Особенности морфофизиологических показателей эритроцитов белых крыс на этапах онтогенеза в норме и при оксидативном стрессе

Теплый, Дмитрий Давидович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Особенности морфофизиологических показателей эритроцитов белых крыс на этапах онтогенеза в норме и при оксидативном стрессе
ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Особенности морфофизиологических показателей эритроцитов белых крыс на этапах онтогенеза в норме и при оксидативном стрессе"

На правах рукописи

ТЕПЛЫЙ Дмитрий Давидович

ОСОБЕННОСТИ МОРФОФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЭРИТРОЦИТОВ БЕЛЫХ КРЫС НА ЭТАПАХ ОНТОГЕНЕЗА В НОРМЕ И ПРИ ОКСИДАТИВНОМ СТРЕССЕ.

Специальность 03.03.01 - Физиология (Биологические науки)

АВТОРЕФЕРАТ на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 9 МАЙ 2011

Астрахань-2011

4847186

Работа выполнена на кафедре физиологии и морфологии человека и животных Астраханского государственного университета.

Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент

Нестеров Юрий Викторович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Ведущая организация: Ставропольский государственный университет

Защита диссертации состоится «28» «мая» 2011 года в 13:30 часов на заседании объединенного диссертационного совета ДМ 212.009.01 при Астраханском государственном университете по адресу: 414000, г. Астрахань, пл. Шаумяна, 1.

С диссертацией и авторефератом можно ознакомиться в библиотеке Астраханского государственного университета по адресу: 414000, Астрахань, пл. Шаумяна, д.1

Киричук Вячеслав Федорович

доктор биологических наук, профессор Горст Виктор Рудольфович

Автореферат разослан

2011 года.

Ученый секретарь

диссертационного совета, доктор биологических наук

Ю.В. Алтуфьев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования.

Одна из центральных проблем современной биологии - проблема дифференцировки, старения, гибели и замены клеток. Эта проблема непосредственно связана с изучением онтогенеза целого организма и является важнейшим направлением современной биологии старения (Голубев А.Г., 1997; Никитин В.М., 1983; Тодоров И.Н., Тодоров Г.И., 2003; Гончарова Н.Д., Маренин В.Ю. и др., 2008; Teply D.L., 2010).

Среди многочисленных теорий старения одной из ведущих считается свободнорадикальная теория (Emanuel N.V.; Harinan D., 1994). В настоящее время она развивается особенно плодотворно и является ведущей фундаментальной теорией в геронтологии (Гусев В.А., 2000; Анисимов В.Н., 2003). Согласно положениям свободнорадикальной теории старения, активные формы кислорода индуцируют цепную реакцию повреждения биополимеров и служат основным фактором инволюции организма (Зенков Н.К., Кандалинцева Н.В., Ланкин В.З и др. 2003; Меньшикова Е.Б., Зенков Н.К., Ланкин В.З. и др., Субинина Е.Е., 2006).

В соответствии с принятой многими учеными точкой зрения, возрастные особенности окислительного стресса при старении являются следствием ослабления эффективности системы антиоксидантной защиты (Абрамченко В.В., 2001; Хавинсон и др., 2003; и др.). Однако, несмотря на несомненные успехи в изучении эффектов и механизмов действия антиоксидантов, их использование в медицинской и ветеринарной практике носит нередко эмпирический характер, а многие вопросы изучения стресс- и геропротекторного действия антиоксидантов требуют дальнейшего изучения. Недостаточно изучены нарушения конечного звена эритрона - эритроцитов при интенсификации окислительного стресса разного генеза, особенно на позднем этапе онтогенеза.

В последние десятилетия появились исследования, указывающие на особенности морфофизиологических показателей эритроцитов периферической крови на ранних критических этапах постнатального онтогенеза, указывающие на возможность суждения о стадиях онтогенеза по показателям структуры и функции эритроцитов (Войнов В.П., Полюхов A.M., 1986; Леонова В.Г., 1987; Новожилов A.B., Капохин Л.Н., 2008). Между тем, состояние эритроцитов -чувствительных индикаторов изменений нормального хода физиологических, биохимических и биофизических процессов в онтогенезе, особенно позднем, изучены недостаточно.

Взаимосвязь возрастной активации свободнорадикальных процессов с действием экстремальных факторов может оказать существенное влияние на эритроциты, онтогенетические изменения которых представлены в литературе крайне фрагментарно. Между тем, исследование возрастных особенностей структурно-функциональной организации эритроцитов при хроническом действии экстремальных, особенно токсических, факторов, может иметь,

помимо теоретического, диагностическое и прогностическое значение для оценки биологической зрелости и способности организма к адаптации.

В связи с этим представляется актуальным изучение особенностей морфофизиологического состояния эритроцитов на критических этапах онтогенеза, особенно на этапе инволюции, а также при действии экстремальных факторов на примере серосодержащих газовых поллютантов, образующихся при добыче и промышленной переработке газа Астраханского газоконденсатного месторождения. Актуальным представляется и поиск средств эффективной коррекции как инволюционных нарушений структуры и функций эритроцитов, так и нарушений, вызванных хроническим действием сероводородсодержащего газа.

Цель исследования: экспериментальное изучение возрастных особенностей морфофизиологической организации эритроцитов периферической крови белых крыс в норме и при окислительном стрессе, вызванном хроническим действием сероводородсодержащих газовых поллютантов.

Основные задачи исследования:

1. изучить морфофизиологические параметры эритроцитов молодых и старых интактных крыс;

2. исследовать влияние биологического и синтетического антиоксидантов на морфофизиологические параметры эритроцитов интактных молодых и старых крыс;

3. изучить возрастную динамику свободнорадикального окисления и активности катал азы плазмы крови крыс и ее изменение при экстр им альных воздействиях;

4. изучить изменения морфофизиологических параметров эритроцитов молодых и старых крыс, вызванных хроническим воздействием сероводородсодержащего газа;

5. исследовать сравнительные стресс-протекторные эффекты биологического и синтетического антиоксидантов на морфофизиологические показатели эритроцитов молодых и старых крыс, вызванные хроническим действием сероводородсодержащего газа.

Научная новизна

Впервые с применением компьютерной цитофотометрии проведено исследование морфофизиологических показателей функционального состояния эритроцитов периферической крови нелинейных белых крыс на раннем и позднем этапах постнатального онтогенеза. Установлены основные закономерности онтогенетических изменений структуры и функции эритроцитов, имеющие принципиальные различия у молодых и старых животных.

Впервые проведена комплексная оценка морфофункционального состояния эритроцитов у молодых и старых лабораторных животных, подвергнутых хроническому влиянию малых доз промышленных серосодержащих поллютантов, и определены существенные различия в

характере и степени реакции эритроцитов на действие экотоксинов у молодых и старых животных.

Показано, что изменения морфофизиологических показателей эритроцитов, вызванные токсическим действием серосодержащего газа, не являются строго специфичными: подобное действие на эритроциты (по данным литературы) оказывают другие факторы токсической природы, в частности, пероксинитрит и акрилат.

Получены новые данные о принципиальных возрастных различиях действия супрафизиологических доз биоантиоксидантиа 0,Ь,а-токоферолацетата на морфофизиологические показатели эритроцитов и свободнорадикальные процессы крови на молодых и старых животных, менее выраженные у синтетического антиоксиданта эмоксипина.

Теоретическая и практическая значимость

Комплексный подход к анализу возрастной динамики морфофизиологических показателей периферического звена эритрона -эритроцитов с использованием компьютерной цитофотометрии позволяют существенно углубить современные представления о возрастных изменениях эритроцитов на позднем этапе постнатального онтогенеза.

Экспериментальные данные об особенностях возрастной динамики физиологических и морфометрических показателях эритроцитов могут служить объективными показателями старения организма и маркером уровня его адаптивных возможностей.

Результаты исследований указывают на характерную для этапа инволюции развития значительную дестабилизацию мембран эритроцитов, связанную с возрастзависимым увеличением уровня ПОЛ и метаболитов оксида азота.

Ослабление свободнорадикальных процессов антиоксидантами (а-токоферолом и в меньшей мере - эмоксипином) указывает на возможность снижения скорости и степени дестабилизации эритроцитарных мембран и улучшения показателей, характеризующих функциональное состояние эритроцитов на этапе инволюции онтогенеза.

Теоретическое и практическое значение представляют также результаты исследований морфофизиологических показателей эритроцитов при воздействии серосодержащих газовых поллютантов, образующихся при добыче и промышленной переработке Астраханского газоконденсатного месторождения. Особенность этих результатов состоит в обнаружении возрастных особенностей нарушения структуры и функции эритроцитов при хроническом действии малых доз газовых поллютантов и вытекающей отсюда необходимости коррекции этих нарушений.

Выявленные экспериментально способности а-токоферола в дозах, соизмеримых с терапевтическими, (в меньшей степени - эмоксипина) нормализовать морфофизиологические параметры функционального состояния эритроцитов в позднем онтогенезе позволяют предположить возможность их использования в качестве геропротекторов, а также у лиц преклонного

возраста, находящихся под воздействием неблагоприятных производственных условий газоперерабатывающего производства.

Результаты исследований используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторных занятий по физиологии человека и животных, гистологии и биохимии в Астраханском государственном университете и Астраханской государственной медицинской академии, а также в исследованиях Лаборатории экспериментальной физиологии Астраханского государственного университета.

Положения, выносимые на защиту

Возрастзависимые отклонения от физиологического уровня преобладающего числа параметров эритроцитов свидетельствуют об отсутствии стабильности морфофизиологических показателей эритроцитов в позднем онтогенезе, указывая на значительные нарушения газотранспортной функции, особенно выраженной у старых животных при ингаляции серосодержащим газом.

Различия в направленности и степени действия биологического (а-токоферол) и синтетического (эмоксипин) антиоксидантов на периферическое звено эритрона при старении организма определяются особенностями химической природы, соответственно, свойствами фенольного и водорастворимого антиоксидантов, и возрастными отличиями системы «про-и антиоксиданты» микроокружения эритроцитов.

Одним из основных механизмов повреждающего действия сероводородсодержащего газа на эритроциты периферической крови является развитие эндогенной интоксикации, детерминированной совместным действием эндо- и экзогенных прооксидантов, способных экспрессировать синтез оксида азота, особенно на позднем этапе онтогенеза.

Апробация работы: основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научных конференциях Пущинского государственного университета на VI-ой научно-практической конференции «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань-Москва, 2008); на Международной конференции «Экология и жизнь» (Пенза, 2008).

Структура диссертации: диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов и библиографии. Общий объем диссертации (157 с.) с 20 таблицами и 20 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Опыты поставлены на 96 беспородных белых крысах- самцах: молодых (возраст - 180 дней) и старых (820 дней) в соответствии с возрастной классификацией лабораторных крыс (Душкина В.А., 1980; Западнюк И.П., 1983). Животные были разделены на 6 групп соответственно для каждой возрастной группы: 1 - интактные крысы (контроль), 2 - а-ТФ - D,L,a-токоферолацетат - 5% масляный раствор per os в дозе 1 мг /100 г массы тела в течение 14 дней до окончания опытов; 3 - эмоксипин - 1% водный раствор

эмоксипина гидрохлорида внутрибрюшинно в дозе 5 мг/100 г массы тела в течение 14 дней до окончания опытов; 4 - СВСГ - сероводородсодержащий газ ингаляционно в дозе 150 мг/м3 (по H2S); экспозиция 240 мин. в течение 6 недель по 5 дней в неделю; 5- СВСГ + а-ТФ (добавление а-ТФ в течение 14 дней до завершения опытов); 6 - СВСГ + эмоксипин - добавление эмоксипина в течении 14 дней до окончания опытов).

Ингаляционные затравки животных осуществлялись в специальных камерах производства Московского института профзаболеваний им. Эрисмана объемом 200 л на базе кафедры патофизиологии Астраханской государственной медицинской академии. Микроклимат в камере в течение экспериментов поддерживался при температуре 27°С - и влажности в начале эксперимента 64%, в конце - 72-74%.

Изучались следующие гематологические показатели: величина гематокрита - методом центрифугирования в микрокапиллярах, обработанных антикоагулянтом, на специальной микроцентрифуге; определение количества эритроцитов периферической крови - с применением камеры Горяева (Башкиров АЛ. и сотр., 2004); определение содержания гемоглобина с применением гемоглобинцианидного спектрофотометрического метода (Drabicin); вычисление цветового показателя традиционным клиническим методом (Полунин И.Н., Яхьяева Г.З., 1996).

Определяли следующие индексы эритроцитов с помощью методик, применяемых в лабораторной практике (Бондарь Т.П. и сотр., 2007): средний объем эритроцитов (MCV в фл); среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН в пг); среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците (МСНС в г/дл); показатель анизоцитоза эритроцитов (RDW в %).

Определение морфологических и геометрических показателей эритроцитов производили с помощью аппаратно-программного комплекса «МЕКОС-Ц» в программе «Эритроцитометрия» в монослое мазков периферической крови, окрашенных по Гимза-Романовскому, в составе комплекса - тринокулярный микроскоп «NIKON», цифровая фотокамера «Delta-Pix-ЗОО», персональный компьютер.

При анализе геометрических показателей оценивали: средний диаметр эритроцита по формуле S = N/K-1, где N - сумма всех пикселей, составляющих объект, К-1 - коэффициент линейного разрешения (число пикселей на 1 мкм); фактор формы эритроцитов как отношение квадрата диаметра к площади поперечного сечения эритроцита - F = L2/S - характеристика изрезанное™ контура клетки; поляризацию эритроцита (характеристика степени эллиптичности) по формуле - Р*2х (а-в)(а+в), где а - набольшая, в -наименьшая величина диаметра эритроцита, распластанного по стенке; формулу эритроцита (распределение на основные типы: нормальные, обратимо измененные, необратимо измененные, патологические (в у.е.).

Для оценки свободнорадикального окисления и, в связи с этим, степени выраженности липолитических процессов плазмы крови, а также изменения проницаемости мембраны эритроцитов определяли перекисный гемолиз эритроцитов (ПГЭ), используя методику А.А. Покровского и АА. Абрарова

(1964) в модификации А.Е. Лазько и сотр. (1993); перекисное окисление липидов плазмы крови по методу И.Д. Стальной и Т.Г. Гаришвили (1977) в модификации Е.А. Строевой и В.Г. Макаровой (1986); определение уровня оксида азота по методу В.А. Метельской и Н.Г. Гумановой (2005). С целью оценки стресс-реактивности использовалась эозинопеническая проба Торна (Ронин B.C., Старобинец Г.М., 1989). Активность каталазы плазмы крови определяли по методу М.А. Королюк и сотр.,(1998).

Для анализа экспериментального материала использовали методы статистической оценки данных с применением пакета статистических программ Microsoft Exel, BIOSTAT 5.1, предназначенного для медико-биологических исследований с использованием критериев t/P Стьюдента (Рафализ-Ламарка Э.Э., 1971; Лакин Г.Ф., 1990).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При сравнении возрастной динамики количества эритроцитов периферической крови крыс найдено их увеличение у старых животных на 37% в сравнении с молодыми (Р<0,001, табл. 1). Эритроцитоз, характерный для позднего онтогенеза, может бьггь следствием компенсаторного усиления эритропоэза и выходом в периферическое русло крови клеток со значительно меньшим индивидуальным объемом (Р<0,001), что и наблюдалось в наших опытах, а также повышенным гемолизом эритроцитов при старении (Р<0,01 в сравнении с молодыми), индуцированным усилением свободнорадикальных процессов, характерных для этапа инволюции. Значительное уменьшение объема эритроцитов при старении компенсируется ростом их концентрации в крови, что, в какой-то мере, способствует поддержанию общей дыхательной поверхности циркулирующей крови. Как известно (Khausari N. et al.,1983), удаление неполноценных клеток из крови - генетически контролируемая программа. В связи с этим при старении, возможно, имеет место не только выраженное старение эритроцитов, но и недостаточно эффективное удаление дефектных клеток из периферического русла крови (Войтенко В.П., 1984).

Изучение степени анизоцитоза показало несколько большую гетерогенность размеров эритроцитов у старых крыс в сравнении с молодыми и значительное (втрое) увеличение аномальных форм эритроцитов у старых животных.

Старение организма не сказалось на общем уровне гемоглобина крови, однако у старых крыс среднее содержание гемоглобина (МОТ) и средняя концентрация гемоглобина в клетке (МСНС) значительно уменьшились в сравнении с молодыми животными (Р<0,001), что свидетельствует о развитии гипохромии, вызванной нарушением синтеза гемоглобина (Бондарь Т.П. и сотр., 2007). Это подтвердилось и данными о некотором снижении у старых крыс величины гематокрита (на 15-20% в сравнении с молодыми животными).

Гематологические показатели при действии СВСГ и антиоксидангов у молодых и старых крыс.

Таблица 1

Метод Характер воздействия

Молодые Старые

Контроль СВСГ а-ТФ а-ТФ + СВСГ ЭМ ЭМ + СВСГ Контроль СВСГ а-ТФ а-ТФ + СВСГ ЭМ ЭМ + СВСГ

нет (%) 37,81 ± 0,395 39,80*** ± 1,933 35,06** ± 0,601 37,63" ± 0,906 37,38 ± 0,327 ...*** 41,40 ± 0.466 43,13ааа ± 0,641 37,25** ± 0,707 7,23*** ± 0,548 **. 39,38 ± 0,756 23,18*** ± 1,626 38,75 0,567

1ШС (1(Р/л) 6,42 ± 0,065 7,05* ± 0,223 5,48** ± 0,226 6,65» ± 0,095 6,27 ± 0,440 7,3 ± 0,546 8,8 а ▲▲ ± 0,014 4,98* ** ± 0,132 8,70* ± 0,038 7,21** ± 0,189 8,60*** ± 0,015 6,97 0104

НОВ (г/л) 14,34 ± 0,533 15,42* ± 0,094 15,55* ± 0,327 16,45**« ± 0,340 15,27 ± 1,226 14,81 ± 0,525 14,78 ± 0,164 10,95*** ± 0,314 13,73 ± 0,553 12,94***— ± 0,112 11,59 ± 1,529 *** 11,60 0145

ЦП 1.19 1,12 1,51 1,32 1,3 1,05 0.89 1.17 0,84 0,96 0,72 0,88

М>\У(%) 12,65 6,20 8,34 9,93 15,53 17,38 14,25 9,34 5,95 16,25 8,57 6,96

МСУ (фл) 58,8 ± 1,50 56,38 ± 1,061 64,45* ± 1,901 56,72 ± 1,992 61,23 ± 3,365 58,02 ± 4,501 49,02 а А ± 2,472 75,22*** ± 2,507 48,86 ± 1,028 54,91***»" ± 1,966 41,95* ± 1,292 *... 55,72 1,199

мснс (г/дл) 38,08 ± 1.267 39,41 ± 1.635 44,41** ± 1,119 43,82**" ± 0.866 40,86 ± 0,542 35,91» ± 1,008 34,34а ± 0.669 29,45*** ± 0,945 32,42 ± 1.316 32,95" ± 0,743 32,50 ± 2,909 ***30,11 ± 0.668

мен (пг) 22,36 ± 0,808 22,11 ± 1,272 28,56*** ± 0,847 24,32 ± 0,824 26,26* ± 0,989 21,05 ± 2,612 16,86а А А ± 0,264 22,03*** ± 0,583 15,77* ± 0,470 •••18,05 ± 0,436 13,55* ± 1,087 ••• 16,96 ± 0,437

пгэ (%) 3,97 ± 0,130 4,96*** ± 0,061 4,31* ± 0,030 4,23*— ± 0,040 4,15 ± 0,036 4,12 ± 0,086 4,6 а А ± 0,155 7,23*** ± 0,548 2,44*** ± 0,211 •**5,59 ± 0,268 5,31** ± 0,162 6,2* ± 0,595

Р<0,05, **Р<0,01, ***Р<0,001-в сравнении с контролем; а-Р<0,05, а аР<0,01, А А жР<0,001; --возрастные различия в сравнении с СВСГ

Результаты экспериментов показали наличие слабой корреляции между количеством эритроцитов (ЛВС) и их индивидуальным объемом (МСУ): у молодых крыс г = +0,21, у старых - г = -0,10, что соответствует корреляции между ИБС и МСУ у взрослого человека (Шмаров ДА. и сотр., 2002).

Изучение возрастной динамики адаптивных возможностей выявило эозинофилию у старых крыс (Р<0,05 - на 25% выше в сравнении с молодыми животными), что свидетельствует о возрастном снижении стресс-реактивности, связанном с возможным возрастзависимым ослаблением секреторной активности надпочечников (Агаджанян Н.А. и сотр., 1998; Телль Л.З. и сотр., 2007).

Известно, что основной мишенью активных кислородных метаболитов, уровень которых возрастает при старении, является мембрана эритроцитов (Краснов А.Ф. и сотр., 1978, Войтенко В.П., 1984). В наших экспериментах уровень перекисного гемолиза эритроцитов у старых крыс оказался значительно большим, чем у молодых (Р<0,01), что указывало на возрастное истощение антиоксидантной системы эритроцитов и их микроокружения. При определении активности каталазы плазмы крови обнаружили понижение активности ферментного антиоксиданта в плазме крови у старых животных (Р<0,05).

Найденные изменения активности каталазы сочетались с возрастной динамикой показателей ПОЛ и метаболитов оксида азота. У молодых крыс исходный уровень МДА плазмы крови был вдвое ниже уровня МДА старых крыс (Р<0,01) (рис. 1). Те же изменения характерны и для скорости аскорбатзависимого и спонтанного ПОЛ (Р<0,001 в обоих случаях). Полученные данные свидетельствуют также о повышении концентрации и суммарных метаболитов N0 (Р<0,001). Сходные данные были получены ранее другими авторами (Янькова В.И., Иванова ИЛ., 2003).

При характеристике онтогенетических особенностей морфометрических показателей эритроцитов были найдены существенные возрастные различия количества аномальных форм эритроцитов: у молодых крыс - 2.44%, у старых -8.40%. Такая ситуация характерна для условий напряжения эритропоэза, формирующегося при усилении гемолиза эритроцитов (Новицкий В.В. и сотр., 2004) и усиления свободнорадикальных процессов в позднем онтогенезе. По мнению других авторов (Черницкий Е.А., Воробей А.И., 1981) в механизме увеличения аномальных форм эритроцитов участвует снижение внутриклеточной АТФ (АТФ-зависимые системы). Характерно, что заметно больший процент аномальных клеток у старых крыс представляли сфероциты, появление которых в крови связано с изменением содержания спектрина, приводящего к нарушению устойчивости эритроцитарных мембран (Зинчук В.В., 2001).

Результаты морфометрических исследований не выявили существенных отклонений от нормы ни одного из геометрических показателей. Однако у старых крыс существенно увеличилась площадь эритроцитов (Р<0,001), средний диаметр (Р<0,001), отмечены некоторые изменения уровня поляризации. Увеличение среднего диаметра эритроцитов определило

Молодые

нМоль/ч

Исходный Уровень МДА

Скорость

Скорость спонтанного ПОЛ аскорбат-зависимого ПОЛ

Старые

Исходный Уровень МДА . _„ Скорость

Скорость спонтанного ПОЛ аскорбат-зависимого ПОЛ

Рис.1 Возрастные особенности уровня свободнорадикальных процессов крови интактных крыс получавших антиоксиданты.

- Контроль

•а-ТФ

• Эмоксипин

' - в сравнении с контролем ь - возрастные различия

обратную корреляцию между этим показателем и средним объемом эритроцитов при старении (г = -0.71). Старение способствовало некоторому уменьшению эластичности эритроцитов ( у молодых крыс -0.091+0.015 у.е.; у старых - 0.072 + 0.017 у.е.).

Анализ эффектов антиоксидантов обнаружил возрастные различия ряда морфофизиологических показателей эритроцитов и уровня свооднорадикальных процессов их микроокружения (табл.1). У молодых крыс а-токоферол способствовал развитию эритропении (Р<0,01), не оказав значимого влияния на число эритроцитов у старых крыс. При действии на организм эмоксипина число эритроцитов не отличалось от контрольных показателей вне зависимости от возраста животных.

Эритропенический эффект а-токоферола у молодых крыс сопровождался достоверным ослаблением перекисной резистентности эритроцитарных мембран (Р<0,05), а у старых - оставался на уровне контроля. При анализе этих результатов было учтено то обстоятельство, что подвижное равновесие ПОЛ и активности антиоксидантов в состоянии физиологического покоя смещено вправо - состояние, характерное для ранних этапов постнатального онтогенеза. При этом с неизбежностью образуется феноксильный радикал а-токоферола, не оказывающий существенного прооксидантного эффекта, однако накопление этих радикалов при значительном превышении физиологического уровня антиоксиданта способствует проявлению его выраженного прооксидантного действия (Ланкин В.З и сотр., 2001, Барабой В.А., 2001, Зенков Н.К и сотр., 2003). Следствием такого превышения концентраций а-токоферола у молодых крыс стало развитие перекисного гемолиза эритроцитов.

Под влиянием а-токоферола вариабельность размеров эритроцитов уменьшилась у молодых крыс (ШЖ = 8,34% ) и в большей степени у старых (Я1Ж = 5,05%). Тот же эффект у старых животных оказал эмоксипин.

Воздействие антиоксид антами привело к увеличению общего уровня гемоглобина у молодых крыс и его уменьшению у старых животных (Р<0,01 в обоих случаях). В этих условиях добавочные дозы а-токоферола способствовали увеличению среднего содержания и средней концентрации гемоглобина в эритроците (Р<0,001 и Р<0,01 соответственно), а у старых животных те же показатели уменьшились (МСН - Р<0,05, а МСНС -незначительно). Аналогичные по направленности, но менее выраженные по степени изменения МСН и МСНС произошли под влиянием эмоксипина.

Под влиянием как биологического, так и синтетического антиоксидантов сформировалась не характерная для интактных молЬдых и старых животных сильная отрицательная корреляция между количеством эритроцитов и их индивидуальным объемом (ЯВС - МСУ).

Среди физико-химических факторов старения немалое значение придается свободнорадикальному окислению (Ыо^сЫ N. Мп Е.,2000; Хавинсон В.А. и сотр., 2003; Анисимов В.Н., 2008). С учетом этого обстоятельства было исследовано влияние антиоксидантов на активность каталазы и свободнорадикальных процессов плазмы крови молодых и старых животных. Под влиянием антиоксидантов активность каталазы не претерпела

существенных изменений у молодых крыс, а у старых - значительно уменьшилась (Р<0,001). Изменения каталазы в определенной степени сочетались с возрастной динамикой свободнорадикальных процессов крови. Так, добавление а-токоферола не изменило уровня ПОЛ плазмы крови молодых животных.

В отличие от а-токоферола, эмоксипин достоверно увеличил скорость кинетических показателей ПОЛ. Вероятно, антиоксидантные возможности эмоксипина оказались сильнее, чем у а-токоферола, и эмоксипин при достаточном физиологическом уровне антиоксидантной защиты у молодых животных проявил гиперантиоксидантное действие.

В тех же условиях а-токоферол при действии на старых крыс резко уменьшил уровень МДА и величину кинетических показателей ПОЛ (Р<0,001) и значительно уменьшил уровень метаболитов оксида азота (Р<0,05), что свидетельствует о формировании при старении дефицита антиоксидантной защиты (Воскресенский О.Н. и сотр., 1962; Янькова В.И., Иванова И.Л., 2003).

Значительное уменьшение числа сфероцитов у старых животных под влиянием а-токоферола служит доказательством стабилизации эритроцитарной мембраны с учетом возрастного дефицита антиоксидантов.

Выраженные возрастные изменения под влиянием эмоксипина проявились в прооксидантном характере действия синтетического антиоксиданта на молодых животных. Так, число деформированных клеток возросло в 1,5 раза, эхиноцитов - в 5 раз, сфероцитов и каплевидных форм - в 2 раза в сравнении с контрольными значениями. Однако, при действии на старых крыс эмоксипин проявил четкий антиоксидантный эффект - вдвое уменьшилось число предгемолигических форм и полностью отсутствовали деформированные эритроциты.

Различия в действии антиоксидантов разной природы определяются, очевидно, различием химической структуры и, соответственно, свойств обоих антиоксидантов. Литературные данные не содержат сведений об эффектах эмоксипина на лабораторных животных, что осложняет интерпретацию его эффектов на живые системы, в том числе на эритроциты.

Воздействие антиоксидантами способствовало существенному приближению величины всех изучаемых геометрических показателей старых животных к величине аналогичных показателей у молодых крыс, что указывает на участие интенсификации процессов свободнорадикального окисления при старении как одной из основных причин формирования патологических форм эритроцитов.

Далее полученные результаты отличались рядом возрастных особенностей как в отношении концентрации эритроцитов (ЯВС), так и гематокрита (НСТ) и объема клеток (МСУ): у молодых животных СВСГ привел к эритроцитозу (Р<0,001) и увеличению НСТ, некоторому уменьшению МСУ, увеличению общего содержания гемоглобина (НОВ) и изменению других показателей. В популяции эритроцитов старых животных общее количество эритроцитов, напротив, существенно уменьшилось (Р<0,001), как и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците (МСН) (Р<0,001), а

индивидуальный объем эритроцитов (МСУ) резко возрос (на 53% в сравнении с контролем - Р<0,001). Эти данные свидетельствуют о значительном нарушении газотранспортной функции эритроцитов и гемоглобинсинтезирующих процессов эритроидных элементов костного мозга (Степовая Е.А. и сотр., 1994; Осипенко М.Д., 2009).

Коррекция антиоксвдантами эффектов СВСГ вне зависимости от возраста способствовала значительному приближению показателей ЛВС, НСТ и НвВ крови к аналогичным контрольным значениями. Менее выраженный эффект оказал эмоксипин.

Результаты анализа корреляционных отношений между МСУ и ЛВС у молодых крыс при действии СВСГ демонстрируют формирование слабой положительной корреляции (г=0,33). В тех же условиях у старых крыс обозначилась высокая отрицательная взаимосвязь (г= -0,82). Действие антиоксидантов сформировало высокую отрицательную корреляцию у молодых и сохранило ее значение у старых животных. Изучение степени анизоцитоза (ЫЖ) у крыс, подвергшихся действию СВСГ, показало на уменьшение этого показателя, особенно у молодых крыс - на 51%, у старых - на 45%. Воздействие а-токоферолом приблизило уровень МЖ к величине контрольных показателей. У старых животных эмоксипин не оказал защитного действия.

Под влиянием СВСГ у молодых крыс общий уровень гемоглобина увеличился (Р<0,01). Показатели МСН и МСНС изменились незначительно. В тех же условиях у старых крыс СВСГ резко уменьшил содержание НОВ (Р<0,001) и способствовал увеличению МСН и МСНС (Р<0,001) в обоих случаях).

При действии на молодых крыс а-токоферол оказал выраженное протекторное действие: уровень НвВ увеличился в сравнении с аналогичным показателем у крыс группы СВСГ (Р<0,05). Столь же направленно а-токоферол проявил себя в отношении показателей МСН и МСНС (Р<0,01 и Р<0,001 соответственно). Менее выраженное защитное действие оказал эмоксипин.

Морфофизиологические изменения эритроцитов у старых крыс и их особенности в условиях эндотоксикоза, вызванного ингаляцией СВСГ, в значительной мере определяются нарушением фосфолипидного состава эритроцитарных мембран, вызванного интенсификацией свободнорадикальных процессов.

Полученные данные свидетельствуют об усилении под действием газа перекисного гемолиза эритроцитов (ПГЭ) у молодых (на 15%) и особенно у старых животных (на 57%) в сравнении с контрольными показателями (Р<0,01). Четкий защитный эффект антиоксиданты проявили только у старых крыс, приблизив уровень ПГЭ к контрольному. В исследованиях, проведенных ранее Р.И. Асфандияровым и сотр. (1995), у рабочих разных возрастных групп (не старых) авторы пришли к заключению, что по мере увеличения возраста и особенно длительности контакта с СВСГ, происходит постепенное истощение эритрона, сопровождающееся ухудшением морфофункциональных показателей мембран эритроцитов. Постепенное истощение эритрона при контакте с газом

у людей трех возрастных групп, вызванное, в частности существенным ослаблением резистентности эритроцитарных мембран к гемолитикам, наблюдали ранее А.Е. Лазко и сотр. (2003) и В.И.Бойко с сотр., (2001), а также, в опытах на половозрелых крысах (Тризно H.H. и сотр., 2005)

Одним из существенных повреждающих механизмов действия серосодержащего газа является усиление цепного свободнорадикального окисления различных структур клеточных образований (Горбатенко Е.А., 1991; Тризно H.H. и сотр., 2005).

Сравнение действия СВСГ на показатели свободнорадикального окисления крови молодых и старых животных показало на явные возрастные различия: так, у молодых крыс все изучаемые показатели СРО увеличились вдвое в сравнении с контролем, в то время как у старых животных аналогичный эффект проявился только в отношении уровня МДА и скорости спонтанного ПОЛ. Полученные результаты подтверждают данные о большей экосенситивности эритрона в неполовозрелом возрасте, его относительной устойчивости в зрелом и разбалансированности процессов саморегуляции эритропоэза в старческом возрасте (Туликова З.А., 1997).

а-Токоферол и эмоксипин оказали выраженное протекторное действие, достоверно снизив уровень ПОЛ крови вне зависимости от возраста животных, но более выражено у молодых крыс.

Полученные данные свидетельствуют о повышении концентрации суммарных метаболитов NO в крови животных, подвергнутых действию СВСГ (Р<0,001) и защитном действии антиоксидантов, более выраженном у старых животных.

Действие СВСГ значительно уменьшило активность каталазы крови вне зависимости от возраста животных: (Р<0,01 - молодые; Р<0,001 - старые). Применение антиоксидантов ослабило действие газа на синтез каталазы крови вне зависимости от возраста животных (Р<0,01).

Оценка морфологии эритроцитов играет важную роль в анализе изменений функционального состояния эритроцитов и распознавании патогенетического варианта, в том числе в анализе гипоксического состояния, вызванного воздействием СВСГ. Такое воздействие в наших опытах вызвало уменьшение уровня дискоцитов вне зависимости от возраста (у молодых - на 22%, у старых крыс - на 18% в сравнении с контролем). В 4,7 раза возросло количество обратимо- и необратимо измененных форм эритроцитов у молодых крыс и в 4 раза - у старых. При этом в 12 раз (в сравнении с контролем) возросло количество эхиноцитов у молодых и появились эхиноциты в крови старых крыс. Таким образом, при действии индукторов окислительного стресса - газовых поллютантов АГКМ в плазме крови(особенно молодых животных) происходят существенные биохимические изменения, сопровождающиеся усилением свободнорадикальных процессов, что, по-видимому, приводит к нарушению процессов энергоснабжения эритроцитов. В результате образуются кренированные формы - эхиноциты, обладающие выраженной деформируемостью (Козинец Г.И., 1998).

Следует особо подчеркнуть большую, чем у старых животных реактивность крови молодых крыс к действию СВСГ, что, вероятно, связано с менее зрелыми механизмами адаптации к действию неблагоприятных факторов и менее выраженными компенсаторными возможностями эритропоэза на ранних этапах постнатального онтогенеза. Это нашло подтверждение в развитии более выраженной у молодых крыс эозинопении под влиянием СВСГ (у молодых - 262,4+10,11, в контроле - 395,0+15,64, Р<0,01; у старых -415+21,06, в контроле -495,1+30,62, Р<0,05).

В формуле эритроцитов у старых животных при сочетанном действии СВСГ и антиоксидантов обнаружилось увеличение числа дискоцитов на 18,7% под влиянием а-токоферола и на 34,4% - эмоксипина. Эффективность действия антиоксид антов проявилась и по отношению к необратимо измененным формам эритроцитов: под влиянием а-токоферола их число уменьшилось на 47,4%, а эмоксипина - на 54,6%. Кроме того, обнаружилась тенденция к уменьшению обратимо измененных форм эритроцитов под влиянием а-токоферола на 30%, а эмоксипина - на 85%.

Экспериментально при остром и хроническом действии СВСГ убедительно доказан мембраностабилизирующий эффект а-токоферола и ионола, но преимущественно на показатели эритропоэза (Сеттсо Н.П., 1986; Полунина О.С., 2000; Осипенко М.Д. 2009; и др.). Наши исследования подтвердили результативность применения антиоксид антов в качестве протекторов нарушения баланса про- и антиоксид антов (как одного из важных механизмов токсического действия СВСГ на эритрон), но выявили также возрастные особенности нормализации формы эритроцитов и особенности стресспротекторного действия биологического и синтетического антиоксид антов.

Анализ изменений геометрических показателей функционального состояния эритроцитов и их изменений под влиянием серосодержащего газа проведенный с помощью аппаратно-программного комплекса МЕКОС-Ц, показал значительное увеличение площади эритроцитов (Р<0,01) без существенных изменений других геометрических показателей у молодых животных. В тех же условиях у старых крыс под действием СВСГ значительно уменьшились площадь эритроцитов (Р<0,001), средний диаметр (Р<0,01) и поляризация клеток (Р<0,01). При этом фактор формы значительно превзошел тот же показатель у молодых крыс (Р<0,01) (рис. 2)

а-Токоферол не оказал корригирующего действия на величину площади эритроцитов у молодых крыс, измененную под действием СВСГ, а у старых крыс достоверно уменьшил уровень изрезанности контура эритроцитов в сравнении с теми же показателями у животных, подвергшихся действию СВСГ (Р<0,01).

Молодые

мкм2

Площадь

Средний диаметр

Фактор формы

Поляризация

Старые

Средний диаметр

Фактор формы

Поляризация

Рис 2. Влияние антиоксидантов, СВСГ и их сочетаний на средние геометрические показатели эритроцитов молодых крыс.

* - в сравнении с контролем; • - в сравнении с СВСГ ■-Контроль | !- а-ТФ Щ- СВСГ (¡Я-а-ТФ+СВСГ

-Эмоксипин |!§|- Эмоксипин+СВСГ

Более результативно проявилось действие эмоксипина: у молодых животных эмоксипин способствовал нормализации эллиптичности клеток (Р<0,05), а у старых - значительно ослабил негативные последствия от действия СВСГ на геометрические показатели эритроцитов.

Таким образом, результаты исследований свидетельствуют о возрастзависимых отклонениях от физиологического уровня преобладающего числа исследованных морфофизиологических параметров функционального состояния эритроцитов периферической крови, указывая на отсутствие стабильности этих показателей в позднем онтогенезе, на значительные нарушения газотранспортной функции эритроцитов и гемоглобинсинтезирующих процессов, особенно четко выраженных при ингаляции животных сероводородсодержащим газом.

Результаты свидетельствуют о возрастзависимой степени коррекции антиоксидантами старческих изменений периферического звена эритрона и нарушений, вызванных газовыми поллютантами особенно у старых животных и большей стабильности антиоксидантного действия а-токоферола в сравнении с эмоксипином.

ВЫВОДЫ

1. При старении обнаружены изменения морфофизиологических показателей эритроцитов, характерные для микроцитарной анемии: увеличение гематокрита, числа эритроцитов, уменьшение индивидуального объема клеток, среднего содержания и средней концентрации эритроцитов при сохранении общего уровня гемоглобина, увеличение количества аномальных форм и геометрических показателей эритроцитов, рост анизоцитоза.

2. У молодых животных а-токоферол понижает гематокрит, уменьшает число и увеличивает индивидуальный объем эритроцитов, способствует увеличению патологических форм и степени перекисного гемолиза эритроцитов, проявляя тем самым гиперантиоксидантное действие.

3. У старых крыс а-токоферол оказывает характерное антиоксидантное действие, приближая величину исследованных морфофизиологических показателей к уровню интактных молодых животных.

4. Синтетический антиоксид ант - эмоксипин - существенно не изменяет большую часть исследованных показателей эритроцитов молодых крыс, а у старых оказывает прооксидантное действие, проявляющегося в формировании анемии и повышении проницаемости эритроцитарных мембран.

5. Снижение стабильности эритроцитарных мембран у старых животных связано с возрастной интенсификацией свободнорадикальных процессов в плазме крови (показателей ПОЛ и метаболитов оксида азота), а-Токоферол снижает уровень свободнорадикальных процессов. Менее выраженное, но аналогичное действие оказывает эмоксипин.

6. Вне зависимости от возраста серосодержащие газовые полтотанты проявляют токсическое действие, повышая активность катал азы и свободнорадикальные процессы в крови.

7. Хроническое воздействие малыми дозами серосодержащего газа формирует возрастзависимые изменения эритроцитов: у молодых животных - эритроцитоз, рост гематокрита и общего содержания гемоглобина, значительное уменьшение площади и поляризации эритроцитов; у старых - эритропению, микроцитоз с уменьшением степени насыщения клеток гемоглобином, нарушение геометрических показателей и увеличение патологических форм эритроцитов.

8. Антиоксиданты (значительнее а-токоферол) оказывают стресс-протекторное действие на эритроциты животных, подвергшихся интоксикации, существенно приближая величину морфофизиологических показателей эритроцитов к контрольному уровню вне зависимости от возраста животных, но стабилизируя мембрану эритроцитов только у старых крыс.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Мажитова М.В., Теплый Д.Д. Возрастные и половые особенности свободнорадикальных процессов и антиоксидантной защиты плазмы крови белых крыс // Журнал естественные науки.-2010.- №193.- с.79-85

2. Мажитова М.В., Теплый Д.Д., Тризно H.H. / Влияние сероводородсодержащего газа Астраханского месторождения на содержание конечных метаболитов N0 и уровня малонового диальдегида в плазме крови белых крыс // Материалы 6-ой научно-практической конференции «Достижения фундаментальной науки в решении актуальных проблем медицины». -Астрахань - Москва - 2008.-Т.З, №3.- с. 261-263.

3. Мажитова М.В., Теплый Д.Д., Теплый Д.Л., Тризно H.H., Карнеева Д.В., Ходарина O.A. / Модуляция перекисного окисления липидов в разных отделах ЦНС под воздействием сероводородсодержащего газа // -Материалы 15-ой Международной конференции «Экология и жизнь». -Пенза. 2008.- с. 32-34.

4. Теплый Д.Д. / Возрастные особенности эритроцитов периферической крови белых крыс и реакции на действие биологических и синтетических антиоксидантов // Журнал «Естественные науки».-2009.- №3(28). - с. 143152.

5. Теплый Д.Д. / особенности морфологических показателей эритроцитов белых крыс на раннем и позднем этапах онтогенеза // Журнал «Естественные науки»- 2011, №1.(34) с. 139-143.

6. Теплый Д.Д. Влияние природного газа сероводорода на эритроцитарные показатели самцов половозрелых белых крыс при коррекции витамином Е / Д.Д. Теплый, О.Н. Позднякова // 12-ая Пущинская научная школа-конференция молодых ученых, (Пущино, 10-14 ноября 2008 года). Сборник тезисов. - Пущино, 2008. - С. 153-154.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

RBC - эритроциты

HGB - гемоглобин

HCT - гематокрит

MCV - средний объем эритроцита

МСН - среднее содержание гемоглобина в эритроците

МСНС - средняя концентрация гемоглобина в эритроците

EOS - эозинофилы

RDW - анизоцитоз

ЦП - цветной показатель

ЦНС - центральная нервная система

ПОЛ - перекисное окисление липидов

МДА - малоновый диальдегид

ПГЭ - перекисный гемолиз эритроцитов

а-ТФ - а-Токоферол

ЭМ - эмоксипин

СВСГ - сероводородсодержащий газ СРО - свободнорадикальное окисление N0 - оксид азота

Заказ № 2382 Тираж 100 экз.

_Уч-изд. л. 1,3. Усл. печ. л. 1,2_

Оттиражировано в Издательском доме «Астраханский университет» 414056, г. Астрахань, ул. Татищева, 20 Тел. (8512) 48-53-47 (отдел маркетинга), 48-53-45 (магазин); тел. 48-53-44, тел./факс (8512) 4&53-46 E-mail: asupress@yandex.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Теплый, Дмитрий Давидович

МСНС - средняя концентрация гемоглобина в эритроците

EOS - эозинофилы

RDW - анизоцитоз

ЦП — цветной показатель

ЦНС — центральная нервная система

ПОЛ - перекисное окисление лип идо в

МДА - малоновый диальдегид

ПГЭ - перекисный гемолиз эритроцитов а-ТФ - а-Токоферол

ЭМ - эмоксипин

СВСГ - сероводородсодержащий газ СРО - свободнорадикальное окисление N0 - оксид азота

СВСГ - сероводородсодержащий газ

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1.Современные представления о структуре и функциях эритроцитов.

1.2.Морфофизиологические изменения эритроцитов в онтогенезе.

1.3.Структура и функции эритроцитов при действии на организм экстремальных факторов.

1.4.Морфофизиологические изменения эритроцитов периферической крови, вызванные сероводородсодержащими газовыми поллютантами.

ГЛАВА 2.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ГЛАВА 3.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1 Возрастные особенности морфофизиологических показателей эритроцитов белых крыс и их реакции на супрафизиологические дозы антиоксидантов.

3.1.1. Показатели морфофункционального состояния эритроцитов периферической крови белых крыс на разных этапах постнатального онтогенеза и особенности их реакции на антиоксиданты разной природы.

3.1.2. Возрастные особенности перекисного гемолиза эритроцитов, свободнорадикальных процессов и уровня каталазы плазмы крови молодых и старых животных.

3.1.3. Возрастные особенности морфометрических показателей функционального состояния эритроцитов в норме и под влиянием антиоксидантов.

3.2. Онтогенетические особенности морфофизиологических показателей эритроцитов, вызванные хроническим воздействием сероводородсодержащего промышленного газа и их коррекция антиоксидантами.

3.2.1 Особенности морфофизиологических показателей эритроцитов и плазмы крови Молодых и старых белых крыс, подвергшихся действию серосодержащего газа.

3.2.2 Перекисный гемолиз эритроцитов и свободнорадикалъные процессы в крови молодых и старых крыс, подвергшихся действию

СВСГ.

3.2.3 Возрастные особенности морфометрических показателей эритроцитов молодых и старых крыс, подвергшихся действию СВСГ.

3.2.4 Возрастные особенности геометрических показателей эритроцитов молодых и старых крыс, подвергшихся действию серосодержащих газовых поллютантов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Особенности морфофизиологических показателей эритроцитов белых крыс на этапах онтогенеза в норме и при оксидативном стрессе"

Одной из центральных проблем современной биологии является проблема дифференцировки, старения, гибели и замены клеток. Эта проблема непосредственно связана с изучением онтогенеза целого организма и является важнейшим направлением современной биологии старения (Голубев А.Г., 1997; Никитин В.М., 1983; Тодоров И.Н. и Тодоров Г.И., 2003, Котельников A.B. и Теплый Д.Л., 2005; Гончарова Н.Д., Маренин В.Ю. и др., 2008).

Среди различных многочисленных теорий старения одной из ведущих считается свободнорадикальная теория старения (Emanuel N.V. et all., 1985; Harman D., 1994). В настоящее время эта теория развивается особенно плодотворно и является ведущей фундаментальной теорией в геронтологии (Гусев В.А., 2000; Анисимов В.Н., 2003). Согласно основным положениям свободнорадикальной теории старения, активные формы кислорода индуцируют цепную реакцию повреждения биополимеров и служат основным фактором инволюции организма (Зенков Н.К., Кандалинцева Н.В., Панкин В.З. и др., 2003; Дубинина Е.Е., 2006; Меньшикова Е.Б, Зенков Н.К., Ланкин В.З. и др. (2003); Teply D.L., 2010).

Согласно принятой многими учеными точке зрения, возрастные особенности окислительного стресса при старении являются следствием ослабления эффективности системы антиоксидантной защиты, что приводит к неконтролируемому увеличению генерации оксидантов. Вместе с тем, согласно гипотезе Е.В. Терещиной (2007), окислительный стресс возникает не вследствие возрастного снижения антиоксидантной защиты, а из-за возрастного увеличения генерации прооксидантов, с которыми антиоксиданты «не в состоянии справиться». Однако работы, указывающие на то, что при старении в организме происходит снижение содержания витаминов-антиокислителей (Arockia-Rani, PJ. Panneerscivam С., 2001), служат еще одним веским основанием для широкого применения витаминов -антиоксидантов в медицинской практике (О.С. Полунина, Г.А.Трубников, A.A. Резаев, 2000; В.В. Абрамченко, 2001; Шанин Ю.Н, Шанин В.Ю, Зиновьев Е.В, 2003; В.З. Панкин, А.К. Тихазе, Ю.Н. Беленков, 2003; В.Х. Хавинсон, и др., 2003 и др.).

Несмотря на несомненные успехи в изучении эффектов и механизмов действия природных и синтетических антиоксидантов, их использование в медицинской и ветеринарной практике носит нередко эмпирический характер, а многие вопросы изучения стресс-протекторного и геропротекторного действия требуют дальнейшего изучения, особенно на клеточном уровне. Недостаточно изучены нарушения функционального состояния конечного звена эритрона - эритроцитов при интенсификации окислительного стресса разного генеза. Ведущая роль в развитии этих изменений отводится возрастным особенностям функционирования организма, особенно на этапе инволюции.

В последние десятилетия появились исследования, отмечающие особенности морфофизиологических показателей эритроцитов периферической крови преимущественно на ранних, критических этапах онтогенеза (Войнов В.П., Полюхов A.M., 1986; Леонова В.Г., 1987; Новожилов A.B., Катюхин JI.H. 2008, Леонова В.Г.) в известной монографии «Анализ эритроцитарных популяций в онтогенезе человека» пришла даже к заключению о возможности судить о стадии онтогенеза человека по отдельным показателям структуры и функции эритроцитов. Все чаще появляются работы, посвященные изучению возрастных особенностей лейкоцитов крови (Пименов Ю.С. и др., 2006; Кондурцев В.А. и др., 20072010). Между тем, состояние структурно-функциональных субъединиц системы газопереноса - эритроцитов - чувствительных индикаторов изменений нормального хода физиологических, биохимических и биофизических процессов - в онтогенезе изучены недостаточно. В настоящее время достаточно хорошо изучена возрастная динамика отдельных показателей крови — гемоглобина и концентрации эритроцитов -преимущественно на ранних стадиях онтогенеза и в состоянии половой зрелости организма (Войтенко В.П., Полюхов A.M., Леонова В.Г., 1987; Козинец, Г.И., Макаров В.А., 1998; Костин А.Ю., Киричук В.Ф., 2005; Бондарь Т.П., Запорожцева О.И., Карчинская Т.В., 2006; Новожилов A.B., 2009; Катюхин Н.Л., Осипенко М.Д., 2008 и др.) Однако, информации, касающейся иных, не менее важных возрастных изменений периферического звена эритрона, особенно на этапе инволюции человека и животных, явно недостаточно. К настоящему времени появилось большое число экспериментальных исследований, доказывающих, что окислительное повреждение липидов, белков и нуклеиновых кислот клеток занимает центральное место в процессе старения и в развитии заболеваний, связанных со старением (Hallwell В., 1992; Stadtmann, 1992; Dubey А., Erster M.J., Sohal R.S,1995).

Взаимосвязь возрастной активации свободнорадикальных процессов с действием экстремальных факторов может оказать существенное влияние на эритроциты, онтогенетические изменения которых представлены в литературе крайне фрагментарно и недостаточно. Между тем, исследование возрастных особенностей структурно-функциональной организации эритроцитов при хроническом действии экстремальных, особенно токсических факторов, может иметь (помимо теоретического) диагностическое и прогностическое значение для оценки биологической зрелости и способности организма к адаптации.

В связи с этим представляется актуальным изучение особенностей морфофизиологического состояния эритроцитов на критических этапах онтогенеза, особенно на этапе инволюции постнатального онтогенеза, а также при действии экстремальных факторов на примере сероводородсодержащих поллютантов, образующихся при добыче и промышленной переработке газа Астраханского газоконденсатного месторождения. Актуальным представляется и поиск средств эффективной коррекции как инволюционных нарушений структуры и функции эритроцитов, так и их нарушений, вызванных хроническим воздействием сероводородсодержащего газа.

Задачи исследования

1. Изучить морфофизиологические параметры эритроцитов молодых и старых интактных крыс;

3. изучить возрастную динамику свободнорадикального окисления и активности каталазы плазмы крови крыс и ее изменение при экспериментальных воздействиях;

4. определить уровень каталазы плазмы крови молодых и старых интактных крыс и крыс, подвергшихся экспериментальным воздействиям;

5. изучить изменения морфофизиологических параметров эритроцитов молодых и старых крыс, вызванных хроническим воздействием сероводородсодержащего газа;

6. исследовать сравнительные стресс-протекторные эффекты биологического и синтетического антиоксидантов на морфофизиологические показатели молодых и старых крыс, вызванные хроническим действием сероводородсодержащего газа.

Научная новизна

Получены новые данные о принципиальных возрастных различиях действия супрафизиологических доз биоантиоксиданта Б, Ь,а-токоферолацетата на морфофизиологические показатели эритроцитов и свободнорадикальные процессы крови на молодых и старых животных, менее выраженные у синтетического антиоксиданта эмоксипина.

Положения, выносимые на защиту

Различия в направленности и степени действия биологического (а-токоферол) и синтетического (эмоксипин) антиоксидантов на периферическое звено эритрона при старении организма определяются особенностями химической природы, соответственно, свойствами фенольного и водорастворимого антиоксидантов, и возрастными отличиями системы «про- и антиоксиданты» микроокружения эритроцитов.

Комплексный подход к анализу возрастной динамики морфофизиологических показателей периферического звена эритрона — эритроцитов - с использованием компьютерной цитофотометрии позволяют существенно углубить современные представления о возрастных изменениях эритроцитов на позднем этапе постнатального онтогенеза.

Результаты исследований указывают на характерного для этапа инволюции развития значительной дестабилизации мембран эритроцитов, связанной с возрастзависимым увеличением уровня ПОЛ и метаболитов оксида азота.

Ослабление свободнорадикальных процессов антиоксидантами (а-токоферолом и в меньшей мере - эмоксипином) указывает на возможность снижения скорости и степени дестабилизации эритроцитарных мембран и улучшению показателей, характеризующих функциональное состояние эритроцитов на этапе инволюции онтогенеза.

Теоретическое и практическое значение представляют также результаты исследований морфофизиологических показателей эритроцитов при воздействии серосодержащих газовых поллютантов, образующихся при добыче и промышленной переработке газа Астраханского газоконденсатного месторождения. Особенность этих результатов состоит в обнаружении возрастных особенностей нарушения структуры и функции эритроцитов при хроническом действии малых доз газовых поллютантов и вытекающей отсюда необходимости коррекции этих нарушений.

Выявленные экспериментально способности а-токоферола в дозах, соизмеримых с терапевтическими, (в меньшей степени — эмоксипина) нормализовать морфофизиологические параметры функционального состояния эритроцитов в позднем онтогенезе позволяют предположить возможность их использования в качестве геропротекторов, а также у лиц преклонного возраста, находящихся под воздействием неблагоприятных производственных условий газоперерабатывающего производства.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Теплый, Дмитрий Давидович

ВЫВОДЫ

1. При старении обнаружены изменения морфофизиологических показателей эритроцитов. Увеличение гематокрита, числа эритроцитов, уменьшение индивидуального объема клеток, среднего содержания и средней концентрации гемоглобина в эритроцитах при сохранении его общего уровня, увеличение количества аномальных форм и геометрических показателей эритроцитов, рост анизоцитоза.

4. Синтетический антиоксидант - эмоксипин — существенно не изменяет большую часть исследованных показателей эритроцитов молодых крыс, а у старых оказывает прооксидантное действие, проявляющегося в формировании анемии и понижение перекисной резистентности эритроцитов.

5. Снижение стабильности эритроцитарных мембран у старых животных связано с возрастной интенсификацией свободнорадикальных процессов в плазме крови (показателей ПОЛ и метаболитов оксида азота). а-токоферол снижает уровень свободнорадикальных процессов. Менее выраженное, но аналогичное действие оказывает эмоксипин.

6. Вне зависимости от возраста серосодержащие газовые поллютанты проявляют токсическое действие, понижая активность катал азы и повышая свободнорадикальные процессы в крови.

7. Хроническое воздействие малыми дозами серосодержащего газа формирует возрастзависимые изменения эритроцитов: у молодых животных — эритроцитоз, рост гематокрита и общего содержания гемоглобина, значительное уменьшение площади и поляризации эритроцитов; у старых — эритропению, микроцитоз с уменьшением степени насыщения клеток гемоглобином, на рушение геометрических показателей и увеличение патологических форм эритроцитов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ литературных источников подтвердил необходимость дальнейшего изучения комплекса морфофизиологических нарушений эритроцитов крови на этапе инволюции организма, индуцированных, в частности, возрастной интенсификацией свободнорадикальных процессов, так и возможностей эффективной коррекции этих нарушений антиоксидантами разной природы.

Результаты наших исследований показали на характерные возрастзависимые изменения структурно-физиологических показателей эритроцитов. Обнаруженное развитие с возрастом эритроцитоза у старых крыс является, по-видимому, результатом общей гипоксии тканей, которая приводит к стимуляции синтеза эритропоэтина и последующему увеличению эритрокариоцитов в костном мозге, ритикулоцитов и эритроцитов в периферической крови. Как отмечают М.К. БЫ§епа§а е! а1. (1994), в процессе старения развивается состояние гипоксии тканей, что приводит к увеличению компонентов дыхательной цепи.

К настоящему времени накопились убедительные сведения о возрастных изменениях отдельных показателей эритроцитов (Козинец Г.И., Погорелов В.М. 1998), в то время как данные о возрастной динамике этих показателей недостаточны и противоречивы, что связанно, возможно, с видовыми особенностями экспериментальных животных и различиями условий экспериментов. Сведения о достоверном увеличении гематокрита при старении, обнаруженное в наших опытах на животных, близки к данным о некоторых концентрационных изменениях гематокрита, имеющих место у людей после 60 лет жизни (Киричук В.Ф. и др. 2004). По нашему мнению, увеличение гематокрита при старении способствует стабилизации оптимального уровня общей дыхательной поверхности и поддерживается на позднем этапе онтогенеза за счет обратного отношения размеров эритроцитов и их общей концентрации в периферической крови. Возрастзависимое увеличение общего объема эритроцитов крови старых животных при значительном уменьшении индивидуального объема клеток, а также значительное уменьшение показателей средней концентрации и среднего содержания гемоглобина в эритроците, в обоих случаях могут отражать развитие процессов, направленных на поддержание кислородной емкости крови при старении. Указанные гематологические изменения отражают состояние стресса у животных и человека, вместе с тем в процессе старения развитие оксидативного стресса приобретает особое значение, поскольку носит прогрессивный характер нередко независимо от антиоксидантной терапии (Ргуог ЛУ.А.,1982; ЗоЪа! 11.8., Ки Н.У., Agarwal Б., а а1., 1998, Дубинина Е.Е., 2006).

Обнаруженное в наших опытах у старых животных достоверное увеличение патологических форм эритроцитов, рост уровня анизоцитоза, изменение форм эритроцитов, связанных с деформацией их мембран, изменение геометрических показателей, способствует ухудшению их газотранспортной функции.

Найденное при старении животных заметное понижение перекисной резистентности эритроцитарных мембран, преобладание старых эритроцитов, пребывающих в предгемолитическом состоянии, следует, очевидно, связать с ухудшением микроокружения эритроцитов. Полученные нами данные свидетельствуют о том, что накопление продуктов ПОЛ и метаболитов N0 послужили пусковым механизмом модификации клеточных мембран эритроцитов. Продукты свободнорадикального окисления нарушают, как известно, регулярную упаковку мембранных липидов и могут вызвать неконтролируемое увеличение проницаемости клеточных мембран, способствуя их деструкции и последующему гемолизу. Исследования Д.У. Черкасовой (2006) показали, что кислотная эритрограмма людей при старении характеризуется значительными изменениями в эритроцитарной популяции: в эритрограмме преобладают эритроциты с низкой кислотной резистентностью, определяемой ослаблением защитных свойств старческого организма и активацией свободнорадикальных процессов. При этом, как отмечали ранее В.П. Войтенко и A.M. Полюхов (1986), старение организма существенно не влияет на молодые эритроциты, дифференцирующиеся из стволовых клеток костного мозга, но приводит к более выраженному их старению в русле периферической крови. Таким образом, представления других авторов об относительной стабильности структурно-физиологических параметров эритроцитов взрослого организма с учетом результатов наших исследований на лабораторных животных не нашло подтверждения, особенно на периоде инволюции онтогенеза.

В старости снижается активность многих процессов, в ходе которых образуются свободные радикалы и параллельно снижается мощность систем антиокислительной защиты (Обухова JI.K., Эммануэль Н.М., 1983; Shigenaga М.К, Hogen Т.М., Ames B.N., 1994; Анисимов В.Н. 2008).

В настоящее время свободнорадикальная концепция остается одной из ведущих при обсуждении механизмов старения. В ее основе лежит представление о том, что увеличение возрастного уровня окислительных повреждений биополимеров клетки является следствием увеличения продукции активных форм кислорода, либо снижения уровня антиоксидантов (Skulachev V.P., 2007). Это послужило основанием для испытания в наших опытах антиоксидантов (альфа-токоферола и эмоксипина) в качестве геропротекторов. Биоантиоксиданты ( и токоферол в их числе) - специфические соединения с множеством биологических функций, играющих важную роль в метаболических процессах (Зенков Н.К и др., 2003). При этом большой метаболический антиокислительный потенциал а-токоферола обеспечивает увеличение резистентности клеток к аутоокислительным процессам, что может являться причиной отдаления старения и, соответственно, удлинения жизненного цикла. Добавление а-токоферола к рациону старых крыс повысило резистентность эритроцитов к перекисной провокации, нормализовало исследованные величины геометрических показателей и уровень свободнорадикальных процессов в плазме крови, приблизив их к аналогичным показателям, характерным для молодых животных.

В отличие от старых, у молодых животных альфа-токоферол проявил гиперантиоксидантный эффект, уменьшив величину гематокрита, увеличив число микроцитов, и компенсаторно повысив в них среднее содержании и концентрацию гемоглобина.

Наши исследования обнаружили некоторые особенности в действии на гематологические показатели крыс синтетического антиоксиданта — эмоксипина. Эмоксипин не оказал существенного влияния на большую часть исследованных показателей состояния эритроцитов у молодых животных, а у старых существенно уменьшил показатель гематокрита, число эритроцитов, их индивидуальный объем, понизил среднее содержание гемоглобина в эритроците. Мы считаем возможным объяснить различия в действии обоих антиоксидантов тем, что, во-первых, альфа-токоферол - жирорастворимый, а эмоксипин — водорастворимый антиоксидант, обладающий несколько иным действием, чем а-Токоферол, которому свойственна полифункциональность. Во-вторых, различие в действии обоих антиоксидантов связано с разными скоростями реакции со свободными радикалами. Механизмы антиоксидантного действия эмоксипина изучены еще недостаточно (Клебанов Г.И., Любицкий О.В. и др., 2001), в то же время в исследованиях последнего десятилетия выявлен ряд функций а-токоферола, не свойственных эмоксипину и не связанных с хорошо изученной антиоксидантной и антирадикальной активностью, в частности, с индукцией активности фосфолипазы и циклогеназы, подавлением протеинкиназы с и липооксигеназы на посттрансляционном уровне и продукции оксида азота в клетках крови (Аъъ\ А., ШсЫагеШ Я., Zmgg.Ы., 2002). Эти и иные данные подтверждают существенные отличия в действии биологического и синтетического антиоксидантов, определяемых проявлением у а-токоферола, помимо антиоксидантных, характерных «витаминных» свойств (Капралов А.А. и др. 2003; Зенков Н.К. и др., 2003; Теплый Д.Л., 2008).

Одним из негативных факторов, нарушающих функциональное состояние эритрона, являются производственные факторы газовой пр омыш л енно сти.

Природный газ Астраханского газоконденсатного месторождения, его различные компоненты и дериваты занимают одно из центральных позиций в комплексе агрессивных экологических факторов, характерных для Нижнего Поволжья.

Результаты наших исследований выявили характерные для животных разного возраста изменения эритроцитов. При действии серосодержащих газовых поллютантов они отличались у молодых и старых крыс разнонаправленностью: у молодых проявился эритроцитоз, у старых -эритропения. Представляется вполне вероятной связь этих различий, во-первых, с меньшим гемолитическим эффектом газовых поллютантов на I эритроциты молодых животных с учетом их достаточно надежной I антиоксидантной защитой, характерной для ранних этапов онтогенеза. Во-вторых, есть основания согласиться с мнением М.Д. Осипенко (2009) о возрастании при действии серосодержащего газа на молодых крыс эритробластических островков костного мозга, компенсирующее гипоксические явления увеличением числа эритроцитов. Исследования обнаружили развитие выраженной эритропении у старых животных, в отличие от молодых. При этом компенсация гипоксического состояния оказалась невозможной в связи с истощением функционального резерва эритрона. Ситуация осложнилась за счет возрастного истощения антиоксидантной системы и соответствующего усиления свободнорадикальных процессов (ПОЛ и метаболитов N0). По данным F. Azzi A. A. Stocker (2000), связывание NO° с гемоглобином приводит к образованию нитрозилгемоглобина (HbNO), причем такие комплексы локализуются главным образом в эритроцитах. В результате у старых крыс существенно нарушились морфофизиологические показатели эритроцитов, уменьшилось число функционально полноценных клеток и резко возросло число их патологических форм. Результаты экспериментов указывают на то, что интоксикация, вызванная серосодержащим газом особенно выраженная у старых крыс определяется не только метаболитами серосоединений, но и активацией свободнорадикальных процессов и снижением уровня ферментативных антиоксидантов (каталаза). Истощение антиоксидантной системы и ее емкости у старых крыс оказывается недостаточно для сдерживания токсического действия избытка свободных радикалов в ответ на действие индуктора окислительного стресса -серосодержащего газа. В связи с этим, использование антиоксидантов (особенно альфа-токоферола) в качестве стресспротектора значительно снизило уровень всех показателей свободнорадикальных процессов, причем антиоксиданты способствовали стабилизации эритроцитарных мембран только у старых животных.

Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о возрастзависимых отклонениях от физиологического уровня преобладающего числа исследованных параметров периферического звена эритрона. Эти изменения свидетельствуют об отсутствии стабильности морфофизиологических показателей на поздних этапах постнатального онтогенеза, прямо указывая на значительные нарушения газотранспортной функции эритроцитов, а также нарушения гемоглобинситезирующих процессов эритроидных элементов костного мозга (ранее обоснованного другими авторами) и особенно четко выраженными при ингаляции серосодержащим газом. Результаты экспериментов свидетельствуют о возрастзависимой коррекции антиоксид антам и этих нарушений, особенно выраженной у старых животных, и большей эффективности биоантиоксиданта (а-токоферола) в сравнении с синтетическим (эмоксипином).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Теплый, Дмитрий Давидович, Астрахань

1. Абрамова Ж.И. Сера и ее соединения / Ж.И. Абрамова., З.Х. Черный // Вредные вещества в промышленности. Под ред. Н.В. Лазарева, И.Д. Галаскинной. — 7-изд. — Л.: Химия,- 1977.-Т.З. — С. 49-74.

2. Абрамченко В.В. Антиоксиданты и антигипоксанты в акушерстве. Окислительный стресс в акушерстве и его терапия антиоксидантами и антигипоксантами. / В.В. Абрамченко СПб: ДЕАН. 2001. - 400 с.

3. Агаджанян H.A. Физиология человека / H.A. Агаджанян, Л.З. Тель, В.И. Циркин, С.А. Чеснокова // СПб: СОГИС.- 1998. С. 500-503.

4. Анисимов В.Н. Молекулярные и физиологические механизмы старения / В.Н. Анисимов // Т. 1. СПб.: Наука.- 2008.- 281 с.

5. Анисимов В.Н. Молекулярные и физиологические механизмы старения / В.Н. Анисимов // СПб: Наука.- 2003.- 468 с.

6. Анисимов В.Н. Эволюция концепций в геронтологии / В.Н. Анисимов, М.В. Соловьев // СПб.: Эскулап.- 1999.- 129 с.

7. Арутюнян A.B. Методы оценки СРО и антиоксидантной системы организма / Е.Е. Дубинина, H.H. Зыбина // СПб.- 2003 .-103с.

8. Арутюнян A.B. Механизмы СРО и его роль в старении / A.B. Арутюнян, Т.С. Козина. Успехи геронтологии // 2009.- Т.22, № 1.- С. 1984-116.

9. Ю.Арутюнян A.B., Козина JI.C. Механизм свободнорадикальногоокисления и его роль в старении // Успехи геронтологии.- 2009.- Т. 22, №1.- С. 194-2006.

10. Асфандияров Р.И. 1993. Состояние мембраны эритроцитов при воздействии серосодержащего газа / Р.И. Асфандияров, А.Е. Лазько, A.A. Резаев // Морфол. Сборник статей медвузов России.- Ижевск.-1993. С. 41-47. Ч. 1.

11. Асфандияров Р.И., 1993. Острые отравления серосодержащим газом / Р.И. Асфандияров, В.Е. Бучин, А.Е. Лазько, A.A. Резаев \\ Астрахань. -1995.-155 с.

12. Ахаидзе Н.Г. Биологический возраст и физическая работоспособность по данным долговременного наблюдения рабочих и служащих на судостроительном предприятии / Н.Г. Ахаидзе, A.A. Поляков, Н.Б. Душечкина // Физиология человека.- 1993.- Т. 16 №4.- С.28-36.

13. Болдырев A.A., Биологические мембраны / A.A. Болдырев, Е.Г. Курелла, Т.Н. Павлова \\ М.- 1996.- 124 с.

14. Банных C.B. Состояние эритрона в постреанимационном периоде / C.B. Банных // Автореф. Дисс. канд. мед. наук. Кемерово. 1997.

15. Барабой В.А., Перекисное окисление липидов и стресс / В.А. Барабой, И.И. Брехман, В.Г. Голотин, Ю.Б. Кудряшов //- СПб: Наука.- 1992.- 148 с.

16. Барадулин В.Б. Биохимические основы единой теории старения / В.Б. Барадулин // Часть 1. Основные положения. Успехи геронтологии.-2008.- Т. 21. №4.- С. 535-545.

17. Баширова P.M., Роль гемоглобина в регуляции электрокинетических характеристик и объема эритроцитов / P.M. Баширова, Е.М. Гареев, H.A. Киреева // Бюлл. экспер. биол. мед. 1998 Т. 126. №7,- С. 49-51.

18. Власова И.Г., Практикум по нормальной физиологии / A.A. Башкиров К.Т. Ветчинкина и др. //, М.: РУДН,- 2004.- 609с.

19. Беднов И.А. Физиологические механизмы хронического воздействия серосодержащих газов в эксперименте / И.А. Беднов // Автореф. дисс. канд. наук. -2004г.

20. Безуглый Ю.В., Динамика активности АО-системы в онтогенезе / Ю.В. Безуглый, О.В. Воскресенский // Тезисы Всеросс. конф. 14-16 мая. 1986 г. «Биоантиоксиданты». Черноголовка Московской области. 1986. С. 56.

21. Бобова Л.П., Гистофизиология крови и органов кроветворения и иммуногенеза / Л.П. Бобова, С.Л. Кузнецова, В.П. Сапрыкин //- М.: Новая волна.- 2003.- 155 с.

22. Боев В.М., Сернистые соединения природного газа и их действие на организм / В.М. Боев, Н.П. Сетко // -М.: Медицина,- 2001.- 216 с.

23. Бойко В.И. Основные вопросы гигиены при переработке природного газа с высоким содержание сероводорода / В.И. Бойко // Тез. докл. обл. научно-практич. конфер. сотрудников мед. ин-та и врачей Астраханской области.-Астрахань.- 1989.- С. 195-196.

24. Болдырев A.A. Биологические мембраны и транспорт ионов / A.A. Болдырев //- М.: МГУ,- 1985.- 93 с.

25. Болдырев A.A. Веление в биомембранологию / A.A. Болдырев //- М.: МГУ.- 1990.- 208 с.

26. Болдырев A.A., Биологические мембраны / A.A. Болдырев, Е.Г. Курелла, Т.Н. Павлова // -М., 1966.-124 с.

27. Бондарь Т.П., Лабораторная гемоцитология: методы исследования и клинико-диагностическое значение изучения эритроцитов / Т.П. Бондарь, О.И. Запорожцева, Т.В. Карчинская, Е.В. Верщак //Ставрополь: СГУ.-2007.-62с.

28. Верещак Е.В., Реакция эритроцитов периферической крови на окислительный стресс у работников / Е.В. Верещак, Т.П. Бондарь, Ю.И. Половко // Вестник РУДН.- 2007.- №6.- С. 330-332.

29. Роль нарушений свойств липидного слоя мембран в развитии патологических процессов / Ю.А. Владимиров // Патофиз. и эксп. терап.- 1989.- № 4,- С.7-19.

30. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты / Ю.А. Владимиров // Вестн. РАМН.- 1998.- №7.- С. 43-51.

31. Войтенко В.П. Эритроцит: старение клетки и старение организма / В.П. Войтенко // Цитология и генетика.- 1984.- №6.- С. 442-447.

32. Войтенко В.П., Системные механизмы развития и старения / В.П. Войтенко, A.M. Полюхов // Ленинград: Наука.- 1986.- 184 с.

33. Воскресенский О.Н. Антиоксидантная система, онтогенез и старение / О.Н. Воскресенский, И.А. Жутаев, В.Н. Бобырев, Ю.В. Безуглый // Вопр. мед.химии,- 1982.- Т.28, № 1.- С. 14-27.

34. Гареев P.A. Вторая функция эритроцитов / P.A. Гареев // -Материалы Международной конференции, посвященной 150-летию И.П. Павлова. СПб. Россия.- 23-25 сентября 1999.- СПБ.- 1999.- С. 59-61.

35. Гланц С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц //-М.: Практика.-1998.- 459 с.

36. Гогуадзе Р.П., Изменение поверхности эритроцитарной мембраны при хроническом темновом стрессе / Р.П. Гогуадзе, М.В. Чачуа, Н.Д. Кебурия, М.Д. Чипашвили, Г.Я. Алесидзе, Н.Г. Алексидзе // Бюлл. эксп. биол. мед. -2006,- Т. 141, №5.- С. 519-521.

37. Голубев А.Г. Биохимия продления жизни / А.Г. Голубев // Успехи геронтологии.- 2003.- Вып. 12.- С. 57-76.

38. Голубев А.Г. Взаимная совместимость представлений о старении и продолжительности жизни, их механизмах и проявлениях на уровне организма и популяции, и их эволюции / А.Г. Голубев // Успехи геронтологии.- 1997.- вып. 4,- С. 41-49.

39. Гольдберг Е.Д. Закономерности Структурной организации систем жизнеобеспеченности в норме и при развитии патологического процесса / Гольдберг Е.Д., A.M. Дыгай, В.В. Удут и др. // Томск.-1996.-304 с.

40. Т.Н. Богатыренко, Л.С. Козина, М.В. Прокопенко // Успехи геронтологии.- 2008.- Т.21, №4.- С. 548-554.

41. Горбатенко Е.А. Электрохимические методы в медицине / Е.А. Горбатенко // М.: Медицина, 1991. — 95 с.

42. Грушко Я.II. Вредные органические соединения в промышленных выбросах в атмосферу / Я.Н. Грушко // Справочник.-1986.- 207с.

43. Гусев В.А. Свободно-радикальная терапия старения в парадигме геронтологии / Гусев В.А. //- 2000.- Вып. 4.- С. 41-49.

44. Дильман В.М. Четыре модели медицины / В.М. Дильман // М.: Медицина,- 1987.- 288 с.

45. Доценко Ю.И. Эколого-гигиеническая оценка условий труда рабочих, занятых производством серы на Астраханском ГПЗ / Ю.И. Доценко // -Медико биол. аспекты адаптации.- Тр. Астрах, гос. мед. академии,-Астрахань.- 1996.-С. 86-87.

46. Долгов В.В., Лабораторная диагностика нарушений обмена железа / В.В. Долгов, С.А. Луговская, М.Е. Почтарь, Н.Г. Шевченко //- М., 1996.- 64 с.

47. Дубинина Е.Е. Продукты метаболизма кислорода в функциональной активности клеток. Жизнь и смерть. Созидание и разрушение / Е.Е. Дубинина// СПб.: Медицинская пресса,- 2006,- 394 с.

48. Дубинина Е.Е. Окислительный стресс одна из возможных причин развития сосудистой деменции у пожилых людей / Е.Е. Дубинина, C.B. Ковручина, П.В. Коновалов, И.Б. Солитернова, М.Г. Морозова // Успехи геронтологии.- 2000.- №4.- С. 47-101.

49. Зинчук Б.В. Роль сродства гемоглобина к кислороду в активации перекисного окисления липидов при лихорадке / Б.В. Зинчук, М.В. Борисюк, В.Н. Корнейчук // Бюлл. эксп. биол. и мед.- 1996.- №1.- С. 4447.

50. Измеров Н.Ф. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии / Н.Ф. Измеров, И.В. Саноцкий, К.К. Сидоров //- М.: Медицина.- 1977.-240с.

51. Кагаева А.Я. Биомембраны / А.Я. Катаева //- М.: Высшая школа.- 1985.304 с.

52. Казанчеев В.П. 1980. Некоторые биофизические механизмы адаптации человека на крайнем Севере / В.П. Казанчеев, В.В. Ляхович, В.Ю.

53. Куликов II- Экологическая физиология человека.- В кн: Руков. по физиологии.- Л.: Наука.- 1980.- С. 53-78.

54. Катюхин Н.Л. Реологические свойства эритроцитов. Современные методы исследования / Н.Л. Катюхин // Физиологич. журн,- им. И.М. Сеченова.- 1995.- Т. 81, №6,- С. 122-129.

55. Камилов Р.Ф. Кислотная и осмотическая резистентность эритроцитов / Р.Ф. Камилов, Д.Ф. Шакиров, В.П. Кудрявцев // Вятский медиц. журн.-№4.-2007.-С. 106-108.

56. Канунго М.С. Биохимия старения / М.С. Канунго //- М., 1982.- 294 с.

57. Капралов A.A. Физико-химические свойства и биологическая роль токоферолсвязывающих белков / A.A. Капралов, Г.В. Петрова, Г.В. Донченко //Успехи современн. биол.- 1993. Т. 113, №3.- С. 131-137.

58. Кленова H.A. Биохимические механизмы дезинтеграции эритроцитов человека в различных условиях функционирования / H.A. Кленова // -Автореф. дисс. докт. наук. Тюмень, 2003.

59. Кииоин А.И., Функциональная неравнозначность эритроцитов / А.И. Клиоин, Л.А. Тиунов //- Л. Наука.- 1974.- 148 с.

60. Козинец Г.И., и др.- // Метод интерферометрии в гематологии / Г.И. Козинец, И.А. Быкова, Т.А. Мамедова-М., 1980.- С. 1-16.

61. Козинец Г.И., Кинетические аспекты гемопоэза / Г.И. Козинец, И.А. Быкова, Т.Г. Сукласова // Томск.- 1982 - 308с.

62. Козинец Г.И., Исследование системы крови в клинической практике / Г.И. Козинец, В.А. Макаров //- М.: Триада X.- 1997.- 470 с.

63. Козинец Г.И. Консерватизм биологических процессов — стабильность кроветворения / Г.И. Козинец, В.М. Погорелов // Клин. лаб. диагност.-1998.- №12. С. 21-32.

64. Г.И. Козинец Физиологические системы организма, основные показатели / Г.И. Козинец //- М.: Трада- X.- 2002.- 384 с.

65. Козинец Г.И., Слеворт Ю.А. Поверхностная архитектоника клеток периферической крови / Г.И. Козинец // Таллин: Валгус.- 1984.- 116 с.

66. Колтовер В.К. Свободнорадикальная теория старения: исторический очерк / Колтовер В.К. // Успехи геронтологии.- 2000.- Вып. 4.- С. 33-40.

67. Колтовер В.К. Свободнорадикальная теория старения: современное состояние и перспективы / Колтовер В.К. // Успехи геронтологии.-1998.- Вып.2,- С. 37-42.

68. Кондурцев В.А., Компьютерная морфометрия периферической крови у больных пневмонией различного возраста / В.А. Кондурцев, Н.О.

69. Захарова, О.И. Федорова, A.B. Селезнев // Успехи геронтологии.-2010.- Т. 23, №2.- С. 285-292.

70. Конев C.B. Структурная лабильность биологических мембран и регуляторные процессы / C.B. Конев //- Минск: Наука и техника.1987.- 240 с.

71. Копанев В.А., Метод вероятностной оценки токсического эффекта / В.А. Копанев, В.А. Гинзбург, В.Н. Семенова //- Новосибирск: Наука.1988.-234С.

72. Каркушко О.В., Пептидные препараты тимуса и эпифиза в профилактике ускоренного старения / О.В. Каркушко, В.Х. Хавинсон, Г.М. Бутенко, В.Б. Шатило //- СПб: Наука.- 2002.- 202 с.

73. Корякина Е.В., Особенности патогенетических механизмов эндогенной интоксикации у больных ревматоидным артритом / Е.В. Корякина, C.B. Белова // Научно-практическая ревматология.- 2001.- №1.- С. 89-93.

74. Краснов А.Ф. Строевние и биологическая роль белков гемоглобинового профиля / А.Ф. Краснов, Г.И. Самоданова, C.B. Усик, H.H. Яковлев Ю.А. Кривенцев, Д.М. Никулина //- Астрахань: АГМА.-2007.- 100 с. // Физиол. журн., 1978. Т. 64, №4. С. 538-542.

75. Кривохижина JI.В. Здравоохранение Башкортостана / Л.В. Кривохижина, М.В. Осиков, E.H. Ермолаева //- 2005, №7.- С. 99-100.

76. Крупицкая Л.И., Реакция крыс линии Август на раннюю постнатальную гипоксию / Л.И. Крупицкая, В.Э. Цейликманг, A.C. Попова, А.И. Синицкий, А.Б. Горностаева // Росс, физиолог, журн. им. И.М. Сеченова,- Т. № 7.- 2009.

77. Крыжановский Г.Н. Дизрегуляционная патология / Г.Н. Крыжановский //- М.: Медицина,- 2002.- 632 с.

78. Крылова В.Н. Типовые изменения электрофоретической подвижности эритроцитов при стрессовых воздействиях / В.Н. Крылова, A.B. Дерюгина, // Бюлл. экс. биол. мед.- 2005.- Т. 139, №4.- С. 364-366.

79. Кулапина О.И., Проницаемость мембран эритроцитов у больных с инфекционной патологией / Кулапина О.И., В.Ф. Киричук, Е.Г. Кулапина, И.А. Зайцева // Критические технологии. Мембраны.- 2005, №1(25).- С. 3-9.

80. Бирисюк М.В. Роль сродства гемоглобина к кислороду в активации перекисного окисления липидов при лихорадке / М.В. Бирисюк, В.Н. Корнейчик // Бюлл. экс. биол. мед.- №1, 1996 С. 44-47.

81. Кульчицкий O.K. Особенности перекисного окисления липидов в тканях головного мозга и печени старых крыс при старении / O.K. Кульчицкий, Р.И. Потапенко, С.Н. Новикова // Укр. биохим. журн.-2001.- Т.73, №4.- с. 73-8.

82. Кучеренко Н.В., Липиды / Н.В. Кучеренко, А.Н. Васильев //Киев: Высшая школа.- 1985.- 248 с.

83. Лазько А.Е. Состояние газотранспортирующего компартмента системы микроциркуляции при воздействии серосодержащего газа / А.Е. Лазько, A.A. Резаев // Матер, юбилейн. научной конференции

84. Астраханск. гос. мед. ин-та (к 75-летию со дня основания).-Астрахань.-1993.-С.179-182.

85. Ланкин В.З., Свободнорадикальные процессы в норме и патологических состояниях / В.З. Ланкин, А.К. Тихазе, Ю.Н. Беленков //-М.: 2001. 78 с.

86. Ланкин В.З., Антиоксиданты в комплексной терапии атеросклероза / В.З. Ланкин, А.К. Тихазе, Ю.Н. Беленков // Proet contra.- Пособие для врачей.- М.: Медпрактика — 2003.- 40 с.

87. Леонова В.Г. Анализ эритроцитарных популяций в онтогенезе человека / В.Г. Леонова // Новосибирск: Наука, Сибирское отделение 1987. 242 с.

88. Ли B.C., Липидный состав и структурно-функциональные свойства мембран эритроцитов разного возраста / B.C. Ли, Э.М. Халилов, В.И. Сабурова и др. // Вопросы мед. химии.- 1982.- №6.- С. 66-71.

89. Лисовская И.Л. Популяционная характеристика эритроцитов в норме и патологии, фильтрационно-осмотические методы исследования деформируемости / И.Л.Лисовская // Авторефф. дисс. доктора биол. наук. М., 2004.- 42 с.

90. Лишневская Ю.В. Роль свободнорадикального окисления в нарушении гемоваскулярного гомеостаза при старении / Ю.В. Лишневская // Успехи геронтологии.- 2004.- Вып. 13.- С. 52-57.

91. Луговская С.А., Лабораторная гематология / С.А. Луговская, В.Т. Морозова, М.Е. Почтарь, Долгов,. М.: Тверь.- ООО Изд.-во Трада.- 224 с.(?)

92. Логинов П.В. Влияние витамина Е (а-токоферола) на гипоталамо-гипофизарно-гонадную систему самцов белых крыс при окислительном стрессе, индуцированном природными токсикантами / П.В. Логинов //-Дисс. канд. биол. наук.- Астрахань.- 2004.- 170 с.

93. Маслова М.Н. Активность мембранных ферментов эритроцитов при различных стрессорных воздействиях / М.Н. Маслова // Физиологич. журн. Имени И.М. Сеченова. 1994. Т.80 С. 76-80.

94. Маслова М.Н. Молекулярные механизмы стресса / М.Н. Маслова // Росс, физиол. журн. им. И.М. Сеченова 2005. Т. 91, №11.- С. 65-72.

95. Матюшичев В.Б. Связь электрофоретической подвижности с их концентрацией в крови крыс / В.Б. Матюшичев, В.Г. Шамратова // Бюлл. эксп. биол. мед.- 2005.- Т. 139, №3.- С. 250-251.

96. Медовый B.C. Автоматизированные цитофотометрические тесты мазков крови для общей клиники и скрининговых обследований населения / B.C. Медовый, В.А. Балабуткин, Н.В. Всрденская, Г.И. Козинец и др. // Клин. лаб. диагност.- 1997.- №10.- С. 6-7.

97. Меерсон Ф.З. Адаптация к стрессогенным ситуациям и стресслимитирующие системы. Физиология адаптационных процессов / Ф.З. Меерсон // М. 1986. С. 21-53.

98. Меньшикова Е.Б., Окислительный стресс / Е.Б. Меньшикова, В.З. Панкин, Н.К. Зенков, И.А. Бондарь, Н.Ф. Круговых, В.А. Труфанкин // Прооксиданты и антиоксиданты.- М.: Фирма «Слово».- 2006.- 244 с.

99. Макаров В.П. Эритропоэз и энэргообмен организма / В.П. Макаров //- Новосибирск: Наука.- 1984.- 96 с.

100. Метельская В.А. Скрининг-метод определения уровня метаболитов оксида азота в сыворотке крови / В.А. Метельская, Н.Г. Туманова//Клинич. лабор. диагностика.- 2005.- №6.- С. 15-18.

101. Михайлова О.В. Анимия и др. заболевания крови / О.В. Михайлова //- СПб: Невский проспект.- 2002.- 126 с.

102. Михайлович В.А. Проницаемость эритроцитарных мембран и сорбционная способность эритроцитов — оптимальные критерии тяжести эндогенной интоксикации / В.А. Михайлович, В.В. Марусанов, А.Б. Бичун, И.А. Доманская // Анест. и реаним.- 1993.- №5.- С. 66-69.

103. Моршаковская Е.Ф., Павлов А.Д., Румянцев А.Г. 1999. цит. По: Матюшичев В.Б., Шамратова В.Г. (2005).

104. Мушкабаров H.H. Молекулярная биология / H.H. Мушкабаров, C.JL Кузнецов //- М.: Мед. информ. агентство.- 2003.- 535 с.

105. Никитин В.Н. Атлас клеток крови сельскохозяйственных животных / В.Н. Никитин //- М., 1983.- 160 с.

106. Никитченко Ю.В. Перекисное окисление липидов и его регуляция при действии факторов, влияющих на скорость старения / Ю.В. Никитченко // Билогич. вестник.- 1997.- Т. 1, №2.- С. 26-31.

107. Новгородцева Т.П. Липиды эритроцитов крови при формировании наследуемой кардиальной патологии / Т.П. Новгородцева//- авторефф. дисс. доктора биол. наук. Владивосток, 2000.

108. Новиков Н.М Физиология экстремальных состояний / Новиков Н.М., В.В. Горанчук, Е.Б. Шустов // СПб: Наука.- 1988.- 247 с.

109. Новиков Н.М. Механизмы влияния продуктов деструкции эритроцитов на образование почечного эритропоэтического фактора — эритрогенина / Н.М. Новиков //Патол. физиол. экстремальных состоянии.- Пермь.- 1986.- С. 87-88.

110. Новиков Н.М. Об изменении эритропоэзстимулирующего действия эритроцитарных факторов при блокаде клеток системы мононуклеарных фагоцитов / Новиков Н.М. // Патол. физиол. и эксперим. терапия.- 1982.- № 6.- С. 56-58.

111. Новицкий B.B и др. Атлас. Клинический патоморфоз эритроцита / В.В. Новицкий, Н.В. Рязанцева, Е.А. Степанова //- Томск: ТГУ,- 2003.208 с.

112. Новожилов A.B. Динамика гематолитических показателей крови белых крыс в постнатальном онтогенезе / A.B. Новожилов, JI.H. Катюхин // Журн. эвол. био-хим. и физиол.- 2008.- Т. 44, №6,- С. 613621.

113. Обухова Л.К. Роль свободнорадикальных реакций окисления в молекулярных механизмах старения живых организмах / Л.К. Обухова, М.Н. Эммануэль // Успехи химии.- 1983. Т.32.- С. 353-372.

114. Осипенко М.Д. Влияние газообразных серосодержащих поллютантов на эритропоэз в онтогенезе / М.Д. Осипенко / Автореф. дисс. канд. биол. наук. Астрахань, 2009.

115. Павлова М.М. Функционирование эритроцитарной системы при анемичных состояниях у рабочих, занятых переработкой Астраханского газоконденсата / М.М. Павлова, Т.А. Эсаулова // Астраханский медицинский журнал.- 2007.- №2.- С. 140.

116. Панин Л.Е. Детерминантные системы физики химии и биологии / Л.Е. Панин II- Новосибирск.- 2006.- 211 с.

117. Пименов Ю.С., Старение организма и состояние системы крови в норме и патологии / Ю.С. Пименов, A.A. Девяткин, М.В. Углова //Самара.- 2006,- 180 с.

118. Погорелов В.М., Диагностическая значимость морфологических особенностей эритроцитов в мазках периферической крови / В.М.

119. Погорелов, Г.И. Козинец // Гематология и трансфузиология.- 2005.- Т. 50, №5.- С. 13-17.

120. Погорелов В.М., Лабораторно-клиническая диагностика анемий / В.М. Погорелов, Г.И. Козинец, Л.Г. Ковалева //- Медицинское информационное агенство.- М., 2004.- 164 с.

121. Покровский A.A. К вопросу о перекисной резистентности эритроцитов / A.A. Покровский, A.A. Абраров // Вопросы питания.-1964.- С. 44.

122. Покровский В.И. Оксид азота, его физиологические и патофизиологические свойства / В.И. Покровский, H.A. Виноградов // Терап. Архив.- 2005, №1.- С.82-87.

123. Полунин И.Н. Токсический отек легких при остром отравлении серосодержащим газом / И.Н. Полунин, Р.И. Асфандияров, H.H. Тризно //- Астрахань.- 1999.- 219 с.I

124. Полунин И.Н., Токсическое воздействие СВСГ на дыхательную ! систему Медико-биол. аспекты адаптации / И.Н. Полунин, H.H.

125. Тризно //- Тр. Астрах, гос. мед. академии.- Астрахань.- 1996.- С. 128145.

126. Полунина О.С. Клинико-диагнностическое значение исследований перекисного окисления липидов крови при хроническом бронхите у пожилых / О.С. Полунина //- Авторефф. дисс. канд. мед. наук. Астрахань 2001.

127. Полунина О.С., Свободнорадикальный статус и антиоксидантная терапия при хроническом бронхите у пожилых / О.С. Полунина, Г.А. Трубников, A.A. Резаев //- Астрахань, 2000.- 30 с.

128. Резаев A.A. Лабораторные показатели крови у рабочих АГК / A.A. Резаев, В.И. Балашов, В.А. Бочановский // Матер, международн. конф. «Экология и здоровье населения». Актуальные проблемы биологии и медицины.- Астрахань.- 2000.- С. 132-133.

129. Ронин B.C. Руководство к практическим занятиям по методам клинических лабораторных исследований / B.C. Ронин, Г.М. Старобинец // М., 1989.- 320 с.

130. Румянцева А.Г. Эритропоэтин: биологические свойства, возрастная регуляция эритропоэза, клиническое применение / А.Г. Румянцева, Е.Ф. Моршакова, А.Д. Павлов // М., 2002.- 400 с.

131. Рябов С.И., Молекулярно-генетические аспекты эритропоэза / С.И. Рябов, Г.Д. Шостоков // Л., 1973.- 190 с.

132. Рязанцева H.B. Молекулярные основы старения эритроцитов / Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий // Бюлл. эксп. биол. и мед.- 2002.-Прилож. 1.- С. 96-98.

133. Рязанцева Н.В. Ультраструктура эритроцитов в норме и патологии. Морфологические феномены. Клинические аспекты / Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, Б.А. Степовая, С.Б. Ткаченко // Морфология,- 2004.- Т. 126, №5,- С. 12-16.

134. Рязанцева Н.В. Типовые изменения обратимой агрегации эритроцитов при патологических процессах разного генеза / Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, Е.А. Степовая, Я.В. Буклавина, В.А. Фокин //Бюлл. эксп. биол. и мед.- 2003.- Т. 135 №1.- С. 33-36.

135. Саенко Е.Л., Скоробогадько О.В., Ярополов А.И. // Биохимия. 1990. Т.55. Вып. 9. С. 1563-1569.

136. Сайфиев P.P. Исследование деформируемости эритроцитов млекопитающих с использованием усовершенствованного эктацитометра / P.P. Сайфиев // Автореф. дисс. канд. биол. наук., 2002.- 23 с.

137. Сарычева Т.Г. Морфологическая характеристика эритрона при гематологических заболеваниях и хронической почечной недостаточности / Т.Г. Сарычева // Авторефф. дисс. д-ра мед. наук.-М., 2000.-40 с.

138. Селезнев С.А. Взаимосвязь между динамикой и тяжестью травматического шока в плане общей оценки и его патогенеза / С.А. Селезнев, Б.С. Мазуркевич // Патологич. физиол. и эксперим. терапия.-1974, №1,-С. 3-9.

139. Сетко Н.П. Защитный эффект антиоксидантов при экспериментальной интоксикации организма / Н.П. Сетко // Гигиена и санитария.- 1986.-№2.- С. 16-18.

140. Скулачев В.П. Старение организма — особая биологическая функция, а не результат поломки сложной живой системы: биохимическое образование концепции Вейсмана / В.П. Скулачев // Биохимия.- 1997.- Т. 62.- С. 1369-1399.

141. Соколов В.В. Гематологические показатели здорового человека /

142. B.В. Соколов, И.А. Грибова//М.: Медицина.- 103 с.

143. Стальная И.Д. (1927) Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты / И.Д. Стальная, Гаришвели Т.Г. // Современные методы в биохимии.- М.: Медицина.-1977.- С. 66-68.

144. Стародубцева М.Н. Механические свойства мембран эритроцитов человека при действии пероксинитрата / М.Н. Стародубцева, Т.Г. Кузнецова, С.Н. Черенкевич // 2007.- Т. 143, №2.1. C. 227-230.

145. Степовая Е.А. Типовые изменения эритроцитов при хроническом восполении / Е.А. Степовая, В.В. Новицкий, Н.В. Рязанцева, С.Б. Ткаченко, В.Е. Гольдберг // Бюлл. эксп. биол. и мед.- 2004 Т. 137, №1.- С. 66-70.

146. Сторожок С.А. Молекулярные дефекты белков мембраны эритроцита / С.А. Сторожок, А.Г. Санников // Вопр. мед. химии.- 1997.Т. 42.- Вып. 2. С. 64-70.

147. Сторожок С.А. Молекулярные структуры мембран эритроцитов и их механические свойства / С.А. Сторожок, А.Г. Санников, Ю.М. Захаров // Тюмень: ТГУ.- 1997.- 140 с.

148. Сторожок С.А. Структурные и функциональные особенности цитоскелета мембраны эритроцитов / С.А. Сторожок, C.B. Соловьев // Вопросы медицинской химии.- 1996.- №2.- с. 14.

149. Строев Е.А., Практикум по биологическох химии / Е.А. Строев, В.Г. Макарова // М.: Высшая школа, 1986. 230 с.

150. Судаков К.В. Функциональная система, определяющая оптимальный уровень эритроцитов в организме / К.В Судаков, Ю.М. Захаров //Клинич. медицина.- 2002.- №4. С. 4-10.

151. Тарских М.М. Повреждение мембран эритроцитов в механизме токсического действия акрилатов / М.М. Тарских // Бюлл. эксп. биол. и мед.- 2006.- Т. 142, №12.- С. 646-638.

152. Телль. JI.3. Патологическая физиология / JÏ.3. Телль, С.П. Лысенков, С.А. Шастун // М.: Медицинское информационное агенство.- 2007.- С. 379-396; 541-548.

153. Тодоров И.Н. Стресс, старение и их биохимическая коррекция / И.Н. Тодоров, Г.И. Тодоров // М.: Наука, 2003.- С. 478.

154. Теплый Д.Л., 2008. Нейрофизиологические эффекты витамина Е / Д.Л. Теплый // Астрахань: Издательский дом. «Астраханский университет»-2008.-310с.

155. Терещина Е.В. Рольжирных кислот в развитии возрастного окислительного стресса / Е.В. Терещина // Успехи геронтологии. -2007.-Т. 20,-№1.- С. 26-32.

156. Тихомирова И.А. Роль экстрацеллюлярных, мембранных и внутриклеточных факторов в процессе агрегации эритроцитов / И.А. Тихомирова// автореф. Дисс. д-ра. биол наук.- Ярославль, 2006.

157. Тихомирова И.А. Физиологические роли механизма объединения эритроцитов в агрегаты / И.А. Тихомирова, A.B. Муравьева // Росс, физиол. журн. им. И.М. Сеченова,- 2007.- Т. 93, №12.- С. 1382-1390.

158. Тодоров И.Н. Стресс и старение и их биохимическая коррекция / И.Н. Тодоров, Г.И. Тодоров // М.: Наука,.- 2003.- 479 с.

159. Тризно H.H. К вопросу о моделировании эколого-патологического состояния токсического отека легких / H.H. Тризно // Медико-биол. аспекты адаптации,- Тр. Астрах, гос. мед. академии.-Астрахань, 1996.- Т. 3-С. 121-135.

160. Тризно H.H., Серосодержащие газы, их действие на организм и пути детоксикации в эксперименте / H.H. Тризно, Р.И. Асфандияров, И.А. Беднов, А.К. Аюпова // Астрахань 2005,- 114 с.

161. Туликова З.А. Антиоксидантная активность различных фракций средних молекул и их элиминация при гемосорбции у обожженных / З.А. Туликова // Эфферентная терапия.- 1887.- Т. 3, №1.- С. 25-27.

162. Фалер Д.Ж. Молекулярная биология клетки / Д.Ж. Фалер, Д.М. Шилдс // БИНОМ Пресс,.- 2003.- 268с.

163. Франциянц Е.М. Перекисное окисление липидов в патогенезе1. Лопухолевой болезни / Е.М. Франциянц, Ю.С. Сидоренко, Л.Я. Розенко //Ростов-на-Дону: РГУ,- 1995.- 176 с.

164. Хавинсон В.Х. Свободнорадикальное окисление и стресс / В.Х. Хавинсон, В.А. Баринов, A.B. Арутюнян, В.В. Малинин // СПб: Наука.-2003.- 327 с.

165. Храпова Н.Г. Кинетические особенности действия токоферолов как антиоксидантов / Храпова Н.Г. // Биофизика, 1977.- Т. 22, №3.- С. 436-442.

166. Цикорнов A.A. Состояние микросомальных монооксидаз при однократном ингаляционном воздействии сероводородсодержащего конденсата / Цикорнов A.A. // Гигиена и санитария,- 1991.- №3.- С. 1314.

167. Черешнев В.А. Механизмы изменений гемоглобинового профиля в период адаптации к экстримальным условиям / В.А. Черешнев, М.Н.

168. Сумин, A.B. Реза, Б.Г. Юшков // Бюлл. эксп. биол. и мед.- 2002. Т. 134, №9.- С. 18-20.

169. Черницкий Е.А. Структура и функции эритроцитарных мембран / Е.А. Черницкий, A.B. Воробей // Минск.- 1981. 246 с.

170. Чернух А.И. Микроциркуляция / А.И. Чернух, П.Н. Александров, О.В. Алексеев // М.: Медицина.- 1988. 432с.

171. Чернышев В.А. Система крови и адаптации организма к экстремальным факторам / В.А. Чернышев, Ю.Г. Юшков, М.Н. Суслин, Н.В. Тюменцева, Ю.С. Храмцова, И.Г. Данилова // Росс, физиол. журн. им. И.М. Сеченова.- 2004.- Т. 90, №10.- С. 1193-1202.

172. Шанин Ю.Н. Антиоксидантная терапия в клинической практике / Ю.Н. Шанин, В.Ю. Шанин, Е.В. Зиновьев // СПб.- ЭЛБИ СПб, 2003.128 с.

173. Шиффман Ф.Дж. Патофизиология крови / Ф.Дж. Шиффман // М.: СПб.- 2000.- 190 с.

174. Шишкина Т.А. Патогенетические механизмы нарушения микроциркуляции легких при хроническом воздействии сероводородсодержащимгазом/Т.А. Шишкина// Автореф. дисс. канд. мед. наук.- Саратов.- 2008.

175. Шмаров Д.А. К вопросу о соотношении количества эритроцитов и их размеров в периферической крови / Д.А. Шмаров Л.К. Соболевская, A.B. Скрипка, Т.Н. Левина, О.И. Рябенкова // Клинич. лабор. диагностика.- 2002.- №4. С. 43-45.

176. Шустов B.JI. Профессиональные болезни / B.JI. Шустов // Саратов, 1980. 295 с.

177. Эллиот В. Биохимия и молекулярная биология / В. Эллиот. Д. Элиот // М: Наука, Интерпериодика, 2002,444 с.

178. Янькова В.И. Возрастные изменения липидного спектра, уровень пероксидации липидов и антиоксидантной защиты в крови печени крыс / В.И. Янысова, И.Л. Иванова // Росс, физиол. журн. им. И.М. Сеченова,- 2003,- Т. 89, №7. С. 828-836.

179. Ястребов А.П. Регуляция гемопоэза при действии на организм экстремальных факторов / А.П. Ястребов, Б.Г. Юшков, В.Н. Большаков //Свердловск.- 1988.- 152 с.

180. Ackerman М. Sistemic in flammatory respons syndrome, sepsis and nutritional support / M. Ackerman, N. Evans, M. Teklund // Crit. Care Nurs. Clin. North Am., 1994. Vol. 6. - P. 321-340.

181. Aftergood L. Effect of administration of a-and y-tocopherol on tissue distribution and red cell hemolysis in rats. Int. J. Vitam. and Nutr. / L. Aftergood, R.B. Alfin-Slater // Res., 1978.- Vol. 48, №1, P. 32-37.

182. Arockia-Rany P.D. as a free radical scavenger in aging / Arockia-P.D. Rany, C. Pannerscivan. Carnitini // Exp. gerontol. 2001.- Vol. 36, №10.-P.1713-1726.

183. Azzi A. Vitamin E: non-antioxidant roles / A. Azzi, A. Stocker // Progr. Lipid Res. 2000.-Vol.39.- P.231-225.

184. Back B.S. Regional difference of ROS generation, lipid peroxidation and antioxidant enzyme activity in rat brain in their dietary modulation /

185. B.S. Back, H.J. Know, K.H. Lee et all. // Arch. Pharm. Res.- 1999.- Vol. 22,ч4.- P. 361-366.

186. Barchrein G. Kinetic of linear rouleauk visual monitoring of red cell dinamic organization / G. Barchrein, D. Wainblum, S. Yedgar // J. Biophys -2000. Vol. 78, №5. - P. 2470-2474.

187. Barchtein., Wainblum D., Jedgar S.- 2005. (Цит. по: И.А. Тихомирова, A.B. Муравьева 2007).

188. Barry Hallwell. Guttering edition. Free radicals in biology and medicine. /Barry Hallwell, M.C. John //- 1998.- P. 36-104. (From: The chemistry free radicals and related "reactive cpecies").

189. Baskurt O.K., Cellular determinants of low shear blood viscosity. / O.K. Baskurt, H.J. Meiselman // Bioreology, 1997.- Vol. 34, №3,- P.235-247.

190. Bratozin D. Cellular and molecular mechanisms of senisept erythrocyte phagocytosis by macrophages. A. revive. / D. Bratozin, J. Mazuriez, J.P. Tissier et. all. // Bichim.- 1998.- Vol.- 80, №2.- P. 173-195.

191. Burkart V. Suppression of nitric oxide toxicity in isjet by a-Tocopherol / V. Burkart, Grov A. Eick, К. Bellimann et all.// FEBS Lett., -1995.- Vol. 364. - P. 259-263.

192. Casey R. Case control study of lymphoid neoplasm in three French areas: describtion, alcohol and tobacco consumption / R. Casey, Piazzon- K. Ferve, N. Raverdy, M.L. Forzy, B. Tretare, P.M. Carli, M. Maynadie // Vol. 16.-№2.- P. 142-150.

193. Catania Caimi G. The erythrocyte membrane; the interrelations between lipids, protein and the dynamic properties // Minerva Med.- 1992.-Vol. 83.-P. 187-192.

194. Chasis J.A. Membrane deformability and capacity for shape change in the erythrocyte / J.A. Chasis, S. Schrier //Blood.- 1989.-Vol. 74, №7.-P. 2562-2568.

195. Direcze N.C. Bone marrow and tumor stoma: and intimate relation ship / N.C. Direcze, M.R. Alison // Hematol. Oncol.- 2006.- Vol. 24, №4io-P. 189-195.

196. Dubey A. Effect on the spin-trapping compound N-test-butil-a-phenilnitrone on protein oxidation and life span / A. Dubey, M.J. Forster, R.S. Sohal // Arch. Biochem, Biophis. 1995. - V. 324.- P. 239-254.

197. Dutte G.G. Ingibitory effects of isomers of tocopherol on lipid peroxidation of microsomes from vitamin E -deficiens rats / G.G. Dutte, B.M. Gonzales, P.C. Morrice, J.R. Arthur // free radic. Res. Commun.-1991.-Vol. 15, №1.-P. 35-40.

198. E.G. Farris. The rat in the laboratory investigation /E.G. Farris //N.Y.-1962-364 p.

199. Emanuel N.M. Kinetics and free radical mechanisms of aging and carcinogenesis / N.M. Emanuel A. Likhacher, V. Anisimov, R. Montesano // Eds. (JARC Sci. Publ. №58) JARC. Lion.-1985.- P. 127-149.

200. Fujii J. Role of membrane lipids and proteins in discocyte-echinocyte and stomatocyte transformation of erythrocytes // Acta Biol. Med. Germ.-1981.- Vol.40.- P. 361-367.

201. Freitas J.P. Gycation et peroxidation lipidique dans la peau et le plasma de patients diabetiqes / J.P. Freitas, Filip Querra., f. Radrigo // C.R. Seancec Soc. Biol.- 1997.- Vol. 191, №5-6.- P. 837-842.

202. Guulivani A. A monoclonal antibody monitoring band 3 modifications in human red blood cells / A. Guulivani, Marini., J. Ferroni et. all. // Mol. Cell. Biochem.- 1992.- Vol. 117,№1.-P. 43-41.

203. Gomi F. Effects of oxygen in hatation on the oxidant capacity of lipids, livers, and brains in normal and vitamin E-deficient rats at various ages / F. Gomi, M. Matsuo J. Nutr. // Sci. Vitaminol.- 1995.- Vol. 41.- P. 139-149.

204. Guidi S.P. Membrane skeleton-bilayer interaction is not the major determinant of membrane phospholipid asymmetry in human erythrocytes / S.P. Guidi, A. Kumar et all., // Biochim. Biophis. Acta: Biomembranes.-1990.-Vol. 1023.- №1.- P. 63-72.

205. Halliwell B. Lipid peroxidation: its mechanism, measurement, and a . significance / B. Halliwell, S. Chirico // Am. J. Clin. Nutr.- 1993.- Vol. 57, №5(Suppl.).-P. 715-754.

206. Handin T.P. (eds) Blood: Principles and practice of hematology / T.P. Handin, S.G. Stossel, S.G. Lux, J.B. Lappincott // 1995.- P. 1726.

207. Harman D. Aging: a based on free radicals and radiation chemistry / D. Harman // J. Gerontol.- 1956.- Vol. 11.- P. 298-300.

208. Harman D. Free radical theory of aging: increasing the functional life span // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1994.-Vol. 717. - P. 1-15.

209. Harman D. Free-radical theory of aging: an apdate: increasing the functional life span //Am. N.Y. Acad. Sci.- 2006.- Vol.1067.- P. 10-21.

210. Harnett M. Serum markers of oxidative stress and severity of diabetic retinopathy / M. Harnett, S. Elizabeth., D. Robert, Stratton, J. Richard, Lanham, Donald Armstrong. // Diabetes Care.- 2000.- Vol. 23, №2,- P. 234240.

211. Hegner D. Age dependence of molecular changes in biological membrane properties // Mech. Aging and develop.- 1980. Vol. 14, №1. P. 3-118.

212. Jeppi C. Evidence for membrane protein oxidation during in vivo aging of human erythrocytes / C. Jeppi, M.A. Castellana, G. Minetti et all.// Mech Aging Dev.- 1991.-Vol. 57, №3.-P.247-258.

213. Kellicher J. Vitamin E in the elderly.-Tokopherol, oxygen and biomembranes / J. Kellicher, M.S. Losowsky //Proc. Jnt. Symp. Lake. Jamanaka. 1977. Amsterdam. N. Y.- 1972.- P. 311-327.

214. Kelly M.J. Characteristics of the protective action of alpha-tocopherol in vascular hypoxia / M.J. Kelly, W. Richardson // Pharmacol.-Toxicol.-1996,- Vol. 78, №4.- P. 209-213.

215. Khausari N. Mechanisms for the removal of senescent human erythrocyres / N. Khausari, E. Merler, H.H. Fudenberg T.T. Mech. // Aging and develop.- 1983.- Vol. 21., №1.- P. 49-58.

216. Kitabchi A. Specific binding sites for D-L-a-Tocopherol on human erythrocytes / A. Kitabchi, J. Wimalasen // Biochim. et Biophis. Acta.-1982.- Vol. 684, №2.- P. 200-206.

217. Kosmider S. Studies on the toxic action mechanism of hydrogen susfide / S. Kosmider, Rogala E., Pacholek A. // Jnt. Arch. Arbeidsmed.-1966.- Vol. 22, №1.- P. 60-67.

218. Martin A. Effects of vitamin E and C in the central nervous system and peripheral tissues: implications for healt recommendation / A. Martin, D. Ganigian, Shukitt-Haleb., R.L. Prior, J.A. Joseph // Brain Res.- 1999.-V.825.- №1.- P. 50-59.

219. Meiselman H.G. In vivo circulatory correlates of altered RBC aggregation//Biorheology.- 2002.-vol. 39, №5.-P.636.

220. Meydani M. Vitamin E and atherosclerosis beyond prevention of LDL oxidation // J. Nutr. 2001. Vol. 131, №2. P. 366-368.

221. Nakamura A. Transfer of L-Tocopherol from plasma to erythrocytes in vitamin E-deficient rats /A. Nakamura. F. Masugi // Jnt. J. Vitam. and nutr. Res.- 1979.- 49, №4.- P. 364-369.

222. Noguchi N. Phenolic antioxidants a rationale for design and evolution of novel drug for aterosclerosis / N. Noguchi, E. Niki // Free radic. Biol. Med.-2000.- Vol. 28, №10.- P. 1538-1546.

223. Novozhilov A.V. Dinamics of blood hematological parameters of white rats in postnatal ontogenesis / A.V. Novozhilov, L.N. Katuchin // Zh. Evol. Biokim. Physiol. 2008. Nov.-Dec. Vol. 44(6).- P. 613-621.

224. Papa S. Reactive oxygen species, mitochondria, apoptosis and aging / S. Papa, V.P. Skulachev // Molec. Cell. Biochem. 1997. - Vol. 174. - P. 305-319.

225. Parker L. Molecular aspects of alpha-Tokoferinol antioxidant action and all signaling // J. Nutr.- 2001.- Vol. 7, №2.- P. 396-373.

226. Pollac M. Zeuwenburg. Molecular mechanisms of oxidative stress in aging: antioxidants and disease // Jn: Handbook of oxidant and antioxidants in exercise / C.K. Sen., L. Packer and E.N. Hannin (eds).- 2000.- P. 851-921.

227. Pryor W.A. Free radical biology: xenobiotics, cancer and aging // Ann. N.Y. Ahead. Sci.- 1982.- Vol. 393.- P. 1-22.

228. Pryor W.A., Free radical biology: xenobiotics, cancer and aging // Ann.- N.Y. Acad. Sci.-1982.-Vol.393.- P. 2.

229. Ragsdale F.R., Jngermann R.L. // AmJ. Phisiol., 1993 Vol. 264.- №3 Pt.2. P. 481-486 ijht no: 3hhnyk E.B., EopucioK M.B., KopHeiiHHK B.H.

230. Rakhmani L.A. The structural organization of the erythrocyte , membranes of representatives of different ethnie groups following a single drink of ethanol / L.A. Rakhmani, N.E. Kushnerova, A.E. Bulanov, Ju. A. // Gig Saint.- 1991.- №11.- P. 59-62.

231. Seppi C. Evidence for membrane protein oxidation during in vivo aging of human erythrocytes / C. Seppi, E. Gucux, A. Mazur et. all. // Mech. Aging Dev.- 1991.- Vol. 57, №3.- P. 471-476.

232. Sehgal P.K. Therapeutic effects of vitamin E and Selenium in treating hemolytic anemia of monkeys (Aotis trivirgatus). / P.K. Sehgal, R.T. Bronson, P.S. Brady, K.W. Mc Jntyre, M.W. Ellion // Jab. Anim. Sci.-1980,- Vol. 30, №1.-P. 92-98.

233. Shigenaga M.K. Oxidative damage and mitochondrial decay in aging / M.K. Shigenaga, T.M. Hogen, B.N. Anmes // Proc. Nal. Acad. Sci.- 1994. -Vol. 91.-P. 10771-10778.

234. Signorini C. Iron relase membrane proteoxidation and erythrocyte aging. / C. Signorini, L. Ciecoli, M. Ferrari, L. Sugheriri, A. Magnani, M. Comporti //FEBS Left.- 1995.- Vol. 362, №2.- P. 165-170.

235. Skulachev V.P. A. iochemical approach to the problem of aging: Megaprotect on membrane Penetzating ions. The first Resuets and prospects // Biochemistry (Moscow)- 2007.- Vol.72, №12.-P.1385-1396.

236. Sohal R.S. Relationship between antioxidants, prooxidants, and the aging process / R.S. Sohal, W.C. Orr // Ann. N.Y. Acad. Sci.- 1995. Vol. 663, №l.-P.74-84.

237. Stadtman E.R. Protein oxidation and aging // Science.-1992.-Vol. 257, №5074. P.- 1220-1224.

238. Stadtman E.R. Protein oxidation in aging and age-related diskases // Ann N.Y. Acad. Sci.-2001.- Vol.928.-P.22-38.

239. Sushil J.K., Evidence for membrane lipid peroxidation the in vivo aging of human erythrocytes //Biochim. Biophis. Acta; Biomembranes.-1988.-Vol. 937, №2.-P.205-210.

240. Teply D.L. Neurophysiological effects of vitamin E.-Publishing House «Astrakhan University » 2010.- 248 p.

241. Tsujimoto M., Yabutani Т., Murotani H., Mishima Y., Maruyama K., Yasuzava M., Motonaca J. // Anal. Sci.- 2006.- Vol. 23, №1.- P. 59-63.

242. Vanaserry G.T. Changesin vitamin E concentrations in human platelets with age / G.T. Vanaserry, G.J. Johnson, A.M. Krezovski // J. Amer. Coll. Nutr.- 1983. Vol.2 P. 369-375.

243. Wallach D.F., Dieri S., Verna S.P., 1985 (цит по: Леонова В.Г., 1987).

244. Wanatabe H. Alterations of human erythrocytes membrane fluidity by oxygen-derived free radicals and calcium / H. Wanatabe, A. Kobayashi, T. Yamamoto, et all. //Free Radic. Biol. Med.- 1990- 8(6)- P. 507-514.

245. Wolffenbuttell B.H. Bucala Long-term assessment of glucose control by hemoglobin-AGE measurement / B.H. Wolffenbuttell, D. Giordano, H.W. Founds // The Lancet.- 1996.- T.347 (9000).- P. 513-515.

246. Wustner D. Release of phospholipids from erythrocyte membranes by taurocholate in determined by their transbilayer orientation and hydrophobic backlone / D. Wustner, T. Pomorski, A. Herrman, P. Miller // Bioch.- 1998.-Vol. 37, №48.-P. 17093-17104.

247. Zhang Y. Restricted uptake of dietary coenzyme Q is in contrast uptake of alpha-tocopherol into rat organs and cells. / Y. Zhang, M. Turunen, E.L. Appelkvist // J. Nutr., 1996.- Vol. 126.- №9.- P. 2089-2097.

Информация о работе

Теплый, Дмитрий Давидович
кандидата биологических наук
Астрахань, 2011
ВАК 03.03.01

Диссертация

Особенности морфофизиологических показателей эритроцитов белых крыс на этапах онтогенеза в норме и при оксидативном стрессе - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Особенности морфофизиологических показателей эритроцитов белых крыс на этапах онтогенеза в норме и при оксидативном стрессе - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы