Влияние СКЭНАР-воздействия на свободнорадикальные процессы в тканях и мембранах эритроцитов при окислительном стрессе

Гуськова, Елена Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние СКЭНАР-воздействия на свободнорадикальные процессы в тканях и мембранах эритроцитов при окислительном стрессе
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние СКЭНАР-воздействия на свободнорадикальные процессы в тканях и мембранах эритроцитов при окислительном стрессе"

На правах рукописи

Гуськова Елена Николаевна

Влияние СКЭНАР-воздействия на свободнорадикальные процессы в тканях и мембранах эритроцитов при окислительном стрессе

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ростов-на-Дону 2009

003466190

Работа выполнена на кафедре биохимии и микробиологии Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Южный федеральный университет»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Внуков Валерий Валентинович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Горошинская Ирина Александровна

доктор медицинских наук, профессор Чесникова Анна Ивановна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Ставропольская государственная

медицинская академия» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Защита диссертации состоится «21» апреля 2009 г. в 10.00 час на заседании диссертационного совета Д 212.208.07 по биологическим наукам в ФГОУ ВПО «Южный федеральный университет» по адресу 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Б. Садовая, 105/42, ауд. 203

С диссертацией можно ознакомится в научной библиотеке Южного федерального университета по адресу 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Пушкинская, 148.

Автореферат разослан «Д-0 » ^ьСк^птАХ- 2009 г. Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор биологических наук Майе* Т.С. Колмакова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. В настоящее время принято считать, что главным фактором в развитии патологических состояний является оксидативный стресс. Его проявление выражается в сдвиге динамического равновесия в системе антиоксиданты - про-оксиданты в сторону свободнорадикального окисления, продукты которого обладают широким спектром повреждающего действия. Это приводит к снижению стабильности и изменению физико-химических свойств мембран: микровязкости, текучести, мембранного потенциала, полярности внутренних областей мембраны и др.

К числу «свободнорадикальных патологий» относится ишемическая болезнь сердца (ИБС). Внедрение в клиническую практику новых мощных антиангинальных средств, позволило добиться определенных успехов в лечении ИБС. Воздействовать на активность свободнорадикальных процессов и систему антиоксидантной защиты возможно как при помощи фармакологических препаратов, так и при использовании немедикаментозных методов лечения (Jackson G.1999). Однако, у большой группы больных, несмотря на современное антиангинальное лечение, наблюдается учащение и утяжеление приступов стенокардии (Хрипун A.B., 2003). В связи с этим, проблема поиска новых подходов к оценке нарушений гомеостаза и оптимизации терапии ИБС сохраняет свою актуальность.

В литературе имеются указания на успешное применение электронейростимуля-ции аппаратом СКЭНАР (самоконтролируемый энергонейроадаптивный регулятор) при лечении больных кардиологического профиля (Гринберг Я.З., 1999; Тараканов A.B. и др., 2003). Однако, воздействие СКЭНАР-терапии на биохимические процессы, в частности, на свободнорадикальное окисление и структурное состояние биомембран у больных ИБС, изучено недостаточно.

В соответствии с этим несомненный теоретический и практический интерес представляет изучение влияния СКЭНАР-воздействия на свободнорадикальное окисление ли-пидов, активность антиоксидантной системы и структурное состояние мембран эритроцитов, как адекватной модели плазматических мембран у больных ИБС.

Цель работы. Изучить влияние СКЭНАР-воздействия на свободнорадикальные процессы в тканях и структурно-функциональное состояние мембран эритроцитов при окислительном стрессе.

Задачи исследования.

1. Изучить влияние СКЭНАР-воздействия на интенсивность свободнорадикальных процессов и ПОЛ по параметрам хемилюминесценции и по содержанию молекулярных продуктов - ДК, МДА и ШО в тканях и эритроцитах крыс при окислительном стрессе .

2. Определить активность антиоксидантных ферментов - супероксидцисмутазы, каталазы, церулоплазмина в тканях и эритроцитах крыс при оксидативном стрессе и СКЭНАР- воздействии.

3. Исследовать эффективность СКЭНАР-воздействия на окислительную модификацию белков эритроцитов, а также стабильность и структурное состояние мембран эритроцитов у крыс при ГБО - индуцированном стрессе.

4. Исследовать эффективность СКЭНАР-воздействия на содержание МСМ в плазме крови крыс при окислительном стрессе.

5. Исследовать влияние СКЭНАР-воздействия на свободнорадикальные процессы, сбалансированность в системе прооксиданты - антиоксиданты, а также на уровень МСМ и ЦИК, стабильность и структурное состояние мембран эритроцитов у больных ИБС.

Научная новизна работы. В работе впервые показано, что СКЭНАР-воздействие обладает антирадикальным эффектом, выражающимся в подавлении генерации АФК, уменьшении интенсивности ПОЛ в эксперименте на интактных и подвергнутых действию ППДК животных и в клинике у пациентов с ИБС.

В работе впервые установлено, что СКЭНАР обладает выраженным антиокси-дантным действием, что проявляется в повышении активности ферментов антиоксидан-тов СОД и каталазы в эксперименте на подвергнутых действию ГБО животных и в клинике у пациентов с ИБС.

Впервые отмечено мембранопротекторное действие СКЭНАР-терапии, что выражается в нормализации структурно-функциональных свойств и проницаемости мембран эритроцитов у экспериментальных животных и пациентов с ИБС при развитии оксида-тивного стресса.

В работе впервые показан эффект применения СКЭНАР-воздействия, связанный с купированием синдрома эндогенной интоксикации, после развития оксидативного стресса у экспериментальных животных и пациентов с ИБС.

Теоретическая и практическая значимость. Исследованы основные механизмы антирадикального, антиоксидантного и мембранопротекторного эффектов СКЭНАР-терапии при развитии оксидативного стресса в экспериментах на животных, которые проявляются в нормализации процессов СРО и ПОЛ, возобновлении скоординированно-

сти действия компонентов антиокеидантной ферментативной системы, восстановлении структурных свойств и стабильности эритроцитарных мембран, устранении окислительной деградации белков. То есть тех нарушений, которые следует рассматривать как патологические реакции.

В сравнении с традиционным стандартным медикаментозным лечением включение СКЭНАР в комплексную терапию ИБС приводит к более существенному восстановлению прооксидантно-антиоксидантного равновесия, ингибированию СРО в крови, что сопряжено с активацией ферментативных антиоксидантов, нивелированию эндогенной интоксикации, а также способствует стабилизации структурно-функционального состояния мембран.

Проведенное исследование свидетельствует о целесообразности включения в комплекс лечебных мероприятий при ИБС СКЭНАР-терапии, что позволит значительно повысить эффективность лечения за счет выраженного саногенетического, антирадикалыю-го, антиоксидантного и мембранопротекторного действия СКЭНАР.

Полученные в процессе проведенного исследования данные можно использовать в клинической практике для индивидуальной оценки состояния пациентов при развитии и обострении ИБС, а также повышения эффективности проводимой терапии. На основании сопоставления полученных экспериментальных и клинических материалов следует, что разработанная на животных схема развития гипероксического стресса (воздействие ГБО 0,5 МПа, 1 час) является адекватной моделью для исследования свободнорадикальных состояний и их коррекции при сердечно-сосудистых заболеваниях (патологиях). Материал диссертации используется при чтении лекций в спецкурсах «Основы патобиохимии», «Свободные радикалы в живых системах» и «Клинические методы диагностики» на кафедре биохимии и микробиологии ЮФУ.

Основные положения, выносимые на защиту. СКЭНАР-воздействие обладает антирадикальным эффектом, выражающимся в подавлении генерации АФК, уменьшении образования продуктов ПОЛ в эксперименте на интактных и подвергнутых действию ГБО животных, а также в клинике у пациентов с ИБС.

СКЭНАР-терапия обладает выраженным антиоксидантным действием, что проявляется в повышении активности ключевых ферментов антирадикальной защиты СОД и каталазы в эксперименте на интактных и подвергнутых действию ППДК животных, а также в клинике у пациентов с ИБС.

Применение СКЭНАР-терапии приводит к стабилизации мембран эритроцитов и купированию синдрома эндогенной интоксикации в эксперименте на интактных и подвергнутых действию ГБО животных в клинике и у пациентов с ИБС.

Включение СКЭНАР-терапии в комплексную терапию ИБС значительно повышает антиангинальную эффективность лечения за счет выраженного саногенического, антирадикального, антиоксидантного и мембраностабилизирующего действия.

Апробация диссертационной работы. Материалы диссертации доложены на научно-практической конференции «Нейроспецифические метаболиты и энзимологические основы деятельности центральной нервной системы» (Пенза, 2006), на научной конференции с международным участием ВАРАДЕРО, (Москва, 2006), «на VI-й межвузовской международной биохимической научно-практической конференции молодых учёных, специалистов, студентов «Обмен веществ при адаптации и повреждении» (Ростов-на-Дону, 2007), на V-й национальной научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2007), на Ш-й всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (Новосибирск, 2007), на И-ой международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины (Ростов-на-Дону, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, в том числе в издании, рекомендованном ВАК РФ -1 статья. Личный вклад 80%, 0,1 п.л.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 157 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, характеристики обследуемых животных и больных, методов исследования, две главы с результатами исследований и обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Работа содержит 19 таблиц и иллюстрирована 14 рисунками. Список использованной литературы включает 206 наименований, в том числе 93 зарубежных источника.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проводились в две стадии: в эксперименте - при моделировании окислительного стресса с возможностью оценки постгипероксического эффекта (6 суток); в клинике - у пациентов с ИБС, разделенных на группы по выбранной методике лечения.

Опыты проводили на половозрелых белых крысах. Сеанс ГБО выполняли по стандартной схеме с использованием медицинского кислорода, продолжительность сеанса - 1 час при давлении 0,5 МПа в специальной барокамере со щелочным поглотителем, Были сформированы следующие группы животных (таблица 1):

Таблица 1

Группы животных и проводимые исследования в эксперименте

1 группа 2 группа 3 группа 4 группа 5 группа

Интактные животные СКЭНАР 5 суток ежедневно 5 минут ГБО 0,5 Мпа 1 час однократно Через 6 суток после ГБО ГБО 0,5 Мпа 1час + СКЭНАР 5 суток ежедневно 5 минут

1 Сыворотка крови, эритроциты, мозг, печень 1

Биохимические и биофизические показатели СРО (ХЛ, ПОЛ), АОС (СОД, КАТ, ЦП) СПА, ВЭГ, структурное состояние мембран эритроцитов, ОМ белков эритроцитов, Эндогенная интоксикация (мочевина, МСМ)

Клиническое исследование проводили на базе кардиологического отделения горбольни-цы №7 г. Ростова-на-Дону. Было проведено комплексное клинико-биохимическое обследование 123 больных с ишемической болезнью сердца (ИБС) - 90 мужчин и 33 женщины. Средний возраст пациентов мужчин составил 52,7±3,9, а женщин - 53,3±4,2 года. Диагноз устанавливался при поступлении в отделение.

Больные ИБС были рандомизированы на 2 группы сопоставимые по возрасту и полу. Первая группа пациентов получала традиционное лечение, которое состояло в базовой медикаментозной терапии, сбалансированной гиполипидемической диете, психотерапии. Во второй группе больных комплексную традиционную терапию сочетали со СКЭНАР-терапией. Забор крови для исследования осуществляли в два этапа: до начала лечения и после окончания лечения в отделении (через 16-18 дней). Контролем служила группа практически здоровых доноров соответствующего возраста.

Был использован аппарат СКЭНАР-97.4. Во время сеансов лечения, которые проводились утром после завтрака в течение 10 дней, применялся индивидуально дозированный режим воздействия. При использовании данного режима время воздействия на одно место определяется автоматически, в зависимости от параметров биологической обратной связи. Применялась общерегулирующая методика для индивидуально-дозированного режима: «три дорожки», частота - постоянная 60 Гц, воздействие комфортное. Определение комфортного порога энергии воздействия проводилось рядом с зоной, на которую осуществлялось воздействие.

В соответствии с задачами исследования изучали биохимические и биофизические показатели плазмы крови, эритроцитов, ткани мозга и печени при ГБО-индуцированном

окислительном стрессе и последующем СКЭНАР-воздействии у животных, а также в плазме крови и эритроцитах у больных ИБС до и после лечения.

Методы определения активности процессов СРО. Уровень свободнорадикаль-ных процессов (СРП) оценивали по интенсивности хемилюминесценции (XJI) в системе Н2О2 - люминол (Шестаков и др., 1979) и активированной дрожжами хемилюминесценции цельной крови (Прокофьев и др., 1995).

Методы определения активности процессов ПОЛ. Интенсивность перекисного окисления липидов (ПОЛ) определяли по содержанию его молекулярных продуктов -диеновых коньюгатов (ДК) (Стальная, 1977), малонового диальдегида (МДА) (Стальная и др.1977) и шиффовых оснований (ШО) (Bidlack et al., 1973). Для определения гемоглобина в гемолизате эритроцитов использовали стандартный клинический набор реактивов «Эколаб» (Россия) (Меньшиков В.В., 1987).

Методы определения активности антиоксидантной защиты. О состоянии ан-тиоксидантной защиты судили по активности ферментативных антиоксидантов: суперок-сиддисмутазы (СОД) (Fried, 1975), каталазы (Королкж и др., 1988) и церулоплазмина (ЦП) (Камышников, 2000).

Методы определения структурно-функционального состояния мембран. Для оценки структурного состояния мембран эритроцитов определяли микровязкость липид-ной фазы и зон белок-липидных контактов и другие параметры с использованием флуоресценции зонда пирена (Владимиров, Добрецов, 1980). Окислительную модификацию белков эритроцитов определяли по изменению флуоресценции аминокислотных остатков (Gutteridqe, Wilkins, 1983). Исследовали суммарную пероксидазную активность (СПА) (Покровский, 1969, в модификации Лукаша А.И. с соавт., 1996), а также содержание внеэритроцитарного гемоглобина (ВЭГ) (Меньшиков, 1987).

Методы определения эндогенной интоксикации. Определяли показатели эндогенной интоксикации по содержанию молекул средней массы (МСМ) в трех фракциях ( >.=210 нм, 254 нм, 280 нм) ( Камышников, 2000), и мочевины - с помощью стандартного набора фирмы «Pliva- Lachema» (Чешская Республика). Содержание общего белка определяли методом Лоури в модификации J.Shacterle, К. Pollak (1973).

Статистическую обработку полученных результатов осуществляли с помощью статистического пакета Statistica 7,0 (Stat Soft, Inc). Сравнение величин в случае нормального распределения проводили с помощью t-критерия Стьюдента. Различия между группами считали статистически значимыми при р<0,05, при 0,05<р<0,1 говорили о тенденции к изменению, при р>0,1 различия полагали недостоверными.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В эксперименте сеанс ГБО вызывал развитие окислительного стресса, который проявлялся в возрастании параметров НгОг-люминол-индуцированной хемилюминесцен-ции в различных тканях крыс. Наиболее существенные изменения зарегистрированы в крови и печени. Животные, получившие сеансы СКЭНАР-терапии после действия гипербарической оксигенации, отличались по показателям интенсивности НгОг-люминол-индудированной хемилюминесценции от крыс других групп следующим образом (рис.1)

По сравнению с действием ГБО, наблюдалось четкое снижение параметров Н2О2-люминол-индуцированной хемилюминесценции во всех тканях, за исключением свето-суммы ХЛ в ткани мозга, где изменения отсутствовали. Интенсивность быстрой вспышки ХЛ снижалась в плазме на 39%, в мозге на 35%, в печени на 31%. Светосумма уменьшалась на 22% в плазме и на 33% в печени. Из данных литературы известно, что основной вклад в ХЛ вносит ВЭГ и его производные (Внуков В.В., и др., 2005). Это согласуется с полученными нами данными о повышении содержания ВЭГ (на 201%) и увеличении СПА плазмы крови крыс (на 138%) после сеанса ГБО. СКЭНАР-воздействие на животных, перенесших оксидативный стресс, оказывало четкое позитивное влияние на сохранение барьерной функции мембран эритроцитов. Показано, что концентрация ВЭГ после сеансов СКЭНАРа достоверно снижалась по сравнению с этим показателем, измеренным после ГБО (на 60%). Такая же динамика отмечалась и в отношении СПА, уменьшение составило 55% в сравнении с показателем, измеренньм после ГБО.

ГБО + СКЭНАР

IН (плазма) □ Бт (плазма) Ш Н (печень) Н Бт (печень) 0 Н (мозг) И ВЭГ В СПА

Рис.1. Корригирующее влияние СКЭНАР-воздействия на интенсивность показателей НзОг-люминол-индуцированной хемилюминесценции, ВЭГ и СПА у крыс, подвергнутых ГБО - индуцированному окислительному стрессу (в % относительно действия ГБО).

Обозначения: на рис.1-10 достоверность обозначена следующим образом: *- р<0,05; **- р <0,01;***- р <0,001; без звёздочки -0,05<р<0,01

Таким образом, СКЭНАР-воздействие способствует нормализации свободноради-кальных процессов в крови и тканях крыс, а также восстановлению барьерной функции мембран форменных элементов крови после ГБО-индуцированного оксидативного стресса.

В эксперименте действие ГБО 0,5 МПа (1 час) приводило к активации свободно-радикального перекисного окисления липидов в крови и тканях животных, причем наибольшая интенсивность пероксидации отмечалась в крови, а наименьшая - в ткани мозга. Данному факту, на наш взгляд, может быть дано следующее объяснение: в ответной реакции на действие повышенного давления кислорода особое место среди тканей занимает кровь. В условиях гипероксии именно кровь, первой после легких, испытывает действие ППДК. Этим и объясняется более высокое содержание первичных продуктов окисления в плазме крови и эритроцитах.

Применение животным СКЭНАР-воздействия после сеанса ГБО оказывало нормализующее влияние на процессы ПОЛ. В плазме крови содержание ДК достоверно снижалось по сравнению с действием ГБО на 69%. Статистически значимого изменения концентрации ШО в плазме крови обнаружено не было. Уровень ДК в эритроцитах был меньше в сравнении с действием ГБО на 42%. Содержание конечных продуктов ПОЛ в эритроцитах относительно животных после действия ГБО достоверно снижалось на 43% (рис. 2).

Плазма Эритроциты Мозг крови

Печень

■ ДК (ГБО) ПМДА(ГБО) В ШО (ГБО) ИДК (ГБО+СКЭНАР) В МДА (ГБО+СКЭНАР) г ШО (ГБО+СКЭНАР)

Рис.2. Корригирующее влияние СКЭНАР-воздействия на содержание продуктов ПОЛ в крови и тканях крыс относительно ГБО-воздействия (в % относительно действия ГБО, обозначения как на рис. 1).

В ткани печени наблюдалось выраженное снижение концентрации первичных, вторичных и конечных продуктов окисления не только относительно действия ГБО, но и относительно контроля. Так содержание ДК было ниже на 29% относительно контроля и на 55% ниже по сравнению с действием ГБО. Уровень МДА снижался на 22% и 46% по

сравнению с контролем и с действием ГБО. Наиболее значимы были изменения содержания ШО. Отмечено достоверное снижение на 73% и 83% по сравнению с контролем и с действием ГБО (рис'2).

Таким образом, СКЭНАР-воздействие приводит к снижению интенсивности сво-боднорадикального окисления липидов как у интактных животных, так и у крыс, подвергнутых влиянию оксидативного стресса. Наиболее отчетливо нормализующее влияние СКЭНАР-воздействия на активность процессов пероксидации проявляется в ткани печени.

Ведущая роль в поддержании антиоксидантного статуса принадлежит СОД, которая осуществляет антирадикальную защиту и ингибирует ПОЛ на стадии зарождения цепного процесса, а также каталазе, снижающей скорость цепной реакции. Обнаруженная нами при действии ГБО на животных активация ПОЛ, сопровождается одновременным ингибированием СОД и каталазы в эритроцитах, а также СОД в ткани мозга. Активность ЦП при оксидативном стрессе существенно повышалась, что, по-видимому, является компенсаторной реакцией в связи с полифункциональностью этого белка (рис.3). После СКЭНАР-воздействия в группе животных, получивших сеанс ГБО, активность ЦП снижалась на 70%, а СОД резко возрастала: в эритроцитах на 239%, в мозге на 208%, в печени на 203%. Активность каталазы в эритроцитах имела тенденцию к росту, а в печени достоверно не менялась (рис 3).

% 240 210 180 150 120 90 60 30 0 -30 -60 -90

§ л

1 1

■4"' 1

1 3е" 70* ■Ж

11 К 1-

1| ¡л □ Я

к! Ё Я 53 ■'Л

И .£ эУ А Иг

П 1

Плазма Эритроциты крови

Мозг

Печень

ВЦП (ГБО) г ЦП (ГБО+СКЭНАР) ШСОД (ГБО) Э СОД (ГБО+СКЭНАР) Н Каталаза (ГБО) а Катапаза(ГБО+СКЭНАР)

Рис.3. Влияние СКЭНАРа на изменение активности антиоксидантных ферментов в плазме крови, эритроцитах, ткани мозга и печени крыс (в % относительно ГБО-воздействия, обозначения как на рис. 1).

Усиление ПОЛ в мембранах эритроцитов, обнаруженное нами при оксидативном стрессе, вызванном воздействием ГБО (0,5 МПа, 1 час), способствовало появлению в ли-пидном бислое гидрофильных кластеров, что, возможно, приводило к повышенному проникновению молекул воды в толщу мембраны и разупорядочиванию ее структуры. Выяв-

ленное в настоящем исследовании изменение текучести липидного бислоя и наличие структурных перестроек мембранных белков эритроцитов при окислительном стрессе может косвенно подтвердить этот факт. Применение СКЭНАРа после оксидативного стресса приводило к нормализации структурных свойств мембран эритроцитов крыс, что выражалось в отсутствии достоверных отличий параметров флуоресценции пирена от контрольных цифр, за следующим исключением: показатель Бэ/Fm (334) увеличился на 33% по сравнению с данными, полученными после сеанса ГБО, коэффициент Fo-F/Fo был выше такового, зарегистрированного после сеанса ГБО на 29%. Коэффициент полярности липидного бислоя Рз7з/з9з(334)-КП] был ниже, чем сразу после сеанса ГБО на 30%(рис.4). Это свидетельствует о повышении гидрофобности внутренних областей мембраны, и, тем самым, увеличении ее термодинамической стабильности. Что же касается параметра Рз7М9з(282)-КПг, то тенденция к снижению на 13% отмечена только в сравнении с 6-ми сутками после сеанса ГБО.

И F3/Fm(334) ■ Fo-F/Fo И F347(282) В F440(360) В F400(320)

ГБО

ГБО + СКЭНАР

Рис.4. Влияние СКЭНАР-воздсйствия на изменение структурного состояния мембран эритроцитов и показателей окислительной модификации белков эритроцитов крыс после ГБО-индуцированного окислительного стресса (в % относительно контроля, обозначения как на рис. 1).

Окислительный стресс вызывает окислительную модификацию белков мембран эритроцитов крыс, выражающуюся в деградации отдельных аминокислот, образовании межмолекулярных сшивок при взаимодействии с вторичными продуктами ПОЛ, что ведет к нарушению структуры и функции мембран эритроцитов и в конечном итоге их дестабилизации. Применение СКЭНАР-воздействия после оксидативного стресса приводило к следующим изменениям: параметр Б 347(282) повышался относительно действия оксидативного стресса на 44%, в постгипероксический период - на 37% и достоверно не отличался от контрольных значений. Параметр Б 440(360) снижался относительно сеанса ГБО на 38% и статистически не отличался от значения, полученного в группе контроля. Параметр Р 400(320) снижался относительно данных после сеанса ГБО на 25%.

Таким образом, СКЭНАР-воздействие оказывает нормализующее влияние на структурно-функциональные свойства мембран эритроцитов крыс и способствует восстановлению структуры белков мембран эритроцитов крыс после оксидативного стресса.

Развитие любой патологии формирует определённый метаболический ответ организма, что приводит к изменению метаболического статуса, а его регистрация является важной и значимой, особенно при развитии патологических состояний (Малахова, 2000; Зубаткина и др., 2002; Волчегорский и др., 2002). Динамику пула молекул средней массы (МСМ) оценивали по трем фракциям, имеющим максимум поглощения при длинах волн 210 нм, 254 нм и 280 нм (Николайчик В.В. и др., 1991), а также вычисляли соотношение содержания МСМ при 280 нм и 254 нм.

Полученные нами результаты показали, что после ГБО-индуцированного оксидативного стресса в плазме крови уровень фракции МСМ (254), характеризующих катабо-лическое происхождение эндоинтоксикации, достоверно увеличивался на 33%. Отмечена тенденция к достоверному повышению фракции МСМ (280) на 17%, что говорит о присутствии в генезе ЭИ продуктов протеолитических реакций, в том числе соединений пептидной природы, содержащих ароматические аминокислоты (Добротина и др., 2004). В то же время коэффициент соотношения фракций - К 280/254 снижался на 12% (рис 5).

Согласно литературным данным, прирост МСМ (280), характеризующий поглощение пептидной фракции, связывают с прямой стимуляцией ограниченного протеолиза, а при активации ПОЛ и иммуногенеза наблюдается преимущественный прирост МСМ (254) (Чаленко В.В., 1991).

Для изучения уровня эндогенной интоксикации мы рассматривали также изменение содержания мочевины, как азотсодержащего соединения - одного из основных продуктов катаболизма важнейших биополимеров - белков (Dast et al., 1991; Hicks et al., 1993; Spitsin et al., 2002; Меньшикова и др., 2006) в плазме, мозге и печени крыс.

После сеанса ГБО (0,5 МПа, 1 час) содержание мочевины возрастало по отношению к контрольной группе во всех исследованных тканях: в плазме крови на 54%, в ткани мозга и в печени на 28% и 30% соответственно. Можно предположить, что под действием ГБО происходит увеличение «ёмкости» антиоксидантной системы, в том числе за счет низкомолекулярного антиоксиданта - мочевины. На 6-е сутки после оксидативного стресса по сравнению с сеансом ГБО содержание мочевины достоверно не изменялось, но оставалось выше контрольных цифр в плазме крови на 39%, в мозге на 19% и в печени на 21% (рис.5).

-40

-20

-ео

а Мочевина (плазма) Ш Мочевина (мозг) И Мочевина (печень)

■ МСМ (210) ИМСМ(254) 0МСМ(28О) ЕЗК280/254

ГБО

ГБО + СКЭНАР

Рис.5 Влияние СКЭНАР-воздействия на содержание молекул средней массы в плазме, мочевины в плазме и тканях крыс при ГБО-индуцированном оксидатив-ном стрессе (в % относительно контроля, обозначения как на рис. 1).

Таким образом, окислительный стресс приводит к накоплению в плазме крови и тканях среднемолекулярных токсинов и повышению содержания мочевины. На 6-е сутки после сеанса ГБО происходит частичная элиминация токсических продуктов обмена во всех исследуемых тканях.

Применение СКЭНАР у животных, подвергнутых действию окислительного стресса приводило к нивелированию явлений эндогенной интоксикации, что выражалось в нормализации содержания фракций МСМ.

Так уровень фракции МСМ (210) в плазме крови снижался относительно сеанса ГБО на 20%. Содержание МСМ (254) достоверно снижалось на 53% по сравнению с действием ГБО и достоверно не отличалось от такового, зарегистрированного на 6-е сутки у животных после оксидативного стресса. Фракция МСМ (280) снижалась по сравнению с развитием оксидативного стресса на 34% и статистически не отличалась от значения, зарегистрированного на 6-е сутки после сеанса ГБО. Такая же динамика наблюдалась и в отношении коэффициента 280/254. Этот показатель повышался относительно контроля и действия ГБО на 25% и 42% соответственно и достоверно не отличался от такового значения, полученного на 6-е сутки после ГБО (рис.5).

Применение СКЭНАР-воздействия на животных, подвергнутых оксидативному стрессу, приводило к снижению концентрации мочевины, наиболее выраженному в плазме крови и ткани печени. В плазме крови этот показатель уменьшался относительно контроля на 24%, относительно сеанса ГБО на 51%, относительно 6-х суток после сеанса ГБО на 46%. В ткани печени концентрация мочевины снижалась относительно контроля на 30%, относительно сеанса ГБО и относительно 6-х суток после действия ГБО на 46% и 42% соответственно. В ткани мозга после СКЭНАР-воздействия содержание мочевины было меньше, чем сразу после оксидативного стресса (на 17%) и достоверно не отлича-

лось от контрольного уровня, а также уровня, зарегистрированного на б-е сутки после оксидативного стресса.

Таким образом, СКЭНАР-воздействие способствует снижению содержания молекул средней массы и мочевины в различных тканях крыс, перенесших оксидативный стресс, тем самым, способствуя снижению эндогенной интоксикации.

Несмотря на значительные усилия специалистов различных медико-биологических специальностей, направленные на диагностику, лечение и профилактику сердечно-сосудистых заболеваний, количество таких больных быстро увеличивается во всех странах. По этой причине поиск эффективных методов лечения патологии сердечнососудистой системы по-прежнему чрезвычайно актуален. В литературе имеются данные об успешном применении СКЭНАР-терапии при лечении кардиологических больных, в том числе, пациентов с ИБС (Завадская Э.Д., Попов В.А., 1999). Однако выраженный лечебный эффект этой процедуры пока не нашел достаточного объяснения.

Можно предположить, что обнаруженные нами компоненты неспецифической ответной реакции на оксидативный стресс неизбежно будут выявляться при такой свобод-норадикальной патологии как ИБС.

В плазме крови больных ишемической болезнью сердца интенсивность ХЛ регистрировали по амплитуде быстрой вспышки (Н) и светосумме (8ш). В ходе выполнения настоящей работы установлено, что у больных с ИБС наблюдается увеличение интенсивности и светосуммы НгОг-люминол-индуцированной хемилюминесценции плазмы крови. В 1 группе интенсивность быстрой вспышки превышала таковую у доноров на 52%, во 2 группе на 65%. Светосумма была выше у больных, отнесенных нами в 1 группу на 55%, во 2 группу - на 75%. Таким образом, у больных с ИБС в крови наблюдается повышенная генерация активных кислородных метаболитов, которые способны инициировать ПОЛ в биомембранах и липопротеидах крови.

Сравнительный анализ результатов биохимического исследования, полученных от двух групп пациентов с ИБС, показал влияние различных методов лечения на активность свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты, а также выраженность структурно-метаболических нарушений.

После проведенного лечения по стандартной схеме достоверных изменений интенсивности и светосуммы хемилюминесценции относительно исходного фона не зарегистрировано. Можно предположить, что стандартное медикаментозное лечение больных ИБС не вызывает угнетение генерации АФК и снижение интенсивности СРО.

Включение СКЭНАР-терапии в комплексное лечение ИБС привело к снижению интенсивности хемилюминесценции на 25% относительно исходного уровня, однако

нормализации данного показателя не произошло: отмечалась тенденция к его повышению относительно доноров на 23%. Что же касается светосуммы, то она имела тенденцию к снижению на 33% относительно исходного значения (рис.6). Это указывает на уменьшение уровня СРП в обследуемой клинической группе и может быть связано с состоянием «напряжения» организма (фаза относительно устойчивой адаптации) (Милютина и др., 2005) в процессе проводимых лечебных мероприятий больных ИБС.

Таким образом, хемилюминесцентный анализ показал, что после применения СКЭНАР-терапии наблюдалось снижение генерации АФК, которое, по-видимому, приводило к позитивным сдвигам в системе свободнорадикальные процессы - антиоксидант-ная система и способствовало ослаблению признаков оксидативного стресса.

2-я группа после лечения

нн

НЭт

0ВЭГ

НСПА

Рис.6 Влияние СКЭНАР-воздействия на интенсивность показателей Н2О2-люминол-индуцированной хемилюминесценции, ВЭГ и СПА в плазме крови больных ИБС 2 группы (в % относительно исходного фона, обозначения как на рис. 1).

Усиление интенсивности и светосуммы Н2О2- люминол-зависимой ХЛ нашло свое отражение в активации ПОЛ на фоне снижения активности антиоксидантных ферментов при ИБС. В результате проведенного клинического исследования установлено, что как в плазме, так и в эритроцитах пациентов с ИБС наблюдается увеличение содержания продуктов ПОЛ, причем в наибольшей степени первичных, в наименьшей - конечных, что, возможно, свидетельствует об известной обратимости процесса. После лечения в группе пациентов, получавших стандартную терапию, наблюдалась тенденция к увеличению содержания ДК в плазме крови на 26% по сравнению со значениями, определенными до начала лечения. Остальные изученные параметры достоверных изменений не претерпевали. Содержание продуктов ПОЛ у пациентов 1 группы после лечения менялось в эритроцитах следующим образом: наблюдалась тенденция к росту содержания ДК на 19%, уровень ШО снижался на 33% и содержание МДА достоверно не отличалось от аналогичной величины, зарегистрированной до лечения (рис.7).

НДК в плазме

□ДК в плазме после лечения

□ МДА. в плазме

□ ШО в плазме

И ШО в плазме после лечения НДК в эритроцитах НДК в эритроцитах после лечения ШМДА в эритроцитах

□ МДА в эритроцитах после лечения ВШОв эритроцитах

ШО в эритроцитах после лечения

1-я группа

2-я группа

Рис.7 Содержание продуктов ПОЛ в плазме крови и эритроцитах больных ИБС 1 и 2 групп (до лечения в % относительно показателей продуктов ПОЛ у доноров, после лечения относительно исходного уровня, обозначения как на рис. 1).

Сочетание стандартного лечения со СКЭНАР-терапией приводило к достоверному падению уровня ДК в плазме крови на 42%, однако по сравнению со значениями, полученными у доноров, эта величина была выше на 45%. Содержание ШО в плазме крови снижалось на 18% и достоверно не отличалось от величины, определенной в группе доноров. Содержание МДА в плазме крови после СКЭНАР-терапии достоверно не изменялось по сравнению с исходным фоном, но оставалось выше, чем у доноров на 52%.

После завершения курса СКЭНАР-терашш в сочетании со стандартными схемами лечения отмечено снижение интенсивности ПОЛ в эритроцитах. По сравнению с исходным фоном содержание ДК уменьшалось на 30%, МДА на 21%, ШО на 20%. При этом только уровень ДК превышал значение, определенное у доноров - на 59%. Концентрации МДА и ШО достоверно не отличались от контроля.

После проведения курса традиционной терапии активность свободнорадикальных процессов оставалась на довольно высоком уровне, как в плазме крови, так и в мембранах эритроцитов. Введение в схему лечения СКЭНАР - терапии достоверно приводило к снижению интенсивности ХЛ, интенсивности всех стадий ПОЛ, что подтверждалось падением уровня молекулярных продуктов пероксидации в плазме крови и эритроцитах и свидетельствовало о снижении СРО у пациентов с ИБС. Таким образом, одним из эффектов СКЭНАРа является антирадикальное действие.

Поддержание стационарного уровня свободнорадикального окисления в организме невозможно без тонко сбалансированной и сопряженной антиоксидантной системы.

П Каталаза (плазма) И СОД (эритроциты) В Каталаза (эритроциты)

Рис. 8 Влияние СКЭНАР-терапии на состояние антиоксидантной системы у больных ИБС (в % относительно показателей до лечения, обозначения как на рис. 1).

Включение СКЭНАР-терапии в состав комплексного лечения приводило к снижению активности каталазы в плазме крови, что может свидетельствовать о нормализации проницаемости мембран эритроцитов и других клеток крови. В отношении активности антиоксидантных ферментов в эритроцитах наблюдалась иная динамика (рис.8). В 1 группе пациентов активность СОД и каталазы достоверно не изменялась и оставалась ниже, чем у здоровых лиц. У пациентов 2 группы активность как СОД, так и каталазы в эритроцитах повышалась, достигая значений, полученных у доноров. Таким образом, применение СКЭНАР приводило к повышению активности антиоксидантных ферментов и восстановлению антиоксидантного статуса эритроцитов. Следовательно, антиоксидант-ный эффект можно назвать одним из важнейших механизмов СКЭНАР-терапии.

Стабильность мембран подтверждалась уровнем ВЭГ и СПА в плазме крови, которые достоверно не менялись относительно контроля после СКЭНАР-воздействия.

Следствием нарушения равновесия в системе оксиданты - прооксиданты после сеанса ГБО явилась дестабилизация эритроцитарных мембран. Нами зарегистрированы разнонаправленные изменения физического состояния липидного бислоя мембран эритроцитов пациентов с ИБС вследствие нарушения липид - липидных и белок -липидных взаимодействий, приводящие к ее дестабилизации.

Традиционное лечение ИБС не оказывало стабилизирующего влияния на мембраны эритроцитов. Так, микровязкость, степень погружения белков в липидный матрикс, коэффициенты полярности липидного бислоя и зон белок-липидных контактов достоверно не изменялись. Концентрация ВЭГ превышала таковую до начала лечения, а СПА оставалась на прежнем уровне. Сочетанное применение СКЭНАР в терапевтической программе пациентов с ИБС приводило к нормализации всех показателей структурного состояния мембран эритроцитов (рис.9).

При этом снижение микровязкости мембран эритроцитов до уровня контрольных значений может указывать на омоложение популяции эритроцитов, т.е. косвенно о стимуляции эритропоэза под воздействием СКЭНАР.

После проведения комплексной терапии ИБС в сочетании со СКЭНАР-воздействием были обнаружены следующие результаты: текучесть липидного бислоя увеличивалась на 33% относительно исходного фона и достоверно не отличалась от величины, зарегистрированной у доноров. Текучесть аннулярных липидов снижалась на 17% и статистически не отличалась от параметра, измеренного у здоровых лиц. Показатель Ро-Р/Ро увеличивался у пациентов после проведения СКЭНАР-терапии на 16% и достоверно не отличался от такового у доноров. Коэффициент полярности липидного бислоя незначительно, но достоверно снижался на 5% и не отличался от величины, полученной в группе здоровых лиц. Коэффициент полярности липид-белковых контактов также достоверно снижался на 6%, после проведённого лечения, статистически не отличаясь от контроля (рис.9).

53 Fa/Fm(334) HF3/FM(282) И Fo-F/Fo

HF372/393(334)-KI"l1 В F372/393(282)-Kfl2

2-я группа

Рис. 9 Показатели структурного состояния мембран эритроцитов крови больных ИБС 2-ой группы после лечения (в % исходного фона, обозначения как на рис. 1).

Таким образом, в группе пациентов с ИБС, получавших СКЭНАР-терапию наряду с традиционным лечением, происходила стабилизация структурно-функционального состояния мембран эритроцитов, тогда как в группе больных, получавших только традиционное лечение, не наблюдалась нормализация структурных параметров мембран эритроцитов.

При ишемии миокарда важнейшим патогенетическим механизмом является развитие синдрома эндогенной интоксикации, представляющего собой структурно-метаболический ответ организма на аутоагрессию. Проведение традиционной медикаментозной терапии сопровождалось снижением фракции МСМ (210), в то время как фракции МСМ (280) и МСМ (254) достоверно не изменялись.

В МСМ (210) И МСМ (254) 3 МСМ(280) КЗ ЦИК

Рис. 10. Влияние СКЭНАР-терапии на уровень молекул средней массы и циркулирующих иммунных комплексов в крови больных ИБС (в % относительно показателей до лечения, обозначения как на рис. 1)

Таким образом, высокое содержание после лечения двух фракций МСМ (280) и МСМ (254) свидетельствует об активности протеолиза и иммуногенеза (Чаленко В.В., 1991). При комплексном лечении, включавшем СКЭНАР-терапию, содержание МСМ (280) и МСМ (254) снижалось и статистически не отличалось от контроля (рис.10).

Уровень ЦИК в плазме, отражая иммунопатологическое влияние эндотоксикоза (Кратнов А.Е., 2002; Шанин В.Ю. с соавт., 2002), также является важной характеристикой синдрома эндогенной интоксикации. Обнаружено что у больных ИБС 1 группы после окончания лечения уровень ЦИК оставался по-прежнему высоким. В результате сочетания традиционного медикаментозного лечения со СКЭНАР-терапией, напротив, уровень ЦИК снижался до значений, обнаруженных в контроле (рис.10). Таким образом, применение СКЭНАР-терапии в составе комплексного лечения ИБС приводило к купированию синдрома эндогенной интоксикации, что проявлялось в снижении уровня МСМ и ЦИК в плазме.

Подавление явлений эндотоксикоза и аутоиммунных реакций, улучшение архитектоники белково-липидного матрикса и восстановление функции клетки, а также значительное повышение антиоксидантной защиты на фоне угнетения процессов ПОЛ являются важнейшими механизмами саногенического воздействия СКЭНАР на организм.

Таким образом, окислительный стресс, вызванный как гипероксией, так и гипоксией (ишемией), сопровождается глубокими нарушениями свободнорадикального и структурно-метаболического гомеостаза, которые в значительной степени носят неспецифический характер. Причем, показанная нами активация является как пусковым, так и амплифицирующим механизмом окислительного повреждения клеток и тканей как при ГБО, так и в условиях ИБС; именно данный процесс является одной из главных мишеней коррекции метаболизма при окислительном стрессе.

Результаты нашего исследования показали эффективность применения СКЭНАР-терапии для коррекции структурно-метаболических нарушений при окислительном стрессе различной этиологии, что согласуется с данными других авторов (Тараканов А.В и др., 2003; Усалева H.H. и др., 2005; Карташева Н.В., 2007).

Обсуждая пусковые механизмы антиоксидантного и мембраностабилизирующего эффектов СКЭНАР-воздействия, следует предположить его активирующее влияние на гены раннего реагирования. Установлено, что индукция ранних генов в клетках происходит при целом ряде воздействий, в том числе при действии электрокожных раздражителей (Daval J.I.et al., 1989). В соответствии с выше изложенным можно считать, что СКЭНАР, являясь электроимпульсным низкоинтенсивным нейроподобным воздействием с обратной связью, активирует ранние гены, которые осуществляют избирательную транскрипцию генома, направленную на запуск каскада защитно-адаптивных реакций, приводящих к активации стресс-лимитирующих систем, прежде всего антиоксидантной системы, что способствует купированию окислительного стресса.

Таким образом, экспериментальные и клинические данные, полученные в ходе настоящего исследования свидетельствуют о том, что протекгивный эффект СКЭНАРа в условиях окислительного стресса реализуется по нескольким направлениям. Предотвращение гиперпродукции активных форм кислорода и торможение процессов свободнора-дикального окисления липидов не только на стадии активации кислорода, но и на этапе образования молекулярных продуктов указывает на антирадикальный эффект СКЭНАРа. Нормализация активности ключевых ферментов первичного звена АО защиты - СОД и каталазы в эритроцитах свидетельствуют об антиоксидантном действии СКЭНАР. Как показано в нашем исследовании, в условиях окислительного стресса наблюдается резкое увеличение генерации АФК, которые приводят к окислительной модификации антиокси-дантных ферментов. Обладая антирадикальной активностью, СКЭНАР-терапия способствует сохранению нативной структуры и каталитической активности АО ферментов и других белков (рис. 11).

В нашем исследовании установлено, что СКЭНАР при окислительном стрессе способствует стабилизации структурного состояния мембран эритроцитов. При использовании СКЭНАРа происходит нормализация таких параметров как микровязкость ли-пидного бислоя, аннулярных липидов, степень погружения и ассоциации мембранных белков, полярность внутренних гидрофобных областей мембран эритроцитов, которые рассматриваются как адекватная модель плазматических мембран в целом. Такие изменения приводят к улучшению вязкостно-эластических свойств мембран и улучшению микроциркуляции. Нормализация структурных свойств мембран эритроцитов способст-

Рис. 11. Корригирующее влияние СКЭНАРа на состояние свободнорадикального и структурно-метаболического гомеостаза при окислительном стрессе.

вует восстановлению барьерной и редепторной функций, а также вязкостно-эластических свойств. Важным положительным эффектом СКЭНАР является уменьшение показателей эндогенной интоксикации. Данный факт может служить объяснением мембранопротек-торного действие СКЭНАР-терапии за счет снижения содержания МСМ, так как пептидные компоненты, входящие в этот пул, способны адсорбироваться на гликокаликсе эритроцитов, повреждая его и оказывая негативное влияние на структуру мембраны и межклеточные взаимодействия.

Полученные в ходе настоящего исследования данные позволяют заключить, что СКЭНАР-терапия обладает выраженным антирадикальным, антиоксидантным, мембра-нопротекторным и мембраностабилизирующим действием, существенно снижает проявление патологических реакций эндогенной интоксикации, то есть эффективно устраняет деструктивные последствия окислительного стресса. Положительный клинический эффект СКЭНАР-терапии у пациентов с ИБС характеризуется улучшением общего состояния, нормализацией сна, уменьшением или исчезновением болей в сердце.

Выводы

1. СКЭНАР-воздействие обладает выраженным антирадикальным эффектом, что проявляется в его ингибирующем влиянии на интенсивность свободнорадикального окисления у экспериментальных животных и пациентов с ИБС.

2. СКЭНАР-воздействие вызывает повышение активности ключевых антиокси-дантных ферментов СОД и каталазы, способствуя восстановлению антиоксидантного статуса эритроцитов у экспериментальных животных и пациентов с ИБС.

3. СКЭНАР-воздействие оказывает мембранопротективное действие, что выражается в стабилизации микровязкости липидного бислоя, аннулярных липидов, степени погружения и ассоциации мембранных белков, полярности внутренних гидрофобных областей, а также нормализации проницаемости мембран эритроцитов у экспериментальных животных и пациентов с ИБС.

4. Применение СКЭНАР-терапии после оксидативного стресса приводит к купированию синдрома эндогенной интоксикации, что проявляется в снижении содержания МСМ и ЦИК у экспериментальных животных и пациентов с ИБС.

5. Включение СКЭНАР-терапии в комплексное лечение ИБС приводит к восстановлению прооксидантно-антиоксидантного равновесия, ингибированию свободнорадикального окисления в крови, что сопровождается активацией СОД и каталазы, нивелирует явления эндогенной интоксикации, а также способствует стабилизации структурно-функционального состояния мембран эритроцитов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации в издании, рекомендованном ВАК РФ

1 .Крайнева H.H., Гуськова E.H., Милютина Н.П., Внуков В.В. Свободнорадикаль-ное окисление при ишемической болезни сердца и корригирующее влияние СКЭНАР-терапии. //Известия Высших учебных заведений Северо - Кавказский регион. Естественные науки.- Ростов н/Д, 2007. -№6. - с.60-63,- п.л.,- личный вклад 80%.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1.Крайнова H.H., Гуськова E.H., Милютина Н.П., Внуков В.В. Активность супер-оксиддисмутазы и уровень свободнорадикального окисления в мозгу крыс, подвергнутых оксидативному стрессу при коррегирующем влиянии СКЭНАР-воздействия. // В мат. Научно-практической конференции «Нейроспецифические метаболиты и энзимологиче-ские основы деятельности центральной нервной системы». - Пенза, 2006. - с.96.- 0,05 п.л., личный вклад - 75%.

2.Крайнова H.H., Гуськова E.H., Милютина Н.П., Внуков В.В. Влияние СКЭНАР-воздействия на интенсивность ПОЛ в различных тканях крыс при ГБО - индуцированном стрессе. // Материалы научной конференции с международным участием, ВАРАДЕРО, Журнал «Успехи современного естествознания», Москва, 2006, №3. - с.63. 0,05 п.л., личный вклад - 75%.

3.Гуськова E.H. Структурное состояние мембран эритроцитов крыс при оксида-тивном стрессе и СКЭНАР-воздействии // В сб. тр. VI-й межвузовской международной биохимической научно-практической конференции молодых учёных, специалистов, студентов «Обмен веществ при адаптации и повреждении». Ростов-н/Д, 2007. е.- 49. 0,05 п.л., личный вклад - 100%.

4. Гуськова E.H., Крайнова H.H., Милютина Н.П., Внуков В.В. Динамика Н2О2 -люминол-индуцированной хемилюминесценции плазмы крови у пациентов с ишемической болезнью сердца на фоне стандартного лечения и в сочетании со СКЭНАР-терапией.// В мат. V-й национальной научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека». Смоленск, 2007. -с.171-173. 0,05 п.л., личный вклад - 75%.

5. Гуськова E.H., Крайнова H.H., Внуков В.В. Милютина Н.П., Коррегирующее действие СКЭНАРа при ГБО - индуцированном оксидативном стрессе// В мат. III-й всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов». Сибирский консилиум. Новосибирск, 2007. №7(62). С.182. 0,05 п.л., личный вклад- 75%.

6. Милютина Н.П., Гуськова E.H., Крайнова H.H., Внуков В.В. Корригирующее действие СКЭНАР на активность антиоксидантных ферментов при ИБС// Мат.Н-ой международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии, нано-технологий и медицины. Ростов-на-Дону, с.96 , 0,05п.л., личный вклад - 75%.

Список использованных сокращений

АКМ активированные кислородные метаболиты

АО антиоксидант

АФК активные формы кислорода

ВЭГ внеэритроцитарный гемоглобин

ГБО гиперборическая оксигенация

ДК диеновые коньюгаты

ИБС ишемическая болезнь сердца

МДА малоновый диальдегид

МСМ молекулы средней массы

ПОЛ перекисное окисление липидов

ППДК повышенное парциальное давление кислорода

СКЭНАР самоконтролируемая энерго-нейро-адаптивная регуляция

СОД супероксиддисмутаза (КФ 1.15.1.1)

СПА суммарная пероксидазная активность

СРО свободнорадикальное окисление

СРП свободнорадикальные процессы

ХЛ хемилюминесценция

ЦП церулоплазмин

ШО шиффовы основания

ЭИ эндогенная интоксикация

Сдано в набор 16.03.09 г. Подписано в печать 16.03.09 г. Заказ№ 68. Тираж 100 экз. Формат 60*84 1/ 16. Печ. лист. 1,0. Усл. печ. л. 1,0. Копировально-множительный отдел НИЧ Южного федерального университета 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Б. Садовая, 105, тел (863) 263-82-91.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гуськова, Елена Николаевна

Используемые сокращения.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Свободнорадикальные процессы и их регуляция в биологических системах.

1.1.1 .Характеристика основных форм свободных радикалов.

1.1.2. Перекисное окисление липидов.

1.1.3.Регуляция свободнорадикальных процессов.

1.2. СКЭНАР - перспективы использования в кардиологии.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Постановка эксперимента на животных.

2.2. Клинические исследования.

2.2.1.Методика проведения СКЭНАР-терапии у больных с ИБС.

2.3. Получение биологического материала.

2.3.1. Получение плазмы крови.

2.3.2. Приготовление суспензии эритроцитов и гемолизата.

2.3.3. Приготовление гомогенатов тканей.

2.4. Методы исследования.

2.4.1. Экстракция липидов.

2.4.2. Определение содержания диеновых конъюгатов.

2.4.3. Определение содержания шиффовых оснований.

2.4.4. Определение содержания малонового диальдегида.

2.4.5. Определение активности супероксиддисмутазы.

2.4.6. Определение активности катал азы.

2.4.7. Определение оксидазной активности церулоплазмина.

2.4.8.Определение содержания гемоглобина.

2.4.9. Определение содержания общего белка.

2.4.10. Определение суммарно пероксидазной активности.

2.4.11. Хемилюминесцентный анализ в системе Н2О2 -люминол.

2.4.12. Метод активированной дрожжами хемилюминесценции цельной крови.

2.4.13. Определение структурных параметров мембран эритроцитов.

2.4.14. Измерение интенсивности флуоресценции белков суспензии эритроцитов.

2.4.15. Определение содержания молекул средней массы.

2.4.16. Определение содержания мочевины.

2.5. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Интенсивность свободнорадикального окисления и стуктурно-функциональные свойства мембран эритроцитов при оксидативном стрессе у крыс и корригирующее действие СКЭНАР-терапии.

3.1. Интенсивность НгОг-люминол-индуцированной хемилюминесценции в различных тканях крыс при ГБО-индуцированном оксидативном стрессе и СКЭНАР-воздействии.

3.1.1. Интенсивность Н202-люминол-индуцированной хемилюминесценции в различных тканях крыс при ГБО-индуцированном оксидативном стрессе.

3.1.2. Влияние СКЭНАР-терапии на интенсивность Н202-люминол-индуцированной хемилюминесценции в различных тканях крыс при ГБО-индуцированном оксидативном стрессе.

3.2. Интенсивность активированной дрожжами ХЛ крови крыс при ГБО-индуцированном оксидативном стрессе и СКЭНАР-воздействии.

3.2.1. Интенсивность активированной дрожжами ХЛ крови крыс при ГБО-индуцированном оксидативном стрессе.

3.2.2. Влияние СКЭНАР-воздействия на активированную дрожжами хемилюминесценцию крови* крыс при ГБО-индуцированном оксидативном стрессе.

3.3. Интенсивность ПОЛ в различных тканях крыс при ГБО-индуцированном окислительном стрессе и СКЭНАР-воздействии.

3.3.1. Интенсивность ПОЛ в различных тканях крыс при ГБО-индуцированном окислительном стрессе.

3.3.2. Влияние СКЭНАР-воздействия на интенсивность ПОЛ в различных тканях крыс, подвергнутых ГБО-индуцированному оксидативному стрессу.

3.4. Уровень внеэритроцитарного гемоглобина и суммарной пероксидаз-ной активности в плазме крови крыс при ГБО-индуцированном оксидатив-ном стрессе и СКЭНАР-воздействии.

3.4.1. Уровень внеэритроцитарного гемоглобина и суммарной перокси-дазной активности в, плазме крови крыс при ГБО-индуцированном оксида-тивном стрессе.

3.4.2. Влияние СКЭНАР-воздействия на уровень ВЭГ и СПА в плазме крови крыс при ГБО-индуцированном оксидативном стрессе.

3.5. Активность антиоксидантной системы в плазме крови, эритроцитах и тканях крыс при ГБО-индуцированном оксидативном стрессе и СКЭНАР-воздействии.

3.5.1. Активность антиоксидантной системы в плазме крови, эритроцитах и тканях крыс при ГБО-индуцированном оксидативном стрессе.

3.5.2. Влияние СКЭНАР-воздействия на активность антиоксидантной системы в различных тканях крыс при ГБО-индуцированном оксидативном стрессе.

3.6. Структурное состояние мембран эритроцитов крыс при ГБО-индуцированном оксидативном стрессе и СКЭНАР-воздействии.

3.6.1. Структурное состояние мембран эритроцитов* крыс при ГБО-индуцированном оксидативном стрессе.

3.6.2. Влияние СКЭНАР-воздействия на структурное состояние мембран эритроцитов крыс при ГБО-индуцированном оксидативном стрессе.

3.7. Уровень окислительной модификации белков эритроцитов крыс при ГБО-индуцированном оксидативном стрессе и СКЭНАР-воздействии.

3.7.1 Уровень окислительной модификации белков эритроцитов крыс при ГБО-индуцированном оксидативном стрессе.

3.7.2 Влияние СКЭНАР-воздействия на уровень окислительной модификации белков эритроцитов крыс, подвергнутых ГЪО-индуцированному ок-сидативному стрессу.

3.8. Содержание молекул средней массы в плазме крови и мочевины в тканях крыс при ГБО-индуцированном оксидативном стрессе и СКЭНАР-воздействии.

3.8.1. Содержание молекул средней массы в плазме крови и мочевины в различных тканях крыс при ГБО-индуцированном оксидативном стрессе.

3.8.2. Влияние СКЭНАР-воздействия на содержание молекул средней массы в плазме крови и мочевины в различных тканях крыс при ГБОиндуцированном оксидативном стрессе.

Глава 4.Свободнорадикальное окисление в крови и структурно-функциональные свойства мембран эритроцитов у больных ишемической болезнью сердца на фоне стандартного лечения и в сочетании со СКЭНАР-терапией.

4.1. Интенсивность Н202-люминол-индуцированной хемилюминесцен-ции в плазме крови больных ИБС на фоне стандартного лечения и в сочетании со СКЭНАР-терапией.

4.2. Интенсивность свободнорадикальных процессов в крови больных ИБС на фоне стандартного лечения и в сочетании со СКЭНАР-терапией.

4.3. Активность антиоксидантной системы в плазме крови и эритроцитах больных ИБС на фоне стандартного лечения и в сочетании со СКЭНАР-терапией.

4.4. Структурное состояние мембран эритроцитов больных с ИБС на фоне стандартного лечения и в сочетании со СКЭНАР-терапией.

4.5. Синдром эндогенной интоксикации у больных ИБС на фоне стандартного лечения и в сочетании со СКЭНАР-терапией.

ГЛАВА 5. Обсуждение результатов.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние СКЭНАР-воздействия на свободнорадикальные процессы в тканях и мембранах эритроцитов при окислительном стрессе"

В настоящее время принято считать, что главным фактором в развитии патологических состояний является оксидативный стресс. Его проявление выражается в сдвиге динамического равновесия в системе антиоксиданты -прооксиданты в сторону свободнорадикального окисления, продукты которого обладают широким спектром повреждающего действия. Это приводит к снижению стабильности и изменению физико-химических свойств мембран: микровязкости, текучести, мембранного потенциала, полярности внутренних областей мембраны и др.

Воздействовать на активность свободнорадикальных процессов и систему антиоксидантной защиты возможно как при помощи фармакологических препаратов, так и при использовании немедикаментозных методов лечения, в связи с чем обсуждаются вопросы применения новых методик, в том числе электронейростимуляции (Jackson G.1999).

В литературе имеются указания на успешное применение электронейростимуляции аппаратом СКЭНАР (самоконтролируемый энергонейроадаптивный регулятор) при лечении больных кардиологического профиля (Гринберг Я.З., 1999; Тараканов A.B. и др., 2003). Однако, воздействие СКЭНАР -терапии на биохимические процессы, в частности, на свободнорадикальное окисление и структурное состояние биомембран у больных ИБС, изучено недостаточно.

В соответствии с этим несомненный теоретический и практический интерес представляет изучение влияния СКЭНАР — воздействия на свободнорадикальное окисление липидов, активность антиоксидантной системы и структурное состояние мембран эритроцитов, как адекватной модели плазматических мембран у больных ИБС.

Целью работы явилось исследование влияния СКЭНАР - воздействия на свободнорадикальные процессы в тканях и структурно-функциональное состояние мембран эритроцитов при окислительном стрессе.

Для достижения поставленной цели были сформулированы и решены следующие задачи:

1. Изучить влияние СКЭНАР - воздействия на интенсивность свобод-норадикальных процессов и ПОЛ по параметрам хемилюминесценции и по содержанию молекулярных продуктов - ДК, МДА и ШО в тканях и эритроцитах крыс при окислительном стрессе.

2. Определить активность антиоксидантных ферментов - супероксид-дисмутазы, каталазы, церулоплазмина в тканях и эритроцитах крыс при ок-сидативном стрессе и СКЭНАР - воздействии.

5. Исследовать влияние СКЭНАР — воздействия на свободнорадикаль-ные процессы, сбалансированность в системе прооксиданты - антиоксидан-ты, а также на уровень МСМ и ЦИК, стабильность и структурное состояние мембран эритроцитов у больных ИБС.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Гуськова, Елена Николаевна

Выводы

2. СКЭНАР-воздействие вызывает повышение активности ключевых антиоксидантных ферментов СОД и каталазы, способствуя восстановлению антиоксидантного статуса эритроцитов у экспериментальных животных и пациентов с ИБС.

3. СКЭНАР-воздействие оказывает мембранопротективное действие, что выражается в стабилизации микровязкости липидного бислоя, аннуляр-ных липидов, степени погружения и ассоциации мембранных белков, полярности внутренних гидрофобных областей, а также нормализации проницаемости мембран эритроцитов у экспериментальных животных и пациентов с ИБС.

5. Включение СКЭНАР-терапии в комплексное лечение ИБС приводит к восстановлению прооксидантно-антиоксидантного равновесия, ингибиро-ванию свободнорадикального окисления в крови, что сопровождается активацией СОД и каталазы, нивелирует явления эндогенной интоксикации, а также способствует стабилизации структурно-функционального состояния мембран эритроцитов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гуськова, Елена Николаевна, Ростов-на-Дону

1. Алешин C.B. Возможности СКЭНАРа при лечении ревматоидного артрита // СКЭНАР терапия и СКЭНАР - экспертиза. - Таганрог, 2001. -Вып. 7. - с. 72-78.

2. Афанасьева А.Н. Сравнительная оценка уровня эндогенной интоксикации у лиц разных возрастных групп //Клин. Лаб. Диаг. -2004. №6. -с. 11-13.

3. Беляков H.A., Малахова М.Я. Критерии и диагностика эндогенной интоксикации// Эндогенные интоксикации: Тез. Докл. Междунар. Симп. -С-Пб., 1994-С. 60-62.

4. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов. М.: Медицина, 1989.-368 с.

5. Боголюбов В.М., Пономаренко Г.Н. Общая физиотерапия. -M .Медицина, 1999, C.-432.

6. Бурлакова Е.Б., Губарева А.Е., Архипова Г.В., Рогинский В.А. Модуляция перикисного окисления липидов биогенными аминами в модельных системах //Вопр. мед. химии.-1992.-2.-С.47-50.

7. Бурлакова Е.Б., Крашаков С.А., Храпова Н.Г. Генетические особенности токоферолов как антиоксидантов. Черноголовка, 1992. -56с.

8. Владимиров Ю.А. Арчаков А.И., Добрецов Г.Е. Перекисное окисление в биологических мембранах.-М.: Наука, 1972. -252с.

9. Владимиров Ю.А. Свободыорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран.- Биофизика. -1987.- Т.32.- №5.- С.830-844

10. Владимиров Ю.А. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. -М.: 1987. -257С.

11. Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев А.И. и др. Свободные радикалы в живых системах // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика.-1991.-Т. 29.-С. 1-249.

12. Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев А.И. и др. Свободные радикалы в живых системах // Биофизика (Итоги науки и техники ВИНИТИ АН СССР). М.-1991.-Т. 29.- 252с.

13. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Фруоресцентные зонды в иследова-нии биологических мембран. М.: Наука, - 1980. - 320с.

14. Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев И.А., Козлов A.B., Осипов А.И., Рещупкин Д.И. Свободные радикалы в живых системах. Итоги науки и техники -М.: ВИНИТИ, 1991.- Т. 29. С. 248.

15. Волчегорский И.А., Власов A.B., Лившин Г.Е. и др. Средние молекулы как неспецифические регуляторы активности фагоцитов. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 1995,- №2.- С. 159-162

16. Волчегорский И.А., Колесников О.Л., Цейликман В.Э. Влияние когне-тивного и некогнетивного воздействия на чувствительность к стрес-сорным гормонам и выбор адаптационной стратегии // Журнал Изв. АН. Сер. Биология. 1999. №2. с. 201-210.

17. Волчегорский И.А., Тишевская Н.В., Кузнецов Д.А. Влияние средних молекул, выделенных из плазмы крови интактных и обожженных животных, на клеточный состав культур эритробластических островков костного мозга. Вестник Российской АМН.- 2002.- №2.- С.30-36

18. Воляник Т.А. Опыт применения СКЭНАР-терапии в лечении некоторых болевых синдромов в неврологии // СКЭНАР — терапия и СКЭНАР экспертиза. - Таганрог, 1999. - Вып. 5. - с. 59-62.

19. Габриэлян Н.И., Дмитриев A.A., Кулаов Г.П. Диагностическая ценность определения средних молекул в плазме крови при нефрологиче-ских заболеваниях. Клиническая медицина.- 1983.- № 10.- С. 38-42

20. Габриэлян Н.И., Дмитриев H.A., Севостьянова O.A. и др. Средние молекулы и уровень эндогенной интоксикации у реанимационных больных. Анестезиология и реанимация.- 1985.- №1.- С.36-38

21. Гамалей И.А., Клюбин И.В., Перекись водорода как сигнальная молекула//Цитология.-1996,- Т.38, №12.-С.1233-1247.

22. Горфинкель Ю.В. Теоретические и практические основы повышения эффективности СКЭНАР терапии // СКЭНАР - терапия и СКЭНАР -экспертиза: Сб. ст. , Вып.2. -Таганрог. — 1999. с. -16-18.

23. Готовский Ю.В., Перов Ю.Ф., Перов С.Ю. Энергоинформационные взаимодействия и биорезонансная терапия / Теоретические и клинические аспекты применения биорезонансной и мультирезонансной терапии. Матер.V Межд. Конф. М., 1999. - Ч 2. - С. 201-218.

24. Гринберг Я.З. СКЭНАР терапия: эффективность с позиций методов электролечения// СКЭНАР - терапия и СКЭНАР - экспертиза. - Таганрог, 1999. - Вып. 2. - с. 18-32.

25. Гринберг Я.З. СКЭНАР терапия и СКЭНАР - экспертиза. Некоторые аспекты //Рефлексология. Научно — практ. журнал, 2005, №3(7), с 5-10.

26. Гринберг Я.З. Эффективность СКЭНАР терапии. Физиологические аспекты // СКЭНАР - терапия и СКЭНАР - экспертиза. - Таганрог, 1998.-Вып. 4.-с. 8-19.

27. Гужавина Г.П. СКЭНАР-терапия для реабилитации детей в психоневрологическом санатории // СКЭНАР терапия и СКЭНАР - экспертиза. - Таганрог, 1999. - Вып. 2. - с. 62-64.

28. Гуляев В.Ю., Щеколдин П.И., Чернышев В.В. Лечебное применение импульсной низкочастотной терапии / Уральское медицинское обозрение .-2001.-№2. с. 47-54.

29. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов. М.: Наука, 1989. - 277с.

30. Добротина H.A., Ртницкий А.Ю., Гладышева М.В. и др. Полифункциональность церулоплазмина, обоснование применения. Успехи современной биологии.-1999.- т.119.-С.375-379

31. Добротина H.A., Копытова Т.В. Эндоинтоксикация организма человека. Методологические и методические аспекты. Нижний Новгород, 2004. -с. 19-55.

32. Доманский A.B., Лапшина Е.А., Заводник И.Б. Окисительные процессы, индуцируемые органической гидроперекисью в эритроцитах человека: хемилюминесцентные исследования // Биохимия, 2005, т.70, вып. 7, с. 922-932.

33. Дубинина Е.Е. Некоторые особенности функционирования ферментативной антиоксидантной защиты плазмы крови человека //Биохимия. — 1993.- Т.58; вып. 2. С. 268-273.

34. Дубинина Е.Е. Характеристика внеклеточной супероксиддисмутазы // Вопр. мед. химии. -1995. -Т.41.вып.6. -С.8-12.

35. Евгина С.А., Панасенко О.Н., Сергиенко В.И., Владимиров Ю.А. Пе-рекисное окисление липопротеинов крови человека, индуцированное гипохлорит-анионом//Биол. мембраны.- 1992.-Т.9, №9.-С.946-953.

36. Журавлёв А.И. Свободнорадикальная биология. М. -1991. С. 59.

37. Завадская Э.Д., Попов В.А. Опыт лечения больных кардиологического профиля. Сборник СКЭНАРтерапия, СКЭНАР-экспертиза. Таганрог, 1999, в.5 С. 66-68

38. Зенков Н.К. Меныцикова Е.Б. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах // Успехи соврем. Биологии.-1993.-Т. 113, вып.З С.286-296.

39. Зенков Н.К. Меныцикова Е.Б. Индуцированная Н2С>2 биохемилюми-несценция сыворотки крови // Лаб. Дело.-1991. -№8.-С.30.

40. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньшикова Е.Б. Окислительный стресс: биохимический и патофизиологический аспекты. М.: МАИК «Наука/ Интерпериодика», 2001.-343 с.

41. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меныцикова Е.Б. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты. —М., Наука/интерпериодика, 2001. с.340.

42. Зилов В.Г., Кудаева Л.М. Методы традиционной медицины с позиции теории функциональных систем // СКЭНАР терапия и СКЭНАР -экспертиза. - Таганрог, 1997. - Вып. 3. - с. 7-12.

43. Зилов В.Г., Кудаева Л.М., Ревенко А.Н. и др. Методика коррекции клинических проявлений соматических, хирургических, неврологических заболеваний электростимулятором «СКЭНАР» : Пособие для врачей М.: 2000.

44. Зилов В.Г., Судаков К.В.,Эпштейн О.И. Элементы информационной биологии и медицины. М.:МГУЛ, 2000. -С.248.

45. Зубаткина О.В. Малахова М.Я. Критерии метаболической стабильности //Эфферентная терапия -2002. -Т. 8. №4. С. 55-60.

46. Камышников B.C. Справочник по клинико биохимической лабораторной диагностике. - Мн. Белорусь, 2000 - Т. 1-2. -453с.

47. Карякина Е.В., Белова C.B. Молекулы средней массы как интегральный показатель метаболических нарушений // Клин. Лаб.диаг. 2004.№3. -с.4-8.

48. Кения М.В., Лукаш А.И., Гуськов Е.П. Роль низкомолекулярных анти-оксидантов при окислительном стрессе // Успехи совр. биологии.-1993.-Т.113,вып.4.- С.456-470.

49. Колесникова Е.И., Городецкая Е.А., Медрашев А.Н. и др. Усиленная продукция гидроксильных радикалов в гипертрофированном миокарде крысы: микродиализное исследование in vitro. // Биофизика. -2003. — Т.48. -№1. -С.97-102.

50. Костюченко А.Л., Белоцерковский М.В., Соколов А.А. Острый эндо-токсикоз. // В кн. Медицинская лабораторная диагностика (программы и алгоритмы). Справочник. СПб.: Интермедика, 1997. — с. 246-264.

51. Красновский А.А. Синглетный молекулярный кислород: механизмы образования и пути дезактивации в фотосинтетических системах //Биофизика.-1994.-Т. 39,вып.2. -С.236-250.

52. Кратнов А.Е. Состояние кислородзасисимого метаболизма фагоцитов и антиоксидантной защиты плазмы крови при острых коронарных синдромах в зависимости от исхода в период госпитализации. Клиническая лабораторная диагностика.- 2002.- №6.- С. 6-13

53. Кузнецова Л.Н. СКЭНАР —терапия в лечении хронического посттравматического остеомиелита // Уральск. Мед. Обозрен. — 2001. -№2. с.65-68.

54. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Биологическая роль глутатиона // Успехи совр. биол. 1990.- Т. 110, вып.1.- С.37-50.

55. Ланкин В.З., Тихадзе А.К., Беленков Ю.Н. Свободнорадикальные процессы в норме и при патологических состояниях. М., 2001.- 78 с.

56. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Свободнорадикальные процессы при заболеваниях сердечно-сосудистой системы // Кардиология. -2000. №7.- С. 48-58.

57. Ларкий Э.Г. Методы определения и метаболизм металлобелковых комплексов //Итоги науки и техники Сер. Биологическая химия.-1990: Т.41.

58. Ларский Э.Г. Методы определения и метаболизм металлобелковых комплексов. Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Биохимия. 1990.-т.41.- 198 с.

59. Лебедев В. А. Лечение нейрогенной дисфункции мочевого пузыря с энурезом у детей аппаратом СКЭНАР// Вопр. Курорт. Физиотер.1995. -№4. -с.25-26.

60. Лебеденко A.A. СКЭНАР терапия при атопическом дерматите у детей // // СКЭНАР - терапия и СКЭНАР - экспертиза. - Таганрог, 2001. -Вып. 7.-с. 86-87.

61. Логинов A.C., Матюшин Б.Н., Ткачев В.Д., Якимчук Г.Н. Новый подход к диагностике холестаза по активности медьсодержащих ферментов // Терапевт. Архив.- 1993.-№ 2.- С. 34-36

62. Лойко H.A. Особенности СКЭНАР терапии нейродермита // СКЭНАР- терапия и СКЭНАР экспертиза. - Таганрог, 2001. - Вып. 7. - с. 8790.

63. Лукаш А.И., Внуков В.В., Ананян A.A. Металлосодержащие соединения плазмы крови при гипербарической оксигенации. Ростов-на-Дону,1996.- 108с.

64. Лукаш А.И., Менджерицкая Л.Г., Внуков В.В., Ананян A.A., Кесель-ман В.Л. Железосодержащие белки в плазме и сыворотке крови больных при гипербарооксигенотерапии //Анестезиология и реаниматология. 1991 №2. с 27-29.

65. Ляшедько П.П. Биорегулируемая электростимуляция при лечении осложнений со стороны желудочно-кишечного тракта у пострадавших с тяжелыми сочетанными повреждениями // СКЭНАР терапия и СКЭНАР - экспертиза. - Таганрог, 1998. - Вып. 4. - с.44-46.

66. Ляшедько П.П., Шляпников С.А. СКЭНАР терапия для местного лечения ран у больных с вторичным иммунодефицитом // СКЭНАР — терапия и СКЭНАР - экспертиза. - Таганрог, 1999. - Вып. 2. - с.44-45.

67. Маклецова М.Г., Гринберг Я.З., Сталбов А.Э. и др. Влияние СКЭНАРвоздействия на интенсивность перекисного окисления липидов // СКЭНАР терапия и СКЭНАР - экспертиза. - Таганрог, 2001. - вып. 7.-с. 37-38.

68. Малахова М.Я. Эндогенная интоксикация как отражение компенсаторной перестройки обменных процессов в организме. Эфферентная терапия.- 2000.- т.6.- №4.- С.3-14

69. Малахова М.Я. Эндогенная интоксикация как отражения компенсаторной перестройки обменных процессов в организме // Эфферентная терапия. 2000 Т. 6. №4. -с. 3-15.

70. Малышев И.Ю., Монастырская Е.А., Смирин Б.В. и др. Гипоксия и оксид азота. //Вестник Росс. АМН.-2000. -№9. -С.44-48.

71. Марусанов В.Е., Михайлович В.А., Деманчская И.А., Гуло C.JI. Характеристика стадий эндогенной интоксикации// Эфферентная терапия. -1995. №2 -с.26-30.

72. Матюшин Е.М., Логинов A.C. Активные формы кислорода: цитотокси-ческое действие и методические подходы к лабораторному анализу при поражениях печени// Клин.лаб.диаг. -1996 №4. —с.51 -54.

73. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемиче-ских повреждений сердца.- М.: Медицина, 1984.- 269 с.

74. Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам. М.: медицина, 1989.- 256 с.

75. Меныцикова Е.Б., Зенков Н.К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов // Успехи соврем, биологии.-1993.-Т. 113, вып.4.- С.442-455.

76. Меныцикова Е.Б., Зенков Н.К., Сафина А.Ф. Окислительный стресс при ишемическом и реперфузионном повреждении миокарда // Успехи соврем, биологии.-1997.-Т. 117, вып.З.- С.362-373.

77. Меныцикова Е.Б., Зенков Н.К., Ланкин В.З., Бондарь И.А. Круговых Н.П., Труфакин В.А. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты. -М.: Фирма «Слово», 2006. -556с.

78. Меркулова Л.М., Холодов Ю.А. Реакции возбудимых тканей организма на импульсные магнитные поля. -Чебоксары 1996. с. -174.

79. Милютина Н.П., Ананян A.A. Свободнорадикальное окисление и механизмы адаптации к измененным условиям газовой среды обитания // Известия вузов. Северо Кавказский регион. Естественные науки . Спецвыпуск. -2005. -С. 45-47.

80. Музыкантов В.Р., Пучнина-Артюшенко Е.А., Чекнева Е.В., Войно-Ясенецкая Т.А. Перекись водорода в субтоксических концентрациях активирует фосфоинозитидный обмен в эндотелиальных клетках человека // Биол. Мембраны. -1992. -Т. 9, №2. -С.133.

81. Муравьев P.A., Фомина В. А., Роговин В.В. Пероксидазосомы эозино-фильных лейкоцитов // Известия АН. Сер. Биол.- 1992.- №6.-С.835-843.

82. Найман В.А., Гаев A.B., Жиляков А.В Способ лечения хронического посттравматического остеомиелита костей голени с использованием СКЭНАР -терапии // Новые направления в клинической медицине: Матер. Всерос. Конф. Ленинск - Кузнецкий, 2000. - с. 135-136.

83. Николайчик В.В., Моин В.М., Кирковский В.В. и др. Способ определения «средних молекул» // Лаб. дело. 1991. - в.З. - с.374-389.

84. Олисов Д.Е. СКЭНАР-терапия в лечении дерматологических больных // СКЭНАР терапия и СКЭНАР - экспертиза. - Таганрог, 1999. -Вып. 5. - с. 76-78.

85. Осипов А.Н., Азизова O.A., Владимиров Ю.А. Активированные формы кислорода и их роль в организме // Успехи биол. химии.-1990.-Т. 31.-С.-180-208.

86. Осипов А.Н., Якутова Э. Ш., Владимиров Ю.А. Образование гидро-ксильных радикалов при взаимодействии гипохлорита с ионами железа //Биофизика. -1993.- Т. 38, вып. 3. -С. 390-396.

87. Подопригорова В.Г. Роль свободнорадикального окисления липидов и антиоксидантных систем в патогенезе и саногенезе язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, возможности коррекции анти-оксидантами // Автореф. дис. д-ра медюнауюо -М., 1998.

88. Понасенко О.М., Евгина С.А., Сергиенко В.И. Изучение способности гипохлорита проникать в липидную фазу липопротеинов крови человека //Бюл. эксперим. биологии и медицины. -1993. -№4.-С.358-360.

89. Пономаренко Г.Н. Электротерапия и электролечение. СПб. Мир и семья, 1995. С.-250.

90. Поскребышева A.C., Гриневич В.В., Смурова Ю.В. и др. Нейроиммун-ноэндокринные взаимодействия в патогенезе хронической сердечной недостаточности. Успехи физиологических наук.- 2003.- т. 34.- №3.-С.3-20

91. Пучкова J1.B., Платонова H.A. Механизм, обеспечивающий гомеостаз меди у эукариотов, и его связь с транспортом железа. Успехи современной биологии.-2003.-т. 123.-№ 1.- С.41-58

92. Ревенко А.Н. Толкование и отличительная методология.// СКЭНАР -терапии СКЭНАР терапия и СКЭНАР - экспертиза. Таганрог, 1996. -Вып.2 е.-13-15.

93. Реутов В.П., Сорокина Е.Г., Охотин В.Е., Косицын Н.С. Циклические превращения оксида азота в организме млекопитающих. М.: Наука, 1997.-156 с.

94. Рогинский В.А. Фенольные антиоксиданты: реакционная способность и эффективность. М. Наука -1988 с. 320.

95. Рязанцева Н.В., Новицкий В.В. Типовые нарушения молекулярной организации мембраны эритроцита при соматической психической патологии // Успехи физиол. Наук, 2004, т. 35, №1, с. 53-65.

96. Симоненков А.П., Федоров В.Д. Общность клинических проявлений синдрома серотониновой недостаточности и интоксикационного синдрома. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 1997.- т. 123.- №6.- С. 604-613

97. Смирнова И.Н. Результаты СКЭНАР- и галотерапии при обструктив-ных заболеваниях лёгких // СКЭНАР терапия и СКЭНАР - экспертиза. - Таганрог, 2001. - Вып. 7.-е. 108-110.

98. Тараканов A.B., Гринберг Я.З., Милютина Н.П. Универальные механизмы действия СКЭНАР при оксидативном стрессе // Рефлексотерапия.-2003.-№4. С.41-45.

99. Тараканов A.B., Ильин A.B., Самакаев A.C., Карташева Н.В. Применение СКЭНАР терапии в остром периоде инфаркта миокарда // Медицина для профессионалов. - 2007. №8. - с. 14-15.

100. Тараканов A.B., Лось Е.Г. Многофакторный механизм СКЭНАР -анальгезии // Рефлексология. Научно — практ. Журнал, 2005, №3(7), с. 24-30.

101. Тараканов A.B., Лось Е.Г., Карташева Н.В. и др. Лечение гипертен-зивных кризов и мигрени с помощью СКЭНАРа // СКЭНАР терапия и СКЭНАР - экспертиза. - Таганрог, 2001. - Вып. 7. - с. 58-64

102. Туликова З.А., Осипович В.К. Влияние средних молекул, выделенных из сыворотки крови обожженных пациентов на состояния процессов перекисного окисления липидов в тканях животных. Вопросы мед. химии.- 1990.- т. 36.-№3.- С.502-506

103. Улащик B.C., Лукомский И.В. Основы общей физиотерапии. -Витебск, 1997. с.-256

104. Фатенков В.Н., Зарубина Е.Г., Милякова М.Н. Нарушения в структуре мембран эритроцитов у больных инфарктом миокарда.// Кардиология. 2002. -№6. -с. 54.

105. Чайлахян Л.М.,Клеточные механизмы основа регуляции физиологических функций//Тезисы докладов XVII съезда физиологов России. Ростов на Дону, 1998.-c.108.

106. Ю8.Чаленко В.В. Возможные причины повышения концентрации молекул средней массы при патологии // Пат. физиол. и эксперт, терапия. — 1991. с. 13-14.

107. Шанин В.Ю., Шанина Н.Ю., Забродский П.Ф. и др. Критерии аутоиммунного статуса органов при остром разлитом перитоните как интегральный показатель выраженности энотоксикоза. Эфферентная терапия.- 2002.- Т.8.- №4.- С.49-54

108. Шаронов Б.П., Говорова Н.Ю., Лызлова С.Н. Антиокислительные свойстви и деградация белков сыворотки активными формами кислорода, генерируемые стимулированными нейтрофилами. Биохимия.-1988.- т.53.-№5.- С.816-825

109. Ш.Шаронов Б.П., Чурилова И.В. Окислительная модификация и инактивация супероксиддисмутазы гипохлоритом // Биохимия.-1992.-Т.57, вып.5.- С.719-727.

110. Ярмоненко С.П. Радиобиоогия человека и животных.-М., «Высшая школа», 1977, 368 с.

111. Ясногорский В.Г. Электролечение. Медицинская реабилитация. М., Пермь: ИПК «Звезда», 1998, - Т. 1. -С. 194-296.

112. Agarwal S., Sohal R.S. Aging and proteolysis of oxidized proteins // Arch. Biochem. and Biophys.-1994. Vol. 309. - P.24-28.

113. Al-Ramadi B.K., Meissler J.J., Huang D., Eisenstein Т.К. Immunosuppression induced by nitric oxide and its inhibition by interleukin-4 // Eur. J. Immunol. -1992. -Vol. 22. -P. 2249-2254.

114. Archer S. Measurement of nitric oxide in biological models // FASEB J. -1993.-Vol. 7.-P. 349-360.

115. Atanasiu R.L., Stea D., Mateescu M.A. et al. Direct evidence of ceruloplas-min antioxidant properties // Mol. Cell. Biochem. -1998. Vol. 189. - P. 127-135.

116. Barrington P.F. Effects of free radicals on the electrophysiological functions of cardiac membranes. Free Radical Biol, and Mad.- 1990.- V.9.- P. 355-365

117. Basn A., Haenen G.R.M.M., Doelman C.J.A. Oxidants and antioxidants: State of the art // Amer. J. Med. -1991. -Vol.91, Suppl.3C. P. 2S.-13S.

118. Blok E. Hydrogen peroxide alters physical state and function of the plasma cell membrane of pulmonary artery endothelial cells // J. Cell Physiol. -1991.-Vol. 146.-P. 362-369.

119. Boes M., Debye C., Pincemail J. Degradation of membrane phospholipids by direct nucleophilic action of superoxide anion // Free Radicals, Lipoproteins and Membrane Lipids. -N.Y.: Plenum Press, 1989. -P. 105-113.

120. Burdon R.H. Released active oxygen species as intercellular signals: their role in regulation of normal and tumour cell proliferation // Biol. Chem./Hoppe-Seyler.-l 992.-Vol.373.-P.739-740.

121. Curzio M. Interaction between neutrophils and 4-hydroxyalkenals and consequences on neutrophil motility // Free Radic. Res. Commun. -1998. V. 5. -P.55-66.

122. Dast A., Haenen G.R.M.M., Doelmann C.J.A. Oxidants and antioxidants. State of art// Am. J. Mrd.-1991.-V.91, Suppl.3. -P.2-13.

123. Del Rio L.A., Sandalio L.M., Palma J.M. et al. Metabolism of oxygen radicals in peroxisomes and cellular implications // Free Radical Biol, and Med. -1992.-Vol.13.-P.557-580.

124. Demiera E.V., Ruby B. Modulation of K+ channels by hydrogen peroxide // Biochem. and Biophys Res. Commun. -1992.-Vol.186. -P. 1681-1687.

125. Desilva D., Aust S.D. Stoichiometry of Fe (II) oxidation during ceruloplas-min catalyzed loading of ferritin // Arch. Biochem. and Biophys.-1992. -Vol. 298. - P. 259-264.

126. Diaber A., August M., Baldus S. et al. Measurement of NAD(P)H oxidase -derived superoxide with the luminal analogue L-012 // Free Radic. Biol. Med.-2004.-V. 36. -P. 101-111.

127. Dimascio P., Briviba K., Sasaki S.T. et al. The reaction of peroxynitrite with tert-butul hydroperoxide produces singlet molecular oxygen // Biol. Chem.-1997.-Vol. 378.-P. 1071-1074.

128. Dix T.A., Aitkens J. Mechanisms and biological relevance of lipid peroxidation inhalation // Chem. Res. Toxicol -1993. -Vol. 6. -P.2-18.

129. Drapier J.-C. L-arginine-derived nitric oxide and the cell-mediated immune response //Res. Immunol.-1991. -Vol. 142. -P. 553-555.

130. Eisenberg W.C., Taylor K., Guerrero R.R. Cytogenetic effects of singlet oxygen // J. Photochem. and Photobiol. -1992: -Vol. 16. -P. 381-384.

131. Esterbauer H. Cytotoxicity and genotoxicity of lipid oxidation product // Am. J. Clin. Nutr. -1993. -V.57, Suppl. -P. 779-786.

132. Fattman C.L., Schaefer L.M., Oury T.D. Extracellular superoxide dismutase in biology medicine // Free Radic. Biol. Med. -2003 -V.35. -P.235-256.

133. Fried R. Enzymatic and non-enzymatic assay of superoxide dosmutase // Bi-ochemic. 1975. Vol. 57, №5. -P. 657-660.

134. Gaetani G.F., Ferraris A.M., Rolfo M. et al. // Blood. 1996. -V. 87. -P.1595-1599.

135. Granger D.L., Hibbs J.B.J., Perfect J.R., Durack D.T. Metabolic fate of L-arginine in relation to microbistatic capability of murine macrophages // J. Clin. Invest. -1990. -Vol.85. -P.264-273.

136. Griffin S.V., Chapman P.T., Lianos E.A., Lockwood C.M. The ingibition of myeloperoxidase by ceruloplasmin can be reversed by anti-myeloperoxidase antibodies // Kidney Int. 1999. -Vol. 55. -P. 917-925.

137. Hevel J.M., Marietta M.A. Macrophage nitric oxide synthase -Relationship between enzymebound tetrahydrobiopherin and synthase activity // Biochemistry. -1992. -Vol. 31. P.7160-7165.

138. Hicks M., Wong L, S., Day R.O. Identification of products from oxidation of uric acid induced by hydroxyl radicals // Free Radic. Res. Commn. -1993. -V. 18.-P. 337-351.

139. Jackson G. Лечение рефрактерной стенокардии // Медикография. — 1999. №2. -С. 107-112.

140. Jeroudi М.О., Triana F.J., Bharat S.P., Bolli R. Effect of superoxide dismu-tase and catalase, given separately, on myocardial "stunning" // Amer. J. Physiol.- 1990.- Vol. 253.- P. H889-H901

141. Kalra J., Chaudhary A.K., Massey K.L., Prasad K. Effect of oxygen free radicals, hypoxia and pH on the release of liver lysosomal enzymes // Mol. and Cell. Biochem. -1990. -Vol. 94. -P. 1-8.

142. Kameoka M., Kimura Т., Ikuta K. Superoxide enhances the spread of HIV-1 infection by cell-tocell transmission // FEBS Lett. 2004. Vol. 331.-P. 182186.

143. Kaneko M., Suzuki H., Masuda H. Effects of oxygen free Radicals on Ca2+ binding to cardiac troponin. Jap. Circ. J.- 1992.- V. 56, Suppl.5-P. 12881290

144. Kikuchi K., Nagano Т., Hayakawa H. et al. Real time measurement of nitric oxide produced ex vivo by luminol-H202 chemiluminescence method // J. Biol. Chem. -1993. -Vol. 268. -P. 23106-23110.

145. Kim Y. M., Yamazaki I., Piette L.H. The effect of hemoglobin, hematin and iron on neutrophil inactivation in superoxide generating system // Arch. Biochem. And Biophys. -1994. -Vol. 309. -P. 308-314.

146. Kiryu C., Makiuchi M., Miyazaki J. et al. Physiological production of singlet molecular oxygen in the myeloperoxidase- H202-chloride system // FEBS Lett. -1999. -Vol. 443. -P. 154-158.

147. Kobayaschi T., Satio N., Takemori N. et al. Ultrastructural localization of superoxide dismutase in human skin // Acta Derm, and Venerol.- 1993. -Vol.73. -P. 41-45.

148. Kolb H., Kolb-Bachofen V. Nitric oxide: A pathogenic factor in autoimmunity // Immunol. Today. -1992. -Vol. 13. -P. 157-160.

149. Kukreja R.C., Jesse R.L., Hess M.L. Singlet oxygen: A potential culprit in myocardial injury? // Mol. Cell. Biochem. -1992. -Vol. 111. -P. 17-24.

150. Kurose I., Miura S., Fukumura D. et al. Nitric oxide mediates Kupffer cell-induced reduction of mitochondrial' energization in hepatoma cells: A comparison with oxidative burst // Cancer Res. -1993. -Vol. 53. -P. 2676-2682.

151. Lee S.C., Dickson D.W., Brosnan S.F., Kasadevall A. Human astrocytes inhibit Cryptococcus neoformans growth by a nitric oxide-mediated mechanism // J. ExP. Med. -1994. -Vol. 180. -P. 365-369.

152. Lefer A.M., Lefer D.J. Enlotelial dysfunction in myocardial ischemia and reperfusion: role of oxygen -derived radicals // Basic Res. Cardiol. -1991. -Vol. 86, Suppl.2. -P. 109-116.

153. Lefer D.J., Ma X.-L., Lefer A.M. A comparison of vascular biological actions of carbon monoxide and nitric oxide // Meth. and Findings Exp. and. Clin. Pharmacol. -1993. -Vol. 15. -P. 617-622.

154. Lepoivre M., Raddassi K., Oswald I. et al. Antiproliferative effect of NO synthase product //Res.Immunol. -1991. -Vol. 142.-P. 580-583.

155. Link E.M. Why is H202 cytotoxicity pH-dependent? // Free Radicals, methodology and concepts. -1988. -P. 539-550.

156. Lock R., Dahlgren C. Characteristics of the granulocyte chemiluminscence reaction following an interaction between human neutrophyls and Salmonella typhimurium bacteria // Acta Pathol. Microbial. Immunol. Scand. -1988. -V. 96. -P. 299-306.

157. Lovaas E. Free radical generation and coupled thiol oxidation by lactoperox-idase / SCN7 H202 // Free Radical Biol, and Med. -1992. -Vol. 13. -P. 187195.

158. Lowe H., Baeger I., Blastig I.E. et al. Oxygen radicals attenuate the contractility of skinned muscle fibres from the pig myocardium. Pharmacia.- 1994.-V. 49.- P. 845-849

159. Mailer K. Superoxide radical as electron donor for oxidative phosphorylation of ADP // Biochem. and Biophys. Res. Commun.-1990. -Vol.170. -P.59-64.

160. Marklund S.L. Ceruloplasmin, extracellular-superoxide dismutase and scavenging of superoxide anion radicals. J. Free Rad. Biol. Med.- 1987.-V.2.-P.255-260

161. Marklund S.L., Karlsson K. Extracellular- superoxide dismutase, distribution in the body and therapeutic implication // Antioxidants in Therapy and Preventive Medicine. -N.Y.: Plenum Press, 1990. -P. 1-4.

162. Meljova Z., Esteban M. Inhibition of vaccine virus DNA replication by inducible expression of nitric oxide sinthase // J. Immunol.-1995.- Vol. 155. -P. 5711-5718.

163. Min K.C., Kovall R.A., Hendrickson W.A. Crystal structure of human a-tocopherol transfer protein bound to its ligand: implication for ataxia with vitamin E deficiency // Proc. Natl. acad. Sci. USA. 2003. -V.100.-P. 14711478.

164. Naidu K.A-. Vitamin C in human health and disease in still a mystery? An overview //Nutr. J. -2003 -V. 2. -P. 7-16.

165. Nathan C.F.,Hibbs J.B. Role of nitric oxide synthesis in macrophage antimicrobial activity // Current Opinion Immunol. -1991. -Vol. 3. -P. 65-70.

166. Nohl H. Is redox-cycling ubiquinone involved in mitochondrial oxygen activation? // Free Radical Res. Commun. -1990. -Vol.8 -P. 307-315.

167. Petersen S.V., Oury T.D., Ostergaard L. et al. Extracellular superoxide dis-mutase (ES-SOD) binds to type I collagen and protects against oxidative fragmentation // J. Biol. Chem. -2004. -V. 279. -P.1370-1371.

168. Pigeolet E., Corbisier P., Houbion A. et al. Glutatione peroxidase, superoxide dismutase, and catalase inactivation by peroxides and oxygen derived free radicals // Mech. Age Dev. -1990. -Vol. 51.-P. 283-297.

169. Rashba-Step J., Turro N.L., Cederbaum A.I. ESC studies on the production of reactive oxygen intermediates by rad liver microsomes in the presence of NADPH orNADH//Arch. Biochem. Biophys. 1993. V. 300. -P. 401-408/

170. Reiter A., Klinger W. The influence of systemic hypoxia and reoxygenation on the glutathione redox system of brain, liver, lung and plasma in newborn rats // Exp. Toxicol, and Pathol. -1992. -Vol. 44/ -P.339-343.

171. Reiter R.J., Guerrero J.M., Garsia J.J., Acuna-Castroviejo D. Reactive oxygen intermediates, molecular damage, and aging. Relation to melatonin // Ann. N.Y. Acad. Sci. -1998. Vol.854. - P.410-424.

172. Reiter R.Y., Tan D., Gabrera J. et al. The oxidant/antioxidant network: role of melatonin // Biol. Signals Recept. -1999. Vol.8. - P.56-63.

173. Reiter R.Y., Tan D., Poeggeler B. et al. Melatonin, free radicals and cancer initiation // Advances in Pineal Research.-Vol. 7.-London: John Libbey & Company Ltd., 1994.-P.211-228.

174. Sandstrom P. A., Roberts B., Folks T. M., Buttke T.M. HIV gene expression enhances T cell susceptibility to hydrogen peroxide-induced apoptosis // AIDS Res. and Human Retrovirules. 1994.-Vol.9.-P.l 107-1113.

175. Sato M., Gitlin J.D., Mechanism of copper incorporation during the biosynthesis of human ceruloplasmin // J. Biol. Chem. -1991. -Vol. 266. -P. 51285134.

176. Sazontova T.G., Zhukova A.G., Zenina T.A., Belkina L.M. Antioxidant defense and sensitivity to free radical oxidation in ischemic and ischemic/ re-perfused myocardium of Wistar and August rats. // Hypoxia Med. -2002 -V. 10.-P. 25-31.

177. Schubert J., Wilmer J.W. Does hydrogen peroxide exist "free" in biological systems? // Free Radical Biol, and Med. -1991. Vol.11. - P.545-555.

178. Shattock M.L., Matsuura H. Measurement of Na+, K+ -pump Current in isolated rabbit ventricular myocytes using the whole-cell voltage-clamp technique: Inhibition of the pump by oxidant stress. Circ. Res.- 1993.- V. 72.-P.91-101

179. Shi X., Dalai N.S. Flavoenzymes reduce vanadium (V) and molecular oxygen and generate hydroxyl radical // Arch. Biochem. and Biophus. -1991. -Vol. 289.-P. 355-361.

180. Shindu M., Nonaka S., Nishimukai H. et al. Activation of complement in normal serum by hydrogen peroxide and hydrogen peroxide- related oxygen radicals produced by activated neutrophils // Clin, and Experim. Immunol. -1992.-Vol. 90.-P. 72-78.

181. Snyder S.H., Nitric oxide- 1st in a new class of neurotransmitters // Science.-1992. -Vol.257. -P. 494-496.

182. Sohal R.S., Svensson I., Brunk U.T. Hydrogen peroxide production by liver mitochondria in different species // Mech. Ageing and Develop. -1990. -Vol. 53.-P. 209-215.

183. Spitsin S.V., Scott J.S., Mikheeva T. et al., Comparison of uric acil and ascorbic acid in protection against EAE // Free Radic. Biol. Med. -2002. -V. 33.-P. 1363-1371.

184. Stadtman E.R. Protein oxidation and aging // Science. -1992. -Vol. 257. -P. 1220-1224.

185. Stamler J.S., Jaraki O., Osborne J. et al. Nitric oxide circulates in mammalian plasma primarily as an S-nitroso adduct of serum albumin // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1992. -Vol. 89. -P. 7674-7677.

186. Summersgill J.T., Powell L.A., Buster B.L. et al. Killing of Legionella pneumophila by nitric oxide in gamma-interferon-activated macrophages // J. Leukocyte Biol. -1992. -Vol. 52.- P. 625-629.

187. Sundqvist T. Bovine aortic endothelial sells release hydrogen peroxide // G. Sell. Physiol.-1991. -Vol.148. -P.152-156.

188. Van der Meide P.H., De Labie M.C.D.C., Botman C.A.D. et al. Mercuric chloride down-regulates T cell interferon-y production in brown normal but not in lewis rats: role of glutathione // Eur. J. Immunol. -1993. -Vol. 23. -P 675-681.

189. Vanasbeck B.S. Involvement of oxygen radicals and blood cells in the pathogenesis of ARDS by endotoxin and hyperoxia // Appl. Cardiopulm. and Pathophysiol. -1991. -Vol. 4.-P. 127-138.

190. Vanasbeck B.S. Involvement of oxygen radicals and blood cells in the pathogenesis of ARDS by endotoxin and hyperoxia // Appl. Cardiopulm. and Pathophysiol.-1991.Vol. 4.- P.127-138.

191. Verma A., Hirsch D.J., Glatt C.E. et al. Carbon monoxide: A putative neural messenger// Science. -1993. -Vol.259. -P. 381-384.

192. Wagner K. -H., Kamal-Eldin A., Elmadfa I. Gamma-tocopherol -an underestimated vitamin? //Ann. Nutr. Metab. -2004. -V.48. -P. 169-188.

193. Wasawa T., Matsuoka A., Tajima G. et al. Hydrogen peroxide plays a key role in the oxidation reaction of myoglobin by molecular oxygen: A computer simulation // Biophys. J.- 1992.- Vol 63.- P. 544-550

194. Wilson J., Winter M., Shadby D.N. Oxidants, ATP depletion, and endothelial permeability to macromolecules // Blood. -1990. -Vol. 76. -P. 25782582.

195. Wu S.M., Pizzo S.V. Mechanism of hypochlorite-mediated inactivation of proteinase inhibition by alpha 2-macroglobulin // Biochemistry. -1999. -Vol. 38. -P.13983-13990.

196. Zamara E., Novo E., Marra F. et al., 4- hydroxynonenal as a selective pro-fibrogenic stimulus for activated human hepatic stellate cells // J. Hepatol. -2004. -V.40. -P. 60-68.

197. Zhang Q.-M., Yones S. Induction of manganese-superoxide dismutase by membrane-binding drugs in Escherichia coli // J. Bacterid. -1991.-Vol. 173.-P.3488-3491.

198. Zhu L., Gunn C., Beckman J.S. Bactericidal activity of peroxynitrite // Arch. Biochem. and Biophus. -1992. -Vol. 298. -P. 452-457.

Информация о работе

Гуськова, Елена Николаевна
кандидата биологических наук
Ростов-на-Дону, 2009
ВАК 03.00.04

Диссертация

Влияние СКЭНАР-воздействия на свободнорадикальные процессы в тканях и мембранах эритроцитов при окислительном стрессе - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы