Особенности гриппа у разных видов птиц в экспериментальных условиях и эффективность методов выявления возбудителя

Абрамова, Людмила Юрьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Особенности гриппа у разных видов птиц в экспериментальных условиях и эффективность методов выявления возбудителя
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Особенности гриппа у разных видов птиц в экспериментальных условиях и эффективность методов выявления возбудителя"

*х На правах рукописи

Абрамова Людмила Юрьевна

Особенности гриппа у разных видов птиц в экспериментальных условиях и эффективность методов выявления возбудителя

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 9 МАЙ 2011

Москва-2011

4846645

Работа выполнена в лаборатории диагностики вирусных болезней птиц ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ «ВНИИЗЖ»)

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор, лауреат премий Ленинского Комсомола и Правительства РФ в области науки и техники Власов Николай Анатольевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор Сидорчук Александр Андреевич;

доктор ветеринарных наук, профессор Сухарев Олег Иванович

Ведущая организация - Государственное учреждение научно-исследовательский институт вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН

Защита диссертации состоится « 2011 г. в «

часов на заседании диссертационного совета Д.220.042.01 в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23. тел. (495) 377-93-83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина».

Автореферат разослан « ^^_2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

Грязнева Т.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Вирус гриппа птиц относится к роду Influenzavirus А семейства Orthomyxovîridae. Различные штаммы могут существенно различаться по вирулентности, биологические свойства вируса гриппа А разнообразны. Высоковирулентные штаммы способны вызывать острую контагиозную болезнь со смертностью до 100%, сопровождаемую системным поражением различных тканей и органов. Высокопатогенный грипп птиц включен в перечень карантинных и особо опасных болезней животных, способен к эпизоотическому распространению (Сюрин В.Н., 1998, Loeffelholz M.J., 2010, Lupiani В., 2009, SwayneD.,2000).

Низковирулентные штаммы, как правило, не вызывают клинически выраженных признаков болезни и патологических изменений в органах, однако могут существенно изменять свои вирулентные свойства в зависимости от целого ряда факторов (Swayne D., 1998, Werner О., 2006).

За последнее десятилетие эпизоотическая ситуация по высокопатогенному гриппу птиц в мире значительно изменилась (Власов H.A., 2010, Alexander D., 2006, 2007, Capua I., 2007, Senne D.A., 2006, Stegeman A., 2004). Повышенное внимание ветеринарных служб вызвано распространением вируса гриппа A/H5N1, сформировавшегося в странах Азии и вызвавшего эпизоотию среди диких и сельскохозяйственных птиц (Alexander D., 2007, Chen H., 2005, Shortridge K.F., 1998, Xu X., 1999). Первые случаи заболевания на территории Российской Федерации были зарегистрированы в июне 2005 г. в Западной Сибири, затем очаги болезни возникали с различной периодичностью в других федеральных округах на протяжении 2005 — 2010гг. (A.B. Андрия-сов, 2007, Власов H.A., 2010, Львов Д.К., 2006-2008, Чвала H.A., 2007).

Существенную угрозу для птицеводства Российской Федерации также представляет и вирус высокопатогенного гриппа подтипа Н7. За последнее десятилетие он вызвал вспышки болезни в странах Европы (Италия, 19992000гг., Голландия, Бельгия и Германия, 2003г., Англия, 2008г.), Азии (Корея, 2005г.), а также в Чили (2002г.) и Канаде (2003 и 2007гг.). В результате было потеряно около 60 миллионов голов сельскохозяйственной птицы, нанесен значимый урон популяциям диких птиц (Aamir U.B., 2009, Alexander DJ., 2007, Capua I., 2003, Elbers A.R. 2004, 2005, Pasick J., 2005, Stegeman A., 2004).

Своевременная постановка диагноза является залогом последующего выполнения ветеринарно-санитарных мероприятий. В комплексе диагностических мероприятий решающее значение имеет лабораторная диагностика гриппа птиц. Существенное влияние на результаты лабораторных исследований может оказать качество и скорость выполнения преаналитических (дола-бораторных) мероприятий, которые, как правило, осуществляются в полевых условиях и менее всего стандартизированы. По различным оценкам до 80% ошибок при постановке диагноза приходится на преаналитический этап исследований (Киршина A.A., 2007).

Таким образом, очевидна необходимость изучения особенностей высокопатогенного и низкопатогенного гриппа птиц, вызванного актуальными эпизоотическими штаммами вируса. Важнейшими его результатами являются оптимальный выбор органов разных видов птиц, содержащих наибольшее количество вируса и пригодных для дальнейших лабораторных исследований, а также описание клинических признаков и патологоанатомических изменений у разных видов птиц.

Цель и задачи исследований. Цель работы - изучить особенности гриппа, вызванного эпизоотическими изолятами вируса у разных видов птиц, и оптимизировать преаналитические мероприятия для постановки предварительного диагноза в полевых условиях.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Описать особенности высокопатогенного гриппа A/H5N1 при заражении цыплят различными эпизоотическими изолятами вируса.

2. Изучить особенности высокопатогенного и низкопатогенного гриппа A/H7N1 при заражении цыплят.

3. Воспроизвести и изучить особенности гриппа у разных видов диких и сельскохозяйственных водоплавающих птиц (разновозрастные мускусные утки, кряквы, серые гуси), вызванного высоковирулентным вирусом A/H5N1.

4. Оценить возможность применения коммерческих экспресс-тестов для выявления вируса гриппа птиц в пробах биоматериала.

5. Разработать набор для выявления антител к вирусам ньюкаслской болезни и гриппа птиц подтипов Н5 и Н7 в реакции торможения гемагглю-тинации.

Научная новизна. Впервые представлены экспериментальные данные по изучению особенностей высококопатогенного гриппа A/H5N1 у разных видов диких и сельскохозяйственных птиц.

Впервые воспроизведена и изучена инфекция гриппа A/H7N1 у цыплят, вызванная высоко- и низковирулентными штаммами вируса.

Впервые проведено сравнительное изучение разрешенных к применению в Российской Федерации коммерческих экспресс-тестов для обнаружения вируса гриппа в пробах биоматериала: Flu Detect, AIV Ag, H5 AIV Ag, H7 AIV Ag, H9 AIV Ag.

Разработан «Набор для выявления антител к вирусам ньюкаслской болезни и гриппа птиц подтипов Н5 и Н7 в реакции торможения гемагглюти-нации».

Практическая значимость. На основании проведенных исследований разработаны и утверждены ФГУ «ВНИИЗЖ»: «Методические рекомендации по определению индекса патогенности штаммов вируса гриппа А птиц», «Методические рекомендации по определению нейраминидазного подтипа вируса ГП и антител к вирусу ГП в реакции ингибиции нейраминидазной активности», «Методические рекомендации по идентификации вируса гриппа птиц в реакции торможения гемагглютинации».

Разработаны и утверждены Россельхознадзором «Методические рекомендации по отбору, хранению и транспортировке биологического материала при подозрении на грипп А птиц».

Материалы исследований вошли в СТО ФГУ «ВНИИЗЖ» 004955270161-2010 «Набор для выявления антител к вирусам ньюкаслской болезни и гриппа птиц подтипов Н5 и Н7 в реакции торможения гемагглютинации».

Апробация результатов. Результаты исследований по теме диссертации доложены и обсуждены на Международной научной конференции «Грипп птиц 2009: Грипп птиц и здоровье человека» (Великобритания, Оксфорд, 2009), Международной научно-практической конференции «Современные системы биобезопасности и биозащиты в ветеринарной медицине» (Феодосия, Украина, 2010), Международной научно-практической конференции молодых ученых «Достижения молодых ученых в ветеринарную практику», посвященной 30-летию создания СМУ ФГУ «ВНИИЗЖ» (Россия, Владимир, 2010) и на заседаниях учёного совета ФГУ «ВНИИЗЖ» в 20082010 гг.

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы выполнены совместно с сотрудниками ФГУ «ВНИИЗЖ» Чвала И.А., Бабиным Ю.Ю., Циванюк М.А., Сарбасо-вым А.Б., за что автор выражает им искреннюю благодарность.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 7 работ опубликовано в изданиях, включенных в Перечень ведущих периодических изданий ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 185 листах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, данные о практическом использовании научных результатов, список использованной литературы (232 источника, в том числе 182 зарубежных автора), приложения. Работа иллюстрирована 29 таблицами и 37 рисунками.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- особенности гриппа A/H5N1 у разных видов диких и сельскохозяйственных птиц;

- особенности гриппа у цыплят, вызванного высоко- и низковирулентными штаммами вируса A/H7N1 ;

- выявление вируса гриппа птиц в пробах биоматериала с применением коммерческих экспресс-тестов;

- «Набор для выявления антител к вирусам ньюкаслской болезни и гриппа птиц подтипов Н5 и Н7 в реакции торможения гемагглютинации».

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа была выполнена в период 2008-2010 гг. в лаборатории диагностики вирусных болезней птиц ФГУ «ВНИИЗЖ» г. Владимира.

В работе были использованы штаммы вируса гриппа А птиц, любезно предоставленные D. Senne (NVSL, США), I. Capua (IZSVe, Италия), ФГУ «ВГНКИ», а также выделенные в ФГУ «ВНИИЗЖ» из проб патологического материала, отобранного в различных регионах РФ в период 2005 - 2009гг., штамм Ла-Сота вируса ньюкаслской болезни и 9-11-суточные эмбрионы СПФ-кур фирмы Lohmann Tierzucht (Германия).

Гипериммунные сыворотки получали от клинически здоровых неиммунных к ВГП и ВНБ цыплят в возрасте 60-100 суток. При проведении экспериментов использовали неиммунных серых гусят в возрасте 18 суток, 27-суточных утят и годовалых крякв, полученных из ОАО «Заповедное охотничье хозяйство Загорское» Московской области; 27- и 37-суточных мускусных утят (кросс Юбилейный), полученных из ГППЗ «Благоварский» Республики Башкортостан; 4- и 6-недельных цыплят различных пород коммерческой птицы.

Вирус гриппа в пробах биоматериала обнаруживали при использовали экспресс-тестов Flu Detect (Synbiotics, Франция), AIV Ag (Anigen, Корея), Н5 AIV Ag (Anigen, Корея), Н7 AIV Ag (Anigen, Корея), H9 AIV Ag (Bionote, Корея), BD Directigen EZ Flu A+B (Becton, Dickinson and Company, США) в соответствии с инструкциями производителей.

Растворы готовили с использованием химических реактивов компаний Sigma (США), Invitrogen (США), а также отечественные реагенты марки о.с.ч. и х.ч.

Для выделения и культивирования вируса гриппа птиц из исследуемого материала готовили 10%-ную суспензию, центрифугировали в течение 15 мин. при 1000 g. К надосадочной жидкости добавляли антибиотики, выдерживали при температуре 20°С в течение 60 мин. и использовали для инокуляции эмбрионов СПФ-кур (КЭ), инкубировали при 37°С в течение 120 ч.

Для определения инфекционной активности из исследуемого материала готовили последовательные десятикратные разведения и вводили в аллантоисную полость эмбрионов СПФ-кур 11-суточного возраста. Специфичность гибели КЭ подтверждали в РГА с ЭЭЖ от каждого инокулированного эмбриона. Титр вируса в исходном материале определяли по методу Кербера и выражали в единицах ЭИД5о/см3.

Для изучения особенностей инфекционного процесса птиц заражали интраназально в дозе 6,0 lg ЭИД50/см3, устанавливали ежесуточное наблюдение, регистрируя случаи гибели и признаки заболевания. Ежесуточно проводили отбор клоакальных и ротоглоточных смывов, которые исследовали с применением экспресс-тестов. В случае гибели птиц проводили их вскрытие. От павших птиц отбирали пробы органов и использовали их в дальнейшей работе.

Для инактивации ЭЭЖ, содержащей ВГП, применяли 0,05% раствор бета-пропиолактона. Смесь инкубировали при 25°С в течение 24 часов при постоянном перемешивании. Для инактивации ВНБ использовали аминоэти-

ленимин (АЭЭИ) в конечной концентрации 0,1%. Инактивацию проводили при температуре 37,0+0,5°С в течение 24 часов.

Гипериммунную сыворотку крови кур получали путём двукратной иммунизации кур-доноров инактивированным эмульгированным в масляном адъюванте Монтанид ИЗА-70 (Seppic, Франция) ВГП и ВНБ. Нормальную сыворотку крови кур получали при обескровливании 14-суточных СПФ-цыплят.

Серологические реакции (РТГА, РДП, ИФА) проводили в соответствии с рекомендациями МЭБ и инструкциями производителей тест-систем.

Определение стерильности проводили в соответствии с ГОСТ 28085-89 и согласно «Руководству МЭБ по стандартам для диагностических тестов и вакцин».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Особенности гриппа A/H5N1 у цыплят

В связи со сложившейся эпизоотической ситуацией и возможностью заноса вируса A/H5N1 в стада домашних птиц возникла необходимость изучения особенностей болезни.

Для проведения экспериментов сформировали три группы цыплят 6-недельного возраста и провели их интраназальное заражение в дозе 6,0 lg ЭИД50/см3': 10 цыплят заразили A/duck/Novosibirsk/02/05 H5N1; 5 цыплят заразили A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1; 10 цыплят заразили A/grebe/Tyva/100/09 H5N1. В качестве контроля содержали еще 5 цыплят.

Ежесуточно от всех птиц отбирали клоакальные и ротоглоточные смывы, проводили их исследование с применением наборов Flu Detect, AIV Ag и H5 AIV Ag. Отобранные пробы смывов также использовали для вирусовыде-ления в эмбрионах СПФ-кур.

В результате заражения происходило заболевание и гибель всех птиц в период 1 - 4 суток. Цыплята контрольной группы оставались здоровыми в течение эксперимента.

При клиническом осмотре цыплят отмечали: угнетенное состояние, отказ от корма и воды, затрудненное дыхание, диарею, цианоз гребня, бородок и лап, конъюнктивиты, риниты, синуситы, отечность подкожной клетчатки в области головы и шеи. У отдельных птиц наблюдали ярко выраженные признаки поражения нервной системы, предшествующие их гибели.

Патологические изменения в органах были наиболее выражены у цыплят, павших через 48 - 96 ч. после заражения. При вскрытии трупов регистрировали геморрагии в гортани и трахее, гиперемию и кровоизлияния в головном мозге, в поджелудочной железе, железистом желудке, в кишечнике. Отмечали отечность легких, геморрагии и гиперемию в тканях сердца, печени, почек, селезенки, брыжейки, серозной и слизистой оболочек кишечника. Описанные клинические признаки и патологоанатомические изменения

свидетельствуют о генерализации инфекции и вовлечении всех систем органов в инфекционный процесс.

Через 3 суток после заражения от павших птиц отбирали пробы органов и определяли титр вируса (таблица 1). Было установлено, что вирус гриппа А/Н5>П обладает выраженным тропизмом к различным органам цыплят и способен накапливаться в них в высоких титрах (до 7,7 ^ ЭИД50/см3). Таким образом, в полевых условиях для последующего лабораторного исследования предпочтительно отбирать пробы головного мозга, паренхиматозных органов (включая легкие) и кишечника.

Таблица 1

Титр вируса в органах цыплят,

павших через 3 суток после заражения вирусом гриппа A/H5N1

Вирус, использованный для заражения Титр вируса (lg ЭИД5(/см^) в органах

головной мозг легкие паренхиматозные органы* сердце мышцы кишечник

A/duck/Novosibirsk/02/05 H5N1 7,5 6,2 6,7 6,2 2,5 5,5

A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1 6,7 7,2 7,0 7,0 3,2 4,2

А/grebe/Tyva/100/09 H5N1 6,5 7,5 7,7 7,2 3,5 6,2

Примечание: * паренхиматозные органы - почки, печень, селезенка

При исследовании клоакальных смывов максимальное количество положительных результатов было получено с применением набора Flu Detect (49 положительных результатов из 74 исследованных проб). При применении тестов AIV Ag и Н5 AIV Ag ВГП был обнаружен в 39 и 14 пробах, соответственно, что значительно отличается от результатов вирусовыделения в КЭ (62 положительных результата из 74 исследованных проб).

В клоакальных смывах больных и павших цыплят на 3 сутки после заражения титры вируса имели значения в диапазоне 3,8 - 7,5 lg ЭИД50/см3, и все пробы имели положительный результат исследования с применением набора Flu Detect. С применением набора AIV Ag были выявлены пробы с содержанием вируса более 4,5 - 4,8 lg ЭИД50/см3. Отдельные смывы с титром вируса не менее 7,3 - 7,5 lg ЭИД50/СМ3 были обнаружены с использованием теста Н5 AIV Ag.

При исследовании ротоглоточных смывов с применением набора Flu Detect из 74 исследованных проб вирус был выявлен в 39 смывах. При применении тестов AIV Ag и Н5 AIV Ag ВГП был обнаружен в 20 и 6 пробах, соответственно, что значительно отличается от результатов вирусовыделения в КЭ (53 положительных результата из 74 исследованных проб).

В результате определения титра вируса A/H5N1, содержащегося в ротоглоточных смывах больных и павших цыплят через 3 суток после заражения, были получены значения в диапазоне 2,5 - 7,5 lg ЭИД50/СМ3.

Пробы с титром вируса менее 3,5 lg ЭИД50/см3 не были выявлены ни одним из исследуемых наборов. С применением набора Flu Detect были выявлены все пробы с активностью не менее 3,5 lg ЭИДзо/см3. С использованием набора AIV Ag обнаруживали пробы с титром вируса не менее 4,5 lg ЭИД50/см3. Отдельные пробы, содержащие вирус в титрах 7,2 lg ЭИД50/см3 и выше, были выявлены с применением набора Н5 AIV Ag.

Наличие вируса в высоких титрах в ротоглотке и клоаке птиц предполагает его экскрецию в окружающую среду и передачу инфекции восприимчивым животным. Таким образом, можно рекомендовать использование клоакальных и ротоглоточных смывов клинически больных птиц для лабораторной диагностики болезни.

Особенности гриппа A/H5N1 у 27-суточных мускусных утят

Группу из семи птиц заразили интраназально вирусом A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1 в дозе 6,0 lg ЭИД50/см3 и через 2 суток провели диагностический убой двух утят. В качестве контроля в отдельном изоляторе содержали 5 утят.

При вскрытии птиц, убитых с диагностической целью, видимых изменений внутренних органов выявлено не было. Однако, вирус был выявлен в пробах органов, причем наибольшие его титры были установлены в легких и кишечнике (4,5 lg ЭИД50/СМ3), сердце (4,0 lg ЭИД50/см3), наименьшие - в головном мозге (3,2 lg ЭИД50/СМ3) и печени (3,5 lg ЭИД50/СМ3). Также вирус был выделен из грудных мышц. При применении экспресс-теста Flu Detect вирус выявляли в пробах легких, кишечника, сердца и печени, другие наборы не обнаружили вирус ни в одной из проб.

Инкубационный период болезни составлял не менее 2 суток. Гибель всех утят происходила в течение 3-6 суток после заражения. Клинический период болезни не превышал 4 суток. Через 3 суток после заражения у птиц отмечали угнетенное состояние, отказ от корма и воды, признаки поражения нервной системы, помутнение роговицы глаз. При вскрытии трупов птиц, павших в период 3-6 суток после заражения, наблюдали гиперемию и кровоизлияния в головном мозге, поджелудочной железе, отек легких.

В пробах органов, отобранных от утенка, павшего через 6 суток после заражения, вирус был выделен из легких (3,5 lg ЭИДзо/см3) и кишечника (2,5 lg ЭИД50/см3). Из проб головного мозга, сердца, мышц и печени вирус выделен не был. С помощью набора Flu Detect вирус выявляли только в пробе легких, другие наборы не обнаружили вирус ни в одной из проб.

Из клоакальных и ротоглоточных смывов вирус выделяли от клинически здоровых утят в течение 2 суток после заражения, а также от больных и павших птиц. Из 29 исследованных проб вирус был выделен в 15 ротоглоточных и 18 клоакальных смывах. При исследовании данных проб с применением экспресс-теста Flu Detect вирус был выявлен в 6 ротоглоточных и 9 клоакальных смывах, в том числе от клинически здоровых птиц. С использо-

ванием набора AIV Ag вирус был выявлен только в 3 ротоглоточных и 2 клоакальных смывах.

В ротоглоточных смывах, отобранных через 2 суток после заражения, при применении набора Flu Detect обнаружили только пробу с содержанием вируса 4,2 lg ЭИД50/см3, тогда как в пробах с титрами 2,2 - 3,2 lg ЭИД50/СМ3 вирус не был выявлен. В клоакальных смывах были выявлены пробы с активностью не менее 3,2 - 4,5 lg ЭИД50/см3, тогда как вирус с титром 2,5 - 2,8 lg ЭИД50/СМ3 не был обнаружен. Другие использованные в работе наборы не выявляли вирус в пробах смывов.

Особенности гриппа A/H5N1 у 37-суточных мускусных утят

При вскрытии птиц, убитых с диагностической целью через 2 суток после заражения, не было выявлено каких-либо видимых изменений внутренних органов при сравнении с контрольными птицами. Наибольший титр вируса установлен в легких (3,8 lg ЭИД50/см3), кишечнике (4,2 lg ЭИД50/см ) и сердце (3,0 lg ЭИД50/см3), наименьший - в головном мозге (2,2 lg ЭИД50/см3) и печени (2,5 lg ЭИД50/СМ3). Из грудных мышц вирус не был выделен. При применении экспресс-теста Flu Detect вирус выявляли в пробах легких и кишечника, другие наборы не обнаружили вирус ни в одной из проб.

Инкубационный период болезни длился не менее 3 суток. Случаи гибели птиц регистрировали в интервале 6-8 суток эксперимента. Через 3 суток у птиц наблюдали снижение потребления корма и воды, угнетенное состояние. Начиная с 4-5 суток, регистрировали признаки поражения нервной системы. Через 3-5 суток отмечали помутнение роговицы глаз, слезотечение, которые исчезали к 9-10 суткам опыта. У всех зараженных птиц регистрировали отставание в росте.

При вскрытии трупов утят наблюдали гиперемию и кровоизлияния в головном мозге, поджелудочной железе, отек легких, геморрагические поражения сердца. В пробах органов, отобранных от утенка, павшего через 6 суток, вирус был выделен из легких (2,5 lg ЭИД50/см3) и кишечника (2,2 lg ЭИД5о/см3). Из проб головного мозга, сердца, мышц и печени вирус не был выделен. Экспресс-тесты не обнаружили вирус ни в одной из проб.

В органах утенка, убитого через 10 суток после заражения, вирус не был выделен в эмбрионах СПФ-кур и не выявлен при использовании экспресс-тестов, что может быть связано с процессом выздоровления и элиминацией вируса из организма.

В клоакальных и ротоглоточных смывах вирус выделяли от клинически здоровых утят в течение 3 суток после заражения, а также от больных и

павших птиц в течение 5 суток эксперимента. Из 34 исследованных проб вирус был выделен в 9 ротоглоточных и 8 клоакальных смывах. При исследовании этих проб с применением набора Flu Detect вирус был выявлен в 2 ротоглоточных и 7 клоакальных смывах, в том числе от клинически здоровых птиц. С использованием набора AIV Ag вирус у утят выявлен не был.

В ротоглоточных смывах, отобранных через 2 суток после заражения, при применении набора Flu Detect вирус обнаружили в титре 4,5 lg ЭИД50/СМ3, тогда как в пробах с содержанием 2,8 - 3,2 lg ЭИД50/см3 вирус не был выявлен. В клоакальных смывах были выявлены пробы с активностью не менее 4,2 - 4,5 lg ЭИД50/СМ3. Другие использованные в работе наборы не выявили вирус в пробах смывов.

В результате исследовали в РТГА сыворотки крови утенка, убитого по окончании эксперимента, были выявлены специфические антитела в титре 4 log2. Сыворотки крови контрольных птиц в РТГА имели отрицательный результат исследований.

Особенности гриппа A/H5N1 у 27-суточных крякв

Группу из десяти птиц заразили интраназально вирусом A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1 в дозе 6,0 lg ЭИД50/см3. В отдельном изоляторе в качестве контроля содержали 4 утят.

Инкубационный период болезни длился не менее 2 суток. Гибель всех птиц происходила в течение 9 суток. При осмотре утят регистрировали отказ от корма и воды, признаки поражения нервной системы. У отдельных птиц не регистрировали клинических признаков болезни, предшествующих их гибели.

Вирус в смывах, отобранных от клинически здоровых птиц, выявляли уже через сутки после заражения, что допускает возможность его экскреции в окружающую среду и дальнейшее распространение болезни.

При исследовании ротоглоточных смывов с применением набора Flu Detect вирус был обнаружен в 13 из 58 исследованных проб с титром не менее 4,0 lg ЭИД50/см3, отобранных, в основном, в период 2-6 суток после заражения от клинически больных и павших утят. С применением набора AIV Ag вирус был выявлен всего в 2 ротоглоточных смывах с активностью 5,2 lg ЭИД50/см3.

При исследовании клоакальных смывов с применением набора Flu Detect вирус был обнаружен в 4 пробах с титром не менее 3,8 lg ЭИД50/см3, отобранных в период 3-5 суток после заражения от клинически больных и павших утят. Во всех остальных пробах с активностью вируса не более 3,6 lg ЭИДзо/см3 тестируемые наборы вирус не выявили.

Во внутренних органах утят, павших через 4 суток после заражения, были получены следующие титры вируса: 6,7 lg ЭИД50/СМ3 (головной мозг), 6,0 lg ЭИДзо/см3 (сердце), 7,0 lg ЭИД50/см3 (легкие), 4,7 lg ЭИД50/см3 (печень), 2,5 lg ЭИДзо/см3 (кишечник).

В результате вирусовыделения и титрования вируса в органах утят, павших через 7 суток после заражения, вирус был обнаружен только в пробах головного мозга и легких (3,2 Ig ЭИД50/см3).

Особенности гриппа A/H5N1 у годовалых крякв

В условиях эксперимента удалось вызвать клиническую болезнь всех 10 уток, зараженных интраназально A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1 в дозе 6 lg ЭИД5о/см3. Инкубационный период болезни длился не менее 3 суток. При осмотре птиц регистрировали отказ от корма и воды, снижение яйценоскости, помутнение роговицы глаз, признаки поражения нервной системы. С седьмых суток эксперимента наблюдали угасание признаков болезни, через 10 суток две утки были клинически здоровы. При вскрытии павших птиц регистрировали гиперемию сосудов головного мозга, отек легких, желточные перитониты, кровоизлияния в сердце.

Через 2 суток произвели диагностический убой двух уток в экспериментальной группе, через 8 суток - еще одной. При определении количества вируса в легких, кишечнике, сердце и грудных мышц уток, убитых через 2 суток после заражения, были установлены титры, равные 4,2 lg ЭИД50/СМ3, 3,0 lg ЭИД50/СМ3, 1,45 lg ЭИД50/см3, 1,2 lg ЭИД50/см3, соответственно. Из головного мозга вирус выделен не был. При применении экспресс-теста Flu Detect вирус выявили только в пробе легких. Другие использованные наборы не обнаружили вирус ни в одной из проб.

При исследовании проб легких, кишечника, сердца, головного мозга и грудных мышц уток, убитых через 8 суток после заражения, вирус выявить не удалось.

В результате исследования клоакальных и ротоглоточных смывов крякв вирус выделяли в течение 5 суток после заражения. Наибольшее количество случаев выделения вируса отмечено при исследовании ротоглоточных смывов (11 из 56 исследованных). В ротоглоточных смывах, отобранных через 2 суток, были определены титры вируса 3,2 и 4,2 lg ЭИД50/СМ3. Титры в клоакальных смывах имели значения 2,2,2,5 и 2,8 lg ЭИД50/см3.

При исследовании ротоглоточных смывов с использованием набора Flu Detect вирус был выявлен в трех пробах в пределах 3,8 - 4,8 lg ЭИД50/см3, тогда как в клоакальных смывах вирус был обнаружен лишь в одной пробе с титром 4,2 Ig ЭИД50/см3. С применением других наборов вирус выявить не удалось.

В сыворотках крови уток, отобранных через 10 суток после заражения, в РТГА были выявлены антитела к вирусу гриппа подтипа Н5 в титрах 2-4 log2, в РДП специфических антител не обнаружили.

Особенности гриппа A/H5N1 у серых гусят

Для изучения инфекционного процесса было проведено интраназаль-ное заражение A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1 девяти 18-суточных гусят в дозе 6,0 lg ЭИД50/см3. В качестве контроля содержали 4 гусят.

Инкубационный период болезни длился не менее 2 суток. Гибель всех птиц произошла в течение 6 суток. При осмотре птиц регистрировали отказ от корма и воды, признаки поражения нервной системы, помутнение роговицы глаз. У отдельных птиц не регистрировали клинических признаков болезни, предшествующих их гибели. При патологоанатомическом вскрытии павших гусят регистрировали гиперемию и кровоизлияния в головном мозге, сердце, кишечнике, отечность легких.

При вскрытии гусят, павших через 4 и 6 сутки после заражения, был проведен отбор проб органов и определены значения титра вируса (таблица 2).

Таблица 2

Титр вируса А/Н51Ч1 в пробах органах павших гусят_

Сутки гибели птицы Титр вируса (lg ЭИДзо/см3) в органах

головной мозг легкие сердце кишечник

4 2,5 4,9 4,5 5,2

6 3,2 4,9 2,5 3,9

Из представленных данных видно, что более высокое содержание вируса отмечено в кишечнике, легких и сердце гусенка, павшего на 4 сутки после заражения. При использовании набора Flu Detect вирус был выявлен в кишечнике, легких и сердце, тогда как с применением набора AIV Ag вирус был выявлен только в кишечнике.

Набольший титр вируса в органах гусенка, павшего на 6 сутки после заражения, был установлен в пробе легких, наименьший - в кишечнике, головном мозге и сердце. При использовании набора Flu Detect вирус был обнаружен только в пробах кишечника и легких.

При выделении вируса из 44 ротоглоточных смывов положительный результат был получен в 29 случаях, тогда как при исследовании клоакальных смывов вирус был выделен из 22 проб. Наибольшее количество случаев выделения вируса от павших и больных птиц отмечено на 4 и 5 сутки после заражения.

При исследовании клоакальных смывов с применением набора Flu Detect вирус был выявлен в пяти пробах, отобранных в период 1 - 5 суток после заражения, с титром 3,8 - 4,2 lg ЭИД50/см3. При исследовании 44 ротоглоточных смывов вирус был обнаружен с использованием набора Flu Detect в двух пробах с активностью 3,8 и 4,8 lg ЭИД5о/см3, отобранных соответственно через 1 и 2 сутки после заражения.

Таким образом, для диагностики ВГП и проведения лабораторных исследований можно рекомендовать отбирать пробы легких, кишечника, головного мозга и сердца.

Особенности гриппа A/H7N1 у цыплят

С целью изучения инфекционного процесса, вызванного высоковирулентным штаммом A/turkey/Italy/4580/99 H7N1, было проведено интра-назальное заражение десяти 30-суточных цыплят в дозе 6 lg ЭИД50/СМ3. В качестве контроля содержали еще 10 птиц.

Через 24 часа после заражения пало семь цыплят, еще три птицы погибли в период 24-48 часов, что позволяет охарактеризовать течение болезни как острое. При клиническом осмотре и вскрытии павших птиц отмечали признаки и множественные поражения, характерные для высокопатогенного гриппа птиц. Патологические изменения в органах и тканях были наиболее выражены у птиц, павших через 24 часа после заражения.

При исследовании 13 клоакальных смывов с применением набора Flu Detect вирус был выявлен в 11 пробах, с применением набора AIV Ag и Н7 AIV Ag в 8 и 2 пробах соответственно. Было установлено, что при применении экспресс-теста Н7 AIV Ag вирус выявлялся в пробах с титром не менее 7,5 lg ЭИД50/СМ3.

При тестировании 13 ротоглоточных смывов цыплят вирус был выявлен в 7 и 5 пробах при использовании тестов Flu Detect и AIV Ag, соответственно. С использованием набора Н7 AIV Ag вирус не был обнаружен ни в одной из проб.

При определении количества вируса в смывах было установлено, что экспресс-тест Flu Detect выявлял пробы с титром вируса не менее 3,8 lg ЭИД50/см3. Смывы, содержащие не менее 5,5 lg ЭИД50/см3 вируса, были выявлены с применением набора AIV Ag.

В ходе вскрытия павших птиц был проведен отбор проб внутренних органов. Вирус был обнаружен с применением наборов Flu Detect и AIV Ag во всех органах, отобранных от павших птиц через 24 и 48 часов после заражения. С использованием теста Н7 AIV Ag вирус выявляли в некоторых пробах легких и головного мозга. В результате титрования в эмбрионах кур проб головного мозга, легких, сердца, кишечника и паренхиматозных органов были определены титры вируса 7,5 lg ЭИД5о/см , 7,8 lg ЭИД50/см , 7,0 lg ЭИДзо/см3, 5,5 lg ЭИД50/СМ и 6,2 lg ЭИД50/см3 соответственно.

Таким образом, вирус вызывает острую генерализованную инфекцию и характерные поражения в органах цыплят, способен накапливаться в органах птиц в высоких титрах (до 7,8 lg ЭИД50/см3), что позволяет обнаружить его с применением экспресс-тестов.

С целью изучения инфекционного процесса, вызванного низковирулентным штаммом A/turkey/Italy/3675/99 H7N1, было проведено интра-назальное заражение десяти 30-суточных цыплят в дозе 6 lg ЭИД50/см3. Клинические признаки болезни наблюдали у четырех цыплят в период 3 - 5 суток после заражения.

Отмечены отказ от корма и воды, угнетенное состояние, диарея. Один из четырех заболевших цыплят пап через 6 суток после заражения, осталь-

ные 3 выздоровели. При вскрытии павшего цыпленка наблюдали признаки истощения, незначительную отечность легких, катаральное воспаление слизистой кишечника.

В клоакальных смывах вирус обнаруживали в течение 10 суток с применением теста Flu Detect и вирусовыделения. С использованием набора A1V Ag вирус был выявлен лишь в одной пробе, отобранной через 3 суток после заражения.

Из ротоглоточных смывов вирус выделяли в течение 9 суток эксперимента, тогда как применение набора Flu Detect позволило обнаружить вирус в пробе, отобранной через 3 суток после заражения. Набор AIV Ag не обнаружил вирус ни в одной из проб.

При вскрытии цыплят, убитых через 14 суток, и цыпленка, павшего на б сутки после заражения, был проведен отбор проб внутренних органов. Вирус был выделен из нескольких проб органов цыпленка, павшего на 6 сутки после заражения, и определены его титры: 2,3 lg ЭИД50/см3 в легких, 2,5 lg ЭИД50/см3 в кишечнике, 4,5 lg ЭИД50/см3 в паренхиматозных органах. С использованием набора Flu Detect вирус был обнаружен в суспензии паренхиматозных органов, а с использованием теста AIV Ag не выявлен ни в одной из проб. При исследовании органов цыплят, убитых через 14 суток, вирус не был обнаружен ни в одной из проб.

В сыворотках крови цыплят, отобранных на 14 сутки после заражения, в РТГА и РДП были обнаружены специфические антитела к вирусу гриппа. Уровень антител к гемагглютинину Н7 находился в пределах 6-8 log2.

Применение экспресс-тестов для обнаружения вируса гриппа в пробах биоматериала

В последние годы в ветеринарии и здравоохранении находят все более широкое применение экспресс-тесты, позволяющие обнаружить вирус гриппа. Применение экспресс-тестов с целью идентификации вируса непосредственно в очаге болезни может значительно ускорить постановку диагноза в комплексе ветеринарно-санитарных мероприятий.

Как правило, эти экспресс-тесты основаны на иммунохроматографиче-ской идентификации антигена (НА-, NA- или NP-белков) вируса гриппа А и позволяют обнаружить вирус в течение 10-30 мин. (Chen 2008, Peng, 2008, Woolkock 2005, Yamanaka 2008).

С целью изучения возможности применения экспресс-тестов для обнаружения вируса гриппа птиц в пробах биоматериала были отобраны коммерческие наборы, разрешенные к применению в Российской Федерации: Flu Detect (Synbiotics, Франция) и AIV Ag (Anigen, Корея), предназначенные для выявления вируса гриппа А; Н5 AIV Ag (Anigen, Корея) - для обнаружения гемагглютинина вируса гриппа А/Н5; Н7 AIV Ag (Anigen, Корея) - для обнаружения гемагглютинина вируса гриппа А/Н7; Н9 AIV Ag (Bionote, Корея) -для обнаружения гемагглютинина вируса гриппа А/Н9.

Данные тест-системы рекомендованы производителями для индикации вируса гриппа в клоакальных, ротоглоточных смывах и фекалиях птиц. Кроме того, наборы пригодны для полевых исследований и полностью укомплектованы необходимыми компонентами.

Также в работе был использован экспресс-тест BD Directigen EZ Flu A+B (Becton, Dickinson and Company, США), предназначенный для обнаружения и дифференциации вируса гриппа А и В в носо- и ротоглоточных, тра-хеальных смывах человека.

Для изучения возможности выявления различных штаммов вируса гриппа с применением указанных наборов был проведен ряд экспериментов.

Таблица 3

Активность штаммов и минимальные титры вируса гриппа А,

выявляемые с использованием экспресс-тестов (п=3)_

Название штамма* Гемагглюти-нирующая активность, log2 Инфекционная активность, lg ЭИДм/см3 Минимальный титр вируса (lg ЭИД5о/см!), определяемый с использованием

Flu Detect AIV Ag BD**

A/NJ/8/76-Equine-1 H1N7 7,0 7,6 4,6 5,6 4,6

A/pintail/Alberta/293/77 H2N9 7,0 7,6 4,6 5,6 4,6

A/dk/Ukraine/1/63 H3N8 8,0 7,6 4,6 5,6 4,6

A/mynah/Mass/71 H4N8 8,0 9,1 6,1 7,1 6,1

A/Ty/Wisconsin/68 H5N9 7,0 8,1 5,1 6,1 5,1

A/Ty/Mass/65 H6N2 7,0 7,6 4,6 5,6 4,6

A/Ty/Ontario/63 H6N8 8,0 8,5 4,5 6,5 4,5

A/Equine-1 -Swine/Tenn/ 3/76 H7N1 8,0 7,6 3,6 5,6 3,6

A/Ty/Oregon/71 H7N3 8,0 8,1 4,1 6,1 4,1

A/Ty/Ontario/6118/67 H8N4 7,0 8,1 4,1 6,1 4,1

A/gul[/Mary(and/443S/80 H9N5 8,0 7,6 3,6 5,6 3,6

A/Ck/Germany/49 H10N7 9,0 8,1 5,1 6,1 5,1

A/dk/Memphis/546/74 HUN9 8,0 7,5 4,5 5,5 4,5

A/dk/Alberta/60/76 H12N5 9,0 8,1 5,1 7,1 5,1

A/gull/Maryland/704/74 H13N6 7,0 8,1 5,1 7,1 5,1

A/mallard/Gurjev/263/82 H14N1 8,0 7,1 4,1 6,1 4,1

A/shearwater/W. Australia/ 2576/99 H15N9 8,0 7,6 4,6 6,6 4,6

аллантоисная жидкость СПФ-КЭ отр. отр. отр. отр. отр.

ФБР (pH 7,0-7,2) отр. отр. отр. отр. отр.

Примечание: отр. - отрицательный результат исследований; * - названия приведены в соответствии с сопроводительными документами, предоставленными NVSL, США; ** - полное название - BD Directigen EZ Flu A+B

Из таблицы 3 видно, что минимальное количество вируса, определяемое с использованием наборов Flu Detect и BD Directigen EZ Flu A+B, составило 3,6 - 6,1 lg ЭИД50/см . Значения минимальных титров вируса, определяемых с использованием набора A1V Ag, были выше (5,5 - 7,1 lg ЭИД50/см3).

Особый интерес представляет оценка минимального количества вируса гриппа птиц А/Н5. Из результатов, представленных в таблице 4, видно, что минимальное количество вируса, определяемое с использованием наборов Flu Detect и BD Directigen EZ Flu A+B, составило 3,7 - 4,2 lg ЭИД50/см3.

Таблица 4

Активность штаммов и минимальные титры вируса гриппа птиц А/Н51Ч1, выявляемые с использованием экспресс-тестов (п=3)

Название штамма ГА, log2 ИА, lg ЭИД,0/ см3 Минимальный титр вируса (lg ЭИД5о/см3), определяемый с использованием

Flu Detect и BD Directigen EZ Flu A+B AIV Ag H5 AIV Ag

A/duck/Novosibirsk/02/05 H5N1 7.0 8,0 4,0 6.0 8.0

A/duck/Tambov/565/05 H5N1 5,0 8.0 4.0 6,0 8,0

A/s wan/Astrakhan/5 98/05 H5N1 6,0 7,7 3,7 5,7 7,7

A/cat/Dagestan/87/06 H5N1 6,0 8,0 4,0 6.0 8.0

А/chicken/Krasnodar/199/06 H5N1 6,0 7,7 3,7 4.7 7,7

A/chicken/Krasnodar/07/07 H5N1 7,0 8,2 4,2 6.2 8.2

A/chicken/Moscow/17/07 H5N1 7,0 8.2 4,2 6.2 8.2

A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1 7,0 8,0 4.0 5,0 8.0

A/Ty/Wisconsin/68 H5N9 7,0 8,1 5,1 6,1 8,1

аллантоисная жидкость СПФ-КЭ отр. отр. отр. отр. отр.

ФБР (pH 7,0-7,2) отр. отр. отр. отр. отр.

Примечание: отр. - отрицательный результат исследований,

ГА - гемагглютинирующая активность, ИА - инфекционная активность.

Значения минимальных титров вируса, определяемых с использованием набора AIV Ag, были выше (4,7 - 6,2 lg ЭИДзо/см3). Применение набора Н5 AIV Ag позволило выявить гемагглютинин эпизоотических штаммов вируса только в неразведенных препаратах (7,7 - 8,2 lg ЭИД50/см3). С применением набора Н5 AIV Ag удалось выявить гемагглютинин штамма A/Ty/Wisconsin/68 H5N9 только в нативном препарате (8,1 lg ЭИДзо/см3). Использованные в работе изоляты ВГП не были обнаружены при применении наборов Н7 AIV Ag и Н9 AIV Ag.

Практический и научный интерес имеет и определение минимальных количеств вируса гриппа птиц А/Н7. В работе использовали высоко- и низковирулентные штаммы вируса гриппа A/H7N1 и A/H7N3, выделенные в 1999-2002гг., в том числе при вспышках ВПГП в Италии, а также референтные штаммы подтипов A/H7N1 и A/H7N3. Использованные в работе изоляты ВГП не были обнаружены при применении наборов Н5 AIV Ag и Н9 AIV Ag.

Таблица 5

Активность штаммов и минимальные титры вируса гриппа птиц А/Н7, _выявляемые с использованием экспресс-тестов (п=3)_

Название штамма ГА, log2 ИА, lg ЭИД50/ см3 Минимальный титр вируса (lg ЭИД50/СМ3), определяемый с использованием

Flu Detect и BD Directigen EZ Flu A+B AIV Ag H7 AIV Ag

A/turkey/Italy/9289/02 H7N3 7,0 9,0 4,0 6,0 9,0

A/turkey/ItaIy/3675/99 H7N1 7,0 9,0 4,0 6,0 9,0

A/turkey/I taly/1387/00 H7N1 6,0 8,7 3,7 5,7 8,7

A/turkey/Italy/2984/00 H7N1 7,0 9,0 4,0 6,0 9,0

A/turkey/Italy/4580/99 H7NI 6,0 9,2 4,2 5,2 8,2

A/Equine-l-Swine/Tenn/3/76 H7N1 8,0 7,6 3,6 5,6 7,6

A/Ty/Oregon/71 H7N3 8,0 8,1 4,1 6,1 8,1

аллантоисная жидкость СПФ-КЭ отр. отр. OTp. отр. отр.

ФБР (рН 7,0-7,2) отр. отр. отр. OTp. отр.

Примечание: отр. — отрицательный результат; ГА - гемагглютинирующая активность; ИА — инфекционная активность.

Согласно данным, приведенным в таблице 5, видно, что минимальное количество вируса подтипа А/Н7, определяемое с использованием наборов Flu Detect и BD Directigen EZ Flu A+B, составило 3,6 - 4,1 lg ЭИД5о/см3. Значения минимальных титров вируса, определяемых с использованием набора AIV Ag, были выше (5,2 - 6,1 lg ЭИД5о/см3).

