Совершенствование технологии размножения редких садовых растений в культуре in vitro и оценка их потенциала устойчивости к абиотическим стрессорам

Шорников, Денис Геннадьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Совершенствование технологии размножения редких садовых растений в культуре in vitro и оценка их потенциала устойчивости к абиотическим стрессорам
ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Автореферат диссертации по теме "Совершенствование технологии размножения редких садовых растений в культуре in vitro и оценка их потенциала устойчивости к абиотическим стрессорам"

На правах рукописи

□03453861

Шорников Денис Геннадьевич

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ РАЗМНОЖЕНИЯ РЕДКИХ САДОВЫХ РАСТЕНИЙ В КУЛЬТУРЕ IN VITRO И ОЦЕНКА ИХ ПОТЕНЦИАЛА УСТОЙЧИВОСТИ К АБИОТИЧЕСКИМ СТРЕССОРАМ

Специальность 06.01.05 - селекция и семеноводство

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

Мичуринск-наукоград РФ, 2008

003453861

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и селекции плодовых растений им. И.В. Мичурина Россельхозакадемии (ГНУ ВНИИГиСПР им. И.В. Мичурина).

Научные руководители: академик РАСХН,

доктор сельскохозяйственных наук, профессор Савельев Николай Иванович

кандидат биологических наук, Тюленев Виктор Михайлович

Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук, профессор

Верзилин Александр Васильевич

кандидат сельскохозяйственных наук Минаев Вадим Александрович

Ведущая организация: ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт садоводства им. И.В. Мичурина

Защита диссертации состоится 2 декабря 2008 г. в 13 час. 30 мин. на заседании диссертационного совета Д 220.041.01 при Мичуринском государственном аграрном университете по адресу: 393760, Тамбовская обл., г. Мичуринск, ул. Интернациональная, 101.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Мичуринского государственного аграрного университета, с авторефератом диссертации - на официальном сайте университета http//www.mgau.ru

Автореферат разослан .a^t^J^г.2008 г.

Отзывы на автореферат в двух экземплярах, заверенные и скрепленные гербовой печатью, просим направлять ученому секретарю диссертационного совета.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 220.041.01 кандидат сельскохозяйственных наук

.М. Соломатин

Актуальность темы. Следствием активной селекционной работы с редкими культурами (актинидия, жимолость, лимонник) явилось интенсивное расширение сортимента, а так же создание новых перспективных форм и гибридов этих растений, требующих быстрого массового размножения и всестороннего изучения хозяйственно-значимых признаков. Важной задачей является так же оздоровление существующих сортов, потому что, несмотря на устойчивость к биотическим стрессорам актинидия и лимонник могут являться носителями ряда вирусов, представляющих опасность для других плодовых культур (Туть, Упадышев, 2005).

Для достижения этих целей необходимо активно использовать метод культивирования in vitro в производстве посадочного материала нетрадиционных растений, но одним из сдерживающих факторов широкого внедрения технологии микроразмножения является проблема видо- и сортоспецифичности ростовых реакций in vitro, и как следствие - недостаточная разработанность приемов микроююнирования ценных сортов и форм. В связи с этим возникает необходимость разработки и оптимизации технологии клонапьного микроразмножения нетрадиционных садовых культур, а так же изучения адаптивного потенциала полученных сортов с применением современных методов экспресс-диагностики.

Цель н задачи исследовании. Цель работы - разработка и совершенствование приемов клонапьного микроразмножения растений нетрадиционных садовых культур (жимолости, актииидии, лимонника и элеутерококка), а так же оценка и выделение генотипов, устойчивых к некоторым абиотическим стресс-факторам (перегрев, обезвоживание, воздействие хлорида натрия и солей тяжелых металлов). Задачи исследований:

• разработать приемы клонапьного микроразмножения in vitro лимонника и элеутерококка;

• оптимизировать отдельные этапы микроразмножения изучаемых объектов (введение в культуру, собственно микроразмножение, укоренение и адаптация растений, полученных in vitro)\

• оценить морфогенетический потенциал жимолости в культуре листовых дисков;

• дать оценку экономической эффек1ивности производства посадочного материала жимолости с применением технологии клонального микроразмножения;

• изучить жаро- и засухоустойчивость редких культур в лабораторных условиях;

• провести оценку устойчивости сортов и форм актинидии и жимолости к избыточному засолению;

• оценить уровень толерантности редких ягодных растений к воздействию катионов тяжелых металлов

• выделить генотипы, устойчивые к воздействию абиотических стрессоров

Научная новизна и практическая значимость результатов исследований. Впервые изучено влияние экзогенных регуляторов роста, различных источников углеводного питания и гидролизата казеина на рост и развитие микропобегов лимонника. Установлена биологическая эффективность препарата «Экстракт корня элеутерококка спиртовой» в качестве добавки к питательной среде микроразмножения элеутерококка и лимонника. Определены эффективные типы экзогенного ауксина для индукции морфогенеза в культуре соматических тканей жимолости.

Изучена устойчивость сортов актинидии, жимолости и лимонника к воздействию экстремальных положительных температур и дефициту влаги. Проведено исследование уровня толерантности данных культур к таким дестабилизирующим факто-

рам как избыток хлорида натрия и действие солей тяжелых металлов. Впервые установлен факт повышенной жароустойчивости хлорофиллсодержащих тканей двуцвег-ных листьев актинидии коломикта в зонах, экранируемых с адаксиальной стороны светлым пигментом. На примере актинидии коломикта показана эффективность применения метода лазерного анализа микроструктуры тканей для экспресс-диагностики адаптивного потенциала новых ягодных растений.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

I .Влияние экзогенных регуляторов роста, источников углеводного и минерального питания на рост и развитие микропобегов редких садовых растений на разных этапах культивирования. Влияние гидролизата казеина и препарата «Экстракт корня элеутерококка спиртовой на интенсивность пролиферации лимонника и элеутерококка in vitro.

2. Применение методов экспресс-диагностики для оценки устойчивости актинидии, жимолости и лимонника китайского к абиотическим стресс-факторам внешней среды.

Апробация результатов диссертации. Результаты исследований доложены на международной научно-практической конференции «Современные проблемы технологии производства, хранения, переработки и экспертизы качества сельскохозяйственной продукции» (Мичуринск. 26-28 февраля 2007 г.); межрегиональной научно-практической конференции «Современные проблемы и перспективы отечественного садоводства», посвященной 90-летию со дня рождения профессора Е.С. Черненко (Мичуринск, 19 декабря 2007 г.); VIII международной научно-методической конференции «Интродукция нетрадиционных и редких растений» (Мичуринск, 8-12 июня 2008г.); на заседаниях ученого совета ВНИИГиСПР им. И.В. Мичурина (2003-2007г.г.)

Реализация результатов исследований. Результаты исследований внедрены в лаборатории биотехнологии ВНИИГиСПР им. И.В. Мичурина. Разработаны методические рекомендации (в соавторстве) «Размножение садовых культур in vitro» (Мичуринск-наукоград РФ, 2008). Подана заявка на изобретение (в соавторстве) «Способ оценки реакции растений на токсические вещества», per. № 2007139421, приоритет от 23. 10. 2007

Публикация материалов исследований. По результатам исследований опубликовано 26 печатных работ, из них по теме диссертации — 23 работы, в том числе 2 в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ к защите кандидатских диссертаций («Садоводство и виноградарство», «Плодоводство и ягодоводство в России» Т. XVIII, 2008).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 193 листах компьютерного текста и состоит из введения, 9 глав, выводов, рекомендаций производству, списка используемой литературы из 210 наименований, из них на иностранных языках 41, и содержит 18 таблиц и 81 рисунок.

Материалы, методика и условия проведения исследований. Работу проводили на 10 сортах жимолости селекции ВНИИС им. И.В. Мичурина, Павловской опытной станции ВИР, НИИСС им. М.А. Лисавенко, ЮУНИИПОК; 12 сортах актинидии коломикта селекции МОВИР и Павловской опытной станции ВИР; I сорте актинидии пурпурной (Actinidiapurpurea), мужских и женских формах актинидии полигама и аргута, растениях лимонника китайского {Schizandra chirtensis) и элеутерококка колючего (Eleutherococcus senticosus).

При работе с культурой тканей мы пользовались общепринятыми методиками Р.Г. Бутенко (1964); Н.В. Катаева, Р.Г. Бутенко (1983); «Биотехнология растений: культура клеток» под ред. P.A. Диксон, М., 1989; а также методиками, разработанными во ВНИИГ и СПР им. И. В. Мичурина: «Методиче-

скис рекомендации по применению искусственной культуры тканей и органов в генетико-селекционных работах с плодовыми» под ред. Г.А. Курсакова и Т.В. Зоточкиной (Мичуринск, 1987) и «Индукция морфогенеза и тканевая селекция плодовых и ягодных культур» (методические рекомендации) под ред. В.М. Тюленева (Мичуринск, 1996).

Все работы, связанные с культивированием нетрадиционных растений in vitro, курировала старший научный сотрудник лаборатории биотехнологии ВНИИГ и СГ1Р им. И.В. Мичурина, кандидат биологических наук С.А. Муратова.

Жаро- и засухоустойчивость, а так же устойчивость к солям тяжелых металлов изучаемых культур оценивали по методике В.Г. Леонченко с сотрудниками (2007), устойчивость к хлориду натрия - по методике Б.П. Строганова с сотрудниками (1970).

Оценку устойчивости тканей листа актинидии к перегреву и солям тяжелых металлов осуществляли несколькими лабораторными методами, в том числе на лазерном анализаторе микроструктуры (ЛАМ) тканей (Будаговский и др., 1998; Будаговский и др., 2005), и методом импульсно-модулированной хлорофиллфлуоресценции (Schreibcr et al., 1986; Portable fluorimeter PAM-2000, 1993). Для количественной оценки функциональной активности тканей методом ЛАМ использовали степенной показатель b из уравнений регрессии G(t); I(t)= At \ аппроксимирующих экспериментальные кривые, в качестве контроля брали величину приведенной флуоресценции Fv/Fm.

Работу по оценке функционального состояния растений методами ЛАМ и РАМ проводили совместно с ведущим научным сотрудником лаборатории биотехнологии ВНИИГ и СПР им. И.В. Мичурина, кандидатом технических наук A.B. Будаговским, и сотрудником Инженерного центра ВНИИС им. И.В. Мичурина, кандидатом технических наук О.Н. Будаговской. Полученные экспериментальные данные обрабатывали с применением методов статистической обработки (Доспехов, 1985), а так же с помощью программы Microsoft Office Excel 2003.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Стерилизация растительного материала новых садовых растений

Получение стерильного растительного материала представляет собой сложную задачу, успешное решение которой зависит от правильного выбора стерилизующего агента и его концентрации, экспозиции стерилизации, типа и размера исход ного экспланта, а также сроков введения в культуру. Проведенные исследования показали высокую эффективность использования в качестве эксплантов узлов неодревесневших зеленых побегов жимолости, актинидии, лимонника и элеутерококка. Эксплантирование в период активного роста побегов позволило получить 50-91% стерильных и жизнеспособных эксплантов. Узлы одревесневших приростов отличались низкой жизнеспособностью (0-20%), высокой инфицированностью (до 88, 6%) и были непригодны для получения стерильной культуры. Высокий уровень асептики обеспечивало использование коммерческого препарата гипохлорита натрия «Белизна» разведенного стерильной водой в объемном соотношении 1:1 при экспозиции 5-7 мин.

Оптимизация этапа микроразмножения жимолости и актинидии Влияние концентрации ципокинина на пролиферацию микропобеговжичолоат

Ввиду большого многообразия ответных реакций растений в культуре in vitro, этап собственно микроразмножения требует оптимизации условий культивирования не только для представителей разных видов, но и отдельно взятых сортов.

На этапе введения в культуру целесообразно применять низкие концентрации 6-БАП, но при этом экспланты характеризуются низким коэффициентом размножения.

Повышение концентрации 6-БАП усиливает побегообразование жимолости in vitro. Оптимальной концентрацией 6-БАП является 1,5 мг/л, при этом коэффициент размножения составляет 4 - 6,4 новых побега на эксплант в зависимости от сорта. Повышение концентрации цитокинина до 2 мг/л с различной интенсивностью подавляет пролиферацию пазушных меристем. Гибберелловая кислота даже в сравнительно небольших концентрациях (0,2-0,5 мг/л) вызывает частичную витрификацию и приводит к формированию источенных побегов жимолости, которые малопригодны для последующего этапа укоренения.

В результате проведенных исследований выявлена сортосиецифичность реакции культивируемых растений на пространственную ориентацию экспланта. Изменение положения черенка с вертикального на горизонтальное увеличивало коэффициент размножения сортов Братка и Зимородок с 2,2 до 4,3 и с 1,2 до 2,3 соответственно. У сортов Лазурная и Виола коэффициент размножения различно ориентированных экс-плантов был практически равнозначен, либо незначительно больше у черенков, помещенных на среду горизонтально.

Влияниетипа циткшшна на коэф^шциетщхпмпансения атиашдии

Положительный эффект при клональном микроразмножении актинидии дает применение зеатина или 6-БАП. По сравнению с вариантами, содержащими кинетин и 2-iP, коэффициент размножения выше в 1,5-3 раза и составляет 2-3 побега на эксплант. Данный показатель сходен у сортов Садовая пурпурная и Плоская как на среде с 6-БАП, так и с зеатином.

Интенсивным ростом побегов под влиянием 2-iP и кинетина выделяется сорт Садовая пурпурная, принадлежащий к другому виду актинидии, хотя коэффициент размножения при этом снижается. Данный сортообразец наиболее интенсивно образует раневой каллус в базальной части микрочеренка и отличается неприхотливостью к условиям культивирования, что позволяет ему формировать побеги на средах разного гормонального состава.

Разработка метода культивирования in vitro лимонника и элеутерококка Влияние гидролизатказеина и гормонального соопяеа среды на пралш]>ерацию лимонника

Несмотря на большую ценность лимонника как лекарственной культуры, до настоящего времени не отработаны методы клонального микроразмножения, позволяющие длительно культивировать микропобеги in vitro и получать растения через культуру изолированных органов и тканей. Исследователи, работавшие с лимонником, отмечают проблему полного отсутствия роста микропобегов.

Нами впервые установлена важная роль гидролизата казеина в инициации побегообразования и поддержания обменных процессов эксплантов лимонника. Уже на этапе введения этот компонент питательной среды в концентрации 100 мг/л способствовал дружному пробуждению почек микрочеренков, активизировал развитие первичных эксплантов, а так же существенно усиливал побегообразовательную способность на этапе микроразмножения. Как показали результаты исследований, диапазон оптимальных концентрации гидролизата казеина в среде пролиферации находится в пределах 250-500 мг/л.

В сочетании с наиболее эффективным регулятором роста 6-БАП максимум побегообразования был достигнут через 60 суток культивирования и составил 2,7-2,8 новых побега на эксплант. Коэффициент размножения лимонника на среде с 6-БАП вдвое превышал данный показатель при использовании зеатина. Прочие регуляторы роста из группы цитокининов: 2-iP и кинетин оказались малопригодными, поскольку

даже через 68 суток среднее число новых побегов было меньше 1, а варианте, содержащем 2 мг/л кинетина, происходило отмирание сформированных побегов, что вызывало снижение коэффициента размножения при дальнейшем культивировании (рис.1).

□ 32 дня §68 дней

5? 70

2 о 60

LO 50

S 30

Ш 20

о с 10

БАП Zea 2iP Тип цитокинина

Kin

БАП

Zea 2-iP Тип цитокинина

Kin

Рис. 1. Влияние гипа цитокинина на коэффициент размножения лимонника (среда <2Ь, гидролизат казеина 250 мг/л, ИУК-0,2 мг/л, витамины М8)

Рис. 2. Выход побегов, лимонника пригодных к укоренению при сочетании гибберел-ловой кислоты (0,5 мг/л) и разных цитоки-нинов (концентрация цитокининов 2 мг/л, ИУК-0,2 мг/л, среда (}Ь содержит 250 мг/л гидролизата казеина и витамины М8)

В наших опытах комбинирование гибберелловой кислоты с разными цитоки-нинами в концентрации 2 мг/л оказывало неравнозначное воздействие на способность эксплантов формировать побеги и являлось малоэффективным приемом на этапе размножения, поскольку ингибировало развитие пазушных меристем и приводило к снижению коэффициента размножения. Во всех вариантах опыта даже через 72 дня культивирования коэффициент размножения был не более единицы, но выход побегов достигших 1,5 см существенно увеличился (рис. 2). Наиболее активная элонгация микропобегов лимонника отмечена при совместном использовании гиббереллина с зеатином или 6-БАП (66,7 и 52,9% соответственно).

Влияние углеводного состава среды на побегообразовептьную способность микрочеренков лимонника

Тип и концентрация вещества, являющегося источником углеводного питания в среде размножения может определять скорость и интенсивность побегообразования в зависимости от индивидуальных особенностей растительного организма.

Варьирование источников углеводного питания не оказало существенного влияния на коэффициент размножения лимонника. Следует отметить общую тенденцию к увеличению числа микропобегов у эксплантов, культивируемых на сахарозе, но в большинстве случаев различия между вариантами находились пределах ошибки средней (рис. 3-А). Под конец пассажа (52 сутки) различия между вариантами сглаживались, и количество новых побегов на эксплант составляло в среднем 2,5-2,2 шт. При этом одни микрочеренки формировали по 5-9 побегов, а у других наблюдали преимущественный рост одиночного осевого побега.

Оценка эффективности микроразмножения по такому показателю как средняя длина побега показала, что изменение углеводного состава среды положительно влияет на силу роста побегов in vitro (рис. 3-Б). Использование глюкозы или фруктозы активизирует вертикальный рост побегов лимонника китайского. Существенные разли-

чия по силе прироста были установлены на 26 сутки культивирования. У этих экс-плантов обменные процессы протекали более активно, на что указывает интенсивный рост побегов в течение всего срока эксперимента.

□ 16 сут В 26 сут [^"ТИ К 52 сут

ü 16 сут ®26 сут 52 сут

Сахароза Глюкоза Фруктоза

А)

Г>)

Рис. 3. Интенсивность побегообразовании и элонгации микропобегов лимонника in vitro в зависимое™ от источника углеводного питания на этапе микроразмножении (среда QL содержит 250 мг/л гидролизата казеина, 1мг/л 6-БАП; 0,1 мг/л ИМ К)

Дополнипелыше добавки к среде размножения лимонника

В некоторых случаях, с целью оптимизации состава питательной среды исследователи применяют дополнительные добавки, активизирующие процесс роста или укоренения пробирочных растений. Это могут быть как химически чистые вещества из групп антиоксидантов, элиситоров так и различные экстракты растительного происхождения. Мы испытывали активность медицинского препарата спиртового экстракта корня элеутерококка, поскольку в литературе есть данные об успешном применении жидкого экстракта элеутерококка для ускорения процессов регенерации в культуре каллусов абрикоса (Фардзиева, 2003).

Проведенные исследования выявили стимулирующее действие спиртового экстракта элеутерококка на рост побегов лимонника в культуре in vitro (рис. 4-А).

i 40 суток Е 81 сутки S40 суток S81 сутки

0,5 1

Концентрация, мхУл

Концентрация, мл/л

А)

Б)

Рис. 4. Влияние концентрации спиртового экстракта корня элеутерококка на рост побегов и коэффициент размножения лимонника китайского /я среда содержит 250 мг/л гидролизата казеина, 1мг/л 6-БАП; 0,1 мг/л ИМК)

Добавка экстракта во всех испытуемых концентрациях усиливала рост, гак что к концу пассажа побеги достигали в длииу в среднем 1,6-1,4 см и были пригодны для укоренения. Наиболее ярко выраженный стимулирующий эффект имела концентрация 1 мл/л. Изменение величины коэффициента размножения под действием смеси элеутерозидов находилось в обратной зависимости с показателем средней длины побега (рис.4-Б). Оказывая действие, сходное с гиббереллином, экстракт корня элеутерококка усиливал элонгацию побегов, но снижал коэффициент размножения по сравнению с контролем.

Подбор минерального соотеа среды для кулшшвирования элеутерококка

Элеутерококк требует оптимизации условий культивирования уже на этапе введения, иначе экспланты успешно прошедшие стерилизацию не образуют побегов и постепенно погибают. На средах Мурасиге-Скуга и Кворина -Лепорье экспланты развивались намного активнее, чем на средах WPM и Хеллера. По такому важному показателю как средняя длина побега экспланты, культивируемые на средах MS и QL существенно превосходили остальные варианты (рис. 5).

s 12

2 10 а> о

ю о

0 с 6 то

1 4

et 2 О

MS QL WPM Heller

Рис. 5. Влияние минерального состава среды на poci побегов первичных эксплантов элеут ерококка в нулевом пассаже в присутствии I мг/л гибберелловои кислоты (среды дополнительно содержат 1 мг/л 6-БАП и 0,1 мг/л ИМК)

Набор минеральных солей по прописи Кворина-Лепорье или Мурасиге-Скуга уже через восемь суток с момента введения в культуру обеспечивал прирост побега до 0,9-1,2 см. В этот же период на средах Хеллера и WPM сформированные микропобеги достигали всего 0,5-0,6 см соответственно.

Влияние гибберелловои кислот/ и ношеных соединений на инпенсивность развипш эксплштов элеутерококка

В нулевом пассаже у стерильных эксплантов элеутерококка из пазушной почки появлялась первая пара листьев, после чего развитие останавливалось. Пересадки на свежие среды не дали положительного результата. В имеющейся литературе есть данные, что в схеме получения растений женьшеня и двух видов элеутерококка через стадию соматического эмбриогенеза используют среду, содержащую гибберелловую кислот>' (Lee et al, 1990; Choi, Yang, Yoon, 1999; Choi et al., 2002).

При включении в состав среды 1 мг/л гиббереллина в сочетании с 6-БАП 1 мг/л нам удалось значительно увеличить долю активно развивающихся эксплантов элеутерококка и инициировать рост осевых побегов в нулевом пассаже. Дальнейшее варьирование концентрации гибберелловои кислоты на этапе собственно микроразмноже-

ния не оказало существенного влияния на рост и развитие побегов элеутерококка in vitro. Более того, после отделения от исходного экспланта, микропобеги останавливались в росте. Незначительная побегообразовательная активность сохранялась только в вариантах, содержащих 1-1,5 мг/л ГК, но средний коэффициент размножения был меньше единицы даже через месяц культивирования.

Побеги элеутерококка пассировали на среду, содержащую различные концентрации лекарственного препарата «Экстракт корня элеутерококка спиртовой» стерилизованный через мембранные ультрафильтры Millipore (рис. 6).

I ¡Длина —♦-Коэффициент размножения

Концентрация экстракта

Рис. 6. Влияние жстракта корня элеутерококка на пролиферацию побегов элеутерококка колючег о в культуре in vitro (среда QL содержит 1 мг/л ГК; 1 иг/л 6-БАП и 0,! мг/л ИМК)

Действие спиртового экстракта корня элеутерококка усилило побегообразование в 2,5 раза по-сравнению с контролем, при этом с увеличением концентрации препарата до 2 мл/л наблюдали рост коэффициента размножения. Уже через 14 дней культивирования этот показатель составил 0,8-1,3 новых побега на экс-плант в вариантах, содержащих 1-2 мл/л экстракта. Повышение концентрации до 3 мл/л ингибировало как пролиферацию пазушных меристем, так и элонгацию побегов. При содержании экстракта 1-2 мл/л отмечено улучшение физиологического состояния культивируемых микропобегов, что выражалось в более интенсивной окраске листьев и отсутствии некрозов апикальной части. Средняя длина не превышала 1 см. Похожие колебания соотношений длины побегов и коэффициента размножения были отмечены нами ранее на других культурах, ког да с ростом числа новых побегов снижается их длина и наоборот.

Регенерация побегов в культуре листовых дисков жимолости

Наибольшую морфогенную активность соматических тканей жимолости обеспечивало применение ауксинов ПУК или ИУК. Установлено влияние продолжительности этиоляции на интенсивность и направленность процессов морфогенеза. Длительный период этиоляции на срок до 22 суток или в течение всего срока регенерации (1,5-2 мес.) активировало рост корней и снижало процент эксплантов, формирующих адвентивные побеги (не более 8,7%). Прямое воздействие света в первые сутки инкубации также отрицательно сказывалось на жизнеспособности изолированных листьев, особенно в вариантах, содержащих 0,1-0,25 мг/л ИУК. Оптимальная продолжительность этиоляции составляла

15-17 суток, при этом регенерация первых побегов начиналась через 14 суток с момента помещения эксплантов в условия полного фотопериода.

При сочетании 6-БАП 5 мг/л с 0,1 мг/л ИУК до 7,7% листьев сорта Гжелка регенерировали побеги, при гаком же содержании ПУК регенерация проходила успешно только у 3,7% листовых эксплантов (рис. 7). Повышение концентрации ИУК до 1 мг/л стимулировало органогенез у 16% эксплантов сорта Лазурная.

3= 45 зг 40 35

2.зо

2 25 2 20 2.15 £ 10

8 5 £ 0 о

X <0

8 А 1 \

Побеги Корни Побеги Корни

Гжелка Лазурная

в иук 0,1 в иук 0,25 в иук 0,5

а иук 1

и нук 0,1 !нук 0,25 жук 0,5 i нук 1

¡'не. 7. Морфогенез сортов Гжелка н Лазурная в культуре листовых дисков на разных концентрациях ауксинов + 5 мг/л БАП

При снижении концентрации 6-БАП в среде до 4 мг/л отмечена активизация процессов побегообразования на среде, содержащей 0,5-1 мг/л ауксина (рис. 8). Наиболее активно морфогенез сорта Гжелка проходил на среде, содержащей I мг/л ИУК. Побеги регенерировали 16% всех эксплантов, а при использовании 1 мг/л НУК регенерация данной формы не превышала 10%.

I Побеги ■ Корни

зГ 16

3- 14 ГО

О. 12

X ф

ф о.

2 о ф

1 1

1 I

| 0,25 0,5 1

нук

0,1 ¡0,25| 0,5 1 ИУК

Концентрация ауксина, мг/л

Рис. 8. Морфогенез в культуре листовых дисков жимолости сорта Гжелка на разных концентрациях ауксинов + 4 мг/л БАЛ

Укоренение микропобегов нетрадиционных культур in vitro и адаптация in vivo

Этап укоренения является основой успешной адаптации стерильных растений in vivo. Па степень развития корневой системы влияют не только тип и концентрация ауксина, а также способ обработки, минеральный состав среды и условия укоренения.

В результате проведенных исследований установлена низкая эффективность среды Андерсена для укоренения жимолости. Лучшие результаты давало применение сред Мурасиге-Скуга и Кворина-Лепорье с редуцированным в два раза содержанием макроэлементов и сахарозы до 2%. Фаза этиоляции на начальных стадиях ризогенеза ускоряла корнеобразование и стимулировала рост корней в длину. Наиболее активно микропобеги укоренялись на среде Кворина-Лепорье с фазой этиоляции в 6 суток. В первые 11 суток культивирования получено 14% укоренных растений, в то время когда на других средах этот показатель не превышал 4%. Несмотря на стимулирующий эффект, этиоляция продолжительностью 10-11 суток оказывала отрицательное воздействие на общее состояние растений - появлялись некрозы листьев и усыхали побеги длиной более 3 см.

В результате проведенных исследований установлено, что укоренение на среде, содержащей ИМК в концентрации 1мг/л, эффективнее, чем обработка базальной части микрочеренков ауксином. Побеги жимолости укоренялись на 65,4-100% в зависимости от сорта, но по количеству образующихся корней микрорастения, полученные с предобработкой раствором ИМК (50 мг/л) превосходили варианты с хроническим воздействием индолилмасляной кислоты (рис. 9). Особенно эффективен данный прием при формировании корневой системы регенерантов №1 и №2/2.

Микропобеги актинидии хорошо формируют корневую систему на безгормональной среде ризогенеза. Но наличие в среде ауксина способствует более активному заложению корневых зачатков. Как показали результаты исследований, высокие концентрации ИМК способны тормозить рост и развитие корней актинидии Пурпурной. Ингибирование роста наблюдали у данного сорта уже при концентрации индолилмасляной кислоты 0,5 мг/л, но в целом для данной формы характерно образование коротких корней (1,6-2 см) во всех вариантах опыта (рис. 10. А-Б).

□ ИУК 1МГ/П ШИМК 1МГ/Л азам. ИУК в зам. ИМК

Дл Лаз Дл. р.1 Дп. р 2/2

Рис. 9. Развитие корневой системы in vitro у регенерантов, полученных путем адвентивного органогенеза из листовых дисков (Дл. p. I и Дл. р. 2/2) и меристемных растений жимолости сортов Лазурная и Длинноплодная при разных способах аппликации ауксина

а Пурпурная r¿ Плоская

О Пурпурная В Плоская

я: 10

0.1 0.5 1

Концентрация ИМК, мг/л

О 0,1 0,5 1

Концентрация ИМК, мг/л

А)

Б)

Рис. 10. Укореннсмоеть актинидии Садовая пурпурная и Плоская на разных концентрациях ИМК

Уровень развития корневой системы in vitro обуславливает эффективность адаптации микрорастений жимолости к нестерильным условиям. Микропобеги, укоренные на средах, содержащих 0,5-1 мг/л ИМК отличались лучшей приживаемостью (84,5-100%) и в 1,4-2,7 раза по величине прироста превосходили растения, у которых этап ризоге-неза проходил на средах с пониженной концентрацией ИМК (0-0,25 мг/л).

Некоторые биометрические показатели in vivo регеиерантов жимолости, полученных в культуре листовых дисков

Укорененные растения-регенеранты, полученные из тканей листа жимолости, а так же исходные формы, размноженные через культуру меристем, по окончании периода адаптации были высажены на постоянное место выращивания. В условиях in vivo мы изучили некоторые морфологические показатели регеиерантов с целью выявления спонтанных эпигенетических изменений, возникших в результате процессов морфогенеза в соматических тканях.

В результате проведенных исследований выделен регенерант №7, существенно превосходящий исходный сорт Длинноплодная по всем оцениваемым признакам (рис. 11). Растения этого регенеранта формируют в среднем по 20,5 шт. побегов, длина которых составляет 19,4 см. Для контрольных (меристемных) растений жимолости Длинноплодная в этот период развития характерны мёньшие значения этих величин -8,9 побегов на растение при средней длине прироста 13,3 см.

Результаты замеров в группе регенерантов трехлетнего возраста показали высокую стабильность показателя количества узлов на побег независимо от формы (рис. 12). Регенерант №4 значительно отличается по морфологическим показателям, как от исходного сорта, так и от других растений этой группы. В трехлетнем возрасте этот образец обладает сдержанным ростом и сниженной побегообразовательной способностью. При средней длине побега контрольного сорта Длинноплодная 14,5 см, прирост регенеранта № 4 не превышает в длину 6,2 см. Следует отметить, что по среднему числу узлов на побег - 4,3 шт., эта форма так же уступает жимолости Длинноплодная, имеющей показатель 5,7 шт./ побег.

ш р

0) ю о

т о С

о >>

О Ц

о 3"

25 20 15 10 5

----Кол-во узлов

—*- Длина побега

■ Кол-во побегов

<? Л

20 15 10 5

(и ю о с га х з с;

ч:

Рис. 11. Морфологические характеристики двухлетних меристемных растений жимолости сортов Длинноплолнан, Лазурная и регснсрантов, полученных в культуре листовых дисков

----Кол-во узлов

эи §45 ш"40

I35

ёзо

ш25 о

Й20 >. о15

о _ :г10 35

• Кол-во побегов — *- Длина побега

14 2

12 ГО

О)

10 ю

8 го

6 с;

Дл (исх.ф.) Длр 2 Дл. р 4 Дл р 5

Рис. 12. Морфологические характеристики трехлетних меристемных растений жимолости Длинноплодная и его рсгенерантов, полученных в культуре листовых дисков

Устойчивость нетрадиционных садовых растений к абиотическим стрессорам (жаро- и засухоустойчивость, толерантность к действию хлорида натрия и солей тяжелых металлов)

Высокие температуры и дефицит влаги в период вегетации являются важными лимитирующими факторами для многих плодовых и ягодных растений. В результате проведенных исследований установлено, что для сортов жимолости характерны потери воды в диапазоне 25,9-46% и низкие значения степени восстановления оводненно-сти. Лучшие показатели водного режима выявлены у сортов Десертная и Крупноплодная. Тепловой шок усиливает водопотери и снижает способность восстанавливать оводненность тканей (рис. 13, А-Б).

51) 41) 30

А)

Рис. 13. Потеря волы (ГШ) и степень восстановления оводненностп (СВО) тканей листа жимолости при искусственной засухе (А) и тепловом шоке (Б)

Высокой водоудерживающей способностью в условиях дефицита влаги характеризуются сорта актинидии Дальневосточная, Память учителю, женские и мужские формы актинидии полигама № 3 из МоВИР. Отличаясь высоким уровнем оводненно-сти тканей листа (64,8-78,2%) растения актинидий и лимонника обладают низкой способностью удерживать и восстанавливать эту воду в условиях теплового шока. Полученные данные позволяют охарактеризовать эти культуры как не жаростойкие и средне- и слабо засухоустойчивые (рис. 14, А-Б).

Рис. 14. Потеря воды (Г1В) и степень восстановления оводненносги (СВО) гканей листа актинидии коломикга при искусственной засухе (А) и тепловом шоке (Б)

В условиях возрастающей техногенной нагрузки на окружающую среду устойчивость к ионам тяжелых металлов является важным элементом адаптивного потенциала плодовых и ягодных культур (табл. 1). Полученный экспериментальный материал согласуется с литературными данными о меньшей токсичности ионов свинца по сравнению с другими тяжелыми металлами, что связано с низкой подвижностью этого элемента в растительном организме (Титов и др., 1995; Серегин, Иванов. 1998). Наиболее устойчивыми к действию солей свинца и хрома являются представители видов актинидии полигама и пурпурная (Садовая пурпурная), а так же сорта актинидии коломикта Университетская, Сахалинская 32 и мужская форма.

Солеустойчивость таких культур как жимолость, актинидия и лимонник мало изучена. Среди сортов жимолости максимальную толерантность к разным концентра-

циям хлорида натрия проявляют образцы Десертная и Крупноплодная (рис. 15). В результате проведенных исследований установлено, что растения актинидии коломикга, полигама и аргута по солевыносливости превосходят жимолость (рис. 16. А-Б).

1. Повреждения тканей листа актинидии и лимонника, ____индуцированные ионами тяжелых металлов__

Сорт (форма), вид Интенсивность поражения листовой пластинки (средний балл)

(Ш^СггОу 0,125 мМ (МН4)2Сг207 0,25 мМ РЬ(]ЧО,)2 1,25 мМ

Женская форма (А. ро1у^ата) 0 0,6 0

Мужская форма (А. рогата) 0,2 0,7 0

Садовая пурпурная (А.ригригеа) 0,9 0,9 0,2

Сахалинская 32 (А.ко1отИс1а) 0,5 1,4 0

Университетская (А.коЬт/кш) 0,8 1,7 0,3

Мужская форма (А.ко!опик1а) 0,9 1,5 0

Плоская (А.коЬт/Ьа) 1,0 1,9 0,9

Сентябрьская (А.ко1от1ка) 1,1 1,9 1,4

Народная (А.ко/отНаа) 1,8 1,9 0,8

Женская форма (А. аг&Па) 0,7 1,5 0,4

Мужская форма (А. а^ша) 1,4 1,8 0,1

Лимонник (Бск^гапЛ-а сЫпетк) 0,8 1,6 0

НСРМ 0,7 0,9 0,4

У большинства сортов актинидии действие 0,6% -го раствора хлорида натрия вызывало некрозы листа не более чем на 1,6 балла. К наиболее устойчивым следует отнести сорта актинидии коломикга Народная, Плоская, Изобильная, Находка, а так же Садовую пурпурную, женские и мужские формы актинидии полигама.

□ 0,3% В 0,6%

с;

Рис. 15. Устойчивость сортов жимолости к действию раствора хлорида натрии (0,3-0,6%)

□ 0,3% и 0,6%

О 0,3% В 0,6%

Садовая пурпурная

Полигама Полигама муж. жен.

А)

В)

Рис. 16. Устойчивость сортов н видов актинидии и растений лимонника к действию расгвора хлорида натрия (03 - 0,6%)

Применение метода лазерного анализа микроструктуры (ЛАМ) растительной ткани для оценки устойчивости к абиотическим етресс-факггорам растений актинидии Уатйчивоат к экагремальным полансиюльнымтемперапурам

Изучение оптических свойств двухцветных листовых пластинок актинидии коломикта методами лазерного анализа микроструктуры тканей и импульсно-модулированной хлорофиллфлуоресценции позволило установить статистически достоверные различия по уровню термостойкости между тканями разных участков листа. Хлорофилсодержащие ткани в зонах с измененной пигментацией адаксиаль-ной поверхности отличаются повышенной устойчивостью к воздействию сублетальных температур (+50 С), сохраняя высокие показатели приведенной флуоресценции, а так же скоростей роста интенсивности и спада когерентности зондирующего лазерного излучения (рис. 17).

^ , □ бел зона

Ш зелен, зона

0,8

<V о_

0 ^0,6 -8-

(X _

Ш 0,4

1 О) £0,2

25°С

43°С

50°С

Рис. 17. Влияние температуры на величину приведенной флуоресценции в разных зонах двухцветной листовой пластинники актинидии коломикта

Возможно, явление повышенной термостойкости хлорофилсодержащих тканей, экранируемых с адаксиальной поверхности белым пигментом может иметь важное значение в механизме адаптации растений актинидии к избыточной инсоляции и перегреву в период вегетации.

Устойчивость к солямтоюепыхматплов и хлориду нстрия Данные, полученные двумя методами, сходны и подтверждают высокую токсичность для тканей актинидии хлорида никеля. Оценка устойчивости ткани по величине динамического показателя лазерного излучения методом ЛАМ позволила установить достоверные различия с контролем уже в первые сутки инкубации в растворах всех трех соединений (рис. 18-А).

0,12

0,07

0 02

0,8

0.6

0,4

0,2

-о- Контроль -х- N¡012

I 1

Длительность инкубации, часы А)

12 24 36 48 60 72 Длительность инкубации, часы

Б)

Рис. 18. Устойчивость тканей листа актинидии коломикга Сентябрьская к действию хлорида натрия, фгорида натрия и хлорида никеля (концентрации веществ: №С1 - 200 мМ; - 10 мМ; №С12 -10 иМ, инкубация высечек в течении 3 суток при +25°С и освещенности 600 лк) А) Оценка методом ЛАМ по величине динамического показателя (в-!) (¡-интенсивность, С-когерентность зондирующего лазерного излучения рассеянного тканью листа) Б) Оценка методам РАМ по изменению показателя приведенной флуоресценции (Ь\'/Гт)

На вторые сутки опыта зафиксировали наиболее четкие различия по устойчивости ткани листа к разным химическим стрессорам. При этом резко возрос до контрольных значений показатель приведенной флуоресценции и динамический показатель лазерного излучения в тканях, находящихся в растворе ЫаР. Хлориды никеля и натрия индуцировали стабильное снижение приведенной флуоресценции (рис. 18-Б), а так же значений динамического показателя зондирующего лазерного излучения в течение всего опыта. Катионы тяжелого металла сильнее ингибировали скорость фо-тоиндуцированных перестроек и активность фотосистемы, что указывает на повышенную чувствительность актинидии коломикта к хлориду никеля и сравнительную устойчивость к хлориду натрия.

При оценке интенсивности воздействия на ткани актинидии нитрата свинца и дихромата аммония по изменению степенного показателя Ь из уравнений регрессии, аппроксимирующих экспериментальные кривые, установлены двукратные различия по токсичности этих соединений для растительного организма (рис. 19).

Значения Ь уже на третьи сутки эксперимента (72 часа) снизились в два раза, отметив высокую токсичность дихромат-аниона как в сравнении с контролем, так и в сравнении с исходными показаниями в этом варианте после начала опыта. Скорости фотоиндуцированных перестроек в тканях под воздействием нитрата свинца в этот же период были значительно выше. Токсичность ионов хрома обуславливает дальнейшее ухудшение оптических свойств ткани, так что на 13 сутки (312 часов) значения Ь сменили знак, отметив начало фотодеструкции хлорофилл-белкового комплекса. Контрольный вариант, помещенный в дистиллированную воду, характеризовался стабильным усилением функциональной активности ткани, выраженной ростом абсолютного значения степенного показателя Ъ.

0.1

0,05

о: С <и t-

о с

О)

s -0.05 х <D т П> X

сэ -0.1

-0,15 ' Длительность инкубации, часы

Рис. 19. Изменения степенного показателя b из уравнений регрессии G(t); 1(C) = Atb, характеризующего скорости фотоиндуцнрованных перестроек в тканях листа актинидии коломикта Сентябрьская и функциональную активность в условиях воздействия катионов свинца и хрома (/-интенсивность лазерного излучения, <7-когерентность лазерного излучения).

Экономическая эффективность получения посадочного материала нетрадиционных садовых культур с привлечением метода клоналыюго размножения

Проведенные исследования показали высокую результативность применения технологии клонального микроразмножения в производстве посадочного материала сортовой жимолости. Миниатюризация процесса размножения в культуре in vitro позволяет более эффективно использовать производственные площади лаборатории (табл. 2).

2. Экономическая эффективность выращивания посадочного материала жимолости с применением метода клоналыюго мнкроразмноження

Показатели Клональное микроразмножение Размножение зелеными черенками

Исходное количество материала на 1 м"\ шт. 864 200

Выход материала с 1м2 теплицы или куль-туральной комнаты за 1 пассаж, шт. 4320 125

Выход адаптированных стерильных растений после доращивания ш vivo, шт. 3020 -

Полные затраты, руб. 26826,72 1458

Себестоимость, руб. 8,9 11,7

Средняя цена реализации, руб./шт. 25 25

Стоимость валовой продукции, руб. 75500 3125

Прибыль, руб. 48673,28 1667

Уровень рентабельности, % 181,4 114,3

—♦— Контроль (I) —О— Контро1Ъ (G) —•— Pb(N03)2 (I)

- -О- - Pb(N03)2 (G) —4— (NH4)2Cr207 (I)

- -Ь - (NH4)2Cr207 (G)

В результате с 1м2 культуральной комнаты от 864 исходных микрочеренков (при среднем коэффициенте размножения 5) выход новых побегов за пассаж достигает значительных величин. С учетом потерь на этапах ризогенеза in vitro и адаптации in vivo выход растительного материала составляет 87,7% и 79% соответственно. В то же время, при стандартной схеме посадки 5х 10 см, с единицы тепличной площади выход укорененных растений жимолости составляет в среднем 62,5%.

Результаты расчета и сравнения экономической эффективности производства посадочного материала жимолости методом зеленого черенкования и через культуру тканей показали, что технология микроразмножения требует больших капиталовложений на единицу площади, но высокий выход растительного материала на этапе размножения и успешная приживаемость микрорастений на этапе доращивання обеспечивает существенное снижение себестоимости саженца по сравнению со стандартной методикой и повышение рентабельности производства на 67,1%.

Выводы

1. Минеральная основа среды Кворина-Лепорье, модифицированная А. Стандарди (1984), является оптимальной для роста и развития побегов актинидии, элеутерококка и лимонника китайского.

2. Проведенные исследования показали необходимость гидролизата казеина для успешной индукции побегообразования лимонника в сочетании с глюкозой и 6-БАП или зеатином. Установлено ингибирующее действие гибберелловой кислоты на пролиферацию пазушных меристем актинидии и лимонника.

3. На этапе клонального микроразмножения актинидии наиболее эффективным регулятором роста является зеатин.

4. Препарат «Экстракт корня элеутерококка спиртовой» в сочетании с гибберелловой кислотой (1мг/л) и 6-БАП (1 мг/л) стимулирует побегообразование экс-плантов элеутерококка колючего.

5. На этане микроразмножения жимолости наиболее эффективной является концентрация 6-БАП в среде 1,5 мг/л в сочетании с витаминным комплексом по Гамборгу (Вз).

6. Эффективными средами укоренения микропобегов актинидии и жимолости являются среды Кворина-Лепорье, в модификации А. Стандарди (1984), и Мурасиге-Скуга (1962) с 'Л концентрацией макроэлементов, содержащих 0,5-1 мг/л ИМК.

7. Высокую морфогенную активность листовых тканей жимолости стимулирует комбинация 1 мг/л ИУК и 4 мг/л 6-БАП и прекультивирование эксплантов в течение 14-17 суток в условиях полной темноты.

8. Высокой засухоустойчивостью обладает сорт жимолости Десертная, сорта актинидии коломикта Дальневосточная и Память учителю, а так же женская форма актинидии аргута.

9. Высокоустойчивы к хлоридному засолению сорта: (А. коломикта) Плоская, Сахалинская 32, Дальневосточная, Гладкая, Сахалинская 35, Находка, Изобильная, Народная и Университетская; актинидия пурпурная Садовая пурпурная и женская форма актинидии полигама, сорт жимолости Десертная.

10. Высокой комплексной устойчивостью к солям хрома и свинца обладают женские и мужские формы актинидии полигама, сорт актинидии пурпурной Садовая пурпурная, мужская форма актинидии коломикта и сорта Сахалинская 32 и Университетская.

11. Метод ЛАМ является эффективным способом экспресс-оценки устойчивости растений актинидии коломикта к воздействию абиотических стресс-факторов.

12. Использование метода клоналыюго микроразмножения в получении посадочного материала жимолости обеспечивает увеличение рентабельности производства на 67,1%.

Рекомендации для практического использования

Для культивирования микропобегов лимонника, актинидии и элеутерококка рекомендуется использовать минеральную основу среды Кворина-Лепорье в модификации А. Стандарди (1984).

Среду микроразмножения лимонника необходимо дополнять гидролизатом казеина - 250 мг/л (на этапе введения в культуру - 100 мг/л) и глюкозой - 30 г/л. В качестве регуляторов роста необходим 6-БАП или зеатин (1-2 мг/л) в сочетании с ИМК - 0,1 мг/л. На этапе микроразмножения актинидии рекомендуется зеатин в концентрации 1-2 мг/л.

Для успешной пролиферации микропобегов элеутерококка среда должна содержать 6-БАП - 1 мг/л и гиббереллин - 1 мг/л. Рекомендуется уже в первом пассаже добавлять в питательную среду 0,5-1 мл/л препарата спиртового экстракта корня элеутерококка.

В качестве основной среды культивирования жимолости рекомендуется среда Мурасиге-Скуга (1962), содержащая витамины по Гамборгу (В5), 1-1,5 мг/л 6-БАП и 0,1-0,5 мг/л ИМК. Микропобеги жимолости и актинидии укореняют на средах MS или QL с пониженным содержанием макроэлементов и дополненных 0,5-1 мг/л ИМК. Для индукции морфогенеза из листовых эксплантов жимолости рекомендуется использовать 1 мг/л ИУК и 4 мг/л БАП в сочетании с фазой этио-ляции продолжительностью 14-17 суток и затем проводить регенерацию в условиях 16-ти часового фотопериода.

В селекции на засухоустойчивость рекомендуются: сорт жимолости Десертная, сорта актинидии коломикта Дальневосточная и Память учителю. В селекции на устойчивость к хлориду натрия рекомендуются: сорт жимолости Десертная, сорта актинидии коломикта - Плоская, Сахалинская 32, Дальневосточная, Гладкая, Сахалинская 35, Находка, Изобильная, Народная и Университетская; актинидия пурпурная Садовая пурпурная и женская форма актинидии полигама. В селекции на устойчивость к солям свинца и хрома рекомендуются: женские и мужские формы актинидии полигама, сорт актинидии пурпурной Садовая пурпурная и сорт актинидии коломикта Сахалинская 32. В целях повышения рентабельности производства посадочного материала жимолости следует применять метод клоналыюго микроразмножения.

Список опубликованных работ

1. Тюленев, В.М. Система совместного использования стрессоров и антистрессоров в тканевой селекции плодовых и ягодных культур / В.М. Тюленев, Н.В. Соловых, А.Н. Перегоедов, Д.Г. Шорников, С.Л. Расторгуев // Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии. Ill междунар. науч. конф. : тез. докл. - М., 2004.-С. 92-95.

