Особенности развития и иммуногенез куриного эмбриона под влиянием амброзийного антигена

Трунова, Анастасия Петровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Особенности развития и иммуногенез куриного эмбриона под влиянием амброзийного антигена
ВАК РФ 03.00.30, Биология развития, эмбриология

Автореферат диссертации по теме "Особенности развития и иммуногенез куриного эмбриона под влиянием амброзийного антигена"

На правах рукописи

ТРУНОВА Анастасия Петровна

ОСОБЕННОСТИ РАЗВИТИЯ И ИММУНОГЕНЕЗ КУРИНОГО ЭМБРИОНА ПОД ВЛИЯНИЕМ АМБРОЗИЙНОГО АНТИГЕНА

03 00 30 - биология развития, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биоло! ических наук

Ставрополь - 2008

003163420

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Ставропольский государственный университет» и Южном научном центре Российской академии наук

Научный руководитель: Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор ветеринарных наук, профессор Тимченко Людмила Дмитриевна

доктор биологических наук, профессор Квочко Андрей Николаевич, доктор биологических наук, доцент Родзаевская Клена Борисовна

ГОУ ВПО «Ставропольская государственная медицинская академия».

Защита диссертации состоится 20 февраля 2008 г в 15-00 часов на заседании диссертационного совета ДМ 212 256 09 в Ставропольском государственном университете по адресу 355009, г Ставрополь, ул Пушкина, 1, корп 2, комн 506

С диссертацией можно познакомиться в библиотеке Ставропольского государственного университета

/5' ¿ш£с

Автореферат разослан У 6 ОС^Ссф^ _ 2008 г

Ученый секретарь |

диссертационного совета (/' Ржепаковский И В

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Наиболее адекватной моделью, позволяющей в динамике изучить у позвоночных закономерности преобразований на протяжении эмбриогенеза без ущерба для материнского организма, являются эмбрионы птиц Их особенностью является доступность и управляемость в процессе эксперимента, возможность получения и фиксирования результатов практически с помощью всех известных методов: эмбриологических, гистологических, цитологических, генетических, биохимических, гематологических, микрохирургических и многий других Работа с куриным эмбрионом (КЭ), как объектом промышленного инкубирования, сопровождается неизбежными потерями, но они не противоречат принципам биоэтики и, в отличие от работы с эмбрионами млекопитающих и человека, может быть реализована на любом этапе онтогенеза, являющемся предметом интереса исследователя

В вирусологии и микробиологии куриный эмбрион используется для определения патогенности и степени вирулентности микроорганизма, в иммунологии - для изучения толерантности, аллореактивности, онтогенеза В- и Т-лимфоцитов и пр (Вирусология Методы, 1988, Ветеринарная вирусология, 1991, Ветеринарная вирусология, 1999, Косик Н В, Ржепаков-ский И В , Булгакова И В, 2003)

В биотехнологии и медицине куриный зародыш применяют в качестве основной сырьевой субстанции для производства биологически активных препаратов, иммунотропных и косметических средств (Тимченко Л Д, Косик Н В, 2004) Это обусловливает необходимость изучения особенностей реагирования, в том числе иммунного ответа организма КЭ на многочисленные естественные и искусственно созданные внешние факторы, окружающие птицу в процессе жизни и влияющие на яйцо во время инкубации.

Одним из малоизученных и интересных аспектов развития куриного эмбриона является изучение особенностей его реакции на многочисленные аллергены, вероятность контакта с которыми в процессе жизни у птицы велика Имеется скудная информация (Болотников И А , 1982, Болотников И А , Михкеева В С , Олейников Е К, 1983), свидетельствующая о специфике реагирования взрослой птицы на общеизвестные аллергены отсутствие аллергической реакции по классическому типу, отсутствие ^Е, признаки гиперчувствительности замедленного типа и др.

Однако сведений об исследованиях, связанных с изучением особенностей развития, в том числе иммунокомпетентных органов КЭ под действием известных аллергенов, в доступной литературе найти не удалось Этот

факт приобретает особое значение в связи с имеющимися сообщениями о возможности накопления продуктов эндогенного происхождения в желточном мешке, вещества которого используется эмбрионом в качестве источника питания (Отрыганьев Г К , Бессарабов Б Ф , Исаев Ю В , 1981) К таким эндогенным веществам можно отнести наиболее агрессивные аллергены растительного происхождения, в частности, повсеместно распространенную на территории Южного федерального округа амброзию, с которыми курица может контактировать в процессе жизни

В связи с вышеизложенным, изучение особенностей развития и иммуногенеза эмбриона в процессе экспериментального воздействия амброзийного аллергена представляется крайне актуальным

Цель исследования Изучить влияние аллергена пыльцевого амброзии полыннолистной на показатели развития и иммуногенез куриного зародыша при его экспериментальном введении на разных этапах эмбриогенеза Задачи исследования:

1) изучить особенности реакции куриного эмбриона на разных этапах его развития при введении амброзийного аллергена с учетом результатов общего осмотра, динамики роста и массы тела,

2) исследовать уровень иммуноглобулинов у куриных эмбрионов в. норме и под воздействием амброзийного аллергена,

3) изучить в сравнительном аспекте морфофункциональные показатели крови куриного эмбриона в норме и под воздействием амброзийного аллергена,

4) исследовать цитохимические особенности лимфоцитов и нейтрофи-лов куриного зародыша в разные периоды инкубации в норме и под воздействием амброзийного аллергена,

5) изучить влияние амброзийного аллергена на процесс гистогенеза иммунных органов эмбрионов в отдельные периоды развития

Научная новизна. Впервые изучены особенности роста, развития и состояния иммунных органов КЭ под влиянием амброзийного аллергена при его экспериментальном введении в различные периоды инкубации

Впервые изучены закономерности ашюметрическош, конформного, гомономного типов роста у эмбрионов в норме и под воздействием аллергена

Получены новые данные по влиянию амброзийного аллергена на разных этапах развития на гистогенез иммунных органов куриного эмбриона

Впервые изучены в различные сроки развития КЭ гематологические, иммунологические, цитохимические показатели лимфоцитов и нейтрофилов крови при однократном введении амброзийного аллергена в желточный мешок Установленавзаимосвязь этих показателей с особенностямиразвития

Установлены наиболее критические сроки развития куриного эмбриона по отношению к влиянию аллергена

Получены новые данные, дополняющие гистологию и эмбриологию, биологию развития и размножения, иммунологию, сведениями об особенностях эмбрионального развития птицы и иммунной реактивности зародышей под влиянием аллергена

Теоретическая и практическая значимость. Проведенные исследования позволили выявить закономерности развития куриных зародышей в отдельные периоды эмбриогенеза в искусственно смоделированных неблагоприятных условиях и выявить роль аллергического фактора в нарушении развития

Результаты исследования позволяют судить о качестве эмбриона в целом и его иммунной системе на отдельных этапах онтогенеза, в том числе о вероятности сенсибилизации и специфике ответных реакций организма, что может представлять интерес для биотехнологов при целенаправленном отборе эмбриональных тканей, для разработки биологически активных и * лекарствеш!ых препаратов

Полученные данные дополняют и расширяют общеизвестные представления об эмбриогенезе птиц и могут быть использованы в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторных занятий по биологии развития и размножения, гистологии и эмбриологии

Апробация работы. Основные положения работы доложены на научной конференции «Университетская наука - региону» (Ставрополь, 2006, 2007), Международной научно-практической конференции (Ставрополь, 2006), в рамках Российской школы-конференции молодых ученых (Пущи-но, 2006), на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные аспекты жизнедеятельности человека на Севере» (Архангельск, 2006), на Третьей ежегодной конференции студентов и аспирантов базовых кафедр ЮНЦ РАН (Ростов-на-Дону, 2007), в рамках 16-й Всероссийской научно-методической конференции «Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных» (Ставрополь, 2007) Положения, выносимые на защиту.

1 Аллерген пыльцевой амброзии полыннолистной оказывает негативное влияние на морфометрические, гематологические, гистологические показатели роста и развития и иммуногенез куриного эмбриона в зависимости от сроков введения в желточный мешок

2 Специфичность влияния аллергена на организм куриного эмбриона в разные сроки инкубации различна и проявляется гипоксией, гипотро-

фией, нарушением тканевой дифференцировки, а также изменением иммунной реактивности

Реализация результатов исследований. Работа проведена в соответствии с тематическим планом НИР Южного научного центра РАН по теме № 00-05-06 от 2005 г «Разработка концепций комплексной защиты здоровья человека и животных при иммунопатологиях», выполняемой совместно со Ставропольским государственным университетом Результаты исследований включены в научные отчеты ЮНЦ РАН и СГУ за 2005-2007 гг и используются в деятельности сектора иммуномониторинга и иммуно-коррекции научно-исследовательской лаборатории биологически активных веществ и новых материалов ЮНЦ РАН, в проблемной научно-исследовательской лаборатории экспериментальной иммуноморфологии, иммунопатологии и иммунобиотехнологии СГУ при разработке новых биологически активных препаратов, в том числе аллерготропинов

По заявке, основанной на результатах исследований, выигран грант на участие в работе Российской школы-конференции молодых ученых «Экоток-сикология современные биоаналитические системы, методы и технологии» Результаты используются учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторных занятии по биологии развития и размножения, гистологии и эмбриологии, иммунологии в Ставропольском государственном университете, Ставропольском филиале Московского государственного гуманитарного университета им М А Шолохова, Кубанском государственном аграрном университета, Кабардино-Балкарской государственной сельскохозяйственной академии, Башкирском государственном аграрном университете и в научной работе Ставропольского научно-исследовательского института животноводства и кормопроизводства

Публикации результатов исследования. По теме диссертационного исследования опубликовано 13 работ, в том числе две из них в периодических изданиях из перечня ведущих рецензируемых научных журналов, утвержденных ВАК Министерства образования и науки России и рекомендованных для публикации основных научных результатов диссертации на соискание искомой ученой степени

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов собственных исследований, выводов, практических предложений, списка литературы Список литературы включает 238 источников, в том числе 50 -иностранных авторов Работа изложена на 181 странице компьютерного текста, иллюстрирована 47 фотографиями, 19 таблицами, 7 диаграммами

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Экспериментальная работа выполнена на кафедре общей биологии и на базе проблемной научно-исследовательской лаборатории экспериментальной иммуноморфологии, иммунопатологии и иммунобиотехнологии Ставропольского государственного университета и сектора иммуномони-торинга и иммунокоррекции лаборатории биологически активных веществ и новых материалов ЮНЦ РАН в течение 2004-2007 гг

Материалом для исследования послужили куриные эмбрионы на разных стадиях развития, которые разделили по принципу аналогов на контрольную и опытную группы Каждая группа была разделена на 5 подгрупп по 50 эмбрионов с целью изучения заданных параметров эмбриона на разных стадиях развития

Инкубация осуществлялась в вентилируемом инкубаторе «ИПХ-10И» при температуре 38,5±2°С и относительной влажности 80%.

Для изучения влияния аллергена пыльцевого амброзии полыннолист-ной на куриный эмбрион осуществлялось однократное введение антигена производства ФГУП НПО «МИКРОГЕН» в дозе 0,03 мл и концентрацией 1 100000 в желточный мешок на 10,12,14, 16, 18-е сутки инкубации Введение аллергена осуществлялось в стерильных условиях Вскрытие яиц производилось с периодичностью в 20-22 часа после введения антигена

Измерение массы провизорных органов, тела эмбрионов и иммунных органов проводили с помощью электронных весов «ВЛТЭ-150» с точностью до 0,01 мг

Для определения длины тела эмбрионов использовали циркуль и линейку с миллиметровым делением с точностью до 0,5 мм

Вычисления абсолютного и относительного прироста массы и длины тела эмбрионов, а также относительных показателей массы и коэффициента массы органов экспериментальных групп на разных стадиях развития проводили по формуле, предложенной И И Шмальгаузеном (1984)

Гемоглобин - гематиновым методом Сали с помощью гемометра ГС-3 Число эритроцитов и лейкоцитов подсчитывали в сетке камеры Горяева Лейкограмму в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимза, определяли четырехполосным методом с подсчетом не менее 200 клеток Общий белок определяли рефрактометрическим методом на приборе УРЛ-1

Активность внутриклеточных лизосомапьных катионных белков (КБ) определяли по В Е Пигаревскому (Сафронова В М, Локтев Н.А, Руднев С М , 1994) Активность кислой фосфаггазы (КФ (К.Ф 3 1.3.2)) определяли по А СоЫЬегц, Т Вагка (1965) Выявление щелочной фосфатазы (ЩФ (К.Ф 3 I 3 1)) - с

помощью методики J1 Кэплоу (Сафронова В M, Локтев H А, Руцнев С M, 1994) Сукцинагдегидрогеназу (СДГ (К Ф 1 3 99 1)) определяли по РП Нарциссову (1965) Оценку цитохимических реакций и вычисление среднего цитохимического показателя (СЦП) проводили по формуле, предложенной L Kaplow (1963) Исследование титров антител сыворотки крови проводили при помощи набора реагентов «ИФА-Бест-стрип» ЗАО «Вектор-Бест» методом ИФА

Гистологические исследования проводили по общепринятой методике с использованием замораживающего устройства «ТЕХНОМ ОМТ-0228» с последующей окраской гематоксилин-эозином Микроморфометрию проводили с помощью стандартного окуляр-микрометра МОВ-1-16 (Автандилов ГГ, 1990) Результаты экспериментов подвергали вариационно-статистической обработке с использованием программы Primer of Biostatistics (Version 4 03)

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Выживаемость, общее состояние и морфометрические показатели эмбрионов

При определении уровня выживаемости КЭ опытной группы на разных стадиях развития по сравнению с контролем (рис 1) установлено, что после однократного введения аллергена наибольшее количество погибших эмбрионов приходится на 11-е сутки, а в контрольной группе - на 19-е сутки развития Увеличение числа погибших эмбрионов на 11-е сутки в опытной группе, вероятно, связано с несовершенством защитной реакции зародыша в ответ на введение аллергена После однократного введения антигена наименьший уровень смертности приходится на 19-е сутки, что, очевидно, обусловлено кратковременным стимулирующим влиянием антигена на морфофункци-ональные показатели зародыша на фоне достаточно полноценно сформированного комплекса защитно-приспособительных механизмов

Изучение морфометрических показателей провизорных органов и белка яйца свидетельствует, что введение аллергена не вызывает выраженных изменений в процессе атрофии амниона и аплантоиса и в динамике уменьшения количества белка в яйце

На 11, 13, 15-е сутки после введения аллергена на поверхности желточного мешка увеличивается число сосудов среднего и крупного калибра В контроле преимущественно встречались сосуды мелкого калибра, непосредственно принимающие участие в переносе питательных веществ Снижение интенсивности формирования сосудов мелкого калибра у КЭ опытной группы на 11, 13, 15-е сутки, возможно, повлияло на процесс использования эмбрионом желтка как источника пластического и энергетического материала, так как масса желточного мешка больше чем в контроле

о --

11 11 15 17 19

сутки

" контроль -опыт

Рис 1 Кривая смертности эмбрионов экспериментальных групп в различные сутки инкубации

В опытной группе на 11,13,15 и 17-е сутки соответственно у 28,32,39 и 30% эмбрионов отмечены признаки анемии, а у 5,9,12 и 7% - венозный застой На 19-е сутки изменение цвета кожных покровов отмечено у отдельных эмбрионов опытной группы

При однократном введении аллергена куриным эмбрионам на разных стадиях развития в желточный мешок происходит снижение абсолютных величин массы и длины тела эмбрионов по сравнению с контрольной группой (табл 1)

Таблица 1

Среднегрупповые значения массы и размеров тела эмбрионов опытной и контрольной групп

Сроки введе- Сроки учета Число КЭ Масса, г Длина тела,

ния антигена, показателей, в группах см

сутки инкубации сутки инкубации

- И контроль $1=50) 3,34±0,32 3,22±0,45

10 опыт $1=50) 2,56±0,21*** 3,15±0,46

- 13 контроль $1=50) 6,53±0,20 5,44±0,32

12 опыт(п=50) 5,73±0,19** 4,40^=0,25***

- 15 контроль (гН50) 12,04±0,23 7,84±0,32

14 опыт(п=50) 11,34±0,25*** 6,41±0,26*

- 17 контроль (п=50) 18,95±0,23 8,30±0,36

16 опыт(п=50) 17,82±0,41*** 8,01±0,45

- 19 контроль (п=50) 25,62±0,38 10,18±0,48

18 опыт(п=50) 25,27±0,43 10,05±0,34

*(Р<0,0005), **(Р<0,005), ** *(Р<0,05) - в сравнении с контрольной группой

Снижение темпов использования желтка, уменьшение массы и линейных размеров эмбрионов после однократного введения амброзийного аллергена в желточный мешок свидетельствуют о наличии признаков гипотрофии

Абсолютный и относительный прирост массы тела эмбрионов в опытной группе на всех изучаемых стадиях меньше чем в контроле Максимальные различия приходятся соответственно на 15 (1,24±0,13 г) и 11-е сутки эмбриогенеза (34,78±2,54%) Минимальные недостоверные различия между значениями приходятся на 19-е сутки Значения абсолютных и относительных скоростей изменения линейных размеров тела эмбрионов после контакта с аллергеном на 11,13, 15 и 17-е сутки меньше чем в контроле Максимальные различия приходятся на 13-е сутки (0,49±0,07 см и 10,54±1,23% соответственно). На 19-е сутки данные показатели недостоверно больше чем в контрольной группе. Изменение индекса Кетле I отображено на рисунке 2

сутки

*"~ контроль опыт

Рис 2. Изменение индекса Кетле I в разные периоды эмбриогенеза в норме и при введении аллергена

Изменения в опытной группе абсолютных и относительных скоростей увеличения массы и длины тела, индекса Кетле I по сравнению с контрольной группой свидетельствуют о непропорциональном развитии куриных зародышей, что особенно выражено на 11, 13 и 15-е сутки эмбриогенеза.

Патологоанатомические и морфометрические особенности иммунных органов

Для подтверждения пропорциональности развития, заключающегося в сохранении геометрического подобия отдельных частей тела по отношению ко всему организму, вычислялась относительная масса органа к мас-

се тела, те закономерности конформного роста Сопоставление относительной скорости увеличения массы печени и иммунных органов с периодом их развития (коэффициент массы) позволяет изучить и особенности гомономного роста

Относительная масса селезенки, тимуса и бурсы на всех изучаемых стадиях развития выше у эмбрионов опытной группы по сравнению с контролем Относительная масса печени выше на 11,17 и 19-е сутки и ниже на 13 и 15-е сутки в сравнении с контролем Данные изменения свидетельствуют о нарушении конформного роста органов, причиной которому могут быть в разной степени выраженные у отдельных эмбрионов процессы нарушения дифференцировки тканей или реактивные процессы

Коэффициент массы иммунных органов и печени после введения антигена выше на 11,13,15 и 17-е сутки по сравнению с контролем Это свидетельствует о развитии органов по гетероморфному типу, нехарактерному для нормального развития На 19-е сутки разница между значениями относительной массы и коэффициента массы органов экспериментальных групп выравнивается

Гистологическое строение печени свидетельствует о том, что на 11 и 13-е сутки развития ткань является практически интактной в ответ на однократное введение амброзийного аллергена На 15, 17 и 19-е сутки после ведения антигена отмечена периваскулярная полиморфноклеточная инфильтрация, сосудистая реакция, сопровождающаяся, иногда, набуханием, слущиванием эндотелия - признаки воспалительной реакции В эти периоды в ответ на введение антигена печень отвечает выраженными процессами замедления развития (степени дифференцировки балок, долек и меж-дольковых структур) На 15 и 17-е сутки - вакуолизация гепатоцитов, как признак самостоятельной дистрофии, или как феномен повреждения при воспалении. На 19-е сутки признаки воспаления отмечены у подавляющего большинства эмбрионов, и они выступают на первый план, в то время как нарушение процессов дифференцировки практически не отмечено

В ткани иммунных органов КЭ опытной группы формирование структурно-гистологических единиц протекает интенсивнее, чем в контрольной группе На 11-е сутки, и у некоторых эмбрионов на 13-е сутки развития, ткань иммунных органов практически интактна в ответ на введение аллергена Гистологические особенности взаимосвязаны с морфометрическими характеристиками органов в эти периоды

Площадь селезенки на 13-е сутки инкубации увеличивается преимущественно за счет увеличения площади паренхимы Строма формируется медленнее по сравнению с контролем В ткани селезенки эмбрионов под воздействием аллергена увеличивается количество кровеносных сосудов

На 17, 19-е сутки в опытной группе более интенсивно формируются тра-бекулы и строма, преимущественно вокруг сосудов, отмечено увеличение толщины стенки сосудов по сравнению с контролем соответственно на 1,6±0,19 и 3,2±0,30 мкм На 19-е сутки эмбриогенеза у некоторых эмбрионов опытной группы отмечено формирование зародышевых центров и разделение ткани на красную и белую пульпу Площадь очагов красной пульпы значительно больше, чем в контроле. Визуально отмечено повышение плотности клеточных элементов в срезе

В гистологическом строении тимуса на 13, 15, 17, 19-е сутки у КЭ после однократного введения аллергена отмечена отечность капсулы Площадь органа и долек в эти периоды больше чем в контрольной группе На 15, 17, 19-е сутки инкубации у зародышей после контакта с аллергеном возникают признаки разделения дольки на корковое и мозговое вещество Площадь коркового вещества на 17 и 19-е сутки больше мозгового по сравнению с контролем В очаговых скоплениях клеток коркового вещества преобладают лимфоциты и макрофаги, вокруг которых отмечено скопление эпителиальных клеток Введение аллергена способствует формированию у некоторых зародышей фолликулов Кларка на 17-е сутки развития На 19-е сутки в мозговой зоне тимуса отмечены единичные концентрически расположенные скопления клеток эпителиального происхождения, предположительно формирующиеся тельца Гассапя

После однократного введения аллергена в ткани бурсы на 13,15,17-е сутки развития по сравнению с контролем увеличивается количество складок и их площади Процесс формирования фолликулов идет интенсивнее по сравнению с контрольной группой Первые зачатки фолликулов по периферии складки возникают на 15-е сутки В фолликулах визуализируются базофиль-ные лимфобласты, число которых достоверно выше, чем в контрольной группе На 13 и 15-е сутки эмбриогенеза происходит разделение ткани складки на светлую и темную зоны, как и в контрольной группе Однако после контакта эмбрионам антигеном толщина темной зоны выше, чем в контрольной группе На 17,19-е сутки площадь и число фолликулов в складке превышает таковой показатель в контроле На 17-е сутки визуализируется разделение фолликула на корковое и мозговое вещество Площадь эпителиальной основы складки в опытной группе по сравнению с контролем достоверно меньше

Результаты гематологических и иммунологических показателей эмбрионов

После введения аллергена достоверно уменьшается количество эритроцитов (Р<0,05) по сравнению с контролем на 11, 13 15, 17-е сутки Наибольшая разница между значениями приходится на 13-е сутки (0,177х10|2/л) На 11, 13,

15, 17-е сутки развития у зародышей опытной группы отмечено увеличение числа гипохромных и разрушенных эритроцитов («клетки-тени») (рис. 3).

Рис. 3. «Клетки-тени» (—*■) и гипохромные эритроциты (— ■») у эмбрионов опытной группы на 17-е сутки развития. Окраска гематоксилин-эозином, хЮОО.

Количество гемоглобина в крови после введения аллергена на 11, 13, 15, 17-е сутки достоверно меньше (Р<0,05) чем в контрольной группе. Максимальная разница между значениями приходится на 15-е сутки (8,6±0,94 г/л). Количество гемоглобина в одном эритроците и цветовой показатель на 11, 13, 15, 17-е сутки меньше по сравнению с контролем. Наибольшая достоверная разница между значениями данных показателей приходится на 15-е сутки инкубации и составляет соответственно 2,15±0,23 пг и 0,07. На 19-е сутки различия между количеством эритроцитов, гемоглобина в крови, количеством гемоглобина в одном эритроците и цветовым показателем экспериментальных групп минимальны.

Для оценки состояния клеточного звена иммунитета определяли общее количество лейкоцитов и учитывали особенности лейкоцитарной формулы у КЭ опытной группы по сравнению с контрольной.

На 11, 13, 15, 17-е сутки у зародышей после контакта с аллергеном количество лейкоцитов по сравнению с контролем выше. Максимальная разница приходится на 13-е сутки (0,237х 109/л), а минимальная - на 19-е сутки развития.

В опытной группе эмбрионов на 11, 13, 15, 17, 19-е сутки происходит достоверное увеличение количества эозинофилов и моноцшвв по сравнению с контролем. На 15-е сугки в крови КЭ опы тной г руппы появились базофилы, тогда как в контроле их наличие отмечено на 17-е сутки. В лейкоцитарной формуле на 13, 15 и 17-е сутки отмечен ядерный сдвиг вправо, а на 19-е сугки-незначительный ядерный сдвиг влево при увеличении числа фагоцитов. Данные изменения свидетельствуют о развитии воспалительной и аллергоподобной реакции у зародышей в отвег на введение в желточный мешок аллергена.

Об уровне развития защитной реакции у зародышей после введения амброзийного аллергена свидетельствует изменение количества иммуноглобулинов А, М и G по сравнению с контрольной группой (табл. 2).

Количество иммуноглобулинов в крови куриных эмбрионов в норме и при введении амброзийного аллергена в различные периоды эмбриогенеза

Группы КЭ Время введения антигена, сутки инкубации Время учета показателей, сутки инкубации Имму ноглобулины

А, мг/мл М, мг/мл в, мг/мл

Конгроль (п=50) - 11 0,214±0,013 0Д50±0,01б 0,150±0,021

Опыт (п=50) 10 0,227±0,017 0,328±0,017** 0,199±0,013***

Конгроль (п=50) - 13 0,227±0,038 0,392±0,028 0,281±0,017

Опыт (ге=50) 12 0,219±0,014 0,512±0,025** 0,328±0,012***

Контроль(п=50) - 15 0,352±0,061 0,316±0,11 0,425±0,011

Опыт (п=50) 14 0,547±0,054*** 0,298±0,06 0,475±0,013*

Контроль (п=50) - 17 0,313±0,0П 0,321 ±0,022 0,529±0,010

Опыт (п=50) 16 0,281±0,008*** 0,35610,024 0,621±0,012*

Конгроль(п=50) - 19 0,408±0,07 0,361 ±0,033 0Г334±0,006

Опыт (п=50) 18 0,386±0,02б 0,340±0,017 0,483±0,007*

*Р<0,005, **Р<0,005, ***Р<0,05- в сравнении с контрольной группой

Амброзийный аллерген способствует увеличению суммарного количества ^ в опытной группе по сравнению с контрольной При этом достоверно и закономерно во все сроки развития увеличивается содержание только ^С Динамика отличий от контроля количества 1§А и 1§М незакономерна С учетом этого, а также суммарной динамики гематологических, гистологических показателей представляется возможным идентификация специфичности отмеченных воспалительных изменений, с прогнозированием и типизацией иммунопатологических процессов у эмбриона после однократного введения аллергена Это не противоречит мнению Болотникова И А, Михкеевой В С, Олейникова Е К (1983) о возможности развития у птиц аплергоподобной реакции

Установлена коррелятивная зависимость увеличения суммарного количества ^ с увеличением уровня общего белка и числа лимфоцитов на 11, 13,15, 17 и 19-е сутки развития

Для уточнения специфики защитно-компенсаторных механизмов и механизмов повреждений изучали ферментативную активность нейтрофи-лов и лимфоцитов как клеток, принимающих непосредственное участие в формировании ответной реакции организма на внедрение антигенов

Количество катионных белков (КБ), кислой (КФ) и щелочной фосфата-зы (ЩФ) в нейтрофилах и сукцинатдегидрогеназы (СДГ) в лимфоцитах на разных стадиях развития в экспериментальных группах эмбрионов отображено в таблице 3 и представлено на рисунках 4, 5, 6, 7

Количество ферментов в крови куриных эмбрионов в норме и под воздействием амброзийного антигена на различных стадиях эмбрионального развития

Число КЭ в фуппах Время введения антигена, сугки инкубации Время учетг показателей, сутки инкубации СЦП

КБ ЩФ КФ СДГ

Контроль (п=50) - 11 0,041 ±0,011 0,77±0,01 0,43±0,02 0,28±0,01

Эпыт (п=50) 10 0,013±0,008*** 0,85±0,02* 0,33±0,03 *** 0,24±0,01 ***

Кошроль (п=50) - 13 0,062±0,008 0,82±0,04 0.48±0,04 0,43±0,04

Опыт (н=50) 12 0,057±0,011 0,97±0,03 ** 051±0,02 0.30±0,02 **

Кошроль [п=50) - 15 0,92±0,036 1.26±0,02 0,54±0,05 0,58*0,02

Опыт 01=50) 14 0,75±0,041 ** 1,41±0,04 ** 0,74±0,08 0,49Щ03 ***

Котроль (п=50) - 17 0,98±0,054 1,32±0,04 0,64±0,02 0,72±0,06

Опыт (и=50) 16 0,76±0Д)48 ** 1.49±0,04 ** 0,74±0,04 *** 0,51±0,08

Контроль (11=50) - 19 1,15±0,024 1,45±0,02 0,72±0,36 1,08±0,08

Опыт (п=50) 18 1,04±0 070 1 56±0,02 ** 0,88±0,41 0,96±0,05 ***

*Р<0,005, **Р<0,005, ***Р<0,05 - в сравнении с контрольной группой

Увеличение ЩФ и КФ на 15 и 19-е сутки, снижение количества КБ под действием модельного фактора, в целом, свидетельствует об усилении фагоцитарной активности нейтрофилов и активизации воспалительной реакции под действием аллергена Снижение количества СДГ и КБ, увеличение количества эозинофилов, базофилов с одновременным повышением у КЭ с выраженными признаками воспаления в иммунных органах подтверждает развитие иммунопатологических процессов преимущественно на 17 и 19-е сутки Помимо этого, снижение количества СДГ на 11, 13, 15, и 17-е сутки эмбриогенеза подтверждает наличие гипоксии соответственно у 35,42, 55 и 32% эмбрионов опытной группы

А-

Рис. 5. Активность щелочной фосфатазы в нейтрофилах. А - 0 степень, Б — 1 степень, В - 2 степень, Г — 3 степень интенсивности реакции. .

Рис. 6. Активность кислой фосфатазы в нейтрофилах. А - 0 степень, Б - 1 степень, В - 2 степень, Г - 3 степень интенсивности реакции.

Рис. 7. Активность сукцинатдегидрогеназы в лимфоцитах. А - 0 степень, Б - 1 степень, В - 2 степень, Г — 3 степень интенсивности реакции.

Рис. 4. Активность катионных белков в нейтрофилах. О степень, Б - 1 степень, В - 2 степень, Г - 3 степень интенсивности реакции.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На основании проделанной работы можно заключить, что влияние амброзийного аллергена на развивающиеся КЭ неадекватно и принципиально различно в зависимости от срока контакта с ним Оно взаимосвязано, прежде всего, с тем, какие органы и ткани появляются в этот период онтогенеза, что и определяет особенности нарушений развития и иммунного ответа на изучаемый антиген

Изменения на 11 -е сутки неспецифичны и заключаются в гипотрофии, анемии, гипоксии, непропорциональности роста Это закономерно связано с динамикой формирования сосудистого русла желточного мешка под влиянием аллергена, то есть трофикой зародыша, и непосредственным влиянием антигена на клетки крови, что проявляется деструктивно-компенсаторными процессами усиление лейкопоэза, нарушение эритропоэза и др На 13 и 15-е сутки, кроме указанных признаков гипоксии и гипотрофии, на фоне специфических изменений гематологических и иммунологических показателей выявлены изменения тканевой дифференцировки печени и иммунных органов (при нарушении конформности и гомоном-ности), сопровождающиеся соответствующими реактивными (дистрофическими или воспалительными) процессами Именно эти периоды по большинству нарушенных по сравнению с контрольной группой показателей развития отнесли к критическим

На 17 и особенно 19-е сутки эмбриогенеза при сохранении конформности и гомономности роста у большинства эмбрионов отмечена выраженная реакция иммунной системы, заключающаяся в наличие морфофунк-циональных признаков воспаления, увеличине очагов экстрамедулярного кроветворения в печени Это подтверждено на гематологическом, цитохимическом и гистологическом уровне Специфичность изменения соотношения клеток крови, во взаимосвязи с уровнем иммуноглобулинов и цитохимическими показателями нейтрофилов и лимфоцитов у эмбрионов с отклонениями в развитии и признаками гипоксии, указывает на формирование у них иммунопатологической реакции в виде гиперчувствительности по ци-тотоксическому или иммунокомплексному типу в ответ на однократное введение в желточный мешок КЭ аллергена пыльцевого амброзии полын-нолисгной, что наиболее часто выражено на 17-е сутки развития

Полученные результаты позволяют восполнить пробел об отсутствии в доступной литературе информации об особенностях развития куриного эмбриона под действием аллергенов различного происхождения Полученные результаты дают основание считать куриный эмбрион не только доступной, но

и вполне адекватной моделью для изучения механизмов гиперчувствительности в эмбриогенезе Это позволяет рекомендовать его для использования в биотехнологии при разработке биологически активных препаратов, в том числе противоаллергического действия

ВЫВОДЫ

1 Установлено, что особенности и степень влияния амброзийного аллергена на показатели выживаемости, роста и развития при однократном введении куриному эмбриону различны в зависимости от периода онтогенеза

- период максимума эмбриональной смертности при введении аллергена смещается с 19-х суток в контроле на 11-е сутки, минимальные показатели смертности в опыте и контроле приходятся ответственно на 19 и 15-е сутки,

- при введении аллергена у КЭ на 11, 13, 15 и 17-е сутки отмечены признаки анемии соответственно у 28, 32, 39, 30%, а у 5, 9, 12, 7% - венозный застой, на 19-е сутки отличий в окраске кожных покровов не установлено,

- после контакта с аллергеном на 11, 13 и 15-е сутки соответственно у 42, 65 и 72% эмбрионов отмечено увеличение массы желточного мешка и количества сосудов среднего и крупного калибра на его поверхности, достоверных изменений массы амниона, аллантоиса и яичного белка по сравнению с контрольной группой не установлено Сосудистая реакция желточного мешка на введение аллергена имеет компенсаторно-приспособительный характер

2 Однократное введение аллергена КЭ приводит к уменьшению массы и длины тела Наибольшая разница между показателями массы отмечена на 17-е сутки (1,13±0,11 г), а длины тела - на 15-е сутки (1,4±0,20 см) Минимальные отличия между показателями массы и длины тела установлены на 19-е сутки

Изменение индекса Кетле I свидетельствует о нарушении пропорциональности развития, что выражено на 11 и 15-е сутки (различия по сравнению с контролем составляют 0,23±0,02 и 0,24±0,02 соответственно) На 17 и 19-е сутки индекс Кетле I не отличается от контроля

3 После контакта с аллергеном у зародышей на 11, 13, 15-е сутки развиваются признаки анемии достоверное уменьшение количества эритроцитов, понижение уровня гемоглобина и цветового показателя, увеличение числа разрушенных и гипохромных эритроцитов

Амброзийный аллерген во все периоды развития оказывает влияние на содержание общего количества лейкоцитов и показатели лейкоцитарной формулы, что свидетельствует о достаточном уровне иммунной реактивности

В целом, динамика гематологических показателей свидетельствует о компенсаторном лейкопоэзе и нарушении эритропоэза (преимущественно на 11 и 13-е сутки) или развитии воспалительной реакции (преимущественно на 15, 17 и 19-е сутки) в организме эмбриона

4 Изменение уровня ферментативной активности нейтрофилов и лейкоцитов в сочетании с гематологическими, иммунологическими и морфологическими показателями эмбрионов уточняет сущность механизма реактивных и патологических процессов, возникающих под влиянием ам-брозийного аллергена

Увеличение ЩФ и КФ на 15 и 19-е сутки и снижение количества КБ свидетельствует об усилении фагоцитарной активности нейтрофилов, активизации воспалительной, а в отдельных случаях иммунопатологической реакции Снижение количества СДГ и КБ, увеличение количества эозино-филов, базофилов и повышение 1§С, у КЭ с выраженными признаками воспаления в иммунных органах подтверждает развитие иммунопатологических процессов, преимущественно на 17 и 19-е сутки Снижение количества СДГ на 11, 13, 15, и 17-е сутки подтверждает наличие гипоксии соответственно у 35, 42, 55 и 32% эмбрионов опытной группы

5 В опытной группе КЭ происходит увеличение количества ^О на всех стадиях развития по сравнению с контролем Количество ^М в опыте возрастает на 11, 13 и 17-е сутки Количество ^А возрастает на 11 и 15-е сутки по сравнению с контролем На всех стадиях развития увеличение суммарного количества 1ц коррелятивно связано с уровнем общего белка и числом лимфоцитов

6 Нарушение закономерностей гомономного роста иммунных органов в опытной группе КЭ приводит к их развитию по гетероморфному типу, изменение относительной массы органов свидетельствует о нарушении конформности

Гистологически установлено, что на 11 и 13-е сутки развития все исследуемые органы эмбрионов опытной группы являются интактными На 15, 17 и 19-е сутки печень отвечает на введение антигена замед лением процессов развития, околососудистой полиморфноклеточной инфильтрацией, сосудистой реакцией, иногда набуханием, повреждением (слущиванием эндотелия), повышением проницаемости стенки венозных и артериальных сосудов

В опытной группе эмбрионов в ткани селезенки, тимуса и бурсы на 15, 17, 19-е сутки увеличивается общая площадь органов Интенсивно образуются гисто-функциональные единицы органов, что свидетельствует о созревании органов в функциональном плане

7 Изменение гематологических, морфологических, гистологических и иммунологических показателей куриных зародышей на 11, 13, 15-е сутки свидетельствует о нарушении процессов развития организма Наибольшие различия между показателями экспериментальных групп приходится на 13, 15-е сутки, что позволяет выделить их в качестве критических периодов

На 17 и 19-е сутки у эмбрионов после контакта с аллергеном происходит незначительное изменение показателей конформного и гомономного роста Гематологические, цитохимические, гистологические и иммунологические показатели свидетельствуют о развитии воспалительной реакции, которая у эмбрионов с выраженной гипоксией и отклонениями в развитии иногда принимает характер иммунопатологического процесса в виде гиперчувствительности по цитотоксическому или иммунокомплексному типу

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1 Полученные результаты по динамике морфофункциональных показателей развития куриного эмбриона под влиянием аллергена пыльцевого амброзии полыннолистной могут быть использованы в научных целях и при составлении учебных и справочных пособий по биологии развития и размножения, гистологии и эмбриологии, аллергологии

2 Сведения о критичности отдельных сроков развития зародышей птиц по отношении аллергена пыльцевого амброзии полыннолистной могут быть использованы в биотехнологии при разработке новых биологически активных препаратов, в том числе аллерготропинов, на основе эмбриональной ткани

Список работ, опубликованных по теме

1 Трунова, А П Куриный эмбрион как экспериментальный и сырьевой объект для биологии, медицины и биотехнологии / А П Трунова // Естествознание и гуманизм Сб научн работ - Томск, 2005 - Т2 -№4 - С 100

2 Трунова, А П Результаты введения амброзийного аллергена куриному эмбриону / А П Трунова // Естествознание и гуманизм Сб научн работ - Томск, 2005 - Т 2 - № 5 - С 345

3 Трунова, А П Анализ влияния 5% спиртового раствора йода, используемою в качестве дезинфицирующего раствора на рост куриного эмбриона / А П Трунова, Л Д Тимченко // Проблемы развития биологии и экологии на Северном Кавказе-Мат-лы научн конф / СГУ - Ставрополь, 2006 -С 214-216

4 Трунова, А П Методы введения аллергена куриному эмбриону / А П Трунова // ЭКО (экология, культура, образование) - Ставрополь, 2006 -Вып 19-20 -С 36-37

5 Трунова, А П Влияние амброзийного аллергоида на рост куриного эмбриона / А П Трунова, Л Д Тимченко, И В Ржепаковский // Управление функциональными системами организма Мат-лы Междунар научно-практической конф /СГАУ-Ставрополь,2006 -С 236-238

6 Бондарева, Н И Биоиндикационная роль эмбриональных и внезароды-шевых тканей экспериментальных животных и птиц в прогнозировании аллергических состояний в раннем постнатальном онтогенезе /НИ Бондарева, А П Трунова // Экотоксикология современные биоаналитические системы, методы и технологии - Пущин о-Тула ИБФМРАН,2006 -С 27-29

7 Трунова, А П Содержание иммуноглобулинов в крови плодов белых крыс и куриных эмбрионов под влиянием амброзийного антигена / АП Трунова, НИ Бондарева//Экология человека - Архангельск -2006 -Приложение4/2 -С 248-250

8 Бондарева, Н И Цитохимические показатели крови эмбрионов лабораторных животных и птиц под воздействием сенсибилизирующего фактора /НИ Бондарева, А П Трунова // Вестник Московского государственного областного университета Серия «Естественные науки» — М Изд-воМГОУ,2006 -№4 -С 19-22

9 Трунова, А П Гистометрические показатели селезенки эмбрионов кур в норме и под воздействием амброзийного антигена / А П Трунова // Третья ежегодная научная конференция студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН Тезисы докладов - Ростов-на-Дону Изд-воЮНЦРАН,2007 -С 35-36

10 Трунова, А П Развитие селезенки куриного эмбриона в норме и под воздействием амброзийного аллергена / А П Трунова, Л Д Тимченко // Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных Мат-лы Всеросс научно-практической конф -Ставрополь,2007 -С 299-301

11 Тимченко, Л Д, Концентрация щелочной и кислой фосфатазы в нейтрофилах крови куриных эмбрионов в норме и при введении амброзийного антигена / Л Д Тимченко, А П Трунова // Проблемы развития биологии и экологии на Северном Кавказе Мат-лы научн конф / СГУ -Ставрополь,2007 -С 242-245

12 Тимченко, Л Д Содержание альфа-фетопротеина(АФП) в эмбрионах кур нараннихстадияхэмбриогенеза/Л Д Тимченко,А П Трунова,В Н Стрекалова, С В Черников // Проблемы развития биолопш и экологии на Северном Кавказе Мат-лы научн конф /СГУ-Ставрополь, 2007 -С 245-246

13 Тимченко, ЛД Особенности гистологического строения печени куриных эмбрионов на разных стадиях развития в норме и под влиянием амброзийного аллергена / Л Д Тимченко, А П Трунова // Естествознание и гуманизм Сб научн работ-Томск, 2007 -Т 2 -С 38-39

Подписано в печать 14 01 2008 Формат 60x84 1/16 Уел печ л 1,28 Уч-изд л 1,17

Бумага офсетная Тираж 100 экз Заказ 8

Отпечатано в Издательско-полиграфическом комплексе Ставропольского государственного университета 355009, Ставрополь, ул Пушкина, I

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Трунова, Анастасия Петровна

Введение.

Глава 1. Куриный эмбрион, как адекватная биологическая модель эмбрионального развития (обзор литературы).

1.1. Экспериментальное и практическое использование куриного эмбриона в биологии, медицине и промышленности.

1.2. Основные сведения о закономерностях эмбрионального развития кур( и- специфические особенности адаптации и патологии куриного эмбриона в онтогенезе.

1.2.1. Особенности иммунного реагирования птиц в онтогенезе.

Неспецифические и иммунные факторы защиты у куриного эмбриона.

1.3. Искусственное и естественное воздействие внешних факторов на эмбриогенез птиц. Пути управления эмбриогенезом.

Глава 2. Материалы и методы.

Глава 3. Изменения показателей роста, развития и иммуногенез куриных эмбрионов под влиянием амброзийного антигена (собственные исследования).

3.1. Выживаемость, общее состояние и морфометрические показатели эмбрионов.

3.2. Патологоанатомические и морфометрические особенности иммунных органов.

3.3. Результаты гематологических и иммунологических показателей эмбрионов.

3.4. Цитохимические показатели крови развивающихся эмбрионов

Обсуждение результатов собственных исследований.

Выводы.

Практические предложения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Особенности развития и иммуногенез куриного эмбриона под влиянием амброзийного антигена"

Актуальность темы. Наиболее адекватной моделью, позволяющей в динамике изучить у позвоночных закономерности преобразований на протяжении эмбриогенеза без ущерба для материнского организма, являются эмбрионы птиц. Их особенностью является доступность и управляемость в процессе эксперимента, возможность получения и фиксирования результаI тов практически с помощью всех известных методов: эмбриологических, гистологических, цитологических, генетических, биохимических, гематологических, микрохирургических и многих других. Работа с куриным эмбрионом (КЭ), как объектом промышленного инкубирования, сопровождается неизбежными потерями, но они не противоречат принципам биоэтики и, в отличие от работы с эмбрионами млекопитающих и человека, может быть реализована на любом этапе онтогенеза, являющемся предметом интереса исследователя.

В вирусологии и микробиологии куриный эмбрион используется для определения патогенности и степени вирулентности микроорганизма, в иммунологии — для изучения толерантности, аллореактивности, онтогенеза В-и Т-лимфоцитов и пр. (Вирусология. Методы, 1988; Ветеринарная вирусология, 1991; Ветеринарная вирусология, 1999; Косик Н.В., Ржепаковский И.В., Булгакова И.В., 2003).

В биотехнологии и медицине куриный зародыш применяют в качестве основной сырьевой субстанции для производства биологически активных -препаратов, иммунотропных и косметических средств (Тимченко Л1Д., Косик Н.В., 2004). Это обусловливает необходимость изучения особенностей реагирования, в том числе иммунного ответа организма КЭ на многочисленные естественные и искусственно созданные внешние факторы, окружающие птицу в процессе жизни и влияющие на яйцо во время инкубации.

Одним из малоизученных и интересных аспектов развития куриного эмбриона является изучение особенностей его реакции на многочисленные аллергены, вероятность контакта с которыми в процессе жизни у птицы велика. Имеется скудная информация (Болотников И.А., 1982; Болотников И.А., Михкеева B.C., Олейников Е.К., 1983), свидетельствующая о специфике реагирования взрослой птицы на общеизвестные аллергены: отсутствие аллергической реакции по классическому типу, отсутствие IgE, признаки гиперчувствительности замедленного типа и др.

Однако сведений об исследованиях, связанных- с изучением особенностей развития, в том числе иммунокомпетентных органов КЭ под действием известных аллергенов, в доступной литературе найти не удалось. Этот факт приобретает особое значение в связи с имеющимися сообщениями о возможности накопления продуктов эндогенного происхождения в желточном мешке, вещества которого используется эмбрионом в качестве источника питания (Отрыганьев Г.К., Бессарабов Б.Ф., Исаев Ю.В., 1981). К таким эндогенным веществам можно отнести наиболее агрессивные аллергены растительного происхождения, в частности, повсеместно распространенную на территории Южного федерального округа амброзию, с которыми курица может контактировать в процессе жизни.

В связи с вышеизложенным, изучение особенностей развития и иммуногенеза эмбриона в процессе экспериментального воздействия амброзий-ного аллергена представляется крайне актуальным.

Цель исследования. Изучить влияние аллергена пыльцевого амброзии полыннолистной на показатели развития и иммуногенез куриного зародыша при его экспериментальном введении на разных этапах эмбриогенеза.

Задачи исследования:

2) исследовать уровень иммуноглобулинов у куриных эмбрионов в норме и под воздействием амброзийного аллергена;

3) изучить в сравнительном аспекте морфофункциональные показатели крови куриного эмбриона в норме и под воздействием амброзийного аллергена;

4) исследовать цитохимические особенности лимфоцитов и нейтро-филов куриного зародыша в разные периоды инкубации в норме и под воздействием амброзийного аллергена;

5) изучить влияние амброзийного аллергена на процесс гистогенеза иммунных органов эмбрионов в отдельные периоды развития.

Впервые изучены закономерности аллометрического, конформного, гомономного типов роста у эмбрионов в норме и под воздействием аллергена.

Получены новые данные по влиянию амброзийного аллергена на разных этапах развития на гистогенез иммунных органов куриного эмбриона.

Впервые изучены в различные сроки развития КЭ гематологические, иммунологические, цитохимические показатели лимфоцитов и нейтрофи-лов крови при однократном введении амброзийного аллергена в желточный мешок. Установлена взаимосвязь этих показателей с особенностями развития.

Установлены наиболее критические сроки развития куриного эмбриона по отношению к влиянию аллергена.

Результаты исследования позволяют судить о качестве эмбриона в целом и его иммунной системе на отдельных этапах онтогенеза, в-том числе о вероятности сенсибилизации и специфике ответных реакций организма, что может представлять интерес для биотехнологов при целенаправленном отборе эмбриональных тканей, для разработки биологически активных и лекарственных препаратов. .

Апробация работы. Основные положения работы доложены на научной конференции «Университетская наука - региону» (Ставрополь, 2006; 2007); Международной научно-практической конференции (Ставрополь, 2006); в рамках Российской школы-конференции молодых ученых (Пущи-но, 2006); на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные аспекты жизнедеятельности человека на Севере» (Архангельск, 2006); на Третьей ежегодной конференции студентов и аспирантов базовых кафедр ЮНЦ РАН (Ростов-на-Дону, 2007); в рамках 16-й Всероссийской научно-методической конференции «Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных» (Ставрополь, 2007).

Положения, выносимые на защиту.

1. Аллерген пыльцевой амброзии полыннолистной оказывает негативное влияние на морфометрические, гематологические, гистологические показатели роста и развития и иммуногенез куриного эмбриона в зависимости от сроков введения в желточный мешок.

2. Специфичность влияния аллергена на организм куриного эмбриона в разные сроки инкубации различна и проявляется гипоксией, гипотрофией, нарушением тканевой дифференцировки, а также изменением иммунной реактивности.

Реализация результатов исследований. Работа проведена в соответствии с тематическим планом НИР Южного научного центра РАН по теме № 00-05-06 от 2005 г. «Разработка концепций комплексной защиты здоровья человека и животных при иммунопатологиях», выполняемой совместно со Ставропольским государственным университетом. Результаты исследований включены в научные отчеты ЮНЦ РАН и СГУ за 2005-2007 гг. и используются в деятельности сектора иммуномониторинга и иммунокоррек-ции научно-исследовательской лаборатории биологически активных веществ и новых материалов ЮНЦ РАН, в проблемной научно-исследовательской лаборатории экспериментальной- иммуноморфологии, иммунопатологии и иммунобиотехнологии СГУ при разработке новых биологически активных препаратов, в том числе аллерготропинов.

По заявке, основанной на результатах исследований, выигран грант на участие в работе Российской школы-конференции молодых ученых «Эко-токсикология: современные биоаналитические системы, методы и технологии».

Результаты используются учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторных занятии по биологии развития и размножения, гистологии и эмбриологии, иммунологии в Ставропольском государственном университете, Ставропольском филиале Московского государственного гуманитарного университета им. М.А. Шолохова, Кубанском государственном аграрном университета, Кабардино-Балкарской государственной сельскохозяйственной академии, Башкирском государственном аграрном университете и в научной работе Ставропольского научно-исследовательского института животноводства и кормопроизводства.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов собственных исследований, выводов, практических предложений, списка литературы. Список литературы включает 238 источников, в том числе 50 — иностранных авторов. Работа изложена на 181 странице компьютерного текста, иллюстрирована 47 фотографиями, 19 таблицами, 7 диаграммами.

Заключение Диссертация по теме "Биология развития, эмбриология", Трунова, Анастасия Петровна

155 ВЫВОДЫ

1. Установлено, что особенности и степень влияния амброзийного аллергена на показатели выживаемости, роста и развития при однократном введении куриному эмбриону различны в зависимости от периода онтогенеза:

- период максимума эмбриональной смертности при введении аллергена смещается на 11-е сутки с 19-х суток в контроле; минимальные показатели смертности в опыте и контроле приходятся ответственно на 19 и 15-е сутки;

- при введении аллергена у КЭ на 11, 13, 15 и 17-е сутки отмечены признаки анемии соответственно у 28, 32, 39, 30%, а у 5, 9, 12, 7% - венозный застой; на 19-е сутки отличий в окраске кожных покровов нет;

- после контакта с аллергеном на 11, 13 и 15-е сутки соответственно у 42, 65 и 72% эмбрионов отмечено увеличение массы желточного мешка и количества сосудов среднего и крупного калибра на его поверхности; достоверных изменений массы амниона, аллантоиса и яичного белка по сравнению с контрольной группой не установлено. Сосудистая реакция желточного мешка на введение аллергена имеет компенсаторно-приспособительный характер.

2. Введение аллергена КЭ приводит к уменьшению массы и длины тела. Наибольшая разница между показателями массы отмечена на 17-е* сутки (1,13±0,11 г), а длины тела - на 15-е (1,4±0,20 см). Минимальные отличия между показателями массы и длины тела установлены на 19-е сутки.

Изменение индекса Кетле I свидетельствует о нарушении пропорциональности развития, что выражено на 11 и 15-е сутки (различия по сравнению с контролем составляют 0,23±0,02 и 0,24±0,02, соответственно). На 17 и 19-е сутки индекс Кетле I не отличается от контроля.

3. Установлено, что после контакта с аллергеном у зародышей на 11, 13, 15-е сутки развиваются признаки анемии (достоверное уменьшение количества эритроцитов, понижение уровня гемоглобина и цветового показателя, увеличение числа разрушенных и гипохромных эритроцитов). На 17-е сутки развития, степень достоверности данных показателей различна.

4. Аллерген во все периоды развития оказывает влияние на динамику общего количества лейкоцитов и показателей лейкоцитарной формулы, что свидетельствует о достаточном уровне иммунной реактивности.

На 11, 13, 15 и 17-е сутки достоверно увеличивается число лейкоцитов, максимальные достоверные отличия с контролем отмечены на 13-е сутки, на 19-е сутки - разница недостоверна.

На 11, 13, 15, 17-е сутки развития количество эозинофилов, палочкоя-дерных нейтрофилов, моноцитов и лимфоцитов увеличивается по сравнению с контролем. Максимальная разница между значением показателей в контроле и опыте приходится на 15-е сутки. На 15-е сутки появляются ба-зофилы, а в контроле - на 17-е сутки. Наибольшая разница между количеством базофилов, между опытом и контролем, приходится» на 17-е сутки. На 19-е сутки после введения аллергена возрастает количество базофилов, эозинофилов, сегментоядерных нейтрофилов, моноцитов и лимфоцитов.

На 19-е сутки в опытной группе отмечен сдвиг лейкоцитарной формулы влево, а на 13, 15 и 17-е - вправо, что коррелятивно связано с динамикой цитохимических показателей, отражающих интенсивность воспаления.

Динамика гематологических показателей свидетельствует о компенсаторном лейкопоэзе и нарушении эритропоэза (преимущественно на 11 и 13-е сутки) или развитии воспалительной реакции (преимущественно на 15, 17 и 19-е сутки) в организме эмбриона.

5. Увеличение ЩФ и КФ на 15 и 19-е сутки, и снижение количества КБ свидетельствует об активизации воспалительной реакции и усилении фагоцитарной активности нейтрофила под действием аллергена. Снижение количества СДГ на 11, 13, 15, и 17-е сутки подтверждает наличие гипоксии соответственно у 35, 42, 55 и 32% эмбрионов опытной группы.

6. В опытной группе КЭ происходит увеличение количества IgG на всех стадиях развития по сравнению с контролем. Количество IgM в опыте возрастает на 11, 13 и 17-е сутки. Количество IgA возрастает на 11 и 15-е сутки по сравнению с контролем. На всех стадиях развития увеличение суммарного количества Ig коррелятивно связано с уровнем общего белка и числом лимфоцитов.

7. Нарушение закономерностей гомономного роста иммунных органов в опытной группе КЭ приводит к их развитию по гетероморфному типу; изменение относительной массы органов свидетельствует о нарушении конформности.

Гистологически установлено, что на 11 и 13-е сутки развития органы эмбрионов опытной группы являются интактными. На 15, 17 и 19-е сутки

I , печень отвечает на введение антигена замедлением процессов развития, околососудистой полиморфноклеточной инфильтрацией, сосудистой реакцией, иногда, набуханием, повреждением (слущиванием эндотелия), повышением проницаемости стенки венозных и.артериальных сосудов.

В ткани селезенки, тимуса и бурсы на 15, 17, 19-е сутки увеличивается общая площадь органов. Интенсивно образуются гисто-функциональные единицы органов, что свидетельствует о созревании органов в функциональном плане.

8. Изменение гематологических, морфологических, гистологических и иммунологических показателей куриных зародышей на 11, 13, 15-е сутки свидетельствуют о нарушении процессов развития организма. Наибольшие различия между показателями экспериментальных групп приходится на 13, 15-е сутки, что позволяет выделить их в качестве критических периодов.

На 17 и 19-е сутки у эмбрионов после контакта с аллергеном происходит незначительное изменение показателей конформного и гомономного роста. Гематологические, цитохимические, гистологические и иммунологические показатели свидетельствуют о развитие воспалительной реакции, которая иногда, у эмбрионов с выраженной гипоксией и отклонениями в развитии, принимает характер иммунопатологического процесса в виде гиперчувствительности по цитотоксическому или иммунокомплексному типу.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Полученные результаты по динамике морфофункциональных показателей развития куриного эмбриона под влиянием аллергена пыльцевого амброзии полыннолистной могут быть использованы в научных целях и при составлении учебных и справочных пособий по биологии развития и размножения, гистологии и эмбриологии, аллергологии.

2. Сведения о критичности отдельных сроков развития зародышей птиц по отношению аллергена пыльцевого амброзии полыннолистной могут быть использованы в биотехнологии при разработке новых биологически активных препаратов, в том числе аллерготропинов, на основе эмбриональной ткани.

159

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Трунова, Анастасия Петровна, Ставрополь

1. Абелев, Г.И. Альфа-фетопротеин: биология, биохимия, молекулярная генетика / Г.И. Абелев // Иммунология. 1994. № 3. — С. 4-9.

2. Автандилов, Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство / Г.Г. Ав-тандилов. -М.: Медицина, 1990. 384 с.

3. Агеев, А.К. Гистохимия щелочной и кислой фосфатаз человека в норме и патологии / А.К. Агеев. — JL: Медицина, 1969. 143 с.

4. Адо, А.Д. Общая аллергология / А.Д. Адо. М.: Медицина, 1978. -464 с.

5. Александровская, О.В. Цитология, гистология, эмбриология / О.В. Александровская, Т.Р. Радостина, Н.А. Козлов. М.: Агропромиздат, 1987.-448 с.

6. Артемьев, А.В. Биология гнездования большой синицы Parus major в Юго-восточном Приладожье / А.В. Артемьев // Русский орнитологический журнал. 1993. - Т. 2. - Вып. 2. - С. 201-207.

7. Асоскова, Н.И. Особенности размещения численности и гнездования серой вороны в антропогенных ландшафтах Архангельской области / Н.И. Асоскова, В.М. Константинова // Врановые в антропогенном ландшафте. Липецк, 1993. —Вып. 1.-С. 16-32.

8. Афанасова, Л.В. Сравнительная биология птиц береговых обрывов: Ав-тореф. дисс. . канд. биол. наук / Л.В. Афонасова. -М., 1990. 16 с.

9. Бакаев, С.Б. Некоторые оологические характеристики анторпогенных ландшафтов равнины Узбекистана / С.Б. Бакаев // Современные проблемы оологии: Материалы 1 Международного совещания. — Липецк, 1989.-Ч. 2.-С. 145-147.

10. Бакуев, М.М. Особенности секреции миелопероксидазы и хеммлюми-несцентного ответа нейтрофилов человека при контакте со стимуляторами различного происхождения / М.М. Бакуев, М.З. Саидов, А.А. Бу-таков//Иммунология. 1991.-№ 1.-С. 15-18.

11. Белоусов, J1.B. Основы общей эмбриологии / JI.B. Белоусов. —М.: Наука, 2005.-368 с.

12. Вельский, Е.А. Ранние стадии гнездового периода птиц дуплогнезд-ников в действиях техногенного загрязнения / Е.А. Вельский, B.C. Бе-зель, Э.А. Поленц // Экология. - 1995. - № 1. - С. 46-52.

13. Бережная, Н.М. Биологическая роль иммуноглобулина Е / Н.М. Бережная, С.И. Ялкут. Киев: Здоровье, 1983. - 134 с.

14. Бессарабов, Б.Ф. Практикум по инкубации яиц и эмбриологии сельскохозяйственных птиц / Б.Ф. Бессарабов. М.: Агропромиздат, 1992. - 143 с.

15. Бессарабов, Б.Ф. Применение мумие для стимуляции формирования иммунитета у птицы / Б.Ф. Бессарабов, И.М. Мельникова, Л.П. Гонцо-ва, А.А. Дорогавцев // Ветеринария. 1999. - № 3. С. 15-16.

16. Бецкий, О.В. Миллиметровые волны и живые системы / О.В. Бецкий, В.В. Кислов, Н.Н. Лебедева. М.: САЙНС-ПРЕСС, 2004. - 272 с.

17. Биология. Кн. 1: Учеб. для мед. спец. вузов / Под ред. В.Н. Ярыгина. — М.: Высшая школа, 2001. 432 с.

18. Бодемер, Ч. Современная эмбриология / Под ред. Т.А. Детлаф. — М.: Мир, 1971.-446 с.

19. Боева, О.И. Возможности цитоэнзимохимического анализа лейкоцитов в диагнозе и дифференциальном диагнозе токсических поражений печени: Автореф. дисс. . канд. мед. наук / О.И. Боева. Ставрополь, 1998.-23 с.

20. Болотников, И.А. Иммунопрофилактика инфекционных болезней птиц / И.А. Болотников. -М.: Россельхозиздат, 1982. 183 с.

21. Болотников, И.А. Стресс и иммунитет у птиц / И.А. Болотников, B.C. Михкеева, Е.К. Олейников. — Л.: Наука, 1983. — 123 с.

