Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Особенности функционирования репродуктивной системы сельскохозяйственных растений при воздействии гербицидов

ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Автореферат диссертации по теме "Особенности функционирования репродуктивной системы сельскохозяйственных растений при воздействии гербицидов"

На правах рукописи

ЗВЯГИНА АНАСТАСИЯ СЕРГЕЕВНА

ОСОБЕННОСТИ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ГЕРБИЦИДОВ

Специальность: 06.01.05 - селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Краснодар - 2015

Диссертация выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Кубанский государственный аграрный университет» в 2011-2014 гг.

Научный руководитель: до1сгор биологических наук, профессор

Цаценко Людмила Владимировна

Официальные оппоненты: Щеглов Сергей Николаевич, доктор биологических наук, профессор кафедры генетики, микробиологии и биотехнологии, ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный университет»

Мухина Жанна Михайловна, доктор биологических наук, заведующая лабораторией биотехнологии и молекулярной биологии ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт риса»

Ведущая организация: ФГБНУ «Краснодарский научно-исследовательский институт сельского хозяйства им. П.П. Лукьяненко»

Защита состоится «25» июня 2015 г. в II00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.03, созданного на базе ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г.Краснодар, ул. им. Калинина, 13, (главный корпус, 1-й этаж, ауд. 106), тел7 факс (8-861) 221-57-93.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет», по адресу 350044, г. Краснодар, ул. им. Калинина, 13 и на сайте - http://www.kubsau.ru, с авторефератом на сайтах: Высшей аттестационной комиссии -http://www.vak.ed.gov.ru и ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» http://www.kubsau.ru.

Автореферат разослан «_» мая 2015 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор биологических наук, профессор

^ ^¡(/ММ-О Л. В. Цаценко

РОССИЙСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ БИБЛИОТЕКА 2С !5

—ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последнее время становится актуальным вопрос сохранения генетического потенциала сельскохозяйственных растений. Усиление антропогенной нагрузки в аграрном секторе, в частности гербицидной, может привести к дестабилизации генофонда и необратимым последствиям его деградации, поэтому значимость цитогенетических исследований постоянно возрастает.

Существуют направления исследований, отображающиеся в публикациях, где применяются различные критерии оценки последствий гербицидной обработки на экосистему в целом, поэтому изучение всестороннего комплекса воздействий на геном растений представляет интерес.

Цели и задачи исследований. Цель наших исследований - изучение функционирования репродуктивной системы сельскохозяйственных растений на примере линий гербицидоустойчивого подсолнечника и озимой мягкой пшеницы при воздействии послевсходовых гербицидов Секатор Турбо, Пума Супер 75 и Евро-Лайтнинг.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. подобрать растительные тест-системы и определить критерии оценки токсического воздействия послевсходовых гербицидов на анализируемые объекты;

2. провести биологическое тестирование почвы, направленное на выявление токсического действия препарата в почве;

3. изучить закономерности роста и развития осевых органов проростков тест-культур при действии послевсходовых гербицидов;

4. провести цитологический анализ фертильности пыльцевых зерен сельскохозяйственных растений с целью выявления устойчивости генотипов к послевсходовым гербицидам;

5. проанализировать зависимости действия послевсходовых гербицидов на репродуктивную систему пшеницы по элементам продуктивности растений;

6. разработать методологию оценки адаптивных и урожайных свойств растений озимой мягкой пшеницы при воздействии послевсходовых гербицидов.

Научная новизна работы. Проведена комплексная оценка действия послевсходовых гербицидов Пума Супер 75 и Секатор Турбо в посевах озимой мягкой пшеницы сорта Таня и линий подсолнечника, устойчивого к гербициду Евро-Лайтнинг по состоянию репродуктивной системы высших растений.

Установлены основные подходы к оценке токсичного загрязнения почвы послевсходовыми гербицидами на основе биотестирования с использованием высших растений в разных биологических состояниях.

Впервые проведено биотестирование образцов почвы в лабораторных условиях в устройствах с постоянным поддержанием микроклимата.

Выявлены основные критерии селекционной оценки генотипов подсолнечника и озимой пшеницы, подвергшихся обработке послевсходовыми гербицидами, с использованием пыльцевого анализа.

Показаны информативные характеристики пыльцевых зерен при оценке действия послевсходовых гербицидов на репродуктивную систему линий гербицидоустойчивого и озимой мягкой пшеницы сорта Таня.

Установлены информативные и сопряженные с цитологическими характеристиками пыльцевого зерна показатели продуктивности растений озимой мягкой пшеницы на основе четырех критериев: длина колоса, число колосков, масса колоса, число зерен с колоса.

Впервые использованы биологические модели при определении действия послевсходовых гербицидов на репродуктивную систему высших растений.

Теоретическая и практическая значимость работы определяется тем, что результаты полученные в ходе исследований могут применяться при оценке репродуктивного потенциала озимой пшеницы в технологиях с применением послевсходовых гербицидов, а так же использоваться при разработке программ по созданию гербицидоустойчивых линий подсолнечника.

Оценка почвы на загрязнение послевсходовыми гербицидами позволит применять две тест-системы на основе высших растения для получения полной картины действия токсикантов в агроценозе.

Разработанные в ходе работы биологические модели для биотестирования почвы и сушки индивидуальных растений и семян имеют многофункциональное значение и широкий спектр применения.

Материалы диссертации используются в учебном процессе кафедры генетики, селекции и семеноводства ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» при чтении курсов: «Цитология», «Генетический мониторинг», «Биологическое тестирование почвы».

Апробация работы. Основные положения и результаты работы докладывались и обсуждались на всероссийских и международных конференциях и конкурсах: Всероссийская научно-практическая конференция молодых ученых и специалистов «Научное обеспечение агропромышленного комплекса» (г.Краснодар, 2011, 2012, 2013); Международная научно-практическая конференция «Наука и образование» в XXI веке» (г. Москва, 2013), Международная научно-практическая конференция «Вклад ВОГиС в решение проблем инновационного развития России (г.Краснодар, 2011), Научно-практическая конференция преподавателей по итогам НИР за 2012 и 2013 год (г. Краснодар, 2013, 2014), VI съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров (ВОГиС) и ассоциированные генетические симпозиумы. Экологическая генетика (г. Ростов-на-Дону, 2014).

Автор выиграла грант на обучение в Международной летней школе «Биотехнология в сельском хозяйстве (AgгoBюTech)», г. Москва, 2012. Является победителем Всероссийского конкурса на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений МСХ РФ по направлению «Биологические науки», Орел, 2013. По итогам конкурса награждена дипломом победителя и дипломом лауреата премии по поддержке талантливой молодежи, установленной Указом Президента Российской Федерации от 6 апреля 2006 г. № 325 «О мерах государственной поддержки талантливой молодежи».

В Государственном реестре изобретений Российской Федерации зарегистрировано 4 патента и 3 свидетельства регистрации базы данных. По материалам диссертации опубликовано 10 научных статей, из них 3 в рецензируемых журналах, определенных ВАК РФ.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Оценка фитотоксичности почвы после применения послевсходо-вых гербицидов проводится на основе двух тест-объектов относящихся к высшим растениям, в двух состояниях: семена и взрослое растение.

2. Основным критерием селекционной оценки генотипов подсолнечника и озимой пшеницы, подвергшихся обработке послевсходовыми гербицидами, являются фертильность и однородность пыльцы.

3. Цитологические показатели пыльцы растений сопряжены с показателями продуктивности растений озимой мягкой пшеницы, а именно: длиной колоса, числом колосков, числом зерен, массой колоса, массой зерен, числом недоразвитых колосков, числом недоразвитых зерен, массой 1000 зерен.

4. Наследование негативного действия послевсходовых гербицидов на репродуктивную систему озимой мягкой пшеницы и продуктивность растений изучится в поколении.

Объем и структура работы. Работа изложена на 130 страницах машинописного текста и состоит из: введения, пяти глав с описанием современного состояния проблемы на основании источников литературы, описанием материала и методов, результатов исследований и их обсуждения, заключения, рекомендаций для практики. Иллюстративный материал представлен в 30 таблицах, на 24 рисунках и 4 приложениях. Список литературы включает 174 источника, в том числе 19 на иностранном языке.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Глава 1. Особенности развития мужского гаметофита озимой мягкой пшеницы (обзор литературы). В главе рассмотрены вопросы по влиянию различных факторов среды, в том числе и гербицидов на репродуктивную систему сельскохозяйственных культур. Приведены данные отечественных и зарубежных авторов по оценке действия токсиканта на куль-

турные растения и почву в системе генетического мониторинга.

Глава 2. Условия, материал и методика проведения исследований. Экспериментальная часть работы выполнена в 2011-2014 годах в «Инновационной лаборатории генетики, селекции и контрольно-семенного анализа», кафедры генетики, селекции и семеноводства ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» и на опытном поле КубГАУ учхоза «Кубань», а так же на экспериментальной базе ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт масличных культур» в 2011 году.

Погодные условия в годы проведения исследований в целом можно охарактеризовать как благоприятные для роста и развития растений подсолнечника и озимой пшеницы.

Посев семян подсолнечника проводился ручными сажалками. В одно гнездо помещали по 2-3 семянки. Каждый рядок включал в себя по 25 гнезд при расстановке 70x35 см. Посев семян озимой мягкой пшеницы осуществляли ручным способом на делянках 1,0 м х 2,0 м в 3-х кратной повторности, общая площадь делянки 36 м2, два варианта опыта, контроль и варианты с обработкой послевсходовыми гербицидами.

Изучали влияние гербицида Евро-Лайтнинг в дозе 1,2 л/га на герби-цидоустойчивых линиях подсолнечника и смеси послевсходовых гербицидов Секатор Турбо в дозе 0,1 л/га и Пума Супер 75 в дозе 0,6 л/га на культуре озимая мягкая пшеница сорт Таня.

Пыльцевой анализ включал изучение морфологических и физиологических характеристик пыльцевых зерен: размер, фертильность, стерильность, жизнеспособность, количество и типичность развития.

Жизнеспособность пыльцевых зерен определяли на искусственной питательной среде (15 % раствор сахарозы, подкисленный 0,006 % раствором борной кислоты) по общепринятой методике (Паушева 3. П., 1988) и считали жизнеспособными, если пыльцевая трубка имела длину равную диаметру пыльцевого зерна и более, при этом анализировали по 100 случайно выбранных пыльцевых зерен.

Количество пыльцевых зерен в цветке растений определяли по методике, разработанной на кафедре РГАУ-МСХА им. К. А. Тимирязева (Иванова С. В. и др., 1996), для подсчета количества использовали камеру Горяева.

Анализ продуктивности растений озимой мягкой пшеницы осуществляли ручным способом, для этого с исследуемых делянок отбирали по 25 растений каждого варианта и формировали снопы, которые хранили в контейнере для сушки и хранения плодов, являющиеся авторской разработкой и использующиеся как полезная модель (рисунок 1 г). Затем производили подсчет параметров продуктивности растений: количество колосков на уступе колосового стержня, количество зерен в колосе, массу колоса, массу 1000 зерен. Семена исследуемых образцов хранили в индивидуальных контейнерах для сушки и хранения семян (рисунок 1 в).

Фитотоксичность почвы оценивали с использование нескольких методик и тест-культур (семена пшеницы, кресс-салата, редиса и растений ряски малой).

Всхожесть и энергию прорастания семян определяли по ГОСТу 12038-84 используя рулонный способ, а так же в качестве сравнения результатов исследования использовали авторское изобретение на полезную модель- устройство для биотестирования (рисунок 1а, 1 б), где семена высевались непосредственно в почву, что на наш взгляд является наиболее эффективным способом определения действия послевсходовых гербицидов на ростовые процессы семян тест-культур. Проводили учет размера осевых (ростовых) органов проростков семян тест-культур на 7-е сутки эксперимента на 10 растениях каждого варианта, в 3-х кратной повторности.

Рисунок 1 - биологические модели, используемые в исследованиях:

а) Устройство для биотестирования почвы: патент № 139000 РФ, 2013;

б) Переносной контейнер для биотестирования почвы: патент № 148100 РФ, 2014; в) Контейнер для сушки малых партий семян: патент № 140303 РФ, 2014; г) Контейнер для сушки и хранения плодов: патент № 146651 РФ, 2014.

Для биотестирования использовали культуру растений ряски малой, в каждую пробу помещали по 20 листецов в 3-х кратной повторности. Все образцы инкубировали в термолюминостате в течение 7 суток при комнатной температуре.

Статистическую обработку полученных данных осуществляли на основе одно- и двухфакторного дисперсионного анализа (Доспехов Б. А., 1979). Оценку достоверности различий между средними значениями признаков образцов проводили с помощью рангового теста (Тюрин В. В., 2010). Использовали пакеты программ Statistica 7, MS Excel 2000.

Глава 3. Результаты исследований. Биологическое тестирование почвы на определение токсичности послевсходовых гербицидов с помощью высших растений. В задачу работы входило определение токсичности послевсходовых гербицидов на посевные качества семян тест-культур в системе генетического мониторинга.

Анализ качества семян позволяет определить агротехнологическую нагрузку на растения, уловить влияние каждого фактора (пестицидов, удобрений, гербицидов). При использовании этого показателя необходимо установить критерии учета показателей (силы роста и энергии прорастания семян, количества не проросших, загнивших семян или семян с аномалиями развития, всхожести семян), поэтому мы изучали действие послевсходовых гербицидов Пума Супер 75 и Секатор Турбо на всхожесть семян тест-культур.

В работе проведено биологическое тестирование почвы по показателям тест-культур в двух вариантах:

а) проращивание семян тест-культур в водных растворах (водная вытяжка из почвы, обработанной послевсходовыми гербицидами);

б) выращивание растений непосредственно в почве, токсичность которой необходимо оценить.

Данный метод основывается на реакции тест-культур на присутствие в почве загрязняющих веществ, что позволяет определить токсичное действие химических веществ или стимулирующее влияние, которое активизирует развитие тест-культур. При исследовании фиксируется всхожесть и энергия прорастания семян, размер корешков и ростов проростков.

При определении влияния послевсходовых гербицидов на количество сильных проростков тест-культур были получены не однозначные результаты, так на культуре озимой мягкой пшеницы достоверных различий между вариантами опыта с обработкой и без обработки гербицидами не обнаружено. При оценке семян редиса и кресс-салата как тест-растений в анализе токсичности почвы по признаку число сильных проростков различия между вариантами установлены и их доля в общей дисперсии составила 48 % и 27,9 % соответственно (таблица 1).

Таблица 1 - Результаты рангового теста определения числа сильных проростков кресс-салата при биотестировании почвы, загрязненной послевсходовыми гербицидами Пума Супер 75 и Секатор Турбо, Краснодар (2011-

Вариант Среднее, % Ранговый тест

Сильные проростки

Почва с гербицидами 71,00

Почва без гербицидов (контроль 2) 77,78 ****

Примечаиие. Здесь и в последующих аналогичных таблицах знак «*», расположенный на разных вертикалях показывает различия между образцами.

Сравнение нескольких культур по морфофизиологическим показателям оценки проростков показало, что на контрольных вариантах показатель силы роста значительно выше по сравнению с исследуемым образцом, что позволяет сделать вывод о негативном влиянии, присутствующих в почве веществ, на проростки тест-культур.

Определение всхожести семян тест-культур. Одной из главных задач для успешного получения здоровых всходов является обеспечение теплом, светом, влагой и питанием. Немаловажное значение играет так же качество семенного материала, а значит, семена должны обладать высокой всхожестью.

Проращивание семян при проведении эксперимента по определению всхожести семян тест-культур осуществляли непосредственно в почве с использование устройства для биотестирования почвы, а так же по стандартной методике. Срок тестирования 7 дней. По истечении времени проводили подсчет нормально проросших семян, пробившихся через слой почвы.

В качестве абсолютного контроля выступал вариант с дистиллированной водой - контроль I, а относительного - почва без обработки по-слевсходовыми гербицидами - контроль 2.

Результаты эксперимента по оценке возможности использования семян пшеницы для биотестирования на выявление негативного влияния по-слевсходовых гербицидов показали, что достоверные различия между вариантами эксперимента были получены только на седьмые сутки и доля показателя «Общая всхожесть» 14 %. На третьи и пятые сутки оценки различий обнаружено не было. Это может быть объяснено с позиции кумулятивного эффекта воздействия загрязнения гербицидами, который начал сказываться только на седьмые сутки. Самая высокая всхожесть получена на варианте «Почва без гербицидов», а наименьшая - «Почва с гербицидами». Различия между вариантами «Почва без гербицидов» и «Дистиллированная вода» не значительные, однако лучшие результаты на первом варианте.

Результаты по тестированию редиса как тест-культуры показали, что различия между вариантами эксперимента были выявлены на третьи и седьмые сутки от начала эксперимента. На пятые сутки достоверного влияния фактора не обнаружено. Доля дисперсии на 3-й сутки составила 28,6 %, а 7-е сутки 33,25 %.

Результаты эксперимента по оценке возможности использования кресс-салата для биотестирования были обработаны в однофакторном дисперсионном анализе, и получено, что доля дисперсии «Между вариантами опыта» находилась в пределах 34,2-58,8 %. Это свидетельствует о достоверных различиях между вариантами опыта, а так же негативном эффекте влияния на тест-растение.

Характер различий между вариантами эксперимента достаточно сложен. Так, достоверные различия выявляются только между вариантами «Почва без гербицидов» и «Почва с гербицидами» (таблица 2).

Таблица 2 - Результаты множественного сравнения средних значений всхожести семян кресс-салата, Краснодар (2011—2014 гг.)__

Вариант | Среднее, % | Ранговый тест

3 сутки

Почва с гербицидами 4,44 ****

Дистиллированная вода (контроль 1) 5,11

Почва без гербицидов (контроль 2) 6,22

5 сутки

Почва с гербицидами 12,22 ****

Дистиллированная вода (контроль 1) 14,44

Почва без гербицидов (контроль 2) 15,67

7 сутки

Почва с гербицидами 61,67

Дистиллированная вода (контроль 1) 72,22

Почва без гербицидов (контроль 2) 78,33 ****

Согласно представленным данным, наибольшая всхожесть семян кресс-салата наблюдается на варианте «Почва без гербицидов», причем на третьи сутки она составила 6,2 % и достоверно отличалась от двух других вариантов опыта, на пятые и седьмые сутки отличалась только от варианта «Почва с гербицидами».

Таким образом, результаты множественного рангового теста подтверждают, что в варианте с обработкой послевсходовыми гербицидами идет снижение всхожести семян по сравнению с контролем. Наименьшие средние значения изучаемых признаков наблюдались на варианте «Почва с гербицидами».

Предложенная нами система оценки качества семян предполагает выявление вариантов, несущих повышенную агротехнологическую нагрузку по отклонениям в формировании здоровых проростков, а также таким показателям как сила роста и всхожесть семян. Наиболее результативной культурой при оценке отзывчивости на присутствие послевсходовых гербицидов в почве оказался кресс-салат, так как обнаружен уже на третьи сутки начала эксперимента, на втором месте оказался редис. Наименее результативной оказалась пшеница, так как эффект негативного влияния послевсходовых гербицидов проявился только на седьмые сутки.

Определение длины осевых органов проростков тест-культур. Проведение биотестирования на определение токсичного влияния послевсходовых гербицидов включает в себя не только определение силы роста семян, но и исследование ростовых показателей тест-культур, а именно размер осевых органов проростков, в данном случае длины корешков и ростков.

Мы провели исследования по установлению влияния послевсходо-вых гербицидов Пума Супер 75 и Секатор Турбо на ростовые органы проростков, с использованием устройства для биотестирования. Данные эксперимента по оценке влияния послевсходовых гербицидов на ростовые органы тест-культур были обработаны при помощи дисперсионного анализа.

Для двух исследуемых признаков (длина корешков и ростков) проростков кресс-салата были установлены различия между вариантами опыта. Их доля в общей дисперсии превышает 40 %.

При определении признаков длины корешков и ростков пшеницы установлены различия между вариантами опыта, их доля составляет 70 %.

Проведенные нами исследования по определению влияния послевсходовых гербицидов на рост осевых органов редиса показали статистически достоверные различия для двух признаков: длина корешков и ростков. Различия между вариантами опыта статистически достоверны, их доля в общей дисперсии составляет 58,2 % для признака длина корешков и 68,6 % для признака длина ростков.

Завершением дисперсионного анализа был ранговый тест, который позволил выявить различия между средними значениями каждого варианта опыта (таблица 3).

Таблица 3 - Ранговый тест средних значений длины осевых органов редиса, Краснодар (2011-2014 гг.)______

Вариант Среднее, мм Ранговый тест

Корешок

Почва без гербицидов (контроль 2) 56,57

Дистиллированная вода (контроль 1) 55,40

Почва с гербицидами 38,14

Росток

Почва без гербицидов (контроль 2) 75,38

Дистиллированная вода (контроль 1) 73,21

Почва с гербицидами 47,31

По результатам таблицы 3 можно заключить, что длина осевых органов проростков редиса была выше на варианте «Почва без гербицидов» и достоверно отличалась от варианта с применением послевсходовых гербицидов, а вариант с «Дистиллированной водой» выступал как нейтральный вариант, так как его результаты были средними по значению между двумя предыдущими.

Таким образом, при исследовании длины корешков и ростков проростков тест-культур установлено статистически достоверное влияния послевсходовых гербицидов на рост осевых органов. Причем достоверны различия между вариантами опыта «Почва без гербицидов» и «Почва с гербицидами».

Фитоиндикация загрязнения почвы с помощью ряски малой Lemna minor L. Для объективной оценки о действии гербицидов на почву согласно требованиям методики биотестирования, где тест-объекты должны относиться к разным таксономическим группам. В нашей работе первую группу составили семена кресс-салата, редиса и пшеница, а вторую группу - взрослое растение ряски малой, которое размножается преимущественно вегетативно и поэтому является клоном растений одного поколения с идеальной генетической однородностью. В качестве фактора выступала почва обработанная послевсходовыми гербицидами и контроль (почва без обработки гербицидами).

Межгрупповые различия между вариантами проб почвы по исследуемым признакам установлены в каждом из изучаемых временных промежутков, причем, доля влияния учтенного фактора со временем увеличивается, на третьи сутки она составляет 56,5 %, на пятые - 73,7 %, на седьмые - 76,0 %. Это позволяет сделать заключение о накоплении однотипности действия токсических веществ в растениях в период эксперимента.

Глава 4. Скрининг состояния мужского гаметофита у сельскохозяйственных растений. Для успешного прохождения процессов микро- и маркроспорогенеза и обеспечения оплодотворения высшие растения производят качественные пыльцевые зерна, в которых находится часть генетической информации о геноме всего растения, а так же является индикаторным экраном отражающим неблагоприятное воздействие биотических и абиотических факторов среды на мужской гаметофит.

Для анализа качества пыльцевых зерен использовали пыльцевой тест, который основан на разделении всей пыльцы на стерильную и фер-тильную. Формирование пыльцевых зерен является завершающим процессом микроспорогенеза, поэтому ее «качество» зависит от условий протекания фаз мейоза. Различные нарушения отражаются на фертильности пыльцевых зерен. Для успешной оценки токсичного эффекта гербицидов ведут тщательный подбор видов для данного теста по признакам: относительно длительный периода цветения, универсальность и легкость сбора, низкий уровень формирования аберрантной пыльцы (до 10 %) у вида.

Пыльцевой анализ линий гербицидоустойчивого подсолнечника, обработанного послевсходовым гербицидом Евро-Лайтнинг. Подсолнечник является перекрестноопыляемой культурой, где число пыльцевых зерен на один цветок достигает 40 тыс. шт. Линии гербицидоустойчивого подсолнечника характеризуются устойчивостью к группе имидозолиноно-вых гербицидов. Для каждой культуры фертильность пыльцевых зерен в норме может колебаться от 60 до 100%, что обусловлено типом и способом опыления. Анализ данных представлен в таблице 4.

Таблица 4 - Фертильность пыльцевых зерен линий подсолнечника, ВНИ-

ИМК, Краснода р (2011г.)

Линия Фертильность пыльцы, %

не обработанные обработанные

ти-117 96,3 95,5

¡тМШ 95,3 92,3

ти-1117 98,3 93,2

¡1Ш-В5 98,4 91,6

¡1ТП-В7 97,4 93,8

нш-В19 92,2 98,8

¡пн-В21 95,1 99,4

НСР05 2,4 1,0

Анализ данных таблицы 4 показал, что снижение фертильности у обработанных линий подсолнечника послевсходовым гербицидом Евро-Лайтнинг не произошло. Для культуры подсолнечник фертильность пыльцевых зерен в норме достигает 90-100%. Во всех случаях фертильность была в пределах нормы.

В работе был проведен анализ изменения доли основного типа пыльцевых зерен в зависимости от обработки послевсходовым гербицидом (таблица 5).

Таблица 5 - Частота встречаемости различных типов пыльцевых зерен у линий подсолнечника, ВНИИМК, Краснодар (2011 г.)_

Линия Тип пыльцевых зерен

необработанные обработанные

основной - аномальный-стерильный, % основной - аномальный-стерильный, %

¡пн-Я7 96-3-1 89-5-6

цт-Ш2 94-6-0 92-5-3

¡тМШ 97-0-3 90-3-7

¡пп-В5 92-3-5 87-9-4

¡1Ш-В7 95-2-3 87-5-8

¡гш-В19 98-1-1 86-6-8

¡1Ш-В21 92-4-4 85-9-6

Из представленных данных можно заключить, что изученные линии подсолнечника после обработки послевсходовым гербицидом отличались по проценту аномальных пыльцевых зерен, которые не могут успешно участвовать в процессе оплодотворения. В процессе опыления у растений подсолнечника важным качеством пыльцевых зерен является ее фертильность и однородность. При изучении линий подсолнечника после гербицидной об-

работки наблюдался большой процент слипшихся пыльцевых зерен, процент аномальных пыльцевых зерен составил 3-10 %. Однако за счет достаточного количества нормальных пыльцевых зерен, происходит компенсация и процесс оплодотворения протекает успешно.

Учитывая тот факт, что анализ пыльцевых зерен является широкооп-робированным тестом, тем не менее, исследование генетической особенности каждой культуры играет важную роль.

Анализ гаметофита у растений подсолнечника позволил оценить действенность данного метода и поскольку существенных отличий не обнаружено, мы решили продолжить исследования на культуре отличной от подсолнечника по геномному составу, технологии возделывания и способу опыления.

Пыльцевой анализ у растений озимой мягкой пшеницы. В результате трехлетних исследований пыльцевых зерен озимой мягкой пшеницы, наблюдали изменения состояния мужского гаметофита на вариантах с озимой пшеницей при применении послевсходовых гербицидов.

Наши исследования были начаты с оценки влияния послевсходовых гербицидов на пыльцевую продуктивность и качество пыльцы озимой мягкой пшеницы. Оценка была проведена с помощью двухфакторного дисперсионного анализа. Эксперимент по оценке фертильности пыльцевых зерен предусматривал изучение материала за три года. В связи с этим помимо фактора вариант опыта, год также выступал в качестве самостоятельного контролируемого фактора. Результаты эксперимента были обработаны с использованием модели двухфакторного дисперсионного анализа (таблица 6).

Таблица б - Результаты двухфакторного дисперсионного анализа фертильности пыльцевых зерен озимой мягкой пшеницы сорта Таня с факторами «Вариант опыта» и «Год», Краснодар (2011-2014 гг.)__

Изменчивость шБ И Дисперсия Доля в общей дисперсии, %

Общая 239 49,08 100

Между годами 2 76,91 1,57 0,00 0,00

Между вариантами 1 990,54 20,18 7,85 13,41

Взаимодействие 2 99,34 2,02 0,00 0,00

Остаточная 234 49,08 49,08 86,59

Анализ показал, что на фертильность пыльцевых зерен достоверно влияет только фактор «Вариант опьгга». Доля его влияния составляет 13,4%.

Сравнение средних значений фертильности показало, что фертильность в варианте без обработки послевсходовыми гербицидами статистически достоверно выше, чем в варианте о обработкой (Х|=85,96±1,11;

х2=79,82±0,52; р<0,05, где Х| - контроль, х2 - вариант с обработкой гербицидами).

Исследования по определению количества пыльцевых зерен в пыльниках пшеницы показали, что существенных различий между вариантами с и без обработки послевсходовыми гербицидами не обнаружено. На обоих вариантах среднее количество пыльцевых зерен в пыльнике находилось в пределах 2829-2946 шт.

Важным показателем качества пыльцевых зерен является их жизнеспособность, т. е. способность пыльцы к прорастанию на рыльце пестика или питательной среде. По литературным данным температура для прорастания пыльцевых зерен злаковых культур в условиях термостата составляет 15—40°С, в течение 2—8 часов. В нашей работе результат прорастания пыльцевых зерен пшеницы получили при температуре +30 °С, и через 6 часов.

По определению жизнеспособности пыльцевых зерен пшеницы были предприняты неоднократные попытки установления зависимости влияния токсиканта (гербицид) на данный показатель, однако полученные данные не позволяют сделать однозначное заключение, так как процент проросших пыльцевых зерен был слишком низким и составил 5-10 %.

По результатам полученных данных можно сделать вывод, что при применении послевсходовых гербицидов на посевах линий гербицидо-устойчивого подсолнечника и озимой мягкой пшеницы сорта Таня происходит снижение фертильности пыльцевых зерен, это влияние не губительно для растения и мало значимо для урожая. За счет компенсаторного механизма растений и высокой пыльцевой продуктивности культуры процессы опыления и оплодотворения протекают успешно.

Глава 5. Формирование элементов продуктивности озимой мягкой пшеницы с учетом действия послевсходовых гербицидов. При неблагоприятных условиях окружающей среды происходит нарушение процесса развития генеративных органов, что может привести к снижению продуктивности растений и в конечном итоге недобору урожая.

Потеря урожая зерна зависит как от длительности действия неблагоприятных факторов среды, так и от агротехнологий возделывания. Оценка озимой мягкой пшеницы сорта Таня по основным элементам продуктивности представляет интерес при определении реализации генетического потенциала сорта в определенных условиях возделывания.

Сравнение признаков продуктивности растений пшеницы в вариантах с обработкой послевсходовыми гербицидами и без нее было выполнено с использованием ^критерия Стьюдента (таблица 7).

Таблица 7 - Сравнение средних значений признаков продуктивности растений озимой мягкой пшеницы сорт Таня (2011 - 2014 гг.) _

Элементы продуктивности Среднее 1 Среднее 2 ^критерий

Длина колоса 10,15 9,23 4,24 *

Число колосков 19,40 18,08 5,61 *

Число недоразвитых колосков 1,04 0,83 1,67

Масса колоса 2,12 1,94 2,59 *

Число зерен с колоса 35,78 33,31 2,35 *

Число недоразвитых зерен с колоса 0,65 0,67 0,12

Масса зерен с колоса 1,56 1,48 1,92

Масса 1000 зерен 42,23 43,72 -1,43

Примечание: Среднее 1 - контроль, среднее 2 — варианты с обработкой по-слевсходовыми гербицидами; * указывает на достоверность различий

По результатам сравнения установлено, что из 8 учтенных признаков статистически достоверные различия выявлены только для четырех: длина колоса, число колосков, масса колоса, число зерен с колоса, причем достоверное превышение значений наблюдается в варианте без обработки, что свидетельствует о негативном влиянии применения послевсходовых гербицидов на продуктивные качества растений пшеницы.

Известно, что продуктивные качества растений, оцениваемые в рамках полевых экспериментов, зависят от конкретных условий сезонов вегетации, что может внести свои коррективы в конечный результат. В связи с этим при изучении продуктивности растений пшеницы был выполнен двух-факторный перекрестный дисперсионный анализ с факторами «Вариант опыта» и «Год».

Дисперсионный анализ показал, что различия между годами вносят заметное варьирование для 6 признаков. Их доля колебалась от 3 % до 25 %. Различия между вариантами опыта выявлены для пяти признаков, их доля составляла от 1 % до 17 % от общей изменчивости признаков. Взаимодействие установлено в трех случаях с эффектом 2-10 %.

Невысокая доля эффектов контролируемых факторов («Год», «Вариант» и «Взаимодействие») объясняется высокой остаточной дисперсией, однако сам факт выявления достоверных различий между средними разных факторов. Результаты множественного сравнения средних значений по признакам продуктивности растений представлены в таблице 8.

Таблица 8 - Результаты множественного сравнения средних значений по признакам продуктивности растений озимой мягкой пшеницы сорта Таня, Краснодар (2011 - 2014 гг.)__

Вариант Среднее Ранговый тест

Длина колоса, см

С обработкой 9,2

Без обработки 10,2 ****

Число колосков, шт

С обработкой 18,08 ****

Без обработки 19,40 ****

Масса колоса, г

С обработкой 1,94 +***

Без обработки 2,12 ****

Число зерен с колоса, шт

С обработкой 33,31

Без обработки 35,78 ****

Длина колоса растений пшеницы в варианте «Без обработки» статистически достоверно была больше, чем в варианте «С обработкой», так 10,2 см против 9,2 см, соответственно. «Число колосков» так же на контрольном варианте была выше, чем на исследуемом варианте.

Количество зерен в колосе на варианте с обработкой послевсходо-выми гербицидами составило 33,3 шт., а на варианте без обработки -35,8 шт., что свидетельствует о не существенном различии межау вариантами опыта.

Воздействие послевсходовых гербицидов на культурные растения, в данной случае растений пшеницы, проявляется, как правило, не в их гибели, а некотором снижении интенсивности роста, изменениях репродуктивных органов и в конечном итоге - на урожайности растений. В благоприятных для роста и развития растений условиях фототоксичное действие послевсходовых гербицидов может оказаться не очевидным, так как будет скомпенсировано устранением сорняков и за счет этого увеличением урожайности.

Подходы к исследованию потомства озимой мягкой пшеницы сорта Таня на действие послевсходовых гербицидов Пума Супер 75 и Секатор Турбо. Проведенные нами исследования по установлению зависимости влияния послевсходовых гербицидов Пума Супер 75 и Секатор Турбо, на ценоз в целом, показали неоднозначные результаты. Так, при проведении биологического тестирования почвы наиболее чувствительными оказались кресс-салат, как представитель культур, размножающийся семенами, и ряска малая, как взрослое растение одного поколения.

Исследования репродуктивной системы сельскохозяйственных культур на примере состояния мужского гаметофита и анализа продуктив-

ности растений озимой мягкой пшеницы позволяет получить интегральную оценку состояния целого растения в ценозе, проследить изменения, затрагивающие репродуктивную систему и отражение влияния на потомство, выбрать стратегию селекционных работ с учетом воздействия герби-цидной нагрузки.

Нами были проведены исследования по установлению наследования влияния послевсходовых гербицидов в потомстве. Установлено, что фер-тильность пыльцевых зерен в потомстве не зависит от обработки растений послевсходовыми гербицидами не смотря на высокий коэффициент вариации (от 6, 34 % до 10,95 %). Анализ наследования влияния гербицидов в потомстве озимой мягкой пшеницы сорта Таня представлен на рисунке 2.

Среднее значение признаков проду|сгивности пшеницы

Масса 1000 зерен, г

Масса зерен с колоса, г

Число недоразвитых зерен с колоса, шт

Число зерен с колоса, шт Масса колоса, г Число недоразвитых колосков, шт Число колосков,шт

Длина колоса, см

0 10 20 30 40 50

13 Вариант 2 н Вариант 1 я Контроль 2 а Контроль 1 Рисунок 2 - Анализ наследования влияния гербицидов в потомстве озимой мягкой пшеницы сорта Таня: Контроль - без обработки гербицидами два года проведения исследований; контроль 2 - обработка гербицидами на второй год проведения исследований; вариант 1 - обработка гербицидами на второй год исследования не проводилась; вариант 2 - два года проводили обработку гербицидами

При анализе потомства на выявление влияния послевсходовых гербицидов Пума Супер 75 и Секатор Турбо закономерности не наблюдается. Отклонение от контроля по средним значениям признаков не значительны. Таким образом анализ данных позволяет сделать вывод, что действие послевсходовых гербицидов Пума Супер 75 и Секатор Турбо на потомство растений пшеницы не проявляется по таким показателям как фертильность

пыльцы, длина колоса, масса колоса и число зерен с колоса, т. е. проявляется на двух уровнях клеточном и организменном. Возможно, это связано с механизмом действия самого препарата или индивидуальной особенностью растений пшеницы.

Предлагаемая нами схема анализа влияния послевсходовых гербицидов на репродуктивную систему сельскохозяйственных растений пред-

Рисунок 3 - Схема проведения скрининга действия послевсходовых гербицидов, на примере растений озимой пшеницы.

Проведение цитогенетического скрининга посевов пшеницы может проходить в несколько этапов:

1. Биотестирование почвы, нацеленное на выявление негативного действия послевсходовых гербицидов, которые тестируют на двух культурах: кресс-салате, как семенной тест и ряске малой, как взрослое растение. При проведении анализа необходимо учитывать следующие показатели: энергию прорастания семян тест-культур, силу роста и всхожесть семян, длину ростовых (осевых) органов тест-культур, число листецов на 3, 5 и 7 сутки.

2. Из пыльцевого анализа в скрининг включают анализ фертильности и стерильности, поскольку эти показатели являются наиболее информативными по сравнению с жизнеспособностью пыльцевых зерен растений.

3. Анализ репродуктивного потенциала культуры связан с продуктивностью растений, и включает восемь показателей: 1) длина колоса, 2) число колосков, 3) число зерен, 4) масса колоса, 5) масса зерен, 6) число недоразвитых колосков, 7) число недоразвитых зерен. 8) масса 1000 зерен. В нашем случае информативными оказались четыре: длина колоса, число колосков, масса колоса, число зерен с колоса.

Общая схема проведения скрининга представлена в таблице 9, которая состоит из трех основных блоков: 1-й блок (Биотестирование почвы), 2-й блок (Пыльцевой анализ), 3-й блок (Анализ продуктивности на примере растений пшеницы).

Таблица 9 - Рекомендации по проведению тестирования действия гербицидов Пума Супер 75 и Секатор Турбо в посевах пшеницы

Метод анализа Цель исследования Рекомендуемый способ

1-й блок Биотестирование почвы Выявление негативных эффектов применяемых гербицидов на почву как один из компонентов ценоза Тестирование почвы проводить несколькими методами, в том числе методом прямого высева семян в почву, обработанной послевсходовыми гербицидами. Использовать в качестве тест-объектов несколько культур, разных по таксономической характеристике (рекомендуются семена кресс-салата и растений ряски малой).

Учитывать следующие показатели: а) энергию прорастания семян тест-культур; б) силу роста и всхожесть семян; в) длину ростовых (осевых) органов тест-культур; г) число листецов на 3, 5 и 7 сутки.

2-й блок Пыльцевой анализ Влияние послевс- ходовых гербицидов на репродуктивную систему сельскохозяйственных растений При проведении исследований (сбор материала пыльцы) осуществлять в фазу начала цветения (девятый этап органогенеза) и проводить в утренние часы.

Использовать метод определения фер-тильности пыльцевых зерен. В выборку включать по 10 растений с каждого варианта опыта. При этом проводить анализ пыльцы не менее чем на 100 пыльцевых зернах и учитывать следующие параметры: а) фертильность пыльцевых зерен; б) стерильность пыльцевых зерен; в) наличие аномальных пыльцевых зерен.

Для подсчета количества пыльцевых зерен использовать камеру Горяева и в качестве красителя использовать ацетокармин.

3-й блок Анализ продуктивности растений Влияние послевс- ходовых гербицидов на репродуктивную Анализ продуктивности растений пшеницы проводить по следующим показателям: а) длина колоса; б) число колосков в колосе; в) число зерен с колоса; г) масса колоса;

продолжение таблицы 9

систему сельскохозяйственных растений

д) масса зерен с колоса;

е) число недоразвитых колосков;

ж)число недоразвитых зерен с колоса;

з) масса 1000 зерен.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

1. Наиболее эффективной культурой по отзывчивости на присутствие послевсходовых гербицидов Пума Супер 75 и Секатор Турбо в почве являются семена кресс-салата, так как он показал результат уже на третьи сутки от начала эксперимента. Наименее результативной оказалась пшеница, так как эффект негативного влияния послевсходовых гербицидов проявился только на седьмые сутки.

2. В мониторинге токсического действия послевсходовых гербицидов можно использовать растения ряски малой, по которым легко дифференцировать почву разного уровня загрязнения на седьмые сутки проведения эксперимента.

3. Разработаны и предложены для практического использования биотестирования почвы биологические модели анализа почвенных образцов, позволяющие поддерживать постоянный микроклимат тестируемых образцов. На разработанные модели получены два патента Российской Федерации (Устройство для биотестирования почвы: патент на полезную модель № 139000 РФ, 2014; Переносной контейнер для биотестирования почвы: патент на полезную модель № 148100 РФ, 2014).

4. Анализ линий гербицидоустойчивого подсолнечника, обработанного послевсходовым гербицидом Евро-Лайтнинг в фазу 3-4 пар настоящих листьев показал, что фертильность пыльцевых зерен у обработанных линий подсолнечника не снижается при норме фертильности 90-100%. Во всех случаях фертильность пыльцы была в пределах нормы. По результатам анализа репродуктивной системы озимой мягкой пшеницы было получено, что на фертильность пыльцевых зерен достоверно влияет только вариант опыта «Обработка гербицидами».

5. Исследования количества пыльцевых зерен в пыльнике у растений пшеницы в зависимости от обработки послевсходовыми гербицидами Пума Супер 75 и Секатор Турбо в фазе кущения показали, что существенных различий между вариантами с обработкой гербицидами и без нее не обнаружено, среднее количество пыльцевых зерен в пыльнике находилось в пределах 2829-2946 шт., по результатам определения жизнеспособности пыльцы пшеницы в лабораторных условиях закономерности влияния послевсходовых гербицидов на растения пшеницы не установлено, так как процент проросших пыльцевых зерен слишком низкий и колеблется в пределах 5-10 %.

6. По результатам сравнения элементов продуктивности растений пшеницы установлены различия между годами для 6 признаков: длина колоса, число недоразвитых колосков в колосе, масса колоса, число зерен с колоса, масса зерен с колоса и масса 1000 зерен, между вариантами опыта -по пяти признакам: длина колоса, число колосков в колосе, масса колоса, число зерен с колоса, масса зерен с колоса. Показатели продуктивности колоса растений в варианте «Без обработки» статистически достоверно были больше, чем в варианте «С обработкой».

7. Фертильность пыльцевых зерен, в зависимости от обработки по-слевсходовыми гербицидами не изменяется в потомстве. Отклонение от средних значений в процентном отношении составляет от 6,34% до 10,95%. При анализе потомства обработанных растений на выявление влияния по-слевсходовых гербицидов по показателям продуктивности растений различий по вариантам не наблюдается. Таким образом на элементы продуктивности растений пшеницы послевсходовые гербициды, применяемые на материнские растения, в их потомстве не влияют, продуктивность не снижается.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ПРАКТИКИ

Предлагаются методы оценки адаптивных и урожайных свойств высших растений, подвергнутых обработке послевсходовыми гербицидами на основе анализа репродуктивной системы, по состоянию мужского гаме-тофита, анализа структуры урожая растений и биотестирования почвы.

При биологическом анализе почвы на присутствие послевсходовых гербицидов тестировать почву с использованием биологических моделей, на которые получены патенты Российской Федерации (Патент на полезную модель № 139000 РФ, 2014; № 148100 РФ, 2014) и двух тест-культур: кресс-салата и ряски малой.

Для индивидуального анализа продуктивности растений использовать биологические модели: сушки малых партий семян и хранения плодов растений, на которые получены патенты Российской Федерации (Патент на полезную модель № 140303 РФ, 2013; № 146651 РФ, 2014).

Для оценки действия послевсходовых гербицидов на растения в посевах подсолнечника и озимой мягкой пшеницы использовать пыльцевой анализ на основе фертильности и однородности пыльцевых зерен.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ: Публикации в изданиях, рекомендуемых ВАК:

1. Лукомец, В. М. Цитологический скрининг мужского гаметофита линий подсолнечника, устойчивых к имидазолиноновым гербицидам [Текст]/ В. М. Лукомец, Н. И. Бочкарев, Л. В. Цаценко, А. А. Пихтярева, А. М. Бурдун,

А. С. Синельникова (Звягина) // Труды Кубанского государственного универ-отгета, № 2(35), 2012 - С.117-122. - ает. 0,09 п. л.

2. Цаценко, Л. В. Пыльцевой анализ в селекции растений [Электронный ресурс] / J1. В. Цаценко, А. С. Синельникова (Звягина) // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ). - Краснодар: КубГАУ, 2012. -№ 03(077). - С. 88-98. - Режим доступа: http://ej.kubagro.ni/2012/03/pdC09.pdf. -авт. 0,5 п. л.

3. Звягина, А. С. Показатель фертильности мужского гаметофита как критерий в биотестировании влияния гербйцидов на репродуктивную систему озимой мягкой пшеницы [Электронный ресурс] / А. С. Звягина // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ). - Краснодар: КубГАУ, 2014. - № 04 (098). С. 675-685. - Режим доступа: http://ej.kubagro.ru/2014/04/pdff50.pdf. -авт. 1,38 п. л.

Публикации в других изданиях:

4. Синельникова (Звягина), А. С. Влияние гербицида нового поколения Евро-Лайтнинг на состояние мужского гаметофита растений подсолнечника [Текст] / А. С. Синельникова, Л. В. Цаценко // Научное обеспечение агропромышленного комплекса. Материалы V Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых. Краснодар, 2011. - С.746-747. - авт. 0,08 п. л.

5. Синельникова (Звягина), А. С. Использование тест-системы на основе ряски малой Lemna minor L. для выявления остаточного действия гербицида в селекционных посевах подсолнечника [Текст] / А. С. Синельникова, А. А. Пих-тярева // Вклад ВОГиС в решение проблем инновационного развития России: Материалы научно-практической конференции Кубанского отделения ВОГИС. - Краснодар, 2012. - С. 155-156. - авт. 0,09 п. л.

6. Звягина, А. С. Оценка фитотоксичного действия гербицидов по изменению роста проростков озимой пшеницы [Текст] / А. С. Звягина, Л. В. Цаценко // Наука и Образование в XXI веке. Часть V. Москва, 2013. - С.65-66. - авт. 0,03 п. л.

7. Звягина, А. С. Оценка фертильности пыльцевых зерен пшеницы, после обработки гербицидами [Текст] / А. С. Звягина // Мониторинг в растениеводстве и земледелии. Материалы научно-практической конференции преподавателей по итогам НИР за 2012 год. - С. 21-22. - авт. 0,06 п. л.

8. Звягина, А. С. Реакция мужского гаметофита озимой мягкой пшеницы на воздействие гербицидов [Текст] / А. С. Звягина, Л. В. Цаценко // Мониторинг в растениеводстве и земледелии. Материалы научно-практической конференции преподавателей по итогам НИР за 2013 год Краснодар, КубГАУ. - С. 3-15. - авт. 0,11 п. л.

9. Звягина, А. С. Использование пыльцы растений пшеницы в качестве индикатора влияния гербицидов [Текст] / А. С. Звягина, Л. В. Цаценко // VI съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров (ВОГиС) и ассоциированные генетические симпозиумы. Экологическая генетика, Ростов-на-Дону. - 2014. - С. 194-195.-авт. 0,13 п. л.

10. Звягина, А. С. Оценка действия гербицидов на тест-растения [Текст] / А. С. Звягина, Л. В. Цаценко // Материалы VIII всероссийской научно-практической конференции молодых ученых, Краснодар. - 2014. - С. 110-111.-авт. 0,13 п. л.

Патенты и свидетельства регистрации баз данных РФ:

11. База данных № 2014620098 Российская Федерация. Иллюстрированный гнд по теме «Мейоз у растений» [Текст] / Л. В. Цаценко, А. С. Синельникова (Звягина); заявитель ФГБОУ ВПО Кубанский ГАУ. - Заявка № 2013621519, дата приоритета от 18.11.2013.-авт. 15 %.

12. База данных №2014621088 Российская Федерация. Модели в биологических исследованиях» [Текст] / Л. В. Цаценко, А. С. Синельникова (Звягина), Н. А. Цаценко ; заявитель ФГБОУ ВПО Кубанский ГАУ. - Заявка № 2014620790, дата приоритета 11.06.2014. - авт. 15 %.

13. База данных № 2012620192 Российская Федерация. Пыльцевой анализ в иллюстрациях и комментариях [Текст] / Л. В. Цаценко, А. С. Синельникова (Звягина); заявитель ФГБОУ ВПО Кубанский ГАУ. - Заявка № 2011620973, дата приоритета 15.12.2011. - авт. 15 %.

14. Патент № 139000 Российская Федерация, МКП A01G. Устройство для биотестирования почвы [Текст] / Л. В. Цаценко, А. С. Звягина, Н. А. Цаценко ; заявитель и патентообладатель ФГБОУ ВПО Кубанский ГАУ. -№2013148492/13,заявл. 30.10.2013: опубл. 27.03 2014, Бюл. №9.-авт. 15%.

15. Патент № 140303 Российская Федерация, МКП A23L3/00. Контейнер для сушки малых партий семян [Текст] / Л. В. Цаценко, А. С. Звягина, Н. А. Цаценко ; заявитель и патентообладатель ФГБОУ ВПО Кубанский ГАУ. - № 2013157689/13, заявл. 24.12.2013: опубл. 10.05.2014, Бюл. 12,-авт. 15%.

16. Патент № 146651 Российская Федерация. Контейнер для сушки и хранения плодов: МКП A01F 25/14 (2006.01), A01F 25/00 (2006.01), В65В 25/02 (2006.01) [Текст] / Л. В. Цаценко, А. В. Моисеев, А. С. Звягина, Н. А. Цаценко ; заявитель и патентообладатель ФГБОУ ВПО Кубанский ГАУ. - № 148100 U 1, заявл.01.072014:опубл20.10.2014),Бюл. 29.-авт. 15%.

17. Патент № 148100 РФ, Переносной контейнер для биотесгирования почвы: МКП А01 G 31/02 (2006.01) [Текст] / Л. В. Цаценко, Г. В. Перминова, А. С. Звягина, Н. А. Цаценко; заявитель и патентообладатель ФГБОУ ВПО Кубанский ГАУ. -№ 148100 U 1, заявл. 29.07.2014: опубл. 27.112014, Бюл. 33. -авт. 15%.

Подписано в печать22„ 04.2015 г.

Бумага офсетная Формат 60х84'/|6 Печ. л. 1 Офсетная печать Тираж 100 экз._Заказ № 202

Отпечатано в типографии Кубанского ГАУ 350044, Краснодар, ул. Калинина, 13

2012478140

2012478140