Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Особенности микроклонального размножения шиповника и декоративных сортов рода Rosa L.
ВАК РФ 06.01.07, Плодоводство, виноградарство
Автореферат диссертации по теме "Особенности микроклонального размножения шиповника и декоративных сортов рода Rosa L."
На правах, рукописи
ПОЗДНЖОВ ИВАН АЛЕКСАНДРОВИЧ
ОСОБЕННОСТИ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ ШИПОВНИКА И ДЕКОРАТИВНЫХ СОРТОВ РОДА Rosa L.
Специальность 06 07 01. - Плодоводство, виноградарство
Автореферат на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук
GO31735Э2
Москва 2007
003173592
Работа выполнена на кафедре плодоводства ФГОУ ВПО Российского государственного аграрного университета - МСХА имени К А Тимирязева
Научный руководитель. доктор сельскохозяйственных наук, профессор
Деменко Василий Иванович
Официальные оппоненты доктор биологических наук, профессор,
кафедры биотехнологии Калашникова Елена Анатольевна Российского государственного аграрного университета - МСХА имени К А Тимирязева
кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Лебедев Вадим Георгиевич Института биоорганической химии им ММ Шемякина иЮ А Овчинникова РАН
Ведущее учреждение ГНУ Всероссийский научно-исследовательский
институт сельскохозяйственной биотехнологии
Защита состоится 12 «ноября» 2007г в 14 30 на заседании Диссертационного совета - Д 220 043 01 при РГАУ - МСХА имени К А Тимирязева по адресу. 127550, Москва, ул Тимирязевская, 49
С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке РГАУ МСХА имени К А Тимирязева
Автореферат разослан 2007 г и размещён на сайте
университета - www timacad ru
Ученый секретарь диссертационного совета
доктор сельскохозяйственных наук Аладина О Н
ОБЩАЯХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы Представители рода Rosa L имеют огромное значение в хозяйственной деятельности человека Помимо множества декоративных сортов в практической и производственной деятельности издавна используются формы розы, имеющие высокую пищевую, сырьевую ценность для фармацевтической промышленности Такие сорта принято называть шиповником Селекционный процесс позволил создать сорта шиповника, отличающиеся урожайностью, содержанием питательных веществ и витаминов, размером и массой плодов (Стрелец, Агафонов 1994)
В плодоводстве важное значение имеет раздел, связанный с размножением ценных сортов растений и получением необходимых количеств посадочного материала, разработка и внедрение новых, экономически эффективных методов размножения плодовых и декоративных растений
Одной из особенностей шиповника как плодовой культуры, является невысокая способность многих перспективных сортов к размножению черенкованием Поэтому, изучение особенностей процессов, происходящих при регенерации растений в условиях культуры in vitro побегов роз и шиповника, представляют большой практический интерес Исследование технологии микроклонального размножения сортов шиповника и других представителей рода Rosa L имеет первостепенное значение для создания системы эффективного воспроизводства и создания новых плантаций Особенную важность это приобретает с учетом активного селекционного процесса, который в будущем может вывести культуру шиповника на новый уровень и в связи с отсутствием данных по размножению т vitro шиповника.
Цель и задачи исследований Цель настоящей работы - разработать научно обоснованную технологию микроклонального размножения сортов шиповника и декоративных представителей рода Rosa L и выявить оптимальные условий размножения in vitro Для достижения поставленных целей решались следующие задачи
1 Изучить способность к регенерации и развитию шиповника in vitro
2 Определить оптимальные условия культивирования на стадии введения (I), определить благоприятный состав среды для развития и регенерации эксплантов шиповника, провести сравнение с развитием декоративных представителей рода Rosa L
3 Определить условия культивирования и состав питательной среды, обеспечивающие необходимый коэффициент размножения и получение требуемого качества микропобегов шиповника и ро'з
4 Установить состав питательной среды не только, обеспечивающий высокий коэффициент размножения за пассаж, но и позволяющий максимально исключить такие нежелательные явления, как образование каллусной ткани и витрификация растений на всех этапах размножения
5 Выявить благоприятные условия укоренения шиповника в культуре т
vitro
6 Разработать методы адаптации пробирочных растений и не укорененных микропобегов шиповника и роз в нестерильных условиях.
7 Изучить закономерности строения устьичного аппарата, морфологических и анатомических особенностей листовой пластинки от состава среды
Научная новизна Впервые проведено изучение изолированной культуры сортов шиповника, имеющих плодовое значение Установлены существенные различия в морфогенезе и развитии представителей декоративных и плодовых сортов рода Rosa L Изучена зависимость приживаемости эксплантов шиповника на этапе введения в зависимости от времени года Проведен скрининг основных макроэлементов и их соотношения в среде для размножения плодовых и декоративных сортов рода Rosa L, разработана оригинальная среда для эффективного размножения декоративных сортов роз и сортов шиповника, обеспечивающая оптимальный коэффициент размножения без физиологических расстройств Исследовано влияние различных форм азота и кальция на рост в культуре in vitro сортов роз и шиповника
Исследованы различные приемы введения эксплантов шиповника в стерильную культуру, обеспечивающие высокий процент приживаемости экспланта и регенерации на этапе введения
Проведены исследования влияния салициловой кислоты (антивирусный агент), селенита натрия, а - токоферола, гумата калия на морфогенез и регенерацию представителей сортов Rosa L на различных этапах стерильной культуры
Показана существенность состава среды, использованной на этапе размножения на последующий процесс ризогенеза на этапе укоренения
Впервые показано влияние состава среды на анатомию тканей листового и устьичного аппарата роз, проведено сравнение анатомии листа и устьичного аппарата роз растущих в стерильных и нестерильных условиях
Практическая значимость Разработана технология микроклонального размножения сортов шиповника и декоративных сортов роз, обеспечивающая эффективное получение, устойчивого в нестерильных условиях посадочного материала шиповника и роз с высоким коэффициентом размножения Разработаны оригинальные среды, поддерживающая высокий уровень регенерации, размножения и укоренения, обеспечивающая устойчивость растений на этапе адаптации к нестерильным условиям
Показана возможность, использования разработанных способов промышленной технологии получения посадочного материала сортов шиповника и декора гивных сортов роз
Реализация работы Адаптированные растения роз, полученных в процессе проведения работы, передавалась для доращивания в отдел размножения земляники лаборатории плодоводства РГАУ - МСХА им К А Тимирязева для дальнейшего изучения и размножения
Апробация работы Материалы работы были представлены на 53-ей научной конференции студентов и молодьк ученых МСХА им К А Тимирязева
(Москва 2000). На 54-ой научной конференции студентов и молодых учёных МСХА им К А Тимирязева (Москва 2001) На научной конференции молодых учёных и специалистов МСХА 2004 г (Москва 2004) На научной конференции молодых ученых и специалистов МСХА 2004 г (Москва 2004)
Публикации По теме диссертации опубликовано 5 научных работ Объём и структура диссертации Работа содержит введение, обзор научных источников, главу, посвященную методике проведения опытов, четыре тематических главы, экономическую оценку, выводы и рекомендации к использованию результатов работы в технологии производства и приложение Работа изложена на 188 страницах, содержит 61 таблицу 15 фотографий Библиографический список включает
- 105 источника отечественных авторов и -101 источников зарубежных исследователей
ОБЪЕКТЫ УСЛОВИЯ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Опыты по изучению стерильной культуры шиповника проводились в лаборатории микроклонального размножения отдела земляники лаборатории плодоводства РГАУ - МСХА им К А Тимирязева и на территории 2-го отделения Калининградского Совхоза Декоративного Садоводства, по адресу г Москва ул Академика Скрябина вл № 17 в течении трех лет с 1998 по 2003 год.
Объекты исследования В качестве объектов исследований в программу проведения опытов были включены сорта шиповника, имеющие пищевое и сырьевое назначение «Витаминный ВНИВИ», «Глобус», «Титан» В качестве представителей декоративных сортов роз использовались из группы миниатюрных и патио роз «Little Buckaroo», «Red Асе», из группы плетистых роз. «New Down», «Pirtk: Sunblase», из группы парковых роз «La Mmuet», из группы чайно-гибридных роз «Gloria Dei», «Soma», «Rumba», «Flamingo», «Eiffel Turn», «Rose Gojar», представитель дикого вида — Rosa canina L
В качестве основного экспланта использовали пазушные почки размером 0,5-1,0 см, взятые нз средней трети молодых, активно растущих побегов, использовали отрезки побегов с узлом длиной 2-3 мм, проращенных из побегов в стадии покоя Верхушки побегов, выросших при пониженных температурах и этиоляции
В опытах по изучению влияния времени года на приживаемость шиповника на этапе введения эксплантами служили боковые почки с удаленными почечными чешуями и зачатками листьев, размером 0,5-1,0 см
Условия стерилизации Стерилизация растительного материала происходила по методике с применением раствора гипохлорита натрия (2-3%) Стерилизация материала одревесневших побегов шиповника в осенне-зимнее время осуществлялась в несколько этапов Перед основной стерилизацией использовалась предварительная обработка фунгицидами, раствором перманганата калия и промывка с применением ПАВ (Твин-20)
Питательные среды В качестве исходной среды и среды для контрольных вариантов использовалась среда Мурашиге и Скуга (далее МС) дополненная тиамина шдрохлоридом 1,0 мг/л, пиридоксина гидрохлоридом 1,0 мг/л, никотиновой кислотой 1,0 мг/л, мезоинозитом 100 мг/л, сахарозой 25 г/л, агаром 6 г/л
Основной средой для исследования микроклонального размножения шиповника служили оригинальные среды созданные в результате опытов по определению оптимального состава среды для микроклонального размножения роз (табл. 4 и 14)
Условия культивирования Культуральные сосуды размещались на стеллажах с продольным расположением люминесцентных ламп Освещенность поддерживалась на уровне 3,0 КЛк (источник света -люминесцентные лампы белого цвета 35 Вт) Температура 21+ 2° С.
На этапе введения изучали возможность введения и развития эксплантов шиповника в стерильную культуру в сравнении с декоративными сортами роз
Для определения благоприятного состава минеральной основы питательной проведена серия опытов с участием декоративных сортов роз На этапе введения изучали влияние соотношения калия и азота на регенерацию и морфогенез эксплантов роз Соотношение калия и азота брались в диапазоне от 10/15 ммоль/л (1/1,5) до 20/60 ммоль (2/6 или 1/3) Изучали влияние различных концентраций кальция (Са++) в среде от 6,0 до 11,2 ммоль/л Исследовали влияние различных концентраций фосфора (Р043') (0,4 - 1,8 ммоль/л) на интенсивность и качество регенерации эксплантов
На стадии введения эксплантов шиповника изучали влияние веществ с антиоксидантной активностью и веществ, способствующих разрушению аскорбиновой кислоты Было изучено влияние концентраций меди от 0,025 до 10,000 мг/л Изучали влияние а - токоферола на приживаемость эксплантов в среде в концентрациях близких к концентрациям других витаминов (от 0,0 до 10,0 мг/л) Проверено развитие эксплантов на средах с различной концентрацией (от 0 г/л - посадка на жидкую среду с фильтровальной бумагой до 6 г/л) агара
Испытывали влияние объема культурального сосуда, введения в среду активированного угля и посадка различного вида эксплантов, прошедших различную предварительную подготовку
Исследована зависимость способности к регенерации эксплантов шиповника в зависимости от времени года
На этапе размножения изучали влияние соотношения калия и азота на морфогенез и размножение роз и шиповника.
Было исследовано влияние соотношения нитратного и аммонийного азота (МН4+/ЫОз") в различном соотношении от 3/1 до 1/4 Ион аммония вводился в среду в различных формах КН4]\т03, №14С1 и (МН4)2804 В качестве одного из возможных источников азота была испытана мочевина (от 0,0 до 3,0 ммоль/л)
На этапе размножения было изучено влияние различных концентраций кальция в диапазоне концентраций от 2,5 до 15,0 ммоль/л среды и различные
формы кальция кальций хлористый (СаСЬ х 2Н20 ), нитрат кальция (Ca(N03)2 х 2Н20) и органическая форма кальция - глюконат кальция
На этапе размножения в изолированной культуре шиповника были изучены различные концентрации салициловой кислоты, селенита натрия (соль с антиоксидантной и протекторной активностью), а - токоферола Исследовано совместное влияние различных концентраций агара (3,0-7,0 г/л) и 6-бензиламинопурина (6-БАП, 1,0-3,0 мг/л)
Был изучен процесс ризогенеза шиповника и декоративных сортов роз На стадии укоренения исследовали влияние соотношения 6-БАП и индолил-3-масляной кислоты (ИМК) Исследовали влияние состава среды, использованной на этапе размножения на последующий ризогенез С целью оптимизации процесса укоренения было изучено влияние на ризогенез гумата калия, в сравнении с действием ИМК на фоне различных минеральных основ среды
Адаптация укоренённых растений и не укорененных микрочеренков проведено в теплицах на стеллажах в пластиковых культивационных сосудах диаметром 25 см, покрытых полиэтиленовой плёнкой в смеси перлита и субстрата (1 1,5 части) на основе верхового торфа
Исследование анатомии листового и устьичного аппарата проводили путём микрокопирования поперечных срезов листьев различных микропобегов, взятых из стерильных условий на разных по составу средах и из условий m vivo Полученные данные фиксировали в виде параметров и обрабатывали статистически, а так же фиксировали на фотоснимках
Анализ концентрации аскорбиновой кислоты проводился методом титрования водной вытяжки из тканей реактивом Тильманса (раствор 0,001 н 2,6-дихлорфенолиндофенола) по стандартной методике
Статистическая обработка результатов производили путем расчетов с использованием пакета статистического анализа приложения Microsoft Excel.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Глава 1. Особенности регенерации и морфогенеза эксплантов шиповника на этапе введения в сравнении с розами декоративных сортов
Опыты на этапе введения показали, что шиповник в отличие от декоративных сортов роз проявляет низкую способность к росту на среде МС, которая признана многими исследователями, приемлемой для большинства декоративных сортов роз (табл 1 и 2) Среда МС при введении эксплантов сортов роз вызывает такие явление, как появление каллусной ткани и витрификации Появление этих признаков при дромышленном воспроизводстве растений в стерильной культуре является нежелательным
Таблица 1
Влияние условий этапа введения на приживаемость и развитие эксплантов шиповника «Витаминный ВНИВИ» (среда МС 6-БАП 1 мг/л , 2000 - 2002 гг )
Развитие экспланта Контроль Затемнение побегов перед посадкой 5 дн Этиолированные побеги, рост в темноте 2 нед Среднее по вариантам
Наличие каллуса, % 26,6 6,7 10,0 14,4
Наличие развитых листьев, % 26,6 20,0 10,0 18,9
Высота*, см 0,9 0,7 0,7 0,8
Количество живых эксплантов (бая нед), % 6,7 33,3 40,0 26,6
* НСР 0,05=0,33 см
Таблица 2
Особенности регенерации и морфогенеза различных эксплантов роз на среде МС (6-БАП 1 мг/л, 1998 г) ___
Развитие экспланта «Литтл Баккара» «Нью Даун» «Соня» «Фламинго» «Эйфелева Башня»
Приживаемость, % 95,0+4,9 98,0+3,1 83,0+8,4 72,0+10,0 98,0+3,1
Наличие каллуса, % 95,0+4,9 98,0+3,1 83,0+8,4 72,0+10,0 9,08+3,1
Растения, начавшие пролиферацию, % 32,0+10,4 61,0+10,9 18,0+8,6 12,0+7,3 29,0+10,1
Высота, см* 1,5 2,7 1,1 0,9 1,7
* НСР о;05=0,55 см
Регенерировавшие из почек побеги шиповника, полученные на среде МС при пересадке на этап размножения на среду МС, дополненную 1 мг/л 6-БАП через некоторое время погибали Одной из причин низкой приживаемости эксплантов шиповника на этапе введения, вероятно, являлась высокая концентрация аскорбиновой кислоты в тканях шиповника, поскольку известно, что концентрация ее в плодах может достигать 3000 мг %. Результаты поведённых анализов подтвердили это предположение Концентрация в тканях узлов вегетирующих побегах шиповника составила 100,3 мг %, что, почти, в три раза превышает этот показатель в тканях узлов одного из сортов роз (табл 3)
На основании результатов приживаемости эксплантов шиповника m vitro и измеренных концентраций аскорбиновой кислоты в тканях шиповника, было избрано два направления исследований
- первое - детальное изучение влияния минеральной основы среды на рост различных сортов роз в культуре in vitro,
- второе - изучение факторов, влияющих на процессы регенерации m vitro, и концентрацию аскорбиновой кислоты в тканях шиповника
Таблица 3
Содержание аскорбиновой кислоты в тканях шиповника
Использованная часть растения Время взятия образца Объем 0,001 н 2,6-дихлорфенолиндофен ола, пошедшего на титрование, мл Концентрация аскорбиновой кислоты, мг%
Узлы с почками вегетирующих побегов 1 порядка 15 06 2003 фаза начала цветения 5,7 100,3
Узлы с почками вегетирующих побегов 2 порядка 15 06 2003 фаза начала цветения 4,6 81,0
Полностью развитые листья с побегов 2 порядка, растущие в затенении 15 06 2003 фаза начала цветения 17,7 312,0
Узлы с почками зимующих верхней части побегов 1 порядка 17 02 2003 фаза покоя 4,2 74,4
Узлы с почками зимующих нижней части побегов 1 порядка 17 02 2003 фаза покоя 4,9 85,4
Влияние концентраций макроэлементов на приживаемость эксплантов шиповника Поскольку, на момент начала исследований этапа введения, мы не имели возможность получить экспланты шиповника в достаточном количестве, изучение влияния минерального состава среды на этапе введения проводилось на декоративных сортах розы
В течение исследований на этапе введения были исследованы соотношения калия и азота (К/КГ) в диапазоне от 10/15 до 20/60 ммоль/л
Концентрации кальция в среде изменялись в пределах от 6,0 до 11,2 ммоль/л
Концентрации фосфора изменялись от 11,0 до 60,0 ммоль/л Результаты опытов установили, что средой, обеспечивающей наиболее оптимальные условия для введения эксплантов декоративных сортов роз, оказалась среда со следующими характеристиками соотношение калия и азота (К/Ы) в среде - 10/30 ммоль/л, достаточно высокая концентрация кальция 6,5 -8,0 ммоль/л, и несколько более высокая концентрация фосфора, чем в среде МС, а именно 46 ммоль/л (200 мг/л КН2Р04)
Данная среда обеспечивала не только более высокую приживаемость эксплантов декоративных сортов роз, по сравнению со средой МС, но и предотвращала проявление на большинстве сортов таких негативных явлений, как образование каллусной ткани и витрифнкацию растений, что немаловажно для промышленного воспроизведения растений посредством микроклонального размножения (табл 4)
Таблица 4
Среда I, полученная для введения эксплантов шиповника
Макросоли* Концентрация мг/л
NH4N03 800
KN03 380
K2S04 368
Ca(N03)2 * 2Н20 1160
СаС12 * 2Н20 100
КН2Р04 200
MgS04 370
N суммарный, ммоль 30
К суммарный, ммоль 10
Са суммарный, ммоль 6,5
На среде I оказалось возможным получение регенерации побегов шиповника и его нормальный рост (табл 5)
Приживаемость эксплантов шиповника значительно зависела от времени года Максимального значения приживаемость достигала в весенне-летнее время Так в июне приживаемость достигала 83,3 %, но уже к августу она падала до 36,5 % (табл 6) Такая закономерность развития характерна для многих растений умеренной зоны
Таблица 5
Сравнение роста и развития эксплантов сортов роз и гибридного шиповника «Витаминный ВНИВИ»* (среда I, 6-БАП 1 мг/л , 2000 - 2001 гг )
Рост и развитие эксплантов Сорта Розы гибридной и шиповник «Витаминный ВНИВИ»
«Витаминный ВНИВИ» «Литгл Баккара» «Ламинуэт» «Глория Дей»
Наличие каллуса, % 20,0 37,0 5,0 0,0
Наличие листьев, % 53,3 95,0 87,5 100
Высота *, см 0,6 1,5 1,1 0,8
Выжившие к 6-ой неделе, % 60,0 97,0 87,5 100
*НСР 0>05=0,31 см, Влияние времени года на приживаемость и развитие
Таблица 6 эксплантов
Показатель Месяц, в который производилось введение эксплантов
апр май июнь июль авг сент окт ноя дек янв февр
Начало роста, % 60,0 91,7 91,7 80,0 78,8 53,0 40,0 70,0 60,0 41,7 41,7
Наличие листьев, % 33,3 58,3 83,3 50,0 36,3 53,3 0,0 50,0 30,3 33,3 33,3
Высота*, см 0,6 1,0 1,0 0,8 0,8 0,6 0,5 0,4 0,5 0,4 0.4
Выжившие к 5-ой неделе**, % 53,5 58,3 83,3 55,0 36,5 53,3 20,0 0,0 20,0 25,0 25,0
* НСР о,о5=0,40 см
Приживаемость эксплантов шиповника была существенно ниже, чем у сортов роз
Влияние различных веществ и условий выращивания на приживаемость эксплантов шиповника.
Одно из основных предположений о причинах неудовлетворительной регенерации и приживаемости эксплантов шиповника на этапе введения -повышенная концентрация аскорбиновой кислоты в их тканях Одним из веществ, способствующих защите клеточных структур и повышающих сопротивляемость ко многим отрицательным факторам, является салициловая кислота, которая может быть использована, как антивирусный и антимикоплазменный агент
Обработка черенков шиповника растворами салициловой кислоты различной концентрации и введение ее в среду в концентрации 0,02 г/л способствовало значительному повышению приживаемости эксплантов (табл. 7) Концентрация 0,05 г/л в растворе для обработки черенков и введение салициловой кислоты в среду в концентрации 0,02 г/л позволяют максимально повысить приживаемость эксплантов и выход микрочеренков пригодных для дальнейшего размножения
Повышение концентрации меди в среде, как агента, способствующего интенсивному разложению аскорбиновой кислоты, дало положительный результат при добавлении в среду в виде кристаллогидрата сульфата меди в концентрациях 0,050 и 0,250 мг/л, по сравнению с контролем на 20 % (0,025 мг/л - по прописи МС принятой для микроэлементов во всех опытах) Повышение концентрации сульфата свыше 0,250 мг/л среды оказывало на экспланты токсичный эффект
Таблица 7
Влияние концентраций салициловой кислоты на развитие эксплантов шиповника сорта «Витаминный ВНИВИ» т vitro (среда I, 6-БАП 1 мг/л, 2001 - 2002 гг) ______
Развитие эксплантов Концентрация салициловой кислоты для обработки черенков, г/л Салициловая кислота в среде 0,02 г/л
0,00 0,01 0,05 0,10 0,25 0,50
Наличие каллуса, % 0,0 0,0 0,0 30,0 0,0 10,0 0,0
Наличие листьев, % 21,0 60,0 75,5 80,0 55,5 30,0 66,7
Растения прожившие 6 недель, % 25,0 75,0 70,0 80,0 70,0 41,5 91,7
Исследование влияния а - токоферола обусловлено необходимостью проверки влияния высоких концентраций антиоксидантов на регенерацию эксплантов шиповника Поскольку введение аскорбиновой кислоты, в качестве антиоксиданта, после приготовления среды путем фильтрации является нетехнологичным, в качестве вещества с подобными функциями был избран а-токоферол Введение в среду а - токоферола не вызвало увеличения приживаемости по сравнению с контрольным вариантом, а при добавлении в среду в концентрации 10 мг/л вызывало образование каллуса у микропобегов и появление витрифицированных регенератов (табл 8)
Таблица 8
Влияние различных концентраций а-токоферола на приживаемость и развитие эксплантов шиповника «Витаминный ВНИВИ» (среда I, 6-БАП 1
мг/л, 2001 - 2002 гг)
Развитие эксплантов Концентрация а-токоферола, мг/л
0,0 0,0 + этанол 5 мл/л 2,0 5,0 10,0
Высота микропобегов, см* 0,6 0,7 0,5 0,6 0,7
Доля каллуса, % 25,0 41,7 33,3 36,4 66,7
Экспланты образовавшие листья, % 41,7 33,3 16,7 27,2 31,7
Витрификация, % 0,0 0,0 25,0 36,4 50,0
* НСР 0,01 - 0,7 см
Был установлен положительный эффект от снижения концентрации агара в среде на приживаемость и регенерацию эксплантов шиповника Это может быть обусловлено большей мобильностью веществ, выделяющихся при повреждении тканей экспланта перед посадкой Данный прием иногда применяется для культур, выделяющих в среду фенольные вещества на этапе введения Максимальная приживаемость 100 % достигалась на среде с концентрацией агара 2,5 г/л (полужидкое состояние среды) При этом ни в одном из вариантов не отмечено появления верифицированных растений (табл 9)
Таблица 9
Влияние изменения концентрации агара на показатели роста и развития эксплантов шиповника сорта «Витаминный ВНИВИ» (среда I, 6-БАП 1 мг/л, 2001-2002 гг) _
Развитие эксплантов Концентрация агара г/л*
6,0 4,0 2,5 0,0 (жидкая среда с мостиком)
Экспланты, начавшие рост, % 66,7±13,5 83,3±18,8 100 92,0±7,8
Экспланты с развитыми листьями, % 58,3±11,0 83,8±8,4 100 91,7±10,5
Экспланты, сохранившие жизнеспособность через 6 недель, % 41,7±14,1 58,3±14,2 91,7±7,8 66,7±13,6
Высота микропобегов, см 0,6 0,6 1,8 1,6
*НСР 0,05=0,41 см *НСР 0,01=0,55 см
На этапе введения отмечено положительное влияние увеличение объема культурального сосуда, так приживаемость достигала 100 % при использовании пробирок объемом 25 и 50 мл
Таблица 10.
Влияние способа введения экспланта на приживаемость и развитие эксплантов различных сортов шиповника (среда I, 6-БАП 1 мг/л , 2002 - 2003
гг)
Тип экспланта Сорт шиповника Развитие эксплантов
Экспланты, развернувшие листья, % 1 Экспланты, сохранившие жизнеспособност ь через 6 недель, % | Высота микропобегов, см Приживаемость на следующем пассаже
Почки вызревшего побега «Витаминный ВНИВИ» 36,3 40,0 0,6* 16,7
«Глобус» 40,0 33,3 0,7 8,3
«Титан» 25,0 25 0,6 5,0
Среднее по сортам 33,7 32,8 0,6 10,0
Почки с побега полученного проращиванием «Витаминный ВНИВИ» 50,0 100 0,8 35,5
«Глобус» 66,7 100 1,1 66,7
«Титан» 66,7 100 1,0 50,0
Среднее по сортам 61,1 100 1,0 50,7
*НСР o,oi = 0,55
Значительное увеличение доли регенерировавших эксплантов (до 100%) было достигнуто при применении специальных манипуляций с побегами шиповника перед введением При этом применялся способ, который мог потенциально понизить концентрацию аскорбиновой кислоты в побегах Для этого черенки, взятые с растений, помещались в холодильник, где они проращивались при температуре + 5°С, после чего на среду высаживались отрезки вновь образованных побегов (табл 10)
Глава 2. Особенности развития и размножения микропобегов шиповника на этапе размножения в сравнении с розами декоративных сортов.
Влияние концентраций макроэлементов на развитие микропобегов шиповника. Поскольку на момент начала исследований введения эксплантов шиповника в количестве достаточном для получения данных было затруднительньм опыты по изучению влияния минерального состава среды на развитие эксплантов растений рода Rosa L проводилось на декоративных сортах
На этапе размножения изучали влияние соотношения концентраций калия и азота в диапазоне соотношений (K/N) 5/15 - 10/60 ммоль/л на эффективное размножение декоративных сортов роз и сортов шиповника
Было установлено, что наиболее благоприятными средами на данном этапе являются среды с соотношением калия и азота (K/N) 10/30 и 10/37,5 ммоль/л среды Они обеспечивали достаточный коэффициент размножения от
бДпобегов в одном конгломерате у сорта «Little Buckaroo» до 3,0 побегов в среднем у сортов чайно-гибридных роз «Sonia», «Flamingo», «Eiffel Turn» Данные концентрации обеспечивали достаточную высоту и выравненность микропобегов в конгломерате Эти же среды обеспечивали минимальный уровень образования каллуса
Изучение культуры шиповника на этапе размножения позволило выявить закономерности и найти приемы для его успешного и эффективного размножения
Была установлена зависимость характера роста и интенсивности размножения от соотношения концентраций аммонийного и нитратного азота Были поставлены три опыта, по изучению влияния формы аммонийного азота (NH4NO3, NH4CI или (NH4)2S04) Из диапазона концентраций (NH^/NCV) благоприятной для размножения средой оказалась среда с соотношением аммонийного и нитратного азота (NH4VNO3") 1/1 и 1/2 или 15/15 и 10/20 ммоль/л в среде Эта среда не содержала NH4CI или (NEL^SC^, а только нитрат аммония Преобладание в среде нитрат аниона вызывает спонтанное укоренение микрочеренков роз, а среда с соотношением (NH+VNCb") 7/22 ммоль/л - и активное формирование каллуса в основании побегов (табл 11 и 12)
Дальнейшее размножение подтвердило эффективность установленного соотношения концентраций аммонийного и нитратного азота
Таблица 11
Влияние различных соотношений аммонийного и нитратного азота с добавлением в состав среды сульфата аммония на спонтанное укоренение
Сорт роз Соотношение NH4/N03, ммоль/л
22/7 20/10 15/15 10/20 7/22
«Литтл Баккара» 0/0 о/о 75/0 41/25 58/42
«Нью Даун» 0/0 о/о 41/17 50/42 67/100
«Соня» о/о о/о 0/0 0/58 0/42
«Фламинго» о/о о/о 8/0 42/25 42/100
«Эйфелева Башня» о/о 0/8 0/8 25/25 8/100
Среднее но средам о/о 0/2 25/5 32/35 35/77
В числителе - доля конгломератов с корнями, в знаменателе - доля конгломератов с каллусом
Таблица 12
Влияние концентрации кальция на коэффициент размножения сортов роз,
Сорт роз Концентрации кальция Са++, ммоль/л
2,5 5,0 7,5 7 10,0 12,5 15,0
«Литтл Баккара» 8,7 6,0 5,5 6,0 4,6 3,7 2,5
«Нью Даун» 4,4 4,7 4,8 4,8 4,5 3,0 2,0
«Соня» 5,8 6,0 5,8 6,4 4,5 2,0 2,0
«Фламинго» 4,2 6,4 5,5 6,3 3,0 2,2 1,5
«Эйфелева Башня» 6,8 7,5 6,7 8,3 5,2 2,2 1,0
Среднее по средам 6,0 6,2 5,6 6,4 4,4 2,6 1,8
НСР 0,05=0,87 шт побегов/ конгломерат НСР0,01=1,15 шт побегов/ конгломерат
** данный вариант с концентрацией 7,5 ммоль/л Са"14" содержал минимальную концентрацию СаС12
Оптимальными для развития и размножения роз оказались высокие концентрации кальция 7,5 и 10,0 ммоль/л Как высокие 10,0-15,0 ммоль/л, так и низкие концентрации кальция 2,5-5,0 негативно влияло на развитие микрочеренков роз Низкие концентрации кальция вызвали развитие некрозов верхушек побегов и появление оводненных растений, при том условии, что концентрация 6-БАП во всех опытах по размножению роз и шиповника составляла только 1,0 мг/л (табл 12 и 13)
Применение глюконата кальция на этапе размножения дало положительный эффект
При сравнении двух наиболее благоприятных вариантов опытов, в одном из которых кальций представлен нитратом кальция, а во втором глюконатом кальция, вариант с глюконатом кальция оказывается более желательным источником кальция При несущественном увеличении коэффициента размножения глюконат кальция значительно снижает вероятность образования каллуса микропобегами
Таблица 13
Влияние концентрации кальция на образование каллуса* и витрифицированных побегов** у сортов роз, % (6-БАП 1 мг/л, 1998 - 2000 гг)
Сорт роз Концентрации кальция Са++, ммоль/л
2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0
«Литтл Баккара» 50,0/50,0* 58,3/ 0,0 41,7/0,0 16,7/0,0 0,0/0,0 0,0/0,0
«Нью Даун» 66,7/41,8 66,7/ 0,0 33,3/0,0 . 33,3/0,0 0,0/0,0 0,0/0,0
«Соня» 58,3/66,8 25,0/ 0,0 0,0/0,0 0,0/0,0 0,0/0,0 0,0/0,0
«Фламинго» 50,5/54,0 55,0/ 0,0 5,0/0,0 0,0/0,0 0,0/0,0 0,0/0,0
«Эйфелева Башня» 42,0/58,3 55,6/ 0,0 0,0/0,0 0,0/0,0 0,0/0,0 0,0/0,0
Среднее по средам 53,5/54,2 52,1/0,0 16,0/0,0 10,0/0,0 0,0/0,0 0,0/0,0
*в числителе — доля растений с каллусом, в знаменателе - доля растений с витрификацией
На основании полученных результатов была составлена пропись для этапа размножения роз, в которой учтено влияние всех исследованных концентраций и соотношений макроэлементов
Сравнение развития и размножения шиповника на среде, полученной на основании опытов, и на среде МС показало, что опытная среда (среда для размножения II) обеспечивает нормальное развитие микропобегов шиповника, в отличие от среды МС (табл 14)
Таблица 14 [роз (среда II)
Макросоли* Концентрация мг/л
КН4МОЗ 790
КЫОЗ 422
Са(ШЗ)2 * 2Н20 497
СаС12 * 2Н20 235
КН2Р04 200
1^804 370
N суммарный, ммоль 30
К суммарный, ммоль 6
Са суммарный, ммоль 7,5
Влияние концентраций веществ с антиокеидантной активностью, агара и б-БАП на развитие микропобегов шиповника.
На этапе размножения не было установлено ни положительного влияния салициловой кислоты, ни положительного эффекта селенита натрия -потенциального антиоксиданта Так же не вызвало положительного эффекта введение в среду а-токоферола Возможно это связано с тем, что концентрация аскорбиновой кислоты в конгломератах шиповника на этапе размножения была уже невысокой - 25,1 мг %
На этапе размножения, было установлено, что увеличение концентрации 6-БАП вызывает появление витрифицированных побегов в конгломератах шиповника Оптимальной концентрацией оказалась - 1,0 мг/л Уменьшение концентрации агара, как само по себе, так и на фоне увеличении концентрации 6-БАП так же способствовало появлению витрифицированных побегов
Максимальный коэффициент, достигнутый на этапе размножения шиповника, составил 7,1 побегов у сорта «Титан» при нормальной концентрации 6-БАП 1,0 мг/л
Таблица 16
Влияние состава минеральной основы среды на развитие микропобегов шиповника на этапе размножения (6-БАП 1 мг/л , 2001 - 2002 гг )_
Среда Сорт шиповника Показатель развития эксплантов
Доля отмерших побегов, % Коэффициент размножения*, шт побегов Высота конгломератов* *, см
МС «Витаминный ВНИВИ» 85,0 1,5 0,7
«Титан» 54,5 2,4 1,6
Среднее по сортам 69,8 2,0 1,2
Среда для размножения роз «Витаминный ВНИВИ» 0,0 6,7 3,2
«Титан» 0,0 7,1 3,6
Среднее по сортам 0,0 6,9 3,4
* НСР 0,01 - 0,70 см, ** НСР o,oi - 1,42 шт,
Глава 3. Особенности развития микропобегов шиповника на этапе укоренения в сравнении с розами декоративных сортов.
Для укоренения была использована среда для размножения II При этом не было отмечено положительного влияния добавления низкой концентрации 6-БАП (0,01 мг/л)
Для роз установлено влияние состава среды этапа размножения на последующее укоренение Различное соотношение аммонийного и нитратного азота (от 15/15 до 7/22 ммоль/л) существенно влияло на последующий ризогенез микрочеренков роз Максимальный процент укоренения отмечен в том случае, если на этапе размножения была использована среда с соотношением аммонийного и нитратного азота 10/20 ммоль/л В этом варианте укоренение достигало 100% при длине корней в среднем 3,7 см и количестве корней 4,5 на один микрочеренок При укоренении микрочеренков пересаженных со среды с соотношением аммонийного и нитратного азота 15/15 ммоль/л эти же показатели составили 59,8%, 1,0 см, и 2,9 шт корней на один микрочеренок
Обнаружено положительное влияние применения гумата калия по сравнению с традиционно применявшейся на этом этапе ИМК Эксперимент, учитывающий одновременное влияние состава среды и вида вещества, индуцирующего образование корней, показал, что в качестве такового может быть использован гумат калия
Среди различных концентраций гумата калйя выявлены концентрации, обеспечивающие наилучший результат укоренения - это 50,0 и 100 мг/л среды В этих вариантах отмечен средний процент укоренившихся микропобегов -87,1% одновременно с достаточным количеством корней на одном микрочеренке - 3,6-3,9 шт. и достаточной длине корней - около 2 см Таким образом гумат калия может быть более эффективной заменой ИМК
На этапе адаптации приживаемость декоративных сортов роз колебалась в пределах от 61,3 % до 100%, при этом способность к адаптации миниатюрного сорта была выше, чем у чайно-гибридных сортов
Адаптации шиповника колебалась в среднем от 52,3 % до 96,0 % На адаптацию сильное влияние оказали как состав среды, на которой производилось укоренение, так и концентрация ИМК Наиболее низкой способностью к адаптации отличались регенераты шиповника, полученные на среде МС с уменьшенной вдвое концентрацией и концентрацией ИМК равной 0,3 мг/л Максимальный выход на этапе адаптации шиповника наблюдался у черенков, полученных на среде II с дополнением 0,3 мг/л ИМК
Успех адаптации во многом зависит от состава среды, на которой получены микропобеги, что следует из опыта, в котором производилось укоренение не укоренённых черенков, взятых с этапа размножения Установлено, что среда II способствует эффективному укоренению декоративных роз в нестерильных условиях (табл 17)
Опыты по адаптации показали возможность успешного и эффективного применения микроклонального размножения в производстве посадочного материала и селекционных целях - для ускоренного воспроизводства отдельных генотипов шиповника Это особенно важно с той точки зрения, что большинство сортов шиповника имеют ограниченную способность к вегетативному размножению традиционными методами
Таблица 17
Влияние состава среды на развитие неукорененных побегов, полученных на этапе размножения, в нестерильных условиях (2002 - 2003 гг )__
Среда, использованна я на этапе размножения Сорт Йысота побегов в момент высадки, см Развитие микропобегов
Укоренение, % Длина корней, см* Количество корней 1-го порядка, шт ** Высота | микропобего в, см***
МС «Литгл Баккара» 1,4 0,0 - - -
«Нью Даун» 2,6 0,0 - - -
«Соня» 1,4 0,0 - - -
«Глория Дей» 1,3 0,0 - - -
«Эйфелева Башня» 2,1 0,0 - - -
Среднее по сортам 1,8 0,0 - - -
Среда для размножения роз «Литтл Баккара» 3,1 36,0 5,3 3,1 4,4
«Нью Даун» 3,8 35,0 11,8 1,2 5,7
«Соня» 2,4 15,0 4,5 2,1 2,7
«Глория Дей» 3,0 60,0 10,6 2,3 3,7
«Эйфелева Башня» 4,1 23,5 5,7 2,0 5,4
Среднее по сортам 3,3 33,9 7,6 2,1 4,4
*НСР оо5=1,0 см, НСР о,01=1,4 см **НСР 0,о5=0,5 шт, НСР 0>С1=0,7 шт ***НСР о,о5=0,8 см, НСР о,о1=1,0 см
Глава 4. Влияние состава питательной среды на морфологические характеристики растений роз в условиях in vitro.
Важность минерального состава среды является одним из ключевых условий успешного промышленного воспроизведения плодовых растений Он способен не только создать оптимальные условия для размножения и укоренения, но и как показали проведенные исследования, но и дает возможность избежать многих нежелательных явлений, как-то образование каллуса микропобегами и их витрификацию
Было установлено, что избыток калия в среде, недостаток кальция могут вызвать явление витрификации Изменение соотношения аммонийного и нитратного азота свыше 1/2 (> 10/20 ммоль/л) способно вызывать такой морфофизиологический эффект, как спонтанное образование корней и каллуса у микропобегов
Оценка анатомического состояния тканей показала более глубокие изменения, которые способен вызвать различный состав среды
Было установлено достоверное различие между строением тканей на поперечном срезе листа, а так же достоверные различия в строении устьичного аппарата листа (табл 18 и 19)
Ткани растений выросших на среде II, составленной на основании результатов исследований отличались от тканей растений, полученных на среде МС. У растений с пассажа, где была использована среда II, обнаружена в полтора раза большая ширина листа и в два раза большая толщина палисадной паренхимы Количество устьиц на 1 см2 у растений, полученных на среде П, было в среднем сходным с таковым у растений выросших в условиях in vivo Состав среды влиял на размер устьиц, который был больше у растений полученных на среде II Так же отмечено, что часть устьиц у растений со среды II способна к замыканию (табл 18, 19 Фото 1-6 )
Таблица 18.
Некоторые анатомические особенности микроскопического строения тканей листа. (6-БАП 1 мг/л., 2003 г.)___
Среда Сорт роз Параметры тканей
Толщина листа, мкм Толщина палисадной хлоренхимы, мкм Толщина верхнего эпидермиса, мкм Толщина центральной жилки, мкм
Среда для размнож. роз «Лигга Баккара» 126 44 30 251
«Нью Даун» 128 43 18 224
«Соня» 117 42 14 230
«Эйфелева Башня» 98 29 15 183
Среднее по сортам 117 40 19 222
MC «Литтл Баккара» 83 30 15 154
«Нью Даун» 84 14 15 160
«Соня» 112 26 Pío 175
«Эйфелева Башня» 71 13 13 151
Среднее по сортам 88 21 13 160
Условия in vivo «Литтл Баккара» 155 50 26 308
«Нью Даун» 165 55 25 340
«Соня» 263 140 45 550
«Эйфелева Башня» 210 82 35 515
Среднее по сортам 198 82 33 428
НСР 0,05=5,3 мкм, НСР 0,01=6,9 мкм по толщине листа. НСР 0,05=5,6 мкм, НСР 0,01=7,3 мкм по толщине палисадной паренхимы. НСР 0,05=5,3 мкм, НСР 0,01=6,9 мкм по толщине верхнего эпидермиса. НСР 0,05=11,5 мкм, НСР 0,01=15,0 мкм по толщине центральной жилки.
Фото 1. Поперечный срез листа. Условия in vivo. Сорт «Sonia»
Фото 2. Нижний эпидермис. Условия in vivo. Сорт «Sonia»_
Таблица 19.
Некоторые анатомические особенности микроскопического строения тканей листа. (6-БАП 1 мг/л., 2003 гг.)_
Среда Сорт роз Измеренные параметры
Количество устьиц, шт/мм2 Длина устьиц, мкм Доля закрытых устьиц, %
Среда для размнож. роз «Литтл Баккара» 204 27 70,0
«Нью Даун» 357 26 20,0
«Соня» 244 23 35,4
«Эйфелева Башня» 179 24 22,9
Среднее по сортам 246 25 37,1
МС «Литтл Баккара» 505 15 10,1
«Нью Даун» 485 19 2,1
«Соня» 536 18 1,9
«Эйфелева Башня» 413 18 2,5
Среднее по сортам 485 18 4,2
Среднее в условиях in vitro 366 22 20,7
Условия in vivo «Литтл Баккара» 280 27 80,0
«Нью Даун» 327 30
«Соня» 143 32 92,9
«Эйфелева Башня» 165 27 73,3
Среднее по сортам 229 29 77,9
НСР о,о5=57 шт/мм , НСР o,oi=74 шт/мм по количеству устьиц. НСР 0,05=5,1 мкм, НСР o,oi=6,6 мкм по длине устьиц.
Фото 3. Поперечный срез листа. Условия in vitro. Опытная среда "I". Сорт «Sonia»_
Фото 4. Нижний эпидермис. Условия in vitro. Опытная среда "1". Сорт «Sonia»
- ■
Фото 5. Поперечный срез листа. Условия in vitro. Среда МС. Сорт «Sonia»
Фото 6. Нижний эпидермис. Условия in vitro. Среда МС. Сорт «Soniav>
Исследования анатомии, согласующиеся с результатами, полученными при исследований состава среды, а так же сильное влияние состава среды на этапах введения и размножения шиповника показали значимость изученного вопроса и помогли в понимании процессов, происходящих в условиях стерильной культуры роз и шиповника.
Заключение
Вопрос полноценного питания и обеспечения витаминной продукции в рационе современного человека, особенно в крупных городах стоит крайне остро. Современный темп жизни и экологическая обстановка мегаполисов диктует необходимость в рационе человека витаминной продукции. Культура питания в свою очередь ставит в качестве основной цели разнообразие и привлекательность потребляемой пищи. Шиповник, как плодовая культура является одним из возможных элементов полноценной витаминной диеты. Совершенствование сортов и гибридов шиповника методами современной селекции может вывести эту культуру на новый уровень, вполне возможно, что плоды шиповника со временем, могут занять место одного из ценных диетических, высоковитаминных продуктов.
Питомниководство, призвано не только, обеспечивать производство посадочного материала плодовых и ягодных культур, но и создавать базу для эффективного размножения новых сортов. Селекция шиповника и роз как перспективных и востребованных культур не может обойтись без высокоэффективных методов ускоренного воспроизводства новых сортов и гибридов.
Культура in vitro на сегодняшний день является одним из эффективных методов размножения как плодовых, так и декоративных растений она не столько объёкт научных исследований, сколько незаменимый инструмент для массового воспроизводства растений и один из методов широко применяемых в селекции. Она так же призвана решить такую проблему, как распространение
вирусных и микоплазменных инфекций с посадочным материалом плодовых и декоративных культур
Исследования культуры m vitro шиповника и роз показали возможность эффективного размножения шиповника и позволили оптимизировать технологию размножения роз в стерильной культуре Результаты исследования и расчет экономической эффективности показали преимущество использования микроклонального размножения перед традиционным методом производства -Зеленым черенкованием
При производстве посадочного материала роз и шиповника методом зеленого черенкования применяется схема двухгодичного выращивания саженцев в условиях умеренной зоны В первый год производится укоренение черенков, на второй год черенки доращиваются в условиях открытого или защищенного грунта Для расчетов брались условия доращивания в открытом грунте При использовании для производства посадочного материала с применением культуры in vitro схема выращивания саженцев обычно состоит из двух этапов, которые составляют цикл размножения, завершающийся за один год Первый этап - собственно размножение в стерильной культуре, второй - доращивание саженцев в кассетах или контейнерах в защищенном грунте с применением установки искусственного тумана в первые две недели доращивания.
Расчетная стоимость посадочного материала шиповника, полученного методом микроклонального размножения, будет в полтора раза ниже чем, саженцев, полученных черенкованием (табл 20) Полный цикл микроклонального размножения составляет 32 недели и проводится с июля по март То есть в то время, когда размножение черенкованием возможно только в отапливаемых теплицах, что экономически менее выгодно Объемы денежных затрат, пошедших на приготовление сред для размножения роз (пропись сред в таблицах 4, 14) будут ниже, чем затраты, необходимые для приготовления среды МС
Таким образом, применение для размножения шиповника отработанных сред и приемов в культуре in vitro, является экономически оправданным и может быть рекомендовано для производства
Таблица 20
Расчет экономических показателей производства саженцев шиповника
№ Структура затрат Способ выращивания
п/п зеленое черенкование микроклональное размножение
собственно черенкование доращивание саженцев собственно микроразмно жение доращивание саженцев
1 Срок выращивания, нед 6 8 32 4
2 Затраты на материалы 145 706* 1 307 137 821** 5 400
3 Трудозатраты 80055 185 396 23 330 54 427
4 Энергозатраты 600 0 1 100 629
5 Отчисления аренды***, амортизации и ТО**** 131 894 66 024 63 000 131 894
6 Итого затрат 377 126 252 727 225 251 192 350
7 Выход посадочного материала за цикл 12000 10 000 12 000 10 000
8 Себестоимость растения 31,43 25,27 18,7 19,2
9 Итого себестоимость полного цикла размножения 56,70 37,9
Выводы.
В результате проведенных исследований в период с 1997 по 2003 год были разработаны приемы микроклонального размножения посадочного материала шиповника и оптимизированы условия стерильной культуры роз
1 Проведен полный цикл микроклонального размножения шиповника Показана способность к регенерации и развития шиповника в культуре in vitro
2 Определены оптимальные условия культивирования изолированных эксплантов шиповника и роз на стадии введения в культуру т vitro Установлен благоприятный состав среды для развития и регенерации эксплантов и проведен сравнительный анализ морфогенеза представителей рода Rosa L и шиповника
3 Определены условия культивирования и состав питательной среды, обеспечивающие необходимый коэффициент размножения и получение требуемого качества микропобегов шиповника и роз
4 Установлен состав питательной .среды не только, обеспечивающий высокий коэффициент размножения за пассаж, но и позволяющий максимально
исключить такие нежелательные явления, как образование каллусной ткани и витрификация растений на всех этапах размножения
5 Выявлены благоприятные условия укоренения шиповника в культуре in
vitro
6 Разработаны методы адаптации пробирочных растений и не укорененных микропобегов шиповника и роз в нестерильных условиях
7 Выявлены особенности строения устьичного аппарата, морфологические и анатомические параметры листовой пластинки в зависимости от состава среды
Рекомендации производству.
Для успешного размножения шиповника с применением культуры т vitro необходимо перед введением производить проращивание почек, взятых с зимних побегов Этот прием позволяет существенно увеличить приживаемость на этом этапе Начало стерильной культуры следует начинать в июне, что обеспечит проведение адаптации в оптимальные сроки и позволит завершить цикл размножения за один год Необходимо проводить проращивание почек побегов с добавлением в воду 0,10 г/л салициловой кислоты, что увеличивает долю растений с развитыми побегами и листьями
На этапе собственно введения, необходимо, использовать среду I, представленную в таблице 4 Увеличение концентрации меди в среде до 0,05 мг/л позволяет эффективно (в 1,4 раза) повысить приживаемость эксплантов шиповника на данном этапе
На этапе размножения следует использовать среду II (табл 14) Использование этой среды позволяет добиться увеличения коэффициента размножения в 3 раза по сравнению с размножением на среде МС и при этом исключить физиологические расстройства - витрификацию, отмирание побегов в конгломерате и образование каллуса
На этапе размножения рекомендуется применение салициловой кислоты в качестве антимикоплазменного и антивирусного вещества в терапевтических концентрациях
Рекомендуется добавление в среду невысоких концентраций - 0,025-0,050 мг/л селенита натрия
На этапе укоренения гумат калия рекомендован в качестве более эффективной замены ИМК в концентрации 50-100 мг/л На этапах укоренения необходимо использовать среду, полученную на этапе размножения среда II Это обеспечит существенное (в 1,3 раза) увеличение доли адаптированных растений
Основные работы по теме диссертации
1 Поздняков И А Влияние состава среды на рост Rosa hybrida L in v/íro/Поздняков И А., Деменко В И //Сборник научных студенческих работ, вып 7 М, изд-во МСХА, 2001, С202-209.
2 Поздняков И А Влияние состава среды и методики культивирования на микроклональное размножение розы гибридной /Поздняков И А, Деменко В И //Доклады ТСХА, вып 276 М, изд-во МСХА, 2004, С501-506
3. Поздняков И А Влияние состава среды на микроклональное размножение роз (Rosa х hybrida L) // Материалы юбилейной научной конференции молодых ученых и специалистов Московская с -х академия -М, изд-во МСХА 2003, - С 464-474
4 Поздняков И А Особенности микроклонального размножения плодовых гибридов шиповника (Rosa L ) // Материалы научной конференции молодых ученых и специалистов МСХА -М изд-во МСХА 2005,-С 387-396
5 Деменко В И , Поздняков И А Особенности пролиферации боковых побегов при микроклональном размножении садовых растений // Изв ТСХА -2007 N1 -С 106-111
1,5 печ л
Тир 100 экз
Зак 769
Центр оперативной полиграфии ФГОУ ВПО РГАУ - МСХА им К А Тимирязева 127550, Москва, ул Тимирязевская, 44
Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Поздняков, Иван Александрович
Введение.
1. Обзор литературы.
1.1. Значение культуры шиповника.
1.2. Особенности размножения плодовых гибридов шиповника и представителей рода Rosa L.
1.3. Биологические основы размножения шиповника in vitro.
1.3.1. Особенности этапа введения представителей рода Rosa L.
1.3.2. Особенности этапа размножения представителей рода Rosa L.
1.3.3. Физиологические нарушения, возникающие у роз в культуре in vitro.
1.3.4. Особенности этапов укоренения и адаптации представителей рода Rosa L.
2. Экспериментальная часть.
2.1. Цели и задачи исследований.
2.2. Объекты, методика и условия проведения экспериментов.
Микроклональное размножение.
Учёты и наблюдения.
2.3. Результаты исследований и обсуждение.
Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Особенности микроклонального размножения шиповника и декоративных сортов рода Rosa L."
Представители рода Роза, глубоко вошли в жизнь человека, его культуру, быт и традиции. Разнообразие сортов, форм и гибридов роз поражает - на момент 2000 года в мире насчитывалось свыше 24000 сортов (Сурина, Сурина. 2002). При этом природных видов насчитывается всего около 150-200 (по ряду источников до 400) видов (Хржановский 1958, Тахтаджан и др. 1981). На сегодняшний день роза применяется в качестве эфиромасличной, лекарственной и пищевой культуры (Магомедов, Мирошникова, Абдулгалимова 2003). Несмотря на то, что большинство сортов используется в качестве декоративной культуры, ряд сортов имеет важное пищевое и фармацевтическое значение.
Термин шиповник применяется по отношению к формам, гибридам, сортам роз, имеющим плодовое назначение и видам. Этот же термин считается русским эквивалентом латинского названия рода Rosa L. для видов распространённых на территории России (Усенко 1969, Губанов и др. 1995, Хржановский 1958, Тахтаджан и др. 1981). Ряд сортов и сортообразцов, выращиваемых в культуре представляет собой формы, отобранные из популяций диких видов. К таким сортам относятся «Крупноплодный ВНИВИ», «Российский 2», «Юбилейный» (Стрелец, Агафонов 1994). Морфология и габитус растений сортов, имеющих плодовое назначение, близок к габитусу диких, предковых представителей рода таких, как Р. коричная (R. cinnamomea L.), Р. морщинистая (R. rugosa Thunb.), Р. яблочная (R. pomifera Herrn.), P. Уэбба (R. webbiana Wall.).
В настоящее время культура шиповника имеет два основных направления использования. Первое - плодовое, при этом используются мягкие оболочки гипантия - ложного плода, как в свежем виде, так и в виде концентратов для витаминной и пищевой промышленности. Второе -использование плодов (простых плодиков - костянок) для получения масла. Культура шиповника является одним из важнейших источников каротина и аскорбиновой кислоты для пищевой и фармакологической промышленности. Его плоды содержат рекордные количества витамина С свыше 3000 мг% и витамина Р около 1000 мг%. Содержание каротина у отдельных сортов достигает 30 мг% (Стрелец 2000). Из наиболее важных и распространённых продуктов шиповника можно отметить следующие: сироп из плодов шиповника, сушёные плоды шиповника, витаминные концентраты из мякоти плодов шиповника. Значительная часть каротина, используемого в качестве красителя для пищевой и кондитерской промышленности, получается из плодов шиповника. Употребление плодов в свежем виде не столь распространено, но небольшое их количество способно удовлетворить суточную потребность в витамине С.
Шиповник является перспективной культурой для нечернозёмной зоны плодоводства, поскольку он обладает рядом уникальных качеств. Во-первых, это рекордное содержание витаминов в плодах, ни одна культура умеренной зоны не содержит такие количества аскорбиновой кислоты и витамина Р. Во-вторых, шиповник обладает высокой морозоустойчивостью и зимостойкостью а зона промышленного выращивания может быть продвинута до широты Санкт-Петербурга и Архангельска (Пименов и сотр. 1987). В-третьих, культура шиповника нетребовательна к качеству почв и может произрастать на относительно бедных почвах. Большинство сортов и форм способно ежегодно давать устойчивые урожаи, вне зависимости от погодных условий. Урожай с куста достигает у ряда сортов 4 кг с куста при схеме посадки 3 х 3 м, что соответствует урожайности 4,4 т с гектара. Средняя урожайность ряда сортов в условиях Средне-Волжской Зональной Опытной Станции достигала 6 т. с гектара (Пименов и сотр. 1998), по многолетним данным Крымской Опытной Зональной Станции шиповник на каменистых почвах способен в возрасте 5 лет давать урожаи по 2,0-2,5 т/га (Турсин и сотр. 1990). Сравнительно молодая в историческом плане культура шиповника уже достигла урожайности такой традиционной ягодной культуры, как смородина. Современные сорта отличаются по размеру ягод и урожайности от диких видов более чем в три раза, превосходя их по содержанию витаминов и питательности. Средняя масса ложного плода шиповника коричного (К. стпатотеа Ь.) имеет среднюю массу в момент созревания 0,5 г., масса ложного плода шиповника разных сортов колеблется от 1,5 до 10 г (Стрелец 2000). Высота кустов сортов шиповника иногда более чем в полтора раза превышает высоту родительских видов. Побеги большинства сортов более мощные и долговечные, чем у предковых форм. Многие сорта такие, как «Витаминный ВНИВИ», «Пальчик», «Каштановый» несут на побегах меньше колючек, чем предковые сорта. Процесс селекции в настоящее время находится на этапе завершения отбора выдающихся форм из природных популяций и продолжении проведения активных внутривидовых и межвидовых скрещиваний. На сегодняшний день известно свыше двух десятков сортов шиповника, рекомендованных для промышленного производства. Среди наиболее перспективных сортов можно назвать такие сорта, как: «Витаминный ВНИВИ», «Воронцовский 1», «Воронцовский 3», «Каштан», «Крупноплодный ВНИВИ», «Победа» «Российский 2», «Титан», «Юбилейный», «Яблочный».
Приоритетными направлениями селекции шиповника на сегодняшний день считаются следующие. Во-первых, проводится создание сортов, обладающих плодами с большей долей мякоти. Во-вторых, отбор новых сортов шиповника должен быть направлен на улучшение органолептических характеристик плодов шиповника таких, как уменьшение количества плодиков - орешков и трихом внутри ложного плода. В-третьих, проводится поиск форм шиповников устойчивых к ржавчине и создание на их основе иммунных сортов (Стрелец, Агафонов 1994, Пименов и сотр. 1998).
Одной из характеристик многих сортов шиповника является его низкая способность к вегетативному размножению. Большинство сортов шиповника характеризуется слабой способностью к наращиванию побегов и вегетативной массы куста. Многие из них слабо образуют побеги возобновления. Размножение ряда сортов черенкованием, как зелёными, так и одревесневшими черенками затруднено. Особенности вегетативного размножения сильно варьируют в зависимости от сорта и предковых видов. Низким ростом кустов и слабым наращиванием массы побегов обладают сорта и формы, полученные с участием шиповника морщинистого (R. rugosa). Слабой способностью к образованию побегов возобновления отличаются сорта «Глобус», «Каштан», «Титан», но они имеют среднюю способность к размножению зелёными черенками.
Трудности вегетативного размножения шиповников связаны, прежде всего, с особенностями их физиологии, биохимии и морфологии. Один из авторов установил закономерность, что сорта, происходящие из тёплых и влажных мест более способны к укоренению, чем сорта из сухих и холодных регионов (Сушков 1967). К трудно укореняемым сортам этим автором отнесены сорта Р. столепестной (R. centifolia), Р. дамасской (R. damascena L.), Р. альба (R. alba), Р. лютеа (R. lutea), Р. морщинистой (R. rugosa Thunb). Для каждого сорта шиповника способность к укоренению различна, в целом способность к размножению шиповников, как одревесневшими, так и зелёными черенками низкая по сравнению с большинством сортов декоративных роз.
В современном питомниководстве приняты и традиционно используются следующие виды размножения сортов и видов роз.
1. Прививка глазков или побегов на семенные или вегетативно размножаемые подвои.
2. Размножение одревесневшими черенками.
3. Размножение зелёными, облиственными черенками.
Такие методы, как размножение отводками, размножение корневыми черенками и делением куста не получили широкого распространения в промышленном производстве, поскольку они имеют низкий коэффициент размножения и применимы не для всех сортов.
В настоящее время отмечается тенденция к переходу с привитой культуры роз и шиповника на корнесобственную (Баев, Джабаев 1998,
Турсин и сотр. 1990). Причиной тому служит ряд трудностей при производстве привитых роз и некоторые отрицательные качества, которыми обладают привитые розы. Для создания саженца привитой розы требуется не менее 3-4 лет. При использовании в качестве подвоев сеянцев Р. собачей (R. canina L.), Р. коричной (R. cinnamomea L.) и других видов существует проблема низкой всхожести их семян. Основными недостатками привитых роз, сильно осложняющими их культуру, являются, сильное образование поросли и плохая совместимость ряда сортов, что делает привитую культуру недолговечной.
Большинство сортов рода роза обладает достаточно устойчивой корневой системой и слабо повреждается неблагоприятными факторами окружающей среды в зимний период. По этой причине в большинстве регионов выращивания розы предпочтителен переход к корнесобственной культуре. Корнесобственные розы лишены недостатков привитых роз. Получить полноценный саженец можно за 1,5-2 года. Они не образуют поросли, а значит, они не требуют проведения ежегодной операции удаления побегов подвоя. Большинство корнесобственных роз более устойчивы благодаря тому, что они способны возобновлять побеги от подземной части куста, привитые розы такой возможности лишены.
Недостатком всех перечисленных методов размножения является так же о то, что все они являются одним из возможных путей передачи вирусных инфекций и карантинных заболеваний. Опасность вирусных и микоплазменных заболеваний состоит в том, они могут долгое время не проявлять себя в виде заметных симптомов и распространяться при вегетативном размножении. Вопрос чистоты посадочного материала от инфекции важен при возделывании культуры по интенсивной технологии, когда требуется частая смена насаждений и в питомниководстве, когда вегетативное размножение растений происходит особенно интенсивно. Вирусные и микоплазменные инфекции, отмеченные на розе и шиповниках способны сильно снизить продуктивность растений, качество продукции, их иммунитет и способность к размножению. На розах отмечено распространение таких вирусных инфекций, как вирус кольцевой пятнистости сливы (Prunus Necrotic Ringspot Virus), вирус кольцевой пятнистости томатов (Tomato Necrotic Ringspot Virus), вирус линейной и жилковой пятнистости розы (Rose Yellow Mosaic Virus) и многие другие вирусы (Сурина, Сурина. 2002, Bjarnason et al. 1985).
Одним из эффективных способов получения корнесобственных саженцев является метод микроклонального размножения. Культура in vitro роз на данный момент не является достаточно изученной, для того чтобы посредством её можно было успешно размножать все без исключения сорта и формы. Многие сорта роз способны успешно и активно размножаться посредством микроклонального размножения.
К моменту начала проведения работы в научных источниках не было обнаружено работ, посвященных микроклональному размножению сортов шиповника, имеющих плодовое назначение. Поэтому, культура микроклонального размножения роз и в особенности сортов шиповника требует более детального и глубокого изучения.
Настоящая работа посвящена изучению условий культивирования in vitro и состава искусственной питательной среды на микроклональное размножение гибридов шиповника.
1. Обзор литературы.
Заключение Диссертация по теме "Плодоводство, виноградарство", Поздняков, Иван Александрович
Выводы.
В результате проведённых исследований в период с 1999 по 2003 год был разработан цикл микроклонального размножения посадочного материала шиповника и оптимизированы условия стерильной культуры роз.
1. Проведён полный цикл микроклонального размножения шиповника. Показана принципиальная возможность регенерации и развития шиповника в культуре in vitro.
2. Определены оптимальные условия культивирования на стадии введения (I), определить благоприятный состав среды для развития и регенерации эксплантов шиповника, провести сравнение с развитием декоративных представителей рода Rosa L. на данном этапе.
3. Определены условия культуры и состав среды, обеспечивающие необходимый уровень размножения при требуемом качестве микропобегов шиповника в сравнении с культурой декоративных сортов роз на этапе размножения (II).
4. Найден состав среды на только, обеспечивающий высокий коэффициент размножения за пассаж, но и позволяющий максимально исключить такие нежелательные явления, как образование каллусной ткани и витрификация растений на всех этапах размножения.
5. Изучена возможность укоренения шиповника в культуре in vitro и выявлены благоприятные условия необходимые для обеспечения этого процесса.
6. Изучены условия адаптации укоренённых и не укоренённых микропобегов шиповника и роз в нестерильных условиях.
7. изучить морфологические и анатомические особенности листового и устьичного аппарата представителей рода Rosa L. в зависимости от состава среды и влияние на развитие его на развитие микропобегов в нестерильных условиях.
Рекомендации производству.
Для успешного размножения шиповника с применением культуры in vitro необходимо перед введением производить проращивание почек, взятых с зимних побегов. Этот приём позволяет существенно увеличить приживаемость на этом этапе. Начало стерильной культуры оптимально начинать в январе - феврале, что обеспечит проведение адаптации в оптимальные сроки и позволит завершить цикл размножения за один год. Рекомендуется проводить проращивание почек побегов с добавлением в воду 0,10 г/л салициловой кислоты, что увеличивает долю растений с развитыми побегами и листьями.
На этапе собственно введения, возможно, использовать среду, подобранную для введения роз, представленную таблице 12.
Увеличение концентрации меди в среде до 0,05 мг/л. позволяет так же эффективно (в 1,4 раза) повысить приживаемость эксплантов шиповника на данном этапе.
На этапе размножения целесообразно использовать среду, оптимизированную для этапа размножения роз (таблица 41).
Использование этой среды позволяет добиться увеличения коэффициента размножения в 3 раза по сравнению с размножением на среде
МС и при этом исключить физиологические расстройства такие, как витрификация, отмирание побегов в конгломерате и образование каллуса.
На этапе размножения возможно применение салициловой кислоты в качестве антимикоплазменного и антивирусного вещества в терапевтических концентрациях. Введение салициловой кислоты так же усиливает рост и способность шиповника к размножению на данном этапе.
Рекомендуется добавление в среду невысоких концентраций - 0,0250,050 мг/л. селенита натрия.
На этапе укоренения гумат калия может быть рекомендован в качестве более эффективной замены ИМК. Данное вещество показало выраженную способность к индукции ризогенеза. Обнаружено, что оптимальные концентрации этого вещества для индукции ризогенеза у микропобегов роз лежат в пределах 50-100 мг/л. Применение гумата калия существенно по сравнению ИМК снижает вероятность образования каллуса в основании побегов.
На этапах укоренения желательно использовать среду, полученную на этапе размножения, путём подбора оптимальных концентраций макроэлементов. Это обеспечит существенное (в 1,3 раза) увеличение доли адаптированных растений.
2.4. Заключение
Вопрос полноценного питания и обеспечения витаминной продукции в рационе современного человека, особенно в крупных городах стоит крайне остро. Современный темп жизни и экологическая обстановка мегаполисов диктует необходимость в рационе человека витаминной продукции. Культура питания в свою очередь ставит в качестве основной цели разнообразие и привлекательность потребляемой пищи. Шиповник, как плодовая культура является одним из возможных элементов полноценной витаминной диеты. Ряд рецептов, в состав которых входит шиповник, являются незаменимой частью витаминной терапии для организма, ослабленного стрессами и заболеваниями. Совершенствование сортов и гибридов шиповника методами современной селекции может вывести эту культуру на новый уровень, вполне возможно, что плоды шиповника со временем, могут занять место одного из ценных диетических, высоковитаминных продуктов.
Питомниководство, призвано не только, обеспечивать производство посадочного материала плодовых и ягодных культур, но и создавать базу для эффективного размножения новых сортов. Селекция шиповника и роз как перспективных и востребованных культур не может обойтись без высокоэффективных методов ускоренного воспроизводства новых сортов и гибридов.
Культура in vitro на сегодняшний день является одним из наиболее эффективных методов размножения как плодовых, так и декоративных растений. На сегодняшний день существует большое количество промышленных лабораторий с объёмом годового производства от 10 до 50 млн. растений в год (информация сайтов www.potosplants.nl, www.pac-elsner.de, www.innovaplant.com). А стерильная культура сегодня уже не столько объёкт чисто научных исследований, сколько незаменимый инструмент для массового воспроизводства растений и один из методов широко применяемых в селекции.
Разработка эффективной методики размножения in vitro таких культур, как шиповник и розы является необходимой задачей современного питомниководства. Культура in vitro так же призвана решить такую проблему, как распространение вирусных и микоплазменных инфекций с посадочным материалом плодовых и декоративных культур.
Исследования культуры in vitro шиповника и роз показали возможность эффективного размножения шиповника и позволили оптимизировать технологию размножения роз в стерильной культуре. Результаты исследования и расчёт экономической эффективности показали преимущество использования микроклонального размножения перед черенкованием.
При производстве посадочного материала роз и шиповника методом зелёного черенкования применяется схема двухгодичного выращивания саженцев в условиях умеренной зоны (Тарасенко 1991). В первый год производится укоренение черенков, на второй год черенки доращиваются в условиях открытого или защищённого грунта. Для расчётов брались условия доращивания в открытом грунте.
При использовании для производства посадочного материала с применением культуры in vitro схема выращивания саженцев обычно состоит из двух этапов, которые составляют цикл размножения, завершающийся за один год. Первый этап - собственно размножение в стерильной культуре, второй - доращивание саженцев в кассетах или контейнерах в защищённом грунте с применением установки искусственного тумана в первые две недели доращивания (таблица 1 приложения 2).
12 ООО растений за период размножения может быть обеспечено двумя работниками, один из которых выполняет пересадку, второй - приготовление среды. В этом случае необходим один ламинар-бокс и 60 м стеллажей в световой комнате. В расчётах применён средний коэффициент размножения 1/5,5
12 000 на этапе адаптации, согласно данным исследование способны обеспечить выход 10 ООО саженцев. Расчёт эффективности этапа адаптации и доращивания проводился с учётом высадки регенерантов в кассеты и условий плёночных теплиц с установкой искусственного тумана. В этом случае структура затрат будет выглядеть следующим образом. Время доращивания составит приблизительно 1 мес (таблица 2 приложения 2).
Себестоимость посадочного материала шиповника, готового к высадке в открытый грунт составит 37,90 руб. за саженец.
При использовании зелёного черенкования цикл размножения так же состоит из двух этапов и завершается за два года. Первый этап -черенкование в условиях защищённого грунта с установкой искусственного тумана, второй - доращивание саженцев в открытом грунте (таблица 3 приложения 2).
Такое количество растений может быть обеспечено двумя работниками, один из которых выполняет пересадку, второй - приготовление среды. В этом случае необходим один ламинар-бокс и 60 м стеллажей в световой комнате. В расчётах применён средний коэффициент размножения 1/5,5
На этапе доращивания из укоренённых черенков с учётом выпадов выход составит 10 000 шт. Расчёт эффективности этапа адаптации и доращивания проводился с учётом высадки регенерантов в кассеты и условий плёночных теплиц с установкой искусственного тумана. В этом случае структура затрат будет выглядеть следующим образом. Время доращивания составит приблизительно 2 мес (таблица 4 приложения 2).
Таким образом, себестоимость посадочного материала шиповника, полученного зелёным черенкованием, оставит 56,70 руб.
Таким образом, размножение шиповника и роз с применением культуры in vitro, может стать эффективной заменой зелёному черенкованию и позволит обеспечить воспроизводство этих культур с меньшими затратами в условиях умеренной зоны.
Сравнив эффективность размножения роз на среде МС и средах полученных в результате исследований установили, что опытные среды более экономичны по сравнению с МС. Так, для производства 16 200 шт. растений, затраты на реактивы в случае МС составят 186 969 руб., а в случае применения опытных сред соответственно - 186 058 руб.
Таким образом, цикл размножения роз и шиповника с применением культуры in vitro, может быть рекомендован для производства посадочного материала роз и шиповника.
Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата сельскохозяйственных наук, Поздняков, Иван Александрович, Москва
1. Александров И.В., Коссов И.И., Бурков П.А., Жигмид Д., Отгонбояр Д. Гуминовые вещества бурых углей, как мелиоранты солончаковых почв. // В. сб.: Гуминовые вещества в биосфере. М.:, Наука, 1993.-е. 174-178.
2. Алехно Г.Д., Высоцкий В.А. Клональное микроразмножение роз. // Физиология и биохимия культурных растений. Киев: «Наукова Думка»., 1986.-Т. 18- № 15.-е. 489-494.
3. Анализ транедукции сигнала цитокинина на гены первичного ответа. / Романов Г.А. // 6-ая Международная конференция «Регуляторы роста и развития растений в биотехнологиях». Москва. 26-28 июня 2001: Тез. докл. с. 61.
4. Баев В.И., Джабаев Б.Р. Новое в выращивании саженцев садовых роз. // Махачкала «Юпитер», 1998.
5. Бабаев В.И. Размножение плодовых и декоративных растений зелёными черенками в Дагестане. // Махачкала, 1983.
6. Бабаев В.И., Джамбулатова З.М. О сравнительном изучении привитой и корнесобственной из зелёных черенков культуры роз. // Тр. Даг. СХИ. Махачкала. 1980. с. 3-11.
7. Безуглова О.С., Шевченко И.Д. Влияние углегуминовых удобрений на гумусовое состояние чернозёма обыкновенного карбонатного. // Тез. докл. II съезда Общества почвоведов. // РАН.-Спб., 1996.-Кн. 1.-е. 147-148.
8. Бленда A.B. Вплив генотипу на особливост} м1кроклонального розмноження предствниюв шдродини Prunoideae. Автореферат дисертацп на здобуття наукового ступеня кандидата бюлопчних наук.: 03.00.15., Кшв.-2000. 15 с.
9. Биохимия растений, культура клеток. Г.П. Болвел, Дж.В. Чалман, P.A. Диксон и др., перевод д.б.н. В.И. Негру к, под ред. Р.Г. Бутенко. М. В.О. «Агропромиздат». 1989.
10. Болезни и вредители растений интродуцентов. / Синадский Ю.В., Козаржевская Э.Ф., Мухина JI.H. и др. - М.: Наука, 1990.272 с.
11. И. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М. изд. «Наука». 1964.
12. Вигоров Л.И. Фонды защитных веществ у съедобных фруктов и закономерности их распределения. // Вопросы уральского садоводства: Тр. Уральского НИИ сельского хозяйства. -Свердловск., 1985. Т.45. - с. 53-66.
13. Виджешвар П. Биотехнологические и физиологические основы клонального микроразмножения Actinidia deliciosa (Chev.) Liang, Ferguson. // Автореферат на соискание учёной степени кандидата биологических наук.: 03.00.23., Ялта. 1996. 25 с.
14. Влияние гумата калия на прорастание семян Orchis picta Loisel. in vitro. / Теплицкая Л.М. // 6-ая Международная конференция «Регуляторы роста и развития растений в биотехнологиях». Москва. 26-28 июня 2001: Тез. докл. с. 196.
15. Высоцкий В. А. Биотехнологические методы в системе производства оздоровленного посадочного материала и селекции плодовых и ягодных культур. // Автореферат на соискание учёной степени доктора с.-х. наук.: 06.01.07., 03.00.12., М. 1998. 44 с.
16. Высоцкий В.А. Действие некоторых регуляторов роста на изолированные меристематические верхушки чёрной смородины. // Плодоводство и ягодоводство нечернозёмной полосы. М., 1976.-Т. IX.-с. 101-107.
17. Высоцкий В.А. Клональное микроразмножение некоторых форм груши. // Биология культивируемых клеток и биотехнология. / Тезисы докладов междун. Конференции. Новосибирск. 1988. т. 2.-е. 318-319.
18. Высоцкий В.А. Клональное размножение плодовых и декоративных кустарников. // Микроразмножение и оздоровление растений в промышленном плодоводстве и цветоводстве. // Сб. научных трудов ВНИИС им. И.В. Мичурина. Мичуринск. 1989. -с. 3-8.
19. Высоцкий В.А. Корнацкий С.А. Изменение коэффициента размножения и укореняемости микропобегов сливы при длительном культивировании in vitro. // Агротехника, защита от вредителей и болезней, механизация в плодоводстве в НЗ РСФСР. М., 1992.-с. 14-20.
20. Высоцкий В.А. О генетической стабильности при микроклональном размножении плодовых и ягодных культур. // Сельскохозяйственная биология. 1995. № 5. с. 57-63.
21. Высоцкий В.А. Олешко Е.В. Совершенствование питательных сред для микроклонального размножения вишни. // Агротехника и сортоизучение плодовых культур. // Сб. научных трудов НИЗИСНП. М. 1985. с. 72-76.
22. Высоцкий В.А., Попов Ю.Г., Трушечкин В.Г. Регенерация изолированных верхушек древесных растений. // Плодоводство и ягодоводство нечернозёмной полосы. М., 1976. - Т. IX. - с. 89100.
23. Высоцкий В.А. Ризогенез у микропобегов малино-ежевичных гибридов при различных температурах. // Тез. докладов II международной конференции «Биология культивируемых клеток и биотехнология». Алматы. 1993. - Т. 2. - с. 210.
24. Высоцкий В.А., Упадышев М.Т. Регенерация вегетативных органов листовыми дисками и другими эксплантами рода Rubus in vitro. // Физиология растений. 1992. Т. 39. - вып. 3. - с. 584591.
25. Высоцкий В.А. Усовершенствование способов получения растений малины из изолированных меристематических верхушек. // Ягодоводство в Нечерноземье. М., 1984. с. 3-8.
26. Глежери Г.С. Подбор питательных сред для микроклонального размножения роз // Науч. труды сельскохозяйственной акад. 1990. 35. с. 26-32. (лит.). Рез. рус. библ. 10464287. / Реф. ж. Биол. Физиол. И Биохим. раст. 1991 № 1 с. 35.
27. Горовая А.И., Орлов Д.С., Щербенко О.В. Гуминовые вещества. Строение, функции, механизм действия, протекторные свойства, экологическая роль. // Киев. «Наукова Думка». 1995.
28. Деменко В.И. Микроклональное размножение плодовых и ягодных культур. Методические указания к практическим занятиям по плодоводству. // М. Изд. МСХА. 1997.
29. Деменко В.И., Трушечкин В.Г. Размножение вишни методом in vitro. // С.-х. биология. 1983. № 7. с. 51-53.
30. Демидова H.A., Фомина В.О. Результаты селекции облепихи и высоковитаминного шиповника в Архангельске. // Садоводство, семеноводство и интродукция древесных растений. Красноярск. 1998.
31. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика, пер. с англ. к.хим.н. Друцы B.JL, и к.хим.н. Королёвой О.Н. М. «Мир». 1991.
32. Жаркова И.В. Микроклональное размножение земляники. // Сб. Интенсификация возделывания ягодных культур. Ленинград. 1988.-с. 41-45.
33. Жидёхина Т.В. Размножение шиповника зелёными черенками с использованием ростовых веществ. // Состояние и перспективы развития нетрадиционных садовых культур. Воронеж 2003. с. 182-185.
34. Жидёхина Т.В., Куминов Е.П., Тимкин A.B. Шиповник в центральном Черноземье. // Состояние и перспективы развития нетрадиционных садовых культур. Воронеж 2003. с. 185-193.
35. Жуковский П.М. Культурные растения и их дикие сородичи. // -М. 1950.-с 595.
36. Ильин B.C., Ильина H.A. Шиповник. // Нетрадиционные садовые культуры. Мичуринск. 1994. с. 336-356.
37. Ипполитова Н.Я., Высоцкий В. А., Талалаева Г. А. Микроклональное размножение пионов. // Цветоводство. 1984. № 1.-е. 34.
38. Кин Е.В., Митрофанова О.В., Клименко З.К. Совершенствование биотехнологических приёмов микроразмножения розы садовой. // Проблемы дендрологии, садоводства и цветоводства. Ялта, 1995, -с. 57.
39. Кириченко Е.Б., Фернандо Ш.С., Кузмина Т.А., Чернядьев И.И. Особенности морфогенеза эфиромасличных роз при микроклональном размножении. // Бюллетень Главного ботанического сада, 1993. т. 167. - с. 96-102.
40. Кириченко Е.Б., Кузмина Т.А., Катаева Н.В. Факторы оптимизации репродуцирования декоративных и эфиромасличных роз in vitro. // Бюллетень Главного ботанического сада, 1991.-т. 159. с. 61-67.
41. Кларксон Д. Транспорт ионов и структура растительной клетки. Перевод М.Г. Дудиной, под ред. д.б.н. Д.Б. Вахмистрова., М. изд. «Мир». 1978.
42. Корнацкий С.А. Наиболее значимые элементы промышленной технологии клонального микроразмножения древесных культур. // Пром. пр-во оздоровленного посадочного материала плодовых, ягодных и цветочно-декоративных культур. М., 2001.
43. Кузнецова Т.А., Кириченко Е.Б. Стимуляция формирования побегов и корней регуляторами роста при микроклональном размножении роз. // VIII Всесоюзная конференция по регуляторам роста. Киев, «Наукова Думка», 1989. с. 243.
44. Кузьмина H.A. Потапова O.A. Культивирование меристем различных сортов роз in vitro. // Естественные науки и экология: Ежегодник. Омск, 2000. Вып. 5 с. 38-39.
45. Кулаева О.Н., Силина Е.И., Курсанов А.Л. Пути первичного усвоения аммонийного азота в корнях тыквы. // Физиол. растений. 1957. №4.-с. 520-528.
46. Курбонмамадова С.А., Мамадризохонов A.A. Проблема семенного размножения шиповника. // IV съезд О-ва физиологов астений России: Тез. докл. -М. 1999. т. 2. - с. 615.
47. Курсанов А.Л. Корневая система растений как орган обмена веществ. // Известия АН СССР, серия биол. 1957. № 5. с. 689705.
48. Курсанов А.Л. Круговорот органических веществ в растении и деятельность корневой системы. // Вопросы ботаники. 1954. № 1. -с. 131-141.
49. Курсанов А.Л. Метаболизм первичной ассимиляции ионов и теория клеточных переносчиков. // Известия АН СССР, серия биол. 1962. №5.-с. 740-753.
50. Курсанов А.Л. Транспорт ассимилятов в растении. М. изд. «Наука». 1976.
51. Курсанов A.Jl. Выскребенцева Э.И. Первичное включение фосфата в метаболизм корней. // Физиол. растений. 1960. № 7. с. 276-286.
52. Лазарев М.И. Война с витаминным голодом. Опыт участия. // Пищевая промышленность. 2002. № 2. 80 с.
53. Леонченко В.Г., Жбанова Е.В. Пищевая и биологическая ценность плодов нетрадиционных садовых растений. // Состояние и перспективы развития нетрадиционных садовых культур. Воронеж 2003. с. 202-207.
54. Магомедов Г.О., Мирошникова Т.Н., Абдулгалимова О.В. Полуфабрикаты из шиповника и сроки годности жироёмких изделий. // Кондитерское производство. 2003. № 4. с. 26-27.
55. Мамадризохонов A.A., Коровин С.Е. О калусообразовании видов рода Rosa L. // IV съезд физиологов растений России: Тез. док. -М. 1999 Т.2.-С. 627-628.
56. Метлицкая К.И. Вирусные и вирусоподобные болезни косточковых пород и пути оздоровления от них насаждений. // Пром. пр-во оздоровленного посадочного материала плодовых, ягодных и чветочно-декоративных культур. М., 2001.
57. Миронова O.A. Микроклональное размножение крыжовника. // Сб. «Проблемы вегетативного размножения в садоводстве». М. 1985.-с. 102-106.
58. Мичурин И.В. Избранные сочинения // М. 1948.-е. 791.
59. Олешко Е.В., Трушечкин В.Г., Высоцкий В.А. Размножение клоновых подвоев вишни. // Садоводство. 1983. № 3. - с. 20-21.
60. Орлов П.Н. Особенности размножения зелёными черенками садовых роз в связи с происхождением их сортов. // Автореферат дисс. на соискание учёной степени кандидата биологических наук. М., 1973.
61. Петрова В.П. Дикорастущие плоды и ягоды. М. Лесная пр-сть, 1987.-248 с.
62. Попов Ю.Г. Высоцкий В.А. Культура стеблевых верхушек in vitro, как метод ускоренного размножения плодовых и ягодных растений. // Вестник сельскохозяйственной науки. 1978. № 4. -с. 124-127.
63. Попов Ю.Г., Высоцкий В.А., Трушечкин В.Г. Культура изолированных стеблевых верхушек вишни. // Физиология растений.-1976.-Т. 23.- № 3. с. 513-518.
64. Причко Т.Г. Нетрадиционные и дикорастущие культуры Северного Кавказа. // Состояние и перспективы развития нетрадиционных садовых культур. Воронеж 2003. с. 211-216.
65. Пухирь Ю.Н. Размножение роз и других декоративных растений зелёными черенками в условиях южной лесостепи УССР. // Автореферат дисс. на соискание учёной степени кандидата биологических наук. М., 1974.
66. Реактивы для биохимии и исследований в области естественных наук. // Каталог корпорации Сигма-Алдрич 2004-2005 г.
67. Родэ В.В., Аляутдинова Р.Х., Екатеринина JI.H., Рыжков О.Г., Мотовилова JLB. Стимуляторы роста растений из бурых углей. //
68. B. сб.: Гуминовые вещества в биосфере. М. «Наука». 1993. с. 157-162.
69. Роль кальция в механизме действия фитогормонов. / Медведев
70. C.С. // 6-ая Международная конференция «Регуляторы роста и развития растений в биотехнологиях». Москва. 26-28 июня 2001: Тез. докл. с. 51.
71. Сабинин Д.А. О значении корневой системы в жизнедеятельности растений. // Тимирязевские чтения. М. изд. АН.СССР. 1949. № 9., с 47.
72. Селен адаптоген и стимулятор роста растений. / Блинохватов А.Ф. Вихрева В.А. Хрянин В.Н. // 6-ая Международная конференция «Регуляторы роста и развития растений в биотехнологиях». Москва. 26-28 июня 2001: Тез. докл. - с. 82.
73. Современная лаборатория // Каталог фирмы «Диа ЭМ» от 2001 г.
74. Современные прогуматы. / Алейников И.Н. // 6-ая Международная конференция «Регуляторы роста и развития растений в биотехнологиях». Москва. 26-28 июня 2001: Тез. докл. -с. 77.
75. Стрелец В.Д. Агафонов Н.В. и др. Методические рекомендации по селекции шиповника (Rosa L.): Для студентов и аспирантов плодоовощного факультета МСХА. // ТСХА, НПО Всерос. НИИ лекарств. Растений М., Изд-во МСХА. 1994.
76. Стрелец В.Д. Биологические особенности промышленных сортов шиповника и разработка технологии их выращивания. // Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора с.-х. наук.: 06.01.07. М., Изд-во МСХА. 2000. 43 с.
77. Сушков К.Л., Бесчётнова М., Михнева Т. Под водяным светофильтром.//Цветоводство № 1. 1967.
78. Сурина Е.И., Сурина О.Б. Розы. // «Олма-Пресс Звёздный Мир». М. 2002.
79. Тарасенко М.Т., Новиков П.Г., Прохорова З.А. Интенсификация технологии зелёного черенкования декоративных культур в условиях Южного берега Крыма // Изв. ТСХА. 1977. Вып. 6. с. 95-105.
80. Турсин Г.С. и сотрудники. Выращивание саженцев шиповника методом зелёного черенкования. Методические рекомендации. // Симферополь. 1990. 23 с.
81. Тутунова Ш.М. Размножение суперэлитного материала земляники с помощью метода культуры меристем. // Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата с.-х. наук.: 06.01.07. М. 1980. 23 с.
82. Упадышев М.Т. Высоцкий В.А. Размножение ежевики и малины чёрной методом культуры тканей. // Садоводство и виноградарство 1991. № 6. - с. 24-27.
83. Усенко Н.В. Деревья, кустарники и лианы Дальнего Востока. // Хабаровское кн. издательство. 1969. 416 с.
84. Физиологическая активность продуктов трансформации лигнина, / Комаров A.A. // 6-ая Международная конференция «Регуляторы роста и развития растений в биотехнологиях». Москва. 26-28 июня 2001: Тез. докл. с. 101.
85. Холодовая адаптация озимой пшеницы в связи с действием салицилата. / Воловник И.Л., Асафова Е.В., Роматова С.А. // 6-ая Международная конференция «Регуляторы роста и развития растений в биотехнологиях». Москва. 26-28 июня 2001: Тез. докл. -с. 19.
86. Хржановский В.Г. Розы. Филогения и Систематика. Спонтанные виды Европейской части СССР, Крыма и Кавказа. Опыт и перспективы использования. М., «Сов. Наука». 1958.
87. Шипунова A.A. Высоцкий В.А. Повышение укореняемости побегов миниатюрной розы при размножении in vitro. //
88. Плодоводство и ягодоводство России. М.: 2006. - Т 15., - с. 1315.
89. Шувалова О.П. Доктор шиповник. // СПб.: Невский проспект., 2001.- 122 с.
90. Эол. О.Х., Калашникова Е.А. Влияние антиоксидантов на развитие эксплантов вишни. // Проблемы дендрологии, садоводства и цветоводства. Ялта, 1995, с. 129-130.
91. Эффективность комплексного применения гумата калия и микроэлементов на растениях томатов. / Блинова З.П. // 6-ая Международная конференция «Регуляторы роста и развития растений в биотехнологиях». Москва. 26-28 июня 2001: Тез. докл. -с. 81-82.
92. Эффективность применения гумата калия удобрительного на озимой пшенице. / Шаповал O.A., Чернышёва Н.В. // 6-ая Международная конференция «Регуляторы роста и развития растений в биотехнологиях». Москва. 26-28 июня 2001: Тез. докл. -с. 293.
93. Юдинцева Е.В. Корнесобственные розы. // Интродукция и приёмы культуры цветочно-декоративных растений. M.: Бот. сад АН СССР. 1977.-с. 140-149.
94. Abbott Aj. Practice and promise of micropropagation of woody species.//Acta Hort. 1978. №79.-p. 113-127.
95. Abdulnour J., Arnold N.P., Barthakur N.N. Uptake of labelled phosphorus by rooted and non-rooted in vitro cultured 'John Franklin' rose.//J. Plant Nutr. 1994. № 17. v. 2&3.-p. 333-343.
96. Alderson P.G., McKinless J., Rice R.D. Rooting of cultured rose shoots.//Acta Hortic. 1988. № 226.-p. 175-182.
97. Avramis T., Hugard J., Jonard R. Exaltation des potentialités rhizogenes de pousses feuillées de rosier multipliées in vitro. // C. R. Acad. Sci. Paris. 1982. № 294.: 679-682.
98. Avramis T., Hugard J., Jonard R. La multiplication in vitro du rosier porte-greffe Rosa indica major. // С. R. Acad. Sci. Paris. 1982. № 294.: 63-68.
99. Ault J., Blackmon W. In vitro propagation of Ferocactus acanthoides (Cactaceae). // HortScience. 1987. № 22. v. 1.
100. Badzian T., Hennen G.R., Fotyma-Kern J. In vitro rooting of clonal propagated miniature rose cultivars. // Acta. Hortic. 1991. № 289. p. 329-330.
101. Barber D.A. "Dual isotherms" for the absorption of ions by plant tissues. // New Phytol. 1972. № 71. p. 255-262.
102. Baraceló-Muñoz A., Encina C.L., Simón-Pérez E., Pliego-Alfaro F. Micropropagation of adult avocado. // Plant Cell Tissue and Organ Culture. 1999. № 17.-p. 11-17.
103. Bell C.W., Biddulph O. Translocation of calcium: Exchange versus mass flow.//Plant Physiol. 1963. №38. -p. 610-614.
104. Bilkey P.C., McCown В., Hildebrandt A.C. Micropropagation of African violet petiole cross-section. HortScience. 1978. № 13.: 37-38.
105. Bini G., Leva A.R.C., Nicese F.P. Richere sulla micro propagazione della rosa. // Riv Ortoflorofrutt Ital. 1983. № 67.: 1-13.
106. Bjarnason E.N., Hanger D.C., Moran J.R., Cooper J.A. Production of Prunus necrotic ringspot virus free roses by heat treatment and tissue culture.//N.Z.J. Agric Res. 1985. №85.-p. 151-156.
107. Brainerd K.E., Fuchigami L.J. Acclimatization of aseptically cultured apple plants to low relative humidity. // J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1981. № 106.-v. 4.-p. 515-518.
108. Bressan P.H., Kim Y.J., Hasegawa P.M. Plant regeneration from cultured rose shoot tips.//HortScience. 1980. № 15.-p. 432-433.
109. Bressan P.H., Kim Y.J., Hyndman S.E., Hasegawa P.M., Bressan R.A. Factor affecting in vitro propagating of rose. // J. Am Soc. Hortic Sci. 1982. № 107.-p. 979-990.
110. Capellades M., Fontarnau R., Carulla C., Debergh P Environment influences anatomy of stomata and epidermal cells in tissue cultured Rosa multiflora. // J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1990. № 115. v. 1. - p. 141-145.
111. Christine A Webster, Jones O.P. Micropropagation of apple rootstock M.9: effect of sustained subculture on apparent rejuvenilisation in vitro. //J. Hortic. Science. 1989. № 64. v. 4. - p. 421-428.
112. Clarkson D.T. Sanderson J. Inhibition of the uptake and long-distance transport of calcium by aluminium and over polyvalent cations. // J. Exp. Bot. 1971. №23.-p. 837-851.
113. Collander R. The permeability of plant protoplast to small molecules. //Physiol. Plant. 1949. № 13.-p. 1471-1479.
114. Collet G.F. Enracinement amélioré lors de la production in vitro de rosier. // Rev Suisse Vitic Arboric Hortic. 1985. № 17.: 259-263.
115. Davies D.R. Rapid propagation of roses in vitro. Sci. Hortic. 1980. № 13.-p. 385-389.
116. Delbard H. Micropropagation of roses at Delbard nurseries. // Plant Prop. 1982. №28.-p. 7-8.
117. De Profit M.P., Van den Broek G., De Greef J.A. Involvement of ethylene on senescence and vitrification of in vitro cultured miniroses. // Acta Hortic. 1987. № 212. p. 217-222.
118. Die I. van On the synthesis of carboxylic- and amino acid in the roots and their transport to aerial parts of tomato plant. // Proc. Koninkl. nederl. Akad. Wet., Sec. C. 1959. № 62. p. 505-517.
119. Donnelly D.J., Skelton F.E. Comparison of hydathode structure in micropropagated plantlets and greenhouse-grown "Queen Elizabeth" rose plants. //J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1989. T 114. № 3. p. 841-846.
120. Dubois L.A.M., Roggemans J., Soyeurt G., De Vries D.P. Comparison of the growth and development of dwarf rose cultivars propagated in vitro and in vivo by softwood cuttings. // Sci. Hortic. 1988. № 35. p. 293-299.
121. Dunlop J., Bowling D.J.F. The Movement of the ions to the xylem exudate of maize root. // J. Exp. Bot. 1971. № 22. p. 434-444.
122. Elliott R.F. Axenic culture of meristem tips of Rosa mutiflora. // Planta. 1970. №97.: 183-186.
123. Fritsch F.E., Salisbury E. Plant form and function. Bell., London. 1953.
124. Fuchigami L.H., Cheng T.Y., Soeldner A. Abaxial transpiration and water loss in aseptically cultured plum. // J. American Soc. Hortic Sci. 1982. № 106.-v. 4.-p. 519-522.
125. Gavinlertvantana P., Read P.E., Wilkins H.F., Heins R. Ethylene levels in flask atmospheres of Dahlia pinnata Cav. leaf segments and callus cultured in vitro. // J. American Soc. Hortic Sci. 1982. № 107. p. 3-6.
126. Ghashghaie J., Brenckmann F., Saugier B. Effects of agar concentration on water status and growth of rose plant cultured in vitro. // Physiol. Plantarum. 1991. № 82. p. 73-78.
127. Ginsig U., Zwygart T. Morphologische unterschiede zwischen blattern von pflanzen aus in vitro und ex vitro kultur. // Erwerbsobstbau 1995. №37/1.: 23-26.
128. Goldstein D.A., Solomon A.K., Determination of equivalent pore radius for human red cells by osmotic pressure measurement.// J. Gen. Physiol. 1960. №44.-p. 11-17.
129. Graifenberg A. Coltura in vitro embrioni e di parti de seme in Rosa canina. // Riv. Ortoflorofrutt Ital. 1973. № 5. p. 374-380.
130. Hasegawa P.M. In vitro propagation of rose. // HortScience. 1979. № 14.: 610-612.
131. Hasegawa P.M. Factor affecting shoot and root initiation from cultured rose shoot tips. // J. Am Soc Hortic Sci. 1980. № 105.: 216-220.
132. Hinke J.A.M. Glass microelectrodes for measuring intracellular activities of sodium and potassium. // Nature. 1959. № 184. p. 12571258.
133. Hoagland D.R. Davis A.R. The uptake and accumulation of electrolytes by plant cells. // Protoplasm. 1929. № 6. p. 610-626.
134. Horan I., Walker S., Roberts A.V. Mottley J., Simpkins I. Micropropagation of roses: The benefits of pruned mother-plantlets at stage II and greenhouse environment at stage III. // J. Hort. Sci. 1995. № 70. v.5. - p. 799-806.
135. Horn W.A.H. Micropropagation of rose. // High Tech. 1992. v.2. - p. 322-342.
136. Horn W., Schlegel G., John K. Micropropagation of roses. // Acta Hortic. 1988. №226.: 623-626.
137. Hyndman S.E., Hasegawa P.M., Bressan R.A. The role of sucrose and nitrogen in adventitious root formation on cultured rose shoot. // Plant Cell Tissue and Organ Cult. 1982. № 1. p. 229-238.
138. Hyndman S.E., Hasegawa P.M., Bressan R.A. Stimulation of root initiation of cultured rose shoot through the use of reduced concentration of mineral salts. // Hort Science. 1982. № 17. p. 82-83.
139. In vitro propagation of rose: effect of cytokinin, sucrose, agar and pH on shoot proliferation. / Ära K.A., Sharifuzzaman S.M., Hossain M.M. // Bangladesh J. Agril. Res. 1999 24 № 2 - c. 265-274.
140. In vitro regeneration of shoots fro callus of Rosa x hybrida L. cv. 'Landera'. / Rout G.R., Debata B.K., Das P. // Indian J. Exp. Biol. 1992,-30, № l.p. 15-18. Англ.
141. Isermann K. Der Einfluss von chelatoren auf die Ca-aufnahme und Ca-verlagerung die höheren pflanze. // Z. Pflanzenr. Bodenkunde. 1971. № 128.: 355-362.
142. Ivanko S., Inguerson J. Chemical composition of exudate from maize roots. // Physiol. Plant. 1971. № 24. p. 355-362.
143. Jacobs G., Alan P., Bornman C.N. Tissue culture studies on rose: use of shoot tip explants. III. auxin:gibberellin effects. // Agroplantae. 1970. №2.: 45-50.
144. Khosh-Khui M., Sink K.C. Micropropagation of New and Old World rose species. // J Hortic Sei. 1982. № 57.: 315-319.
145. Khosh-Khui M., Sink K.C. Rooting enhancement of Rosa hybrida for tissue culture propagation. // Sei Hortic. 1982. № 17.: 371-376.
146. Khosh-Khui M., Sink K.C. Callus induction and culture of Rosa. // Sei Hortic. 1982. № 17.: 361-370.
147. Korban M., Donnelly D.J. Performance of micropropagated 'Queen Elisabeth' rose following mechanically induced stress. Hort Science. 1994. № 29.-v. l.-p. 20-21.
148. Kyte L., Klein J. Plant from test tubes. An Introduction to micropropagation. Third edition. Timber press, Portland, Oregon 1999.
149. Langford P.J., Wainwright H. Influence of sucrose concentration on the photosynthetic ability of in vitro grown rose shoot. // Acta Hortic. 1988. №227.: 305-310.
150. Leffring L., Skovdogaard M., Esendam H. Weefselkweek bij roos. // Bloem OndersNed., Alasmeer. 1984.: 364-365.
151. Malcolm R.L., MacCarthy P. Limitation in the use of commercial HA in water and soil research. // Environ. Sci. Technol. 1986. № 20. p. 904-911.
152. Marcelis-van Acker C.A.M., Scholten H.J. Development of axillary buds of rose in vitro. // Sci. Hort. 1995. № 63. p. 47-55.
153. Martin C., Carré M., Vernoy R. La multiplication végétative in vitro des végétaux ligneux cultivés. // C.R. Acad. Sci Paris. 1981. № 293.: 175-177.
154. McGranahan G.H., Driver J.A., Tulecke W. Tissue culture of Juglans. In cell and tissue culture in forestry. // Dordrecht, Netherlands: Martinus-Nijhoff. 1987.
155. Morton R.A. Fat soluble vitamins. Pergamon. 1970.
156. Mothes K., Engelbrecht L. Uber allantoinsaure und allantoin. I. Ihre rolle als wanderform des stickstoffs und ihre besiehungen zum eiweisstoffwechsel des ahorns. // Flora. 1952. № 139.: 585-591.
157. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant. 1962. № 15.: 473-497.
158. Oswald T.H., Smith A.E., Phillips D.V. Callus and plantlet regeneration from cell cultures of ladino clover (Trifolium repens 'Royal Ladino') and soybean (Glycine max). // Phisiologia Plantarum. 1977. №39. -p. 129-134.
159. Parthasarathi Bhattacharya, Satyahari Dey & Bimal Chandra Bhattacharya. Use of low-cost gelling agents and support matrices for industrial scale plant tissue culture. // Plant Cell Tissue & Organ Cult. 1994. №37.-p. 15-23.
160. Piccolo A., Pietramellara G., Mbagwu J.S.C. Use of humic substance as soil conditioners to increase aggregate stability. // Geoderma. 1997. Vol. 75. №3/4.-p. 267-277.
161. Piccolo A., Celano G., Pietramellara G. Influence of humic acid on laurel growth, associated rhizospheric microorganism and mycorrhizal fungi.//Biol. Fertil. Soils. 1993. № 16.-p. 11-15.
162. Pitman M.G., Mertz S.M., Graves J.S., Pierce W.S., Higinbotham N. Electrical potential difference in cells of barley roots and their relation to ion uptake. // Plant Physiol. 1970. № 47. p. 76-80.
163. Pittet H., Moncousin C. La micropropagation in vtro du rosier. // Rev Hortic Suisse. 1982. № 55.: 67-70.
164. Podwyszynska M., Hempel M. The factors influencing acclimatization f Rosa hybr. Plants multiplied in vitro to greenhouse condition. // Acta. Hortic. 1988. №226.: 639-642.
165. Podwyszynska M., Olszewski T. Influence of gelling agents on shoot multiplication and uptake of macroelements by in vitro culture of rose cordyline and homalomena. // Sci. Hortic. 1995. № 64.: 77-84.
166. Propagation in vitro del portaingerto Rosa x noisettiana. cv. 'Monettia' partir de yemas axilares. / Lozoya H.S., Burgarin M.R. // Rev. chapigno. // Реф. ж. Биол. Физиол. и Биохим. раст. 1992. 16, № 78. - с. 39-44. - Исп.; рез. Англ. автореф. Рус.
167. Rozmnazanie podkladki Rosa manetti w kulturach in vitro. / Kucharska D., Golis A., Podwyzynska M., Wisniewska-Grzeszkiewicz H., Orlikowska T. // Zeszyty naukowe. Institutu sadownictwa I kwiaciarstwa. 2000. T. 7. c. 365-373.
168. Sauer A., Walter F., Preil W. Different suitability for in vitro propagation of rose cultivars. // Gartenbauissuscraft. 1985. № 50.: 133138.
169. Skirvin R.M., Chu M.C. In vitro propagation of Forever Yours rose. HortScience. 1979. № 14.: 608-610.
170. Skirvin R.M., Chu M.C. Propagation of rose with tissue culture. // III. Res. № 21.: 3.
171. Skirvin R.M., Chu M.C. Root and shoot formation from Forever Yours rose in vitro. HortScience. 1979. № 14.: 457 (abstr. on 455).
172. Smith F.A. Active phosphate uptake by Nitella translucens. // Biochim. Biophys. Acta. 1966. № 126. p. 94-99.
173. Smith R.H. In vitro propagation of Nandina. // Hort Science. 1983. № 18.-p. 304.
174. Somatic embryogenesis & generation of flowering plants in rose. / de Wit Joyce C., Esendan Harald F. et al. // Plant cell Repts. 1990. 9 № 8ю-p. 456-458. Англ.
175. Spanswick R.M. Electrophysiological techniques and magnitudes of membrane potentials and resistance in Nitella Translucens. // J. Exp. Bot. 1970. №21. p. -617-627.
176. Starling R. In vitro propagation of Leuchtenbergia princeps. // Cactus & Succulent J. 1985. №57.
177. Stein W.D. The Movement of Molecules across Cell Membrans. // Academic Press, N.Y. and London. 1967.
178. Vallini G., Pera A., Avio L., Valdrighi M., Giovanetti M. Influence of humic acid on laurel growth, associated rhizospheric microorganism, andmycorrhizal fungi.//Biol. Fertil. Soils. 1993. № 16.-p. 1-4.
179. Valles M., Boxus P. Micropropagation of several Rosa hybrida cultivars.//Acta. Hortic. 1987., №212.: 611-617.
180. Valles M., Boxus P. Regeneration from Rosa callus. // Acta. Hortic. 1987., №212.: 691-696.
181. Vaughan D., B.G. Ord, and R.E. Malcolm. Effect of soil organic matter on some root surface enzymes of and uptake into winter wheat. // J. Exp. Biol. 1978. № 29. -p. 1337-1344.
182. Voyiatzi C. An assessment of the in vitro germination capacity of pollen grains of five tea hybrid rose cultivars. // Euphytica. 1995. № 83.-p. 199-204.
183. Voyiatzi C. Voyiatzis D.G., Tsiakmaki V. In vitro shoot proliferation rates of the rose cv. (hybrid tea) 'Dr. Verhage', as affected by apical dominance regulating substances. Sci. Hortic. 1995. № 61. p. 241249.
184. Walker N.A. Microelectrode experiments on Nitella. // Aust. J. Biol. Sei. 1955. № 8.-p. 476-489.
185. Walker N.A., Hope A.B. Membrane fluxes and electric conductance in Characean cells. // Aust. J. Biol. Sei. 1969. № 22. p. 1179-1195.
186. Walter R.J., Kamp M., Smith R.H. In vitro propagation of Rosa chinensis Jacq. Red Cascade. // J. Rio Grande Vial Hortic Soc. 1979. № 33. -p. 125-127.
187. Wang A. Callus induction and plant regeneration of American ginseng // Hort Science. 1990. № 25. p. 5.
188. Wulster G., Sacalis J. Effects of auxins and cytokinins on ethylene evolution and growth of rose callus in sealed vessels. // Hort Science. 1980. № 15.-p. 736-737.
189. Xiangfu Gao, Tianyong Gao. In vitro propagation of Rosa roxburghii. // Acta Hortic. Sinica. 1994. vol. 21. № 3. p. 235-238.
-
Поздняков, Иван Александрович
-
кандидата сельскохозяйственных наук
-
Москва, 2007
-
ВАК 06.01.07
- Особенности репродуктивной биологии некоторых видов и сортов шиповника (Rosa L. ) в условиях Предуралья
- Повышение продуктивности сортов шиповника на основе совершенствования защиты их от вредителей генеративных органов
- Хозяйственно-биологическая оценка сортов шиповника в условиях ЦЧР
- Дикорастущие виды Rosa L. на территории Приуралья
- Особенности развития и продуктивность интродуцированных шиповников в условиях Краснодарского края
