Особенности цитогенетических эффектов при острых лейкозах и исполь-зование их в прогностических целях

Закурдаева, Кристина Александровна

Автореферат диссертации по теме "Особенности цитогенетических эффектов при острых лейкозах и исполь-зование их в прогностических целях"

004609738

На правах рукописи

ЗАКУРДАЕВА КРИСТИНА АЛЕКСАНДРОВНА

ОСОБЕННОСТИ ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ ПРИ ОСТРЫХ ЛЕЙКОЗАХ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ИХ В ПРОГНОСТИЧЕСКИХ ЦЕЛЯХ

03.02.07 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва-2010

• 8 АПР 20Т0

004600738

Работа выполнена на кафедре биологии, медицинской генетики и экологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Иванов Владимир Петрович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Козлова Светлана Ивановна доктор медицинских наук, профессор Щипков Валерий Петрович

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Московская медицинская академия

им. И.М. Сеченова Росздрава»

Защита состоится 2010 г. в 15 часов на заседании диссер-

тационного совета Д 212.203.05 в Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, дом 8.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке ГОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, дом 6.

Автореферат разослан « ФЗ 2010 г.

Ученый секретарь / )

диссертационного совета, /У/ У

кандидат биологических наук, доцент { / 3 О.Б.Гигани

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

В настоящее время цитогенетический анализ в гематологии играет важную роль в диагностике, прогнозировании течения заболевания и оценке эффективности применяемой терапии. Некоторые хромосомные нарушения строго ассоциируются с характерной клинической картиной и подтипом заболевания и в этом случае являются дополняющими, а в некоторых случаях и определяющими признаками онкогематологической патологии (Домрачева, Е.В., Асеева, Е.А., 2001). Данные литературы свидетельствуют, что при типичных для острых лейкозов хромосомных аберрациях смена локализации и/или повреждение структуры генов могут приводить к нарушению их экспрессии или к структурно-функциональным изменениям кодируемых ими белков. Данные изменения играют интегральную роль в патогенезе и в прогрессировании лейкозов (Белохвостое, A.C., 2003; Флейшман, Е.В., 2008).

Группа острых лейкозов (OJI) чрезвычайно гетерогенна по своим морфологическим, иммунофенотипическим, цитогенетическим и молекулярно-генетическим характеристикам. Практическое значение цитогенетического исследования в данной группе патологий в настоящее время является общепризнанным, поскольку его результаты имеют решающее значение в диагностике, динамическом наблюдении и определении прогноза (Ворсанова, С.Г., 2006).

На современном этапе продолжается поиск новых неслучайных хромосомных перестроек при острых лейкозах и выявление их взаимосвязей с течением и прогнозом заболевания, эффективностью применяемой терапии.

Наименее изученными в этой области остаются проблемы комплексного исследования цитогенетических эффектов при ОЛ, включая, наряду с проведением стандартного исследования с использованием дифференциального окрашивания хромосом, оценку функциональной активности рибосомных генов (ФАРГ), уровня спонтанного мутагенеза в клетках как костного мозга, так и периферической крови, а также установление их клинической и прогностической значимости.

Изложенное выше, а также необходимость дальнейшего расширения представлений о состоянии хромосомного аппарата клеток при острых лейкозах de novo и в ходе терапии определили актуальность проведения настоящего исследования.

Цель исследования

Целью настоящего диссертационного исследования является изучение состояния хромосомного аппарата клеток костного мозга и периферической крови и установление его взаимосвязи с особенностями клинического проявления и течения острых лейкозов.

Задачи исследования

Для реализации поставленной цели были определены и последовательно решены следующие задачи:

1. Изучить с использованием методов дифференциального окрашивания кариотипы больных острым лейкозом в клетках костного мозга и периферической крови.

2. Оценить особенности клинического проявления и течения острых лейкозов у больных в популяции Курской области.

3. Изучить состояние функциональной активности рибосомных генов в клетках периферической крови больных острым лейкозом.

4. Изучить уровень спонтанного мутагенеза в клетках периферической крови больных острым лейкозом.

5. Установить взаимосвязи между особенностями клинического проявления заболевания и цитогенетическими эффектами в клетках больных острым лейкозом.

Научная новизна работы

Впервые получены данные комплексного исследования состояния хромосомного аппарата клеток костного мозга и периферической крови больных острым лейкозом, включая кариотип, функциональную активность рибосомных генов и уровень спонтанного мутагенеза, в неисследованной ранее популяции Курской области. Показано, что при различных вариантах лейкозов цитогенетические эффекты проявляют свои особенности, что важно для проведения дифференциальной диагностики. Впервые доказано, что цитогенетические эффекты взаимосвязаны с особенностями клинического проявления острых лейкозов, что открывает перспективы прогнозирования течения и исхода заболевания.

Практическая значимость

Полученные данные о цитогенетических эффектах при острых лейкозах могут применяться практическими врачами-гематологами и врачами ме-

дико-генетических консультаций для ранней оценки прогноза течения и исхода заболевания.

Практические рекомендации

1. Врачам-гематологам использовать обнаруженные в клетках костного мозга и периферической крови неслучайные хромосомные перестройки в качестве одного из ведущих прогностических факторов течения и исхода острого лейкоза в соответствии с разработанной стратификацией больных по группам благоприятного, промежуточного и неблагоприятного прогноза.

2. Использовать разработанные уравнения линейно-дискриминантной функции с целью прогнозирования течения острых лейкозов на основе комплексного цитогенетического исследования клеток костного мозга и периферической крови в практике врачей-гематологов и врачей медико-генетических консультаций.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Острые лейкозы характеризуются широким разнообразием цитогенетических эффектов, касающихся изменений кариотипов, функциональной активности рибосомных генов и уровня спонтанного мутагенеза.

2. Варианты лейкоза (миело-/лимфобластный) характеризуются своими особенностями цитогенетических эффектов, прогнозом течения и исхода заболевания.

3. Функциональная активность рибосомных генов при острых лейкозах существенно ниже общепопуляционных показателей, при этом уровень различий касается и вариантов лейкозов (миело-/лимфобластных).

4. Больные острым лейкозом характеризуются высоким уровнем спонтанного мутагенеза по сравнению с общей популяцией. При этом проводимая химиотерапия способствует усилению спонтанного мутагенеза.

5. Полученные цитогенетические эффекты при острых лейкозах демонстрируют связи с особенностями клинических проявлений заболевания, что открывает возможности раннего прогнозирования течения и исхода заболевания.

Внедрение в практику

Результаты исследования внедрены в работу гематологического отделения Курской областной клинической больницы, Курской областной медико-генетической консультации, лаборатории кафедры биологии, медицин-

ской генетики и экологии Курского государственного медицинского университета. По результатам исследования в работу гематологического отделения и медико-генетической консультации Курской областной клинической больницы внедрено предложение «Прогнозирование течения острых лейкозов на основе комплексного цитогенетического исследования клеток костного мозга и периферической крови с использованием метода дискри-минантного анализа».

Апробация и публикации

Результаты работы доложены на конференциях студентов и молодых ученых КГМУ (Курск, 2006, 2007, 2008, 2009), итоговых научных сессиях КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного научного центра РАМН, 80-ой конференции студенческого научного общества СПбГМА им. И.И. Мечникова «Человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2007), Международной молодежной научно-методической конференции «Проблемы молекулярной и клеточной биологии» (Томск, 2007), Международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные исследования» (Италия, 2009), Международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2010), V международной Пироговской студенческой научной медицинской конференции (Москва. 2010). По материалам диссертации опубликовано 16 печатных работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, библиографического списка и приложения. Работа изложена на 163 страницах машинописного текста, содержит 41 таблицу и 25 рисунков. Библиографический список используемой литературы включает 250 источников, 133 из которых - зарубежные.

Материал исследования

Материалом для комплексного цитогенетического исследования явились клетки костного мозга, полученные при стернальной пункции, а также клетки периферической крови больных с впервые выявленным острым лейкозом. Забор материала производили до начала терапии и после курса индукции ремиссии.

Всего было обследовано 97 человек; проанализировано 15520 метафаз-ных пластинок: стандартное цитогенетическое исследование (G-banding) клеток костного мозга - 1940 метафазных пластинок; стандартное цитогенетическое исследование (G-banding) клеток периферической крови - 1940 метафазных пластинок; определение уровня функциональной активности рибо-сомных генов - 1940 метафазных пластинок; определение уровня спонтанного мутагенеза - 9700 метафазных пластинок.

Контрольная группа включала 70 практически здоровых добровольцев, проживающих на территории Курской области, соответствовавших группе исследования по половозрастной структуре.

Методы исследования

Клинико-лабораторные методы. Обследование пациентов включало сбор жалоб и анамнеза с подробным уточнением возможных факторов, способствовавших развитию заболевания; исследование объективного статуса с выделением ведущих синдромов заболевания (анемический, опухолевой инфильтрации, геморрагический, инфекционных осложнений, опухолевой интоксикации); лабораторно-инструментальные методы исследования, в том числе развернутый анализ крови (включая подсчет тромбоцитов и ретикуло-цитов) в динамике, биохимический анализ крови (общий белок, билирубин, тимоловая проба, AJIT, ACT, ЛДГ, щелочная фосфатаза, электролиты, мочевая кислота, мочевина, креатинин, глюкоза), коагулограмма, общий анализ мочи, подсчет миелограммы с цитохимическим исследованием, ультразвуковое исследование органов брюшной полости (печень, селезенка, поджелудочная железа, желчный пузырь, лимфатические узлы) и почек, рентгенография органов грудной клетки, ЭКГ, эхо-кардиография, в ряде случаев - анализ спинномозговой жидкости. Результаты клинического и лабораторно-инструментального обследования пациентов заносились в индивидуальную анкету. Диагноз острый лейкоз устанавливался на основании обнаружения в пунктате костного мозга (в ряде случаев в периферической крови) более 20% бластных клеток. При обнаружении в костном мозге менее 20% бластных клеток, а в периферической крови - более 20%, также устанавливался диагноз острого лейкоза.

Цитогенетические методы. Культивирование клеток костного мозга и периферической крови обследованных лиц проводилось общепринятым методом, описанным Hungerford и Moorhead, с модификациями лаборатории цитогенетики НИИ Канцерогенеза Российского онкологического научного

центра имени H.H. Блохина. Соблюдались единые условия забора материала, культивирования и фиксации. Забор костного мозга в объеме 1-2 мл производился при стернальной пункции в стерильные флаконы, содержащие гепарин (разведенный в воде в соотношении 1:20) со средой RPMI в соотношении 1:9. Взятие крови производили из локтевой вены в объеме 10 мл. Кровь немедленно помещали во флаконы с гепарином, разведенным водой в соотношении 1:20, с целью предотвращения ее свертывания.

Культивирование крови и костного мозга проводилось в течение 24-48 часов при температуре 37°С. Культуральная смесь состояла из среды RPM1, сыворотки крови крупного рогатого скота, глутамина, антибиотика для предотвращения пророста среды. Остановку клеточного деления на стадии ме-тафазы проводили с помощью цитостатиков - колхицина («ПанЭко») и ноко-дазола (Nocodazole, «Fluka») или колцемида (Demecolcine, «Sigma»). Гипотоническая обработка осуществлялась в 0,56% растворе хлорида калия в течение 30 минут в термостате при температуре 37°С. Фиксацию культур проводили общепринятым методом с использованием смеси этилового спирта и уксусной кислоты в соотношении 3:1. Препараты готовили раскапыванием осадка клеточной суспензии на влажные охлажденные тонкие стекла (толщиной 1 мм) на пару или с последующим обжигом над огнем спиртовки. После высушивания препараты маркировались и до окраски хранились при комнатной температуре.

Для стандартного цитогенетического исследования препараты окрашивали по методу Гимзы с применением раствора трипсина 0,25% (дифференциальное окрашивание - G-banding) и шифровали. При определении уровня спонтанного мутагенеза препараты окрашивали рутинным методом с использованием красителя Гимза в течение 10 минут. Для специфического выявления районов ядрышковых организаторов (ЯОР) использовался метод дифференциальной окраски хромосом нитратом серебра, предложенный Howell и Black, с некоторыми модификациями.

Полученные препараты анализировали под микроскопом «Zeiss» при увеличении х1200. С целью кариотипирования от каждого индивида анализировали 20 метафазных пластинок. Оценку уровня спонтанного мутагенеза в клетках периферической крови производили путем подсчета количества аберраций в 100 клетках.

Для оценки ФАРГ в каждом случае средний показатель суммарной активности 10 ЯОР рассчитывался без кариотипирования хромосом в 20 клетках. Уровень ФАРГ клеток периферической крови оценивался визуально по

размерам преципитатов восстановленного серебра и выражался по пятибалльной шкале в условных единицах (от 0 до 4).

Метафазные пластинки фотографировали при помощи системы OLYMPUS, с использованием программного обеспечения «ImageScope» и «KaryoService».

Статистические методы. Статистический анализ сформированного банка данных проводился на ПК с использованием пакета прикладных программ Microsoft Excel 2007 фирмы Microsoft Inc. (США) и STATISTICA фирмы StatSoft Inc. (США), версия 6.0. Обработка данных осуществлялась по стандартным методикам вариационной статистики (Боровиков, В.П., 1997; Урбах, В.Ю., 1975). При описании количественных признаков использовались параметры нормального распределения: среднее значение, стандартная ошибка среднего значения. При обработке качественных показателей вычислялись: размер выборочной доли в процентах и ошибка выборочной доли (Урбах, В.Ю., 1975; Трубников, В.И., 1980). Для проверки достоверности различий между совокупностями использовались параметрические критерии Стьюдента и Фишера (Лакин, Г.Ф., 1990; Реброва, О.Ю., 2003). За уровень значимости принимали р<0,05, многозначимые показатели - при р<0,01. Анализ выживаемости производился методом Каплан-Майер, для сравнения выборок использовался F - критерий Кокса. В работе также использовались корреляционный, многомерный, дискриминантный анализы (Реброва, О.Ю., 2003; Гланц, С, 1998).

Результаты н обсуждение собственных исследований

1. Хромосомные аномалии при острых лейкозах и их прогностическое значение.

1.1. Результаты кариотипирования клеток костного мозга и периферической крови.

В ходе цитогенетического исследования изменения со стороны хромосомного аппарата в клетках костного мозга были выявлены у 63,92% пациентов и в клетках периферической крови - у 32,99% пациентов. Дальнейший анализ показал, что выявление хромосомных аберраций в клетках периферической крови наиболее вероятно при наличии в лейкоформуле более 49% бластных клеток. Обнаруженная прямая зависимость между уровнем бласте-мии и наличием изменений со стороны хромосомного аппарата клеток периферической крови пациентов позволит более четко определять, какой материал целесообразно использовать для цитогенетического исследования.

Обнаруженные при кариотипировании клеток костного мозга и периферической крови хромосомные перестройки считались неслучайными в случае их выявления в 2 и более метафазных пластингсач для структурных перестроек и в 3 и более метафазных пластинках для изменений числа хромосом.

При кариотипировании клеток стернального пунктата больных острым лейкозом были обнаружены следующие типы хромосомных аномалий: изменения плоидности хромосом (гипер- и гипоплоидия) встречались в 14,43% случаев; моносомии - в 13,4% случаев; трисомии - в 6,19% случаев; различные виды транслокаций, такие как 1(8;21), 1(9;22), К9;11) и другие, наблюдались у 19,59% пациентов; инверсии обнаружены у 6,19% больных; делеции -в 3,09% случаев; у одного пациента выявлен сложный кариотип, включающий 3 и более аберраций; нормальный кариотип (46,XX; 46,ХУ) отмечен в 36,08% случаев. Все обнаруженные в ходе исследования хромосомные аномалии были ранее описаны в литературе. Были выявлены такие редкие аномалии, как транслокация инверсия ¡пу(3).

1.2. Прогностическое значение выявленных хромосомных изменений.

Критериями оценки прогноза являлись быстрота наступления клинико-гематологической ремиссии, наличие или отсутствие цитогенетической ремиссии, наличие рецидива, длительность общего выживания больных. Благоприятным считался прогноз в случае быстрого наступления клинико-гематологической ремиссии в ходе первых курсов химиотерапии, наличия цитогенетической ремиссии и выживаемости пациентов более 3 лет, отсутствия рецидива. Прогноз расценивался как неблагоприятный в случае летального исхода в течение года или быстрого наступления рецидива, крайне неблагоприятный - в случае летального исхода до начала лечения или в ходе первого курса терапии. Промежуточный прогноз соответствует выживаемости в пределах 1-3 лет, наличию клинико-гематологической ремиссии при отсутствии выраженного цитогенетического ответа.

В группе острых миелобластных (нелимфобластных) лейкозов (ОМЛ) наиболее благоприятными оказались транслокации 1(8;21), ^15;17), а также инверсия ту(16), что соответствует данным литературы. В большинстве случаев наличия моносомий (за исключением моносомии У) отмечался неблагоприятный прогноз, также как и при нарушениях плоидности кариотипа, в то время как трисомии (+13, +21) характеризовались промежуточным прогно-

зом. В единственном случае сложного кариотипа отмечался крайне неблагоприятный прогноз с быстрым прогрессированием заболевания, отсутствием ремиссии и смертью больного во время первого курса химиотерапии.

В группе острых лимфобластных лейкозов (OJ1JI) благоприятный прогноз был характерен для случаев гипердиплоидного набора хромосом. Крайне неблагоприятным образом развивались острые лимфобластные лейкозы с наличием транслокации t(9;22). В этой группе наблюдалась наибольшая частота рецидивов.

2. Цитогенетические эффекты при острых лейкозах de novo и в ходе лечения.

2.1. Оценка функциональной активности рибосомных генов при острых лейкозах.

С целью комплексной оценки цитогенетических проявлений ОЛ нами были изучены показатели ФАРГ, отражающие активность белоксинтези-рующего аппарата клеток, до начала лечения и в ходе терапии.

Установлено, что средний показатель ФАРГ в группе контроля составляет 19,83±1,94 условных единиц, тогда как у больных острым лейкозом как до, так и после курсов лечения, данный показатель по 10 хромосомам был статистически многозначимо ниже, чем в контроле (t=9,28 и 8,22, соответственно, при р<0,01) и составлял 17,70±0,98 и 17,69±1,12 условных единиц, соответственно. Снижение ФАРГ происходило за счет ядрышкообразующих районов хромосом группы G (t=9,46 и 8,56, соответственно, при р<0,01). Сравнительный анализ ФАРГ при острых лейкозах до и после лечения не показал статистически значимых различий между показателями.

Сравнительный анализ ФАРГ при острых миело- и лимфобластных лейкозах выявил статистически многозначимые различия показателей ФАРГ в этих группах (t=4,04 при р<0,01). Средний показатель ФАРГ у больных острым миелобластным лейкозом составил 17,91±0,91, лимфобластным -17,03±0,92. Показатели ФАРГ были значительно ниже при остром лимфобла-стном лейкозе во всех группах хромосом. Те же различия показателей ФАРГ в группах больных острым миело- и лимфобластным лейкозом сохранялись и после курса индукции ремиссии (t=3,76 при р<0,01), однако статистически многозначимые различия наблюдались только по показателям ФАРГ в ЯОР хромосом группы D (t=3,73 при р<0,01). Сравнительный анализ ФАРГ до и после лечения в группах острых миело- и лимфобластных лейкозов не показал статистически значимых различий между показателями.

2.2. Оценка уровня хромосомных аберраций при острых лейкозах.

Уровень клеток с аберрациями в культуре лимфоцитов периферической крови обследованных лиц в группе контроля составил 0,97%±0,15. Основным типом аберраций были одиночные фрагменты, частота которых достигала 75% от всех наблюдаемых аберраций. Парные фрагменты встречались в 18% случаев, хромосомные обмены - в 4,5%, хроматидные обмены - в 2,5% случаев. В целом, из всех наблюдаемых аберраций 77,5% составили аберрации хроматидного типа и 22,5% - хромосомного.

В группе больных острым лейкозом до лечения наблюдалось статистически достоверное повышение уровня хромосомных аберраций в клетках периферической крови по сравнению с контролем (3,87%±0,60, 1=4,84 при р<0,05) за счет всех видов хромосомных аберраций, среди которых преобладали аберрации хроматидного типа (простые и обменные), составившие 79,8% от общего числа аберраций. Преобладающее число больных (74,2%) имели от 1 до 3 аберраций, у 17,5% пациентов не выявлены изменения со стороны хромосомного аппарата, у остальных (8,3%) определялось по 4 аберрации.

Среди больных острым лейкозом после курсов химиотерапии наблюдалось резкое повышение уровня хромосомных аберраций в клетках периферической крови (4,62±0,69, 1=4,95 при р<0,05) в сравнении с контрольной группой. Так же, как и в предыдущих группах, основным типом хромосомных аберраций явились одиночные фрагменты, составившие 78,3%. Частота парных фрагментов достигала 15,1%, хромосомные обмены встречались в 3,9% случаев, хроматидные обмены - в 2,7% случаев. Преобладали пациенты, имевшие от 1 до 3 аберраций (61,8%), 19,7% пациентов имели от 4 до 6 аберраций, 13,2% больных - 7 и более хромосомных аберраций. У 5,3% пациентов данной группы не обнаружено цитогенетических изменений.

При сравнении групп больных острым лейкозом до и после лечения определялось статистически достоверное повышение уровня аберраций в клетках периферической крови пациентов после химиотерапии как хромосомного, так и хроматидного типа (1=2,06 и 1=1,99 при р<0,05, соответственно). При анализе уровня спонтанного мутагенеза в группах больных острым миело- и лимфобластным лейкозом статистически значимых различий не выявлено. Внутри групп больных острым миело- и лимфобластным лейкозом до и после лечения выявлены изменения, схожие с закономерностями, установленными для общей выборки больных острым лейкозом.

2.3. Взаимосвязь уровня функциональной активности рибосомных генов и хромосомных аберраций с особенностями клинического проявления и течения острых лейкозов.

Проведен анализ показателей ФАРГ клеток периферической крови пациентов с различной длительностью жизни после манифестации заболевания. Для этого все пациенты были разделены на две основные группы: больные острым миелобластным лейкозом и больные острым лимфобластным лейкозом, которые, в свою очередь, подразделялись по срокам выживаемости на следующие группы:

1) умершие в течение первого курса терапии или до начала лечения;

2) с выживаемостью менее 1 года;

3) с выживаемостью от 1 до 3 лет;

4) с выживаемостью более 3 лет.

Сравнительный анализ уровня ФАРГ в зависимости от выживаемости в группе острых миелоблстных лейкозов показал статистически многозначимые (р<0,01) различия показателей ФАРГ по 10 хромосомам между всеми группами выживаемости, при этом изменения активности отмечались в ЯОР хромосом групп как Б, так и О.

Аналогичный анализ в группе ОЛЛ выявил статистически достоверные (р<0,05) различия показателей ФАРГ по 10 хромосомам между группами больных, умерших до начала лечения или в течение первого курса полихимиотерапии (ПХТ) и с выживаемостью более 3 лет (1=2,71), а также статистически многозначимые (р<0,01) различия показателей ФАРГ по 10 хромосомам между остальными группами выживаемости (1=5,72 и 1=3,19), при этом основные изменения показателей ФАРГ отмечались в ЯОР хромосом группы О, за исключением групп больных, умерших до начала лечения или в течение первого курса ПХТ и с выживаемостью от 1 до 3 лет, где изменения ФАРГ затрагивали также ЯОР хромосом группы О. Однако сравнение уровня ФАРГ в различных группах выживаемости больных ОЛЛ до и после лечения не показало статистически значимых изменений ни в одной из исследуемых групп.

При сравнительном анализе показателей активности рибосомных генов в группах больных острым миело- и лимфобластным лейкозом с различной выживаемостью выявлена прямая зависимость между исходным уровнем активности рибосомных генов и уровнем выживаемости пациентов, страдающих острым лейкозом. Показано, что чем ниже исходная активность РГ, тем короче продолжительность жизни пациента после манифестации заболевания.

Сравнительный анализ уровня спонтанного мутагенеза в зависимости от выживаемости в группе острых лейкозов показал статистически достоверные (р<0,05) различия показателей уровня спонтанного мутагенеза между группами больных, умерших в ходе первого курса ПХТ или до начала лечения, и больных с продолжительностью жизни после манифестации ОЛ более 3 лет (1=2,01), при этом изменения происходили, в основном, за счет аберраций хроматидного типа (1=2,19).

Также отмечались статистически достоверные (р<0,05) различия числа хроматидных обменов между всеми группами, за исключением групп больных, выживших в течение года и более трех лет.

Статистически достоверные (р<0,05) различия числа хромосомных обменов наблюдались между группами больных, умерших в ходе первого курса терапии или до начала лечения, и больных, умерших в течение года, а также между группами больных, умерших в ходе первого курса терапии или до начала лечения, и больных, выживших в течение 1-3 лет после начала ОЛ (1=2,43 и 1=2,81, соответственно).

На основании полученных в ходе исследования данных о клинико-лабораторных и цитогенетических показателях среди больных острым лейкозом нами была предпринята попытка выделить наиболее ценные в прогностическом отношении характеристики и с помощью дискриминантного анализа построить линейно-дискриминантную функцию, позволяющую оценивать прогноз течения заболевания.

Обобщенный многомерный анализ клинико-лабораторных и цитогенетических показателей больных выявил наиболее значимые корреляционные взаимосвязи и позволил выделить 6 признаков, обладающих наиболее высокой ценностью: бластоз костного мозга, лейкоцитоз, суммарная активность рибосомных генов, бластемия, возраст больных и уровень мутагенеза.

у1 = -О,О6х1+(-0,05х2)+0,О4х3+(-О,О4х4)+(-О,ОЗх5)+О,О5х6+(-1,57), у 2 = -0,ОЗх,+(-0,02х2)+0,ОЗхз+(-0,ОЗх4)+(-0,01х5)+0,02хб+(-0,67), где X) - бластоз костного мозга, %; х2 - лейкоцитоз, * 109;

Хз - суммарная активность рибосомных генов, усл. ед.; х4 - бластемия, %; х5 - возраст, лет;

х6 - уровень спонтанного мутагенеза, %.

Полученное итоговое уравнение линейно-дискриминантной функции открывает возможность выполнения предварительной оценки благоприятного и неблагоприятного прогноза течения заболевания с вероятностью 83% только по вышеуказанным показателям.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время проблема разработки и выбора адекватной терапии острых лейкозов, повышения уровня выживаемости и качества жизни больных является одной из наиболее актуальных в современной гематологии. Постоянно появляются и совершенствуются новые высокотехнологичные методы диагностики этой группы заболеваний, в связи с чем открытыми остаются вопросы интерпретации полученных в ходе обследования пациентов данных в отношении прогноза течения заболевания. Распределение больных ОЛ по группам риска позволяет наиболее адекватно подбирать протоколы терапии, сопроводительную терапию. Прогностические факторы (или факторы благоприятного и неблагоприятного прогноза) могут включать возраст, пол, исходный соматический статус пациента, клинические, морфологические, ци-тогенетические, иммунологические характеристики лейкемических клеток.

Не вызывает сомнения постулат о том, что в основе патогенеза острого лейкоза лежит поломка в генетическом материале пораженной вследствие воздействия каких-либо этиологических факторов клетки, которая является прародительницей патологического клона. В связи с этим исследование состояния хромосомного аппарата клеток при ОЛ является неотъемлемой частью всестороннего обследования пациентов.

Настоящее исследование является первой работой по комплексной оценке цитогенетических показателей при острых лейкозах и определению их прогностического значения. Ее научная ценность определяется целью и задачами исследования.

Первая часть исследования посвящена изучению клинических особенностей течения острых лейкозов. В ходе комплексного анализа социально-биологических и клинико-лабораторных показателей среди больных острым лейкозом была показана значительная гетерогенность данной группы заболеваний.

Среди лабораторно-инструментальных исследований изучались 42 показателя, среди которых наиболее значимыми оказались уровень гемоглоби-

на, число лейкоцитов, тромбоцитов и бластных клеток в периферической крови и в костном мозге, уровень ЛДГ, бластоз костного мозга, наличие ге-патоспленомегалии (по данным УЗИ). Полученные данные и их анализ были необходимы в работе не только для получения базовых фенотипических характеристик больных, но и для выявления взаимосвязей с цитогенетическими эффектами при ОЛ.

В ходе изучения цитогенетических показателей при ОЛ, в первую очередь, производили стандартное цитогенетическое исследование клеток костного мозга и периферической крови больных ОЛ с использованием методов дифференциального окрашивания хромосом (С-Ьагкйг^). Результаты карио-типирования отражены в главе 4.

В ходе исследования были определены более 20 разнообразных хромосомных аберраций, играющих важную роль в патогенезе и прогрессировании острых лейкозов. Хотя и не было обнаружено новых неслучайных хромосомных перестроек, были выявлены несколько редких изменений кариотипа.

Изменения со стороны хромосомного аппарата в клетках костного мозга были выявлены у 63,92% пациентов, в клетках периферической крови - у 32,99% пациентов. При анализе корреляций между уровнем бластемии и наличием изменений со стороны хромосомного аппарата клеток периферической крови показано, что выявление хромосомных аберраций в клетках периферической крови наиболее вероятно при наличии в лейкоформуле более 49% бластных клеток, что важно для предотвращения проведения заведомо неудачных исследований.

Посредством анализа методом Каплан-Майер для части выявленных хромосомных аномалий показано прогностическое значение в развитии заболевания. Обращает на себя внимание тот факт, что анализ выживаемости показал отличие прогностического значения схожих хромосомных перестроек в группах острого миело- и лимфобластного лейкоза, что подтверждает различия в патогенезе ОЛ с поражением клеток разных линий кроветворения.

Необходимо также отметить, что важным прогностическим признаком, влиявшим на общую выживаемость и длительность безрецидивного течения, явилось наступление или отсутствие цитогенетической ремиссии у больных после индукционной терапии, что подтверждает необходимость проведения цитогенетического исследования клеток костного мозга больных ОЛ в динамике для определения прогноза и дальнейшей тактики лечения.

После стандартного цитогенетического исследования нами проводилось изучение активности рибосомных генов как отражение деятельности бе-

локсинтезирующего аппарата клеток и уровня спонтанного мутагенеза, как показателя генетической нестабильности клеток при ОЛ. Результаты представлены в главе 5 настоящей работы.

В ходе исследования активности рибосомных генов при ОЛ впервые была показана прямая зависимость между исходным уровнем активности рибосомных генов и уровнем выживаемости пациентов, страдающих острым лейкозом: чем выше исходная активность РГ, тем выше показатели общей выживаемости пациентов.

Изучение уровня спонтанного мутагенеза в группе больных ОЛ выявило повышение уровня спонтанного мутагенеза у больных острым лейкозом как до, так и после лечения, что свидетельствует о генетической нестабильности пораженных клеток. Преобладание аберраций хроматидного типа свидетельствует в пользу преимущественного влияния химических факторов на процесс формирования мутаций у данной группы больных. Оценка прогностического значения исходного уровня спонтанного мутагенеза показала обратную зависимость между данным показателем и общей выживаемостью: наибольший уровень спонтанного мутагенеза наблюдался в группе больных, умерших в ходе индукционной терапии или до начала лечения.

Исходя из полученных данных комплексного цитогенетического обследования больных ОЛ, с использованием дискриминантного анализа был разработан алгоритм предварительной оценки прогноза течения заболевания на основании результатов общепринятых лабораторных исследований (гемограммы, миелограммы) и цитогенетических показателей (суммарной активности рибосомных генов и уровня спонтанного мутагенеза).

Практическое значение результатов цитогенетического исследования клеток костного мозга и периферической крови больных ОЛ для врачей-гематологов определяется возможностью стратификации больных по степени риска развития рецидива, резистентности к терапии, прогнозу общей выживаемости. Разработанная схема достаточно проста и легко применима на практике, она позволит врачам-гематологам уточнять предварительный прогноз и своевременно корригировать тактику проводимой терапии.

По результатам проведенного исследования разработанные методы оценки прогноза течения острых лейкозов были внедрены в работу гематологического отделения Курской областной клинической больницы, областной медико-генетической консультации, генетической лаборатории кафедры биологии, медицинской генетики и экологии КГМУ.

В ходе нашего исследования подтверждена ведущая роль генетических нарушений в патогенезе и прогрессировании ОЛ, показано прогностическое значение изученных цитогенетических показателей. Впервые представлен алгоритм предварительной оценки прогноза течения ОЛ на основании оценки клинико-лабораторных и цитогенетических показателей. Таким образом, включение комплексного цитогенетического исследования в план обследования пациентов, страдающих острым лейкозом, до начала лечения и в динамике является необходимым для оценки прогноза и выбора тактики терапии.

ВЫВОДЫ

1. Показатель заболеваемости острыми лейкозами в популяции Курской области за период с 2003 по 2009 гг. оставался относительно стабильным и составлял 0,38 на 10 000 населения. Ранжирование территории области по заболеваемости гемобластозами позволило выявить 3 района группы высокого риска (Железногорский, Курчатовский и Поныровский) и 18 районов группы низкого риска.

2. Установлены тесные корреляционные взаимосвязи между уровнем бластемии и количеством хромосомных аберраций в клетках периферической крови и уровнем бластоза костного мозга и количеством хромосомных аберраций в клетках костного мозга (г=0,86 и 0,68 соответственно). Показано, что выявление хромосомных аберраций в клетках периферической крови наиболее вероятно при наличии в лейкоформуле более 49% бластных клеток.

3. Кариотипирование клеток костного мозга и периферической крови больных острым лейкозом подтвердило наличие 22 описанных ранее в научной литературе видов хромосомных перестроек. Обнаружены и редкие хромосомные аномалии: транслокация 1(1 ;3) и инверсия ¡пу(3).

4. Использование критериев оценки прогноза показало, что острый лимфобластный лейкоз в целом имеет менее благоприятное течение, чем острый миелобластный лейкоз. Наличие цитогенегаческой ремиссии статистически достоверно вело к увеличению медианы общей выживаемости и безрецидивнош течения заболевания (1=2,93 при р<0,05).

5. Доказано, что при острых лейкозах уровень функциональной активности рибосомных генов статистически достоверно ниже (Х= 17,70 усл. ед.) по сравнению с популяцией (Х=19,83 усл. ед.) за счет ядрышкообразующих районов акроцентрических хромосом группы в, что может рассматриваться как предрасполагающий фактор развития патологического процесса.

6. Больные острым миело- и лимфобластньш лейкозом в различных группах выживаемости характеризуются прямой зависимостью между исходным уровнем функциональной активности рибосомных генов и уровнем выживаемости пациентов.

7. Уровень спонтанного мутагенеза у больных острым лейкозом (Х=3,87%) существенно превышает уровень в общей популяции (Х=0,97%), что указывает на генетическую нестабильность геномов больных и свидетельствует о неблагоприятном экзогенном воздействии среды. Повышению уровня хромосомных аберраций у больных способствуют курсы полихимиотерапии (Х=4,62%), что связано, в первую очередь, со специфическим мутагенным воздействием химиотерапевтических препаратов. Преобладание аберраций хроматидного типа (64,3%) указывает на преимущественное влияние химических факторов на процесс формирования мутаций.

8. Проведенный линейный дискриминантный анализ позволил выделить 6 наиболее значимых в отношении прогноза течения заболевания кли-нико-лабораторных и цитогенетических признаков и на их основе получить уравнение регрессии, позволяющее с вероятностью 83% осуществлять прогнозирование течения острого лейкоза.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИСЕРТАЦИИ

1. Закурдаева К.А., Иванов В.П., Мандрик И.А. Прогностическое значение некоторых хромосомных перестроек при острых лейкозах // Медицинская генетика. - 2009. - №10. - С. 19-22.

2. Закурдаева К.А. Хромосомные изменении при гемобластозах П Человек и его здоровье - 2007: Материалы 80-й конференции Студенческого Научного Общества СПбГМА им. И.И. Мечникова. - СПб., 2008. - С. 69.

3. Закурдаева К.А. Результаты цитогенетических исследований клеток костного мозга у больных с гемобластозами // Проблемы молекулярной и клеточной биологии: Сб. матер. Международной молодежной научно-методической конференции. - Томск, 2007. - С. 70-71.

4. Закурдаева К.А. Прогностическое значение цитогенетических показателей при острых лейкозах // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2009. - №6. - С. 43.

5. Закурдаева К.А., Иванов В.П., Мандрик И.А. Анализ хромосомных перестроек в клетках костного мозга и периферической крови больных острым лейкозом // Бюллетень Сибирского отделения РАМН. - Новосибирск, 2010. -№2.-С. 41-44.

6. Закурдаева КА., Иванов В.П., Мандрик И.А. Оценка уровня хромосомных аберраций у больных острым лейкозом // Кубанский медицинский вестник. - Краснодар, 2009. - №7. - С. 67-69.

7. Закурдаева К.А., Мандрик И.А. Хромосомные изменения при острых лейкозах // Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и технико-экономических сфер в жизни общества. Международная научно-практическая конференция, 26-27 марта 2009 г. - Курск, 2009.-С. 34-35.

8. Закурдаева К.А. Результаты цитогенетических исследований клеток костного мозга при острых лейкозах // Материалы 74-й межвузовской итоговой научной конференции студентов и молодых ученых: Молодежная наука и современность, посвященной Году молодежи в России. В 3-х частях. Часть I. -Курск: ГОУ ВПО КГМУ, 2009. - С. 60.

9. Закурдаева К.А., Мандрик И.А., Пахомова О.В. Хромосомные изменения при гемобластозах // Университетская наука: Теория, практика, инновации. Сборник трудов 73-й научной конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН. В 3-х томах. - Курск, 2008. - Т. 1. - С. 402-405.

10. Закурдаева К.А., Пахомова О.В. Изменения кариотипа у больных различными видами гемобластозов // Материалы 72-й межвузовской итоговой научной конференции студентов и молодых ученых: Молодежная наука и современность. В 3-х частях. Часть I. - Курск: ГОУ ВПО КГМУ, 2007. - С. 60.

11. Пахомова О.В., Закурдаева К.А., Трубникова Е.В., Мандрик И.А. Хромосомные аберрации в периферической крови человека при лимфомах // Ма-

териалы 71-й межвузовской итоговой научной конференции студентов и молодых ученых: Молодежная наука и современность. В 3-х частях. Часть I. -Курск: ГОУ ВПО КГМУ, 2006. - С. 72-73.

12. Железнова МА., Мандрик И.А., Комкова Г.В., Закурдаева К.А., Пахо-мова О.В. Цитогенетическая диагностика гемобластозов // Инновационные формы и методы в физической культуре и спорте: Материалы Международной научно-практической конференции. - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздра-ва, 2008.-С. 103-107.

13. Закурдаева К.А., Конорев М.Ф., Алтунин A.B., Ходов С.В. Цитогене-тическое исследование стернального пунктата пациентов при гемобластозах // Материалы 72-й межвузовской итоговой научной конференции студентов и молодых ученых: Молодежная наука и современность. В 3-х частях. Часть I. - Курск: ГОУ ВПО КГМУ, 2007. - С. 184.

14. Закурдаева К.А. Влияние курения на уровень хромосомных аберраций // Вестник РГМУ. - М.: ГОУ ВПО РГМУ Росздрава. - 2006, №2 (49). -С. 368-369.

15. Закурдаева К.А. Влияние возраста на уровень хромосомных аберраций II Вестник РГМУ. - М.: ГОУ ВПО РГМУ Росздрава. - 2007, №2 (55). -С. 272-273.

16. Закурдаева К.А. Хромосомные перестройки при острых лейкозах // Вестник РГМУ. - М.: ГОУ ВПО РГМУ Росздрава. - 2010, №2 (61). - С. 288.

Закурдаева Кристина Александровна

Особенности цитогенетических эффектов при острых лейкозах и использование их в прогностических целях

В работе представлены исследования по комплексному цитогенетическому анализу клеток костного мозга и периферической крови больных острым лейкозом de novo и после курсов индукции ремиссии. Показано, что неслучайные хромосомные перестройки, уровень функциональной активности рибосомных генов и спонтанного мутагенеза имеют самостоятельное прогностическое значение при острых лейкозах. Разработан алгоритм раннего прогнозирования течения и исхода заболевания на основании вышеуказанных цитогенетических показателей. Результаты исследования могут использоваться в научных исследованиях, а также в практической медицине.

Zakurdaeva Kristina Aleksandrovna Characteristics of cytogenetic effects at acute leukemia and their prognostic value

The complex cytogenetic analysis of bone marrow and peripheral blood cells of patients with acute leukemia de novo and after the inductive therapy is presented in the research. It is shown that nonprioritized chromosomal abnormalities, functional activity of ribosomal genes and spontaneous mutagenesis have independent prognostic value at acute leukemia. The algorithm of the early prognosis of the course and the outcome of the disease is worked out. The results of the research may be used in scientific researches as well as in medical practice.

Сдано в табор 15.03.2010 г. Подписано в печать 15.03.2010 г. Формат 60x84 '/щ. Бумага «Снегурочка». Гаршпура Times New Roman Cyr. Объем 1,0 усл. печ. л. Тираж 100 экз. Заказ № 910.

Издательство МУ «Издательский центр «ЮМЭКС», Лицензия: ИД№04804от21 05.2001 г.

Отпечатано: ПБОЮЛ Киселева О.В. (ОГРН 304463202600213)

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Закурдаева, Кристина Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Современные представления- об этиологии, патогенезе, диагностике и лечении острых лейкозов.

1.2 Генетические основы канцерогенеза.

1.3 Цитогенетические особенности острых лейкозов.

1.4 Прогностическое значение хромосомных нарушений при* острых лейкозах.

1.5 Показатели ядрышкового аппарата клеток при. острых лейкозах.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.36.

2.1. Материал.

2.2. Клинико-лабораторныеметоды.

2.3. Цитогенетические методы.

2.4. Статистические методы.

Глава 3. ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ ОСТРЫХ ЛЕЙКОЗОВ.

3.1 Эпидемиология острых лейкозов в Курской области.

3.2 Общая характеристика*выборки.

3.3 Особенности клинических проявлений острых лейкозов.

3.4 Результаты лабораторно-инструментальных методов исследования.

3.5 Обсуждение.

Глава 4. ХРОМОСОМНЫЕ АНОМАЛИИ ПРИ ОСТРЫХ ЛЕЙКОЗАХ

И ИХ ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

4.1 Результаты кариотипирования клеток костного мозга и периферической крови.

4.2 Неслучайные хромосомные аномалии при острых лейкозах.

4.3 Анализ выживаемости больных острым лейкозом с учетом особенностей кариотипа.

4.4 Прогностическое значение выявленных хромосомных изменений.

4.5 Обсуждение.

Глава 5. ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ ПРИ ОСТРЫХ ЛЕЙКОЗАХ DE NOVO И В ХОДЕ ЛЕЧЕНИЯ.

5.1 Оценка функциональной активности рибосомных генов при острых лейкозах.

5.2 Оценка уровня хромосомных аберраций при острых лейкозах.

5.3. Взаимосвязь уровня функциональной активности рибосомных генов и хромосомных аберраций с особенностями клинического проявления и течения острых лейкозов.

5.4 Обсуждение.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Особенности цитогенетических эффектов при острых лейкозах и исполь-зование их в прогностических целях"

Актуальность темы

В настоящее время' цитогенетический анализ в гематологии играет важную роль в диагностике, прогнозировании течения заболевания и оценке эффективности применяемой' терапии. Некоторые хромосомные нарушения строго ассоциируются с характерной клинической картиной и подтипом заболевания и в этом случае являются дополняющими, а в некоторых случаях и определяющими признаками онкогематологической патологии [29]. Данные литературы свидетельствуют, что при типичных для острых лейкозов хромосомных аберрациях смена локализации и/или повреждение структуры генов могут приводить к нарушению их экспрессии или к структурно-функциональным изменениям кодируемых ими белков. Данные изменения играют интегральную роль в патогенезе и в прогрессировании лейкозов [7, 14, 34]'.

Группа острых лейкозов (ОЛ) чрезвычайно гетерогенна по своим морфологическим, иммунофенотипическим, цитогенетическим и молекулярно-генетическим характеристикам. Практическое значение цитогенетического исследования в данной группе патологий в настоящее время является общепризнанным, поскольку его результаты имеют решающее значение в диагностике, динамическом наблюдении и определении прогноза [22, 31].

На современном, этапе продолжается поиск новых неслучайных хромосомных перестроек при острых лейкозах и выявление их взаимосвязей с течением и прогнозом заболевания, эффективностью применяемой терапии.

Наименее изученными в этой области остаются проблемы комплексного исследования цитогенетических эффектов при острых лейкозах, включая, наряду с проведением стандартного исследования с использованием дифференциального окрашивания хромосом, оценку функциональной активности рибосомных генов, уровня спонтанного мутагенеза в клетках как костного мозга, так и периферической крови, а также установление их клинической и прогностической значимости.

Изложенное выше, а также необходимость дальнейшего« расширения представлений о состоянии хромосомного аппарата клеток при острых лейкозах de novo и в ходе терапии определили актуальность проведения настоящего исследования.

Цель исследования

Целью настоящего диссертационного исследования является изучение состояния хромосомного аппарата клеток костного мозга и периферической крови и установление его взаимосвязи с особенностями клинического проявления и течения острых лейкозов.

Задачи исследования

Для реализации поставленной цели были определены и последовательно решены следующие задачи:

1. Изучить с использованием методов дифференциального окрашивания кариотипы больных острым лейкозом в клетках костного мозга и периферической крови.

2. Оценить особенности клинического проявления и течения острых лейкозов у больных в популяции Курской области.

3. Изучить состояние функциональной активности рибосомных генов в клетках периферической крови больных острым лейкозом.

4. Изучить уровень спонтанного мутагенеза в клетках периферической крови больных острым лейкозом.

5. Установить взаимосвязи между особенностями клинического проявления заболевания и цитогенетическими эффектами в клетках больных острым лейкозом.

Научная новизна работы

Впервые получены данные комплексного исследования состояния хромосомного аппарата клеток костного мозга и периферической крови больных острым лейкозом, включая кариотип, функциональную активность рибосомных генов и уровень спонтанного мутагенеза, в неисследованной ранее популяции Курской области. Показано, что при различных вариантах лейкозов цитогенетические эффекты проявляют свои особенности, что важно для проведения дифференциальной диагностики. Впервые доказано, что цитогенетические эффекты взаимосвязаны с особенностями клинического проявления острых лейкозов, что открывает перспективы прогнозирования течения и исхода заболевания.

Практическая значимость

Полученные данные1 о цитогенетических эффектах при острых лейкозах могут применяться, практическими врачами-гематологами для ранней оценки прогноза течения и исхода заболевания. По результатам'исследования в работу гематологического отделения и медико-генетической консультации Курской областной клинической больницы внедрено предложение «Прогнозирование течения острых лейкозов на основе комплексного цитогенетического исследования клеток костного мозга и периферической крови с использованием метода дискриминантного анализа».

Практические рекомендации

1. Врачам-гематологам использовать обнаруженные в клетках костного мозга и периферической крови неслучайные хромосомные перестройки в качестве одного из ведущих прогностических факторов течения и исхода острого лейкоза в соответствии с разработанной стратификацией больных по группам благоприятного, промежуточного и неблагоприятного прогноза.

2. Использовать разработанные уравнения' линейно-дискриминантной функции с целью прогнозирования течения острых лейкозов на основе комплексного цитогенетического исследования клеток костного мозга и периферической крови в практике врачей-гематологов и врачей медико-генетических консультаций.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Острые лейкозы характеризуются широким разнообразием цитогенетических эффектов, касающихся изменений кариотипов, функциональной активности рибосомных генов и уровня спонтанного мутагенеза.

2. Варианты лейкоза (миело-/лимфобластный) характеризуются своими особенностями цитогенетических эффектов, прогнозом течения^ и исхода заболевания.

3. Функциональная активность рибосомных генов при острых лейкозах, существенно ниже общепопуляционных показателей, при этом уровень различий касается и вариантов лейкозов (миело-/лимфобластных).

4. Больные острым лейкозом характеризуются высоким уровнем спонтанного мутагенеза по сравнению с общей популяцией. При этом проводимая химиотерапия способствует усилению спонтанного мутагенеза.

5. Полученные цитогенетические эффекты при острых лейкозах демонстрируют связи с особенностями клинических проявлений заболевания, что открывает возможности раннего прогнозирования течения и исхода заболевания.

Внедрение в практику

Результаты исследования внедрены в работу гематологического отделения Курской областной клинической больницы, Курской областной медико-генетической консультации, лаборатории кафедры биологии, медицинской генетики и экологии Курского государственного медицинского университета.

Апробация и публикации

Результаты работы доложены на конференциях студентов и молодых ученых КГМУ (Курск, 2006, 2007, 2008, 2009), итоговых научных сессиях КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного научного центра РАМН, 80-ой конференции студенческого научного общества СПбГМА им. И.И. Мечникова «Человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2007), Международной молодежной научно-методической конференции «Проблемы молекулярной и клеточной биологии» (Томск, 2007), Международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные исследования» (Италия, 2009), Международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2010), V международной Пироговской студенческой научной медицинской конференции (Москва, 2010). По материалам диссертации опубликовано 16 печатных работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, библиографического списка и приложения. Работа изложена на 163 страницах машинописного текста, содержит 41 таблицу и 25 рисунков. Библиографический список используемой литературы включает 250 источников, 133 из которых - зарубежные.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Закурдаева, Кристина Александровна

ВЫВОДЫ

1. Показатель заболеваемости острыми лейкозами в популяции Курской области за период с 2003 по 2009 гг. оставался относительно стабильным и составлял 0,38 на 10 000 населения. Ранжирование территории области по заболеваемости гемобластозами позволило выявить 3 района группы высокого риска (Железногорский, Курчатовский и Поныровский) и 18 районов группы низкого риска.

2. Установлены тесные корреляционные взаимосвязи между уровнем бластемии и количеством хромосомных аберраций в клетках периферической крови и уровнем бластоза костного мозга и количеством хромосомных аберраций в клетках костного мозга (г=0,86 и 0,68 соответственно). Показано, что выявление хромосомных аберраций в клетках периферической крови наиболее вероятно при наличии в лейкоформуле более 49% бластных клеток.

3. Кариотипирование клеток костного мозга и периферической крови больных острым лейкозом подтвердило наличие 22 описанных ранее в научной литературе видов хромосомных перестроек. Обнаружены и редкие хромосомные аномалии: транслокация 1(1 ;3) и инверсия шу(3).

4. Использование критериев оценки прогноза показало, что острый лимфобластный лейкоз в целом имеет менее благоприятное течение, чем острый миелобластный лейкоз. Наличие цитогенетической ремиссии статистически достоверно вело к увеличению медианы общей выживаемости и безрецидивного течения заболевания (1=2,93 при р<0,05).

5. Доказано, что при острых лейкозах уровень функциональной активности рибосомных генов статистически достоверно ниже (Х=17,70 усл. ед.) по сравнению с популяцией (Х=19,83 усл. ед.) за счет ядрышкообразующих районов акроцентрических хромосом группы О, что может рассматриваться как предрасполагающий фактор развития патологического процесса.

6. Больные острым миело- и лимфобластным лейкозом в различных группах выживаемости характеризуются прямой зависимостью между исходным уровнем функциональной активности рибосомных генов и уровнем выживаемости пациентов.

7. Уровень спонтанного мутагенеза у больных острым лейкозом (Х=3,87%) существенно превышает уровень в общей популяции (Х=0,97%), что указывает на генетическую нестабильность геномов больных и свидетельствует о неблагоприятном экзогенном воздействии среды. Повышению уровня хромосомных аберраций у больных способствуют курсы полихимиотерапии (Х=4,62%), что связано, в первую очередь, со специфическим мутагенным воздействием химиотерапевтических препаратов. Преобладание аберраций хроматидного типа (64,3%) указывает на преимущественное влияние химических факторов на процесс формирования мутаций.

8. Проведенный линейный дискриминантный анализ позволил выделить 6 наиболее значимых в отношении прогноза течения заболевания клинико-лабораторных и цитогенетических признаков и на их основе получить уравнение регрессии, позволяющее с вероятностью 83% осуществлять прогнозирование течения острого лейкоза.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время проблема разработки и выбора адекватной терапии острых лейкозов, повышения уровня выживаемости и качества жизни больных является одной из наиболее актуальных в современной гематологии. Постоянно появляются и совершенствуются новые высокотехнологичные методы диагностики этой группы заболеваний, в связи с чем открытыми остаются вопросы интерпретации полученных в ходе обследования пациентов данных в отношении прогноза течения заболевания. Распределение больных ОЛ по группам риска позволяет наиболее адекватно подбирать протоколы терапии, сопроводительную терапию. Прогностические факторы (или факторы благоприятного и неблагоприятного прогноза) могут включать возраст, пол, исходный соматический статус пациента, клинические, морфологические, цитогенетические, иммунологические характеристики лейкемических клеток.

Не вызывает сомнения постулат о том, что в основе патогенеза острого лейкоза лежит поломка в генетическом материале пораженной вследствие воздействия каких-либо этиологических факторов клетки, которая является прародительницей патологического клона. В связи с этим исследование состояния хромосомного аппарата клеток при ОЛ является неотъемлемой частью всестороннего обследования пациентов.

Настоящее исследование является первой работой по комплексной оценке цитогенетических показателей при острых лейкозах и определению их прогностического значения. Ее научная ценность определяется целью и задачами исследования.

Первая часть исследования посвящена изучению клинических особенностей течения острых лейкозов. В ходе комплексного анализа социально-биологических и клинико-лабораторных показателей среди больных острым лейкозом была показана значительная гетерогенность данной группы заболеваний.

Среди лабораторно-инструментальных исследований изучались 42 показателя, среди которых наиболее значимыми оказались уровень гемоглобина, число лейкоцитов, тромбоцитов и бластных клеток в периферической крови и в костном мозге, уровень ЛДГ, бластоз костного мозга, наличие гепатоспленомегалии (по данным УЗИ). Полученные данные и их анализ были необходимы в работе не только для получения базовых фенотипических характеристик больных, но и для выявления взаимосвязей с цитогенетическими эффектами при ОЛ.

В ходе изучения цитогенетических показателей при ОЛ, в первую очередь, производили стандартное цитогенетическое исследование клеток костного мозга и периферической крови больных ОЛ с использованием методов дифференциального окрашивания хромосом (О-ЬапсШ^). Результаты кариотипирования отражены в главе 4.

В ходе исследования были определены более 20 разнообразных хромосомных аберраций, играющих важную роль в патогенезе и прогрессировании острых лейкозов. Хотя и не было обнаружено новых неслучайных хромосомных перестроек, были выявлены несколько редких изменений кариотипа.

Изменения со стороны хромосомного аппарата в клетках костного мозга были выявлены у 63,92% пациентов, в клетках периферической крови - у 32,99% пациентов. При анализе корреляций между уровнем бластемии и наличием изменений со стороны хромосомного аппарата клеток периферической крови показано, что выявление хромосомных аберраций в клетках периферической крови наиболее вероятно при наличии в лейкоформуле более 49% бластных клеток, что важно для предотвращения проведения заведомо неудачных исследований.

Посредством анализа методом Каплан-Майер для части выявленных хромосомных аномалий показано прогностическое значение в развитии заболевания. Обращает на себя внимание тот факт, что анализ выживаемости показал отличие прогностического значения схожих хромосомных перестроек в группах острого миело- и лимфобластного лейкоза, что подтверждает различия в патогенезе ОЛ с поражением клеток разных линий кроветворения.

Необходимо также отметить, что важным прогностическим признаком, влиявшим на общую выживаемость и длительность безрецидивного течения, явилось наступление или отсутствие цитогенетической ремиссии у больных после индукционной терапии, что подтверждает необходимость проведения цитогенетического исследования клеток костного мозга больных О Л в динамике для определения прогноза и дальнейшей тактики лечения.

После стандартного цитогенетического исследования нами проводилось изучение активности рибосомных генов, как отражение деятельности белоксинтезирующего аппарата клеток, и уровня спонтанного мутагенеза, как показателя генетической нестабильности клеток при ОЛ. Результаты представлены в главе 5 настоящей работы.

В ходе исследования активности рибосомных генов при ОЛ впервые была показана прямая зависимость между исходным уровнем активности рибосомных генов и уровнем выживаемости пациентов, страдающих острым лейкозом: чем выше исходная активность РГ, тем выше показатели общей выживаемости пациентов.

Изучение уровня спонтанного мутагенеза в группе больных ОЛ выявило повышение уровня спонтанного мутагенеза у больных острым лейкозом как до, так и после лечения, что свидетельствует о генетической нестабильности пораженных клеток. Преобладание аберраций хроматидного типа свидетельствует в пользу преимущественного влияния химических факторов на процесс формирования мутаций у данной группы больных. Оценка прогностического значения исходного уровня спонтанного мутагенеза показала обратную зависимость между данным показателем и общей выживаемостью: наибольший уровень спонтанного мутагенеза наблюдался в группе больных, умерших в ходе индукционной терапии или до начала лечения.

Исходя из полученных данных комплексного цитогенетического обследования больных ОЛ, с использованием дискриминантного анализа был разработан алгоритм предварительной оценки прогноза течения заболевания на основании результатов общепринятых лабораторных исследований (гемограммы, миелограммы) и цитогенетических показателей (суммарной активности рибосомных генов и уровня спонтанного мутагенеза).

Практическое значение результатов цитогенетического исследования клеток костного мозга и периферической крови больных ОЛ для врачей-гематологов определяется возможностью стратификации больных по степени риска развития рецидива, резистентности к терапии, прогнозу общей выживаемости. Разработанная схема достаточно проста и легко применима на практике, она позволит врачам-гематологам уточнять предварительный прогноз и своевременно корригировать тактику проводимой терапии.

По результатам проведенного исследования разработанные методы оценки прогноза течения острых лейкозов были внедрены в работу гематологического отделения Курской областной клинической больницы, областной медико-генетической консультации, генетической лаборатории кафедры биологии, медицинской генетики и экологии КГМУ.

В ходе нашего исследования подтверждена ведущая роль генетических нарушений в патогенезе и прогрессировании ОЛ, показано прогностическое значение изученных цитогенетических показателей. Впервые представлен алгоритм предварительной оценки прогноза течения ОЛ на основании оценки клинико-лабораторных и цитогенетических показателей. Таким образом, включение комплексного цитогенетического исследования в план обследования пациентов, страдающих острым лейкозом, до начала лечения и в динамике является необходимым для оценки прогноза и выбора тактики терапии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Закурдаева, Кристина Александровна, Москва

1. Абдулкадыров, K.M. Гематология: новейший справочник / Под общ. ред. K.M. Абдулкадырова. -М.: Эксмо; СПб.: Сова, 2004. - 928 с.

2. Абрамов, М.Г. Гематологический атлас / М.Г. Абрамов. М.: Медицина,1985.-344 с.

3. Айала, Ф. Современная генетика / Ф. Айала, Дж. Кайгер. Т. 1. - М., 1987. - 296 е.; Т. 2. - М., 1988. - 368 с.

4. Активация транскрипции рибосомных генов при цитомегаловирусной инфекции фибробластов эмбриона человека in vitro / О.О. Жарская, A.C. Барсукова, A.A. Меджидова и др. // Цитология. 2003. - Т. 45, №7. - С. 690-701.

5. Активность ядрышкообразующих районов нормальных и лейкозных клеток костного мозга человека / H.H. Мамаев, С.Е. Мамаева, И.Л. Либуркина и др. // Цитология. 1984. - Т. 26, № 1. - С. 46-51.

6. Белохвостов, A.C. Онкомаркеры: молекулярно-генетические, иммунохимические, биохимические анализы: Пособие для врачей. / A.C. Белохвостов, А.Г. Румянцев. М.: МАКС Пресс, 2003. - 92 с.

7. Биологический энциклопедический словарь. М.: Сов. энциклопедия,1986.

8. Бифенотипический вариант острого лейкоза: клинико-иммунологические сопоставления / H.H. Мамаев, Е.В. Кондакова, Т.Л. Гиндина и др. // Вестн. гематол. 2007. - Т. 3, №1. - С. 24-29.

9. Ю.Болгова, JI. С. Особенности ядрышкового аппарата лимфоидных клеток лимфатических узлов в зависимости от возраста человека / Л.С. Болгова, Т.Н. Туганова, И.С. Танасийчук // Украинский медицинский журнал. -2004. -№6(44). С. 95-100.

10. Болгова, Л.С. Ддрышковые организаторы и процессе малигнизации бронхиального эпителия / Л.С. Болгова, В.И. Лобода, Т.Н. Туганова // Цитология и генетика. 1998. - Т.32, №1. - С. 79-82.

11. Боровиков, В.П. STATISTICA. Статистический анализ и обработка данных в среде Windows / В.П. Боровиков, И.П. Боровиков. М: «Филин», 1997. - 608 с.

12. Бочков, Н.П. Генетика человека / Н.П. Бочков. М., 1973. - 448с.

13. Бочков, Н.П. Клиническая генетика: учебник / Н.П. Бочков. 3-е изд., исп. и доп. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2004. - 480 е.: ил.

14. Бродский, В.Я. Возможность цитофотометрии ядрышковых белков. Перспективы исследований состояния ядрышкового аппарата / В.Я. Бродский, Т.Л. Маршак, М.Ш. Аврущенко, P.E. Дунгенова // Цитология. 1991. -Т.ЗЗ, №8. - С.65-73.

15. Бучинская, Л.Г. Изучение структурно-функциональных особенностей ядрышка при гиперпластических процессах и раке эндометрия: автореф. дис. . канд. биол. наук / Л.Г. Бучинская; Ин-т проблем онкологии и радиологии. Киев, 1989. - 17 с.

16. Бушуева, О.Ю. Функциональная активность рибосомных генов и ее связь с особенностями клинического проявления и течения миомы матки: автореф. дис. . канд. мед. наук / О.Ю. Бушуева. — М., — 2005. — 32 с.

17. Вейко, H.H. Особенности организации метилированных копий рибосомных генов в ядрах лимфоцитов человека / H.H. Вейко, H.A. Ляпунова, Д.М. Спитковский // Цитология. 2000. - Т. 42, №3. - С. 271.

18. Волкова, М.А. Клиническая онкогематология: Руководство для врачей / Под ред. М.А. Волковой. -М.: Медицина, 2001. С. 92-115.

19. Воробьев, А.И. Руководство по гематологии 1-3 тт. с приложениями / Под ред. А.И. Воробьева. 4-е изд. - М.: НЬЮДИАМЕД, 2007. - 1275 с. с ил.

20. Ворсанова, С.Г. Медицинская цитогенетика (учебное пособие) / С.Г. Ворсанова, Ю.Б. Юров, В.Н. Чернышов. М.: ИД МЕДПРАКТИКА-М, 2006.-С. 148-159.

21. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. -М.: Практика, 1999. -459 с.

22. Гольдбер, Е.Д. Методы культуры ткани в гематологии / Е.Д. Гольдбер. Томск, 1992.

23. Грабовская, И.Л. Изучение характера серебрения и ассоциативной способности акроцентрических хромосом нормальных и лейкозных клеток человека / И.Л. Грабовская, С.Е. Мамаева, H.H. Мамаев // Цитология. 1986. -№28(3). - С. 350-359.

24. Грин, Н. Биология: пер. с англ. / Н. Грин, X. Стаут, Д. Тейлор. В 3-х тт. - М.: Мир, 1996. - 465 с.

25. Два случая острого лейкоза с редкой неслучайной транслокацией (12;17)(pl3;q21) / Т.Л. Гиндина, H.H. Мамаев, Э.А. Глуховская и др. // Гематол. и трансфузиол. Т. 54, 2009. - № 2. - С. 40-44.

26. Дифференциально-диагностическое и прогностическое значение активности области ядрышковых организаторов при неходжкинскихзлокачественных лимфомах / И.А. Букаева, Н.Т. Райхлин, H.A. Пробатова и др. // Клинич. лаб. диагностика. 1997. - №10. - С. 37-38.

27. Домрачева, Е.В. Достижения и перспективы гематологической цитогенетики (по материалам кариологической лаборатории ГНЦ РАМН) / Е.В. Домрачева, Е.А. Асеева // Гематол. и трансфузиол. — 2001.-Т. 46, №3.-С. 14-18.

28. Домрачева, Е.В. Индуцированные лейкозы, их связь с воздействием радиации / Е.В. Домрачева // Радиац. биология. Радиоэкология. 2002. -Т. 42, №6.-С. 715-719.

29. Домрачева, Е.В. Хромосомные нарушения при гемобластозах / Е.В. Домрачева // Врач. 2001. - №10. - С. 13-15.

30. Дополнительные аномалии кариотипа при остром миелобластном лейкозе с транслокацией t(8; 21) / Е.В. Флейшман, О.И. Сокова, A.B. Попа и др. // Гематол. и трансфузиол. Т. 48, 2003. - № 2. - С. 10-13.

31. Дрейпер, Н. Прикладной регрессионный анализ. Кн. 2: Пер. с англ / Н. Дрейпер, Г.-М. Смит. -М.: Финансы и статистика, 1987. -351 с.

32. Жимулев, И.Ф. Общая и молекулярная генетика / И.Ф. Жимулев. -Новосибирск: Изд-во Новосибирского ун-та: Сиб. универ. изд-во, 2002. -459 с.

33. Зацепина, О.В. Трехмерная организация и транскрипция РГ в ядрышке / О.В. Зацепина // Цитология. 1997. - №1. - С. 60-61.

34. Изменения экспрессии химерного гена AML1-ETO и прогноз острого миелобластного лейкоза с хромосомной транслокацией t(8;21) / Е.В. Флейшман, О.И. Сокова, И.С. Косорукова и др. // Гематол. и трансфузиол. 2004. - Т. 49, № 1. - С. 3-10.

35. Исследование полиморфизма в пределах кластера генов рРНК человека / Б. В. Скрябин, В. М. Гиндилис, Н. С. Куприянова // Генетика. — 1989. -№7

36. Кассирский, И.А. Клиническая гематология / И.А. Кассирский, Г.А. Алексеев. -М.: Медгиз, 1955.-456 с.

37. Качественная и количественная ОТ-ПЦР в мониторинге минимальной остаточной болезни при остром миелобластном лейкозе с транслокацией t(8;21) / E.B. Флейшман, И.С. Косорукова, О.И. Сокова и др. // Гематол. и трансфузиол. 2006. - Т. 51, № 1. - С. 3-12.

38. Ковалева, Л.Г. Острые лейкозы / Л.Г. Ковалева. М.: Медицина, 1990.

39. Коленкова, Г.В. Маркеры острого лейкоза в диагностике и прогнозе заболевания у детей / Г.В. Коленкова // Гематол. и трансфузиол. 2002. -Т. 47, №2.-С. 28-35.

40. Количественная характеристика гемопоэза у больных множественной миеломой по данным серебрения ядрышек / H.H. Мамаев, Т.Л.

41. Гиндина, И.А. Скороход и др. // Гематол. и трансфузиол. — 2002. Т. 47, № 4. - С. 24-28.

42. Колчанова, И.О. Функциональная активность рибосомных генов и ее модифицирующее влияние на особенности клинического проявления, течение и эффекты лечения язвенной болезни: дис. . канд. мед. наук. / И.О. Колчанова. М., 2005. - 167 с.

43. Лакин, Г. Ф. Биометрия: учеб. пособие для биолог, специально-стей вузов / Г. Ф. Лакин. — 4-е изд., перераб. и доп. — М .: Высш. Школа, 1990.-352 с.

44. Луговская, С.А. Гематологический атлас / С.А. Луговская, М.Е. Почтарь. -М., 1998. -212 с.

45. Ляпунова, H.A. Рибосомные гены в геноме человека: вклад в генетическую индивидуальность и фенотипическое проявление дозы гена / H.A. Ляпунова, H.A. Еголина, Т.Г. Цветкова // Вестн. Рос. АМН. -2000.-№5.-С. 19-23

46. Ляпунова, H.A. Ядрышкообразующие районы хромосом и рибосомные гены в геноме человека: от научных поисков к практике / H.A. Ляпунова // Современные методы диагностики наследственных болезней. М. - 2001. - С. 12-22.

47. Мамаев, H.H. Структура и функция ядрышкообразующих районов хромосом: молекулярные, цитологические и клинические аспекты / H.H. Мамаев, С.Е. Мамаева // Цитология. 1992. - Т.34, №10. - С. 3-25.

48. Мамаев, H.H. Структурная организация и экспрессия рибосомных генов в физиологических и патологических условиях / H.H. Мамаев // Цитология. 1997. -№1. - С.80.

49. Маршак, T.JI. Транскрипционная активность ядрышек и содержание в них ар-гентофильных белков / Т. JI. Маршак, Р. Е. Дунгенова, В. Я. Бродский // Цитология.- 1993. Т. 35, № 10. - С. 83-84.

50. Минимальные клинические рекомендации Европейского Общества Медицинской Онкологии (ESMO) / ред. С.А. Тюляндин, Н.И. Перевозчикова, Д.А.Носов. М.: Издат. группа РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН, 2004. - 146 с.

51. Минимальные клинические рекомендации Европейского Общества Медицинской Онкологии (ESMO) / ред. С.А. Тюляндин, Н.И. Перевозчикова, Д.А.Носов. М.: Издат. группа РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН, 2007. - 112 с.

52. Мониторинг минимальной резидуальной болезни при остром миелоидном лейкозе с транслокацией t(8;21) (q22;q22) / Ю.А. Батурина, A.B. Попа, О.И. Сокова и др. // Гематол. и трансфузиол. 2002. - Т. 47, № 1. — С. 10-14.

53. Мониторинг минимальной резидуальной болезни при остром промиелоцитарном лейкозе / Е.В. Флейшман, И.С. Косорукова, Ю.А. Батурина и др. // Гематол. и трансфузиол. 2004. - Т. 49, № 5. - С. 3-9.

54. Новик, A.A. Генетические транслокации в онкогематологии / A.A. Новик, Т.А. Камилова, В.Н. Цыган // Вопросы онкологии. 2002. -Т.48, №6. - С. 629-638.

55. О значении цитогенетических исследований в процессе лечения острого миелобластного лейкоза / С.И. Моисеев, И.С. Мартынкевич, C.B. Грицаев и др. // Гематол. и трансфузиол. 1996. - Т. 41, №1. - С. 41-43.

56. Ольшанская, Ю.В. Хромосомные перестройки при гемобластозах, сопровождающихся гиперэозинофилией / Ю.В. Ольшанская, A.B. Захарова, Е.В. Домрачева // Гематол. и трансфузиол. — 2005. — Т. 50, № 4. С. 42-47.

57. Ольшанская, Ю.В. Хромосомные перестройки при миелодиспластическом синдроме / Ю.В. Ольшанская, Е.В. Домрачева, А.И. Удовиченко // Терапевт, арх. 2005. - Т. 77, №7. - С. 27-33.

58. Ольшанская, Ю.В. Хромосомные перестройки при острых лейкозах: Справочное пособие / Ю.В. Ольшанская, Е.В. Домрачева. М.: МЕДпресс-информ, 2006. - 112 с.

59. Острые лимфобластные лейкозы с высокогипер диплоидными кариотипами / Т.Д. Гиндина, H.H. Мамаев, Е.В. Кондакова и др. // Вестн. гематол. 2007. - Т. 3, №4. - С. 18-23.

60. Острые лимфобластные лейкозы с перестройками генов BCR-ABL / E.H. Паровичникова, В.Г. Савченко, В.Г. Исаев и др. // Терапевт, арх. -2005.-Т. 77, №7.-С. 11-16.

61. Острый мегакариобластный лейкоз у детей / И.Н. Серебрякова, H.H. Тупицын, A.B. Попа и др. // Гематол. и трансфузиол. 2008. - Т. 53, № 6.-С. 7-12.

62. Острый промиелоцитарный лейкоз с транслокацией t(15; 17) и частичной трисомией 17q, успешно леченного комбинацией ATRA сантрациклинами / E.B. Кондакова, Т.Д. Гиндина, H.A. Гильнич и др. // Гематол. и трансфузиол. 2004. - Т. 49, № 2. - С. 46-48.

63. Острый промиелоцитарный лейкоз: проблемы диагностики и возможности современной терапии / О.Ю. Баранова, М.А. Френкель, М.А. Волкова, H.H. Тупицын // Гематол. и трансфузиол. Т. 48, 2003. -№4.-С. 3-11.

64. Первичные острые миелоидные лейкозы с миелодисплазией: клинико-лабораторные особенности и прогноз / О.Ю. Баранова, М.А. Волкова, М.А. Френкель и др. // Гематол. и трансфузиол. 2005. - Т. 50, № 4. -С. 10-21.

65. Поддубная, И.В. Клиническая онкогематология / И.В. Поддубная. М.: Медицина, 2001.

66. Полиморфизм хромосом у человека / под ред. A.A. Прокофьевой-Бельговской, А.Ф. Захарова. -М.,1981. -256 с.

67. Прокофьева-Бельговская, A.A. Основы цитогенетики человека / A.A. Прокофьева-Бельговская. -М.: Медицина, 1969.

68. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О.Ю. Реброва. М.: МедиаСфера, 2003. - 312с.

69. Редкая неслучайная хромосомная транслокация t(6;ll) при остром лейкозе / Е.В. Флейшман, О.И. Сокова, О.П. Кириченко и др. // Гематол. и трансфузииол. 2001. - Т. 46, №5. — С. 9-11.

70. Рибосомные гены в геноме человека: вклад в генетическую индивидуальность и фенотипическое проявление дозы гена / H.A. Ляпунова, H.A. Еголина, Т.Г. Цветкова и др. // Вестник РАМН. 2000. -№ 5. - С.19-23.

71. Романова, А.Ф. Клиническая гематология / Под ред. А.Ф. Романовой. -Киев: Медицина, 2006.

72. Сабанеева, Е.В. Специфичность окрашивания ядрышковых организаторов азотнокислым серебром / Е.В. Сабанеева // Цитология. -1989.-Т. 31, №1.-С. 5-14.

73. Сборник протоколов и алгоритмов химиотерапии и сопроводительного лечения лейкозов, миелодисплазий и аплазий кроветворения / Коллектив авторов. // Гематологический Научный Центр РАМН. — М., 2008.-484 с.

74. Сергеев, А.Г. Диагностическое и прогностическое значение генетических аномалий опухолевых клеток при лейкозах онкогематологии / А.Г. Сергеев, P.A. Иванова, Л.Г. Фечина // Гематол. и трансфузиол. 2000. - Т. 45, № 1. - С. 28-35.

75. Сергеев, А.Г. Опыт использования полимеразной цепной реакции для выявления хромосомных аберраций в детской онкогематологии / А.Г. Сергеев, P.A. Иванов, Л.Г. Фечина // Гематол. и трансфузиол. 1999. -Т. 44, № 2. - С. 3-7.

76. Сингер, М. Гены и геномы / М. Сингер, П. Берг. Т. 2. - М.: Мир 1998.

77. Случай острого лимфобластного лейкоза с транслокацией t (9; 22) и несколькими дополнительными перестройками / А.Н. Богданов, О.В. Саржевский, С.Н. Колюбаева и др. // Гематол. и трансфузиол. 2008. -Т. 53, №3.-С. 35-38.

78. Смирнов, В.Г. Цитогенетика / В.Г. Смирнов. М.: Высш. школа, 1991. -247 с.

79. Современные методы хромосомного анализа в клинико-цитогенетических исследованиях/ Т.А. Залетаева, Н.П. Кулешов, Д.В. Залетаев, О.Б. Барцева; Рос. мед. акад. последил, образования. М.: Медицина, 1994. - 68с.

80. Современные методы цитогенетической диагностики / В.М. Погорелов, Е.В. Домрачева, Е.А. Асеева, Г.И. Козинец // Клинич. лаб. диагностика. -1997.-№12.-С. 16-19.

81. Созанский, O.A. Функционирование ядрышкообразующих районов хромосом культивируемых лимфоцитов крови человека / O.A. Созанский // Бюл. Эксперим. Биологии и медицины. — 1983. — №95(4). -С. 71-74.

82. Созанский, О.В. Структурная стабильность ЯОР хромосом человека / О.В. Созанский, Т.В. Коновалова, О.М. Яворская и др. // Хромосомы человека в норме и патологии. — 1989. — С. 26-33.

83. Статистическая оценка особенностей распространения и динамика заболеваемости злокачественными новообразованиями: метод, рекомендации. М., 1990. - 30 с.

84. Три случая лейкемии с экспрессией химерного BCR-ABL-гена в одной семье / В.И. Петухов, Д.К. Бондаре, И.Л. Строжа и др. // Гематол. и трансфузиол. 1999. - Т. 44, № 3. - С. 46-47.

85. Татосян, А.Г. Онкогены. Канцерогенез / А.Г. Татосян. М.: Медицина, 2004.

86. Транскрипционная активность ядрышек и содержание в них аргентофильных белков / Т.Л. Маршак, P.E. Дунгенова, В.Я. Бродский // Цитология.- 1993. -Т. 35, №10. -С. 83-84.

87. Транслокация t(8;21) при остром миелоидном лейкозе / Ю.А. Батурина и др. // Соврем, онкология. 2001. - Т.З, №1. - С. 9-12.

88. Трехмерная организация ядрышек доброкачественных и злокачественных опухолевых клеток различных органов человека / П.В. Челидзе, Т.В. Тория, А.Г. Агладзе и др. // Цитология 1991. - Т. 33, № 5.-С. 10-17.

89. Трубников, В.И. Многомерный статистический анализ антропометрических показателей. Сообщ. 1. Генетическая корреляция между признаками / В.И. Трубников, В.М. Гиндилис // Вопр. антропологии. Вып. 64. - М.: Медицина, 1980. - С. 94-106.

90. Туганова, Т.Н. Цитогенетические показатели в дифференциальной диагностике пролимфоцитарных лимфом и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний / Т.Н. Туганова, Л.С. Болгова, О.И. Алексеенко // Онкология. 2003. - №1. - С. 14-18.

91. Увеличение количества активных рибосомных генов, выявляемых с помощью Ag-окрашивания ядрышкообразующих районов метафазных хромосом, при старении культивируемых фибробластов человека / Т. Г. Цветкова и др. // Цитология. 1997. - № 1. - С. 116-117.

92. Урбах, В.Ю. Статистический анализ в биохимических и медицинских исследованиях / В.Ю. Урбах. М.: Медицина, 1975. - 296 с.

93. Феномен Ag-негативности ядрышковых организаторов клеток костного мозга и крови у детей с острым лимфобластным лейкозом / O.A. Иконникова, Р.В. Ленская, О.В. Зацепина и др. // Эксперим. Онкология. 1990. - №12(4). - С. 40-43.

94. Фогель, Ф. Генетика человека: пер. с англ. / Ф. Фогель, А. Мотуски. В 3-х т.-М.: Мир, 1989.

95. Фролов, А.К. Частота ассоциаций акроцентрических хромосом в лимфоцитах крови человека при разных способах ее оценки / А.К. Фролов // Генетика. 1985. - №7. - С. 1229-1235.

96. Фролов, А.К. Частота ассоциаций акроцентрических хромосом и их окрашивание серебром в лимфоцитах крови человека при иммунных реакциях. / А.К. Фролов // Цитология. 1981. - Т.23, №29. - С. 1047.

97. Хромосомная транслокация t (10; 11) при остром нелимф областном лейкозе /Е.В. Флейшман, О.И. Сокова, О.П. Кириченко и др. // Гематол. и трансфузиол. 2000. - Т. 45, № 5. - С. 7-10.

98. Характеристика некоторых цитогенетических показателей при неходжкинских лимфомах / A.A. Новик, В.Я. Мельниченко, С.Н. Колюбаева и др. // Гематол. и трансфузиол. 2000. - Т. 45, № 3. - С. 5052.

99. Характеристика окрашенных серебром ядрышек в бластных элементах разного диаметра больных острым лейкозом / H.H. Мамаев, У. Мартинес, Е.О. Морозов, H.A. Иванова // Цитология. 1988. - Т. 30, №12.-С. 1478-1482.

100. Хромосомы человека. Атлас / А.Ф. Захаров, В.А. Бенюш, Н.П. Кулешов и др. М.: Медицина, 1982. - 261 с.

101. Цитогенетические нарушения при остром лейкозе у детей / В.А. Овсепян, О.М. Целоусова, Н.В. Рябов и др. // Гематол. и трансфузиол. -1999. Т. 44, № 6. - С. 23-24.

102. Цитогенетический анализ лейкозов в Чернобыльском регионе / Е.В. Домрачева, Е.А. Асеева, Г.И. Милютина и др. // Проблемы гематологии. 2000. - №4. - С. 16-23.

103. Шуравина, E.H. Мониторинг минимальной резидуальной болезни у больных с острым промелоцитарным лейкозом / E.H. Шуравина // Терапевт, арх. 2006. - №7. - С. 25-31.

104. Элементы структурной организации транскрибируемой области рибосомного повтора (рДНК) в лимфоцитах периферической крови человека / H.H. Вейко, H.A. Ляпунова, Н.В. Косякова, Д.М. Спитковский // Молекуляр. биология. 2001. - Т.35,№1. - С. 52-64.

105. Ядрышкообразующие районы (ЯОР) хромосом человека: опыт количественного цитологического и молекулярного анализа / H.A. Ляпунова, H.A. Еголина, H.H. Вейко и др. // Биологич. мембраны. -2001. Т. 18, №3. - С. 189-199.

106. Ядрышкообразующие районы хромосом и рибосомные гены: от научных поисков к практике / H.A. Ляпунова, H.H. Вейко, Т.Г.

107. Цветкова и др. // Современные методы диагностики наследственных болезней. Сб. материалов. 2001. - С. 12-22.

108. A case of lineage switch from acute lymphoblastic leukemia to ac ute myeloid leukemia / H.J. Chung, C.J. Park, S. Jang et al. // Korean J. Lab. Med.-2007.-27(2).-P. 102-105.

109. A nonclassical translocation involving 17ql2 (retinoic acid receptor a) in acute promyelocytic leukemia (APML) with a tipical features / S J. Corey, J. Locker, D.R. Oliver et al. // Leukemia. 1994. - Vol. 8. - P. 1350-1353.

110. Abnormalities of short arm of chromosome 12 in acute nonlymphocytic leukemia and dysmyelopoietic syndrome / R. Berger, A. Bernheim, M. Le Coniat et al. // Cancer Genet.Cytogenet. 1986. - Vol. 19. - P. 281-289.

111. Acute lymphoblastic leukemia accompanied by chromosomal abnormality of translocation (12; 17) / S.I. Asahara, K. Saigo, N. Hasuike et al. // Haematologia (Budap.). -2001 -31(3). P. 209-213.

112. Acute myeloid leukemia with t(6;9)(p23;q34): association with myelodysplasia, basophilia, and initial CD34 negative immunophenotype / R. Alsabeh, R.K. Brynes, M.L. Slovak, D.A. Arber. // Am. J. Clin. Pathol. -1997.-N 107.-P. 430-437.

113. Acute myelomonocytic leukemia with abnormal eosinophils and inv(16) or t(16; 16) has a favorable prognosis / R.A. Larson, S.F. Williams, M.M. Le Beau et al. // Blood. 1986. -N 68. - P. 1242-1249.

114. Additional chromosomal abnormalities in patients with acute promyelocytic leukaemia (APL) do not confer poor prognosis: results of APL 93 trial / S. De Botton, S. Chevret, M. Sanz et al. // Br. J. Haematol. 2000. - N 111. -P. 801-806.

115. All-trans-retinoic acid in acute promyelocytic leukemia / M.S. Tallman, J.W. Andersen, C.A. Schiffer et al. N. Engl. J. Med. - 1997. - N 337. - P. 10211028.

116. Alsabeh, R. Acute myeloid leukemia with t(6;9) (p23;q34): association with myelodysplasia, basophilia, and initial CD34 negative immunophenotype / R. Alsabeh, R.K. Brynes, M.L. Slovak // Am. J. Clin. Pathol. 1997. - Vol. 107.-P. 430-437.

117. An investigation of the t(12;21) rearrangement in children with B-precursor acute lymphoblastic leukaemia using cytogenetic and molecular methods / H. Kempski, J. Chalker, J. Chessells et al. // Br. J. Haematol. 1999. - Vol. 105.-P. 684-689.

118. Arthur, D.C. Partial deletion of the long arm of chromosome 16 and bone marrow eosinophilia in acute nonlymphocytic leukemia: A new association / D.C. Arthur, C.D. Bloomfield//Blood. 1983. - Vol. 62. - P. 994-998.

119. Atlas of Genetics and Cytogenetics in Oncology and Haematology: http://www.atlasgeneticsoncology.org.

120. Bain, B.J. The morphological, immunophenotypic, cytogenetic, molecular genetic (MIC-M) classification of acute leukaemia / B.J. Bain // Experim. Oncol.-2001.-N23.-P. 11-16.

121. Bateman, E. Regulation of Eukaryotic Ribosomal RNA Transcription by RNA Polymerase Modification / E. Bateman, M.R. Paule // Cell. 1986. -Vol. 45.-P. 445-450.

122. Berger, R. Acute lymphoblastic leukemia and chromosome 21 / R. Berger // Cancer Genet. Cytogenet. 1997. - Vol. 94. - P. 8-12.

123. Bishop, J. M. Cancer: the rise of the genetic paradigm / J.M. Bishop // Genes and Development. 1995.-N9.-P. 1309-1315.

124. Bishop, J.M. Scientific American molecular oncology / J.M. Bishop, R.A. Weinberg. New York: Scientific American, Inc, 1996.

125. Bohlander, S.K. ETV6: a versatile player in leukemogenesis / S.K. Bohlander//Semin. Cancer Biol.-2005.- 15(3).-P. 162-174.

126. Cancer Statistics, 2000 / R.T. Greenlee, T. Murray, S. Bolden, P.A. Wingo // CA Cancer J. Clin. 2000. - Vol. 50. - P. 7-33.

127. Chromosomal abnormalities identify high-risk and low-risk patients with acute lymphoblastic leukemia / C.D. Bloomfield, A.L. Goldman, G. Alimena et al. // Blood. 1986. - Vol.67. - P. 415-420.

128. Chromosome and other prognostic factors in acute lymphoblastic leukemia: a long-term follow-up / L.M. Seeker-Walker, J.M. Chessels, E.I. Stewart et al. // Br. J. Haematol. 1989. - Vol. 72. - P. 336-342.

129. Chromosome preparation of leukocytes cultured from human peripheral blood / P.S. Moorhead, P.C. Nowell, W.J. Mellman et al. // Exp. Cell. Res. -1960.

130. Clinical and molecular characterization of a rare syndrome of acute promyelocytic leukemia associated with translocation (11; 17) / J.D. Licht, C. Chomienne, A. Goy et al. //Blood. 1995. -Vol. 85.-P. 1083-1088.

131. Clinical significance of cytogenetic abnormalities in adult acute lymphoblastic leukemia / S. Faded, H.M. Kantarjian, M. Talpaz et al. // Blood. 1998. - Vol. 91. - P. 3995-4019.

132. Clinical significance of Y chromosome loss in hematologic disease / A. Wiktor, B.A. Rybicki, Z.S. Piao et al. // Genes Chromosomes Cancer. — 2000.-Vol. 27.-P. 11-15.

133. Consolidation therapy by cytogenetic risk in adults with acute myeloid leukemia (AML) 60 years in first complete remission (CR): results of CALGB 9621 abstract. / J.E. Kolitz, S.L. George, R.K. Dodge et al. // Blood.-2001.-N98.-P. 688a.

134. Cytogenetic adds independent prognostic information in adults with acute lymphoblastic leukemia on MRC trial UKALL XA / L.M. Seeker-Walker, H.G. Prentice, J. Durrant et al. // Br. J. Haematol. 1997. - Vol. 96. - P. 601-610.

135. Cytogenetic and clinical correlates in AML patients with abnormalities of chromosome 16 / P. Marlton, M. Keating, H. Kantarjian et al. // Leukemia. -1995.-N9.-P. 965-971.

136. Cytogenetic findings in acute biphenotypic leukemia / F. Carbonell, J. Swansbury, T. Min et al. // Leukemia. 1996. - Vol. 10. - P. 1283-1287.

137. Cytogenetics and their prognostic value in de novo acute myeloid leukaemia: a report on 283 cases / P. Fenaux, C. Preudhomme, J.L. Lai et al. // Br. J. Haematol. 1989. -N 73. - P. 61-67.

138. Cytogenetics for detection of minimal residual disease in acute myeloblasts leukemia / E.J. Freireich, A. Cork, S.A. Stass et al. // Leukemia. 1992. -Vol. 6.-P. 500-506.

139. Derenzini, M. Importance of interfase nucleolar organize regions in tumor pathology / M. Derenzini, D. Trere // Virchows Arch. 1991. - Vol. 61. - P. 1-8.

140. Diagnosis of chronic myeloid and acute lymphocytic leukemias / B.S. Kawasaki, S.S. Clark, M. Coyne et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1988. -Vol. 85.-P. 5698-5702.

141. De Pinho, R. A. The age of cancer / R. A. De Pinho // Nature. 2000. - Vol. 408. - P. 248-254.

142. Dicentric (9; 12) in acute lymphocytic leukemia and other hematological malignancies: report from a dic(9;12) study group / H. Behrendt, C. Charrin, B. Gibbons et al. // Leukemia. 1995. - Vol.9. - P. 102-106.

143. Disruption of ETV6 in intron 2 results in upregulatory and insertional events in childhood acute lymphoblastic leukaemia / G.R. Jalali, Q. An, ZJ. Konn et al. // Leukemia. 2008. - 22(1). - P. 114-123.

144. Distribution of human chromosomes on the metaphase plate using banding techniques / B. Sele, P. Jalbent, B. Van Cutsem et al. // Human Genetics. -1977.-Vol. 39, N 1. -P. 39.

145. Fearon, E.R. The molecular biology of cancer / E.R. Fearon, K.R. Cho. — New York: Churchill Livingstone, 1996. P. 405-438.

146. Field, D. Nucleolar silver staining patterns related to cell cycle phase and cell generation of PHA-stimulated lymphocytes / D. Field // Cytobios. — 1984.-Vol. 41.-P. 23-33.

147. Fifty-one patients with acute myeloid leukemia and translocation t(8;21)(q22;q22): an additional deletion in 9q is an adverse prognostic factor / G. Schoch, D. Haase, T. Haferlach et al. // Leukemia. 1996. - Vol. 10. -P. 1288-1295.

148. First MIC Cooperative Study Group. Morphologic, immunologic, and cytogenetic (MIC) working classification of the acute lymphoblastic leukemias // Cancer Genet. Cytogenet. — 1986.-Vol. 23.-P. 189-197.

149. Frequency of prolonged remission duration after high-dose cytarabine intensification in acute myeloid leukemia varies by cytogenetic subtype /

150. C.D. Bloomfield, D. Lawrence, J.C. Byrd et al. Cancer Res. - 1-998. - N 58.-P. 4173-4179.

151. Frequency of satellite association of human chromosomes in correlated with amount of Ag-staining of the nucleolus organizer regions / D.A. Miller, R. Tantravahi, G. Dev, O.J. Miller // Human Genetics. 1977. - Vol. 29, N 5. -P. 490.

152. Galperin-Lemaitre, H. Comparison of acrocentric associations in male and female cells. Relationship to the active nucleolar organizers / H. Galperin-Lemaitre, L. Hens, B. Sele // Hum. Genet. 1980. - Vol. 54, N 3. - P. 349353.

153. Gelehrter, Thomas D. Principles of medical genetics / Thomas D. Gelehrter, Francis S. Collins, David Ginsburg. 2nd ed. - Williams & Wilkins. - 1998. -P. 245-272.

154. Genetic predisposition to cancer / R.A. Eeles, B.A. Ponder, D.F. Easton, A. Horwich (eds). Chapman & Hall, London, 1996.

155. Growth characteristics in vitro of myeloid leukaemic cells with t(6;9) / P.E. Hollings, J. Cochrane, J.A. Bowen et al. // Leuk. Lymphoma. 1995. - N 17.-P. 281-288.

156. Haematopoetic and lymphoid cell culture / Margaret J. Dallman, Jonathan R. Lamb (Handbooks in practical aimal cell biology) Cambridge University Press. - 2000.

157. Harget, Ph. Multipele primaire tumoren. Studies over 159 patients en literature overricht / Ph. Harget, J. M. Debois // Tijdschr. Genesk. — 1989. -Vol. 45.-P. 1129-1130.

158. Heim, S. Cancer Cytogenetics. Chromosomal and Molecular Genetic Aberrations of Tumor Cells / S. Heim, F. Mitelman. — NY: Wiley-Liss Inc., 1995.

159. Hens, L. Relationship between measure chromosomes distribution parameters and Ag-staining of the nucleolus organizer regions / L. Hens, M. Kirsh-Volders, F.E. Arright, C. Susunne // Human Genetics. 1980. - Vol. 51, N3.-P. 349.

160. Howell, W.M. Controlled silver- staining of nucleolus organizer regions with a protective colloidal developer: a 1-step method / W.M. Howell, D.A. Black // Experientia. 1980. - V.36. - P. 1014-1015.

161. Hungerford, D.A. Leukocytes cultured from small inocula of the blood and the preparation of metaphase chromosomes by treatment of the hypotonic KC1 / D.A. Hungerford // Stain. Techn. 1965. - Vol. 40. - P. 333-338.

162. Incidence of chromosome abnormalities and clinical significance of karyotype in de novo acute myeloid leukemia / R. Stasi, G. Del Poeta, M. Masi et al. // Cancer Genet. Cytogenet. 1993. - N 67. - P. 28-34.

163. Is trisomy 5 a distinct cytogenetic subgroup in acute lymphoblastic leukemia? / R.L. Harris, C.J. Harrison, M. Martineau et al. // Cancer Genet. Cytogenet. 2004. - Vol. 148.-P. 159-162.

164. ISCN: An International System Human Cytogenetic Nomenclature (2005) / Shaffer L. G., ed. Basel: Niels Tommerup, 2005.

165. Jackson, A.L. The mutation rate and cancer / A.L. Jackson, L.A. Loeb // Genetics.-1998.-Vol. 148.-P. 1483-1490.

166. Johansson, B. Secondary chromosomal abnormalities in acute leukemias / B. Johansson, F. Mertens, F. Mitelman // Leukemia. 1994. - Vol. 8. — P. 9539-9562.

167. Karyotype at diagnosis, subseqent leukemic transformation and survival in myelodysplasia syndrome / Musilowa J, Michalowa K et al. // Leukemia Res. 1995. - N 19. - P. 303-308.

168. Karyotype in acute myeloblasts leukemia: prognostic significance in a prospective study assessing bone marrow transplantation in first remission / A. Ferrant, C. Doyen, A. Delannoy et al. // Bone Marrow Transplant. 1995. -N 15.-P. 685-690.

169. Karyotypic analysis predicts outcome of preremission and postremission therapy in adult acute myeloid leukemia: a Southwest Oncology Group /

170. Eastern Cooperative Oncology Group study / M.L. Slovak, K.J. Kopecky, P.A. Cassileth et al. // Blood. 2000. - N 96. - P. 4075-4083.

171. Larson, D.E. Control points in eukaryotic ribosome biogenesis / D.E. Larson, P. Zahradka, B.H. Sells // Biochem. Cell Biol. 1991. - Vol. 69. - P. 5-22.

172. Lewin, B. Genes / B. Lewin. Oxford: Oxford Univ. Press, 1997. - 1260 p.

173. Lowe, S. Silent DNA Architecture Helps Block Cancer Cell Growth; Researchers Uncover New Tumor Suppression Mechanism / S. Lowe // J. Cell.-2003.-P. 06-13.

174. Lukens, J.N. Wintrobe's Clinical Hematology. 9th ed. - Philadelphia -London: Lea, Febiger, 1993.-P. 1873-1891.

175. MacPhee, D.G. Mismatch repair, somatic mutations, and the origins of cancer / D.G. MacPhee // Cancer Res. 1995. - Vol. 55, N 23. - P. 54825492.

176. McKay, R.D.G. The mechanism of G- and C-banding in mammalian metaphase chromosomes / R.D.G. McKay // Chromosoma. 1973. - Vol. 44.-P. 1-14.

177. Mitelman, F. Catalog of Chromosome Aberrations in Cancer / Eds. Johansson B., Mertens F. John Wiley and Sons, Inc., 1998.

178. Mitelman, F., ed. ISCN 1995: An International System for Human Cytogenetic Nomenclature 1995 / F. Mitelman. Basel, Switzerland: S Karger, 1995.

179. Molecular cytogenetic characterization of breakpoints in 19 patients with hematologic malignancies and 12p unbalanced translocations / M.D. Odero, K. Carlson, I. Lahortiga et al. // Cancer Genet. Cytogenet. 2003. - 142(2). -P. 115-119.

180. Molecular cytogenetic delineation of deletions and translocations involving chromosome band 7q22 in myeloid leukemias / K. Fischer, S. Frohling, S.W. Scherer et al. // Blood. 1997. - Vol. 89. - P. 2036-2041.

181. Mrozek, K. Clinical importance of cytogenetics in acute myeloid leukaemia / K. Mrozek, K. Heinonen, C.D. Bloomfield // Best Pract. Res. Clin. Haematol.-2001.-N 14.-P. 19-47.

182. Mueller, Robert F. Emery's Elements of medical genetics / Robert F. Mueller, Ian D. Young. 11th ed. - Churchill Livingstone, 2001. - P. 189208.

183. On behalf of the EU Cocerned action llq23 Workshop. Hematological malignancies with a deletion of 11 q23 : cytogenetic and clinical aspects / J. Harbott, M. Manchini, C. Verellen-Dumoulin et al. // Leukemia. 1998. -Vol. 12.-P. 823-827.

184. On behalf of the EU Cocerned action llq23 Workshop. The t(10;l I)(pl2;q23) translocation in acute leukemia: a cytogenetic and clinical study of 20 patients / D.M. Lillington, B.D. Young, R. Berger et al. // Leukemia. 1998. - Vol. 12. - P. 801-804.

185. On behalf of the EU Concerned action llq23 Workshop. The t(6;l I)(q27;q23) translocation in acute leukemia: a laboratory and clinical study of 30 cases / M. Martineau, R. Berger, D.M. Lillington et al.// Leukemia. 1998. - Vol. 12. - P. 788-791.

186. Pagano, J. S. Epstcin-Barr virus: the first humantumor virus and its role in cancer proc ASSOC / J. S. Pagano // Am. Phys. 1999. - Vol. 111, N6. - P. 573-580.

187. Partial deletions of long arm of chromosome 6: biologic and clinical implications in adult acute lymphoblastic leukemia / M. Mancini, M.L. Vegna, G.L. Castoldi et al. // Leukemia. 2002. - Vol. 16. - P. 2055-2061.

188. Patients with de novo acute myeloid leukaemia and complex karyotype aberrations show a poor prognosis despite intensive treatment: a study of 90 patients / C. Schoch, T. Haferlach, D. Haase et al. // Br. J. Haematol. 2001; -N 112. -P. 118-126.

189. Philadelphia chromosome-positive acute myeloid leukemia: cytoimmunologic and cytogenetic features / A. Cuneo, A. Ferrant, J.L. Michaux et al.// Haematologica. 1996. - Vol. 81. - P. 423-427.

190. Pierre, R. Cytogenetic studies in preleukemia / R. Pierre // Blood Cells. -1975.-Nl.-P. 163-170.

191. Pretreatment cytogenetics predicts initial induction success and overall survival in adult patients with de novo acute myeloid leukemia: results from CALGB 8461 abstract. / J.C. Byrd, K. Mrozek, R. Dodge et al. // Blood. -2001.-N98.-P. 457a.

192. Prognostic factors of patients with acute myeloid leukemia (AML) allografted in first complete remission: analysis of the EORTC-GIMEMA AML 8A trial / S. Keating, S. Suciu, T. de Witte et al. // Bone Marrow Transplant. 1996. -N 17. - P. 993-1001.

193. Prognostic impact of cytogenetic abnormalities in patients with de novo acute nonlymphocytic leukemia / C.A. Schiffer, E.J. Lee, T. Tomiyasu et al. // Blood. 1989. - N 73. - P. 263-270.

194. Prognostic impact of karyotypic findings in childhood acute lymphoblastic leukemia: a Nordic series comparing two treatment periods / E. Forestier, B.

195. Johansson, G. Gustafsson et al. // Br. J. Haematol. 2000. - Vol. 110. - P. 147-153.

196. Prognostic implication of additional cytogenetic aberrations in de novo acute myeloid leukemia (AML) with t(15;17), t(8;21) or inv(16)/t(16;16) abstract. / P.H. Wiernik, H. Kim, H. Gundacker et al. // Blood. 2001. - N 98. - P. 457a.

197. Prognostic significance of karyotype in de novo adult acute myeloid leukemia / N. Dastugue, C. Payen, M. Lafage-Pochitaloff et al. // Leukemia. 1995.-N 9.-P. 1491-1498.

198. Proposal for the recognition of minimally differentiated acute myeloid leukaemia (AML-M0) / J.M. Bennett, D. Catovsky, M.T. Daniel et al. // Br. J. Haematol. 1991. -N 78. - P. 325-329.

199. Proposals for the classification of the acute leukaemias. French-American-British (FAB) co-operative group. Br J Haematol / J.M. Bennett, D. Catovsky, M.T. Daniel et al. // 1976. N 33. - P. 451-458.

200. Proposed revised criteria for the classification of acute myeloid leukemia: a report of the French-American-British Cooperative Group / J.M. Bennett, D. Catovsky, M.T. Daniel et al. // Ann. Intern. Med. 1985. - N 103. - P. 620625.

201. Propp, S. Philadelphia chromosome in acute lymphocytic leukemia / S. Propp, F.A. Lizzi // Blood. 1970. - Vol. 36. - P. 353-360.

202. Prospective karyotype analysis in adult acute lymphoblastic leukemia: the cancer and leukemia Group B experience / M. Wetzler, R.K. Dodge, K. Mrozek et al. // Blood. 1999. - Vol. 93. - P. 3983-3993.

203. Rearrangement of ALL1 (MLL) in acute myeloid leukemia with normal cytogenetics / M.A. Caligiuri, M.P. Strout, D. Lawrence et al. // Cancer Res. -1998.-N58.-P. 55-59.

204. Report of the National Cancer Institute-sponsored workshop on definitions of diagnosis and response in acute myeloid leukemia / B.D. Cheson, P.A. Cassileth, D.R. Head et al. // J. Clin. Oncol. 1990. -N 8. -P. 813-819.

205. De Vita, V. Cancer principles and practice of oncology / V. de Vita, S. Heeman, S.A. Rosenberg. 5th ed. - Philadelphia - N.Y., 1997. - P. 22932321.

206. Screening for MLL tandem duplication in 387 unselected patients with AML identify a prognostically unfavorable subset of AML / S. Schnittger, U. Kinkelin, C. Schoch et al. // Leukemia. 2000. -N 14. - P. 796-804.

207. Seeker-Walker, L.M. General Report on the European Union Concerted Action Workshop on llq23. London, UK, May 1997 / L.M. Seeker-Walker // Leukemia. 1998. - Vol. 12. - P. 776-778.

208. Six-year follow-up of the clinical significance of karyotype in acute lymphoblastic leukemia / C.D. Bloomfield, L.M. Seeker-Walker, A.I. Goldman et al. // Cancer Genet. Cytogenet. 1989. - Vol. 40. - P. 171-185.

209. Sylvester, I.E. The human ribosomal RNA genes: structure and organization of the complete repeating unit / I.E. Sylvester, D.A. Whiteman, R. Podolsky // Hum. Genet. 1986. - Vol. 73, N 3. - P. 193-198.

210. T(12;17) (pl3;q21) in early pre-B acute lymphoid leukemia / R.A. Krance, S.C. Raimondi, R. Dubowy et al. // Leukemia. 1992. - 6(4). -P. 251-255.

211. The clinical significance of karyotype in acute myelogenous leukemia / D.C. Arthur, R. Berger, H.M. Golomb et al. // Cancer Genet. Cytogenet. 1989. -N40.-P. 203-216.

212. The importance of diagnostic cytogenetics on outcome in AML: Analysis of 1,612 patients entered into the MRC AML 10 trial / D. Grimwade, H. Walker, F. Oliver et al. // Blood. 1998. - Vol. 92. - P. 2322-2333.

213. The mechanism of C- and G-banding of chromosomes / D.E. Comings, E. Avelino, T.A. Okada, H.E. Wyandt // Exptl. Cell Res. 1973. - Vol. 77. - P. 538-564.

214. The significance of trisomy 8 in de novo acute myeloid leukaemia: the accompanying chromosome aberrations determine the prognosis / C. Schoch, D. Haase, C. Fonatsch et al. // Br. J. Haematol. 1997. - N 99. - P. 605-611.

215. The t(l;22)(pl3;ql3) is nonrandom and restricted to infants with acute megakaryoblastic leukemia: A Pediatric Oncology Group study / A. Carroll, C. Civin, N. Scheider et al. // Blood. 1991. - Vol. 78. - P. 748-752.

216. Theml, H. Color Atlas of Hematology / H. Theml, D. Heinz, H. Torsten. -Stuttgart-New York: Thieme, 2004. 198 p.

217. Translocation 4; 11 in acute lymphoblastic leukemia: clinical characteristics and prognostic significance / D.C. Arthur, C.D. Bloomfield, L.L. Lindquist et al. // Blood. 1982. - Vol. 59. - P. 96-99.

218. Trisomy 13: a new recurring chromosome abnormality in acute leukemia / H. Dohner, D.C. Arthur, E.D. Ball et al. // Blood. 1990. - N 76. - P. 16141621.

219. United Kingdom Cancer Cytogenetics Group. Primary, single, autosomal trisomies associated with haematological disoders // Leukemia Res. 1992. -Vol. 16.-P. 841-851.

220. Walker, A. M. Reporting results of epidemiologic studies / A.M. Walker // Am. J. Public. Health. 1996. - Vol. 76. - P. 556-558.

221. World Health Organization Classification of Tumours. Pathology and Genetics of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues /E.S. Jaffe, N.L. Harris, H. Stein, J.W. Vardiman, eds. Lyon, France: IARC Press, 2001.