Применение набора Н7 AIV Ag позволило выявить гемагглютинин исследуемых штаммов вируса в суспензиях с активностью не менее 7,6 - 9,0 lg ЭИДзо/см3.

При исследовании десятикратных разведений вируса с использованием экспресс-теста Н9 AIV Ag, приготовленных из штамма A/gull/Maryland/4435/80 H9N5, гемагглютинин был выявлен только в нераз-веденном препарате (7,6 lg ЭИД5о/см3).

Установлено, что набор Flu Detect обладает высокой аналитической чувствительностью и выявляет вирус гриппа различных подтипов в титрах 3,6-6,1 lg ЭИД50/см3.

Экспресс-тесты, предназначенные для обнаружения гемагглютинина подтипов Н5, Н7 и Н9, обладали низкой чувствительностью и выявляли вирус в титрах не менее 7,6 - 9,0 lg ЭИД50/СМ3, что ограничивает возможность их применения в полевых условиях.

Разработка «Набора для выявления антител к вирусам ньюкаслской болезни и гриппа птиц подтипов Н5 и Н7 в реакции торможения гемагглютипации»

Одним из вирусологических методов, применяемых для диагностики ньюкаслской болезни и гриппа птиц, является реакция торможения ге-магглютинации. К преимуществам метода относятся возможность исследования сывороток крови разных видов птиц, отсутствие необходимости использования дорогостоящего оборудования и относительная простота проведения исследований.

Для разработки набора были выбраны референтные штаммы ВГП А/ёисШоуоз1Ыг5к/02/05 Н5ТЧ1 и А/Ег^1апс1/ЯАУ/4054/06 Н7Ш и штамм Ла-Сота ВНБ с известными биологическими свойствами (БЬтка, 2009, Фролов 2007,2007, Старое 2003).

Для получения расплодок, пригодных для проведения вирусологических работ, штамм вируса А/с1иск/Моуо51Ыг5к/02/05 Н5Ш в дозе 2,0 ^ ЭИД50/см3, штаммы А/&щ1ап(1/КАУ/4054/06 НЖЗ и Ла-Сота в дозе 4,0 ^ ЭИД5()/см3 инокулировали в аллантоисную полость КЭ. Инкубировали в течение 48-72 часов при 37°С, затем охлаждали в течение 8-12 часов при 4-8°С. Вируссодержащую ЭЭЖ отбирали в стерильные флаконы, затем центрифугировали при 2000 g в течение 30 минут. Гемагглютинирующую и инфекционную активность полученных расплодок ВГП АУН7ЫЗ и Н5Ш и ВНБ определяли в РГА и титрованием в эмбрионах кур. В результате был получен высокоактивный вируссодержащий материал (таблица 6).

В результате инактивации вирусного сырья было установлено отсутствие инфекционности штаммов при сохранении их гемагглютинирующей активности. К инактивированным антигенам ВГП и ВНБ в качестве стабилизаторов добавляли сахарозу, желатин и гидролизат лактальбумина в конечной концентрации 2%, 4% и 3%, соответственно, и антибиотики, разливали по 2 см3 во флаконы, замораживали до минус 60-65°С, выдерживали при этой температуре не менее суток и проводили сублимационное высушивание. По окончании лиофилизации гемагглютинирующая активность антигенов оставалась неизменной.

Одним из необходимых условий для получения воспроизводимых и достоверных результатов РТГА является стабильность препаратов антигенов при хранении. Для этого исследовали возможность хранения антигенов вирусов в лиофилизированном и растворенном состояниях. С целью изучения активности антигена при хранении в растворенном состоянии препарат разводили непосредственно перед первым тестированием, далее антиген хранили при различных температурных режимах. В результате исследований установлено, что активность всех антигенов, хранящихся в лиофилизированном состоянии при 4°С, сохранялась на одном уровне в течение первого года хра-

нения, а затем постепенно снижалась. Активность антигенов в растворенном виде сохранялась в течение 1 недели при 4°С и 6 месяцев при минус 10°С.

Таблица 6

Активность вирусного материала, используемого для получения антигенов вирусов гриппа и ньнжаслской болезни птиц (п=3)

Штамм вируса Активность в Инфекционная активность, lg ЭИДзо/см3

РДП РГА, log2

A/duck/Novosibirsk/02/05 H5N1 +* 8,0 9,2±0,13

A/England/RAV/4054/06 H7N3 + 9,0 9,5±0,21

Ла-Сота н/и 11,0 9,8±0,13

Примечание: * - положительный результат; н/и - не исследовали

Гипериммунные сыворотки крови, полученные после двукратной иммунизации кур, имели активность в РТГА не ниже 8,0 log2- Нормальную и гипериммунные сыворотки крови кур подвергали лиофильному высушиванию. Предварительно добавляли сахарозу и желатин до конечных концентраций 2%, разливали по 0,5 см3 во флаконы, замораживали до температуры минус 55-60°С и выдерживали при этой же температуре не менее суток.

Активность лиофилизированных гипериммунных сывороток крови кур в РТГА была не менее 8,0 log2. Нормальная сыворотка не реагировала ни с одним из исследованных антигенов. Для изучения специфической активности гипериммунных к ВНБ и ВГП А/Н5 и А/Н7 и отрицательной сывороток в РТГА исследовали антигены возбудителей, обладающих гемагглютинирую-щей активностью, производства ФГУ «ВНИИЗЖ» (ВНБ, ССЯ-76, МГ); 19 референтных антигенов (16 гемагглютинирующих подтипов вируса гриппа птиц (Н1-Н16)) производства IZSVe (Италия). Растворение препарата в исходное состояние осуществляли путем добавления 0,5 см3 ФБР (таблица 7).

Таблица 7

Активность гипериммунных и нормальной сывороток в РТГА (п=3)

Антиген Сыворотка против ВНБ, log2 Сыворотка против ВГП, log2 Нормальная сыворотка, •og2

A/H5N1 A/H7N3

A/H5N1 отр. 8,3 отр. отр.

A/H7N3 отр. отр. 8,3 отр.

ВНБ 9,0 отр. отр. отр.

Примечание: отр. - отрицательный результат

Следующим этапом изучали длительность хранения положительной и отрицательной сывороток в лиофилизированном и растворенном состоянии

при различных температурах. При хранении в лиофилизированном состоянии гипериммунные сыворотки крови кур против ВГП А/Н51Ч1, А/НТЫЗ и ВНБ не теряли свою антигемагглютинирующую активность в течение 12 месяцев при температуре хранения 4°С. Дальнейшее хранение сывороток до 18 месяцев (срок наблюдений) при температуре 4°С вызывало снижение активности препарата. Активность сывороток в растворенном виде сохранялась в течение 1 месяца при 4°С и 6 месяцев при минус 10°С. Нормальная сыворотка крови не реагировала ни с одним из антигенов в течение всего периода хранения.

В состав «Набора для выявления антител к вирусам ньюкаслской болезни и гриппа птиц подтипов Н5 и Н7 в реакции торможения гемагглюти-нации» был включен набор солей и 96-луночные полистироловые микропанели для иммунологических реакций, что позволяет стандартизировать неспецифические компоненты реакции независимо от места и времени проведения исследований.

Полученные результаты исследований явились основанием для разработки нормативной документации на изготовление партии набора и его использования в ветеринарной практике.

ВЫВОДЫ

1. При заражении 6-недельных цыплят вирусом гриппа А/Н5М1 гибель всех птиц происходила в период 2-4 суток после инфицирования. Болезнь протекала в острой форме с характерными признаками и патологическими изменениями. Титр вируса во внутренних органах достигал 7,7 ^ ЭИД50/см3.

2. В результате заражения вирусом гриппа А/сЫскеп/Рптогзку/85/08 Н5№ разных видов водоплавающих птиц вирус вызывал гибель всех 18-суточных серых гусят, 27-суточных крякв и мускусных утят. Инкубационный период болезни длился не менее 2 суток. Титр вируса во внутренних органах достигал 7,0 ^ ЭИД5о/см3.

3. При заражении вирусом гриппа А/сЫскеп/Рптог5ку/85/08 Н51Ч1 годовалых крякв и 37-суточных мускусных утят происходило заболевание всех птиц, некоторые птицы были способны к выздоровлению уже к 10 суткам эксперимента. Инкубационный период болезни длился не менее 3 суток. Титр вируса во внутренних органах достигал 4,2 ^ ЭИД50/см3.

4. Заражение 30-суточных цыплят высоковирулентным вирусом А/Н7Ы1 вызывало острую генерализованную болезнь и гибель всех птиц в течение 2 суток после инфицирования. Титр вируса во внутренних органах цыплят достигал 7,8 ЭИДзо/см3.

5. Заражение 30-суточных цыплят низковирулентным вирусом А/Н7Ы1 вызывало незначительную гибель цыплят с признаками истощения, отечности легких и воспаления кишечника. Титр вируса во внутренних орга-

нах павших цыплят достигал 4,5 lg ЭИД50/см3. Болезнь регистрировали у ряда птиц в период с 3 по 5 сутки, большинство заболевших цыплят выздоравливали.

6. В результате изучения накопления вируса гриппа А/Н5 и А/Н7 в органах разных видов птиц наиболее высокие титры вируса содержались в кишечнике, паренхиматозных органах (легких, печени, почках, селезенке), головном мозге и сердце, что позволяет рекомендовать перечисленные органы для лабораторной диагностики гриппа птиц.

7. При применении набора Flu Detect высоковирулентные вирусы A/H5N1 и A/H7N1 выявляли в 61 % отобранных смывов цыплят, причем на 13 % чаще в клоакальных пробах. Низковирулентный вирус A/H7N1 при помощи набора Flu Detect выявляли в единичных смывах, преимущественно клоакальных.

8. В смывах здоровых, больных и павших серых гусят и мускусных утят при помощи набора Flu Detect вирус A/H5N1 на 10,3 % чаще выявляли в клоакальных пробах. В смывах, отобранных от 27-суточных и годовалых крякв, при помощи набора Flu Detect вирус на 9,6% чаще выявляли в рото-глоточных пробах. Во всех случаях количество положительных результатов, полученных с использованием набора Flu Detect, было существенно ниже, чем при выделении вируса в куриных эмбрионах.

9. В результате сравнительного изучения экспресс-тестов для обнаружения вируса гриппа в пробах биоматериала набор Flu Detect обладал высокой аналитической чувствительностью и выявлял референтные и эпизоотические штаммы вируса в титрах не менее 3,6-6,1 lg ЭИД50/СМ3 и 3,6 - 4,2 lg ЭИД5()/см3, соответственно.

10. Разработан «Набор для выявления антител к вирусам ньюкаслской болезни и гриппа птиц подтипов Н5 и Н7 в реакции торможения гемагглю-тинации». Установлено, что полученные антигены, реагируют только с гомологичными гипериммунными сыворотками в титрах 7,3-8,0 log2 для ге-магглютинина Н5, в титрах 7,7-8,0 log2 для гемагглютинина Н7, в титрах 9,0 log2 для ньюкаслской болезни.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

На основании проведенных исследований разработаны в соавторстве и рекомендованы для практического применения методические рекомендации, утвержденные ФГУ «ВНИИЗЖ»:

«Методические рекомендации по определению индекса патогенности штаммов вируса гриппа А птиц» (2010);

«Методические рекомендации по определению нейраминидазного подтипа вируса ГП и антител к вирусу ГП в реакции ингибиции нейрамини-дазной активности» (2011);

«Методические рекомендации по идентификации вируса гриппа птиц в реакции торможения гемагглютинации» (2011).

«Методические рекомендации по отбору, хранению и транспортировке биологического материала при гриппе А птиц», утвержденные Россель-хознадзором(2011).

СТО ФГУ «ВНИИЗЖ» 00495527-0161-2010, одобренный ученым советом и утвержденный директором ФГУ «ВНИИЗЖ» (2011).

5.СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Чвала И.А., Абрамова Л.Ю., Власов H.A. / Экспресс-тесты для выявления вируса гриппа А в пробах биоматериала // Ветеринария. - 2009. - № 9. -С. 27-31.

2. Случай выделения вируса гриппа А подтипа H4N6 в популяциях си-нантропных птиц в Российской Федерации / Чвала И.А., Андриясов A.B., Мудрак Н.С., Борисов A.B., Дрыгин В.В., Абрамова Л.Ю. // Ветеринария. -2009. -№ 10. -С. 19-20.

3. Особенности течения гриппа А у уток-крякв, вызванного A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1 / Чвала И.А., Щербакова Л.О., Шульпин М.И., Ю.Ю. Бабин Ю.Ю., Варкентин A.B., Щелканов М.Ю., Мудрак Н.С., Борисов A.B., Дрыгин В.В., Абрамова Л.Ю., Власов H.A. // Ветеринария. -2009.-№ 10.-С.25-26.

4. Инфекция гриппа птиц, вызванная вирусом подтипа H7N1 / Абрамова Л.Ю., Чвала И.А., Бабин Ю.Ю., Мудрак Н.С., Борисов A.B., Дрыгин В.В., Власов H.A. // Ветеринария . - 2010. - №10. - С. 26-30.

5. Изучение вирулентных свойств изолятов вируса гриппа A/H5NI, выделенных в Российской Федерации в 2005 году / Абрамова Л.Ю., Чвала И.А., Андриясов A.B., Пчёлкина И.П., Манин Т.Б., Мудрак Н.С., Ирза В.Н., Борисов A.B., Дрыгин В.В., Старов С.К. // Ветеринарная медицина: М1жвщ. тем. наук. зб. - 2010. - Вып. 94. - С. 54-56.

6. Биологические свойства вируса гриппа A/H4N6, выделенного от си-нантропных птиц в Ростовской области / Абрамова Л.Ю., Чвала И.А., Андриясов A.B., Пчёлкина И.П., Колосов С.Н., Бабин Ю.Ю.// Ветеринария и кормление. - 2010. - № 6. - С. 6-7.

7. Особенности инфекции гриппа А у молодняка водоплавающих птиц, вызванной A/chicken/Primorsky/85/08/H5Nl / Чвала И.А., Абрамова Л.Ю., Бабин Ю.Ю., Щербакова Л.О., Варкентин В.В., Мудрак Н.С., Дрыгин В.В.. // Ветеринария . - 2010. - № 12. - С. 28-30.

8. Протективные свойства вакцины против гриппа птиц / Чвала И.А., Щербакова Л.О., Бабин Ю.Ю., Шульпин М.И., Абрамова Л.Ю., Рунина И.А., Борисов A.B., Власов H.A., D. Suarez // Вестник ветеринарии. - 2010. - №55. -С. 40-44.

9. Characteristics of influenza A infection caused by A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1 virus in mallards / I.A. Chvala, L.O. Scherba-kova, L.Y. Abramova, M.I. Shulpin, A.V. Varkentin, Y.Y. Babin, N.S. Mudrak, V.V. Drygin // BirdFlu 2009: Avian Influenza and Human Health . - Oxford, UK, 2009. - P. 23-25.

Отпечатано в ООО «ВП24» Подписано в печать 26.04.2011 Тираж 100 экз. Усл.пл. 1 Москва, ул. Трубная, д.21 тел. 651-64-48

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Абрамова, Людмила Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Классификация и номенклатура вируса гриппа птиц.

1.2. Состав и морфология вируса гриппа.

1.3. Репродукция вирусов гриппа А.

1.4. Устойчивость вируса к физико-химическим факторам.

1.5. Биологические свойства вируса гриппа.

1.6. Источники и пути передачи инфекции.

1.7. Восприимчивые животные.

1.8. Особенности инфекции у разных видов птиц.

1.9. Наиболее значимые эпизоотии гриппа А среди птиц.

1.10. Эпизоотия азиатского вируса подтипа Н51Ч1.

1.11. Профилактика и мероприятия по ликвидации эпизоотических очагов.

1.12. Лабораторная диагностика гриппа птиц.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Особенности гриппа у разных видов птиц в экспериментальных условиях и эффективность методов выявления возбудителя"

Вирус гриппа птиц относится к роду 1пйиепгау1гиз А семейства ОгЛотухоутёае. Различные штаммы «могут существенно различаться по вирулентности, биологические свойства вируса гриппа А разнообразны. Высоковирулентные штаммы способны , вызвать острую контагиозную болезнь, сопровождаемую системным поражением различных тканей и органов, причем смертность может достигать 100%. Высокопатогенный грипп птиц включен- в перечень карантинных и особо опасных болезней животных и способен к эпизоотическому распространению (8, 146, 147, 208).

За последнее десятилетие эпизоотическая ситуация по высокопатогенному гриппу птиц в мире значительно изменилась (10, 54, 56, 63, 71, 90). Прежде всего, повышенное внимание сотрудников ветеринарных служб вызвано распространением вируса гриппа А/Н5Ш, сформировавшегося в странах Азии и вызвавшего эпизоотию среди диких и сельскохозяйственных птиц (54, 62, 75, 109). Первые случаи заболевания на территории Российской Федерации были зарегистрированы в июне 2005 г. в Западной Сибири, и затем очаги болезни возникали с различной периодичностью в Сибирском, Уральском, Южном, Центральном и Дальневосточном федеральных округах на протяжении 2005 - 2010гг. Следует отметить, что в нескольких регионах, кроме диких птиц, пострадало птицепоголовье в населенных пунктах и промышленных птицеводческих предприятиях (3, 10, 16, 25, 26; 27, 31, 40, 50). Начиная с 2005г. вспышки болезни, вызванные высокопатогенным вирусом А/Н5Ш, регистрировали в странах Азии, Европы и Африки, причем в некоторых регионах болезнь стала эндемичной (54, 65, 89, 97). Особое беспокойство вызывают случаи распространения за пределы стран Азии генетически отличных форм вируса и их вероятная эволюция в новых экосистемах (49; 115).

Существенную угрозу для птицеводства Российской Федерации представляет вирус высокопатогенного гриппа подтипа Н7, за последнее десятилетие вызвавший вспышки болезни в странах Европьъ (Италия, 1999-2000гг., Голландия, Бельгия' и Германия, 2003г., Англия, 2008г.), Азии (Корея, 2005г.), а также в Чили (2002г.) и Канаде (2003 и 2007гг.). Всего погибло и было уничтожено примерно 60 миллионов сельскохозяйственных птиц, а также нанесен значимый урон популяциям диких птиц (54, 63, 64, 94, 95, 131, 232). Возможный занос и распространение вируса может причинить значимый экономический ущерб птицеводческой отрасли Российской Федерации.

Своевременная постановка диагноза является залогом успешного выполнения последующих ветеринарно-санитарных мероприятий и позволяет значительно снизить возможный ущерб. В комплексе диагностических мероприятий решающее значение имеет лабораторная диагностика гриппа птиц. Однако, существенное влияние на результаты лабораторных исследований может оказать качество и скорость выполнения преаналитических (долабора-торных) мероприятий, которые, как правило, осуществляются в полевых условиях и менее всего стандартизированы. Факторы, влияющие на проведение данного этапа работ, весьма разнообразны и включают клиническое состояние животного на момент обследования (вид и возраст животного, диагностические и лечебные мероприятия, иммунный статус, наличие ассоциированных заболеваний и др.), условия отбора проб биоматериала и др. По различным оценкам до 80% ошибок приходится на преаналитический этап лабораторных исследований (20), причем наиболее распространенные ошибки связаны с процедурой сбора, хранения и транспортировкой проб биоматериала. Учитывая разнообразие клинических признаков и патологоанатомиче-ских изменений при гриппе птиц, определенные трудности возникают и при постановке предварительного диагноза, что препятствует своевременному проведению ветеринарно-санитарных мероприятий и ликвидации очага болезни:

Таким образом; очевидна необходимость изучения, особенностей течения! высокопатогенного и низкопатогенного гриппа птиц, вызванного современными эпизоотическими- штаммами вируса, а также выбора органов-различных видов птиц, содержащих наибольшее количество вируса и* пригодных для дальнейших лабораторных исследований. Описание клинических признаков и патологоанатомических изменений у различных видов птиц также является актуальной задачей для ветеринарной практики.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Описать особенности высокопатогенного гриппа А/Н5№ при заражении цыплят различными эпизоотическими изолятами вируса.

2. Изучить особенности высокопатогенного и низкопатогенного гриппа А/Н7Ш при заражении цыплят.

5. Разработать набор для выявления антител к вирусам ньюкаслской болезни и гриппа птиц подтипов Н5 и Н7 в реакции торможения гемагглютина-ции.

Научная новизна. Впервые представлены экспериментальные данные по изучению особенностей высококопатогенного гриппа А/Н5№ у разных видов диких и сельскохозяйственных птиц.

Впервые проведено сравнительное изучение разрешенных к применению в Российской! Федерации коммерческих экспресс-тестов для обнаружения вируса гриппа в пробах биоматериала: Flu Detect, AIV Ag, H5 AIV Ag, H7AIV Ag,H9AIV Ag.

Разработан «Набор для выявления антител к вирусам ньюкаслской болезни и гриппа птиц подтипов Н5 и Н7 в реакции торможения гемагглютина-ции».

Практическая значимость. На основании проведенных исследований разработаны и утверждены ФГУ «ВНИИЗЖ»: «Методические рекомендации по определению индекса патогенности штаммов вируса гриппа А птиц», «Методические рекомендации по определению нейраминидазного подтипа вируса ГП и антител к вирусу ГП в реакции ингибиции нейраминидазной*активности», «Методические рекомендации по идентификации вируса гриппа птиц в реакции торможения гемагглютинации».

Основные положения, выносимые на защиту:

- особенности гриппа A/H5N1 у разных видов диких и сельскохозяйственных птиц;

- особенности гриппа у цыплят, вызванного высоко- и низковирулентными штаммами вируса A/H7N1;

- выявление вируса гриппа птиц в пробах биоматериала с применением коммерческих экспресс-тестов;

Апробация результатов. Результаты исследований по теме диссертации доложены и обсуждены на Международной научной конференции «Грипп птиц 2009: Грипп птиц и здоровье человека» (Великобритания, Оксфорд, 2009); Международной научно-практической конференции «Современные системы биобезопасности и биозащиты в ветеринарной медицине» (Феодосия, Украина, 2010), Международной научно-практической конференции молодых ученых «Достижения молодых ученых в ветеринарную практику», посвященной 30-летию создания СМУ ФГУ «ВНИИЗЖ» (Россия, Владимир, 2010) и на заседаниях учёного совета ФГУ «ВНИИЗЖ» в 20082010 гг.

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы выполнены совместно с сотрудниками ФГУ «ВНИИЗЖ» Чвала И.А., Бабиным Ю.Ю., Циванюк М.А., Сарбасовым А.Б., за что автор выражает им искреннюю благодарность.

Публикация научных исследований. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 7 работ опубликовано в изданиях, включенных в Перечень ведущих периодических изданий ВАК РФ.

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Абрамова, Людмила Юрьевна

4. ВЫВОДЫ

1. При заражении 6-недельных цыплят вирусом гриппа A/H5N1 гибель всех птиц происходила в период 2 — 4 суток после инфицирования. Болезнь протекала в острой форме с характерными признаками и патологическими о изменениями. Титр вируса во внутренних органах достигал 7,7 lg ЭИД50/см .

2. В результате заражения вирусом гриппа A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1 разных видов водоплавающих птиц вирус вызывал гибель всех 18-суточных серых гусят, 27-суточных крякв и мускусных утят. Инкубационный период болезни длился не менее 2 суток. Титр вируса во внутренних органах достигал 7,0 lg ЭИД50/см3.

3. При заражении вирусом гриппа A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1 годовалых крякв и 37-суточных мускусных утят происходило заболевание всех птиц, некоторые птицы были способны к выздоровлению уже к 10 суткам эксперимента. Инкубационный период болезни длился не менее 3 суток. л

Титр вируса во внутренних органах достигал 4,2 lg ЭИД50/см .

4. Заражение 30-суточных цыплят высоковирулентным вирусом A/H7N1 вызывало острую генерализованную болезнь и гибель всех птиц в течение 2 суток после инфицирования. Титр вируса во внутренних органах о цыплят достигал 7,8 lg ЭИД50/см .

5. Заражение 30-суточных цыплят низковирулентным вирусом A/H7N1 вызывало незначительную гибель цыплят с признаками истощения, отечности легких и воспаления кишечника. Титр вируса во внутренних органах о павших цыплят достигал 4,5 lg ЭИД50/см . Болезнь регистрировали у ряда птиц в период с 3 по 5 сутки, большинство заболевших цыплят выздоравливали.

8. В смывах здоровых, больных и павших серых гусят и мускусных утят при помощи набора Flu Detect вирус A/H5N1 на 10,3 % чаще выявляли в клоакальных пробах. В смывах, отобранных от 27-суточных и годовалых крякв, при помощи набора Flu Detect вирус на 9,6% чаще выявляли в ротог-лоточных пробах. Во всех случаях количество положительных результатов, полученных с использованием набора Flu Detect, было существенно ниже, чем при выделении вируса в куриных эмбрионах.

ЭИД50/см , соответственно.

10. Разработан «Набор для выявления антител к вирусам ньюкаслской болезни и гриппа птиц подтипов Н5 и Н7 в реакции торможения гемагглюти-нации». Установлено, что полученные антигены, реагируют только с гомологичными гипериммунными сыворотками в титрах 7,3-8,0 log2 для гемагглю-тинина Н5, |в титрах 7,7-8,0 log2 для гемагглютинина Н7, в титрах 9,0 log2 для ньюкаслской болезни.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Методические рекомендации по определению индекса патогенности штаммов вируса гриппа А птиц» (2010);

Методические рекомендации по определению нейраминидазного подтипа вируса ГП и антител к вирусу ГП в реакции ингибиции нейраминидаз-ной активности» (2011);

Методические рекомендации по идентификации вируса гриппа птиц в реакции торможения гемагглютинации» (2011).

Методические рекомендации по отбору, хранению и транспортировке биологического материала при гриппе А птиц», утвержденные Россельхоз-надзором(2011).

СТО ФГУ «ВНИИЗЖ» 00495527-0161-2010, одобренный ученым советом и утверждений директором ФГУ «ВНИИЗЖ» (2011).

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Абрамова, Людмила Юрьевна, Владимир

1. Аминокислотные замены в гемагглютинине вируса гриппа подтипа Н5, влияющие на антигенную специфичность и вирулентность вируса птиц / П.С. Крылов, ИА. Руднева, Т.А. Тимофеева и др. // Вопросы вирусологии. 2009. - № 5. - С. 14 - 19.

2. Бёме, Р. Л. Птицы открытых и околоводных пространств СССР / Р.Л. Бёме, A.A. Кузнецов // Москва: Просвещение, 1983. С. 35 - 176. кряква

3. Биологические свойства вируса гриппа птиц подтипа H5N1, выделенного в Российской Федерации в 2006 году / И.А. Чвала, Т.Б. Манин, В.В. Дрыгин, Е.В. Велик // Вет. патология. 2007. - № 4(23). - С. 118-121.

4. Биология вирусов животных: в 2-х т. / Ф. Феннер, Б. Мак-Ослен, С. Миме и др. 2 изд., доп. - Москва: Мир. - 1977. - Т. 1. - 13-331 с.

5. Борисов, A.B. Клинические признаки и патологоанатомические изменения при гриппе птиц / А. В. Борисов, В. Н. Ирза // РацВетИнформ. 2007. - № 3. - С. 7-8.

6. Васильев, Ю.М. Вакцины против вируса гриппа птиц / Ю.М. Васильев // Вопросы вирусологии. 2008. - № 6. - С. 4 - 16.

7. Васильев, Ю.М. Сравнительное изучение размножения вирусов гриппа птиц в культуре клеток и куриных эмбрионах / Ю.М. Васильев, И.А. Руднева, И.Б. Коптяева // Вопросы вирусологии. 2009. - № 4. С. 18 - 23.

8. Вирусные болезни животных / В. И. Сюрин, А. Я. Самуйленко, Б. В. Соловьёв, И. В. Фомина. -М.: ВНИИТиБП, 1998. С. 233-238, 324-336.

9. Вспышки гриппа у лебедей и пеликанов в Дагестане в 2006 г. / A.B. Фролов, A.B. Борисов, Г.Х. Асаев и др. // Рос. вет. журн. С.-х. животные. Спец. вып., посвящ. 50-летию ФГУ "ВНИИЗЖ". 2008. - С. 64-65.

10. Высокопатогенный грипп птиц. Текущая ситуация и меры контроля / H.A. Власов, В.Н. Ирза, A.B. Варкентин и др. // Ветеринария. 2010. - № 1. - С. 3-7.

11. Выявление антител к вирусу гриппа типа А в сыворотках крови диких и домашних птиц / H.H. Луговская , М.А. Циванюк , Н.С. Мудрак, В.В. Дрыгин // 2-й Междунар. вет. конгр. по птицеводству. 2006. - С. 42-46.

12. Грипп: обзор литературы / Н.С. Дудникова, В.В. Дрыгин, Л.О. Щербакова, A.B. Андриясов // ФГУ ВНИИЗЖ. Владимир. - 2005. - 59 с.

13. Дифференциальная диагностика гриппа птиц методом ПЦР / И.М. Обухов, Г.А. Шипулин, С.Б. Яцышина и др. // БИО. 2006. - № 4. - С. 1415.

14. Жданов В.М. Эволюция вирусов / В.М. Жданов // АМН СССР. М.: Медицина, 1990. - С. 153-167.

15. Зауер, Ф. Птицы обитатели озёр, болот и рек / Ф. Зауер // Москва: ACT, Астрель, 2002. С. 108-109. кряква

16. Изучение вирулентных свойств изолятов вируса гриппа A/H5N1, выделенных в Российской Федерации в 2005 году / JI. Ю. Абрамова, И.А. Чвала, A.B. Андриясов и др. // Ветеринарна медицина: м1жвщ. тем. наук, зб. 2010. - Вып. 94. - С. 54-56.

17. Киршина, A.A. Значение преаналитического этапа лабораторных исследований в обеспечении качества диагностики птичьего гриппа /A.A. Киршина, A.M. Пустынникова // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. — 2007. № 3. - С. 35-37.

18. Комплексное использование серологических методов для обнаружения антител к вирусу гриппа птиц подтипа Н5 в сыворотках крови диких и домашних птиц / H.H. Луговская, М.А. Циванюк, C.B. Фролов и др. // Вет. патология. 2006. - № 4. - С. 63-67.

19. Комплексный эколого-вирусологический мониторинг на территории Приморского края в 2003—2006 гг. / М.Ю. Щелканов, В.Ю. Ананьев, Д.К. Львов и др. // Вопросы вирусологии. 2007. - № 5. - С. 37- 41.

20. Межпопуляционные взаимодействия в системе вирусы гриппа А -животные человек / Д.К. Львов, С.С. Ямникова, А.Д. Забережный, Т.В. Гребенникова // Вопр. вирусологии. - 2005. - № 4. - С. 4-10.

21. Непрямой вариант ИФА для выявления и количественного определения антител к вирусу гриппа птиц при тестировании проб в одном разведении / М. А. Циванюк, H.H. Луговская, Н.С. Мудрак и др. // Вет. патология. -2007. № 4(23). - С. 132-137.

22. Оптимизация параметров культивирования штамма "Новосибирский" вируса гриппа птиц / С. В. Фролов, Т.Б. Манин, A.B. Борисов и др. // Тр. Федерального центра охраны здоровья животных. 2007. - Т. 5.-С. .131137.

23. Особенности течения гриппа А у уток-крякв, вызванного A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1 / И.А. Чвала, Л.О. Щербакова, М.И. Шульпин и др. // Ветеринария. 2009. - № 10. - С. 25-26.

24. Первый прорыв нового для России генотипа 2.3.2 высоковирулентного вируса гриппа A/H5N1 на Дальнем Востоке / Д.К. Львов, М.Ю. Щелканов, H.A. Власов и др. // Вопросы вирусологии. 2008. - № 5. - С. 4 - 9.

25. Получение и свойства моноклональных антител к высокопатогенному штамму вируса гриппа птиц A(H5N1), выделенного на территории Российской Федерации / A.A. Кущ, P.P. Климова, О.В. Масалова и др. // Вопросы вирусологии. 2008. - №5. - С. 9 - 14.

26. ПЦР тест-системы для диагностики гриппа птиц / И.Л. Обухов, Г.А. Шипулин, С.Б. Яцышина и др. // Ветеринария. 2006. - № 7. - С. 25-30.

27. Различная рецепторная специфичность вирусов гриппа уток и кур и ее отражение в составе сиалозидов на хозяйских клетках / A.C. Гамбарян,

28. B.П. Маринина, Т.А. Солодарь и др. // Вопр. вирусологии. 2006. - № 4.1. C. 24-32.

29. Разработка диагностического набора для определения уровня антител к вирусу гриппа птиц в РТГА / H.A. Чвала, М.А. Циванюк, H.H. Луговская и др. // 3-й Междунар. вет. конгр. по птицеводству. 2007. - С. 73-78.

30. Разработка диагностической тест-системы на основе "сэндвич"-ИФА для выявления вируса гриппа А птиц / Л.В. Жемаева, А.Ю. Козлов, С.С. Ямникова и др. / Вопросы вирусологии. 2009. - № 4. - С. 45 - 48.

31. Разработка конкурентного варианта ИФА для выявления антител к вирусу гриппа подтипа Н5 у различных видов птиц / М. А. Циванюк, H.H. Луговская, Н.С. Мудрак и др. // Вет. патология. 2007. - № 4(23). - С. 126132.

32. Разработка тест-систем для выявления и типирования вируса гриппа А на основе полимеразной цепной реакции / Д.Е. Киреев, Д.С. Аканина. Т.В. Гребенникова и др. // Вопросы вирусологии. 2007. - № 4. - С. 17-22.

33. Расшифровка эпизоотической вспышки среди диких и домашних птиц на юге европейской части России в декабре 2007 г. / Д. К. Львов, М.Ю. Щелканов, А.Г. Прилипов и др. // Вопросы вирусологии. -2008. № 4. - С. 18-23.

34. Рябицев, В. К. Птицы Урала, Приуралья и Западной Сибири /В.К. Рябицев // Екатеринбург: Издательство Уральского университета, 2001. С. 6263.кряква

35. Сравнительная оценка коммерческих тест-систем для диагностики гриппа птиц / H.H. Луговская, М.А. Циванюк, Н.С. Мудрак и др. // Вет. медицина: м1жвщ. тем. наук. зб. Харгав, 2006. - Вип. 87. - С. 112-121.

36. Степанян, Л.С. Конспект орнитологической фауны России и сопредельных территорий / Л.С. Степанян // Москва: Академкнига. 2003. - С. 54. кряква

37. Характеристика изолятов вируса гриппа подтипа H5N1, выделенных в 2006 и 2007 годах на территории ЮФО России / И.А. Чвала, Т.Б. Манин, И.П. Пчелкина и др. // Рос. вет. журн. С.-х. животные. Спец. вып., посвящ. 50-летию ФГУ "ВНИИЗЖ". -2008 С. 66-69.

38. Чвала, И.А. Экспресс-тесты для выявления вируса гриппа А в пробах биоматериала / И.А. Чвала, Л.Ю. Абрамова, H.A. Власов // Ветеринария. -2009.-№9.-С. 27-31.

39. Штамм для изготовления инактивированной вакцины против гриппа птиц (описание антигенных и биологических свойств) / С. В. Фролов, Т.Б. Манин, И.П. Пчёлкина и др. // Тр. Федерального центра охраны здоровья животных. 2007. - Т. 5. - С. 119-130.

40. Экспериментальные данные по выявлению вируса гриппа птиц с помощью магнитных иммуносорбентов / В.И. Ефременко, Д.К. Львов, П.Г. Дерябин и др. / Вопросы вирусологии. 2008. - № 3. - С. 43 - 45.

41. Эпизоотия среди лебедей-шипунов (Cygnus olor) в нижней дельте Волги (ноябрь 2005 г.), вызванная высокопатогенным вирусом гриппа A/H5N1 / Д.К. Львов, М.Ю. Щелканов, П.Г. Дерябин и др. // Вопр. вирусол. 2006. -№ 3. -С.10-16.

42. Age at infection affects the pathogenicity of asian highly pathogenic avian influenza H5N1 viruses in ducks / M J. Pantin-Jackwood, D.L. Suarez, E. Spackman, D.E. Swayne // Virus Research. 2007. - Vol. 130, N. 1-2. - P. 151161.

43. Alexander D J. Experimental assessment of the pathogenicity of eight avian influenza A viruses of H5 subtype for chickens, turkeys ducks and quail / D J. Alexander, G. Parsons, R.J. Manvell // Avian Pathol. 1986. - Vol. 15. - P. 647-662.

44. Alexander, D.J. A review of avian influenza in different bird species / D. J. Alexander // Vet. Microbiol. 2000. - Vol. 74. - P. 3-13.

45. Alexander, D.J. An overview of the epidemiology of avian influenza / D.J. Alexander // Vaccine. 2007. - Vol. 25, N 30. - P. 5637-5644.

46. Alexander, D.J. Ecology of avian influenza in domestic birds / D.J. Alexander // Proceedings of the International Symposium on Emergence and Control of Zoonotic Ortho- and Paramyxovirus Diseases. 2001. - P. 25-34.

47. Alexander, D.J. Summary of avian influenza activity in Europe, Asia, Africa and Australia 2002-2006. Avian Dis. 51:161-166. 2006.

48. Almond, J. W. A single gene determines the host range of influenza virus / J.W. Almond // Nature. 1977. - N 270. - P. 617-618.

49. Antigenic and genetic characterization of a novel hemagglutinin subtype of influenza A viruses from gulls / V.S. Hinshaw, G.M. Air, A.J. Gibbs et al. // J. Virol. 1982. - N 42. - P. 865-872.

50. Antigenic and molecular characterization of subtype H13 haemagglutinin of influenza virus / T.M. Chambers, S. Yamnikova, Y. Kawaoka et al. // Virology. 1989.-Vol. 172.-P. 180-188.

51. Application of Directigen FLU-A for the detection of influenza A virus in human and non-human specimens. / K.A. Ryan-Poirier, J.M. Katz, R.G. Webster, Y. Kawaoka // Journal of Clinical Microbiology. 1992. - Vol. 30. -P. 1072-1075.

52. Are seals frequently infected with avian influenza viruses? I V.S. Hinshaw, W.J. Bean, R.G. Webster et al. I I J. Virol. 1984. - Vol. 51. - P. 863-865.

53. Avian flu: H5N1 virus outbreak in migratory waterfowl / H. Chen, G.J. Smith, S.Y. Zhang et al. // Nature 2005. - Vol. 436. -P. 191-192.

54. Avian influenza A virus (H7N7) epidemic in The Netherlands in 2003: course of the epidemic and effectiveness of control measures / A. Stegeman, A. Bouma, A.R. Elbers et al. // J. Infect. Dis. 2004. - Vol. 190. - P. 2088-2095.

55. Avian influenza in Italy 1997-2001 /1. Capua, S. Marangon, M. dalla Pozza et al. // Avian Dis. 2003. - Vol. 47. - P. 839-843.

56. Avian influenza viruses in Korean live poultry markets and their pathogenic potential / Y.K. Choi, S.H. Seo, J.A. Kim et al. // Virology. 2005. - Vol. 332. - P. 529-537.

57. Bano, S. Evaluation of pathogenic potential of avian influenza virus serotype H9N2 in chicken / S. Bano, K. Naeem, S.A. Malik // Avian Dis. 2003. - Vol. 47.-P. 817-822.

58. Bean, W. J. Phenotypic properties associated with influenza genome segment / W.J. Bean, R.G. Webster // Negative strand viruses and the host cell London, 1978.-P. 685-692.

59. Beare, A.S. Replication of avian influenza viruses in humans / A.S. Beare, R.G. Webster // Arch. Virol.- 1991. Vol. 119. - P. 37-42.

60. Belshe, R.B. The origins of pandemic influenza-lessons from the 1918 virus / R.B. Belshe // N. Engl. J. Med. 2005. - N 353. - P. 2209-2211.

61. Brown, J.D. Experimental infection of swans and geese with highly pathogenic avian influenza virus (H5N1) of asian lineage // J.D. Brown, D.E. Stallknecht, D.E. Swayne /EID. — 2008. — V. 14.-Nl.-p. 136-142.

62. Capua, I. Control and prevention of avian influenza in an evolving scenario /1. Capua, S. Marangon // Vaccine. 2007. - Vol. 25, N 30. - P. 5645-5652.

63. Changes in the haemagglutinin and the neuraminidase genes prior to the emergence of highly pathogenic H7N1 avian influenza viruses in Italy / J. Banks, E.C. Speidel, E. Moore et al. // Arch. Virol. 2001. - Vol. 146. - P. 963-973.

64. Characterization of a new avian-like influenza A virus from horses in China / Y. Guo, M. Wang, Y. Kawaoka et al. // Virology. 1992. - Vol. 188. - P. 245255.

65. Characterization of a novel influenza A virus hemagglutinin subtype (HI 6) obtained from black-headed gulls / R.A. Fouchier, V. Munster, A. Wallensten et al. // J. Virol. 2005. - Vol. 79. - P. 2814-2822.

66. Characterization of avian H5N1 influenza viruses from poultry in Hong Kong / K.F. Shortridge, N.N. Zhou, Y. Guan et al. // Virology. 1998. - Vol. 252. -P. 331-342.

67. Characterization of duck H5N1 influenza viruses with differing pathogenicity in mallard (Anas platyrhynchos) ducks Y. Tang, P. Wu, D. Peng et al. // Avian Pathology. 2009. - Vol. 38, N 6. - P. 457 - 467.

68. Characterization of two influenza A viruses from a pilot whale / V.S. Hinshaw, W.J. Bean, J. Geraci et al. // J. Virol. 1986. - Vol. 58. - P. 655-656.

69. Charlton, B. Conventional and future diagnostics for avian influenza / B. Charlton, B. Crossley, S. Hietala// Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. 2009. Vol. 32, N 4. - P. 341-350.

70. Close relationship between mink influenza (H10N4) and concomitantly circulating avian influenza viruses / M. Berg, L. Englund, I.A. Abusugra et al. // Arch. Virol. 1990. - Vol. 113. - P. 61-71.

71. Cocirculation of avian H9N2 and contemporary human H3N2 influenza A viruses in pigs in southeastern China: potential for genetic reassortment? / J.S. Peiris, Y. Guan, D. Markwell et al. // J. of Virol. 2001. - Vol. 75. - P. 96799686.

72. Compans, R.W. Reproduction of myxoviruses / R.W. Compans, P.W. Choppin // Fraenkel-Conrat H., Wagner R.R., (eds.). Comprehensive Virology. New York, 1975. - Vol. 4. - P. 179-252.

73. Cox, N.J. Influenza: global surveillance for epidemic and pandemic variants / N.J. Cox, T.L. Brammer, H.L. Regnery // Eur. J. Epidemiol. 1994. - N 10. - P. 467-470.

74. Crawford R.D. Origin and history of poultry species // Poultry Breeding and Genetics / R.D. Crawford, ed.- Amsterdam: Elsevier Sc. Publishers B.V., 1990, —Ch. 16. —P. 1-41.

75. Deduced amino acid sequences at the haemagglutinin cleavage site of avian influenza A viruses of H5 and H7 subtypes // G.W. Wood, J.W. McCauley, J.B. Bashiruddin, D.J. Alexander // Arch. Virol. 1993. - Vol. 130. - P. 209-217.

76. Development of an immunochromatographic strip for rapid detection of H9 subtype Avian Influenza viruses. / F. Peng, Z. Wang, S. Zhang et al.. // Clinical and vaccine immunology. 2008. - P. 569-574.

77. Diagnostic methods applied to analysis of an outbreak of equine influenza in a riding school in which vaccine failure occurred. / C. van Maanen, G.J. van Essen, J. Minke et al. // Veterinary Microbiology. 2003. - Vol. 93, N 4. - P. 291-306.

78. Do hemagglutinin genes of highly pathogenic avian influenza viruses constitute unique phylogenetic lineages? / C. Rohm, T. Horimoto, Y. Kawaoka et al. // Virology. 1995. - Vol. 209. - P. 664-670.

79. Domestic ducks and H5N1 influenza epidemic, Thailand / T. Songserm, R. Jam-on, N. Sae-Heng et al. // Emerg. Infect. Dis. 2006. - Vol. 12. - P. 1-12.

80. Ecology and epidemiology of avian influenza in North and South America / D.A. Senne, D.L. Suarez, D.E. Stallnecht et al. // Developments in biology. -2006. Vol. 124. - P. 37-44.

81. Efficacy of inactivated vaccines against H5N1 avian influenza infection in ducks / D. Middleton, J. Bingham, P. Selleck et al. // Virology. 2007. - Vol. 359, N1.- P. 66-71.

82. Efficacy of vaccines in chicken against highly pathogenic Hong Kong H5N1 avian influenza / D.E. Swayne, J.R. Beck, M.L. Perdue, C.W. Beard // Avian Dis.-2001.-Vol. 45.-P. 355-365.

83. Efficacy of vaporized hydrogen peroxide against exotic animal viruses / R.A. Heckert, M. Best, L.T. Jordan et al. // Applied and Environmental Microbiology. 1997. - Vol. 63, № 10. - P. 3916-3918.

84. Elbers, A.R. Performance of clinical signs in poultry for the detection of outbreaks during the avian influenza A (H7N7) epidemic in The Netherlands in 2003 / A.R. Elbers, G. Koch, A. Bouma // Avian Pathol. 2005. - Vol. 34. - P. 181-187.

85. Elbers, A.R. Performance of gross lesions at postmortem for the detection of outbreaks during the avian influenza A virus (H7N7) epidemic in the Netherlands in 2003 / A.R. Elbers, B. Kamps, G. Koch // Avian Pathol. 2004. -Vol. 33.-P. 418-422.

86. Emergence of avian HINT influenza viruses in pigs in China / Y. Guan, K.F. Shortridge, S. Krauss et al. // Journal of Virology. 1996. - Vol. 70, N 11. - P. 8041-8046.

87. Epidemiology and ecology of highly pathogenic avian influenza with particular emphasis on South East Asia / V. Martin, L. Sims, J. Lubroth et al. // Developments in biology. 2006. - Vol. 124. - P. 23-36.

88. Epizootiology of avian influenza—simultaneous monitoring of sentinel ducks and turkeys in Minnesota / D.A. Halvorson, D. Karunakaran, D. Senne et al. // Avian Dis. 1983. - Vol. 27. - P. 77-85.

89. Evaluation of a rapid test for detection of H5N1 avian influenza virus. / Y. Chen, F. Xu, X. Fan et al.. // Journal of Virological methods. 2008. - Vol. 154.-P. 213-215.

90. Evaluation of antigen detection kits for diagnosis of equine influenza. / T. Yamanaka, K. Tsujimura, T. Kondo, T.J. Matsumura // J. Vet. Med. Sei. Vol. -2008.-Vol. 70, No. 2.-P. 189-192.

91. Evolution and ecology of influenza A viruses / R.G. Webster, W.J. Bean, O.T. Gorman et al. // Microbiological Reviews. 1992. - Vol. 56. - P. 152-179.

92. Evolution of influenza A virus nucleoprotein genes: implications for the origin of H1N1 human and classical swine viruses / O.T. Gorman, W. J. Bean, Y. Kawaoka et al. // J. Virol. 1991. -N 65. - P. 3704-3714.

93. Evolution of the receptor binding phenotype of influenza A (H5) viruses / A. Gambaryan, A. Tuzikov, G. Pazynina et al. // Virology. 2006. - N 344. - P. 432-438.

94. Evolutionary analysis of the influenza A virus M gene with comparison of the Ml and M2 proteins / T. Ito, O.T. Gorman, Y. Kawaoka et al. // J. Virol. -1991. -N 65. -P. 5491-5498.

95. Experimental infection of chickens, ducks and quails with the highly pathogenic H5N1 avian influenza virus / O.M. Jeong, M.C. Kim, M.J. Kim et al. // J. Vet. Sci. 2009. -Vol. 10. - N 1. - p. 53-60.

96. Field experiences in the control of avian influenza outbreaks in densely populated poultry areas / S. Marangon, I. Capua, G. Pozza, U. Santucci // Developments in Biology. 2004. - N 119. - P. 155- 164.

97. Generation of a highly pathogenic avian influenza A virus from an avirulent field isolate by passaging in chicken / T. Ito, H. Goto, E. Yamamoto et al. // J. Virol. -2001. Vol. 75. - P. 4439-4443.

98. Genetic reassortment between avian and human influenza A viruses in Italian pigs / M. R. Castrucci, I. Donatelli, L. Sidolli et al. // Virology. 1993. - Vol. 193.-P. 503-506.

99. Genetic relatedness of haemagglutinins of the HI subtype of influenza A viruses isolated from swine and birds / C. Scholtissek, H. Burger, P.A. Bachmann, C. Hannoun // Virology. 1983. - Vol. 129. - P. 521-523.

100. Global patterns of influenza A virus in wild birds / B. Olsen, V.J. Munster, A. Wallensten et al. // Science. 2006. -N31.- P. 2384-2388.

101. Gurtler, L. Virology of Human Influenza/L. Gurtler. In Behrens G., Gottschalk R., Gurtler L. et al. // Influenza Report 2006. Flying Publisher, 2006.-P. 87-91.

102. H4N6 influenza virus isolated from pigs in Ontario / A.I. Karasin, C.W. Olsen, I.H. Brown, et al. // Can. Vet. J. 2000. - N 41. - P. 938-939.

103. H5N1 avian influenza outbreak in,the Far East of Russia in 2008: New introduction / T.B. Manin, I.A. Chvala, S.N. Kolosov et al. // Avian Dis. -2010. Vol. 54, N 1. - P. 509-512.

104. H5N1 chicken influenza viruses display a high binding affinity for Neu5Acalpha2-3Galbetal-4(6-HS03)Glc-NAc-containing receptors / A. Gambaryan, G.V. Tuzikov, R.G. Pazynina et al. // Virology. 2004. - Vol. 326.-P. 310-316.

105. H7N1 avian influenza in Italy (1999-2000) in intensively reared chickens and turkeys /1. Capua, F. Mutinelli, S. Marangon, D.J. Alexander // Avian Pathol. -2000. Vol. 29. - P. 537-543.

106. Haemagglutinin activation of pathogenic avian influenza viruses of serotype H7 requires the recognition motif R-X-R/K-R/ M. Vey, M. Orlich, S. Adler et al. // Virology. 1992. - Vol. 188. - P. 408-413.

107. Herrler, G. Sialic acid as receptor determinant of ortho- and paramyxoviruses / G. Herrler, J. Hausmann, H.D. Klenk // Rosenberg A. (ed.), Biology of the Sialic Acids/ New York, 1995. - P. 315-.

108. Highly pathogenic avian influenza (H7N1) in ostriches fanned in Italy /1. Capua, F. Mutinelli, C. Terregino et al. // Vet. Rec. 2000. - Vol. 146. - N 12.-P. 356.

109. Highly pathogenic avian influenza // O.I.E. Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines, 2008.

110. Highly pathogenic H5N1 influenza virus infection in migratory birds / J. Liu, H. Xiao, F. Lei et al. // Science. 2005. - N 309. - P. 1206.

111. Hinshaw, V.S. Water-borne transmission of influenza A viruses? / V.S. Hinshaw, R.G. Webster, B. Turner // Intervirology. 1979. - Vol. 11. - P. 6668.

112. Horimoto, T. Molecular changes in virulent mutants arising from avirulent avian influenza viruses during replication in 14-day-old embryonated eggs/ T. Horimoto, Y. Kawaoka // Virology. 1995. - Vol. 206. - P. 755-759.

113. Human and avian influenza viruses target different cell types in cultures of human airway epithelium / M.N. Matrosovich, T.Y. Matrosovich, T. Gray et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004. - Vol. 101. - P. 4620-4624.

114. Infection dynamics of highly pathogenic avian influenza and virulent avian paramyxovirus type 1 viruses in chickens, turkeys and ducks / E.W. Aldous, J.M. Seekings, A. McNally et. al. // Avian Pathol. 2010. - № 39(4). - P. 265273.

115. Infection of children with avian-human reassortant influenza virus from pigs in Europe / E.C. Claas, Y. Kawaoka, J. C. De Jong et al. // Virology. 1994. -Vol. 204.-P. 453-457.

116. Influenza A viruses of migrating wild aquatic birds in North America / S. Krauss, D. Walker, S.P. Pryor SP et al. // Vector Borne Zoonotic Dis. 2004. -N4.-P. 177-189.

117. Influenza virus hemagglutinin with multibasic cleavage site is activated by furin, a subtilisin endoprotease / A. Stieneke-Grober, M. Vey, H. Angliker et al. // EMBO J. 1992. - N 11. - P. 2407-2414.

118. Influenza virus pleiomorphy characterized by cryoelectron tomography / A. Harris, G. Cardone, D.C. Winkler et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. -N 103(50). -P. 19123-19127.

119. Intestinal influenza: replication and characterization of influenza viruses in ducks / R.G. Webster, M. Yakhno, V.S. Hinshaw et al. // Virology. 1978. -N 84. - P. 268-276.

120. Investigation of outbreaks of highly pathogenic H5N1 avian influenza in waterfowl and wild birds in Hong Kong in late 2002 / T. M. Ellis, R. B. Bousfield, L. A. Bissett et al. // Avian Pathol. 2004. - Vol. 33. - P. 492-505.

121. Is the gene pool of influenza viruses in shorebirds and gulls different from that in wild ducks? / Y. Kawaoka, T.M. Chambers, W.L. Sladen, R.G. Webster // Virology. 1988. - Vol. 163. - P. 247-250.

122. Israel, A. Productive and abortive infection of L cells by fowl plague virus (FPV): comparison of in vivo and in vitro translation products of the virus mRNAs / A. Israel // J. Gen. Virol. 1980. - Vol. 47. - P. 473-483.

123. Kawaoka, Y. Avian-to-human transmission of the PB1 gene of influenza A virus in the 1957 and 1968 pandemics / Y. Kawaoka, S. Krauss, R.G. Webster // J. Virol. 1989. - Vol. 63. - P. 4603-4608.

124. Kida, H. 1988. Origin of the hemagglutinin gene of H3N2 influenza viruses from pigs in China / H. Kida, K.F. Shortridge, R.G. Webster // Virology. 1988. -Vol. 162.-P. 160-166.

125. Kilbourne, E.D. Influenza / E.D. Kilbourne // New York: Plenum Press. -1987.

126. Kim, J. A. Cells in the respiratory and intestinal tracts of chicken have different proportions of both human and avian influenza virus receptors / J. A. Kim, S.Y. Ryu, S.H. Seo // J. Microbiol. 2005. - Vol. 43. - P. 366-369.

127. Kistner, O. Differential phosphorylation of the nucleoprotein of influenza A viruses / O. Kistner, K. Muller, C. Scholtissek // J. Gen. Virol. 1989. - N 70. -P. 2421-2431.

128. Lamb, R.A. Orthomyxoviridae: the viruses and their replication / R.A. Lamb, R.M. Krug //In B.Fields. Virology. New York, 1997. - P. 1353-1396.

129. Landman, WJ. Avian influenza: eradication from commercial poultry is still not in sight. / W.J. Landman, C.C. Schrier // Tijdschr. Diergeneeskd. 2004. - N 129. - P. 782-796.

130. Lang, G. A review of influenza in Canadian domestic and wild birds / A. Lang // In: Proceedings of the First International Symposium on Avian Influenza. 1982.-P. 21-27.

131. Lee, C.W. Avian influenza virus: prospects for prevention and control by vaccination / C.W. Lee, D.L. Suarez // Anim. Health. Res. Rev. 2005. - N 6. -P. 1-15.

132. Li, S. Generation of seal influenza virus variants pathogenic for chickens, because of hemagglutinin cleavage site changes / S. Li, M.A. Orlich, R. Rott R // J Virol. 1990. - Vol. 64. - P. 3297-3303.

133. Loeffelholz, M.J. Avian Influenza A H5N1 / M.J. Loeffelholz // Virus clinics in laboratory medicine. 2010. - Vol. 30, N 1. - P. 1-20.

134. Lupiani, B. The history of avian influenza / B. Lupiani, S.M. Reddy // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. 2009. — Vol. 32, N4.-P. 311-323.

135. Lvov, D.K. Circulation of influenza viruses in natural biocoenosis / D.K. Lvov // Kurstak E, Maramovosch K, editors. Viruses and Environment. New York,.1978.-P. 351-380.

136. Marangon, S. Control of Avian influenza in Italy: from Stamping-out.-strategy to emergency and prophylactic vaccination / S. Marangon, I. Capua // Proc. Intemat. Conf. on Avian Influenza. Paris, 2005. P. 29.

137. Matrix gene of influenza A viruses isolated from wild aquatic birds: ecology and emergence of influenza A viruses / L. Widjaja, S.L. Krauss, RJ. Webby et al. // J. Virol. 2004. - Vol. 78. - P. 8771-8779.

138. Matrosovich, M.N. H9N2 influenza A viruses from poultry in Asia have human virus-like receptor specificity / M.N. Matrosovich, S. Krauss, R.G. Webster // Virology. 2001. - Vol. 281. - P. 156-162.

139. Molecular basis for the generation in pigs of influenza A viruses with pandemic potential / T. Ito, J.N. Couceiro, S. Kelm et al. // J. Virol. — 1998. -Vol. 72.-P. 7367-7373.

140. Morgan, I.R. Virological studies of Adelie Penguins (Pygoscelis adeliae) in Antarctica. Morgan, I.R., Westbury H.A. // Avian Dis. 1981. - Vol. 25. - P. 1019-1026.

141. Murphy, B.R. Influenza viruses. / B.R. Murphy, E.G. Webster // B. Fields. Virology. New York, 1985. P. 1179-1240.

142. Nakajima, S. Neurovirulence of influenza virus in mice. Mechanism of virulence as studied in a neuroblastoma cell line / S. Nakajima, A. Sugiura // Virology. 1980. - Vol. 101. - P. 450-457.

143. Neurotropism of highly pathogenic avian influenza virus A/chicken/Indonesia/2003 (H5N1) in experimentally infected pigeons (Columbia livia f. domestica) / R. Klopfleisch, O. Werner, E. Mundt et al. // Vet. Pathol. 2006. - Vol. 43. - P. 463-470.

144. Normile, D. Avian influenza. China will attempt largest-ever animal vaccination campaign. Science. 2005. - N 310. - P. 1256-1257.

145. Occurrence and possible mechanisms of cleavage site insertions in the avian influenza hemagglutinin gene / M. Perdue, J. Crawford, M. Garcia et al. // In: Proceedings of the Fourth International Symposium on Avian Influenza. 1998. -P. 182-193.

146. Office International des Epizooties (OIE). Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines. Chapter 2.1.14. Highly Pathogenic Avian Influenza // Paris. -2004.-P. 258-269.

147. Outbreaks of low pathogenicity avian influenza in USA / D.A. Halvorson, D.D. Frame, A .J. Friendshuh, D.P. Shaw // Proceedings of the Fourth International Symposium on Avian Influenza, Athens, Georgia. 1998. - P. 3646.

148. Pantin- Jackwood, M J. Pathobiology of asian highly pathogenic avian influenza H5N1 virus infection in ducks / Pantin-Jackwood M.J., Swayne D.E. // Avian Dis. 2007. - Vol. 51. - P. 250-259.

149. Pearson, J.E. International standards for the control of avian influenza / J.E. Pearson // Avian Dis. 2003. - Vol. 47. - P. 972-975.

150. Perdue, M.L. Structural features of the avian influenza virus hemagglutinin that influence virulence / M.L. Perdue, D.L. Suarez // Vet. Microbiol. — 2000. -Vol. 74.-P. 77-86.

151. Perez, D.R., Land-based birds as potential disseminators of avian/mammalian reassortant influenza A viruses / D.R. Perez, R.J. Webby, R.G.Webster // Avian Dis. 2003. - Vol. 47. - P. 1114-1147.

152. Performance of rapid tests for detection of Avian Influenza A virus types H5N1 and H9N2. / D.P. Fedorko, N.A. Nelson, J.M. McAuliffe, K. Subbarao. Journal of Clinical Microbiology. 2006. - Vol. 44, N 4. - P. 1596-1597.

153. Perkins, L. E. Pathogenicity of a Hong Kong-origin H5N1 highly pathogenic avian influenza virus for emus, geese, ducks, and pigeons. / L. E. Perkins, D. E. Swayne // Avian Dis. 2002. - Vol.46. - P. 53-63.

154. Perkins, L.E. Comparative susceptibility of selected avian and mammalian species to a Hong Kong-origin H5N1 high-pathogenicity avian influenza virus / L.E. Perkins, D.E. Swayne // Avian Dis. 2003. - Vol. 47. - P. 956-967.

155. Perpetuation of influenza A viruses in Alaskan waterfowl reservoirs / T. Ito, K. Okazaki, Y. Kawaoka et al. // Arch. Virol. 1995. - Vol. 140. - P. 11631172.

156. Persistence of avian influenza viruses in water / D.E. Stallknecht, S.M. Shane, M.T. Kearney, P,J. Zwank // Avian Dis. 1990. - Vol. 34. - P. 406^111.

157. Phosphopeptide fingerprints of nucleoproteins of various influenza A virus strains grown in different host cells / O. Kistner, H. Muller, H. Becht, C. Scholtissek // J. Gen. Virol. 1985. - Vol. 66. - P. 465-472.

158. Phylogenetic analysis of H7 haemagglutinin subtype influenza A viruses / J. Banks, E.C. Speidel, J.W. McCauley, D.J. Alexander // Arch. Virol. 2000. -Vol. 145.-P. 1047-1058.

159. Phylogenetic analysis of influenza A viruses of H9 haemagglutinin subtype / J. Banks, E.C. Speidel, P.A. Harris, D.J. Alexander // Avian Pathol. 2000. -Vol. 29.-P. 353-360.

160. Pomeroy, B.S. Avian influenza in turkeys in the USA / B.C. Pomeroy // In: Proceedings of the Second International Symposium on Avian Influenza, 1986. 1987.-P. 14-21.

161. Potential for transmission of avian influenza viruses to pigs / H. Kida, T. Ito, J. Yasuda et al. // J. Gen. Virol. 1994. - Vol. 75. - P. 2183-2188.

162. Preparation of a standardized, efficacious agricultural H5N3 vaccine by reverse genetics / M. Liu, J.M. Wood, T. Ellis et al. // Virology. 2003. - Vol. 314.-P. 580-590.

163. Prince, H. Principles of viral control and transmission / H. Prince, D. Prince // Block S.S. ed. Desinfection, sterilization and preservation, Fifth edition. — 2001. -P. 543-571.

164. Programmed cell death (apoptosis) in human monocytes infected by influenza A virus / H. Fesq, M. Bâcher, M. Nain, D. Gemsa // Immunobiology. 1994. -Vol. 190.-P. 175-182.

165. Protective efficacy in chicken, geese and ducks of an H5N1-inactivated vaccine developed by reverse genetics / G. Tian, S. Zhang, Y. Li et al. // Virology. 2005. - Vol. 341. -P. 153-162.

166. Reassortants of H5N1 Influenza Viruses Recently Isolated from Aquatic Poultry in Hong Kong SAR / Y. Guan, J.S.M. Peiris, L.L.M. Poon et al. //AvianDis. -2003. Vol. 47.-P. 911-913.

167. Receptor specificity of influenza A viruses from sea mammals correlates with lung sialyloligosaccharides in these animals / T. Ito, Y. Kawaoka, A. Nomura, K. Otsuki // J. Vet. Med. Sci. 1999. - Vol. 61. - P. 955-958.

168. Receptor specificity of influenza viruses from birds and mammals: new data on involvement of the inner fragments of the carbohydrate chain / A. Gambaryan, S. Yamnikova, D. Lvov et al. // Virology. 2005. - Vol. 334. - P. 276-83.

169. Recombinant paramyxovirus type 1- avian influenza-H7 virus as a vaccine for protection of chicken against influenza and Newcastle disease / D.E. Swayne, D.L. Suarez, S. Schultz-Cherry et al. // Avian Dis. 2003. - Vol. 47. - P. 1047-1050.

170. Recombination resulting in virulence shift in avian influenza outbreak. Chile / D.L. Suarez, D.A. Senne, J. Banks et al. // Emerg. Infect. Dis. 2004. - Vol. 10.-P. 1-13.

171. Reemerging H5N1 influenza viruses in Hong Kong in 2002 are highly pathogenic to ducks / K. M. StuiTn-Ramirez, T. Ellis, B. Bousfield et al. J. Virology 2004. - Vol. 78. - P. 4892-4901.

172. Rogers, G. N. Receptor binding properties of human and animal influenza virus isolates. G. N. Rogers, B. L. D'Souza // Virology. 1989. - Vol. 173. - P. 317-322.

173. Role of quail in the interspecies transmission of H9 influenza A viruses: molecular changes on HA that correspond to adaptation from ducks to chicken / D.R. Perez, W. Lim, J.P. Seiler et al. // J. Virol. 2003. - Vol. 77. - P. 31483156.

174. Rott, R. Correlation of pathogenicity and gene constellation of influenza A viruses. Non-pathogenic recombinants derived from highly pathogenic parent strains / R. Rott, M. Orlich, C. Scholtissek // J. Gen. Virol. 1979. - Vol. 44. -P. 471-477.

175. Scholtissek, C. Influenza in pigs and their role as the intermediate host / C. Scholtissek, V.S. Hinshaw, C.W. Olsen // In: Nicholson KG, Webster RG, Hay AJ (eds.), Textbook of Influenza, Blackwell Scientific, Oxford. 1998. - P. 137-145.

176. Schulman, J. L. Virulence factors of influenza A viruses: WSN virus neuraminidase required for plaque productions in MDBK cells / J. L. Schulman, P. Palese // J. Virol. 1977. - Vol. 24. - P. 170-176.

177. Senne, D.A. Avian influenza in the Western Hemisphere including the Pacific Basin / D.A. Senne // Avian Dis. 2003. - Vol. 47. - P. 798-805.

178. Seroepidemiological and molecular evidence for the presence of two H3N8 equine influenza viruses in China in 1993-94 / Y. Guo, M. Wang, G.S. Zheng et al. // Journal of General Virology. 1995. - Vol. 76. - P. 2009-2011.

179. Shaw, M.W. New Aspects of Influenza Viruses / M.W. Shaw, N.H. Arden, H.F. Maassab // Clinical microbiology reviews. 1992. - P. 74-92.

180. Sialic acid species as a determinant of the host range of influenza A viruses / Y. Suzuki, T. Ito, T. Suzuki et al. // J. Virol. 2000. - Vol. 74. - P. 1182511831.

181. Sidorenko, Y. Structured model of influenza virus replication in MDCK cells / Y. Sidorenko, U. Reichl // Biotechnology Bioeng. 2004. - Vol. 88. - P. 1-14.

182. Skehel, J.J. Receptor binding and membrane fusion in virus entry: the influenza hemagglutinin / J.J. Skehel, D.C. Wiley // Annu. Rev. Biochem. -2000. -N 69. -P. 531-569.

183. Stallknecht, D.E. Ecology and epidemiology of avian influenza viruses in wild bird populations / D.E. Stallknecht // Proceedings of the Fourth International Symposium on Avian Influenza. 1998. - P. 61-69.

184. Stallknecht, D.E. Host range of avian influenza virus in freeliving birds / D.E. Stallknecht, S.M. Shane // Vet. Res. Commun. 1988. - Vol. 12. - P. 125-141.

185. Steinhauer, D.A. Role of hemagglutinin cleavage for the pathogenicity of influenza virus / D.A. Steinhauer // Virology. 1999. - Vol. 258. P. 1-20.

186. Structure of influenza haemagglutinin at the pH of membrane fusion / P. A. Bullough, F.M. Hughson, J.J. Skehel, D.C. Wiley // Nature. 1994. - Vol. 371. -P. 37-43.

187. Suarez, D.L. Overview of avian influenza DIVA test strategies / D.L. Suarez // Biologicals. 2005. - Vol. 33. - P. 221-226.

188. Susceptibility and transmissibility of pigeons to Asian lineage highly pathogenic avian influenza virus subtype H5N1 / Y. Liu, J. Zhou, H. Yang et al. // Avian Pathology. 2007. - Vol. 36, N 6. - P. 461 - 465.

189. Suzuki, Y. Sialobiology of influenza: molecular mechanism of host range variation of influenza viruses / Y. Suzuki // Biol. Pharm. Bull. 2005. - N 28. -P. 399-408.

190. Swayne, D.E. Highly pathogenic avian influenza / D.E. Swayne, D.L. Suarez // Rev. Sci. Tech. 2000. - N 19. - P. 463-468.

191. Swayne, D.E. Influenza / D.E. Swayne, D.A. Senne, C.W. Beard // In: Isolation and Identification of Avian Pathogens, Fourth Edition, Swayne D.E., Glisson J.R., Jackwood M.W., Pearson J.E. eds. Kennett Square, Pennsylvania, USA, 1998.-P. 150-155.

192. The appearance of H3 influenza viruses in seals / R. J. Callan, G. Early, H. Kida, V.S. Hinshaw // J. Gen. Virol. 1995. - Vol. 76. - P. 199-203.

193. The B allele of the NS gene of avian influenza viruses, but not the A allele, attenuates a human influenza A virus for squirrel monkeys / J.J. Treanor, M.H. Snyder, W.T. London, B.R. Murphy // Virology. 1989. - Vol. 171. - P. 1-9.

194. The characterization of influenza A viruses by carbohydrate analysis / H.D. Klenk, W. Keil, H. Niemann et al. // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1983. -Vol. 104.-P. 247-257.

195. The nucleoprotein as a possible major factor in determining host specificity of influenza H3N2 viruses / C. Scholtissek, H. Burger, 0. Kistner, K. F. Shortridge // Virology. 1985. - Vol. 147. - P. 287-294.

196. The surface glycoproteins of H5 influenza viruses isolated from humans, chicken, and wild aquatic birds have distinguishable properties / M.N. Matrosovich, N. Zhou, Y. Kawaoka, R.J. Webster // Virology. 1999. - Vol. 73. -P. 1146-1155.

197. Towards improved influenza A virus surveillance in migrating birds / V.J. Munster, J.V.B. Olsen, R. Vogel et al. // Vaccine. 2006. - Vol. 24, N 44-46. -P. 6729-6733.

198. Utterback, W. Update on avian influenza through February 21, 1984 in Pennsylvania and Virginia / W. Utterback // Proceedings of the 33rd Western Poultry Disease Conference. 1984. - P. 4—7.

199. Vaccination with infectious laryngotracheitis virus recombinants expressing the hemagglutinin (H5) gene / D. Luschow, O. Werner, T.C. Mettenleite, W. Fuchs // Vaccine. 2001. - Vol. 19. - P. 4249-4259.

200. Validated RealTime reverse transcriptase PCR methods for the diagnosis and pathotyping of Eurasian H7 avian influenza viruses / M.J. Slomka, T. Pavlidis, V.J. Coward et al. // Influenza and Other Respiratory Viruses. 2009. - Vol. 3.-P. 151-164.

201. Virulence-associated sequence duplication at the hemagglutinin cleavage site of avian influenza viruses / M.L. Perdue, M. Garcia, D. Senne, M. Fraire // Virus Res.-1997.-Vol. 49.-P. 173-186.

202. Wagner, R. Functional balance between haemagglutinin and neuraminidase in influenza vims infections / R. Wagner, M. Matrosovich, H.D. Klenk // Rev. Med. Virol. 2002. - Vol. 12. - P. 159-166.

203. WAHID Interface OIE World Animal Health Information Database, 2009.

204. Walker, J. A. Importance of conserved amino acids at the cleavage site of the haemagglutinin of a virulent avian influenza A virus / J. A. Walker, Y.J. Kawaoka// Gen. Virol. 1993. - Vol. 74. - P. 311-314.

205. Wan, H. Quail carry sialic acid receptors compatible with binding of avian and human influenza viruses / H. Wan, D.R. Perez // Virology. 2006. - Vol. 346.-P. 278-286.

206. Webster, R.G. Microbial adaptation and change: avian influenza / R.G. Webster, D.J. Hulse // Rev. Sci. Tech. 2004. - N 23. - P. 453-465.

207. Werner, O. Avian Influenza / O. Werner, T.C. Harder // Behrens G., Gottschalk R., Gurtler L. et al.. Influenza Report 2006. Flying Publisher. -2006. P. 48-87.

208. Westbury, H.A. Transmissibility of two avian influenza A viruses (H7N7) between chickens / H.A. Westbury, A.J. Turner, C. Amon // Avian Pathol. -1981.-Vol. 10.-P. 481-487.

209. WHO/OIE/FAO H5N1 Evolution Working Group. Towards a unified nomenclature system for highly pathogenic H5N1 avian influenza viruses //http:www.who.int/csr/disease/avianinfluenza/guidelines/nomenclature/en/ind ex.html.

210. Wild duck as long-distance vectors of highly pathogenic avian influenza virus (H5N1) / Keawcharoen J., van Riel D., van Amerongen G., Besterbroer T., Beyer W.E. // EID. 2008. - Vol. 14. - N 4. - P. 600-607.

211. Wild ducks are the reservoir for only a limited number of influenza A subtypes / G.B. Sharp, Y. Kawaoka, S.M. Wright et al. // Epidemiol. Infect. -1993.-Vol. 110.-P. 161-176.

212. Woolcock, P.R. Commercial immunoassays kits for the detection of influenza virus type A: evaluation of their use with poultry. / P.R. Woolcock, C J. Cardona // Avian diseases. 2005. - Vol. 49. - P. 477-481.

213. Zoonotic potential of highly pathogenic avian H7N3 influenza viruses from Pakistan / U.B. Aamir, K.Naeem, Z. Ahmed et al. // Virology. 2009. - Vol. 390, №2.-P. 212-220.

Информация о работе

Абрамова, Людмила Юрьевна
кандидата ветеринарных наук
Владимир, 2011
ВАК 06.02.02

Диссертация

Особенности гриппа у разных видов птиц в экспериментальных условиях и эффективность методов выявления возбудителя - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы