Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Особенности функционирования гипофизарно-надпочечниковой системы у мышей с наследственно обусловленным нарушением иммунной системы (линия NZB)

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Особенности функционирования гипофизарно-надпочечниковой системы у мышей с наследственно обусловленным нарушением иммунной системы (линия NZB)"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ ИНСТИТУТ ФИЗИОЛОГИИ

На правах рукописи

УДК

ЧУХЛИБ Виктория Львовна

ОСОБЕННОСТИ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ИПОФИЗАРНО-НАДПОЧЕЧНИКОВОЙ СИСТЕМЫ У МЫШЕЙ С НАСЛЕДСТВЕННО ОБУСЛОВЛЕННЫМ АРУШЕНИЕМ ИМУННОЙ СИСТЕМЫ (ЛИНИЯ Ы1В)

03.00.13 - физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск, 1992

ОБИАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТ« Актуальность проблемы. Многочисленные данные свидетельствуют о тесном взаимодействии кмиукноа и нгвроэндокринноа систем. Известно что как пептидное, так и стероидное гормона оказывают существенное влияние на ход юмушшх процессов. Производные проодиомелгкоксрткпа - АХТГ, эндор$гаш и энкефа-лш;ы способны модулировать Функционирование больжкнспш типов лимфокдкых клеток (Bateüan et al., 1939, Blalock, 198S). В условиях in vitro установлено действие глыхокортккоидов иа некоторые функции лимфоцитов, в частности, иг. синтез лянфо-кинов, специфических медиаторов иммунной системна, а такне экспрессии рецепторов к нам на клеточкой поьерхкости (Chan et al., 1937, Miguel et al., 1986). Согласно гипотезе В-аез-dovsky с соавторами повшхенке уровня глзхокортнкендео ка определениях стадиях иммунного ответа усиливает его специфичность (Besedevsky et al., 1977, Besedovsky et &1., 1S83). С другоп стороны, имеются даикис о той, что фактора лимфо-идяого происхождения модулируют эндокринные функции-. Еолхи, продуцируема а ктизнросанными иммуноцмтами - Ил-1, Ил-2, Ил-6, ФКО, иитер?ерок, гормона ткмуса - существенно влияют на целый ряд эндокринных показателей (Hall et al., 19S5, V'eigent et al., 1987, BateE&n et si., 1S8S). Данные последки?: лет свидетельствуют о тон, что в регуляции иммункых и эндокринных функцка участвуют одни и те же гуморальные Факторы. Оказалось, что способность синтезировать пептидные гормоны присуща не только классическим эндокринным тканям, но при определенных условиях и лимфоцитам (Batesnan et al., 1989, Blalock , 1989). В то хе время иммуноциты имеют на своей поверхности рецепторы к этим гормонам1 к способны реагировать кг. них изменением своих специфических функцка (Blalock, 1989). Все эти данные позволили сформулировать гипотезу о существовании единой иммуно-неярозкдокрикнок системы, обеспечкваюиея гомеостаз организма (Bateesn et el., 138Э).

В связи с большим числом иммунологических проВлем, вставших перед современной медициной и биологиеП, резко возросла актуальность анализа механнзмоз взаимодействия и взаиморегуляцкп отдельных звеньев этоп системы.

Чрезвычайно удобным объектом для исследования данного нопроса являются животные с генетически обусловленными патологическими нарушениями иммунитета. Проводимые на них исследования позволяют не только более детально проследить механизмы взаимодействия двух систем, но и приблизиться к пониманию причин возникновения патологии.

Мыши линии NZB являются моделью таких аутоиммунных заболеваний человека как гемолитическая анемия и системная красная волчанка. У этих животных в определенном возрасте начинают вырабатываться антитела к собственным эритроцитам, нуклеиновым кислотам, тимоцигам. Кассовая продукция аутоан-тител ведет к накоплению в крови иммунных комплексов, отложению их на базальной мембране и сосудах почек, что приводит к развитию летального комплексного глокерулонефрита.

Известно, что гормоны коры надпочечников необходимы для осуществления нормальных иммунных реакция. При аутоиммунных расстройствах нарушенными оказываются именно те звенья иммунной системы, функционирование которых в норме регулируется кортикостероидами - синтез лимфокинов (Blech, Baker, 1986), экспрессия рецепторов для них на лимфоцитах (Redondo et al., 1988), продукция гормональных факторов тимуса (Dar-denne et al., 1988).

Цель настоящей работы состояла в исследовании механизмов взаимодействия иммунной и эндокринной систем у животных с генетически обусловленными нарушениями иммунитета (мыши линии NZB).

Основные задачи:

1) исследовать реакцию гипофизарно - надпочечниковоя системы у больных и здоровых животных на введение Ил-2, медиатора иммунной системы;

2) оценить экспрессию гена ПОМК а гипофизах мышей в разные возрастные периоды, а также у больных и здоровых животных после введения Ил-2;

3) изучить динамику содержания кортикостерона в плазме крови мышей в различные периоды;

4) проанализировать изменения продукции кортикостерона надпочечниками in vitro и их реактивность к экзогенному корти-

котропину с возрастом;

5) оценить связывающую способность КСГ (транскортнна), регулирующего величину пула свободного активного гормона в крови.

Научная новизна. Проведено исследование влияния Ил-2 на различные уровни гипофизарно-на^почечниковой системы у здоровых мышей и животных линии NZB с наследственно обусловленными нарушениями иммунитета . Впервые продемонстрировано, что Ил-2 оказывает стимулирующее влияние на экспрессию гена ПОМК, а такие на уровень кортикостерона у здоровых мышея in vivo. Установлено, что больные животные не отвечают повышением концентрации кортикостерона в крови и увеличением экспрессии гена ПОМК на введение Ип-2, что свидетельствует о нарушении взаимосвязи между иммунной и эндокринной системами.

Впервые проведено исследование функциональной активности гипофизарно-надпочечниковой системы у мышей линии NZB. Установлено, что у этих животных с возрастом резко падает концентрация кортикостерона, причем снижение уровня глюко-кортикоидов не является результатом ослабления базалыюя экспрессии гена ПОМК и связано, вероятно, с падением чувствительности надпочечников к АКТГ. Показано, что у больных мьшея увеличена концентрация и повышена связывакщая способность траискортина, что в еще большей степени снижает пул биологически активного гормона. Поскольку введение Физиологических доз дексаметаэона препятствовало развитии заболевания , можно предполагать, что нарушение взаимодействия иммунной и нейроэндокринной систем обусловлено ослаблением Функциональной активности ГНС.

Научно - практическая ценность. Полученные результаты развивают теоретические представления о взаимосвязи иммунной и эндокринной систем. Данные о влиянии Ил-2 на экспрессию гена ПОМК у больных и здоровых животных служат дополнительной информацией о молекулярных основах этого взаимодействия. Результаты могут иметь практическую значимость в связи с широким распространением аутоиммунных патологий в человеческой популяции. Материалы диссертации использованы для составления методических рекомендаций "Комплексная оценка функ-

циональноя активности надпочечников у мьшея в норме и после различных воздействия" (Новосибирск, 1992).

Апробация работы■ Материалы диссертации выли доложены на 3-й школе семинаре по генетике и селекции животных (Бийек, 1989), на I Международном симпозиуме "Биологические модели" (Пущино, 1989), на Международном симпозиуме "Физиология адренокортикальноп системы" (Ленинград, 1990), на IV Международном симпозиуме "Circumventricular organs and fluid environment molecular and functional aspects" (Леяпциг, Германия, 1991).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ.

Обьем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обаора литературы (г 1ава 1), описания объектов и методов исследования (глава 2), изложения результатов собственных исследований (глава з), обсуждения результатов (глава 4), выводов и списка литературы. Диссертация изложена на 103 страницах машинописного текста, содержит 7 рисунков и 4 таблицы. Список использованноп литературы включает 96 источников, в том числе 92 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследования проводились на самцах мывея линии DBA/2 и мышах NZB с наследственно обусловленной аутоиммунной патологией.

Дексаметазон (Dexamethasone, Sigma) в дозе 5 мкг на мышь вводили группе мышей NZB, начиная с 4 месячного возраста 2 раза в неделю. Навеску гормона растворяли в спирте. Для инъекция спиртовыя раствор дексаметазона разводили стерильным Физиологическим раствором. Контролем служили животные тов же линии, которым вводили равныя объем (0,1 мл) 2,5Х-ного спирта в физиологическом растворе .

Интерлеякин-2 (Ил-2, Институт органического синтеза, Рига, Латвийская ССР) экспериментальным животным обеих линия вводили внутрибрюиинно в дозе 200 IU на мышь. Лиофилизиро-ванный препарат разводили до необходимой концентрации раствором Хенкса, равныя обьем которого вводили контрольной группе. Мышеи забивали через 1 и 6 часов после введения

препарата.

При исследовании реактивности надпочечников к действию эндогенного кортикотропина к одной из двух предварительно отмытых желез каждого животного добавляли 20 mil) АКТГ (АСТН, Serva) на 1 мл инкубационной среды.

Содержание антиэритроцитарных аутоантител определяли с помоцью антиглобулинового теста (Mellors, 1965).

Оля оценки продукции кортикостерона надпочечниками и их реактивности к эндогеннону АКТГ применяли метод инкубации желез в условиях in vitro (Колпаков, 1974).

Концентрацию кортикостерона в плазме крови и инкубатах надпочечников определяли методом конкурентного белкового связывания (Murphy, 1967) в модификации, не требуюцея предварительной экстракции стероидов (Тинников, Бажан, 1984).

Для определения содержания транскортина и его связывающей способности использовали Скэтчардовския анализ (Chesnokova et al., in press).

Уровень экспрессии гена ПОМК оценивали по результатам блот-гибридизации суммарной РНК, выделенной из гипофизов экспериментальных животных (Chomezynski et al., 1987), с кДНК ПОМК крысы (Ианиатис и др., 1984).

Статистическая обработка результатов экспериментов проводилась по имеющейся в ИЦиГ СО РАН программе дисперсионного анализа выборок. При оценке достоверности различия групп данных использовали t-критерий Стьюдента (Лакин, 1973). Построение Скэтчардовских графиков и нахождение константы ассоциации и концентрации транскортина в крови проводили с помощью миниЭВМ "Искра".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Признаком развития аутоиммунных процессов у мышея линии NZB служит появление у них антител к собственным эритроцитам . Для того, чтобы можно было сопоставить эндокринные изменения в организме с развитием заболевания, необходимо иметь представление о динамике появления у животных аутоантител . Первые антитела у интактных самцов NZB были зарегистрированы в 6-месячном возрасте. Далее процесс образования аутоантител лавинообразно нарастал и к 12 месяцам 97% животных давало положительный результат в антиглобулиновом тесте

(табл. 1). У мышей контрольной линии 1)ВА/2 антиэритроцитар-Таблица 1.

Динамика появления антиэритрсцитарных аутоантител у интактных мышеп линии ыгв.

возраст (мес ) количество исследованных животных из них X заболевших животных от общего числа исследованных

без АТ с АТ

4 129 129 - 0

5 126 125 1 0,7

6 126 121 5 3,9

7 120 98 22 18,3

8 54 25 29 53,7

9 73 27 46 63,0

10 82 14 68 82,9

11 86 2 84 97,6

12 95 2 93 97,9

ных антител обнаружить не удалось ни в один исследуеннй период. Поскольку первые аутоантнтела были зарегистрированы у мыиея в 6 месяцев, этот возраст рассматривался нами как критический для проявления патологии и в.дальнейших экспериментах использовались мыши трех возрастных групп: 2-3 месячные здоровые животные без каких-либо аутоиммунных проявлений; 6-7 месячные, взятые в период, соответствующий началу заболевания; 10-12 месячные животные с уже развившимися аутоиммунными процессами.

Одним из важных иммуномедиаторов, обеспечивающих передачу информации от иммунной системы к эндокринным структурам, является нктерлеякин-2. В многочисленных работах, пос-вяцеиных аутоиммунным заболеваниям, основную роль в развитии патологии авторы отводят именно ему (Кгоегоег, 1989). Проведенные нами эксперименты показали, что Ил-2 одновременно оказывает влияние на различные уровни гипофизарно-

иадпочечниковоя системы, причем на всех исследованных уровнях были выявлены принципиальные различия между больными и здоровыми ЕИЕотаьгмн, Так, через 6 часов после введения Ил-2 содержание мРНЕ пена ПОИВ у здоровых животных йутоиммунноя и контрольной ллния значительно увеличивалось, у больных же мышея уровень- мРНК ЙОМХ в ответ на предлагаемый стимул не изменяло? (рис. 1).

Через 1 час после введения Ил-2 содержание кортикосте-рона у мышея липни ЕВА/2 й здоровых ныаея пгв разных возрастов достоверно (р<0,06) увеличивалось (рис. 2,). По сравнении с молодыми (2 месячными) еивотными к 6-ти месячному возрасту реакция ГНС на Ил-2 у здоровых мышея ыгв снижалась, но оставалась значительной. У животных 6-7 месяцев с нарушением иммунитета реакция данной системы на введение Ил-2 отсутствовала. Через 6 часов после введения препарата уровень кортикостерона у всех групп животных снижался (рис. 2,).

Таким образом, нами было показано, что у больных животных теряется чувствительность ГНС к введению Ил-2. Это свидетельствует о нарувеиии нормальных взаимодействия между нммунноя и иеяроэндокришюя системами.

Известно, что глпкокортнкоиды принимают участие в осуществлении иммунных реакция. Существует предположение, что кортнкостеронды предохраняют организм от возникновения ауто-реактивных клопов лимфоцитов (Р1еграоИ et а1., 1972, Везе-аоувку е! о1. , 1983). Известно, что у аутоиммунных животных оказываются поврежденными именно те звенья нммунноя системы, участие в регуляции которых в норме принимают глюкокортико-иды. Приведенные данные, а также обнаруженные нами нарувения взаимодействия иммунной и гипофизарно-надпочечннковоя систем позволили предположить, что у ианеи с наследственно обусловленной аутоннмуиноя патологией ГНС может быть функционально неполноценной.

Центральным звеном ГНС, определяющим ее функциональную активность, являжтся регуляторные гормоны гипофиза, поэтому исследование данной системы мы начали с анализа экспрессии гена [ЮМК - преднественника АКТГ. Результаты блот-гибридизации суммарной РНК, выделенной из гипофизов, с кДНК ПОМК крысы показали, что как у аутоиммунной так и у конт-

Рис, I. экспрессия Гена ДОМК в' гипофизу 6-месячных и здоровых мышей линии NZB в разные стоки noyie введения

^ vrtfi тм нд» ИНШЪ). • •

1.^гв с АТ^через т час отсела введения среда ХеИкса

2. мг.в с А1 через I час после введения Ш-Т

3. ягв о ат через 5 часов после введения Ил-2 -

4. N£3 без АТ через Г час после вреддния среда Холкса

5. дев без АТ ч'ереэ I лас после введения

6. тъ без АТ через &час п<*сле введения* Ш-2

%

500

1

2-5 нео 6-7 нес

. ое» АТ

Piif. 2. ьлияниэ введения Ил-2 ка ур'!' '.^ртикостер: нп г JIJILí'Mfl Крови мышей ЛИНИЙ N2B И DQA/'

•?.•! ''и* принят уровень коргик'нг- р н плазме крови 4ii •••«гчнх животньх.

П. и ординат - процент прироста содержания гормоив поел« вЕел:>ния Ил-2 "Yio отношению к оазольнейлу у^'ргшю.

га

уровень hopTiíKocTepona через I чпе пос.п fгедекия Ил-к! уровень кортикостерона через о нясс" нсп-ле введения Ил-2

рольной линии экспрессия гена ПОМК значительно увеличивается к 10-12 месяцам (рис. 3). Различия между молодыми и 6-7 месячными эивоткыии обеих линий несущественны, как несуиест-венны они меаду больными и адоровыни пимами NZB.

Исследование динаники уровня кортикостерона в крови аутоиммунных и нормальных животных показало, что у мыией контрольной линии DBA/2 концентрация гормона не меняется с возрастом (рис. 4). Эти результаты согласуются с данными, приводимыми в литературе (Zaleska-Freljan, 1979). У самцов аутоиммунлоя лииин NZB в 2-3 месяца уровень кортикостерона высок. Абсолютное значение концентрации данного гормона в 5 раз лревынает аналогичный показатель у контрольной линии (р<0,01). К 6-7 месяцам, времени появления аутоантител, уровень кортикостерона резко снижается, но все еще остается достоверно выае , чем у DBA/Я (р<0,05). К 10-12 месяцам концентрация гормона в периферической крови мыоея липли NZB уменьеается еце более (р<0,05) и уже не отличается от наблюдаемой в контроле. Таким образом, у мышей NZB возрастные изменения уровня кортикостерона существенно отличаются от того, что характерно для контрольной линии.

Результаты определения кортикостерона in vitro выявили, что у контрольных мьшев в 6-7 месяцев происходит временное уменьиение продукции кортикостерона (р<0.05) (табл. 2), что никак не отранается на содержании гормона в крови. У животных же аутоиммунной линии продукция кортикостерона надпочечниками на протяжении исследуемого периода не изменяется. Таблица 2.

Удельная продукция кортикостерона in vitro надпочечниками мыией циник NZB и DBA/2 (мкг/ЮОмг ткани/час).

2-3 мее 6-7 мее 8-9 мес 10 - 12 мес

NZB 1. 0,421-0,054 (23) 2' + 0,793-0,237 (11) ♦ 0,659-0,216 (9) 4- + 0,893-0,256 (9)

DBA/2 5' + 0,60Э-0,107 (21 ) 6- ♦ 0.302-0,063 (19) 1- + 0,670^0,154 (Ю) 8- + 0,544-0,07 5 (12)

- Э -

1 г 1 * г 4 *

■V '„ ■

Рис. 3. Возрастцян линиммса пкг.проесин Гена ¡ЮМК в гипофиза* интактных миной линий >.'7.в и ГОА/2. 1. ига

г. ргв.

3. .чгв

4. тав,

5. БВА/2

6. пвк/г

7. ввк/г

2-3 М9С

6-7 мес с АТ ' 6-7 мое без АТ' 10-12 мес ' 2-3 мзо ' . 6-7 мео 10-12, неу

у кг/ 10с ыл

16

ли 12 10 8 Ь

п2в

ом/г

2-3 6-7 1&-12

Рис. 4. Возрастные изменения уровня кортикостероня в плавмэ крови г самцов линий.игв (——.) и БВА/2 '—•). Ззпздачкаии обозначены различия (р<0.05) между киеЗтними тщелвдуемых линий соответствующих возрастов.

а.

Рс . < 0,05 P. „ < 0,05

i> , О V t I

Животные двух изучаемых генотипов различаются по рассматриваемому показателю только в возрасте 6-7 месяцев (р<0,05).

При оценке продукции кортикостерона надпочечниками in vitro в ответ на добавление к инкубационной среде 20 mill АКТР было показано, что реактивность надпочечников неаутоиммунной линии мышеи DBA/2 практически не изменялась с возрастом (рис. 5). Прирост продукции кортикостерона в ответ на АКГГ, измеряемый по отношении к базальному уровню секреции интактными железами, принятому за 100Х, колебался у них от 130 до 190%. У животных аутоиммунной линии наблюдались резкие изменения данного параметра. В 2-3 месячном возрасте у мышей NZB регистрировалась максимальная реактивность надпочечников . Прирост продукции кортикостерона в ответ на АКТГ составлял у них 420Х. К моменту начала заболевания - 6-7 месяцам - этот показатель снижался до 140Х от базального уровня секреции. В 10-12 месяцев надпочечники этих животных не отвечали на данную дозу тропного гормона. Полученные данные свидетельствуют о том, что активация функции надпочечников у молодых здоровых мышея линии KZB связана с повышенной чувствительностью желез к АКТГ. Потеря этой чувствительности с возрастом может приводить к снижению урозня гормона у старых животных.

Известно, что около 80Х кортикостероидов циркулируют в крови в связанном состоянии. Как показали результаты Faict с соавторами (1985), именно свободные, неассоциированные с КСГ гормоны обладают иммунорегуляторными свойствами. Концентрация свободного активного гормона определяется пулом свободных кортикостероидов, не связанных с транспортным белком. Косвенным образом об этом показателе можно судить по таким характеристикам КСГ как его связывающая способность и содержание в крови,

Результаты исследования показали, что у здоровых мышей аутоиммунной линии, у которых аутоантитела не регистрировались до 12 месяцев, и у мышея контрольной линии DBA/2 уровень КСГ не менялся с возрастом (рис. 6). У мыиея NZB, дающих положительную реакцию в антиглобулиновом тесте, наблюдалось достоверное увеличение данного показателя (р<0,05) прр

2-5 $ - 7 10-1» («во)

Рис. 5.' Возрастные изменения реактивности надпочечников к АНТГ у "мышей линий ЩВ (-) и БВА/2 (—).

За 1008 принят Сазальный уровень продукции кортикостерона.

По оси ординат - процент приросте удельной продукции кортикостерона под действием АКТГ (20 тГО/пй) по отношению к Сазальному уровню продукции.

В

(Ых10"

г7\

2-3

игв сАТ игв без АТ

6-7

10-12 "СО

Рис. 6. Возраст1ше изменения уровня транскортина в крови. По оси ординат - концентрация транскортина (И х 10 ). *2

развитии патологик (10-12 нес.).

Связывающая способность тракскортниа, оцениваемая по константе ассоциации К^ у здоровых мывеп И'ЛЪ и представителей контрольно« линии ОВА/2 не менялась с возрастом (табл. 3). У заболевших иьшее игв транскортина с гормоном значи-Таблица 3.

Возрастные изменения связывающей способности транскортина (Ка х 105 М-1).

2-3 нес 6-7 нес 10 - 12 мес

• без АТ с АТ

нгв 1. 2,9 ± 0,52 2. 3,9 2 0,38 3. 3,8 2 0,47 4. 9,1 - 0,79

БВА/2 5. 4,9 - 0,43 6. 4,1 2 0,61 7. 4,0 0,35

Р1,4; 2,4; 3,4 < °'01 Р1,5 < °-05

тельно выше, чем у животных отрицательных в антиглобулиновом тесте (р<0,01). Повышение содержания КСГ в крови и увеличение его связывающих способностей у больных мывеп позволяет 'говорить об уменьшении у них пула активных глюкокортикоидов. Уменьшение количества активных кортикостероидов может быть проявлением нарушения взаимодействия иммунной и эндокринной систем, а также одной нз вероятных причин развития патологических процессов у мыией ыгв.

Искусственное повышение.пула активного гормона введением близких к Физиологическим доз дексаметазона привело к задержке появления аутоантител у мышей с наследственно обусловленным нарушением иммунной системы. Оказалось, что первые антиэритроцйтарные аутоантитела регистрируются у 9% животных в 8-месячном возрасте, а к 12 месяцам заболевает только 57Х мышей (табл. 4), в отличие от интактных животных, которые заболевают на 2 месяца раньше, а к 12-месячному возрасту патология проявляется у 97Х мышей (рис. 7).

Таблица 4.

Динамика появления ангизритроцитарных аутоантител у мыиея линии игв После длительного введения дексаметазона.

возраст (мес ) количество исследованных животных из них X заболеввих животных от общего числа исследованных

без АТ с АТ

4 12 12 0 0

5 12 12 0 0

б 12 12 0 0

7 12 12 0 0

8 11 10 1 9

9 11 9 2 18

10 7 5 2 28,6

11 5 3 2 40

12 7 3 4 57

100*80% -60% 40% 20%

6 7 8 9 10 11 12 (нее)

Рис.7. Динамика появления антиэрнтроцитарных аутоантител у интактных (I II и после длительного введения дексаметазона (Е2Э) мышей линии Р«В.

- -

Таким образом, в результате исследования функционального состояния гипофизарно-надпочечниковоя системы у самцов мышея NZB нами установлено, что в период развития патологии у животных нарувается нормальнее взаимодействие между им-мунноя и эндокринной системами и резко снижается глюкокорти-коидныя тонус. Возможно, эти два фактора взаимозависимы и многочисленные литературные данные о взаимодействии иммунной и эндокринное систем позволяют считать такое предположение вполне вероятным. Можно полагать, что высокий уровень Функционирования этоя системы у молодых животных предохраняет организм от проявления наследственно обусловленного нарушения иммунитета. Обнаружено, что у мывея линии NZB к моменту заболевания снижается чувствительность различных звеньев ГНС к регуляторным пептидам (АКТГ, лимфокииам). Снижение реакции ГНС на стимулирующее действие иммуномодуляторов и уменьшение концентрации кортикостерона в плазме может лиаить организм регуляторного влияния глкжокортикоидов на процессы, происхо-дяиие в иммунной системе. Нортикостерон обеспечивает супрессию неспецифических клонов лимфоцитов, которые появляются в процессе иммунного ответа на определенные антигены (Schauenstein et al., 1987). Данные, полученные в навих экспериментах , рассмотренные совместно с опубликованными в литературе , позволяют предполагать , что нарушение функционирования ГНС может стать серьезным патогенетическим фактором в проявлении аутоагресски.

Полученные результаты подтверждают формирующееся в настоящее время представление о том, что иммунная и эндокринная системы составляют единый регуляторный контур поддержания иммунно-неяроэндокринного гомеостаза. Наруяение взаимосвязи между отдельными звеньями этого контура может приводить к возникновению патологических процессов.

ВЫВОДЫ

1. У животных с нормальной иммунной системой введение ИЛ-2 вызывает увеличение концентрации кортикостерона в крови. У мывея с развившимися аутоиммунными реакциями надпочечники не отвечают на данный стимул.

2. Возрастные изменения базального уровня экспрессии гена

ПОМК в гипофизе одинаковы у животных линия DBA/2 и NZB, но у здоровых мыоея NZB введение ИЛ-2 приводит к увеличению экспрессии гена ПОМК, а у животных с нарушением иммунитета данный лимфокин стимулирующего действия на гипофизарном уровне не оказывает.

3. У мышея линии DBA/2 содержание кортикостерона на временном промежутке от 2 до 12 месяцев не изменяется. У мышея же с наследственно обусловленными нарушениями иммунноя системы уровень гормона с возрастом значительно уменьшается, что коррелирует с развитием у животных аутоиммунных процессов.

4. Продукция кортикостерона in vitro надпочечниками мышея линии NZB в исследованные возрастные периоды не изменяется. У мышея линии DBA/2 этот показатель временно уменьшается в 6 месяцев. Реактивность желез к кортикотропному гомону у мыпея DBA/2 остается постоянной; у животных линии NZB данный показатель резко уменьшается к моменту появления аутоантител.

5. У мывеЯ линии DBA/2 и здорозых животных аутоиммунноя линии NZB содержание транскортина и его сродство к кортикостерону не изменяется с возрастом. У мывея N2B с развившейся патологией содержание транскортина и его сродство к переносимому гормону достоверно повышены по сравнению со здоровыми животными обеих линия. Это в еще больней степени может уменьшать пул активных кортикостероидов в крови аутоиммунных мывеЯ.

6. Длительное введение мышам NZB близких к физиологическим доз синтетического аналога глюкокортикоидов дексаметазона зцэадерживает появление аутоиммунных реакция.

7. Нарушение взаимодействия иммунноя и эндокринной систем у мышея линии NZB обусловлено, по всея видимости, снижением Функциональной активности ГНС в 6-7 месячном возрасте, что может быть одним из факторов, способствующих проявлении наследственно обусловленных аутоиммунных реакция.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Чеснокова В.М., Чухлиб В.Л., Игнатьева Е.В. "Глюкокортикоидный тонус" у мыпея с генетически

детерминированной аутоиммунной патологиея (линия NZB) // Известия Сибирского отделения АН СССР, сер. биол. наук. -

1989. - вып.2. - С. 26.

2. Чеснокова В.М., Чухлиб В.Л., Игнатьева Е.В. Особенности Функционирования гипофизарно-адренокортикальноя системы у мышей с генетически детерминированной аутоиммунной патологией (линия NZB) // Материалы международного симпозиума "Физиология алренокортикальноя системы". Ленинград, 1990. - С. 154 - 155.

3. Chesnokova V.M., Chukhlib V.L. The possible role of the glucocorticoid in the manifestation of autoimmune desease in NZB mice // The First European young scientist conference on immunology. - Bratislava, Chechoslovakia,

1990. - P. 36.

4. Chesnokova V.M., Chukhlib V.L., Karjagina A.J. The role of neuroendocrine system in determining genetic susceptibility to autoimmune disease in NZB mice // Circumventricular organs and brain fluid envirooent molecular and functional aspects. IV Reinhasdsbrunn Symposium CVO. - Leipzig, Germany, 1991. - P. 14.

5. Чеснокова В.И., Чухлиб В.Л., Карягина A.M. Особенности Функционирования гипофизарно-надпочечниковоя системы у самок мышея с наследственной аутоиммунной патологией (линия NZB) // Физиологический журнал им. Сеченова. - Ленинград, 1992. - т. 78. - Я 1, - С. 109 - 115.

6. Крымская Л.Г., Игнатьева Е.В., Тинников А.А., Громыхина Н.Ю., Чеснокова В.М., Чухлиб В.Л. Комплексная оценка функциональной активности надпочечников у мышея в норме и после различных воздействий // Методические рекомендации. - Новосибирск, 1992. - 25 С.

7. Chesnokova V.M., Chukhlib V.L., Ignat'eva E.V., Ivanova L.N. The possible involvement of glucocorticoids in the development of genetically determined autoimmune pathology in NZB mice // Biomedical science (in press).