Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Оценка исходного материала столовой моркови на устойчивость к фузариозу и альтернариозу с использованием методов традиционной и клеточной селекции

ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Автореферат диссертации по теме "Оценка исходного материала столовой моркови на устойчивость к фузариозу и альтернариозу с использованием методов традиционной и клеточной селекции"

На правах рукописи

ПЛАТОВА Наталия Валерьевна

ОЦЕНКА ИСХОДНОГО МАТЕРИАЛА СТОЛОВОЙ МОРКОВИ НА УСТОЙЧИВОСТЬ К ФУЗАРИОЗУ И АЛЬТЕРНАРИОЗУ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДОВ ТРАДИЦИОННОЙ И КЛЕТОЧНОЙ СЕЛЕКЦИИ

Специальность 06.01.05-селекция и семеноводство

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

Москва 2004

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте овощеводства в 1999-2002гг.

доктор сельскохозяйственных наук, старший научный сотрудник Владимир Иванович Леунов.

Доктор сельскохозяйственных наук, старший научный сотрудник Маргарита Ивановна Федорова.

Кандидат сельскохозяйственных наук, старший научный сотрудник Григорий Федорович Монахос

Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева.

Защита состоится мая 2004г. в 10 °° часов на заседании

диссертационного совета Д 006.022.01 во Всероссийском научно-исследовательском институте овощеводства по адресу: 140153 Московская обл., Раменский район д. Верея, строение 500, ВНИИО

С диссертационной работой можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института овощеводства.

Автореферат разослан апреля 2004г.

Ученый секретарь Диссертационного совета

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

9 л

Актуальность темы. В последние годы в Нечерноземной зоне России все большее распространение получают болезни моркови (Dau-cus carota), вызываемые грибами рода Fusarium Link. Ex. Fr. Фузарии могут поражать растения моркови на всех этапах ее развития, вызывая гибель проростков моркови до 30% (Nowicki,1992), увядание семенников и поражение корнеплодов при хранении до 20% (Перши-на,1994).Зараженность семян моркови фузариозом достигает 21% (Дураков, 1985).

В современной литературе и практической селекции не встречаются работы, в которых в полной мере были бы отражены приемы оценки и отбора (на инфекционных фонах) устойчивых к этому патогену генотипов моркови. В настоящие время нет сортов моркови с устойчивостью к фузариозу.

В сочетании с классическими методами селекции на устойчивость к болезням, можно использовать методы биотехнологии, которые ускоряют селекционный процесс и позволяют расширить спектр генетического разнообразия. В этом направлении одно из ведущих мест занимает клеточная селекция, при которой в условиях in vitro проводится отбор клеточных популяций, устойчивых к селективному фактору. Однако для фузариоза моркови эти методики пока не разработаны.

Цель исследований - оценка исходного материала столовой моркови на устойчивость к фузариозу традиционными методами селекции и на клеточном уровне

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить уровень вредоносности фузариоза на столовой моркови в естественных условиях.

2. Оценить коллекцию моркови на устойчивость к возбудителям фузариоза и альтернариоза {Alternaria radicina M.D. et E.) на искусственных инфекционных фонах.

3. Подобрать эффективные методы экспресс-анализа для определения устойчивости столовой моркови к фузариозу.

i БИБЛИОТЕКА I

! ¿"жт

4. Изучить условия культивирования каллусной ткани моркови методами in Vitro с последующей оптимизацией питательной среды, обеспечивающей получение растений - регенерантов.

5. Провести клеточную селекцию на каллусной ткани моркови, отобрать клеточные популяции, устойчивые к культуральному фильтрату гриба Fusarium avenaceum.

6. Получить растения - регенеранты и провести их оценку по устойчивости к фузариозу.

Научная новизна. Усовершенствована методика применения искусственного инфекционного фона для отбора устойчивых образцов моркови к фузариозу и альтернариозу в период вегетации. Подобраны ускоренные методы оценки коллекционного материала моркови первого года жизни на устойчивость к F. avenaceum. В результате применения этих методов из 50 изученных образцов рода Daucus выделено 5 источников признака устойчивости к фузариозу. Разработаны элементы методики проведения клеточной селекции моркови на устойчивость к грибу После проведения

клеточной селекции получены растения-регенеранты, устойчивые к этому патогену.

Практическая значимость работы. Оценен уровень вредоносности фузариоза на столовой моркови в производственных условиях Московской области. Усовершенствованные методики позволяют оценить устойчивость селекционного материала в большом объеме на ранних этапах селекции. Полученные в результате исследований устойчивые формы моркови могут служить в качестве исходного материала для получения новых гибридов и сортов, обладающих повышенной устойчивостью к

Апробация работы. Основные положения диссертации были доложены на заседаниях Методической комиссии отдела селекции, на ученом совете ВНИИО. Результаты доложены и опубликованы в материалах научно-практических конференций - «Квасниковские чтения» (Москва, ВНИИО, 2001, 2003).

На защиту выносятся:

1. Вредоносность грибов рода Fusarium в комплексе патогенеза»

моркови столовой в естественных условиях Московской области.

2.Система методов оценки устойчивости генотипов моркови к

Fusarium avenaceum.

3. Исходный материал столовой моркови устойчивый к

полученный методом клеточной селекции.

Автор выражает глубокую благодарность Е.А. Калашниковой, С.Д. Сапелкиной и Т.А. Терешонковой за консультационную помощь в процессе экспериментальных исследований и моральную поддержку.

Объем и структура работы. Работа изложена на 134 страницах компьютерного текста и состоит из введения, 6 разделов, общих выводов, практических рекомендаций, списка литературы, состоящего из 202 наименований, в т.ч. 58 на иностранных языках. Текст иллюстрирован 29 таблицами и 23 рисунками.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

Условия, объекты и методы проведения исследований.

Работа выполнена в 1999-2003 гг. на базе отдела селекции ВНИИО, лаборатории селекции корнеплодов, в пленочных теплицах Селекцентра, производственных условиях ОПХ «Быково», на кафедре с.-х. биотехнологии МСХА.

Объектом исследования служили 50 образцов столовой моркови селекции ВНИИО, образцы иностранной селекции, а также чистые культуры грибов

Оценку устойчивости коллекции образцов столовой моркови проводили в соответствии с методикой ВИР (Сазонова, Власова, 1990). При учете болезни оценивали балл поражения и вычисляли распространенность и развитие в процентах.

В экспериментальных опытах по оптимизации системы методов искусственного заражения использовали методики ВИР (Сазонова, Власова, 1990).

Распространение болезней на корнеплодах моркови определяли визуально после окончания периода хранения. Патогены идентифицировали после выделения их в чистую культуру, используя определитель Н.М. Пидопличко (1977).

Инфекционное состояние семян оценивали по общепринятой методике (Наумова, 1970).

При искусственном заражении дисков, изолированных с корнеплодов использовали методику, разработанную во ВНИИССОК(1988). Минимальное количество оцененных корнеплодов в сортообразце -10 шт.

В 2002 году были заложены два инфекционных фона для оценки селекционного материала на устойчивость к

(работа проводилась совместно с отделом биотехнологии ВНИИО,). Патогены были выделены из корнеплодов моркови. Дозировка инфицирования почвы задавалась через количество субстрата, на котором наработан инокулюм, т.е. 250 гр. на 0,5 м2.

Учет пораженности растений проводили в фазе 3-4 настоящих листьев, а также при уборке корнеплодов.

В качестве стандарта при оценке на устойчивость использовали сорт Леандр, в качестве восприимчивого стандарта сорт REW -186.

В работе, проводимой в МСХА, использовали методики, разработанные на кафедре сельскохозяйственной биотехнологии и изложенные в «Лабораторно-практические занятия по с-х биотехнологии»(1996, 2000).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Распространение и вредоносность грибов родов Fusarium spM Alternaria sp. в условиях ОПХ «Быково» Раменского района М.О.

В ходе исследований был определен видовой состав основных патогенов на различных этапах онтогенеза столовой моркови. Установлена степень распространения и уровень вредоносности грибов рода и в естественных условиях Раменского рай-

она Московской области.

На рисунке 1 представлены результаты оценки распространенности основных грибных заболеваний на семенах, корнеплодах и семенниках столовой моркови.

Распространенность основных заболеваний на столовой моркови.

(естественный инфекционный фон, 1999-2002гг.)

25 20 15

□ альтернариоз 0 фузариоз 13 фомоз

10 гг— п~ iflfcfc.ll

Рис. 1.

Наибольшую вредоносность представляют грибы рода Alternaria. Зараженность ими семян моркови составляет 9%, корнеплодов 20% и семенников - 18%. Грибы рода Fusarium также занимают одно из ведущих мест в комплексе патогенов, паразитирующих на моркови. Зараженность семян этим патогеном составляет - 7,4%, поражение корнеплодов этими грибами при хранении составляет - 9,2%, процент поражения семенников — 11,5%. Таким образом, инфицирование столовой моркови грибами рода и обусловленные этим потери, проис-

ходят на всех этапах онтогенеза моркови. Поэтому селекция на устойчивость моркови к грибам рода Fusarium актуальна и своевременна.

Устойчивость образцов моркови к фузариозу в условиях есте-

В период с 1999-2002 гг. коллекцию моркови выращивали для изучения полевой устойчивости к грибам рода Fusarium. В период вегетации распространенность болезни составляла от 13 до 50%, а при уборке корнеплодов от 6,3 до 40%. Наибольшую устойчивость к этому патогену в условиях естественного заражения проявил гибрид Олимпиец, количество пораженных растений у него было существенно ниже сорта стандарта — сорта Леандр и составляло 6,3% против 13%. Коллекция образцов моркови была разделена на пять сортотипов. Оценка устойчивости сортотипов к фузариозу позволила выявить диф-

ственного заражения.

ференциацию по этому признаку. При оценке моркови в фазу 3-4 настоящих листьев наибольшее число устойчивых образцов было в сор-тотипе Парижская каротель: поражено растений 22%. Пораженность образцов сортотипов Амстердамская, Нантская и Берликум грибами рода Fusarium составила 29,2%, 31,1 % и 3 0,4%, соответственно.

При уборке корнеплодов наибольшую устойчивость проявили образцы сортотипа Нантская: распространенность фузариоза -19,8%. У других сортотипов поражение корнеплодов в образцах было выше и в среднем составило от 24,3% до 29,6%

Как известно, основной вред моркови наносят патогены, развивающиеся в период хранения. Условия хранения 2002-2003гг. были не благоприятны для хранения корнеплодов- температура воздуха колебалась от -5°С до +8°С. Из данных таблицы 1, в которой представлена часть коллекционных образцов, с четко прослеживающимися симптомами поражения различными патогенами, видно, что до 98% корнеплодов в образцах поражены болезнями «хранения». Часто на одном корнеплоде было идентифицировано по 2-3 возбудителя, в некоторых случаях нам не удавалось установить, что же являлось первичной инфекцией. Оранжевоокрашеные образцы поражались в меньшей степени, чем желтоокрашенные корнеплоды: средний процент пораженных корнеплодов составил 80% и 91,9%, соответственно. Наибольшую вредоносность в условиях хранения 2002-2003гт. - представлял фомоз. Поражение корнеплодов грибами родов составило, в среднем, по всем исследованным образцам 15,5% и 15,3% соответственно. Наибольшее количество пораженных корнеплодов «болезнями хранения» было у сорта REW -186- 100%, гибрида Топаз Fi и линий 690П - 98%, 8В - 90%. Наименьшую восприимчивость к этим болезням проявил гибрид И^лимпиец — 52%. На уровне стандарта (Леандр) были поражены корнеплоды сортов Riesen verbesserte wersse №220 - 70%, Zong White №1414 - 69%(имеющие желтую окраску корнеплодов) и линии 225 В - 62%.

Таблица 1

Пораженность корнеплодов коллекционных образцов моркови после хранения

( при естественном заражении, 2002-2003гт.)

Степень развития болезни, %

И" о §• я » Bi г.ч.

а с. VO О § ÜU >2 Б. С о 3 Я А о. 53 4) о Ё & о к & м 0 1 Е 2 л § £ я S s о. U

¡4 О е © 5 и е- и М

Леандр st. 64 93,2 24,2 20,0 29,0 - - 20

Нантская 4 82 79,4 21,6 22,1 24,1 11,6 - -

НИИИОХ 336 70 82,0 7,8 13,6 18,9 21,7 12,0 8,0

Нюанс 96 77,8 15,1 18,1 16,6 3,0 6,0 19

REW-186 100 99,9 16,6 20,4 23,3 - 30,6 9

Топаз Fi 100 79,9 10,7 12,4 11,6 24,7 20,5 -

Олимпиец Fi 52 68,6 7,6 8,2 7,7 18,9 19,4 6,8

среднее 80 83,7 14,2 17,0 20,0 11,7 11,7 8,8

Riesen verbesserte 70 95,8 4,7 5,9 4,7 50,4 12,5 17,6

wersse №220 ж

Zong White №1414 ж 69 81,6 10,4 13,5 18,4 - 20,6 18,7

Голландская желтая 78 86,2 17,6 14,5 17,8 13,4 14,7 8,2

Местная №2356 ж 82 95,7 12,4 11,7 19,7 20,5 - 21,4

Местная №2368 ж 86 91,9 10,7 10,4 11,7 25,4 23,7 -

среднее 91,9 93,2 13,6 12,3 12,8 18,8 20,1 16,6

1238П 94 89,8 24,2 20,0 26,0 6,0 7,6 6,0

690П 98 98,7 20,9 17,6 17,0 7,4 26,6 9,2

8В 90 91,7 22,7 25,6 18,5 11,3 13,6 -

200П 76 93,5 19,0 26,2 30,0 9,3 - 9,0

1238В 100 66,4 7,5 14,0 20,0 8,3 16,6 -

225В 62 80,0 12,0 11,7 11,4 20,6 - 24,3

HCP« 9,0

Примечание: ж- желтая окраска корнеплода.

Использование различных методов искусственного заражения для оценки устойчивости образцов моркови столовой к фузариозу.

Для оценки и отбора исходного материала устойчивость образцов целесообразно проверять при использовании методов искусственного заражения. Нами была проведена работа по подбору и оценке

этих методов, а именно: использование искусственных инфекционных фонов, метод оценки проростков в лабораторных условиях, оценка сегментов, изолированных с корнеплодов.

Последние два - лабораторные экспресс-методы оценки устойчивости - позволяют оценить большое количество исходного материала и провести отбор устойчивых биотипов в неоднородных по этому признаку растительных популяциях.

При использовании различных методов инфицирования растений столовой моркови грибами рода необходимо сравнить оцен-

ки устойчивости, полученные этими методами между собой и с уровнем поражения растений при естественных условиях (Таб.2). За эталон приняты оценки устойчивости, полученные при естественном заражении.

Таблица 2

Поражение образцов столовой моркови фузариозом при заражении различными методами

Образец Поражено растений, %

Естественный инфекционный фон Искусственный инфекционный фон Искусственное заражение в лаб. условиях Диски, изолированные с корнеплода

Леандр st. 18 24,1 38 40

REW-186 воспр st. 34 76,1 100 76

НИИОХ336 20 52,3 54 49

Нюанс 20 31,2 34 60

Топаз Fi 30 56,0 53 70

1238В 23 25,6 26 70

225В 28 37,2 40 50

1585В 31 35,0 39 76

Коэф. Корреляции- +0,76 +0,82 +0,63

Коэффициент корреляции при сравнении лабораторного метода с естественным инфекционным фоном достаточно высок и составляет +0,82, а при сравнении оценки устойчивости в условиях инфекционного фона, с условиями заражения в естественных условиях - коэффициент корреляции равен +0,76. При инфицировании дисков изолированных с корнеплода коэффициент корреляции равен +0,63. Следовательно, эти методы заражения моркови грибами рода можно ис-

пользовать при оценке растений моркови на устойчивость к этим патогенам.

Оценки устойчивости образцов, полученные при использовании экспресс- методов, несколько завышены в сторону восприимчивости по сравнению с результатами, полученными на искусственном инфекционном фоне в теплице. Это вполне естественно т.к. в лабораторных условиях поддерживаются более благоприятные условия для развития гриба. По иммунологической характеристике, устойчивость оцененных в лаборатории образцов распределяется так же, как в условиях искусственного инфекционного фона (Таб.4).

Результаты испытания различных методов оценки и отбора, устойчивых образцов моркови позволили сформировать систему методов оценки (Таб. 3). Использование этой системы позволяет ускорить селекционный процесс на ранних этапах и проводить оценку исходного материала в удобное для селекционера время.

Таблица 3

Система методов оценки и отбора, образцов столовой моркови на устойчивость к грибам рода Fusarium.

Метод Сроки использования Решаемые задачи

Лабораторная оценка проростков в инокулироваяной почве В течение всего года Предварительная оценка коллекционного материала

Оценка проростков на инфекционном фоне Период вегетации Оценка и отбор

Оценка дисков изолированных с корнеплода В течение всего года Выделение устойчивых корнеплодов из образца

Оценка корнеплодов во время хранения Осень- весна Оценка на устойчивость и лежкость

В таблице 4 представлены результаты оценки коллекционных образцов полученные в условиях искусственного инфекционного фона, созданного в условиях теплицы селекцентра ВНИИО. При использовании этого метода оценку проводили в 2 срока: в период вегетации на 50-е сутки после всходов и при уборке корнеплодов.

Таблица 4

Оценка образцов моркови на устойчивость к фузариозу на искусственном инфекционном фоне.

(в теплице селекцентра, 2001-2002)

Образец Поражено растений, % Степень устойчивости по шкале СЭВ (1-9 баллов)

Фаза 3-4 настоящих листьев, А Корнеплоды при уборке, Б

А Б

Леандр st. 24,1 48,6 7 5

REW-186 в. st 76,1 100- 1 1

НИИОХ- 336 52,3 56,7 3 3

Нантская 4 30,0 30,0 7 5

Нюанс 32,0 53,6 5 3

Олимпиец Fi 13,1 12,5 9 7

Riesen verbesserte wersse №220 ж 20,0 32,1 7 5

Zong White №1414 ж 0,0 24,0 9 7

Голландская желтая №1382 15,7 23,3 7 7

Белая №1425 15,3 22,0 7 7

Места ая№2368 ж 23,6 20,0 7 7

Местная№337ж 25,0 23,5 7 7

Местная 20,0 25,0 7 7

Местная № 1766ж 25,0 25,0 7 7

8В 32,8 23,8 5 7

1238В 25,6 25,0 7 7

НСР 05 6,1 6,9

Примечание: ж- желтая окраска корнеплода.

Из данных таблицы 4 следует, что сорт REW-186 был поражен на 76%, у сорта-стандарта (Леандр) поражение растений составило -24,1%, и он по иммунологической характеристике относится к устойчивым сортам. Достоверно на уровне стандарта был устойчив сорт Нантская 4 (распространенность 25%), и все образцы, имеющие желтую окраску корнеплодов. К высокоустойчивым образцам можно отнести гибрид Р^Олимпиец, имеющий 13,1% пораженных растений и образец Zong White №1414, у которого на период оценки не было поражено патогеном ни одного растения. Все остальные образцы относятся к восприимчивым с различным процентом пораженных растений.

В период уборки заражение не проявилось в высокой степени или носило скрытый характер. Из линейного материала выделились в этот период две линии - 8В; 1238В - со степенью устойчивости по шкале СЭВ 7 баллов, у которых количество пораженных растений составляло: 23,6%, и 25,0%, соответственно

Восприимчивость образцов моркови к Alternaria radicina.

В 1999-2002 гг. проводили оценку 50 образцов моркови на устойчивость к альтернариозу, т.к. эта оценка необходима в целях корректировки хода селекционного процесса при селекции на устойчивость к фузариозу. По результатам оценки коллекции 55% образцов было отнесено к средневосприимчивым, 32% - к устойчивым, 13% - к сильновосприимчивым образцам.

В таблице 5 представлены устойчивые образцы, из них максимально устойчивы: Олимпиец F¡_Zong White №1414, Riesen verbesserte

№220, которые можно использовать в качестве исходного материала при создании устойчивых к этому патогену сортов.

Таблица 5

Оценка коллекционных и селекционных образцов столовой моркови на устойчивость к Alternaria radicina.

(искусственный инфекционный фон) (2003г).

образец Количество пораженных растений % Степень развития болезни % Стспень устойчивости по шкале СЭВ (1-9 баллов) иммунологическая характеристика

Леандр st 50 20 7 устойчивый

Олимпиец Fi 15,4 25 7 устойчивый

Riesen verbesserte wersse №220 52,3 17,6 7 устойчивый

Zong White №1414 22,8 22,8 7 устойчивый

Голландская желтая №1382 24,4 24,4- 7 устойчивый

Местная №2418 43,7 21,4 7 устойчивый

Местная №2368 40,9 22,1 7 устойчивый

690П 34,4 24 7 устойчивый

HCPos обшиЯ 6,8-

Применение клеточной селекции в оценке и отборе устойчивых к Fusarium avenaceum клеточных популяций и получение растений - регенерантов.

Кроме традиционных методов оценки и отбора мы использовали клеточную селекцию, при которой в жестких селективных условиях выживает лишь определенный мутантный тип клеток. Для проведения работ по селекции растений т vitro в качестве объекта исследований мы использовали каллусную культуру, так как она представляет собой легко доступный материал и на протяжении ряда субкультивирований не утрачивает способность к регенерации.

При получении каллусной ткани изучали зависимость каллусоге-неза от генотипа и используемого первичного экспланта, в качестве которых использовали сегменты листовых черешков, гипокотильные сегменты и диски, изолированные из сердцевидной ткани корнеплода (Рис. 2).

Рис.2.

Из рисунка видна зависимость между каллусообразованием и типом первичного экспланта. Наиболее интенсивный каллусогенез наблюдали у эксплантов изолированных с гипокотильных сегментов. Причем этот процесс не зависел от исследуемого генотипа. Это, вероятно, обусловлено тем, что гипокотили состоят из паренхимных клеток и тканей проводящей системы, клетки которых способны хорошо переходить в дедиферинцированное состояние.

Интенсивность образования каллусной ткани можно определить по приросту сырой биомассы каллуса (Рис.3). Масса каллусной ткани сорта Витаминная 6 и линии 200П составила соответственно 256,8мг и 294,4мг, а для линий 1585В и 8В и сортов Леандр и Нюанс - 786,9мг, 724,3мг, 756.6мг, 778,1мг, соответственно. Причем при культивировании каллусной ткани генотипов Витаминной 6 и линии 200П в течение последующих 3-х пассажей наблюдалось снижение активности роста.

Сырая биомасса каллусной ткани в конце пассажа.

Рис. 3.

В качестве селективного фактора использовали культуральный фильтрат (КФ) гриба Fusarium avenaceum.

Получение КФ гриба осуществляли путем культивирования патогена в жидкой питательной среде Чапека.

В работе испытывали влияние 5-ти разных концентраций культураль-ного фильтрата на пролиферацию каллусных клеток, и подбирали концентрацию, при которой клеточная селекция на устойчивость к патогену эффективна (Таб.6). Контролем служила питательная среда, не содержащая КФ патогена.

Из таблицы 6 видно, что культуральный фильтрат в низких концентрациях не оказывал существенного ингибирования на рост и развитие каллусной ткани. Повышенные концентрации КФ гриба (40% и 50%) в питательной среде снижали жизнеспособность каллусной ткани в 3 раза по сравнению с контролем. Из 4-х изучаемых генотипов самая достоверно наименьшая жизнеспособность и наименьший прирост

каллусной ткани наблюдался у линии 8В. При культивировании кал-лусной ткани на питательной среде, содержащей КФ в концентрации 30%, жизнеспособность составила 42,2%, а прирост каллусной ткани по отношению к контролю — 55,9%. В этом варианте лучшие показатели были отмечены - для сорта Леандр.

Таблица 6

Прирост и жизнеспособность каллусной ткани при различных концентрациях культурального фильтрата гриба Fusarium avenaceum

Образец Концент) зация КФ//

0 10 20 30 40 50

1585В 96,2+5 85,6±3,5 68,3±4,6 46,3±4,9 21,2±4 20,3+2,9

8В 89,6+3 80,0+4 61,8+4,8 42,2±4,9 19,6+3,9 14,3+3,2

Леандр 95,9+1,9 86,2±3,4 70,3±4,5 49,4±4,9 20,7±3,9 18,8+3,9

Нюанс 94,3+1,9 82,4+3,8 67,2+4,6 45,4+4,9 20,8-fc3,9 17,1+3,9

Выявленные экспериментально концентрации КФ были нами использованы в дальнейшей работе по клеточной селекции, которая предусматривает следующие этапы.

1. Культивирование каллусной ткани на селективной среде (концентрация КФ 30%, 40%) в течение 3-х месяцев.

2. Культивирование каллуса в течение одного пассажа на среде без КФ.

3. Культивирование каллусной ткани на селективной среде в течение 3-х месяцев (концентрация КФ 30%, 40%).

После проведения клеточной селекции, выжившие популяции клеток пересаживали на питательную среду для морфогенеза. В качестве индуктора морфогенеза использовали физиологически активные вещества 6-БАП, 21р, ИУК. В результате проведенного эксперимента наблюдалось образование адвентивных почек или соматических эмбрио-идов (Таб.7). Установлено, что только у линии 1585В, при добавлении в питательную среду цитокинина 6-БАП происходило образование соматических эмбриоидов, в 95% случаев при использовании в качестве первичного экспланта гипокотильных сегментов. Для остальных гене-

типов морфогенетический потенциал реализовывался только через образование адвентивных почек.

Таблица 7

Влияние различных цитокининов на морфогенез каллусной ткани моркови.

Генотип Вариант среды Первичный эксплант Тип морфогенеза, %

Адвентивные почки Соматический эмбриогенез'

Леандр МС +6-БАП гипокотиль 50 -

сегменты корнеплода 45 -

МС+2ф+ИУК гипокотиль 47 -

1585В МС +6-БАП гипокотиль 5 95

сегменты корнеплода 62 -

МС+21р+ИУК гипокотиль 60 -

Для формирования полноценных растений, меристематические ткани были перенесены в пробирки на жидкую питательную среду. В этих условиях выращивания наблюдался рост побегов и формирование растений с нормальной морфологией. В таблице 8 представлены данные о числе полученных растений регенерантов после клеточной селекции.

Таблица 8.

Число растений- регенерантов моркови, полученных после кле-

точной селекции.

Генотип Схема селекции Количество растений, шт.

1585В 3(30%КФ) 1(ОКФ)4(30%КФ)* 125

3(40%КФ) 1 (ОКФ)4(40%КФ) 110

8В 3(30%КФ) 1(0КФ)4(ЗО%КФ) 40

3(40%КФ) 1 (0КФ)4(40%КФ) 25

Леандр 3(40%КФ) 1 (0КФ)4(4О%КФ) 104

3(30%КФ) 1(0КФ)4(ЗО%КФ) 98

Нюанс 3(40%КФ) 1(0КФЖ40%КФ) 112

3(30%КФ) 1(0КФЖ30%КФ) 106

Примечание* 3,1,4, число пассажей, 40%,30% - концентрация КФ.

Выбранные схемы селекции способствовали получению расте-ний-регенерантов. Причем наибольшей способностью к регенерации

растений из каллусной ткани обладала линии 1585В, для которой была характерна высокая морфогенетическая активность клеток на всех этапах селекции in vitro.

Растения-регенеранты полученные из каллусной ткани, прошедшей отбор клеток в селективных условиях, были проверены на устойчивость к патогену, т.к устойчивость клетки не всегда эквивалентна устойчивости интактного растения. Для оценки растения-регенеранты культивировали на питательной среде, содержащей КФ патогена в концентрации 80%(Таб. 9).

Таблица 9

Сравнительная оценка устойчивости растений-регенерантов на питательной среде, содержащей КФ Fusarium avenaceum, в концентрации 80%. п=100.

(схема селекции 3(40%КФ) 1(0КФ)4(40%КФ))

Образец Поражено растений, % Степень поражения растений, %

Линия 1585В

Исходное растение 100 82,3

Контроль Ro 80,0 66,5

Roc 50,0 30,0

Леандр

Исходное растение 90,0 80,1

Контроль Ro 78,3 60,0

Roc 48,2 32,4

Ro- растения-регенеранты контрольного варианта.

Roc - растения-регенеранты после селекции in vitro.

Данные таблицы 9 свидетельствуют о том, что растения после клеточной селекции обладают устойчивостью к токсинам гриба Fusarium avenaceum, по сравнению с исходным генотипом.

Растения-регенеранты после лабораторной оценки, а также исходные растения (выращенные из семян), были высажены в вегетативные сосуды с почвой отобранной на инфекционном фоне. В этих условиях их выращивали в течение 2-х месяцев. На протяжении этого пе-

риода отмечалась гибель растительного материала, полученного в условиях in vitro, в 20% случаев. В то время как в контрольном варианте гибель растений составляла 40-50%.

Оставшиеся, устойчивые растения-регенеранты после яровизации были высажены в теплицу и впоследствии помещены под индивидуальные изоляторы. В результате самоопыления были получены семена. Таким образом, в результате селекции in vitro, были получены растения - регенераты моркови, обладающие повышенной устойчивостью к экзометаболитам гриба Fusarium avenaceum в 20-25% случаев, по отношению к исходному генотипу.

Выводы.

1. Установлено, что грибы рода Fusarium в производственных условиях ОПХ «Быково» Раменского района занимают одно из ведущих мест по распространенности и вредоносности в патогенезе семенных растений моркови до 11,7%, заражение семян составляет 7,4%. При хранении маточников процент поражения корнеплодов равен 9,2%.

2. Установлено, что в период вегетации наибольшую устойчивость к фузариозу проявляют образцы сортотипа Парижская каротель, а при уборке корнеплодов - образцы сортотипа Нантская.

3. В результате оценки при искусственном заражении из 50 образцов столовой моркови выделены три источника устойчивости к фузариозу и альтернариозу (Олимпиец Fi, Zong White № 1414, Riesen verbesserte wersse №220), а также к фузариозу -2 устойчивые линии 1238П и 8В, а к альтернариозу линия 906.

4. Усовершенствованная система методов оценки устойчивости, сочетающая 2 экспресс-метода и оценку на искусственном инфекционном фоне, на устойчивость моркови к позволяет проводить предварительную оценку и отбор устойчивых образцов в удобное для селекционера время.

5. Установлено, что оценка образцов на устойчивость к фузарио-зу с помощью экспресс-методов на проростках моркови, коррелирует с соответствующими показателями, полученными на искусственном инфекционном фоне (г= +0,82) и с оценкой устойчивости при заражение в естественных условиях(г= +0,76). При оценке дисков

изолированных с корнеплодов коэффициент корреляции составляет +0,62.

6. Установлено, что культивирование каллусной ткани моркови на питательной среде, содержащей КФ гриба Fusarium avenaceum в концентрации 30-40%, позволяет получить растения-регенеранты с повышенной устойчивостью к экзометаболитам этого патогена.

7. Проверка растений-регенерантов сорта Леандр и линии 1585В, на искусственном инфекционном фоне показала их повышенную устойчивость к Fusarium avenaceum в 20-25% случаев, по сравнению с исходным генотипом.

Практические рекомендации.

1. Выявленные образцы столовой моркови устойчивые к фуза-риозу и альтернариозу рекомендуются для использования в селекции на устойчивость к этим патогенам.

2. Гибрид Р]'Олимпиец, проявивший высокую устойчивость к фу-зариозу при различных условиях заражения, рекомендуется использовать для выращивания в хозяйствах, где фузариоз моркови является экономически значимым заболеванием.

3. Представленная в работе система экспресс-методов оценки исходного материала моркови (оценка проростков моркови и сегментов, изолированных с корнеплода) рекомендуются для использования в научных учреждениях, занимающихся селекцией столовой моркови.

4. Разработанные элементы методики клеточной селекции моркови на устойчивость к Fusarium avenaceum, позволяют получать исходный материал моркови устойчивый к этому патогену, который может использоваться для дальнейшей селекционной работы.

Список опубликованных работ по теме диссертации.

1. Ипатова Н.В. Калашникова Е.А. Влияние веществ с цитокини-новой активностью и первичного экспланта на процесс регенерации растений моркови // Доклады третьей международной конференции посвященной памяти Б.В. Квасникова. - М-2003,. С. 513-514.

2. Ипатова Н.В. Основные виды патогенов на столовой моркови и распространение фузариоза //Доклады третьей международной конференции посвященной памяти Б.В. Квасникова. ВНИИО. - М-2003,. С. 208-209.

3. Лебедева Т.Н., Ильченко О.В., Ипатова Н.В., Поляков А.В. Оценка генотипов моркови различного географического происхождения на устойчивость к фузариозу и альтернариозу в условиях искусственного инфекционного фона // Современные системы защиты растений и перспективы использования достижений биотехнологии и генной инженерии/ материалы Всероссийского совещания. Голицино-2003.- С.61-63.

4. Калашникова Е.А., Ипатова Н.В. Влияние вторичных метаболитов гриба на рост каллусной ткани моркови // Овощеводство: состояние, проблемы, перспективы /научн. тр. ВНИИО.- М-2001, Т.-2.- С.-100-103.

5. Леунов В.И., Клыгина Т.Э., Сапелкина С.Д., Ипатова Н.В. Изучение физиологически активных веществ при гибридном семеноводстве моркови // Материалы докладов международной научной конференции молодых ученых-овощеводов. ВНИИО.- М-1999,- С. 67-74.

6. Ипатова Н.В. Основные болезни моркови и меры борьбы с ними// Картофель и овощи. - 2002.- № 8.- С.26-27.

7. Клыгина Т.Э., Леунов В.И., Ипатова Н.В. Новые подходы в селекции и семеноводстве моркови. // Приоритетные направления в селекции и семеноводстве с.-х. растений в 21 веке. /сб. тр. ВНИИССОК.-М.-2003.- С.-203.

Усл.печ.л. 1,16 Зак, 182 Тираж 100экз.

АНО «Издательство МСХА» 127550, Москва, ул. Тимирязевская, 44

.«-R 165

Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Ипатова, Наталия Валерьевна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1.Распространенность и вредоносность фузариозной гнили.

1.2. Биология и патогенез возбудителя.

1.3. Распространение и вредоносность возбудителя черной гнили - 13 Alternaria radicina.

1.4. Природа устойчивости растений к фузариозу и пути создания 17 сортов слабовосприимчивых к заболеванию.

1.5. Клеточная селекция растений, на устойчивость к болезням. 18 1.5.1 Использование патогенов в клеточной селекции растений на устойчивость к болезням.

1.5.2. Использование патотоксинов в селекции растений.

1.5.3. Использование культуралыюго фильтрата патогена при 24 клеточной селекции.

1.6. Клеточная селекция на устойчивость к грибам рода Fusarium 28 и методы оценки устойчивых форм, полученных в условиях in vitro.

ГЛАВА 2. МЕСТО, УСЛОВИЯ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДИКА РАБОТЫ.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА 3. Встречаемость грибов рода Fusarium ssp. в комплексе 47 патогенов моркови и оценка образцов моркови на устойчивость к фузариозу и альтернариозу.

3.1. Вредоносность грибов рода Fusarium ssp. в комплексе патоге- 47 нов моркови. Симптомы развития болезни на разных этапах онтогенеза.

3.1.1. Распространение фузариозной и черной гнили на корнеплодах 47 столовой моркови, в комплексе с основными патогенами, при хранении.

3.1.2. Встречаемость фузариоза и альтернариоза на семенных растениях.

3.1.3. Микофлора семян моркови, выращенных в условиях Московской области.

3.2.Оценка устойчивости генотипов столовой моркови в период вегетации к фузариозному увяданию в условиях естественного 59 заражения.

3.3. Использование искусственных инфекционных фонов при 66 оценке образцов столовой моркови на устойчивость к

Fusarium avenaceum.

3.4. Восприимчивость образцов моркови к Alternaria radicina.

3.5. Лежкость корнеплодов столовой моркови при длительном хранение.

3.6. Оценка корнеплодов моркови на нораженность комплексом 77 болезней после зимнего хранения.

3.7. Использование экспресс-методов для оценки растений столовой 80 моркови на устойчивость к Fusarium avenaceum.

Глава 4. Применение методов клеточной селекции моркови на устойчивость Fusarium avenaceum.

4.1. Особенности каллусогенеза и морфогенеза в культуре ткани 87 столовой моркови.

4.1.1. Зависимость каллусогенеза от генотипа и первичного экспланта

4.1.2 Характеристика каллусной ткани различных генотипов моркови.

4.2. Влияние культурального фильтрата гриба Fusarium avenaceum 94 на различные генотипы моркови.

4.2.1. Способы получения культурального фильтрата гриба

Fusarium avenaceum.

4.3. Технология клеточной селекции моркови на устойчивость к па- 99 тогену Fusarium avenaceum.

4.3.1. Влияние экзометаболитов патогенного гриба

Fusarium avenaceum, на рост каллусной ткани моркови.

4.4.Получение растений - регенерантов.

4.5. Оценка растений-регенерантов на устойчивость к фузариозу.

5. Выводы

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Оценка исходного материала столовой моркови на устойчивость к фузариозу и альтернариозу с использованием методов традиционной и клеточной селекции"

Актуальность темы. В современной селекции моркови большое внимание уделяется проблеме повышения устойчивости сортов и гибридов к отдельным возбудителям наиболее вредоносных болезней и их комплексу. В последние годы в Нечерноземной зоне России все большее распространение получают болезни моркови (Daucus carola), вызываемые грибами рода Fusarium Link. Ex. Fr. Фузарии могут поражать растения моркови на всех этапах ее развития, вызывая гибель проростков моркови до 30% (Nowicki, 1992), увядание семенников и поражение корнеплодов при хранении до 20% (Першина,1994).Зараженность семян моркови фузариозом достигает 21% (Дураков, 1985).

В современной литературе и практической селекции не встречаются работы, в которых в полной мере были бы отражены приемы оценки и отбора (на инфекционных фонах) устойчивых к этому патогену генотипов моркови. В настоящие время нет сортов моркови с устойчивостью к фузариозу.

В сочетании с классическими методами селекции на устойчивость к болезням, можно использовать методы биотехнологии, которые ускоряют селекционный процесс и позволяют расширить спектр генетического разнообразия. В этом направлении ведущее место занимает клеточная селекция, при которой в условиях in vitro проводится отбор клеточных популяций, устойчивых к селективному фактору, и затем регенерируют целые растения.

В настоящее время работ по использованию методов биотехнологии, а именно клеточной селекции, в получении устойчивых к фитопатогепам сортов и гибридов моркови мало, а полученные данные трудновоспроизводимы.

Цель работы:

Оценка исходного материала столовой моркови па устойчивость к фузариозу традиционными методами селекции, и на клеточном уровне, in vitro.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Определить уровень вредоносности фузариоза на столовой моркови в естественных условиях.

2. Оценить коллекцию моркови на устойчивость к возбудителям фузариоза и альтернариоза на искусственных инфекционных фонах.

3. Подобрать эффективные методы экспресс-анализа для определения устойчивости столовой моркови к фузариозу.

4. Изучить условия культивирования каллусной ткани моркови методами in vitro с последующей оптимизацией питательной среды обеспечивающей получение растений регенерантов.

5. Провести оценку и клеточную селекцию на каллусной ткани моркови обладающей устойчивостью к Fusarium avenaceum.

6. Оцепить растения - регенераты на устойчивость к фузариозу.

Научная новизна. Усовершенствована методика применения искусственного инфекционного фона для отбора устойчивых образцов моркови к фузариозу в период вегетации. Подобраны ускоренные методы оценки коллекционного материала моркови первого года жизни, на устойчивость к Fusarium avenaceum при искусственном заражении. В результате применения этих методов из 50 изученных образцов выделено 5 источников признака устойчивости к фузариозу. Разработаны элементы методики проведения клеточной селекции моркови на устойчивость к грибу Fusarium avenaceum. После проведения клеточной селекции, получены растения-регенеранты устойчивые к этому патогену.

Практическая значимость работы. Оценен уровень распространения вредоносности фузариоза на столовой моркови в условиях Московской области и Белоруссии. Усовершенствованные методики позволяют оценить селекционный материал в большом объеме на ранних этапах селекции. Полученные в результате исследований устойчивые формы моркови могут служить в качестве исходного материала для получения новых гибридов и сортов, обладающих повышенной устойчивостью к Fusarium avenaceum.

Апробация работы. Основные положения диссертации были изложены на заседаниях Методической комиссии отдела селекции, на Ученом совете ВНИИО. Результаты доложены и опубликованы в материалах научно-практических конференций (Квасниковские чтения 2001,2003)

На защиту выносятся:

1. Вредоносность грибов рода Fusarium в комплексе патогенеза моркови столовой в условиях Раменского района Московской области.

2.Система методов оценки устойчивости генотипов моркови к Fusarium avenaceum.

3. Исходный материал столовой моркови устойчивый к Fusarium avenaceum полученный методом клеточной селекции.

Заключение Диссертация по теме "Селекция и семеноводство", Ипатова, Наталия Валерьевна

Выводы.

1. Установлено, что грибы рода Fusarium в производственных условиях ОПХ «Быково» Раменского района занимают одно из ведущих мест по распространенности и вредоносности в патогенезе семенных растений моркови до 11,7%, заражение семян составляет 7,4%. При хранении маточников процент поражения корнеплодов равен 9,2%.

2. Установлено, что в период вегетации наибольшую устойчивость к фузариозу проявляют образцы сортотипа Парижская каротель, а при уборке корнеплодов - образцы сортотипа Нантская.

3. В результате оценки при искусственном заражении из 50 образцов столовой моркови выделены три источника устойчивости к фузариозу и альтернариозу (Олимпиец Fb Uong White № 1414, Riesen verbesserte wersse №220), а также к фузариозу-2 устойчивые линии 1238Пи8В,ак альтернариозу линия 906.

4. Усовершенствованная система методов оценки устойчивости, сочетающая 2 экспресс-метода и оценку на искусственном инфекционном фоне, на устойчивость моркови к Fusarium avenaceum, позволяет проводить предварительную оценку и отбор устойчивых образцов в удобное для селекционера время.

5. Установлено, что оценка образцов на устойчивость к фузариозу с помощью экспресс-методов на проростках моркови, коррелирует с соответствующими показателями, полученными на искусственном инфекционном фоне (г= +0,82) и с оценкой устойчивости при заражение в естественных условиях(г= +0,76). При оценке дисков изолированных с корнеплодов коэффициент корреляции составляет +0,62.

6. Установлено, что культивирование каллусной ткани моркови на питательной среде, содержащей КФ гриба Fusarium avenaceum в концентрации 30-40%, позволяет получить растения-регенеранты с повышенной устойчивостью к экзометаболитам этого патогена.

7. Проверка растений-регенерантов сорта Леандр и линии 1585В, на искусственном инфекционном фоне показала их повышенную устойчивость к Fusarium avenaceum в 20-25% случаев, по сравнению с исходным генотипом.

Практические рекомендации.

1. Выявленные образцы столовой моркови устойчивые к фузариозу и альтернариозу рекомендуются для использования в селекции на устойчивость к этим патогенам.

2. Гибрид Р|Олимпиец, проявивший высокую устойчивость к фузариозу при различных условиях заражения, рекомендуется использовать для выращивания в хозяйствах, где фузариоз моркови является экономически значимым заболеванием.

3. Представленная в работе система экспресс-методов оценки исходного материала моркови (оценка проростков моркови и сегментов, изолированных с корнеплода) рекомендуются для использования в научных учреждениях, занимающихся селекцией столовой моркови.

4. Разработанные элементы методики клеточной селекции моркови на устойчивость к Fusarium avenaceum, позволяют получать исходный материал моркови устойчивый к этому патогену, который может использоваться для дальнейшей селекционной работы.

116

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата сельскохозяйственных наук, Ипатова, Наталия Валерьевна, Москва

1. Аврова А.О. Физиолого-биохимические особенности взаимодействия томатов с Alternaria solani и селекция in vitro на устойчивость к альтер-нариозу // Автореф. диссерт. к.б.н., ВИЗР, 1994. -18 с.

2. Асфандиерова P.P. Использование суспензионных культур из каллусной ткани пшеницы в клеточной селекции на устойчивость. /Тез.докл.1 Всесоюзного симпозиума «Новые методы биотехнологии растений».- Пущино, 1991.- С. 28.

3. Белякова Г.А., Ермолинский Б.С., Свиридов С.И. и др. Токсичность КФ грибов, вызывающих пятнистость на хлопчатнике.// Вестник Московского ун-та, 1991.- № 4.- С.56-61.

4. Белякова Г.А., Левкина Л.М. Токсические метаболиты грибов. И неспецифические митотоксины // Миколог, и фитопатол., 1992.- Т.26.-Вып.З.- С.183-188.

5. Берестецкий О.А Определение фитотоксичной активности культур микросеопических грибов. // В кн.: Методы экспериментальной микологии.- Киев, 1973.-С. 165-175.

6. Билай В.И. Фузарии (биология и систематика). Киев, изд. Ак. Наук УССР. 1955.-С. 319.

7. Биотехнология растений: культура клеток /Под ред. Бутенко Р.Г.-М.:Агропромиздат, 1989.-С. 123.

8. Боос Г.В. Власова Э.А. Исследования генофонда ВИР в селекции овощных культур на устойчивость к основным заболеваниям //Селекция овощных культур на устойчивость к основным заболеваниям.- М.,1984.-С. 12-20.

9. Бунин М.С. Новые овощные культуры России.- М.: ФГНУ «Росин-формагротех»,- 2002. С. 190-208.

10. Бутенко Р.Г., Гусев М.В., Киркин А.Ф. и др. Клеточная инженерия. Биотехнология, 3 книга.- М.: Высшая школа, 1987.-С. 128.

11. Бутенко Р.Г. Культура клеток растений и биотехнология.- М.: Наука, 1986.- С. 67

12. Вальдеррама Р.А.С. Изучение процессов регенерации и клонирования некоторых перуанских видов картофеля к культуре in vitro J Авто-реф. диссерт. к.б.н.- М., 2002.- С. 23.

13. Ван дер Плапк Я. Проблемы иммунитета культурных растений М.: Колос, 1972.-С. 254.

14. Вахания В.И. Видовой состав патогенной микрофлоры столовых корнеплодов при хранении. // Сб. ст. мол. уч. и плодоовощеводов. Труды НИИОХ.- 1979.-Т.9.-С. 100-102.

15. Вахрушева Т.Е. Методические указания по инвентаризации болезней и микофлоры корнеплодов моркови в условиях хранения.- J1.: ВИР, 1980.- С. 25-28

16. Вахрушева Т.Е., Власова Э.А. Инвентаризация болезней и микофлоры корнеплодов моркови в период хранения. Л., 1980.

17. Власова Е.А. Фитопатологические аспекты изучения устойчивости овощных растений к болезням.// Сб. науч. трудов по прик. ботанике, генетике и селекции. Л., -1985.- 'Г. 92.

18. Власова Э.А.закономерность распределения устойчивости среди разнообразия родов Lycopersicon Tourn. и Daiicus L.I I Тр.ио прикл. Бот., ген. И сел.-1987.-Т. 102.-С.89-81.

19. Власова Э.А., Федорепко Е.И. Закономерность распределения устойчивости к комплексу болезней среди видового разнообразия Daucus са-rota.ll Бюлл. ВАСХНИЛ. Вып. 192. -Л.: ВИР.-1989.

20. Винцунас Т.С. Полевая устойчивость подвидов и разновидностей моркови к грибным болезням.//Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. 1980.- Т. 66. Вып. 2. С. 84-90.

21. Еременко П.С. Учет смешанных гнилей клубней картофеля. //Защита растений.- 1984.-№1.- С.20

22. Генетические основы селекции растений на иммунитет.// Сб.тр.- М.: Наука, 1973.

23. Германович С.Т. Отбор клеточных линий клевера лугового, устойчивых к КФ Fusarium oxysporum.il Материалы конф. Молодых ученых иаспирантов "Новые идеи в растениеводстве, и пути их реализации", М., 1991.- С. 90-91.

24. Гирко В.С., Волощук К.Г. Оценка устойчивости к действию КФ грибного патогена в культуре незрелых зародышей.// С.-х. биология, сер. Биология растений, 1993.- № 9.- С. 62-70.

25. Гришкова В.П., Виневцев B.C., Хапдобики Л.М. Физиологическая роль ряда фенольпых соединений, образующихся в тканях моркови под воздействием гриба Phoma rostrupii.il Научные доклады высш. Биол. школы, 1984.- № 6.- С. 63.

26. Гумбатова Р.И., Раджабова А.А. Синтез липидов Alternaria.// Известия АН Аз СССР, сер. Биол. наук., 1988.- №5.- С. 117-122.

27. Данлади Дада Кута. Маркеры сортовой устойчивости к пирикулярио-зу в каллусной культуре риса.// Автореф. диссерт. к.б.н., М., 2000.-21 с.

28. Дементьева М.И., Выгонский М.И. Болезни овощей, плодов и картофеля при хранении.-М.: В.О.Агропромиздат, -1988.-С. 231.

29. Дорожкин И.А., Соколов Л.И. Черная гниль моркови и борьба с ней сельского хозяйства Белоруссии. 1985.- № 12.- С. 24.

30. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта.-М.: Колос, 1976.-416 с.

31. Дьяков Ю.Т. Физиолого-биохимические механизмы устойчивости растений к грибным болезням.// Итоги науки и техники, сер. Защита растений, ВИНИТИ,- 1983. Т. 3.

32. Жидкова Н.И. Селекция сортов и гетерозисных гибридов моркови с высоким качеством продукции, //автореферат дис. на соиск. уч. ст. д.с.-Х.Н.-М.-1996. С.49.

33. Жучаева Е.Н. Патогенные микромицеты и устойчивость к ним моркови. // Афтореф. диссерт. К.б.н. 1993. С. 20.

34. Жучаева Е.Н. Гринберг Е.Г. Биологическое обоснование мер борьбы с инфекциями на семенах моркови. //Сибирский вестник с.-х. наук,-1984.-С. 154.

35. Запрометов М.Н. Фенольные соединения растений: биосинтез, превращения и функции.// Новые направления в физиологии растений, М.: Наука, 1985.- С.143-162.

36. Запрометов М.Н. Фенольные соединения: распространение, метаболизм и функции в растениях. М.: Наука, 1993, 272 с.

37. Запрометов М.Н. Специализированные функции фенольиых соединений в растениях.// Физиология растений, 1993. Т. 46. С. 291.

38. Закиян JI. Грибы из рот Alternaria и Stemphylium в Армении и некоторые их биологические особенности.// Автореф. диссертации к.б.н., Ереван, 1982. С.20.

39. Иванова Н.Г. Разработка селективного фактора для проведения клеточной селекции на устойчивость к Corynebamiimsepedorium.il Использование клеточной технологии в селекции картофеля. М. 1987- С. 26-28.

40. Иванова О.С. Клеточная селекция на инфекционном фоне для получения фузариозоустойчивых форм томатов.// Материалы Всесоюз. Конф. по с/х биотехнологии, Целиноград, 1991.- С. 97-98.

41. Иванюк В.Т. Методы и результаты оценки моркови на устойчивость к сухим гнилям //Л.:ВИР, 1989.

42. Иванюк В.Т., Свиридов А.В. Виды родов Alternaria и Stemjhilium -возбудителей болезней моркови в Беларуссии.// Науч. докл, высш. шк. библ. Науки, 1989.- № 5.- С. 72-74.

43. Иванюк В.Т., Свиридов А.В. Бурая пятнистость листьев моркови. // Изв. АН БССР, сер. С/х наук, 1990.

44. Иванюк В.Т., Нефедова Л.Г. Методы и результаты оценки моркови на устойчивость к сухим гнилям. //Бюлл. ВАСХНИЛ Вып. 192. Л.: ВИР, 1989.

45. Исаев Г.И. Закатова Г.Н. Лежкоспособность моркови после механической уборки //Хранение и плодоовощеводство. М. -1983.

46. Калашникова Е.А. Клеточная селекция пшеницы на устойчивость к септориозу.//Сельскохозяйственная биотехнология. Избранные работы, М.: Воскресенье, 2000.-Т.1. С.61-71.

47. Калашникова Е.А. Карсункина Н.П. Регуляторная роль фитогормонов при адаптации растительных клеток к стрессовым условиям in уЦго.//Аллоцитоплазматическая пшеница и некоторые аспекты биотехнологии растений. М.: Спутник, 2003.-С.-84.

48. Калашникова Е.А. Раскалиева В.А. Использование методов биотехнологии в клеточной селекции моркови на устойчивость к альтернарио-зу.// Известия ТСХА. 1997.Вып.4.С.163-165.

49. Калинин Ф.Л. и др. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений. Киев.: Наукова думка, 1980.- С 24.

50. Кашникович В.И. Состав и вредоносность болезней моркови при хранении. // Сб. тр. Новосибирского СХИ. -1980.- Т. 130. С. 19-25

51. Кербаева Л. Грибы рода Fusarium на плодах и овощах во время хранения в Туркменистане. //Изд. АН ТССР.- 1975.

52. Кирай 3. Клемент 3. Методы фитопатологии. М.:Колос, 1974.-С. 145.

53. Кирьян И.Г. Мазин В.В. Клеточная селекция клевера лугового на устойчивость к фузариозу. /Тез.докл.1 Всесоюзного симпозиума «Новые методы биотехнологии растений».- Пущино, 1991.

54. Кривченко В.М. Методические указания по ускоренной оценке устойчивости овощных культур к болезням и расовой дифференциации их возбудителя. Ленинград.- 1975.

55. Кононенко Т.П., Поправко С.А., Соколова С.А. Бисинтез и превращения птерокарианов и изофлаванов при взаимодействии бобовых растений с паразитическими грибами. //Прикладная биохимия и микробиология.- 1984.- Т. 20. Вып. 6. С. 723-725.

56. Коновалов Ю.Б. Селекция растений на устойчивость к болезням и вредителям. М.: Колос, 2002. С. 56.

57. Котляров В.В. Устойчивость сортов пшеницы к фузариозу и методы ее определения. //Селекция и семеноводство. 1986. №6. С.51.

58. Кудряшова А.А. Микробиологические основы сохранности плодов и овощей. М.: Агропромиздат, 1986.-С. 190.

59. Кукушина Л.Н., Дорошенко А.А. Изучение оценки регенерантов картофеля по устойчивости к фитофторе in vivo и in vitro.// Использование клеточных технологий в селекции картофеля.- М., 1987. С. 52-56.

60. Купрашвили Т.Д. Выявление микрофлоры зонтичных растений и изучение биоэкологии возбудителя черной пятнистости вГузии.//Авто-реф. дисс.на соиск. учен, ст.- Тбилиси, 1973. С. 25.

61. Курчакова Л.Н. Использование токсичности культуральной жидкости гриба Fusarium для отбора здоровых каллусов льна.// Селекция, семеноводство и агротехника возделывания льна-долгунца. Торжок.: ВНИИЛ, 1991.

62. Лабораторно-практические занятия по сельскохозяйственной биотехнологии./ Методические указания. М.:МСХА, 1996. С. 90 .

63. Лети Джое Получение форм пшеницы (Triticum aestivum) устойчивых к грибу Scptoria nodorum в условиях in vitro./ Автореф. диссерт. к.б.н., М., 1998. С. 22.

64. Лети Джое, Калашникова Е.А. Влияние гриба S. nodorum и его метаболитов на прорастание семян пшеницы.// Известия ТСХА. 1996. Вып. 4. С. 150-155.

65. Лихачев А.Н. Использование жидких питательных сред для получения моноспоровых культур грибов.// Микология и фитопатология.-1994.-Т. 28. Вып. 5. С. 14-16.

66. Лопухина Г.П., Сычева Л.В. Устойчивость моркови к возбудителю черной гнили./ В кн.: Интегр. система защиты урожая с/х культур от вредных организмов. -Воронеж, 1983.- С. 23-27.

67. Лукьянюк С.Ф., Овсюк Т.Н. Методы in vitro для отбора люцерны на фузариозоустойчивость.//Методы биотехнологии в селекции с/х растений.- Одесса, 1992.- С. 39-48.

68. Лутова Л.А. Биотехнология высших растений. Изд-во С-П. Университета, 2003.-103 С.

69. Мазин В.В., Холодов Ю.В. Интегральный метод определения количества и жизнеспособности клеток клевера и люцерны в суспензионной культуре. /Тез.докл. 1 Всесоюзного симпозиума «Новые методы биотехнологии растений».- Пущино, 1991.

70. Маруненко И.М., Кучко А.А. и др. Клеточная селекция картофеля на устойчивость к патогенам.// Междунар. Конф. "Биология культивируемых клеток и биотехнология", Новосибирск.- 1988.- Ч. 1. С. 169.

71. Маруненко И.М. и др, Отбор генотипов, устойчивых к мокрым гни-лям картофеля, методами клеточной селекции.//Создание и использование исходного материала в селекции картофеля.- Киев, 1992.- С. 62-70.

72. Масленников С.Е. Методы культуры каллусов и клеток в создании форм люцерны, устойчивых к фузариозу. Автореф. диссертации к.б.н., М.:ТСХА, 1994. С. 15.

73. Масленников С.Е. Получение устойчивых к корневым гнилям растений люцерны с использованием методов культуры каллусов и клеток.// Соврем, достижения биотехнологии.- Ставрополь, 1995.- С. 24-25.

74. Мезенцева О.Н. Получение клеточных линий пшеницы, устойчивых к токсинам фузариоза.//Доклады научно-практич. Конф. "Ученые Нечерноземья развитию сельского хозяйства"-М., 1991,-С. 179-183.

75. Мезенцева О.Н. Создание исходного селективного материала люцерны и пшеницы устойчивых к фузариозу методом биотехнологии. Автореф. диссертации к.б.н., М.:ТСХА, 1992.- 15 с.

76. Метлицкий Л.В. Иммунологический контроль в жизни растений. // 45-е Тимирязевские чтения. М.:Наука, 1987. С. 57.

77. Метлицкий Л.В. Фитоиммунитеты, молекулярные механизмы. //31-е Баховские чтения. М.:Наука, 1976., с. 78

78. Методика заражения и оценки устойчивости корнеплодов моркови к сухой фузариозной гнили. М.: ВНИИССОК, 1988.-14с.

79. Методика по оценке устойчивости сортов полевых культур к болезням на инфекционных и провокационных фонах. М.: РАСХН, 2000. 87с.

80. Методы клеточной инженерии растений.//Под редакцией МомотВ.П. Киев, 1988.

81. Михайлов А.А. Нуждин К.С. Комплекс мер борьбы с болезнями моркови. //Картофель и овощи, 1985.- С. 12.

82. Муромцев Г.С., Бутенко Р.Г., Прокофьев М.И. Основы сельскохозяйственной биотехнологии. М.:Агропромиздат, 1990.- 384 с

83. Мохамед Али-Абдельхамед Али. Физиологические изменения в культуре клеток моркови при соматическом эмбриогенезе./Автореферат дис-серт. к.б.н., М., 1997.-С.18.

84. Наумова Н.А. Анализ семян на грибную и бактериальную инфекцию М.: Сельхозгиз, I960.- 69с.

85. НикуленкоТ.Р., Чкаников Д.И. Токсины фитопатологических грибов и их роль в развитии растений. М.:Агропромиздат, 1987.

86. Нгуен Хонг Минь Селекция in vitro на устойчивость к Fusarium ох-ysporum f. Sp. Lycopersici у томатов. Автореферат диссерт., к.б.н., Минск, 1991.-21 с.

87. Першина Г.Ф. Патогенез сухой фузариозной гнили моркови и способы борьбы с комплексом болезней в семеноводстве.// Автореферат диссерт., к.б.н., М., 1988.23с.

88. Першина Г.Ф. Особенности развития фузариозной гнили на маточниках растениях моркови // Семеноводство овощных культур, 1994. Вып 33.

89. Першина Г.Ф. Фузариозные гнили моркови // Защита и карантин растений 2001.-№8. С. 24.

90. Плащев В.М. Клеточная селекция клевера и люцерны на устойчивость к фузариозному увяданию.//Гаметофитная и защитная селекция растений,- Кишенев, 1987.-С. 176-178.

91. Пожар З.А. Шевченко В.А. О фузариозном загнивании корнеплодов. 1980. №10. С.39-40.

92. Попкова К.В. Общая фитопатология. М.гАгропромиздат,- 1989.-С.94.

93. Попова Т.Т. Вопросы методики выявления, создания и повышения болезнеустойчивости льна.//Труды ВНИИЛ.- Калинин: ВНИИЛ, 1958.-Вып. 5.

94. Пуца Н.М. Соложенцев Л.Ф. Селекция и использование инфекционного фона в селекции вики на устойчивость к фузариозу. // Селекция и семеноводство,- 1992. №6. С. 15.

95. Пуца Н.М., Разгуляева Н.В. Методы формирования устойчивого к патогенам исходного материала для селекции многолетних трав./Адаптивное кормопроизводства. М., ФГНУ: «Росинформагротех» 2002.- С. 386.

96. Пуца Н.М., Разгуляева Н.В. селекция на устойчивость к патогенам корневой системы. / Методические рекомендации по селекции и первичному семеноводству клевера. М.,1999

97. Райлло А.И. Грибы рода Fusarium. /Гос. изд. с/х литературы 1950.

98. Расколиева В.А., Калашникова Е.А. Использование методов биотехнологии в получении форм моркови устойчивых к альтернарио-зу.//Сельскохозяйственная биотехнология. Избранные работы, М.: Воскресенье, 2000. т. 1 .С.61-71.

99. Расколиева В.А. Калашникова Е.А. Влияние культурального фильтрата трпба Alternaria radicina на суспензионную культуру моркови. / Тез.

100. Межд. Конф. «Актуальные проблемы биотехнологии в растениеводстве, животноводстве, и ветеринарии», Москва. 2000.

101. Расколиева ВА. Использование методов биотехнологии в получении исходных форм моркови, устойчивых к патогенному грибу Alternaria radicina. M.,Dr. Et. E./ автореферат дис.к.биол. наук.-М. -2001.-С 18.

102. Родева В., Станчева И. Биологичен эфект на културални филтрати от различии изоиати на Alternaria solani върху растение доматени растение in vitro.// Биотехнология, -1990. Т. 4. № 3/4. С.27-30.

103. Родин М.Н. Общая фитопатология. М.: Высшая школа, 1978.

104. Рубин Б.А., Архиховская Е.В., Аксенова В.А. Биохимия и физиология иммунитета растений, М.: Высшая школа, 1975.

105. Саттон Д. Фоторгилл А. Определитель патогенных и условно патогенных грибов, Мир. 2001.С. 387.

106. Сазонова Л.В., Власова Э.А. Корнеплодные растения (морковь, сельдерей, редис, редька). Л.: Агропромиздат, - 1990. 296с.

107. Свиридов А.В. Сухие гнили моркови // Овощеводство. Минск, -1987. Вып. 7. С.30-32

108. Сельскохозяйственная биотехнология: Учебник (под редакцией В.С.Шевелухи), М.: Высшая школа, 1998, 416 с.

109. Сельскохозяйственная биотехнология: Учебник (иод редакцией

110. B.С.Шевелухи), М.: Высшая школа, 2001.

111. Семенов А .Я. Инфекция семян хлебных злаков. М.:Колос.-1984,1. C.94.

112. Семенов Л.Д. Питательные среды. М., 1994.-С. 210.

113. Сидоров В.А. Биотехнология растений. Клеточная селекция. Киев.: Наукова Думка, 1990.-С. 360.

114. Сидукова Е.В., Свиридов Л.В. Источники инфекции моркови возбудителем бурой пятнистости листьев.//Экол.экон. основы усовершенствования интегр. Систем зашиты растений от вредителей, болезней и сорняков. Минск,- 1996. Ч. 2. С. 42-43.

115. Соколов Л.Н. Грибные гнили при храпении. Вест. АН БССР. 1985.-№1. С. 87-89.

116. Соколова Л.Н. Грибные болезни моркови при хранении. //Веси. АН БССР. Сер. с.-г. наук, 1985. С 45.

117. Соколова Т.Д. Физиолого-биохимические реакции корнеплодов на ранних этапах заражения возбудителя Alternaria в процессе хранения. Автореферат диссерт. к.б.н., Сп.б.: ВИЗР, 1998. 19 с.

118. Солодкая Л.А., Новоселова Е.Ю. Методы создания форм клевера лугового с повышенной устойчивостью к раку.// Сборн. Науч. Трудов ВНИИ кормов,- 1989. Вып. 42. С.57-65.

119. Стекман Э., Харрар Д. Основы патологии растений. М., 1959.- 541 с.

120. Таганов Б.О. Разработка лабораторной технологии получения анд-рогенных растений моркови in vitro. Авт. дис. к.б.н., М., 1991.- 22 с.

121. Тимина Л.Т. Эколого-генетические особенности проявления устойчивости моркови к Alternaria.ll Научи. Тр. По семеноводству овощных культур, 1995. Т. 1.- С. 147-152.

122. Тимина Л.Т., Василевский В.А. Устойчивость моркови к альтерна-риозу при селекции на гетерозис.// Гетерозис с/х растений, 1997.- С. 158.

123. Угарова С.В., Тесля А.А. Селекция моркови с применением биотехнологических методов./ Тез. докл. "Пробл. Совета по растеииеводству, селекции, семеноводству с/х культур Сибири", Новосибирск, 1994.- С.23

124. Фадеев Ю.Н. Адеишвили T.LLI. Действие токсической фракции веществ гриба на хлоропласты яровой пшеницы //Достижения науки и техники АПК 1990. № 1. С. 19-20.

125. Федоренко Е.И. Изучение коллекционного разнообразия моркови но устойчивости к альтернариозу//Бюл. ВИР.-1983.-Вып.128.-С.64-66.

126. Федорова М.И. Методологические основы селекции и семеноводства овощных культур . Автореф. Дисс. На сиск. Учен. Ст. док.с.-х. наук-М.-1999.-С.-66.

127. Федорова М.И., Першина Г.Ф., Назарова Н.П. Исходный материал для селекции моркови на устойчивость к болезням// Научные труды ВНИИССОК, Т.2, 1995,- С. 63-72.

128. Федорова М.И., Першина Г.Ф.Методологические основы селекции моркови на болезнеустойчивость// Научные труды ВНИИССОК, -Вып.37, 1999.

129. Фитоалексины./ Под ред. Бейли Д.А. и Мансфильда Д.В., Киев. : Hay кова Думка, 1985.

130. Хандобина JI.М., Гришкова В.П.,Вишвецев B.C. Изменение состава фенольных соединений в тканях моркови при поражении грибом Phoma rostrupii.// Научн. Докл. Высш. школы биол. науки, 1982, № 9, с.85-89.

131. Хомяков М.Т. Латентные формы микозных патогенов клубней и корнеплодов. // Микология и фитопатология. 1985.- Т. 19. Вып.1. С. 70.

132. Хотин Ю.А., Полякова Т.М. Сохранение инфекционных свойств возбудителя ризоктониоза риса при культивировании на искусственных питательных средах.//Микология и фитопатология, 1991.-Т. 25. Вып. 1. С.80-84.

133. Элланская И.А. Закордонец Л.А. Фузарии и фузариозы // С-х биология, 1985.- Т.З. №2. С. 308-309.

134. Черненко Е.А. Распространение устойчивости к болезням среди разнообразия вида Daitcits carrota.ll Проблемы селекции овощных культур. Минск, 1997. С.40-41.

135. Чумаков А. Е. Власов Ю.И. Инфекционные фоны в фитопатологии. -М.: Колос, 1979.

136. Шаяхметов И.Ф. Биологически-активиые метаболиты из культурального фильтрата Fusarium oxysporum в связи с клеточной селекции злаков на устойчивость к фитопатогенам. //Микология и фитопатология,-2001. №6. С. 13.

137. Шаяхметов И.Ф. и др. Клеточная селекция яровой пшеницы на устойчивость к корневым гнилям.// Генетика, 1994. Т. 30. С. 181.

138. Шаяхметов И.Ф. Особенности регенерации растений пшеницы из каллусной ткани выращенной па фоне фитотоксииов. //1 симпозиум Новые методы биотехнологии растений., Пущино 1991.

139. Шаяхметов И.Ф. Культура клеток и тканей пшеницы in vitro и соматический эмбриогенез.// Авт. диссер. доктора биолог, наук, 2001. 45с.

140. Шевелуха B.C. Новая биотехнология в селекции и растениеводстве.// Вестник с/х науки,- 1986. № 2. С. 25-31.

141. Яковлева Т.А. и др. Негативный отбор in vitro самоклонов картофеля, устойчивых к парше обыкновенной.// II Междунар. Конф. "Биология культивируемых клеток растений и биотехнология" Алма-Ата, 1993.- с. 136.

142. Allicchoi R., Bioni М., Ghedini R. Jsozymatic varition in potato plants regenerstion cells resistant tofungab toxin.// Atti| Assoc. Gent. Ital. 1989. V. 35.- P. 9-70.

143. Arcioni S. Et al. Thea. Appl. Gen., 1987.- V. 74. P. 700-705.

144. Arsvell K. Patogenes on carrots in Nerway. Meld Nerdes Landbruksheg-skole, 1960.

145. Arsvoll. K. Pathogenes on carrots in Norway. Meld Norges Landbruk-shogskoll. 1969. V.48. 52p.

146. Austin S et. al. Thea. Appl. Gen., 1986.- V. 71. P. 682-690.

147. Baranski R., Nowak E. et. al. Development of carrot callus in the presence of the crude extract from Erwinia carotovora culture.// J. appl. Genet., 1997.- V. 38. P. 91-99.

148. Brown J.C. Diseases of carots.- Agric. Охр. Stat, %Univiof Arizona, Tucson, 1950. N. 227. P. 19.

149. Bruno N., Smolka S.F. Entwicklung von verfaren zur selection von Moren mit vermindenter Anfalligkeit gegenuber Alternaria. //Mitt. Biol. Bundesanstalt Land-Forstwirtsch. Berlin,- 1993.

150. Chawa H.S., Wenzel G. Thea. Appl. Gen., 1987.- V. 74. P. 841-845.

151. Daub M.E. Tissue culture and the selection of resistance to patogens.// Ann. Rev. Phitopathol., 1986. V. 24. P. 156-186.

152. Daamen P.A. Tandera K. Monographella nivalis and Fusarium spp. In winter bilds and seit lots.//Netherland journal of plant patology № 6.- 1991.-C. 34.

153. Deadon W.R., Keyes G.J., Collins G.B. Expressed resistance to black shankamong tobacco callus cultures.// Theer. And Appl. Genet., 1982.- V. 63. P. 65-70.

154. Durin R.D. The biochemistry of fungal and bacterial toxins and their modes of action // Biochemistry Plant Pathology / Ed J. A. Callow. 1983.- P 137-162.

155. Gray D. Same effeets of umbelorder and harvest date on carrot seed variability and performaree,. J.Hortis Sc. 1983.

156. Foroughi Wehr В., Stalle K., Nachr D. Pflanzenshuts., 1985.- V. 37. P. 170-173.

157. Harborre J.B. Do natural plants phenols play a role in ecology.// Acta hort., 1994.- №381. P. 36-43.

158. Harding. V. Heales J. Ann. APP. Biol., 1983.P. 375-380.

159. Hartman G.L. McCoy T.Y. Selection of alfalfa cell lines and regeneration of plant resistant to the toxin (S) produced by Fusarium oxsisporum. -1984. vol.34.31.2. -P. 183-194.

160. Hartman C.L. et. al. Plant Sc. Let., 1984. V. 34. P. 151-158.

161. I lcdin P. A., Menn J.J. Biotechnology for Crop Protection. Washington. Amer. Chem. Soc., 1988. 379p.

162. Hentschelk.-D., Teske P. Faulrriserzeger bei dcr Mohrenlfgerung ihrc Bekempfung.- Markkleeberg, 1979. 12p.

163. Herrandez M.M., Kowalski В., Orizu Electividaddel empleode filtrados Alternaria solani Ellij. Y Mantienen la selecci on in vitro deformas resistens en papa (Solanum tuberosum L.).//Cultuvost гор., 1991.- V. 12. № 2. P. 4850.

164. Hunold R. In vitro selection for gerstl and resistens gegen toxine von Drechslera tores (Sacc.) sholmaker.// Vortr. Fur Pflanzenzuchtung. Bonn., 1991.- P. 8-30.с

165. Hunold N. Toxin sensibilitat von kalluskulturenjnnigen sommer gersten IS mit unterschiedlicher resistens gegenuben Drechslera teres (Sacc.) shvem.// Arch. Phytopathol. Pflanzenschuts, 25, h. 3. P. 267-276.

166. Jin H. Widholm J.M. Regeneration of tpin resistant soybean embryo-genic suspension cultures and testing of regenerants to Fusarium solani. // Phytopathology. 1995. Vol. 85 №10. P. 1160

167. Jensen R.A. The shikimate/arogenate pathway: Link between carbohydrate metabolism and secondary metabolism.// Physiol. Plant., 1986.- V. 66. P. 164.

168. Kasenberg T.R., Traguair J.A. Effectis of phenolics on growth of fusurium oxysporum f. Sp. Radicis- Lycopersici in vitro.// Can. J. Bot., 1988.- ^ V. 66. № 6. P. 1174-1177.

169. Kern H. Phitotoxins produced by Fusarium // Phitotoxins in plant diseases. N.Y. Acad. Press, 1972.- P. 35-48.

170. Kroon B.A.M. Elgersima D.M. Inducition of mutans of Fusarium oxsis- t/ ^ porum lycopersici with alter verulenct.// Netherland journal of plant patology1991 .-№ 6. C. 28.

171. Kroon B.A.M. Scheffer P.J. Elgersima D.M. Inducid resistace in tomato plants against Fusarium spp. Wilt invoked by Fusarium oxsisporum dianthi. // Netherland journal of plant patology 1991.- № 6.

172. Kurusaki P., Amin M., Nishi A. Induction of phytoalexin production and accumulation of phenolic compounds in cultured carrot cells.// Physiol. Molec. Plant. Pathol., 1986.- V. 28. № 3. P. 359-370.

173. Kurusaki P., Tashiro N., Nishi A. Secretion of chitinasef from cultured carrot cell treated with fungal myceliae walls.// Physiol. Molec. Plant. 1997

174. Le-Wis N. G., Yamamot O.E. Lignin occarence, biogenesis and biodeg-radation.// Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Boil., 1990.- V. 41. P. 339.

175. Lynn D.G., Chang M. Phenolic signalis cohabitation: Implications for plant development.// Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Boil., 1990.- V. 41. P. 497.

176. Ludwig R.A. Toxin production by Helminthosporium sativum P.K. et B. fnd its significance in disease development //Can. J. 1957. Vol. 35. №3. P. 291-304.

177. Mirocha T.J. Mycotoxins ansthe Fungi that produce them (Proc. of Amcr. Phytophthora.1986.

178. Moerschbucher B. Lignin biosynthesis and rsistance of wheat to stem rust.// Phytoparasitica, 1998.- V. 16. P. 153.

179. Mutert W. LutfringN. Formation of fusaric//Naturforschung Selection C.-1981. Vol 36. №3-4. P.338-339.

180. Nederlnik S. Fytoxicita nekterych toxinu Fusarium spp. Jetelovihy. // ochrana rostlih plant protection 1991.-№1.

181. Nowicki B. Grzyby powodujace zgorzee siewek marchwi.// Acta agrobot, Warczawa 1995.

182. Nowicki B. Patogeniczhe grzyby zasiedlajace nasiona marchwi //Acta agrobot, Warczawa 1995.

183. Olsson K., Svensson A. Are carrot phenols and polyacety lenes in flu-eniry susceptilicity. 1997.- V. 38A. P. 219-223.

184. Pauly M.N. Selektion for Bacteriad blind phytotoxin resistance in wheat culture // Crop. Sei. 1987. Vol. 27, №2. P.340.

185. Rizk A.M., Hammouda F.M. Phytoalexins produced by Daucus carota infected with some fungi.// Ann. Agri. Sc., 1983.- V. 28. N 1. P. 23-31.

186. Simon P.W. Carrot genetics. //Plant Mol. Biol/ Report. -1984.-V.2, №3.-P.54-63.

187. Tvaruzek L. Frecer R. The development of some Fusarium spp. Speciens in yjng wheat plants depending on temperature. // Ochrana rostlih plant protection, 1991.-№1.

188. Toyoda Y., et. al. Phytopathol. Soc. Janan., 1984.- V. 50. P. 538-540.

189. Toyoda H. Selection of disease resistant plant through tissue culture //Karaky to seibucu.-1990.Vol. 28. № 1.- P. 12-19.

190. Tylkowska K. Stadies toxines Alternaria alternata isolaten from carrot seeds and seedling.//Szczeshag, 1974.- S. 877-879.

191. Vocho H. Hirai F. Induced mutations and genetic correlations between scab risistance and sole agronomic characters in wheat // GTh International Wheat Genetics Semposiun. Japan.-1983.-P39.

192. W. Oavies, Blewis J. Obeservations on infektion of carrot rot by Myco-centrospora acenina. Trans Brit. Mycol Soc 1981.-P. 139-151

193. Wagner A.M., Wagner M.J. Measurement of in vivo ubiqionone reduction levels in plant cell.// Plant Physiol., 1995.- V. 108. P. 277.

194. Wadholm J.M. Selection and characterization a Daucus carota L. Cell line resistant to four aminoacidd analogues.// J. Exp. Bot., 1978.- V. 29. P. 1111-1116.

195. Wadholm J.M. Selection of plants cell lines which accumulate compound.// Plant Tissue Culture, 1980.- P. 99-114.

196. Wadholm J.M. Differential expression of amino acid biosynthetic control isoenzymes in plants and cultured cells.// Plant Tissue Culture, 1980. P. 157159.

197. Wong J.R., Sussex J.M. Isolation of abscisic acid risistant variants from tobacco cell cultures.// Planta, 1980. P. 97-102

198. Wray J.L. The molecular genetics of highen plant nitrate assimilation. //A genetic approach to plant biochemistry, 1986.- P. 101-151.

199. Wright W.E., Hayflick L. Use of biochemical lesions for selection of human cells with hybrid cytoplasms.// Proc. Nat> Acad. USA, 1975. P. 18121816.