2. Янковская, М.Б. Решение проблемы устойчивости современных агроэкосистем путем избавления от монокультурности / М.Б. Янковская, Д.Г. Шорников, С.А. Муратова // Актуальные проблемы сохранения устойчивости живых систем : Мат. III междунар. науч. экологической конф., г. Белгород, 27-29 сентября 2004 г. - Белгород, 2004.-С. 250-251.

3. Янковская, М. Б. Потенциальные возможности расширения биологического разнообразия в агроэкосистемах / М.Б. Янковская, Д.Г. Шорников, С.А. Муратова //

Роль экологического пространства в обеспечении функционирования живых систем : Материалы первой междунар. науч.-практ. конф. - Елец, 2005. - С. 111-112.

4. Муратова, С.Л. Особенности введения в культуру in vitro плодовых и ягодных растений / С.А. Муратова, М.Б. Янковская, Д.Г. Шорников, I I.B. Соловых, В.М. Тю-ленев // Плодоводство : Матер, междунар. науч. конф. «Современное плодоводство: состояние и перспективы развития», посвященной 80-летию основания Института плодоводства HAH Беларуси.- Самохваловичи, 2005. - Т. 17, часть 2. - С. 298-301.

5. Шорников, Д. Г. Клональное микроразмножение жимолости съедобной / Д.Г. Шорников // Развитие и наследие И.В. Мичурина и подготовка кадров : Междунар. науч.-практ. конф. - Мичуринск, 2005. - Т. 2. - С. 93-94.

6. Шорников, Д. Г. Актуальные направления развития экологически безопасных биотехнологий в современном садоводстве / Д.Г. Шорников, М.Б. Янковская, С.А. Муратова // Актуальные проблемы современных аграрных технологий : мат. Российской науч. конф. студентов и молодых ученых с международным участием, 12-13 апреля 2006 г. - Астрахань, 2006. - С. 103-105.

7. Шорников, Д.Г. Перспективные виды нетрадиционных и редких культур и их активная интродукция с применением биотсхнологических методов размножения растений / Д.Г. Шорников, С.А. Муратова, М.Б. Янковская // Нетрадиционные и редкие растения, природные соединения и перспективы их использования. VII международный симпозиум : мат. междунар. науч.-практ. конф. - Белгород,

2006. -Т.1. - С. 49-52.

8. Янковская, М. Б. Интенсификация способов распространения нетрадиционных садовых культур / М.Б. Янковская, С.А. Муратова, Д.Г. Шорников // 1нноващини напрямки науково! дияльности молодих вчених в галуз! рослинництва. Збфник тез.Ш-oi М1жнародно1 науково1 конференцн молодих вчежх (20-22 червня 2006 р.) -Харкт, 2006.-С. 137-138.

9. Абызов, В.В. Изучение солеустойчивости сортов земляники и жимолости /

B.В. Абызов, Д.Г. Шорников // Селекция и семеноводство сельскохозяйственных культур : сб. статей XI Всерос. науч.-практ. конф. - Пенза, 2007. - С. 5-7.

10. Муратова, С.А. Влияние регуляторов роста на эффективность клонального микроразмножения нетрадиционных ягодных культур / С.А. Муратова, Д.Г. Шорников, М.Б. Янковская, Н.В. Соловых // Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования : материалы VII Междунар. симпоз. - М.,

2007.-Т. II.-С. 248-251.

11. Шорников, Д.Г. Ускоренное размножение нетрадиционных садовых культур на искусственных питательных средах / Д.Г. Шорников, М.Б. Янковская,

C.А. Муратова // Садоводство и виноградарство. - 2007. - № 5. - С. 12-14.

12. Шорников, Д.Г. Размножение in vitro лимонника и актинидии / Д.Г. Шорников // Современные проблемы технологии производства, хранения, переработки и экспертизы качества сельскохозяйственной продукции : материалы междунар. науч.-практ. конф., 26-28 февраля 2007 г. - Мичуринск-наукоград РФ, 2007. - Т. 1. - С. 337-341.

13. Шорников, Д.Г. Величина водоудерживающей способности тканей нетрадиционных культур как один из критериев оценки жаро- и засухоустойчивости / Д.Г. Шорников // Актуальные проблемы садоводства России и пути их решения: материалы Всерос. науч.-метод. конф. молодых ученых, 2-5 июля 2007 г. - Орел, 2007.-С. 267-271.

14. Шорников, Д. Г. Пестролистность актинидии как возможный признак высокой адаптивности сорта / Д.Г. Шорников // Перспективы селекции яблони и других культур для промышленных насаждений : Мат. Всероссийской науч. и практ. конф.,

посвященной 130-летию со дня рождения проф. С.Ф. Черненко, 21-23 ноября 2007 г. - Мичуринск, 2007. - С. 164-168.

15. Будаговский, A.B. Применение метода лазерного анализа микроструктуры растительных тканей для оценки действия экстремальных температур и токсичных веществ / A.B. Будаговский, О.Н. Будаговская, Н.В. Соловых, Д.Г. Шорников // Применение лазеров в медицине и биологии : Мат. XXVIII международной науч.-практ. конф. (И Шахбазовские чтения, 21-24 октября 2007 г.). - Ялта, 2007. - С. 82-84.

16. Шорников, Д.Г. Влияние типа экспланта на эффективность введения in vitro сортов малины красной (Rubus ideaus L.) / Д.Г. Шорников, A.C. Гляделкина // Сучасни-ий стан i прюритсти розвитку ф'п'юлогп рослин, генетики та бютехнологп: мат. деся-Toi конф. молодих вчених (25-26 жотия 2007 р.). - Кш'в, 2007. - С. 157-158.

17. Шорников, Д. Г. Изучение устойчивости актинидии и лимонника китайского к действию хлорида натрия / Д.Г. Шорников // Проблемы научной, обучающей и просветительской деятельности в биологических центрах ВУЗов и хозяйствах зоопар-кового типа : Мат. Всероссийской науч. практ. конф. - Тамбов, 2007. - С. 116-118.

18. Шорников, Д.Г. Укоренение in vitro и адаптация нетрадиционных садовых культур / Д.Г. Шорников, М.Б. Янковская, С.А. Муратова // Интродукция нетрадиционных и редких растений : VIII Междунар. науч. метод, конф., г. Мичуринск, 8-12 июня 2008 r.-T.l. плодовые, ягодные, редкие и нетрадиционные садовые культуры. -Воронеж: Кварта, 2008. - С. 335-337.

19. Шорников, Д.Г. Изучение жаростойкости разноокрашенных зон листовой пластинки актинидии коломикта методом лазерного анализа микроструктуры тканей / Д.Г. Шорников // Применение лазеров в медицине и биологии : Мат. XIX Междунар. науч.-практ. конф. (VU Васильевские чтения 21-24 мая 2008 г.). - Харьков, 2008. - С. 147-151.

20. Муратова, С.А. Генотипические особенности растений при культивировании in vitro / С.А. Муратова, М.Б. Янковская, Д.Г. Шорников // Биотехнология как инструмент сохранения биоразнообразия растительного мира : Мат. II Всерос. науч.-практ. конф., г. Волгоград, 19-21 августа 2008 г. - Белгород, 2008. - С. 222-226.

21. Шорников, Д.Г. Разработка метода клоналыюго размножения лимонника и актинидии / Д.Г. Шорников // Плодоводство и ягодоводство в России: Сб. тр. науч.-практ. конф. «Состояние садовых растений после зимы 2006/07 г. и проблемы их зимостойкости (13 июня 2007 г.) и международной науч.-практ. конф. «Инновационные направления в питомниководстве плодовых культур» (14-15 июня 2007г.). -М.: ВСТИСП, 2008. - T. XVIII. - С. 428-434.

22. Муратова, С.А. Размножение садовых культур in vitro (методические рекомендации) / С.А. Муратова, Д.Г. Шорников, М.Б. Янковская. - Мичуринск-наукоград РФ, 2008. - 69 с.

23. Шорников, Д.Г. Разработка метода клонального размножения элеутерококка колючего (Eleutherococcus senticosus (Rupr. et Maxim.) Maxim.) / Д.Г. Шорников // Биология клеток растений in vitro и биотехнология : Тез. IX междунар. конф., г. Звенигород, 8-12 сентября 2008 г. - М.: ИД ФБК ПРЕСС, 2008. - С. 442.

Формат 60x84/16 Объем 1 уел п.л.

Тираж 100 экз.__Заказ № 37_

ГНУ Всероссийский НИИ генетики и селекции плодовых растений им. И.В. Мичурина Россельхозакадемии

Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Шорников, Денис Геннадьевич

Введение.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Специфика культивирования in vitro редких садовых растений.

1.1.1. Введение в культуру in vitro.

1.1.2. Этап собственно микроразмноэюения.

1.1.3. Укоренение микропобегов in vitro.

1.1.4. Адаптация растений к нестерильным условиям.

1.2. Регенерация из соматических тканей.

1.3. Устойчивость редких садовых культур к неблагоприятным абиотическим факторам окружающей среды.

1.3.1. Устойчивость к дефициту влаги и перегреву.

1.3.2. Устойчивость к избытку солей в почве.

1.3.3. Устойчивость к действию ионов тяжелых металлов

ГЛАВА 2. ЦЕЛЬ, ЗАДАЧИ, МЕТОДИКА И ОБЪЕКТЫ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Цель и задачи исследований.

2.2. Объекты и методы исследований.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ГЛАВА 3. ЭКСПЛАНТИРОВАНИЕ И СТЕРИЛИЗАЦИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО МАТЕРИАЛА РЕДКИХ САДОВЫХ

РАСТЕНИЙ.

3.1. Получение стерильного растительного материала жимолости.

3.2. Влияние режима стерилизации и типа экспланта на эффективность введения в культуру лимонника китайского и сортов актинидии.

3.3. Отработка режимов стерилизации эксплантов элеутерококка колючего.

ГЛАВА 4. ОПТИМИЗАЦИЯ ЭТАПА МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ

ЖИМОЛОСТИ И АКТИНИДИИ.

4.1. Влияние концентрации 6-БАП на пролиферацию микропобегов жимолости.

4.2. Зависимость роста и развития микропобегов жимолости от концентрации ИМК в питательной среде.

4.3. Влияние концентрации и типа витаминной смеси на интенсивность побегообразования жимолости.

4.4. Оптимизация этапа микроразмножения актинидии.

ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА ПРИЕМОВ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ IN

VITRO ЛИМОННИКА И ЭЛЕУТЕРОКОККА.

5.1. Влияние гидролизата казеина и гормонального состава среды на пролиферацию лимонника.

5.2. Влияние источников углеводного питания на побегооб-разовательную способность микрочеренков лимонника

5.3. Дополнительные добавки к среде размножения лимонника.

5.4. Подбор минерального состава среды для культивирования элеутерококка.

5.5. Влияние гибберелловой кислоты и нативных соединений на индукцию побегов элеутерококка in vitro.

ГЛАВА 6. РЕГЕНЕРАЦИЯ ПОБЕГОВ ЖИМОЛОСТИ В КУЛЬТУРЕ ЛИСТОВЫХ ДИСКОВ.

ГЛАВА 7. УКОРЕНЕНИЕ МИКРОПОБЕГОВ IN VITRO И АДАПТАЦИЯ МИКРОРАСТЕНИЙ К УСЛОВИЯМ IN VIVO

7.1. Оптимизация минерального состава среды укоренения

7.2. Влияние концентрации ауксина и способа обработки микрочеренков на укореняемость in vitro.

7.3. Адаптация микрорастений к условиям открытого грунта.

7.4. Некоторые биометрические показатели in vivo регене-рантов, полученных в культуре листовых дисков жимолости

ГЛАВА 8. АДАПТИВЫНЙ ПОТЕНЦИАЛ РЕДКИХ САДОВЫХ

КУЛЬТУР.

8.1. Жаро- и засухоустойчивость лимонника китайского, сортов жимолости и актинидии.

8.2. Изучение солеустойчивости редких садовых культур.

8.3. Оценка толерантности актинидии и лимонника к воздействию ионов тяжелых металлов.

8.4. Применение метода лазерного анализа микроструктуры (ЛАМ) растительной ткани для оценки устойчивости к абиотическим стресс-факторам растений актинидии.

8.4.1. Устойчивость к экстремальным положительным температурам.

