Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Ускорение вегетативного размножения оздоровленного посадочного материала актинидии и лимонника

ВАК РФ 06.01.07, Плодоводство, виноградарство

Автореферат диссертации по теме "Ускорение вегетативного размножения оздоровленного посадочного материала актинидии и лимонника"

На правах рукописи

ТУТЬ

ЕВГЕНИЯ АЛЕКСАНДРОВНА

УСКОРЕНИЕ ВЕГЕТАТИВНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ ОЗДОРОВЛЕННОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА АКТИНИДИИ И ЛИМОННИКА

Специальность 06 01 07- плодоводство, виноградарство

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

Москва-2008

□□3172267

003172267

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский селекционно-технологический институт садоводства и питомниководства Россельхоз-академии (ГНУ ВСТИСП)

Научный руководитель: кандидат сельскохозяйственных наук,

старший научный сотрудник Упадышев Михаил Тарьевич

Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук, профессор

Стрелец Виктор Дмитриевич Российский Государственный Аграрный Университет - Московская сельскохозяйственная академия имени К.А Тимирязева,

кандидат сельскохозяйственных наук Козак Наталья Васильевна Московская опытная станция растениеводства ГНУ ВСТИСП Россельхозакадемии

Ведущая организация: Главный ботанический сад имени

НВ Цицина Российской академии наук

Защита диссертации состоится "03" июля 2008 года в 15°° на заседании диссертационного совета Д 006 035 01 в Государственном научном учреждении Всероссийский селекционно-технологический институт садоводства и питомниководства Россельхозакадемии по адресу 115598, Москва, Загорье, ул Загорьевская, 4, конференц-зал

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного научного учреждения Всероссийский селекционно-технологический институт садоводства и питомниководства Россельхозакадемии

Автореферат разослан "27" мая 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор сельскохозяйственных наук

J1A Принева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Актинидия и лимонник являются богатыми источниками витаминов и биологически активных веществ и широко используются в пищевой промышленности, медицине, косметической промышленности и ландшафтном дизайне (Мельников, 1968, Стрелец, 1987, Колбасина, 2000) Ежегодно возрастает спрос на посадочный материал актинидии и лимонника со стороны любительского и промышленного садоводства. Однако существующая технология размножения этих культур не отвечает современным требованиям получения здорового посадочного материала и нуждается в усовершенствовании, так как не учитывается зараженность этих культур вирусной инфекцией

Разработка системы производства оздоровленного посадочного материала актинидии и лимонника и перевода питомниководства на безвирусную основу является актуальной Вопросы фитосанитарного состояния этих культур, в том числе зараженности их вирусными болезнями, изучены слабо Сведения о вирусах на актинидии и лимоннике носят очень ограниченный характер (Келдыш, Помазков, 1985, Caciagh, Lovisolo et al, 1987; Келдыш, Червякова, 1996)

Важно разработать эффективную систему размножения данных культур, в том числе in vitro Необходимо подобрать оптимальные регуляторы роста и их концентрации для обеспечения стимуляции ризогенеза у зеленых черенков лимонника Несмотря на высокую способность к укоренению, свойственную различным видам актинидии, задача улучшения корнеобразования для нее также актуальна. В последние годы разработан целый ряд препаратов, характеризующихся своей универсальностью, высокой биологической активностью, экологичностью, безопасностью для здоровья человека К таким препаратам относятся циркон, рибав-экстра, эпин-экстра, салициловая кислота, настойка лимонника

Помимо химических факторов воздействия на зеленые черенки актинидии и лимонника в последние годы большое внимание уделяется и физическим факторам, в частности, магнитно-импульсной обработке (Упадышев и др , 2005) Однако действие указанных перспективных препаратов и магнитно-импульсной обра- , ботки на актинидии и лимоннике изучено слабо Разработанная система приведет^-. ) к увеличению выхода оздоровленного посадочного материала и позволит осуще-"4^ * ствить несколько культурооборотов в защищенном грунте с туманообразующей

установкой, что в конечном итоге повысит ее эффективность Цель исследований: разработать систему оздоровления от вирусной инфекции и ускоренного вегетативного размножения оздоровленного посадочного материала актинидии и лимонника китайского Задачи исследований:

1 отработать методику диагностики вирусов с использованием иммуно-ферментного анализа, изучить видовой состав и распространенность вирусов и обосновать необходимость оздоровления посадочного материала актинидии и лимонника,

2 для получения оздоровленных клонов на закладку маточников актинидии и лимонника разработать систему размножения m vitro с помощью эффективных питательных сред, стимуляторов роста и их концентраций,

3 усовершенствовать технологию размножения изучаемых культур зелеными черенками с применением перспективных регуляторов роста и магнитно-импульсного воздействия

Из вышеизложенных цели и задач следует, что методология настоящих исследований заключается в поиске эффективных путей решения проблемы ускоренного получения оздоровленного посадочного материала актинидии и лимонника с использованием усовершенствованных технологических приемов тестирования на вирусы, оздоровления и размножения Научная новизна результатов исследований

Впервые разработана система ускоренного вегетативного размножения оздоровленного посадочного материала актинидии и лимонника, включающая в себя следующие этапы диагностику вирусной инфекции, оздоровление и размножение оздоровленного посадочного материала актинидии и лимонника с применением перспективных регуляторов роста и магнитно-импульсного воздействия

Показана высокая эффективность применения препаратов циркон, эпин-экстра и рибав-экстра для стимуляции ризогенеза актинидии и лимонника, а для зеленого черенкования - впервые предложено использование настойки лимонника (патент РФ № 2309591 "Способ обработки зеленых черенков садовых культур")

Практическая значимость и реализация результатов исследований

Предложена новая система производства оздоровленного посадочного материала актинидии и лимонника на безвирусной основе для питомниководсгва и селекции. Данная система позволяет выявить наличие вирусов и получил, безвирусные базисные клоны с использованием метода клонального микроразмножения и последующего зеленого черенкования их в теплице с искусственным туманообразованием, при увеличении рентабельности производства посадочного материала лимонника на 309,1 %, актинидии - на 49,9 %

За годы исследований получено 5 тысяч безвирусных растений актинидии и лимонника В СХПК "Племзавод Майский" Вологодской области проведено испытание разработанных элементов технологии зеленого черенкования актинидии и лимонника с применением регуляторов роста в оптимальных концентрациях на площади 100 м2, что позволило повысить экономический эффект на 29 % Лабораторией агротехнической оценки ФГНУ "Росинформагротех" испытано воздействие магнитно-импульсной обработки на зеленые черенки актинидии и лимонника на площади 200 м2, где в среднем получено 150 шт/м2 укорененных черенков В ГНУ ВСТИСП Россельхозакадемии заложены маточные насаждения актинидии и лимонника на площади 100 м2 Основные положения, выносимые на защиту:

1 Обоснование необходимости оздоровления растений актинидии и лимонника от вирусной инфекции,

2 Система размноженияактинидии и лимонника in vitro с применением эффективных питательных сред,

3. Технологические приемы ускоренного размножения оздоровленного посадочного материала актинидии и лимонника китайского методом зеленого черенкования с использованием перспективных экологически безопасных стимуляторов роста Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены на научной конференции в ТСХА (Москва, 21-27 апреля 2002 и 2003 гг) и на VI международном симпозиуме (г Пущино МО, 13-17 июня 2005 г) Результаты исследован-ний опубликованы на 6 симпозиуме по фенольным соединениям (Москва, 28-30

апреля 2004 г), в материалах международной научно - практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения А Г Волузжева "Ягодоводство на современном этапе" (Беларусь, 13-15 июля 2004 г), в материалах VII Международного симпозиума "Нетрадиционные и редкие растения, природные соединения и перспективы их использования" (Белгород, 15-19 июня 2006 г)

Публикации. Основные результаты исследований по диссертации изложены в 12 научных статьях, в том числе 5 - в рецензируемых научных журналах Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 150 страницах, состоит из введения, 4 глав, выводов, рекомендаций по практическому использованию, списка литературы из 189 источников, в том числе 73 на иностранных языках, содержит 48 таблиц, 9 рисунков и 11 приложений. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении и обзоре литературы обоснована актуальность работы, сформулированы основные направления исследований, дана общая характеристика работы

1. Материалы, методика и объекты исследований

Исследования проводили в 2004-2006 гг в отделах размножения, защиты растений от вредителей и болезней, научно-производственном отделе ГНУ ВСТИСП Россельхозакадемии Объектами изучения являлись тир вида актинидии (Actinidia (А), Lindl) - актинидия коломикта (A. kolomikta) - женская форма сортов ВИР 1, Фея, Павловская, Фантазия садов, Нарядная, Праздничная, Клара Цеткин, Находка, Галина и мужская форма, актинидия полигама (A. pofygama) -женская форма сортов Перчик, Жар птица, Солнцеликая, Образец № 2 и мужская форма, актинидия аргута (A. argüía) - женская форма семьи Образца 2, семьи Золотая коса, Образец № 3, Фигурная, мужская форма семьи Золотая коса и Гибрид сладкий и один вид лимонника (Schizandra Turez Baúl) - лимонник китайский {Sch. chinensis) 2 сорта (Первенец и Садовый 1) и 2 формы (Образец 3 и Коломенский)

Для выявления вирусной инфекции использовали метод прямого сэндвич-варианта иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием базовой методики (М Clark, A Adams, 1977) Тестирование осуществляли на 10 наиболее часто ветре-

чаемых вирусов неповирусы мозаики резухи (Arabis mosaic virus - ArMV), кольцевой пятнистости малины (Raspberry ringspot vims - RpRSV), черной кольчато-сти томата (Tomato black ring virus - TBRV), скручивания листьев черешни (Cherry leaf roll spot virus - CLRV), иларвирусы карликовости сливы (Prune dwarf virus - PDV), некротической кольцевой пятнистости косточковых {Prunus necrotic ring spot virus - PNRSV), мозаики яблони (Apple mosaic ilarvirus - ApMV), куку-мовирус огуречной мозаики (Cucumber mosaic virus - CMV), тобамовирус табачной мозаики (Tobacco mosaic virus - ToMV) и садвавирус латентной кольцевой пятнистости земляники (Strawberry latent ringspot virus - SLRSV) Обследование растений на наличие вирусной инфекции проводили в ГБС имени Н В Цицина РАН, Ботаническом саду МГУ имени М В. Ломоносова (г Москва) и Московской опытной станции растениеводства ГНУ ВСТИСП Россельхозакадемии (п Михнево МО) В качестве образцов для ИФА отбирали почки, листья, бутоны, цветки и кору побега. Тестирование проводили в 2 срока, соответствующие фазам окончания бутонизации и зеленых плодов При изучении листьев актинидии с пестрой окраской определяли локализацию вирусов в разных сегментах листа и содержание хлорофилла по Гетри (1946). Тестировали по 6-10 образцов в 2-кратной химической повторности

На этапах введения в культуру m vitro экспланты изолировали в 4 срока, соответствующие фазам глубокого, вынужденного покоя, начала плодообразования и налива плодов и высаживали на питательные среды Мурасиге-Скуга (MC) (1962), Лепуавра (1977) и Ли и де Фоссарда (1980) Изучали действие следующих регуляторов 2-изопентениладенина (2-iP - 0,5-5,0 мг/л), 6-бепзиламинопурина (6-БАП - 0,025-1,0 мг/л), зеатина (0,1-0,5) мг/л; тидиазурона (ТДЗ - 0,05-0,1 мг/л), настойки лимонника (НЛ - 1,0-6,0 мл/л) Введение в культуру тканей и клональ-ное микроразмножение осуществляли в соответствии с «Методическими указаниями по клональному микроразмноженю черной и красной смородины» (1986) и учебным пособием «Клональное микроразмножение плодовых и ягодных культур» (Воронеж, 2003) В каждом варианте опыта изолировали по 15-25 шт мери-стематических верхушек величиной 0,5-2,0 мм, повторность неизолированная

Опыты по зеленому черенкованию проводили в защищенном грунте с тума-

нообразующей установкой в соответствии с методическими указаниями «Выращивание материала зеленым черенкованием» (ФЯ Поликарпова и др , 1991) В качестве грунта использовали смесь торфа и песка в соотношении 3.1 по объему Черенки заготавливали в 2 срока, соответствующие фазам цветения и начала образования плодов исходного растения. Для проведения опытов заготавливали черенки длиной 25-30 см При зеленом черенковании изучали действие регуляторов роста рибава-экстра (0,1-1,0 мл/л), циркона (0,1-2,0 мл/л), эпина-экстра (0,12,0 мл/л), настойки лимонника (HJT - 0,1-1,0 мл/л), салициловой кислоты (СК - 525 шг1л),£-индолилмасляной кислоты (ИМК - 5-25 мг/л) Воздействие на зелёные черенки актинидии и лимонника магнитно-импульсной обработкой (МИО) осуществляли при помощи сконструированных в отделе механизации ГНУ ВСТИСП приборов ГОИ и СИ-3 с числом импульсов магнитной индукции от 0 до 100 В каждом варианте опыта брали по 50 шт черенков в 4-х кратной повторности

Статистическую обработку опытных данных осуществляли методами дисперсионного и корреляционного анализов по Доспехову (1985)

Расчет экономической эффективности выполняли в соответствии с «Методическими рекомендациями ВСТИСП по определению экономической эффективности научных достижений в садоводстве» (2005)

2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Обоснование необходимости оздоровления посадочного материала от вирусной инфекции

С целью обоснования необходимости оздоровления от вирусов были проведены маршрутные обследования отличающихся по возрасту и функциональному назначению коллекций актинидии и лимонника в ведущих научных учреждениях Изучаемые нами вирусы были выявлены практически во всех обследованных насаждениях актинидии и лимонника, но частота встречаемости конкретных видов существенно различалась Наиболее распространённым вирусом на актинидии коломикта в МГУ и МОСР оказался RpRSV, в ГБС - PDV Вирус CMV по частоте встречаемости на актинидии коломикта в среднем по трем обследован-

ным насаждениям находился на втором месте после С1_Ю/ Вирусы БЬЯБУ и PNRSV встречались редко, вирус ТоМУ не обнаружен

Изучение возможности использования помимо листьев других видов образцов для диагностики вирусов (почек, коры побегов и бутонов) на актинидии не показало их преимуществ по сравнению с листьями (таблица 1) Только некоторые виды вирусов хорошо выявлялись в коре и бутонах Так, вирус РШБУ наряду с листьями диагностировался приблизительно на том же уровне в коре побегов, а вирусы АрМУ и ЯрЯБУ - в бутонах

Таблица 1 - Зараженность (%) растений актинидии комплексом вирусов в зависимости от вида образца (2004 г.)

Вирус листья почки кора бутоны

АрМУ 71,4 14,3 14,3 50,0

РБУ 71,4 0,0 0,0 0,0

РЖБУ 42,9 28,6 42,9 0,0

ТоМУ 57,2 57,2 14,3 0,0

СМУ 71,4 28,6 14,3 0,0

СЬЯУ 71,4 28,6 14,3 25,0

ТВЯУ 71,4 28,6 14,3 0,0

ЫрЯБУ 71,4 28,6 28,6 50,0

БЬЯБУ 71,4 42,9 14,3 25,0

АгМУ 57,2 14,3 14,3 0,0

Мониторинг вирусов в листьях трех видов актинидии и 1 вида лимонника в 2005-2006 гг показал, что на актинидии присутствуют все виды вирусов, за исключением вируса табачной мозаики (таблица 2). Наибольшая частота встречаемости вирусов отмечена на актинидии полигама по ряду вирусов она достигла 80 % В среднем по трем видам актинидии чаще других диагностировались вирусы СЬЯУ, АгМУ и РЫЯБУ Низкий процент зараженности растений актинидии отме-

чен для вирусов ИрКБУ и ТВИУ Промежуточное положение по проценту зараженных растений занимали вирусы БЬЯБУ и РБУ На лимоннике китайском выявлены все изученные нами вирусы Наибольшее число растений лимонника заражено вирусами СЬКУ и АгМУ, менее встречаемыми вирусами были БЬЯБУ, ЯрК^У и РМ^У, ТоМУ и еще реже встречались СМУ, РОУ и ТВЯУ.

Таблица 2 - Заражённость вирусами (%) актинидии различных видов и лимонника (в среднем за 2005-2006 гг.)

Вирусы Актинидия Лимонник

Коломикта Аргута Полигама Китайский

CMV 16,7 0,0 80,0 10,0

PDV 33,3 20,0 40,0 10,0

ТоМУ 0,0 0,0 0,0 20,0

SLRSV 16,7 20,0 60,0 30,0

RpRSV 100,0 0,0 0,0 30,0

CLRV 66,7 20,0 80,0 40,0

AiMV 50,0 0,0 80,0 40,0

PNRSV 0,0 40,0 80,0 30,0

TBRV 0,0 0,0 40,0 10,0

Следовательно, актуальной проблемой является оздоровление растений актинидии и лимонника от вирусов Для этих целей чаще всего используют культуру меристематических верхушек Однако метод микроразмножения для актинидии и лимонника нуждается в усовершенствовании

22. Совершенствование технологии размножения актинидии и лимонника in vitro

Регенерационная способность эксплантов лимонника и актинидии разных видов на этапе введения в культуру зависела от срока изоляции Наибольший процент приживаемости эксплантов (в среднем 38-45 %) достигался при изоляции меристематических верхушек в фазы глубокого и вынужденного покоя. В фазы плодообразования и налива плодов приживаемость в среднем по трем видам актинидии снижалась примерно в 2-4 раза (таблица 3)

Таблица 3 - Приживаемость эксплантов (%) актинидии и лимонника на этапе введения в культуру в зависимости от срока изоляции (в среднем за 20042006 гг., фон - 6-БАП 0,5 мг/л)

Род Вид Глубокий покой (декабрь) Вынужденный покой (февраль) Начало плодо-образования (июнь) Налив плодов (июль)

Актинидия Коломикта 76,8а* 56,9аб 50,06 10,Ов

Полигама 37,5а 16,56 12,56 0,0в

Аргута 20,96 41,7а 0,0в 20,06

Лимонник Китайский 86,7а 100,0а 0,06 33,36

Примечание * - разные буквы означают существенные различия при 5 % -ом уровне значимости

В целом меристематические верхушки актинидии коломикта приживались лучше, чем актинидий аргута и полигама соответственно в 2,4 и 2,9 раза Экспланты женской формы актинидии коломикта в среднем по всем срокам изоляции отличались в 3 раза более высокой приживаемостью, чем мужской формы Однако при изоляции эксплантов актинидии коломикта в фазу глубокого покоя различия по приживаемости между женской и мужской формами отсутствовали Наибольшая приживаемость эксплантов лимонника сорта Первенец (86,7-100 %) была отмечена при высадке на питательную среду в фазы глубокого и вынужденного покоя, тогда как в фазы плодо-образования приживаемость резко снижалась Для актинидии аргута и полигама сроки изоляции эксплантов в фазы глубокого и вынужденного покоя также оказались более благоприятными для их развития по сравнению с другими сроками (рисунок 1) При введении меристематических верхушек лимонника китайского сорта Первенец в культуру тканей их приживаемость и развитие на питательной среде, как и у актинидии, зависели от срока изоляции Высота эксплантов актинидии при изоляции в фазу покоя была на 30-40 %, а число листьев - в 3,2-4,1 раза больше, чем в фазу образования плодов

(июль)

р Коломикта Мужская С5 Коломикта (ВИР-2) Женская

В Полигама Мужекая О Полигама (Перчик) Ж енехэя

В Аргута (Золотая коса) Женская а Аргута Мужская

О лимонник

Рисунок 1 - Высота (мм) эксплантов актинидии и лимонника в зависимости от срока изоляции

Пол актинидии в ряде случаев оказывал значительное влияние на регенера-

ционные процессы у эксплантов. Так, меристемы женской формы актинидии коломикта не только лучше приживались на питательной среде, но и формировали более облиственную розетку листьев по сравнению с мужской формой. Разница по числу образовавшихся листьев и высоте побегов у женской и мужской форм актинидии была почти трёхкратной. Исключение составила актинидии полигама: экспланты мужской формы у неё характеризовались более сильным вегетативным развитием, чем женской формы. Развитие меристематических верхушек актинидии аргута практически не зависело от пола растения, с которого они были взяты.

Изоляция эксплантов в фазы покоя была более благоприятной для приживаемости и развития эксплантов, вероятно, в силу формирования специфического биохимического статуса маточных растений, в том числе более высокого содержания в тканях питательных и гормональных веществ, что и обуславливало в конечном итоге активные регенерационные процессы у меристем.

Большое число эксплантов лимонника не развивалось в течение нескольких месяцев культивирования. В этой связи важен подбор оптимальной питательной среды.

Испытание различных регуляторов роста, включённых в состав питательной среды, на этапе введения в культуру актинидии и лимонника показало, что наи-

ыпую приживаемость меристем в среднем по 3 видам актинидии обеспечивал азурон (ТДЗ) (таблица 4).

лица 4 - Приживаемость (%) актинидии и лимонника в зависимости от муляторов роста на этапе введения в культуру (среда МС)

улятор Концентрация, мг/л актинидия лимонник китайский

аргута коломикта полигама

1 0,025 15,0вг Ог Ог 16,7вг

0,5 20,Ов 20,Ов Ог 33,3бв

1,0 30,0бв Ог Ог 33,3бв

н 0,1 Ог Ог Ог 50,06

0,25 Ог Ог Ог 16,7вг

0,5 Ог Ог Ог 16,7вг

0,05 15,0вг Ог 60,0аб 33,3бв

0,5 10,Ог Ог Ог 33,3бв

1,0 Ог 60,0аб Ог 33,3бв

0,5 Ог Ог Ог Ог

1,0 5,0г Ог Ог 50,06

5,0 75,0 а Ог Ог 33,3бв

Р05 регулятор роста Бф05=53,4, культура Рф05=30,3; концентрация Рф05=27,3

Приживаемость на средах с 6-БАП и 2-)Р была в 2,1-2,2 раза ниже, чем на е с тидиазуроном Вместе с тем имела место и видовая специфика Так, мак-ьная приживаемость меристем актинидии аргута достигалась на среде с 2-мг/л) - 75 %, актинидии коломикта - с ТДЗ (1 мг/л) - 60 %, актинидии поли- с ТДЗ (0,05 мг/л) - 60 % Наибольшая приживаемость меристематических аек лимонника (50 %) наблюдалась при добавлении в состав среды Мураси-куга зеатина (0,1 мг/л) или 2-1Р (1,0 мг/л) Тидиазурон обеспечивал прижи-сть эксплантов лимонника на уровне 33,0 %, 6-БАП - 17-33 % Благоприят-ействие на развитие эксплантов, особенно у актинидии аргута и коломикта, шал 6-БАП в концентрациях 0,5 и 1,0 мг/л (для коломикты - 0,5 мг/л). Хо-й рост побегов в длину у актинидии аргута также стимулировал ТДЗ в низ-онцентрации (0,05 мг/л) или 2-1Р (1,0 и 5,0 мг/л), а у актинидии полигама -концентрации 0,05 мг/л На способность ТДЗ к активной стимуляции орга-еза на других культурах указывали некоторые зарубежные исследователи г, 1992, БапкЫа, 1993) Данное действие ТДЗ связывают с его способностью ицировать биосинтез или метаболизм ИУК и этилена и поддерживать их

оптимальный уровень внутри культивируемых тканей экспланта В этой связи в 2006 г при подборе оптимальной среды для актинидии дополнительно применяли ТДЗ в концентрации 0,1-0,5 мг/л (таблица 5)

Таблица 5 - Приживаемость и развитие микрочеренков актинидии в зависимости от минерального состава среды и концентрации тидиазурона (2006 г.)

Концентрация тидиазурона, мг/л Вид актинидии Среда Лепуавра Среда Ли и де Фоссарда

Приживаемость, % Число листьев, шт Высота экспланта, см Диамепр каллуса, мм Приживаемость, % Число листьев, пгг Высота эшшшпа см Диаметр каллуса, мм

0,1 ксяомикга 7,2в 1а 06 2а 12,56 4а 0,8а 1а

псшгама 25,0а 2аб Об 2,5а Ов Ов 0а 0а

0,25 «эломикп 21,5аб 2,96 1,7аб 16 563а 236 0,8а 23аб

полигама 16,76 1а 06 Об 12,56 1в 0а 46

0,5 ШЛОМИКТ! 15,56 1,5а Об 16 20,3аб 1в 0а 1а

полигама 33,3а 2,56 Об 16 57Да 1,8в 0а 0а

Для актинидии коломикта и полигамы на этапе введения оптимальной средой оказалась среда Ли и де Фоссарда с ТДЗ соответственно в концентрациях 0,25мг/л и 0,5 мг/л

2.3. Совершенствование технологии зеленого черенкования 2.3.1. Действие регуляторов роста на ризогенез у зеленых черенков

В настоящее время наиболее эффективным способом размножения базисных растений является зеленое черенкование Из-за существующей проблемы, связанной с укоренением лимонника и необходимостью сокращения сроков укоренения актинидии, изучалось действие различных регуляторов роста на ризогенез черенков Наибольшую укореняемость зеленых черенков лимонника обеспечивали такие регуляторы роста, как рибав-экстра (2,0 мл/л), циркон (2,0 мл/л) и НЛ (3,0 мл/л) Укореняемость черенков лимонника с применением указанных регуляторов роста была в 3,7-4,2 раза выше по сравнению с контролем (таблица 6)

Таблица 6 - Укореняемость и развитие зеленых черенков лимонника китайского в условиях туманообразующей установки в зависимости от вида и концентрации регуляторов роста (в среднем за 2004-2006 гг.)

Регулятор роста Концентрация, мг/л* или мл/л Укореняемость, % Число корней, цгг Длина корней, см Длина прироста, см

Вода контроль 17,4в 0,9а 1,5д 1,9

ИМК (эталон) 50,0* 47,46 6,8в 15,86 11,5

НЛ 1,0 29,4бв 2,56 5,4г 3,7

3,0 64,0а 5,2в 8,9в 10,05

6,0 53,4аб 2,76 13,3бв 15,3

ИМК + НЛ** 50,0*+1,0 53,4аб 6,9в 12,5бв 12,65

Циркон 0,5 40,06 3,06 4,0г 2,0

1,0 52,7аб 2,0аб 5,4г 4,3

2,0 66,7а 3,3 бв 4,8г 1,0

ИМК + циркон 50,0*+1,0 28,06в 2,66 6,2вг 4,8

Рибав-экстра 0,5 20,Ов 1,5аб 1,4д 0

1,0 58,0а6 4,8бв 11,7в 12,1

2,0 73,3а 9,8г 16,86 2,2

ИМК + рибав-экстра 50,0*+1,0 53,3 аб 15,Од 36,3а 05

Примечание здесь и далее *- концентрация препарата в мг/л,

** НЛ - настойка лимонника

По мере увеличения концентрации НЛ от 1 до 3 мл/л имелась тенденция к

улучшению ризогенеза, увеличению длины побегов и уменьшению диаметра каллуса Увеличение концентрации НЛ до 6,0 мл/л не способствовало повышению укореняемости, но приводило к формированию более развитых корневой и надземной систем В связи с достижением значительного технического эффекта в отношении стимуляции ризогенеза нами была подана заявка на изобретение и получен патент РФ № 2309591

С увеличением концентрации препаратов циркон и рибав-экстра от 0,5 до 2,0 мл/л отмечено повышение укореняемости черенков лимонника соответственно в 1,7 и 3,7 раза В случае применения циркона существенные различия по развитию корней в вариантах с различными концентрациями отсутствовали Оптимальной для развития корней концентрацией рибава-экстра оказалась 2,0 мл/л Наилучший результат по развитию корней у черенков лимонника среди изученных стимуляторов роста был отмечен при совместном использовании препаратов

ибав-экстра (1,0 мл/л) и ИМК (50,0 мг/л) число корней увеличилось в 16,7 раза, их длина - в 24,2 раза по сравнению с контролем.

В процессе укоренения зеленых черенков лимонника часто происходит за-ивание их оснований Возможной причиной недостаточно высокого укоренения имонника при размножении зелеными черенками (а отчасти и размножения т Лго) является высокое содержание в тканях лигнанов - димерных фенольных со-нений.

При изучении влияния различных сроков высадки черенков актинидии на укореняемость и развитие было отмечено, что высадка черенков этой культу-I в более поздний срок (налива плодов) приводит к незначительному сниже-ю укореняемости (в среднем на 14 %) и числа корней (на 26 %) по сравнению ранним сроком (начало завязывания плодов). По длине корней черенки акти-дии аргута и полигама более позднего срока высадки не уступали черенкам ннего срока. У черенков актинидии коломикта позднего срока высадки длина рней снижалась в 1,7 раза по сравнению с ранним сроком У всех изученных дов актинидии черенки, высаженные в более поздний срок, характеризовались реднем в 5 раз более слабым приростом побегов по сравнению с ранним сро-м Данное явление вполне объяснимо, поскольку черенки при поздних сроках садки не успевают сформировать развитую надземную систему. Поэтому для лучения более развитых саженцев целесообразнее рекомендовать более ране сроки посадки черенков. Однако для организации рационального культуро-рота в теплице поздний срок высадки актинидии является экономически оп-данным

В целом все изученные виды актинидии характеризуются высокой регене-ионной способностью черенков, поэтому существенные различия по укоре-мости зеленых черенков между вариантами с применением разных регулято-роста как правила, отсутствовали (таблица 7) Черенки актинидии аргута ее развитую корневую систему формировали при использовании рибава-тра (0,1и 0,5 мл/л) или ИМК (25,0 мг/л) Высокая суммарная длина корней

была отмечена также при обработке черенков актинидии аргута в растворах СК (25,0 мг/л) или циркона (1,0 мл/л) У актинидии почигама наибольшее число и длину корней (соответственно на 112-115 % и 56-62 % больше по сравнению с контролем) обеспечивало намачивание черенков в растворе эпина-экстра в концентрациях 0,1 и 0,5 мл/л В отношении числа и длины корней у актинидии полигама хороший результат также был получен и при использовании циркона (0,1 и 0,5 мл/л), рибава-экстра (0,1мл/л) или ИМК (10,0 мг/л) На актинидии коло-микта значительный эффект в отношении ризогенеза от применения изученных нами регуляторов роста отсутствовал Однако имелись различия, связанные с полом актинидии коломикта Черенки мужской формы актинидии коломикта положительно реагировали на их обработку регуляторами роста укореняемость по сравнению с контролем в случаях использования циркона (0,1 мл/л) или эпина-экстра (1,0 мл/л) увеличивалась на 20 %, ИМК (10,0 мг/л), рибава-экстра (0,5 и 1,0 мл/л) или СК (5,0 мг/л) - на 16-18 %

Приросты наибольшей длины формировали растения актинидии аргута и полигама, превосходя по этому показателю в 5 - 7 раз актинидию коломикта В природных условиях актинидии аргута и полигама также характеризуются более мощным вегетативным развитием по сравнению с актинидией коломикта.

Таблица 7 - Укореняемость и развитие зелёных черенков актинидии разных видов в условиях тумапообразую-щей установки в зависимости от вида и концентрации регуляторов роста (в среднем за 2004-2006 гг.)

Регулятор роста Концентрация, мг/л* или мл/л Укореняемость, % Число корней, шт Длина корней, см Длина прироста, см

аргута коло-микта полигама аргута коло-микта полигама аргута коло-микта полигама аргута коло-микта полигама

н2о Контроль 86,5а 85,6а 100,0а 43,8аб 53,7а 39,Ов 82,1в 77,6а 78,06 33,5в 6,16 35,2в

Циркон 0,1 78,5а 84,9а 92,0а 21,7в 2Д76 60,06 69,8в 74,4а 108,0в 12,5а 3,6а 15,7аб

0,5 87,5а 95,4а 52,06 39,66 31,36 54,66 100,16 58,26 113,Ов 20,76 4,9аб 31,5в

1,0 84,3а 87,9а 52,06 23,Зв 38,3аб 26,6в 120,1аб 73,7а 50,0а 22,36 5,66 32,4в

ИМК (эталон) 5,0* 85,5а 85,6а 88,0а 23,8в 34,2аб 31,Ов 76,5в 56,96 66,баб 18,1аб 6,16 22,96

10,0* 85,0а 79Даб 100,0а 4б,4аб 35,4аб 75,0аб 88,6бв 55,36 108,0в 23,6бв 3,8а 14,1аб

25,0* 86,5а 90,8а 92,0а 55,0а 32,16 61,06 101,96 52,86 83,06 22,16 5,66 40,4в

Рибав-экстра од 84,3а 88,7а 94,0а 45,4аб 28,76 59,46 103,06 57,36 95,06в 27,7в 7,06 13,6а

0,5 90,4а 91,1а 100,0а 52,5а 28,96 45,0бв 102,06 51,96 94,06в 19,баб 3,3а 37,5в

1,0 86,3а 93,1а 96,0а 41,66 28,46 48,5бв 89,8бв 62,баб 70,0аб 18,8а 5,4аб 9,9а

Эпин-экстра 0,1 85,5а 81,9аб 88,0а 44,2аб 27,46 83,0а 91,5бв 53,86 126,Ов 19,5аб 3,8а 9,8а

0,5 81,5а 86,4а 100,0а 38,36 35,1аб 84,0а 85,1бв 54,66 122,0в 24,8бв 3,9а 10,5а

1,0 83,0 а 90,7а - 39,26 36,8аб - 79,4в 62,4аб - 15,8а 3,0а -

Салициловая кислота 5,0* 82,3а 93,3а - 36,86 30,96 - 81,7в 67,4а - 23,7бв 3,9а -

10,0* 79,8а 72,26 80,0аб 43,8аб 30,86 32,4в 95,9бв 57,16 75,06 20,66 3,9а 25,5бв

25,0* 82,8а 86,0а - 21,7в 31,76 - 158,0а 63,7аб - 33,6в 5,0аб -

2.3.2. Действие магнитно-импульсной обработки (МИО) на развитие зеленых черенков

При воздействии магнитной обработки с числом импульсов 60 на черенки актинидии полигама с предварительным их намачиванием в НЛ (1,0 мл/л) отмечали увеличение прироста побегов в 1,9 раза по сравнению с вариантом без обработки Для образования и развития корней актинидии полигама наилучший эффект оказывала обработка черенков 10, 40 и 100 импульсами магнитной индукции (рисунок 2) Число корней при этом возрастало в 1,7-1,8 раза, а их длина - в 2,2-2,7 раза по сравнению с контролем

130 120 ПО

100

а 83 «.-70 £ 60 §■50 *40 Я 30

'К

/

оГ

V

260

240 п— 220 ;— 200 |- -38» г-160 ■— 340 -320 - . 300 г'-

оп__

10

40

имтльсов

100

= 49 ^20

Чиста мулъсо»

О

10

40

60

Актинидия полигама

-Лимонник китайский

Акшоди полигама —Личонш китайский!

Рисунок 2 — Действие МИО на развитие корневой системы у зеленых черенков актинидии и лимонника в условиях защищенного грунта с туманообразующей установкой (2005 г.): А. Суммарное число корней, шт.; Б. Суммарная длина корней, см

Магнитно-импульсная обработка зетеных черенков актинидии ар гута и ко-ломикта не оказала положи гельного действия на их развитие Предпосадочное воздействие на зеленые черенки лимонника китайского импульсами магнитной индукции не приводило к увеличению укореняемости и улучшению развития надземной системы, но в некоторых вариантах улучшало развитие корневой системы Максимальное число корней черенки лимонника образовывали при их обработке 40 импульсами число корней возрастало на 33 % по сравнению с вариантом без обработки При этом на 21% увеличивалась и длина корней Наилучший рост

корней в длину обеспечивал вариант с обработкой черенков лимонника 10 импульсами длина корней возрастала в 1,9 раза по сравнению с контролем 3. РАСЧЕТ ЭКОНОМИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ

Расчёт экономической эффективности производства посадочного материала с использованием метода зеленого черенкования приводим на примере лимонника китайского и актинидии коломикта (таблица 8)

Усовершенствованная технология зеленого черенкования по сравнению с традиционной способствовала снижению себестоимости 1 саженца лимонника китайского на 298 % и затрат труда на 321 %, а по актинидии - себестоимости на 11% и затрат труда на 11,5 % Рентабельность производства саженцев лимонника по разработанной технологии увеличилась на 309,1 %, а актинидии - на 49,9 % по сравнению с известной технологией

В ходе работы получены безвирусные клоны актинидии и лимонника для дальнейшего размножения

Таблица 8 - Экономическая эффективность получения посадочного материала актинидии и лимонника с использованием различных технологий зеленого черенкования (в расчёте на 1000 шт. высаженных зелёных черенков)

Виды затрат Лимонник китайский Актинидия коломикта

Традиционная Разработанная Традиционная Разработанная

Выход саженцев % шт 17,4 73,3 85,6 95,4

174 733 856 954

Всего затрат, руб 20125 21304 22506 22610

Себестоимость 1 саженца, руб 115,7 29,1 26,3 23,7

Цена реализации 1 саженца, руб 120,0 120,0 120,0 120,0

Выручка от реализации, руб 20880 87960 102720 114480

Прибыль, руб 755 66656 80214 91870

Дополнительная прибыль, руб - 65901 - 11656

Уровень рентабельности, % 3,8 312,9 356,4 406,3

Затраты труда, чел -час 105,2 25,0 21,4 19,2

ВЫВОДЫ

Разработана система оздоровления посадочного материала актинидии и лимонника Отработана методика диагностики вирусов с использованием ИФА Показано, что в качестве тест-образцов лучше использовать листья в период с апреля по июль В других органах концентрация большинства вирусов была ниже по сравнению с листьями В тканях листьев лимонника химерного происхождения наибольшая концентрация вирусов отмечена в желто-бетых сегментах Методом ИФА выявлено 10 наиболее распространенных видов вирусов в насаждениях актинидии и лимонника Москвы и Московской области и обоснована необходимость оздоровления посадочного материала данных культур от вирусной инфекции Установлена зараженность коллекционных насаждений изученных культур непо-, садва-, илар-, кукумо- и тобамовирусами Наиболее часто на актинидии встречались неповирусы кольцевой пятнистости малины, скручивания листьев черешни, мозаики резухи и иларвирусы мозаики яблони и некротической кольцевой пятнистости косточковых, а на лимоннике китайском - неповирусы скручивания листьев черешни, мозаики резухи и кольцевой пятнистости малины Зараженность вирусами актинидии аргута достигает 40 %, коломикта - 67 %, полигама - 80 %, лимонника китайского - 40 % Усовершенствована методика ускоренного получения оздоровленных клонов актинидии и лимонника in vitro Установлено, что регенерационная способность эксплантов актинидии и лимонника на этапе введения в культуру зависит от сроков изоляции, минерального и гормонального состава питательной среды и биологических особенностей культуры (вида, сорта, а для актинидии -и пола) Наибольшая приживаемость (50-100 %) меристематических верхушек и более активные ростовые процессы отмечаются в фазы глубокого и вынужденного покоя маточных растений

Для развития эксплантов актинидии наиболее благоприятен минеральный состав питательной среды по Ли и де Фоссарду Наибольшая приживаемость

меристем актинидии коломикта и полигама обеспечивается при применении тидиазурона в концентрации 0,05-0,5 мг/л, актинидии аргута - 2-1Р 5 мг/л Лучшая приживаемость меристематических верхушек лимонника отмечается на питательной среде с зеатином (0,1 мг/л) или 2-1Р (1 мг/л) Настойка лимонника улучшает развитие эксплантов во время второго и последующих субкультивирований в 3,5-3,9 раза по сравнению с контролем 5 Установлено, что укореняемость и развитие зелёных черенков актинидии и лимонника китайского зависят от вида культуры, срока заготовки черенков, вида и концентрации применяемого регулятора роста Прирост побегов возрастает при заготовке их в фазу бутонизации и снижаются при высадке в фазу налива плодов Приросты наибольшей длины формируют растения актинидии полигама, превосходя по этому показателю в 5-7 раз актинидию коломикта

6. Укореняемость черенков актинидии коломикта мужской формы возрастает при использовании циркона, рибава-экстра, эпина-экстра, салициловой кислоты, ИМК Черенки актинидии аргута формируют более развитую корневую систему при использовании рибава-экстра (0,1 и 0,5 мл/л) или ИМК (25 мг/л), актинидии полигама - эпина-экстра (0,1 и 0,5 мл/л)

У лимонника китайского наибольшая укореняемость (64-73 %) обеспечивается намачиванием черенков в растворах рибава-экстра (2 мл/л), циркона (2 мл/л) или настойки лимонника (3 мл/л), а наилучшее развитие корней - при совместном применении рибава-экстра и ИМК

7. Магнитно-импульсная обработка зелёных черенков актинидии аргута и коломикта не оказывает положительного действия на их ризогенез, а на актинидии полигама стимулирует увеличение прироста побегов в 1,9 раза, числа корней в 1,7-1,8 раза и их длины в 2,2-2,7 раза

Магнитно-импульсная обработка черенков лимонника при некоторых режимах (10-60 импульсов) улучшает развитие корневой системы 8 Разработанная технология получения оздоровленных саженцев актинидии и лимонника китайского методом зелёного черенкования способствует увелкче-

нию рентабельности производства саженцев лимонника китайского на 309,1 %, актинидии - на 49,9 % и снижению затрат труда соответственно на 321 % и 11,5 % по сравнению с традиционной технологией

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПРАКТИЧЕСКОМУ ИСПОЛЬЗОВАНИЮ

1 Разработанную систему ускоренного производства оздоровленного посадочного материала актинидии и лимонника китайского рекомендуется использовать с включением следующих этапов диагностики вирусной инфекции, оздоровления с использованием метода культуры меристематкческих верхушек, получения клонов для закладки маточников и их ускоренного размножения путем зеленого черенкования в условиях туманообразующей установки

2 Для диагностики вирусной инфекции методом ИФА рекомендуется в качестве образцов отбирать листья в сроки с апреля по июль

3 При получении оздоровленного посадочного материала методом клонального микроразмножения изоляцию меристематических верхушек следует проводить в фазы глубокого или вынужденного покоя и высаживать экспланты на питательную среду Ли и де Фоссарда, дополненную тидиазуроном в концентрации 0,05 - 0,5 мг/л или 2-1Р в концентрации 5 мг/л для актинидии, зеатином в концентрации 0,1 мг/л, 2-1Р в концентрации 1 мг/л, настойкой лимонника 1-3 мл/л

- для лимонника китайского

4 Зеленые черенки для укоренения в условиях туманообразующей установки необходимо заготавливать в фазу начала завязывания плодов Для повышения укореняемости зеленых черенков актинидии аргута следует применять регулятор роста рибав-экстра (0,1 или 0,5 мл/л) С целью улучшения развития корневой и надземной систем зеленые черенки актинидии аргута рекомендуется обрабатывать в водных растворах циркона (1,0 мл/л), салициловой кислоты (10,0

- 25,0 мг/л), черенки актинидии полигама - в растворе эпина-экстра (0,1-0,5 мл/л) Зеленые черенки актинидии коломикта мужской формы следует обрабатывать в растворах циркона (0,1 мл/л) или эпина-экстра (1 мл/л)

Зеленые черенки лимонника китайского перед высадкой на укоренение рекомендуется намачивать в водном растворе настойки лимонника (3,0 мл/л), циркона (2 мл/л) или рибава-экстра (2 мл/л) с экспозицией 16-24 ч 5 Для улучшения развития корневой системы у зеленых черенков лимонника перед их высадкой рекомендуется осуществлять воздействие магнитно-импульсной обработкой с числом импульсов 10 - 60, а для актинидии полигама - 40 или 100 импульсов

Основные положения диссертации опубликованы в следующих работах:

1 Туть, Е А Изучение отдельных элементов технологии размножения актинидии и лимонника/ЕА Туть,ЛМ Голенева,ЭИ Колбасина // Сборник студен науч работМСХА -М МСХА -2002 -В 8.-С 207-209,

2 Туть, Е А Изучение отдельных элементов технологии размножения актинидии и лимонника / ЕЛ Туть, JIМ. Голенева, Э И Колбасина // Сборник студен науч работ МСХА. - М..МСХА. - 2003. -В 9 - С 221-223,

3. Туть, ЕА Гидроксикоричные кислоты (смесь) при укоренении черенков лимонника китайского / Е А Туть // VI симпозиум по фенольным соединениям (тезисы докладов), 28-30 апреля 2004 - М - 2004 - С 89,

4 Упадышев, М Т Особенности размножения актинидии и лимонника китайского in vitro и зелеными черенками / М Т. Упадышев, Е А Туть // Плодоводство и ягодоводство России. Сб. науч тр / ВСТИСП - М, 2004 - т XI - С 200-209,

5 Упадышев, М Т Особенности размножения актинидии и лимонника китайского in vitro / М Т Упадышев, Е А Туть // Материалы международной науч -практ конф посвященной 100-летию со дня рождения А Г. Волузжева "Ягодоводство на современном этапе" / Научн. тр -Белсад -2004 -т 15 -С 250-253; 6. Туть, Е.А Вирусные болезни и совершенствование методов размножения актинидии и лимонника китайского / Е А Туть, М Т Упадышев // VI международный симпозиум (Материалы симпозиума) "Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования", 13-17 июня 2005 г, Пущино - М РУДЫ -2005 -т. 1 -С 398-400,

7 Туть, Е А Диагностика вирусов на актинидии и лимоннике методом ИФА / Е А Туть, М Т Упадышев // Плодоводство и ягодоводство России Сб науч тр / ВСТИСП -М,2005 -т XII -С 606-611,

8 Туть, Е А. Распространенность вирусов на актинидии и лимоннике / Е А Туть, МТ Упадышев // Плодоводство и ягодоводство России Сб научтр / ВСТИСП -М,2006 -т XIII -С 380-390,

9. Упадышев, М Т Регуляторы роста и сроки высадки при укоренении зеленых черенков актинидии и лимонника китайского / М Т Упадышев, Е А Туть // Материалы междунар науч - практич конф "Нетрадиционные и редкие растения, природные соединения и перспективы их использования" / VII междунар симпозиум - Белгород "Политерра" -2006 -т 1 -С 340-343, 10 Туть, Е А Серомониторинг и диагностика вирусов на актинидии и лимоннике / Е А Туть, М Т Упадышев // Защита и карантин растений - 2007 -№ 8 - С 44-45, И Патент РФ № 2309591, МЕК А01N 65/00, A01G 1/00 - "Способ обработки зеленых черенков садовых культур"/ М Т Упадышев, Е А Туть // Бюл № 31 от 10 11 2007, 12 Туть, Е А Особенности микроразмножения актинидии и лимонника китайского / ЕА Туть,МТ Упадышев// Сельскохозяйственная биология-2008-№3-С 96-101

Подписано в печать 23 05 2008 г Печать трафаретная

Заказ № 469 Тираж 110 зкз

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш , 36 (495) 975-78-56, (499) 788-78-56 www autoreferat ru

Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Туть, Евгения Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

Цель исследований.

Задачи исследовании.

Научная новизна результатов исследований.

Предмет исследования.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Биологические особенности актинидии и лимонника.

1.2. Вирусные и фигонлазменные болезни па актинидии и лимоннике.

1.3. Диагностика сокопереносимых вирусов на ягодных культурах.

1.3.1. Визуальная диагностика и диагностика па травянистых индикаторах.

1.3.2. Диагностика вирусов меюдом иммупофермептпого анализа (ИФА).

1.4. Особенности вегетативного размножения актинидии и лимонника.

1.4.1. Клональпое микроразмножепие растений.

1.4.2. Размножение актинидии и лимонника зелёными и одревесневшими черенками.

1.4.2.1. Физиологические и апатомо-морфологические особенности. дифференциации придаточных корней.

1.4.2.2. Режимы укоренения и сроки черенкования.

1.4.2.3. Применение регуляторов роста.

1.4.2.4. Применение магнитно-импульсной обработки (МИО). при укоренении зелёных черепков актинидии и лимонника китайского.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ, МЕТОДЫ И ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Время, место проведения исследований.

2.2. Метеорологические условия в годы проведения экспериментов.

2.3. Методика исследований.

2.3.1. Объекты исследований.

2.3.2. Характеристика изучаемых сортов.

2.3.3. Характеристика изучаемых вирусов.

2.3.4. Характеристика стимуляторов роста.

2.3.5. Элементы учёта и наблюдений.

2.3.6. Краткие схемы опытов.

2.3.7. Методика маршрутных обследований и тестирования растительных. образцов на наличие вирусов.

2.3.8. Отработка приёмов клональиого микроразмножепия акгинидии и лимонника.

2.3.9. Отработка технологии зеленого череикования актинидии и лимонника.

2.3.10. Статистический анализ результатов исследований.

2.3.11. Расчёт экономической эффективности результатов исследований.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Видовой состав и распространенность вирусов на видах и сортах актинидии.

3.2. Особенности клональиого микроразмпожеиия актинидии и лимонника.

3.2.1. Регенерационпая способность эксплаптов актинидии и лимонника в. зависимости от сроков изоляции.

3.2.2. Действие регуляторов роста и минерального состава питательной. среды на развитие эксплаптов акгинидии и лимонника.

3.3. Зелёное черенкование.

3.3.1. Влияние сроков заготовки и регуляторов. роста на ризогенез у черенков актинидии и лимонника китайского.

3.3.2. Действие магпишо-импульспой обработки па ризогенез у зелёных. черенков актинидии и лимонника китайского.

Глава 4. ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПРОИЗВОДСТВА.

ОЗДОРОВЛЕННОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА.

ВЫВОДЫ.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПРАКТИЧЕСКОМУ ИСПОЛЬЗОВАНИЮ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Ускорение вегетативного размножения оздоровленного посадочного материала актинидии и лимонника"

В связи с всевозрастающими проблемами экологии актуальной задачей является включение в рацион человека плодов новых культур. Это позволяет использовать лекарственные свойства таких растений, как голубика, клюква, облепиха, актинидия и лимонник. Важнейшей особенностью большинства нетрадиционных культур является высокое содержание биологически активных соединений в плодах и других органах. К ним относятся растения рода актинидии Actinidia LindL, семейство Акт и н и д и е в ы е /I с tin idiaceae Van-Tiegh.

О большой популярности актинидии говорит тот факт, что уже в 1989 году потребление плодов актинидии китайской Actinidia chinensis Planch, в Новой Зеландии достигло 2,8 кг на душу населения, в Австралии - 583 г, в ФРГ -236 г, в Бельгии и Италии - 211 г, в Швейцарии - 178, а в Японии 147 г на человека (Э.М. То дадзе, 1989).

Плоды актинидии обладают исключительными биохимическими свойствами. У актинидии коломикта Actinidia kolomikta Maxim, содержание аскорбиновой кислоты достигает 2500 мг %, что в 10 раз превышает содержание аскорбиновой кислоты в плодах цитрусовых и в 2-3 раза - в плодах черной смородины (И.А. Панкова, С.Д. Мовчап, 1954; В.Д. Стрелец, 1987; Э.И. Колбасина, 1991).

По своему лечебному спектру актинидия способна потеснить многие медицинские препараты химического синтеза (Н.К. Фруептов, 1987; Лекарственные свойства видов растений флоры Дальнего Востока, 1992).

В плодах актинидии содержится фермент актинидии, который способствует перевариванию и лучшему усвоению пищи, особенно мясной. Сок актинидии предупреждает образование рака и туберкулеза. Плоды актинидии имеют прекрасный ананасовый вкус и аромат, могут быть использованы в пищу как в свежем, так и в переработанном виде.

В природе существует сорок видов актинидии. Наиболее известна и про-мышленно распространена актинидия китайская Actinidia chinensis Planch, или культивируемый вид Actinidia deliciosa. Она более известна под коммерческим названием «киви», по из-за слабой зимостойкости она может расти только в условиях тропического или субтропического климата (И.А. Губанов, 1976).

В лесах Дальнего Востока России произрастают более зимостойкие виды актинидии: аргута Actinidia argu/a Planch., коломикта Actinidia kolomikta и полигама Actinidia polygama Maxim. Они привлекают внимание селекционеров и садоводов-любителей нашей страны. Целесообразность их интродукции и акклиматизации в европейской части России доказана исследованиями ученых и практикой садоводства. Один из видов акшпидии, произрастающих в России — актинидия аргута, введен в промышленную культуру в 1992 году в Крыму (В.Н. Меженский, JI.A. Межснская, 2002).

Большой интерес для введения в культуру представляют растения лимонника китайского Schisandra chinensis (Turcz.) Bail!, из семейства Лимонниковые Schisandraceae Blume. Это самый зимостойкий и северный по ареалу вид лимонника. С древних времен и до наших дней лимонник китайский входит в сборы растительных препаратов наравне с женьшенем. Лекарственные препараты лимонника используют для профилактики простудных заболеваний, снятия стресса и усталости (Л.И. Вигоров, 1967; Н.А. Мельников, 1968). При длительном применении они укрепляют иммунную систему, а также благоприятно влияют на сердечнососудистую и центральную нервную системы человека благодаря содержанию многоатомных спиртов и лигпапов (схизапдрина, схизандрола и других). На основе лимонника создаются лекарственные препараты, кремы в косметологии и т.д. (приложение А). Показано положительное влияние отходов фармацевтической переработки лимонника в дозах 2,0 и 0,5 г/птицу в сутки на иммуногенез при псевдочуме кур (В.Г. Ярцев, 1992). Настойка лимонника оказывает профилактическое действие в отношении импотенции. Введением в культуру лимонника китайского и актинидии занимался И.В. Мичурин (1948), который предсказывал им большое будущее. Промышленные плантации лимонника были заложены в Крыму в 1998 году (В.Н. Меженский, Л.А. Меженская, 2002).

И.В. Мичурин вывел несколько сортов актинидии: Актинидия урожайная, Актинидия ранняя, Актинидия поздняя, Ананасная Мичурина, Клара Цеткин. Параллельно им велось изучение лимонника китайского. В 60-е годы прошлого столетия методом индивидуального отбора в поколениях был создан ряд сортов учеником И.В. Мичурина профессором Ф.К. Тетеревым (Э.И. Колбасина, 2005). В настоящее время активно ведутся работы по выведению новых сортов в Беларуси, на Украине, в России (Н.С. Грипепко, П.А. Мороз, 2000; Э.И. Колбасина, 2000, 2005).

Актинидия и лимонник китайский привлекательны своей декоративностью. Многолетние вьющиеся древесные лианы при хорошем уходе быстро растут. За 1 год вегетации могут дать приросты от 1,5 до 3,0 м и более, хотя высаженные на укоренение к концу вегетации растут не так быстро - 7-25 см (В.В. Фаустов, 1979; А.А. Подкопаев, 1987).

Технология возделывания лимонника и актинидии не адаптирована к средней полосе России. Базируясь на морфологии и биологии лиан, возможно создание нового подхода к их размножению. Лимонник плохо размножается, что делает актуальным усовершенствование способов размножения. При этом необходимо решить целый ряд проблем, связанных с получением оздоровленного посадочного материала. Вопросы фитосанитарного состояния этих культур, в том числе зараженности вирусными болезнями, изучены крайне недостаточно.

В связи с выше изложенным, нами определены следующие цель и задачи исследования.

Цель исследований - разработать систему оздоровления от вирусной инфекции и ускоренного вегетативного размножения оздоровленного посадочного материала актинидии и лимонника китайского. Задачи исследований:

1. отработать методику диагностики вирусов с использованием имму-ноферментного анализа, изучить видовой состав и распространенность вирусов и обосновать необходимость оздоровления посадочного материала актинидии и лимонника;

2. для получения оздоровленных клонов на закладку маточников актинидии и лимонника разработать систему размножения in vitro с помощью эффективных питательных сред, стимуляторов роста и их концентраций;

3. усовершенствовать технологию размножения изучаемых культур зелёными черенками с применением перспективных регуляторов роста и магнитно-импульсного воздействия. Научная новизна результатов исследований

Впервые разработана система ускоренного вегетативного размножения оздоровленного посадочного материала актинидии и лимонника, включающая в себя следующие этапы: диагностику вирусной инфекции, оздоровление и размножение оздоровленного посадочного материала актинидии и лимонника с применением перспективных регуляторов роста и магнитно-импульсного воздействия. Показана высокая эффективность применения препаратов циркон, эпин-экстра и рибав-экстра для стимуляции ризогепеза актинидии и лимонника, а для зелёного черенкования впервые предложено использование настойки лимонника (патент РФ № 2309591 "Способ обработки зелёных черепков садовых культур"). Практическая значимость и реализация результатов исследований

Предложена новая система производства оздоровленного посадочного материала актинидии и лимонника на безвируспой основе для пигомниководства и селекции. Данная система позволяет выявть наличие вирусов и получить безвирусные базисные клоны с использованием метода клоналыюго микроразмпожения и последующего зелёного черенкования их в теплице с искусственным туманообразованием. При этом увеличивается рентабельность производства посадочного материала лимонника на 309,1 %, актинидии - на 49,9%.

За годы исследований получено 5 тысяч безвирусных растений актинидии и лимонника. В СХПК "Племзавод Майский" Вологодской области проведено испытание разработанных элементов технологии зелёного черенкования актинидии и лимонника с применением регуляторов роста в оптимальных концентрациях на площади 100 м~, что позволило повысить экономический эффект на 29 %. Лабораторией агротехнической оценки ФГНУ "Росинформагротех" испытано воздействие магнитпо-импульспой обработки на зелёные черенки ак

2 2 тинидии и лимонника на площади 200 м , где в среднем получено 150 шт./м укорененных черенков. В ГНУ ВСТИСП Россельхозакадемии заложены маточ

-у ные насаждения актинидии и лимонника на площади 100 м". Основные положения, выставляемые па защиту:

1. Обоснование необходимости оздоровления растений актинидии и лимонника от вирусной инфекции;

2. Система размножения in vitro с применением эффективных питательных сред;

3. Технологические приемы ускоренного размножения оздоровленного посадочного материала актинидии и лимонника китайского методом зелёного черенкования.

Предмет исследования:

Предметом исследования является зависимость распространённости вирусов от местоположения насаждений, видового состава и сортовых особенностей актинидии и лимонника китайского, эффективности диагностики вирусов от срока тестирования и вида образца. Также предметом исследований являются особенности регенерации растений in vitro и ризогенеза у зелёных черенков в зависимости от регуляторов роста и их концентрации, срока изоляции эксплан-тов (высадки черенков); видовых и сортовых особенностей актинидии и лимонника; числа импульсов при магнишо-импульсной обработке (МИО) зелёных черенков.

Заключение Диссертация по теме "Плодоводство, виноградарство", Туть, Евгения Александровна

117 ВЫВОДЫ

1. Отработана методика диагностики вирусов с использованием ИФА. В качестве тест-образцов эффективно отбирать листья в период с апреля по июль. В других органах концентрация большинства вирусов была ниже по сравнению с листьями. В тканях листьев лимонника химерного происхождения наибольшая концентрация вирусов отмечена в жёлто-белых сегментах.

2. Методом ИФА выявлено 10 наиболее распространенных видов вирусов в насаждениях актинидии и лимонника Москвы и Московской области и обоснована необходимость оздоровления посадочного материала данных культур от вирусной инфекции. Установлена заражённость коллекционных насаждений изученных культур непо-, садва-, илар-, кукумо- и тобамови-русами. Наиболее часто на актинидии встречались неповирусы кольцевой пятнистости малины, скручивания листьев черешни, мозаики резухи и иларвирусы мозаики яблони и некротической кольцевой пятнистости косточковых, а на лимоннике китайском - неповирусы скручивания листьев черешни, мозаики резухи и кольцевой пятнистости малины. Зараженность вирусами актинидии аргута достигает 40 %, коломикта — 67 %, полигама — 80 %, лимонника китайского - 40 %.

3. Усовершенствована методика получения оздоровленных клонов актинидии и лимонника in vitro. Установлено, что регенерационная способность экс-плантов актинидии и лимонника на этапе введения в культуру зависит от сроков изоляции, минерального и гормонального состава питательной среды и биологических особенностей культуры (вида, сорта, а для актинидии - и пола). Наибольшая приживаемость (50-100 %) меристематических верхушек и более активные ростовые процессы отмечаются в фазы глубокого и вынужденного покоя маточных растений.

4. Для развития эксплантов актинидии наиболее благоприятен минеральный состав питательной среды по Ли и де Фоссарду. Наибольшая приживаемость меристем актинидии коломикта и полигама обеспечивается при применении ти-диазурона в концентрации 0,05-0,5 мг/л, актинидии аргута—2-iP 5 мг/л. Лучшая приживаемость меристематических верхушек лимонника отмечается на питательной среде с зеатином (0,1 мг/л) или 2-iP (1 мг/л). Настойка лимонника улучшает развитие эксплаитов во время второго и последующих субкультивирований.

5. Усовершенствованы методы ускоренного размножения и разработаны новые элементы в технологии производства оздоровленного посадочного материала трёх видов актинидии (коломикты, аргуты и полигамы) и лимонника китайского. Укореняемость и развитие зелёных черенков актинидии зависят от вида культуры и срока заготовки черенков, вида и концентрации регулятора роста. Укореняемость черенков и прирост побегов возрастают при заготовке их в фазу бутонизации и снижаются при высадке в фазу налива плодов. Приросты наибольшей длины формируют растения актинидии полигама, превосходя по этому показателю в 5-7 раз актинидию коломикта.

6. Укореняемость черенков актинидии коломикта мужской формы возрастает при использовании циркона, рибава-экстра, эпина-экстра, салициловой кислоты, ИМК. Черенки актинидии аргута формируют более развитую корневую систему при использовании рибава-экстра (0,1 и 0,5 мл/л) или ИМК (25 мг/л), актинидии полигама - эпина-экстра (0,1 и 0,5 мл/л).

У лимонника китайского наибольшая укореняемость (64-73 %) обеспечивается намачиванием черенков в растворах рибава-экстра (2 мл/л), циркона (2 мл/л) или настойки лимонника (3 мл/л), а наилучшее развитие корней -при совместном применении рибава-экстра и ИМК.

7. Магнитно-импульсная обработка зелёных черенков актинидии аргута и коломикта не оказывает положительного действия на их ризогенез, а на актинидии полигама стимулирует увеличение прироста в 1,9 раза, числа корней в 1,7-1,8 раза и их длины в 2,2-2,7 раза.

Магнитно-импульсная обработка черенков лимонника при некоторых режимах (10-60 импульсов) улучшает развитие корневой системы.

8. Разработанная технология получения оздоровленных саженцев актинидии и лимонника китайского методом зелёного черенкования способствует увеличению рентабельности производства саженцев лимонника китайского на 309,1 %, актинидии — на 49,9 % и снижению затрат труда соответственно на 321 % и 11,5 % по сравнению с традиционной технологией.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПРАКТИЧЕСКОМУ ИСПОЛЬЗОВАНИЮ

1. Разработанную систему производства оздоровленного посадочного материала актинидии и лимонника китайского рекомендуется использовать с включением следующих этапов: диагностики вирусной инфекции, оздоровления с использованием метода культуры меристематических верхушек, получения клонов для закладки маточников и их ускоренного размножения путем зеленого черенкования в условиях туманообразующей установки.

2. Для диагностики вирусной инфекции методом ИФА рекомендуется в качестве образцов отбирать листья в сроки с апреля по июль.

3. При получении оздоровленного посадочного материала методом клонального микроразмножения изоляцию меристематических верхушек следует проводить в фазы глубокого или вынужденного покоя и высаживать экспланты на питательную среду Ли и де Фоссарда, дополненную тидиазуроном в концентрации 0,05 - 0,5 мг/л или 2-iP в концентрации 5 мг/л для актинидии; зеатином в концентрации 0,1 мг/л, 2-iP в концентрации 1 мг/л, настойкой семян лимонника 13 мл/л - для лимонника китайского.

4. Зеленые черенки для укоренения в условиях туманообразующей установки необходимо заготавливать в фазу начала завязывания плодов. Для повышения укореняемости зелёных черенков актинидии аргута следует применять регулятор роста рибав-экстра (0,1 или 0,5 мл/л). С целью улучшения развития корневой и надземной систем зелёные черенки актинидии аргута рекомендуется обрабатывать в водных растворах циркона (1,0 мл/л), салициловой кислоты (10,0

- 25,0 мг/л); черенки актинидии полигама — в растворе эпина-экстра (0,1-0,5 мл/л). Зелёные черенки актинидии коломикта мужской формы следует обрабатывать в растворах циркона (0,1 мл/л) или эпина-экстра (1 мл/л).

Зеленые черенки лимонника китайского перед высадкой на укоренение рекомендуется намачивать в водном растворе настойки лимонника (3,0 мл/л), циркона (2 мл/л) или рибава-экстра (2 мл/л) с экспозицией 16-24 ч.

5. Для улучшения развития корневой системы у зеленых черенков лимонника перед их высадкой рекомендуется осуществлять воздействие магнитно-импульсной обработкой с числом импульсов 10 — 60, а для актинидии полигама

- 40 или 100 импульсов.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата сельскохозяйственных наук, Туть, Евгения Александровна, Москва

1. Абраменко, Н.М. Разработка методов получения исходного безвирусного материала земляники / Н.М. Абраменко, И.Г. Цуркан // Культура земляники в СССР: Докл. симп. М., 1972.- С. 382-384.

2. Атабеков, И.Г. Методические рекомендации по применению иммунофер-ментного анализа для диагностики вирусов картофеля / И.Г. Атабеков, А.Ф. Бобкова, Н.М. Наувлишвили и другие // М., 1985, 20 с.

3. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР. / М.-1976.- С. 359.

4. Атрощенко, Г.П. Оздоровление посадочного материала земляники / Г.П. Атрощенко, Н.Г. Соколова, Е.В. Михайлова // Сб. науч. тр. «Защита сельскохозяйственных культур от вредителей, болезней и сорняков» Л.: 1991.- С. 75-78.

5. Атрощенко, Г.П. Рекомендации по производству оздоровленного посадочного материала земляники / Г.П. Атрощенко, В.В. Костицын, А.Л. Надешоев // С.Петербург: 2001.-15 с.

6. Буллах, Е.М. Грибы источник жизненной силы / Е.М. Буллах // Владивосток: «Русский остров», 2001- 64 с.

7. Вердеревская, Т.Д. Вирусные и микоплазменные заболевания плодовых культур и винограда / Т.Д. Вердеревская, В.Г. Маринеску // Кишинев: Штиинца, 1985.-С.311.

8. Вечернина, Н.А. Регенерация растений актинидии китайской из каллусных культур листьев / Н.А. Вечернина, О.К. Таварткиладзе, В.В Кутубидзе // Субтропические культуры.-№5.- 1990.-С. 133-142.

9. Вигоров, Л.И. Практикум по физиологии древесных растений / Л.И. Вигоров //М.-Высшая школа.-1961.-148 с.

10. Вигоров, Л.И. Сад лечебных культур /Л.И. Вигоров // Садоводство.- 1967.-№ 12.- С. 34-35.

11. Власов, Ю.И. Вирусные и микоплазменные болезни растений / Ю.И. Власов // М.: Колос, 1992.- 207 с.

12. Высоцкий, В.А. Применение методов культуры изолированных тканей и органов для размножения плодовых и ягодных растений /

13. B.А. Высоцкий // Ягодоводство в Нечерноземье: Сб. науч. тр. НИ-ЗИСНП. М., 1982.- С. 30-41.

14. Высоцкий, В.А. Культура изолированных тканей и органов плодовых растений: оздоровление и клональное микроразмножение / В.А. Высоцкий //

15. C.- х. биология. 1983.- № 7.- С. 42-47.

16. Высоцкий, В.А. Клональное микроразмножение малины / В.А. Высоцкий, Н.В. Герасимова // Информационный листок Мособл ЦНТИ.- 1987 — 3 с.

17. Высоцкий, В.А. Введение в культуру дикорастущих видов актинидии, способы размножения in virto / В.А. Высоцкий, Л.В. Бартенёва, М.Т. Упадышев // Сб. науч. Трудов ВНИИ сад-ва им. И. В. Мичурина.-Мичуринск,- 1990.- Вып. 57- С. 39-40.

18. Высоцкий, В.А. О генетической стабильности при клональном микроразмножении плодовых и ягодных культур / В.А. Высоцкий // е.- х. биология. 1995.-№5,- С. 57-63.

19. Голиадзе, Ш.К. Изменчивость биохимических показателей при по-семейственной селекции актинидии / Ш.К. Голиадзе, Г.П. Сарджвеладзе // Субтропические культуры —№ 2 — 1990.- С. 140-142.

20. Губанов, И.А. Дикорастущие полезные растения СССР / И.А. Губанов, И.Л. Крылова, В.Л. Тихонова // М.-Изд-во «Мысль»-1976.- С. 356-358.

21. Гукова, М.М. К вопросу механизма действия гетероауксина в растениях / М.М. Гукова , В.В. Фаустов // Докл. ТСХА.- М., 1961. Вып. 70.- С 31-42.

22. Гуськов, А.В. Метаболизм ауксинов в растениях и его регуляция /А.В.Гуськов.- М.: ВИНИТИ, 1991.- Серия «Физиология растений», т. 8.- 156 с.

23. Дёрфлинг, К. Гормоны растений / К. Дёрфлинг // М.- «Мир».- 1985,-С. 177-178.

24. Дорофеев, П.И. Развитие третичной флоры СССР по данным палео-карпологических исследований / П.И. Дорофеев // Автореф. диссер. докт. биол. наук.- Л,- 1964.- 43 с.

25. Доспехов, Б.А. Методика полевого опыта (с основами статистической обработки результатов исследований) / Б.А. Доспехов // изд. 5 дополненное и переработанное.- М. Агропромиздат.- 1985.- 351 с.

26. Дрягина, И.В. Радиация в селекции плодовых и цветочно-декоративных культур. / И.В. Дерягина // М: Россельхозиздат,1974 — 136 с.

27. Ермаков, Б.С. Лесные растения в нашем саду / Б.С. Ермаков, Т.И. Артамонов // Лесная промышленость.-1993.-147 с.

28. Келдыш, М.А. Болезни нетрадиционных культур / М.А. Келдыш, О.Н. Червякова // Защита и карантин растений — 1996. № 8 — С. 25.

29. Келдыш, М.А. Вирусные и микоплазменные болезни древесных растений / М.А. Келдыш, Ю.И. Помазков // М.- Наука.- 1985 133 с.

30. Козак, Н.В. Итоги интродукции актинидии в Московском отделении ВИР / Н.В. Козак //Тезисы докл. П съезд ВОШС,- Санкт-Петербург: ВИР.- 2000.- С. 316-317.

31. Колбасина, Э.И. Лесные незнакомцы в нашем саду / Э.И. Колбасина, М.Н. Плеханова, А.С. Эйдельнант // М.- Московский рабочий.- 1984.- С. 1-55.

32. Колбасина, Э.И. Выращивание посадочного материала актинидии / Э.И. Колбасина // Информационный листок — Люберцы МО.- 1991.- С. 1-2.

33. Колбасина, Э.И. Новые нетрадиционные культуры сада — источники лечебно-диетических продуктов питания / Э.И. Колбасина // Нетрадиционные садовые культуры. Мичуринск 1994- С. 46-49.

34. Колбасина, Э.И. Актинидия Actinidia и лимонник Schizandra в не черноземной зоне России. / Э.И. Колбасина // Автореферат докт. дисс.- С.Петербург.-1996.-Вир.-37 с.

35. Колбасина, Э.И. Актинидии и лимонник в России (биология, интродукция, селекция) / Э.И. Колбасина // М.- Россельхозакадемия.- 2000.-. 246 с.

36. Колбасина, Э.И. Актинидия и лимонник / Э.И. Колбасина // М.- изд. Дом МСП- 2005.- 64 с. ил.

37. Клоконос, Н.П. Размножение малины методом культуры ткани / Н.П. Клоконос, И.И. Соловьёва // Вестник е.- х. науки Казахстана. 1986. - № 9. с. 44-47.

38. Костырко, Д.Р. Интродукция лиан в Донбассе и перспективы их использования в декоративном садоводстве и народном хозяйстве. / ДР. Костырко // Авто-реф. на соискание ученой степени доктора биол. наук дисс Кишинев.- 1987 - С.51.

39. Кочетова, Н.И. Особенности регенерации растений крыжовника в условиях in vitro / Н.И. Кочетова, Л.В. Алешкевич, Ю.В. Кочетов // Вестник с.-х. науки. -1981.- № 2.- С. 80-82.

40. Курындин, И.И. Плодоводство / И.И. Курындин, В.В. Малинковский, А.Н. Веньяминов, ИВ. Белохонов // М Сельхозизд. - 1954.- 592 е.- табл.- рис. 279.

41. Лекарственные свойства видов растений флоры Дальнего Востока.-Владивосток, 1992.-Вып. 1.-С. 13-18.

42. Малеванная, Н.Н. Циркон на службе растений / Н.Н. Малеванная // Гавриш.- № 1.- 2001.-№ 1.- С. 21.

43. Меженский, В.Н. Введения в промышленное производства актинидии аргута и лимонника китайского / В.Н. Меженский, Л.А. Меженская // Плодоводство." Т.- 14.- Ч. 2,- 2002.- С. 163-167.

44. Мельников, Н.А. Введение в культуру лимонника китайского / Н.А. Мельников // Лекарственные растения (возделывание). Сборник науч. науч. тр. отд. Растениеводства.- ВИЛАР М.- 1968.-Т. 13.- С 126-137.

45. Мельников, Н.А. Биологические особенности лимонника китайского при введении в культуру в Европейской части СССР/ Н.А. Мельников // Автореферат на соискание уч. степ. канд. биол. наук.- М., 1968 а.- 23 с.

46. Мельников, Н.А. Особенности вегетативного размножения лимонника китайского/ Н.А. Мельников // Сб. науч. работ «Интродукция новых лекарственных растений».- М.: ВИЛР, 1973.- В. 5.- С. 53-69.

47. Мерцалова, О.С. Механическая передача одного из вирусов яблони / О.С. Мерцалова // Материалы науч. конференции молодых ученых.- Л., 1967.-С. 24-25.

48. Метлицкая, К.В. К распространению и диагностике вирусных болезней косточковых культур в Нечерноземье /К.В. Метлицкая // Актуальные проблемы развития питомниководства и научное обеспечение отрасли Тез. докладов Всеросс. совещания - М. 1993-С.56-57.

49. Методические указания по экспресс-диагностике вирусов на ягодных культурах / Ю.Н. Приходько, О.Ю. Суркова, М.Т. Упадышев, М.П. Лапинская.-М.; ВСТИСП,- 2002.- 36 с.

50. Методические указания по клональному микроразмножению черной и красной смородины / Ф.Я. Поликарпова, В.А. Высоцкий, З.Т. Тарашвили.- М: НИЗИСНП,- 1986.- тираж 600 экз.- 16 с.

51. Методические указания. Производство и сертификация посадочного материала ягодных культур и винограда в России. Контроль качества. Ч. I. Ягодные культуры / под редакцией И.М. Куликова // М.: ВСТИСП.- 2005.- 156 е.- с илл.

52. Мичурин, И.В. Сочинения в четырех томах / И.В. Мичурин // М.-гос. изд. с/х литературы 1948 — изд. 2- т. 2- с. 281—290.

53. Мишина, А.П. Мозаика и розеточность яблони (этиология, патогенез) / А.П. Мишина // Автореф. дисс. канд. с/х. наук. М., 1974 - 22с.

54. Никелл, Л. Дж. Регуляторы роста растений: применение в сельском хозяйстве / Л. Дж. Никелл // М.- «Колос».- 1984.- С. 110-111.

55. Ольшевская, В.Т. Стимуляция семян кормовых культур слабыми постоянными магнитными полями / В.Т. Ольшевская, Р.Х. Юсупов // 75 лет Тат. НИИСХ: Матер, науч.-практ. конф., Казань, 1995.- Тез. докл. Казань.-1996.-С. 210-211.

56. Осипенко, Г.М. Селекция плодовых и ягодных культур / Г.М. Осипенко, В.Ф. Корепанова, Э.И. Суламов // Сб. науч. Тр. Всеросс. НИИ цветоводства и субтропических культур: Вып. 38. 1994. - С. 227-240.

57. Острейко, С.А. О генетической и фенотипической стабильности при культуре растений in vitro / С.А. Острейко, Э.М. Дроздовский // Плодоовощное хозяйство.- 1987.-№12,- С. 30-31.

58. Панкова, И.А. «Деревья и кустарники СССР / И.А. Панкова, С.Д. Мовчан // II ч,- 1954 г.- С. 356-359.

59. Петерсон, Л.П. Вирусные болезни тюльпанов в Латвийской ССР / Л.П. Петерсон, Я.Р. Игнаш, А.А. Путнаэргле // Труды Латвийской с.-х. акад.— 1974 Вып.82. - С.42-52.

60. Петрова, АД. Фенольные соединения при оздоровлении и размножении садовых культур / АД. Петрова // Автореферат дисс. на соискание учёной степени,кандидата с. -х. наук-2001 г.-19 с.

61. Плеханова, М.Н. Актинидия, лимонник, жимолость /МН. Плеханова // Л-Агропромиздат 1990 - 87 с.

62. Подкопаев, А.А. Размножение актинидии зелёными черенками / А.А. Подко-паев // Лесное хозяйство №7.-1987 - С. 49.

63. Поликарпова, Ф. Я. Размножение плодовых и ягодных культур зелёными черенками./ФЯ. Поликарпова//М., "Агропомиздат", 1990.-96 с.

64. Поликарпова, ФЯ. Выращивание материала зеленым черенкованием / ФЛ. Поликарпова, В.В. Пилюгина//М.: Росагропромиздат. —1991.—96 с.

65. Попов, Ю.Г. Получение растений малины и земляники из верхушки побегов в культуре in vitro / Ю.Г. Попов, В.Г. Трушечкин // Культура изолированных тканей, органов и клеток растений: Тр. 1 Всес. конф. -М., 1970.- С. 315-319.

66. Прозина, М.Н. Ботаническая микротехника. / М.Н. Прозина // М.-"Высшая школа".- I960.- С. 23-26.

67. Рогозина, Т.А. Микроклональное размножение актинидии / Т.А. Рогозина, В.М. Колесниченко // Проблемы интродукции и экологии Центрального Черноземья.- Воронеж, 1997.- С. 131 -133.

68. Рункова, JI.B. Действие циркона на трудноукореняемые растения / JI.B. Рункова, М.Н. Мельникова, B.C. Александрова // тез. докл. 2-ой межд. конф. «Регуляторы роста, развития и продуктивности растений».- Минск, 2001.- С 218.

69. Самаладас, Т.Х. Культура киви — актинидия / Т.Х. Самаладас // Сухуми: Алашара- 1991.-79 с.

70. Самусь, В.А. Состояние и пути развития белорусского плодоводства // Плодоводство: Науч. тр./ В.А. Самусь // Беларус. НИИ плодоводства.-Самохваловичи, 2000.-Т. 13.-С 19-25.

71. Самусь, В.А., Методика микроразмножения подвоев яблони in vitro / В.А. Самусь, С.Э. Семенас, Н.В. Кухарчик, А.А. Змушко. / Плодоводство.- Беларусь.- Белсад.- Самохваловичи Т. 18.- Ч. 2.- 2006.- С. 146-156

72. Смит, К. Вирусные болезни растений / К. Смит, (перевод с англ. Г.М. Раз-вязкиной под ред. проф.К.С. Сухова) // изд. Иностр. литература -М. - I960.- 591 с. - 94 рис.- библиогр. С. 539-575.

73. Соколов, СЛ. Деревья и кустарники СССР, Ш ч. / СЛ. Соколов // Акад. наук СССР.-1954.- С. 101-102.

74. Сократова, Э.Г. Облепиха в Бурятии / Э.Г. Сократова, В.В. Фаустов // Улан-Удэ, Бурят, кн. изд-во.-1974 52 с.

75. Стрелец, В.Д. Лимонник / В.Д. Стрелец // Природа и человек.- 1985.- №6.-С.72.

76. Стрелец, В.Д. Актинидия / В.Д. Стрелец // Природа и человек 1987 - №3-С.72.

77. Тарасенко, М.Т. Новая технология размножения растений зелеными черенками / М.Т. Тарасенко, Б.С. Ермаков, В.В. Фаустов, З.А. Прохорова // М.- ТСХА -1968.- 67 с.

78. Тарасенко, М.Т. Выращивание саженцев облепихи методом зеленого черенкования в Нечерноземной зоне / М.Т. Тарасенко, В.В. Фаустов, В.И. Авдеев // Известия ТСХА.-1979.- Вып. 3.- С 104-116.

79. Тарасенко, М.Т. Размножение вечнозеленых субтропических растений на основе современной технологии зеленого черенкования/ М.Т. Тарасенко, В.В. Ульянов, В.В. Фаустов // Известия ТСХА.- 1982.- Вып. 3.- С 90-101.

80. Технологический процесс получения безвируснош посадочного материала плодовых и ягодных культур // Методические указания М - ВСТИСП - 2001 - С. 36.

81. Тодадзе, Э.М. Актинидия / Э.М. Тодадзе // Субтропические культуры — 1989.- № 5.- С. 100-103.- Табл. 2.- Рис. 2.

82. Трушечкин, В.Г. Клональное микроразмножение плодовых и ягодных культур / В.Г. Трушечкин, В.А. Высоцкий // Плодоовощное хозяйство — 1985.- №1.- С. 43-46

83. Турецкая, Р.Х. Возможная роль фенольных соединений в росте и ризогенезе черенков / Р.Х. Турецкая, А.В. Гуськов, В. Блайст, Э.М. Коф,

84. B.И. Кефели, М. Кутачек // Физиология растений .- 1976.- т.23.- вып.4.1. C.760-764.

85. Упадышев, М.Т. Рибав-экстра — перспективный препарат при зелёном черенковании / М.Т. Упадышев, Г.Ю. Упадышева // Садоводство и виноградарство.-2006.-№6. С. 14-16.

86. Урбах, В.Ю. Математическая статистика для биологов и медиков /В.Ю. Урбах // М.- АН СССР.- 1963.- 63 с.

87. Учебное пособие «Клональное микроразмножение плодовых и ягодных культур» / Н.М. Кругл ов, О.В. Матушкина, Р.Г. Ноздрачёва, И.Н. Пропина, Н.И. Туровская.- Воронеж 2003.- тираж 200экз.- 80с.

88. Фаустов, В.В. О роли белковых синтезов при укоренении зеленых черенков вишни / В.В. Фаустов // Докл. ВАСХНИЛ.- М.- 1969.- № 28.- С 21-23.

89. Фаустов, В.В. Ускоренное размножение актинидии коломикта зелёными черенками / В.В. Фаустов, Ю.М. Сизенко, С.Н. Агафонова, Н.В. Кублицкая // М. Доклады ТСХА.- 1979.- Вып. 251.- С. 81-87.- Библ. 6.-Табл. З.-Рис. 2.

90. Фаустов, В.В. Влияние листьев и почек на развитие придаточных корней у черенков садовых культур / В.В. Фаустов, В.В. Ульянов // Прогрессивные технологии в плодоводстве и виноградарстве.- М.- ТСХА.- 1982.- С.3-12.

91. Фаустов, В.В. Закономерности формирования придаточных корней зелёными черенками садовых культур / В.В. Фаустов, П.Н. Орлов // Проблемы вегетативного размножения в садоводстве Сб. науч. тр. МСХА им. К.А. Тимирязева —М.-ТСХА,- 1985.- С. 3-21.

92. Фаустов, В.В. Биологические основы технологии зеленого черенкования / В.В. Фаустов // Автореф. на соиск. учен. степ. докт. е.- х. наук -М., 1991.- 35 с.

93. Фардзинова, И.М. Питательная среда для микроразмножения груши / И.М. Фардзинова // Патент РФ № 2141524, МПК С 12 №5/04, А 01 Н 4/00 / бюл. № 32.-20.11.1999.

94. Фруентов, Н.К. Лекарственные растения Дальнего Востока / Н.К. Фру-ентов // 3-е изд., расшир. и доп. Хабаровск, 1987.- 350 с.

95. Хромова, Т.В. Размножение лимонника китайского весенними черенками / Т.В. Хромова // Бюллетень ГЪС АН СССР.- 1988,- В. 150.- С. 49-53.

96. Царькова, Т.Ф. Хлорогеновая кислота при зеленом черенковании / Т.Ф. Царькова, С.А. Острейко // Плодоовощное хозяйство- 1986.- №3.- С.27-28.

97. Цубера, Л.В. Хемотерапия вирусов плодовых и ягодных растений в комбинации с культурой изолированных апексов / Л.В. Цубера // Автореферат дисс., на соискание учёной степени кандидата с/х. наук 1998 г.— 22 с.

98. Щелкунова, С.Е. Изучение условий, способствующих регенерации растений малины из меристематических верхушек / С.Е. Щелкунова // Автореф. дисс. канд. биол. наук. -М., 1973. 31 с.

99. Щелкунова, C.E. Сезонная периодичность регенерации растений из меристематических верхушек малины / С.Е. Щелкунова // Физиология растений.-1974.-Т.21.-В. 1.-С. 69-74.

100. Шайтан, И.М. Интродукция и селекция южных и новых плодовых растений / Шайтан, И.М., Мороз, П.А., Клименко, С.В. // Киев.- Наук.- Думка- 1983214 с.

101. Шевелуха, B.C. Рост растений и его регуляция в онтогенезе / B.C. Шеве-луха//М.: 1998 г.- 594 с.

102. Эзау, К. Анатомия растений / К. Эзау // М.- Мир.- 1969.- С. 238-239.

103. Albers, М. Untersuchungen zur Gewebekultur von Geholzen / Albers, M., Denissen, C., De Klerk, G. J. // TASPO. Gartenbaumag.- 1994.- J. 3.- № 12.- S. 56-58.

104. Bondok, A.Z. In vitro micropropagation of "Wardi Red" pomegranate (Punica granatum L.) / Bondok, A.Z., El-Agamy, S.Z., Gabr, M.F. // Edypt. J. Hort.- 1986.- V. 13.-№2.-P. 103-108.

105. Brossard-Chriqui, D. Comparison of morphogenetic ability in fertile of sterile stamens of Actinidia chinensis cultured in vitro / D. Brossard-Chriqui, В. K. Tripathi // Can. J. Bot. 1984.- 62. -S. 1940-1946.

106. Butemco, R.G. Kulturakletokrastenij /R.G. Butemco//Izd. Nauka-Moskva-1981.-S. 166.

107. Caciagli, P. Behaviour of kiwifruit plants (Actinidia deliciosa) in regard to virus infections / P. Caciagli, O. Lovisolo / Adv.Hort. Sci., 1.-1987 S. 11-14.

108. Casper, R. Serogical properties of prunus necrotic ringspot and apple mosaic isolates from rose / R. Casper // Phytopathology.- 1973.- 63.- P. 238-240.

109. Chalupa, V. In vitro propagation of some broad leaved forest trees / V. Chalupa // Commun. Inst. Forest. Czechseo. 1979. V. 11.- P. 159-170.

110. Clark, M. F. Characterization of the microplate method of enzyme — linked immunosorbent assay for the detection of plant viruses / M. F. Clark, A. N. Adams // J. Gen. Virol.- 1977.-V. 34.-№3.-P. 475-^85.

111. Converse, R.N. Virus disease of small fruits / R.N. Converse // USDA ARS Agriculturae Handbook. 1979. - 631. - 277 p.

112. Converse, R.H. Virus diseases of small friuts / R.H. Converse // US DA Agricultural Handbook. N 631. 1987. - 276 p.

113. Cown, Mc. ornamentals, shade trees, and conifers: ed.: / Mc. Cown, B.H. Woody, R.H. Zimmerman et al. // Tissue culture as a plant production system for horticulture crops; Martinus Nijhoff Publ., Dordrecht [Boston] Lancaster.- 1985.- P. 333343.

114. Czynczyk, A. Influence of micropropagation on the performance and qua-lite of P22 rootstock in mother plantation / A. Czynczyk, G. Hodun, P. Bielicki // J. Fruit ornamental Plant Res. 1994.- Vol. 2,№ 3,- P. 251-257).

115. Czynczyk, A. The polish sistem for the production of elite plants of po-mological material / A. Czynczyk // Agronomuas vestis (latlian journal of Agronomy) 2006.- № 9 LLU-P.10-15.

116. Dragoyski, K. Experience in establishing a scionwood in the central Balkan mountains in Bulgaria / K. Dragoyski, H. Dinkova, T. Stoyanova, P. Minkov, H. Kutin-kova / Agronomuas vestis (latvian journal of Agronomy) 2006.- № 9 LLU.- P.20-23.

117. Frazir, R.S.S. Evidence for the occurrence of the pathogenesis-related proteins in leaves of healthy tobacco during flowering / R.S.S. Frazir // Physiol. Plant. Pathol—1981.- Vol.14.-№ 1.-P.69.

118. Fridlund, P.R. Influence of apple green crinkle disease on the quality of Granny Smith apples / P.R. Fridlund, S.R. Drake // Plant Disease.- 1987.- Vol.71.-№7.- P.585-587.

119. Fuchs, E. Seroloqical detection of apple chlorotic leaf spot virus (CLSV) and apple stem grooving virus (SGV) in apple trees / E. Fuchs // Acta Phytopath. Acad. Sci. Hung.- 1980 a Vol.15 №1 - 4. - P.69 - 73.

120. Fuchs, E. Untersuchungen zum serologischen nachweis mechanisch ubertragbarer viren des Keronobstes / E. Fuchs // Tag.-Ber. Acad.Landwirtsch.-1980 6.-№184.-P.453-460.

121. Fulton, R.W. Mechanical transmission and properties of rose mosaic virus / R.W. Fulton // Phytopathology 1952.- № 42.- P.413-416.

122. Fulton, R.W. Purification and serology of rose mosaic virus / R.W. Fulton //Phytopathology.- 1967. Vol .57. - P. 1197-1201.

123. Fulton, R.W. Serology of viruses causing cherry necrotic ringspot, plum line pattern, rose mosaic. / R.W. Fulton // Phytopathology. 1968. - 58. - P.635-638.

124. Gui, Y. L. Studies on morphological differentiation of endosperm plant-lets of Chinese gooseberry In vitro / Y. L. Gui, X. J. Mu, T. Y. Xu // Acta bot. sin. 24, 1982. P. 216-221.

125. Hamdorf, G. Latente viren in Apfelsorten und Unterlagen / G. Hamdorf // Mitt. Biol. Bundesans Land und Forstwirtschuf. 1968 - №121. - P. 152 -154.

126. Hansen, A.J. Plant disease diagnosis present status and futhure prospects / A.J. Hansen, R.L. Wcick // Adv. Plant. Pathol. 1993 - Vol. 10 - P.65- 126.

127. Harada, H. In vitro organ culture of Actinidia chinensis PI. as a techique for vegetative multiplication / H. Harada // J. Hort. Sci. 1975.- 50.- S. 81-83.

128. Heinrich, C. SproPspitzenkultur eine aussichtsreiche Methode der In-vitro-Vermehrung von Pflanzen / C. Heinrich, H.I. Hahn // Biol. Rundsch.- 1984.- V. 22.- S. 87-98.

129. Hu, J. Evaluation of new antiviral agents (1. In vitro perspectives) / J. Hu, G. D. Hsiung // Antiviral Res.- 1989.- Vol. 11.- № 5/6.- P. 217-232.

130. Jippert, Benate. Anwendung der Jewebekulturtechnik in Pflanzen / Be-nate Jippert// Boil. Rolsch. -1972. -10. №6.- S. 382-388 (нем.).

131. Johnstone, G.R. Interaction of rootstocks, scion variety and virus complement on apple tree growth / G.R. Johnstone, W.D. Boucher // J. Hort. Sci. 1973 -Vol.48 -P.175- 179.

132. Jones, O.P. The culture of gooseberry shoot tips for eliminating virus / O.P. Jones, S.J. Vine // J.Hort.Sci.-1989.-Vol 43, № 3.-P.289-292.

133. Kalashjan, Y.A. Apple chlorotic leaf spot virus in affected tissues and the possibility of its detection by immune electron microscopy (IEM) / J.A. Kalashjan, Z.M. Lipartia // Acta Horticulturae. 1986. - №193. - P.311 - 317.

134. Kamenika, A. Indukcia organogenezy aktinidie viznacnej v pod-mienkach in virto / A. Kamenika, M. Rypak // Polnohospodarstvo.- R. 32.- № 9 — 1986.-P. 800-810.

135. Kerlan, C. Immunosorbent elektron microscopy for detektion apple chlorotic leaf spot and plum pox viruses / C. Kerlan, B. Mille, J. Dunez // Phytopathology. 1981. - Vol.71.-P.400-404.

136. Kerlan, C. Immunoelectron microscope for virus detection and virus strain identification / C. Kerlan, B. Mille, J. Dunez // Acta Hort.-1982. №130. - P. 173-178.

137. Kirkpatrick, H.C. A mechanically transmissible virus latent in apple / H.C. Kirkpatrick, R.C. Lindner // Phytppathology.-1964.-Vol.54.-P.229-232.

138. Klaas, L. The effect of different propagation methods on the yield and frutt mass of plums / L. Klaas, H. Janes, K. Kahu, E. Haak. // Agronomuas vestis (latvian journal of Agronomy).- 2006. № 9 LLU-P.45-48.

139. Kmitene, G. Anatomical structure of schisandra chinensis stem and leaf / G. Kmitene, O. Ragazinskiene // Botanica lithuanica 2003. Sci. 9. - № 3. - P. 229233.

140. Kviklys, D. Fruit tree nurseries in Lithuania: propagation and certification system / D. Kviklys // Agronomuas vestis (latvian journal of Agronomy).- 2006. № 9 LLU - P.52-57.

141. Lemoine, J. Les principales maladies de degenerescense du poirier et du pommier / J. Lemoine // Phytoma 1986.- №330.- P. 36-40.

142. Lenz, F. Certification scheme for fruit trees in cermany / F. Lenz, Chr. Lankes / Agronomuas vestis (latvian journal of Agronomy).- 2006. № 9 LLU -P.69-74.

143. Liskova, D. Niektore faktory ovplyvnujuce vyvin embryi smreka obyca-jneho in virto / D. Liskova, D. Kakonlova // Dni rastlinnej fyziologie IV.- Kosice.1986.-P. 182-183.

144. Lister, R.M. The purification, characterization and serology of filamentous apple viruses / R.M. Lister // Proceeding XIII th European Symp. Fruit Tree Virus Diseases, Bordeaux 1970 -P.365 - 371.

145. Lee E.C.M., Fossard R.A. Regeneration of Strawberry plants from tissue cultures // intern. Plant Prop. Soc. (Comb.Proc.) 1975. - V. 25. - P. 277-285.

146. Monette, P. L. Influence on size of culture vessels on in vitro proliferation of grape in liquid medium / P. L. Monette // PI. Cell Tiss. Organ Culture 2. -1983.- P. 327-332.

147. Monette, P.L.: Micropropagation of kiwifruit using nonaxenic shoot tips / P. L. Monette // Pl.Cell Tiss. Organ Culture 1986.- 6.- P. 73-82.

148. Monette, P. L. Organogenetsis and plantlet e regeneration followring in vitro cold storage of kiwifruit shoot tip cultures / P. L. Monette // Sci. Hort.- (Neth).—1987.-V. 131.-P. 101-106.

149. Mori, Kan-ichi Сёкубуцу-но кагаку тёсэцуб / Kan-ichi Mori // Chem.requla. plants. 1971.- 6. № 1.- P. 52-68.- (япон.).

150. Murant, A. CMJ/AAB / A. Murant // Descrip. of pi. Viruses, 1970. 6,16,3 8.

151. Murashige Т., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with to baco tissue cultures // Phyziol., Plantarum. 1962. - V. 15. - № 3 - P. 473 -497.

152. Murphy, F.A. Vims Taxonomy; 6 th Report of the International Commiftee on Taxonomy of Viruses / F.A. Murphy, C.M. Fauguet, D. H. Bishop, S.A. Ghabrial, A.W. Sarvis, G. P. Martelli, M.A. Mago, M. D. Summers // Arch. Virol. 1995 - suppl 10.

153. Nitsch, J.P. Haploiol plant from pollen groins / J.P. Nitsch, C. Nitsch // Science. 1969, - V.163. - № 3862. - P. 85-87.

154. Olivira, M.M Somatic embryogenesis in leaves and leaf derived protoplasts of Actinidia delicilosa var delicilosa. Hayward (Kiwifruit) / M.M Olivira, MS.S. Pais//Plant Cell Repts.- 1992.- 11.-№ 5-6.-P. 314-317.

155. Posnette, A.F. A preliminary report on strains of the apple mosaic / A.F. Posnette, R. Cropley //Rep. East Mailing Res. Sta. for. 1951 - 1952 - P.l28 - 130.

156. Posnette, A.F. Apple mosaic virus-host plants and strains / A.F. Posnette, R. Cropley // Phytopath. Mediterranea. 1963 - Vol.2 №3. - P. 100 - 103.

157. Predieri, S. Ranieri Rigenerazione "in vitro" da foglie di Aktinidia deli-ciosa cv. Haywerd / S. Predieri, B. Mezzetti, R. // Rev. Frutticolt. e ortofloricolt— 1988.-V. 50.- 11.-P. 69-72.

158. Rosati, P. Genetic stability of micropropagated loganberry plants / P. Rosati, D. Gaggioli // J. hortic. Sci.- 1986.- V. 61.- P. 31-41.

159. Sequeira, O.A. Recent work on the some sap transmissible viruses from apple. II Apple cucumber virus and E-36 virus / O.A. Sequeira // Zaztita Bilja 1965 -Vol.16-P.247-249.

160. Sequeira, O.A. Studies on a virus causing stem grooving and graft-union abnormalies in Virginia crab apple / O.A. Sequeira // Annal. appl. Biol. 1967 -Vol.60 №1.-P.59- 66.

161. Schade, C. Practiceskoe vyiavlenie virusa chloroticeskoj pjatnistostii lis-tev jablone (CLSV) pri pomosci lateks-testa / C. Schade, E. Fuchs // Tag-Ber Acad Landvirtasch-wiss. DDR. 1977 - №152. - P.37 - 41.

162. Skirvin, R. Sources and frequency of somaclonal variation / R. Slcirvin // J. Hort. Sci. 1994. V. 29.- P. 1232-1236.

163. Standard!, A. Micropagazi delF Actinidia chinensis PI. mediante colture 'in vitro' di actur meristematici / A. Standardi // Frutticoltura, 1981. Vol. 15.- P. 23-27.

164. Standardi, A. Indagini sulla micropropagazione dell' Actinidia. Radi-cazione ed ambientamento / A. Standardi, F. Catalano // Com. present al II. Incontro

165. Frutticolo SOI sull' Actinidia, Udine.- 12-13 th Okt.- 1983 a.- S. 533-544.

166. Standardi, A. La micropropagazlone mella moltiplicazione dell Actinidia / A. Standardi // Frutticoltura.- 1983 6.- 45.- S. 17-22.

167. Standardi, A. Tissue culture propagation of kiwifruit / A. Standardi, F. Catalano // Combined Proceadings, International Plant Propagators'.- Society 34.1985.- S. 236-243.

168. Somer, H. E. Organogenesis in Woody angiosperms. Applications to vegetative propagation / H. E. Somer // Bull. Soc. Bot. Fr., 130, actual, bot., 1983,2, 79-85.

169. Sotiropoulos, Th.E. The effect of toxic boron concentrations on shoot proliferation of in vitro kiwifruit shoot tip cultures / Th.E. Sotiropoulos, I.N. Therios, K.N. Dimassi // Adv.- Hort.- Sci. 12- 1998.- S. 196-200.

170. Torrance, L. Development in serological methods to detect and identify plant viruses / L. Torrance // Plant Cell. Tissue and Organ Culture. 1998 - Vol.52 - P.27 - 32.

171. Tremaine, J.H. Viruses mechanically transmitted to herbaceous host from apple trees with mosaic Sygmptoms / J.H. Tremaine, R.S. Willison, W.R. Allen // Phytopath. Mediterranea. 1963 - Vol.2.- №3. - P.92 - 95.

172. Voller, A. The detection of viruses by enzyme-linked immunosorbent assay / A. Voller, A. Barlett, D.E. Bidwell, M.F. Clark, A.N. Adams // J. Gen. Virol. -1976.-Vol. 33.-P. 165-167.

173. Wang, J.X. Propagation of Actinidia chinensis by tissue culture / J.X. Wang, S.Z. Li, E. Y. Ren // Liaoning Agricult. Sci. 1982.- 1.- P. 32-34.

174. Webster, C.A. Micropropagation of the apple rootstocks M9: effect of sustained subculture on apparent rejuvenation in vitro / C.A. Webster, O.P. Jones // J. Hort. Sci.- 1989,- № 64.- P. 421-428.

175. Wessebs, E. In vitro propagation of Actinidia chinensis / E. Wessebs, D.D. Nel, O.F. Staden // PI. cultivar Hayward, Decid. Fruit Grow. № 34.- 1984.- P. 453-457.

176. Zhand, Y. J., Plant regeneration from in vitro-cultured seedlind leaf protoplasts of actinidia eriantha Benth. / Y. J. Zhand, Y. Qu. Qian // Plant cell Repts-1998.-№ 10.-P. 819-821.