22. Борисенко, Е.Я. Практикум по разведению сельскохозяйственных животных / Е.Я. Борисенко, К.В. Баранова, А.П. Лисицын. М.: Колос, 1984.- 124 с.

23. Брауде, М.И. Материалы к гнездовой биологии хохлатой чернити в низовьях Оби / М.И. Брауде // Структура населения птиц Европейского Северо-востока СССР. Сыктывкар, 1983. - С. 10-16.

24. Брауде, М.И. К экологии серого журавля в Пермской области / М.И.* Брауде, О.А. Сафина, Е.Н. Суворова // Гнездовая жизнь птиц. — Пермь, 1997.-С. 118-123.

25. Булекбаева, Л.Э. Сравнительная физиология лимфатической системы / Л.Э. Булекбаева. Алма-Ата: Наука, 1985. - 166 с.

26. Буртов, Ю.З. Инкубация яиц: Справочник / Ю.З. Буртов, Ю.С. Голдин, И.П. Кривопишин. М.: Агропромиздат, 1990. - 239 с.

27. Бутенко, З.А. Цитохимия и электронная микроскопия клеток крови и кроветворных органов / З.А. Бутенко, Д.Ф. Глузман. — Киев, 1974. — 246 с.

28. Бэр, К.М. История развития животных / К.М. Бэр. — М.: Изд-во АН СССР, 1953.-Ч. 1.-466 с.

29. Венглинская, Е.А., Об информативности цитохимического анализа лейкоцитов крови больных ревматоидным артритом / Е.А. Венглинская // Вопросы рквматизма. 1977. № 4. - С. 29-34.

30. Вершигора, А.Е. Общая иммунология / А.Е. Вершигора. — Киев: Выща школа, 1990. 735 с.

31. Ветеринарная вирусология / Под ред. Р.Г. Госманова, Н.М. Колычева. Омск: Изд-во ОмГАУ, 1999. - 288 с.

32. Ветеринарная вирусология / Под ред. В.Н. Сюрина. М.: Агропромиздат, 1991. - 431 с.

33. Ветеринарные препараты: Справочник / Под ред. Д.Ф. Осидзе. М.: Колос, 1981.-448 с.

34. Вирусология. Методы / Под ред. Б. Мейхи. М.: Мир, 1988. - 344 с.

35. Вишняков, А.И. Состояние костномозгового кроветворения кур под действием ионизирующего излучения / А.И. Вишняков // Актуальныепроблемы ветеринарной патологии и морфологии животных. — Воронеж, 2006.-С. 97-100.

36. Вольнова, M.JI. Обоснование электрофизического воздействия на эмбрионы птицы / M.JI. Вольнова, В.В. Пушкарский // Труды Кубанского государственного аграрного университета. — Краснодар, 2000. № 381.-С. 78-83.

37. Кирющенков, А.П. Влияние вредных факторов на плод / А.П. Кирю-щенков. М.: Медицина, 1978. — 216 с.

38. Воронин, Е.С. Иммунология / Е.С. Воронин. М.: Колос-Пресс, 2002. -408 с.

39. Воспаление. Руководство для врачей / Под ред. В.В. Серова, B.C. Пау-кова. М.: Медицина, 1995. - 640 с.

40. Гаврилов, O.K. Клетки костного мозга и периферической крови:структура, биохимия, функция / O.K. Гаврилов, Г.И. Козинец, Н.Б.

41. Черняк. -М.: Медицина, 1985.-286 с.

42. Газарян, К.Г. Биология индивидуального развития животных: Уч. для биол. спец. вузов / К.Г. Газарян, JI.B. Белоусов. М.: Высшая школа, 1983.-287 с.

43. Генчев, А.Г. Рост и развитие эмбрионов в зависимости от их пола и возраста кур бройлерного типа / А.Г. Генчев, А.К. Османян // Известия Тимирязевской сельскохозяйственной академии. 1996. — Вып. 4. — С. 179-188.

44. Герберт, У. Дж. Ветеринарная иммунология. М.: Колос, 1974. - 311 с.

45. Гистология / Под ред. Э.Г. Улумбекова, Ю.А. Селышева. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. - 672 с.

46. Гладков, Б.А. Оценка гистофункционального состояния селезенки кур / Б.А. Гладков // Научные аспекты профилактики и терапии болезней сельскохозяйственных животных. Воронеж, 1997. - С. 90.

47. Голубева, Н.Н. Изменения цитохимической активности лимфоцитов при антигенном воздействии / Н.Н. Голубева, Н.Н. Константинова, И.А. Комисарова // Микробиология. 1987. - С. 86-90.

48. Горышина, Е.Н. Сравнительная гистология тканей внутренней среды с основами иммунологии / Е.Н. Горышина, О.Ю. Чага. JL: Изд-во ЛГУ, 1990.-320 с.

49. Гражданкин, А.В. Влияние влажного воздуха на испарительную влагоотдачу птичьих яиц / А.В. Гражданкин // Зоологический журнал. -1987. Т. 62. - Вып. 4. - С. 585-591.

50. Гражданкин, А.В. Моделирование инкубации яиц трех видов воробьиных птиц // А.В. Гражданкин // Зоологический журнал. 1992. — Т. 71. -Вып. 12.-С. 117-124.

51. Гримблатов, В.М. Современная аппаратура и проблемы низкоинтенсивной лазерной терапии // Применение лазеров в биологии и медицине.-Киев, 1996.-С. 326.

52. Деблик, А.Г. Функциональная морфометрия периферических органов иммунитета цыплят при применении пробиотиков: Автореф. дисс. . канд. биол. наук / А.Г. Деблик. М., 2007. - 19 с.

53. Дель, В. Дезинфекция яиц озоном / В. Дель // Птицеводство. 1995. -№ 5. - С. 7-8.

54. Доброненко, А. Определение оплодотворенности яиц до инкубации / А. Доброненко, П. Хвосторезов // Птицеводство. 1999. - № 2. - С.19-20.

55. Дранник, Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология / Г.Н. Дранник.

56. М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2003. 604 с.

57. Дубась, Г.И. Влияние эколого-этологических факторов насиживания у птиц в период яйцекладки на темп раннего онтогенеза и вылуплен ия птенцов: Автореф. дисс. . канд. биол. наук / Г.И. Дубась. М., 1993.- 17 с.

58. Дьяконов, Ю.В. Основные и возобновляемые кладки птиц: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. / Ю.В. Дьяконов М., 1981. — 16 с.

59. Егорова, Г.В. Экология закрытогнездных птиц небольшого промышленного центра России (на примере Орехово-Зуево): Автореф. дисс. . канд. биол. наук / В.Г. Егорова — Киев, 1997. — 16 с.

60. Емельяненко, П.А. Иммунология животных в период внутриутробного развития / П.А. Емельяненко. М.: Агропромиздат, 1987. - 213 с.

61. Жаров, А.В. Вскрытие и патоморфологическая диагностика болезней животных / А.В. Жаров, И.В. Иванов, А.П. Стрельников. М.: Колос, 2000. - 400 с.

62. Животная клетка в культуре (Методы и применение в биотехнологии) / Под ред. проф. Дьяконова Л.П., проф. Ситькова В.И. М.: Компания Спутник +, 2000. - 400 с.

63. Жук Р., Микробный стимулятор роста цыплят / Р. Жук, Ю. Батюжев-ский, Г.Г. Шабельник // Птицеводство. 1999. - № 25 - С.9-10.

64. Жукова, И.А. Изучение тератогенного и эмбриотоксического действия витатиурама на куриные эмбрионы / И.А. Жукова, Н.П. Чечеткина // Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных. Воронеж: Научная книга, 2006. - С. 624-628.

65. Заварзин, А.А. Краткое руководство по эмбриологии человека и позвоночных животных / А.А. Заварзин. Л.: Биомедгиз, 1935. - 264 с.

66. Задарновская, Г.Ф. Сравнительные материалы по эмбриогенезу домашних птиц: Дисс. . д-ра биол. наук / Г.Ф. Задарновская. — Краснодар, 1966.-27 с.

67. Зайцев, А. Влажная обработка инкубационных яиц / А. Зайцев // Птицеводство. -1991. № 6. - С. 17.

68. Иванов, Л.И. Аллергия и фагоцитоз моноцитарных, полиморфноядер-ных лейкоцитов / Л.И. Иванов, П.А. Николаев, С.Л. Ялуква. — М., 1993. 7 с. - Деп. в ВНИИМИ. - № 473-13.

69. Игнатов, П.Е. Иммунитет и инфекция / П.Е. Игнатов. М.: Время, 2002. - 352 с.

70. Инюшин, В.М. Лазерный свет и живой организм / В.М. Инюшин. -Алма-Ата, 1970. 378 с.

71. Карпуть, И.М. Гематологический атлас сельскохозяйственных животных / И.М. Карпуть. Минск: Ураджай, 1986. - 183 с.

72. Карпуть, И.М. Формирование иммунного статуса цыплят-бройлеров / И.М. Карпуть, М.П. Бабина // Ветеринария. 1996. - № 6. - С. 28-30.

73. Климов, С.М. Воздействие антропогенных факторов на численность и характер размножения чибиса / С.М. Климов // Экологическая и морфологическая изменчивость животных под воздействием антропогенных факторов. — Волгоград, 1994. — С. 117-120.

74. Климов, С.М. Внешняя ооморфология как отражение экологической изменчивости и дифференцировки птиц: Автореф. дисс. . докт. биол. наук / С.М. Климов М., 1997. - 48 с.

75. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: Справочное издание / И.П. Кондрахин, Н.В. Курилов, А.Г. Малахов. М.: Агро-промиздат, 1985. - 287 с.

76. Клиническая цитохимия / Под ред. А.В. Ягоды, Н.А. Локтева. — Ставрополь: СтГМА, 2005. 485 с.

77. Клинические лабораторные исследования / Под ред. Л .Я. Любиной, Л.П. Ильичевой, Т.В. Катасоновой, С.А. Петросова. М.: Медицина, 1984.-228 с.

78. Кнорре, А.Г. Эмбриональный гистогенез / А.Г. Кнорре. М.: Медицина, 1971.-352 с.

79. Комисарова, И.А. Особенности некоторых цитохимических показателей нейтрофилов крови в детском и подростковом возрасте / И.А Комисарова, А.И. Зивенко, Р.Э. Петросян // Лабораторное дело. 1971. -№8.-С. 479-481.

80. Комисарова, И.А. Цитохимическое изучение кислой фосфотазы и окислительных ферментов лимфоцитов периферической крови / И.А Комисарова, Р.П. Нарциссов // Лабораторное дело. 1968. - № 7. - С. 390-394.

81. Косик, Н.В. Новый стимулятор роста микроорганизмов / Н.В. Косик, И.В. Ржепаковский // Проблемы развития биологии и экологии на Северном Кавказе: Материалы научной конференции «Университетская наука региону». - Ставрополь, 2004. — С. 108-109.

82. Красота, В.Ф. Разведение сельскохозяйственных животных / В.Ф. Красота, В.Т. Лобанов, Т.Г. Джапаридзе М.: Колос, 1983. - 414 с.

83. Кричинская, Е.Б. Птицы / Е.Б. Кричинская, В.И. Ефремов. М.: Наука. - 1974. - 362 с.

84. Крочак, Н. Обеззараживание яиц и цыплят в инкубатории / Н. Крочак // Птицеводство. 1987. - № 1. - С. 17-19.

85. Лабораторные исследования в ветеринарии. Справочник / Под ред. В.Я. Антонова, П.Н. Блинова. М.: Колос. - 1971. - 468 с.

86. Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник / Под ред. В.В. Меньшикова. М.: Медицина, 1987. - 368 с.

87. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М.: Высшая школа, 1990. - 352 с.

88. Н.В. Лебедева -М., 1990.- 16 с.

89. Лебедева, Н.В. Методика лечения эмбриона в яйце для идентификации птенцов мелких воробьиных после вылупления / Н.В. Лебедева // Зоологический журнал. 1996. - Т. 75. - Вып. 5 - С. 757-762.

90. Левин, Г.М. Особенности эмбрионального и постэмбрионального развития цыплят в связи с эффектом гетерозиса: Дис. . канд. с/х наук / Г.М. Левин. М., 1971. - 23 с.

91. Лимфоциты: Методы / Под ред. Дж. Клауса, А.Н. Маца. М.: Мир, 1990.-395 с.

92. Левкин, А.В. Аспекты применения лазеров в ветеринарии / А.В. Лев-кин // Материалы XIX международной научно-практической конференции «Применение лазеров в медицине и биологии». — Киев, 2003. -С. 38-41.

93. Ллойд, 3. Гистохимия ферментов, лабораторные методы. -/ 3. Ллойд. -М.: Мир, 1982-270 с.

94. Локтев, Н.А. Основы количественной гистохимии / Н.А. Локтев. — Ставрополь: СтГМА, 1999. 128 с.

95. Лукьянов В. Оборудование для обработки яиц / В. Лукьянов, А. Васильев // Птицеводство. 2000. - № 1. - С. 37-40.

96. Мащенко, А.С. АТФ-азная активность тканей куриных эмбрионов и их реактивность к вирусной инфекции / А.Н. Мащенко, А.А. Сорокина // Ветеринария. 1999. - № 11. - С. 25-26.

97. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле / А.Н. Маянский, Д.Н Маян-ский. Новосибирск: Наука, 1989. - 344 с.

98. Методы биологии развития / Под ред. Б.Л. Астаурова. М.: Наука, 1974. -619 с.

99. Микляева, М.А. К экологии раннего онтогенеза золотистой щурки в Центральном Черноземье / М.А. Микляева // Гнездовая жизнь птиц. — Пермь, 1997. С. 76-83.

100. Микляева, М.А. Особенности раннего онтогенеза экологически различных групп птиц / М.А. Микляева, Л.Ф. Скрылева. Мичуринск, 2001.- 133 с.

101. Морина, Н.В. В технологии инкубации яиц мелочей нет / Н.В. Морина // Птицеводство. 1992. - № 8. - С. 12-14.

102. Мхчан, Э.И., Изменение белковых фракций яиц в связи с различной интенсивностью эмбрионального развития: Автореф. дисс. . канд. с/х наук. / Э.И. Мхчан М., 1973. - 19 с.

103. П.Мянд, Р., Внутрипопуляционная.изменчивость птичьих яиц / Р. Мянд. Таллин: Валгус, 1988. - 193 с.

104. Нагоев, Б.С. Очерки о нейтрофильном гранулоците / Б.С. Нагоев. -Нальчик: Эльбрус, 1986. 144 с.

105. Нарциссов, Р.П. Применение П-нитротетразолия фиолотового для количественной цитохимии дегидрогеназ лимфоцитов человека / Р.П. Нарциссов // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1969. - № 5.-С. 85-91.

106. Небогатиков, Г.В. Способы стирмуляции сперматогенеза у петухов и инкубациие куриных яиц / Г.В. Небогатиков, Д.Е. Жирков // Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных. -Воронеж: Научная книга, 2006. С. 947-950.

107. Ницканский, С.Г. Влияние некоторых физических факторов на эмбриональное развитие куриного зародыша / С.Г. Ницканский, Б.А. Нейман // Вопросы эмбриологии: Сб. статей. 1974. - С. 3-18.

108. Новикова, Д:К. Клеточные методы иммунодиагностики / Д.К! Новикова, В.И. Новикова. Минск: Беларусь, 1979. - 222 с.

109. Общая анатомия лимфатической системы // Ю.И. Бородин, M.I I. Санин, JI.E. Этинин. Новосибирск: Наука; 1990. - 240 с.119: Объекты биологии развития / Под ред. Б.Л. Астаурова., Mi: Наука, 1975.-579 с.

110. Отрыганьев, Г.К. Болезни эмбрионов птиц / Г.К. Отрыганьев, Б.Ф. Бессарабов, Ю.В. Исаев. М.: Россельхозиздат, 1981. - 136 с.

111. Пальцын, А.А. некоторые вопросы современного учения о полиморф-ноядерных лейкоцитах / А.А. Пальцын // Архив патологии. 1989. — Т. 5. - № 8. - С.85-90.

112. Панин, Л.Е. Лизосомы: роль в адаптации и восстановлении / Л.Е. Панин, Н.Н. Маянская. Новосибирск: Наука, 1987. - 199 с.

113. Паршина Ю.Э., Материалы по биологии размножения певчего дрозда / Ю.Э. Паршина // Материалы Всероссийской конференции «Научное наследие П.П. Семенова-Тянь-Шанского и его роль в развитии современной науки». Липецк, 1997. - С. 48-49.

114. Пенионжкевич, Э.Э. К вопросу о гистогенезе куриных эмбрионов / Э.Э. Пенионжкевич // Материалы к изучению патологии эмбрионального развития птиц. 1939. - Вып. 2. - CI93-95.

115. Петров, Р.В. Иммунология / Р.В. Петров. М.: Медицина, 1983. - 118 с.

116. Петрунькина, A.M. Практическая биохимия / A.M. Петрунькина. JL: Медгиз, 1961.-428 с.

117. Пигаревский, В.Е. Полиморфноядерный лейкоцит и макрофаг в реакциях воспаления и геперчувствительности / В.Е. Пигаревский // Архив патологии. 1983. - № 11. - С. 14-22

118. Познанин, Л.П., Эколого-морфологический анализ онтогенеза птенцовых птиц / Л.П. Познанин. М.: Наука, 1979. - 293 с.

119. Рагозина, М.Н. Развитие зародыша домашней курицы в его соотношении с желтком и оболочками яйца / М.Н. Рагозина. — М.: Изд-во АН СССР. 1961.- 167 с.

120. Родионов, С.Ю. Влияние препарата из эмбриональных тканей на рост и метастазирование опухолей / С.Ю. Родионов, Н.А. Пак // Материалы Всероссийской конференции «Опухоли висцеральных локализаций». -Томск, 1995.-С. 188-189.

121. Родимцев А.С., Эффективность размножения сороки на юге Западной Сибири / А.С. Родимцев // Экология. 1991. - № 1.- С. 87-88.

122. Родимцев, А.С. Селективные преимущества старших птенцов в выводках массовых видов врановых птиц / А.С. Родимцев // Экология и численность врановых птиц России и сопредельных государств. — Казань, 1996.-С. 94-96.

123. Ройт, А. Основы иммунологии / А. Ройт. М.: Мир, 1991. - 327 с.

124. Рольник, В.В. Биология эмбрионального развития птиц / В.В. Рольник. М.: Наука. - 1968. - 424 с.

125. Романов, A.JI. Птичье яйцо / А.Л. Романов, А.И. Романова. — М.: Пи-щепромиздат — 1959. 620 с.

126. Российский статистический ежегодник: Статистический сборник: Официальное издание. Госкомстат России. -М., 2002. 1204 с.

127. Руководство по гематологии: Т. 1 / Под ред. А.И. Воробьева. М. Медицина, 1985. - 448 с:

128. Сафронова, В.М. Практическое пособие по цитоэнзиматическим методам исследования / В.М. Сафронова, Н.А. Локтев, С.М. Руднев. -Ставрополь, 1994.-43 с.

129. Серых, М.М. Некоторые особенности иммунитета у млекопитающих и птиц / М.М. Серых, В.В. Зайцев // Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии. г Самара, 2006. Вып. 2. — С. 38-41.

130. Силюнова Н.П. Ультрафиолетовое облучение яиц / Н.П. Силюнова // Ветеринария. 1999. - № 3. - С. 48-50.

131. Симонова, Н.П. Ультрафиолетовое облучение инкубационных яиц / Н.П. Симонова // Ветеринария. 1999. - № 3 - С. 48-50.

132. Скрылева, Л.Ф., Особенности раннего онтогенеза некоторых куликов Тамбовской области при искусственном разведении / Л.Ф. Скрылева, С.А. Евдокишин // Гнездовая жизнь птиц. Пермь, 1992. - С.65-68.

133. Соколовская, И.И. Иммунные факторы в оплодотворении и эмбриональном развитии / И.И. Соколовская, Н.М. Решетникова // Животноводство. 1968. - № 1. - С. 66-67.

134. Сорокин, А.П. Клиническая морфология селезенки / А.П. Сорокин, Н.Я. Полянкин, Я.И. Федонюк. М.: Медицина, 1989. - 160 с.

135. Справочник ветеринарного лаборанта / Под ред. В.Я. Антонова. — М.: Колос, 1981.-248 с.

136. Справочник специалиста ветеринарной лаборатории / Под ред. Ю.П. Смияна. Киев: Урожай, 1987 - 368 с.

137. Справочник по лазерам / Под ред. A.M. Прохорова. М., 1978. - Т. 1. -256 с.

138. Степанова, А.В. Некоторые свойства цитомединов из сумки Фабрициуса, костного мозга и кишечника / А.В. Степанова // Механизмы патологических реакций. Новокузнецк, 1991. - С. 126-128.

139. Сугробова, Н.Ю. Сравнительная биология и ранний онтогенез ласточ-ковых птиц на севере ареала (Камское Предуралье): Автореф. дисс. . канд. биол. наук. / Н.Ю. Сугробова. М., 1997. - 16 с.

140. Сулейманов, С.М. Методы морфологических исследований (методическое пособие) / С.М. Сулейманов, П.А. Паршин, Ю.П. Жарова. Воронеж, 2000. - 64 с.

141. Сыздыков, К.Н. Цитохимические изменения у кур и мышей при заражении микотоксинами / К.Н. Сыздыков, Б.С. Майканов, Ю.А. Балджи // Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных. Воронеж: Научная книга, 2006. - С. 206-212.

142. Тетерев И. Прополис стимулирует рост цыплят / И. Тетерев, В. Ушаков // Птицеводство. 1992. - № 6. - С. 14-15.

143. Тимченко, JI.Д., Новый стимулятор роста микроорганизмов / Л.Д. Тимченко, Н.В. Косик // Материалы научной конференции «Университетская наука региону». — Ставрополь: СКГТУ, 2004. - С. 220.

144. Тимченко, Л.Д. Испытание препарата «ЭСРМ» в качестве стимулятора роста микроорганизмов / Л.Д. Тимченко, И.С. Тюменцева, Н.В. Косик // Биотехнология, экология, охрана окружающей среды: Сб. научн. тр.- М.: Изд-во ООО «Графикон-принт», 2005. С. 156.

145. Тимченко, Л.Д. Основы микроскопической техники для биолога: Уч. пособие / Л.Д. Тимченко, В.Н. Вакулин. Ставрополь: Изд-во СГУ, 2005.- 164 с.

146. Тимченко, Л.Д. Противоаллергические компоненты биологически активной эмбрионально-яичной массы / Л.Д. Тимченко, А.С. Каузова // Общество биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова. М.: МАКС Пресс, 2005. - С. 220.

147. Токин, Б.П. Общая эмбриология / Б.П. Токин. М.: Высшая школа, 1970.-507 с.

148. Торбек, В.Э. Морофогенез тимуса / В.Э. Торбек М.: Изд-во Российского университета дружбы народов, 1995. - 114 с.

149. Третьяков, Н.П. Инкубация с основами эмбриологии / Н.П. Третьяков

150. М.: Агроппромиздат, 1990. 191 с.

151. Тугоци, Н.Б. К вопросу о биологическом действии СВЧ поля на характер эмбрионального развития кур / Н.Б. Тугоци // Вопросы эмбриологии: Сб. статей. 1974. - С. 65-70.

152. Тутов, И.К. Основы ветеринарных препаратов: Учебное пособие для студентов высших учебных заведений / И.К. Тутов, В.И. Ситьков. — Ставрополь, 1997. 253 с

153. Тяжелова, В.Г. Регуляция мегакариоцитопоэза / В.Г. Тяжелова, В.А. Селиванов, В.Н. Ланин. — Пущино: Ин-т теорет. и эксперим. биофизики, 1991. 97 с.

154. Флоренсов, В.А. Очерки эволюционной иммуноморфологии 7 В.А. Флоренсов, И.М. Пестова. — Иркутск: Изд-во ИрГУ, 1990. 248.с.

155. Фролов, И.Ю. Биологические проблемы нетрадиционных способов инкубации яиц и терапии цитомединами молодняка птиц и животных / И.Ю. Фролов. Волгоград: Астерикс, 1993. — 69 с.

156. Хаитов, P.M. Иммунология / P.M. Хаитов. М.: Медицина, 2000. - 434 с.

157. Хохлов; А.Н., Размещение, численность и успешность гнездовой серой вороны в антропогенных ландшафтных Ставропольского края /

158. A.Н. Хохлов // Врановые птицы в антропогенных ландшафтах. Липецк, 1993.-Вып. 1.-С. 105-111.

159. Хэм, А. Гистология / А. Хэм, Д: Кормак. -М.: Мир, 1983. Т. 5. - С. 264.

160. Цитамины: биологически активные добавки к пище — методические рекомендации. М.: 1999. - 40 с.

161. Черешнев, В.А., Альфа-фетопротеин7 В.А. Черешнев, С.Ю Родионов,

162. B.А. Черкасов, Н.Н. Малютина, О.А. Орлов. Екатеринбург: УрО РАН, 2004. - 376 с.

163. Шмальгаузен, И.И. Рост и дифференцировка / И.И. Шмальгаузен — Киев: Наукова думка, 1984. Т. 1. — 176 с.

164. Шубик, В.М. аллергия вчера и сегодня. — СПб.: Фолиант, 2000. — 192 с.

165. Шураков, А.И. Темп эмбриогенеза у птиц / А.И. Шураков // Тезисы докладов Всесоюзной научной конференции зоологов педагогических вузов. Пермь, 1976 - С. 360-363.

166. Шураков, А.И. Некоторые особенности размножение полевого воробья в Пермской и Астраханской областях / А.И. Шураков // Гнездовая жизнь птиц. Пермь, 1977. - С.16-24.

167. Экология раннего онтогенеза птиц / Под ред. A.M. Болотникова, А.И. Шуракова и др. Свердловск: УНЦ АН СССР, 1985. - 228 с.

168. Якименко, И.Л., Обработка инкубационных куриных яиц расфокусированным излучением гелий-неонового лазера / И.Л. Якименко, В.Т. Розумнюк // Киевский НИПЦ ИМЭКС / Информ. листок. Киев, 1991. - N002-91.-3 с.

169. Якупов, Р.А. Лазерная рефлексотерапия / Р.А. Якупов. — М.;1998. -204 с.

170. Яремченко, О.А., Биология размножения воробьиных птиц-дуплог-нездников в лесу Житомирского полесья: Автореф. дисс. .канд. биол. наук / О.А. Яремченко. Киев, 1990. - 17 с.

171. Ярилин, А.А. Основы иммунологии / А.А. Ярилин. М.: Медицина, 1999.-608 с.

172. Ярилин, А.А. Структура тимуса и дифференцировка Т-лимфоцитов / А.А. Ярилин. Киев: Наука думка, 1991. - 243 с.

173. Ястребов, А.П. Регуляция гемопоэза при воздействии на организм экстремальных факторов / А.П. Ястребов, Б.Г. Юшков, В.Н. Большаков. -Свердловск: УРО АН СССР, 1988. 151 с.

174. Якименко, 1.Л. Кшетика в мюту комплекс1в тривалентного зашза в жовтку курячого яйця, що шкубуеться шсля дп червоного лазерногосвггла / I.JL Якименко // BicH. Бшоцерюв. держ. аграр. ун-ту. — Бша Церква, 1997. Вин. 3. - С. 176-179.

175. Abelev, G.I. Cellular aspects of alpha-fetoprotein reexpression in tumors / G.I. Abelev, T.L. Eraiser // Semin. Cancer Biol. 1999. - V. 9 - № 2. - P. 95-107.

176. Alava, M. Specific uptake of alpha-fetoprotein and albumin by rat Morris 7777 hepatoma cells / M. Alava, M. Iturralde, F. Lampreave, A. Piceiro // Tumour Biol. 1999. - V. 20. - № 1. - P. 52-64.

177. Austin, J.H. Histochemical method for sulfatase activity in heime cells and organ imprints / J.H. Austin, M.H. Bichel // Blood. 1961. - V. 17. - P. 216.

178. Babiol, B. Le polynucllaire neutrophile: une arme a double trenchant / B. Babiol // J. Int. Med. 1992. - № 205. - P. 120-125.

179. Badwoy, J.A. Acute oxygen species and the functions of phagocytic leukocytes / J.A. Badwoy, M.Z. Karnovsky // Ann. Rev. Biochem. 1980. - V. 49.-P. 695-726.

180. Baggiolini, M. Resolution of granules from rabbit heterophil leukocytes into distinet populations by zonal sedimentation / M. Baggiolini, J. Hirch, C. De Duve // J. Cell. Boil. 1969. - V. 40. - P. 269.

181. Baillif, R. Studies on leukocyte granules after staining with Sudan black Band May-Grun Wald Gimsa / R. Baillif, C. Kimbrough // J. Lab. Clin. Med. - 1947.- V. 32.-P. 155.

182. Baldi, A. Effect of habitat on the clutch size and egg dimensions of the Great Tit (Parus major) / A. Baldi, T. Gsorgo // Aquila. 1993. - V. 100. -P. 201-209.

183. Barbo, E. Factor effecting nestling growth in the Great Tit Parus Major / E. Barbo, A. Jose, G. Delgado, S. Monros // Ardeola. 1993. - № 2. - P. 201209.

184. Barka, T. Histochemikal method for acid phosphatase using hexasonium pararosanilin as coupler / T. Barka, P. Anderson // J. Histochem. Cytochem. 1962.-V. 10.-P. 741.

185. Barrot, H.G. Effect of temperature, humidity and other factors on hatch of hen's eggs and on energy metabolism of chick embryos / H.G. Barrot // Technical Bulletin N 533 U.S. Department of Agriculture. Washington, 1937.-P. 1-45.

186. Benes, I. Pranatalni a posinatani vyvoj Kosa cerneho (Turdus merula) / I. Benes // Plzen. lek. sb. 1991. -№ 63. - P.335-336.

187. Bose, C.K. Alpha-fctoprotein in advanced epithelial ovarian cancer Muk-herjea M. / C.K. Bose, Br.J. Obstet //. Gynaecol. 1993. - V. 100. - № 12. P. 1149-1150.

188. Cichon, M. The timing of breeding and offspring size in Great Tit Parus major L. / M. Cichon, C. Mariusz, M. Linden // Ibis. 1995 - № 3. - P. 364-370.

189. Clarke, P. Developmental cell death: morphological diversity and multiple mechanisms / P. Clarke // Anat. Embriol. 1990. - V. 181. - P. 195-2.

190. Desai, J.H., Embryonic development of pariah kite Milvus migrans go-vinda/ J.H. Desai, A.K. Malhotra // Misc. Repts Ymachina Inst. Ornithol. -1980.-№3.-P. 220-224.

191. Duval, M. Atlas d'embryologie / M. Duval. Paris, 1889. - 116 p.

192. Foo, K.F. A case of alpha-fetoprotein-producing gastric cancer / K.F. Foo, C.K. Tan, K.K. Wong // Ann. Acad. Med. Singapore. 2001. - V. 30. - № 1. -P. 58-61.

193. Goldberg, A. Acid phosphatase activity in human blood cells / A. Goldberg, T. Barka //Nature. 1965. - V. 195. - № 4838. - P.297-299.

194. Hamburger, V. A series of normal stages in the development of the chick embryo / V. Hamburger // J. Morphology. 1951. - V. 88. -Ж 1. - P.49-92.

195. Hamburger, V. Experimental analysis of the dual origin of the trigeminal ganglion in the chick embryo / V. Hamburger // J. Exptl. Zool. 1961. - №4. P. 148-149.

196. Hamilton, T. Sexual stabilization of Miillerian ducts in the chick embryo / T. Hamilton, C. Tung. New-York, 1965. - 368 p.

197. Higgi, K.E. Discrimination of B-, T- and nulelymphocytes by esterase cytochemistry / K.E. Higgi, G.F. Burns, F.G. Hayhoe // Scand. J. Haemat. -1975.-V. 18. P. -437.

198. Inglisa, M. Daily activity at nasts of the European bee eaters (Merops api-aster) / M. Inglisa, P. Galeotti // Ethol. Ecol. and Evol. - 1993. - № 1. - P. 107-114.

199. Jalkanen, S. Immune capacity of the chicken bursectomized et 60 hr of incubation / S. Jalkanen, R. Korpela, K. Granfors // Clin. Immunol. And Im-munopatol. 1984. - № 30. - P. 41-50.

200. Kaplow, L.S. Cytohemistry of leukocyte alkaline phosphatase. Use of complex naphtol AS phosphates in azo-dye coupling techniques / L.S.; Kaplow // Amer. J. Clin. Path. 1963. - № 39. - P. 439.

201. Lukas, F.K. Effect of local environmental condition on nestling growth in the Great Tit Parus major L. / F. K. Lukas, A.J. Noordwijk // Ardea. 1994. - V. 82. - № 2. - P. 349-362.

202. Lemez, L. The blood of chick embryos: Qualitative embryology at a cellular level / L. Lemez // Advan. Morphogenesis. 1964. - № 5 - P. 3-5.

203. Lessels, C.M. Hatching asynchrony in European bee-eaters Merops api-aster / C.M. Lessells // J. Anim. Ecol. 1989. - V. 58. - № 3. - P. 27-31.

204. Liu, Z.M. Iodmelatonin binding sites in the bursa of Fabricius / Z.M. Liu,

205. F. Pang//Endocrinol. 1993. - V. 138. - № 1. - p. 51-57.

206. Magrath, D. The effect of egg mass on the growth and survival of blackbirds: a fiebol experiment / D. Magrath // J. Zool. 1992. - № 4. - P. 639653.

207. Mahoney, S.P. Notes on the egg, embryos snd chick growth of common guillemots Una aalge in Newfoundland / S.P. Mahoney, W. N. Threlfal // Ibis. 1981. - V. 123. - № 2. - P.211-218.

208. Mookerjees, S. Effect of temperature — fasting on the structural organisation of chick embryos / S. Mookerjees / Archiv fur Entwicklungsmechanik der Organismen. 1953. - Bd. 146. - № 4. - S. 537-543.

209. Mothes, T. The cells fetal intestine in tissue culture / T. Mothes, W. Muhle, F. Muller, W. Schmidt // Biomed. biochim., acta. 1985. - V. 44 - № 4. - P. 561-571.

210. Pauksen, K. Serum levels of granulocyte cotiony stimulating factor (G-CST) in bacterial and viral infections in atipycal pneumonia / K. Pauksen, L. Efman, A. Ulfgen // J. Hematol. 1994. - V. 2. - P.256-260.

211. Perrins, C.M. The scort apperent incubation period of the Culkoo / C.M. Perrins // Brit. Birds. 1967. - V. 60. - № 1. - P.51-57.

212. Quaroni, A. Establishment and characterization of intestinal epithelian cell cultures / A. Quaroni, R. May // Meth. Cell. Biol. 1980. - V. 21. - P.403-427.

213. Quinney, Т.Е. Sources of varistion in growth of tree swallows / Т.Е. Quin-ney, J.T. Hussell, C.D. Davison Ankeny // Auk. 1986. - № 2. - P. 389-400.

214. Rahn, H. Gas fluxes in avian eggs: driving forces and the pathway for ex-chane / H. Rahn, C. Paganelli // Сотр. Biochem. And Physiol. A. 1990. -V. 95.-№ 1. - P.1-15.

215. Rogers, S. Weigt loss and eggshell thickness of crane eggs / S. Rogers // Proc. Int. Crane Workshop, Bahatpuk, Febr. 1983. Baraboo (Wise.), -1987.-P. 585-595.

216. Roitt, I. Essential immunology / I. Roitt. Oxford: Blackwell Science, 1994.-448 p.

217. Thomson, P.S. Growth and development of Redshank Tringa tetanus chicks on the Ribble saimarches / P.S. Thomson, M.T. Carty, W.C. Hale // N.W. England Ring and Migr. 1990. - №1.-P. 57-64.

218. Turan, L.S. Beytepe saksagan (Pica pica L.) Larinin kulucka bilojisi / L.S. Turan // Turk Zool. Derg. 1990. - № 3. - P. 318-323.

219. Soler, M. Crecimiento de los grailla (Corvus monufula) relacion entre de-sarrolg у comportamiento pefitorio / M. Soler, J. Soler // Ardeola. 1990. -№ 1. - P. 37-52.

220. Spotila, J.R. Shell resistant and evaporative water loss from bird egg effects of wind speed and egg size / J.R. Spotila, C.J. Weinheimer, C.V. Paganelli // Physiol. Zool. 1981. - V. 54. - № 2. - P. 195-202.

221. Vickery, P.D. Is density an indicator of breeding success? / P.D. Vickery, M.L. Hunter, J.V. Wells // AuK. 1992. - № 4. - P.706-710.

222. Wald, N.J. Maternal serum alpha-fetoprotein screening for open neural tube defects: revised statistical parameters / N.J. Wald, A.K. Hackshaw, H.S. Cuckle // BJOG. 2000. - V. 107 - № 2. - P. 296-298.

223. Wiebe, K.L. Energetic efficiency of reproduction the benefits of asynchronous hatching of American kestrels / K.L. Wiebe, G.R. Bortolotli // J. Anim. Ecol. 1994. - № 3. - P. 3 51 -560.

Информация о работе

Трунова, Анастасия Петровна
кандидата биологических наук
Ставрополь, 2008
ВАК 03.00.30

Диссертация

Особенности развития и иммуногенез куриного эмбриона под влиянием амброзийного антигена - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы