Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Оценка стресс-реактивности рыб-объектов аквакультуры и ее коррекция писцином

ВАК РФ 03.00.10, Ихтиология

Автореферат диссертации по теме "Оценка стресс-реактивности рыб-объектов аквакультуры и ее коррекция писцином"

На правах рукописи

Романова Наталья Николаевна

ОЦЕНКА СТРЕСС-РЕАКТИВНОСТИ РЫБ -ОБЪЕКТОВ АКВАКУЛЬТУРЫ И ЕЕ КОРРЕКЦИЯ ПИСЦИНОМ

Специальность 03.00.10. - ихтиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2005

Работа выполнена во ФГУП "Всероссийский научно-исследовательский институт пресноводного рыбного хозяйства" (ФГУП "ВНИИПРХ")

Научный руководитель - кандидат биологических наук

Головин Павел Петрович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Илясов Юрий Иванович кандидат биологических наук, ст.н.с. Бенина Елена Николаевна

Ведущая организация: Межведомственная Ихтиологическая комиссия

Защита состоится " 7 " июня 2005 г. в 11 часов на заседании диссертационного совета Д.307.003.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте пресноводного рыбного хозяйства (ВНИИПРХ) по адресу: 141821, Московская обл., Дмитровский р-н, пос. Рыбное

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУП "ВНИИПРХ"

Автореферат разослан " h " 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, к.б.н. Подоскина Т.А.

г#об - ?

<<¿0*7

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Выращивание рыбы в условиях аквакультуры сопряжено с влиянием на нее различных сильнодействующих факторов среды (стрессоров), вызывающих общий адаптационный синдром (Vedemeyer, McLeay, 1976; Мартемьянов, 1982; Pickering et al., 1982; Лебедева и др., 1985; Крепис, 1989; За-пруднова, 2003 и др.). В процессе эволюции у животных выработалась сложная система адаптивных механизмов, реализация отдельных звеньев которой определяет физиологическую стресс-реактивность вида (Mazeaud et al., 1977; Хайдарлиу, 1984). Изучение этих адаптивных механизмов позволяет выяснить особенности их проявлений, определить степень пластичности вида и решать конкретные вопросы акклиматизации и разработки технологий выращивания рыб - объектов аквакультуры (Виноградов и др., 1986; Багров, 1993 и др.). Наиболее перспективным представляется комплексный подход к изучению механизмов адаптаций на клеточном, тканевом, органном и организменном уровнях, без которого нельзя понять и правильно оценить значение того или иного стрессора или их синергическое воздействие на рыбу.

Другой немаловажной негативной стороной стрессовых воздействий является снижение резистентности у рыб к возбудителям заболеваний и возникновение ряда болезней, сопряженных со стрессом (Snieszko, 1974; Головин, 1984; Вихман 1996 ).

Диагностика стресса у рыб направлена на выявление первичных или вторичных его эффектов. Проведение таких анализов достаточно трудоемко и не всегда доступно практикам. Последние достижения биологической и медицинской науки направлены на разработку экспрессивных методов диагностики (Лебедева и др., 1993; Тушмалова и др., 1998). Принцип проведения их основан на полуколичественном быстро протекающем на твердой фазе аналитическом методе. Апробация и отработка таких методов весьма перспективна и практически значима для аквакультуры.

В мировой аквакультуре для снижения стресс-реакции рыб используют в основном анестетики. В настоящее время отмечена тенденция по использованию с этой целью биологически активных препарате малых дозах.

Одним из таких является разработанный в НТЦ "Омела" - антистрессовый препарат "Писцин" (Томкевич и др., 1999). В этой связи изучить реакцию различных видов рыб на писцин и выяснить возможность его использования для коррекции стресса является актуальным.

Цели и задачи исследования. Целью данной работы являлось оценить стресс-реактивность рыб - основных объектов отечественного рыборазведения при использовании принципиально нового для аквакультуры метода экспресс-диагностики и отработать способ коррекции негативных последствий стресса с помощью биологически активного препарата "Писцин".

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Определить стресс-реактивность отдельных видов рыб, выращиваемых в аквакультуре России, по изменениям биохимического состава наружной слизи и крови.

2. Оценить течение общего адаптационного синдрома у рыб в зависимости от вида и силы стрессора.

3. Провести сравнение стресс-реактивности различных видов рыб на хенд-

линг.

4. Определить влияние стресс-факторов на пищевую активность рыб.

5. Выяснить воспроизводимость и стабильность седативной активности препарата "Писцин".

6. Испытать антистрессовое действие писцина в условиях транспортировки и при хендлинге (биотехнические манипуляции с рыбой).

7. Оценить влияние писцина на резистентность рыб к некоторым заболеваниям.

Научная новизна. Впервые проведена сравнительная оценка стресс-реактивности рыб на основе использования принципиально нового для аквакультуры полуколичественного метода экс пресс-диагностики стресса с помощью мульти-и глюкостиксов. Определена специфичность изменений наружной слизи у различных видов рыб и их стресс-реактивность. Впервые получены материалы по коррек-

ции стресс-реакции рыб биологически активным антистрессовым препаратом "Пис-цин", используемым в ультрамалых дозах.

Практическое значение. Результаты работы направлены на оценку здоровья рыб в аквакультуре и могут применяться в качестве критерия их стресс-реактивноста. Предложены эффективные способы использования антистрессового препарата "Писцин" для предупреждения и коррекции стресс-реакции у рыб. Отработаны физиолого-биохимические параметры, которые могут служить критериями оценки стресс-устойчивости при проведении селекционно-племенных работ. Полученные данные по изменению активности питания после хендлинг-стресса следует учитывать при нормировании кормления молоди осетровых рыб и карпа.

Апробация. Основные результаты диссертации были представлены и обсуждались на международных конференциях: "Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб", Борок, 2003; "Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов", Петрозаводск, 2004; Научных чтениях посвященных памяти профессора В.А. Мусселиус-Богоявленской, Рыбное, 2003 и на отчетных сессиях ФГУП "ВНИИПРХ".

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ и 1 в печати.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста, включая 18 таблиц, 12 рисунков, и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, результаты исследований (три главы с под-главами), заключение, выводы, список литературы, включающий 191 источник (отечественных - 134 и иностранных - 57) и 2 приложения.

ГЛАВА 1. СТРЕСС-РЕАКТИВНОСТЬ РЫБ, ФАКТОРЫ, ЕЕ ОПРЕДЕЛЯЮЩИЕ, И МЕТОДЫ КОРРЕКЦИИ (обзор литературы)

В литературном обзоре обобщены наиболее значимые аспекты проблемы стресса в аквакультуре. Они посвящены стресс-реактивности рыб, механизмам формирования общего адаптационного синдрома, формам его проявления, нормам реакции задействованных систем. Многочисленные литературные данные показывают, что проявление реакции организма рыбы на воздействие стрессоров зависит от

ее физиологического состояния, уровня доместификации, видовой, групповой принадлежности и ряда других условий. Рассмотрен вопрос о применении антистрессовых препаратов в аквакультуре.

СОДЕРЖАНИЕ И РЕЗУЛЬТАТЫ ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Работу проводили в лаборатории ихтиопатологии, в условиях аквариальной ФГУП "ВНИИПРХ" и на кафедре ихтиологии Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова. Материал собирали в период с 2000 по 2004 гг. в производственных условиях ЭПО "Якоть", ОАО "Бисеровский рыбокомбинат" и форелевого хозяйства "Сходня" (Московской области), Ардонского рыбзавода (Республика Северная Осетия - Алания), Конаковского осетрового завода (Тверская область) и Умбского лососевого завода (Мурманская область). Объектами исследования явились основные виды рыб, выращиваемые в аквакультуре в количестве 976 экз. (табл.).

Таблица. Объем обследованного материала

Вид рыбы Число рыб, экз.

в производственных условиях в эксперименте Всего

Пестрый толстолобик 70 258 328

Радужная форель 72 67 139

Карп - 125 125

Ленский (сибирский) осетр 214 63 277

Стерлядь и ее гибриды 14 4 18

Каспийский лосось (кумжа) 59 - 59

Атлантический лосось (семга) 30 - 30

Стресс-реактивность рыб оценивали по результатам поведенческих реакций (изменению поведения и пищевой активности) и по физиолого-биохимическим показателям.

б

Биохимические параметры наружной слизи и глюкозу в крови измеряли полуколичественным экспресс-методом с помощью индикаторных тест-полосок (стик-сов) "Multistix" и "Glucostix" фирмы "Bayer". Считывание результатов Со стиксов проводили на приборе "Clinitek-50" и Тлюкометр-GH" соответственно, или визуально сопоставляя интенсивность полученной окраски с прилагаемой стандартной шкалой. Одновременно с измерением биохимических параметров определяли такие показатели крови, как гемоглобин, число эритроцитов, гематокрит, лейкокрит, содержание гемоглобина в одном эритроците (СГЭ) и средний объем эритроцитов (СОЭ) по принятым в ихтиопатологии методам (Головина, 1979).

Всего на рыбах было проведено 19 экспериментов (10 - для оценки стресс-реакции рыб и 9 - для отработки способа коррекции стресс-реакции писцином). За контроль принимали интактную (нестрессированную) группу рыб. Стресс-факторами служили хендлинг, резкое повышение или понижение температуры воды, дефицит кислорода и транспортировка (или ее имитация). В качестве хендлинга использовали определенный набор технологических манипуляций с рыбой: отлов, выдерживание на воздухе, имитация сортировки, пересадка в другую емкость. Отбор проб у опытных групп рыб проводили спустя 1 ч после воздействия стрессора.

Первичную оценку активности писцина проводили методом биотестирования на тест-объекте - ресничной инфузории Spirostomum ambiquum. За основу был принят показатель ее спонтанной двигательной активности (СДА).

Статистическую обработку полученных материалов проводили по пакету программ Statistica и Harvard Graphics для PC.

ГЛАВА 3. ОЦЕНКА СТРЕСС-РЕАКЦИИ РЫБ 3.1. Оценка стресс-реакции рыб в зависимости от вида и силы воздействия

стресс-фактора

Оценку стресс-реакции рыб в зависимости от вида стресс-фактора проводили на годовиках карпа, сеголетках и двухлетках ленского осетра.

На карпе средней массой 36 г действие хендлинга исследовали при двух температурах - 14 и 23°С. При температуре воды 14°С хендлинг вызывал достоверные

изменения уровня глюкозы в крови, белка и гемоглобина в слизи, а при 23°С -только глюкозы в крови и гемоглобина в слизи.

Гипертермию вызывали перепадом температуры воды на 6°С (с 14 до 20°С). В результате у стресс-реактивных особей возрастали число эритроцитов (на 18%), ге-матокрит (почти на 80%), уровень глюкозы в крови (на 153 %) и гемоглобин в слизи (на 60 %), а содержание белка в слизи достоверно снижалось по сравнению с ин-тактноЙ группой рыб (на 26%).

' Гипотермию вызывали резким снижением температуры воды на 7°С (с 23 до 16°С). В результате у стресс-реактивных особей возрастал уровень глюкозы в крови на 56 %, белка и гемоглобина в слизи соответственно на 31 и 96 %.

Хроническую гипоксию вызывали постепенным снижением кислорода в воде в течение 5 ч до уровня 1 мг/л. В результате у карпа отмечено увеличение уровня гемоглобина и белка в слизи соответственно в 5 и 3 раза. При этом глюкоза в крови резко не изменяется за счет медленно развивающей стресс-реакции. Однако острая гипоксия, вызванная более резким снижением кислорода в воде до 1,3 мг/л, показала, что у карпа уровня глюкозы в крови увеличивается в 2 раза.

На ленском осетре средней массой 140 г влияние хендлинга оценивали при температуре воды 16°С. Из исследованных показателей достоверно увеличился уровень глюкозы в крови (на 15%) и гемоглобина в слизи (на 19%), а содержание белка в слизи снизилось относительно контроля (на 54%).

Гипертермия (перепад температуры на 9°С с 17 до 26°С) у двухлеток осетра средней массой 450 г вызывала кратковременный (3-5 мин) шок, или по классическим канонам развития стресс-реакции - стадию тревоги. Спустя 30 мин у рыб наблюдал I стадию контрашока или резистентности. При этом изменения физиолого-биохимических параметров крови и слизи по направленности оказались аналогичны тем, что имели место у карпа, т.е. происходило увеличение глюкозы в крови (на 99%) и гемоглобина в слизи (на 41%) относительно контроля.

Таким образом, стресс-реакция рыб (карпа и ленского осетра) на гипертермию была выражена сильнее, чем на хендлинг. При этом рыбоводные манипуляции при 14°С вызывали у карпа более сильный стресс, чем при 23°С, когда рыба уже активно

питалась. Гипотермию карпы переносят легче, чем гипертермию. Уровень глюкозы в крови у них достоверно увеличивался лишь при остром стрессе (температурный шок, хендлинг), тогда как гемоглобин в слизи реагирует и на хроническую гипоксию.

Оценку стресс-реакции рыб в зависимости от силы стресс-факторов проводили на годовиках карпа и двухлетках ленского осетра.

У карпа стресс-факторами служили гипер- и гипотермия, сила воздействия которых определялась в скачках температуры на 6 и 12°С. В результате было показано, что действие этих стрессоров вызывает у карпа значительные изменения уровня глюкозы в крови, белка и гемоглобина в слизи. При гипертермии из этих показателей только изменение гемоглобина в слизи коррелировало с силой воздействия стрессора. Содержание же глюкозы в крови независимо от величины скачка температуры одинаково резко возрастало в 2,5 раза, а белка в слизи падало (на 30%) по сравнению с интактной группой рыб. При гипотермии эти показатели изменялись несколько по-другому. Увеличение глюкозы с возрастанием силы стрессора происходило всего на 10 %, белка - на 40%, а изменение содержания гемоглобина в слизи меняет свою направленность. Так, если у стресс-реактивных особей при снижении температуры на 6°С содержание гемоглобина в слизи возрастает почти в 2 раза, то при снижении температуры на 12°С оно остается на уровне контрольной группы рыб.

У ленского осетра стресс-фактором служила гипертермия, сила воздействия которой определялась в скачках температуры на 7 и 9°С. Реакция рыб на гипертермию в обоих случаях проявлялась в виде температурного шока. С усилением силы стрессора число стресс-реактивных особей увеличивалось от 25 до 100%. Спустя 2535 мин эти рыбы адаптируются и восстанавливают свое поведение. У таких особей в крови возрастал уровень глюкозы на 99% и 137% при перепаде температуры воды на 7 и 9°С соответственно. Гемоглобин в слизи возрастал с увеличением силы стресс-фактора почти в 1,5 раза.

Таким образом, в зависимости от силы воздействия температурного стресс-фактора, у рыб выявлен ряд наиболее значимых ответных реакций. При этом как на

повышение, так и на понижение температуры воды у карпа при усилении силы действия стрессора увеличивался уровень глюкозы в крови. У ленского осетра стресс на гипертермию проявляется в виде шока, то есть через реакцию тревоги, которая сменяется через адаптивные механизмы стадией резистентности. Указанные изменения у этих видов рыб следует относить к физиологическому стрессу (или эустрессу), который приводит к увеличению интенсивности анаболических процессов и повышению неспецифической резистентности организма.

3.2. Влияние стресс-факторов на пищевую активность рыб

Влияние стресс-факторов на пищевую активность рыб оценивали в экспериментах, проведенных в аквариальных условиях на годовиках ленского осетра и сеголетках карпа. В течение месяца рыбу адаптировали к максимальной суточной по-едаемости корма, а затем одну из трупп подвергали хендлйнгу. а другая оставалась в виде контроля. После этого наблюдали за динамикой пищевой активности.

В результате у ленского осетра на 1-е, 2-е и 3-е сутки после хендлинга было отмечено снижение пищевой активности на 80,70 и 30 % соответственно (рис.1).

♦ Контроль

Ш После хендлинга ленский осетр - - а - - После хендинга карп

Рис. 1. Динамика пищевой активности рыб после хендлинга

(% от контроля)

В то же время у карпа в период активного питания хендлинг не вызвал столь сильного снижения пищевой активности. В первый день после хендлинга средняя

суточная поедаемость корма составила 62%, а в последующие дни в пределах той величины, которая была до стресса (рис.1).

3.3. Оценка стресс-устойчивости форели

Все возрастающие стрессовые нагрузки на рыб в условиях аквакультуры, особенно высокоинтенсивной, ставят перед специалистами'задачу селекционирования объектов выращивания с повышенной стресс-устойчивостью. В этой связи в условиях форелевого хозяйства "Сходня" в течение 2-х лет радужная форель проходила отбор на стресс-устойчивость. Проведенное нами экспресс-тестирование селекционной группы на хендлинг показало отсутствие у большинства исследуемых особей выраженной стресс-реакции, тогда как у обычной для этого хозяйства форели при стрессе изменилось 5 показателей крови (увеличились гематокрит и доля палочкоя-дерных нейтрофилов, понизились гемоглобин, лейкокрит и СГЭ). Большой разброс значений показателей, отмеченный у стресс-устойчивой форели, свидетельствует о высокой гетерогенности этой группы и отражает, вероятно, физиологическую перестройку организма при переходе на новый, повышенный уровень устойчивости к неблагоприятным факторам среды. Косвенным признаком меньшей подверженности стрессу может служить и отсутствие признаков некроза дорзального плавника (хо-лодноводного флексибактериоза) у этой группы рыб, как заболевания, сопряженного со стрессом.

Проведенные работы позволили отобрать группу физиолого-биохимических показателей, помогающих при формировании маточного стада форели, вести отбор особей, отличающихся устойчивостью к стрессу.

ГЛАВА 4. ИСПЫТАНИЕ АНТИСТРЕССОВОГО ПРЕПАРАТА "ТТИСЦИН" ДЛЯ КОРРЕКЦИИ НЕГАТИВНЫХ ПОСЛЕДСТВИЙ СТРЕССА У РЫБ 4.1. Отработка условий сохранности биологической активности антистрессового препарата "Писцин"

Первичная оценка активности писцина с помощью тест-объекта ресничной инфузории спиростомы показала, что в разведениях Д"15 и Д"ю препарат проявляет

седативное действие. При дальнейшем изучении было определено, что стабильность его активности сохраняется в темной стеклянной или пластиковой таре в течение 2-х месяцев при температуре 18-20°С и только после этого срока отмечаются небольшие изменения. При температуре хранения 24-26°С происходит быстрое снижение его активности, вплоть до полного исчезновения в течение 2-х месяцев. Хранение препарата при температуре 6-8°С в те же сроки не приводит к изменению

СДА-

Писцин рекомендовали к применению, если седативный эффект на инфузориях достигал 60-80% от контроля.

4.2. Отработка эффективных методов использования антистрессового препарата "Писцин" на рыбе Работу проводили на двухлетках нестрога толстолобика средней массой 350 г. Было поставлено три эксперимента в различных вариантах по применению писцина (до стресса, после и комбинированно - до и после). Опытные группы рыб подвергали хендлингу. Препарат вносили в воду до или сразу после стрессирования согласно схеме, представленной на рис. 1.

Рис. 1. Схема испытания препарата "Писцин" при стрессировании пестрого толстолобика хендлингом

Результаты показали, что использование писцина до стрессирования снижает стресс-реакцию толстолобиков во всех группах. При этом максимальное восстановление глюкозы до уровня контроля было отмечено у рыб при внесении препарата за 50 мин, а гемоглобина в слизи - за 20 мин.

Использование писцина после стрессирования также приводило к снижению стресс-реакции. При этом отмечено, что уровень глюкозы в крови был на 29%, а гемоглобина в слизи на 50% ниже, чем у рыб при хендлинге без применения писцина. Кроме этого произошло восстановление кетонов в слизи до уровня контроля.

При комбинированном способе внесения препарата было отмечено, что наибольшее восстановление глюкозы в крови произошло при внесении препарата за 20 и 50 мин, а кетонов и гемоглобина в слизи - за 10 и 30 мин.

Таким образом, проведенные исследования показали, что писцин эффективно работает при кратковременном стрессе небольшой силы. Наиболее оптимальным вариантом является внесение препарата в воду за 20-30 мин до воздействия стресс-фактора и обработка в нем в течение 30-60 мин после. Максимальный эффект отмечен при комбинации этих ванн. В этом случае писцин не дает полностью развиться стресс-реакции, сдерживая изменения таких лабильных параметров, как содержание гемоглобина в слизи, глюкозы в крови и СГЭ.

4.3. Испытание писцина с цепью коррекциии стресса у рыб

Антистрессовое действие писцина проверяли на рыбах при хендлинге и транспортировке в производственных условиях.

Результаты экспериментов по коррекции стресс-реакции при хендлинге на молоди ленского осетра показали, что обработка писцином скорректировала стресс-реакцию и не привела к увеличению уровня глюкозы, как это произошло у необработанной рыбы. Кроме этого, число особей с высоким содержанием гемоглобина в слизи (от 80 до 200 эр./мкл) снижается с 33 до 20%.

Аналогичный опыт был проведен на молоди атлантического лосося средней массой 18 г Результаты, полученные после обработки одной из групп рыб писцином

после действия хендлинга, показали, что препарат приводит к снижению числа рыб с уровнем гемоглобина в слизи более 80 эр./мкл с 62 до 24%.

Проведена оценка антистрессового эффекта писцина на молоди каспийского лосося средней массой 20 г после хендлинга и имитации транспортировки. На основании однофакторного кластерного анализа полученного материала по уровню глюкозы в крови среди контрольной группы (интактная рыба) доля стресс-устойчивых рыб составляла 39%. Под воздействием писцина число таких рыб возросло до 74%.

Двухгодовиков пестрого толстолобика средней массой 350 г весной сразу после разгрузки зимовала подвергали транспортировке в течение 1 ч, после чего рыба была пересажена в проточные бассейны. В одну из транспортных емкостей был внесен писцин (опыт), а в другую нет (контроль). Результаты оценки стресс-реакции показали, что в крови рыб контрольной группы были отмечены выше физиологической нормы уровень глюкозы, СГЭ и СОЭ, а в слизи снизилось количество кетонов и возросло содержание белка и гемоглобина. У опытных рыб часовое воздействие писцина не уменьшило уровень глюкозы в крови - основного индикатора стресса. Однако другие показатели в крови - СГЭ и СОЭ, а в слизи - кетоны и белок достоверно отличались от контрольной группы, что свидетельствует о восприятии рыбой препарата. Исходя из полученных результатов, был сделан вывод о том, что препарат не способен оказывать требуемого антистрессового эффекта на фоне уже сформировавшегося сильного стресса у пестрого толстолобика. Вероятно, у такой стресс-реактивной рыбы обработку писцином необходимо проводить не только после, но и до воздействия стрессора, тогда будет более значим седативный эффект.

Проведены испытания действия писцина на радужной форели средней массой 120 г при хендлинге и имитации транспортировки. В результате был выявлен высокий индивидуальный разброс изучаемых физиолого-биохимических показателей даже в контрольной группе рыб. Проведенный кластерный и однофакторный дисперсионный анализ массива данных по трем основным переменным (гемоглобину в слизи, глюкозе и СГЭ в крови) показал, что в данной популяции форели около 55% рыб являются стресс-реактивными, а остальные 45% - стресс-устойчивыми. При использовании писцина доля стресс-устойчивых возросла до 70%, то есть 25%

стресс-реактивных особей под влиянием препарата скорректировали стресс-реакцию.

Таким образом, выявлена хорошо выраженная коррекция стресса под воздействием писцина, которая наиболее значимо проявилась в изменении концентрации глюкозы в крови и снижении процента рыб с гемоглобином в слизи. Это свидетельствует об эффективности препарата и перспективе его применения в производственных условиях при проведении биотехнологических манипуляций с выращиваемой рыбой.

ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ ПИСЦИНА НА ОБЩУЮ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ РЫБ

На заводах Северо-Запада России к заболеванию, сопряженному со стрессом относится "некроз спинного плавника", вызываемый Р1ауоЬааепит «р., Р1. ациаИИ, Р вгеуе, а также и другими бактериями (Сердюк, 1995). В эксперименте, проведенном на Умбском рыбзаводе в одном из производственных бассейнов, молодь атлантического лосося сразу после сортировки обработали писцином. Дальнейшее наблюдение за этой рыбой (в течение 15 дней) показало, что поражение "некрозом спинного плавника" у обработанных рыб было значительно (на 37%) меньше, чем у необработанных (рис. 2).

Известно, что при снижении уровня неспецифической резистентности после стрессовых нагрузок у таких стресс-реактивных видов рыб, как толстолобики, са-пролегниевые грибы (&хрго1еф1ш1е*•) поражают травмированные участки тела. Заболевание может протекать длительно, особенно при низкой температуре, вызывая повышенную гибель рыбы (Головина и др., 2003).

В экспериментальных целях одну из 2-х групп двухлеток пестрого толстолобика после транспортировки в течение 20 мин обработали писцином. Результаты наблюдения за рыбой показали, что уровень поражения сапролегниозом составил у необработанных 48 %, а у обработанных писцином - 25 % (рис. 2).

Атлантический лосось Пестрый толстолобик □ контроль ■ опыт

Рис. 2. Влияние писцина на восприимчивость рыб к заболеваниям ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенной работы нами дана оценка стресс-реактивности рыб - основных объектов аквакультуры по отношению к наиболее часто встречаемым при рыборазведении стресс-факторам. Отработан способ коррекции негативных последствий стресса с помощью биологически активного препарата "Писцин".

При экспресс-диагностике стресса в наружной слизи рыб с помощью мульти-стиксов было выявлено 10 биохимических параметров: глюкоза, билирубин, кетоны, удельный вес, гемоглобин, рН, белок, уробилиноген, нитриты, лейкоциты. Анализ собранного материала по обследованию интактных групп рыб показал, что слизь разных видов содержит различный уровень гемоглобина, белка, кетонов, глюкозы, билирубина и имеет различный рН и удельную массу. Такие параметры, как уробилиноген, нитриты, лейкоциты оказались мало информативными и в наших исследованиях для оценки стресса не использовались. У некоторых видов обнаружены возрастные колебания ряда биохимических параметров. Так, например, у радужной форели отмечено возрастание гемоглобина в слизи с 10 у сеголетков до 80 эр./мкл у двухлеток. У ленского осетра билирубин в слизи появляется только к концу первого года выращивания и достаточно стабилен у двухлетков.

При сравнительной оценке стресс-реактивности рыб были взяты результаты экспериментов по тестированию хендлингом. Наиболее информативными из показателей слизи оказались изменения гемоглобина, кетонов и белка. При этом у толстолобика эти отличия от интактных рыб были достоверны по всем трем показателям, у карпа - по гемоглобину и белку, у форели только по кетонам, у осетровых по белку и билирубину.

Результаты проведенного тестирования хендлингом позволили распределить рыб в зависимости от их стресс-устойчивости в следующий ряд (от менее устойчивых к более устойчивым): пестрый толстолобик —» атлантический лосось (семга) -* ленский осетр—» каспийский лосось (кумжа) —> радужная форель —> карп.

Для коррекции стресс-реакции у рыб проведено испытание антистрессового препарата "Писцин", содержащего активно действующее начало в ультрамалых дозах. Метод биотестирования на инфузориях позволил провести оценку седативной активности писцина и выяснить условия его хранения.

Использование писцина на рыбах с различной стресс-реактивностью (толстолобик и форель) при хендлинге и транспортировке показало принципиальную возможность снятия им негативных последствий стресса. Наибольший антистрессовый эффект достигается при комбинированном внесении препарата в воду до, а затем сразу после стрессирования рыбы.

Таким образом, нами обнаружено отсутствие видоспецифичности биологической реакции на препарат, используемый в ультрамалых дозах. Но было отмечено, что при сильно развитой стресс-реакции (например, облов прудов и последующая транспортировка) у таких стресс-реактивных рыб, как пестрый толстолобик, препарат работает с наименьшим эффектом.

Проведенные исследования позволили выяснить, что выращиваемые в производственных условиях популяции радужной форели, каспийского лосося и семги по своему ответу на стресс-фактор гетерогенны и делятся на две группы: стресс-устойчивые и стресс-реактивные. Под воздействием писцина определенное число стресс-реактивных рыб корректируют свою стресс-реакцию. Разница между долей изначально стресс-устойчивых и долей особей, составивших эту группу при воздей-

ствии писцина, отражает эффект действия препарата. По полученным результатам проведенных экспериментов эффект действия писцина при работе с форелью составил 25%, а в экспериментах с каспийским и атлантическим лососем - 90-100%, то есть среди наиболее реактивных рыб количество особей с пониженной стресс-реацией увеличилось почти в 2 раза.

Применение антистрессового препарата "Писцин" положительным образом отразилось на уровне неспецифической резистентности рыб, в частности на восприимчивости к возбудителям заболеваний, сопряженных со стрессом, таких, как "некроз спинного плавника" (флавобактериоз) и сапролегниоз.

Показана объективность оценки стресс-реакции у рыб экспересс-методом с использованием глюко- и мультистиксов. Их применение позволяет оперативно и прижизненно проводить определение биохимических параметров в слизи и глюкозы крови. На основании проведенных исследований подготовлен проект "Методических указаний по экспресс-диагностике стресса у рыб" и "Рекомендаций по применению писцина для коррекции стресса у рыб в пресноводной аквакультуре".

ВЫВОДЫ

1. Стресс-реакггивность является одним из главных свойств организма рыб, обеспечивающих его адаптацию к условиям окружающей среды. Ее проявление в виде изменений физиолого-биохимических реакций имеет большое значение в диагностике стресса. Диапазон этих изменений отражает индивидуальную стресс-реактивность, что позволяет выделить в выращиваемых популяциях рыб, особенно у радужной форели, каспийского и атлантического лосося, стресс-реактивные и стресс-устойчивые особи.

2. Огработан экспресс-метод диагностики стресса у рыб с использованием глюко- и мультистиксов. Их применение позволяет оперативно и прижизненно проводить определение до 10 биохимических параметров в слизи и глюкозу в крови в течение 2-3 мин. Получена устойчивая корреляция некоторых из них с такими гематологическими показателями, как гематокрит, лейкотрит, СОЭ и СГЭ.

3. У всех исследованных видов рыб при стрессе наблюдается увеличение уровня глюкозы в крови. Из показателей биохимического состава слизи наиболее информативными оказались изменения гемоглобина, кетонов и белка. Колебания по гемоглобину в слизи рыб были в пределах от 25 до 200 эр./мкл, кетонам - от 0,05 до 2,1 ммоль/л, белку - от 0,30 до 3,0 г/л, билирубину - от негатива до ++ у.е. При этом у толстолобика при стрессе достоверно изменяется гемоглобин, белок и кетоны, у карпа - гемоглобин и белок, у форели - кетоны, у осетровых - бедок и билирубин.

4. Действие различных стресс-факторов (хендлинга, гипертермии, гипотермии и гипоксии) вызывает у рыб изменения ряда физиолого-биохимических параметров, характеризующих общий адаптационный синдром. Течение стресс-реакции зависит от силы стрессора и от стресс-реактивности вида. В зависимости от силы воздействия температурного стрессора у карпа и ленского осетра выявлен ряд наиболее значимых ответных реакций в биохимическом составе слизи (гемоглобина и белка) и показателях крови (глюкозы, гематокрита и числа эритроцитов). При этом гипотермию рыбы переносят легче, чем гипертермию. При гипертермии реакция тревоги у ленского осетра проявляется в виде шока, которая у карпа визуально не наблюдается, но выражена в более значительном отклонении от нормы некоторых физио-лого-биохимических показателей, особенно глюкозы в крови.

5. Оценка действия хендлинга на пищевое поведение выявила, что осетры более медленно восстанавливают пищевую активность, чем карп. Полное восстановление пищевой активности у осетра происходит на 4-й день, а у карпа на 2-й. Поэтому целесообразно изменять режим кормления после хендлинга у ленского осетра, снизив суточную норму корма на 80, 70 и 30 % соответственно на 1, 2 и 3-е сутки, а у сеголетков карпа - на 38% в этот день.

6. Для коррекции стресс-реакции рекомендуется биопрепарат "Писцин", используемый в ультрамалых дозах - 10~15 - 10"16. Эффект его действия отмечали при внесении препарата в воду за 20-30 мин до стресса и 60 мин после стресса. Оптимальной схемой его применения является комбинация этих ванн.

7. Выявлено, что антистрессовое влияние писцина положительно отражается на резистентности рыб к заболеваниям, сопряженным со стрессом. Пораженность

атлантического лосося "некрозом спинного плавника", а толстолобика - сапролег-ниозом оказалась в 2 - 2,5 раза ниже после применения писцина.

8. Проведенный анализ стресс-реактивности на хендлинг исследованных объектов аквакультуры позволил распределить рыб в следующий ряд (от менее устойчивых к более устойчивым): пестрый толстолобик —» атлантический лосось (семга) -* ленский осетр —* каспийский лосось —> радужная форель —»карп.

9. Установлено, что активность антистрессового препарата "Писцин" в ходе его хранения изменяется. Выявлено, что хранение в темной стеклянной или пластиковой таре при температуре не выше 20°С гарантирует его активность в течение 2-х месяцев со дня изготовления.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Лебедева Н.Е., Головина H.A., Головин П.П., Головкина Т.В., Романова H.H. Эффект сверхмалых воздействий биопрепарата "Писцин" на рыб // Рыбное хоз-во. Аналит. и реферат, информ. / Сер. Болезни гидробионтов в аквакультуре.-М.:ВНИЭРХ, 2002. - Вып. 4. - С. 1-9.

Головин П.П., Головина H.A., Лебедева Н.Е., Головкина Т.В., Романова H.H. Оценка стресс-устойчивости рыб - объектов аквакультуры // Сб. научных трудов ВНИИПРХ / Актуальные вопросы пресноводной аквакультуры. - М.:Изд-во ВНИРО, 2002. -Вып. 78. - С.171-174.

Романова H.H. Применение антистрессовых препаратов в аквакультуре // Сб. научных трудов ВНИИПРХ / Болезни рыб. - М.: Компания Спутник+, 2004. - Вып. 79.-С.138-147.

Головин П.П., Головина H.A., Романова H.H. Адаптивные физиолого-биохимические реакции рыб на резкие температурные изменения воды / Расширенные мат-лы Всерос. науч.-практ. конф., Борок, 16-18 июля 2003 г. - М., 2004. -С.235-242.

Головин П.П., Головина H.A., Романова H.H. Адаптивные механизмы слизи рыб на резкие температурные изменения воды / Мат-лы Межд. конф. "Современные

проблемы физиологии и биохимии водных организмов" (6-9сентября 2004 г., г. Петрозаводск, Респ. Карелия, Россия). - Петрозаводск, 2004. - С. 35.

Лебедева Н.Е., Головкина Т.В., Головин П.П., Головина H.A., Романова H.H. К вопросу о специфичности биохимического состава слизи у рыб при стрессе / Мат-лы Межд. конф. "Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов" (6-9сентября 2004 г., г. Петрозаводск, Респ. Карелия, Россия). - Петрозаводск, 2004. - С. 79-80.

A.B. Линник, H.A. Головина, H.H. Романова. Физиолого-биохимическая характеристика форели (Oncorhynchus mykiss Wale.) при селекции на стресс-устойчивость (в печати).

>

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 27.04.05 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,31 Печать авторефератов (095) 730-47-74,778-45-60

?

I I,

!

i Í

7

I

i i I

I

%

I

» i

-8777

РНБ Русский фонд

2006-4 14087

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Романова, Наталья Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1.

СТРЕСС-РЕАКТИВНОСТЬ РЫБ, ФАКТОРЫ, ЕЕ ОПРЕДЕЛЯЮЩИЕ, И МЕТОДЫ ЕЕ КОРРЕКЦИИ" обзор литературы).

1.1. Особенности проявления общего адаптационного синдрома (ОАС) и стресс-реактивность рыб.

1.2. Генетические факторы стресс-реактивности.

1.3. Физиологические механизмы стресс-реактивности.

1.3.1. Нейрогуморальные реакции.

1.3.2. Механизм адаптации в системе водно-солевого равновесия.

1.3.3. Механизм адаптаций гематологических реакций.

1.4. Иммунологические механизмы стресс-реактивности.

1.4.1. Неспецифические гуморальные факторы иммунореактивности.

1.4.2. Клеточные факторы иммунореактивности.

1.5. Поведенческие реакции.

1.6. Использование антистрессовых препаратов в аквакультуре.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ.

2.1. Объекты исследований.

2.2. Методы исследований.

2.3. Постановка экспериментов.

2.4. Характеристика антистрессового препарата "Писцин" и тестирование его активности.

2.5. Опытно-производственные испытания писцина.

ГЛАВА 3. ОЦЕНКА СТРЕСС-РЕАКТИВНОСТИ РЫБ.

3.1. Оценка стресс-реакции рыб в зависимости от вида и силы воздействия стресс-факторов.

3.2. Влияние стресс-факторов на пищевую активность рыб.

3.3. Тестирование стресс-устойчивой группы форели.

ГЛАВА 4. ИСПЫТАНИЕ АНТИСТРЕССОВОГО ПРЕПАРАТА "ПИСЦИН" С ЦЕЛЬЮ КОРРЕКЦИИ НЕГАТИВНЫХ ПОСЛЕДСТВИЙ СТРЕССА У РЫБ.

4.1. Отработка условий сохранности биологической активности препарата "Писцин".

4.2. Отработка эффективных методов использования препарата "Писцин" на рыбе.

4.3. Испытание писцина с целью коррекции стресса на молоди рыб.

4.4. Испытание писцина в условиях транспортировки.

ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ ПИСЦИНА НА ОБЩУЮ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ РЫБ.

5.1. Восприимчивость атлантического лосося к "некрозу спинного плавника".

Введение Диссертация по биологии, на тему "Оценка стресс-реактивности рыб-объектов аквакультуры и ее коррекция писцином"

Выращивание рыбы в условиях аквакультуры постоянно сопряжено с влиянием на нее различных факторов среды, к которым ее организм вынужден приспосабливаться. Приспосабливаемость, или способность адаптироваться к меняющейся обстановке, И.И.Шмальгаузен (1968) определил "одним из самых замечательных свойств живых существ".

Свойство адаптирования обладает универсальностью, так как присуще любой саморегулирующейся системе (Ковальский, 1982). Оно обеспечивает нормальное существование животного организма через сохранение постоянства внутренней среды, определяемой как гомеостаз (Казанский, 1977; Серавин, 1977). В процессе эволюции у животных выработалась сложная система адаптивных механизмов, реализация отдельных звеньев которой определяет физиологическую реактивность вида (Хайдарлиу, 1984).

Изучение адаптивных механизмов у рыб особенно актуально в связи с их промышленным выращиванием. Оно позволяет выяснить особенности адаптивных проявлений, определить степень пластичности вида и решать конкретные вопросы акклиматизации рыб как объектов аквакультуры и разрабатывать технологии их выращивания (Виноградов и др., 1986; Багров, 1993).

Комплекс рыбоводных воздействий на рыбу, таких, как облов, сортировка, кратковременное выдерживание на воздухе и пересадка, принято определять обобщающим термином "хендлинг" (handling) (Vedemeyer, 1976), а ответную реакцию организма - "хендлинг-стрессом" (Pickiring, 1981). Негативные последствия хендлинга особенно значимы для стресс-реактивных рыб, например, толстолобиков, потеря которых (прямая или опосредованная) от стресса может составлять от 20 до 50% (Крепис, 1989; Чертихин, 1993).

Поэтому столь важно понять и правильно оценить значение того или иного стрессора или их синергическое действие на рыбу в аквакультуре, однако этого нельзя сделать без комплексного подхода к изучению механизмов адаптации на клеточном, тканевом, органном и организменном уровнях.

Диагностика стресса у рыб направлена на выявление первичных или вторичных его эффектов, которые проявляются в виде отклонений от нормы физиолого-биохимических показателей. Проведение таких исследований достаточно трудоемко и не всегда доступно практикам. Последние достижения биологической и медицинской науки направлены на разработку экспрессивных методов определения биохимических параметров биологических жидкостей. Принцип проведения таких анализов основан на полуколичественном быстро протекающем на твердой фазе методе. На рыбе они впервые были применены для определения биохимического состава слизи (Лебедева, Головкина, 1989 а). Оказалось, что этот метод достаточно прост в применении и отвечает современным требованиям к экспресс-диагностикумам.

В мировой аквакультуре в настоящее время при заболеваниях рыб наблюдается тенденция к использованию биологически активных препаратов, в том числе и в ультрамалых дозах. Универсальность функционального значения ультрамалых доз может служить примером энергетически экономного пути развития биоты (Лебедева и др., 2002, а). В живых организмах в ультрамалых концентрациях проявляют свою активность гормоны, нейромедиаторы, нейропептиды и феромоны (Бурлакова и др., 1990). Одним из таких феромонов - феромон тревоги карповых рыб - был впервые обнаружен в коже гольяна в 1941 г. Карлом фон Фришем (Karl von Frisch) и назван им "Schreck Stoff', т.е. отпугивающим веществом, или веществом испуга, вызывающим стресс (Frisch, 1941). Он проявляет свое отпугивающее действие на рыб в разведении 10"6 от исходного водного экстракта кожи. Дальнейшие исследования показали, что содержащиеся в коже биологически активные соединения обладают широким спектром действия, в частности гормональным и феромональным (Лебедева, Головкина, 1989 б; Лебедева и др., 1993 а; Lebedeva, 1999). В том числе было выявлено, что стресс, вызываемый экстрактом кожи рыб в относительно высоких концентрациях, может корректироваться более низкими (Лебедева, Головкина, 1993). В связи с вышесказанным появилась возможность проверить эффект антистрессового действия одного из таких биологически активных веществ - водорастворимого препарата "Писцин", вырабатываемого по авторской технологии из кожи карпа (Томкевич и др., 1999).

Целью данной работы являлось оценить стресс-реактивность рыб — основных объектов отечественного рыборазведения с использованием принципиально нового для аквакультуры метода экспресс-диагностики стресса и отработать способ коррекции негативных последствий стресса с помощью биологически активного препарата "Писцин".

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Определить стресс-реактивность отдельных видов рыб, выращиваемых в аквакультуре России, по изменениям биохимического состава наружной слизи и крови.

2. Оценить течение общего адаптационного синдрома у рыб в зависимости от вида и силы стрессора.

3. Определить влияние стресс-факторов на пищевую активность рыб.

4. Выяснить воспроизводимость и стабильность седативной активности препарата "Писцин".

5. Испытать антистрессовое действие писцина в условиях транспортировки рыб и при хендлинге (биотехнические манипуляции с рыбой).

6. Оценить влияние писцина на резистентность рыб к некоторым заболеваниям.

7. Провести сравнение стресс-реактивности различных видов рыб на хендлинг.

Научная новизна. Впервые оценена стресс-реактивность рыб на основе использования принципиально нового для аквакультуры полуколичественного метода экспресс-диагностики стресса с помощью мульти- и глюкостиксов. На основе полученных данных определена специфичность изменений наружной слизи у различных видов рыб и их стресс-реактивность.

Впервые получены материалы по коррекции стресс-реакции рыб — основных объектов аквакультуры биологически активным антистрессовым препаратом "Писцин", используемым в ультрамалых дозах.

Практическая значимость. Полученные данные направлены на оценку здоровья рыб в аквакультуре и могут применяться в качестве критерия их стресс-реактивности; разработаны эффективные способы использования антистрессовго препарата "Писцин" для предупреждения и коррекции стресс-реакции у рыб, выращиваемых в аквакультуре. Отработаны физиолого-биохимические параметры, которые могут служить критериями оценки стресс-устойчивости при проведении селекционно-племенных работ. Полученные данные по изменению активности питания после хендлинг-стресса следует учитывать при кормлении молоди осетровых рыб и карпа.

Апробация работы. Основные результаты диссертации были представлены и обсуждались на следующих международных конференциях: "Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб", Борок, 2003; Чтения посвященные памяти профессора В.А. Мусселиус-Богоявленской, Рыбное, 2003; "Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов", Петрозаводск, 2004 и на годовых отчетных сессиях ФГУП "ВНИИПРХ".

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ и 1 в печати.

Автор выражает искреннюю благодарность научному руководителю к.б.н. П.П. Головину, д.б.н. H.A. Головиной, сотрудникам кафедры ихтиологии МГУ к.б.н. Н.Е. Лебедевой и научному сотруднику Т.В. Головкиной за помощь при выполнении работы и ряд ценных замечаний; сотруднику отдела НТЦ "Аквакорм" ФГУП "ВНИИПРХ" к.б.н. A.B. Линнику за совместную работу; специалистам Ардонского и Умского рыбоводных заводов и форелевого хозяйства "Сходня" за предоставленную возможность сбора материала; сотрудникам медицинского центра "Омела" за приготовление и предоставление к испытаниям препарата "Писцин" и всем сотрудникам лаборатории ихтиопатологии ФГУП "ВНИИПРХ" за всестороннюю помощь и поддержку.

Заключение Диссертация по теме "Ихтиология", Романова, Наталья Николаевна

ВЫВОДЫ

1. Стресс-реактивность является одним из главных свойств организма рыб, обеспечивающих его адаптацию к условиям окружающей среды. Ее проявление в виде изменений физиолого-биохимических реакций имеет большое значение в диагностике стрессе. Диапазон этих изменений отражает индивидуальную стресс-реактивность, что позволяет выделить в выращиваемых популяциях рыб, особенно у радужной форели, каспийского лосося и семги стресс-реактивные и стресс-устойчивые особи.

2. Отработан экспресс-метод диагностики стресса у рыб с использованием глюко- и мультистиксов. Их применение позволяет оперативно и прижизненно проводить определение до 10 биохимических параметров в слизи и глюкозу в крови в течение 2-3 мин. Получена устойчивая корреляция некоторых из них с такими гематологическими показателями, как гематокрит, лейкотрит, СОЭ и СГЭ.

3. У всех исследованных видов рыб при стрессе наблюдается увеличение уровня глюкозы в крови. Из показателей биохимического состава слизи наиболее информативными оказались изменения гемоглобина, кетонов и белка. Колебания по гемоглобину в слизи рыб были в пределах от 25 до 200 эр./мкл, кетонам - от 0,05 до 2,1 ммоль/л, белку - от 0,30 до 3,0 г/л, билирубину - от негатива до ++ у.е. При этом у толстолобика при стрессе достоверно изменяются гемоглобин, белок и кетоны, у карпа — гемоглобин и белок, у форели - кетоны, у осетровых - белок и билирубин.

4. Действие различных стресс-факторов (хендлинга, гипертермии, гипотермии и гипоксии) вызывает у рыб изменения ряда физиолого-биохимических параметров, характеризующих общий адаптационный синдром. Течение стресс-реакции зависит от силы стрессора и от стресс-реактивности вида. В зависимости от силы воздействия температурного стрессора у карпа и ленского осетра выявлен ряд наиболее значимых ответных реакций в биохимическом составе слизи (гемоглобина и белка) и показателях крови (глюкозы, гематокрита и числа эритроцитов). При этом гипотермию рыбы переносят легче, чем гипертермию. При гипертермии реакция тревоги у ленского осетра проявляется в виде шока, которая у карпа визуально не наблюдается, но выражена в более значительном отклонении от нормы некоторых физиолого-биохимических показателей, особенно глюкозы в крови.

5. Оценка действия хендлинга на пищевое поведение выявила, что осетры более медленно восстанавливают пищевую активность, чем карп. Полное восстановление пищевой активности у осетра происходит на 4-й день, а у карпа на 2-й. Поэтому целесообразно изменять режим кормления после хендлинга у ленского осетра, снизив суточную норму корма на 80, 70 и 30 %, соответственно на 1, 2 и 3-й сутки, а у сеголетков карпа - на 38% в этот день.

6. Для коррекции стресс-реакции рекомендуется биопрепарат "Писцин", используемый в ультрамалых дозах 10"15 — 10"16. Эффект его действия отмечали при внесении препарата в воду за 20-30 мин до стресса и 60 мин после стресса. Оптимальной схемой его применения является комбинация этих ванн.

7. Выявлено, что антистрессовое влияние писцина положительно отражается на резистентности рыб к заболеваниям, сопряженным со стрессом. Пораженность атлантического лосося "некрозом спинного плавника", а толстолобика - сапролегниозом оказалась в 2 — 2,5 раза ниже после применения писцина.

8. Проведенный анализ стресс-реактивности на хендлинг исследованных объектов аквакультуры позволил распределить рыб в следующий ряд (от менее устойчивых к более устойчивым): пестрый толстолобик —> атлантический лосось (семга) —> ленский осетр —> каспийский лосось —> радужная форель —> карп.

9. Установлено, что активность антистрессового препарата "Писцин" в ходе его хранения изменяется. Выявлено, что хранение в темной стеклянной или пластиковой таре при температуре не выше 20°С активность в течение 2-х месяцев со дня изготовления. гарантирует его I

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Оценка физиологического статуса организма рыб может проводиться по разным критериям. Одним из интегральных показателей состояния организма является состав биологических жидкостей: крови и слизи. Использование гематологических показателей с этой целью у рыб достаточно хорошо изучено (Хамидов и др., 1973; Ellis, 1981; Mazeaud, Mazeaud, 1981; Wedemeyer, McLeay, 1981; Головин, 1984 и др.). Образование наружной слизи у рыб связано, в первую очередь, с выделительной защитной функцией кожи и является одним из важных физиологических процессов. Полифункциональность слизи определяется ее сложным химическим составом. Изменения, происходящие с рыбой под воздействием неблагоприятных факторов, отражаются на биохимическом составе слизи (Лебедева, 2001). Поэтому для экспресс-оценки физиологического статуса организма рыбы нами был применен современный аналитический метод, основанный на использовании плотных носителей (мультистиксов) для определения биохимического состава биологических жидкостей.

Величина физиолого-биохимического ответа рыбы на стресс определяется ее видовой реактивностью. Диапазон индивидуальной реактивности, оценный по сдвигам биохимических параметров в слизи и крови, может служить одним из признаков стресс-устойчивости организма.

В результате проведенной работы нами оценена стресс-реакция рыб — основных объектов аквакультуры на различные стресс-факторы, наиболее часто встречаемые при рыборазведении, и отработан способ коррекции последствий их влияния на физиологическое состояния выращиваемой популяции.

Проведенные исследования показали снижение пищевой активности у культивируемых рыб после хендлинга: у ленского осетра в последующие трое суток и в течение следующего дня у карпа. При организации кормления необходимо учитывать эти моменты, чтобы предотвратить нецелесообразное использование корма. Полученные нами результаты позволяют скорректировать принятые нормы кормления.

В результате проведенных исследований показано, что стресс-реакция у рыб, протекающая на физиолого-биохимическом уровне, зависит от силы стрессора и от стресс-реактивности вида. Так, стресс, вызванный гипертермией, проявляется сильнее, чем при хендлинге. При этом гипотермию рыбы переносят легче гипертермии. Глубина изменений физиолого-биохимических параметров при гипертермии как у карпа, так и у осетра протекает на уровне общего адаптационного синдрома. Только у ленского осетра он проявляется в виде шока, что соответствует стадии тревоги, которая наблюдается у других видов рыб при остром обратимом стрессе (Запруднова, 2001).

Результаты обработки полученного материала показали, что слизь разных видов рыб содержит различный уровень гемоглобина, белка, кетонов, глюкозы, билирубина и имеет различный рН и удельную массу. Видоспецифичность состава слизи проявилась не только в ее количественных характеристиках, но и качественных. Поэтому для диагностики очень важна воспроизводимость метода, однонаправленность реакции исследуемых параметров, чем и отличаются показатели слизи, определяемые стиксами. Контроль стресс-реакции подтверждали данными гематологического анализа и, в первую очередь, изменением глюкозы в крови, содержание которой резко возрастает при стрессе.

Применение метода экспересс-диагностики стресса у рыб разных систематических групп показало, что используемые глюко- и мультистиксы отражают не только специфику биохимического состав слизи рыб, но и реактивность последних. Так, содержание гемоглобина в слизи толстолобика при стрессе повышается в десятки раз значительнее, чем у менее реактивного карпа и некоторых других рыб. С другой стороны, у лососевых рыб (радужная форель) изменения гемоглобина в слизи при стрессе минимальны и мультистиксами практически не улавливаются. В данном случае более информативным оказалось содержание в слизи кетонов, а в крови — глюкозы. Диапазон видовой реактивности, оцененный по сдвигам биохимических параметров слизи и крови, послужил основой для оценки стресс-устойчивости рыб, выращиваемых в аквакультуре.

В табл. 1 приложения 1 приведены обобщающие данные биохимического состава слизи интактных рыб. Оценку стресс-устойчивости рыб проводили, анализируя материал, собранный нами за весь период исследований. У обследованных рыб были выявлены существенные различия в количестве гемоглобина, белка и кетонов в слизи Такие параметры, как уробилиноген, нитриты, лейкоциты в наших исследованиях оказались мало информативными. Межвидовые различия обнаружены по величине удельной массы и рН. Билирубин в слизи появляется только у ленского осетра к концу первого года выращивания и достаточно стабилен у двухлетков. У таких рыб, как карп, форель, толстолобик, обнаружены внутривозрастные колебания ряда биохимических параметров.

При сравнительной оценке стресс-устойчивости рыб были взяты результаты экспериментов по тестированию хендлингом. Обобщены наиболее информативные показатели биохимического состава слизи, которые приведены в табл. 2 приложения 1. Показано, что при хендлинге (технологические нагрузки, манипуляции) наиболее информативными из исследованных показателей слизи оказались изменения гемоглобина, кетонов и белка. Колебания этих параметров у рыб были следующими: по гемоглобину - 25-200 эр./мкл; "кетонам - от 0,05 до 2,1 ммоль/л; белку - 0,30-3,0 г/л. В то же время дифференциация слизи рыб по удельному весу слизи (1,008-1,03 г/см ) и водородным ионам (5,8-7,1) была менее значима.

При этом у толстолобика эти отличия от интактных рыб были достоверны по гемоглобину, белку и кетонам, у карпа -по гемоглобину и белку, у форелн только по кетонам, у осетровых - по белку и билирубину.

Результаты проведенного тестирования хендлингом позволили распределить рыб в зависимости от их стресс-устойчивости в следующий ряд (от менее устойчивых к более устойчивым): пестрый толстолобик —» атлантический лосось —» ленский осетр —> каспийский лосось (кумжа) —» радужная форель —> карп.

Для коррекции стресс-реакции у рыб был испытан антистрессовый препарат "Писцин", содержащий активнодействующее начало в ультрамалых дозах. Основной особенностью действия малых доз является изменение знака их биологической активности. Подобная зависимость выявлена в отношении

1 8 экстракта кожи рыб. Так, в дозах он обладает репеллентной активностью и является стрессором для карповых рыб (Лебедева, Головкина, 1987). В дозе 10"п он начинает проявлять седативное действие, которое достигает максимума при концентрациях 10"15-10"16. Именно эти ультрамалые дозы и были использованы в биопрепарате "Писцин" для обработки рыб. Антистрессовый эффект воздействия препарата отмечен у различных организмов — инфузорий и рыб разных видов и зарегистрирован на клеточном, тканевом и организменном уровнях (Лебедева и др., 1998; Тушмалова и др., 1998).

Работы с антистрессовым препаратом "Писцин" позволили нам определить методом биотестирования его активность, а также условия хранения. Оптимальным является хранение писцина в темной стеклянной или пластиковой таре при температуре не выше 20°С, что гарантирует активность препарата в течение двух месяцев со дня изготовления.

Результаты по использованию писцина, полученные на рыбах с различной стресс-устойчивостью (толстолобик и форель), показали принципиальную возможность снятия у них негативных последствий стресса, вызванного хендлингом и транспортировкой. Наибольший антистрессовый эффект достигается при комбинированном внесении препарата в воду до, а затем сразу после стрессирования рыбы. Таким образом, нами обнаружено отсутствие видоспецифичности биологической реакции на препарат, используемый в ультрамалых дозах. Но было отмечено, что при сильно развитой стресс-реакции (например, при облове прудов) препарат работает с наименьшим эффектом.

Проведенные исследования позволили выяснить, что выращиваемые в производственных условиях популяции радужной форели, каспийского лосося и семги по своему ответу на стресс-фактор гетерогенны и делятся на две группы: стресс-устойчивые и стресс-реактивные. Под воздействием антистрессового препарата "Писцин" определенное число стресс-реактивных рыб может корректировать свою стресс-реакцию (рис.12). Разница между частью изначально стресс-устойчивых и частью особей, составивших эту группу при воздействии писцина, отражает эффект действия препарата. По результатам проведенных экспериментов эффект действия писцина при работе с форелью составил 25%, в эксперименте с каспийским и атлантическим лососем - 90-100%, то есть у последних среди наиболее реактивных рыб количество особей с пониженной стресс-реацией увеличилось почти в 2 раза.

Применение антистрессового препарата "Писцин" позволило не только скорректировать стресс-реакцию у рыб, но и повысить уровень их неспецифической резистентности, в частности по отношению к слабо патогенным возбудителям заболеваний, возникновение которых обычно сопряжено со стрессом.

Показана объективность оценки стресс-реакции у рыб экспресс-методом с использованием глюко- и мультистиксов. Их применение позволяет оперативно и прижизненно проводить определение биохимических параметров в слизи и глюкозе крови. На основании проведенных исследований подготовлен проект "Методических указаний по экспресс-диагностике стресса у рыб" (Приложение 1) и "Рекомендации по применению писцина для коррекции стресса у рыб в пресноводной аквакультуре" (Приложение 2). лосось И! лосось IV

Щ стресс-устойчивые □ стресс-реактивные

Рис. 12. Коррекция стресса у форели, каспийского и атлантического лосося под влиянием писцина ( %)

Примечание: I, ill. V - контрольные группы рыб;

II. IV, VI - опытные группы рыб

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Романова, Наталья Николаевна, Москва

1. Аршавский И.А. Физиологические механизмы и закономерности индивидуального развития. М.: Наука, 1982.- 270 с.

2. Багров A.M. Гаметогенез и половые циклы растительноядных рыб в разных климатических зонах в связи с искусственным воспроизводством // Автореф. док. дис.- М., 1993.-58 с.

3. Балабанова Л.В. Палочковые клетки рыб // Проблемы патологии, иммунологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов / Сб. тезисов докладов Всерос. науч.-практ. конф., 16-18 июля 2003 г. М.: Россельхозакадемия, 2003. — С. 12-13.

4. Балахнин И.А. Протектины беспозвоночных и рыб (обзор) // Гидробиол. журн. 1989. - №3. - Т. 25.-С. 49-55.

5. Баранникова И.А., Боев A.A., Буковская О.С., Ефимова H.A. Гормональная регуляция репродуктивной функции у осетровых и биотехника стимуляции созревания производителей в осетроводстве // Биологические основы осетроводства. М.: Наука, 1983. - С. 22-42.

6. Баранникова И.А., Дюбин В.П., Коваленко Р.И. и др. Способ повышения жизнеспособности рыб и рыбообразных на ранних стадиях развития // Пат. 2115308. № 94027060; заяв. 21.07.94; опубл. 20.07.98. Б.И., 1998. - № 20.

7. Бекина E.H. Реакция организма карпа на негативные воздействия, сопутствующие рыбоводному процессу // Автореф. канд. дисс.: 03.00.10 -ихтиология. Рыбное, 1994. - 27 с.

8. Ботяжова O.A. Нервная регуляция двигательной функции пищеварительного тракта различной экологии и типов питания // Экологическая физиология и биохимия рыб / Тезисы докл. VII Всесоюзной конференции, май 1989, г. Ярославль 1989. -Т. I. - С.56-57.

9. Бурлакова Е.Б., Кондратов A.A., Худяков И.В. Воздействие химических агентов сверхмалых дозах на биологические объекты // Известия АН СССР // Сер. Биологическая -1990. №2. - С. 184-194.

10. Ведемейер Г.А., Мейер Ф.П., Смит JI. Стресс и болезни рыб // М.: Легкая и пищевая пром-сть, 1981. — 127 с.

11. Виноградов В.К., Костылев В.А., Багров A.M. Выращивание производителей и эксплуатация маточных стад растительноядных рыб в прудах с регулируемым температурным режимом // Экспресс-информ. М.: ЦНИИТЭИРХ, 1986.-Вып.1. - С.1-10.

12. Виноградов Г.А. Экологические и возрастные аспекты ионной регуляции у пресноводных рыб // Возрастная и экологическая физиология рыб / Тез. докл. Всероссийского симпозиума,- Борок, 1998,- С. 18-19.

13. Вихман A.A. Иммунофизиологический статус рыб объектов аквакультуры. Автореф. док. дис.: 03.00.10. — ихтиология —М., 1994. - 48 с.

14. Вихман A.A. Системный анализ иммунофизиологической реактивности рыб в условиях аквакультуры. М.: Экспедитор, 1996. - 176 с.

15. Воронин В.Н. Лечебные препараты в зарубежной ихтиопатологии (США)// Рыбн. хоз-во // Сер. Болезни гидробионтов в аквакультуре: Аналит. и реф. информ. М.: ВНИЭРХ, 2001.- Вып.2.- С.35-41.

16. Восилене М.-З., Лебедева Н.Е., Головкина Т.В. Воздействие факторов различной природы на морфологические показатели у радужной форели // Вопр. ихтиологии 1999. - Т. 39, №2. - С. 241 - 246.

17. Галактионов В.Г. Очерки эволюционной иммунологии. М.:Наука, 1995. -256 с.

18. Гаркави Л.Х., Квакина Е.В., Кузьменко Т.С. Антистрессорные реакции и активационная терапия. Реакция активации как путь к здоровью через процессы самоорганизации. М.:ИМЕДИС, 1998. - 656 с.

19. Головин П.П. Стресс- факторы в индустриальном рыбоводстве, их влияние на рыб и меры предупреждения // Автореф. канд. дис.: 03.00.10. ихтиология. — М., 1984.-21 с.

20. Головин П.П. Проблемы стресса у рыб в пресноводной аквакультуре: способы диагностики и коррекции // Сб. науч. тр. ВНИИПРХ / Болезни рыб.-М.: Компания "Спутник+", 2004. Вып. 79. - С.54-61.

21. Головин П.П., Головина H.A. Влияние стресс-факторов на гематологические показатели и зараженность карпа ихтиофтириусами // Рыбное хоз-во / Сер. Рыбохоз. использование внутренних водоемов. М., 1982.- Вып. 4. - С. 1-5.

22. Головина H.A. Морфологический анализ клеток крови карпа в норме и при заболеваниях // Автореф. канд. дис.: 03.00.10. ихтиология. - М., 1977. - 24 с.

23. Головина H.A. Морфофункциональная характеристика крови рыб — объектов аквакультуры // Автореф. док. дис.: 03.00.10. — ихтиология. М., 1996 - 53 с.

24. Головина H.A., Тромбицкий И.Д. Гематология прудовых рыб. Кишинев: Штиинца, 1989.-157 с.

25. Головина H.A., Стрелков Ю.А., Воронин В.Н. и др. Ихтиопатология. Под ред. H.A. Головиной, О.Н. Бауера. М.: Мир, 2003,- 448 с.

26. Горизонтов П.Д., Протасова Т.Н. Роль АКТГ и кортикостероидов в патологии (к проблеме стресса). М., 1968. - 247 с.

27. Грозеску Ю.Н. Биологическая эффективность применения аскорбиновой кислоты и ее аналогов в составе поливитаминного премикса и стартовых комбикормов для осетровых рыб // Автореф. канд. дис. — М., 2000. — 21 с.

28. Гусева Н.В. Иммунный ответ рыб объектов аквакультуры на вакцинацию против бактериальных заболеваний // Автореф. канд. дис.: 03.00.10.-ихтиология - М., 1998. - 25 с.

29. Запруднова P.A. Йонный обмен у леща при остром и хроническом стрессе // Экологическая физиология и биохимия рыб / Тезисы докл. VII Всесоюзной конференции, Ярославль, май 1989 г.- Ярославль, 1989. -Т. I. С. 142-143.

30. Запруднова P.A. Температурные адаптации у леща: изменения в поведении и ионорегуляции // Экологическая физиология и биохимия рыб: Тезисы докл. IX Всероссийской конференции, Ярославль, май 2000 г. Ярославль, 2000. —T. I. -С.112 —115.

31. Запруднова P.A. Обмен и регуляция катионов у пресноводных рыб при стрессе // Автореф. канд. дис.: 03.00.18. Борок, 2003. - 23 с.

32. Запруднова P.A., Мартемьянов В.И. Сезонные изменения концентрации катионов в плазме крови пресноводных рыб // Вопросы ихтиологии. — 1988. -Т.28, №4,-С. 671-676.

33. Зиньковский О.Г., Зиньковский В.Г., Потрохов A.C. Способ анестезии рыб // А. с. 1824123 А 1. № 4916134; заяв. 04.03.91; опубл. 30.06.93. Б.И. № 24.

34. Казанский Б.Н. Системность адаптаций на примере гаметогенеза и размножения рыб // Тез. докл. Всероссийского совещания "Механизмы адаптации живых организмов к влиянию факторов среды", Ленинград, декабрь, 1977 г.- Л., 1977.-С.50.

35. Катасонов В.Я., Черфас Н.Б. Селекция и племенное дело в рыбоводстве. — М.: Агропромиздат, 1986.- 183 с.

36. Кирпичников B.C. Генетические основы селекции рыб. Л.:Наука, 1979. -392 с.

37. Климонов В.О., Никоноров С.И., Витвицкая JI.B. Справочник по применению анестезирующих веществ в рыбоводстве. — М.: ТОО "Мединор", 1995.- 169 с.

38. Ковальский В.В. Геохимическая среда и жизнь.- М.: Наука, 1982. 78 с.

39. Костылев В.А., Головин П.П. Использование анестетика сомбревин в тепловодном хозяйстве: Тез. докл. Всес. совещ. по рыбохоз. использ. тепл. вод (г. Курчатов, октябрь 1990). М., 1990. - С. 254-256.

40. Коштоянц Х.С. Основы сравнительной физиологии. M-JL: АН СССР, 1950. -Т.1.-524 с.

41. Крепис О.И. Профилактика отрицательных последствий стресса у белого толстолобика (Hypophthalmichthys molitrix val.) в процессе искусственного воспроизводства // Автореф. канд. дис. М., 1989.- 21 с.

42. Крючков В.Н. Иммунофизиологические исследования в практике товарного рыбоводства // Первый российско-американский симпозиум "Аквакультура и здоровье рыб": Тез. докл.- 1998.- С. 159-161.

43. Кузьмина В.В. Защитная функция пищеварительного тракта рыб // Вопр. ихтиологии.- 1995.- Т. 35, №1.- С.86-93.

44. Кузьмина В.В., Гарина Д.В. Влияние глюкозы, аминокислот и цитрата натрия на пищевое поведение рыб / Экологическая физиология и биохимия рыб // Тез. докл. IX Веер, конф., Ярославль, май 2000 г. Ярославль, 2000. -Т. I.- С. 162165.

45. Кузьмина О.Ю. Состояние водно-солевого гомеостаза у русского осетра Acipenser guldenstenstadti из Волги и Днепра // Мат-лы Межд. симп. "Экологическая физиология и биохимия осетровых". Ярославль, 1997 а. — С. 53-55.

46. Кузьмина О.Ю.Водно-солевой обмен стерляди из разных районов Волжского бассейна // Мат-лы Межд. симп. "Экологическая физиология и биохимия осетровых". Ярославль, 1997 б. - С. 55-57.

47. Купер Э. Сравнительная иммунология. М.: Мир, 1980. — 422 с.

48. Лав P.M. Химическая биология рыб. М.: Легкая и пищевая пром-сть, 1976. — 349 с.

49. Лебедева Н.Е. Слизь кожи рыб индикаторная система их физиологического состояния // Рыбн. хоз-во / Сер. Болезни гидробионтов в аквакультуре. Аналит. и реф. информ. - М.:ВНИЭРХ, 2001. - Вып.2. - С. 1-23.

50. Лебедева Н.Е., Бурлаков А.Б. Изменение состава водорастворимых белков кожи и слизи речного гольяна под влиянием длительного лабораторного содержания// Вопр. ихтиологии.- 1975. Т. 15,- Вып. 1.- С. 180-182.

51. Лебедева Н.Е., Бурлаков А.Б. Влияние гипофизарных инъекций на изоферментный состав неспецифических эстераз в тканях белого толстолобика // Журн. эволюц. биохимии и физиологии.- 1976. T.XII, №3. - С. 284 - 286.

52. Лебедева Н.Е., Восилене М.-З.Е., Головкина Т.В. Особенности стресса у радужной форели Salmo gairdneri выделение химических сигналов опасности // Вопр. ихтиологии. - 1993. - Т. 33. - №2. - С. 281-284.

53. Лебедева Н.Е., Восилене М.-З., Головкина Т.В. Изменение биохимического состава слизи рыб при воздествии факторов окружающей среды // Докл. РАН.-1998.- Т.362, №5. С.715-717.

54. Лебедева Н.Е., Головкина Т.В. Электрофоретические исследования белков инуклеиновых кислот кожи и слизи у самцов и самок гольяна // Биол. науки. — 1979. №1. - Деп. в ВИНИТИ за №4115-77 от 25.10.1977. — С. 105.

55. Лебедева Н.Е., Головкина Т.В. Состав и некоторые свойства слизи растительноядных рыб как критерий стрессового состояния // Вестник МГУ.-1987.-Сер.16, №4 —С.28-33.

56. Лебедева Н.Е., Головкина Т.В. Поиски возможной коррекции стресса у толстолобика // Вопр. ихтиол. 1993 б. - Т. 33, №4. - С. 556-572.

57. Лебедева Н.Е., Головкина Т.В., Михалева И.И. Особенности действия пептида дельта-сна на поведение и некоторые биохимические показатели у рыб // Журн. эволюцион. биохимии и физиологии. 1993 б. - Т.29, № 1. - С. 16 - 18.

58. Лебедева Н.Е., Головкина Т.В., Эль-Гарабавей М.М. Об оценке раннего стресса у рыб // Рук. деп. Биол. науки. 1985. - №7261-В. - С. 103.

59. Лебедева Н.Е., Головкина Т.В., Эль-Гарабавей М.М. Начальный стресс и изменение содержания электролитов в слизи карпа // Вопр. ихтиологии.- 1988. -Т. 28, вып. 6.-С. 1014- 1022.

60. Лебедева Н.Е., Лебедев В.И., Головкина Т.В. Феромон форели индуктор стресса // Биофизика. - 1994. - Т. 39, вып. 3. - С. 530-533.

61. Лебедева Н.Е., Томкевич М.С., Восилене З.-М., Головкина Т.В. Эффект ультрамалых концентраций действия экстракта кожи рыб на физиологические параметры гидробионтов // Биофизика. 1999. - Т.44, вып. 4. - С. 728-731.

62. Леонов А.Г., Судакова Э.В. Определение эффективности воздействия нового анестетика ВБОЗ на рыб // Сб. науч. трудов / Пути интенсификации рыбоводства и рыболовства в малых озерах северо-запада. — Л.: ГосНИОРХ, 1989. Вып. 292. - С. 82 - 86.

63. Лукьяненко В.И. Иммунобиология рыб, М.: Пищевая пром-ть, 1971. - 364 с.

64. Лукьяненко В.И. Иммунобиология рыб: Врожденный иммунитет. М.: ВО Агропромиздат, 1989.— 271 с.

65. Мартемьянов В.И. Стресс как источник ошибок при эколого-физиологических и биохимических исследованиях рыб // Оценка погрешностей методов гидробиологических и ихтиологических исследований / Труды — Рыбинск, 1982. Вып. 49 (52). - С. 124-134.

66. Мартемьянов В.И., Запруднова P.A. Динамика концентрации электролитов в плазме крови, эритроцитов и мышечной ткани пресноводных рыб при стрессе // Биол. науки. 1982. - №10. - С. 44-49.

67. Мартемьянов В.И., Лиманский В.В., Бекина E.H., Яржомбек A.A., Лапкин

68. B.В. Динамика электролитов в плазме сеголетков карпа при охлаждении // Сб. науч. тр. / Физиология основных объектов рыб-ва. М.: ВНИИПРХ, 1984. -вып. №42. - С. 93-95.

69. Матей В.Е. Гипоталамо-нейросекреторная система и симптомокомплексы отравления рыб при воздействии некоторых токсикантов // Физиология и паразитология пресноводных животных. Л.: Наука, 1979. — С. 60-67.

70. Микряков В.Р. Актуальные вопросы иммунологии рыб // Теоретические аспекты рыбохозяйственных исследований водохранилищ. Л.: Наука, 1978. —1. C. 116-133.

71. Микряков В.Р. Закономерности формирования приобретенного иммунитета у рыб. Рыбинск, 1991. - 152 с.

72. Микряков В.Р., Балабанова Л.В., Заботкина Е.А., Лапирова Т.Б., Попов A.B., Силкина Н.И. Реакция иммунной системы рыб на загрязнение воды токсикантами и закисление среды. М.: Наука, 2001. — 126 с.

73. Микряков В.Р., Лапирова Т.Б. Влияние солей некоторых тяжелых металлов на картину белой крови молоди ленского осетра (Acipenser baeri, Brandt) // Вопр. ихтиологии. 1997 а. - Т.37, №4. - С. 538-542.

74. Микряков В.Р., Лапирова Т.Б. Влияние карбофоса на картину белой крови карпа // Итоги научно-практических работ в ихтиопатологии. 1997 б.- С.72-73.

75. Микулин А.Е., Микодина Е.В., Коуржил Я. и др. Действие анестетиков хинальдина и менокаина на некоторые виды черноморских рыб // Сб. науч. тр.

76. Водные биоресурсы, воспроизводство и экология гидробионтов. М., 1992. — Вып. 66.-С. 123 - 127.

77. Мирзоева JI.M. Новый анестезирующий препарат для рыб // Рыбн. хоз-во / Сер. Рыбохоз. использ. внутр. водоемов. Экспресс-информ.- М.: ВНИЭРХ, 1984 а.-Вып. 2.-С. 18.

78. Мирзоева JI.M. Новый анестезин для рыб (ПНР) // Рыбн. хоз-во / Сер. Рыбохоз. использ. внутр. водоемов. Экспресс-информ. -М.: ВНИЭРХ, 1984 б. -Вып. 9.-С. 18-19.

79. Мирзоева JI.M. Новый анестезирующий препарат для рыб (ЧССР) // Рыбн. хоз-во // Сер. Рыбохоз. использ. внутр. водоемов / Экспресс-информ. — М.: ВНИЭРХ, 1987. Вып. 9. - С. 8-9.

80. Мирзоева JI.M. Новые анестетики в рыбоводстве // Анал. и реф. инфор. / Сер. Болезни гидробионтов в аквакультуре. М.: ВНИЭРХ, 2002. - Вып.1. -С. 20-24.

81. Наточин Ю.В. Проблемы эволюционной физиологии водно-солевого обмена. Л.: Наука, 1984.-40 с.

82. Немова H.H. Свойства и физиологическая роль внутриклеточных протеиназ в тканях рыб И Успехи современной биологии.- 1991. Т. 111, вып. 6. -С. 948-954.

83. Новоженин Н.П. Использование анестезирующих веществ в рыбоводстве // Тр. ВНИИПРХ / Вопр. прудового рыбоводства. М., 1969. T.XVI. - С. 258-266.

84. Остроумова И.Н. Биологические основы кормления рыб. С.-Пб., 2001. -372 с.

85. Петренко Л.А., Куров Н.Г., Скворцова Г.Г. и др. Анестезирующие средство ■для рыб//А. с. №961619 AI; заяв. 11.10.78; опубл. 1982. -Б.И., 1982.-№36.

86. Плященко С.И., Сидоров В.Т. Стрессы у сельскохозяйственных животных. -М.: Агропромиздат, 1987. 192 с.

87. Поленов А.Л. Гипоталамическая нейросекреция. Л.: Наука, 1971. - 159 с.

88. Пурголам Реза, Норузи Могадам Хоссейн // Межд. симпоз. по марикультуре. Краснодар Небуг, 24 - 27 сент., 1995: Тез. докл. - М., 1995 - С. 68-69.

89. Путинцев Н.В. Физиологические и биохимические методы исследования взрослых рыб при токсикологических исследованиях // Методы биотестирования качества водной среды. М.:Изд-во МГУ, 1989. - С. 74-96.

90. Руссель-Юклаф, Сабюро Кюбота, Руссель-Юклаф. Средство для борьбы против стресса и способ борьбы со стрессом у рыб: Пат. 2016512. № 5011375; заяв. 13.02.91; опубл. 30.07.94. Б.И. 1994. - № 14.

91. Рывлина И.В. Биологическое действие и последствие применения анестезирующих веществ при транспортировке рыб // Автореф. канд. дис. — М., 1985.-23 с.

92. Селье Г.Очерки об адаптационном синдроме. М.: Медгиз, I960.- 98 с.

93. Селье Г. Стресс без дистресса. -М.: Прогресс, 1979. 171 с.

94. Серавин Л.Н. Гомеостазис, анастазис и гомеотаксис — механизмы фенотипической адаптации живых систем // Тез. докл. Всерос. совещания "Механизмы адаптации живых организмов к влиянию факторов среды", Ленинград, декабрь, 1977 г.- Л., 1977. С. 122-123.

95. Сердюк A.B. Инфекционные заболевания лососевых рыб северо-запада России // Сб. докл. Всерос. совещ. "Проблемы товарного выращивания лососевых рыб России" Мурманск: ПИНРО, 1995.- С. 84-88.

96. Сидоров B.C., Высоцкая Р.У. Сравнительная биохимия водных животных. -Петрозаводск: Ин-т биол., 1983. 192 с.

97. Смирнов Л.П. Роль липидов и белков в становлении биохимических адаптаций у эктотермных организмов // Автореф. докт. дисс.: 03.00.16 — экология, 03.00.04 биохимия,- Петрозаводск, 2005. — 48 с.

98. Смит Л.С. Введение в физиологию рыб / Сокращ. пер. с англ. В.И. Лапина. — М.: Агропромиздат, 1986. 168 с.

99. Соколов В.Д., Андреева Н.Л. Фармакологическая коррекция стресса // Ветеринария. 1989. - №5. - С. 61-64.

100. Соколов В.Д., Рабинович М.И., Горшков Г.И. и др. Фармакология / Под. Ред. В.Д. Соколова, 2-е изд., испр. и доп.- М.: Колос, 2000. 576 с.

101. Строганов Н.С. Экологическая физиология рыб. М.: Изд-во МГУ, 1962. — 444 с.

102. Судаков К.В. Эмоциональный стресс и артериальная гипертензия // Сер. Терапия. М.:ВНИИМИ., 1976.- 116 с.

103. Темниханов Ю.Д., Клименко О.Н. Участие фагоцитов в иммунном надзоре у рыб /Теоретические и практические аспекты ихтиопатологии // Сб. статей.-Ривнэ, 2003 а.-С. 173-195.

104. Темниханов Ю.Д., Клименко О.Н. Фагоциты индикаторы химических воздействий на рыб // Теоретические и практические аспекты ихтиопатологии / Сб. статей. -Ривнэ, 2003 б.- С. 196-212.

105. Томкевич М.С., Лебедева Н.Е., Головкина Т.В. Препарат антистрессового действия на рыб и способы его изготовления: Пат. 2156571. № 99115483; Заяв. 23.07.1999.-Бюл. №27.

106. Тушмалова H.A., Бурлакова Е.Б., Лебедева Н.Е., Томкевич М.С., Головина Т.В. Поведение до нервных организмов —индикатор эффекта сверхмалых доз // Вестник МГУ.- 1998. Сер. 16, №4. - С. 24 - 26.

107. Чертихин В.Г. Биологические основы формирования и эксплуатации маточных стад, выращивания посадочного материала растительноядных рыб // Автореф. докт. дисс.: 03.00.10.- ихтиология М., 1993. - 61 с.

108. Уголев A.M., Иезуитова H.H., Тимофеева Н.М. Энзиматический барьер тонкой кишки // Физиол. журн.- 1992.- Т.78, №8. — С. 1-20.

109. Устинов Д.А. Стресс-факторы в промышленном животноводстве. М.: Россельхозиздат, 1976. — 166 с.

110. Фонталин JI.H. Проблема происхождения иммунной системы позвоночных животных // Иммунология. 1988.- №3. - С. 5-20.

111. Фурдуй Ф.И. О нейрогенном механизме воздействия гипертиреоза // Здравоохранение.- Кишинев, 1963. №3. - С. 27-30.

112. Фурдуй Ф.И. Регуляция функций щитовидной железы и механизм возникновения неврогенного тиреотоксикоза. Кишинев, 1967. -151 с.

113. Фурдуй Ф.И. Системные механизмы развития адаптации и функциональных нарушений при остром действии на организм стресс-факторов // Стресс, адаптация и функциональные нарушения. Кишинев, 1984. — С. 294-295.

114. Фурдуй Ф.И. Физиологические механизмы стресса и адаптации при остром действие стресс-факторов. Кишинев: Штиинца, 1986. — 239 с.

115. Фурдуй Ф.И., Хайдарлиу С.К., Штирбу Е.И. и др. Стресс как патогенетическая основа развития заболеваний у телят // Научные основы системы ведения животноводства.- Кишинев: Штиинца, 1985.- С. 72-73.

116. Хамидов Д.Х., Гульдиев Б,С., Рахимов Е.Р., Масудова Р.И., Усманова A.C. Система крови как показатель стрессового состояния различных позвоночных животных // Стресс и его патогенетические механизмы / М-лы Всес. симпозиума.-Кишинев, 1973.-С. 134-135.

117. Хайдарлиу С.Х. Функциональная биохимия адаптации.- Кишинев: Штиинца, 1984.-272 с.

118. Шмальгаузен И.И. Организм как единое целое в индивидуальном и историческом развитии. — М.: Наука, 1968. — 327 с.

119. Щербина М.А. Методические указания по физиологической оценке питательности кормов для рыб. М., 1983. - 83 с.

120. Эль-Гарабавей М.М. Эколого-физиологическое значение химических сигналов хищных рыб как стрессоров для мирных карповых// Дис. канд. биол. наук: 03.00.10. ихтиология - М., 1986. - 144 с.

121. Яржомбек А.А. Биологические ресурсы роста рыб.- М.: ВНИРО, 1996. -168 с.

122. Anderson D.P. Immunological indicators: effects of environmental stress on immune protection and disease outbreaks // Amer. Fisheries Society Symh. 1990. -№8.-P. 38-50.

123. Bams R.A. Survival and propensity for homing as affected by presence or absence of locally adapted paternal genes in two transplanted populations of pink salmon (Oncorhynchus gorbuscha) // J. Fish. Res. B. Canada. — 1976. 33, 12. - P. 27162725.

124. Banerjee S., Bhattacharya S. Histopathological changes induced by chronic nonlethal levels of Elson, mercury and ammonia in the small intestine of Channa punctatus (Blooh) // Ecotoxicol. Environ. Safety. 1995. - V. 31. - P. 62 - 68.

125. Biron M., T.J. Benefey. Cortisol, glucose and hematocrit changes during acute stress, cohort sampling and the dial cycle in diploid and triploid brook trout (.Salvelinus fontinalis Mitchill). Fish Physiol. Biochem. 1994.- №13- P. 153-160.

126. Bowler B. Factors influencing genetic control in lakeward migrations of cut-throat trout fry // Trans. Amer. Fich. Soc. 1975. - 104, 3. - P. 474-482.

127. Brannon E.L. Genetic control of migrationg behavior of salmon // Progr. Rep. Of Int. Pacific Salmon Fish. Comm. 1967, № 16. - P. 1 -31.

128. Buddington R.K., Krogdahl A., Bakke Mckellep A.M. The intestines of carnivorous fish: structure and functions and the relation with diet // Acta Physiol. Scand. - 1997. - V. 161. - Suppl. 638. - P. 67 - 80.

129. Carlin B. Salmon tagging experiments // Laxforskingsinstituted meddelande. Stockholm. 1969. - P. 2-4.

130. Casillas E., Smith L.S. Effect of stress on blood coagulation and haematology in rainbow trout (Salmo gairdneri) // J. Fish Biol. 1977. - V. 10, № 5. - P. 481-491.

131. Delahunty G., Tomlison M. Hypoglycemic effects of melatonin in the gold fish, Carassius auratus // Comp. Biochem. physiol.- 1984. -V. 78, №4. P. 871 -875.

132. Donaldson E.M. The pituitary-interrenal axis as an indicator of stress in fish // Stress and Fish (A.B. Pickering, ed.).- L. N.-Y.: Acad. Press, 1981. P. 11-47.

133. Eddy F.B. Effects of stress on osmotic and ionic regulation in fish // Stress and Fish, L. N.-Y.: Acad. Press, 1981.-P. 77-102.

134. Eliot R.S., Clayton F.C., Pieper G.M., Todd G.L. Fed. Proc., 1977. - V. 36, №5. -P. 1719-1724.

135. Elliott J.M. Some Aspects of Thermal Stress on Freshwater Teleosts // Stress and Fish. L. N.-Y.: Acad. Press, 1981. - P. 209 - 245.

136. Ellis A.E. Stress and the modulation of defence mechanisms in fish // Stress and fish / Ed. by A.D.Pickering. L. N-.Y.: Acad. Press, 1981. - P. 147 - 170.

137. Farmer G. J., Ashfield D., Samant H.S. Effects of zinc on juvenile Atlantic salmon Salmon salar: Accute toxicity, food intake, growth and bioaccumulation // Environ Pollut. 1979. - №19. - P. 103 - 117.

138. Kakuta I. Effect of orally administrated bovine lactoferrin on physiological responses offish II Zool. Sci. 1997. - 14, Suppl. - P. 97.

139. Keene J.L., Noakes D, L.G., Moccia K.D., Soto C.G. The efficacy of clove oil as an anesthetic for rainbow trout, Oncorhynchus mykiss (Walbaum) // Aquacult Res. -1998.-29, №2.-P. 89-101.

140. Krae J., Borovicka A. Vysledky vyvoje noveho anestetika pro ryby // Reprodykce a genetika ryb. 1986. - P. 210-214.

141. Hafez E.S.E. Adaptation of domestic animals. Philadelphia, 1968.

142. Mazeaud M.M., Mazeaud F. The role of catecholamines in the stress response of fish // In: Stress and Fish (A.B. Pickering, ed.) L. N.-Y.: Acad. Press, 1981. - P. 4975.

143. Melamed O., Timan B., Avtalion R.R., Noga EJ. Design of a stress model in the hybrid bass (Morone saxatilis x Morone chrysops) U The Israeli Journal of Aquaculture-Bamidgeh, 51 (1). 1999.-P. 10-16.

144. Olivier L., Tottmar O., Winberg S. Elevated dietary intake of L-tryptophan coun • teracts the stress-induced elevation of plasma Cortisol in rainbow trout (O. mykiss) //

145. J. Exp. Biol. 2002. - 205, №23. - P.3679-3687.

146. Pickering A.D., Maccy D.J. Structure, hystochemisty and the effect of handling on the mucous cells of the epidermis of the char, Salvelinus alpinus // J. Fish Biol. -1977. V. 10, №6. - P. 505-515.

147. Pickering A.D., Pottinger T.G., Christie P. Recovery of the brown trout, Salmo ^ trutta L., from acute handling stress: a time course study // J. Fish Biol. - 1982.2.-P. 229-244.

148. Pickering A.D., Pottinger T.G. // J. Fish Biol. 1987. - Vol. 30, № 1 - P. 41-50.

149. Qureshi Irfan Z., Hafeez M.A., Shaikh S.A. Hematological responses of the fish, ^ Cyprinion watsoni, to hypoxia, anemia and hyperthermia // Pakistan J. Zool. — 1995.- 27, №3.-P. 219-227.

150. Raleigh R.F., Champman D.W. Genetic control in lakeward migration of cutthroat trout fry // Trans. Amer. Fish. Soc. 1971. - 100, 1. - P. 33-40.

151. Ramos F., Smith A.C. Jccult haemoglobin in fish skin mucus as an indicator of early stress // J. Fish. Biol. 1976. - №9.- P. 637-641.

152. Ramos F., Smith A.C. C-reactive protein (CRP) test for the detection of earlydiseases fishes // Aquculture. 1978. - V. 14, №3. - P. 261-266.

153. Refstie T., Steine T.A., Gjedrem T. Selection experiments with salmon. II. Proportion of Atlantic salmon smoltifying at one year of age // Aquaculture. — 1977. -10,3.-P. 231-242.

154. Rombout J.H.W.M., Taverne-Thiele A.J., Villena M.I. The gut-associated lymphoid tissu (GALT) of carp (Cyprinus carpio L.): an immunocytochemical % analysis // Develop. Comp. Immun. 1993. - V. 17, №1. - P. 55-56.

155. Roth S.S., Patnaik B.K. Effct of short term starvation stress on the age-related changes in hepatic SDH activity of the Indian murrel, Channa punctatus // Arch. Gerontol, and Geriatr. 1983. - V. 2 , №3. - P. 201 - 209.

156. Selye H. Stress and the general adaptation syndrome // Brit. Med. J. 1950. V. 1. — P. 1383-1392.

157. Schwalme K., Mackay W.C. The influence of exercise — handstress on blood lactate, acidbase, and plasma glucose of northern pike (Esox lucius L.) // Can. J. Zool.- 1985. V. 63, №5 - P. 1125-1129.

158. Schreck C.B. Stress and compensation in Teleostean Fishes: Response the cocial and Phisical Factors // Stress and Fish. London, 1981. - P. 295-321.

159. Smith P.D. Analysis of the hyperosmotic and bath methods for fish vaccination -comparison of uptake of particulate and non-particulate antigens // Dev. Comp. Immunol. 1982. - Suppl. 2. - P. 181-186.

160. Snieszko S.F. The effects of environmental stress on outbreaks of infectious * diseases of fishes II J. Fish. Biol. 1974. - V. 6. - P. 197-208.

161. Takahashi Y., Itami T. Enzymatic properties of partially purifed lysozyme from the skin mucus of carp//Bui. Jap. Soc. Sci. Fish. 1986. -V. 52, №7. - P. 1209-1215.

162. Takahashi Y., Toshiaki I., Kajiwaki T. Bacteriolytic substances in the skin mucus yellowtail // Fish Pathol. 1992. - V. 27, №3. - P. 171-172.

163. Vazzana M., Cammarata M., Cooper E.L., Parrinello N. Confinement stress in sea bass {Dicentrarchus labrax) depresses peritoneal leukocyte cytotoxicity // Aquculture.-2002.-210, №1-4.-P. 231 -243.

164. Vosyliene Milda Zita, Kazlauskiene Nijole. Alterations in fish health state parameters after exposure to different stressors // Acta Zoologica Lituanica. Hydrobiologia. 1999. - V. 9, №2. - P. 83 - 94.

165. Wedekind H., Schreckenbach K. Investigation on the effect of angling on stress response in rainbow trout // Bull. Eur. Ass. Fish Pathol. 2003. - 23 (5). -P.235-240.

166. Wedemeyer G. Physiological response of juvenile coho salmon {Oncorhynchus kisutch) and rainbow Trout (Salmo gairdneri) to Handling and crowding stress in intensive fish culture // J. Fish. Res. Bd Can. 1976. - V.33. - P. 2699 - 2702.

167. Wedemeyer G., McLeay D.G. Methods for determining the tolerance of fishes to environmental stressors // In: Stress and Fish. L. N.-Y.: Acad. Press, 1981.-P. 247-275.