Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Особенности культуры клеток актинидии (Actinidia chinesis Planch) и черной смородины (Ribes nigrum L.) in vitro

ВАК РФ 03.00.12, Физиология и биохимия растений

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Косумбекова, Фотима Аноятбековна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Культура клеток и тканей растений in vitro.

1.2. Каллусогенез и морфогенез в культуре in vitro.

1.3. О культуре клеток и тканей актинидий и черной смородины

Глава 2. Материал и методы исследований.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 3. Генотипическая особенность каллусогенеза актинидии и черной смородины в зависимости от состава питательной среды и типа экспланта.

3.1. Каллусообразующая способность актинидии в зависимости от пола растений, происхождения экспланта и действия фитогормонов.

3.2. Особенности каллусогенеза соматических тканей растений 50 черной смородины в зависимости от состава среды и типа экспланта.

3.3. Морфологические особенности каллусных тканей актинидии и черной смородины.

3.4. Обсуждение.

Глава 4. Морфогенетический потенциал каллусных тканей актинидии и черной смородины.

4.1. Некоторые общие закономерности морфогенеза актинидии и черной смородины in vitro.

4.2. Реализация морфогенетического потенциала каллусных структур актинидии.

V 4.3. Особенности морфогенеза каллусных тканей черной смородины.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Особенности культуры клеток актинидии (Actinidia chinesis Planch) и черной смородины (Ribes nigrum L.) in vitro"

Актуальность проблемы. Достижение прогресса в области генной и клеточной биотехнологии растений непосредственно связано с разработкой фундаментальных основ культивирования клеток и тканей in vitro. При этом особый интерес представляет подбор подходящей питательной среды, установление типа и размера экспланта, а также режима культивирования с целью выявления тотипотентности у представителей различных таксономических групп растений. В настоящее время эта уникальная способность соматических клеток выявлена у различных культур, среди которых большую часть составляют однолетние и в практике вегетативно размножаемые растения. Это, прежде всего, овощные культуры и декоративные растения, список которых с каждым годом пополняется (Бутенко, 1983; Bajaj, 1987). Поэтому, изучение теоретических основ и разработка прикладных аспектов культуры клеток и тканей многолетних растений, в частности плодово-ягодных и лесных культур, считается весьма актуальным для разработки и налаживания биотехнологий их ускоренного, размножения, получения соматических гибридов и трансгенных растений (Biotechnology of perennial fruit crops, 1993).

Таджикистан славится богатым генофондом плодово-ягодных культур (Вавилов, 1929; Запрягаева, 1962), который пополняется интродуцированными культурами. Среди относительно новых для условий страны культур особое внимание уделяется актинидии (киви) (Actinidia chinensis Planch) и черной смородине (Ribes nigrum L), плоды которых характеризуются ценными пищевыми и лекарственными качествами. Изучение биологии этих культур с целью разработки агротехнологий их возделывания и повышения продуктивности является одной из задач в плодоводстве горных и предгорных районов. В теоретическом плане представляет интерес выявление степени тотипотентности соматических клеток актинидии и черной смородины. Также интересно изучение фундаментальных основ каллусообразования и морфогенеза соматических клеток актинидии и черной смородины путем подбора культуральных сред, типа экспланта и режима культивирования с целью для разработки прикладных аспектов микроклонального размножения этих культур.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является выявление степени тотипотентности соматических клеток актинидии и черной смородины путем изучения закономерностей их каллусогенеза и морфогенеза в культуре in vitro, подбора состава питательной среды, типа экспланта и режима культивирования.

Исходя из этого, в задачи исследований входило:

- подбор подходящей питательной среды, типа экспланта и режима культивирования актинидии и черной смородины in vitro;

- изучение особенностей каллусообразования соматических клеток этих культур в зависимости от фитогормонального состава питательной среды;

- морфологическое описание типа сформировавшихся каллусных тканей и подбор морфогенных структур; изучение закономерностей морфогенеза каллусных клеток и тканей; выявление морфогенетического потенциала каллусных тканей в зависимости от состава питательной среды и происхождения экспланта;

- разработка прикладных аспектов микроклонального размножения актинидии и черной смородины in vitro.

Научная новизна. Путем подбора различных по фитогормональному составу культуральных сред, типа экспланта и режима культивирования выявлена тотипотентность соматических клеток актинидии и черной смородины. Разработан состав питательных сред, позволяющий индуцировать каллусообразование у эксплантов актинидии и черной смородины и вызвать образование морфогенных структур.

Практическая значимость. Выбор подходящих эксплантов, состава питательной среды и режима культивирования позволяет наладить технологию микроклонального размножения актинидии и черной смородины с целью их ускоренного размножения. Экспериментами доказана возможность использования представителей плодово-ягодных растений в культуру in vitro. Использованный в опытах состав питательной среды, выбранные экспланты и режимы культивирования соматических тканей, каллусов и морфогенных новообразований послужат прототипом при разработке клеточных биотехнологий ряда других плодовых и лесных культур.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены (или представлены): на ежегодных профессорско-преподавательских конференциях Таджикского аграрного университета (1999-2003г.г), заседании кафедры физиологии растений и биотехнологии и межлабораторном семинаре Института физиологии растений и генетики АН Республики Таджикистан.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи.

Работа выполнена в1994-2002г.г в рамках комплексной научной программы Института физиологии растений и генетики АН Республики Таджикистан и Научно-исследовательского института биотехнологии Таджикского аграрного университета.

Заключение Диссертация по теме "Физиология и биохимия растений", Косумбекова, Фотима Аноятбековна

Выводы

1. Все типы эксплантов актинидии и черной смородины в зависимости от состояния клеток при их культивировании в определенных условиях образуют каллус. Это свидетельствует о тотипотентности клеток актинидии и черной смородины, способных к гормональной индукции и определенным образом реагировать на это влияние, изменяя программу развития по тому или иному пути органогенеза.

2. Для индукции каллусогенеза из эксплантов апикальных и пазушных меристем актинидии и черной смородины благоприятным является питательная среда МС 3, содержащая 4 мг\л 2.4-Д и 0,2 мг\л кинетина. Для эксплантов листьев и черешков листьев, больше подходит среда МС 4 с относительно высокими концентрациями фитогормонов (8мг\л 2,4-Д и 0,4 мг\п кинетина).

3. Между сортами черной смородины по скорости индукции каллусогенеза и темпам нарастания каллусных структур явных различий не обнаружено.

4. Как более низкая, так и высокая концентрация ауксинов и цитокининов не позволяет полностью реализовать каллусообразующий потенциал соматических клеток актинидии и черной смородины. Если при относительно низких концентрациях фитогормонов индукция каллусогенеза протекает медленно,то при более высоких концентрациях образовавшися каллусные структуры некротизируются и погибают. Показано, что для индукции морфогенеза нужно использовать каллусы только 1-го пассажа. .

Установлено, что наибольший выход морфологически однородных растений- регенерантов актинидии можно получить при культивировании каллусов апикальных и пазушных почек, индуцированных на каллусогенной среде МС 3 и далее пересаженных на морфогенную среду МС 7 и ризогенную МС 8. Выход регенерантов у других морфогенных каллусов не превышает 3-5%. Выход растений- регенерантов у черной смородины оказался относительно низким. Более однородные по морфологическим признакам растения-регенеранты черной смородины были получены из каллусов из апикальных и пазушных почек на питательной среде МСЗ.

Заключение и выводы

Анализ полученных результатов позволили разрабатать индукции каллусогенеза и морфогенеза у актинидии и черной смородины in vitro путем подбора оптимальных концентраций фитогормонов в составе питательных сред. Эта технология основана на использовании в будущем на совершенном уровне морфогенных клеток и их культивирование in vitro , что способствует проведению изучения молекулярных механизмов роста и развития на боли высоки уровне, а также применять методы генной инженерии и клеточной селекции для совершенствования растений актинидии и черной смородины.

В результате многолетних исследований нам удалось, используя два контрастно различающихся между собой по своим биологическим, физиологическим и народнохозяйственным признакам, представителя плодово-ягодных культур - актинидии и черной смородины и добиться в условиях in vitro каллусогенеза и морфогенеза. Для увеличения числа морфогенных клеток в культивируемых тканях ряд исследователей рекомендуют использовать питательные среды с более высокими концентрациями 2,4-Д (Понтович, 1979; Давоян, 1986; Бутенко, 1987). Однако, как показывают наши наблюдения, эта закономерность не всегда соблюдается. В наших экспериментах высокие концентрации 2,4-Д приводили к некротизации, угнетению роста и гибели каллусных структур актинидии и черной смородины.

Таким образом, сочетание гормонов, их концентрация определяют суммарный характер процессов каллусогенеза и морфогенеза. Вместе с тем, имеется определенная тенденция учитывающей концентрации гормонов, и роль этих компонентов по степени компетентности клетки к относительно постоянному уровню этих соединений, биосинтез которых находится у высших растений под строгим контролем (Кефели и др., 1990).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Косумбекова, Фотима Аноятбековна, Душанбе

1. Аветистов В.А., Мелик-Соркисов О.С Генетические особенности морфогенеза в каллусных культурах различных сортов кортофеля\\С-Х.биология, 1985,№3,С.67-70

2. Алиев К.А , Каримов Б.К, КаримовБ.Б. Возделывание оздоровленного картофеля в Таджикистане-Душанбе, 1997-36с

3. Биотехнология растений:культура клеток // Пер.с.англ.М.:Агропромиздат, 1989.-280с8 .Бишимбаева Н .К. Морфологическая гетерегенность регенерационная способность каллусной ткани ячменя; Автореферат дис. .кан.биол.наук-Душанбе, 1989-22с.

4. Брокш В.П и др. Цитогенетическая нестабильность картофеля //Доклады ВАСХНИЛ,1989, 12, с.10-13.

5. Ю.Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М.; Наука. 1964-195с11 .Бутенко Р.Г.Тотопотентность растительной клетки и культура тканей, культура изолированных органов, тканей и клеток растений .-М:Наука.1970-с.84-91

6. Бутенко Р.Г. Гормональная регуляция дифференцировки растений клетки в культуре in vitro-/PocT и гормональналная регуляция жизнедеятельности растений.-Иргутск. 1974.С.67-85.

7. Бутенко Р.Г. Дифференцировка морфогенез в культуре тканей, клеток и пропластов/ Биология развития растений.-М.;.Наука.1975-с.48-49.

8. Бутенко Р.Г. Технология in vitro в сельском хозяйстве //С.-х.,биология.1983.- 5.-C.3-7.

9. Бутенко Р.Г.Новые направления в физиологии растений.М.; Наука,1985, 411с.

10. Бутенко Р.Г. Выращивание клеток высших растений в суспензионной культуре //Изв АН.СССР. Сер биол, 1987,- 5,с.697-709.

11. Быков О.Д и др. Фотосинтез в культуре первичного каллуса картофеля. Фотосинтез и фотобиология;Тез.докл.и сообщ.Междунар.Конф.Пущино.16-73 июня 1991-е 106-107.

12. Винклером Г.Н Бутенко.Применение черенкованияпри выращивании безвирусных растений кортофеля методом культуры меристемы\\Физиология растений-1970.т.17.№4.с.851-853

13. Глеба Ю.Ю.Сытник К.Т.Клеточная инженерия растений.-Киев:Наукова думка. 1983.-187с.

14. Горьковцева Е.А.ДОлдошев О.Х.,Культура тканей и клональное микроразмножение киви\\Известия АН. Таджикистана. Отд№ 1 -2-1995-е.52-55.

15. Гутман Т.С., Ширяева Г.А. Новк;й способ выращивания культуры изолированных тканей высших растений //Растительные ресурсы. 1980.-Т. 16.-№14.-С.601-606.

16. Давонян Э.Н., Кучеренко JI.A. Индукция каллусной ткани из различных органов и тканей риса //Бюл.НТН ВНИ Риса, 1978,№24.-С. 18-21.

17. Доросилев JI и др Зависимость каллусогенеза и регенерацииозимого ячменя от генотипа и содержание 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты в питательной среде/Биология культивирования клеток и биотехнология растений -М.: Наука. 1991.243-246с.

18. Долгих и др.Оздоровление посадочного материла ягодних культур //Защита раст.- М.1988-№8 с.22-23.

19. Джордемалиев Ж.К. Биотехнологические аспекты регенерации растений в культуре клеток и протопластов пшеницы:

20. Автореферат, дис. канд.,биол .наук-Ташкент. 1994-27с.

21. Джигадло М.И. Клональное микроразмножение черной смородины/Сб.науч. тр. ВНИИ садовод.1988.№51-е. 141-143

22. Жексембекова М.А Соматический эмбриогенез в культуре тканей амаранта:Автореферат дис. .канд.биол.наук.-Алма-аты-1996.-41с

23. Иванова И.Физиологические основы микроклонального размножения растений\\Международный агропромышленный журнал.-1990.-№Зс.35-40

24. Искакова К.М.Морфогенез в длительно поддерживаемой культуре андрогенных каллусов ячменя:Автореферат дис. .канд.биол.наук.-Алма-Ата, 1991.-е 11

25. КартельМ.А Манешина Т.В Каллуссообразовние у различных по генотипу растений ячменя (Hardeum vuigare Ь.)\\Циталогия и генетики.-1997.-т.11-с.44-72

26. Кефели В.И и др.Общие проблемы регуляции онтогенеза\Итоги науки и техники.-М.,1990.С.6-40

27. Клоконос Н.П Регенерационных способность верхушек смородины малины подвлиянием ростовых вещество в условиях культивирования. Алма-Ата .1991.-с97-102

28. Кучеренко JI.A. Подходы к разработке технологии массовой регенерации растений in vitro \\ Биология культивирования клеток и биотехнология растений.М. :Наука, 1991 .С.232-242.

29. Кучеренко JI.A.0 некоторых параметрах регенерации риса.\\С.-биология1994.№1.С.232-242.

30. Лакин Г.Ф Биометрия:Учеб.пособие для биол.Спец.Вузов.4-е изд.перераб.идоп.-М.:Высшая шк. 1990.-352с.

31. Jle Тхи Муой \\Рост растений и его регуляция .-Кишенёв.-1985.-с. 18-28

32. Муромцев Г.С и др Основы сельскохозяйственной биотехнологии .-М:Во.Агропромиздат .1998.-27

33. Моисеева Н.А Молекулярные и клеточные механизмы морфогенеза в культуре клеток растений\Биология культивируемых клеток и биотехнология растений.-М.,Наука, 1991.-166-185

34. Муминджанов Х.А.Селекция и семеноводство картофеля на основефизиологических тестов и методов клеточной биотехнологии: Автореферат дис.докт.с-х.наук-Душанбе 2000.-51с

35. Насыров Ю.С Фотосинтез и генетика хлоропластов.М.:Наука. 1975.144с

36. Папазян И. Д. Культура зародышей и стеблевых узлов некоторых сортов ячменя\\Апомикс и цитоэмбриология растений -Саратов .-1983.C.119-151.

37. Понтович В.Э Ранний эмбриогенез покрытосеменных и его гормональная регуляция \Рост растений.Первичные механизмы .-М:Наука. 1978с.208-232

38. Рахимбаев И.Р.Тивари Ш.БишимбаеваН.К. и др.Биотехнология зерновых культур -Алма-Ата: Рылым, 1992.-240 е.

39. Сайб JI.P., Савин В.И и др. Влияние генотипа на формирование морфогенного каллуса и регенерацию растений кукурузы in vitro \\ Известия АНКаз:ССР. Серия биологическая-1991.-Вып.6.С.ЗЗ.

40. Сидоров В.А., Сидорова Н.В. Сомоклональная изменчивость-источник генетического разнообразия у растений \\Цитология и генетика.-1987.-Т.21.-№3.

41. Сидоров В.А. Биотехнология растений. Клеточная селекция Шод.ред.Ю.Ю Глеба,-Киев; Наукова думка.1990.-290с.

42. Ступнецкий В.Ю., Глеба Д.М. Индукция морфогенеза у банана карликового \\ Тез.докл. Межд.конф. "Биология культ, клеток и биотехнология "-Новосибирск 2-62. 1988.-С.325-326.

43. Суриков И.М. Получение регенерантов и первичного клубного каллуса картофеля и зависимости от сорта, состава среды и положения экспланты \\C.-x. биология. 1983.№6 с. 13-15.

44. Тивари Ш.М. Морфогенез в культуре пылников изолированных микроспор ячменя.\\Авторефер. дис. .канд.,биол.наук-М.,1989.-29с.

45. Туровская И.И Идр. Ситмуляция ризогенеза у клоновк;х подвоев яблони in vitro //Тез.докл.Международной конференции «Билогия и культивируемых клеток и биотехнология."-Новосибирск, 2-6 авг.-1988.-С.148.

46. Тюленев М.и др. Сомоклональная изменчивость земляники Биотехнология. 1999.№2 с.34-40.

47. Уайт Ф.Р. Культура растительных тканей. \ Перевод с англ. Штернир и др. Под ред. Б.А Рубина- М.: Колос. 1919.-212с.

48. Уоринг Ф., Филипс Н. Рост растений и дифференцировка.- М.,Мир.1984.-512с.

49. Фелалиев А.С. Физиологические основы микроклонального размножения ореха грецкого in vitro. Автореф.дисс.канд.биол.наук. Душанбе-1990. С. 17.

50. Фролова JI.B. Особенности популяций культивируемых клеток \Культура клеток растений.-М.: Наука .1981.С.5-15.

51. Хотамов У.А. Физиологические особенности оздоровленных сортов картофеля в условиях Гиссарского долины Таджикистана: Автореф.дисс. .канд.биол.наук.-Душанбе. 1997.-С 9-19.

52. Хромова и др., Клеточная селекция картофеля \\ с-х.-биология1986.№6 с.3-11.

53. Ширяева Т.А., Лаврентьева И.Ф. Морфологические потенции ели европейской в связи с индивидуальной изменчивостью и происхождением экспланта \\Тез. докл. Международ. конф.Биология культивируемых клеток и биотехнология-Новосибирск 2-6 авг.-1988.-С-134-135.

54. Юсуфов А.Г. и др.Метомерная изменчивость активности к пролиферации росту почек абрикоса in vitoW Тез.докл.межд.конф.'Ъиология культивируемых клеток и биология" Новосибирск,2-6 авг.-1988.С. 144.

55. Abe T.,Futsuhara Y.Genotypic variabililaty dor callus formation and plant regeneration in rise (Oruza sativa 1) Theor and Appl.Genet.-1086.-72NL-P.3-10

56. Aitken Y.Influence ofexplant selection on the shootforming capacity of jiwenile tissue of Pinus radiate .//Can.J.Forest Res .//1981 .-11 .-NI.-P. 112-117.

57. Amerson H.VJodlally pine tisse culture;Laboratory greenhause and flied studies .//Tissue cult.Forest and Agr.poc.3rd Tenn Symp Sept.New York:London1985.~p271-287/

58. Bajaj .Y.P.S.,Sopory S.K.Biotechnology of potato improvement .//Biotechnology in Crops .1.V.2 1986.Berlin :Springer -Verlag .1986-p 216-218.

59. Beswar M.R. Noland T.J.,Wann S.R. A method forguantification of the level of somatic embryogenesis mound Norway Spruce callus lints.//Plant Cell Repts/-1987/-6,Nl-P.35-38

60. Biotechnologi of Perennial fruit crops. 1993.-P.35-39.

61. Boxus P.H. In vitro vegetative propagation of plants. //Neste Research News.-1987.-P.75-79.

62. Brar et al. In vitro ovules and embryo culture of Gossypium. Curr. Sei. (India). 1984 . 68.Camaron G.Tissue culture technigue .2nd ed.New York:Academic R,1950.191p

63. Campbell R.A.,Durzan D.I.Induction of multiple buds and needless in tissue culturesof Picea glauca .//Can.J.Bot.~1975-53.N16.-P.1652-1637//

64. Constantin M.I.,et al,Effect of activated charocoal on calls growth and shoot organogenesis in tobacco .//In vitro ,-1977.-13-23.P.293-296/.

65. Conzales M.I.,et al.,Somatic embryogenesis from chestnut cotyledon tissue cultured in vitro .//plant physiol. 1984.-115.N3 .-P217-229/

66. Conzales et al.,Characteration of cultured tobacco cell lines resistant toe thonine analog .//Plant .Phisiol.-1989.-74.-p.640-644/

67. Hu G.Y., Wang P .J. Meristem, shoot tip and bud culture. // Handbook of plant ceii cuiture (Evans D.A. and others eds.). V. I.-chap. 5. New York:Macmillian,1983. P. 177-227.

68. Einzet J.W. Two effect of cytokinin on the auxin regurement of tobacco callus cuitures. //Hlant Physiol.-1977.-59, №1.- P. 45-47.

69. King P. et al. Mutagenesis in plant cell cultures //Annu. Rep.Friedrich-Miesher Ins. Basel. 1979. P.20-22.

70. Kruse R.F.et al. Tissue culture metods and applications. New York: Academies Pr., 1973.-p.868.

71. Jay- Allemand C., Cornu D., Macheix J. Characterisation du rayenissement du Noyer (Juglans sp.) par une etude spectophotomerigue globale du contenu poyphenolique.//Ann. Sci.For.-1987.-44,№3.-P.303-314.

72. Jones M. G. K„ P J. Dave Reproducible regeneratium of callus from suspension culture protoplasts of the grass Lolium multiform // pflanzen physiol.-1982.-Vol.l05.-P.267-274.

73. Meins F.L. Petermination and morphogenetic, in plant tissue culture //Plant cell culture technology.- Oxford: Blaclewell sei. Publ., 1986.-P. 7-25.

74. Messeguer J., Meie E. Clonal propagation of Coryllus avellana L.//Atti Conv.int nocciuolo, Avellino., 22-24 sett.,1983.Torino.-1984.-P.293297.

75. Monnete P.L. Organogenesis and plantlet regeneration following in vitro cold storage ofkiwifruit shoot tip cultures. // Sci.hort. (Neth)- 1987- 31.№1-2.P.101-106.

76. Murashige T., Slcoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. // Physiol. PLANT.- 1962. 15. - P. 473- 497.

77. Nelson S.H Effects of stock plant etiolation on the rooting of saskaton berry Amelanchier alnifolia cuttings.//Can.J.Plant.Sci.-1987-67,N.I.-P.299-303

78. Norton M.F. Explant orididin as a determiant of in vitro shoot proliferation in Prumus and Spirae.//Hortic.Sci.-1986.№l.P. 43-48.

79. Opatrina J., Burdova Z. Experiment of the regeneration ability of potato explants //Bio. Plantarum-1992.V. 34.P.,545-546.

80. Panorama Economico de la Agriculture 1985. P.56-58.

81. Paul J. Cell and tissue culture.-4 th.-Livingstore. Edinburg and London: E.S., 1970.-317p.

82. Perez et al. "In vitro filbert (Corulus avellana L.) micropropagation from shoot and cotyledonaru node segments //Plant.Cell Report.-1985.-4-3.-P. 137-139.

83. Pierik R.L. In vitro culture of higher plant wakening: Martins high off publishen, 1987.344p.

84. Power W. Tissue culture // Ann rept. Scot. Crop. Rts.ins.-Perth. 1990.-P.50-56.

85. Quak F. Meristem culture virus-free plants.//Applied and fundamental aspects of plant cell tissue and organ culture (Ed.by Reinert J. Bajaj V.P.S) Berlin. New Jork: Springer-Verlag. 1977.P.624-631.

86. Sebastiani et al, Somaclonal variation for resistanse to Verticillilimn dahlia in potato (S tuberasum)plants regerated from eallus//Euahytica/1994.№280p.32-39

87. Selby C, Harvey B.M The ihfluence of naturfl and in vitro bud flushing on adventitious production in Silka spruce (Picea sitcensis). Nong.(Carr) bud and needle cultures.//New Phytol-1985.-100,№4.-P. 549-562.

88. Street H.E. ed . Plant tissue and cell culture. Oxford: Blactivell scientific publication, 1973. 503 p.

89. Su C.Y., Tsay H.S. Anther culture of papay (Carica papay L.).//Tissue Cult. Forest. And AGR. Proc.(3rd Tenn.,9-13 Sept, 1984).- New York. London. 1985.-P.375.

90. Thomas V, Rao P.S. In vitro propagagation of oil palm (Elais guineensis Jacg. Var. Tenera) through somatic embrogenesis in leaf-derived caiius.//Curr. Sci.(India).-1985.-54,№4-P.184-185.

91. Vasil L. Cell culture and somatic cell genetics of plant. Vol. 8. Academic Press. San Diego. 1991.-P.321-350.

92. Zok S. Multiplication vegetative in vitro par culture d apex chez les cafeires Coffea arabicaL. // 12Collog.sci. int. cafe. -1988. P. 791-800.