная реоксигенация способствовала уменьшению концентрации стабильных радикалов меланина ПЭ до контрольного уровня. По-видимому, увеличение ЭПР поглощения ПЭ при гипоксии является 'результатом локализации реакционносиособных радикалов в матрице меланина, которые за короткое врем реоксигенации исчезают.

2. Особенность изменения ПОЛ в различных органах и их клеточных органеллах при гипоксии и ишемии.

Трансплантология считается одним из актуальных я быстро-

развивавшихся напревший современной медицины, дальнейший прогресс з этой области науки прежде всего зависит от реиения проблемы противошемпческсй защити трансплантата. Это связано стем, что шемическое состояние трансплантата создает опасность возникновения и поддержания энергодефинитного состояния в пересаженных органах на всех этапах операции. Оно действует на орган в процессе умирания, на этапах его изъятия из трупа, консервации и трале-партировки, в период трансплантации реципиенту, а таете в процессе криза отторжения. Поэтому при пересадке тканей стойкий клинический эффект - истинное приживление гомотрансилантатоа наблюдается лишь при сохранении ими жизнеспособности. У тканях, лишенных кровообращения, а также в изолированных тканях вне организма, создаются условия для интенсификации ПОЛ, которые может привести резкому подавлению функциональной активности изолированных тканей, что свидетельствуют о важ-юй роли интенсивности НОЛ в жзноспособиости организма. Учитывая это, нами было исследовано изменение интенсивности ПОЛ в трансплантате и тканях реципиента в различные сроки ауто- и гсмопересадки в надкостнице, кости и костном мозге при экспериментальных переломах длинных трубчатых костей.

Установлено, что после пересадки в трансплантате и в исследуемых участках кояи реципиента интенсивность ПОЛ подвергается существенным изменениям. Через день после пересадки в аутогрансп-лантатах интенсивность ХЛ начинает увеличиваться, что прэдолда-ется в течение 5 дней, но с 6-го дня пересадки после восстановления связи трансплантата с тканью реципиента, Интенсивность ХЛ в образцах аутотрансплантатов плавно уменьшаясь через 21 день опыта, установливается на урозне, присущем интактной кояе (120 имп/10 сек). Для К'ДЛ аутотрансплантатов при пересадке характерна такая ке закономерность, как и для ХЛ - заметное увеличение его содержания в первые 5 дней после пересадки. Содержание ЦДА до 18-го дня уменьшаете.-), затем устанавливается на постоянном уронив.

После аутогересадки изменения в интенсивности ПОЛ происходили такке в коже, прилегающей к трансплантату. Так, с 3-5-го дня после пересадки в образцах кожи, прилегающей к аутотралеллантату, довыаазтея интенсивность ХЛ и содерканпе ЦДЛ. Увеличение интенсивности ЮЛ в кожа реципиента продолжает нарастать дс 12-14-го дня пересадки; после указанного срока показатели ПОЛ ксж реципиента, крилогаюкей к трансплантату, постепенно возвращаются к исходным величинам. При аутопереичцке а крови таку.о наблюдается

изменение содержания .\и1Л. В крови кроликов с аутопересадкой содержание МДА; уменьшаясь с 3-го дня опыта к 9-му дню пересадки, - -----устапо:»л;:ваотса 1в нормы. Только поело 20-го дня пересадки содержании иЦи в кроьп восстанавливается до контрольного уровня.

Килетика иатаисиыюстл ХЛ У гомсграноплантата в перпзо 9 дней пересадил подобна топ, которая наблюдается у аутотраасилан-татсп - увеличение интенсивности ХЛ в трансплантате в первые 5 дней, з-сгом ¡юболшое уменьшение ее до. 9-го дня пересадки. Однако в отличие от аутопересадки у гомотрансплаитатоа с 3~гэ дня . опыта интенсивность ХЛ непрерывно нарастает, и через 18-21 день после перс садки достигает второго максимума, при котором интенсивность ее повышает в 4 раза исходную величину.

Посе достижения максимума интенсивность ХЛ заметно снижается, что, по-видимому, обусловлено истощением субстрата фосфоли-пидов в трансплантатах. Ь изменении содержания МДА в гомотранс-плантатах отмочена та же закономерность, что и для ХЛ. При гомо-верзсадке в коне реципиента, прилегающей к трансплантату, и в крови в отличие от аутопересадки, начиная с 3-го дня опыта, наб-"с-пр-равное возрастание интенсивности ХЛ' и содогжгикп , ■■ Г-гс для они'^, после чего интенсивность ПОЛ в указанных ..ланях л;лл,ллгл ¡одаилнется,

."лталинле релит-.-нт». -токо^ролом заметно снимало лнлл;» .■плпервого мак.-.'.м.ума ПОЛ как у ауто-, так и гомотрансн-лг..:• I. Сдкско аьедекие аиткоксидаата существенно не лллъ-.о ии -■::■■• л;; :.:с ггорогэ -"..кеимума СОЛ у гсмотранстантата,,'" Ззедзкяс

Л-лллленлу нммуно^апрессанта (предяйзалой каьтлзон), не изъяны.. гллсоту первого максимума ПОЛ заметно снияалс высоту второго максимума, смещая его в более поздние сроки опыта. Эти факты М ¡.: оснсланп! полагать, что резкое усиление интенсивности "ОЛ л.'. >.;• :точсантп у гомотранепдантата обусловлено иммунологическим повреждением. Учитывая регуляцию ПОЛ антиоксиданташ в первые 5 дней опыта, а также ослабление ПОЛ в трансплантате после установления морфологического контакта с тканью реципиента, мож£о сказать, что нораий максимум ПОЛ связан с нарушением метаболизма яр.: :;ерехи;;ании трансплантата в ил омических условиях л 'ранние срок* пересадки, в результате которого быстро расходуются ащогогшые алтиокелданты.

Таким образе:.';, анализ долучешшх окспернме:-;?адыых данных показывает, что изменение интенсивности ПОЛ, характеризующее уровень СР процессов в трансплантате, тканях реципиента, приле-

гающих к трансплантату, и крови реципиента зависит от вида пересадки и коррелирует с функциональным состоянием трансплантата на всех стадиях приживления. Применение при этом антиоксидантоа (при гомо-пересадке совместно с иммунодепрессантами) способствует более быстрому прикивленшэ органов, что дает экспеиментальн.ую предпосылку для внедрений их в трансплантологии.

Установлено, что перелом трубчатых костей приводит к разрыву сосудов, образованию гемотомы с последующи разложением эритроцитов на месте перелома, и тем самым - созданию космического состояния, что может способствовать ^усилению СР реакций. Поэтому нами была поставлена задача по изучению динамики изменения интенсивности ПОЛ в надкостнице, кости и костном мозге кролика при экспери.мен-тальних переломах трубчатых костей.

Опыты показали, что динамика накопления продуктов НОЛ в указанных тканях носит почти одинаковый характер: уровень ГГ1 и !ДЛД через 5-15 дней после перелома достигает максимального уровня, затем укапывается к, вновь увеличиваясь, достигает 2-го максимума в .надкостнице через 35, а в кости - через 45 дней после перелома. По-видимому, создание в организме ишемического состояния в результате травмы, приводит к нарушению регуляции функции тканей, рас-тройству метаболизма, обуславливает нарушение ¿баланса про- и ал-тиоксидантных систем и» тем самым - инициацию и продолжение ПОЛ, которое является одним на основных деструктивных факторов. Поэтому для повышения эффективности лечения при переломах костей требуется включение в терапевтический комплекс также и антпоксиданто .■ Определение продуктов ПОЛ в отдельных органеллах при действии различных экстремальных факторов является актуальным вопросим. Та кой подход, с одной стороны, позволяет выявить чувствительность разных органелл к конкретному воздействию, с другой стороны, определить причастность каждого компонента клеток к обнаруженному эффекту.

Одеты показали, что у контрольных животных интенсивность 71 в различных органеллах существенно отличается, более высокая ХЯ обнаруживается в микросоыальной фракции. Однако, после ^-минутной ишемии с последующей ролефузизй более сильное увеличение ХЛ наблюдается в митохондриаг.ькой фракции, хотя усиление ХД при пас-ми.: носит универсальный характер для всех изученных--клеточных ор гаиедл. По срвнению с теплел увеличение ХД в органеллах при вне тканевой гипоксии носит менее выраженный характер. Однако б этом случае степень увеличения ХЛ в матихоздрий также более заметна,

чем вдругих органе ллах. При инкубации клеточных органелл, при- несших, ишемию, содержание, Г11 и ЬЩА у митохондрий достигает максимума за I чао, ,у микрисом и ядер за 2, а у лизасом - за 1,6 ч.

Представляло интерес выяснить, могут ли продукты ПОЛ, локализованные в ми70хо;щрпальных мембранах захватывать лизасомц и шаивать лабваазацию их мембран. С этой целью была проведена совместная инкубации фракций митохондрий и лизасом. О степени г.нб',: i;::>fiu;;:i мйрян ми ос ом судили до изменению активности клс-

егааы л никьат-ил» ОДА в мембранах лизосом. Эт.! опыта показали, что активация ПОЛ после ишемии митохондрий при контак-1-й р «ичпсимяии иГЫиишИ' К ДОСГОВОрНС»ч УС¡1&C11ÍZ) ПОЛ Z ЦИИ ЛНЗОСОмаЛЬНЫХ МеМОХ'йН. Учитывая, что ИИТОХОЩЦШ состоит по наружных и внутренних мембран, для более подробного изучения причин изменения интенсивности ПОЛ в митохондриях мы изучали развитие CP процессов в мембранах митохондрий при ишемии и гипоксии

Содержание ЫДЛ в наружной мембране митохондрий значительно больше, чем во внутренней мембране. После ишемии интенсивность ПОЛ в мптохсндриалышх мембранах заметно усиливается. При этом . >)-.... к ¡,;.¡v„a;i¿i:nñ *ЛИА в наружной мембране визе, чем во внут-

: ■ . .. ; ■ .у-рапно.: с Г ру ей»

скорости накоплении мМ при введении а среду пшсубацн;: патпЗпго-.поллминчц д„ саилптельствуйт о возможном участие-этого фер-

i • - о; :•< наружных мембранах митохондрии, neponcí.-

гап/.ч^скиго coewutemm селена приводит к подавлению ПОЛ в обоих в:!"'-:: .»v.,)■',:< меы'рчк.

Foroo скорость ПОЛ и панее постижение ого максималь—

13ii,y ipcnrij-iuia лап iijjii 'ГШ. И iíp« — -О Т_: J.l '. ■ -' .;

, ;":.';'Л!Н цругих oic;;>:j,íí; при их из

и^уцул оояь парусных мс-уорак митохондрии ■ ; :::/jki--вом механизме- перекисиого повреждения клеток при ишемии и гипоксии.

Анализ имеющихся литературных данных по изучению повреждения миокарда показывает, что одним из путей интенсификация ПОЛ является избыток катехоламлнов и продуктов их неполного окисления при ишемии (Иеерсон, 1984). функциональные особенности и физико-химические свойства структурных компонентов наружной мембраны ипохондрий позволяет предположить непосредственное или косвенное участие в интенсификации ПОЛ сердца при кшемическом повреждении фермента МО. Это предположение диктуется еще тем, что окисление аминох'руппы с участием МАО сопровождается образованием перекиси водорода. Исходя-из приведенного анализа, нами била поставлена задача по исследованию возможной взаимосвязи между интенсивностью ПОЛ к активностью МАО в митохондриальной фракциях миокарда при экспериментальном некроза, вызванном введением солянокислого адреналина.

Опыты показали, что через 2 ч после введения в организм адреналина как активность МАО, так и содержание ЦДА в миокарде существенно увеличивается. Реет активности фермента и содержание [\1ДА в течение 24 ч после введения адреналина продолжается. Однако через неделю оба показателя восстановливаются до контрольного .уровня. Причем введение антиоксидантов (витамина Е и ионола) эффективно подавляет как усиление интенсивности ПСЛ,- так и активности МАО. В дальнейшем было исследовано изменение активности ¡.'АО в наружных мембранах ипохондрий шокарда и ее роль, в накоплении продуктов ПОЛ в наружных и внутренних мембранах митохондрий при экспериментальном некрозе сердца, В отличие от митохондрии, в данном случае, через 24 ч после воздействия обнаруживается существенное подавление активности фермента, что является результатом солюбп-яизаши из структуры наружной мембрана фермента. Предварительное введение животным витамина Е и ионола до инъекции адреналина в значительной степени предотвращает указанные флзико-химическио л структурные наруаенля.

Таким образом, полученные данные показывают возможность интенсификации ПОЛ при кыемическом повреждении миокарда в результате усиления дезаминлрованля моноашков с участие;,! .'¿АО.

3. Роль ПОЛ в структурно-функциональных нарушениях мозга при острой гипоксии.

Анализ илеюдлхся литературных данных показывает, что интенсификация ПОЛ при острой гйпоксци ыоаат играть опрздоаяшую роль в струкгурно-^ункшюнаньиых нарушениях нервных клеток. Поотэ;.:у цель

наших исследований являлось изучение интенсификации ПОЛ и ого некоторых метаболических"последствий' в"отдельных"областях мозга '----

(сеасомоторная и зрительная кора, мозжечок и продолговата/ мозг, и их синалтосомальной и митохондриальной фракциях в механизме структур»о~рункци опальных нарушений, а также путей антисксидштной регуляции этих процессов при острой гипоксии.

Опыты показали, что у крыс подвергавшихся злиякию гипоксии при 5л-не,: кинпетраши кислорода уже на 30-ой минуте опыта происходит заметное уменьшение амплитуды ВН.В дальнейшем тенденции к сжиенил «»«¡в более усиливается и на 90-ой минуте после гилокся-ческого воздействия ответы почти полностью подавляются. Реокск-генация в точение 5-10 мин вызывает частичное восстановление электрических ответов, но этот процесс носит временный характер и сменяется более сильным подавлением амплитудных параметров ВП. Полное восстановление ВП достигается лишь через 26-2В часов.

Предварительное введение животным витамина Е и ионола с одной стороны, способствует значительному уменьшению угнетения амплитуды Ш при гипоксии, с другой стороны,- в отличие от-контрольных жйбзп:ых всего 4 ч реоксигенации достаточно для косегаггсвле-ник эллга до исходного уровня.

Острал гипоксия зазывает существенное увеличение ;;рздуктов ИОЛ (III :: :<иЛ) зо всех исследуемых нами структурах мозга. ко более заветное ?л>елпчснпе продуктов ПОЛ наблюдается в иродм :ге-зато« моа.'-; и сенссмоторной коре* В отличие от гипоксии, лр;: рс-мелгекац;-;:; вз зсех иссзидуомах структурах мозга обнаруннгаегсч y:,;e:i:,.je:;He содержания Л1, что, по-пидимому, связано с лреврац.:---яива П1 л другие продукта ДОЯ. Поэтому при рчокелгенада» зо s.-'-y структурах мозга наблюдается значительное увеличение ЭДДА.

в снмаптосо;.-.ал1-но":, так ;; мптохочдрнг.лыгей фракциях да?!*? r.f:-. ¡иге:;: ли ьаблклается существенное увеличение накопления продуктов ПОЛ. Однако, в отличие от целой структуры ь.спнаптоос;,.^.. :: митохондриях интенсификация ПОЛ при гипоксии была более существенна. Реоксих-енация на фоне гипоксии значительных изменений в hii'rskcnПОЛ вызывает. Ото, 1го-г-:*д::;гог.;у, сряззио г те.", ■;:э Mcv'jv прсизссе выделения контактируют с кксаорэдг-/,

способствует дальнейцо^ .усугублению■окислительных ароце-.^^.

jvc.-,'рс;е;;ь l>Jik г:ри реоксягикьси сохраняется ■:'...

■1-11-, чассп со исследуемых ка.мп областях мо-и'-:. после гипоксичсского воздействия наблюдается существенный с под з накоплен:-::: i/JjA» но все яе только к 2S-28 часу после качала рсо:>

сигонашп количество МДА снижается до контрольного уровня. Причем постгппоксические сдвиги в содержании продуктов ПОЛ, в ранних образованиях мозга, за некоторыми малозначительными исключениями носит однотипный характер. Предварительное введение животным витамина К, ионола, фенозана калия и анфена натрия в значительной степени предотвращает интенсификацию ПОЛ как в структурах мозга, так и их еинаптосомальной и митохондриальной фракциях.

Полученные данные свидетельствуют, что острая гипоксия приводит к усилению интенсивности ПОЛ как в отдельных областях мозга, так и в 1« еинаптосомальной и млтохондриальной фракциях, что может быть одной из причин структурно-функциональных нарушения нервной системы при ишемий и гипоксии.

Одним из центральных звеньев в начальном этапе патогенетической цепе повреждающего действия гипоксии и ишемии являете« дефицит АТч>, который приводит к нарушению работы катионных насосов и их транспортных систем. Учитывая существенное накопление продуктов ПОЛ при гипоксии, а также высокую чувствительность к радикальным продуктам ПОЛ-транспортных АТ^аз, мозно предположить» что нарушение работы катионных насосов при гипоксии является результатом не только дефицита макроэргов, но и интенсификации НОЛ. В связи с этим, мы решили изучить активность А/ а,К- и ¡Лд—АТ'.-аз в различных областях мозга и их еинаптосомальной и митохопдриальной Фракциях при острой гипоксии и реоксигенании.

действие острой гипоксии во всех исследуемых нами структурах мозга (продолговатый мозг, мозжечок, зрительная и сенсомоторная кора) приводило к подавлению активности как N а,К- так и ¡.¡у-АТ^-азы. Ресксигенация после' острой гипоксии усугубила подавление активности транспортных АТ^аз. По всей вероятности, подавление активности трзнсортных АТФаз при гипоксии и усиление этого процесса при реоксигенации связано с интенсификацией ПОЛ, продукты которых способствуют повреждению ферментных комплексов. Для экспериментальной проверки этого .предположения нами была проведена серия опытов по определению действия гипоксии.на активность АТ^азных ферментов при предварительном введении животным ингибиторов ПОЛвитамина Е, ионола, амфена натрия и фенозана калил. Полученные данные показали, что предварительное введение животным антиоксидап-тов как на фоне гипоксии* так и реоксигенации значительно (в отдельных областях мозга - полностью) предотвращает подавление активности транспортных, АТФаз.

Удельная активность изученных ферментов' в синаптосомах и ми-

-тохондриях-значительно выше,-чем. в .целых. структурах мозга,__что связало с очисткой препаратов от различных приме сеи ллаака, не содергацах ланныч ¡«рметти. Однако, действие остро.', гиаалсии и рпокенгеиаппи на активность транспортных АТОаз в этих структурах ни чем не отличается от дельной структуры.

Таким образом, острая гипоксия приводит к подавлению активности ti а,К- и Mj-АТ.'аз и отдельных структурах мозга и их сл-наптссомольной и млтохондриальиоЯ фракшах, что кошт быть кял>-чевым звеном в структурно-функциональных нарушениях мозга при ил;„мли л гппспс;:::.

¿Я-группы, как структурные элемент« биологических м-мбран, активно участвуют в регуляняи проницаемости их по отношению к •различным катионам. Окисление сульфгидрлльных групп вызывает нарушение в катионном балансе клеток, что является глубоким структурно-функциональным нарушением. Поэтому можно предположить, что наблюдаемое нами подавление электрической' активности в отдельных структурах мозга является результатом окисления тиолных групп, »ходящих в функциональную группу транспортных АТ^аз. Кроме того, уыгиная, что тиояо&ые группы играет особую роль л ан-тпакслаантло./ статусе органзэшг, эти данное не обхода для пошл/анид взаимосвязи кс.чду изменением оодержлпш разлатлих тип г.» jíH-групп, закопг.еикек ироду ктоз ИОД и активностью транспортных ЛТааа, а та ¡ese /--¡я выяснения причалы и попдадаьлтлллпеатл зкко-хим;:ч':скях ироцоссоа, вротекагикх в структуре козгз дрк гипоксии.

Под нлашшгк острой гшоксли в структурах мозг а кейс уровень глутатиона заметно сииааогси. Причем, в первые минуты после гипоксического воздействия содержание глутатиона почти оди-нг коьо понижается как в корковых, так х сгцолоямх образованиях мозга. Еолго достоверные едлигл в сторону .уменьшения содар.лания глутатиона установлены уже на четвертом.часу реоксагенации. Такой уровень содержания глутатиона в структурах мозга сохраняется достаточно пояго, и лишь к концу суточного периода, прошедшего с О г.-.:ита прсбывания ж;дотных в галактических условиях, лослелелло изменяется в сторону пояшегош. Через 26 ч посла гл-ноксического воздействия урезонь глутатиона во всех изучениях структурах мозга сравнивается с исходным .уровнем. Аналога: ал ал-л закономерности наблюдаются по отношению ПР-$11-групд и О^Ь-^'йг-групп. Однако в 'отличие от глутатиона, восстановление содержания этих тиолол каблздается через 12 ч с начала рзоксигонацил.

Кроме того, усугубление подавления СЗЕ- ¿'Н-грухш в отдельных областях мозга при реоксигенации более заметно, чем глутатиона или ПР~ <$1-групп, что свидетельствует о более глубокие структурных повреждениях мозга при реоксигенации.

Поскольку тиоловые соединения, особенно глутатион, входят в естественный антиоксиданткый фонд клеток и участвуют в регуляции уровня СР процессов как в норме, так и при действии экстремальных факторов, то определьенный научный и практический интерес представляет изучение стабилизации тиолового обмена при действии на" организм различных экзогенных антиоксидантов. Опыты показали, что предварительное введете животным витамина Е и ионола приводит к существенной стабилизации тиолового обмена в различных областях мозга при гипоксии. Причем, действие ионола оказалось более выраженным, чем витамина Е.

Таким образом, увеличение интенсивности ПОЛ в ртдельных областях мозга при острой гипоксии сопровождается подавлением активности транспортных АТ^аз и.уменьшением содержания различных типов ^Н-групп, -что может играть решающую роль в нарушении функционального состояния организма. .

4.Изменение АШ? при гипоксии и адреналиновом некрозе.

• Вакная роль в регуляции ПОЛ принадлежит ферментным антиокси-дантам, участвующим в детокейкаиии активных форм 1шслорсда и ли-поиерекисей. Поэтому можно предположить, что интенс: ¿пкацкя ПОЛ в биологических мембранах при гипоксии к ишемии может обуславливаться за счет изменения АА^. Надо отметить, что в настоящее время отсутствуют данные по определен™ АА-> в различных органах (сердце, печень и мозг) при острой гипоксии, а при адреналиновом некрозе миокарда изучено изменение активности только СОЛ. С другой сторона в литературе отсутствует данные по.изучению возможности предотвращения подавления АЛ^ действием антиоксидантов.другой природы при указанных экспериментальных моделях гипоксии и ишемии. Поэтому предоставляется актуальным исследовать изменение . АА£, а также возможность предотвращения этих изменений различными антиркевдантами в органах животных при острой гипоксии и в миокарде при адреналиновом некрозе.

Острая гипоксия вызывала подавление активности СОД во всех исследованных органах. Однако в сердце и печени эти изменения были более 'существенными; причем если последующая ре оксигснашю приводила к достоверному подавлению активности СОД в печени, то

»■'•ппгге-чясоздч-экопозаттия-воздухом-поело- гипоксии. не вызыва-

13 за лзллл лл;.,. ллллллнлл аклллле: н

ойедуомых ирхааах .»>: айадо1;;чши уизо^г.'х ьо^.д..;:ггь.:я зт.-.лчп--/; а-ллимоотп СОД; :> частности, г.л;.л' :■-. 1-е;.:.ив и

почтил аклл-.носто ;л;л:<л1та а оп;:лд^иЛ'^н'и.Л стелен;: педанллг.ась леегл: глл~":л';", то ? мозгу наблюдалось заметное увеличение ак-";::■>.I".'г;-. л; !:;''1ЬН':;!;'л с лонп.ол'л. Прлч-м если з :< рдп-.- поело риокешъшаццл активно*гь ГП1 почти возвращалась к контрольному упоанп, то в мозгу наблвдалось уменьшение активности.

Сушосгл^маих помопе.чнЦ л а!~::г::с?т': при «строй гмшкии* и реоксигенации ке наС/г-одалссь. Емгнс.'ввгшым исключением оыло увеличение активности ГТФ в мозгу при гипоксии, которое после реокенгенэции подавлялось. Предварительное введение жявотним c¿ - токоферола как при гипоксии, так и при реоксигенации почти полностью предотвращало подавление активности изучаемого фермента в сердпе, а в печени и мозгу наблюдалось значительное повышение ого активности по сравнению с контролем. При этом актив-пост:. П:9 я сеодие значительно увеличивалась, а з мозгу-уменьшалась.

Ллутрль-.ллчос введение ССД как до- так л после лллолллн уоз— ллчньа.ю активность не только СОД, но и других ангкокелдлнтнвх л-рмектов, что свидетельствует о включении извнеь.чздечшого СОД ь регуляция утл^лчац::;' кислородных радикалов. Ого иредмоложенай диктуется с;» тем, что введение в организм СОД приводит к умень-аению зоны клинического повреждения миокарда крис я сопровождается значительным увеличением послеоперационной г-ллнйаемостл животных (Коновалова и др., 1У69). Эти факты откридавт хорошую гереггоктпл;; для клинического применение фермента, как аниыше-жческого препарата, что требует всесторонего ¡«зучоиия механизма действия СОД. Руление этой задачи прежде »ссо зависит от изучения включение фермента в мембранные структуры, где происходит СР процессы. Для выяснения этого вопроса нами проведены ■ исследование по определении динамики изменения активности СОД и возможности ре включения в клетку после вЕедшиа.

Каксямальное накопление фермента в миокарде наблюдалось через I ч после введения, которое не изменялось в течение 3-х часов. В дальнейшем активность фермента постепенно уменьшалась и достигала контрольного уровня через несколько суток. Пр:.;ааа-нис крови через I ч после введения СОД, путем перфузии сердце физиологическим раствором Приводило к уменьшении активности

СОД до контрольного уровня, что исключает возможность проникновения фермента внутрь клеток и включения в клеточные структуры.

Весь комплекс иолучеиных результатов во данному вопросу свидетельствует о том, что многие вопросы, касающиеся механизма действия извне введенного СОД в регуляции НОЛ в настоящее время остаются не раскрытыми. Однако, можно предположить, что антиише-шческое действие извне введенного СОД связано с предотврашения-ем усиления ПОЛ в кровяном русле, где интенсивно накопяиваются перекисные' соединения, и тем самым очищают органы и ткани от токсического действия продуктов ПОЛ.

Таким образом, можно предположить, что изменение АА^> в различных органах играет существенную рольв интенсификации ИОЛ и его патогенетических последствиях, а предварительное введение Л -токоферола и СОД может предотвращать возникающие при этом Физико-химические и структурно-функциональные нарушения при острой гипоксии.

Уменьшение активности СОД в миокарда наблюдалось также при адреналиновом некрозе. При этом происходит достоверное-подавление активности также и ГГи>. Однако активность ПЮ почти не изменялась. Через 24 ч после введения адреналина активность всех изученных ферментов остается на том же уровне, что и через 2 ч после воздействия.

Учитывая, что антиоксиданты широко используются в качестве антинекрозогенных средств как при экспериментальной ишемии, так и у больных острым инфарктом миокарда, а также отсутствуют сравнительные исследования защитного действия различных типов антиоксвдаятов при адреналиновом некрозе миокарда, мы провели серию исследований по изучению возможности сохранения АА£ действием /-токоферола, ионола и СОД при адреналиновом некрозе. Полученные результаты показали, что и. -токоферол имеет более высокую антиоксидантную способность, чем ионол. С другой стороны, эти факты являются экспериментальным доказательством существования тесной взаимосвязи между генерацией кислородных радикалов и' ПОЛ и указывают на целесообразность использования в качестве антинекроз огенного вещества витамина Е.

5. Участие нейромедиаторов в регуляции СР процессов при гипоксии. • ■ _ •

АдаПтационно-защитная способность организма к стресс-факторам (в том числе гипоксии и ишемии) включает в себя механизмы на системном, клеточном и молекулярном уровне. В центральном ме-

ханизмз этой сложной системы запиты вашую роль играют нейроме-длаторы: ГЛ.МК, J1A, !U, СТ, оноидные-гормоны и др.-Анализ проведенных исследований но дачному вопросу показывает, что действие нейромедиатороа при экспериментальных .условиях монет обуславливаться путем гегулянии С? реакций.

Изавшигае содержания указанных нейромедиаторов в отдельных областях мозга при действии гипоксической гипоксии (5;Й 02 ь течение i,b ч) носит не однозначный характер. Однако несмотря на то, что в отдельных областях мозга наблюдается тенденция к увеличи-ванию содержания отдельных биогенных аминов при гипоксии, существенное подавление общего содсргпния их не вызывает сомнении. Причем, реоксигенапия .усугубляет уменьшение содержания нейромади-аторов во всех исследуемых областях мозга.

Предварительное введение животным предшественников нойромеди-аторов ( L- ДО^А, б-окситрипторан- 5-ОТ, оксибутиризт натрия -Wa-ОБ) в значительной степени предотвращает подавление содержания кейромедиаторов при гипоксии. Причем, существенное увеличение содержание нейромедиаторов наблюдрется не только при действии собстмнют предасьтре."':*коз, но и других, что, по-видкмому, свидетельствует о взаимосвязи и взаимозаменяемости моноаминов л;.п гипоксии.

Предварительное введение ашвотлы:,! L-дОМ и Иа-ОБ при гипоксии и реокси^енаиии почти полностью подавило накопление продуктов ПСЛ как в отдельных областях мозга, так к в их сштлтосо-м^льнои и ми: охондриальной фракциях, ^фиктивность влияния 5-СТ по сравнению с друг/.in предшественниками проявлялась менее значимой. для дикперенчааии влияния ДА и КА при действии L -ДОМ на\.и использован интибитор превращения ДА в НА — тстурам. Опыты показали, что аптноксидаяткая способность L -ДО*1 А при этом .уменьшалась приблизительно на т.е. могло предположить, что антиок-оидангныЯ эффект L-ÀOvA npz действии гяноксии осуществляется :;ок ДА, так и НА. Эти факты свидетельствуют о том, что в основе физико-химического механизма защитного действия медиаторов при гипоксии ¿еклТ "X аитнокеяданткяя способность.

Как нами выше оточено, интенсификация ПОЛ при гипоксии ц р.— оксигвнации, а такие при действии различных антиоксидантов коррелирует с изменением аыиэнооти транспортных АТ^аз з отдельных областях мозга и их с:шпнтос стальной и мптохондрхальпой fcamvux. Поэтому для полноценной, оценки антиоксидантной способности ной-ромедиаторов мы провели эксперименты по. изучения зозможгест.:

предотвращения подавления активности транспортных АТ^аз и содер^-жания различных типов $ ¿¡-групп в продолговатом мозге и зрительной коре действием 1_-ДО*>А, 5-ОТ и Н а-ОБ при гипоксии.

Острая гипоксия вызывала подавлеше активности транспортных АТ^аз в обоих структурах мозга, хотя достоверное уменьшение их проявлялось а отношении У а,К-АТ»>ази в продолговатом мозге. Ре-оксигенация приводила у усугублению подавления активности транспортных ферментов. Предварительное введение животным предшественников нейромедиаторов почти полностью предотвращало подавление активности транспортных АТ^аз, причем в отличие от антиоксидант-ной способности этих метаболитов, в данном случае предшественник серотонина 5-ОТ оказывал такое же эффективное действие, как и М-ДО^А и //.а-ОБ. Аналогичные эффекты получены по отношению к синаптосоаальной и митохондриальной фракциях мозга.

Предварительное введение животным указанных предшественников нейромедиаторов полностью предотвращало подавление всех форм ^Н-групп в изученных нами областях мозга при гшюксии и роокеигена-ции. По всей вероятности эти свойства нейромедиаторов связаны с их антиоксидаптной способностью, .позволяющей защитить сульфгид-рилыше группы от активных продуктов ПОЛ при гипоксии, и тем самым сохранить активность транспортных ферментов.

Влиянио нейромедиаторов на ААФ изучалось в сердце и зрительной области коры при гипоксической гипоксии, а также в сердце при адреналиновом некрозе. Как нами было отмечено, как гипоксия, так и ишемия вызывает подавление активности СОД во всех органах. Предварительное введение предшественников нейромедиаторов ( !_ - ДО^А, 5-ОТ и ^а-ОБ) не только предотвращает подавление АА^>, но во-всех случаях вызывает значительное увеличение их активности. По .всей вероятности, механизм защиты антиоксидантных ферментов и увеличение их активности нейромедиаторами при-гипоксии и ишемии происходит за счет двух взаимосвязанных процессов. Что касается защити антиоксидантных ферментов, то это, по-видимому, связано с высокой антиокислительной активностью этих веществ, что способствует взаимодействию продуктов ПОЛ с биогенными аминами и другими нейромедиаторами и тем самым защищает антиоксидантных ферментов. Значительное увеличение АА<> под влиянием нейромедиаторов при гипоксии и.адреналиновом некрозе, по-видимому, связано с мобилизацией адаптационно-защитной способности организма к стрес-сорным факторам.

Таким образом, можно предположить, что одной из основных причин в мобилизации адаптационно-защитной способности организма к

стресс-ракторам при действии нейромедиаторов является увеличе-- ние АЛ5, участвующих в обезвреживании.активных продуктов ПОЛ.

3 А К г.) Ч К il К К

Коэдмексное изучен;» сгртктурпо-фуякоионаяытх и фияико-хи-мпческих изменении в сетчатке и мозге животных при действии различных рорм гипоксии, показало, что достоверное увеличение пакетлеииа продуктов ПОЛ в этих органах имеет место только при делствак г.:по«сскчсскол а гиперокспческой гипоксиях. С другой стороны, известно, что характерной для перекисного .механизма

т,:г! огоовииестью при ГШШЛСУЯ и «шиши я;»лгхс7ся .усугуЗ'е--iffle структурно-функциональных нарушений i.pn реокссктаго. Од-•пако, такой зфуект обнаруживался только при действии гипокси-ческой гипоксии, а в остальных случаях с момента юдачи кислорода начиналось восстановление электрических ответов как в сетчатке, гак и в мозге. Эти факты свидетельствуют о том, что накопление продуктов ПОЛ, как универсальный.повреждающий-фактор, имеет место только при гипоксической и гипероксическсй гипок-синх,

Гллоксйч f г:п.: пэи'шодя концентрации кислорода ч.::-:-з ;>'/■') '>' различные ,')ср-.и,; (яос гдекааатаилоиная, при арте-

рии печъця, ауте— :: гхше^естхд кож;, ьеримшх трубчатых костей и т.д.) (лзываэт увеличение накоплен,¡я продуктов ПОЛ,

-о

которое с опрсвсждавтса струкгурно-^у ккцзоиаяытмя расвройсгьа-.VI. Поэтому i зучеиие уияозлй и механизма интенсификации ЛСЛ при гипоксии ;; ишзгдш з настоящее время находится в центре ьппланил исследователей. Ло современным представлением существенная роль в интенсификации.ПОЛ при ишемии и,гипоксии отводятся накоплению в клетке восстановленных продуктов,которое является результатов .усиления гликолиза. Однако, нааи исследования показали, что создание з сетчатке энергодерииитного состояния путем подавления аэробного и анаэробного гликолиза внутривенным введением монойздуксуснок кислоты, вызывает достоверное увеличение интенсивности ПОЯ» т,е. снтенсификашя ПОЛ, метет иметь место не только при усилении накопления восстановленных метаболитов в результате повышенна гликолиза, ни и при их дефиците.

Как бчло отмечено, срсд»; органе л л - мат'охондгин особенно выделяются по чувствительности к ишемии и гипоксии, и это дает основание предположить вздутую роль в пусковом механизме пера-кленого повреждения клеток при нарушении,кислородной обеспеченности организма носкт-митохондрия.'Прячем у мисохондриалькой

фракции при ишемии интенсивность ПОЛ горазда выше и возрастание ее обнаруживается значительно раньше изменений интенсивности ПОЛ, в лизосомальных фракциях. Оледовательно, еще до того, как наступает лабилизашш мембран лизосом, уже во многих субклеточных мембранах происходит интенсификация ПОЛ, изменяется функциональная активность, и, в конечном итоге, происходит гибель клеток. Поэтому нельзя считать, что гидролазы, высвобождающиеся после лабплизации мембран лизосом, определяют ишемическое повреждение тканей.

В наших .опытах установлено значительное увеличение активности МАО в наружной мембране митохондрий миокарда при экспериментальном некрозе, что сопровождается усилением интенсивности НОЛ. Поэтому учитывая, что ишемия 'вызывает чрезмерное увеличение содержания ка-техоламиноа и повышение активности МАО, естететвшшо, создается благоприятные условия для интенсификации дезаминирования моноаминов, которые способствуют генерации активной форму кислорода - перекиси водорода. При этом образовавшаяся леркись водорода может способствовать генерации более активных радикалов кислорода и том самым вызывать интенсификацию ПОЛ-.

По литературным данным,, а также согласно нашим исследованиям при интенсификации ПОЛ в различных мембранах первоначальный ифрект заключается в увеличении проницаемости мембран для катионов. Поэтому нами была поставлена цель исследовать активность транспортных АТ^аз как,в отдельных областях мозга, так и в их синаптосо-мальной и митохондриальной фракциях при гипоксии. Сравнительный анализ динамических' изменений продуктов ПОЛ и активности АТлааних ферментов показывает, что между этими двумя физико-химическими процессами наблвдается четкая обратная прояорциальность как при гипоксии, так и при реоксигенации, т.е. нарушение работы катион-ных насосов при гипоксии и ишемии обуславливается не только уменьшением макроэргов, но и за счет подавления активности транспортных АТФаз.

Анализ проводимых исследований показывает, что более чуревк-тельными для действия , продуктов'ПОЛ являются $Н-содержащие ферменты, в том числе транспортные АТФазы, что лежит в основе высокой ранимости ЦНС при гипоксии и-ишемии. Действительно нами показано, что гипоксия вызывает существенное уменьшение-содержания всех типов <>Н-групц. (ПР, СЗБ, глутатиона). Причем ервнецие динамических изменений интенсификации ПОЛ, подавление' активности АТ*аз1шх ферментов и содержанке различных типов $Н-групп при ги-

-поксии, показывает на четкое-взаимодействие между, этими физико-

химическими процессами.

Одной из OUHOBHJX причин кнтеиси^икьщш ПОЛ пря действии различных экстремальных факторов считается инактивация пнтипкс:;-до:шшх систем. Поэтому мы исследовали изменение AJw и позкот-ïïoctj» предотвращении структурно-функциональных и фиэико-химичес-ких наруженлй з различпнх органах животных при гипоксии и mov.hh. Нами иоказанз, что но всех кзученввх органах как гвлокс;ш, тик л ишемия вызывают уменьшение активности СОД. Однако активность ГПО и " ~тт;"т!г> от серд»'ч и печени « мозгу значительно .-увеличивается, что, по-видимому, связано со структурно-функш!онйлькньи особенностями данного органа. Подозрительное введение животным различных антиоксидантов предотвращает подавление АА4>, интенсификацию ПОЛ в отдельных органах, что сопровождается стабилизацией структурно-функциональных нарушений.

Ко менее важным, полученным наш результатом по регуляции CP процессов является определение антиоксидантной способности « областях мезга ?. т,х ггиндптоссчаль-

:¡o/. л лл; олендрладцлол ¡г г.\т;::пх ерх острой гипоксии. Огл дзггнип

лги прлдвлрпллл.лсл «ведение животным предшественнике." л; .'.¡л. ' л..лл (. л-0? л А'а -СБ) предотпр.члаот какой--

;лллл- .лл-;л;л':пл ПОЛ л отдельных областях мозга и их синантомал:-

лил .....ллл<лл;л: ль;г:л; углллллх, чло сопровождается сохранение:.:

лл.л,-. с. л' л -.реимпортных A'i.-аз и еодор.-.л.ннч рлплл-л'лх тллгез

г; - л... Л;:л.:е .'ого, нл'ллл;;;.1 в организм продщестьеннпу.ов но.ироло-

; ■■■ .-.¡-л хллокелл л ад ре на ч нновом некрозе но тольк ¡ предотвращало .уменьшение AA¿, по и вызывало их значятечь.ное увилич«-цип, что свидетельствует о мобилизации адаптационно-защитного м ■. ..л/- j ; л!лзл'- л л;.- иу, воздействиям. С jicyrcv слор-л-

húi, ,_-Л<..л-' '' : :л л - лллл:лти, что а ислелл лллллл-'л;л--

ческого механизма защитного влияния нейромедиаторо?} при действии на организм стрессовых факторов ( в том числе гипоксии и т«ониц) h.ipflnv с до.угкмл свойствами лежит их антиоксидантная ■ллл-"л:н.<,

U ¿J О Д

i. Ус .'снсйдзно íiw.i-ii'íní электрических э«.;тоз< ее."- i..-л: (элвк'1 рор-а»-икограк!») л мозга (вызванный иог'лг.пзл кср-0 su. действии всех форм гипоксии (г.чпоксическсй, гкяероксической, зли-янне СО, СОо, tJО2 и нитрита натрия), дальнейшая реокгигепац/п

вызывает .усугубление нарушения функционального состоянии сетчатки и мозга. При атом интенсификация нерскисного окисления липп-дов имеет место только при действии гипоксической и гиперокси-ческой гипоксиях.

2. Показно увеличение накопления продуктов иерекиспого окисления липидов при действии различных форм ишемии (постдс.-капита-ционной, при ауто- и гомопересадках коки, переломах трубчатых костей и окклюзии сосудов печени). Более существенное усиление интесивности иерекиспого окисления липидов при-ишемии, по сравнению с другими органеллами, наблюдается в митохондриях.

3. Более высокий уровень перекис образования к ранее достижение его максимальных величин в наружной мембране митохондрий по сравнению с 'внутенними как при гипоксиу., так и ишемии, а также лабилязацин мембран других органелл при их взаимодействии указывай на ведущую роль мембран митохондрии в пусковом механизме перекисного повреждеш1я клеток при ишемии и гипоксии.

4. Показна четкая взаимосвязь между изменением активности моноаминоксидазы и накоплением продуктов перекисного окисления .линидов при анемическом повреждении миокарда. Предполагается, что реальным источником генерации кислородных радикалов при ишемии является усиление дезаминирования моноаминов с участием моноаминоксидазы. При этом образовавшиеся в мембране продукты перекисного окисления липидов вызывают глубокие структурные нарушения в наружной мембране митохондрий, что сопровождается "утечкой" моноаминоксидазы из структуры миокарда.

5. Увеличение интенсивности перекисного окисления липидов в отдельных областях мозга и их синаптосомальной и митохондриаль-ной фракциях при острой гипоксии сопровождается подавлением активности // а,К - и М^ ~АТ»>аз и уменьшением содержания различных типов ^Н-групп (поверхнорасположенных, структурно-замаскированных белковых и глутатиона), что •могут играть решающую роль в нарушении функционального состояния органов и тканей.

6. Реоксигенация в начальном этапе после острой гипоксичес-' кой гипоксии приводит к более существенному накоплению продуктов перекисного окисления липидов, уменьшению активности транспортных АТФаз, содержанию различных типов ^Н-групп и подавлению электрической активности. Полное восстановление указанных изменен^ наблюдащся спустя 26-Ю часов поело начала реоксиге-нации.

7. Установлено участие меланопротеиновых гранул пигментного

эпителия 1лаза в рефляции стюбоднорадикальных процессов при остро;! 1ИПОКСИИ. Антирппикальиая способность мёлаишга при'"6том' осуществляется за счет аккугулялии активных радикалов лпиидной природы в своей матрице б виде малоактивных стабильных радикалов, а высокая активность селена как антиоксияачта, происходит ьи только за счет повышения активности 1 лутатионпероксидазк, но и способности селена повитать донорно-акцспторную рзаге/освязь меланина со свободными радикалами.

8. Предварительное введение яшют1гнм аотиоксидантов (витамина ко по ля, феноттт-калкя к яя^ен-яятрян) предотвращает иитен-сигггзсть перекисного окисления липидов ро всех исследованных структурах как при гипоксии, так и ишемии, что сопровождается эффективной защитой активности транспортннх АТФаз, уровня различных типов ^Н-'РУПИ и электрической активности зрительной и сенсомо-торкой, корн. Антиоксидантн проявляют наибольшую эффективность

при реоксигенапии, чем при гипоксии.

9. Установлено значительное изменение активности антиокси-дантных ферментов (супероксиддисмутазы, глутатионпероксидазы и глутатко н-^-трансферагш) в различиях ор! анах (сердце, печень и мозг) при острой ! иноксии и в сердце при адреналиноэом некрозе. Предварительное введение жи-дотнкм Л-токоферола и ионола полностью предотврадает эти изменения.

10. Показано., что стимуляция синтеза нейромедиаторор (ГАМК, дофамин, черадре палия, серотонин) введением их предшественников при гипоксии способствует увеличению активности аятиоксядантных ферментов и предотвращению накопления продуктов перекисного окисления липидов , не давлению активности транспортннх АТФаз и уменьшению содержания различных типов ¿ЗЙ-^упп, т.е. в основе мобилизации адаптшшончо-зэпатной способности организма псйромекатора-.ми лги действии стрессовых факторов (в том числе гипоксии и ишемии) наряду с другими механизмами лежит их- антиокеидантная способность. ■

11. Полученные результаты показывают перспективность поиска малотох^чннх л рь'оокоофьектившх автпогсязтантов дгя лотепяя различных заболеваний, сопровоудающихся нарушением кислородного обеспечения организма. _ ...

ПРАХПППХЖИЕ РНчОЖДЛЦИИ

I.Результаты исследований по изучению влияния пнтиоксидантов на электрическую активность сетчатки при действии экстремальных

факторов используются для лечения различи?« патологий сетчатой оболочки глаза в Азербайджанском НИИ офтальмологии.

2. Для сохранения структурно-функциональных свойств изолированных органов целесообразно комплексное применение ¿С-токоферола с лецетияом и иншбиторами фосфолипазы А., - совкаином и амнионом. Этот, результат подтвержден авторски свидетельством СССР.

3. Путем определения продуктов ПОЛ в крови можно уточшгп. и дополнить критерии диагностики при гипоксии мозга у новорожденных. Эти результаты внедрены как диагностический тест в детской 'неврологической больнице гор. Баку.

Список публикаций, отражающих основное содержание диссертации

1. Об эффективности некоторых селенсодержащих веществ по отношению к свободнорадикальюм процессам в сетчатке глаза животных.

■//йатер. XI науч. сессии, посняц. итогам научно-исследовательских работ республики за 1973 1 . - Баку, Олм. - 1974. - С.5-6 (соавт. Г.Б.Абдуллаев, Ш.Б.Мамедов, А.И.Джафаров, О.Ю.Юсафов).

2. О возможной регуляцйи свободнорадикального состояния сетчатки глаза соединениями селена. //Селен в биологии.'- Баку,- Олм. • 1974. - С.54-157. (соавт. Т'.Б. Абдуллаев, Ш.Б.Мамедов, А.И.Джа-фаров, В.В.Перелыгин).

3. Изучение фотоиндуцирова'ннпх свободнорадикальних состояний пи г ментною эпителия глаза животных. //Докл. АН Аьерб.ССР. -1975 -Т.31.- № 2. -С.31-39. (соавт. Г.Б.Абдулдаев, А.И.Джафаров, Ш.Б.Мамедов).

4. Влияние соединений .селена на перокисное омсление липидов пиг ментюго эпителия глаз кролика. //Сюбоднорадикальноо окисление липидое в. норме и патологии. Тр. МОИП,- М,- 1976.- С.П4-116.

5. Микроволновая фотопроводимость нативной сетчатки глаза кролика. //Докл. АН Азерб.ССР. -1975. -Т.31.- й 9.- С.11-16. (соаг Г.Б.Абдуллаев, Э.Ю.Юсифов, Ш.Б.Мамедов).

6. Сюб'однорадикальше состояния пигментного эпителия при разлив них функциональных состоящих сетчатки. /Д1атер. научной сессии по.ЭПР.--Тбилиси,- 1977.- С.5-6. (соавт. Г.Б. Абдуллаев, Ш.Б.Мамедов, А.И.&афаров, Э.Ю.Всифов).

7. Изучение распредёление радиоактивного селена по- различным структурам глаза. /Д1ат'ер. научн. конф. АзНИИ офталгиогопш. -Баку. - 1977.- С.486-489. (соавт. Г.Б.-Абдуллаев, А.И.Джафаро]

- зг, -

Ш.В.Мамедов, Э.Ю.Юси'юв).

8. Сюбоянораликялънне еютояиия ггагаентного эпптелюг глаза грл

различных функтюналы-шх состояниях. //Селем в биологии.- Баку,- С-лгл,- I960.- Т.З.- С.94-96. (соавт. Г.Б.Абдуллаев, Ш.В. ttmnmn, А.И.Лжафаров, с,.Г.Юск,)''>в).

9. Исследование перекист m окисления лшшдол при экспериментально« дегенерация сетчатки. /Докл. АН АзерО.ССР,- 1981,- № 2.-0.:î8—11. (соавт. Н.К.Не^ан-заде, А.К.Дк?Ларол).

1С. Перекисиие окисление липидор в трансплантате и ? тканях ипци-пиента при различных условиях пересадки. //Еюл. окслеркм. биол.. :г мед.- 1001,- 1С,- С./1%--42/!. í^p.tt. А.И.Д^ап^рор, Ь.м.Ка-сумо в).

11. Перекксное окисление лклидоя при экспериментальной дегенерации сетчатки глаза. /Матср. конф. молодах физиологов Закавказья.

- Ереван,- 1981.- 0.II7-I22. (соавт. Н.К.НеЬан-заде, Э.М.Кулиева).

12. Перекисное окисление лигшдое и активность глутатионпероксида-ñü у различных позвоночных таютннх. //Матер.■ I Всесоюз. био-таяяарр.к-оп)"отняла. 1082.- Т.2.- С.67. (соягт. Н.К.Не:'-

//?;:; х-. -7,77,- С. 77, (оо-.-т.: А.Ь ,?oprc~;?s

l'î, 1тп;,л'.':.".;:.тп мнтсхол,гр:',11!»-.ч;>х "е'.^рлн к Wrj т:т::

V'í2~;.'-!f:y: 'JQI!'ivrjix "-"-b;t!i"t!.'7. //Т'>'' :-:e,~ С,84. (со-я-т. A.-'. Дул*г.?ir-, ГЛ.Ak'-"j¡¡!, Р.Н.Длпсу?, т.Л;Ма'/сяхаклн). 15. Пссло?оранке петеккпн ни окисления ялотдот. при эксперк/еить»ь-ной дегенерации сетчатки..//Евлл. эксперта, бнел. п..чел.-1983.

- т. -С.37-39. (соавт. Н.К.Нейман-заде, Э.М.Кулиева, А.И.Джа-■. ''рак-1.

1-j. Отстав дт: /УЛгтпг.о. с-пдсте:;. СОГ'Г, -

JA II09II0. - Ki.AOI j; I/02-I984. (со'авт. А.И.Джафаров, Э.М.Кулиева, Н.К.Не^ман-заде, Т.А.Мамедханлн). Т 7. гтетк^итиое окисление лшшдов в наружных и внутренних мембра-

Г307\- 10.- С.'-V:;т.т. А.:'К'.' го окисления липидов сетчатки нозьиночных жи&лнкх. /V'.—"

С,427-429. (соавт, А.И.Джафаров, Э.М.КУлиева, Т.А.Мамедханлы, . Н. К.НеРман-заде).'

19. Действии антиокоидантов на перекисное окисление липидов сетчатки при шноксии. /Дез.. II Всесоюз. конф. "Биоантиокси-дант". - И., 198в.~ Т.2.- С.77-78. (соавт. Н.К.Нейман-заде, Э.М.Кулиева, А.И.Джафаров).

20. О действии селенита натрия на поздний рецегтторний потенциал изолированной сетчатки холоднокровных. //Докл. АН Азерб.ССР,-1985- Т.42,- »2,- С.74-77. (соавт. Ш.К.Тагиев, Г.Х.Акопян, А.И.Дкафаров, Э.М.Кулиева). .

21. Взимосвязь между изменением перекисного окисления липидов и активностью моноеминоксидазп митохондрий миокарда при экспериментальном некрозе. /Д1атер. 6 Всесоюзн. школы "Ыншечная' активность и жизнедеятельность организма". - М., 1986,- Депонирован ВИНИТИ АН.СССР. - № 4596-В-86. (соавт, А.И.Ддафаров, А.М.Азимова, Н.И.Алиева). ,

22. Исследование нерекисного. окисления липидов митохондрпальных мембран при:аноксии, //Теоретические и методические основы бкохемилкминесценции. Матер, -скмпоз. "Биохемйлшинесцендия в медицине и сельском хозяйстве. -Ташкент, апрель, I98G". -!■,'., Наука,- 1986.'- C.II5-II8. (соавт. А.И.Джафаров, Р.М.Кулиева, Н.К.НеЯыан-заде,.Р.Ф.Керимов, Т.А.Мамедханлы, З.Н.Алиева, Н.П. Середа).

23. АТФазная активность:отдельных компонентов зрительной системы при гипоксии. ,/Д1атер. X Всесоюзн. конф. по биохимии нервной системы. -Горький, 1987.- С.29. (соавт. А.И.Джафаров, А.Н.Азимова),

24. Функциональное состояние зрительно!« анализатора при изменении . газового состава среды. /Д1атер. 15 съезда Всесоюзн. физиол.

общества им.И.ПЛавлова.- Кишинев, 1987,-'Л., Наука,- 1987.-Т.2.- С.297-298. (соавт. АЖДтафаров, Н.П.Середа., Т.А.Ма- ' кедханлн,'А.М.Азимова, Н.И.Алиева, Д.Н.Дагкесаменская).-

25. Об особенностях,нарушения работоспособности зрительного анализатора прй гипоксии,и.гиперкапнии. //Извест. АН Азерб.ССР. Серия биол. науки. - 1987.-.№ 5.- С.94-100.' (соавт. Н.П.Сере-да, Б.А.Абдуллаева, А.И.Джафаров, Н.А.Рустамова', Ф.Н.Алеске-рова). ' • .. . , ' '

26. АТФазная активность в отдельных компонентах зрительной системы морских свино.к при гипоксии..//Извест. АН Азерб. ССР. Серия биол. науки, - 1987.- 6.- С.89-62.. (соавт, А.И.Джафа-

ров, А.М^Азимова).------ -------:___________ _______________ ________________

27. О роли моноаминоксидазы в интенсификации перекисного окисления липидов митохондрий при экспериментальном некрозе миокарда. /Дюл. эксперт.]. биол. и мед. - 1988.- № 7.- С.45-47. (ссаьт. А.И.Джафаров, А.М.Азимова, Н.И.Алиева).

28. Перекисное окисление липидов и активность АТФазных ферментов в синалтосомальных и митохондриалышх фракциях мозга при гипоксии. //Вопр. мед. химии.- 1989.- Й 4.- С.51-56. (соав-то. А.И.Джафаров, Х.Ф.Бабаев, Г.И.Ахмедова).

29. Перекисное окисление дстядов свваптосомалыгой и митохондри-альной фракциях отдельных структур мозга при гипоксии. //Еюл. эксперим. биол. и мед.- 1989.- В 3.- С.305-307. (со-

• авт. А.И.Джафаров, Х.Ф.Бабаев, Г.Ш.Ахмедова).

30. Об особенностях изменения активности АТФазных ферментов в синаптосомальной и митохондриальной фракциях мозга при гипоксии. //Докл. АН Азерб.ССР.- 1989.-'Л 2.- С.34-38. (соавт. А.И.Джафаров, Х.Ф.Бабаев, Г.И.Ахмедова):

31. Перекисное окисление липидов и моноачиноксадазная- активность в наружных и внутренних мембранах митохондрий при адреналиновом некрозе миокарда. //Кардиалогия.- 1989,- № 4.- С.117. (соавт. А.М.Азимова, Н,И,Алиева, А.И.Джафаров). ■

32. Об особенностях нарушения работоспособности зрительного анализатора лри^действли двуокиси азота и нитрита натрия. //Из-вес. АЛ Азерб.ССР. Серия биол. науки.- 1989.- Л 2.- С.106-112. (соавт. А.И.Джафаров, Н.П.Середа, Э.М.Абдуллаева, Т.А. Мамедхашш).

33. Влияние антиоксидантов на перекисное окисление.липидов и активность АТФазных ферментов в- синалтосомальянх и митохои-

дриальных фракциях мозга при гипоксии. //Тез. III Всесоюзн. коиф. "Биоанигоксидант". - , 1939,- ТЛ.-С.155-156. (соавт. А.И.Джафаров, Х.Ф.Бабаев, Г.Ш.Ахмедова).

34. Влияние фенозана калия и анфена натрия на перекисное окисление липидов и содержание различных типов £ И-групп б зрительной области керн мозга при гипоксии.• /Дам же. - С.126-137. (соаьт. А.И.Джафаров, Х.Ф.Бабаев, Г.Ш.Ахмедова).

35. Антиокслдантное влияние 1.-Д0ФА в зрительной области корн и ее синаптосомалытах и митохондриалькых фракциях при гипоксии. /Дам же. - С.134-135. (соавт. А.И.Джафаров, Р.Х.Ко-чарли, Х.Ф.Бабаев, Г.Ш.Ахмедова).

36. Влияние окиси углерода на электрофизиологические характеристики я перекгеное окисление лиги доз отдельных звеньев

зрительного анализатора. //Докл. АН Азерб.ССР. - 1989,- Я 6. - С.43-47. (соавт. Н.П.Середа, Э.А.Абдуллаева, А.И.Джафа-ров, Т,А.Мачедханлы). 37. Стабилизирующее влияние 5-окситриптофана на структурно-функциональную активность мембранных образований мозга при гипоксии. /Матер. Бсесоюзн. симпоз. "Реконструкция, стабилизация и репёрация биологических мембран". -Благовещенск,

1989,- С.91. (соавт. А.И.Джафаров, Р.Х.Кочарли, Г.Ш.Ахмедо-ва, Х.Ф.Бабаев). . - ■

38« Effect of antioxidants on lipid peroxidation in the rabbit

retina under acute hypoxia. Inter. Confer, on "Regulation

. of free radical reactions". - Bulgaria, Varna 13-16 September, 1999.- P.106-107.

39. j/а.К-АТФазная активность отдельных структурных компонентов • зрительной системы морских свинок при гипоксии. //Бш. эксперта. бдол. и мед. - 1990,- 3,- С.248-250. (соавт. A.M. ■Азимова, А.И.Джафаров). ' _

40. О роли меланина в регуляции свободнорадикальнм процессов в пигментном эпителии глаза при гипоксии. //Биофизика. -

1990. - T.35j - С.977-980. (соавт. А.И.Джафаров, Э.Ю.Ксифов).