Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Физико-химическая характеристика мембран эритроцитов крыс при гипотермии и на фоне введения даларгина

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Саидов, Магомедрасул Будаевич

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Влияние гипотермии на физико-химические параметры мембран.

1.2. Защитные эффекты даларгина при различных экстремальных состояниях.

ГЛАВА II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Обоснование выбора объекта исследования.

2.2. Искусственное охлаждение животных.

2.3. Методика инъекций животным.

2.4. Препаративные методы исследования.

2.4.1. Получение плазмы крови и эритроцитов.

2.5. Биохимические и биофизические методы исследования.

2.5.1 Определение свободного гемоглобина в плазме крови.

2.5.2. Определение кислотной резистентности эритроцитов.

2.5.3.0пределение перекисной резистентности эритроцитов.

2.5.4. Определение МДА в эритроцитах.

2.5.5. Определение поверхностного заряда мембран эритроцитов.

2.5.6. Определение гематокритной величины.

2.5.7.0пределение структурных параметров мембран эритроцитов.

2.5.7.1. Микровязкость липид-липидных контактов мембран эритроцитов.

2.5.7.2. Микровязкость зон белок-липидных контактов мембран эритроцитов.

2.5.7.3. Определение погруженности белка в липидный бислой.

2.5.8. Определение активности Na, К-АТФазы в эритроцитах.

2.5.9. Определение неорганического фосфора.

2.5.10. Анализ содержания ионов натрия и калия в плазме и эритроцитах.

2.5.11. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Кинетика кислотного гемолиза и содержание свободного гемоглобина в плазме крови крыс при гипотермии и на фоне введения даларгина.

3.2. Содержание МДА и перекисная резистентность эритроцитов крыс при гипотермии на фоне введения даларгина.

3.3. Поверхностный заряд мембран эритроцитов крыс при гипотермии и введении даларгина.

3.4.Структурные параметры мембран эритроцитов крыс при гипотермии и на фоне введения даларгина.

3.5. Активность Na, К-АТФазы мембран эритроцитов и содержание ионов Na+ и К+ в плазме и эритроцитах при гипотермии на фоне введения даларгина.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Физико-химическая характеристика мембран эритроцитов крыс при гипотермии и на фоне введения даларгина"

Актуальность проблемы. Гипотермия как метод снижения кислородных запросов организма в последнее время широко используется в различных областях медицины (Мешалкин, Верещагин, 1985; Бабийчук и др., 1990). Защитный эффект гипотермии связан со снижением обменных процессов, приводящим к повышению устойчивости организма к воздействию многих неблагоприятных факторов, прежде всего гипоксии, обычно сопутствующая различным видам патологий (Тимофеев, 1983; Сумбатов, 1985; Эмирбеков, Львова, 1985; Leietal., 1994).

Наряду с благоприятным эффектом гипотермия оказывает и патологическое действие. Установлено, что гипотермия вызывает дискоординацию метаболических процессов в тканях, имеющие длительные постгипотермические последствия (Тимофеев, 1983; Кличханов, 2001).

Основой формирования адаптационных процессов в организме служат биологические мембраны. Считается, что основной мишенью действия низкой температуры на клеточном и субклеточном уровне являются биологические мембраны (Тимофеев, 1983; Эмирбеков, Львова, 1985; Гулевский и др., 1988). Под действием низкой температуры могут изменятся структурные свойства мембран, проницаемость и лиганд-рецепторные взаимодействия и т.д. (Горди-енко, Гордиенко, 1986; Гулевский и др., 1990; Белоконева и др., 1991; Мальцева и др., 1991).

В то же время биологические мембраны служат основой для формирования адаптационных процессов в организме (Крепе, 1981). Поэтому, при изучении механизмов действия гипотермии важно особое внимание уделять исследованиям, направленным на выявление изменений в структуре и свойствах клеточных и субклеточных биомембран.

В связи с важнейшей ролью процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в развитии стресс-реакции (Меерсон, 1993; Кулинский, Ольховский, 1992), в том числе и низкотемпературного стресса (Василькова, Кухта, 1988;

Линчевская, Кондратьева, 1989; Эмирбеков и др., 1991; Бородин и др., 1992) и регуляции структурного состояния биомембран (Гулевский и др., 1990), возникает необходимость изучения интенсивности сврбодно-радикальных процессов, транспортных процессов и структурного состояния мембран эритроцитов при низких температурах тела. Это даст возможность судить об особенностях развития патологических и адаптационно-приспособительных реакций при гипотермии.

В последние годы получены убедительные данные, свидетельствующие о способности опиоидных пептидов, в частности, даларгина, препятствовать развитию стресса и стрессорной активации метаболических процессов (Дворцин, Шаталов, 1991; Маслова и др., 1991; Лишманов, Маслов, 1994). Наряду с анти-стрессорным эффектом даларгин обладает и антиоксидантным действием (Шлюзников и др., 1990; Короткина и др., 1992), в том числе и в условиях гипотермии (Львова и др., 1993). В условиях гипотермии даларгин оказывает и мем-браностабилизирующий эффект (Кличханов и др., 1997).

В связи с вышеизложенным представляется важным использование даларгина для коррекции изменений в мембранах эритроцитов в условиях низкой температуры тела.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось выяснение механизмов изменения структурно-функционального состояния мембран эритроцитов при гипотермии 30 и 20°С, а также выяснение возможности химической коррекции обнаруженных изменений путём введения опиоидного гекса-пептида даларгина.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать кинетику кислотного гемолиза эритроцитов и содержание свободного гемоглобина в плазме крови крыс.

2. Исследовать интенсивность процессов ПОЛ в мембранах эритроцитов по анализу содержания МДА, изменению поверхностного заряда мембран эритроцитов с помощью отрицательно заряженного зонда АНС" и пере-кисной резистентности эритроцитов.

3. Исследовать состояние транспортных процессов в мембранах эритроцитов по анализу активности Na, К-АТФазы и содержания ионов Na+ и К+ в эритроцитах и плазме крови.

4. Изучить структурные свойства мембран эритроцитов путем определения относительной микровязкости липидного бислоя, зон белок-липидных контактов и степени погруженности белков в липидный бислой. Основные положения, выносимые на защиту.

1. Начальные этапы гипотермии стимулируют свободно-радикальные процессы, которые ведут к изменению структурно-функционального состояния мембран эритроцитов.

2. Опиоидный гексапептид даларгин при предварительном внутрибрюшин-ном введении препятствует активации процессов ПОЛ при умеренной гипотермии в эритроцитах и стабилизирует структурно-функциональные параметры мембран эритроцитов. Эффект даларгина зависит от глубины гипотермии.

Научная новизна. В настоящей работе впервые проведены систематические исследования структурно-функциональных характеристик мембран эритроцитов крыс при гипотермии разной глубины.

Установлено, что при умеренной гипотермии, в отличие от глубокой, в мембранах эритроцитов крыс интенсифицируются процессы ПОЛ, что ведёт к дестабилизации мембран эритроцитов, ускорению внутрисосудистого гемолиза и снижению кислотной резистентности.

Обнаружено, что гипотермия разной глубины (30 и 20°С) способствует активации Na, К-АТФазы мембран эритроцитов. В то же время изменяется ионный состав эритроцитов и ионная асимметрия между эритроцитами и плазмой крови, что указывает на нарушение барьерных свойств эритроцитов при низкой температуре тела.

Впервые установлено зависимое от температуры тела, изменение структурных параметров мембран эритроцитов.

Выявлена возможность коррекции процессов ПОЛ и структурно-функциональных характеристик мембран эритроцитов при гипотермии путём внутрибрюшинного введения даларгина.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные данные представляют интерес для понимания механизмов патогенеза холодового повреждения, а также формирования адаптационных механизмов к действию низкой температуры на теплокровный организм. Практическая значимость данной работы определяется возможностью использования структурно-функциональных показателей для оценки тяжести холодового воздействия при гипотермии. Результаты работы указывают на возможность применения даларгина в системе лечебных и профилактических мероприятий при гипотермии.

Материалы, полученные при выполнении данной диссертации, используются в учебном процессе кафедры биохимии Дагестанского госуниверситета и Махачкалинского филиала Ростовского госуниверситета, при чтении ряда спецкурсов и больших практикумов. Методические аспекты работы включены в учебное пособие «Практикум по биохимии» (Ростов/Дон, 2001), рекомендованное для студентов университетов биологических специальностей.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на ежегодных итоговых научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава ДГУ (1997, 1998), на 12 Европейской международной нейрохимической конференции (Санкт-Петербург, 1998), на IV ассамблее университетов прикаспийских государств (Астрахань, 1999), на международной конференции посвященной 50-летию ДНЦ РАН (Махачкала, 1999), на международной конференции «Свободнорадикальные процессы: экологические, фармакологические и клинические аспекты» (Санкт-Петербург, 1999), на 1-м Кавказском симпозиуме по медико-биологическим наукам (Тбилиси, 1999), на Всероссийской конференции «Химия в технологии и медицине» (Махачкала, 9

2001), на совместном заседании кафедры биохимии и НИИ биологии ДГУ (Махачкала, 2001).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 работ.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Саидов, Магомедрасул Будаевич

ВЫВОДЫ

1. Низкая температура тела приводит к снижению кислотной резистентности эритроцитов и «старению» клеток, которое выражается в накоплении в крови количества среднестойких эритроцитов и исчезновении из сосудистого русла высокостойких эритроцитов, а также существенным сокращением общего времени гемолиза. Результатом дестабилизации мембраны эритроцитов при гипотермии является и ускорение внутрисосудистого гемолиза эритроцитов.

2. Умеренная гипотермия стимулирует процессы ПОЛ мембран эритроцитов. Стимуляция ПОЛ сопровождается накоплением МДА, повышением отрицательного поверхностного заряда и снижением перекисной резистентности эритроцитов. При глубокой гипотермии интенсивность процессов ПОЛ несколько снижается по сравнению с умеренной гипотермией.

3. Исследование структурных параметров мембран эритроцитов не выявило влияния гипотермии на относительную микровязкость «общего» липида. Низкая температура тела, независимо от уровня гипотермии, снижает микровязкость зон белок-липидных контактов мембран эритроцитов. В зависимости от температуры тела изменяется погруженность белков в липидный бислой мембраны.

4. Гипотермия, и в особенности умеренная, существенно активирует Na, К-АТФазу эритроцитов. Повышение активности Na, К-АТФазы не предотвращает изменение содержания ионов Na+ и К+ в эритроцитах при гипотермии что свидетельствует об изменении барьерных свойств мембран эритроцитов при глубокой гипотермии.

5. Даларгин оказывает выраженный защитный эффект при гипотермии. Предварительное внутрибрюшинное введение даларгина снижает интенсивность ПОЛ, увеличивает кислотную резистентность и сохраняет весь спектр популяций эритроцитов в крови, удлиняет длительность гемолиза, снижает ин

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время в медико-биологической науке внимание криобиологов сосредоточено в основном на изучении возможностей обратимого охлаждения живого. Искусственное обратимое снижение температуры тела теплокровного организма остаётся сложной проблемой, решение которой дало бы эффективное средство биологической защиты. Переносимость глубокого снижения температуры зимоспящими животными свидетельствует о принципиальной возможности решения этой проблемы.

Уже несколько десятилетий искусственная гипотермия широко применяется не только в экспериментальной биологии, но и в различных областях клинической медицины (Волколаков, Лацис, 1977; Мешалкин, Верещагин, 1985; Бабийчук и др., 1990).

Гипотермию применяют, в основном, для уменьшения потребности в энергии при низких температурах тела, что повышает выживаемость клеток тканей при гипоксических состояниях, возникающих при пережатии кровеносных сосудов (Тимофеев, 1983; Сумбатов, 1985; Эмирбеков, Львова, 1985). Однако, снижение температуры теплокровного организма небезразлично для него и имеет негативные последствия.

Исследования последних лет свидетельствуют о том, что патологическое действие низкой температуры на теплокровный организм реализуется через изменение клеточной мембраны (Шепелев и др., 1984; Эмирбеков, Львова, 1985; Гулевский и др., 1988).

Удобным объектом для выяснения участия клеточных структур в адаптивном ответе является эритроцит, вследствие известной простоты его внутриклеточной организации и возможности получения плазматической мембраны в наиболее чистом виде (Морозова, Репина, 1990).

Ряд авторов (Шепелев и др., 1984; Василькова, Кухта, 1988; Линчевская, Кондратьева, 1989) считают, что активация свободно-радикальных процессов может быть одним из пусковых механизмов развития гипотермической патологии. Для оценки роли свободно-радикальных процессов при гипотермии нами была исследована интенсивность процессов ПОЛ в эритроцитах. Оказалось, что при умеренной гипотермии содержание одного из промежуточных продуктов ПОЛ МДА увеличивается почти 1,5 раза. Эти результаты свидетельствуют об активации процессов пероксидации липидов мембран эритроцитов при гипотермии 30°С.

Интенификация процессов ПОЛ в эритроцитах при умеренной гипотермии может быть связано с повышенным образование активных форм кислорода как в самих эритроцитах, так и в плазме крови под действием низкотемпературного стресса. Снижение концентрации восстановленного глутатиона а также НАД Н2 в эритроцитах при умеренной гипотермии (Василькова, 1988), может способствовать окислению гемоглобина в метгемоглобин и генерации супероксида.

Установлено, что каталаза и НАД Н2 защищают эритроциты от кратковременной экзогенной перекиси водорода, а восстановленный глутатион необходим для защиты от постоянного низкого уровня перекиси водорода и радикалов кислорода, образующихся эндогенно (Dumaswala et al., 1999).

Снижение уровня восстановленного глутатиона указывает, с одной стороны, на его расходование в реакциях ПОЛ, с другой может быть одним из факторов способствующий интенсификации ПОЛ.

Как установлено (Ситожевский и др., 1997) гемовое и негемовое железо эритроцитов участвуют в разложении гидропероксидов в липидной фазе, в реакции подобной реакции Фентона. Как полагают, негемовое железо в эритроцитах находится в железосвязывающих центрах, локализованных на цитоплазти-ческой стороне плазматической мембраны эритроцита в связанном с отрицательно заряженными фосфолипидами (фосфатидилсерин, фосфатидилэтанола-мин). Считают, что содержание негемового железа в мембране, в основном, определяет интенсивность ПОЛ и устойчивость к оксидативному стрессу (Ситожевский и др., 1997).

При умеренной гипотермии и в плазме крови усиливаются процессы ПОЛ (Эмирбеков и др., 1995).

Важную роль в активации ПОЛ в плазме крови при умеренной гипотермии играет гемовое и негемовое железо, концентрация которых возрастает в крови 3-4 раза (Халилов и др., 1998). Другим источником свободных радикалов кислорода может служить реакция окисления адреналина в адренохром. При умеренной гипотермии в плазме крови многократно возрастает содержание адреналина и норадреналина (Шкестерс и др., 1991; Козырева и др., 1999).

В тоже время при глубокой гипотермии интенсивность процессов ПОЛ в эритроцитах снижается до контрольного уровня. Причиной снижения содержания МДА при глубокой гипотермии может быть, с одной стороны, торможение генерации свободных радикалов из-за низкой температуры, с другой - с мета-болизацией МДА в эритроцитах (Банкова и др., 1988). Кроме того снижение концентрации МДА в эритроцитах возможно связано частично с участием в образовании межмолекулярных сшивок (Костюк и др., 1984) в мембранах, частично с вымыванием этого альдегида из мембраны, как гидрофильное соединение.

В норме мембрана эритроцита устойчива к окислительному стрессу. Это достигается как за счёт структурной организации мембраны, так и за счёт наличия в ней липофильных антиоксидантов. Анализ перекисной резистентности позволяет оценить нативность мембраны и её обеспеченность антиоксиданта-ми. Исследование перекисного гемолиза эритроцитов выявило снижение перекисной резистентности эритроцитов при гипотермии. Оказалось, что чем ниже температура тела тем ниже устойчивость эритроцитов к активным формам кислорода. Эти результаты свидетельствуют о том, что при гипотермии снижается обеспеченность мембран эритроцитов токоферолом (Воскресенский, Туманова, 1982). Большая доступность липидов мембран эритроцитов гипотермирован-ных животных активным формам кислорода в условиях in vitro свидетельствует о нарушении упаковки липидного бислоя мембран эритроцитов в результате активации их фосфолипазного гидролиза. В результате действия фосфолипаз или ПОЛ мембрана приобретает отрицательно заряженные группы (Владимиров, 1989). Исследование взаимодействия отрицательно заряжённого зонда АНС" с мембранами эритроцитов подтвердил факт повышения поверхностного отрицательного заряда мембран эритроцитов при гипотермии. Существенную роль в повышении отрицательного поверхностного заряда на мембране при гипотермии играет появление в мембране гидрофильных продуктов, а также свободных жирных кислот (Линчевская, Кондратьева, 1989). При ПОЛ биологических мембран, наряду с повреждением липидного слоя, происходит модификация мембранных белков, что оказывается небезразличным для проницаемости мембран. В первую очередь при ПОЛ поражаются сульфгидрильные группы белков как напрямую, в реакциях SH-групп со свободными радикалами, так и ферментативным путём, с участием фермента глутатионпероксидазы и гидроперекисей липидов (Владимиров, 1989). При гипотермии обнаружено повышение окислительной модификации как плазменных, так и мембранных белков эритроцитов (Эмирбеков и др., 1995; Кличханов и др., 1998).

Пероксидация липидов и окислительная модификация мембранных белков является причиной старения эритроцитов (Козлова и др., 1998). При гипотермии нами выявлено ускоренное старение эритроцитов. Так, при гипотермии как при умеренной, так и глубокой значительно увеличивается процентное содержание среднестойких эритроцитов на фоне снижения повышенностойких и высокостойких форм. Популяция сверхвысокостойких эритроцитов, при этом, исчезает из кровяного русла. Нужно отметить, что более выраженные изменения в качественном составе эритроцитов наблюдается при гипотермии 20°С.

Активация ПОЛ, фосфолипазного гидролиза и окисление SH-групп мембранных белков способствует появлению катионной проницаемости у мембран эритроцитов, что приводит к их коллоидно-осмотическому гемолизу (Владимиров, 1989). О том, что при низкой температуре увеличивается количество гемо-лизирующихся эритроцитов свидетельствуют данные В.И. Кидалова и В.Ф.

Лысака (1987). Они с помощью электронной микроскопии установили друкрат-ное увеличение гемолизирующих форм эритроцитов в крови крыс при гипотермии. Помимо повышения концентрации свободного гемоглобина при гипотермии в плазме крови также увеличивается содержание железа (Кличханов и др., 1997). Как гемовое, так и негемовое железо, участвуя в реакциях Фентона, генерирует свободные радикалы кислорода (Владимиров и др., 1991), что служит дополнительным фактором инициации свободно-радикального окисления белков и липидов плазмы и форменных элементов крови при гипотермии. Кроме того, гемоглобин и его продукты деструкции, разносимые кровью, попадая в ткани, могут служить центрами радикалообразования в этих тканях.

Активация процессов ПОЛ влияет на структурно-функциональные свойства мембран клеток. Нами показано, что коэффициент эксимеризации пирена при исследованных нами уровнях гипотермии не меняется. По-видимому, ли-пидная фаза мембраны эритроцитов, в котором расстворены молекулы зонда, сама по себе не претерпевает существенных изменений при гипотермии (табл. 7, рис. 8).

В тоже время зависимо от уровня гипотермии изменяется другой параметр - коэффициент эксимеризации пирена F3/FM (282), характеризующий текучесть аннулярных липидов мембран (Владимиров, Добрецов, 1980). При гипотермии 30°С коэффициент эксимеризации пирена повышается на 32%, а при гипотермии 20°С на 50%.

Таким образом, полученные нами результаты указывают на зависимое от температуры тела снижение микровязкости зон белок-липидных контактов, или повышение текучести аннулярных липидов.

Исследование интенсивности безызлучательного переноса энергии электронного возбуждения с тринтофановых остатков мембранных белков на пирен при гипотермии 30°С выявило снижение эффективности переноса энергии (F0-F)/Fo с белков на пирен на 32%, что может быть следствием структурных перестроек в мембранных белках эритроцитов. При глубокой гипотермии, в отличие от умеренной, эффективность переноса энергии с триптафановых остатков мембранных белков на пирен возрастает.

Можно предположить, что при умеренной гипотермии уменьшается степень погружености мембранных белков в липидный бислой. Причиной уменьшения погруженности белков в липидный бислой может быть появление на поверхности мембранных белков гидроперекисных группировок. Известно, что под действием АФК белки подвергаются окислительной модификации (Gebicki, Gebicki, 1993; Gebicki,1997). В то же время АФК и поперечно-сшивающие продукты ПОЛ, избыточно образующиеся в крови при гипотермии, могут приводить к олигомеризации мембранных белков.

Поскольку известно, что окислительно модифицированные белки легче и быстрее гидролизуются специфическими протеиназами (Stadtman, 1992), можно предположить, что возрастание эффективности переноса энергии электронного возбуждения с трипфановых остатков мембранных белков на пирен при гипотермии 20°С связано с диссоциацией мембранных белков за счёт активации эндогенных протеиназ, с одной стороны, и увеличением погружения мембранных белков в липидный бислой, с другой.

Таким образом, при гипотермии наблюдается изменение структурной организации мембран эритроцитов крыс, которое проявляется в изменении структурных перестроек в мембранных белках. Такие изменения в мембранах в первую очередь отражается на работе интегральных белков и ферментов. Одним из важных интегральных ферментов мембран эритроцитов является Na, К-АТФаза, участвующая в регуляции ионного гомеостаза в клетке. Нами обнаружено, что гипотермия как умеренная, так и глубокая приводит к возрастанию активности Na, К-АТФазы мембран эритроцитов. Однако, при гипотермии 20°С активность Na, К-АТФазы снижена по сравнению с гипотермией 30°С, хотя остаётся достоверно выше контроля.

Важным регулятором активности Na, К-АТФазы является холестерин. Включение холестерина в мембраны эритроцитов приводит к повышению микровязкости мембранных липидов и уменьшению активности Na, К-АТФазы (Торховская и др., 1980; Халилов и др., 1982; Таганович и др., 1985). В то же время снижение содержания холестерина в мембранах эритроцитов сопровождалось уменьшением микровязкости мембран и возрастанием активности Na, К-АТФазы мембран эритроцитов (Бородин, 1986).

Данные А.А. Линчевской и Л.А. Кондратьевой (1989) свидетельствуют о том, что при гипотермии достоверно снижается содержание холестерина в мембранах эритроцитов крыс. При этом соотношение холестерин/фосфолипид снижается с 0,6 в норме до 0, 52 при гипотермии. Исходя из этого, можно думать, что повышение активности Na, К-АТФазы, обнаруженное нами при гипотермии, частично связано со снижением холестерина в мембранах эритроцитов. Снижение микровязкости зон белок-липидных контактов, обнаруженное нами при гипотермии, видимо, также отражает снижение в этих зонах содержания холестерина. Известно, что при гипотермии в мембранах эритроцитов увеличивается содержание ненасыщенных жирных кислот (Шепелев, 1978). Учитывая важность низкой вязкости аннулярных липидов в функционировании Na, К-АТФазы, вышеприведённые результаты в какой то мере объясняют повышение активности Na, К-АТФазы при гипотермии.

Na, К-АТФаза является тиоловым ферментом и содержит 34 SH-группы на каталитическую субъединицу (Модянов и др., 1988). Для фермента важно поддержание тиоловых групп в восстановленном состоянии (Чеснокова, Ку-ляш, 1985). Восстановленное состоянии сульфгидрильных групп мембранных белков обеспечивается глутатионовой системой эритроцитов (Кулинский, Ко-лесниченко, 1990). По данным Т.В. Васильковой (1988) при гипотермии 33-34°С в эритроцитах снижается содержание GSH на 14%. Однако, активность ферментов, участвующих в восстановлении глутатиона-глутатионредуктазы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы при этом повышалось. Гипотермия 24-25°С не изменяет содержание глутатиона, но достоверно снижает активности глутати-онредуктазы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах. Можно предподожить, что небольшое снижение глутатиона восстановленного в эритроцитах при умеренной гипотермии отражает его участие в восстановлении тиоловых групп мембранных белков, в том числе и Na, К- АТФазы.

Хотя активность Na, К-АТФазы эритроцитов при гипотермии повышается, это однако не способствует стабилизации уровня ионов Na+ и К+ в эритроцитах. Так, при гипотермии концетрация ионов Na+ повышается, а концентрация ионов К+ снижается в эритроцитах.

Одной из причин нарушения ионного гомеостаза эритроцитов при гипотермии может являться разобщение АТФ-гидролизующей и ион-транспортирующей функции Na, К-АТФазы. Разобщение гидролиза АТФ Na, К-АТФазой с активным транспортом ионов было обнаружено при развитии окислительного стресса (Болдырев и др., 1995). Другой возможной причиной нарушения ионного состава эритроцитов при гипотермии может быть появление каналов утечки для ионов Na+ и К+. Установлено, что увеличение пассивной проницаемости для ионов зависит от интенсивности процессов ПОЛ в мембране (Атауллаханов и др., 1986).

Таким образом, гипотермия приводит к активации Na, К-АТФазы эритроцитов. Однако это не приводит к стабилизации уровня ионов Na+ и К+ в эритроцитах при низких температурах тела.

Анализируя полученные нами результаты можно заключить, что на начальных этапах гипотермии существенно ускоряются процессы свободно-радикального окисления. Под действием АФК происходит активация процессов ПОЛ как в плазме, так и форменных элементах крови. Повышенный уровень ПОЛ мембран эритроцитов ответственен за структурно-функциональные изменения мембран этих клеток.

Одной из основных причин активации ПОЛ при гипотермии является развитие низкотемпературного стресса. Поэтому для коррекции свободно-радикальных процессов при гипотермии целесообразно использовать препараты обладающие стресс-лимитирующими свойствами. Одним из таких препаратов является синтетический аналог лей-энкефалина - гексапептид даларгин (Маслова и др., 1991; Дворцин, Шаталов, 1991; Лишманов и др., 1997).

Наши результаты свидетельствуют о том, что введение даларгина способствует предотвращению активации процессов ПОЛ эритроцитов при гипотермии. Так, у крыс с температурой тела 30°С даларгин достоверно снижает содержание МДА в эритроцитах по сравнению с гипотермией без введения этого пептида. В условиях глубокой гипотермии, на фоне введения даларгина полностью нормализуется уровень МДА в эритроцитах.

О том, что даларгин предотвращает ПОЛ при гипотермии свидетельствует также данные о его влиянии на поверхностный заряд эритроцита. Даларгин предотвращает повышение отрицательного поверхностного заряда эритроцитов при гипотермии.

Поскольку в условиях окислительного стресса повышение отрицательного поверхностного заряда связано с появлением гидрофильных продуктов ПОЛ (Владимиров, 1989), то отсутствие изменения поверхностного заряда на фоне введения даларгина свидетельствуют о торможении образования свободных радикалов этим пептидом при низких температурах тела.

Помимо предотвращения активации свободно-радикальных процессов даларгин предотвращает снижение перекисной устойчивости эритроцитов при низких температурах тела. Защитное действие даларгина на перекисную резистентность эритроцитов, возможно, связано с ограничением процессов ПОЛ, в результате чего сохраняются запасы антиоксидантов в клетках тканей при низкой температуре.

Поскольку процессы ПОЛ существенно влияют на структурные свойства липидов биомембран (Владимиров, 1989), то интерес представляет исследование влияния даларгина на микровязкость липидного бислоя эритроцитарных мембран. Оказалось, что как у контрольных так и у животных с низкой температурой тела даларгин не влияет на микровязкость липидной фазы мембраны эритроцита. В то же время даларгин оказывает влияние на микровязкость белок-липидных зон мембраны эритроцита. Так, у контрольных животных при введении даларгина наблюдается тенденция к снижению микровязкости аннулярных липидов. Однако в условиях гипотермии даларгин предотвращает снижение микровязкости зон белок-липидных контактов. Таким образом, даларгин стабилизирует белок-липидные контакты в мембранах эритроцитов при гипотермии.

Вышеприведённые данные свидетельствуют о том, что при гипотермии существенно не ускоряются процессы ПОЛ в общей липидной массе мембраны эритроцита. В то же время, аннулярные липиды более подвержены ПОЛ при гипотермии, что может быть связано с увеличением доступности их для проок-сидантов из-за нарушения белок-липидных взаимодействий под действием низкой температуры тела.

Важную роль во взаимодействии белков и липидов в мембране играет структура и площадь гидрофобной поверхности белков, которые определяют степень погруженности их в липидный бислой мембраны.

Даларгин предотвращает зависимое от температуры тела изменение степени погружения белков в липидный бислой эритроцитов при гипотермии, что свидетельствует об определённом стабилизирующем влиянии даларгина на структуру и комформацию мембранных белков при гипотермии. Стабилизирующее влияние даларгина на структуру мембранных белков, возможно, связано с предотвращением окислительной модификации белков из-за снижения уровня АФК и продуктов ПОЛ.

Исследование кинетики кислотного гемолиза эритроцитов также свидетельствуют о стабилизации белковых и липидных компонентов мембран эритроцитов даларгином при гипотермии. У животных с температурой тела 30 и 20°С данный пептид способствует частичной нормализации эритрограммы. Это выражается в сохранении в кровяном русле высокостойких и сверхвысокостой-ких эритроцитов и в удлинении общего времени гемолиза, по сравнению с гипотермией без введения этого пептида. Нормализация кислотной резистентности эритроцитов при введении даларгина частично может быть связано с предотвращением окислительной модификации белковых и липидных компонентов мембран эритроцитов при низких температурах тела. Однако это може быть связано также с предотвращением даларгином стресс-индуцированной полици-темии. На это указывает гот факт, что предварительно введённый даларгин препятствует повышению гематокрита, вызванное гипотермией.

Изменение микровязкости аннулярных липидов под действием даларгина может оказать влияние на активность мембраносвязанных ферментов. Исследование активности Na, К-АТФазы, активность которой существенно зависит от липидного окружения, показало, что даларгин полностью предотвращает активацию фермента, вызываемое умеренной гипотермией. Стабилизация активности Na, К-АТФазы при умеренной гипотермии под действием даларгина способствует нормализации ионного состава эритроцитов. Снижение степени внутрисосудистого гемолиза эритроцитов при умеренной гипотермии на фоне введения даларгина, видимо, также связано в определённой степени со стабилизацией ионного состава эритроцитов и осмотического давления внутри клеток.

Эти результаты свидетельствуют о том, что даларгин препятствует повышению пассивного транспорта ионов в эритроцитах.

Стабилизация ионного состава эритроцитов при умеренной гипотермии даларгином, по-видимому, связана с тем, что этот пептид препятствует избыл i точному вхождению ионов в эритроциты (Лишманов, Маслов, 1994), в результате чего, с одной стороны, предотвращается открытие Са2+-зависимых калиевых каналов (Асланиди и др., 1997), а с другой, активация внутриклеточных фосфолипаз (Белоус, Бондаренко, 1981).

В отличии от умеренной, при глубокой гипотермии даларгин не предотвращает активацию Na, К-АТФазы эритроцитов, не препятствует изменению ионного состава эритроцитов, а также не предотвращает внутрисосудистый гемолиз эритроцитов.

87

Таким образом, эффект даларгина зависит от глубины гипотермии.

Отсутствие защитного эффекта даларгина при глубокой гипотермии может быть связано с рядом причин. Во-первых, при глубокой гипотермии время проходящее с момента инъекции даларгина значительно больше (90 мин) чем при умеренной (50 мин). Учитывая тот факт, что даларгин циркулирует в крови непродолжительное время, а в последующим гидролизуется специфическими пептидазами, можно сказать, что к моменту наступления глубокой гипотермии эффективная концентрация даларгина в крови существенно уменьшается. Во-вторых, известно, что даларгин действует на ткани через специфические рецепторы (Лишманов и др., 1997). В многих работах показано, что при низких температурах тела существенно снижается или полностью теряется чувствительность рецепторов к своим лигандам (Плотников и др., 1987). Можно предположить, что при глубокой гипотермии опиоидные рецепторы теряют чувствительность к лигандам. Потеря чувствительности опиоидных рецепторов к да-ларгину при глубокой гипотермии может быть связано с изменением липидного микроокружения и активацией процессов ПОЛ (Мальцева и др., 1991; Белоко-неваи др., 1991).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Саидов, Магомедрасул Будаевич, Махачкала

1. Аврова Н.Ф. Биохимические механизмы адаптации к изменяющимся условиям среды у позвоночных. Роль липидов. // Журн. эвол. биохим. и физиол. -1999. Т.35, №3. - С.170-180

2. Акимов Г.А., Алишев Н.В., Берштейн В.А., Буков В.А. Общее охлаждение организма. Л.: Медицина, 1977. - 184с.

3. Алекминская Л.А., Лишманов Ю.Б., Слепушкин В.Д., Титов М.И. Энкефалины и состояние симпатико-адреналовой системы при острой ишемии миокарда // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1985. - №5. - С.535-537

4. Алимова Е.К., Максименко В.А., Шепелев А.П. Изменение обмена липидов на разных стадиях острой экспериментальной гипотермии // Физиол. журн. СССР. 1973. - Т.59, №7. - С.814-817

5. Алимова Е.К., Юфит П.М., Аствацатурьян А.Т., Тарасов Е.К. Влияние гипотермии и последующего самосогревания на состав липидов различных органов и биосинтез их в печени // Изв. Сев.-Кавк. научн. центра высш. школы. Естест. науки. 1984. -№3,- С.86-88

6. Афонская Н.А., Ильинский О.Б., Кондаленко В.Ф., Спевак С.Е., Черначенко Н.М. Влияние опиоидного пептида на заживление экспериментального инфаркта миокарда// Бюлл. экспер. биол. и мед. 1986. - №12. - С.754-757

7. Бабийчук Г.А., Аркатов В.А., Арцыбушев Ю.Н., Гнатив В.В. Гипотермия в лечении острых отравлений. Киев: Наукова думка, 1990. -128с.

8. Банкова В.В., Никанорова Т.Н., Поляков С.Д., Тагиева Т.А. Деградация малонового диальдегида в эритроцитах и ее возрастные, сезонные и суточные изменения // Вопр. мед. хим. 1988. - №6. - С.27-30

9. Белоконева О.С., Зайцев С.В., Варфоломеев С.Д. Кинетика инактивации связывания лигандов с опиоидными рецепторами мембран головного мозга крыс // Биол. мембраны. 1991. - Т.8, №7. - С.694-704

10. Белоус A.M., Бондаренко В.А. Криоповреждения биомембран. Структурно-функциональные нарушения митохондрий и лизосом / Актуальные проблемы криобиологии. Киев: Наукова думка, 1981. -С.41-100

11. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов. М.: Медицина, 1989. - 368с.

12. Богрицевич Ю.И., Кубарко А.И., Третьякович А.Г., Горбачев В.В., Сахарчук

13. B.П. Исследование изменения метаболизма липидов и теплообмена в условиях кратковременного и длительного воздействия холода и тепла на животных в эксперименте / Физиол. и фармакол. терморегуляции. Минск, 1978. -С.13-26

14. Бодеман Н.Н. Факторы, модифицирующие действие внутриклеточного натрия и наружного калия на связывание уабаина с мембранами эритроцитов. В кн.: Мембраны и болезнь. Под ред. Болис Л., Хоффман Д.Ф., Лифа А. -М.: Медицина, 1980. - С. 111-116

15. Болдырев А.А. Олигомерные ансамбли транспортных аденозинтрифосфатаз в мембранном бислое // Журн. эвол. биох. и физиол. 1995. - Т.31, №4.1. C.375-386

16. Болдырев А.А., Булыгина Е.Р., Крамаренко Г.Г. Является ли Na, К-АТФаза мишенью окислительного стресса? // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1996. -№3. - С.275-278

17. Болдырев А.А., Котелевцев С.В., Ланио М.И. Введение в биомембраноло-гию. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1990. - 207с.

18. Болдырев А.А., Курелла Е.Г., Тюлина О.В. Окислительная устойчивость Na+, К+-АТФазы // Докл. акад. наук. 1995. - Т.342, №4. - С.546-548

19. Бородин Е.А. Обмен холестерина между искусственными и биологическими мембранами // Усп. совр. биол. 1986. - Т. 102, №6. - С.432-446

20. Булаев В.М. Рецепторы опиатов и их лиганды / Итоги науки и техники: Сер. Фармакология. Химиотерапев. средства. М.: ВИНИТИ, 1982. - №13. -С.101-184

21. Вальдман Б.М., Волчегорский И.А., Пужевский А.С., Яровинский Б.Г., Лившиц Р.И. Среднемолекулярные пептиды крови как эндогенные регуляторы перекисного окисления липидов в норме и при термических ожогах // Вопр. мед. хим. 1991. - Т.37, №1. - С.23-25

22. Василькова Т.В., Кухта В.К. Применение а-токоферола ацетата для коррекции процесса перекисного окисления липидов эритроцитов при общей гипотермии организма// Здравоохр. Беларуссии. 1988. - №8. - С.45-48

23. Василькова Т.В., Кухта В.К., Королев А.Р. Сезонные различия в антиокси-дантной защите эритроцитов при общей перфузионной гипотермии организма// Здравоохр. Беларуссии. 1990. -№7. - С.26-29

24. Виноградов В.А., Булгаков С.А., Полонский В.М. Создание даларгина, история и этапы исследований / Актуальные вопросы гастроэнтерологии. -М„ 1991.-С.9-14

25. Виноградов В.А., Каленикова Е.И., Соколов А.С. Биодоступность даларгина и его метаболизм при интраназальном введении крысам // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1988. - №7. - С.48-50

26. Виноградов В.А., Полонский В.М. Влияние нейропептидов на экспериментальную язву у крыс // Патол. физиол. и эксперим. терап. 1983. - №1. -С.3-6

27. Виноградов В.А., Полонский В.М. Даларгин наиболее активный синтетический аналог эндогенных опиоидов для лечения язвенной болезни (итоги пятилетнего поиска) // Бюлл. Всесоюз. кардиол. науч. центра АМН СССР. -1986. Т.9, №2. - С.62-63

28. Виноградов В.А., Спевак С.Е., Ярыгин К.Н. Опиоидная активность пептидов и заживление ран кожи // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1987. - №7. -С.89-91

29. Владимиров Ю.А. Роль нарушений свойств липидного слоя мембран в развитии патологических процессов // Патол. физиол. и экспер. терап. 1989. -№4. - С.7-19

30. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И., Козлов А.В., Осипов А.Н., Ращупкин Д.И. Свободные радикалы в живых системах / Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. -М., 1991. Т.29. - 252с.

31. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. М.: Наука, 1980. - 320с.

32. Волколаков Я.В., Лацис А.Т. Глубокая гипотермия в кардиохирургии детского возраста. Л.: Медицина, 1977. - 151с.

33. Воскресенский О.Н., Туманова В.А. Антипротекторы. Киев: Здоровье, 1982.- 119с.

34. Гольдберг Е.Д., Захарова О.Ю., Дыгай A.M. Модулирующее влияние опио-идных пептидов на гемопоэз при стрессе // Бюлл. экспер. биол. и мед. -1988.-№7.-С.23-26

35. Гольдберг Е.Д., Захарова О.Ю., Дыгай A.M., Симонина Е.В., Агафонов В.И., Слепушкин В.Д. О модулирующем влиянии энкефалинов на гемопоэз при стрессе // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1987. - №5. - С.589-590

36. Гордиенко О.И., Гордиенко Е.А. Влияние температуры и ионной силы среды на пассивную проницаемость мембран эритроцитов // Биол. мембраны. -1986. Т.З, №8. - С.869-872

37. Гулевский А.К., Бондаренко В.А., Белоус A.M. Барьерные свойства биомембран при низких температурах. Киев: Наукова думка, 1988. -208с.

38. Гулевский А.К., Рязанцев В.В., Белоус A.M. Структурные перестройки липидов и белков мембран эритроцитов при действии низких температур // Биол. науки. 1990. - №5. - С.29-35

39. Турин В Н. Обмен липидов при гипотермии, гипертермии и лихорадке. -Минск: Беларусь, 1986. 190с.

40. Гуцол А.А., Кондратьев Б.Ю. Влияние даларгина на систолическое давление при экспериментальных хронических нарушениях сердечно-сосудистой регуляции // Бюлл. ВКНЦ АМН СССР. 1986. - Т.9, №2. - С.57-59

41. Дворцин Г.Ф., Шаталов В.Н. Антистрессорный эффект даларгина при им-мобилизационном стрессе у крыс // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1991. -Т.61, №6. - С.617-619

42. Демин Н.Н., Шортанова Т.Х., Эмирбеков Э.З. Нейрохимия зимней спячки млекопитающих. JL: Наука, 1988. - 137с.

43. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов. М.: Наука, 1989. - 277с.

44. Дорофеев Г.И., Кожемякин JI.A., Ивашкин В.Т. Циклические нуклеотиды и адаптация организма. Л.: Наука, 1978. - 200с.

45. Заводник И.Б., Лапшина Е.А., Брышевска М. Эффект свободных жирных кислот на состояние липидного и белкового компонентов мембран. — 1995. — Т. 12, №5. С.516-523

46. Захарова И.О., Аврова Н.Ф. Влияние адаптации к холоду на содержание ганглиозидов в субклеточных фракциях мозга крыс и состав их жирных кислот // Журн. эвол. биохим. и физиол. 1998. - Т.34, №5. - С.555-561

47. Золоев Г.К., Слепушкин В.Д. Эндокринные железы и кальций. Депонир. ВНИИМИ МЗ СССР. 1982. - №5800-82

48. Золоев Г.К., Слепушкин В.Д., Аргинтаев Е С. Влияние даларгина на течение стресса и шока в эксперименте // Бюлл. Всесоюз. кардиол. науч. центра АМН СССР. 1986. - Т.9, №2. - С.60-62

49. Золоев Г.К., Слепушкин В.Д., Аргинтаев Е.С., Прум И.А., Соколович Т.Е. Использование синтетических аналогов энкефалинов в качестве антиатеро-генных средств // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1989. - Т.58, №10. - С.468-470

50. Золоев Г.К., Слепушкин В.Д., Аргинтаев Е.С. Влияние даларгина на течение стресса и шока в эксперименте // Бюлл. Всесоюз. кардиол. науч. Центра АМН СССР. 1986. - Т.9, №2. - С.60-62

51. Золоев Т.К., Слепушкин В.Д., Титов М.И. Влияние энкефалинов на метаболические показатели при экспериментальном инфаркте миокарда у крыс // Кардиология. 1985. - №8. - С.72-74

52. Исакова О.Л., Бушуев В.Н., Пекелис Б.Л., Беспалова Ж.Д. Исследование методом 'Н-ЯМР спектроскопии устойчивости к действию сывороточных про-теаз ряда аналогов даларгина. / Тез. докл. Томск, 1985. - С.12-13

53. Каган В.Е., Шведова А.А., Романцев Е.Ф. Об участии фосфолипаз в «репарации» фоторецепторных мембран, подвергшихся перекисному окислению // Биофизика. 1978. - Т.23, №2. - С.279-284

54. Казеннов A.M., Маслова М.Н., Шалабодов А.Д. Исследование активности Na, К-АТФазы в эритроцитах млекопитающих // Биохимия. 1984. - №7. -С.1089-1095

55. Каленикова Е.И., Дмитриева О.Ф., Колобов Н.В., Жуковский С.Н., Тищенко В.А., Виноградов В.А. Фармакокинетика даларгина // Вопр. мед. хим. -1988.-№1.-С.75-83

56. Каленикова Е.И., Дмитриева О.Ф., Нагорная Л.В., Гищенков В.А. Метаболизм даларгина в сыворотке крови человека в опытах in vitro // Нейропепти-ды: их роль в физиологии и патологии. Томск, 1985. - С.77-78

57. Кассирский И.А. Справочник по функциональной диагностике. М.: Медицина, 1970. -С.398-399

58. Кидалов В.Н., Лысак В.Ф. Квантитативная эритрограмма и возможность ее использования в клинике и эксперименте // Лаб. дело. 1989. - №8. - С.36-40

59. Кличханов Н.К., Халдун Авадх Убад, Исмаилова Ж.Г. Влияние даларгина на интенсивность окислительной модификации белков сыворотки крови при гипотермии / Тез. Междн. симп. Воронеж, 1998. - С. 103-107

60. Кличханов Н.К. Метаболические и структурно-функциональные изменения в плазме крови и эритроцитах при гипотермии // Научная мысль Кавказа. Приложение. Спец. Выпуск. 2001. - С.38-50

61. Клуша В.Е. Пептиды-регуляторы функции мозга. Рига: Зинатне, 1984. -142с.

62. Козлов Ю.В., Васловский В.Ю., Крылова Е.А., Арцыбушев Ю.Н. Ионная симметрия К*", Na+ крови при пролонгированной краниоцеребральной гипотермии / Патофизиологические аспекты действия холода на организм. -Харьков, 1989. С.55-58

63. Козлова Н.М., Слобожанина Е.И., Черницкий Е.А. Окисление мембранных белков и изменение поверхностных свойств эритроцитов // Биофизика. -1998. Т.43, вып.З. - С.480-483

64. Козырева Т.В., Ткаченко Е.Я., Козарук В.П., Латышева Т.В., Гилинский М.А. Особенности реакции симпатоадреналовой системы крыс при разныхтипах охлаждения // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 1999. - Т.85, №11. -С. 1434-1439

65. Кокунин В.А. Статистическая обработка данных при малом числе опытов // Укр. биох. журн. 1975. - Т.47, №6. - С.776-791

66. Колосова Н.Г., Шорин Ю.П., Куликов В.Ю. Реакции перекисного окисления липидов в печени и легких крыс при долговременной адаптации к холоду // Бюлл. экспер. биол. и мед. -1981. -№4. -С.436-437

67. Коробов Н.В. Даларгин опиоидоподобный пептид периферического действия // Фармакол. и токсикол. - 1988. - Т.51, №4. - С.35-38

68. Короткина Р.Н., Шлозников Б.М., Донич С.Г., Гребенчиков О.А., Ситников А.В., Карелин А.А. Изучение активности ксантиноксидазы в ткани головного мозга на фоне миоплегии // Бюлл. экспер. биол. и мед. -1990. Т.59, №2. -С. 145-146

69. Костюк В.А., Потапович А.И., Лунец Е.Ф. Спектрофотометрическое определение диеновых коньюгатов //Вопр. мед. хим. 1984. - №4. - С.125-127

70. Крепе Е.М. Липиды клеточных мембран. Л.: Наука, 1981. - 339с.

71. Куликов В.Ю., Луценко М.Т., Колесникова Л.И. Гидроперекиси жирных кислот, флуоресцирующие продукты и концентрация токоферола в тканях кроликов при действии на них холода // Бюлл. экспер. биол. и мед. -1980. -Т.90, №12. С.681-682

72. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Биологическая роль глутатиона // Усп. совр. биол. 1990. - Т.110, вып.1. - №4. - С.20-23

73. Кулинский В.И., Ольховский И.А. Две адаптационные стратегии в неблагоприятных условиях резистентная и толерантная. Роль гормонов и рецепторов // Усп. совр. биол. - 1992. - Т. 112, вып.5-6. - С.697-714

74. Кухаренко Р.И., Рева А.Д., Родина C.JI. Увеличение гомокарнозина мозга при алкогольной интоксикации // Укр. биох. журн. 1990. - №1. - С.92-94

75. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1990. - 351с.

76. Леонова В.Г. Анализ эритроцитарных популяций в онтогенезе человека. -Новосибирск: Наука, 1987,- 242с.

77. Линчевская А.А., Кондратьева Л.А. Влияние гипотермии на структурно-функциональные свойства мембран эритроцитов белых крыс // Вопр. мед. хим. 1989. - Т.35, №6. - С.36-39

78. Липина О.В., Луговой В.И. Изменение вязкости крови и гематокрита при охлаждении животных // Биофизика. 1996. - Т.41, вып.З. - С.678-679

79. Лисаченко Г.В., Слепушкин В.Д., Загаев Г.К. Влияние даларгина на гемодинамику при остром инфаркте миокарда, осложненном клинической смертью // Анестезиол. и реаниматол. 1992. - №4. - С. 57-59

80. Лишманов Ю.Б. Использование энкефалинов для предупреждения стрес-сорного повреждения сердца в эксперименте // Бюлл. экспер. биол. и мед. -1986. -№9. -С.271-272

81. Лишманов Ю.Б., Амосова Е.Н., Слепушкин В.Д., Яременко К.В. Исследова2 5 6ние антистрессорного эффекта Д-ала -лей -арг -энкефалина // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1984. - №8. - С.199-201

82. Лишманов Ю.Б., Ласукова Т.В., Алекминская Л.А. Энкефалины и гормонально-метаболические реакции при различных по тяжести видах стресса в эксперименте // Бюлл. экспер. биол. и мед. -1985. Т.49, №3. - С.269-271

83. Лишманов Ю.Б., Маслов Л. Н., Ласукова Т.В. Роль опиоидной системы в адаптации организма и защите сердца при стрессе // Усп. физиол. наук. -1997. Т.28, №1. - С.75-96

84. Лишманов Ю.Б., Маслов Л.Н. Опиоидные нейропептиды, стресс и адаптационная защита сердца. Томск: Изд-во Том. ун-та, 1994.-352 с.

85. Лишманов Ю.Б., Маслова Л.В., Цибин А.Н., Трифонова Ж.В. Опиоидные реакции при стрессе и адаптации // Пат. физиол. и эксп. терап. 1987. - №6. - С.51-53

86. Ломакина Л.В. Действие низкой температуры на перекисное окисление и интенсивность протеолиза в мозгу и печени крыс // Укр. биохим. журн. -1980. Т.52, №3. - С.305-308

87. Львова С.П., Горбунова Т.Ф., Абаева Е.М. Влияние гипотермии и даларгина на перекисное окисление липидов в тканях крыс // Вопр. мед. хим. 1993. -Т.39, вып.З. - С.21-24

88. Львова С.П., Назаревич Л.Н. Содержание глюкозы в тканях сусликов и крыс различного возраста при гипотермии // Укр. биохим. журн. 1976. - Т.48, №5. - С.563-567

89. Ляхович В.В., Цырлов И.Б., Мишин В.М. Влияние перекисного окисления микросомальных липидов на спектральную характеристику цитохрома Р-450 // Биохимия. 1973. - Т.38, вып.5. - С.897-900

90. Майзелис М.Я., Заблудовский А.Л., Шихов С.Н. Об участии циклических нуклеотидов в механизме действия энкефалинов // Бюлл. экспер. биол. и мед.- 1982. -№3,-С.33-35

91. Максимов Г.В., Мусуралиева Г.Т., Свердлова Е.А., Колье О.Р. Роль SH-групп мембранных белков в регуляции связывания уабаина и бунгаротокси-на в нерве краба // Биофизика. 1989. - Т.34, вып.4. - С.693-695

92. Мальцева Е.А., Белоконева О.С., Зайцев С.В., Варфоломеев С.Д. Роль изменения микровязкости синаптических мембран в процессе инактивации связывания лигандов с опиоидными рецепторами мембран головного мозга // Биол. мембраны. 1991. - Т.8, №8. - С.830-837

93. Маслова Л.В., Лишманов Ю.Б., Смагин Г.Н. Участие опиоидиых пептидов в регуляции биосинтеза миокардного белка при стрессе и адаптации // Вопр. мед. хим. 1991. - №1. - С.63-65

94. Маслова М.Н. Активность мембранных ферментов эритроцитов при различных стрессорных воздействиях // Физиол. журн. им. И.М. Сеченова. -1994. -Т.80, №7. С.76-80

95. Медведева И.А., Маслова М.Н. Динамика и механизм изменения активности Na, К-АТФазы эритроцитов крыс при действии стрессоров различной природы // Физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 1993. - Т.79, №12. - С.28-34

96. Медведева И.А., Маслова М.Н., Панов А.А. Влияние гипотермического стресса на активность Na, К-АТФазы эритроцитов крыс // Физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 1992. - Т.78, №11. - С. 119-124

97. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца. М.: Медицина, 1984. - 272с.

98. Меерсон Ф.З. Защитные эффекты адаптации и некоторые перспективы развития адаптационной медицины II Усп. физиол. наук. 1993. - Т.22, №2. -С.52-59

99. Мешалкин Е.Н., Верещагин И.Г. Окклюзия в условиях неглубокой гипотер-мической защиты. Новосибирск: Наука, 1985. - 198с.

100. Модянов Н.Н., Аристархова Е.А., Кочергинская С.А. Структурные основы функционирования Na+, К+-насоса // Биол. мембраны. 1988. - Т.5, №4. -С.341-380

101. Морголис Л.Б., Бергельсон С.Н. Липосомы и их взаимодействие с клетками. -М„ 1986.

102. Морозова Т.Ф., Репина С.В. О влиянии гипотермии на состояние белков эритроцитов зимоспящих сусликов / Сб. науч. трудов. Инст-т пробл. крио-биол. и криомед. АН УССР, 1990. С. 106-109

103. Орлов С.Н. Транспорт одновалентных катионов через плазматическую мембрану клеток электрически невозбудимых тканей // Усп. совр. биол. 1985. -Т. 100, вып.2. - С. 203-218

104. Петров И.Р., Гублер Е.В. Искусственная гипотермия. М.: Наука, 1961. -250с.

105. Плотников Н.Ю., Герцог Г.Е., Кулинский В.И. Обратимое снижение чувствительности ct2 и pi-адренореактивных систем при интенсивном холодовом стрессе у крыс // Патол. физиол. и экспер. терапия. 1987. - №6. - С.42-44

106. Покровский В.М., Шейх-Заде Ю.Р., Воверейдт В.В. Сердце при гипотермии. -Л.: Наука, 1984. 141с.

107. Полонский В.М., Коробов Н.В. Противоязвенное действие и периферическая опиоидная активность продуктов деградации даларгина // Бюлл. ВКНЦ АМН СССР. 1986. - Т.9, №2. -С.83-86

108. Полонский В.М., Ярыгин К.М., Кривошеев О.Г., Москвин Г.Н., Виноградов В.А. Место приложения действия даларгина в экспериментальной модели цистеаминовых дуоденальных язв у крыс // Бюлл. экспер. биол. и мед. -1987. №4. - С.433-434

109. Робу А.И. Взаимоотношения эндокринных комплексов при стрессе. -Кишинев: Штиинца, 1982. 208с.

110. Рожанец В.В., Козлова В.Н., Родина Р.И., Швец В.И., Глебов Р.Н. Действие противосудорожных веществ на Na, К-АТФазу синаптических мембран головного мозга животных // Биохимия. 1978. - Т.43, вып.5. - С.892-898

111. Романенко В.Д. Физиология кальциевого обмена. Киев: Наукова думка, 1975.-229с.

112. Сепетов Н.Ф., Исакова О.Л., Пекелис Б.Л., Сураева Н.М. Изучение деградации даларгина и его аналогов в мембранах щеточной каймы энтероцитов крыс методом Н-ЯМР спектроскопии // Бюлл. ВКНЦ АМН СССР. 1986. -Т.9, №2. - С.76-78

113. Сергеев П.В., Шимановский H.JI. Рецепторы физиологически активных веществ. -М.: Медицина, 1987. 400с.

114. Серебренникова Э.Г. Роль жирных кислот фосфолипидов органов белых крыс в формировании резистентности к глубокому многократному переохлаждению // Вопр. мед. хим. 1989. - №4. - С.92-96

115. Серебренникова Э.Г., Векслер Я.И., Гусейнов И.Г. Изменение жирнокис-лотного состава липидов головного и спинного мозга белых крыс при однократном переохлаждении и адаптации к нему // Вопр. мед. хим. 1981. -Т.27, №5. - С.640-643

116. Ситожевский А.В., Хавалкин И.В., Иванов В.В., Кондакова И.В. Кинетика распада трет-бутилгидропероксида в суспензии эритроцитов // Биол. мембраны. 1997. - Т. 14, №4. - С.394-401

117. Слепушкин В.Д., Лишманов Ю.Б., Золоев Г.К., Прум И.А. Современные представления о некоторых нетрадиционных механизмах стресса // Усп. физиол. наук, 1985.-Т. 16, №4.-С. 106-118

118. Спевак С.Е., Соловьева А.И., Шехтер А.Б. Даларгин регулятор репаратив-ной регенерации тканей // Бюлл. ВКЩ АМН СССР. 1986. - Т.9, №2. -С.78-80

119. Стальная И.Д., Горишвили Т.Д. Метод определения малонового диальдеги-да с помощью тиобарбитуровой кислоты // Современные методы в биохимии.-М., 1977.-С.66-68

120. Степуро И.М., Заводник И.Б., Пилецкая Т.П., Арцукевич А.Н. Лизис эритроцитов человека, индуцированный алифатическими альдегидами // Биол. мембраны. 1990. - Т.7, №7. - С.742-749

121. Сумбатов Л.А. Искусственная гипотермии (патофизиология и защитное действие) М.: Медицина, 1985. - 88с.

122. Таганович А.Д., Олецкий Э.И., Кухта В.К. Активность мембраносвязанных ферментов, показатели метаболизма в цитоплазме и некоторые физико-химические свойства эритроцитов с повышенным содержанием холестерина //Вопр. мед. хим. 1985. - №5. - С.75-79

123. Терсков И.А., Гительзон И.И. Метод химических (кислотных) эритрограмм // Биофизика. 1957. - №2. - С.259-265

124. Тимофеев Н.Н. Искусственный гипобиоз. М.: медицина, 1983. - 192с.

125. Ткаченко С.И., Козлова В.Ф., Козлов А.В. Влияние общего охлаждения на некоторые показатели морфофункционального состояния организма / Патофизиологические аспекты действия холода на организм. Харьков, 1989. -С.140-147

126. Тодорова И. Клинические лабораторные исследования в педиатрии. София, 1961.-263с.

127. Торховская Т.И., Артемова Л.Г., Ходжакулиев Б.Г., Руденко Т.С., Полесский В.А., Азизова О.А. Структурные и функциональные изменения мембран эритроцитов при экспериментальном атеросклерозе // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1980. - Т.89, №6. - С.675-678

128. Утно Л.Я. Действие пантетина на метаболизм в митохондриях миокарда в условиях глубокой гипотермии // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1991. - TCXI, №6,- С.577-578

129. Хайдарлиу С.Х. Функциональная биохимия адаптации. Кишинев: Штиин-ца, 1984.-272с.

130. Хайсман Е.Б., Арефолов В.А., Маликова Л.А. Роль периферических катехо-ламинэргических систем в антистрессовом действии нейропептидов // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1988. - №3. - С.302-304

131. Халдун Убад Авадх Биохимические изменения в крови при гипотермии и последующем самосогревании на фоне введения даларгина. Автореф. дис.канд. биол. наук. Махачкала, 1998. - 10с.

132. Халилов Р.А. Биохимические изменения в мембранах при гипотермии и зимней спячке. Автореф.дис.канд.биол.наук. Ростов/Дон, 1994. - 22с.

133. Халилов Р.А., Саидов М.Б., Халдун Авадх Убад, Эседова Т.М., Кличханов Н.К. // Вест. Дагест. госуд. ун-та. Естест. науки. -1998. -Вып.1. С. 140-145

134. Халилов Э.Х., Ли B.C., Азизова О.А., Саженин Г.И., Алимов Г.А., Арчаков А.И. Структурно-функциональный анализ мембран эритроцитов с различным содержанием холестерина // Вопр. мед. хим. 1982. - Т.28, №1. - С.81-86

135. Хочачка П., Сомеро Дж. Биохимическая адаптация. М.: Мир, 1988. - 568с.

136. Хугаева В.К. Влияние даларгина на микрогемо- и микролимфоциркуляцию // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1988. - №3. - С.300-302

137. Чеснокова Н.П., Куляш Г.Ю. О влиянии ботулинического токсина на активность транспортных АТФаз биологических мембран // Вопр. мед. химии. -1985. -№1,-С.65-68

138. Чеснокова Н.П., Куляш Г.Ю. Состояние активности Na, К-АТФазы мембран эритроцитов крыс при ботулинической интоксикации // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1982. - №9. - С.29-31

139. Чуйкин А.Е., Вовенко Е.П. Механизмы развития гипоксии у крыс в условиях иммерсионной гипотермии // Физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 1993. -Т.79, №9. - С.89-97

140. Шепелев А.П. Зависимость состава и фазовых переходов липидов митохондрий миокарда белых крыс и собак от глубины острой гипотермии // Биофизика. 1977. - Т.22, вып.З. - С.465-467

141. Шепелев А.П. перекисное окисление липидов в бурой жировой ткани крыс при остром охлаждении // Физиол. журн. СССР им. И.М. Сеченова. 1978. -№1. - С.108-112

142. Шепелев А.П., Юфит П.М. Состав жирных кислот липидов органов белых крыс при гипотермии и в динамике самосогревания / Теоретич. и практич. пробл. действия низких температур на организм. Л., 1975. - С.227

143. Шкестерс А.П., Утно Л.Я., Гиргенсоне Н.М. Регуляция активности суперок-сиддисмутазы во время глубокой гипотермии одновременным применением водо- и жирорастворимых антиоксидантов // Бюлл. эксп. биол. и мед. -1991. Т. 111, №6. - С.593-594

144. Эмирбеков Э.З., Кличханов Н.К., Эмирбекова А.А. Практикум по биохимии—Ростов-на-Дону: Изд-во СКНЦВШ, 2000,- 127с.

145. Эмирбеков Э.З., Львова С.П. Механизмы биохимических изменений при низких температурах тела. Ростов/Дон: Изд-во РГУ, 1985. - 80с.

146. Эмирбеков Э.З., Львова С.П., Кличханов Н.К. Биохимические изменения в крови при искусственной и естественной гипотермии // Пробл. криобиол. -1995. -№1.-С.14-21

147. Эмирбеков Э.З., Львова С.П., Мусаев Б.С., Мейланов И.С., Симмалавонг Сантисук, Бутаева П.Ш., Абдуллаева М.З. Роль липидов мозга при гипотермии животных / Биохимические аспекты холодовых адаптаций. Харьков, 1991. -С.166-175

148. Эмирбеков Э.З., Сфиев А.А., Кличханов Н.К. Исследование устойчивости эритроцитов крыс при гипотермии // Пробл. криобиол. 1991. - №4. - С.3133

149. Юрков Ю.А., Банкова В.В., Хамидова Н.М., Прищепова Н.Ф., Тамбовцева В.И. Свободно-радикальное окисление липидов и устойчивость к гемолизу эритроцитов здоровых и больных детей // Вопр. мед. хим. 1984. - Т.30, №4. - С.101-106

150. Chang К., Cuatrecasas P. Heterogenity and properties of opiate receptors // Fed. Proc. 1981. - V.40, №13. - P.2729-2734

151. Chen R.U.Z., Chien S. Hemodinamic functions and blood viscosity in surface hypothermia // Am. J. Physiol. 1978. - V.235, №3. -P.99-114

152. Chembini E., North R. jll- and k-opioids inhibit transmitter release by different mechanisms // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1985. - V.82, №6. - P.1860-1863

153. Chun Рак Hoo, Yurkom, Fishman R.A. Phospholipid degradation and cellular edema induced by free radicals in brain cortical slices // J. Neurochem. 1982. -V.38, №2. - P.525-531

154. Connor H.D., Fisoher V., Mason R.P. A search for oxygen-centered free radicals in the lipoxygenase/linoleic acid system // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1986. V.141, №2. - P.614-619

155. Dean Roger Т., Fu Shanlin, Stocker Roland, Davies Michael J. Biochemistry and pathology of radical-mediated protein oxidation // Biochem. 1997. - V.324. -P. 1-18

156. Demel RA., De Kruyff The function of sterols in membranes // Biochem. Biophys. 1976. - Y.457, №2. - P.109-132

157. Dilberto E.J., Allen P.L. Mechanism p-hydroxylation semi dehydroascorbate as the enzymatic oxidation product of ascorbate // J. Biol. Chem. 1981. - V.256, №7. - P.3385-3387

158. Dresdner G. Preparation and properties of spin lecithin cholesterol liposoms // J. Membrane Biol. 1982. - V.64. - P. 145-153

159. Dumaswala U.J., Limei Zhuo, Jacobsen D.W., Jain K.S., Sukalski A.K. Protain and lipid oxidation of banked human erythrocytes: role of glutatione // Free Radical Biology and Medicine. 1999. - V.27, №9/10. - P. 1041-1049

160. Gebicki J.M. Protein hydroperoxides as new reactive oxygen species // Redox Report. 1997. - V.3, №2. - P.99-110

161. Gebicki S., Gebicki J.M. Formation of peroxides in amino acids and proteins exposed to oxygen free radicals // Biochem. J. 1993. - V.289. - P.743-749

162. Glasel J., Bradbury W., Venn R. Opiate binding to subcellular fractions from guinea pig ileum // Life Sci. 1984. - V.34, №4. - P.345-351

163. Gordon C.J. Thermal biology of the laboratory rat // Physiol. And Behav. 1990. - V.47, №5. - P.963-991

164. Greenberg J., Ellyin F., Pullen G. Methionine-enkephalin and beta-endorphin levels in brain, pancreas and adrenals of db/db mice // Endocrinology. 1985. -У.116, №1. - P.328-331

165. Hazel J.R. Cold adaptation in ectotherms: regulation of membrane function and cellular metabolism // Advances in comparative and environmental Physiology / Ed. L.C.H.Wong. Berlin; Heidelberg: Springer Yerlag. 1989. - V.4. - P. 1-50

166. Hazel J.R., Prosser C.L. Molecular mechanisms of temperature compensation in poikilotherms // Physiological Reviews. 1974. - 54. - P.620-677

167. Helle K. Pre- and postsynaptic effects of peptides in peripheral effector system // Acta neurol. Scand. 1984. - V.69, №5. -P.334-336

168. Heuck C.C., Kitz E. Does parathyroid hormone play a role in lipid metabolism // Contribs nephrol. 1980. - Y.20, №9. -P.l 18-128

169. Hollberg D., Werner S. Circulatory and lipolytic effects of parathyroid hormone. As experimental study in dogs // Hormone Metabol. Res. 1977. - V.9, №9. -P.424-426

170. Huidobro-Toro V.P., Ни В., Way L.K. Calcium antagonism of the inhibitory effect of normorphine on the ileum of the morphine tolerant and nontolerant guinea pig // J. Pharmacol. And Exptl. Therap. 1982. - V.218, №1. - P.84-91

171. Jakschik B.A., Sun F.F., Lee L., Steinhoff M.M. Calcium stimulation of a nerve lipoxigenase // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1980. - V.95, №1. - P. 103107

172. Kelly L. Drew, Peter G. Osborne, Kai U. Frerichs, Yong Hu, Risa E. Koren, John M. Hallenbeck, Margaret E. Rice Ascorbate and glutathione regulation in hibernating ground squirrels // Brain Res. 1999. - V.851. - P. 1-8

173. Kepple J.D., Colacearuso В., Massry S.G. Does parathyroid hormone couse protein wasting // Contribs nephrol. 1980. - Y.20, №9. - P.138-148

174. Krusra K.A., Blondin J., Bass K., Santiago J., Thomas L., Altsheler P., Martin H. Effect of intact parathyroid hormone on hepatid glucose release in the dog // J. Clin. Invest. 1979. - V.64, №4. -P.1016-1023

175. Lei Baiping, Tan Xinjuan, Cai Hongwei, Xu Qiming, Guo Quling Effect of mo-gerate hypothermia on lipid peroxidation in canine brain tissue after cardiac arrest and resuscitation // Stroke. 1994. - V.25, №1. - P. 147-152

176. Lombarde F., Verrier R., Lown B. Relationship between sympathetic neuronal activity, coronary dynamics and vulnerability to ventricular fibrillation during myocardial ischemia and reperfusion // Amer. Heart J. 1983. - V.105, №6. -P.958-965

177. Luttinger D., Hernandes D., Nemeroff Ch., Draner W. Peptides and nociception // Int. Rev. Neurobiol. 1984. - V.25. - P.227-241

178. Malencik D.A., Anderson S.K. Binding of simple peptides, hormones and neurotransmitters by calmodulin // Biochemistry. 1982. - V.21, №14. - P.3480-3486

179. Micevych P., Elde R. Relationship between enkephalinergic neurons and the vasopressin and oxiticin neuroendocrine system of the cat. Annu immunohisto-chemical study//J. Сотр. Neurol. 1980. - V.190. -P.135-146

180. Mountaudon D., Robert J., Canguilehem B. Fluorescence polarization study of lipids and membranes prepared from brain hemispheres of a hibernating mammal // Biochem. and Biophys. Res. Comm. 1984. - V.119, №1. - P.396-400

181. Mukherjee В., Chattarjee A., Bhatia G. Effect of epinephrine and norepinephrine on immunoreactive insulin secretion from isolated islets of Langerhans // Biochem. Pharm. 1985. - V.34, №7. - P.985-987

182. Silvius J.R., McElhaney R.W. Membrane lipid fluidity and physical state and activity of the Na, Mg-ATPase // Biophys. J. 1982. - V.37, №1. -P.36-38

183. Singer S.J., Nicolson G.L. The fluid mosaic model of the structure of cell membranes // Science. 1972. - V.175, №4. - P.720-731

184. Slotkin Т., Burwell В., Lan C. An intracellular opiate receptor // Life Sci. 1980. - №27. - P.1975-1978

185. Stadtman E.R. Protein oxidation and aging // Science. 1992. - V.257. - P.1220-1224109

186. Sudha Т., Frank G. Effect of enkephalins on excitability of frog, guinea pig and rabbit nerves // Regul. Peptides. 1985. -№11.- Supp.4. - P.234