Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние рекомбинантного интерлейкина-2 на физиологические показатели осетровых рыб

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние рекомбинантного интерлейкина-2 на физиологические показатели осетровых рыб"

На правах рукописи

КАСАЕВА СВЕТЛАНА ЮРЬЕВНА

ВЛИЯНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРЛЕЙКИНА-2 НА ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ОСЕТРОВЫХ РЫБ

Специальность 03 00 13 — физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

<0

Астрахань - 2007

003162286

Работа выполнена в Научно-производственном центре по осетроводству «БИОС»

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор, академик РАЕН Теплый Давид Львович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Алтуфьев Юрий Владимирович

доктор биологических наук, профессор Крючков Виктор Николаевич

Ведущая организация: Институт биологии внутренних вод им Папанина РАН, Ярославская область, пос Борок

Защита состоится «6» ноября 2007 г. в 1200 часов на заседании регионального диссертационного совета ДМ 212 009 01 при Астраханском государственном университете по адресу 414000, г Астрахань, пл Шаумяна, 1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Астраханского государственного университета по адресу 414000, г. Астрахань, пл Шаумяна, 1

Автореферат разослан «2» октября 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор биологических наук

Ю В Нестеров

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность. При огромном видовом разнообразии рыб, обитающих в водоемах России, осетровые всегда играли и продолжают играть особенную роль Однако в большинстве районов обитания естественные популяции этих рыб находятся в депрессивном состоянии, отмечается дефицит производителей (Власенко и др., 2002, Корниенко и др, 2005; Кокоза, 2007) Поэтому единственным выходом из создавшейся ситуации является формирование продукционных стад на осетровых рыбоводных заводах (Васильева, 2006). При этом отбор особей в ремонтные группы по половому признаку осуществляют в первые годы выращивания Для этого применяют два метода ранней диагностики пола - ультразвуковое сканирование (Астафьева и др, 2006а, 20066) и визуальная оценка гонад при лапаротомии (Дегтярева, Лозовский, 2004а, 20046)

Кроме того, в последние годы используют метод прижизненного получения икры подрезанием яйцеводов (Подушка, 1986) Все эти методы и технологические решения при выращивании и воспроизводстве осетровых требуют высокой стрессоустойчивости и удовлетворительного физиологического состояния рыбопосадочного материала и производителей Однако стремительный рост антропогенных нагрузок и загрязнение водоемов отрицательно сказывается на физиологическом состоянии гидробионтов (Гераскин и др , 1998; 2004), степени их устойчивости, а также оказывает иммуносупрессивное действие (Валедская и др , 2000, Микряков и др , 2001) При этом, в большей степени страдает клеточное звено иммунитета, в частности отмечают лимфопе-нию Поэтому особую актуальность приобретают исследования физиологического состояния осетровых в условиях аквакультуры и внедрение новых экологически безопасных препаратов, повышающих иммунореактивность и стрессоустойчивость рыб Значительная роль в этих исследованиях должна отводиться поиску биологически активных веществ с конкретно направленным действием на стимуляцию пролиферации лимфоцитов — клеток иммунного надзора

Цель и задачи Целью исследований являлось изучение влияния ре-комбинантного интерлейкина-2 (г1Ь-2 - Ронколейкин) на физиолого-иммунологические и биологические показатели осетровых рыб в условиях стрессовых нагрузок различного генезиса Основные задачи работы

1 Изучить действие г1Ь-2 на физиолого-иммунологические показатели организма осетровых рыб средних ремонтных групп после лапаротомии с биопсией гонад и разработать методы введения препарата, определив его оптимальные терапевтические дозы

2 Исследовать физиолого-иммунологический статус производителей осетровых рыб после подрезания яйцеводов при получении половых продуктов, применяя в качестве иммунореабилитатора г1Ь-2

3 Определить действие г!Ь-2 в различных дозах на организм молоди осетровых при его использовании в качестве профилактического средства при неблагоприятном температурном режиме и воздействии хендлинга

Научная новизна. Впервые получены данные по физиолого-иммунологическому статусу молоди осетровых рыб и их гибридов на первом году жизни при экстремальных воздействиях (неблагоприятный температурный режим, хендлинг) в условиях аквакультуры Нижнего Поволжья Изучено влияние г1Ь-2 в различных дозах на регенерацию тканей, физиолого-иммунологические, биологические показатели и выживаемость средних ремонтных групп, производителей осетровых рыб и их гибридов после хирургического вмешательства Научное обоснование и разработка способов им-мунокоррекции рекомбинантным интерлейкином-2 осетровых рыб

Практическая значимость. На основании проведенных исследований и полученных данных разработаны рекомендации по применению г1Ь-2 для реабилитации осетровых рыб разных возрастных групп после оперативного вмешательства, профилактики заболеваний и стресса у молоди осетровых Основные положения выносимые на защиту:

Результаты исследований влияния рекомбинантного интерлейкина-2 на физиолого-иммунологические и биологические показатели осетровых рыб при различных стрессовых нагрузках на их организм

Апробация работы. В диссертации подведены итоги исследований, выполненных автором в 2005-2007 гг. Материалы работы обсуждались на IV Международной научно-практической конференции «Аквакультура осетровых рыб. достижения и перспективы» (Астрахань, 13-15 марта 2006 г.), Международном симпозиуме «Тепловодная аквакультура и биологическая продуктивность водоемов аридного климата» (Астрахань, 16-18 апреля 2007 г), Международной конференции «Проблемы патологии, иммунологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов-2» (п Борок, ИБВВ им И Д Папанина РАН, 17-20 июля 2007 г). По материалам диссертации опубликовано 10 работ, имеется заявка на выдачу патента на изобретение №2007117985, приоритет от 28 апреля 2007

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературных данных, описания материала и методов исследования, собственных данных, обсуждения результатов исследований, выводов, рекомендаций и списка литературных источников, включающего 306 наименований, в том числе 68 зарубежных авторов Текстовая часть изложена на 136 страницах машинописного текста, иллюстрированного 26 таблицами и 16 рисунками

Материалы и методы исследований

1 Схемы проведения экспериментальных работ

Экспериментальные работы проводили на производственной базе ФГУП НПЦ по осетроводству «БИОС» в 2005-2006 гг

Экспериментальная работа с двухгодовиками гибрида белуга х стерлядь (бестер) (Acipenser mkoljukini) была осуществлена в мае-июне 2005 г Для эксперимента было сформировано 3 группы рыб средней массой 1,65 кг. Лапаротомию проводили по методу Дегтяревой, Лозовского (2004) В группе «опыт-1» 10-ти рыбам вводили в хвостовую вену Ронколейкин в дозе 1000 ед./кг массы тела; группе «опыт-2» 10-ти рыбам - 2000 ед /кг, перед операцией Бестерам третьей группы (11 экз ) после операции вводили окситетрацик-лин пролонгированного действия - нитокс, в дозе 0,1 мл/кг биомассы Все бестеры были индивидуально помечены

Экспериментальная работа с производителями стерляди (Acipenser ruthenus, L) была проведена в мае-июне 2006 г Для эксперимента было сформировано 3 группы рыб, средней массой 1,47 кг Прижизненное получение икры проводили методом С Б Подушки (1986) В группе «опыт-Ь> 10-ти рыбам после проведения операции вводили Ронколейкин в дозе 3000 ед /кг массы тела, группе «опыт-2» 11-ти рыбам — 5000 ед /кг Ронколейкин вводили подкожно, двукратно с интервалом между инъекциями 24 часа, непосредственно после операции Самкам стерляди из группы «контроль» (10 экз ) после операции не вводили каких-либо препаратов Все стерляди имели индивидуальные метки

Экспериментальная работа с молодью гибрида русско-сибирского осетра ранних сроков получения (Acipenser gueldenshtadtiu В х Acipenser baeri. В ) была проведена в июле 2005 г. при неблагоприятном температурном режиме воды (свыше 26,0 °С). Первая группа рыб в количестве 70 экз была обработана Ронколейкином в дозе 200 тыс ед/100л воды, вторая (64 экз) — 300 тыс ед/100 л, третья (84) - 400 тыс ед /100 л, четвертая (98 экз ) - контроль В среднем биомасса рыб составила 6,25 кг на бассейн Экспозиция препарата составляла 30 мин

Экспериментальная работа с молодью белуги (Huso huso. L ) была проведена в сентябре 2006 г Средняя масса молоди составляла 116,21 г при плотности посадки 6,99 кг на бассейн Рыбам первой группы (75 экз ) вносили в корм Ронколейкин трехкратно, с интервалом 48 часов в дозе 2 тыс ед /кг массы тела, второй (75 экз ) — однократно 4 тыс ед /кг массы тела, третьей (75 экз ) однократно в дозе 6 тыс ед /кг массы тела, четвертая (75 экз ) была контролем Всю молодь, каждые 7 дней подвергали хендлингу.

2 Методы физиолого-иммунологических исследований При осмотре бестера оценивали состояние операционного шва, меток, кожных покровов, у производителей стерляди — состояние генитального отверстия Отбор проб крови у рыб во всех экспериментах выполняли прижизненно пункцией хвостовой вены Мазки крови фиксировали раствором Майн-Грюнвальда, докрашивали азур-эозином по Романовскому Подсчет лейкоцитарной формулы проводили по методике Ивановой (1983), форменных элементов крови — в счетной камере Горяева, СОЭ — по методу Панченкова (Ли-манский и др , 1984) Гемоглобин в крови определяли гемоглобинцианидным методом (метод Drabkin) Общий белок в сыворотке крови исследовали биу-ретовым методом (Меншиков, 1973), альбумин по реакции с бромкрезоловым зеленым (Лукичева, Синтебова, 1974), а иммуноглобулины по методике Во-ловенко М А (1975) Лизосомально-катионный тест (ЛКТ) проводили по методу Пигаревского В Е , Мазинга Ю А. (1981)

В качестве основных биологических показателей были приняты выживаемость, относительный среднесуточный прирост (CW, %), CW = [2* (Mt-Mo)/(Mt-Mo)*t ]*100% (Винберг, 1959), коэффициент упитанности по Фульто-ну-К(ф) = 1/М3

Мониторинг физико-химических условий водной среды (Т°С, 02, С02 рН, перманганатная окисляемость, содержание N02", N03", NH^) осуществляли по унифицированным методикам

Полученные данные обрабатывали общепринятыми методами статистического анализа (Лакин, 1980) с использованием пакета программы Microsoft Excel. Достоверность отличий сравниваемых признаков оценивали с помощью st-критерия Стьюдента

Объем собранного и проанализированного материала представлен в таблице 1.

Таблица 1 - Объем собранного и проанализированного материала

Вид рыб Количество рыб (экз) Количество проб крови (шт ) Количество анализов (шт )

Двухгодовики гибрида белуга х стерлядь (бестер) 31 124 1240

Производители стерляди 31 124 1240

Молодь гибрида русский осетр х сибирский осетр 316 144 1440

Молодь белуги 300 240 2400

Итого 678 632 6320

Результаты исследований 1 Влияние гИ-2 на физиологические и биологические показатели средних возрастных категорий гибрида белуга х стерлядь (>бестер) после лапаро-томии с биопсией гонад

В результате ихтиопатологического обследования прооперированных рыб обнаружено, что развитие воспалительного процесса с последующей ре-1енерацией тканей и рубцевания шва у рыб с инъекцией г1Ь-2 происходила быстрее на 10-15 суток, чем у рыб и инъекцией антибиотика (таблица 2).

Доза и наименование Состояние шва в Всего рыб экз Сутки

препарата баллах 15 30 45

г1Ь-2 1000 ед/кг массы тела (Опыт-1) - - 4 8

+ 10 - 3 2

++ 3 2 -

+++ 7 1 -

г1Ь-2 2000 сд /кг массы тела (Опыт-2) - - 5 8

+ 10 - 3 2

++ 4 2 -

+-Н- 6 - -

Океитетрациклин 0,1 мл/кг (Опыт-3) - - 2 5

+ 11 2 1 6

++ 5 5 -

+++ 4 3 -

Примечание— (-) - рубцевание разреза, снятие швов, (+) - гиперемия тканей, отечность, (++) — гиперемия тканей, отечность, выделение сукровицы, (+++) - гиперемия тканей, отечность, выделение сукровицы, некроз тканей

Относительный среднесуточный прирост у особей из групп (опыт-1) и (опыт-2), инъецированных г1Ь-2 был выше на 7,9 и 31,8%, чем у пролеченных антибиотиком рыб, соответственно по группам На 45-е сутки отмечено повышение коэффициента упитанности при достоверных различиях (р<0,05) между второй опытной группой и рыбами с инъекцией окситетрациклина

Концентрация гемоглобина в крови после операции у рыб из всех групп, достоверно (р<0,05) снижалась в течение тридцати дней и повысилась только к концу эксперимента (таблица 3) Таблица 3 — Гематологические показатели бестеров

Вариант Показатели 0 сутки 15 сутки 30 сутки 45 сутки

Опыт 1 НЬ± т(г/л) 68,21 ±5,18* 62,50±5,22 49,27±4,50 68,40±5,77

Опыт 2 93,85±5,19* 68,69±5,74 57,00±2,30 83,09±4,49

Опыт 3 85,77±3,79* 74,26±4,45 59,29±3,87 88,43±9,74

Опыт 1 Ег±т, 10|2л 0,97±0,05* 0,81±0,07* 0,79±0,09 0,86±0,06

Опыт 2 1,07±0,05 1,16±0,10* 0,75±0,08 0,90±0,06

Опыт 3 1,22±0,07* 0,94±0,13* 0,90±0,11 1,ООН),08

Опыт 1 Ilb/Er ±т пкг 60,50±4,38* 80,99±6,68* 65,05±4,15 82,55±8,78

Опыт 2 88,39±4,85* 55,26±6,06* 73,71±6,18 95,03±9,42

Опыт 3 71,77±4,18* 87,99±10,32* 70,74±4,83 92,29± 10,91

Опыт 1 Le±m, 1012л 0,03±0,01 0,21 ±0,03 0,17±0,03 0,07±0,02*

Опыт 2 0,04±0,00 0,23±0,04* 0,16±0,05 0,07±0,01*

Опыт 3 0,04±0,01 0,16±0,01* 0,21 ±0,06 0,14±0,05*

Примечание - (*) - различия достоверны (р <0,05)

Компенсация гемоглобина после операционной кровопотери происходила различными путями у групп 1 и 3 на фоне снижения общего числа эритроцитов увеличивался НЬ в одном эритроците, а у группы рыб, инъецированной г1Ь-2 в дозе 2000 ед /кг — за счет увеличения количества эритроцитов в крови на 43,2 и 23,4% относительно опыта-1 и контроля.

На 30-е сутки у этой группы рыб отмечено увеличение концентрации гемоглобина при снижении количества эритроцитов крови

В начале эксперимента у всех рыб была отмечена лейкопения (таблица 3) Впоследствии происходило увеличение абсолютного числа лейкоцитов в первой и второй опытной группе на 700,0 и 575,0%, в то время как у рыб с инъекцией окситетрациклина на 400,0% при р<0,05 На 45 сутки уровень лейкоцитов в крови рыб из группы с антибиотиком превысил в 2,0 раза аналогичные показатели опытных вариантов (р<0,05) При этом СОЭ также на 15-е сутки в группах (опыт-1 и опыт-2) была выше на 29,3 и 21,1%, соответственно по группам, чем в контроле Подобные значения СОЭ у рыб с инъекцией антибиотика зарегистрированы на тридцатые сутки при р<0,05

В послеоперационный период концентрация общего белка в сыворотке крови достоверно снижалась (р<0,05) на 33,4, 20,9, 34,7% в течение тридцати суток у всех групп рыб в основном за счет альбуминовой фракции, соответственно по группам - опыт-1, опыт-2, контроль. Уровень иммуноглобулинов (1ц) увеличивался на 18,6, 22,5, 22,5% соответственно по 1, 2, 3 группам рыб при р<0,05 относительно дооперационных значений Между тем значимых различий между группами не зафиксировано (р>0,05).

Данные таблицы 4 свидетельствуют о перераспределении относительного количества клеток в лейкограмме в сторону нейтрофилии (р<0,05) со сдвигом влево у всех групп оперированных особей

Таблица 4 — Лейкоцитарная формула бестеров (%)

Вариант Сутки Лимфоциты Моноциты Эозино-филы Сегмен-тоядер-ные ней-трофилы Палочко-ядерные нейтрофилы

Опыт-1 0 61,35±1,41* 2Д8±0,34 10,08±0,54 7,71±0,39 17,21±1,01*

Опыт-2 65,20±1,84* 2,ОСЬЮ,41 8,85±0,70 8,90±1,04 15,05±1,76*

Опыт-3 63,36±1,50* 2,18±0,40 9,32±],18 6,73±0,77 18,41±2,17*

Опыт-1 15 40,80±3,83* 4,85±0 40 5,00±0,79 10,55±1,62 38,80±2,91*

Опыт-2 46,95±4,07* 3,40±0,46 5,25±0,90 10,85±1,99 33,55±3,10*

Опыт-3 40,64±3,51 * 3,36±0,33 14,00±3,05 8,77±1,41 33,23±5,00*

Опыт-1 30 58,60±2,81 2,50±0,54 7,65±1,91 7,65±1,77 j 23,60±1,98

Опыт-2 57,75±4,35 3,10±0,71 6,75±1,09 8,35*2,11 24,05±3,18

Опыт-3 49,23±4,93 4,45±0,35 10,68±2,35 9,55±],31 26,09±2,60

Опыт-1 45 64,30±1,64 2,90±0,29 9,90±1,44 8,00±1,74 14,90±1,37

Опыт-2 65,35±1,34* 3,50±0,40* 9,70±1,07 8,40±0,39 13,05±1,12*

Опыт-3 57,27±2,26* 2,27±0,33* 10,27±0,79 5,68±0,95 24,50±2,36*

Примечание - «*» — различия достоверны (р<0,05)

Также у групп 1 и 2 увеличилось содержание моноцитов в 2,1 и 1,7 раза Относительное число эозинофилов, напротив, уменьшилось в 2 и 1,1 раза, а в абсолютных значениях увеличилось в среднем в 3,5 раза У рыб инъецированных окситетрациклином абсолютное количество эозинофилов превысило типичные показатели в 6,0 раз (р<0,05), что, по всей видимости, обусловлено интоксикацией организма, вызванной окситетрациклином

На 30—45 сутки у рыб отмечали профиль крови, имеющий лимфоидный характер, но у рыб 3-й группы зарегистрирована стабильная эозинофилия Число эозинофильных гранулоцитов в группе рыб с антибиотиком превышало 2,2 раза при (р<0,05) по сравнению с рыбами, которым был введен г1Ь-2 При сопоставлении данных лейкограмм и лейкоцитарного профиля с клинической картиной в операционной области, выявлено, они характеризуют неодинаковую клиническую картину - острое воспаление у рыб, инъецированных г1Ь-2 с последующей ускоренной регенерацией тканей, и вялотекущую воспалительную реакцию у бестеров с инъекцией окситетрациклина

Лизосомально-катионный тест показал, что у рыб из всех экспериментальных групп, происходила супрессия функциональной активности палоч-коядерных нейтрофилов, при этом средний цитохимический коэффициент (СЦК) достоверно снижался (р<0,05) На 15-30 сутки в крови бестеров зарегистрировано увеличение числа незрелых форм гранулоцитов со сниженной способностью к фагоцитозу Так, у групп рыб с дозой Ронколейкина 1 тыс ед /кг и 2 тыс ед /кг при увеличении численности палочкоядерных нейтрофилов в 2,3 и 2,2 раза СЦК снизился в 1,9 и 2,3 раза У бестеров, инъецированных антибиотиком, уровень палочкоядерных нейтрофилов возрос в 1,8 раза, а СЦК уменьшился в 2,9 раза, это, вероятно, обусловлено не только оперативным вмешательством, как в первых двух случаях, но и дополнительным ингибированием окситетрациклином нейтропоэза и его негативным воздействием на формирование гранулоцитов способных к фагоцитозу Обнаружено, что при увеличении количества лимфоцитов в крови увеличивается и СЦК лизосомально-катионных белков нейтрофилов. Коэффициент корреляции между СЦК нейтрофилов и количеством лимфоцитов в крови бестеров составил 0,72 На сорок пятые сутки зарегистрировано некоторое увеличение среднего цитохимического коэффициента у группы особей, инъецированных г1Ь-2 в дозе 2 тыс ед./кг Это свидетельствуют о более раннем восстановлении организма после оперативного вмешательства, в том числе фагоцитарной функции гранулоцитов, по сравнению с рыбами первой и третьей групп.

Таким образом, полученные данные демонстрируют явные преимущества рекомбинантного интерлейкина-2 в сравнении с окситетрациклином пролонгированного действия и, соответственно, цитокинотерапии перед антибио-тикотерапией

2 Влияние г!Ь-2 на физиологические и биологические показатели самок стерляди после операции прижизненного получения половых продуктов

При обследовании прооперированных самок обнаружено, что послеоперационное восстановление у рыб из группы с двукратной дозой 5 тыс ед /кг массы тела происходило в среднем на 7 суток быстрее, чем с дозой 3 тыс ед / кг и у контрольных рыб (таблица 5) Кроме того, в этих группах зарегистрирована гибель отдельных особей

Таблица 5 - Ихтиопатологическое состояние самок стерляди, подвергнутых

хирургическому вмешательству (подрезание яйцеводов)

Вариант Состояние ры- Всего рыб Сутки

бы в баллах экз 0 7 14 21

rIL-2 3 тыс ед /кг х 2 (Опыт-1) - - - 1 5

+ - 2 4 4

-н- 10 6 3 4 -

+++ 4 5 1 -

I м 1 1

rIL-2 5 тыс ед /кг х 2 (Опыт-2) - - 4 9

+ - 3 6 2

++ 11 8 4 1 -

+++ 3 3 -

¡in

- - - 1 4

+ - 1 2 4

Контроль -н- 10 7 4 4 -

+++ 3 2 1 -

1111 1 1

Примечание — «-» — норма, «+» — отечность генитального отверстия, «++» — отечность генитального отверстия, выделение сукровицы, «+++» — гиперемия, отечность генитального отверстия, выделение сукровицы, полостной жидкости, снижение мышечного тонуса,«++++» - гибель

До начала эксперимента все производители стерляди (1, 2, 3 группы), от которых впоследствии получили половые продукты - икру, были неоднородны по средней массе Достоверные различия (р<0,001) зарегистрированы между 1 и 2, 2 и 3 группами. При сопоставлении относительного прироста опытных и контрольной групп рыб в течение всего эксперимента выявлено, что особи из группы проинъецированной rIL-2 в дозе 5 тыс ед /кг массы тела прирост был несколько выше - в 1,2 и 1,3 раза, чем у группы с инъекцией 3 тыс ед / кг массы тела и контрольной соответственно Однако достоверных различий не зарегистрировано

При сравнении данных по коэффициенту упитанности по Фультону К(ф), обнаружено, что у всех экспериментальных рыб на нулевые сутки этот показатель снизился, причем у группы (опыт-1) на 10,4,%, (опыт-2) на 14,6%, а у контрольных рыб на 19,86%, относительно аналогичных показателей до

получения половых продуктов При этом, достоверные изменения (р<0,001) выявлены только у второй опытной группы и контроля Проведенный анализ показал, что в период 0-21 сутки коэффициент упитанности у стерляди повысился на 2,0, 4,8% соответственно по группам — 1, 2, а у контрольной группы рыб оставался без изменений Явные изменения зафиксированы только у второй опытной группы (р<0,05)

Содержание НЬ(г/л) у экспериментальных рыб было нестабильным, снижалось в течение семи суток при р<0,05 и имело тенденцию к повышению только к 14 суткам (таблица 6)

Таблица 6 - Гематологические показатели самок стерляди

Вариант Показатели Сутки

-10 0 7 14

Контроль НЬ± ш(г/л) 86,88±7,75 59,81±3,39 52,39±5,02 57,32±3,79*

Опыт-1 86,38±6,21 72,28±5,09 59,41±1,97 59,64±4,55*

Опыт-2 90,50±3,45 66,70±6,81 60,84±3,19* 68 96±2,31 *

Контроль Ег±т, 1012л 1,10±0,08 1,12±0,05 1,12±0,24 1,22±0,04

Опыт-1 1,06±7,75 0,92±0,06 0,90±0,17 0 88±0,09

Опыт-2 1,11 ±0,04 1,09±0,12 0,95±0,13 0,90±0,11

Контроль НЬ/Ег± т пкг 79,12±5,04 64,75±3,28 63,02±12,11 49,27±4,81 *

Огтыт-1 82,34±8,01 65,67±4,35 57,97±7,91 60,81±5,62*

Опыт-2 82,36±3,29 65,84±6,16 72,12±9,09 80,01 ±8,93*

Контроль Ье±т, (млн/мм3) 0,06±0,02 0,09±0,01 0,16±0,06 0,15±0,05

Опыт-1 0,07±0,01 0,10±0,02 0,20±0,03 0,12±0,02

Опыт-2 0„06±0,02 0,10±0,05 0,21±0,05 0,10±0,02

Примечание - «*» - различия достоверны (р<0,05)

У группы особей, инъецированных г11-2 в дозе 5 тыс ед /кг массы тела, на 14-е сутки зарегистрировано увеличение гемоглобина, статистически достоверное (р>0,05) во времени и по отношению к 1 и контрольной группе рыб на 15,6 и 20,4% соответственно. Численное значение этого показателя у рыб из группы, с инъекцией г1Ь-2 в дозе 5 тыс ед /кг массы тела было выше относительно группы (опыт-1) и контроля на 31,6 и 62, 4% соответственно Это свидетельствует об улучшении состояния рыб из второй опытной группы

При анализе скорости оседания эритроцитов на седьмые сутки, обнаружено. что более высокие значения (р<0,05) были у особей, которым двукратно, подкожно вводили г1Ь-2 в дозе 5 тыс ед /кг массы тела Скорость оседания эритроцитов в крови в этой группе была на 13,1 и 19,1 % выше относительно (опыта-1) и контрольной группы рыб

Выявлено, что после операции концентрация общего белка в сыворотке крови уменьшалась в течение 14 суток на 21,1, 24,2, 18,2%, соответственно по группам (опыт-1), (опыт-2), (контроль), в основном, за счет альбуминовой фракции Доля иммуноглобулинов при этом находилась на одном уровне (р>0,05) и возрастала только у группы рыб (опыт-2) при р<0,05 Также у рыб

из всех групп, отмечено перераспределение процентного соотношения иммуноглобулинов к общему белку на 16,8, 37,2, 18,4 %, соответственно по группам (опыт-1), (опыт-2), контроль Однако только у второй опытной группы повышение процентного соотношения иммуноглобулинов было достоверным (р<0,05) Кроме того, в этот период выявлены различия (р<0,05) между второй опытной группой и контрольной на 7-е и между второй группой и первой опытными группами на 14-е сутки Это свидетельствует об усилении имму-нореактивности у особей опытной группы с дозой г!Ь-2 - 5 тыс ед /кг

В результате микроскопии мазков крови подопытных производителей стерляди зафиксировано, что в начале эксперимента их лейкограммы были относительно идентичны (таблица 7) При этом обнаружено, что 72±6,8% эозинофилов были дегранулированными с сохранением целостности клеточной стенки, что свидетельствует о наличии цитотоксического эффекта

На нулевые сутки наблюдали достоверное (р<0,05) перераспределение лейкограмм в сторону нейтрофилии со сдвигом влево у всех групп оперированных особей

Таблица 7 — Лейкоцитарная формула производителей стерляди (%)

Вариант Сутки Лимфоциты Моноциты Эозинофи-лы Сегмептоя-дерпые ней-трофилы Палочкоя-дерные ней-трофилы

Опыт-1 -10 77,42±2,59 2,33±0,93 1,25±0,48 5,92±1,63 13,08±1,85

Опыт-2 73,85±2,74 1,95±0,37 0,80±0.30 6,15±0,91 17,25±2,28

Контроль 70,01 ±6,77 3,2<Ы),64 1,00±0 22 8,00±1,72 17,79±5,25

Опыт-1 0 61,75±9,40 1,00±0,32 3,25±0,96 5,50±2,04 28,50±8,53

Опыт-2 63,55±6,14 1,45±0,29 4,20±0,82 7,10±1,26 23,70±5,44

Контроль 69,80±ЗД7 1,10±0,24 4,20±1,50 5,40±0,37 19,50±2,80

Опыт-1 7 54,50±6,81 1,00±0,32 2,08±0,59 10,58±2,46 31,83±5,88

Опыт-2 73,05±2,71 1,40±0,24 4,45±0,75 5,35±0,93 15,75±1,87

Контроль 54,40±5,56 3,00±0,32 6,00±1,82 9,60±2,06 27,00±5,87

Опыт-1 14 55,05±5,62 1,15±0,26 3,61±0,45 18,00±5,05 22,2Ш: 1,97

Опыт-2 69,50±1,77 1,35±0,24 4,00±0 54 10,40±1,67 14,75±1,24

Контроль 58,40±3,97 0,90±0,40 6,50±1,41 10,10±1,83 24,10±4,83

Примечание - «*» - различия достоверные (р<0,05)

Однако в абсолютном значении количество нейтрофилов осталось на прежнем уровне, составляя при этом 1,6, 1,6, 0,9 тыс.шт/мкл, соответственно по группам (опыт-1), (опыт-2), контроль Также увеличилось содержание эозинофилов у рыб из первой опытной группы в 2,6 у второй — 5,3, у контрольных в 4,2 раза, а в абсолютном значении количество этих клеток возросло до 3,3, 4,0 и 3,8 тыс шт/мкл соответственно Несмотря на то, что анализ лейкограмм свидетельствует о снижении относительного числа лимфоцитов в первом и во втором опытных вариантах в 1,3 и 1,2 раза, а в контроле оно осталось почти на прежнем уровне, их абсолютное количество возросло на 8,5,

29,9, 30,9% соответственно по группам Абсолютное количество моноцитов в крови несколько снизилось в среднем с 1,5 до 1,1 тыс пгг /мкл

На седьмой день исследований в лейкоцитарной формуле у рыб из группы, проинъецированных г1Ь-2 в дозе 5 тыс.ед/кг происходило увеличение количества лимфоцитов (р<0,05), у особей из первой опытной и контрольной, продолжалось снижение количества лимфоцитов и увеличение числа палочкоядерных, сегментоядерных нейтрофилов При этом абсолютное число лимфоцитов в крови продолжало повышаться, достигая значений — 109,0; 149,8, 89,2 тыс шт/мкл, соответственно по группам рыб" опыт-1, опыт-2, контроль Абсолютное число моноцитов также имело тенденцию к повышению Однако данный показатель у рыб из контрольной группы был на 59,3 и 41,7% выше, чем у производителей стерляди из групп (опыт-1) и (опыт-2), что может свидетельствовать о развитии бактериемии или увеличением продуктов распада в крови К четырнадцатым суткам лейкоцитарная формула сохранялась, при этом отмечено снижение абсолютного числа лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов, палочкоядерных и сегментоядерных форм нейтрофилов практически до первоначальных показателей Однако у рыб из группы контроля зарегистрировано превышение числа эозинофилов в среднем на 43,2%, относительно опытных групп

При проведении лизосомально-катионного теста выявлены, различия (р<0,05) на 7-е и 14-е сутки после введения г!Ь-2 между второй опытной и первой опытной, контрольной группами рыб Коэффициент корреляции между СЦК нейтрофилов и уровнем лимфоцитов в крови производителей стерляди составил - 0,79

Таким образом, при исследовании физиологического состояния производителей стерляди, выявлено, что также как и в случае двухгодовиками бес-тера в крови рыб происходят аналогичные изменения Исключение составляют такие показатели как количество лейкоцитов в крови и лейкоцитарная формула При этом различия касаются только сроков реабилитации, поскольку у стерляди уже на 14 сутки количество лейкоцитов в крови было практически на уровне первоначальных значений Это, скорее всего, обусловлено, тем, что травматизация при подрезании яйцеводов менее существенная, чем лапа-ротомия с биопсией гонад Однако минимальная терапевтическая доза при подкожном введении была выше, чем при внутривенном, что, по-видимому, связано с особенностями организации иммунной системы осетровых рыб, в частности отсутствием подлежащих лимфатических узлов в отличие от теплокровных организмов

3 Влияние г!Ь-2 на физиологические и биологические показатели молоди гибрида русско-сибирского осетра (РО х СО) в условиях неблагоприятного температурного режима

В условиях Юга России на осетровых хозяйствах рыбоводы часто сталкиваются с проблемами, связанными с ухудшением условий выращивания рыб, особенно при высоких температурах воды Поэтому данная работа была приурочена температурам воды свыше оптимальных для выращивания осетровых рыб +25 °С

В начале эксперимента все особи были однородны по средней массе Только на тридцатые сутки отмечены различия (р<0,05) между группами опыт-2, -3 и контролем. При этом относительный прирост особей в опыте-2 был выше на 50,9 %, чем в контроле, на 44,9%, чем в опыте-1, а прирост рыб из группы опыт-3 превосходил контрольных на 44,6 и на 37,9% молодь первой опытной группы

При анализе гематологических показателей осетровых (таблица 8) обнаружено, что между 2-м и I, 3, 4-м вариантами имеются достоверные (р<0,05) различия по количеству лейкоцитов на 15-е сутки исследований

Таблица 8 - Гематологические показатели молоди гибрида РО х СО

Вариант Показатели 0 сутки 15 сутки 30 сутки

контроль НЬ± т(г/л) 51,82±1,78 50,30±3,37 56,62±1,73

Опыт-1 49,25±3,34 47,95±3,05 54,20±1,93

Опыт-2 50,50±2,57 42,65±2,05 53,23±2,53

Опыт-3 51,00±2,88 50,10±3,20 56,98±2,46

контроль Ег±т, 1012л 0,84±0,06* 0,53+0,04* 0,86±0,09

Опыт-1 0,79±0,05* 0,58+0,09* 0,84±0,11

Опыт-2 0,86±0,07* 0,69±0,03 1,12±0,07

Опыт-3 0.81±0 05 0,55+0,03* 0,У0±0,11

контроль НЬ /Ег±т, пкг 65,20±7,12 97,72±6,43 72,96±8,57

Опыт-1 71,07±7,09 87,26±10,25 75,19±10,43

Опыт-2 65,90±5,39 67,67±6,12 50,86±4,20

Опыт-3 75,66±4,43 92,54±5,35 65,90+4,22

контроль СОЭ± т мм/ч 4,50+0,53 5,65+0,17 3,55±0,17

Опыт-1 4,29+0,75 5,95±0,24 3,50±0,13

Опыт-2 4,60+0,72 4,30±0,11 3,55±0,20

Опыт-3 4,91±0,56 5,20±0,13 3,15±0,11

контроль Ье ± т (1012л) 0,05±0,00 0,04+0,00* 0,06±0,02

Опыт-1 0 04+0 01* 0 07±0,02 0.07±0,01

Опыт-2 0,03+0,00* 0,09+0,01* 0,06+0,00

Опыт-3 0,05+0,01* 0,08+0,01* 0,06±0,00

Примечание — «*» - различия достоверны (р<0,05)

Зарегистрировано увеличение данного показателя у рыб из опытных вариантов на 75,0, 200,0, 60,0%, соответственно по группам, опыт-1, опыт-2, опыт-3 Это свидетельствует о напряженности клеточного иммунитета и связано с усилением иммунореактивности благодаря т1Ь-2. В контроле число лейкоцитов снизилось на 20,0%, это, вероятно, обусловлено угнетением лейкопоэза и

негативным воздействием на организм рыб высоких температур водной среды в этот период

Анализ концентрации общего белка и альбуминов не выявил достоверных различий между группами экспериментальных рыб на протяжении всего эксперимента Однако зарегистрированы изменения уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови и соответственно значимые различия (р< 0,05) между контролем и опытом 3, между опытом 1 и 2, на 15-е сутки По-видимому, ин-терлейкин-2 в дозах 300 и 400 тыс ед /100 л оказал наибольшее стимулирующее влияние на синтез иммуноглобулинов

Данные таблицы 9 показывают, что на 15-е сутки зафиксировано перераспределение соотношения в лейкограмме контрольных рыб и группы, обработанной г!Ь-2, в дозе 200 тыс ед /100 л

Таблица 9 — Лейкоцитарная формула молоди гибрида РО х СО (%)

Вариант Сут ки Лимфоциты Моноциты Эозинофилы Сегменто-ядерные нейтрофилы Палочко-ядерные нейтрофилы

Контроль 0 61,00±4,54 2,09±0,39 20,75±2,92* 4,45±0,77 14,09±2,26

Опыт-1 68 95±1,91* 2,11±0,43 9,55+0,99* 5,86±0,83 13,53+0,80

Опыт-2 57,15±5,27* 2,43±0,39 17,50±3,24* 4,49±0,80 11,16±2,35

Опыт-3 69,66±4,31 2,14±0,32 14,33±2,85 5,33±0,61 12,40±1,84

Контроль 15 60,68±1,19 2,24±0,18 14,12±1,92 7,93±1,05 15,03±1,55

Опыт-1 63,75±4,97 2,50±0,49* 10,20±2,20* 6,50±1,80 17,05±3,11

Опыт-2 75,73±1,45 1,35±0,47 6,19±0,79 4,50±1,16 12,23±1,50

Опыт-3 67,79±3,10 2,33±0,53 8,63±1,36 6,83±0,93 14,42±2,21

Контроль 30 65,75±1,38 1,95±0,31 12,85±2,04 9,40±1,20 11,25±1,46

Опыт-1 70,75±2,53 2,30±0,51 7,95±1,49 6,50±1,71 12,50±1,33

Опыт-2 75,65±1,49 1,50±0,46 4,95±0,78* 4,95±1,16 13,35±1,40

Опыт-3 69,96±2 82 2,08±0,35 7,08±1,14 7,33±0,94 13,54±2,21

Примечание - * — различия достоверны (р<0,05), ** — различия достоверны (р<0,001)

В контроле число эозинофилов снизилось на 31,95%, а в опыте-1 уменьшилось количество лимфоцитов на 7,54 %, доля палочкоядерных нейтрофиль-ных гранулоцитов возросла, но изменения последних были в пределах ошибки В абсолютных значениях была отмечена иная картина. Так, у рыб из группы контроля зафиксировано снижение количества лимфоцитов и эозинофилов на 20,3 и 46,1% соответственно, а у молоди из первого опытного варианта, напротив, число лимфоцитов и эозинофилов повысилось на 61,5 и 21,0%, соответственно, по формам клеток При этом у групп рыб, которых обрабатывали иммунокорректором в дозах 300 и 400 тыс ед /100 л отмечена та же тенденция, при которой численность лимфоцитов в крови молоди РО х СО также возросла, причем довольно значительно — в 3,9 и 1,6 раза, относительно первоначальных показателей. Это, очевидно, обусловлено стимуляцией г1Ь-2 лимфопоэза Статистический анализ позволил выявить различия

15

(р<0,001) по числу лимфоцитов между контролем и всеми опытными группами рыб и между вариантами с дозами 200 тысед- и 300 тыс ед/100 л (р<0,05) Кроме того, достоверные различия были между группами особей с дозами 300 тыс ед - и 400 тыс ед/100 л и контролем по количеству моноцитов при р<0,05 и эозинофилов (р<0,001).

На тридцатые сутки эксперимента лейкоцитарная формула у всех групп РО х СО практически не изменилась относительно такового на предыдущем этапе исследований Однако отмечено продолжающееся уменьшение числа эозинофильных гранулоцитов относительно первоначальных показателей (нулевые сутки) в 1,6, 1,2, 3,5, 2,0 раза соответственно по группам контроль, опыт-1, -2, -3, это, видимо, связано, с понижением температуры воды до 22°С Достоверные различия в соотношении лейкоформул подопытных рыб обнаружены между группами рыб с дозой г1Ь-2 300 тыс -, 400 тыс ед /100л и контролем по лимфоцитам, эозинофилам и сегментоядерным формам нейтрофи-лов Численность моноцитов в как относительном, так и в абсолютных показателях практически сохранялась на протяжении всего эксперимента у всех групп рыб

В начале экспериментальных работ у рыб всех групп обнаружено довольно низкое содержание лизосомально-катионных белков в палочкоядер-ных нейтрофилах (0,55 — 0,60 у е ) На пятнадцатые сутки СЦК у рыб из опытных групп несколько повысился, но при этом достоверных временных различий не выявлено У контрольных особей, наоборот, имел тенденцию к уменьшению Это происходило на фоне увеличения доли палочкоядерных нейтрофилов На тридцатые сутки эксперимента у групп рыб, обработанных г1Ь-2 в разных дозах, отмечено увеличение числа клеток, содержащих большое количество катионных белков. Так, у групп рыб с дозами препарата - 200 тысед, 300 тьгс.ед и 400 тысед/100 л при численности ПЯН - 12,5±1,3, 13,54±1,4 и 13,54±2,2%, СЦК лизосомально-катионных белков повысился в 1,2, 1,3, 1,1 раза соответственно, относительно предыдущего исследования Контрольная группа (р<0,05) отличалась более низкими показателями При анализе корреляционной зависимости коэффициент корреляции составил -0,33, что говорит о слабой связи, это, вероятно, обусловлено, тем, что у рыб отсутствовал патологический процесс.

4 Влияние г!Ь-2 на физиологические и биологические показатели молоди белуги в условиях систематического хендлинга

В результате изучения динамики размерно-весовых показателей молоди белуги, находящейся под воздействием регулярного хендлинга, обнаружено отставание рыб группы контроля по средней массе и длине на 6,22 % и 8,73% соответственно по показателям от особей группы 3 При этом различия между контролем и опытом 3 были достоверны при р<0,05 Также отличалась

на 9,88% от третьей опытной группы рыб по средней массе молодь из первой опытной с дозой Ронколейкина - 2 тыс ед /кг массы тела с трехкратной дачей препарата в корм. При детальном изучении данных процессов обнаружено, что в период с 14 по 21 сутки отмечено снижение темпа роста у особей из всех групп Периоды усиления и снижения относительного прироста у рыб связаны с тем, что накопление массы чередуется с ростом в длину Причем характер изменений может свидетельствовать о состоянии организма рыб Так, контрольные рыбы имели самые низкие показатели с 14 по 28 сутки эксперимента В этот же период у этой молоди наблюдали покраснение брюшных жучек Это, вероятно, связано с тем, что эта молодь была больше подвержена стрессу в отличие от молоди из опытных вариантов Кроме того, в период с 14 по 21 сутки отмечено, что молодь белуги из опыта-1 в среднем росла интенсивнее на 41,88% относительно контрольного, второго и третьего опытного вариантов Это, по-видимому, обусловлено пролонгированным действия г1Ь-2 в низких дозах при многократном, пероральном введении препарата. Однако при анализе коэффициента упитанности (К(ф)) особых различий между группами не зарегистрировано

Данные таблицы 10 свидетельствуют, что под воздействием контактного стресса в крови всей молоди белуги, участвующей в эксперименте, происходили достоверные изменения ряда гематологических показателей в течение всего периода эксперимента

Таблица 10 - Гематологические показатели молоди белуги

Вариант Показатели 0 сутки 7 сутки 14 сутки 21 сутки 28 сутки

Контроль НЪ±т г/л 41,55±0,86 51,39±1,87 51,05±1,50 48,79±1,57 45,15±1,47

Опыт-1 43,44±1,08 50,74±2,43 57,77±4,84 54,37±1,91 45,32±1,33

Опыт-2 43,47±0,92 49,08±1,55 53,20±1,52 50,99±3,42 41,68±2,04

Опыт-3 41,51 ±0,97 45,27±1,89 44,83±4,55 47,25±2,77 48,17±3,15

Кот роль НЬ/Ег± т ПК1 57,30±3,61 77,27±5,19* 68,38±5,42 64,07±3,91 85,43±5,83*

Опыт-1 47,49±4,17 60,80±2,54 56,62±4,75 68,56±5,67 77,77±5,04

Опыт-2 50,80±3,91 66,30±4,37 55,38±3,22 65,66±6,69 68,49±5,39*

Опыт-З 54 66±3,99 57,39±5,62* 76,11±7,99 75,85±6,06 69,97±6,36

Кот-роль Ег± т, 1012л 0,81 ±0,04 0,69±0,05 0,79±0,06 0,78±0,04 0,55±0,04*

Опыт-1 0,99±0,07 0,84±0,04 1,04±0,05* 0,83±0,06* 0,61±0,06

Опыт-2 1,02±0,03 0,76±0,04 0,99±0106 0,81±0,05 0,64±0,06

Опыт-З 0,89±0,06 0,84±0,07 0,59±0,03* 0,65±0,05* 0,74±0,08*

Контроль Ье ± т 10,2л 0,13±0,01 0,07±0,01* 0,07±0,00 0,07±0,00* 0,04±0,00

Опыт-1 0,14±0,00 0,12±0,00* 0,07±0,00 0,09±0,13* 0,06±0,00

Опыт-2 0,13±0,00 0,09±0,00 0,07±0,00 0,06±0,00* 0,05±0,00

Опыт-З 0,11 ±0,01 0,09±0,00 0,09±0,00 0,08±0,10 0,07±0,00

Примечание - «*» — различия достоверны при р<0,05

В первые две недели отмечено повышение уровня гемоглобина на 18,60, 24,80, 18,28 %, соответственно в контроле опыт-1, -2, по отношению к первоначальным показателям При этом исключением были особи опыта-3, которым однократно в корм был внесен Ронколейкин в дозе 6 тыс ед /кг массы тела К концу эксперимента у особей из всех групп рыб этот показатель практически был равен первоначальным значениям Однако количество эритроцитов в крови снизилось на 47,27, 62,29, 37,83, 20,27 %, соответственно по группам контроль, опыт-1, опыт-2, опыт-3 Что свидетельствует о процессах истощения депонированного резерва этих клеток под воздействием регулярного хендлинга При этом концентрация гемоглобина в одном эритроците была выше, чем в начале эксперимента на 32,92, 38,93; 25,82; 21,88% соответственно по группам рыб

Абсолютное количество лейкоцитов в крови молоди белуги к концу эксперимента снизилось на 69,23, 57,14, 61,53 и 36,16% соответственно по группам рыб (контроль, опыт-1, опыт-2, опыт-3) Это, вероятно, связано не только с негативным влиянием регулярного стресса, но и со снижением температуры воды При анализе этого показателя на седьмые сутки обнаружено, что количество лейкоцитов у рыб с трехкратной дачей г1Ь-2 в дозе 2 тыс ед/кг и однократной - в дозах 4-6 тыс ед./кг было на 1,7, 1,2 и 1,2 раза выше, чем у контрольных особей (р<0,05). До конца эксперимента эта тенденция сохранялась, в среднем разница между этими группами и контролем составила 25,00%

В результате анализа биохимических показателей сыворотки крови обнаружено, что на 7-28 сутки у особей из всех вариантов зарегистрировано увеличение общего белка в сыворотке крови на 21,08, 25,31, 27,43, 17,36% При этом достоверных различий между группами не выявлено.

На 21 и 28-е сутки зарегистрированы достоверные различия (р<0,05) по уровню иммуноглобулинов и отношению иммуноглобулинов к общему белку между контрольной и первой опытной группой При этом у рыб из группы контроля концентрация иммуноглобулинов в сыворотке крови была в среднем на 18,8% ниже, чем у опытных рыб и на 14,4% относительно первоначальных показателей

Наиболее существенные изменения зарегистрированы со стороны клеточного иммунитета В самом начале эксперимента в лейкоцитарной формуле молоди белуги отмечен ярко выраженный гранулоцитоз, обусловленный эо-зинофилией (таблица 11) В дальнейшем у рыб из опытных групп отмечено уменьшение числа эозинофилов в крови в среднем в 2,06 раза относительно первоначальных показателей, а в абсолютном значении на 168,69, 213,65, 211,54%, соответственно по группам опыт-1, опыт-2, опыт-3 и увеличение абсолютной численности лимфоцитов в среднем в 1,5 раза

Вариант Сутки Лимфоциты Моноциты Эозино-филы Сегменто-ядерные нейтрофилы Палочко-ядерные нейтрофилы

Контроль 0 37,71±2 26 1 64±0 26 27,93±3,50 9,36±1,13 24,36±2,20

Опыт-1 40,56±2,30 1.25±0,21 30,50±2,70 10,56±3,12 16,13±1,98

Опыт-2 38,32±3,45 2,14±0,19 28,12±3,55 6,92±0,98 24,49± 3,65

Опыт-3 40,60±2,66 0,90±0,48 25,60±3,13 10,90+2,21 22,00±2,18

Контроль 7 32,89±2,60* 2,25±0,53 31,86±3,74* 7,11±1,01 25,89±2,62

Опыт-1 48.18±1 61* 3.41±0,48 13,14±0,80* 11,82±1,40 23,45±2,08

Опыт-2 47,55±1,98 4,40±1,02 13,10±1,41* 11,45±1,47 23,50±1,79

Опыт-3 44,70±2,88 4 45±0,76 13,10±1,37* 10,60±0,97 27,15±3,05

Контроль 14 37,75±3,28 0,85±0,25 21,35±1,30 15Д0±1,84 24,95±2,23

Опыт-1 54,09±2,89 4,1810,40 12,45±1,47 9,91±1,68 19,36±2,38

Опыт-2 47,45±2,32 2,25±0,34 17,35^-2,24 12,50^1,08 20,45±1,65

Опыт-3 46.50±2.22 4,45±0,53 15,60±1,29 12,05±1,49 21,40±1,73

Контроль 21 37,70±3,15* 3,95±1,17 23,70±2,94 8,75±1,85 25,90±3,08

Опыт-1 53,23±3,06* 2,27±0,41 12,45±1,18 11,73±1,67 20,32±1,50

Опыт-2 45.80±2,61 3 25±0,63 20,35±3,33 10,40±1,93 20,20±3,26

Опыт-3 41,35±3,67 2,95±0,71 17,65±2,16 12,25±1,96 25,80±2,52

Контроль 28 32,10±2,99* 2,20±0,37 23,75±3,36* 14,50±1,48 27,45±2,33*

Опыт-1 47,41±1,97* 2,55±0,43 16,00±1,69* 14,73±1,27 19,32±1,66*

Опыт-2 44,90±3,35 1,60±0,35 15,00±1,64* 15,65±1,92 22,45±1,12

Опыт-3 47,95±2,42* 2,55±0,32 20,05±2,72 12,10±1,62 17,35±2,35*

Примечание - «*» - различия достоверны (р<0,05)

У контрольных особей абсолютное число эозинофилов снизилось на 58,23%, при р<0,05 При этом обнаружены различия по абсолютному количеству лимфоцитов между группой контроля и опытом-1 при р<0,05.

К двадцать восьмым суткам у рыб из контрольной группы на фоне снижения абсолютного числа клеток иммунного надзора — лимфоцитов на 30,8%, происходило снижение количества других клеток белой крови выполняющих цитотоксические функции, в том числе эозинофилов на 27,8%, сег-ментоядерных нейтрофилов на 50,0%, относительно первоначальных показателей, что свидетельствует о явных иммунологических нарушениях Данные показатели у молоди белуги из опытных групп, также имели тенденцию к снижению, но изменения были менее ощутимы по сравнению с опытом При оценке ЛКТ выявлено, что на протяжении всего эксперимента у особей из контрольной группы СКЦ был нестабилен и к концу эксперимента снизился на 14,7% относительно первоначальных показателей Тогда как у рыб из группы, которым был перорально трехкратно введен г1Ь-2 в дозе 2 тысед/кг массы тела СЦК возрос на 53,4%, у молоди из второй и третьей опытных групп на 45,83 и 53,78 При этом различия между СЦК рыб из кон-

трольного и всех опытных вариантов были существенными (р<0,05) Коэффициент корреляции данного показателя и количеством лимфоцитов в крови составил 0,83

Имму но дефициты у осетровых как в естественной среде обитания, так и при искусственном выращивании способствуют снижению антителообразо-вательной функции организма и его защищенности от внешних воздействий микробного типа и ксенобиотиков Поэтому особый интерес возник при возможности иммунокоррекции осетровых рыб рекомбинантным интерлейки-ном-2.

В результате собственных исследований физиологических показателей бестеров и самок стерляди, подвергнутых операционному вмешательству зарегистрированы изменения в красной и белой крови Показано, что у оперированных бестеров, инъецированных Ронколейкином в дозе 2000 ед /кг массы тела и производителей стерляди - в дозе 5 тыс ед /кг при двукратном введении, отмечено усиление эритропоэза, пролиферации лимфоцитов, восстановление фагоцитарной функции нейтрофильных гранулоцитов.

Выявлено, что различия между сроками репарации и минимальными эффективными дозами препарата в случае с бестерами из первого эксперимента и стерлядью из второго обусловлены техникой введения г1Ь-2, особенностями организации иммунной системы осетровых рыб и степенью повреждения тканей при хирургическом вмешательстве

При исследовании гематологических, физиолого-иммунологических и биологических показателей молоди русско-сибирского осетра, обнаружено, что повышение температуры воды выше оптимальных рыбоводно-нормативных значений сказывается на физиологическом статусе данного гибрида, те происходит ослабление защитных функций, касающихся клеточного иммунитета и существует риск возникновения заболевания у молоди осетровых рыб В результате применения Ронколейкина в качестве иммунокорректора при неблагоприятном температурном режиме отмечено, что г1Ь-2 способствует усилению лейкопэза, особенно в дозе 300 тыс ед./100 л, и в дозах 300 тыс ед/100 л и 400 тыс.ед/100 л оказывает наибольшее стимулирующее влияние на выработку иммуноглобулинов

Проведенные исследования показали, что увеличение времени контакта с рыбой и усложнение манипуляций с молодью белуги способствует снижению концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови рыб, а также, приводит к серьезным нарушениям в лейкопоэзе. Кроме того, снижается способность палочкоядерных нейтрофшюв к фагоцитозу При этом довольно в короткий срок, создаются предпосылки для развития вторичного иммунодефицита и возникновения секундарных заболеваний у рыб Пероралыюе применение Ронколейкина при подготовке рыбы к рыбоводным манипуляциям, способствует коррекции соотношения форменных элементов, сохранению лимфоидного характера крови осетровых рыб Показано, что реакция орга-

20

низма рыб на Ронколейкин судя по физиолого-иммунологическим показателям крови отмечается уже на 7-е сутки от начала терапии, а клинически — в среднем на 10-е, 15-е сутки

Таким образом, апробация рекомбинантного интерлейкина-2 (Ронколейкин) в качестве средства пред- и послеоперационной реабилитации средних ремонтных групп и производителей, а также в качестве иммунокорректо-ра при профилактике стресса у молоди осетровых рыб и их гибридов доказала возможность и необходимость использования данного препарата

ВЫВОДЫ

1 Обнаружено, что на различных этапах рыбоводного процесса существует риск возникновения заболевания рыб, связанный с развитием вторичных иммунодефицитных состояний и ослаблением общего физиологического статуса

2 Рекомбинантный интерлейкин-2, оптимизируя обменные процессы организма, способствует ускорению и значительному соматическому росту у осетровых рыб младших и средних возрастных категорий, в том числе после оперативного вмешательства с целью оценки состояния гонад

3 Рекомбинантный интерлейкин-2 стимулирует гемо- и иммунопоэз, существенно увеличивая рост числа форменных элементов крови и в определенных дозах, выработку иммуноглобулинов

4 Экспериментально установлено позитивное влияние интерлейкина-2 на клеточный иммунитет, в первую очередь на активацию пролиферации лимфоцитов и восстановление фагоцитарной функции нейтрофилов крови осетровых рыб и их гибридов

5 Рекомбинантный интерлейкин-2 способствует активной регенерации тканей после хирургической травматизации и более ранней их репарации у осетровых рыб.

6. Положительный эффект рекомбинантного интерлейкина-2 на организм осетровых рыб проявляется примерно на 7—й день после воздействия с пролонгацией иммунотропного эффекта до 15 — 45 суток в зависимости от дозы, методики введения, причин, определяющих необходимость иммунокоррек-ции

7 Показано, что механизм действия г1Ь-2 на физиологическое состояние осетровых имеет дозозависимый характер и не зависит от видовых особенностей рыб

8 Установлено, что воздействие рекомбинантного интерлейкина-2 на организм осетровых рыб имеет принципиально общие черты и функциональное сходство с его действием на организм теплокровных животных.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПРИМЕНЕНИЮ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРЛЕЙКИНА-2 ДЛЯ ПРЕДОПЕРАЦИОННОЙ ИММУНОКОР-РЕКЦИИ, ПОСЛЕОПЕРАЦИОННОЙ РЕАБИЛИТАЦИИ И ПОВЫШЕНИЮ ЖИЗНЕСТОЙКОСТИ МОЛОДИ ОСЕТРОВЫХ РЫБ И ИХ ГИБРИДОВ В УСЛОВИЯХ АКВАКУЛЬТУРЫ

1 Для предотвращения возникновения осложнений после хирургического вмешательства рекомендовано внутривенное однократное введение г1Ь-2 до операции в дозе 2 тыс ед /кг массы тела рыбы После операции рекомендована двукратная подкожная инъекция препарата с интервалом 24 часа - 5 тыс ед /кг массы тела Перед применением препарат разводят водой для инъекций или стерильным 0,65% физиологическим раствором в объеме, зависящем от размера и массы рыбы от 0,5 до 3,5 мл

2 В качестве иммунокорректора и антистрессанта для повышения жизнестойкости молоди осетровых рыб и их гибридов рекомендовано перо-ральное введение г1Ь-2 Перед применением рассчитанную дозу препарата следует развести физиологическим раствором из расчета 16 мл р-ра на 1 кг корма Введение Ронколейкина в корм осуществляется посредством напыления полученного раствора на гранулу, с последующим обжириванием, однократно за 7 дней до ожидаемого разового стресса в дозе 6 тыс ед /кг массы тела рыбы или трехдневным курсом с интервалом 48 часов в дозе 2 тыс ед / га-массы тела при стрессах, связанных с хендлингом

3 Для молоди до 100 г можно применять получасовые ванны с г11_-2 в дозе 300 тыс ед/100 л или - 400 тыс ед./100 л воды с прекращением водообмена и принудительной оксигенацией Применение данного метода может быть целесообразно в случае отсутствия питания у рыб.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1 Касаева, СЮ К вопросу о необходимости осуществления санитарно-профилактических мероприятий при индустриальном выращивании осетровых рыб / С Ю Касаева, Н В Судакова // Вестник Кабардино-Балкарского университета Серия Биологические науки - В ып 7 -Нальчик Каб-Балк ун-т, 2005 -С 104-107

2 Касаева, СЮ Основные периоды иммунокоррекции молоди гибрида русский осетр х сибирский осетр ранних сроков получения на первом году жизни /СЮ Касаева, О А. Письменная, Е Н Савенкова // Аквавультура осетровых рыб достижения и перспективы развития Материалы докл. IV Между*гар науч пракг конф, 13-15 марта Астрахань. -М Изд-во ВНИРО, 2006 - С 247-251

3 Касаева, С Ю Предоперационная иммунокоррекция гибрида (белуга х стерлядь) в условиях индустриального рыбоводства /СЮ Касаева, Н В Судакова, О А Письменная, Е Н Савенкова, АН Дегтярев // Аквакультура осетровых рыб достижения и перспективы развития Материалы докл IV Междунар науч пракг конф, 13-15 марта. Астрахань — М Изд-во ВНИРО, 2006 - С 254-257

4 Касасна, С Ю К вопросу о проведении цитохимического метода исследования лизосомалыю-катионных белков нейтрофилов осетровых рыб /СЮ Касаева, ЕН Савенкова// Аквакультура oceipoeux рыб достижения и перспективы развития Материалы докл IV Междунар науч практ конф , 13-15 марта Астрахань - М Изд-во ВНИРО, 2006 - С 251-254

5 Касаева, С Ю Влияние рекомбинантного интерлейкина-2 на физиологические показатели гибрида белуга х стерлядь (бестер) после хирургического вмешательства для оценки развития гонад /СЮ Касаева, Е А Федосеева И Вестник Астраханского государственного технического университета № 4(39)/2007, июль-август, Астрахань Изд-во АГТУ, 2007 - С 103-109

6 Касаева, С Ю Физиолого-иммунотогические аспекты сохранения биоразнообразия осетровых рыб/ С Ю Касаева, Е А Федосеева // Естественные и инвазийные процессы формирования биоразнообразия водных и наземных экосистем Тезисы докл мсжд науч конф (г Ростов-на-Дону, 5-8 июня) - Ростоп-п/Д Изд-во ЮНЦ РАН, 2007 -С 152-153

7 Касаева, С Ю Влияние рекомбииашного интерлейкина -2 (rIL-2) на показатели белой крови производителей стерляди после хирургического вмешательства / С Ю Касаева, Н В Судакова, Е Н. Савенкова // Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов - 2 Расширенные мат-лы Межд науч -прак конф Борок — Москва, 17-20 июля 2007 —С 37—40

8 Касаева, С Ю Влияние систематического хендлинга на некоторые физиоло-го-иммунологические показатели молоди белуги (Huso huso) /СЮ Касаева, Е Н Савенкова // Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов — 2 Расширенные мат-лы Межд науч - прак конф Борок — Москва, 17-20 июля 2007 - С 351-354

9 Судакова, Н В Иммунокоррекция русско-сибирского осетра при неблагоприятном температурном режиме / Н В Судакова, С Ю Касаева, О А Письменная, Е Н Савенкова // Тепловодная аквакультура и биологическая продуктивность водоемов аридного комплекса Международный симпозиум, 16-18 апреля 2007 материалы и доклады, АГТУ -Астрахань Изд-во АГТУ, 2007 -С 514-517

10 Федосеева, ЕА Оценка физиологического состояния осетровых рыб при интенсивном выращивании / Е А Федосеева, С Ю Касаева, С С Астафьева // Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов - 2 Расширенные мат-лы Межд науч -прак конф Борок — Москва, 17-20 июля 2007 — С 427-430

11 Касаева С10 , Судакова Н В , Савенкова Е Н , Смирнов М Н , Островский М В Способ реабилитации рыб после хирургического вмешательства — Заявка на выдачу патента на изобретение №2007117985, приоритет от 28 апреля 2007

Издательство ФГУП «КаспНИРХ» 414056, г Астрахань, ул Савушкина, 1 Подписано в печать 27 09 2007 г Тираж 100 экз Заказ 106

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Касаева, Светлана Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Современные представления об организации иммунной системы рыб.

1.1.1 Гуморальные и клеточные факторы иммунитета.

1.1.2 Строение и функционирование гемопоэтических органов.

1.2 Физиолого-иммунологическое состояние осетровых рыб в современных условиях.

1.3 Заболевания осетровых рыб при искусственном выращивании.

1.4 Способы, средства профилактики и лечения рыб.

1.5 Интерлейкин-2 - строение, функционирование, область применения.

ГЛАВА 2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1 Материал и методы исследований.

2.1.1 Схемы проведения экспериментальных работ.

2.1.1.1 Экспериментальная работа с двухгодовиками гибрида белуга х стерлядь (бестер).

2.1.1.2. Экспериментальная работа с производителями стерляди.

2.1.1.3. Экспериментальная работа с молодью гибрида русско-сибирского осетра (РО х СО) ранних сроков получения.

2.1.1.4 Экспериментальная работа с молодью белуги.

2.2.2 Методы гематологических и физиолого-иммунологических исследований.

2.2 Результаты исследований.

2.2.1 Влияние rIL-2 на физиологические и биологические показатели средних возрастных категорий гибрида белуга х стерлядь (бестер) после лапаротомии с биопсией гонад.

2.2.1.1 Результаты ихтиопатологического осмотра бестеров.

2.2.1.2 Биологические показатели бестеров.

2.2.1.3 Гематологические показатели бестеров.

2.2.1.4 Биохимические показатели сыворотки крови бестеров.

2.2.1.5 Показатели клеток белой крови и JIKT бестеров.

2.2.2 Влияние rIL-2 на физиологические и биологические показатели самок стерляди после операции прижизненного получения половых продуктов.

2.2.2.1 Результаты ихтиопатологического обследования самок стерляди.

2.2.2.2 Биологические показатели самок стерляди.

2.2.2.3 Гематологические показатели самок стерляди.

2.2.2.4 Биохимические показатели сыворотки крови самок стерляди.

2.2.2.5 Показатели клеток белой крови и JIKT самок стерляди.

2.2.3 Влияние rIL-2 на физиологические и биологические показатели молоди гибрида русско-сибирского осетра в период неблагоприятного температурного режима.

2.2.3.1 Результаты ихтиопатологического состояния молоди РО х СО.

2.2.3.2 Биологические показатели молоди РО х СО.

2.2.3.3 Гематологические показатели молоди РО х СО.

2.2.3.4 Биохимические показатели сыворотки крови молоди РО х СО.

2.2.3.5 Показатели клеток белой крови и ЖТ молоди РО х СО.

2.2.4 Влияние rIL-2 на физиологические и биологические показатели молоди белуги при использовании препарата в качестве антистрессанта.

2.2.4.1 Биологические показатели молоди белуги.

2.2.4.2 Гематологические показатели молоди белуги.

2.2.4.3 Биохимические показатели сыворотки крови молоди белуги.

2.2.4.4 Показатели клеток белой крови и ЖТ молоди белуги.

ГЛАВА 3 Обсуждение результатов исследований.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние рекомбинантного интерлейкина-2 на физиологические показатели осетровых рыб"

Актуальность. При огромном видовом разнообразии рыб, обитающих в водоемах России, осетровые всегда играли и продолжают играть особенную роль. Однако, в большинстве районов обитания естественные популяции этих рыб находятся в депрессивном состоянии (Абросимова, Васильева, 1999; Зыкова и др., 2000; Власенко и др., 2002; Корниенко и др., 2005; Кокоза, 2007), а некоторые виды - на грани исчезновения. На фоне неуклонного снижения численности всех видов осетровых, поднимающихся на нерестилища, падают и масштабы заводского воспроизводства ввиду дефицита качественных производителей. Поэтому единственным выходом из создавшейся ситуации является формирование продукционных стад на осетровых рыбоводных заводах (Васильева, 2006).

Известны несколько способов формирования репродуктивных стад осетровых - путем выращивания производителей от икры и одомашнивание диких самок и самцов (Подушка, 1999а; Васильева, 2000). При этом успех данных мероприятий во многом зависит от физиологического состояния рыб (Телеуж и др., 2001).

Не менее важной представляется проблема отбора в ремонтные группы особей по половому признаку в первые годы выращивания с целью более ранней отбраковки из стада рыб с затянутым половым развитием, что существенно снижает затраты на их содержание. При этом применяют два метода ранней диагностики пола - ультразвуковое сканирование (Астафьева и др., 2006а; 20066) и визуальная оценка гонад при лапаротомии (Дегтярева, Лозовский, 2002; 2003; 2004а; 20046). Кроме того, в последние годы ввиду нехватки производителей применяют метод прижизненного получения икры (Подушка, 1986). Это осуществляется путем оперативного вмешательства (подрезание яйцеводов). Все эти методы и технологические решения при выращивании и воспроизводстве осетровых требуют высокой стрессоустойчивости и удовлетворительного физиологического состояния рыбопосадочного материала и производителей. Однако, в дельте Волги сохраняется достаточно высокий уровень загрязнения воды различными химическими соединениями. В отличие от предыдущих десятилетий, когда основными загрязняющими веществами были хлороганические соединения и их производные, в настоящее время основными полютантами являются нефтяные углеводороды и некоторые тяжелые металлы (Катунин и др., 1998; 1999; 2001; 2004; Егоров и др., 2004). Стремительный рост антропогенных нагрузок и загрязнение водоемов отрицательно сказывается на физиологическом состоянии гидробионтов (Лукъяненко, Кулик, 1994; Гераскин и др., 1998; 2004), степени их устойчивости, а также оказывает иммуносупрессивное действие (Ва-ледская и др., 2000; Микряков и др.; 2001), приводящее к появлению в популяции рыб с уродствами и иммунодефицитом (Решетников и др., 1999; Моисеенко, Лукин, 1999; Кашулин и др., 1999; Васильев, 2003; Валедская, 2005). Причем, в большей степени страдает клеточное звено иммунитета, в частности отмечается лимфопения. Устойчивость организма к действию некоторых биологических, химических, физических факторов обусловлена деятельностью иммунной и других физиологических систем (Вихман, 1996). При промышленном разведении объектов аквакультуры большое значение для получения товарной продукции приобретает контроль и регулирование резистентности (Микряков, 1989; Вихман, 1996; Касаева, Судакова, 2005, Касаева и др., 2006а). Поэтому особую актуальность приобретают исследования физиологического состояния осетровых в условиях аквакультуры и поиск новых экологически безопасных препаратов, повышающих иммунореактивность и резистентность рыб. Причем значительная роль в этих исследованиях должна отводиться поиску биологически активных веществ с конкретно направленным действием на стимуляцию пролиферации клеток иммунного надзора - лимфоцитов.

Цель и задачи. Целью исследований являлось изучение влияния рекомби-нантного интерлейкина-2 (rIL-2- Ронколейкин) на физиолого-иммунологические и биологические показатели осетровых рыб после лапаротомии с целью оценки развития гонад и подрезания яйцеводов при получении половых продуктов, а также при экстремальных условиях рыбоводного процесса, таким как неблагоприятный температурный режим и хендлинг.

Основные задачи работы:

1. Изучить действие rIL-2 (Ронколейкина) на организм осетровых рыб средних ремонтных групп после лапаротомии с биопсией гонад и разработать методы введения препарата, определив оптимальные терапевтические дозы.

2. Исследовать физиолого-иммунологический статус производителей осетровых рыб после подрезания яйцеводов при получении половых продуктов, применяя в качестве иммунокорректора Ронколейкин.

3. Определить действие Ронколейкина в различных дозах на организм молоди осетровых при его использовании в качестве профилактического средства при неблагоприятном температурном режиме, действии хендлинга.

Научная новизна. Впервые получены данные по физиолого-иммунологическому статусу молоди осетровых рыб и их гибридов на первом году жизни при экстремальных воздействиях (неблагоприятный температурный режим, хендлинг) в условиях аквакультуры Нижнего Поволжья. Впервые разработаны основные этапы иммунокоррекции рекомбинантным интерлейкином-2 осетровых рыб. Впервые изучено влияние rIL-2 в различных дозах на регенерацию тканей, физиолого-иммунологические, биологические показатели и выживаемость средних ремонтных групп, производителей осетровых рыб и их гибридов после хирургического вмешательства.

Практическая значимость. На основании проведенных исследований и полученных данных разработаны рекомендации по применению рекомбинант-ного интерлейкина-2 для реабилитации осетровых рыб разных возрастных групп после оперативного вмешательства, профилактики заболеваний и стресса у молоди осетровых.

Апробация работы. В диссертации подведены итоги исследований, выполненных автором в 2005-2007 гг. Материалы работы обсуждались на IV Международной научно-практической конференции «Аквакультура осетровых рыб: достижения и перспективы» (Астрахань, 13-15 марта 2006г), Международном симпозиуме «Тепловодная аквакультура и биологическая продуктивность водоемов аридного климата» (Астрахань, 16-18 апреля 2007г), Международной конференции «Проблемы патологии, иммунологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов -2» (п. Борок, ИБВВ им. И.Д. Папанина РАН, 17-20 июля 2007 г). По материалам диссертации опубликовано 10 работ, имеется заявка на выдачу патента на изобретения № 2007117985, приоритет от 28 апреля 2007.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературных данных, описания материала и методов исследования, собственных данных, обсуждения результатов исследований, выводов, рекомендаций и списка литературных источников, включающего 306 наименований, в том числе 68 зарубежных авторов. Текстовая часть изложена на 136 страницах машинописного текста, иллюстрированного 26 таблицами и 16 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Касаева, Светлана Юрьевна

выводы

1. На различных этапах рыбоводного процесса обнаружен риск возникновения заболевания рыб, связанный с развитием вторичных иммунодефицитных состояний и ослаблением общего физиологического статуса.

2. Рекомбинантный интерлейкин-2, оптимизируя обменные процессы организма, способствует ускорению и значительному соматическому росту у осетровых рыб младших и средних возрастных категорий, в том числе после оперативного вмешательства с целью оценки состояния гонад.

3. Рекомбинантный интерлейкин-2 стимулирует гемо- и иммунопоэз, существенно увеличивая рост числа форменных элементов крови и в определенных дозах выработку иммуноглобулинов.

4 Экспериментально установлено позитивное влияние интерлейкина -2 на клеточный иммунитет, в первую очередь на активацию пролиферации лимфоцитов и восстановление фагоцитарной функции нейтрофилов крови осетровых рыб и их гибридов.

5. Рекомбинантный интерлейкин-2 способствует активной регенерации тканей осетровых рыб после хирургической травматизации и более ранней их репарации.

6. Положительный эффект рекомбинантного интерлейкина -2 на организм осетровых рыб проявляется примерно на 7-й день после воздействия, с пролонгацией иммунотропного эффекта до 15-45 суток в зависимости от дозы, методики введения и причин, определяющих необходимость иммунокоррекции.

7. Показано, что механизм действия rIL-2 на физиологическое состояние осетровых имеет дозозависимый характер и не зависит от видовых особенностей рыб.

8. Установлено, что воздействие рекомбинантного интерлейкина-2 на организм осетровых рыб имеет принципиально общие черты и функциональное сходство с его действием на организм теплокровных животных.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПРИМЕНЕНИЮ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕР-ЛЕЙКИНА-2 ДЛЯ ПРЕДОПЕРАЦИОННОЙ ИММУНОКОРРЕКЦИИ, ПОСЛЕ ОПЕРАЦИОННОЙ РЕАБИЛИТАЦИИ И ПОВЫШЕНИЮ ЖИЗНЕСТОЙКОСТИ МОЛОДИ ОСЕТРОВЫХ РЫБ И ИХ ГИБРИДОВ В УСЛОВИЯХ АКВА-КУЛЬТУРЫ

1. Для предотвращения возникновения осложнений после хирургического вмешательства рекомендовано внутривенное однократное введение rIL-2 до операции. При этом минимальная терапевтическая доза составляет 2 тыс. ед./кг массы тела рыбы. После операции рекомендована двукратная подкожная инъекция препарата с интервалом 24 часа в минимальной терапевтической дозе - 5 тыс. ед./кг массы тела рыб. Перед применением препарат разводят водой для инъекций или стерильным 0,65% физиологическим раствором в необходимом объеме в зависимости от размера и массы рыбы от 0,5 до 3,5 мл.

2. В качестве иммунокорректора и антистрессанта для повышения жизнестойкости молоди осетровых рыб и их гибридов рекомендовано пероральное введение rIL-2. Перед применением рассчитанную дозу препарата следует развести физиологическим раствором из расчета 16 мл р-ра на 1 кг корма. Введение Ронколейкина в корм осуществляется посредством напыления активного приготовленного раствора на гранулу, с последующим обжириванием; или в пастообразные корма без добавления жира - однократно за 4-7 дней до ожидаемого разового стресса в оптимальной дозе 6. тыс. ед./кг массы тела рыбы или трехдневным курсом с интервалом 48 часов в оптимальной дозе 2 тыс. ед./ кг массы тела при систематических стрессах, связанных с хендлингом.

3. Для молоди до 100 г можно применять получасовые ванны с rIL-2 в дозе 300 тыс.ед./100 л или - 400 тыс.ед./100 л воды с прекращением водообмена и принудительной оксигенацией. Данный метод экономически не выгоден, в связи со значительным расходом препарата, однако его применение может быть целесообразно в случае отсутствия питания у рыб.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Касаева, Светлана Юрьевна, Астрахань

1. Абдурахманов Г.М., Зайцев В.Ф., Ложниченко О.В., Федорова Н.Н., Тихонова Э.Ю., Лепилина И.Н. Развитее жизненноважных органов осетровых в раннем онтогенезе/ Монография.- М.: Наука.-2006.-220с.

2. Абросимова Н.А., Васильева Л.М. Основные пути развития товарного осетроводства. //Проблемы современного товарного осетроводства: Тез. докл. I науч.-практич. конф. 24-25 марта 1999 г.-Астрахань, 1999. С. 3-5.

3. Акимова Н.В., Рубан Г.И. Состояние репродуктивной системы сибирского осетра Acipenser baerii Brand нижней Оби//Тез. докл. Международной конференции «Осетровые на рубеже XXI века» Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2000, С. 118-119.

4. Антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны в ветеринарии. Справочник// Сост.: В.Ф. Ковалев, И.Б. Волков, Б.В. Виолин и др. М.: Агропромиздат. -1989.-с. 220.

5. Астафьева С.С., Федосеева Е.А., Судакова Н.В. Информативность различных методов прижизненной диагностики пола у осетровых рыб // Вестник Кабардино-Балкарского университета. Серия Биологические науки. Вып. 8. -Нальчик: Каб.-Балк. ун-т, 2006а.

6. Балабанова Л.В. Ультраструктура иммунокомпетентных клеток осетровых рыб. // Матер. IV Междун.научно-практ.конф.: Аквакультура осетровых рыб:достижения и перспективы развития, Астрахань, март 2006, Изд.ВНИРО, 2006,- С. 20-21.

7. Балабанова JI.B., Лапирова Т.Б. Иммунологические характеристики окуня озер Дарвинского заповедника//Структура и функционирование экосиситем ацид-ных озер. СПб., 1994.

8. Баранникова И.А., Боев А.А., Буковская О.С., Ефимова Н.А. Гормональная регуляция репродуктивной функции у осетровых и биотехника стимуляции созревания производителей в осетроводстве // Биологические основы осетроводства. М.: Наука,- 1983.- С. 22-43

9. Баюнова Л.В., Баранникова И.А., Дюбин В.П., Семенкова Т.Б. Гормональные характеристики осетровых в условиях стресса.// Тез. докл. Международной конференции «Осетровые на рубеже XXI века» Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2000, - С. 122-124.

10. Безгачина Т.В. Паразиты и болезни осетровых рыб важная проблема в ихтиологии.// Матер. IV Междун.научно-практ.конф.: Аквакультура осетровых рыб: достижения и перспективы развития, Астрахань, март 2006, Изд.ВНИРО, 2006,- С.226-227.

11. Бисерова Л.И. Современное состояние гельминтофауны осетровых рыб дельты р. Волги //I Российско-Американский симпозиум. 12-19 июля 1998. М.: ВНИПРХ.- 1998,- С. 125-126.

12. Бойко Н.Е. Некоторые эндокринные корреляции, связанные с «критическим» периодом развития осетра. // Современные проблемы водной токсикологии. Международная конференция памяти д.б.н., проф. Б.А. Флерова, сентябрь 2005 пос. Борок, 2005, С.15.

13. Бойко Н.Е., Корниенко Г.Г. Изменение реакции личинок осетра на стрессорное воздействие после обработки тиреоидными гормонами и кортизолом // Тез. докл. VII Всеросс. конф. «Нейроэндокринология- 2005», С-Пб.: ООО «Аграф», 2005, -С. 32 -33.

14. Бойко Н.Е., Рудницкая О.А. Реакция клеток крови личинок осетра на стимуляцию тиреоидными гормонами и кортизолом. // Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов. Материалы междунар. конф. Петрозаводск, 2005, С. 13-17.

15. Бойко Н.Е., Рудницкая О.А., Корниенко Г.Г. Реакция клеток крови личинок осетра на стимуляцию тиреоидными гормонами и кортизолом // Известия вузов. Северо-Кавказский регион. Естественные науки, №4. 2005,- С. 123125.

16. Бурлаченко И.В., Аветисов К.Б., Юхименко JI.H., Бычкова Л.И. Бактериальная обсемененность комбикормов и ее влияние на молодь стерляди./Тр. ВНИРО. Т.141.-М.: ВНИРО.- 2002а, С. 194-208.

17. Быховская-Павловская И.Е. Паразиты рыб. Руководство по изучению. Л.: Наука. 1985.- 127с.

18. Валедская О.М. Оценка иммунного статуса севрюги дельты Вол-ги//Рыбохозяйственные исследования на Каспии: результаты НИР за 2000 г.Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2001, С.427-443.

19. Валедская О.М. Прогностические возможности двух иммунологических мето-дов//Сб. тез. Всесоюзной конф.» Экологические проблемы охраны живой природы». М.: -1990.- 4.3 С.110-111.

20. Валедская О.М., Михайличенко Д.В. Состояние иммунитета молоди осетровых рыб на рыбоводных заводах дельты Волги// Рыбохозяйственные исследования на Каспии: результаты НИР за 2000 г.- Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2001, -С.424-426.

21. Валедская О.М., Нестерова Л.А. Характеристика состояния производителей и молоди осетровых в иммунологическом аспекте.// Тез. докл. Международной конференции «Осетровые на рубеже XXI века» Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2000а, - С. 127-128.

22. Валедская О.М., Сайед М.А., Зайцев В.Ф. Влияние тяжелых металлов на некоторые показатели иммунитета// Паразиты и болезни рыб: Сб. научн.тр. М.: Изд-во ВНИРО, 20006.- С.29-33.

23. Валедская, О.М. Состояние иммунитета волжских рыб и его динамика в различных условиях обитания/ Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2005. -112с.

24. Васильева Е.Д., Богерук А.К. Номенклатурные проблемы создания селекционных достижений //Генетика, селекция и воспроизводство рыб: Докл. первой Всесрос. науч. конф. 29-30 октября 2002 г. С.-Пб., 2002, - С. 18.

25. Васильева J1.M. Роль центра «БИОС» в развитии отечественного осетроводства/ Матер. IV Междун.научно-практ.конф.: Аквакультура осетровых рыб: достижения и перспективы развития, Астрахань, март 2006, Изд.ВНИРО, 2006,- С.5-7.

26. Васильков Г.В. Необходимость повышения роли ветеринарно- санитарных мероприятий в рыбоводных хозяйствах //Паразиты и болезни рыб: Сборник научных трудов.- М.: Изд-во ВНИРО. 2000,- С. 33-35.

27. Васильков Г.В. Паразитарные болезни рыб и санитарная оценка рыбной промышленности//М.:- ВНИРО.- 1999.- 190с.

28. Ведемейер Г.А., Мейер Ф. П., Смит J1. Стресс и болезни рыб.- М: Легкая и пищевая пром-ть.- 1981, 128 с.

29. Видении В.Н. Антисептики и антибиотики в оперативной хирургии// Ветеринария-Вып. 9.- 2004,- С. 46-53.

30. Винберг Г.Г. Интенсивность обмена и пищевые потребности рыб. Минск:1. Изд-во БГУ, 1956,-252 с.

31. Вихман А.А. Системный анализ иммунофизиологической реактивности рыб в условиях аквакультуры/М.: «Экспедитор», 1996, 176 с.

32. Власенко А.Д., Зыкова Г.Ф., Красиков Е.В. Состояние запасов осетровых в Каспийском бассейне и пути их восстановления //Современные проблемы Каспия: Мат. Междунар. конф., посвященной 105-летию КаспНИРХ, 2002 г. Астрахань, 2002, - С. 58-64.

33. Воловенко М.А. Определение уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови новорожденных телят//Ветеринария,- 1975.-№4. С.39-40.

34. Галактионов В.Г. Очерки эволюционной иммунологии/ М.:- Наука. 1995.-345с.

35. Галактионов В.Г. Иммунология /М.: «Академия», 2004.-528 с.

36. Галактионов В. Г Эволюционная иммунология М.: «Академкнига» -2005,-408с.

37. Галаш В.Т., Марченко А.М. Влияние трихотеценовых микотоксинов на карпа //Избранные труды ВНИИПРХ,- Димитров, 2002.- кн.1.-т. I-II.- С. 453-454.

38. Гераскин П.П. Влияние загрязнения Каспийского моря на физиологическое состояние осетровых рыб// Известия Самарского научного центра РАН. сер. Актуальные проблемы экологии. Т. 8. №1. Вып. 5.2006. С-67-76.

39. Гинецинская Т.А., Добровольский А.А. Частная паразитология М.: Высшая школа, 1978 а.-Т.I.-303 с.

40. Гинецинская Т.А., Добровольский А.А. Частная паразитология -М.: Высшая школа, 19786.-Т. II.-292 с.

41. Головин П.П. Болезни рыб в аквакультуре Центрально-Европейского региона России //Аквакультура и здоровье рыб. I Российско-Американский симпозиум. 12-19 июля 1998. М.: ВНИПРХ.- 1998.- с. 133-135.

42. Головин П.П. Газопузырьковая болезнь и ее профилактика // Избранные труды ВНИИПРХ,- Димитров, 2002 а.- кнЛ.-т. I-II.- С. 448-449.

43. Головин П.П. Основные болезни осетровых рыб в товарных индустриальных хозяйствах и меры борьбы с ними //Материалы I науч. практ. конф. «Проблемы современного товарного осетроводства» 24-25 марта 2000 г. Астрахань.- «БШС»-2000.- С. 122-124.

44. Головин П.П. Проблемы стресса у рыб в пресноводной аквакультуре: способы диагностики и коррекции// Сб. научн. трудов Болезни рыб, «ВНИИПРХ», М.: -2004.-С.54-61.

45. Головин П.П. Стресс у рыб //Избранные труды ВНИИПРХ,- Димитров, 2002 б.- кнЛ.-т. I-II.- С. 456-458.

46. Головин П.П., Головина Н.А., Романова Н.Н. Особенности стресс реакции у осетровых рыб/ Матер. IV Междун. научно-практ. конф.: Аквакультура осетровых рыб: достижения и перспективы развития, Астрахань, март 2006, Изд. ВНИРО, С.239-242.

47. Головина Н.А. Морфофункциональная характеристика крови рыб объектов аквакультуры // Автореф. дис. докт. биол. наук. М.: Всерос. НИИ пруд. рыб. хоз-ва., 1996. - 53 с.

48. Головина Н.А., Головин П.П., Ващенко А.С., Задорожная Н.А. Синдром дефицита энергии у карпа: его диагностика, меры профилактики и терапии //Избранные труды ВНИИПРХ,- Димитров, 2002.- кн.1.-т. I-II.- С. 460-462.

49. Головина Н.А., Стрелков Ю.А., Воронин В.Н., Головин П.П., Евдокимова Е.Б., Юхименко J1.H., Ихтиопатология// М.: «МИР», 2003.- 448с.

50. Головина Н.А., Тромбицкий И.Д. Гематология прудовых рыб.// Кишинев: Штинница, 1989. 156 с.

51. Горышина Е.Н., Чага О.Ю. Сравнительная гистология тканей внутренней среды с основами иммунологии//!!.: Изд. ЛГУ, 1990.- 320 с.

52. Горюнова В.Б., Шагаев В.Г., Никольская М.П. Анализ аномалий строения личинок и молоди осетровых рыб Волго-Каспийского бассейна в условиях искусственного воспроизводства // Вопросы ихтиологии. Т.40. №6.-2000- С. 804-809.

53. Грибова И.А. Гематологическая норма В кн.: Руководство по гематологии// Под ред. А.И. Воробьева, Ю.И. Лорио.- М.:.Медицина, 1979.- 229 с.

54. Грищенко Л. И., Акбаев М. Ш., Васильков Г. В. Болезни рыб и основы рыбоводства- М.: Колос, 1999. 456 с.

55. Гумен А.В., Шанин С.Н., Козинец И.А., Малинин В.В., Рыбакина Е.Г.Активность натуральных киллерных клеток селезенки крыс при стрессе и ее коррекция короткими иммуномодулирующими пептидами// Цитокины и воспаление.- 2006. -Т. 5, -№ 2. -С. 37-41

56. Дегтярева С.С., Лозовский А.Р. Прижизненная оценка гонадогенеза бестера, выращиваемого по комбинированной технологии в условиях Юга России //Вестник КБГУ. Серия Биологические науки. Выпуск 6. Нальчик, 2004а. С. 34-36.

57. Дегтярева С.С., Лозовский А.Р. Физиологическое состояние трехгодовиков бестера после прижизненного исследования гонад при лапаротомии // Человеки животные: Материалы II Международной научно-практической конференции. Астрахань: Изд-во АГУ, 20046. - С.

58. Детлаф Т.А., Гинзбург А.С., Шмальгаузен О.И. Развитие осетровых рыб. М.: «Наука», 1981.- 224с.

59. Дубовская А.В. Морфофункциональное состояние жаберного эпителия нерестовой части популяции каспийской севрюги в весенне-летний ход 1999г.// Тез. докл. Международной конференции «Осетровые на рубеже XXI века» Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2000, С. 140.

60. Евгеньева Т.П. Патология мышечной ткани осетровых рыб// М., 2000. -102с.

61. Евгеньева Т.П., Никольская М.П., Шагаева В.Г. Патологические изменения тканей брюшной стенки молоди осетровых рыб при искусственном разведении в прудах Астраханской области. //Докл. РАН Т.380. №1.-2001- С.133-135.

62. Егоров С.Н., Ивлиева Л.М., Мироненко О.Е., Даирова Д.С., Пивоварова Е.В., Галушкина Н.В., Попова О.В. Оценка уровня токсичности воды и донных отложений Волго-Ахтубинской поймы и дельты Волги и донных отложений

63. Каспийского моря методом биотестирования. Характеристика процессов само-очшцения//Рыбохозяйственные исследования на Каспии: результаты НИР за 2003 г.- Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2004. С.56-67.

64. Ермоленко А.В. Паразитозы разводимых рыб в Приморском крае //Аквакультура и здоровье рыб. I Российско-Американский симпозиум. 12-19 июля 1998. М.: ВНИПРХ.- 1998.- С. 141-142.

65. Житенева Л.Д. Рудницкая О.А. Калюжная Т.И. Эколого-гематологические характеристики некоторых видов рыб// Справочник. Ростов на-Дону, 1997.149 с.

66. Житенева Л.Д., Макаров Э.В., Рудницкая О.А. Основы ихтиогематологии (в сравнительном аспекте)// Ростов на- Дону: Эверест, 2004.- 312 с.

67. Житенева Л.Д., Полтавцева Т.Г., Рудницкая О.А. Атлас нормальных и патологически измененных клеток крови рыб// Ростов на - Дону .- Ростов, кн. изд-во.-1998.-110 с.

68. Заварзин А.А. Очерки эволюционной гистологии крови и соединительной ткани.// М.: Медгиз, Вып. 2.- 1947, 400 с.

69. Злакоманова О.Н., Чукичев А.В., Зурочка А.В. Регуляторные эффекты цитоки-нов при исследовании двигательных функций фагоцитов у детей / Цитокины и воспаление. 2006. Т. 5, № 2. С. 30-36.

70. Златник Е.Ю., Голотин Л.Ю. Изучение возможности применения Ронколейкина для Lak- терапии рака яичника//Цитокины и воспаление. 2005. Т. 4, № 2. С. 54-58.

71. Зыкова Г.Ф., Журавлева О.Л., Красиков Е.В. Оценка неучтенного и браконьерского вылова русского осетра в р. Волга и Каспийском море// Тез. докл. Международной конференции «Осетровые на рубеже XXI века» Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2000, - С. 54-56

72. Иванова Н.Т. Система крови. Материалы к сравнительной морфологии системы крови человека и животных./Ростов на -Дону: 1995.- 156 с.

73. Иванова Н.Т. Атлас клеток крови рыб. М.: Легкая и пищевая промышленность. 1983., 127 с.

74. Иванова Н.Т. Морфология крови донской севрюги при фазовоконтрастной микроскопии.//В кн. Материалы IV межвузовской конф. Физиологов и морфологов пединститутов.-Ярославль, 1970, С.148-149.

75. Исаева Н.М., Козиненко И.И. Влияние химических соединений на иммунный статус рыб в аквакультуре // Вопросы ихтиологии, 19926 - Т.32,- Вып.1,-С. 157-167.

76. Казарникова А.В. Поддержание здоровья осетровых рыб при выращивании в замкнутой системе водоснабжения.// «Рыбное хозяйство», №4,2006.- С.63-64.

77. Кашулин Н.А., Лукин А.А., Амонтсен П.А. Рыбы пресных вод Субарктики как биоиндикаторы техногенного загрязнения.-Апатиты, 1999.142с.

78. Кленова И.Ф., Яременко Н.А. Ветеринарные препараты в России: Справочник -М.: Сельхозиздат, 2000. 544 с.

79. Кобегенова С.С., Жимбей Е.Н. Особенности гистологии печени, почек мышц и жабр каспийских осетровых в современный период.// Тез. докл. Международной конференции «Осетровые на рубеже XXI века» Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2000, - С. 150-151.

80. Ковальчук Л.Г., Загртденова А.И. Особенности нарушений структуры гонад азовских осетровых в современный период.// Тез. докл. Международной конференции «Осетровые на рубеже XXI века» Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2000,-С. 151-152.

81. Козлов В.К. Ронколейкин®: биологическая эффективность, иммунокорриги-рующая и клиническая эффективность. СПб. 2002,- 86 с.

82. Козлов В.К., Егорова В.Н. Применение цитокинов в терапии ВИЧ-инфекции// СПб: изд-во СПбГУ, 2000,- 26с.

83. Козлов В.К., Смирнов М.Н., Егорова В.Н., Лебедев М.Ф. Коррекция иммуно-реактивности рекомбинантным ИЛ-2. Пособие для врачей. СПб. 2001:24с.

84. Компанец Э.В., Темниханов Ю.Д., Просяная В.В. Иммунологические показатели у карпа при экспериментальном вирусном и бактериальном заражении.// Рыбное хоз-во.- Киев.- №44.- 1990.- С. 61-64.

85. Кондратьева И.А., Киташова А.А. Функционирование и регуляция иммунной системы рыб.// Иммунология, № 2,2002.-С. 97-102.

86. Кондратьева И.А., Киташова А.А., Ланге М.А. Современные представления об иммунной системе рыб. Часть I. Организация иммунной системы рыб// Вестник Московского Университета, сер. Биология, № 4,2001.- С. 19-28.

87. Корниенко Г.Г., Кожин А.А., Воловик С.П., Макаров Э.В. Экологические аспекты биологии репродукции. Ростов на - Дону: Эверест, 1998,- С.238.

88. Крючков В.Н., Валедская О.М., Алиновская Ю.Б. Применение иммунофизио-логических тестов для оценки резистентности бестера //Вестник АГТУ. Рыбное хозяйство,- Астрахань: Изд-во АГТУ, 2000. С.63-68.

89. Крючков В.Н., Федорова Н.Н., Дубовская А.В Морфологические критерии адаптации осетра к загрязнению среды//Тез. докл. Международной конференции «Осетровые на рубеже XXI века» Астрахань: Изд-во КаспНИРХа , 2000, С. 157-158.

90. Крячко О.В., Романова О.В. Иммуноориентированная терапия при атопиче-ских дерматитах у лошадей препаратом Ронколейкин./ Санкт-Петербургская Гос. акад. Ветер. Мед. Изд-во «Альтернативная полиграфия» СПб.: 2004. 23с.

91. Лакин Г.Ф. Биометрия// М.: Высшая школа, 1980. -293 с.

92. Ланге Н.О., Дмитриева Е.Н. Методика эколого-морфологических исследований развития молоди рыб //Исследования размножения и развития рыб. М., 1981. -С. 67-88.

93. Ларцева Л.В. Профилактика и терапия сапролегниоза икры осетровых и белорыбицы при искусственном их разведении: Автореф. дисс. канд. биол. наук. М.:, 1987.- 22с.

94. Ларцева Л.В. Микрофлора осетровых и расслоение мышц// Рыбное хоз-во. М.: 1990. № 6. С.67.

95. Лебедева Н.Е. Слизь кожи рыб индикаторная система их физиологического статуса //Рыбное хоз-во. - сер. Болезни гидробионтов в аквакультуре. Вып.2,- М.: 2001.- С.1-23.

96. Лебедева Н.Е., Головкина Т.В. Поиски возможностей коррекции стресса у толстолобика //Вопросы ихтиологии, 1993. т. 33. - № 4. - С. 566-572.

97. Лепилина И.Н. Морфометрические показатели и виды нарушений у предличи-нок севрюги от естественного нереста//.// Тез. докл. Международной конференции «Осетровые на рубеже XXI века» Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2000,-С. 71-72.

98. Лепилина И.Н., Романов А.А. Результаты исследований состояния мезонефро-са осетровых в зимний период// Рыбохозяйственные исследования на Каспии: результаты НИР за 2003 г.- Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2004. С.258-261.

99. Лиманский В.В., Яржомбек А.А., Бекина Е.Н., Андронников С. Б.// Инструкция по физиолого-биологическим анализам рыбы. -М.: 1984.- 60 с.

100. Лебедев В.Ф., Козлов В.К., Гаврилин С.В., Иммунопатогенез тяжелых ранений и травм: возможности иммунокоррекции.// Вестник хирургии, 2002: Т.161, №4, С.85-90.

101. Ложниченко О.В. Анализ кроветворной ткани головной почки молоди русского осетра// Вестник российского университета дружбы народов.- М.: изд-во университета РУДН.- 2005.-№2(12).- С.57-59.

102. Ложниченко О.В. Особенности некоторых органов кроветворения молоди русского осетра //Актуальные проблемы экологической физиологии биохимии, генетики животных: Матер, междун. науч. конф. Саранск: Изд-во «Современные тетради», 2005,- С. 13 8-141.

103. Ложниченко О.В. Особенности строения спирального клапана молоди русского осетра как кроветворного органа.// Вестник российского университета дружбы народов. Научный журнал. М.: изд-во университета РУДН.-2005.№2 (12)., -С.59-62.

104. Ложниченко О.В. Патоморфологические изменения в клетках крови молоди русского осетра как ответная реакция на загрязнения р. Волга// Вестник российского университета дружбы народов.- М.: изд-во университета РУДН.-2005.-№2(12).- С.64-67.

105. Ложниченко О.В. Структурно-функциональные особенности мезонефроса личинок и молоди осетровых рыб//Вестник российского университета дружбы народов.- М.: изд-во университета РУДН,- 2005.-№2(12).- С.37-40.

106. Ложниченко О.В., Федорова Н.Н. Морфология селезенки молоди русского осетра // Актуальные проблемы морфологии: сб. науч. трудов,- Красноярск: Изд-во КрасГМА, 2004.- С. 165-167.

107. Ложниченко О.В., Федорова Н.Н., Зайцев В.Ф. Лимфоцитарный тип крови в раннем онтогенезе осетровых// III Общероссийская конф. «Гомеостаз и инфекционный процесс». Сочи: Дагомыс, 2002.- С.-66

108. Лукьяненко В.И. Дубинин В.И., Сухопарова А.Д. Влияние экстремальных условий приплотинной зоны реки на осетровых рыб// Рыбинск. ИБВВ им И.Д. Папанина, -1990, С. 272 .

109. Лукьяненко В.И., Кулик П.В. Физиолого-биохимическая и рыбоводная характеристика разновозрастных производителей Волго-Каспийских осетровых рыб. -Рыбинск, 1994.-280 с.

110. Малик Н.И., Панин Н.А. Ветеринарные пробиотические препараты //М.: Ветеринария, 2001. №1. С.46-51.

111. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофа-ге//Новосибирск: Наука, 1983. -256 с.

112. Микряков В.Р. Закономерности формирования иммунной системы пресноводных рыб: Дисс. д.б.н.,-Борок, 1984.-468 с.

113. Микряков В.Р. Закономерности формирования приобретенного иммунитета у рыб/Рыбинск, 1991.-154 с.

114. Микряков В.Р., Балабанова Л.В. Клеточные основы иммунитета рыб// Физиология и паразитология пресноводных животных.- Л.: Наука, 1979.

115. Микряков В.Р., Степанова В.М. Влияние митогенов на лимфоциты карпа (Cyprinus carpio L.)// Иммунология.- 1983.- 154 с.

116. Микряков В.Р, Балабанова Л.В., Заботкина Е.А., Литерова Т.Б., Попов А.В., Силкина Н.И. Реакция иммунной системы на загрязнение воды токсикантами// М.: Наука, 2001.-126 с.

117. Микряков В.Р., Балабанова Л.В., Заботкина Е.А., Лапирова Е.Б., Попов Н.И., Силкина Н.И. Реакции иммунной системы рыб на загрязнение токсикантами и закисление среды. М., 2001. С.231.

118. Микряков Д.В., Микряков В.Р. Влияние гидрокортизона на антителообразова-тельную функцию иммунной системы карпа Cyprinus Carpio// Вопросы ихтиологии, Т. 42., №6.- 2002.- С. 820-824.

119. Мирзоева Л.М. Аквакультура и иммуностимуляторы //Инф. Пакет Аквакультура. Корма и кормление рыб/ Всерос. н.-и. и проект.- конструкт, ин-т экон., и инф. и АСУ рыб. хоз-ва. -1999.- №2 С.36-38.

120. Мирзоева Л.М. Применение пробиотиков в аквакультуре //Рыбное хозяйство, сер.: Болезни гидробионтов в аквакультуре.- М., 2001. вып. 2. - С.23-30.

121. Митрофанов И.В. Влияние нефтяного загрязнения на осетровых р. Урал// Тез. докл. Международной конференции «Осетровые на рубеже XXI века» Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2000, - С. 80-82.

122. Михеев В.П. К вопросу промышленного разведения стерляди в плавучих садках //Перспективы развития товарного осетроводства в СССР: Тез. докл. Ростов на Дону, 1972. - С. 24-26.

123. Моисеенко Т.И. Гематологические показатели рыб в оценке их токсикозов (на примере сига Coregonus Lavaretus)// Вопросы ихтиологии., Т 38., №3,- 1998. -С.371-380.

124. Моисеенко Т.Н. Гематологические показатели рыб в оценке токсикозов //Вопросы ихтиологии. №3.- 1998а С.371-380.

125. Моисеенко Т.Н. Экологический подход к нормированию антропогенных нагрузок на водоемы Субарктики // Экология №6.-1998 б.- С. 452-461.

126. Моисеенко Т.Н., Лукин А.А. Патологии рыб в загрязняемыъ водоемах Субарктики и их диагностика//Вопросы ихтиологии,- Т. 39, №4.- 1999.- С. 535-547.

127. Молдавская А.А., Журавлева Г.Ф., Врочинский К.К., Федорова Н.Н., Теплый Д.Л., Земков Г.В. Морфофункциональные аспекты проявления токсикоза у рыб.//Астрахань. Изд-во АГМА, 2003.-183 с.

128. Никольская М.П., Евгеньева Т.П., Шагаева В.Г. Состояние скелетной мускулатуры у личинок осетровых рыб Волжского бассейна при искусственном воспроизводстве//Докл. РАНТ.396.№4.-2004. С. 567-580.

129. Панчихина Ж.А., Бирюкова А.А., Васильева JI.M. Профилактика и лечение жаберного некроза у молоди бестера при введении в рацион шивыртуина //Мат-лы I науч. практ. конф. «Проблемы современного товарного осетроводства». -Астрахань. 2000. - С. 128-135.

130. Пестова И.М., Четверных В.А. Морфофункциональная организация иммунопо-эза в эволюции// Арх. Анатомии, гистологии и эмбриологии.- Т.99.- №11 .-1990,-С.90-99.

131. Пигаревский В.Е., Мазинг Ю.А. Лизосомально-катионные белки// Лаб. дело, 1981, №10,- С.579-582/

132. Плужников М.С., Лавренова Г.В., Катинас Е.Б., Галкина О.В. Местная терапия Ронколейкином гнойных синуситов. СПб.: Изд-во «Ясный Свет», 2003. С.20-21.

133. Подушка С.Б. Способ получения икры от самок осетровых рыб. Авторское свидетельство СССР №1412035.- 1986.

134. Подушка С.Б. Ускоренное формирование маточных стад осетровых рыб в рыбоводных хозяйствах //Проблемы современного товарного осетроводства: Тез. докл. I науч.-практич. конф. 24-25 марта 1999 г. Астрахань, 1999 а. - С. 71-73.

135. Подушка С.Б. Получение икры у осетровых рыб с сохранением жизни производителей// Научно-практический бюллетень лаборатории ихтиологии ИНЭН-КО.-СПб, 1999 б. Вып. 2- С. 4-20.

136. Полонский В.Ф., Михайлов В.Н., Кирьянов С.В. Устьевая область Волги: гидролого-морфологические процессы, режим загрязняющих веществ и влияние колебаний уровня Каспийского моря./М.: ГЕОС, 1998.- 280 с.

137. Пугаева В.П., Сазонов А.А., Линева Г.П. Газопузырьковая болезнь у мальков чавычи Oncorhinchus tshawytscha на экспериментальной базе КоТИНРО //Паразиты и болезни рыб: Сб. науч. тр. М.:- ВНИРО . -2000.- С. 108-113.

138. Решетников Ю.С., Попова О.А., Кашулин Н.А., Лукин А.А., Амондсен П.А., Сталдвик Ф. Оценка благополучия рыбной части водного сообщества по результатам морфопатологического анализа рыб// Успехи современной биологии,.!. 119.-№2.- 1999.-С.165-171.

139. Розанова О.Е., Бубнова Л.Н. Цитокиноопосредованные аспекты иммунопато-генеза апластической анемии //Цитокины и воспаление. 2005. Т. 4, № 4.- С. 3438.

140. Ронколейкин в онкологической практике.//Сборник статей. СПб:- 2003.150с.

141. Рудницкая О.А. Гистофизиолотческий анализ печени производителей азовских и каспийских осетров// Мат. X Всес. совещ. по эвол. физиологии. Л.: Наука, 1990,- 369 с.

142. Рудницкая О.А., Бугаев Л.А. Состояние гонад, печени и крови у азовской севрюги в море// Сб. тр. КГУ «Экологические проблемы Краснодарского края»., -2001 а.-№12.,-С. 201-204.

143. Рудницкая О.А., Бугаев Л.А. Состояние репродуктивной системы, печени и крови у азовской севрюги в море//Тез. Докл. VIII съезда гидробиологич. общ-ва РАН. Т2.Калининград, 2001 б. С. 169-170.

144. Рудницкая О.А., Житенева Л.Д., Клименченко М.В. Гематологический мониторинг азовских осетровых // Осетровые на рубеже XXI века: Тез. докл. Междунар. конф., Астрахань, 11-15 сентября 2000г. Астрахань, -2000.- С. 186 -188.

145. Рудницкая О.А., Загретденова А.И. Показатели крови у производителей азовского осетра//Тез. докл. Первого конгр. ихтиологов России. М.: ВНИРО, 1997. -С. 369.

146. Рудницкая О.А., Клименченко М.Ф. Морфология печени в оценке качества молоди осетров, выпускаемой рыбоводными заводами Нижнего Дона // Мат. докл. Второго междунар. симпоз. «Ресурсосберегающая технология в аква-культуре». Краснодар. -1999. С. 88.

147. Руководство по химическому анализу поверхностных вод суши /Под ред. д.х.н., профессора Семенова А.Д. Д.: Гидрометеоиздат, 1977. - С. 329332.

148. Сборник инструкций по борьбе с болезнями рыб. Под ред. Н. А. Яременко. -Часть П. М. - Отдел маркетинга АМБ - Агро. - 1999. - 234 с.

149. Семенкова Т.Б., Баранникова И.А., Баюнова Л.В., Дюбин В.П. Динамика содержания стероидных гормонов в сыворотке крови в репродуктивном цикле //Осетровые на рубеже веков: Тез. докл. Междунар. конф. Астрахань, 2000. -С. 193-194.

150. Сепиашвили Р.И. Иммунореабилитация настоящее и будущее иммунологии аллергологии // Аллергология и клиническая иммунология .- 1993.- №1,- С. 1928.

151. Сердюк А.В. Морские флаво- и флексибактерии, как этиологические агенты язвенного синдрома культивируемой форели (Onkorhynchus mykiss) //Аквакультура и здоровье рыб. I Российско-Американский симпозиум. 12-19 июля 1998. М.: ВНИПРХ.- 1998.- с. 174-175.

152. Серпунин Г.Г. Гематологические показатели адаптации рыб /Автореф. дисс на соиск.учен. степ доктор биол. наук. Калининград, 2002.- 35 с.

153. Сизякина Л.П., Андреева И.И. Справочник по клинической иммунологии/Серия «Больной вопрос» .- Ростов н/Д: Феникс, 2005 448с.

154. Скляров В.Я., Гамыгин Е.А., Рыжков Л.П. Кормление рыб: Справочник. -М.: Легк. и пищ.пром-сть, 1984.-120 с.

155. Скурат Э.К., Сиволоцкая В.А., Говор Т.А. Пробиотики для профилактики бактериальных инфекций у рыб //Рыбное хозяйство, сер.: Болезни гидро-бионтов в аквакультуре. М., 2001. - Вып. 2. - С.30-32.

156. Сорвачев К.Ф. Основы биохимии питания рыб. М.: Легкая пром-ть, 1982. -247с.

157. Соторов П.П. Справочник ветеринарного врача-ихтиопатолога. //М.:-Росзооветснабпром, 1999.- 246.С.

158. Спотт С. Содержание рыбы в замкнутых системах //М.: Легкая и пищевая промышленность, 1983. С.140-141.

159. Танькин В.В. Пути повышения эффективности выращивания молоди осетровых рыб в бассейнах //Ресурсосберегающие технологии в аквакультуре: Мат. докл. II Межд. Симпозиума 4-7 сентября, Адлер, 1999 г. Краснодар, 1999. - С. 103.

160. Уолке Р.Е., Георг К. Дж., Блезер В.З. Скопления пигментных макрофагов, возможных показателей состояния здоровья рыб //Вопросы ихтиологии т.25, в.1.-1985.-С. 145-152.

161. Федорова Н.Н., Ложниченко О.В. Морфология тимуса молоди русского осетра // Успехи современного естествознания. М.: Академия естествознания, №10.-2004.-С. 110.

162. Фонталин Л.Н. Иммунология. / М:- 1988. № 3. - С. 5-20.

163. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология.- М.:Медицина , 2000.-430 с.

164. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В. Иммуномодуляторы: механизм действия и клиническое применение/ М.: ГНЦ Институт Иммунологии, 2003, 23с.

165. Чепурная А.Г., Вихляева И.А., Паразиты и болезни осетровых рыб при товарном выращивании //Проблемы современного товарного осетроводства. Сб. докл. I научно-практ. конф. 24-25 марта 1999 г. Астрахань. "Биос", 2000. С. 135-138.

166. Шапошникова В.Н. О некоторых условиях и результатах товарного осетро-водства//Осетровые СССР и их воспроизводство. М: Пищевая промышленность, 1971. - Т. 3. - С. 342-344.

167. Шевлякова Н.В., Лозовский А.Р. Физиологические показатели русского осетра, прооперированного для получения икры, после введения перфтора-на//Российский Биомедицинский журнал. Т.5 №6.- 2003,- С.227-228.

168. Шестерин И.С. Совершенствовать гидрохимический контроль: Рыбоводство.-1985.-№4,- С 7-8.

169. Шульман Г.Е., Столбов А .Я., Солдатов А.А., Минюк Г.С., Ивлева Е.В., Трусевич В.В., Дробецкая И.В. Метаболические реакции черноморских рыб на долговременную экспериментальную гипоксию // Гидробиологический журнал. -Т. 39.- №1.-2003.- С. 21-29.

170. Юхименко Л.Н. Бактериальная геморрагическая септицемия рыб, вызываемая подвижными аэромонадами, и ее профилактика//Тез. российско-американского симп. «Аквакультура и здоровье рыб». М.: Всерос. НИИ пруд. рыб. хоз-ва, 1998, - С. 179-180.

171. Ярилин А.А. // Основы иммунологии. М., 1999.

172. Alvarez F., Lopez-Fierro P., Razquin В., Villena A. Salmonid barriers cells in disease //Diseases of fish and shellfish. France. 1993.- P.125.

173. Bagni M., Archetti L., Amadori M., Marino G. Effect of long-temp oral administration of an imunostimuland diet on innate immunity in sea bass. //J. Vet.Med.B. -2000.-47, nlO.-P/745-751.

174. Bird S., Wang Т., Zou J., Cunningham Ch., and. Secombes Ch. J. The first cytokine sequence within cartilaginous fish: IL-1 in the small spotted catshark (Scyliorhinus canicula)/ J. Immunology, 2002,168: P. 3329-3340.

175. Blaxholl P.C. Electronmicroscope studies of fish lymphocytes and thrombocytes// J. Fish Biol. Vol. 22, 2: P.13-16.

176. Cortes J.E., Kantaijian H.M., O'Brien S. et al. A pilot study of interleukin-2 for adult patients with acute myelogenouse leukemia in first complete remission. Cancer 1999; 85:1506 p.

177. Cuesta A., Ortuno J., Rodriuez A., Esteban M.A. Meseguer J. Application desustan-cias naturales (vitamines у quitina) para о protozoarias у frente a tumores de doradas Sparus auratus L.//Bol. Inst. Esp. Oceanogr.- 2002.- 18, nl4.- P 183-187.

178. Daniels, G. D., Zou J., Charlemagne J., Partula S., Cunningham C., Secombes C. J. Cloning of two chemokine receptor homologs (CXC-R4 and CC-R7) in rainbow trout Oncorhynchus mykiss. J. Leukocyte Biol.- 1999,- 65: P. 684.

179. Davey R.T. Immunologic and virulodic effect of substances IL-2 treatment in combination with antiretroviral therapy // J. of American Medical Association /- 2000- v. 284-P. 183-189.

180. Dinarello, C. A. Interleukin-1. Cytokine Growth Factor Rev. -1997.-8: P. 253.

181. Dixon, В., Shum В., Adams E. J., Magor К. E., Hedrick R. P., Muir D. G, Parham P. CK-1, a putative chemokine of rainbow trout (Oncorhynchusmykiss). Immunol. Rev. -1998-.166: P. 341.

182. Engelsma, M. Y., Stet R. J. M., Schipper H.,. Verburgvan В. M. Kemenade L. Regulation of interleukin \ RNA expression in the common carp Cyprinus carpio L. Dev. Сотр. Immunol.-2001.-25: P.195.

183. Esteban M.A., Meseguer J., Munos J., Aqulliero B. Blood cell formation in the head kidney of the see bass (Dicentrarchus labrax L.)//EUREM SS: Proc. 9th Eur. Congr., Electron. Microsv. N-York, 4-9 Sept. Bristol, Philadelphia. -1988.-V. 3: p. 181-182.

184. Fange R.T Limphoid organs in sturgeons (Asipenseridae)/ Vet. Im. a Immunopath. -1986.- V.12.-№l-4- P.153-161

185. Fange R.T. A comparative study of limphomieloid tissue in fish//Develop and Сотр. Immun. 1989. Vol. 6, (2): P.23-33.

186. Galeotti M., Volpatti D., Manzilli A. Immunohistochemical study of fish lymphoid organs with antibody against S-100 protein: Disease of fish and shellfish. Sixth international conf. Brest, France.- 1993.-P. 122

187. Gannam A. L., Schrock R.M. Immunostimulants in fish diets // J. Appl. Aquacult. -1999,- 9, n 4.- P.53-89.

188. Good R.A., Gabrielsen E. The thymus and other lymphoid organs in the development of the immune system. //Human transpl.-1986.-P. 526-536.

189. Haaparanta A.,Valtonen E.T., Hoffman R., Holmes J. Do macrophage centers in freshwater fish reflect the differences in water quality//Aquatic Toxicol., 1995.-Vol. 1: P. 13-20.

190. Hank J.A., Surfiis J., Gan J. Distinct clinical and laboratory activity of two recombinant interleukin-2 preparations. Clin. Cancer res. 1999; 5(2): P. 281 289.

191. Hasel I.R. Adaptation to temperature: phospholipids synthesis in hepatocytes of rainbow trout//Amer. J. Phisiol. -1990, Vol. 258, -n.6, -part 2, P. 1495-1501.

192. Hasel I.R., Prosser C.L. Malecular mechanisms of temperature compensation in poikilotherms// Phisiol. 1974, - Vol. 54,- n. 3, - P.620.

193. Hedrick, R.P.; Groff, J.M.; McDowell, T.S.; Wingfield, W.H.,: Isolation of an epitheliotropic herpesvirus from white sturgeon Acipenser transmontanus. Dis. Aquat. Org. 1991: 11,49-56.

194. Hellstrand K., Mellqist U., Wallhult E. et al. Histamine and interleukin-2 in acute myelogenouse leukemia. Leuk. Lymph. 1997; 27: P.429

195. Hine P.M., Wain J.M. Ultrastructural and citochemical observations on the granulocytes of the sturgeons, Asipenser brevirostrum (Chondrostei)/ J. Fish Biol. 1988.-V 33.-№2.-P. 235-245.

196. Hooton J.W.L., Gibbs C., Paetkau V. Interaction of interleukin-2 with cells: quantitative analysis of effects.// J. Immunol. 1985; 135: P. 2464.

197. Jeal W., Goa K.L. Aldesleukin (recombinant interleukin-2). BioDrugs, 1997.- 7:285.

198. Jorgensen T Immunsystems hos fish//Norsk Veter. 1989, V. 101.- пб.- P.481-487.

199. Junko K., Takaji I. Cortisol directly inhibits neutrophil defense activates in tilapiath

200. Oreochromis niloticus) // 9 Inern.conf. «Diseases of fish and shellfish». Greece. Rodos. 2002.- P.293.

201. Kemenade.T. Regulation of interleukin-l RNA expression in the common lymphocyte-specific genes during the development of cartilaginous fish implicate // 2001.

202. Laing, K. J., C. Cunningham, and C. J. Secombes. Genes for three different isoforms of transforming growth factor are present in plaice (Pleuronectes platessa) DNA. Fish Shellfish Immunol.- 2000-10: P.261.

203. Laing, K. J., L. Pilstrom, C. Cunningham, and C. J. Secombes. TGF-3 exists in bony fish. Vet. Immunol. Immunopathol. -1999.-72: P.45.

204. Laing, K. J., Wang Т. H, Zou J., Holland J., Hong S. H., Bols N., Hirono I., Aoki Т., Secombes C. J. Cloning and expression analysis of rainbow trout Oncorhyn-chus mykiss tumour necrosis factor-. Eur. J. Biochem.- 2001.-268: P.1315.

205. La Patra, S.E.; Groff, J.M.; Jones, G.R.; Munn, В.; Patterson, T.L.; Holt, R.A.; Hauck, A.K.; Hedrick, R.P., 1994: Occurrence of white sturgeon iridovirus infections among cultured white sturgeon in the Pacific Northwest. Aquaculture 126: 201-210.

206. La Patra, S.E.; Groff, J.M.; Patterson, T.L.; Shewmaker, W.D.; Casten, M.; Siple, J.; Hauck, A.K., 1996: The effect of sturgeon density on manifestation of white sturgeon iridovirus disease. J. Appl. Aquacult. 6(3):51-58.

207. Masahiro S. Current research status of fish immunostimulants// Aquaculture.-1999.-172.№l-2.-P.63-92.

208. Mikali V., Perduchizzi F. A quantitative and histochemical study on mela-nomacrophage centers in the spleen of the teleost fish Diplodus annularis L.// Fish Biol. Vol. 37,2: P.55-68.

209. Mogxim M., Vajhi A.R., Veshkini A., Masoudifard M. Determination of sex and maturity in sturgeon (Acipenser Stellatus) by using ultrasonography //J. Appl. Ichthyol. -18.-2002.-P. 325-328.

210. Mott H.R., Driscol P.C. The secondary structure of human interleukin-2 from 3D heteronuclearNMRexperiments.//Biochemistry 1992; 31: P. 7741.

211. Najakshin, A. M., L. V. Mechetina, B. Y. Alabyev, Taranin A. V. Identification of an IL-8 homolog in lamprey (Lampetra fluviatilis): early evolutionary divergence of chemokines. Eur. J. Immunol. 1999.-29:375p.

212. Nand S., Stock W., Stiff P. A phase 11 trial of interleukin-2 in myelodysplastic syndrome. //Br. J. Haematol. 1998; 101:205 p.

213. Ohno Т., Fujii H. Selective Deficiency in IL-2. Production and Refractoriness to Extrinsic IL-2 in Immunodeficiency with hyper-IgM// J. Clin. Immunology and Im-munopatology.-1987,45, P.471-480.

214. Pleguezuelos, O., J. Zou, C. Cunningham, and C. J. Secombes. Cloning, sequencing and analysis of expression of a second IL-1 gene in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss). Immunogenetics- 2000.-51:1002 p.

215. Renault T.C. La thermodependance de la cinetique de syntheses de 1'interferon in vivo chez la truite arc-en-ciel //Toulouse Ecole nat. veter. diss.- 1988, -60 p.

216. Snegaroff J., Bach J. The effect of temperature on the basal activity of cytochrome P-450 in rainbow trout //Сотр. Biochem. and Phisiol. В.- 1990, Vol.95, - n.3, - P. 515-519.

217. Qin Qi-wei, Wu Zao-he, Pan Jinpei. Disease resistance and humoral immunomodulatory effects of vitamin С on grouper, Epnephelus awoara// Chin.J Oceanol. And Limnol.- 2000 a.-18#3.- P.247-252.

218. Qin Qi-wei, Wu Zao-he, Zhou Yong-can, Pan Jinpei. Resistance and humoral immunomodulatory effrcts of vitamin С on grouper, Epnephelus awoara// Redai haiyang= Trop. Oceanol.- 2000 b. 19#1. -. P.58-69.

219. Quesada J., Villena M.J, Aqulleiro B. Structure of the spleen of the sea bass (Dicentrarchus labrax): A light and electron microscopy study.//J. Morphol.Vol. 206: P. 54-48.

220. Renfro W.C. Gas bubble mortality of fish in Galveston Bay. Texas // Trans. Am. Fish. Soc.-V.92.-P.-363.

221. Robb R.J. Interleukin-2: the molecule and its function.// Immunol. Today 1984; 5:203p.

222. Sahoo P.K. Immunostimulating effect of triiodthyronin: Dietary administration of triiodthyronine in rohu (Labelo rohita) enhances immunity and resistance to Aero-monas hidrophila infection //J. Appl. Ichthyol.- 2003.- 19, #2.- P. 118-122.

223. Schaperclaus W., Kulow H., Schrecenbach K. Fichkrankheten.// 5 Auflage.- Berlin: Akad.Verlag.-1990,- 1123 s.

224. Secombes C. J., S. Bird, C. Cunningham, and J. Zou. Interleukin-1 in fish. Fish Shellfish Immunol. -1999.-№ 9 P. 335.

225. Secombes C. J., Zou J., Daniels G., Cunningham C., Koussounadis A., Kemp G. Rainbow trout cytokine and cytokine receptor genes.// Immunol. Rev. -1998.-166: P.333.

226. Smith K.A. Interleukin-2: infection, impact and implication.// Science 1988; 240: 1169 p.

227. Smith, S. L. Cellular and humoral aspects of innate immunity in the shark. Fish Shellfish Immunol. (Abstr.). 2000,10: P.287

228. Voss S.D., Sondel P.M., Robb R.J. Characterization of the interleukin-2 receptor (IL-2R) expressed on human natural killer cells.// J.Exp. Med. 1992; 176: P.531-541.

229. Wilson M., Bengten E., Miller N.W., Clem L.W., Du Pasquier L., Warr G.W.// A novel chemeric Ig heavy chain from a teleost fish shares similarities to IgD// Proc. Nati. Acad. Sci. USA. Vol. 94: P. 4593-4597.

230. Watson, L.R.; Groff, J.M.; Hedrick, R.P., Replication and pathogenesis of white sturgeon iridovirus (WSIV) in experimentally infected white sturgeon Acipenser transmontanus juveniles and sturgeon cell lines. Dis. Aquat. Org. 1998: 32, 173-184.

231. Yoshida S., Stug Т., Miller N.W., Clem L.W. Phylogeny of lymphocyte heterogeneity: Cytotoxic activity of channel catfish peripheral blood leucocytes directed against allogeneic target//Develop. Сотр. Immunol. 19: P.71-77.

232. Yuzuru S., Masato Т., Katsumi A., Isao H. Affinity of fish immunoglobulin to protein A// Bull. Jap. Soc. Sci. Fish V. 56,5:1990. 83 lp.

233. Zou J., Bird S., Minter R., Horton J., Cunningham C., Secombes C. J. Molecular cloning of the gene for interleukin-1 from Xenopus laevis and analysis of expression in vivo and in vitro. Immunogenetics 2000.-49: P. 332.

234. Zou J., Gabowski P. S., Cunningham C., Secombes C. J. Molecular cloning of interleukin-1 from rainbow trout Oncorhynchus mykiss reveals no evidence of an ICE cut site. Cytokine.- 1999.-11: P. 552.

235. Zou J., Holland J., Pleguezuelos O., Cunningham C., Secombes C. J. Factors influencing the expression of interleukin-1 in cultured rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) leucocytes. Dev. Сотр. Immunol.- 2000.-24: P. 575.

236. Zuasti A., Ferrer S. Conception Granulopoiesis in the head kidney of Spatus auratus// Arch. Histol. and Cytol. 1988.-V. 51,5: p. 425-431.