8.4.2. Устойчивость к солям тяжелых металлов и хлориду натрия.

ГЛАВА 9. ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПОЛУЧЕНИЯ ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА ЖИМОЛОСТИ С ПРИМЕНЕНИЕМ МЕТОДА КЛОНАЛЬНОГО

МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ.

Выводы.

Рекомендации для практического использования.

Список используемой литературы.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Совершенствование технологии размножения редких садовых растений в культуре in vitro и оценка их потенциала устойчивости к абиотическим стрессорам"

Интенсификация отечественного садоводства ставит перед селекционерами важную задачу повышения продуктивности агроэкосистем за счет получения новых генотипов, сочетающих стабильную урожайность и высокий потенциал устойчивости к воздействию биотических и абиотических стрессоров. Одним из путей решения этого вопроса является включение в селекционный процесс родственных дикорастущих форм, а также активное привлечение в культуру и дальнейшая работа с малораспространенными растениями, такими как актинидия, жимолость, лимонник.

Чтобы интродуценты успешно конкурировали и дополняли традиционные плодовые и ягодные культуры, необходима серьезная работа по дальнейшему улучшению потребительских качеств плодов и повышению урожайности, словом для достижения того, что делает культуру рентабельной и без чего невозможно ее широкое промышленное использование.

Для наиболее успешной реализации хозяйственно-ценных качеств, заложенных в генотипе, также необходимы исчерпывающие знания о физиологических особенностях растительного организма, в том числе и о величине адаптивного потенциала, что особенно актуально в условиях возрастающей техногенной нагрузки на окружающую среду. Отсутствие по этому вопросу исчерпывающих данных и надежных методов оценки устойчивости к ряду абиотических стрессоров применительно к нетрадиционным растениям ограничивает возможности исследователей и замедляет процесс селекции.

В связи возрастающими требованиями к качеству продукции растениеводства необходимо активно применять современные наукоемкие технологии, которые во много раз расширяют возможности ученых селекционеров и сокращают сроки улучшения сортов по некоторым показателям. Как отмечает В.И. Кашин (2001), на всех этапах от селекции до массового размножения, нужны высокие и более эффективные технологии с применением современного оборудования и химических средств, а С.Н. Хабаров (2001) в числе важнейших проблем питомниководства называет совершенствование микроклонального размножения различных видов и форм растений.

Это связано с тем, что отработанная технология клонального размножения является основой для других биотехнологических методов, открывающих перспективы оздоровления от вирусов и получения нового исходного материала для селекции с использованием соматической гибридизации или индукции сомаклональной изменчивости в культуре тканей. Это одна из наиболее развитых отраслей прикладной биотехнологии в последние годы все чаще применяется для размножения нетрадиционных садовых культур (Куликов, Высоцкий, Шипунова, 2005). Преимуществом культуры тканей in vitro является высокий коэффициент размножения и, как следствие, выход большого количества растений за короткое время, а также возможность тиражировать те формы растений, которые слабо размножаются в обычных условиях.

Особенно перспективной является разработка методов культивирования in vitro для трудно укореняемых форм, таких как лимонник китайский, или многолетних растений, у которых в качестве сырья используют корневища (элеутерококк, женьшень), тем самым нарушая один из механизмов естественного возобновления популяции. Но в связи с интенсивным увеличением сортимента нетрадиционных культур сдерживающим фактором широкого внедрения клонального микроразмножения в систему производства посадочного материала ягодных культур является проблема сортоспецифичности ростовых реакций в условиях in vitro, что требует, помимо разработки новых методов, дополнительной оптимизации условий культивирования применительно к конкретным сортам и формам.

В этой связи цель данной работы — совершенствование технологии размножения нетрадиционных садовых культур и изучение их устойчивости к основным дестабилизирующим воздействиям абиотического характера.

Заключение Диссертация по теме "Селекция и семеноводство", Шорников, Денис Геннадьевич

163 Выводы

2. Проведенные исследования показали необходимость гидролизата казеина для успешной индукции побегообразования лимонника в сочетании с глюкозой и 6-БАП или зеатином. Установлено ингибирующее действие гиббе-релловой кислоты на пролиферацию пазушных меристем актинидии и лимонника.

3. На этапе клонального микроразмножения актинидии наиболее эффективным регулятором роста является зеатин.

4. Препарат «Экстракт корня элеутерококка спиртовой» в сочетании с гибберелловой кислотой (1мг/л) и 6-БАП (1 мг/л) стимулирует побегообразование эксплантов элеутерококка колючего.

5. На этапе микроразмножения жимолости наиболее эффективной является концентрация 6-БАП в среде 1,5 мг/л в сочетании с витаминным комплексом по Гамборгу (В5).

6. Эффективными средами укоренения микропобегов актинидии и жимолости являются среды Кворина-Лепорье, в модификации А. Стандарди (1984), и Мурасиге-Скуга (1962) с Уг концентрацией макроэлементов, содержащих 0,5-1 мг/л ИМК.

9. Высокоустойчивы к хлоридному засолению сорта: (А. коломикта) Плоская, Сахалинская 32, Дальневосточная, Гладкая, Сахалинская 35, Находка,

Изобильная, Народная и Университетская; актинидия пурпурная Садовая пурпурная и женская форма актинидии полигама, сорт жимолости Десертная.

11. Метод ЛАМ является эффективным способом экспресс-оценки устойчивости растений актинидии коломикта к воздействию абиотических стресс-факторов (засоление, ионы тяжелых металлов, экстремальные положительные температуры).

12. Использование метода клонального микроразмножения в получении посадочного материала жимолости обеспечивает увеличение рентабельности производства на 67,1%.

Рекомендации для практического использования

Среду микроразмножения лимонника необходимо дополнять гидролиза-том казеина - 250 мг/л (на этапе введения в культуру — 100 мг/л) и глюкозой -30 г/л. В качестве регуляторов роста необходим 6-БАП или зеатин (1-2 мг/л) в сочетании с ИМК - 0,1 мг/л. На этапе микроразмножения актинидии рекомендуется зеатин в концентрации 1-2 мг/л.

В качестве основной среды культивирования жимолости рекомендуется среда Мурасиге-Скуга (1962), содержащая витамины по Гамборгу (В5), 1-1,5 мг/л 6-БАП и 0,1-0,5 мг/л ИМК. Микропобеги жимолости и актинидии укореняют на средах М8 или (Д, с пониженным содержанием макроэлементов и дополненных 0,5-1 мг/л ИМК. Для индукции морфогенеза из листовых эксплан-тов жимолости рекомендуется использовать 1 мг/л ИУК и 4 мг/л БАП в сочетании с фазой этиоляции продолжительностью 14-17 суток и затем проводить регенерацию в условиях 16-ти часового фотопериода.

В селекции на засухоустойчивость рекомендуются: сорт жимолости Десертная, сорта актинидии коломикта Дальневосточная и Память учителю. В селекции на устойчивость к хлориду натрия рекомендуются: сорт жимолости Десертная, сорта актинидии коломикта - Плоская, Сахалинская 32, Дальневосточная, Гладкая, Сахалинская 35, Находка, Изобильная, Народная и Университетская; актинидия пурпурная Садовая пурпурная и женская форма актинидии полигама. В селекции на устойчивость к ионам свинца и хрома рекомендуются: женские и мужские формы актинидии полигама, сорт актинидии пурпурной Садовая пурпурная и сорт актинидии коломикта Сахалинская 32. В целях повышения рентабельности производства посадочного материала жимолости следует применять метод клонального микроразмножения.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата сельскохозяйственных наук, Шорников, Денис Геннадьевич, Мичуринск

1. Акимова, Т.В. Влияние локального прогрева на тепло-, холодо- и соле-устойчивость клеток листа и корня растений/ Т.В. Акимова, Н.И. Балагу-рова, А.Ф.Титов // Физиология растений. 1991. - Т.46, №1. - С. 119-123.

2. Акк, Г.Я. Влияние ионов кобальта на замедленную и быструю люминесценцию хлоропластов гороха / Г.Я. Акк, Е.Р. Ловягина, Ю.Н. Кауров, И.И. Шанов // Физиология растений. 1995. - Т.42 - №2. - С.268-271.

3. Альтергот, В.Ф. Действие повышенной температуры на растение в эксперименте и природе / В.Ф. Альтергот — М.: Наука,1981. — 56с.

4. Альтергот, В.Ф.Тепловые повреждения водного обмена растений / В.Ф. Альтергот, С.С. Мордкович // Водообмен растений при неблагоприятных условиях среды. Кишинев: Штиница, 1975. - С.38-43.

5. Белинская, Н.К. Показатели водного режима лиан при интродукции в Казахстане / Н.К. Белинская, Р.И. Шокова // Бюллетень главного ботанического сада. 1977. — вып.105. — С.66-69.

6. Белосохов, Ф.Г. Хозяйственно-биологическая оценка сортообразцов жимолости в Тамбовской области- Автореф. дис. . канд. с.-х. наук / Ф.Г. Белосохов, Плодоовощной институт им. И.В. Мичурина. Мичуринск, 1993.-23 с.

7. Биотехнология растений: культура клеток / Под ред. P.A. Диксон М.: ВО Агропромиздат, 1989. - 280 с.

8. Бирюков, С.А. Приемы повышения устойчивости яблони к тяжелым металлам на юге России / С.А. Бирюков // Проблемы экологизации современного садоводства и пути их решения. Мат межд. конф. 7-10 сентября 2004 г. Краснодар, Куб ГАУ, 2004. - С.620-626.

9. Бохорова, Н. Семена межвидовых гибридов подсолнечника в культуре in vitro и их морфогенетические способности / Н. Бохорова, А. Петров, Ю.

10. Георгиева //Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. -М.: Наука, 1991. С.114-116.

11. Будаговский, A.B. Роль когерентности света в биокоммуникационных процессах / A.B. Будаговский, О.Н. Будаговская, И.А. Будаговский //Современные проблемы науки. 2005. - Вып.6. - С.94-105.

12. Будаговский, A.B. Выявление действия экстремальных температур на растительные ткани методом лазерного анализа их микроструктуры / A.B. Будаговский, О.Н. Будаговская, Ф. Ленц // Вестник РАСХН. — 2008. №1. - С.69-82.

13. Бургутин, А.Б. Микроклональное размножение винограда / А.Б. Бургу-тин // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. — М.: Наука, 1991.-С.216-220.

14. Бутенко, Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений / Р.Г. Бутенко — М.: «Наука», 1964. — 272 с.

15. Вечернина, H.A. Регенерация растений актинидии китайской из каллус-ных культур листьев / H.A. Вечернина, O.K. Таварткиладзе, В.В. Куту-бидзе // Субтропические культуры. 1990. - №5. - С.133-139.

16. Витковский, В.Л. Плодовые растения мира / В.Л. Витковский — С-Пб: «Лань», 2003. 592с.

17. Внучкова, В.А. Разработка метода получения растений-регенерантов томата в условиях культуры ткани / В.А. Внучкова // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. — М.: Колос, 1979. — С. 14-23.

18. Высоцкий, В.А. Клональное микроразмножение некоторых форм груши / В.А. Высоцкий // Международная научн. Конф. «Биология культивируемых клеток и биотехнология», тез. докл., 4.2 Новосибирск, 1988. — С.318-319.

19. Высоцкий, В.А. Особенности клонального микроразмножения актинидии / В.А. Высоцкий, J1.B. Бартенева // Международная научн. Конф. «Биология культивируемых клеток и биотехнология», тез. докл., 4.2 — Новосибирск, 1988. С.317-318.

20. Высоцкий, В.А. Особенности клонального микроразмножения актинидии / В.А. Высоцкий, JI.B. Бартенева // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. — М.: «Наука», 1991. С.213-216

21. Высоцкий, В.А. Биотехнологические приемы в современном садоводстве / В.А. Высоцкий // Садоводство и виноградарство. — 2006., № 2. — С.2-3.

22. Гамбург, К.З. Ауксины в культурах тканей и клеток растений / К.З. Гамбург, Н.И. Рекославская, С.Г. Швецов. Новосибирск : «Наука», 1990. -243 с.

23. Гамзикова, О.И. Изменение устойчивости пшеницы к тяжелым металлам / О.И. Гамзикова, B.C. Барсукова / Доклады РАСХН. 1996. - №2. - С.13-15.

24. Генкель, П.А. Солеустойчивость растений и пути ее направленного повышения / П.А. Генкель М.: Изд-во академии наук СССР, 1954 - 84 с.

25. Геринг, X. Преодоление витрификации и улучшение акклиматизации растений при клональном микроразмножении / X. Геринг // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. — М.: Наука, 1991. -С.197-200.

26. Гончарова, Э.А. О физиологическом влиянии плодов на водный режим плодовых растений / Э.А. Гончарова, Е.И. Максименко // Водообмен растений при неблагоприятных условиях среды. Кишинев: Штиница, 1975. - С.68-71.

27. Гриненко, В.В. О сопротивляемости растений обезвоживанию в природных условиях /В.В. Гриненко // Водный режим сельскохозяйственных растений. -М., 1969. С.222-230.

28. Гриненко, В.В. Регуляция водного обмена, определяющая приспособление растений к среде /В.В. Гриненко // Водообмен растений при неблагоприятных условиях среды. — Кишинев: Штиница, 1975. — С.50-56.

29. Давоян, Э.И. Культура каллуса и регенерация растений риса как один из методов создания нового исходного материала для селекции / Э.И. Давоян // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. М.: Колос, 1979. — С.23-31.

30. Доспехов, Б.А. Методика полевого опыта / Б.А. Доспехов — М.: Колос, 1985.-351 с.

31. Еремеев, Г.Н. Материалы по водному режиму и стойкости к засушливым условиям некоторых древесных растений / Г.Н. Еремеев // Краткие итоги работ по физиологии и биохимии растений за 1957-1958. Тр. гос. Никитского бот. сада. Т.ХХХ. Ялта,1959. - С.52-57.

32. Еремеев, Г.Н. Физиологический параллелизм листьев плодовых растений по показателям их водного режима и засухоустойчивости / Г.Н. Еремеев // Водообмен растений при неблагоприятных условиях среды. — Кишинев: Штиница, 1975. С.65-68.

33. Еремеев, Г.Н. Засухоустойчивость черешни на различных подвоях / Г.Н. Еремеев, А.И. Лищук // Физиология устойчивости декоративных и плодовых растений. Тр. гос. Никитского бот. сада. T.LXIV. Ялта, 1974. — С.79-87.

34. Жидехина, Т.В. Изучение засухоустойчивости сортов жимолости как вопроса адаптации / Т.В. Жидехина // Научные основы устойчивого садоводства в России (Сб. докл. конф. 11-12 марта 1999 г., ВНИИС им. И.В. Мичурина). Мичуринск, 1999. - С.354-357.

35. Забродин, В.А. Дальневосточные лианы, их освоение и охрана / В.А. Забродин, Г.Т. Казьмин // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. 1995. - №5 - С.24-27.

36. История и современное состояние физиологии растений в академии наук. / Под ред. Курсанова A.JI. М.: Наука, 1967 — 371 с.

37. Мат. докл. II межд. симп. 19-20 июня 1997 г. Пущино : ВСТИСПД997. -Т.1. - С.43-45.

38. Катаева, Н.В. Клональное микроразмножение растений/ Н.В. Катаева, Р.Г. Бутенко М.: «Наука», 1983. - 96 с.

39. Катаева, Н.В. Значение гормонов в формировании верифицированных побегов яблони при микроразмножении / Н.В. Катаева, И.Г. Александрова, Е.В. Драгавцева // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. -М.: «Наука», 1991. С. 189-192

40. Колбасина, Э.И. Актинидии и лимонник в России (биология, интродукция, селекция) / Э.И. Колбасина М., 2000. - 264 с.

41. Куклина, А.Г. Опыт клонального размножения голубых жимолостей / А.Г. Куклина, Е.А. Семерикова, О.И. Молканова // Бюл. гл. бот. сада., Вып. 128. -М.:Наука, 2003.-С. 160-167.

42. Куликов, И.М. Биотехнологические приемы в садоводстве: экономические аспекты / И.М. Куликов, В.А. Высоцкий, A.A. Шипунова // Садоводство и виноградарство. 2005. - №5. — С.24-27.

43. Кунах, В.А. Цитогенетическая изменчивость клеточных популяций в культуре изолированных тканей растений / В.А. Кунах // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. М. : «Колос», 1979. - С. 38-51.

44. Кухарчик, Н.В. Размножение ежевики (Rubus fraticosus L.) в культуре in vitro / H.B. Кухарчик, С.Э. Семенас, E.B. Колбанова, М.С. Кастрицкая // Плодоводство. Науч. тр., т. 14. Самохваловичи, 2002. — С.95-98.

45. Кучеренко, JI.A. Подходы к разработке массовой регенерации растений in vitro / JI.A. Кучеренко // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. - С.232-242.

46. Кушниренко, C.B. Последействие атмосферной засухи на дыхание растений в связи с проблемой засухоустойчивости / C.B. Кушниренко // Водообмен растений при неблагоприятных условиях среды. Кишинев: Штиница, 1975. - С.71-76.

47. Кушниренко, М.Д. Зависимость водоудерживающей способности и содержания пигментов в листьях плодовых растений от условий увлажнения /М.Д. Кушниренко, Т.Н. Медведева // Водный режим сельскохозяйственных растений. — М.,1969. С.322-333.

48. Кушниренко, М.Д. Экспресс-методы диагностики жаро-, засухоустойчивости и сроков полива растений / М.Д. Кушниренко, Г.П. Курчатова, A.A. Штефырцэ, С.Н. Печерская, Е.В. Клевцова, С.И. Баштовая Кишинев,1986. - 38с.

49. Кушниренко, М.Д., Печерская С.Н. Физиология водообмена и засухоустойчивости растений / М.Д. Кушниренко, С.Н. Печерская — Кишинев, 1991.-306 с.

50. Лайке, X. Использование культуры тканей и органов в селекции растений и производстве посадочного материала. Обзор. / X. Лайке, Р. Лабес, К. Ертель, М. Петерсдорф Берлин: Акад. с.-х. наук ГДР. Ин-т с.-х. информации и документации, 1978. - 96 с.

51. Лебедев, В.М. К вопросу о влиянии потепления климата на плодовыерастения / В.М. Лебедев // Научные основы устойчивого садоводства в

52. России (Сб. докл. конф. 11-12 марта 1999 г., ВНИИС им. И.В. Мичурина).- Мичуринск, 1999. С.50-53.

53. Лисицин, Е.М. Полигенный характер алюмоустойчивости ячменя / Е.М. Лисицин, И.Н. Щенникова, Л.Н. Трунова // Доклады РАСХН. 2007. -№1.-С. 10-12.

54. Лобанова, Е. Редкие культуры для садоводов-любителей / Е. Лобанова // Садоводство и виноградарство. 1997. - №3. - С.23.

55. Максимов. Н.А. Избранные работы по засухоустойчивости и зимостойкости растений T.I. Водный режим и засухоустойчивость растений / Н.А. Максимов М., 1952. - 575с.

56. М.: ВСТИСП, 2001.- 128-129.

57. Матушкина, О.В. Микроклональное размножение жимолости / О.В. Матушкина // Состояние и перспективы развития нетрадиционных садовых культур Мат. межд. науч.- метод, конф. (12-14 августа 2003 г., г. Мичуринск ). — Воронеж, «Кварта», 2003. — С. 109-111.

58. Методика диагностики устойчивости растений (засухо-, жаро-, соле- и морозоустойчивости) / Под ред. Удовенко Г.В. Л., 1970 - 74 с.

59. Методические рекомендации по применению искусственной культуры тканей и органов в генетико-селекционных работах с плодовыми / под ред. Г.А. Курсакова и Т.В. Зоточкиной Мичуринск: ЦГЛ, 1987. - 60 с.

60. Минаев, В.А. Биологические особенности слаборослых клоновых подвоев яблони при клональном микроразмножении. Автореф. дис. . канд. с.-х. наук / В.А. Минаев, МичГАУ. Мичуринск : МичГАУ, 2005. - 23 с.

61. Образцова, В.И. О жароустойчивости древесных и кустарниковых пород / В.И. Образцова // Научные доклады высшей школы. № 4, М.,1960. — 162-166.

62. Оледзка, Н. Действие разных фитогормонов на образование проростковиз верхушек побегов и из пазушных почек к СаИгагапЙшз гозеиз / Н.

63. Оледзка, Е. Юзефович, М. Фурманова // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. — М.: Наука, 1991. С.201-206.

64. Петрова, А. Д. Хемотерапия и размножение садовых культур на питательных средах с фенолкарбоновыми кислотами / А.Д. Петрова, М.Т. Упадышев // Плодоводство и ягодоводство в России. Сб. науч. раб. Т.VII. М.: ВСТИСП, 2000. - С.67-72.

65. Петрова, А.Д. Фенольные соединения при оздоровлении и размножении садовых культур. Автореф. канд. дисс. с.-х. наук., спец. 06.01.07. плодоводство, виноградарство. — М.,2001. — 19с.

66. Плеханова, М.Н. Актинидия, лимонник, жимолость / М.Н. Плеханова -Ленинград: Агропромиздат, 1990. —87с.

67. Плеханова, М.Н. Жимолость / М.Н. Плеханова // Нетрадиционные садовые культуры. -Мичуринск, 1994. С.99-149.

68. Плеханова, М.Н. Жимолость / М.Н. Плеханова // Программа и методика сортоизучения плодовых, ягодных и орехоплодных культур. — Орел: ВНИИСПК, 1999. С.444-457.

69. Ю.Полевой, В.В. Физиология растений. Учеб. для биол. спец. ВУЗов / В.В.1. Полевой М., 1989. - 464с.

70. Попова, И.Б. Оценка хозяйственно-полезных признаков сортов жимолости / И.Б. Попова // Роль сортов и новых технологий в интенсивном садоводстве: Матер, к междунар. науч.-метод. конф., Орел, 28-31 июля 2003. -Орел: ВНИИСПК, 2003. С.204-205.

71. З.Попов, Ю.Г. Применение метода культуры меристематических верхушек в селекционной работе с земляникой / Ю.Г. Попов, A.C. Равкин // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. — М.: Колос, 1979. 115-123.

72. Пухальская, Н.В. Особенности реакции биотипов ячменя на токсичность алюминия / Н.В. Пухальская, A.A. Собачкин // Доклады РАСХН. — 2007. -№4.-С. 12-14.

73. Проворченко, A.B. Система производства оздоровленного посадочного материала клоновых подвоев косточковых культур / A.B. Проворченко,

74. B.Н. Подорожный, В.Ф. Гавриш // Промышленное производство посадочного материала плодовых, ягодных и цветочно-декоративных культур. (Мат. межд. науч.-пр. конф. 20-22 ноября 2001 г.). -М.: ВСТИСП, 2001.1. C.79-81.

75. Пустовойтова, Т.Н. Направленность изменений природных регуляторов роста и засухоустойчивости плодовых растений про адаптации к засухе / Т.Н. Пустовойтова // Водообмен растений при неблагоприятных условиях среды. — Кишинев: Штиница, 1975. С.79-86.

76. Рогозина, Т.А. Микроклональное размножение актинидии {Actinidia Deliciosa) / Т.А. Рогозина, В.М. Колесниченко // Проблемы интродукции и экологии Центрального Черноземья. — Воронеж, 1997. — С. 131-133

77. Рогозинский, М.С. Влияние ионов тяжелых металлов на синтез РНК в изолированных клеточных ядрах растений / М.С. Рогозинский, С.С. Кос-тышин, Р.А. Волков // Физиология и биохимия культурных растений. -1998. Т.ЗО. - №3. - С.209-214.

78. Родюкова, О.С. Особенности водного режима смородины красной / О.С. Родюкова // Междунар. науч. практ. конф. «Мобилизация адаптивного потенциала садовых растений в динамичных условиях внешней среды» 24-26 августа 2004. М.: ВСТИСП,2004. - С.390-395.

79. Рыбалко, А.Е. Экономическая характеристика производства безвирусных мериклонов цветочных культур / А.Е. Рыбалко // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. — С.227-232.

80. Садоводство. Энциклопедия в 3-х томах / под ред. В.И. Бабук и др., T.I. -Кишинев, 1990. 528 с.

81. Самусь, В.А. Предварительные результаты инициации культуры in vitro районированных подвоев яблони / В.А. Самусь, С.Э. Семенас, А.П. Ко-ноплева // Плодоводство. Науч. тр., т. 14. — Самохваловичи, 2002. — С.22-29.

82. Свириденко, Э.И. Особенности размножения облепихи in vitro / Э.И. Свириденко, В. М. Бурдасов, О.П. Дудченко // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. - С.221-224.

83. Семихатова, O.A. Дыхательная цена произрастания растений в условиях засоления / O.A. Семихатова, Т.И. Иванова, О.С. Юдина // Физиология растений. 1993. - №4, Т.40. - С.558-566.

84. Серегин, И.В. Передвижение ионов кадмия и свинца по тканям корня / И.В. Серегин, В.Б. Иванов // Физиология растений. 1998. - Т. 45. - №6. -С.899-905.

85. Сказкин, Ф.Д. Критический период у растений по отношению к недостатку воды в почве / Ф.Д. Сказкин Ленинград, 1971. - 120 с.

86. Сорокин, A.A. Размножение жимолости в культуре in vitro / A.A. Сорокин // Состояние и перспективы развития нетрадиционных садовых культур. Мат. межд. науч.- метод, конф. (12-14 августа 2003 г., г. Мичуринск ). Воронеж, «Кварта», 2003. - С. 119-124.

87. Строгонов, Б.П. Физиологические основы солеустойчивости растений (при разнокачественном засолении почвы) / Б.П. Строганов М.: Изд-во академии наук СССР, 1962. - 366 с.

88. Таланова, В.В. Раздельное и комбинированное действие засоления и закаливающих температур на растения / В.В. Таланова, А.Ф. Титов, C.B. Минаева, С.Е. Солдатов // Физиология растений. Т.40., №4, 1993. -С.584-588.

89. Таланова, В.В. Влияние ионов кадмия и свинца на рост и содержание пролина и АБК в проростках огурца / В.В. Таланова, А.Ф. Титов, Н.П. Боева//Физиология растений. 1999.-Т.46. - №1. - С. 164-167.

90. Таланова, В.В. Влияние возрастающих концентраций тяжелых металлов на рост проростков ячменя и проростков ячменя и пшеницы /В.В. Таланова, А.Ф. Титов, Н.П. Боева // Физиология растений. 2001. - Т.48. -№1. - С.119-123.

91. Ткаченко, О.В. Оптимизация метода микроклонального размножения стевии / О.В. Ткаченко // VII межд. симп. «Нетрадиционные и редкие растения, природные соединения и перспективы их использования» 24-27 мая 2006 г., т. 2. Белгород, 2006. - С. 112-114.

92. Удовенко, Г.В. Солеустойчивость культурных растений / Г.В. Удовенко — JL: Колос,1977 215 с.

93. Упадышев, М.Т. Оздоровление и размножение нетрадиционных ягодных и плодовых культур / М.Т. Упадышев // Садоводство и виноградарство. — 1996.-№4.-С.15-17.

94. Упадышев, М.Т. Клональное размножение садовых культур на безагаровой среде / М.Т. Упадышев // Садоводство и виноградарство — 2000, № 56, — С.20-21.

95. Упадышев, М.Т. Особенности размножения актинидии и лимонника in vitro и зелеными черенками / М.Т. Упадышев, Е.А. Туть // Плодоводство и ягодоводство в России: Сб. науч. работ., T.XI. М.: ВСТИСП, 2004 -С.200-209

96. Фирсов, А.П. Разработка методов регенерации и генетической трансформации Actinidia kolomikta / А.П. Фирсов, В.И. Степанова, C.B. Долгов // II Российский симпозиум «Новые методы биотехнологии растений (1820 мая 1993 г., г. Пущино) Пущино, 1993. - С.56

97. Химический энциклопедический словарь / Под. ред. И.Л. Кнунянц. — М.: «Советская энциклопедия», 1983. 792 с.

98. Шахов, A.A. Солеустойчивость растений / A.A. Шахов М.,1956 - 552 с.

99. Школьник, М.Я. Микроэлементы и солеустойчивость растений / М.Я. Школьник // Физиология устойчивости растений (морозоустойчвость, засухоустойчивость и солеустойчивость). Тр. конф. 3-7 марта 1959 г. М. : Изд-во Академии наук СССР, 1960. - С.742-746.

100. Яхин, О.И. Протекторная роль биорегулятора стифуна при негативном действии кадмия / О.И. Яхин, А.А. Лубянов, И.А. Яхин, В.А. Вахитов // Доклады РАСХН. 2007. - №4. - С. 19-21.

101. A1-Juboory, К.Н. The effect of pulsed excimer laser radiation on control of in vitro culture contamination / K.H. Al-Juboory, D.J. Williams, M.H. Nayfeh // Hort. Sci. 1990. - V.25, № 9 -P.l 150.

102. Alsalihy, A.W. The effect of growth regulators on the rooting of shoots of the peach rootstock Ishtara in in vitro conditions / A.W. Alsalihy, B. Krizan, M. Klems, H. Fiserova, J. Hradilik // Hortic. Science. 2004. - V.31. - №4. -P.124-131.

103. Barbieri, C. Plant regeneration from actinidia callus cultures / C. Barbieri, S. Morini // J. of Horticultural Science. 1987. - V.62. - №1. -P.107-109.

104. Bennet, I.J. The influence of ammonium nitrate, pH and indole butyric acid on root induction and survival in soil of micropropagated Eucalyptus globules / I.J. Bennet, D.A.J. McDavid, J.A. McComb // Biol. Plant. 2003. - V.47. -№3. -P.355-360.

105. Canhoto, J.M. In vitro multiplication of actinidia chinensis Planch. By culture of young leaves / J.M. Canhoto, G.S. Cruz // Bol. Soc. Brot. 1987. - V.60. -№2. - P.239-252.

106. Choi, Y.-E. Rapid propagation of Eleutherococcus Senticosus via direct somatic embryogenesis from explants of seedlings / Y.-E. Choi, D.-C. Yang, E.-S. Yoon // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 1999. - V.58. - P.63-97.

107. Choi, Y.-E. Production of plantlets of Eleutherococcus sessiliflorus via somatic embryogenesis and successful transfer to soil / Y.-E. Choi, S.K. Ko, K.S. Lee, E.-S. Yoon // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 2002. - V.69. -P.201-204.

108. Einset, J.W. Role of cytokinin in woody plant micropropagation / J.W. Einset // Comb. proc. intern, plant propagator' soc. 1985. - V.35. - P.608-615.

109. Fraser, L.G. Somatic embryogenesis from anther-derived callus in two actinidia species / L.G. Fraser // Scientia horticulture. — 1986. — V.29. №4. — P.335-346.

110. Karhu, S.T. Axillary shoot proliferation of blue honeysuckle / S.T. Karhu //Plant cell, tissue and organ culture. 1997. - V.48. - P. 195-201.

111. Karhu, S.T. Rooting of blue honeysuckle microshoots / S.T. Karhu // Plant cell, tissue and organ culture. 1997. - V.48. - P. 153-159.

112. Kataoka, I. Active shoot regeneration in callus culture of kiwifruit (Actinidia chinensis Planch.) / I. Kataoka, M. Nakahira, H. Inoue // Technical bulletin of faculty of agriculture, Kagawa Univ. 1987. - V. 39. - №1. - P.21-26.

113. Kim, S.W. High frequency somatic embryogenesis and plant regeneration in zygotic embryo cultures of Japanese honeysuckle / S.W. Kim, S.C. Oh, D.S. In, J.R. Liu // Plant Cell Tissue and Organ Culture. 2003. - V.72. - №3. -P.277-280.

114. Kornova, K. Studies of in vitro rooting of walnut (J. regia L.) / K. Kornova, A. Stefanova // Plant science. 2004. - №1. - P.30-32.

115. Lee, N. In vitro propagation of Muscanide grape by axillary shoot proliferation / N. Lee, H. Y. Wetstein // J. of American society for Hortic. Sci. 1990. - V.115., № 2. - P. 324-329.

116. Lee, H.S. In vitro flowering of plantlets regenerated from zygotic embrio-derived somstic embryos of ginseng / H.S. Lee, J.R. Liu, S.G. Yang, Y.H. Lee //HortScience. 1990.-V.25. - №12.-P.1652-1654.

117. Lloyd, G.B. Commercially feasible micropropagation of mountain laurel (Kalmia latifolia) by use of shoot tip culture/ G.B. Lloyd, B.H. McCown// Comb.Proc.Intl.Plant. Propagatops Soc. 1980. - V.30. -P.421-427

118. Loretti, F. Vitrtification of plants cultured in vitro / F. Loreti, P.L. Pasqualetto // Comb. Proc. intern, plant propagators' soc. 1986. — V. 36 — P.66-71.

119. Messina, R. Influence of paclobutrazol on in vitro rooting of kiwifruit explants / R. Messina, G. Costa // Adv. Hort. Science. 1990. - №2. - P.90-92.

120. Monette, P.L. Organogenesis and plant regeneration following in vitro cold storage of kiwifruit shoot tip cultures / P.L. Monette // Scientia horticulturae. -1987. — V.31. №1-2. — p. 101-106.

121. Murashige, T. A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures / T. Murashige, F. Skoog // Physiol. Plant. 1962. -Vol.5., № 95-P.473-497.

122. Nehra, N. S. Direct shoot regeneration from strawberry leaf disks / N. S. Nehra, C. Stusnnoff, K.K. Kartha // J. of American society for Hortic. Sci. — 1989. V.l 14., № 6. - P.1014-1018.

123. Portable fluorimetr PAM-2000. Handbook of operation with practical application. Heinz Walz GmbH, - 1993. - 199 p.

124. Palacios, N. Regeneration of Lonicera tatarica plants via adventitious organogenesis fromcultured stem explants / N. Palacios, P. Christou, M.J. Leech // Plant Cell Rep. 2002. - V.20. - №9. - P.808-813.

125. Quinn, J. Recovery of y-linolenic acid from somathic embryos of Borage / J. Quinn, J.E. Simon, J. Janick // J. of American society for Hortic. Sci. 1989. - V.114.,№3.-P.511-515.

126. Quoirin, M. Improved medium for in vitro culture of Prunus sp./ M. Quoirin, P. Lepoivre//Acta Hortic.-1977. V.78. -P.437-442.

127. Standardi, A. Tissue culture propagation of kiwifruit/ A. Standardi, F. Catalano // Comb. proc. Intern, plant propagators' soc. 1984. - Vol.34. -P.236-243.

128. Sucharová, J. Heavy metels in urban soil covers. A review completed by Prague park and street soil analyses / J. Sucharová, I. Suchara // Horticultural Science. 1995. - V.22. - №2. - P.57-77.

129. Suezawa, K. Plantlet formation from cell suspensions of kiwifruit (Actinidia chinensis Planch, var. chinensis) / K. Suezawa, N. Matsuda, M. Omura, S. Yamaki // Scientia horticulturae. 1988. - V.37. - №1-2. - P.123-128.

130. Tsai, C.-K. Plant regeneration from leaf callus protoplasts of actinidia chinensis Planch, var. chinensis / C.-K. Tsai // Plant science. 1988. - V.54. - №3. -P.231-235.

131. Turner, S.R. Vitrification of crab apple, pear and geum on gellan gum-solidified culture medium / S.R. Turner, S. Singha // Hort. Sci. — 1990. -V.25.,№ 12.-P. 1648-1650

132. Velchev, V. Clonal micropropagation of Raspberry (Rubus ideaus L.) / V. Velchev Plant science. - 2004. - № 1. - P.3-8.

133. Weiping, S. Effect of lanthanum on root growth and senescence of GF43 (Prunus domestica) plantlet in vitro / S. Weiping, G. Fugen, Y. Jia, S. Ye, Q. Qunua, L. Jiajia // J. Rare Earths. 2004. - V.22. - №5. - P.696-700.

134. Young, M.J. Comparison of gelling substances used in micropropagation / M.J. Young // Comb. Proc. intern, plant propagators' soc. 1985. - V.35. -P.650-654.

Информация о работе

Шорников, Денис Геннадьевич
кандидата сельскохозяйственных наук
Мичуринск, 2008
ВАК 06.01.05

Диссертация

Совершенствование технологии размножения редких садовых растений в культуре in vitro и оценка их потенциала устойчивости к абиотическим стрессорам - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы