Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изучение структурных свойств эритроцитов крови новорожденных при оксидативном стрессе, вызванном гипоксией

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Изучение структурных свойств эритроцитов крови новорожденных при оксидативном стрессе, вызванном гипоксией"

На правах рукописи

Попова Ирина Евгеньевна

ИЗУЧЕНИЕ СТРУКТУРНЫХ СВОЙСТВ ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ НОВОРОЖДЕННЫХ ПРИ ОКСИДАТИВНОМ СТРЕССЕ, ВЫЗВАННОМ ГИПОКСИЕЙ

Специальность 03 00 02 - Биофизика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Воронеж - 2007

003174444

Работа выполнена в Воронежском государственном университете

Научный руководитель

доктор биологических наук, профессор Артюхов Валерий Григорьевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Бузлама Виталий Соломонович

кандидат биологических наук, доцент Рохас-Риоха Ирина Евгеньевна

Ведущая организация:

Воронежская государственная медицинская академия

Защита состоится 19 октября 2007 года в 1500 часов на заседании диссертационного совета Д 212 038 03 при Воронежском государственном университете по адресу 394006 Воронеж, Университетская пл , 1, биолого-почвенный факультет, ауд 59

С диссертацией можно ознакомиться в зональной научной библиотеке Воронежского государственного университета

Автореферат разослан «17» сентября 2007 года

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Ежегодно в мире умирает более 5 млн новорожденных В России причиной 40% летальных исходов является внутриматочная гипоксия и асфиксия в родах Гипоксическое поражение плода и новорожденного создает предпосылки для высокой заболеваемости и инвалидизации детей раннего возраста (Н П Шабанов, 2006, R Almini, 2000)

С целью снижения частоты и тяжести осложнений, вызванных гипоксией в неонатальный период, необходима разработка и внедрение в клиническую практику методов ранней адекватной оценки тяжести состояния ребенка Наибольший интерес при этом представляет изучение последствий окислительных процессов, активирующихся при гипоксии (НК Зенков, 2001, ЛД Лукьянова, 1997, R Bracci, 2002) и вызывающих нарушение молекулярной организации биомембран Структурные перестройки последних являются эффективным механизмом как стрессовой, так и строго специфической регуляции самых разнообразных процессов в норме и при патогенезе различной этиологии (В В Новицкий, 1999)

Мембрана эритроцита - наиболее удачная биологическая модель для изучения динамики нарушений, протекающих в организме при развитии патологии Эритроциты участвуют в приспособлении организма человека и животных к условиям внешней среды Они не только транспортируют кислород, необходимый для протекания окислительно-восстановительных реакций в клетках и тканях, но и обеспечивают целенаправленный отклик организма на действие внешних и внутренних факторов Кроме того, метаболические процессы, протекающие в эритроцитах при стрессе и клинической патологии, являются интегральным отражением реакции клеток на уровне всего организма (М В Овсянников, 2005, И Е Слобожанина, 2000)

С целью изучения молекулярных механизмов, лежащих в основе формирования повреждений клеточных мембран в условиях развития оксидативного стресса, нами были исследованы структурные свойства эритроцитов, активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ) в динамике заболеваний новорожденных при различной интенсивности реакций свободнорадикального окисления, вызванных гипоксией На модельной системе проведена серия опытов по определению вклада различных химических агентов (карбонильных продуктов пероксидного окисления липидов, некоторых антибактериальных препаратов) в процесс модификации мембранных структур при патологии

Научная новизна. Проведен сравнительный анализ изменения структурных свойств эритроцитов, активности Г-6-ФДГ и уровня оксидативного стресса у новорожденных в динамике постгипоксических осложнений Впервые выявлено наличие скрытых структурных повреждений в эритроцитах при гипоксии Установлено, что глубина формирования дефектных областей в мембране определяется интенсивностью развития реакций свободнорадикального окисления Показана химическая модификация белковых компонентов эритроцита и плазмы крови у новорожденных в динамике критического состояния Впервые установлено, что основной вклад в нарушение композитной организации бел-ково-липидного каркаса мембраны при оксидативном стрессе (ОС) вносят не

карбонильные продукты пероксидного окисления липидов (кетоны, альдегиды), а активные формы кислорода Установлено, что метаболиты карбонильной природы химически модифицируют белковые структуры описаны реакции возможных типов комплексирования между ними Установлено, что антибиотики различных классов (амикацин, фортум, ципрофлаксацин, ванкомицин) проявляют высокое сродство к мембранам низкостойкой субпопуляции эритроцитов и структурным белкам

Практическая значимость. Полученные данные позволяют расширить и углубить фундаментальные представления о механизме повреждения мембран соматических клеток организма при ОС Исследование начальных этапов развития патологии на клеточном уровне дает возможность в дальнейшем осуществить раннюю диагностику заболевания, а также купировать его на первых этапах развития Это позволит снизить риск инвалидизации и смертности, в частности, новорожденных детей и повысить качество и эффективность интенсивной терапии Определение мембранотропности антибиотиков, активно применяемых при лечении инфекционной патологии у новорожденных, позволит изучить механизмы влияния данных препаратов на соматические клетки организма Это даст возможность разработать более эффективную схему лечения пациентов с минимальным риском побочных эффектов от приема антибиотиков Материалы работы используются при проведении практикумов, выполнении курсовых и дипломных работ студентами Воронежского государственного университета

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение молекулярных механизмов структурных свойств эритроцитов крови новорожденных, перенесших гипоксию Для реализации данной цели были поставлены следующие задачи 1 Выявить взаимосвязь между структурными свойствами эритроцитов и активностью их антиоксидантной защиты при различной интенсивности развития оксидативного стресса у новорожденных в динамике постгипоксических осложнений 2 Провести сравнительный анализ между изменениями структурных свойств эритроцитов при различных условиях функционирования их антиоксидантной системы, уровнем оксидативного стресса и клинико-лабораторными показателями крови, а также тяжестью патологии новорожденных в динамике критического состояния 3 Оценить вклад карбонильных продуктов пероксидного окисления липидов и активных форм кислорода в изменение структурных свойств эритроцитов в условиях интенсификации реакций свободнорадикального окисления в организме 4 Изучить влияние препаратов антибактериальной терапии новорожденных на структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран 5 Разработать схему молекулярных механизмов изменения структурных свойств эритроцитов в условиях развития оксидативного стресса

Апробация работы. Основные результаты, полученные при выполнении диссертационной работы, представлены на III Конгрессе педиатров-нефрологов России (Санкт-Петербург, 2003), III Съезде биофизиков России (Воронеж, 2003), II Евразийском конгрессе по медицинской физике и инженерии «Медицинская физика - 2005» (Москва, 2005), 5 World Congress on Pediatric Critical

Care, Geneva, 2007, ежегодной Научной сессии преподавателей и сотрудников Воронежского государственного университета (Воронеж, 2004, 2005)

Публикации. Основные результаты диссертационной работы изложены в 7 публикациях - в 3 статьях и 4 тезисах

На защиту выносятся следующие положения:

1 При оксидативном стрессе, вызванном гипоксией у новорожденных, происходит формирование скрытых структурных повреждений в мембранах эритроцитарных клеток

2 На модельной системе «эритроцит-модификатор» установлено, что метаболиты карбонильной природы, образующиеся в результате пероксидного окисления липидов, не играют определяющей роли в формировании структурных повреждений эритроцитов новорожденных в динамике постгипоксических осложнений основной вклад в образование дефектов мембраны при оксидативном стрессе вносят активные формы кислорода

3 В динамике постгипоксических осложнений у новорожденных выявлено, что количество эритроцитов, имеющих структурные повреждения, и их глубина определяются интенсивностью и продолжительностью развития окси-дативного стресса в организме, а также активностью антиоксидантной системы

4 Антибиотики (амикацин, фортум, ципрофлснссацин, ванкомицин) проявляют различный по выраженности и пролонгированности гемолитический эффект и вступают в реакции химического взаимодействия с белками мембраны эритроцита

5 Предложена схема событий, отражающих возможные механизмы изменения структурных свойств эритроцитов при развитии оксидативного стресса у новорожденных в условиях гипоксии

Структура и объем работы. Диссертация представлена на 250 страницах текста, состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части и обсуждения полученных результатов (9 глав), заключения, выводов, списка литературы и приложения Иллюстративный материал включает 45 рисунков и 2 таблицы В «Приложении» содержатся 17 рисунков и 6 таблиц

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИСЛЕДОВАНИЯ

Объекты исследования. В качестве объекта исследования использовали эритроциты, полученные из крови новорожденных детей и крови взрослых лабораторных белых крыс {Rattus rattus L) Контролем служили эритроциты доноров мужского пола Для изучения уровня ОС использовали плазму крови новорожденных, в которой определяли уровень окислительной модификации белков При исследовании структурных свойств эритроцитов в присутствии карбонильных гомологов продуктов ПОЛ (ацетона, формальдегида, глутарового ди-альдегида) растворы модифицирующих агентов готовили методом последовательных разведений в изоосмотическом и гипоосмотическом (0,55% NaCl) растворах хлорида натрия химически чистых ацетона, коммерческого водного раствора глутарового диальдегида (ГДА) и формалина (ФА) С целью изучения влияния антибиотиков различных классов (амикацина, фортума, ципрофлакса-

цина и ванкомицина) на структурные свойства эритроцитов растворы одноименных фармакологических препаратов готовили в изоосмотическом и гипо-осмотическом (0,55% ЫаС1) растворах хлорида натрия

Получение суспензий эритроцитов. Для изучения осмотической и кислотной резистентности эритроцитов использовали кровь 50 новорожденных детей в динамике развития критического состояния, взрослых лабораторных белых крыс, а также кровь доноров мужского пола не старше 45-50 лет В качестве антикоагулянта добавляли гепарин (5000 ЕД/мл) из расчета 10 ЕД/мл крови Не позднее, чем через час после забора крови, отмытые эритроциты получали путем трехкратного центрифугирования цельной крови в физиологическом растворе хлорида натрия при 1500 об/мин 10 мин с промежуточным отмыванием от стабилизатора и плазмы Очищенный раствор взвеси эритроцитов доводили физиологическим раствором до оптической плотности, равной 0 8 при 490 нм

Автоматический метод регистрации осмотических и кислотных эритрограмм. Принцип метода заключается в фотометрической регистрации процесса гемолиза эритроцитов Кинетические кривые (эритрограммы) являются графическим отражением последовательного вступления клеток различной степени стойкости в стадию гемолиза (И И Гительзон, 1960) Установка для регистрации эритрограмм включает фотоэлектроколориметр ФЭК-56М, двухко-ординатный регистратор ЛКД4-003 и цифровой вольтметр типа В7-20, ультратермостат иТО-б Измерение величин светопропускания осуществляли при длине волны А,=490 нм, т к в этой области спектра коэффициент молярной экстинкции водных растворов НЬОг минимален (С Г Резван, 1996) С целью выявления скрытых структурных превращений в эритроцитах изучали кинетику гипоосмо-тического гемолиза при 0,55% МаС1, что соответствует точке критической резистентности для клеток контроля Кинетику кислотного гемолиза эритроцитов, позволяющую оценить величину гидрофобного барьера проницаемости белковых компонентов мембраны, регистрировали после добавления в рабочую кювету с 5 мл суспензии эритроцитов 100 мкл кислоты (0,1н НС1)

Метод определения уровня окислительной модификации белков плазмы крови. Для исследования интенсивности свободнорадикальных процессов в плазме крови новорожденных оценивали спонтанную окислительную модификацию белков по методу Яваиск й а1 (А Ъ Ке/пюк, 1994) с некоторыми нашими изменениями Метод основан на вза имодействии окисленных аминокислотных остатков с 2,4-динитрофенилгидразином с образованием 2,4-динитрофенилгидразонов Оптическую плотность опытной пробы измеряли на спектрофотометре СФ-46 при 370 нм

Спектрофотометрический метод определения активности глюко-зо-6-фосфатдегидрогеназы эритроцитов. Активность Г-6-ФДГ определяли на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 340 нм О скорости реакции судили по увеличению оптической плотности в результате восстановления ИАВР, образующегося при окислении глюкозо-6-фосфата в 6-фосфоглюконолактон За единицу активности принимали ферментативную единицу активности

Моделирование интоксикации крыс четыреххлористым углеродом.

Острый токсический гепатит индуцировали у взрослых лабораторных белых крыс - самцов массой 150-200 г (Rattus rattus L ) Токсическое повреждение печени моделировали пероральным введением 33% раствора СС14 в вазелиновом масле из расчета 64 мкл СС14/100 г массы животного (Н Ю Федорова, 1999) Взятие крови осуществляли на 1, 2, 3 и 4 сутки после введения токсического агента Развитие токсического повреждения печени крыс отслеживали по изменению активностей аланинаминотрасферазы и аспартатаминотрансферазы в сыворотке животных

Статистическая обработка экспериментальных данных. Опыты проводили в 3-4-х кратной повторности, аналитические определения для каждой пробы осуществляли в четырех повторностях Результаты опытов сравнивали с контролем В таблицах и на рисунках приводятся средние арифметические значения и их стандартные ошибки Для определения статистической достоверности результатов исследований применяли метод вариационной статистики Полученные данные обрабатывали с использованием параметрических критериев (Р < 0,05)

ОСМОТИЧЕСКАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ НОВОРОЖДЕННЫХ В ДИНАМИКЕ ПОСГГИПОКСИЧЕСКИХ ОСЛОЖНЕНИЙ

Известно, что метаболические процессы, протекающие в эритроцитах при стрессе и клинической патологии, являются интегральным отражением реакции клеток на уровне всего организма (К Т Сергеев, 1998, G В Nash, 1985, W Tillmann, 1980) С целью изучения структурных свойств мембран соматических клеток организма в условиях развития ОС, вызванного гипоксией, регистрировали осмотическую резистентность эритроцитов крови 50 новорожденных детей, поступивших на лечение в отделение реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ) Воронежской областной детской больницы № 1 в период с 4 по 18 сутки жизни Пациенты находились в критическом состоянии, которое сопровождалось развитием острой и хронической гипоксии

Методом автоматической регистрации кинетических эритрограмм установлено снижение гипоосмотической (0,55% NaCl) резистентности эритроцитов крови всех обследуемых пациентов как при поступлении в ОРИТ, так и в динамике патологии Это указывает на формирование скрытых структурных повреждений в эритроцитарных мембранах при гипоксии По направленности изменения гипоосмотической стойкости эритроцитов в динамике патологии выделены 3 группы новорожденных первую составили 27 детей, у которых регистрировали снижение резистентности эритроцитов, вторую - 14 новорожденных с последовательным повышением гипоосмотической стойкости клеток, в третью группу вошли 9 пациентов, направленность изменения структурных свойств эритроцитов которых зависела от их возраста

У детей I группы число разрушенных в гипотонической среде эритроцитов за 2 мин увеличилось с 15 до 40% в динамике заболевания (рис. 1). Это свидетельствует о повышении количества эритроцитов низкостойкой субпопуляции, имеющих скрытые структурные повреждения, в динамике постгипоксических осложнений новорожденных, сочетанных с тяжелыми патологиями и инфекционным процессом.

При оценке максимального количества гемолизированных в 0,55% растворе ЫаС1 эритроцитов в течение 30 мин (Опих, %), характеризующего резистентность средне- и более высокостойких клеток, установлено увеличение на 25% числа эритроцитов, имеющих скрытые структурные дефекты в динамике патологии.

о.

Рис. 1. Кинетика гипоосмоти-ческого гемолиза эритроцитов крови новорожденных, перенесших гипоксию: 1, II, III - группы детей при поступлении в ОРИТ (а) и при выписке из ОРИТ (б).

О Г^Г- I I I-L—U-1-L I I I-1-1-1-L_I-1-1—1-1111' МИН

1 2

Результаты исследований осмотической резистентности эритроцитов новорожденных I группы позволили установить не только повышение числа гемолизированных эритроцитов относительно контроля (что согласуется с литературными данными (О.Я. Бабак, 2004, Г.С. Рачкаускас, 1995, M.D. Kaplowitz, 2002)), но и наличие скрытых нарушений структурных компонентов мембраны, формирующихся на ранних этапах повреждения клетки и являющихся первичным признаком дисбаланса в системе «свободно-радикальное окисление (СРО)-антиоксидантная защита (АОЗ)». Это обусловливает необходимость внедрения в клиническую практику методов, позволяющих выявлять скрытые изменения биомолекул в условиях развития ОС для прогнозирования и своевременной оценки исхода патологии.

Сравнительный анализ изменения осмотической резистентности эритроцитов новорожденных, перенесших гипоксию, и клинико-биохимических показателей крови позволил установить четкую взаимосвязь между количеством эритроцитов, имеющих скрытые структурные повреждения, и содержанием их и гемоглобина в крови. Параллельно с формированием дефектов в эритроци-тарной мембране происходит разнонаправленное изменение числа иммунных клеток (moho-, лейко- и лимфоцитов) в организме детей.

У новорожденных II группы в динамике постгипоксических осложнений установлено повышение гипоосмотической резистентности различных по стойкости субпопуляций эритроцитов. Это может являться следствием компенсаторного эритропоэза вследствие гипоксии, при котором в кровяное русло выбрасываются молодые клетки, а старые разрушаются (С.П. Аникеева, 1990).

У детей III группы формируются менее глубокие изменения структурных компонентов эритроцитов по сравнению с таковыми пациентов первых двух групп Установлена прямопропорциональная зависимость между максимальным числом гемолизированных в 0,55% растворе NaCl эритроцитов и содержанием лейко-, лимфоцитов, а также между количеством распавшихся в ги-поосмотической среде клеток в течение 2 мин и числом моноцитов, эритроцитов и гемоглобина в крови детей в динамике патологии

При анализе параметров осмотической резистентности клеток в динамике и тяжести состояния новорожденных, оцененной по шкале SNAP-II при поступлении в ОРИТ, установлено, что в I, II и III группы входят дети с различной тяжестью патологии Анализ баллов по Шкале Апгар у детей различных групп позволил выявить отсутствие взаимосвязи между тяжестью состояния новорожденных при рождении и изменением осмотической резистентности эритроцитов Следовательно, направление изменения структурных перестроек в эритроцитар-ных мембранах у новорожденных, перенесших гипоксию, не всегда определяется тяжестью переносимой патологии Вероятно, значительную роль при этом играют индивидуальные компенсаторные возможности организма ребенка

ИНТЕНСИВНОСТЬ РАЗВИТИЯ ОКСИДАТИВНОГО СТРЕССА У НОВОРОЖДЕННЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ ГИПОКСИЮ

С целью выявления возможной взаимосвязи между интенсивностью развития ОС и изменением структурных свойств эритроцитов крови новорожденных, перенесших гипоксию, нами было проведено исследование уровня окислительной модификации белков (ОМБ) плазмы крови детей в динамике заболевания одновременно с определением осмотической резистентности эритроцитов Установлено 3 типа изменения ОМБ плазмы детей I группы с момента поступления в ОРИТ до перевода в отделение патологии новорожденных У 58% пациентов регистрировали снижение ОМБ плазмы крови в 5 раза в условиях интенсивной терапии (рис 2 А), что свидетельствует об уменьшении оксидативного стресса в организме детей Параллельно с этим в крови детей повышается лишь число лейкоцитов, в то время как количество моно- и лимфоцитов может и не изменяться

Интенсификация реакций СРО в организме приводит к снижению осмотической резистентности эритроцитов, которое сохраняется и после купирования процессов СРО в результате курса интенсивной терапии Вероятно, это является следствием аккумулирования в клетках скрытых структурных повреждений, индуцированных АФК и продуктами их реакций в острый период развития ОС

У 17% обследуемых пациентов I группы установлено увеличение в 3 раза оксидативного повреждения белков плазмы крови на фоне повышения числа структурно-поврежденных эритроцитов в динамике патологии (рис 2 А) При этом возрастает число моно- и лимфоцитов У 25% пациентов I группы уровень ОМБ плазмы снижается после значительного предварительного увеличения (рис 2 А) Активация реакций СРО макромолекул может являться следствием различных причин перевода ребенка с искусственной вентиляции легких на

самостоятельное дыхание, особенностями антибактериальной терапии, присоединения вторичной инфекции и др. В период максимальной интенсивности ОМБ плазмы в крови детей увеличивается число лейко- и лимфоцитов. Установлено, что количество и глубина структурных дефектов в мембране эритроцита определяется интенсивностью ОС новорожденных, перенесших гипоксию.

У детей II группы ОМБ плазмы снижается в 3 раза в динамике патологии (рис. 2 Б) на фоне повышения осмотической резистентности эритроцитов. При этом выявлена разнонаправленная динамика содержания различного типа иммунных клеток.

У новорожденных III группы также регистрировали уменьшение уровня ОМБ плазмы крови в 3 раза в период постгипоксических осложнений (рис. 2 Б). Установлена обратнопропорциональная зависимость между количеством лейкоцитов и осмотической резистентностью высокостойкой субпопуляции эритроцитов, а также между уровнем ОМБ плазмы и устойчивостью низкостойких клеток к действию осмотических сил.

Сравнительный анализ данных, полученных при изучении осмотической резистентности эритроцитов и уровня ОМБ плазмы крови новорожденных в динамике постгипоксических осложнений, позволил установить, что интенсивности образования структурных нарушений в эритроците и ОС в организме не всегда совпадают. Однако в ответ на активацию СРО незамедлительно снижается осмотическая стойкость эритроцитов вследствие формирования дефектов в белково-липидном каркасе их мембраны.

А [СО] в белках плазмы, % Д [СО] в белках плазмы, °/о

Рис. 2. Уровень окислительной модификации белков плазмы крови новорожденных I (А) и II, III (Б) групп в динамике патологии.

КИСЛОТНАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ НОВОРОЖДЕННЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ ЕИПОКСИЮ

С целью изучения уровня химической модификации мембранных белков у новорожденных, перенесших гипоксию, применяли метод автоматической регистрации кислотных эритрограмм. У пациентов I группы при поступлении в ОРИТ выявлено как последовательное снижение, так и отсутствие изменения кислотной стойкости эритроцитов в течение курса интенсивной терапии, на что указывает в первом случае смещение интегральной эритрограммы

влево при выписке детей из ОРИТ относительно таковой при поступлении в ОРИТ (рис. 3, кривые 1а, 16); во втором случае - отсутствие смещения кривых кислотного гемолиза в динамике патологии (рис. 3, кривые 4а, 46). У большинства пациентов снижается гидрофобный барьер проницаемости для протонов не только низкостойкой, но и средне- и высокостойкой субпопуляций клеток. Установлено, что нарастание интенсивности ОС в организме приводит не только к структурной модификации белков плазмы крови, но также и протеинов мембраны эритроцита, что согласуется с данными В.Д. Прокопьевой (2005).

Не зависимо от направленности изменения уровня ОМБ плазмы крови, снижение гидрофобного барьера проницаемости эритроцитарных мембран для протонов сопровождается в большинстве случаев увеличением содержания в крови различного типа иммунных клеток. Это указывает на развитие воспалительного процесса в организме ребенка, и как следствие этого, химической модификации белковых компонентов эритроцитарных мембран.

:f,<Hii—

Рис. 3. Кинетика кислотного гемолиза эритроцитов крови новорожденных, перенесших гипоксию: 1, 2, 3, 4 - пациенты в моменты поступления (а) и выписки (б) из ОРИТ, контроль - 5.

У части новорожденных I группы формируются менее глубокие структурные изменения белков мембраны эритроцита. На это указывают равенство или приближение к контролю длительности ^ и значений К1ШХ кислотного гемолиза эритроцитов при поступлении и при выписке новорожденных из ОРИТ. Таким образом, у пациентов в ходе курса терапии выявлена химическая модификация различных по стойкости субпопуляций эритроцитов, приводящая в одних случаях к снижению, а в других - к повышению гидрофобного барьера проницаемости белков мембраны для протонов.

У 55% новорожденных II группы кислотные эритрограммы смещаются вправо и приближаются к контролю при выписке из ОРИТ относительно таковой в момент поступления (рис. 3, кривые За, 36). То есть на фоне снижения ОМБ плазмы повышается гипоосмотическая и кислотная стойкость эритроцитов в динамике патологии. При этом отсутствует зависимость между изменением химической резистентности эритроцитов и числом иммунных клеток в крови детей. У 45% пациентов II группы регистрировали повышение гидрофобного барьера проницаемости белков для протонов как относительно контроля, так и в динамке заболевания.

У новорожденных III группы, у которых осмотическая стойкость эритроцитов низкостойкой субпопуляции увеличивается, а средне- и высокостойкой - уменьшается при снижении уровня ОМБ плазмы, установлено, что химическая модификация белков мембраны эритроцитов вызывает разнонаправленный характер изменения гидрофобного барьера проницаемости клеток для протонов Выявлена обратнопропорциональная зависимость между содержанием лейкоцитов и длительностью t|at, характеризующей химическую резистентность низкостойких клеток

АКТИВНОСТЬ ГЛЮКОЗО-6-ФОСФАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ ЭРИТРОЦИТОВ НОВОРОЖДЕННЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ ГИПОКСИЮ

Для изучения уровня АОЗ эритроцитов у новорожденных с постгипоксиче-скими осложнениями определяли активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ) эритроцитов У 52 % пациентов I группы ее активность повышается на 30% одновременно с увеличением уровня ОМБ и формированием скрытых структурных повреждений до 30% эритроцитов Снижение интенсивности ОМБ плазмы на 17% сопровождается понижением активности Г-6-ФДГ на 70% (рис 4 А) и увеличением количества структурно-поврежденных эритроцитов на 20% Это позволяет заключить о том, что ферментативное звено АОЗ мгновенно реагирует на развитие деструктивных процессов в эритроците Однако структурные повреждения аккумулируются в клетках, и эритроциты с пониженной осмотической стойкостью продолжают циркулировать в крови больных еще в среднем 3 суток

У 26 % пациентов I группы после уменьшения интенсивности ОС высокая активность Г-6-ФДГ сохранялась еще 5 суток (рис 4 Б) параллельно со снижением осмотической резистентности клеток от 18 до 50% в динамике патологии У 22 % детей активность фермента превышала норму от 50 до 90% (рис 4 В) сочетано с увеличением уровня ОМБ плазмы крови и снижением осмотической резистентности эритроцитов в динамике курса интенсивной терапии То есть у данных пациентов при интенсификации ОС активации Г-6-ФДГ недостаточно для сокращения количества эритроцитов с дефектами белково-липидного каркаса мембраны

У детей II группы активность Г-6-ФДГ снижется (рис 4 Б) одновременно с уменьшением уровня ОМБ плазмы и повышением осмотической резистентности эритроцитов в динамике Г-6-ФДГ мгновенно активируется в ответ на развитие реакций СРО, что согласуется с данными Т В Ереминой (1999)

Показано повышение активности Г-6-ФДГ при формировании структурных повреждений в мембранах низко- и среднестойких эритроцитов, глубина которых определяется интенсивностью ОС При наличии дефектов структурных компонентов мембран низкостойкой субпопуляции клеток фермент снижает свою активность параллельно с уменьшением уровня ОС

У пациентов III группы с различным характером структурных изменений субпопуляций эритроцитов установлено снижение активности Г-6-ФДГ на 40% в динамике пребывания детей в ОРИТ (рис 4 Б) При этом регистрировали уменьшение уровня ОМБ плазмы крови на 11%, а также сокращение числа эритроцитов низкостойкой субпопуляции, имеющие скрытые структурные повреждения на 5%

ФЕ/10 эритроцитов 140

so 60 40

X OME

12 3 4 повторы в динамике

ФЕ/10" эритроцитов 100

п ш

группы новорожденных

Рис. 4. Активность Г-6-ФДГ эритроцитов крови новорожденных I (А) и II, III (Б) групп в динамике развития патологии

Установлено, что эритроциты низкостойкой субпопуляции обладают повышенной чувствительностью к изменению интенсивности эндо- и экзогенных процессов СРО в условиях развития оксидативного стресса невысокой интенсивности.

СТРУКТУРНЫЕ СВОЙСТВА ЭРИТРОЦИТОВ, МОДИФИЦИРОВАННЫХ СОЕДИНЕНИЯМИ КАРБОНИЛЬНОЙ ПРИРОДЫ

Показано, что развитие ОС у новорожденных, перенесших гипоксию, индуцирует структурные повреждения эритроцитов. В литературе основными индукторами повреждения клеток считают СР и продукты их реакций: липидные и белковые пероксиды, альдегиды (4-гидроксиноненеаль, малоновый диальдегид (МДА)), кетоны и др. (Н.К. Зенков, 2001, 1.Ф. Мещишен, 1999, К.Н. СЬееэтап, 1993). Для изучения вклада метаболитов карбонильной природы в повреждение клеточных мембран при ОС нами проведено исследование влияния карбонилов на структурные свойства эритроцитов. В качестве модификаторов применяли ацетон, глутаровый диальдегид (ГДА) (гомолог МДА) и формальдегид (ФА).

ГДА использовали в концентрациях: МО"4 моль/л (физиологическая); МО"3 моль/л, 2,5-10"3 моль/л, 5Т0"3 моль/л, МО"2 моль/л. Методом автоматической регистрации осмотических эритрограмм установлено, что диальдегид обладает высоким химическим сродством к структурным компонентам мембран низкостойких эритроцитов и индуцирует сфероцитоз 8% из них.

Исследование химического взаимодействия белков мембраны с ГДА методом автоматической регистрации кислотных эритрограмм выявило, что диальдегид в концентрации 1-Ю"3 моль/л на первых этапах комплексирует с поверхностными белками мембраны, в результате чего снижается кислотная резистентность низкостойких эритроцитов на 28% относительно контроля (рис. 5 А). Для средне- и высокостойких клеток наблюдается эффект экранирования белковых макромолекул, следствием которого является кажущееся повышение кислотной резистентности эритроцитов на 29% (рис. 5 Б). При увеличении концентрации ГДА в инкубацион-

ной среде до 2,5-103 и 5-Ю'3 моль/л регистрировали уменьшение скорости гемолиза средне- и высокостойких клеток, а при МО"2 моль/л - зависимость процента лизи-рованных эритроцитов от времени приближается к линейной. Полученные данные указывают на увеличение числа комплексов между диальдегидом и белками мембраны при накоплении реагента в инкубационной среде. При исследовании кислотной резистентности эритроцитов, модифицированных ГДА после предварительной 45 мин инкубации, установлено наличие конечного числа центров связывания, расположенных на поверхности мембраны и доступных для реагента.

л Ьл,

л к™

; 50 30

ю ■10

-30 -50 -70 -90

Рис. 5. Зависимость длительности латентного периода Оы) (А) и константы максимальной скорости кислотного (К|гшх) (Б) гемолиза эритроцитов от содержания ГДА в среде: И - без инкубации; □- 45 мин инкубации

Сравнительный анализ результатов полученных данных по изучению осмотической и кислотной резистентности эритроцитов, модифицированных ГДА, позволил заключить, что мембраны клеток обладают высоким барьером проницаемости для диальдегида. Это, по всей вероятности, обусловлено комплексированием ГДА с поверхностными центрами белковых молекул. Установлено, что вклад алифатических диальдегидов в формирование скрытых структурных повреждений клеточных мембран у новорожденных, перенесших гипоксию, не является определяющим.

С целью исключения вклада стерических 01~раничений, характерных для молекул ГДА, использовали ФА в следующих концентрациях: МО"1 моль/л (физиологическая), МО"3 моль/л, МО"5 моль/л. Показано, что ФА не вызывает формирования структурных повреждений в белково-липидном каркасе эритроцитов. То есть, образующихся в результате протекания ПОЛ альдегиды различной химической природы не являются причиной повышения гипоосмотического гемолиза эритроцитов крови новорожденных, перенесших гипоксию. Методом автоматической регистрации кислотных эритрограмм установлено, что ФА вызывает изменение структурных свойств мембранных белков лишь при непосредственном взаимодействии с клетками (рис. 6 А). Модификатор в концентрациях МО"5 и МО"3 моль/л повышает гидрофобный барьер проницаемости для протонов мембран низкостойких эритроцитов на 20 и 30% относительно контроля соответственно, а при содержании МО"3 моль/л — снижает кислотную резистентность средне- и высокостойких клеток на

25% относительно контроля (рис. 6 А.). То есть ФА химически модифицирует белковые компоненты мембран различных по стойкости эритроцитов.

Сравнительный анализ результатов проведенных исследований по изучению влияния ГДА и ФА на химическую резистентность эритроцитов позволил установить, что диальдегид индуцирует более глубокие структурные модификации компонентов эритроцитарной мембраны по сравнению с ФА. Однако простые по химическому строению альдегиды также обладают химическим сродством к клеткам, что может вносить определенный вклад в регистрируемое нами изменение кислотной резистентности эритроцитов новорожденных, перенесших гипоксию, то есть химически модифицировать структурные белки.

К,»», %

35 30 25 20 15 10 5 о

-5

110' 110' 1-10-

Кщал

5

мо" 1-ю' 1-мг

о

-5 -10 -15 -20 -25

ЛЬ Й || й й Ж

1-Ю"5 МО"4 м ■ о-3 Ктах 1-Ю"5 1-Ю*4 МО"3

С, моль/л

- без инкубации: □

С, моль/л 45 мин инкубации

Рис. 6. Значения параметров кислотного гемолиза эритроцитов, модифицированных формальдегидом (без предварительной инкубации) (А) и ацетоном (Б) в различных концентрациях.

С целью выявления вклада кетонов в изменение структурных свойств клеточных мембран при ОС исследовали осмотическую и кислотную резистентность эритроцитов, модифицированных ацетоном в следующих концентрациях: НО"4 моль/л (физиологическая), 1 • 10"5 моль/л, 1 ■ 10"3 моль/л. Установлено, что ацетон даже после длительного взаимодействия с эритроцитами не индуцирует в них структурных повреждений, которые могли бы явиться причиной гемолиза клеток, регистрируемого в крови новорожденных, перенесших гипоксию. Повышение концентрации ацетона и, возможно, других кетонов приводит, в первую очередь, к увеличению отношения объема эритроцита к площади его поверхности, что может отразиться на реологических свойствах крови.

Методом автоматической регистрации кислотных эритрограмм показано, что амфифильный кетон в концентрации 1 -10~3 моль/л наиболее легко проникает в клетки с пониженной и средней стойкостью (рис б Б), вызывая нарушение структурной организации белков и изменение их поверхностного заряда.

Анализ результатов проведенных исследований по изучению влияния карбонилов различной химической природы на структурные свойства эритроцитов позволил констатировать, что вклад конечных продуктов реакций ОС в формирование скрытых повреждений компонентов мембраны не является определяющим. Однако соединения карбонильной природы играют значительную

роль в изменении структурно-функциональных свойств белков мембраны эритроцита, регистрируемом у новорожденных, перенесших гипоксию

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА СТРУКТУРНЫХ СВОЙСТВ ЭРИТРОЦИТОВ И АКТИВНОСТИ ГЛЮКОЗО-6-ФОСФАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ В ДИНАМИКЕ РАЗВИТИЯ ТОКСИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ КРЫС

С целью выявления вклада АФК в изменение структурного состояния мембран соматических клеток организма изучали осмотическую и кислотную резистентность и активность Г-6-ФДГ эритроцитов крови крыс в условиях развития ОС, вызванного острым токсическим гепатитом (ОТГ) Установлено, что интенсификация ОС при ОТГ у крыс сопровождается снижением как гипоосмо-тической (на 20%), так и кислотной (на 25 и 50% для низко- и более высокостойких клеток соответственно) устойчивости эритроцитов, а также резким повышением (в 6 раз) активности Г-6-ФДГ относительно контроля

Поврежденные эритроциты циркулируют в кровяном русле животных еще 2-е суток после купирования воспалительного процесса в печени Химическая резистентность низкостойких эритроцитов сравнима с контролем, а средне- и высокостойких клеток - уменьшается до 150% Активность Г-6-ФДГ при этом соответствует норме При ОТГ наибольшей чувствительностью к действию эндогенных факторов обладают эритроциты низкостойкой субпопуляции, поэтому они могут быть использованы в качестве первичных индикаторов развития патологического процесса в организме

В условиях ОТГ регуляторные системы работают по принципу триггеров, кратковременно запускающих ферментативные звенья АОС, обеспечивающие нормальный уровень восстановленного глутатиона в эритроцитах, а структурные превращения компонентов клеточных мембран характеризуются кумулятивным эффектом пролонгированного действия Результаты модельных опытов на крысах указывают на то, что основной вклад в формирование скрытых структурных повреждений клеточных мембран вносят АФК

СТРУКТУРНЫЕ СВОЙСТВА ЭРИТРОЦИТОВ, МОДИФИЦИРОВАННЫХ АНТИБИОТИКАМИ РАЗЛИЧНЫХ КЛАССОВ

С целью выявления вклада активно применяемых при лечении новорожденных, перенесших гипоксию, антибактериальных препаратов, в процесс модификации структурных компонентов эритроцитарной мембраны, исследовали осмотическую и кислотную резистентность клеток в присутствии фортума, ами-кацина, ципрофлвксацина и ванкомицина в терапевтических концентрациях

Установлено, что фортум взаимодействует с компонентами мембраны низкостойких клеток и, вероятно, встраивается в нее, однако, гемолитическим эффектом по отношению к эритроцитам не обладает Методом автоматической регистрации кислотных эритрограмм показано, что антибиотик образует комплексы с белками

мембран, что приводит к повышению их гидрофобного барьера проницаемости для протонов вследствие снижения числа поверхностных гидрофобных участков

С целью приближения условий эксперимента к организменным изучали структурные свойства эритроцитов, выделенных из крови, предварительно инкубированной с фортумом в течение 15, 30 и 60 мин Анализ основных показателей кинетических кривых гипоосмотического гемолиза эритроцитов позволил заключить, что модифицирующее влияние фортума на клетки пролонгировано во времени и направлено на субпопуляцию «старых» эритроцитов, которые элиминируются из кровяного русла под действием исследуемого антибиотика (3 %)

Фортум взаимодействует с белками мембраны, последовательно снижая (до 20% относительно контроля) гидрофобный барьер проницаемости различных по стойкости субпопуляции эритроцитов Подобную динамику изменения химической резистентности эритроцитов регистрировали у новорожденных, в терапию которых был включен антибиотик, что указывает на его вклад в изменение кислотной резистентности эритроцитов крови детей

Амикацин в терапевтической концентрации проявляет гемолитический эффект по отношению к низкостойким эритроцитам, индуцируя их гемолиз (до 10%) уже на первых этапах взаимодействия Методом автоматической регистрации кислотных эритрограмм установлено, что препарат уменьшает число поверхностных гидрофильных участков на мембране, что регистрируется в повышении гидрофобного барьера проницаемости для протонов эритроцитов средне-и высокостойкой субпопуляций (до 17%) Химическая резистентность низкостойких клеток при этом, напротив, снижается на 7% относительно контроля

При изучении влияния ванкомицина на осмотическую резистентность эритроцитов установлено повышение числа эритроцитов низкостойкой субпопуляции, имеющих скрытые структурные повреждения (до 14% относительно контроля) с увеличением длительности взаимодействия препарата с клетками Ванкомицин обладает высоким химическим сродством к белкам мембран различных по стойкости эритроцитов, вызывая уменьшение количества поверхностных гидрофобных участков и, тем самым, нарушая барьерные и транспортные свойства клеток

Результаты проведенных исследований по изучению влияния ванкомицина на структурные свойства эритроцитов позволяют дать рекомендацию об осторожном назначении препарата при лечении инфекционных патологий новорожденных, избегая введения в кровь больших доз антибиотика

Ципрофлаксацин индуцирует главным образом формирование скрытых структурных повреждений в мембранах эритроцитов низко- и среднестойкой субпопуляций, проявляя среднюю гемолитическую активность (индуцирует гемолиз 6% эритроцитов в 0,55% растворе №С1) Препарат также повышает степень структурной однородности эритроцитов, выраженность которой увеличивается с возрастанием длительности его инкубации в крови (от 0 до f2% относительно контроля при 15 и 60 минутной предварительной инкубации соответственно)

Ципрофлоксацин взаимодействует с белками мембраны эритроцита, изменяя их химическую стойкость и индуцируя старение клеток Это может приводить к ускорению элиминации эритроцитов из кровяного русла, нарушению их барьерных, рецепторных и транспортных свойств, а также оксигенации тканей

Сравнительный анализ результатов проведенных исследований по изучению осмотической и кислотной резистентности эритроцитов, модифицированных антибиотиками различных классов, применяемых при лечении инфекционных патологий у новорожденных, перенесших гипоксию, позволил построить ряды гемолитической и химической активностей препаратов Убывающий ряд гемолитической активности антибактериальных препаратов ванкомицин > ципрофлаксацин > амикацин > фортум Убывающий ряд химической активности антибиотиков ванкомицин > ципрофлоксацин> амикацин > фортум

Результаты экспериментов по изучению влияния антибиотиков различных классов на структурные свойства эритроцитов свидетельствуют о том, что фортум, амикацин, ванкомицин и ципрофлоксацин обладают высоким сродством к белкам мембран эритроцитов Наличие гидрофобных участков в химической структуре антибиотиков позволяет им встраиваться в липидный бислой клетки и индуцировать структурные нарушения как белковых, так и липидных компонентов мембраны Однако препараты могут испытывать барьер стерических ограничений для проникновения в высокостойкие клетки, в результате чего гемолитический эффект антибиотиков проявляется лишь в отношении «старых» эритроцитов Модифицирующее влияние антибиотиков на мембраны эритроцитов пролонгировано во времени Поэтому при антимикробной терапии инфекционных патологий следует тщательно подходить к определению дозы применяемого антибиотика, чтобы снизить тяжесть вызываемого им побочного эффекта

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Методами автоматической регистрации осмотических и кислотных эрит-рограмм, определения уровня окислительной модификации белков плазмы и активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы проанализирована зависимость изменения структурных свойств эритроцитов, антиоксидантного звена их защиты от интенсивности развития оксидативного стресса, вызванного гипоксией, у новорожденных Методом автоматической регистрации осмотических эритро-грамм установлено увеличение относительно контроля доли эритроцитов со структурными дефектами у новорожденных в острый период критического состояния Снижение осмотической резистентности клеток обусловлено накоплением скрытых структурных повреждений в белково-липидном каркасе мембран низко- и высокостойких эритроцитов

При изучении взаимосвязи между структурными свойствами эритроцитов и интенсивностью оксидативного стресса при гипоксии новорожденных установлена прямопропорциональная зависимость между количеством скрытых повреждений в мембранах эритроцитов и активностью реакций СРО Показано, что количество и глубина структурных нарушений компонентов эритроцитар-ной мембраны определяется интенсивностью оксидативного стресса как в острый период, так и в динамике критического состояния новорожденного

Выявлено, что мембраны низкостойких эритроцитов более чувствительны к действию АФК и продуктов их реакций, поэтому изменение осмотической

резистентности низкостойких эритроцитов может быть использовано в клинической практике при тестировании начальных этапов развития патологии

Сравнительный анализ изменения структурных свойств эритроцитов и активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы при оксидативном стрессе, позволил установить активацию фермента при интенсификации реакций свободнора-дикального окисления и накоплении структурных повреждений в эритроцитах средне- и более высокостойкой субпопуляций (АОтах = 20-30%) Найденная зависимость осмотической резистентности эритроцитов и активности Г-6-ФДГ позволяет использовать -метод автоматической регистрации осмотических эритрограмм в клинической практике при экспресс-оценке глубины структурных повреждений мембран соматических клеток и интенсивности ОС

Установлена обратная зависимость между осмотической и кислотной резистентностью эритроцитов и числом лейкоцитов крови в динамике критического состояния новорожденных Выявлено отсутствие взаимосвязи между изменением структурных свойств эритроцитов и тяжестью, а также степенью летального исхода заболевания у новорожденных, оцененным по шкале БЫАР-П

На модельной системе «эритроцит - модификатор» и при моделировании острого токсического гепатита крыс установлено, что основной вклад в формирование скрытых структурных повреждений в мембранах эритроцитов новорожденных вносят АФК При этом оксидация липидов является ключевым звеном в формировании дефектов композитной организации мембраны эритроцита Белковые макромолекулы подвергаются как окислительному (посредством активных форм кислорода), так и химическому (в результате воздействия карбонильных продуктов пероксидного окисления липидов, лекарственных препаратов) повреждению Модификация мембранных протеинов вызывает «подготовку» белково-липидного каркаса к развитию деструктивных процессов, то есть индуцирует «старение» эритроцита

Методами автоматической регистрации осмотических и кислотных эритрограмм установлено, что применяемые при лечении бактериальных инфекций у новорожденных антибиотики обладают высоким химическим сродством к белковым компонентам мембран эритроцитов Наибольшей гемолитической активностью обладает ванкомицин, способный индуцировать внутрисосудистый гемолиз до 15% эритроцитов Данный препарат может вносить вклад в снижение осмотической резистентности эритроцитов крови новорожденных в динамике критического состояния Однако ванкомицин не играет главную роль в этом процессе, так как максимальное количество структурно-поврежденных клеток в крови обследуемых пациентов достигает 50%

Сравнительный анализ результатов исследований по изучению зависимости структурных свойств эритроцитов и активности Г-6-ФДГ от уровня оксида-тивного стресса у новорожденных, перенесших гипоксию, а также выявлению вклада различных звеньев метаболизма при критическом состоянии позволил нам составить обобщенную схему формирования структурных изменений клеточных систем в динамике постгипоксических осложнений (рис 7)

Рис. 7. Обобщенная схема участия различных факторов в формировании структурных изменений в динамике оксидативного стресса у новорожденных, перенесших гипоксию: эритроциты различных субпопуляций: и -

низкостойкая; * - среднестойкая; —* - высокостойкая; Э - эритроцит; ..................- низкий и - _ средний вклад в

изменение параметра.

На основании результатов собственных исследований и данных литературы нами составлена обобщенная схема молекулярных механизмов изменения структурных свойств эритроцитов при развитии оксидативного стресса (рис. 8).

он н2о2 (V

Реакция Реакция

Габера-Вайса

Фентона

Изменение функционирования мембраносвя-занных ферментов и структурных белков

Оксидация НЬ в МеШЬ

Нарушение электролитного баланса Э

Энергетический дефицит Э, Т регидности

Нарушение гемодинамики периферической крови и транспорта метаболитов

т Гипоксия

Гипоэритроэмия

Рис. 8. Обобщенная схема молекулярных механизмов изменения структурных свойств эритроцитов в условиях развития оксидативного стресса: Э - эритроцит, В - ванкомицин, Ц - ципрофлюксацин, А - амикацин, Ф - фортум.

ВЫВОДЫ

1 Методом автоматической регистрации осмотических эритрограмм установлено накопление скрытых структурных повреждений в мембранах до 50% эритроцитов низко- и среднестойкой субпопуляций новорожденных при развитии оксидативного стресса, вызванного гипоксией

2 Установлено, что количество структурных нарушений эритроци-тарных мембран определяется интенсивностью развития оксидативного стресса у новорожденных

3 В условиях оксидативного стресса у новорожденных, перенесших гипоксию, происходит химическая модификация белков как плазмы крови, так и различных по стойкости субпопуляций эритроцитов

4 Показано, что эритроциты низкостойкой субпопуляции обладают большей чувствительностью к воздействию свободных радикалов, продуктов их реакций со структурными макромолекулами клетки и лекарственных препаратов они являются индикаторами начальных этапов развития повреждений мембран соматических клеток

5 Выявлено повышение активности глюкозо-б-фосфатдегидрогеназы эритроцитов в ответ на увеличение интенсивности реакций свободноради-кального повреждения в организме новорожденных, а также на формирование структурных повреждений в мембранах эритроцитов Продолжительность процесса активации фермента определяется количеством и глубиной структурных повреждений в эритроцитах средне- и более высокостойких субпопуляций

6 Методом автоматической регистрации осмотических эритрограмм установлено, что карбонильные продукты пероксидного окисления липи-дов (альдегиды и кетоны) не вносят определяющего вклада в формирование скрытых структурных повреждений эритроцитарных мембран, вызывающих гемолиз клеток в гипотонической среде (0,55% №С1), выявленный нами у новорожденных в динамике постгипоксических осложнений

7 С помощью метода автоматической регистрации кинетики кислотного гемолиза эритроцитов показано, что карбонильные метаболиты реакций сво-боднорадикального окисления обладают высоким химическим сродством к белковым компонентам мембраны, изменяя ее гидрофобный барьер проницаемости д ля протонов

8 Показано, что антибиотики различных классов (амикацин, фортум, ванкомицин и ципрофлакеацин) проявляют пролонгированный во времени слабый гемолитический эффект по отношению к мембранам низкостойких эритроцитов Наибольшей гемолитической активностью среди них обладает ванкомицин, способный индуцировать лизис до 15% эритроцитов в кровяном русле

9 Установлено, что ванкомицин проявляет наибольшую химическую активность по отношению к белковым компонентам мембраны, комплек-сируя с ними при инкубировании с эритроцитарными клетками

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ РАБОТЫ

1 Изучение роли мочевины и креатинина в изменении структурных свойств эритроцитов периферической крови при почечной недостаточности у детей /НА Стародубцева, И Е Попова, С Г Резван, В Г Артюхов, В П Сит-никова, О А Жданова // Материалы III Конгресса педиатров-нефрологов России, 2-4 дек 2003, Санкт-Петербург - СПб , 2003 - С 160-161

2 Изучение мембранотропных свойств карбонильных метаболитов - маркеров окислительного стресса в патогенезе нефропатии /НА Стародубцева, И Е Попова, С Г Резван, В Г Артюхов // Материалы III Съезда биофизиков России, 24 - 29 июня, Воронеж, 2004 - Воронеж, 2004 -Т II - С 581-582

3 Попова И Е Изучение механизма образования структурных нарушений клеточных мембран при развитии оксидативного стресса у крыс / И Е Попова, С Г Резван, В Г Артюхов // Материалы II Евразийского конгресса по медицинской физике и инженерии «Медицинская физика - 2005», 21-24 июня, Москва, 2005 - M , 2005 - С 290-291

4 Попова И Е Исследование структурных свойств эритроцитов новорожденных с постгипоксическими осложнениями / И Е Попова // Научно-медицинский вестник Центрального Черноземья - Воронеж, 2006 - № 26 -С 3-11

5 Попова И Е Исследование структурных свойств эритроцитов крови детей с постасфиксическими расстройствами / И Е Попова, С Г Резван, В Г Артюхов // Современное состояние и перспективы развития медицины Сб науч ст - Воронеж, 2006 -Т 2 - С 160-163

6 Исследование структурных свойств эритроцитов крови детей с различными формами нефропатий / В Г Артюхов, И Е Попова, H А Стародубцева, С Г Резван // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины -2002 -Т 134, №8 - С 205-208

7 Structural properties of erythrocytes and the oxidative modification level of sérum protems m the blood of the newborn who underwent hypoxia /1 E Popova, V G Artyukhov, S G Rezvan, К V Panichev, Y V Kiyukov // Joum of Pédiatrie Critical Care Medicine - 2007 -V 8, 3 Suppl - P 318

Одна работа (№ 6) опубликована в издании, рекомендованном Перечнем ВАК

Подписано в печать 13 09 07 Формат 60*84'/16 Уел печ л 1,4 Тираж 100 экз Заказ 1875

Отпечатано с готового оригинала-макета в типографии Издательско-полиграфического центра Воронежского государственного университета 394000, Воронеж, ул Пушкинская, 3

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Попова, Ирина Евгеньевна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Особенности развития патологического процесса у новорожденных, перенесших гипоксию

1.2. Особенности развития оксидативного стресса у новорожденных

1.3. Общая морфология, строение и функции эритроцита

1.4. Особенности молекулярной структуры мембраны эритроцита

1.4.1. Цитоскелет эритроцита

1.4.2. Липидный состав мембраны эритроцита

1.4.3. Проницаемость эритроцитов для молекул

1.5. Влияние активных форм кислорода на эритроциты в условиях развития гипоксии

1.6. Физико-химические и антиоксидантные свойства глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы

1.7. Окислительная модификация белков плазмы

1.8. Антибиотикотерапия в период новорожденности

1.9. Токсическое повреждение печени четыреххлористым углеродом как модель активации свободнорадикальных реакций

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты исследования

2.2. Получение суспензий эритроцитов

2.3. Физико-химические свойства модификаторов карбонильной природы

2.3.1. Физико-химические свойства ацетона

2.3.2. Физико-химические свойства формалина

2.3.3. Физико-химические свойства глутарового диальдегида

2.4. Структура и фармакологическая характеристика исследуемых антибиотиков

2.4.1. Фортум

2.4.2. Амикацин

2.4.3. Ципрофлоксацин

2.4.4. Ванкомицин

2.5. Автоматический метод регистрации осмотических и кислотных эритрограмм

2.6. Метод определения уровня окислительной модификации белков плазмы крови

2.7. Спектрофотометрический метод определения активности глю-козо-6-фосфатдегидрогеназы эритроцитов

2.8. Подсчет количества эритроцитов крови

2.9. Моделирование интоксикации крыс четыреххлористым углеродом

2.10. Статистическая обработка экспериментальных данных •

ГЛАВА 3. ОСМОТИЧЕСКАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ НОВОРОЖДЕННЫХ В ДИНАМИКЕ ПОСТГИ-ПОКСИЧЕСКИХ ОСЛОЖНЕНИЙ

ГЛАВА 4. ИНТЕНСИВНОСТЬ РАЗВИТИЯ ОКСИДАТИВНОГО СТРЕССА У НОВОРОЖДЕННЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ ГИПОКСИЮ

ГЛАВА 5. КИСЛОТНАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ НОВОРОЖДЕННЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ ГИПОКСИЮ

ГЛАВА 6. АКТИВНОСТЬ ГЛЮКОЗО-6-ФОСФАТДЕГИДРОГЕ-НАЗЫ ЭРИТРОЦИТОВ НОВОРОЖДЕННЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ ГИПОКСИЮ

ГЛАВА 7. СТРУКТУРНЫЕ СВОЙСТВА ЭРИТРОЦИТОВ, МОДИФИЦИРОВАННЫХ СОЕДИНЕНИЯМИ КАРБОНИЛЬНОЙ ПРИРОДЫ

7.1 Структурные свойства эритроцитов, модифицированных глутаровым диальдегидом

7.1.1. Осмотическая резистентность эритроцитов в присутствии глутарового диальдегида

7.1.2. Кислотная резистентность эритроцитов в присутствии глутарового диальдегида

7.2. Структурные свойства эритроцитов, модифицированных формальдегидом

7.2.1. Осмотическая резистентность эритроцитов в присутствии формальдегида

7.2.2. Кислотная резистентность эритроцитов в присутствии формальдегида

7.3. Структурные свойства эритроцитов, модифицированных ацетоном

7.3.1. Осмотическая резистентность эритроцитов в присутствии ацетона

7.3.2. Кислотная резистентность эритроцитов в присутствии ацетона

ГЛАВА 8. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА СТРУКТУРНЫХ СВОЙСТВ ЭРИТРОЦИТОВ И АКТИВНОСТИ ГЛЮКОЗО-6-ФОСФАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ В ДИНАМИКЕ РАЗВИТИЯ ТОКСИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ КРЫС

8.1. Осмотическая резистентность эритроцитов в динамике развития токсического повреждения печени

8.2. Кислотная резистентность эритроцитов в динамике развития токсического повреждения печени

8.3. Активность глкжозо-6-фосфатдегидрогеназы эритроцитов в динамике развития токсического повреждения печени

ГЛАВА 9. СТРУКТУРНЫЕ СВОЙСТВА ЭРИТРОЦИТОВ, МОДИФИЦИРОВАННЫХ АНТИБИОТИКАМИ РАЗЛИЧНЫХ КЛАССОВ

9.1. Структурные свойства эритроцитов, модифицированных фортумом

9.1.1. Осмотическая резистентность эритроцитов, модифицированных фортумом

9.1.2. Кислотная резистентность эритроцитов, модифицированных фортумом

9.1.3. Осмотическая резистентность эритроцитов, выделенных из крови, предварительно инкубированной с фортумом

9.1.4. Кислотная резистентность эритроцитов, выделенных из крови, предварительно инкубированной с фортумом

9.2. Структурные свойства эритроцитов, модифицированных амикацином

9.2.1. Осмотическая резистентность эритроцитов, модифицированных амикацином

9.2.1. Кислотная резистентность эритроцитов, модифицированных амикацином

9.2.3. Осмотическая резистентность эритроцитов, выделенных из крови, предварительно инкубированной с амикацином

9.2.4. Кислотная резистентность эритроцитов, выделенных из крови, предварительно инкубированной с амикацином

9.3. Структурные свойства эритроцитов, модифицированных ванкомицином

9.3.1. Осмотическая резистентность эритроцитов, модифицированных ванкомицином

9.3.2. Кислотная резистентность эритроцитов, модифицированных ванкомицином

9.3.3. Осмотическая резистентность эритроцитов, выделенных из крови, предварительно инкубированной с ванкомицином

9.3.4. Кислотная резистентность эритроцитов, выделенных из крови, предварительно инкубированной с ванкомицином

9.4. Структурные свойства эритроцитов, модифицированных ципрофлоксацином

9.4.1. Осмотическая резистентность эритроцитов, модифицированных ципрофлоксацином

9.4.2. Кислотная резистентность эритроцитов, модифицированных ципрофлоксацином

9.4.3. Осмотическая резистентность эритроцитов, выделенных из крови, предварительно инкубированной с ципрофлоксацином

9.4.4. Кислотная резистентность эритроцитов, выделенных из крови, предварительно инкубированной с ципрофлоксацином

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение структурных свойств эритроцитов крови новорожденных при оксидативном стрессе, вызванном гипоксией"

Актуальность работы. Ежегодно в мире умирает более 5 млн новорожденных. В России причиной 40% летальных исходов является внутрима-точная гипоксия и асфиксия в родах [104]. Гипоксическое поражение плода и новорожденного создаёт предпосылки для высокой заболеваемости и инва-лидизации детей раннего возраста [105, 106].

С целью снижения частоты и тяжести осложнений, вызванных гипоксией в неонатальный период, актуальной является разработка и внедрение в клиническую практику методов ранней адекватной оценки тяжести состояния ребенка. Наибольший интерес при этом представляет изучение последствий окислительных процессов, активирующихся при гипоксии [51, 148] и вызывающих нарушение молекулярной организации биомембран. Структурные перестройки последних являются эффективным механизмом как стрессовой, так и строго специфической регуляции самых разнообразных процессов в норме и при патогенезе различной этиологии [109].

Мембрана эритроцита - наиболее удачная биологическая модель для изучения динамики нарушений, протекающих в организме при развитии патологии. Эритроциты участвуют в приспособлении организма человека и животных к условиям внешней среды. Они не только транспортируют кислород, необходимый для протекания окислительно-восстановительных реакций в клетках и тканях, но и обеспечивают целенаправленный отклик организма на действие внешних и внутренних факторов. Кроме того, метаболические процессы, протекающие в эритроцитах при стрессе и клинической патологии, являются интегральным отражением реакции клеток на уровне всего организма [130, 134].

С целью изучения молекулярных механизмов, лежащих в основе формирования повреждений клеточных мембран в условиях развития оксидатив-ного стресса, нами были исследованы структурные свойства эритроцитов, активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в динамике заболеваний новорожденных при различной интенсивности реакций свободнорадикального окисления, вызванных гипоксией. На модельной системе проведена серия опытов по определению вклада различных химических агентов (карбонильных продуктов пероксидного окисления липидов, некоторых антибактериальных препаратов) в процесс модификации мембранных структур при патологии.

Научная новизна. Проведен сравнительный анализ изменения структурных свойств эритроцитов, активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и уровня оксидативного стресса у новорожденных в динамике постгипоксиче-ских осложнений. Впервые выявлено наличие скрытых структурных повреждений в эритроцитах при гипоксии. Установлено, что глубина формирования дефектных областей в мембране определяется интенсивностью развития реакций свободнорадикального окисления. Показана химическая модификация белковых компонентов эритроцита и плазмы крови у новорожденных в динамике критического состояния. Впервые установлено, что основной вклад в нарушение композитной организации белково-липидного каркаса мембраны при оксидативном стрессе вносят не карбонильные продукты пероксидного окисления липидов (кетоны, альдегиды), а активные формы кислорода. Установлено, что метаболиты карбонильной природы химически модифицируют белковые структуры: описаны реакции возможных типов комплексирования между ними. Установлено, что антибиотики различных классов (амикацин, фортум, ципрофлоксацин, ванкомицин) проявляют высокое сродство к мембранам низкостойкой субпопуляции эритроцитов и структурным белкам.

Практическая значимость. Полученные данные позволяют расширить и углубить фундаментальные представления о механизме повреждения мембран соматических клеток организма при оксидативном стрессе. Исследование начальных этапов развития патологии на клеточном уровне дает возможность в дальнейшем осуществить раннюю диагностику заболевания, а и также купировать его на первых этапах развития. Это позволит снизить риск инвалидизации и смертности, в частности, новорожденных детей и повысить качество и эффективность интенсивной терапии. Определение мембрано-тропности антибиотиков, активно применяемых при лечении инфекционной патологии у новорожденных, позволит изучить механизмы влияния данных препаратов на соматические клетки организма. Это даст возможность разработать более эффективную схему лечения пациентов с минимальным риском побочных эффектов от приема антибиотиков. Материалы работы используются при проведении практикумов, выполнении курсовых и дипломных работ студентами Воронежского государственного университета.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение молекулярных механизмов структурных свойств эритроцитов крови новорожденных, перенесших гипоксию.

Для реализации данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Выявить взаимосвязь между структурными свойствами эритроцитов и активностью их антиоксидантной защиты при различной интенсивности развития оксидативного стресса у новорожденных в динамике постгипокси-ческих осложнений.

2. Провести сравнительный анализ между изменениями структурных свойств эритроцитов при различных условиях функционирования их антиоксидантной системы, уровнем оксидативного стресса и клинико-лабораторными показателями крови, а также тяжестью патологии новорожденных в динамике критического состояния.

3. Оценить вклад карбонильных продуктов пероксидного окисления липидов и активных форм кислорода в изменение структурных свойств эритроцитов в условиях интенсификации реакций свободнорадикального окисления в организме.

4. Изучить влияние препаратов антибактериальной терапии новорожденных на структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран.

5. Разработать схему молекулярных механизмов изменения структурных свойств эритроцитов в условиях развития оксидативного стресса.

Апробация работы. Основные результаты, полученные при выполнении диссертационной работы, представлены на III Конгрессе педиатров-нефрологов России (Санкт-Петербург, 2003); III Съезде биофизиков России (Воронеж, 2003); II Евразийском конгрессе по медицинской физике и инженерии «Медицинская физика - 2005» (Москва, 2005); 5-ом Мировом конгрессе по заботе при критических состояниях в педиатрии (5-th World Congress on Pediatric Critical Care, Geneva, 2007); ежегодной Научной сессии преподавателей и сотрудников Воронежского государственного университета (Воронеж, 2004, 2005).

Публикации. Основные результаты диссертационной работы изложены в 7 публикациях - в 3 статьях и 4 тезисах.

На защиту выносятся следующие положения

1. При оксидативном стрессе, вызванном гипоксией у новорожденных, происходит формирование скрытых структурных повреждений в мембранах эритроцитарных клеток.

2. На модельной системе «эритроцит-модификатор» установлено, что метаболиты карбонильной природы, образующиеся в результате перок-сидного окисления липидов, не играют определяющей роли в формировании структурных повреждений эритроцитов новорожденных в динамике постги-поксических осложнений: основной вклад в образование дефектов мембраны при оксидативном стрессе вносят активные формы кислорода.

3. В динамике постгипоксических осложнений у новорожденных выявлено, что количество эритроцитов, имеющих структурные повреждения, и их глубина определяются интенсивностью и продолжительностью развития оксидативного стресса в организме, а также активностью антиоксидантной системы.

4. Антибиотики (амикацин, фортум, ципрофлоксацин, ванкомицин) проявляют различный по выраженности и пролонгированности гемолитический эффект и вступают в реакции химического взаимодействия с белками мембраны эритроцита.

5. Предложена схема событий, отражающих возможные механизмы изменения структурных свойств эритроцитов при развитии оксидативного стресса у новорожденных в условиях гипоксии.

Структура и объем работы. Диссертация представлена на 250 страницах текста, состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части и обсуждения полученных результатов (9 глав), заключения, выводов, списка литературы и приложения. Иллюстративный материал включает 45 рисунков и 2 таблиц. В приложении содержатся 17 рисунков и 6 таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Попова, Ирина Евгеньевна

192 ВЫВОДЫ

1. Методом автоматической регистрации осмотических эритрограмм установлено накопление скрытых структурных повреждений в мембранах до 50% эритроцитов низко- и среднестойкой субпопуляций новорожденных при развитии оксидативного стресса, вызванного гипоксией.

2. Установлено, что количество структурных нарушений эритроцитарных мембран определяется интенсивностью развития оксидативного стресса у новорожденных.

3. В условиях оксидативного стресса у новорожденных, перенесших гипоксию, происходит химическая модификация белков как плазмы крови, так и различных по стойкости субпопуляций эритроцитов.

4. Показано, что эритроциты низкостойкой субпопуляции обладают большей чувствительностью к воздействию свободных радикалов, продуктов их реакций со структурными макромолекулами клетки и лекарственных препаратов: они являются индикаторами начальных этапов развития повреждений мембран соматических клеток.

5. Выявлено повышение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы эритроцитов в ответ на увеличение интенсивности реакций свободнорадикального повреждения в организме новорожденных, а также на формирование структурных повреждений в мембранах эритроцитов. Продолжительность процесса активации фермента определяется количеством и глубиной структурных повреждений в средне- и более высокостойких субпопуляциях эритроцитов.

6. Методом автоматической регистрации осмотических эритрограмм установлено, что карбонильные продукты пероксидного окисления липидов (альдегиды и кетоны) не вносят определяющего вклада в формирование скрытых структурных повреждений эритроцитарных мембран, вызывающих гемолиз клеток в гипотонической среде (0,55% NaCl), выявленный нами у новорожденных в динамике постгипоксических осложнений.

7. С помощью метода автоматической регистрации кинетики кислотного гемолиза эритроцитов показано, что карбонильные метаболиты реакций свободнорадикального окисления обладают высоким химическим сродством к белковым компонентам мембраны, изменяя её гидрофобный барьер проницаемости для протонов.

8. Показано, что антибиотики различных классов (амикацин, фортум, ванкомицин и ципрофлоксацин) проявляют пролонгированный во времени слабый гемолитический эффект по отношению к мембранам низкостойких эритроцитов. Наибольшей гемолитической активностью среди них обладает ванкомицин, способный индуцировать лизис до 15% эритроцитов в кровяном русле.

9. Установлено, что ванкомицин проявляет наибольшую химическую активность по отношению к белковым компонентам мембраны, комплексируя с ними при инкубировании с эритроцитарными клетками.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Методами автоматической регистрации кинетики осмотических и кислотных эритрограмм, определения уровня окислительной модификации белков плазмы и активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы установлена зависимость изменения структурных свойств эритроцитов, антиоксидантного звена их защиты от интенсивности развития ОС, вызванного гипоксией, у новорожденных. Выявлены механизмы, лежащие в основе повреждения клеточных структур в динамике критического состояния детей.

Методом автоматической регистрации осмотических эритрограмм показано увеличение доли эритроцитов со структурными дефектами у новорожденных в острый период критического состояния относительно контроля. Снижение осмотической резистентности клеток обусловлено накоплением скрытых структурных повреждений в белково-липидном каркасе мембран низко- и высокостойких эритроцитов.

Сравнительный анализ результатов проведенных исследований по изучению взаимосвязи структурных свойств эритроцитов от интенсивности ок-сидативного стресса (о котором судили по уровню окислительной модификации белков плазмы) позволил установить прямопропорциональную зависимость между количеством скрытых повреждений в мембранах эритроцитов и активностью реакций СРО при гипоксии новорожденных.

По уровню и направленности изменения осмотической резистентности эритроцитов в динамике критического состояния новорожденные были разделены на 3 группы. В опытах установлено, что количество и глубина струк-труных нарушений компонентов эритроцитарной мембраны определяется интенсивностью оксидативного стресса как в острый период, так и в динамике критического состояния новорожденного.

Показано, что мембраны низкостойких эритроцитов более чувствительны к воздействиям АФК и продуктов их реакций. Доказательством этому служит снижение кислотной и осмотической резистентности эритроцитов новорожденных III группы на фоне повышения осмотической устойчивости более высокостойких клеток. Выявленная особенность изменения осмотической резистентности эритроцитов низкостойкой субпопуляции может быть использована в клинической практике при тестировании начальных этапов развития процессов оксидативного стресса.

Сравнительный анализ изменения структурных свойств эритроцитов и активности Г-б-ФДГ при оксидативном стрессе позволил установить активацию фермента в условиях интенсификации реакций СРО и накоплении структурных повреждений в эритроцитах средне- и более высокостойкой субпопуляций (AGmax = 20-30%). Найденная зависимость осмотической резистентности эритроцитов и активности Г-б-ФДГ позволяет использовать метод автоматической регистрации осмотических эритрограмм в клинической практике при экспресс-оценке глубины структурных повреждений мембран соматических клеток и интенсивности ОС.

Сравнительный анализ изменения структурных свойств эритроцитов и клинико-лабораторных показателей крови позволил установить обратнопропор-циональную зависимость между осмотической и кислотной резистентностью и числом лейкоцитов в динамике критического состояния новорожденных.

Выявлено отсутствие взаимосвязи между осмотической резистентностью эритроцитов и тяжестью, а также степенью летального исхода заболевания у новорожденных, оцененным по шкале SNAP-II. Следовательно, интенсивность развития ОС у детей, перенесших гипоксию, не зависит от тяжести заболевания. Возможно, что она определяется развитием инфекционного процесса, о чем свидетельствует повышение содержания лейкоцитов в крови детей, находящихся в критическом состоянии.

На модельной системе «эритроцит - модификатор» и при моделировании острого токсического гепатита крыс установлено, что основной вклад в формирование скрытых структурных повреждений в мембранах эритроцитов новорожденных вносят АФК. При этом оксидация липидов является ключевым звеном в формировании дефектов композитной организации мембраны эритроцита. Белковые макромолекулы подвергаются как окислительному (посредством активных форм кислорода), так и химическому (в результате воздействия карбонильных продуктов пероксидного окисления липидов, лекарственных препаратов) повреждению. Модификация мембранных протеинов вызывает «подготовку» белково-липидного каркаса к развитию деструктивных процессов, то есть индуцирует «старение» эритроцита.

Установлено, что применяемые при лечении бактериальных инфекций у новорожденных антибиотики обладают высоким химическим сродством к белковым компонентам мембран эритроцитов, что также может приводить к их внутрисосудистому старению. Показано, что фортум, амикацин, ванкоми-цин и ципрофлоксацин характеризуются высокой мембранотропностью к низкостойкой субпопуляции эритроцитов. Данный эффект антибиотиков пролонгирован во времени. Наибольшей гемолитической активностью обладает ванкомицин, способный индуцировать внутрисосудистый гемолиз до 15% эритроцитов. Следовательно, данный препарат вносит вклад в снижение осмотической резистентности эритроцитов крови новорожденных в динамике критического состояния, однако его роль в этом процессе не является основной, так как максимальное количество структурно-поврежденных клеток в крови обследуемых пациентов достигает 50%.

Анализ результатов исследований по изучению зависимости структурных свойств эритроцитов и активности Г-6-ФДГ от уровня оксидативного стресса у новорожденных, перенесших гипоксию, а также выявлению вклада различных химических соединений в нарушение организации мембранных компонентов позволил составить обобщенную схему формирования структурных изменений клеточных структур в динамике постгипоксических осложнений (рис. 44).

На основании результатов собственных исследований и данных литературы нами составлена обобщенная схема молекулярных механизмов изменения структурных свойств эритроцитов при развитии оксидативного стресса (рис. 45).

Рис. 44. Обобщенная схема участия различных факторов в формировании структурных изменений в динамике оксидативного стресса у новорожденных, перенесших гипоксию: эритроциты различных субпопуляций: и низкостойкая; «► - среднестойкая; — - высокостойкая; Э — эритроцит; .- низкий и- средний вклад в изменение параметра. гипоксия

Отделение Денатурация тема от НЬ НЬ и MetHb

Развитие ОС в цитозоле Э t Активности Г-6-ФДГ

Окисление SH-rpynn Hb и MetHb

ОМБ плазмы

Окисление белков мембран Э I

Формирование структурных повреждений мембран э

Коагуляция э

Изменение поверхностного заряда мембранных белков к аполипилов

Антибиотики (Ф, В, А, Ц) N

Химическая модификация белков мембраны Э

ОН +ОГ н2о2 о7

Реакция Габера-Вайса Реакция Фентона

Оксидация НЬ в MetHb

I микровязкости липпдов

Нарушение работы Na+-К+-АТФ-азы

Нарушение белок-белковых и белок липидных взаимо действий

Нарушение электролитного баланса Э старение э

ГЕМОГЛОБИНОЛИЗ, ГЕМОСТРОМАТОЛИЗ

Продукты ПОЛ (альдегиды, кетоны)

Изменение функционирования мембраносвя-занных ферментов и структурных белков усугубление энергетического дефицита Э, f регидностн

Нарушение гемодинамики периферической крови и транспорта метаболитов / Гипоксия

Гипоэритроэмия чО

Рис. 45. Обобщенная схема молекулярных механизмов изменения структурных свойств эритроцитов в условиях развития оксидативного стресса: Э — эритроцит, В — ванкомгщин, Ц— ципрофлоксацин, А — амикацин, Ф — фортум.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Попова, Ирина Евгеньевна, Воронеж

1. Абрамченко В.В. Клиническая перинатология /

2. B.В. Абрамченко, Н.П. Шабалов. Петрозаводск : Интел. Тек, 2004. - 424 с.

3. Адо А.Д. Патологическая физиология: учебник / А.Д. Адо. -М.: Триада-Х, 2002 616 с.

4. Альберт А. Избирательная токсичность: физико-химические основы терапии / Альберт А. М. : Медицина, 1989. - Т. 1. - 400 с.

5. Анализ фильтруемости неоднородных эритроцитов / Е.Е. Яковенко и др. // Биологические мембраны. 2001. - Т. 18, № 1.1. C. 16-28.

6. Аникеева С.П. Влияние модификации мембраны эритроцитов на скорость высвобождения кислорода / С.П. Аникеева // Вопросы медицинской химии. 1990. - № 3. - С. 589-96.

7. Артюхов В.Г. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами: учеб. пособие / В.Г. Артюхов, М.А. Наквасина. Воронеж : Изд-во Воронеж, гос. ун-та, 2000. - 296 с.

8. Арчаков А.И. Холестерин биологических мембран и пути его выведения из организма / А.И. Арчаков, Е.А. Бородин // Биомембраны. Структура. Функции. Медицинские аспекты. Рига, 1981.-С. 167-184.

9. Афонина Л.Г. Особенности процесса перекисного окисления липидов в эритроцитах новорожденных при нефропатии у матерей / Л.Г. Афонина, Х.Р. Зукалова, В.В. Бакова // Вопросы охраны материнства и детства. 1989. - № 6. - С. 36-40.

10. Бабак О.Я. Окислительный стресс, воспаление и эндотелиальная дисфункция ключевые звенья патогенеза сердечнососудистой патологии при прогрессирующих заболеваниях почек / О .Я. Бабак, И.И. Топчий // Украинский биохимический журнал. 2004. -№4. с. 10-17.

11. Базарный В.В. Синдромы дефицита антигенов эритроцитов / В.В. Базарный, В.А. Терских // Вестник первой областной клинической больницы Екатеринбурга. 2001. - №1. - С. 53-62.

12. Баширова P.M. Связь электрокинетических характеристик с объемом эритроцитов при воздействии ристомицина / P.M. Баширова // Биофизика. 2001. - Т. 46, вып. 1. - С. 77-79.

13. Белозёров Е.С. Побочные эффекты лекарственной терапии / Е.С. Белозёров. Алма-Ата : Наука, 1989. - 309 с.

14. Белушкина Н.Н. Молекулярные основы апоптоза / Н.Н. Белушкина, А. Хасан-Хамуд, С.Е. Северин // Вопросы биологической, медицинской и фармакологической химии. 1998. - № 4. - С. 15-23.

15. Бергельсон JI. Д. Мембраны, молекулы, клетки / Л.Д. Бергельсон. М.: Наука, 1982. - 182 с.

16. Березов Т. Т. Биологическая химия / Т.Т Березов, Б.Ф. Коровкин. М.: Медицина, 2002. - 704 с.

17. Бобова Л.П. Гистофизиология крови и органов кроветворения и иммуногенеза: учеб. пособие / Л.П. Бобова, С.Л. Кузнецов, В.П. Сапрыкин. М.: Изд-во Новая Волна, 2003. - 157 с.

18. Бойтлер Э. Нарушение метаболизма эритроцитов и гемолитическая анемия / Э. Бойтлер. М.: Медицина. - 1981. - 255 с.

19. Болдырев А. А. Введение в биомембранологию / А.А. Болдырев. М.: МГУ, 1990. - 270 с.

20. Болдырев А. А. Оксидативный стресс и мозг / А.А. Болдырев // Соросовский образовательный журнал. 2001. - Т. 7, №4.-С. 21-28.

21. Бондаренко И.Г. Молекулярные механизмы формирования цитолиза в печеночной паренхиме при острых вирусных гепатитах: автореф. дис. канд. мед. наук / И.Г. Бондарено. Л., 1988. - 24 с.

22. Бондаренко И.Г. Прооксидантные и антиоксидантные системы печени в патогенезе цитолитического синдрома при вирусных гепатитах / И.Г. Бондаренко, JI.A. Кожемякин, В.А. Симоненкова // Успехи гепатологии. 1990. - вып. 15. - С. 135-148.

23. Бородюк Н.Р. Кровь живое существо. Биоэнергетические механизмы приспособительных реакций / Н.Р. Бородюк. - М. : Глобус,1999.-214 с.

24. Бышевский А.Ш. Биохимия для врача / А.Ш. Бышевский, О.А. Терсенов. Екатеринбург : Уральский рабочий, 1994. - 384 с.

25. Величковский Б.Т. Молекулярные и клеточные основы экологической пульмонологии / Б.Т. Величковский // Пульмонология.2000.-№3.-С. 10-18.

26. Вишневская Е.К. Клетки синусоидных сосудов печени / Е.К. Вишневская //Морфология. 1993. - Т. 104, № 3. - С. 135-147.

27. Владимиров Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. М. : Наука, 1972.-252 с.

28. Владимиров Ю.А. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран / Ю.А. Владимиров, Г.Е. Добрецов. М.: Наука, 1980.-320 с.

29. Влияние восстановленного и окисленного глутатиона на физико-химическое состояние мембран эритроцитов / Н.М. Козлова и др. // Биофизика. 2002. - Т. 46, вып. 3. - С. 467-470.

30. Влияние встраивания липополисахаридов в мембрну эритроцитов человека на электрофоретическую подвижность / Д.С. Кабанов и др. // Биологические мембраны. 2005. - Т. 22, № 5. -С. 401-407.

31. Влияние гипоксии на состояние мембран и перекисное окисление липидов в легких и крови крыс / J1.B. Могильницкая и др. // Вопросы медицинской химии. 1993. - Т. 39, вып. 6. - С. 35-36.

32. Восстановление экскреторной функции печени антиоксидантами при токсическом гепатите / Л.Ф. Виноградова и др. // Вестник РУДН. Сер. Медицина. 2000. - Т. 54, №2. - С. 53 - 55.

33. Гендель Л.Я. Метод спиновых меток и зондов / Л.Я. Гендель, К.Е. Круглякова. М.: Наука, 1986. - С. 163-194.

34. Геннис Р. Биомембраны: молекулярная структура и функции / Р. Геннис. М.: Мир, 1997. - 624 с.

35. Гительзон И.И. Исследование функционального состояния эритрона методом эритрограмм / И.И. Гительзон, И.А. Терсков // Вопросы биофизики, биохимии и патологии эритроцитов. -Красноярск, 1960. С. 85-99.

36. Гичев Ю.П. Метод органной культуры печени в комплексной диагностике хронических гепатитов и циррозов печени / Ю.П. Гичев, Ю.А. Григорьев // Современная медицина. 1982. - № 2. -С. 67-72.

37. Гончарова Е.И Белки цитоскелета эритроцитов / Е.И. Гончарова, Г.П. Пинаев // Цитология. 1988. - Т. XXX, № 1. - С. 5-16.

38. Губский Ю.И. Коррекция химического поражения печени / Ю.И. Губский.-Киев : Наукова думка, 1989. 157 с

39. Гюльханданян А.В. Ионный транспорт и мембранный потенциал эритроцитов у больных с хронической почечной недостаточностью / А.В. Гюльханданян, Э.Л. Костина, Р.Г. Пандунц // ПФ и ЭГ; 1989. - №4. - С. 27-30.

40. Давидик Г.С. О влиянии экстракта эмбриональной гомологичной ткани печени на течение экспериментального цирроза печени / Г.С. Давидик, И.С. Проскурякова, Г.С. Якобсон // Вопросы патогенеза и терапии органосклерозов. 1967. - Т. 5 - С.379-382.

41. Данилова Л.А. Анализы крови и мочи / Л.А. Данилова. -СПб.: Салит-Медкнига, 2003. 128 с.

42. Дементьева Г.М. Руководство по фармакотерапии в педиатрии и детской хирургии / Г.М. Дементьева, Н.Н. Володина. М.: ИД Медпрактика. - Т. 4. Неонатология, 2004. - 260 с.

43. Дисбаланс в ферментной системе генерирования и утилизации активных форм кислорода в печени мышей линии AKR в процессе развития спонтанного лейкоза / Л.С. Вартанян и др. // Биохимия. 2001. - Т. 66, вып.7. - С. 896-904.

44. Древаль В.И. Радиоционно-индуцируемые изменения структуры белков эритроцитарных мембран / В.И. Древаль // Биофизика. 2000. - Т. 45, вып. 5. - С. 836-838.

45. Дубинина Е.Е. Окислительная модификация белков / Е.Е. Дубинина, И.В. Шугалей / Успехи современной биологии. 1993. -№ 113.-С. 71-81.

46. Дузу П. Криобиохимия / П. Дузу. М.: Наука, 1980. - 176 с.

47. Еремина Т.В. Показатели антиоксидантного статуса эритроцитов при ожоговой травме : автореф. дис. . канд. Мед. наук / Т.В. Еремина. Ростов на Дону, 1999. - 24 с.

48. Завалишин И.А. Гибель нейрона кардинальная проблема неврологии и психиатрии / И.А. Завалишин, М.Н. Захарова // Вестник РАМН. - 1999.-№ 1.-С. 28-33.

49. Зайцев В.Г. Методологические аспекты исследований свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма / В.Г. Зайцев, В.И. Закревская // Вестник Волгоградской медицинской академии. 1998. - Т. 54., вып. 4. - С. 49-53.

50. Зенков Н. К. Окислительный стресс: Биохимические и патофизиологические аспекты / Н.К. Зенков, В.З. Ланкин, Е.Б. Менщикова. М.: МАИК Наука : Интерпериодика, 2001. - 343 с.

51. Змушко Е.И. Медикаментозные осложнения / Е.И. Змушко, Е.С. Белозёров Е.С. СПб.: Питер, 2001. - 448с

52. Зуева О.М. Состояние мембран эритроцитов и их функциональные свойства в постреанимационном периоде / О.М. Зуева, А.С. Лебедев, В.Г. Корпачев //ПФ и ЭГ: 1989. - №4. - С. 22-24.

53. Иванов Д.О. Клинико-лабораторные варианты течения сепсиса новорожденных : автореф. дисс. .канд. мед. наук/Д.О. Иванов. -СПб., 2002. 24 с.

54. Иванов И.Т. Сравнение механизмов кислотного и щелочного гемолиза эритроцитов человека / И.Т. Иванов // Биофизика.- 2001. Т. 46, вып. 2. - С. 281-290.

55. Ивков В.Г. Динамическая структура липидного бислоя /

56. B.Г. Ивков, Г.Н. Берестовский. М.: Наука, 1981. - 295 с.

57. Изменение реологических свойств крови и осмотической резистентности эритроцитов при активации свободнорадикальных процессов / Е.В. Ройтман и др. // Клиническая лабораторная диагностика. 2001. - N 3. - С. 42-43.

58. Изменения активности ферментов углеводного обмена у крыс при экспериментальном отравлении гербицидом 2,4-Д и полихлорированными бифенилами / Э.Г. Давлетов и др. // 2-й Съезд биохимии общества РАН. М., 1997. - С. 20.

59. Измерение фосфолипидного состава и окислительного фосфорилирования в митохондриях печени при гепатите / К.Т. Алматов и др. // Вопросы медицинской химии. 1986. - Т. 32, вып. 3.1. C. 27-30.

60. Изучение взаимодействия метгемоглобина с фосфолипидными бислойными мембранами методом флуоресценции / И.П. Ушакова и др. // Биоорганическая химия. -1981. № 4. - С. 613-620.

61. Инфекционные болезни у детей: учеб. пособие / под ред. В.В. Ивановой. М. : Медицинское информационное агентство", 2002.- 928 с.

62. Кагава Я. Биомембраны / Я. Кагава. М. : Высшая школа, 1985.- 583 с.

63. Каган В.Е. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов / В.Е. Каган, О.Н. Орлов, JI.JI. Прилипко // Итоги науки и техники. Биофизика. 1986. - Т. 18. -136 с.

64. Кантор Ч. Биофизическая химия / Ч. Кантор, П. Шиммел. -М. :Мир, 1984.-Т. 1.-336 с.

65. Каплан О.В. Липиды эритроцитов и газотранспортная функция крови при острой кровопотере / О.В. Каплан // Вопросы медицинской химии. 1995.- Т. 41, № 2.- С. 23-25.

66. Кидалов В.Н. О гармонических отношениях в периферическом пуле эритрона / В.Н. Кидалов // Международные медицинские обзоры. 1994. - Т. 2, № 4. - С. 258-262.

67. Кнунянц И. Л. Золотой фонд. Химия. Энциклопедия. / И.Л. Кнунянц. М.: Большая Российская Энциклопедия, 2003. - 972 с.

68. Козеннов A.M. Структурно-биохимические свойства мембраны безъядерных эритроцитов / A.M. Козеннов, М.Н. Маслова // Физиологический журнал СССР им. И.М. Сеченова. 1998. - № 12. - С. 1587-1598.

69. Кольман Я. Наглядная биохимия / Я. Кольман, К. Рем. М.: Мир, 2000. - 469с.

70. Конев С.В. Структурная лабильность биологических мембран и регуляторные процессы / С.В. Конев. М.: Наука и техника, 1987.-240 с.

71. Коновалока Е.О. Влияние инсулина на активность NADP -зависимых МДГ и Г-б-ФДГ в печени крыс разного возраста / Е.О. Коновалока// Физиология и биохимия онтогенеза. 1983. - Т. 15. -С. 82-84.

72. Костюк В.А. Роль ковалентного связывания и перекисного окисления липидов в повреждении печени четыреххлористым углеродом /В.А. Костюк//Биохимия. -1991.-Т. 56, вып. 10.-С. 1878-1885.

73. Котык К. Мембранный транспорт / К. Котык, К. Янычек. -М.: Мир, 1980.-40 с.

74. Крутецкая З.И. Биофизика мембран / З.И. Крутецкая, А.Б. Лонский. СПб.: Изд-во СПб. ГУ, 1994. - 283 с.

75. Крыжановский С.А.Клиническая фармакология: учеб. для студ. ср. мед. учеб. зав. / С.А. Крыжановский М.: Издательский центр Академия, 2003.-400 с.

76. Кузурман П.А. О механизме полиморфных превращений в фосфотидиловых мембранах / П.А. Кузурман, Г.В. Архипова, Е.Б. Бурлакова // Биофизика. 2002. - Т. 47, вып. 5. - С. 842-846.

77. Кулинский В.И. Структура, свойства, биологическая роль и регуляция глутатионпероксидазы / В.И. Кулинский, Л.С. Колесниченко // Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113, вып. 1. - С. 107-121.

78. Курганов Б.И. Гипотетическая структура комплекса ферментов гликолиза (гликолитического метаболона), формирующегося на мембране эритроцитов / Б.И. Курганов, А.Е. Любарев // Молекулярная биология. 1988. - Т. 22., вып. 6. - С. 1605-1613.

79. Лапшина Е.А. Структурные изменения эритроцитарных мембран в присутствии свободных жирных кислот и их производных / Е.А. Лапшина, И.Б. Заводник // Биологические мембраны. 1995. - Т. 12, №2.-С. 157-165.

80. Леонова В.Г. Анализ эритроцитарных популяций в онтогенезе человека / В.Г. Леонова. Новосибирск : Наука, 1987. - 242 с.

81. Лечение острой гепатоцеребральной недостаточности при инфекционных токсикозах у детей / Б.М. Блохин и др. // Педиатрия. -1985.-№9.-С.41-42.

82. Лисовкая И.Л. Сохранение постоянного отношения площади поверхности к объему в фракционированных по плотности эритроцитах / И.Л. Лисовкая, Ю.М. Розенберг, Е.Е. Яковенко // Биологические мембраны. 2003. - Т. 20, № 2. - С. 168-177.

83. Лукьянова Е.М. Нефротоксичность антибиотиков у новорожденных / Е.М. Лукьянова // Качественная клиническая практика. 2002. - № 2. - С. 53-59.

84. Лукьянова Л.Д. Биоэнергетическая гипоксия: понятия, механизмы и способы коррекции / Л.Д. Лукьянова // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1997. - Т. 124, № 9. - С. 244-253.

85. Ляпков Б.Г. Тканевая гипоксия: клинико-биохимические аспекты // Б.Г. Ляпков, Е.Н. Ткачук / Вопросы медицинской химии. -1995. Т. 41, № 2. - С. 2-8.

86. Мажуль В.М. Фосфресцентный анализ продуктов перекисного окисления липидов в составе изолированных мембран эритроцитов человека / В.М. Мажуль, Д.Г. Щербин // Биофизика. -2000. Т. 45, вып. 2. - С. 283-287.

87. Мамонтова М.В. Влияние гипоксии на структурно-функциональное состояние мембран эритроцитов новорожденных: автореф. дисс. канд. биол. Наук / М.В. Мамонтова. Минск, 1990. - 24 с.

88. Мапчук В.Т. Изменение активности лейкоцитов при экстремальных состояниях у детей / В.Т. Мапчук // Бюллетень ССО РАМН. 1992. - Т. 125, № 5. - С. 38-42.

89. Мари Д. Инфекционные болезни у детей / Д. Мари. М. : Практика, 2006. - 928 с.

90. Меньшикова Е.Б. Антиоксиданты и ингибиторы окислительных процессов / Е.Б. Меньшикова, Н.Е. Зенков // Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113, вып. 4. - С. 442-458.

91. Мещишен 1.Ф. Мехашзм окиснюваль" hoi модифжацн бшмв / 1.Ф. Мещишен, В.П. Польовий // Бук. мед. BicHHK. 1999.- Т. 3, № 1. - С. 196-205.

92. Михайлов И.Б. Клиническая фармакология / И.Б. Михайлов. СПб.: Фолиант, 1999. - 210 с.

93. Московцева О.М. Влияние янтарной кислоты и ее производных на состояние свободно-радикальных процессов экспериментальных животных : автореф. дисс. . канд. биол. Наук / О.М. Московцева. Нижний Новгород, 2006. - 29 с.

94. Нарушение морфологии эритроцитов и окислительная модификация белков теней эритроцитов и плазмы крови при алкоголизме / В.Д. Прокопьева и др. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2005. - № 2. - С. 13-15.

95. Некоторые регуляторные свойства глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы из печени крыс в норме и экспериментальном токсическом гепатите / М.В. Левенкова и др. // Вестник ВГУ. Сер.: Химия. Биология. Фармация. 2004, № 1. - С. 134-138.

96. Неспецифическое действие морфина на мембраны эритроцитов / П.Е. Кузнецов и др. // Биофизика. 2004. - Т. 49, вып. 4. - С. 680-684.

97. Овсянников М.В. Структурное состояние мембран эритроцитов в патогенезе опийной наркомании / М.В. Овсянников, С.Л. Масловский, Н.П. Милютина // Биологические мембраны. 2005. -Т. 22, № 4. - С. 322-326.

98. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия / Ю.А. Овчинников. М.: Просвещение, 1987. - 815 с.

99. Окислительная модификация белков и физико-химическое состояние липидов в мембранах эритроцитов при действии диамида / Н.М. Козлова и др. // Биофизика. 2002. - Т. 47, вып. 3. - С. 500-505.

100. Патологическая физиология система крови / Е.В. Леонова и др.. Новосибирск : Наука, 1992. - 342 с.

101. Патологическая физиология: учебник для студентов мед.вузов / Н.Н. Зайко и др.. М.: МЕДпресс-информ, 2002. - 644 с.2+

102. Пестров Н.Б. Регуляция Са -АТР-азы плазматических мембран / Н. Б. Пестов, Р.И. Дмитриев, М. И. Шахпаронов // Успехи бтологической химии. 2003. - Т. 43. - С. 98-138.

103. Петровский Б.В. Справочник по нефрологии / Б.В. Петровский, И.Е. Тареева, Н.А. Мухина. М. : Медицина, 1986. -432 с.

104. Повреждение цитоскелета и клеточных мембран при апоптозе / А.Б. Егорова и др. // Успехи современной биологии. 2001. -Т. 121,№5.-С. 502-510.

105. Проказова Н.В. Влияние лизофосфатидилхолина на передачу трансмембранного сигнала внутрь клетки / Н.В. Проказова, Н.Д. Звездина, А.А. Каратаева // Биохимия. 1998. - Т. 68, № 1. - С. 38-46.

106. Проскурякова И.С. Морфофункциональные аспекты регенерации печени при экспериментальной коррекции токсического гепатита / И.С. Проскурякова // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1995. - №6. - С. 656-659.

107. Пучкаев А.В. Каталитическая активность Г-б-ФДГ в водно-органических средах / А.В. Пучкаев, Д.И. Метелица // Прикладная биохимия и микробиология. 1992. - Т. 28, №1.- С. 27-32.

108. Рапян В.В. Состояние эритроцитарных мембран при внутриклеточной гипоксии плода / В.В. Рапян, З.А. Авакян, С.О. Мартиросян // Акушерство и гинекология. 1993. - №3. - С. 17-19.

109. Рациональная антимикробная фармакотерапия / В.П. Яковлева и др. М.: Литтера, 2003. - 1008 с.

110. Резван С.Г. Анализ молекулярных механизмов взаимодействия синтетических гомологов ретинола с компонентами эритроцитарной мембраны и свободным гемоглобином : автореф. дисс. . канд. биол. Наук / С.Г. Резван. Воронеж, 1996. - 25 с.

111. Роль глюкозо-б-бфосфатдегидрогеназы в патогенезе анемии при лептоспирозе / М.Г. Авдеева и др. // Клиническая медицина. 2002. - Т. 80, № 6. - С. 42-44.

112. Руководство по гипербарической оксигенации (теория и практика клинического применения) / А.Ю. Аксельдорф и др.. М. : Медицина, 1986. - 416 с.

113. Рыбальченко В.К. Молекулярная организация и ферментативная активность биологических мембран / В.К. Рыбальченко, М.Д. Коганов. Киев : Наукова думка, 1977. - 80 с.

114. Рыбина В.В. Регуляция активности Са2+-АТР -азы ионами Са2+ и кальмодулином в эритроцитах человека при различном времени хранения / В.В. Рыбина, И.А. Еленская, Н.П. Каймачников // Биологические мембраны. 2001. - Т. 18, № 4. - С. 287-293.

115. Рябов Г.А. Логика развития интенсивной терапии критических состояний / Г.А. Рябов // Анестезиология и реаниматология. 1999. - № 1. - С. 10-13.

116. Саприн А.Н. Окислительный стресс и его роль в механизмах апоптоза и развитии патологических процессов / А.Н. Саприн, Е.В. Капинина // Успехи биологической химии. 1999. -Т. 39. - С. 289-36.

117. Сафонов А.Д. Омская государственная военно-медицинская академия Метаболические и иммунные взаимосвязи в патогенезе острого вирусного гепатита В, HCV-инфекции и их сочетанной формы : автореф. дисс. докт. мед. наук / А.Д. Сафонов. СПб, 1998. - 28 с.

118. Свободные радикалы в живых системах / Ю.А. Владимиров и др. // Итоги науки и техники. Биофизика. 1991. - Т. 29. - С. 252.

119. Селивановский Д.А. О существовании газовых полостей в эритроите / Д.А. Селивановский, О.В. Костина, И.Н. Диденкулов // Динамика сплошной среды. 2001. - № 117. - С. 40-42.

120. Сергеев К.Т. Терапия, снижающая уровень липидов, замедляет развитие атеросклероза сонных артерий / К. Сергеев // Русский медицинский журнал. 1998. - Т. 5, № 6. - С. 31-32.

121. Сергеева К.М. Заболевания детей раннего возраста: справ, мед. сестры / К.М. Сергеева. СПб.: Питер, 2002. - 480 с.

122. Серов В.В. Морфологическая диагностика заболеваний печени / В.В.Серов, К. Лапиш М.: Медицина, 1989. - 336 с.

123. Сидельникова В. М. Антенатальная диагностика, лечение гемолитической болезни плода при резус-сенсибилизации и меры ее профилактики / В. М. Сидельникова // Акушерство и гинекология. -2005.-№5.-С. 56-60.

124. Слобожанина И.Е. Структурная модификация мембран эритроцитов при окислительном стрессе и активность мембраносвязанной NADH-метгемоглобинредуктазы / И.Е. Слобожанина, Л.М. Лукьяненко, Н.М. Козлова // Биофизика. -2000. Т. 45, вып. 2. - С. 288-292.

125. Сорокина Н.Ю. Исследование процессов самодиффузии ионного трансмембранного обмена в эритроцитах крыс в норме и при патологии / Н.Ю. Сорокина, В.Н. Орлова // Химия и компьютерное моделирование : Бутлеровские сообщения. 1999. - №2. - С. 15-19.

126. Справочник биохимика / Р. Досон и др.. М.: Мир, 1991.544 с.

127. Сторожок С.А. Молекулярная структура мембран эритроцитов и их механические свойства / С.А. Сторожок, А.Г. Санников, Ю.М. Захаров. Тюмень : Изд-во Тюмен. гос. ун-та, 1997.- 140 с.

128. Страчунский Л.С. Макролиды в современной клинической практике / Л.С. Страчунский, С.Н. Козлов. Смоленск : Русич., 1998. -254 с.

129. Структруно-функциональные параметры клеток крови в норе и при патологии у детей в условиях севера / В.Т. Мапчук и др. // Бюллетень ССО РАМН. 2003. - Т. 108, № 2. - С. 12-16.

130. Структурно-метаболический статус и функциональные особенности эритроцитов при инсулинзависимом сахарном диабете у детей / В.В. Новицкий и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1999. - Т. 128, № 9. - С. 347-351.

131. Судаков К.В. Функциональная система, определяющая оптимальный уровень эритроцитов в организме /К.В. Судаков, Ю.М. Захаров // Клиническая медицина. 2002. - № 4. - С. 4-11.

132. Суслова Г.Ф. Динамика ферментного статуса клеток и тканей при болезнях пищеварительных органов : автореф. дисс. . канд. биол. Наук / Г.Ф. Суслова. М., 1991.-24 с.

133. Сухомлинов Б.Ф. Влияние адреналина на структурно-функциональные свойства мембран, активность ЛДГ и Г-б-ФДГ эритроцитов крыс / Б.Ф. Сухомлинов, З.В. Гузор // Молекулярная генетика и биофизика. 1990. - № 15. - С. 20-30.

134. Тареева И.Е. Острая почечная недостаточность / И.Е. Тареева // Нефрология: Руководство для врачей. М. : Медицина, 2000.-С. 580-595.

135. Теддер Дж. Промышленная органическая химия / Дж. Теддер, А. Нехватал, А. Джубб. М.: Мир, 1977. - 700 с.

136. Тихомолова Е.Г. Состояние мембран эритроцитов у больных хроническим вирусным гепатитом В: автореф. дис. . канд. мед. наук / Е.Г. Тихомолова. СПб., 1992. - 23 с.

137. Тюкавкина Н.А. Биоорганическая химия: учебник для вузов / Н.А. Тюкавкина, Ю.И. Бауков. М.: Дрофа, 2005. - 542 с.

138. Уровни РВТК, карнитина и восстановленного глутатиона при раке мочевого пузыря у человека / X. Сонмез и др. // Биохимия. -2003.-Т. 68, вып. 3.-С. 418-421.

139. Федорова Н.Ю. Состояние системы глутатионпероксидазы-глутатионредуктазы в стимулированном к регенерации органе и ее роль в клеточной пролиферации: автореф. дис. . канд. биол. наук / Н.Ю. Федорова. Воронеж, 1999. - 24с.

140. Финагин Л.К. Обмен холестерина и его регуляция / Л.К. Финагин. Киев : Вища школа, 1981. - 168 с.

141. Фултон А. Цитоскелет. Архитектура и хореография клетки / А. Фултон. М.: Мир, 1987. - 115 с.

142. Халмурадов А.Г. Транспорт жирорастворимых витаминов / А.Г. Халмурадов, В.Н. Тоцкий, Р.В. Чаговец. Киев : Наукова думка, 1980.-216 с.

143. Характеристика реологических свойств эритроцитов у детей, родившихся в асфиксии / P.P. Шиляев и др. // Педиатрия. -1986.-№8. -С. 11-15.

144. Хиггинс К. Расшифровка клинических лабораторных анализов / К. Хиггинс. М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2004. - 376 с.

145. Холестериноз (Холестерин биомембран. Теоретические и клинические аспекты) / Ю.М. Лопухин и др.. М. : Медицина, 1983. -352 с.

146. Черницкий Е.А. Структура и функции эритроцитарных мембран / Е.А. Черницкий, А.В. Воробей. Минск : Наука и техника, 1981 -216с.

147. Шабалов Н.П. Асфиксия новорожденных / Н.П. Шабалов. -М.: МЕДпресс-информ, 2003. 368 с.

148. Шабалов Н.П. Неонатология: учеб. пособие: в 2 т. / Н.П. Шабалов. Т. I. - М.: МЕДпресс-информ, 2006. - 608 с.

149. Шереметьев Ю.А. Влияние La3+ на электрофоретическую подвижность и агрегацию интактных и обработанных низкими концентрациями глутарового альдегида эритроцитов человека / Ю.А. Шереметьев, А.В. Шереметьева // Биофизика. 2003. - Т. 48, вып. 1. - С. 63-67.

150. Шиффман Ф.Дж. Патофизиология крови / Ф.Дж. Щиффман. М.: Бином; СПб.: Невский диалект, 2000. - 448 с.

151. Шмаров Д.А. Изменения стабильности параметров клеточного цикла клеток костного мозга при гематологическихзаболеваниях / Д.А. Шмаров, Ю.М. Кучма, Г.И. Козинец // Терапевтический архив. 1997. - №7. - С. 17-21.

152. Щеголева Т.Ю. Изменение гидратного окружения эритроцитов при гормональной стимуляции / Т.Ю. Щеголева, В.Г. Колесников//Биофизика. 1996. - Т. 41, № 5. - С. 1082-1086.

153. Эстрин В.В. Влияние гемосорбции и ульстрафиолотового облучения крови на морфологические свойства эритроцитов при сепсисе у новорожденных / В.В. Эстрин, О.В. Муравьев, А.Ф. Комаров // Анестезиология и реаниматология. 1993. - № 2. - С. 40-43.

154. Acidosis potentiates oxidative neuronal death by multiple mechanisms / Ying W. et al. // J. Neurochem. 1999. - V. 73. - P. 1549-1556.

155. Alvarado F. The molecular mechanism of organic solute find Na+-cotransport / F. Alvarado. // Int. Union Physiol. 1997. - V. 12. - P. 433.

156. Arachidonic and docosahexaenoic acids are strongly associated in maternal and neonatal blood / K. Ghebremeskel et. al. // Eur. J. Clin. Nutr. 2000. - V. 54, № 1. - P. 50-56.

157. Askar M.A. Regulation and properties of glucoso-6-phosphate dehydrogenase from cat braim / M.A. Askar, K. Sumathy, N.Z. Baquer // Indian J. Biophys. 1996. - V. 33, № 2. - P. 512-518.

158. Astiazazan A.M. Estradiol-proced moidifications on the respronse to glucose of hepatocytes from fasted rats / A.M. Astiazazan, B. Ochoa, M. Lacart // Biochem. Med. And Metab. Biol. 1988. - V. 40, № 2. -P. 197-203.

159. Band 3-Memphis is associated with a lower transport rate of phosphoenolpyruvate / H. Idecuchi et. al. // J. Haematol. 1992. - V. 92, № l.-P. 122-125.

160. Barbara S. The American Society for Biochemistry and Molecular Biology / S. Barbara, Earl Berlett, R. Stadtman // Inc. Protein Oxidation in Aging, Disease, and Oxidative Stress. 1997. - V. 272, № 33. -P. 20313-20316.

161. Basu S. Dehydroascorbic acid reduction in human erythrocytes / S. Basu, S. Som, S. Ded// J. Chromatogr. Biomed. -1991. -№ 1. P. 529-542.

162. Bazhan K.V. Lipid peroxidation and antioxidant system in subjects exposed to the influence of extreme factors / K.V. Bazhan // Lik Sprava.- 1998.-V. 8.-P. 47-50.

163. BDNF protect against spatial memory deficit following neonatal hypoxia-ischemia / R. Almini et al. // Experimental neurology. 2000. - V. 166.-P. 99-114.

164. Beutler E. G6PD deficiency / E. Beutler // Blood 1994. - V. 84,№11.-P. 3613-3636.

165. Bilirubin and ascorbate: antioxidant activity in neonatal plasma V. Gophinathan et al. // FEBS Lett. 1994. - V. 349. - P. 197-200.

166. Bocci V. Determinants of erythrocyte ageing: a reappraisal / V. Bocci // Brit. J. Haematol. -1981. V. 48, № 4. - P. 515-522.

167. Bracci R. Oxidant injury in neonatal erythrocytes during the perinatal period / R. Bracci, S. Perrone, G. Buonocore // Acta Paediatr Suppl. 2002. - V. 91. - P. 130-134.

168. Bredeston L.M. Pre-steady-state phosphorylation and dephosphorylation of detergent-purified plasma-membrane Ca2+-ATPase / L.M. Bredeston, A.F. Rega//Biochem J. 2002. - V. 361. - P. 355-61.

169. Bruce Lactate influex into red blood cells on athletic and nonathletic species / S. Skelton Michele et. al. // Amer. J. Physiol. 1995. -V. 268, №5.-P. 1121-1128.

170. Buonocore G Free radicals and brain damage in the newborn / G. Buonocore, S. Perrone, R. Bracci // Biol Neonate. 2001. - V. 79. - P. 180-186.

171. Burns J. Ascorbic acid in human erythrocytes / J. Burns, C. Evans //J. Biol. Chem. 1996. - № 4. - P. 223-241.

172. Carnosine and taurine protect rat cerebellar granular cells from free radical damage / A.A. Bodlyrev et al. // Neurosci Lett. 1999. - V. 63. -P. 169-72.

173. Chasis J.A. Erythrocyte membrane deformability and stability: two distinct membrane properties that are independently regulated by skeletal protein associations / J.A. Chasis, N. Mohandas // J. cell. Biol. -1986.-V. 103,№2.-P. 343-350.

174. Cheesman К. H. Mechanisms and effects of lipid peroxidation / К. H. Cheesman // Mol. Aspects Med. 1993. - V. 14, № 3. - P. 191-197.

175. Cohen C.M. Functional characterization of human erythrocyte spectrin alpha and beta chains: association with actin and erythrocyte protein 4.1. / C.M. Cohen, R. Langley // Biochemistry. 1984. - V. 23, № 19. - P. 4488-4495.

176. Comparative study of erythrocyte deformability in maternal and cord blood / K. Eguchi et al. // Am. J. Perinatol. 1995. - V. 12, № 1. - P. 39-43.

177. Cotgreave I.A. Recent trends in glutathione biochemistry -glutathione-protein interactions: a molecular link between oxidative stress and cell proliferation / I.A. Cotgreave, R.G. Gerdes // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. - V. 242. - P. 1-9.

178. Dani C. Role of oxidatieve stress as physiopathologic factor in the preterm infant / C. Dani, A. Cecchi, G. Bertini // Minerva Pediatr. -2004.-V. 56.-P. 381 -394.

179. Davies K.L. Buckled-up children: understanding the mechanism, injuries, management, and prevention of seat belt related injuries. / K.L. Davies // J. Trauma Nurs. 2004. - V. 11. - P. 16-24.

180. Differential effects of NADPH/NADP+ ratio on the activities of hexose-6-phosphate degydrogenase and glucose-6-phosphate degydrogenase / K.I. Oka et al. // Biochem. 1981. - V. 662. - P. 318-375.

181. Eder P.S. Phosphorylation reduces the affinity of protein 4.1 for spectrin. / P.S. Eder, C.J. Soong, M. Tao // Biochemistiy. 1986. - V. 25, № 7. - P.1764-1770.

182. Effect of hemoglobin oxidation prodacts on the stability of red cell membrane skeletons and the associations of skeletal proteins: correlation with a release of hemin / P. Jarolim et al. // Blood. 1990. - V. 76,№ 10.-P. 2125-2131.

183. Effect of hydrogen peroxyde exposure on normal human erythrocyte deformability, morfology, surfase characteristics and spectrin-hemoglobin cross-linking / L.M. Snyder et al. // J. Clin.Inv. 1985. - V.76. -P. 1971-1977.

184. Eiserich J.P. Formation of nitricoxidederived inflammatory oxidants by myeloperoxidase in neutrophils / J.P. Eiserich // Nature.- 1998. -V. 391.-P. 393-397.

185. Francis G.L. Enzyme inactivation via disulphide-thiol exchange as catabysed by a rat liver membrane protein / G.L. Francis, F.J. Ballard // Biochem. J. 1980.-V. 186, № 2. - P. 581-590.

186. Gabehr F. Glucose 6-phosphate dehydrogenase eryhtrocyten / F. Gabehr // Biochim. et biophys. Acta. 1989. - V. 29. - P. 52-57.

187. Ganea E. a-Crystallin protects glucose 6-phosphate dehydrogenase against inactivation by malondialdehyde Harding John / E. Ganea // Biochim. et biophys. Acta. 2000. - V. 1500, № 1. - P.49-58.

188. Gregory L. Developmental Pharmacology Drug Disposition, Action and Therapy in Infants and Children / L. Gregory, M. Susan // The New England Journal of Medicine. - 2002. - V. 349, № 12. - P. 1157-1167.

189. Grosu L. Contributions of the CLUG physiology school to the study of capillary permeability for macromolecules / L. Grosu, E. Rosenteld // Rev. roum. physiol. 1992. - V. 29, № 1. - P. 23-31.

190. Gutteridge J.M. Lipid peroxidation and antioxidants as biomarkers of tissue damage / J.M. Gutteridge // Clin Chem. 1995. - V. 12. -P. 1819-1828.

191. Hall A.G. The role of glutathione in the regulation of apoptosis / A.G. Hall // Eur. J. Clin. Invest. 1999. - V. 29. - P. 238-245.

192. Halliwell B. Reactive oxygen species in living systems. Source, biochemistry and role in human disease / B. Halliwell // Amer. J. Med. -1991.- V. 91.-P. 14-22.

193. Hazen S.L. Activation of membrane-accociatted phospholipase A2 during rabbit myocardial ischemia which is highly selective for plasmogen substrate / S.L. Hazen, D.A. Ford, R.W. Gross // J. Biol. Chem.1991. V. 266, № 9. - P. 5629-5633.

194. Heffner J.E. Pulmonary strategies of antioxidant defense / J.E. Heffner, J.E. Repine // Am Rev Respir Dis. 1989. - V. 140, № 2. - P. 531-54.

195. Human erythrocyte protein 4.2: isoform expression, differential splicing, and chromosomal assignment / L.A. Sung et. al. // Blood. 1992. -V. 79,№ 10.-P. 2763-2770.

196. Husain A. The interaction of calmodulin with human and avian spectrin / A. Husain, G.J. Howlett, W.H. Sawyer // Biochem Biophys Res Commun. 1984. - V. 16, № 3. - P. 1194-1200.

197. Impaired deformability of erythrocytes and neutrophils in children with newly diagnosed insulin-dependent diabetes mellitus / O. Linderkamp et al. // Diabetologia. 1999. - V. 42, № 7. - P. 865-869.

198. Intrasplenic hepatocellular transplantation corrects hepatic encephalopathy in portacaval shunted rats / J. Ribero et al. // Hepatology.1992.-V.15.-P. 12-18.

199. Jennings M.L. Characterization of oxalate transport by the human erythrocyte band 3 protein / M.L. Jennings, M.F. Adame Mark // J. Gen. Physiol. 1996. - V. 107, № 1. - P. 145-159.

200. Jones R.H. The effect of diabetes and dietary ascorbate supplementation on the oxidative modification of rat lens beta L crystalline / R.H. Jones, J.S. Hothersall // Biochem. Med. Metab. Biol. 1993. - V. 50, №2.-P. 197-209.

201. Joshi J.G. Inaktivation of bakeris yeast glucose-6-phosphate degydrogenase by aluminium / J.G. Joshi, Cho Sung // Biochemistry. 1989. -V. 28, №8.-P. 353-361.

202. Kaplowitz M.D. Biochemical and cellular mechanisms of toxic liver injury / M.D. Kaplowitz // Semin Liver Dis. 2002. - № 4. -P. 137-144.

203. Kelly Darshan S. / Ethand modulation of the hormonal and nutritional regulation of glucose-6-phospate dehydrogenase activity in primary cultures of rat hepatocytes / S. Kelly Darshan, F.Kletzien Rolf // J. Biochem. 1984. - V. 217, № 2. - P. 543-549.

204. Leto T.L. A structural model of human erythrocyte protein 4.1. / T.L. Leto, V.T. Marchesi //J. Biol Chem. 1984. - V. 10, № 7. - P. 4603-4608.

205. Li C. Reactive species mechanisms of cellular hypoxia-reoxygenation injury // C. Li, M. R. Jackson / Am J. Physiol. Cell Physiol. -2002.-V. 282,№2.-P. 227-241.

206. Lipid peroxidation arachidonic acid and products of lipoxygenase pathway in ischaemic preconditioning of rat heart / J. Starcopf et al. // Cardiovasc. Res. 1998. - V. 37, № 1. - P. 66-75.

207. Lohr G.W. The enzymes of erythrocytes and their functional importance / G.W. Lohr // Methods of Enzymatic Analysis. 1964. - V. 9. -P. 240-258.

208. Luzzatto L. Glucose-6-phosphate degydrogenase / L. Luzzatto // Clin. Journal of Biochemistry. 1986. - V. 35. - P. 373-375.

209. Maddipati K.R. Characterization of the hydroperoxide-reducing activity of human plasma / K.R. Maddipati, C. Gasparski, LJ. Marnett // Arch. Biochem. Biophys. 1987. - V. 254, № 1. - P. 9-17.

210. Mason Philip J. New insights into G6PD deficiency / J. Mason, J. Philip // Brit. J. Haematol. 1996. - V. 94, № 4. - P. 585-591.

211. McCord J.M. Oxygen-derived free radicals in postischemic tissue injury // J.M. McCord // Engl J Med. 1985. - V. 312. - P. 159-163.л .

212. Mechanisms of Ca elevation induced by erythrocyte components in endothelial cells / H. Zhang et. al. // J. Pharmacol Exp Ther. 1996. - V. 277, № 3. - P. 1501-1509.

213. Mehtar S. The continuing problem of "hospital staphylococci / S. Mehtar//J.Chemother. 1994. - V. 6, № 4. - P. 25-31.

214. Meyburg J. Decreased mechanical stability of neonatal red cell membrane quantified by measurement of the elastic area compressibility modulus / J. Meyburg, T. Bohler, 0. Linderkamp // Clin. Hemorheol. Microcirc. 2000. - V. 22, № 1. - P. 67-73.

215. Mishra O.P. C7ellular mechanisms of hypoxic injury in the developing brain / O.P. Mishra, M. Delivoria-Papadopoulos // Brain Res. Bull. 1999.-V. 48.-P. 233-238.

216. Molecular basis for the human erythrocyte glycophorin specifying the Miltenberger class I (Mil) phenotype / C. Huang C. et. al. // J. Blood. 1992. - V. 80, № 1. - 257-263.

217. Mosca A. Simultaneous automated determination of glucose-6-phosphate degydrogenase in whole blood / A. Mosca, R. Paleari, M. Luzzano // Eur. J. Clin. Chem. Clin Biochem. 1996. - V. 34, №5. - P. 431-438.

218. Nash G.B. Alteration of the cell membrane viscoelasticity by heat treatment: effect on cell deformability and suspension viscosity / G.B. Nash, H.J. Mesielman // Biorheology. 1985. - V. 22, № 1. - P. 73-84.

219. Natanson C. Anti-inflammatory therapies to treat sepsis and septic shock: a reassessment / C. Natanson // Crit care Med. 1997. - V. 25. -P. 1095-1100.

220. Oxidative modification of proteins during aging / R.L. Levine et al.. // Meth. Enzymol. 1990. - V. 186. - P. 464-478.

221. Oxidative stress in newborn erythrocytes / Y. Shahal et. al. // PediatrRes.- 1991.-V. 29,№2.-P. 119-122.

222. Palek J. Mutations of the red blood cell membrane proteins: from clinical evaluation to detection of the underlying genetic defect./ J. Palek, K.F. Sahr // Blood. 1992. - V. 80, № 2. - P. 308-330.

223. Papa S. Reactive oxygen species, mitochondria, apoptosis, and aging / S. Papa, V.P. Skulachev // Mol. Cell. Biochem. 1997. - V. 174. - P. 305-319.

224. Protein kinase С of human erythrocytes phosphorylates bands 4.1 and 4.9. / W.C. Faquin et. al. // Biochim. Biophys. Acta. 1986. - V. 11,№2. -P. 142-149.

225. Purification and characterization of a membrane-bound protein kinase from human erythrocytes / M. Tao et al. // J. Biol. Chem. 1980. -V. 25, № 6. - P. 2563-2568.

226. Reed P.W. Enchanced glutatione levels and oxidoresistance mediated by increased G6PDG exspression / P.W. Reed // J. Biol. Chem. -1969.-V. 224,№9.-P. 2459.

227. Rensin H. Lagemngsabhangige Beeinflussung der Sauerstofftransportkapazitat von Erythrozytenkonzentraten / H. Rensin // Anaesthesist. 2001. - B. 50. - S. 9-15

228. Reznick A.Z. Oxidative damage to proteins: Spectrophotometric method for carbonyl assay / A.Z. Reznick, L. Packer // Meth. Enzimol. 1994. - V. 233. - P. 357-363.

229. Rheological properties of young and aged human erythrocytes / W. Tillmann et al. // Klin. Wochenschr. 1980. - V. 58, № 1. - P. 569-574.

230. Robert C. Protein Disulfide Bond Formation in the cytoplasm during Oxidative Stress / C. Robert et al. // The Journal of Boilogical Chemistiy. 2004. - V. 279, № 21. - P. 21749-21758.

231. Robles R. Oxidative stress in the neonate / R. Robles, N. Palomino, A. Robles // Early Hum Dev. 2001. - № 65. - P. 75-81.

232. Roy R. Regulation of membrane lipid bilayer structure during seasonal variation a study of the brain membranes of Clarias batrahus / R. Roy, A.B. Das, D. Ghosh // Biochem. Biophys. Acta. 1997. - V. 1323, № 1. - P. 65-74.

233. S100 protein in serum as a prognostic marker for cerebral injury in term newborn infants with hypoxic ischemic encephalopathy // K. Thorngren-Jerneck et al. / Pediatr Res. 2004. - V. 55, № 3. - P. 406-4012.

234. Sahashi Y. Reduction of ascorbate in eiythrocytes / Y. Sahashi, J. Burns, C. Evans // J. Vitaminol. 1996. - № 12. - P. 6-14.

235. Saklai N. Interaction of hemoglobin with membrane lipid: a souru of pathological phenomena / N. Saklai, H.R. Ranney // Isr. J. Med. Sci. 1978. - V. 14, № 1. - P. 1152-1156.

236. Saugstad O.D. Hypoxanthine as an indicator of hypoxia: its role in health and disease through free radical production / O.D. Saugstad // Pediatr Res. 1988. - V. 23. - P. 143-150.

237. Saugstad O.D. Role of xanthine oxidase and its inhibitor in hypoxia: reoxygenation injury / O.D. Saugstad // Pediatrics. 1996. - V. 98. -P. 103-107.

238. Saugstad O.D. Update on oxygen radical disease in neonatology /O.D. Saugstad//Curr Opin Obstet Gynecol. 2001. - V. 13.-P. 147-153.

239. Selmeci Laszlo E. In reased glucoso-6-phosphate dehydrogenase concentration in hepatoma 3924A: enzymic and immundogical evidence / E. Selmeci Laszlo, George Weler // FEBS Left. -1976.-V. 61, № l.-P. 63-67.

240. Senescent erythrocytes: modification of rheologic properties, antigenic expression and interaction with monocytes / Racca A. et al. // Medicina B. Aires. 1999. - V. 59, № 1. - P. 33-37.

241. Severe infections caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus: 62 cases / T. May et al. // Presse Med. 1993. -№ 22.-P. 909-913.

242. Sutton H.C. On the participation of higher oxidative states of iron and copper in Fenton reactions / H.C. Sutton, C.C. Winterbourn // Free Radic Biol Med. 1989. - V. 6. - P. 53-60.

243. Tanner M.J. The major integral proteins of the human red cell / M.J. Tanner // Baillieres Clin. Haematol. 1993. - V. 6, № 2. - P. 333-356.

244. The ability of neonatal and maternal erythrocytes to produce reactive oxygen species in response to oxidative stress / M. Kondo et al. // Early Hum Dev. 2002. - V. 66, № 2. - P.81-88.

245. The pentose phosphate cycle in regulated by NADPH/NADP ratio in rat liver / J.Febregat et. al. // Arch. Biochem. Biophys. -1985. V. 236,№ l.-P. 110-118.

246. Turrens J.F. Superoxide production by the mitochondrial respiratory chain / J.F. Turrens // Biosci Rep. 1997. - V. 17. - P. 3-8.

247. Turrens J.G. Ubisemiquinone is the electron donor for superoxide formation by complex III of heart mitochondria / J.G. Turrens, A. Alexandre, A.L. Lehninger // Arch Biochem Biophys. 1985. - V. 237. -V. 271-278.

248. Vancomycin, ticarcillin, and amikacin compared with ticarcillin-clavulanate and amikacin in the empirical treatment of febrile,neutropenic children with cancer / J.L. Shenep et al. // N Engl J. Med. -1988. V. 16, № 319. - P. 1053-1058.

249. Velasco P. Purification, characterization and kinetic mechanism of glucose-6-phosphate degydrogenase from mouse liver / P. Velasco, R. Barcio // J. Biochem. 1994. - V. 26, №. 2. - P. 195-200.

250. Velasco P. The modulation of the oxidative phase of the pentose posphate and pathway in mouse liver / P. Velasco, A.M. Siero, I. Ibarguren // Int. J. Biochem. and Cell. Biol. 1995. - V. 27, № 10. - P. 1015-1019.

251. Vince John W. Carbonic anhydrase II binds to the carboxyl terminus of human band 3, the erythrocyte СГ/НСО3" exchanger / W. Vince John, A.F. Reithmeier Reinhart // J. Biol. Chem. 1998. - V. 273, № 43. - P. 28430-28437.

252. Yamazaki M. Ascorbic acid is cellular components / M. Yamazaki, T. Mioki // J. Ferment. Technolog. 1995, № 7. - P. 422-513.