Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Оценка эффективности вакцинации против чумы по модуляции функциональных свойств макрофагов при подкожном и аэрогенном введении вакцины

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Оценка эффективности вакцинации против чумы по модуляции функциональных свойств макрофагов при подкожном и аэрогенном введении вакцины"

ГОСУДАРСТВЕШИЙ КОМ8ТЕТ :САННТАР»й-ЗПНДЕНИОЛОГНЧЕСКОГО НАДЗОРА РОССИЙСКОЙ «ЕДЕРАЩ

российский научно-исследовательский противочумный

. ИНСТИТУТ "ШГСВ"

^ ОД На правах рукопиа

■ г П!Ш Ш95

Яадмила ¡Шхайловиа

оценка эффективности вакцинации против чумк по модуляции функциональных свойств макрофагов при подшном и аэрогенном введении вакцин!!

03.00.О? - микробиология

i4.00.33 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Саратов 1995

Работа выполнена в Ростовском-на-Дону ордена Трудового Красного Знайени научно-исследовательском противочумном институте.

Научные руководители: . Доктоо медицинских наук* старший научный сотрудник Г.И.Васильев Доктор медицинских наук, профессор \Х.П.Гамлешко

Официальные оппоненты: Доктор медицинских наук, профессор Л.И.Иакаровска

Доктор медицинских наук, профессор К.М.Нохни

. I

_ Водуцая организация: Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт Военной Медицины Министерства Обороны Российской Федерации

Защита состоится Яи^Ч^ 1995г. на заседании

специализированного Оовета К 0743201 по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата ыег цинских наук при ,Российском научно-исследовательском противочумном институте "Микроб* (410071. г. Саратов, Университетская ул., 46). ; С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке института "Микроб". . .

Автореферат разослан 1994г.

Учснкй секретарь спОциалигпфовлнксго Совета "

докгс;1 мегецмноких наук . . З.л.девдарнани

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМ: Оценка эффективности ишуннзации против чумы продолжает оставаться актуальной проблемой, что обусловлено большим количеством существующих природных очагов чумы, протекающими в ник эпизоотиями и необходимостью в связи С "-""""лгтрг-Липэитиии Г.ППТПЙТСТВУКЕИХ контингентов насе-

ления [Кузнецова к. А., 1ь>Б0; Баоепин A.C. с 1022: '/.с:";"""" А. И. с Соавт.:, i 9S9; Топоркоз Б. Г., 1989].

Яйца, подлежащие иммунизации живой чумной вакциной (ЖЧВ), должны проходить предварительное иммунологическое обследование, а также систематический иммуномониторинг после вакцина--' цин, так как введение в ослабленный организм ЖЧВ монет иметь нежелательные последствия для иммунной системы макроорганизма. Поэтому возникает необходимость в подборе методик, даияих оценку палинологической потенции организма в ответ на введение антигена, с целью достижения напряженного иммунитета.

До недавнего времени изучение процессоз формирования то-мунитега к чуме проводилось, как правило, в плане оценки гуморального авена иммунитета. В"связи с выявлением ключевой роли с"сточного звона нм^'читета в иммуногенезе данной да^екцик, большое значение уделяется поиску -методик для. оценки участия Т

лимфоцитов и клеток системы мононуклеарных ф:гоцитэв (СКФ) в .. иммунном ответе на вакцинацию КЧВ.В кзсто?гсгсс бремя востгточио полно исеецена роль'Т системы [Герасимова К.И., 19SG; Саяппна Л. В.. 1991; Ледаанов М.Ю. с соавт., х991] ..кейтрэфкльнкх лейкоцитов при формировании иммунитета ^ чуме ГСтукоза Н. ö 1991]. Однако, учитывая, что чумной микроб является факультаттонмд

внутриклеточным паразитом и исход его взаимодействия с манро-организмом зависит от киллерной активности фагоцитирующих клеток, нёЪбходимо признать, что ведущее значение в обеспечении противочумного иммунного ответа принадлежит ОИ» [Васильева Г.'И. ссоавт.. 1983-1933; Куклева Л.н.. 19368].

В связи б этим поиск практически удобных и информативных методик для оценки функциональной актионости ыакрофагальных ■ клеток в процессе Формирования резистентности:к чуме является актуальным. Учиткоач, что современныз представления о роли системы мононуклеарных фагоцитов связаны с её функциональной гетерогенностью (Фрейдлин И. С. ,1984; Земское Б. М. ,1986; Васильева Г. И. ,19911, большое значение приобретают тесты,'оценивающие её активность на популяционном. и субпоПуляционном уровнях. 8 связи с этим представляется целесообразным углубленное, всестороннее изучение динамики Популяционных и субпопуляцион-ных пу/'ОЕ Мф и их перераспределения при формировании резистентности к чуме, а также создание на основе полученных данных модельных систем для иммуномониторинга вакцинного противочум-- него процесса у людей.

В настоящее время проводятся исследования по разработке методов массовой иммунизации людей в максимально короткие сроки. Особенно привлекательна в этой плане аэрогенная вакцинация. позволяющая создать защиту не только от легочной чумы, йо йот других способов заражения этой инфекцией [Самойлова Л. Б. 1983; Гапочко К. Г. с соавт. 1990; Чичерин Ю.В. с со-авт. ,1981; Васильспа Г. И.. 1992].

На протяжении трех последних десятилетий разработка ингаляционной вакцинации всьбтся довольно широко, одначс и до нас-

тоящего времени остаётся актуальны?.» вопрос о рациональном

фракционно дисперсном составе (ФДС) аэрозолен сводимых закцнн. Степень диспергирования частиц аэрозоля имеет значение, с од-нои стороны, d развитии полноценного иммунного ответа макроор-гаьизма, а с другой стороны - в сенсибилизации и проявлении токсического действия изодииого препарата. В связи с этим,

ппопптяппап-г^а jii^rwrjohtj«-.-

ги прививок. проводимых■аэрозолями разной дисперсности. Подбор наиболее рационального ФДС аэрозолей с помощью новых, совре-меышх иммунологических тестов даст возможность снизить дозу антигена, что в настоящее время является весьма своевременным ввиду массовой аллергизации населения. ,

. ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: изучение возможности оценки эффективности противочумной иммунизации из модуляции функциональной активности клеток СМФ в процессе формирования резистентности к чуме при разных способах вакцинации. ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ:

1.Изучить влияние противочумной вакцинации при ингаляционной и подкожной аппликации КЧВ на динамику уровня миелоперок-сидазы (МПО). епьфа-нлфтол-ЛС-ацстатэстсразн (КЗ) и лизосо-

1...дЛьно-катионнь;х белков фагоцитирующих клеток.

*

2. Исследовать динамику композиционного состава альвеолярных Мф у морских свинок при аэрогенной иммунизации разными дозами вакцины и аэрозолями разной дисперсности. ,

3. Выявить корреляционные связи между индексом перераспределения субпопуляций альвеолярных макрофагов (МФ) при аэрогенной иммунизации и резистентностью к чуме.

4. Определи показатели макрофггапьной трансформации мо-

ноцитов периферической крови (ПМТМ) уинтактных и иммунных жи- ' вотных и выявить корреляционные связи между ПМТМ и резистент-. ностью к чуме.

1 6.Изучить влияние способов аппликации, • доз вакцины и аэрозолей с различными ФДС.на ПМТМ. - .. '

6.Разработать новые экспериментальные модели для характеристики иммунологической эффект- зности вакцинных штаммов чумного клкроба и'его антигенов, а также для подбора оптимальной дозы вакцины и' адекватного ФДС аэрозоля.

7. Поврать простой и информативный метод определения эффективности противочумной вакцинации у люаей при подкожной и

/ аэрогенной вакцинации. ;

НАУЧНАЯ НОВИЗНА: расширены наши представления о механизмах формирования г.оства:сцинального противочумного иммунитета и . установлены его особенности в зависимости от способа апплика-■ ции вакцины. ' ''' .

Установлено, что вакцинация ¡НВ приводит к активации клеток СМФ, особенности которой существенно зависят от способа введения вакцины, дозировки аэрозолей и их дисперснобти.

Получены данные о влиянии ЖЧВ на ферментные системы Ыф и их секреторную функцию в зависимости от способа и дозы аппликации вакцины.

Впервые выявлены особенности композиции альвеолярных Мф в зависимости от различных ФДС аэрозоля и дозировки вакцины и установлена корреляция индекса перераспределения субпопуляций (ИПС) данных Ыф с резистентностью экспериментальных животны; к чума ?

Выявлено влияние дозы вакцины на ГШТМ и корреляция ПМТМ с

' - в-

выживаемостью животных при заражении их вирулентны» штаммом чумного микроба.

Показана возможность оценки с помощью ПМТМ эффективности противочумной иммунизации при подкожной и аэрогенной аппликации жчв.

Впервые с помощью ПМТМ подобрана оптимальная доза противочумной вакцины при аэрогенной иммунизации,- позволяющая снизить лн1иренну?} нагрузку нл организм.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ работы заключена в разработке и внедрении в практику научных исследований новых клеточных моделей для:

- оценки эффективности противочумной вакцинации экспериментальных животных и людей;

- определения иммуногенности субкультур вакцинного штамма чумного микроба и его антигенов:

- подбора оптимального способа аппликации и доЬы вакцины;

- определения рационального ФДС вакцинных аэрозолей;

- скрининга иммуномодуляторов, стимулирующих противочумный иммунитет.

Предложена модификация ПМТМ для оценки формирования иммунитета у лрдей.

-Доступность моноцитов периферической коови человека, информативность . и простота исполнения этого метода в нашей модификации позволяют рекомендовать его для наблюдения за динамикой вакцинного процесса и в качестве критерия оценки эффективности противочумной иммунизации.

Предложенные ылдоли и методы внедрены в практику научной работы Ростооского-на-Дону пр<-тивочумногЬ института, Санкт-Пе*

тербургского института Военной Медицины, СЗО Черноморского Флота и применяются при выполнении научно-исследовательских плановых тем. . .

По данным диссертации составлены методические рекомендации: "По оценке противочумного иммунитета по модуляции функциональных свойств СМФ в иммунном организме" которые утверждены Учёным Советом Ростовскаго-на-Дону научно-исследовательского противочумного института (протокол N 13 от 20.11.91г.) .

По материалам диссертации оформлено изобретение, на кото-, рое получено авторское свидетельство за N 1618348 "■ Способ определения ишуногенности противочумных вакцин. " . .. .

ПОЛОЖЕНИЯ ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:"

1. Существует прямая корреляция меаду эффективностью аэрогенной иммунизации против чумы и индексом перераспределения Субпопуляций альвеолярных Мф у иммунизированных животных. •

2. Характер изменения композиции субпопуляций альвеолярных Мф зависит от дозы и ФДС' апплицированного аэрозоля ЖЧВ.

3.Иммунизация людей и экспериментальных животных, против, чумы модулирует показатель макрофагальной трансформации моноцитов периферической крови, на динамику которого влияет доза и■ сгэСоб аппликации вакцины.

' . 4.Существует прямая корреляция между резистентностью экспериментальных животных к чуме и ПМТМ.

5.Способ аппликации, дозы и ФДС вакцинного аэрозоля ЖЧВ влияют на бактерицидные.системы альвеолярных Мф.

. В. Корреляция с эчфективностью противочумной вакцинации, высокая чувствительность, простота выполнения и информативность ПМТМ и ИЛС позволяют использовать их для оценки клеточпо-

го иммунитета у привитых против чумы.

7. Доза ЖЧВ О. I ЧД столь же эффективна, как и 1 ЧД. что позволяет рекомендовать ее применение для снижения антигенной нагрузки на макроорганизм при аэрогенной аппликации вакцины у лсдей.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ: материалы, изложенные в диссертации обсуждались на:

- лт г* ип^тгиапппгАЛ! (гиагччюи мГч*гтРия

Ь^-и'..'.'»».'^ VI»' -1;. - ч.' •-V ■ """ * ......... * -

мононуклеарных фагоцитов в' норме л при патологии" (Новосибирск, 19Э0);. .

- Первом съезде иммунологов России (Новосибирск, 1992); -Международном симпозиуме по аллергологии и клинической иммунологии (Алма-Ата, 1992);

- Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы вакцинопро-филактики 00И" (Киров, 1991);

- Всесоюзной конференции "Иммунология и сЛецифическая профилактика 00И" (Саратов, 1993).

Диссертация обсуждена и одобрена на общеинститутской научной конференции Ростовского - на - Дону государственного научно-исследовательского противочумного института в апреле 1994 года.

ПУБЛИКАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ: основные положения 'диссертации отражены в 15 опубликованных научных работах.

' СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ: диссертация изложена на '136 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 Гяа'з, результатов собственных исследований, заключения, /люодоа и указателя литературы, включающего 219 работ отечественных и

зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 14 рисунками, 4 таблицами. . '

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

материалы и методы исследования

Работа выполнена на 160 беспородных мышах массой 18-20г и 300 морских свинках массой 260-300Г.

Материалом для исследований служили альвеолярные и пери-тонеальны Мф и моноциты периферической крови, полученные от интактных, подкожно и аэрогенно иммунизированных животных. у людей - моноциты крови. '

Объектом исследования являлись также субпопуляции перито-неальных и альвеолярных Мф интактных и иммунизированных морских свинок, выделенные методом адгезии в Ьрадиенте температур [Земсков В.М. с соавт., 1986J.

' Клинические исследования проведены на 250 добровольцах мужского пола в возрасте 18-20 лет. находившихся в равных условиях труда питания, физической подготовки, подлежащих планов вой вакцинации и но имеющих противопоказаний к вакцинации.

В качестве иммунизирующих препаратов применяли вакцинный вташ Y.pestis EV - 76 линии НИИЭГ, полученный из музея Рос-товского-на-Дону про ;.шочу много института. • фракцию fia, Любезно предоставленную Пустовалрвым В. Л... ' полученную по методу Bâkcr (1956). липополисахарид (ЛПС). полученный.по ме-

тоду Весфаля 0.. Янн К. (1967), чумиуя живуи. сухую вакцину серии 20-3, контрольный К ОБК 51 ■производства Ставропольского научно-исследовательского противочумного института Кавказа И'Закавказья.

Заражали животных вирулентным аташом У.реаЫз 231. полученным из музея Ростовского-на-Дону противочумного института.

Иммунизации животных проводили подкожно и аэрогенно раз-

оит|тпцпп К ПЭ1Л1[<ии ЙЧППЧППК-^П НИКПИННПИИ |Ц,у-

цествляли в условиях малой динамической установки. При зтсм варьировались различные режимы иммунизации (типы распылителей, параметры аэрозолей, дозы вакцины, время скспонирования).

л Вакцинацию и наблюдение за привитыми добровольцами проводили вамбулаторных условиях.

При подкожной иммунизации ЖЧВ вводили в подлопаточную область в 0,5 мл изотонического раствора хлорида натрия однора-

\ |

зовыми шприцами. Прививки проводили в соответствии с "Наставлениями по применению вакцины чумной живой сухой".-

Аэрогенное введение живой чумной вакцины осуществляли групповым методом.

Изучалось влияние подкожной и аэрогенной иммунизации экспериментальных животных разными дозами ЖЧВ и аэрозолями разной дисперсности на активность бактерицидных систем. СУ.Ф ( уровни миелопероксидазы неспецифицеской эстеразы и лизосомально-ка-тиоиных белкОо), трансформацию монолитов в макрофаги, распределение и перераспределена субпопуляций альвеолярных и перито-неальных макрофагов.' Проведен корреляционная анализ результатов исследований, выполненных на экспериментальных л;иво1них и полученных от них клетках системы мзнонуклеарних фагоц: ж

- И ,

Иммунологическую эффективность Ьрививок оценивали в тесте трансформации моноцитов периферической' крови в- макрофаги* ПМТМ определяли по методу Демченко Т. А. с соавт. (1902)"в налгсй модификации. -

•Статистический анализ результатов исследований осуществляли преимущественно с помощью статистических таблиц для экспресс обработки экспериментального и клинического материала. Стрелков Р.Б. (1986): определяли значение доверительных интервалов (I), среднего арифметического (М) для уровня достоверности (Р) 95%.

Степень корреляции опреде. тли по критерию р, (Ашмарин - И.П. ,1962).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследование влияния КЧВ при различных способах ее введе- ' ния проводили по модуляции ,Функциональной активности клеток. СМФ в процессе формирования резистентнгсти к чуме. Нами была изучена активность ферментов, определяющих функционирование кислоподзависимой и кислороднезависимой бактерицидных систем .; клеток СМФ, которые имеют существенное значение для обеспечения киллинра чумного микроба.

проведенные исследования показали, \ что влияние ЖЧВ на функциональное ссстояние альвеолярных и перитонеальных Мф существенно эависит от способа аппликации препарата й затрагивает ферментативные системы клеток, а также их секреторную функцию.

При аэрогенной иммунизации выявлено двухфазное увеличение концентраций МПО в альвеолярных и перитонеальных Мф привитых

-лг -

животных ( на 1 и 3-е сутки после вакцинации ).•

Подкожное вг чснке КЧЗ актиаирует процессы, ответственные за синтез ШО в перитонеалышх и альвеолярные фагоцитирующих клетках, -но при этом в альвеолярных Мф возрастание концентрации фермента начинается только на 3-й сутки пбсле прививки. 3 перитонеальных МФ повышение уровня МПО отмечается в более ранние сроки (1-е сутки). В последующие сутки динамика МПО альве-

ЦЛгШНЫХ и ПЬЬИТСННДЛЬНМХ М» 'ИШ игминя. '

Нами били также выявлены определенные различия при оценке влияния КЧВ; введенной азрогенчо и подкожно, на уровень НЭ в Мф.-

. При аэрогенной вакцинации изменение этого показателя наблюдается у альвеолярных и ггзритонеальшх клеток и носит двухфазный характер, при подкожной аппликации препарата отмечено однократное повышение уровня внутриклеточных НЭ на 3-й сутки после иммунизации.

Данные, полученные при изучении лизосомальн'о-катионных белков (ЛКБ) в альвеолярных и перитонеальных Мф при разных способах введения ЖЧВ, указывают на преобладающий иммуносуп-рессивный эффект, оказываемый препаратом на процессы, участвующие в синтезе ЛКБ альвеолярных Мф.' На перитонзальные Мф, при подкожном введении вакцины, этот феномен не распространяется: С 1-х по 6-е суткп у них наблюдается-повышение активности ЛК6.

Использованные нали цитохимические тесты не выявили различий в действии тонкодисперсного и грубодисперсно^о аэрозолей КЧВ на бактерицидное системы Мф привитых живогных, что не да&г вогмонности предложить их для оценки <ЭДС в акциях аэрозолей.

Вместе с тем^ проведённые исследования п.<*азали заои-

симость активации бактерицидных систем фагоцитов от дозы и способа аппликации ЖЧВ. что позволяет рассматривать эти тесты как. дополнительные при подборе оптимальной дозы . вакцины, отборе новых вакцинных штаммов и скрининге иммун .юдуляторов,'

Как уже упоминалось, современные представления о роли !слеток СМФ в иммунитете основгны на их функциональной гетерогенности. Исходя из этого, особое значение приобретают тесты по оценке противочумного вакцинного процесса на популяционном и субпопуляционком уровнях Мф.. которые до настоящего времени не нашли иирокого внедрения.

Экспериментальные йсследовандя альвеолярных Мф, проведённые на субпопуляционном уровне, позволили нам всесторонне изучить поствакцинальную динамику этого пула клеток, подобрать оптимальные- условия' для выполнения иммунологических тестов по оценке перераспределения Мф после, введения ЖЧВ. Анализ композиции субпопуляций в суммарных пулах альвеолярных Мф после вакцинации ЖЧВ выявил дозозависимый характер индекса перераспределения субпопуляций (ИПС) и корреляционную связь ИПС с. напряженностью иммунитета к экспериментальной чуме (рис.1).

В ходе выполнения работы было показано также,что с помощью ИПС можно оценить различия между грушами животных, вакцинированные аэрозолями ЕЧВ разной дисперсности. Введение тон- . кодисперснсго аэрозоля ЖЧВ приводит к более активному перераспределен!«) альвеолярные Мф,чем апплицирование грубодисперс-ного аэрозоля. В перьоы случае уже через сутки после вакцинации ИПС достигает 8.0; в последующем рост показателя продолжается и к окончанию срока наблюдения (31 сутки ) он увеличивается до 11,0. Иная динамика ШС отмечена при введении грубо-

Рис. 1 Динамика индекса перераспределения субпсгг/ляцка. альвеп-. лпрщ1«акрофагоь морских свинок,аэрогенко иммуннзирован-нмх разными Д9зами вакцины.- •

• 1-1. человекодоза -1ЧВ; 'II - 0.1 человечодозя ЯЧВ; III А 0.01 челозекодозм ЖЧБ; • IV - 0.003 чэловекодоза ЖЧВ. По оси ординат - индекс перераспределения субпопуляиий л№С); По оси абсцисс - время после иммунизации в сутках. ." '

дисперсного аэрозоля. Рост показателя начинается такие с первых суток, но значительных величин он достигает только к 11 суткам. ">■'.

Полученные результаты позволяют рекомендовать эти-тесты для оценки эффективности противочумной иммунизации разными дозами вакцины и аэрозолями разной дисперсности., .. ,'

гОднако применение этой методики ограничено моделями экс-перийенталыж животных. С целью оценки эффективности противочумной иммунизации людей и подбора оптимальной дозы и способа введения ЖЧВ. мы разработали другую клеточную модель, - определение показателя макрофагйльной трансформации моноцитов периферической крови.

Как показали предварительные исследования на экспе^имен-■тальных животных, вакцинный иташ чумного микроба и его антигены (ЛПС и FIA) оказывают иумуномодулирующее действие на моноциты периферической крови мышей и свинок. При этом вакцинный штамм чумного микроба а дозе 1х10ак.и. к. вызывает резкое повышение ГВДМ, которое коррелирует с эффективностью ротивочумно* го иммунитета.

Сравнительный анализ результатов введения ЛПС и PIA показал, что ЛПС вызывает снижение ЛМТМ, наиболее резко выраженное в дозе 100 мкг/ил (в 2-3 раза), в то время как введение FIA е. той же дозе увеличивает ПМТМ в 2.6 - 3 раза (рис.2). Такги. модуляция ШТМ отражает протективные свЬйства FIA: защиту от последующего заражения животных экспериментальной чумой и отсутствие протективности при йведении ЛПС.

Рис.2 Слияние ЛЛС ;r FIA чумного микроба на модуЛяиию ПМТМ лерчфоричес зй кропи мышей.

1 контрольные жизотные;

2 ~ лоза Л) 1С -1 мнг/мл':,

3 - доза ЛЛС - 10 мкг/мл;

4 - доза ЛЛС- - 100 мкг/мл.

5 - доза FH - 100 мкг/мл

• По- ось ординат - ramt;îfno оси абсцисс - время посла введения препарата в сутках.

Таким образом, полученные результаты свидетельствует о том, что ПМТМ можно использовать для распознавания стимулирующего или депрессивного эффекта на иммуногенез вводимых антигенов или вакцинных препаратов. . В настоящей работе мы использовали ПМТМ также для оценки эффективности ингаляционной вшодИ' нации морских свинок с вариациями' доз и ФДС , ЙЧВ. Полученные экспериментальные. результаты подтвердили возможность оценки эффективности данного вида аппликации ЖЧВ и лб дозы с помощью ПМТМ' (прямая корреляция; с индексом эффективности ишунизацш •' (ИЭИ). Однако .различий в иммунизирующем эффекте при аппликации . тонко- и грубодиспер'сного аэрозолей по модуляции ШТМ не обна- ; • рулена . ' '."; • ' /

Проведённые исследования показали преимущества ПИТ?!! перед :други1.ш методами оценки иммунного статуса: высокую чувствитель- . . -ность, быстроту к лёгкость исполнения, корреляцию со степенью напряженности поствакцинального - иммунитета, отсутствие необхо-диыости в дорогостоящем оборудовании. ; ■ •"'-.•■ .

Имея в виду перечисленные достоинства этого метода, а также доступность моноцитов периферической крови людей, мы решили апробировать ПМТМ для оценки противочумного иммунитета у . людей, вакцинированных 1ЧВ подкожно или аэрогенно. У добро-, вольцев, подкожно привитых 1 ЧД ЖЧЗ, в результате вакцинации произошло увеличение показателя в 2,9 раза по сравнению с- фоной. По нашим данным, увеличение ПМТМ у иммунизированных животных в 2,5 раза (по сравнимо с штатными) наблюдается при формировании у них устойчивости к чуме. '

Значительное увелич. <.ие ПМТМ при данной способе аппликации вакцины регистрировалось с 12 суток после прививки. Нес-

колько инад' динаша ПШТ? отмечалась при аэрогенной аппликации ИВ. Рост показателя начинался на третьи сутки и к 7-м увеличивался вдвое. К окончанию срока наблюдения (25-е сутки) HTM возрастал в 3,5 раза.

Такое увеличение ПМТМ свидетельствует о сформировавшемся иммунитете к чуме. Таким образом, полученные данные позволяют

ПУТЙ S Kci'-iii-iöD "2 ГН>Ч лирике HMVH-

ного процесса и эффективности противочумной закцкнацй1, у людей при разных способах аппликации вакцины.

Приоритетным условием для развития адекватного ответа макроорганизма на вакцинацию ЖЧВ является введение оптимальной дозы вакцины. При ингаляционном способе иммунизации эта доза на два порядка ниже, чем при подковной аппликации ЖЧВ, что существенно снижает антигенную нагрузку на иммунную систему прививаемых людей. Однако эта доза принята эмпирически и не известно, является ли она оптимальной. Показанная нами дозозав'и-'симость ПМТМ позволяет использовать этот тест для подборе оптимальной дозы ИВ у людей.

В результате проведённых исследований установлено, что дозы вакцину 0.1 и !, О ЧД вызывали увеличение ПМТМ более чем в 2,5 раза, что свидетельствует о практически равной степени выраженности противочумного иммунитета у привитых людей (рис.З). Однако степень антигенной нагрузки на* иммунную систему в первом случае в 10 раз уменьшается,. что. естественно, ведёт к снижению аллергизауии и купированию прививочных реакций у пак-циниров иных людей.

Э0

"ЭЙ. 60-• 50.

..40. 30. Ж

Рис. 3 Сравнительная характеристика ГШ! "

аэрогенно прибитых «ЧВ людей при различных дозах-вакцины. ■ .. i ' 0.001 ЧД; г.- 0.01 ЧД; . . .

• е - 0.1 чд; i - i.o чд • '-Vv

оси Ординат > ПМТи;Йпо оси абсцисс время после вакцинаций в сутках.

Полученные с помощью "ПМТМ данные дают возможность рекомендовать 10-кратное снижение вакцшшрувщей дозн ЯЧВ -при её аэрогенной аппликации.

Таким образом, изложенные в работе результаты расширяют представления о'механизмах формирования йоствакципального клеточного противочумного иммунитета и устанавливают его особенности в зависимости от способа введения и дозы вакцины. . В ре-

пуп.тя-.ц гиюввдыи'шл мни ^--га-

зования но£шх клеточных моделей: индекса перераспределения д^бпопуляций макрофагов и показателя макрофагальной трансфор- . мации моноцитов периферической крови для оценки эффективности иммунизации противочумной вакциной экспериментальных животных и людей,' для подбора оптимальных доз к способа аппликации вак-" цииы. Простота выполнения и воспроизводимость результатов' поз-. воляпт использовать предложенные тесты для оценки иммуноген-ности субкультур вакцинных штаммов и их антигенов, для определения рационального ФДС вакцинных аэрозолей, а такие для с- ?и-нинга иммуномодуляторов, стимулирующих противочумный иммунитет.

В целом полученные результаты дают возможность рассматривать представленные нами тесты как перспективные для экспериментальных исследований и практических нгбяяденнй, . ■

■ >Ы В б Д Ы V ; ; "

1. Аэрогенная иммунизация ЖЧВ вызывает изменение композиции субпопуляций Мф, индекс' перераспределения которых носит дозозависимый характер и коррелирует с 'формированием иммунитета к чуме. .

2. Введение тонкодисперсного аэрозоля 1ЧВ привода г к болзе активному перераспределению альвеолярных Мф. . нем апплицмрон«-ние грубодисперсного аэрозоля. : ,

3.ИПС альвеолярных Мф позволяет оценивать эффективность аэрогенной иммунизации и осуществлять скрининг оптимальной до- ^ зы 1ЧВ и рационального ФДС вакцинного аэрозоля."

, „(. Существует прямая корреляционная связь между увеличением ЩТМ и эффективностью подкожной и аэропенной- противочумной •иммунизации.

'.' ' ,. б. Иикрометод (TMTM е нашей модификации может быть использован для проведения массового шмуномсжиторинга привитых против чумы добровольцев при подковной и аэрогенной иммунизации.

. 6. При аэрогень^й вакцинадии против чумы людей..0,1 ЧД 1ЧВ столь же эффективна, как и 1 ЧД, что позволяет рекомендовать ее применение для снижения антигенной нагрузки, на макроорганизм. ' .v i ' ' " у ' ' </

) . . Список '■■

работ, опубликованных по тбме диссертации

1.Ермоленко Т.Д,, Веркина Л.М., Васильева Г.И.Функциональная . гетерогенность* клеток системы мононуклеарных фагоцитов.// Эпидемиология, микробиология и иммунобиология бактериальных и вкусных инфекций (Ростов н/ДЛ9о9): Тез.докл.. обл. научной конф. молодых ученых. - Ростов н/Д, 1989.- С. 21,

■ ^Vaailjeva Gui., Enaoler&o Т.О.. Verkina L.M. IimmoregUT-Ulory açtlvlty of tue macrophages in the developnent of antip-lasv* 1шип1 ty H Abstracts mononuciyav phagocytes system in

normal and pliatologicai states, - Novosibirsk, 1590. - P. 155-152.

3. Васильева Г.„.. Ткаченко Л. H., Гамлашко X. П., Киселева А.К., Веркина Л.М., Дсроаенко Е.П. Модулирующее действие закцин-ного итг-миа чумного микроба на композицию субпопуляции перитоне-альных маркофагоо // Актуальные вопросы вакциноПрофилактики ООИ: Тез.док. науч.кон. - Киров, 1991.- С. 160-170.

4.Васильева Г.И., Ткаченко Л.И., Дорошенко, Е, П., Гамлешко

V f i t/linnnftni А - It IJrtrUMMi"» it H 1лмрпдл г»л« 'JJfJ «»»»»»упл^лм -

ности противочумных вакцин.- A.c. 1818348. СССР. - N4858651/13; Заявл. 20.11:91; Опубл. 30.05.91л //Открытия, изобретения. - М., 1993.- N20. -С. 14.

. 5. Васильева Г. И.Веркина Л.М. Роль макрофагов в индукции противочумного иммунитета /, I с-ьеэд иммунологов России; Тез.дскл. - Новосибирск, 1992.- С.

3.Веркина Л.М.. Васильева Г.И. Модуляция экспрессии 1а-антигенов макрофагами при индукции иммунного ответа к чудному микробу //I сгезд иммунологов России: Тез.докл.-Новосибирск, 1992.- С.

7. Васильева Г. И., Веркина Л. М., Дорошенко Е. П. Макрофаги jquK эффекторные клетки противочумного' umiyi гета //Факторы гуморального и клеточного иммунитета при различных Физиологических и патологических состояниях: Тез. 6-й республ. конф. - Челябинск, •1992.- С. 18.

8. Васильева Г. И.. Веркина Л. М.. Киселева А. К., Дорошенко Е.И. Оценка противочумного иммунитета по модуляции зональной активности клеток системы монинуклеарных фагоцитов в иммунном организме // Междунарсд. симпозиум по аллергологии и клин, иммунологии: Тез. докл. - Алма-Ата, 1992.- С. 92.

9. Веркина Л. М.. Васильева Г. И.. Гамлешко X. П. Изменение по-

казагеля макрофагапьной трансформации моноцитов крови при аэрр-генндц иммунизации вакцинным штаммом //Международ, симпозиум по аллергологии и клин, иммунологии: Тез. докл. ? Алма-Ата, 1992.-С, 105. '

10.Васильева Г,И.. Веркина Л.М.,. Ермоленко Т.Д. Участие клеток системы мононуклеарных фагоцитов в индукции противочумного дошууртета //Иммунология.-^Б * ■..

Н.Беспалчва H.'jL, Васильеву Р.И., Веркина Л.М. Изучение им-муногекных свойств нативного и детоксицированного липополисаха-• рида чумного микроба в тесте макрофагальной трансформации моноцитов пс зферической- крови //Иммунология и спец. профилактика 00И: Тез. докл. Рос. научн. конф.Саратов. 1993. - Л. 6.

12. Васильева Р. И,, Дорошенко Б. П., Веркина Л. М. Регуляторная функция макрофагов в процессе формирования противочумного иммунитета //Иконология и спец, профилактика ООИ; Тез.дскл, Рос. научи. конф. - Саратов, 1093. - С. 11.

13. ВерК/ша Л, , Васильева Г. И. Динамика экспрессии 1а-анти-генов макрофагами в процессе формирования протизочумного иммунитета //Иммунология и спец.профипактика ООИ: Тез.докл. Рос. научи. конф. -С»ратов 1993. 1 С, 13.

14. Веркина Л.М., Васильева Г. И. Оценка поствакцинального иммунитета у людей по модуляции функциональной активности клеток системы мононуклеарных фагоцитов // Иммунология и спец. профилактика ООИ: Тез. докл. Рос. научн. конф. .- Саратов. 1993. -С.14/

15.Васильева Г.И., Веркина Л.М., Ермоленко Т.Д. Презентирую-щая активность тканевых макрофагов разной локализации и их фракций • при первичном и вторичном ишуннон ответе к чумному микрцбу //Иыуунолсгин, - 1994. - f;'