Закономерности взаимодействия иммунной и эндокринной систем в процессе индивидуального развития

Чеснокова, Вера Михайловна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Закономерности взаимодействия иммунной и эндокринной систем в процессе индивидуального развития
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Закономерности взаимодействия иммунной и эндокринной систем в процессе индивидуального развития"

6 од

О А У Г РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ ИЖТИТУТ ФИЗИОЛОГИИ

На правах рукописи УДК 612. 433:612. 017: 615. 5-002.5

ЧЕСНОКОВА ВЕРА МИХАЙЛОВНА

ЗАКОНОМЕРНОСТИ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ИММУННОЙ И ЭНДОКРИННОЙ СИСТЕМ В ПРОЦЕССЕ ИНДИВИДУАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ

03.00.13 - физиология человека и животных

Диссертация в форме научного доклада на соискание ученой степени доктора биологических наук

Новосибирск 1993

Работа выполнена в лаборатории физиологической генетики Института цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

Научный консультант - член-корреспондент РАН

доктор медицинских наук профессор Л. Е Иванова

Официальные оппоненты - член-корреспондент РАМН,

доктор биологических наук профессор И. Г. Акмаев

Ведущее учреждение - Институт физиологии им. И. П. Павлова РАН, г. Санкт-Петербург

Защита состоится на заседании специализированного совета Л 001.14.01 по присуждению ученой степени доктора наук в Институте физиологии СО РАМН

Адрес: 630117, г. Новосибирск, ул. академика Тимакова, 2

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института Физиологии

Диссертация в форме научного доклада разослана "_" _ 1993г.

Ученый секретарь Специализированного Совета

доктор медицинских наук профессор Л. а Девойно

доктор биологических наук профессор А. Л Маркель

1993г.

кандидат биологических наук

А. Г. Елисеева

ЗАКОНОМЕРНОСТИ ВЗАИМОДЕИСТБИЯ ИММУННОЙ И ЭНДОКРИННОЙ СИСТЕМ В ПРОЦЕССЕ ИНДИВИДУАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ

Актуальность иследования. Долгое время считалось, что иммунная система существует автономно и не подвержена физиологической регуляции со стороны других систем организма . Два последних десятилетия отмечены существенным накоплением фактов о взаимном влиянии иммунной и нейроэндокринной систем, что позволило говорить об истинных физиологических взаимоотношениях между ними. Действительно, с одной стороны были получены данные о воздействии гормонов и нейромедиаторов на иммунную систему. Выявлено участие норадреналина в иммунорегуляции (Besedovsky et al, 1983). Установлено активирующее влияние дофамина и ингибирующее влияние серотонина на иммунный процесс (Девойно, Илыоченок, 1983; Devolno.et al,1986). Было показано, что производные проопиомеланокортина (АКТГ, элдпрФины, эн-кефалины) модулируют функционирование лимфоидных клеток и участвуют в их дифференцировке (Bateman et al.,1989; Blalock, 1989). Глюкокортикоидкые гормоны в физиологических концентрациях способны регулировать многие реакции, происходящие в иммунной системе: они определяют величину синтеза лимфокинов иммунокомпетентными клетками, а также рецепторов к ним на лимфоцитах (Crabtree et al.,1980; Chan et al,1987; Miguel et al, 1988), влияют на величину продукции тимических гормонов (Dar-denne et al.,1988), меняют интенсивность пролиферации и транспорта лимфоцитов на периферию (Корнева,Шхинек,1988). Согласно гипотезе Besedovsky et al (1983), глюкокортикоиды необходимы для реализации иммунного ответа, обеспечивая его специфичность. Половые гормоны также оказывают разнообразное модулирующее влияние на иммунный процесс, принимая участие в регуляции функции тимуса (Fltzpa trick et al, 1987; Kovacs et al, 1987; Kuhn et al, 1991) и возникновении аутоиммунных заболеваний (Talal,1983, Carlsten et al,1989; Schuurs et al, 1992).

В то же время, гуморальные продукты иммунной системы оказывают существенное воздействие на функционирование эндокринных органов. Интерлейкин I является мощным стимулятором гипотала-

ад-гипофазарно-надпочечниковой системы, активируя все ее звенья от усиления выделения кортикотрошнрилизинг гормона (Suda et al, 1990; Watanobe et al, 1991) и увеличения экспрессии гена цроопиомеланокортина (Brawn et al, 1987) до повышения уровня кортикостерона в плазме крови (Blalock, 1989). Интерлей-кнн 2 таете обладает способностью усиливать выделение кортико-либерина гипоталамусом (Cambronero et al, 1992) и АНТГ клетками гипофиза In vitro (Karanth, McCann, 1991). Гормоны тимуса участвуют в регуляции эндокринной функции гонад (Rebar et al, 1982; Allen et al, 1984; Spangelo et al, 1987).

Обнаружены специфические рецепторы для всех стероидных гор-ионов и для большинства гипофизарных пептидов на лимфоцитах (Blalock, 1989). Выявлено наличие медиаторов иммунной системы в структурах мозга (Blalock, 1989).

Оказалось,что способность синтезировать пептидные гормоны присуща не только классическим эндокринным тканям, но, при определенных условиях, и лейкоцитам. Установлено, что интенсивность синтеза пептидов регулируется гипоталамическими рили-зинг-гормонами (Blalock, 1-989, Bateman et al, 1989).

Все эти и многие другие данные дают основание полагать, что иммунная и нейроэндокринная системы тесно связаны между собой и взаимозависимы в своем функционировании. Besedovsky и др.(1983), а в последствии Bateman и др (1989) сформулировали представление о существовании единого регуляторного нейроимму-ноэндокринного контура, обеспечивающего гомеостаз организма. Однако механизмы, лекащие в основе взаимного влияния отдельных звеньев этого контура изучены недостаточно. Большая часть работ проведена в системе In vitro, традиционной для иммунологических исследований. Представляется актуальным анализ закономерностей физиологического взаимодействия иммунной и эндокринной систем на уровне целостного организма.

В современной литературе практически нет данных о взаимном влиянии этих систем в ранние сроки развития. Между тем известно, что формирование иммунных и эндокринных функций происходит параллельно (Pierpaoll et al, 1977). В настоящее время все большее внимание уделяется морфогенетической роли гормонов, которые выступают универсальными регуляторами физиологических

процессов в неонатальном периоде (Бузников,1986). Установлено, что функциональная активность многих звеньев взрослого организма складывается в раннем онтогенезе под влиянием гордонов -явление, получившее название гормонального импринтинга (Салга-ник и др.,1979; Резников,1985; Дернер и др,1990; Сопга1ег ег а1, 1990). Эти факты позволили предположить, что иммунная и эндокринная системы, каждая посредством своих гормонов, могут оказывать взаимное модифицирующее влияние на формирование иммунных и эндокринных функций. Такое взаимодействие в раннеы периоде онтогенеза может во многом определять состояние этнх систем, а, следовательно, и паттерн их совместного функционирования в зрелом возрасте. Становится очевидным, что механизмы взаимного влияния интересущих нас систем необходимо исследовать не только во взрослом организме, но и в момент их созревания.

Понимание закономерностей совместного функционирования систем, обеспечиваэдкх поддержание гомеостаза, на уровне целостного организма, выявление ключевых моментов в их взаимной регуляции, анализ механизмов их взаимодействия в период формирования, становления иммунных и эндокринных функций представляется нэобходгашм как в теоретическом так и в прикладном аспектах. Представление об этих системах как о едином регуляторноа контуре определило новую методологию такого исследования. Цель неехэдовавия. Цель настоящей работы состояла в изучении закономерностей взаимодействия иммунной и эндокринной систем на уровне целостного организма в процессе индивидуального развития.

Для решения поставленнной проблемы были сфор:лулироваш следующие задачи:

1. Исследовать влияние гормонов тимуса на функционирование надпочечников и гонад, выявить механизмы действия тимнческих горюнов на дайные келезы внутренней секреции.

2. Определить роль гипофизарно-надпочечниновой системы в возникновении наруиений лимфоцитарных функций (аутоиммунная патология ).

3. Изучить влияние тимуса и его гормона тимозина на формирование гормональных функций гонад и надпочечников в раннем онто-

гензе.

4. Выявить роль глюкокортикоидов в формировании иммунологических функций в период раннего постнатального развития. Основные положения,выносимые на защиту.

1. Тимус, центральный орган иммунитета, принимает участие в регуляции эндокринных функций гонад во взрослом организме. Гормоны тимуса участвуют и в регуляции функционирования гипофизарно-надпочечниковой системы, модулируя активность надпочечников. Влияние тимуса на функции эндокринных желез у взрослых животных способствует, вероятно, созданию благоприятного фона для иммунных процессов и поддержанию гомеостаза.

2. Снижение чувствительности гипофизарно-надпочечниковой системы к регуляторным сигналам со стороны иммунокомпетентных клеток, а также нарушение ее функционирования, может стать серьезным провоцируицим фактором в проявлении аутоиммунной патологии.

3.,Тимус посредством своих гормонов участвует в формировании эндокринных функций семенников и надпочечников в период раннего постнатального онтогенеза.

4. Глюкокортикоида в раннем онтогенезе могут оказывать влияние на формирование иммунных функций, а также на становление регу-ляторных взаимоотношений мевду гипофизарно-надпочечниковой и иммунной системами.

5. Взаимное влияние иммунной и эндокринной систем в раннем периоде постнатального развития во многом определяет закономерности их совместного функционирования в зрелом возрасте. Прерывание нормального физиологического взаимодействия двух исследованных систем в период их формирования в первые дни жизни или во взрослом организме приводит к серьезным нарушениям их функций.

Научная новизна работы.

В процессе исследования установлены новые закономерности взаимодействия иммунной и эндокринной систем.

Выявлен механизм действия гормонов тимуса на гонады и надпочечники.. Показало, что тимус посредством своих гормонов подавляет эндокринную функцию семенников. Впервые показано, что действие тимозина на тестостеронпродуцирующую функцию гонад

опосредуется простагландинаш. Впервые установлено, что разшэ гормоны тимуса способны разнонаправленно модулировать функциональную активность надпочечников: тинозан активирует' гагофг-зарно-надпочечниковую систему, дейстзуя через центральные,рагу-ляторкые структуры, тогда как тактявин подавляет стеролдоге-нбз, влияя непосредственно на гэлезы. В работе установлено, что такой гормональный продукт тимуса как тактзвнн обладает антистрессорнкм эффектом, препятствуя стимулирующему дейстгаэ АКТГ на надпочечники на этапах, предпествущих образованна вторичных посредников.

Впервые обнаружено, что нарушение физиологического взаимодействия между иммунной и эндокринной системами прямо коррелирует с проявлением генетически детерминированной аутоишунЕоЗ патологией у мышей линия NZB. Показано, что в период, предшествующа заболеванию, теряется чувствительность гзшсфа-зарно-надпочечниковой системы к регуляторному вли$шла кнтер-лейкина 2, дямфохина, принимавшего участие в возникновения аутоиммунных рэакций. Вероятно, одной из щгган является ослабление функционирования гипофиз арно-надпочечнЕксзой оси и снижение пула свободных глякокортзковдов в плазма крова у таких животных. Появление этих наруцонгй совпадает с возникновением аутоиммунного заболэвания. Доказано, что увеличение пула свободных глшскортикоидов значительно замэдляот развитие болэз-ни.

Выявлено, что тимус принимает участие в формировании эндо-кр1шных функций семенников н надпочечников в раннем постна-тальном онтогенезе, во многом определяя их активность в зрелой возрасте. Установлено,'что у генетически бестшусных (мутация nude) и неснатально тямэктомированных мышей заметно нарушено формирование эндокринных функций гонад и надпочечников. Впервые показано, что компенсация гормональной.функции тимуса либо пересадкой тимусной ткани новорожденным мышам nude либо введением гормона тимуса ткмозпна неонатально тимэктомированшш мышам в раннем онтогенезе приводит к нормализации этих функций у взрослых животных.

Впервые продемонстрировано, что г'люкокортккоидные гормоны в неонатальный период в определенной мере детерминируют протека-

ние иммунных процессов во взрослом организме. Установлено, что в период раннего постнатального онтогенеза, который является заг>ершащим этапом становления иммунитета, изменение глюкокор-тикоидного фона приводит к нарушению формирования как иммунологических функций, таких как гуморальный иммунный ответ и способность к индукции неонатальной толерантности, так и нормального физиологического взаимодействия между иммунной и эндокринной системами у взрослых животных.

Данные свидетельствуют о взаимном участии двух исследуемых систем в процессе становления иммунных и эндокринных функций , что, в свою очередь, определяет закономерности их взаимодействия во взрослом организме. Научно-практическая данность исследования.

Даиное исследование развивает теоретическое представление о существовании в организма единого нейроиммунорегуляторного контура поддержания гомеостаза. Показано, что прерывание физиологических взаимодействий мевду отдельными звеньями этого контура может способствовать нарушению гомеостаза и возникновению патологических процессов . Положение о взаимном модифицирующем влиянии иммунной и эндокринной систем в процессе их окончательного формирования в раннем онтогенезе помимо знаний закономерностей, регулирующих их развитие, является новой методологической основой для рассмотрения уже известных экспериментальных данных, касающихся их функционирования. Эти факты позволяют искать способы управления развитием данных функциональных систем.

Результаты настоящей работы наряду с общебиологическим значением имеют определенную практическую ценность. Данные о том, что гормоны тимуса, такие как тактивин и тимозин, широко применяемые в клинике при лечении иммунодефицитных состояний, обладают значительным влиянием на железы внутренней секреции, следует учитывать в клинической практике, а также при планировании и трактовке экспериментальных исследований. Результаты, свидетельствующие о важной роли гипофизарно-надпочечниковой системы в проявлении наследственно обусловленной аутоиммунной болезни, могут служить основой для диагностики и прогноза течения аутоиммунных заболеваний в семьях, предрасположенных к

данной патологии. Полученные в наших экспериментах факты о влиянии глюкокортикоидов в раннем онтогенезе на формирующуюся иммунную систему могут быть использованы в педиатрической практике для понимания и прогнозирования процессов, происходящих при гормональной терапии беременных женщин и детей.

Работа выполнена на стыке физиологии и иммунологии, что и определяет возможность применения ее результатов в обеих областях.

Внедрение результатов работы.

1. Изданы методические рекомендации для научно-исследовательских лабораторий об использоваании метода комплексной оценки функциональной активности надпочечников в норш и после различных воздействий ( Новосибирск, 1992).

2. Материалы работы включены в цикл лекций по регуляции иммунной системы на кафедре физиологии НГУ.

Апробация работы. Результаты исследования были представлены для обсуждения на конференциях и симпозиумах различного уровня: международных, всесоюзных, региональных. Основные из них: XIV Всесоюзный съезд физиологов, Баку, 1933; I Всесоюзная школа по репродукции, Минск, 1985, XXIII Symposium on Biological Models, CSSR, 1986; IV Всесоюзный симрпозиум "Нейрогуморальная регуляция иммунного гомеостаза", Ленинград, 1986; Международное совещание "Онтогенетические аспекты нейроэндокринной регуляции стресса", Новосибирск, 1986; IX Совещание по эволюционной физиологии, Ленинград, 1986; III Всесоюзный съезд эндокринологов, Ташкент, 1989; Всесоюзная конференция "Стресс и иммунитет", Ростов на Дону, 1989; I Международный симпозиум "Биологические модели", Пущино,1989; Международный симпозиум "Физиология адренокортикальной системы", Ленинград, 1990; Sattelite symposium oi the XXXI international Congress of Physiology "Circulating regulatory factors and neuroendocrine function", Czechoslovakia, 1989; IV Reinhardsbrunn Symposium CVO, Germany, 1991; II Всероссийский съезд эндокринологов, Челябинск,1991;'Fifth Symposium on Catecholamine and Other Neurotransmitters in Stress, Czecho-Slovakia, 1991; VIII International Congress of Immunology, Hungary, 1992; Herbsttagung der Österreichischen Gesellschaft fur Allergologie und

Tiffiiunologle, Austria, 1992. Кроме того, результаты диссертации обсувдались на межлабораторных семинарах и отчетных сессиях Института цитологии и генетики СО РАН, а также на двух мекла-бораторных семинарах ИКИ СО РАМН.

Объса к структура работы. По результатам проведенных исследований опубликовано 50 печатных работ в центральных отечественных и зарубежных журналах и сборниках. Основные из них приведены в конце реферата.

Отдельные этапы работы выполнялись в соавторстве с сотрудниками ряда лабораторий Института цитологии и генетики СО РАН, Института клинической иммунологии СО РАМН и Института молекулярной генетики Чехословацкой Академик Наук, Прага. Фамилии соавторов, которым автор глубоко благодарна, указаны в списке публикаций по теме диссертации.

Автор вырезает таете искреннюю признательность директору Института клинической тзднологии СО РАМН , академику РАЕН проф.В.А.Козлову за поддержку в организации ряда экспериментов и плодотворные дискуссии, а также сотрудникам ИКИ СО РАМН д.б.н.Н.Ю.Громыхшгай, д.м.н.В.В.Абрамову, к.б.н.И.А.Гонтовой за помощь в определении некоторых иммунологических показателей.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы Эаспершиетсиъкые зивотние:

Мыаи nude с генетически детерминированным отсутствием тимуса (Ва1Ъ/с nu/nu), полученные в виварии Института цитологии и генетики СО РАН с.н.с. В.М.Юнкер путем внесения мутантного гена в линию Balb/с.Мыпга линии NZB с наследственно обусловленной аутоиммунной патологией. Мыши линий Balb/c и DBA/2, самцы и самки разных возрастов. В случае использования самок в эксперимент брались животные, находящиеся в одной фазе астрального цикла. Животные были получещ из вивария Института цитологии и генетики СО РАН. Мыши линии CBA/J, самцы и самки, были получены в питомнике экспериментальных животных Чехословацкой академии наук, Прага. Большая часть экспериментов проведена в

зимнее время года. Всего было использовано более 4000 животных.

Методы оценки энОокриншг функций:

1.Функциональная активность гшофизарно-надпочечниковой системы. Определение уровня кортикостерона в плазме крови и инкубатах надпочечников in Yltro проводилось флюориметрическим методом определения 11-оксикортикостероидов (II-0KC) (Колпаков и др,1974) и методом конкурентного белкового связывания в модификации Тинникова и Бажан (1984). Для оценки продукции кортикостерона надпочечниками и их реактивности к эндогенному АКТГ применяли метод инкубации желез в условиях In vitro (Колпаков и др.,1974).

Реактивность надпочечников к экзогенному АКТГ In vitro определяли по приросту концентрации кортикостерона в инкубационной среде после инкубации одного из парных надпочечниково в течении I часа с 20 mlU АКТГ (Corticotropin .Serva) .Контролем служил парный надпочечник без АКТГ.Ряд экспериментов был проведен на суспензии клеток надпочечника, которую получали по методу Sayers (1971) с использованием трипсина (Trypsin, SPOFA.CSFR) и ингибитора трипсина из соевых бобов (Trypsin inhibitor, soyabeen, Reanal, Hungary).

Концентрацию кортикотропина в плазме крови определяли радиоиммунным методом с помощью стандартных наборов фирмы CIS (Франция).

Уровень экспрессии гена проопиомеланокортина (ПОМК) оценивали по результатам блот-гибридизации суммарной РНК, выделенной из гипофиза экспериментальных животных (Chomezynski et al, 1987) с кЦНК ПОМК крысы (Маниатис и др.,1984). Физико-химические характеристики кортикостероидсвязываадего глобулина определяли с использованием анализа Скэтчарда (Chesnokova et al, 1992).

2. Гормональную функцию гонад оценивали как по концентрации тестостерона в плазме крови, так и по его продукции семенниками в условиях iii Vitro. Тестостерон определяли радиоиммунным методом с помощью стандартных наборов СТЕРОН- Т (Минск). Методы оценки иллуннологических функций:

Определение числа антителообразущих клеток селезенки проводи-

лось стандартным методом локального гемолиза в жидкой среде (Cunningham, 1965).

Определение числа непрямых антителоообразущих клеток против ли-зоциыа в лимфоузлах проводилось тем не методом,, используя в качестве мишеней эритроциты барана, обработанные лизоцимом (Hraba,Madar,1989)

Регистрацию антиэритроцитарных аутоантител в крови проводиж с помощью антиглобулинового теста (проба Кумбса) с использованием кроличьей сыворотки против мышиных иммуноглобулинов (Институт эпидемиологии и микробиологии РАМН им.Гамалеи, Москва).

Стимуляция митогенами In vitro. Суспензию селезеночных клеток готовили, продавливая органы через сито в раствор Хенкса. Кластеры клеток удаляли осаждением в течение 5 мин и эритроциты лизировали промыванием однократно раством Бойла и дважды средой HPMI-1640. Количество погибших клеток контролировали окраской трипановым синим.Суспензия клеток доводилась до концентрации 2х106 клеток/мл среды HPMI-1640 , в которую были добавлены антибиотики, глютамин, 2-меркаптоэтанол и 5% эмбриональной телячьей сыворотки.Суспендированные клетки в аликвотах по 0.1 мл разносили в 96-луночные плато для культивирования. Митогены конкавалин A (Con A, Sigma) или липополисахарид (EPS.Dlfco) добавлялись таким образом, чтобы финальная концентрация митогенов была 5 или 10 мкг/мл соответственно. Через 3 дня культивирования (37°С, 5ЖС02), добавляли по 1мкКю ^-тимидина на каждую лунку и через 16 часов измеряли включение метки. Подсчитывал! индекс стимуляции, который равен отношению числа распадов в минуту в стимулированной культуре/к числу распадов в минуту в не стимулированной культуре клеток. ПроцеОури:

1) Тимэктомия мышей Balb/c проводилась в 3-х дневном возрасте. Вивотных охлаждали и через небольшой разрез в грудной клетке тимус.отсасывали стеклянной пипеткой. Визуальный контроль пол-юты удаления тимуса проводили в момент забоя животных. Контрольным животным проводили ложную операцию.

2) Трансплантация тамусов мышам (Balb/c nu/nu) проводилась в 5-ти дневном возрасте от 7-ми дневных доноров линии Balb/c.

Тимус пересаживали в подкожную пазуху левой подлапаточной области. Контрольные мыши подвергались ложной операции.

3) Эмоциональный стресс вызывали ограничением возможности передвижения, для чего мышей помещали в сетчатые металлические трубочки диаметром 2 см на 30 мин.

4) Индукция толерантности к лизоциму куриных яиц (Sigma) проводилась у новорожденных мышей путем введения внутрибрюшинно 0.1мг лизоцима в 0.1мл фаз.раствора. Контрольным животным вводили физиологический раствор.

5) Иммунизация животных проводилась в 2-х месячном возрасте

Т-зависимым антигеном (эритроциты барана) или лизоцимом из

!»

куриных яиц. Отмытые средой эритроциты вводили в дозе 2x10 клеток внутрибрюшинно в 0.5 мл среды 199. Число антителообразу-ющих клеток в селезенке определяли через 4 суток после ишуни-зации.

Равные количества раствора лизоцама в фиг. растворе (2мг/мл) и неполного адьюванта фрейнда (Signa) были эмульгированы и вводились в аликвотах 0.05 мл в лапку.Число непрямых антителообра-зующих клеток в соответствующем подколенном лимфоузле определяли на 8-й день после иммунизации. Препарат и их введение:

В работе использованы гормональные препараты тимуса тимозин (фракция 5), полученный по методу Goldstein (Goldstein et al, 1981 ) в Московском Институте технологии кровезаменителей и гормональных препаратов, и тактивин, выделенный по методу Ари-она (Арион,1982) на предприятии по производству бактериальных препаратов ЦНИИ вакцин и сывороток юл.Мечникова (Московская обл.). Сухие препараты разводили физиол. раствором и вводили внутрибрюшинно. Контролем служили-животные с введением эквимо-лярного количества бычьего сывороточного альбумина (БСА) в том же объеме физиол. раствора (0.1мл).

В эксперименте по исследованию механизма действия тимозина животным вводили дексаметазон (Dexamethasone, Serva) по Ю мкг на мышь в 0.1 мл фаз. раствора за 40 мин до инъекции тимозина; индометацин (Indometacine, Sigma) по 100 мкг на мышь в 0.1 мл физ.. раствора за 30 мин до инъекции тимозина.

В опытах по исследованию влияния тимозина в раннем онтогенезе препарат вводили с 4-го по 30-й день жизни 2 раза в неделю по 0.1 мкг на мышь. Контрольным животным вводили физ. раствор. Тестировали животных в 2-х месячном возрасте. В экспериментах по исследованию влияния длительного введения глюкокортикоидов на аутоиммунный процесс дексаметазон (Dexamethasone, Sigma) в дозе 5 мкг на мышь вводили группе мышей NZB начиная с 4-х месячного возраста два раза в неделю. Контрольным животным вводили физ. раствор. Инъекции продолжались до появления у животных аутоантител. Кроме того в работе использовались: дибутирил-цАМФ (Dibutyryl-cAMP, Serra), интерлейкин 2 (ИЛ-2, Институт органического синтеза, Рига), кортикостерон (Cortlcosterone, Sigma), ингибитор биосинтеза кортикостерона метирапон (Metyrapoiie, Serva). КДНК гена ПОМК (проопиомеланокортина) крысы была выделена в лаборатории структуры и функции гена Новосибирского института биоорганической химии СО РАН.

Статистическая обработка результатов проводилась с использованием 1фитериев Стьюдента и Фишера для сравнения групповых средних, двухфакторного дисперсионного анализа и корреляционного анализа. Сравнение средних в экспериментах с индукцией толерантности цроводили методом Бонферони.Обработка графиков Скэтчарда проводилась с помощью специальной компьютерной программы, написанной сотрудниками ИЦиГ СО РАН Е.В.Игнатьевой и д.б.н.Э.Х.Гинзбургом.

РОЛЬ ТИМУСА И ЕГО ГОРМОНОВ В РЕГУЛЯЦИИ ЭНДОКРИННЫХ ФУНКЦИИ НАДПОЧЕЧНИКОВ И ГОНАД.

Особая роль в реализации иммунонейроэндокринных взаимодействий принадлежит тимусу. Показано, что тимус - не только центральный орган иммунитета, где происходит дифференцировка и созревание лимфоцитов, но и эндокринная железа, синтезирующая целый ряд гуморальных факторов, обеспечивающих приобретение Т-лим$оцитами иммунокомпетентности. В последние годы появились сведения о влиянии эндокринных продуктов тимуса на другие железы внутренней секреции. В связи с этим была сформулирована

первая задача исследования: определить эффекты и выявить механизмы действия гормональных факторов тимуса тимозина и так-

нг/кл

БСА

Т-5

®Рэия (чао)

Р< 0-05 «-»

Р< 0.01 (-»

Р<0.05

Г"1

5 Э

Рис.1. Концентрация тестостерона в плазме крови мышей Ва1Ь/с а)через 3,9,24часа после введения тимозина (1мкг/мышь,Т-5) и бычьего сывороточного альбумина (4мкг/мышь,БСА). б)через 24 часа после введения: БСА; Т-5; БСА+ИНД (индометавдн, 100мкг/мышь); Т-5+ЩЦ. Здесь и далее достоверность различий от контроля:*-р<0.05; **-р<0.01; ***-р<0.001

тивкна на эндокринные функции гонад и надпочечников .

Исследование показало, что оба эти фактора подавляют эндокринную функцию семенников. Было обнаружено, что тимозин (1мкг /мл) in vitro сникает удельную продукцию тестостерона у взрослых половозрелых мышей Balb/c . Однократная инъекция тимозина в дозе I мкг/мышь приводила к существенному уменьшению концентрации тестостерона в плазме крови, наблюдавшемуся в течение 24 часов (рисЛа). Наиболее значимые различия по сранению, с контрольными животными были обнаружены через 3 и 24 ч после-инъекции (р<0.05). Через 9 ч исследуемый показатель не отличался от такового у контрольных животных , по-водимому , из-за циркадных изменений эндокринной функции гонад (Karla, Karla, 1977). в литературе имеются противоречивые данные , касающиеся

влияния тимозина на эндокринную функцию половых желез. Установлено, что в условиях In vitro тимозин (фракция 5) стимулирует выделение ЛГ-рилизинг гормона медиобазальным гипоталамусом самок крыс( Rebar et al, 1981). Однако, в условиях in vitro Healy с соавторами (1986) не обнаружили изменения уровня ЛГ в крови после однократного введения тимозина неполовозрелым самкам обезьян.

Практически нет данных о влиянии тимозина на эндокринную функцию самцов. Молекулярные механизмы реализации эффекта тимозина на гонады также оставались неизвестными. Нами была предпринята попытка выяснить, чем обусловлен подавляющий эффект тимозина на эндокринную функцию семенников в наших экспериментах. Согласно литературным данным, действие гормонов тимуса на лимфоциты опосредуется простагландинами (Garaci et al, 1983). С другой стороны, изучена медиаторная роль этих соединений в регуляции гормональной активности гонад. Проста-гландины всех известных групп ингибируют продукцию тестостерона , индуцированную ЛГ (Bartke, 1976, Grotjan, 1978). Для выяснения механизма действия тимического гормона на семенники, за 30 мин до инъекции тимозина животным вводили ингибитор синтеза простагландинов-индометацин (100мкг/мышь). Индометацин сам по себе вызывал повышение уровня тестостерона в крови через 24ч после инъекции, что согласуется с данными GrotJan (1978) и Bartke(1986). Индометацин, введенный совместно с ти-мозином, снимал ингибирующее влияние последнего на уровень тестостерона в плазме крови (рис.1б).Таким образом, ингибитор синтеза простагландинов индометацин црепятствует реализации подавлящего действия тимозина на эндокринную функцию гонад. Эти результаты свидетельствуют об участии простагландинов в эффекте тимозина на семенники.

Эксперименты показали, что другой гормональный препарат тимуса тактивин также вызывает снижение и удельной продукции гормона семенниками и уровня тестостерона в плазме крови (рис. 2 а,б). По-видимому, обнаруженное в наших опытах подавление тестостеронпродуцирувдей функции семенников под действием факторов тимуса целесообразно с биологической точки зрения. Известно, что тестостерон обладает иммуносупрессивным дейст-

вием, и физиологическая инволюция тимуса происходит в опреде-

Рис.2.а) Уровень тестостерона в плазме крови (нг/100мл)

0) удельная продукция тестостерона гонадами- In vitro (нг /ЮОмг/час) у мышей Balb/c через 3 часа

после введения такти-вина.

»99«

По оси абцисс-доза тактивина (мкг)

О Ol 05 г?

о ф qs

ленной степени под влиянием половых стероидов (Grossman, 1984). Это рассуждение позволяет объяснить кажущееся противоречие между результатами, указывающими на подавление эндокринной функции семенников под действием химических факторов и литературными данными, свидетельствующими о стимуляции тимозином секреции пролактина и ЛГ цценгральными нейроэндокринныш структурами у самок (Spangelo et al, 1987). По-видимому, и в этом случае конечным результатом активации половых желез является дополнительная стимуляция иммунных процессов, поскольку, в противоположность тестостерону, женские половые гормоны в физиологических концентрациях активируют иммунную систему (Kuhn, et al, 1991 ;Schuurs et al, 1992).

Исследование действия гормональных препаратов тимуса на функциональную активность надпочечников показало, что тимозин и тактивин оказывают различные эффекты. Тимозин, введенный однократно в дозе I мкг/мышь через 3 часа после инъекции резко ' повышал уровень кортикостерона в плазме крови. Через 9 и 24ч после инъекции достоверных различий между экспериментальными группами не обнаружено (рис.За). Чтобы выяснить, каковы пути

шв/КЮп

БС» Т-5

3 9

15 10

2»

врем (мо)

Р <0.001

?<0.05

и» щ ¡5

♦ *

о Т

Рис.3. Концентрация кортикостерона в плазме крови мышей Ва1Ь/с

а) через 3,9,24 часа после введения тимозина (1мкг/мшь,Т-5), бычьего сывороточного альбумина (4мкг/мышь, БСА).

б) через 3 часа после введения БСА; Т-5; БСА+ДМ (дексаметазон.Ю мкг/мышь); Т-5+ДМ.

его влияния на надпочечники, тимозин вводили на фоне дексаме-тазона, синтетического глюкокортикоида, подавлящего выделение кортикотропин рилизинг гордона и АКТГ центральными нейроэндо-кринными структурами (Коуас, Мегеу,198Т). Как и следовало ожидать, введение дексаметазона приводило к резкому падению уровня кортикостерона в плазме крови. На фоне дексаметазона стиму-лирущий эффект тимозина на кортикостеронпродуцирупцую функцию надпочечников полностью исчезал (рис.Зб). Эти данные свидетельствуют о том, что тимозин не действует непосредственно на кору надпочечников, а его эффект опосредуется центральными регуляторными структурами.

Опыты с использованием тактивина показали, что его влияние на надпочечники отличается от тимозина как по направленности, так и по механизму действия. Установлено, что через 3 часа после однократного введения тактивина самая большая из исследованных доз (2.5 мкг) снижает концентрацию кортикострона в плазме (рис.4а). Значительно ярче этот эффект был выражен в

груше животных с повышенным, после вакцинирования оспозакцинсй

о Ср Q5 гр

ШТИЕШ (ккг/иыиь)

Рис.4. Концентрация кортикостерона (мкг/ЮОмл) в плазме кровн мышей Balb/c а) через 3 часа после введения тактивина; б);в) через 2 часа после введения тактивина мылам с еысокел базальнкм уровнем кортикостерона б)самцам,в) самкам.

Таблица I

Влияние тактивина на продукцию кортикостерона клетками надпочечников мышей Balb/c In vitro.

концентрация тактивина продукция кортикостерона

(мкг/мл) (нг/100мл/1.5часа)

в-:-

6.4хЮ~4 I.6XI0"3 9.0x1О-2 4.0x1О-1 2.0 10.0

I.$6-0.15 (4)

2.09-0.06 (4)

1.80-0.07 (4)

1.47±0.05* (4)

1.77%. 10 (4)

1.47-0.05* (4)

1.50*1.15 (4)

»-различия по сравнению с контрольной группой достоверны (р<0.05). В скобках-число определений.

Коэффициент корреляции=-0.388 при N=32 (наличие обратной корреляции достоверно.

уровнем кортикостерона в крови (рис.4б,в). Данные свидетельствуют о высокодостоверном дозозависимом влиянии этого тимичес-кого фактора. То есть, было обнаружено, что 1п vivo тактивин

kosst действовать как своего рода "антистрессор" по отношению к функции коры надпочечников. Добавление тактивина в различных концентрациях к суспензии клеток надпочечников In vitro выявило подавляющее влияние двух из исследованных доз тактивина на продукцию кортикостерона .(табл.1). Можно полагать, что тактивин в отличие от тимозина, непосредственно действует на кору надпочечников, подавляя стероидогенез. Поскольку наиболее сильный эффект этого гормона наблюдался у животных с повышенным уровнем кортикостерона, для выяснение механизма действия тактивина мы попытались имитировать стрессорную реакцию в условиях in vitro, стимулируя клетки надпочечника добавлением в инкубационную среду АКТГ в дозе 1.6 и 1600 mIU/мл среды (рис.5а,б). В обоих случаях продукция кортикостерона клетками в ответ на АКТГ достоверно увеличивалась по сравнению с базалькым уровнем. Тактивин в широком диапазоне концентраций полностью снимал симуляцию, вызванную низкой дозой АКТГ и значительно подавлял продукцию кортикостерона, стимулированную болэ высокой дозой кортикотропина.

В обоих случаях наибольшие из использованных в эксперименте доз тактивина (10 мкг/мл) оказались неэффективными. Вероятно, данная концентрация гормона уже не является физиологической и оказывает на клетки фармакологическое действие, что хорошо согласуется с данными Михна и др.(1988) об исчезновении лимфо-цатостЕмулируицих свойств тактивина в дозах, больших чем 1-2 мкг/мл -

Зти данные позволяют полагать, что тактивин препятствует стимулирующему влиянию АКТГ на кортикостероидогенез клетками надпочечников. По-видимому, этим и обусловлен тот факт, что подавляющее действие тактивина наиболее ярко проявляется на фоне активации коры надпочечников. Для того чтобы выяснить, реализуется ли влияние этого тимического гормона на уровне мембраны, или он действует внутри клетки, был проведен эксперимент, где был имитирован стимулирующий эффект АКТГ на клетки надпочечника добавлением дибутиршьцАМФ, синтетического аналога цАМФ, который, как известно, является внутриклеточным посредником, осуществляющим передачу сигнала от мембранных рецепторов АКТГ (НогпаЬу,1988). Обнаружено, что тактивин не снима-

ет ститмулирувдего эффекта дибутирил-цАНО на клетки надпочечника (рис.Бв). Этот факт позволяет заключить, что тактиван блокирует передачу сигнала АКТГ на уровне мембран, на этапах, предшествующих образованию цАШ.

а)

5 НЗ

¡11,1

а)

I I г

о м

Я Л й

б)

па

I ■

о т т „ у „ г ю

8 о га о о

я 3 3 3 3 о Рис.5. Влияние тактивина на продукцию кортикостэрона (нг/100шсл/1час) клетками надпочечников, стимулированных: а) АКТГ 1.6 мкед/мл

б) АКТГ 1600 мкед/мл

в) дибутирил ЦАШ 1мМ Пунктирными лиеиями ограничен уровень базальной продукции ¿ошибка среднего. Звездочки указыва-

ют на достоверность отличий от контроля-точки 0.

Таким образом, два гормональных препарата тимуса, согласно литературным данным одинаковым образом влияющих на созревание тимоцитов, оказывают противоположные эффекты на функционирование надпочечников. Один из них, тимозин, активирует надпочечники, действуя через центральное звено регуляции, другой, так-тивин, влияя непосредственно на надпочечники и обладая анти-стрессорным эффектом, подавляет их функцию. Известно,что тимозин и тактивин представляют собой смесь большого количества

г ю

шптидов, выделенных из тимуса различными методами и лежащих в пределах молекулярной массы I-I5 КД( для тимозина) и 1.5-6 КД (для тактивина) (Арион,1982, Goldstein et al, 1981). Полной Е^орыации о первичной структуре всех пептидов, входящих в их состав нет. Можно предположить, что эти факторы содержат как одинаковые, так и различные полипептиды. Соответственно, и в биологическом плаЕе сходство между этими факторами линь частичное. Они однонаправленно действуют на иммунную систему и Ендокрпяную функции гонад, и разнонаправленно на функцию над-почэчееков. Выявленные нами разнонаправленные эффекты паюзина н тактивина показывают, что по крайней мере, эти два гормональных препарата содержат различные активные начала. По-вздшэму, обнаруженное нами наличие разных факторов, протпво-ШЛ02Н0 влаяэдих на эндокринную функцию надпочечникоз, отргка-ет существующую з организме возможность модуляции глзококорти-коздной функции в соответствии с потребностями иммунной система. Вероятно, модуляция функциональной активности надпочечников посредством тимуса способствует созданию благоприятного фона для иммунных процессов, и может являться немаловажным ЗЕвЕом в регуляции иммунного статуса организма. Результаты наших экспериментов, представленные в следующей главе, подтверждают это предположение.

ОСОБЕННОСТИ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ГИПОФИЗАРНО-НАДПОЧЕЧНИКОВОЙ

СИСТЕМЫ У ШВЕИ С НАСЛЕДСТВЕННО ОБУСЛОВЛЕННЫМ НАРУШЕНИЕМ ИММУНИТЕТА (ЛИНИЯ NZB)

В настоящее время широко обсуждается участие гормонов гипо-фазарно-надпочечниковой системы (ГНС) в регуляции иммунных процессов. Показано, что гипофизарный АКТГ способен модулировать функционирование по крайней мере трех звеньев периферической иммунной системы: Т-клеток, В-клеток, макрофагов (Gar-Ьег, 1986, Blalock,1989), Подробно изучены иммуносупрессивные и противовоспалительные эффекты горюнов коры надпочечников (Bateman et al, 1989).В последние годы много работ посвящено влиянию глюкокортикоидов на синтез и секрецию иммуномедиаторов

(Redondo et al, 1988, lee et al, 1983). Большая часть результатов получена в экспериментах In vitro, однако все эти данные дают основание полагать, что функциональная активность гипофз-зэрно-надпочечниковой система играет определенную роль в протекании иммунологических процессов в целостном организме. Эти соображения определили постановку второй задачи исследования: изучить роль гипаЭизарно-надпочечЕиковой системы в возникновении нарушений лимфоцитаркых функций (аутоиммунная патология).

Чрезвычайно удобным объектом для исследования интересующего нас вопроса являются животные с генетически обусловленной еэ-полноценностью иммунитета. Мыши линии NZB представляют собоЗ модель такого аутошмунного заболевания человека, как гемолитическая анемия. У этих животных в определэнном возрасте начинают нарабатываться антитела к собственным эритроцитам,'нуклэ-иноеым кислотам, тимоцктам (Justlse et al, 1992). йзбэстно, что гормоны коры надпочечников необходима для осуцэствлоппя иммунных реакций. Существует предположение, что глпкокортлко-иды предохраняют организм от возникновения аутореактивных клонов лимфоцитов. (Beaedovsky et al,1933; Shausnsteln et al, 1S37). При аутоиммунных расстройствах нарушенными оказываются именно те звенья к^злунной системы, функцаозироввЕПэ которп: в норме регулируется кортикостероидаш: синтез .тофзкиг:св (Blech, Baker, 1986), экспрессия рецепторов для них на лимфоцитах ( Redondo,et al, 1988), продукция гормональных факторов тимуса (Dardenne, et al, 1988). Исследование особенностей функционирования гипофизарно-надпочекиковой системы у таких зивот-ных помогает не только проследить механизмы взаимодействия ишунней и эндокринной систем, но и приблизиться к пониманию причин возникновения патологии.

Признаком развития гемолитической анемии у мшшй линии KZB служит появление у них антител к собственным эритроцитам. Пэр-вые антитела у исследованных нами интактных самцов NZB были зарегистрированы в 6-ти месячном возрасте. Далее процесс лази- • нообразно нарастал и к 12 мес.у 97% животных были обнаружещ антиэритроцитарные аутоантитела.(табл.2). В дальнейшем в экс-

Таблица 2.

Динамика появления антиэритроцитарных аутоантител у интактных самцов мышей линии NZB.

возраст (мес) кол-во животных из них без AT с AT % заболевших

4 129 129 - 0

5 126 125 I 0.7

6 126 121 5 3.9

7 120 98 22 18.3

8 54 25 29 53.7

9 73 27 46 63.1

10 82 14 68 82.9

II 86 2 84 97.6

12 95 2 93 98.9

периментах использовались мыши трех возрастов: 2-3 мес. здоровые животные , 6-7 мес. животные, взятые в период, соответст-вуиций началу заболевания и 10-12 мес. животные с уже развившимся аутоиммунным процессом. В качестве контрольных животных в те же возрвстные периоды использовали самцов линии DBA/2, у которых никогда не возникает аутоиммунных реакций. .

Одним из медиаторов, обеспечивающих передачу информации от иммунной системы к эндокринным структурам, является интерлей-кин 2 (ИЛ 2). Ему отводят важную роль в развитии аутоиммунных заболеваний, поскольку данное состояние характеризуется общей гиперактивностью В-клеточной системы, а ИЛ. 2 необходим для активации, пролиферации и дифференцировки В-клеток (Droeger et al, 1986; Kroemer, Wick,1989; Gonzalo et al, 1992). Работами последних лет установлено, что данный лимфокин стимулирует функцию гипоталамо-гипофизарной системы. Так, в недавних исследованиях было показано, что ИЛ 2 усиливает выделение корти-котропинрилизинг гормона клетками медио-базального гипоталамуса (Gambronero et al, 1992). Обнаружилось, что добавление ИЛ 2 в инкубационную среду активирует высвобождение АКТГ крысиными гипофизами (Karanth, McCann, 1991).Эти данные получены в экспериментах In vitro. Для выявления его роли во взаимодействии

двух систем на уровне целостного организма мы исследовали влияние введения ИЛ 2 на функционирование ГНС у нормальных животных и мышей с наследственно обусловленными нарушениями иммунной системы. Проведенные нами эксперименты выявили принципиальные различия в реакции больных и здоровых животных линии NZB на ИЛ 2 (рис 6). Результаты блот-гибридизации суммарной РНК, выделенной из гипофизов, с кДНК проопиомеланокортина (ПОМК) крысы показали, что через 6 часов после введения Ш 2 содержание мРНК гена ПОМК в гипофизе здоровых животных аутоиммунной и контрольной линии значительно увеличивалось, в то время как у мышей, имеющих аутоантитела, уровень мРНК гена ПОМК в ответ на данный стимул менялся значительно слабее. Этот факт заслуживает внимания уже потому, что в настоящее время существует единственная экспериментальная работа, в которой показано стимулирующее влияние ИЛ 2 на экспрессию гена ПОМК в культуре клеток гипофиза In vitro (Brom et al, 1987). Нами впервые установлено, что данный лимфокин оказывает аналогичный эффект In vivo. Это означает, что стимулирующее влияние ИЛ 2 на ГНС реализуется в данном случае на геномном уроЕне, а не на уровне физиологической регуляции секреции АКТГ.

Результаты, полученные при определении уровня кортикосте-рона в плазме крови в ответ на ИЛ 2 также выявили различия между больны™ и здоровыми ясйвотными и по этому показателю. Через I час после введения ИЛ-2 содержание кортикостерона у мышей линии DBA/2 и здоровых мышей ÍIZB разных возрастов достоверно возрастало (рис.7). По сравнению с молодыми животными.

Рис.6. Экспрессия гена ПОМК в гипофизах мышей NZB после введения

ИЛ 2 (200ед/мышь). I-3-больные; 4-6-здоровые

. --у.. \ i ;

12 3 4 5 6

1,4- через 1час после введения среды Хенкса; 2,5-через 1час после введения ИЛ 2; 3,6-через 6 часов после введения ИЛ 2.

300.

DBA/2

200 •

100

2-3 нес

6-7 мво

Рис.7. Влияние ИЛ 2 на уровень кортикостерона в плазме крови. За 100% принят уровень кортикостерона в плазме крови интактша контрольных животных. По оси ординат- % прироста содержания гормона после введения ИЛ 2 по отношению к оазальному уровню. Светлые столбики- через I час, заштрихованные- через б часов после инъекции.

к 6-ти месячному возрасту реакция ГНС на ИЛ 2 у мышей NZB снижалась, но оставалась значительной. У животных 6-7 мес. возраста, имеющих аутоантитела, реакция на введение ИЛ 2 полностью отсутствовала. Через 6 часов после введения препарата уровень кортикостерона у всех трупп животных снижался. Эти результаты указывают на нарушения нормальных физиологических связей между иммунной и эндокринной системами , развивающихся у мышей NZB к моменту появления аутоантител. Литературные данные об отсутствии реакции ГНС на другой медиатор иммунной системы, ИЛ I, у цыплят линии Obese со спонтанным аутоиммунным тиреовдитом (Schauehsteln et al,198T, Kromer et al, 1988), свидетельствуют о том, что нарушение этих связей может быть общим процессом, сопровождающим различные аутоиммунные болезни.

Таким образом, у мышей, имеющих аутоантитела, потеряна чувствительность ГНС к ИЛ 2. Это свидетельствует об отсутствии нормальных взаимодействий между иммунной и нейроэндокринной системами. Литературные данные о том, что у аутоиммунных животных оказываются поврежденными именно те звенья иммунной системы, которые в норме находятся под регуляторным влиянием глюкокортикоидов, а также обнаруженное нами нарушение взаимодействия иммунной и эндокринной систем позволили предположить, что у мышей с наследственно обусловленной аутоиммунной патологией функционирование гипофизарно-надпочечниковой системы может быть неполноценным.

$ Ч

//2. а Ов/>/8

I 2-Змес

2 б-7мес с АТ

3 6-7М6С без АТ

4 10-12мес с АТ

БВА/2 5 2-Змес

6 6-7мес

7 10-12мес

Рис.8. Возрастная динамика экспрессии гена ПОМК в гипофизах интактных мышей игв и БВА/2.•

Центральным звеном ГНС, определяющим ее функциональную активность, являются регуляторные гормоны гипофиза, поэтому исследование данной системы было начато с анализа экспрессии гена ПОМК, продукты которого являются предшественниками АКТГ. Установлено, что как у аутоиммунной,так и у контрольной линии экспрессия гена ПОМК в гипофизе значительно увеличивается к 10-12 месяцам жизни. Разницы между молодыми и 6-7 месячными животными обеих линий практически нет, так же как и нет ее между больными и здоровыми мышами ыгв (рис.8).

Исследование возрастной динамики уровня кортикостерона в крови аутоиммунных и нормальных животных показало, что у мышей контрольной линии БВА/2 концентрация гормона не меняется за рассмотренный наш период с 2 до 12 мес. У мышей №В в 2-Зх

месячном возрасте уровень гормона высок, его абсолютное значение в 5 раз превышает аналогичный показатель у контрольной линии. К 6-7 месяцам, времени появления аутоантител, уровень кортикостерона резко снижается, еще более он снижается к 10-12 месяцам и уже не отличается от такового у контроля (рис.9).

Рис.9. Возрастная динамика уровня кортикостерона в плазме крови у мыаэй МВ (—) и БВА/2 (—).

Звездочками обозначены различия между животными исследуемых ланий соответствующих возрастов.

Рис.10. Возрастные изменения реактивности надпочечников к АКТГ у мышей NZB (—) и DBA/2 (—).

За 100% принят базальный уровень продукции кортикостерона.По оси ординат-% прироста продукции под действием АКТГ (20 млед/мл) по отношению к базальному уровню продукции.

Анализ кортикостеронпродуцируящей функции надпочечников экспериментальных животных In vitro показал, что у мышей NZB она не меняется на протяжении всего исследуемого периода. У животных контрольной линии этот показатель временно снижался в возрасте.6-7 месяцев, что никак не отражалось на уровне общего кортикостерона в плазме крови (табл.3).

Таблица 3.

Удельная продукция кортикостерона In vitro надпочечниками мышей линий NZB и DBA/2 (мкг/ЮОмг ткани/час)

2-3 мес 6-7 мес 8-9мес 10-12 мес

NZB 0.421±0.054 0.793*0.237 0.659*0.216 0.893*0.256

(23) (11 ) (9) (9)

DBA/2 0.609*0.107 0.302*0.063 0.670*0.154 0.554*0.075

(21) (19) . (Ю) (12)

Здесь и далее в скобках показано число животных в груше. Достоверных различий нет.

Изучение реактивности'надпочечников животных двух линий к экзогенному АКТГ (20 mlïï/ мл среды) in vitro позволяло установить, что реакция надпочечников мышей DBA/2 практически не меняется с возрастом. Прирост продукции кортикостерона в ответ на АКТГ, измеряемый по отношению к базальному уровню секреции интактными железами, принятому за 100%, колебался у них от 130 до 190 %. У животных аутоиммунной линии в возрасте 2-3 мес. наблюдалась высокая реактивность надпочечников (420%). С возрастом этот показатель снижался, к моменту начала заболевания он составлял всего 140% от базального уровня, и .наконец, в 10-12 мес. возрасте надпочечники мышей NZB практически не реагировали на предъявленный стимул (рис.10). Эти данные позволяют полагать, что высокий уровень кортикосторона у молодых здоровых мышей NZB является результатом повышенной чувствительности их надпочечников в этот период к кортикотропному гормону. Потеря такой чувствительности, вероятно, и обуславливает снижение уровня гормона с возрастом.

Известно, что около 80% кортикостероидов циркулируют в крови в связанном состоянии. Как было показано (Faict et al, 1985), именно свободные, не связанные с кортикостероцдсвязыва-ющим глобулином (КСГ) гормоны обладают иммунорегуляторными свойствами. О величине пула свободных кортикостероидов можно косвенно судить по таким характеристикам КСГ как его связы-

вапцая способность и концентрация в крови. Данные наших экспериментов свидетельствую о том, что у мышей ыгв , у которых аутоантитела не появляются до 12 месяцев, и у контрольных животных линии ВЗА/2, концентрация данного глобулина в крови не меняется на протяжении исследованных возрастных периодов. В то же время, у мышей , имеющих аутоантитела, в 10-12 месячном возрасте наблюдается достоверное увеличение этого показателя. Связывающая способность КСГ не менялась с возрастом у здоровых мышей ИИВ и контрольных животных. С появлением аутоантител константа ассоциации данного белка резко возрастала (табл.4), что свидетельствует об увеличение связывающей способности КСГ.

Таблица 4.

Возрастные изменения связывающей способности кортикостероид-связыващего глобулина (КСГ) у мышей №В и БВА/2

Возраст (М6С) кахю5 М-1 N мкМ

игв ВВА/2 БВА/2

2-3 1.(6) 2.(9) 3.(6) 4.(9)

2.9±0.52 4.9±0.43 64±5 66-4

6-7 5.(9) 6.(9) 7.(9) 8.(9)

3.9^0.38" 4.1-0,61 66^5 58-5

1СЫ2

без А? 9. (6) 10.(9) II.(6) 12.(10)

3.8±0.47 4.0±0.35 72-3 65-4

С АТ 13.(10) 14.(10)

9.1^0.79 — 80-3 —

Ка-константа ассоциации, И-число связывающих мест

Ь.2 К0-05 Р1.13 ; 5.13; 9,13<0-01 Рз,14; 7.14<0'05

Повышение содержания КСГ в крови и увеличение его связывающей способности у больных мышей свидетельствует о том, что аутоиммунная патология сопровождается снижением пула свободных ак-

тивных глюкокортикоидов у больных животных. Таким образом, понижение уровня общего кортикостерона в плазме крови у мышей NZB с возрастом усугубляется изменениями, происходящими с кор-тикостероидсвязывющим глобулином. Сходные результаты были получены при исследовании цыплят Obese с наследственно обусловленным аутоиммунным тиреоидитом. У больных птиц содержание КСГ было в 2 раза выше, чем у здоровых, что значительно снижало пул активного гормона (Fassler et al,1986). Можно предполагать, что такое уменьшение пула свободных глюкокортикоидов является общим феноменом при аутоиммунных расстройствах.

Уменьшение количества активных глюкокортикоидов может быть одной из возможных причин развития аутоиммунных реакций. Для проверки этого предположения мышам линии NZB, начиная с 4-х месячного возраста, вводили дважды в неделю низкие, близкие к физиологическим дозы дексаметазона (5мкг/мышь Dexacethasone, Serva) вплоть до появления первых аутоантител. Дексаметазон не связывается с КСГ, поэтому его введение повышает пул активных гормонов. Действительно, искусственное увеличение количества активных глюкокортикоидов привело к задержке появления анти-эритроцитарных аутоантител (рис.11). Оказалось, что первые антитела регистрируются у таких животных в 8 месяцев, а к 12 месяцам заболевает только Ы% мышей.

Рис. II. Динамика появления антиэритроцитарных аутоантител у интактвых (светлые столбики) и после длительного введения дексаметазона (заштрихованные столбики) мышей

ыгв.

По оси ординат-Ж заболевших животных, по оси абцисс-возраст

Возникает вопрос, что se первично, нарушения ли в иммунной системе влекут за собой столь значительные эндокринные сдвиги, или изменения гормонального фона являются причиной патологически процессов в иммунной систем? Очевидно, сам по себе сни-еэнный глшокортикоидный тонус не может являться причиной заболевания, поскольку у мышей контрольной линии DBA/2 с низким уровнем кортикостэроидов в крови и слабой реактивностью надпочечников к трошому гормону никогда не возникает аутоиммунных расстройств. С другой стороны, в серии работ, проведенных на цыплятах линии Obese, было показано, что кондиционная среда от спленоцктов , полученных как от аутоиммунных, так и от нормальных щяелят, одинаково эффективна для стимуляции продукции кортикостерона донорами. Следовательно, лимфоциты аутоиммунных и нормальных птиц продуцируют одинаковое количества полноценных лещокзнов, способных влиять на кортикостероидогенез. В-клеткп от аутоиммунных мышей, введенные нормальным реципиентам, прекращают секрецию аутоантител (Rlnman et al, 1987). Таким образом, можно сделать вывод об отсутствии нарушений в шшуноцнтах животных с аутоиммунной патологией. Вероятно, воз-ннкновэнЕие аутоиммунного процесса провоцируется некими факторами на уровне целостного организма.

Проведанные наш эксперименты позволяют предполагать, что одной из причин, провоцирующих развитие заболевания является нарушение связей между иммунной и нейроэндокринной системами. Свидетельством в пользу данного предположения могут служить работы с экспериментально индуцированным аутоиммунитетом. У крыс линии Lewis в ответ на введение полисахарида из клеточной стенки стрептококка группы А развивается аутоиммунный артрит. У животных линии Fisher, гистосовместимых с Lewis, введение того же антигена не вызывает аутоиммунных реакций. Известно, что при введение данного антигена выделяются интерлейкины I и 2, а также фактор некроза опухоли (Sternberg et al, 1989 а).Было показано, что у крыс линиз Fisher в ответ на введение этих медиаторов повышается уровень АКТГ и кортикостерона в плазме крови, тогда как у Lewis тйкого повышения не происходит (Sternberg et al, 19896).Снижен у них и ответ ГНС на введение

кортикотропт рилизинг гормона (Sternberg et al, 1989а). Эта результаты также свидетельствуют о том, что нарушение взаимодействия между иммунной и эндокринной системами может провоцировать аутоиммунные заболевания.

Таким образом, результаты исследования показали, что в начальный период развития аутоиммунной гемолитической анемия у хавотных нарушается нормальное взаимодействие меэду иммунной и эндокринной система?.® и резко снижается глюкокортикоидный -тонус организма. Возможно, эти два фактора взаимозависимы и кг:~ гочксленныа литературные денные о взаимодействии имнуипсЗ vt эндокринной систем позволяют считать такое предпологаниэ всэл-не вероятным. Обнаружено, что у мышей линии NZB к моменту заболевания снижается чувствительность различных звеньев ГКО к регуляторным пептидам (АКТГ.лимфокинач). Снижение реакции ГШ на стимулирующее действие икмуномодуляторов и уменккзнге концентрации кортикостерока в плазме крови могэт лишить организм рэгуляторного влияния глккокортпкеидов ка процессы, происходящие в иммунной системе. Кортвкостерон обеспэчйЕоэт супрессии неспецифических клонов лтфецктов, которые появляются а процессе иммунного ответа на определенные антигены (Schausiustein et al, 1987). Напротив, внеокяй уровень функционирования ГНС у молодых мышой NZB предохраняет их от проявления наследственно обусловленного нарушения иммунитета.

ДанЕЫо, полученше в нашх экспериментах, рассмотренные совместно с опубликованными в литературе, позволяют полагать, что нарушение функционирования гшофжзерно-кадпочечнтгоЕсй системы мокэт стать серьезным патогенетическим фактором в проявлении аутоагрэссш.

РОЛЬ ТИМУСА И ЕГО ГОРМОНА ТИМОЗИНД В ФОРМИРОВАНИИ ЭНДОКРИННЫХ ФУНКЦИИ НАДПОЧЕЧНИКОВ И ГОНАД В РАННЕМ ОНТОГЕНЕЗЕ

Мыши рождаются эндокринологически и иммунологически незрелыми и системы, регулирующие эти функции продолжают созревать в первые дни после рождения. Одним из наименее изученных аспектов проблемы взаимодействия иммунной и эндокринной систем является вопрос об их взаимном влиянии в период раннего пост-натального онтогенеза. Известно, что активность тимуса-центрального органа иммунитета, особенно высока именно в раннем возрасте и начинает ослабевать после наступления половой зрелости (Allen et al, 1-984; Oates, Goldstein, 1984). Показано, что последние дни эмбриогенеза и первые дни постнатальной жизни-наиболее чувствительный период для дальнейшего функционирования желез внутренней секреции (Csaba,1986; Дыгало и др, 1987; Дыгало, Науменко,1Э88). Эти данные, а также полученные нами результаты об участии тимуса и его гормонов в регуляции эндокринных функций гонад и надпочечников во взрослом организме позволили сформулировать третью задачу исследования: изучить роль тимуса и его гормональных факторов в формировании эндокринных функций в период раннего постнатального онтогенеза.

У мышей, гомозиготных по рецессивной мутации пи (мыши nude), полностью отсутствует тимус, и в связи с этим наблюдаются тяжелые дефекты клеточного иммунитета. Мы исследовали особенности гормональных функций надпочечников и гонад у генетически бестимусных животных.Для этого были использованы взрослые 2-х месячные мыши nude линии Balb/c. Контролем служили нормальные животные соответствующего генотипа и возраста. Было обнаружено, что уровень тестостерона в плазме крови му-тантных животных значительно меньше, чем у мышей, имеющих тимус. Снижение мужского полового гормона у nude является следствием ослабления тестостеронпродуцирующей функции семенников. У мутантных самок, так же как и у самцов, заметно подавлена эндокринная функция гонад.Так, у мышей, несущих мутацию, удель-

ная продукция эстрадиола In vitro существенно ниже, чем у нормальных животных (рис.12). Эти данные согласуются с наблюдениями Flanagan (1966) о слабой фертильности мутантных мышей, а также с результатами исследования Rebar et al (1982) о недостаточном содержании гонадотропных гормонов в гипофизе самцов и самок nude. В то же время, мыши nude имеют значительно более высокий уровень кортикостероидов в крови по сравнению с нормальными контрольными животными. В экспериментах In vivo установлено, что наблюдаемый эффект является следствием увеличения продукции этих гормонов надпочечниками (рис.12).

IfcüSS

юг* ха/ХХХг/ч

rfl

Iß

л 12

Т/ЫЖ ЕтДОас/Ч

ÛÛ

С 1 ■ I I

п-о-с

rfl

22Î3ZI

nr/ICÏcr/ч

•

út:

Рис.12. Эндокринные функции надпочечников и гонад у 2-х месячных мышей Balb/c nu/nu.

Таким образом, отсутствие тимуса приводит к значительным изменениям з активности функций надпочечников и гонад. Для того, чтобы убедиться, что тимус играет определенную роль в формировании эндокринных функций в раннем онтогенезе, были исследованы гормональные функции гонад и надпочечников у нормальных мышей после неонатального удаления у них тимуса и те же гормональные параметры у мутантных животных после ранней трансплантации им тимусной ткани. Животных обеих групп исследовали по достижению ими 2-х месячного.возраста.

Рис.13. Влияние неонатальной тимэктомии на эндокринные функции гонад и надпочечников 2-х месячных мышей nude, светлые столбики-тимэктомированные, заштрихованные-ложнооперированные, черные-интактные животные, »-тимэктомированные достоверно отличаются от интактных; »»-тимэктомированные достоверно отличаются от интактных и ложнооперированвдх,

С А К Ц Ы С 1 ¡1 I ■

in и J ш а з

Рис.14. Влияние неонатальной трансплантации тимуса на эндокринные функции надпочечников и гонад 2-х месячных мышей nude. Черные столбики-интактные нормальные животные, светлые-интактные мыши nude, заштрихованные-мыши nude с пересаженным тимусом.Различия достоверны:»-между интактными nude и нормальными животными(р< 0.01); *«- между интактными и оперированными nude (р<0.05).I-содержание II-0KC в плазме; II- удельная продукция II-ОКС надпочечниками; Ill-содержание тестостерона в плазме, IV-удельная продукция тестостерона семенниками, V-удельная продукция эстрадиола яичниками .

У тимэктомированных самцов наблюдается значительное снижение уровня тестостерона в крови и уменьшение продукции этого гормона гонадами по сравнению с контрольными животными (рис. 13). Соответствие этих результатов данным, полученным на генетически бестимусных мышах, свидетельствует о том, что снижение гормональной функции семенников у мутантных животных связано с отсутствием тимуса в ранние сроки постнатального онтогенеза. Зтот вывод подтверждается полученными нами сведениями о восстановлен}® гормональной активности семенников генетически бестимусных самцов после ранней пересадки им тимусной ткани (рис.14).

Яичники самок оказались менее чувствительными к удалению тимуса, чем гонады самцов. Нэ обнаружено существенных различий меаду контрольными и оперированными сачками по продукции зст-радиола яичниками In vitro , тогда как генетически бэстимусные мыши достоЕэрно отлячал;сь от нормальных (рис.13). Эндокринная функция яичников оказалась такхе нечувствительной к пересадке тимусной ткани. Установлено, что у самок nude продукция эстра-диола яичниками, значительно сниженная по сравнению с нормальней мышами, не меняется после трансплантации игл зилочковсй железы (рис.14). Неспособность имплантируемого тимуса восстановить эндокринную функцию яичников может свидетельствовать,о том, что зилочковая железа участвует в морфогенезе этого органа па ранних этапах развития, и ее отсутствие в эмбриональный период и перине дни жизни приводит к необратимым структурным и функциональным изменениям. Данные японских исследователей N1-shlzuka, Sakaltura (1971), которые продемонстрировали, что ранние стадии развития фолликулов яичника находятся под контролем ■пнмуеа, подтверждают это предположение.

Удаление тимуса в первые дни жизни приводит к увеличению уровня п-оксикортикостероидов (II-0KC) в плазме крови и их продукции надпочечниками у взрослых животных по сравнению с интактным контролем (рис.13). Такое повышение активности надпочечников подобно имеющемуся у генетически бестимусных мышей. Эти результаты свидетельствую о том, что отсутствие тимуса в ранние сроки постнатального онтогенеза является непосредствен-

ной причиной выявленных изменений.

Необходимо отметить, что и у ложнооперированных животных изучаемые показатели также значительно выше, чем у интактных животных. Наблюдаемое повышение является , по-видимому, отдаленным результатом раннего постнатального стресса, каким является ложная операция. Способность ранних стрессорных стимулов влиять на функционирование гипофизарно-надпочечниковой системы в зрелом возрасте была продемонстрирована несколькими исследователями (Салганик и др.1979; Маслова и др. 1980, Martin, Moberg, 1981).

Неонатальная трансплантация тимусной ткани мышам nude привела к нормализации функциональной активности надпочечников у взрослых мутантных животных. Уровень II-0KC в крови экспериментальных мышей не отличается от такового у нормального контроля (рис.14). То же самое произошло и с величиной продукции этих гормонов корой надпочечников in vitro (рис.14). Таким образом, ранняя пересадка вилочковой железы препятствует нарушению функции надпочечников, развивающемуся у мутантных животных. Существуют сведения о том, что трансплантация тимуса взрослым мышам nude не влияет на функциональные нарушения надпочечников (Pierpaoli, Besedovsky, 1975). Вероятно, определяющим моментом во взаимном влиянии этих двух эндокринных органов является ранний постнатальный период, критический для становления многих физиологических функций.

Поскольку тимус является эндокринной железой, мы исследовали действие одного из основных гормонов тимуса-тимозина (фракция 5) на формирование эндокринных функций гонад и надпочечников. Для этого генетически бестимусным мышам Balb/c nu/nu, а таете неонатально тимэктомированнкм и ложносперированным животным вводили этот тимический гормон в течение первого месяца жизни. Исследовали экспериментальных животных в 2-х месячном возрасте.

Раннее введение тиыозина мышам nude привело к повышению у взрослых 2-х месячных животных уровня тестостерона в плазме крови и небольшому подъему удельной продукции этого гормона семенниками (рис.15). Такой эффект от раннего введения тимози-на представляется нам закономерным. Эти результаты соответствуют данным, полученным при ранней трансплантации тимусов сам-

цам nude (см.рлс.14).Возможно, что действие тимозина на становление функции семенников у мутантных мшей опосредовано через гипоталамо-гипофизарную систему. В пользу этого предположения свидетельствуют эксперименты Strich et al(1985), где было обнаружено повышение уровня ЛГ в гипофизе 21-дневных мышей nude, с первого дня жизни ежедневно получавших тимозин.

Н-

„ г

S g

t, аз

Р I.

гН

I II in I И I II

Рис.15. Влияние многократного введения тимозина в течение первого месяца жизни на эндокринную активность гонад и надпочечников у 2-х месячных мышей Balb/c nu/nu. I-введение физиологического раствора, П-ввведенке тимозина

Введение тимозина вызвало достоверное снижение удельной продукции кортнкостерона надпочечниками мутантных мышей и не повлияло на уроЕень этого гормона в крови (рис.15). Расхождения между исследуемыми параметрами, по-видимому, связаны с какими-либо функциональными особенностями эндокринной системы у мышей nude. Известно, что у мутантных животных имеются многочисленные структурные и функциональные нарушения в печени, где в основном протекает метаболизм гормонов (Pantelourls, MacMenamin,1973). С другой стороны, введение тимозина могло снизить депонирование кортнкостерона тканями, так как известно, что тимозин in vitro уменьшает число рецепторов к глюко-кортикоидам в тимоцитах человека и мыши (Osherorr, 1981). Следовательно, экперименты показали, что у мутантных мышей nude функциональная активность надпочечников значительно выше, чем у нормальных животных. Неонатальная пересадка тимусной ткани

таким мышам полностью нормализует эту функцию во взрослом.состоянии, а раннее взэдениэ им гормона тимуса тимозина действует на формирование эндокринной функции надпочечников сходным образом.

Пошло МЫП6Ё шйе, для исследования влияния магазина на формирование эндокринной функции коры надпочечников бкли использованы неонатально тамзктошрованныэ животные. Как вами было показано выше, удаление тимуса в 3-х дневном возрасте вызывало повышение Функциональной активности коры надпочечников у взрослых животных (см.рис.13). В данной серии опытов эта операция также привела к увеличению уровня кортикостерона в крови. Регулярные инъэкщш {миологического раствора в течение первого месяца шзш не повлияли на этот показатель. На этом фоне шогократкое введение тимозша тимэктомировашщм мышам в течение первого месяца кизня вызывало значительное снижение функции коры надпочечников (рас Л 6). Падение уровня кортикостерона было обнаружено и при введении тимозина ложко-ошрированнык еивотшм (результаты нэ представлены).

I-р<0.05

р<0.0£ р<0.01

Рис.16. Влияние многократного введения тп-'мозина в течение первого месяца жизни на функциональную активность надпочачликов у нзснатально тиыэктомировашшх мишей Ва1Ъ/с.

ИНТ.-штактные; Т.Э.+Ф.Р.-тиаэктомирован-ныэ с введением . раствора; Т.Э.+Т-5-тшэктомарованные с введением тшозкна.

СО Ср

еч • .

СВ СП

Данные экспериментов позволяют заключить, что введение гордона тимуса тимозша в раннем возрасте приводит к снижению функциональной активности надпочечников у взрослых животных. Это хорошо согласуется с результатами предыдущих эксперимен-

тов, свидетельствутих о подавляющем влиянии тимуса на формирование функции надпочечников. Можно предполагать, что гормональное влияние тимуса на надпочечники в указанный период формирует программу их дальнейшего взаимодействия в совместной регуляции функциональной активности лигфсидяой ткани.

Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о том, что тимус, центральный орган иммунитета, в ранние сроки постнатального онтогенеза принимает участие в формирования эндокринных функций надпочечников и гонад, и это участие опосредуется гормонами тимуса, по крайней мере, таким, как тимозин.

РОЛЬ г.тясонортшвдов в формировании твшхчошшзш функций

В РАННЕМ ОНТОГЕНЕЗЕ

У танго: гидов гзтотпкх как крыса и мапь активность гзпота-л&мо-гшгсЗязерно-надпочзчпиковой системы снижена в неонаталь-енй период. Так, .в перЕке дни жизни (со 2 по 14) у та наблюдается вязкий басальЕкй уровень глскокортикоддов и отсутствие реакции со стороны гипсфгзарЕО-надпочечЕиновой системы на многие виды стресса (так называемый ароактивнкй период) (Шаляпина .Чемыртен, 1983; Заро1зку е1 а1, 1986). Примерно в это зе время у Г'лвотшх даших видов завершается формирование структур и ©уншщй иммунной системы: отменяется способность индуцировать нзонатальную толерантность, исчезают кеспецифяческие супрессоры и появляется ответ на антиген, который, постепенно нарастая, достигает к 3-х недельному возрасту уровня взрослых животных (Аг£ 1г1в ег а1, 1985; ¡Уагзоп, ег а1, 1991).

Учитывая тесную взаимосвязь иммунной и эндокринной систем у взрослых животных, параллельность развития их в раннем онтогенезе, а также модифицирующее действие гормонов коры надпочечников по отношению ко многим физиологическим функциям, мы ■ предположили, что глюкокортикоиды в ранней постнатальной жизни могут оказывать влияние на формирование иммунной системы, детерминируя величину иммунологических реакций. На основании этого предположения была сформулирована четвертая задача исследования: выявить роль глюкокортикоидов в формировании имму-

нологических функций в период раннего постнатального онтогенеза.

Было изучено воздействие глшокортикоидов в первые дни жизни на установление неонатальной толерантности и формирование гуморального иммуннного ответа.

Влияние гмоаокорпгикоидов на формирование состояния иммунологической толерантности,

Возможным механизмом действия глюкокортикоидных гормонов в раннем онтогенезе является их непосредственное влияние на субпопуляции лимфоцитов . Мыши срузу после рождения являются им-мунологически незрелыми, что обуславливает возможность вызвать у них толерантность (неотвечаемость) на определенный антиген. Толерантность обеспечивается прежде всего субпопуляцией неспецифических клеток супрессоров, которые присутствуют в селезенке животных в течение первой недели постнатальной жизни и продуцируют растворимые факторы, ингибирувацие In vitro клеточный и гуморальный иммунитет (Arglris, 1981),а также мито-ген-индуцируемую пролиферацию спленоцитов взрослых животных (Holan et al, 1991). Известно, что в последние дни эмбриональной жизни уровень глюкокортикоидных гормонов высок, но сразу после родов снижается и остается очень низким в течение первых двух недель постэмбриональной жизни. Поскольку кортикостерон оказывает выраженное влияние на иммунорегуляторные Т-клетки (Haynes et al, 1979; Kombluth et al, 1991), мы исследовали, окажет ли влияние искусственное повышение уровня кортикостеро-на в первые дни жизни на способность к индукции неонатальной иммунологической толерантности. Была проведена серия экспериментов, в которой изучали влияние глюкокортикоидных гормонов на индукцию неонатальной толерантности к белковому антигену лизо-циму из куриных яиц у мышей линии CBA/J. Для этого новорожденным мышам вводили в.б.или 0.1мг лизоцима в 0.1мл физ.раствора ■(толерантные мыши) или 0.1мл физ. раствора (контрольные мыши) между 12 и 24 часами после рождения. На 1,3,и 5 дни жизни и толерантным и контрольным мышам вводили или 1мкг кортикосте-рона в 0.2 мл физ. раствора, или только физ.раствор. Части контрольных мышей вводили метирапон (ЮОмкг) в том же режиме,

что и кортикостерон. Тестировали животных в 2-х месячном возрасте.

Обнаружено, что у взрослых животных, у которых индуцировали толерантность к лизоциму после рождения, образуется значительно меньше антителообразущих клеток в ответ на иммунизацию данным белком, чем у контрольных мышей (рис.17). Введение кортикостерона в первые дни жизни не изменило величину иммунной реакции у контрольных животных, но значительно увеличило ее у толерантных, практически до контрольного уровня. С другой стороны, изменение фона глюкокортиксидов не подействовало на иммунную реактивность у нетолеризированных животных.

Установлено, что неонатальное введение лизоцима и /или кор-

Таблица 5.

Влияние неонатального введения кортикостерона на клеточность подколенных лимфоузлов (ЛУ) через 8 дней после иимунизации ли-зоцимом 2-х месячных мышей СВА^

Воздействие число клеток (млн)/2 ЛУ

контроль, без кортикостерона 25.4-3.3 (Ю)

контроль, кортикостерон 26.0-2.1 (И)

толерантные, без кортикостерона 23.2±3.3 (Ю)

толерантные, кортикостерон 22.9-3.6 (Ю)

Различий между группами нет.

тикостерона не повлияло на число клеток в лимфоузлах (табл.5) и на чувствительность клеток селезенки взрослых мышей к стимуляции митогенами (рис.18). Эти данные свидетельствуют о том, что введение лизоцима сразу после рождения способствует индукции неонатальной толерантности, а повышение уровня кортикостерона в раннем постнатальном онтогенезе препятствует ее возникновению. При этом, кортикостерон, введенный в первые дни яизни, не влияет на количественную структуру иммунной системы, но действует на специфическую популяцию регуляторных клеток, вовлеченную в процесс формирования иммунологической толерант-

1<Л]

103102.

гв—ф

Г»

г. с б с ь. в ^ 5" К К+КС Т Т+КС

К+КС -

т .001 .001

Т+ЕС - - .001

К К+КС т

Рис. 17."Число лизоцим-спе-цифических антителообразу-вдих клеток в лимфоузлах 2-х месячных мышей СВА/.1, неонатально толеризирован-ных лизоцимом (1мкт/мышь), и подвергшихся затем 3-х кратной инъекции кортико-стерона (1мкг/мышь, 1,3,5 дни после рождения). По оси ординат-число АОК/ Ю6 клеток лимфоузлов. Горизонтальные линии-средние значения в экспериментальной группе; а,б-два отдельных эксперимента. К-контрольные интактные, К+КО-контрольные,обработанные кортикостероном, Т-толерантные, Т+КС-толе-рантные.обработанные кортикостероном.

60 40 20

КОН А

¿1

ГП гЬ

20.

12 3

лпс

гЪ1*Тг*1

12 3

Рис.18. Стимуляция митоге-нами спленоцитов 2-х мес. мышей СВА/.Т, (I) интактных, (2) обработанных на 1,3,5 дни жизни кортикостероном (1мкг/мышь) или (3) мети-рапоном (ЮОмкг/мышь). По оси ординат-индекс стимуляции.

ности. До сих пор неизвестен конкретный механизм индукции и поддержания иммунологической толерантности. Неспецифические супрессоры, присутствующие в организме в неонатальный период и считающиеся одним из факторов, сбеспечивавдих неонатальную толерантность (Holán et al, 1991) кортикостеронрезистентны (Arglrls, 1978), и их роль в нашей экспериментальной модели не может быть определяющей. Более вероятно, что в данных экспериментах оказался затронутым процесс индукции популяции специфических клеток супрессоров, таких как предшественники L3T4+,Lyt-2+ долгокивущих супрессоров, высокочувствительных к кортикостероидам (Duvall, Wyllle,1986). Согласно последним данным, описаны цитотоксические Т-клетки, для которых показана способность непосредственно уничтожать антиген-чувствительные, несущие Ig рецептор В клетки (Shlnohara et al, 1988; Yefenof et al, 1990). Такие цитотоксические клетки могут играть роль "антиген-специфических" супрессоров, обеспечиваниях толерантность в нашей экспериментальной модели, поскольку установлена их чувствительность к глюкокортикоидам на ранних стадиях развития (Kornbluth et al, 1991).

Гуморальный имщннзьей ответ у лшзй с модифицированным в раннем возрате уровнем глюкокорткоиЗов.

Для выяснения рож глюкокортикоидных гормонов в раннем онтогенезе в детерминации иммунологической реактивности взрослых киеотных мы исследовал? формировании гуморального иммунного ответа на Т-зависимый антиген-эритроциты барана. Для решения поставленной задачи был модифицирован фон глюкокортикоидов в первые 5 дней жизни у 2-х групп новорожденных самцов мышей линии Balb/c(I) повышен путем ежедневного введения кортикосте-рона (I мкг/ мышь); (2) и снижен путем ежедневного введения метирапона,ингибитора биосинтеза кортикостерона (ЮОмкг/мышь); (3) контрольные животные получали в том же режиме физ. раствор или были интактными (4). Тестирование животных проводили по достижению 2-х месячного возраста.

Известно, что на 5-е сутки после иимунизации у животных

образуется максимальное число антителообразупщх клеток в се-

Рис.19.Число антителообразупцих клеток (А0К/106) в селезенке 2-х месячных мышей с модифицированным в раннем возрасте фоном глюкокортикоидов на 5-е сутки после в.б.введения 2хЮ7 эритроцитов барана. Здесь и далее: И-интактные, ФР- с введением физ. раствора, КС- с введением кортико-стерона, МП- с введением метирапона.

лезенке. одновременно в плазме крови значительно возрастает концентрация эндогенного кортикостерона (Веаейоуэку ег а1, 1983). Существует предположение, что повышение уровня гормона обеспечивает специфичность иммунного ответа, так как кортико-стерон подавляет малодифференцированные клоны лимфоцитов, обладающих низкой аффинностью к антигену.

Взрослых 2-х месячных мышей, которым в раннем возрасте меняли уровень глюкокорикоидов, иммунизировали Т-зависимым антигеном (эритроциты барана). Через 96 ч после иммунизации животных забивали и определяли число антителообразунцих клеток в селезенке (АОК). Одновременно оценивали уровни кортикотропина и кортикостерона в плазме крови. Величина иммунного ответа у мышей, получавших в раннем возрасте кортикостерон, была в 2 раза меньше, чем у животных обеих контрольных групп. Мыши, которым в первые 5 дней жизни вводили метирапон, напротив, демонстрируют образование очень большого числа АОК в ответ на данный антиген(рис.19).Следовательно, снижение глюкокортикоид-ного фона в первые дни жизни способствует формированию более высокого гуморального иммунного ответа.

600

400

200

Рис.20

Рис.21.

4M1 КС МП

Рис.20. Уровень кортикостерона в плазме крови (ют/Юйлл) 2-х месячных мышей Еа1Ъ/с с модифицированным в раннем возрасте фоном глюкоковтикоидов в дингьапсе иммунного ответа. По оси абцисс-время после иммунизации (часы).

крови (пкг/100 МЛ) 2-Х м в раннем возрасте Фоном глюкокортикоидов на 5-ё сутки после иммунизации.

Анализ функциональной активности ГКО показал,что у 2-х месячных мышей с модифицированным в раннем возрасте' фоном глюкокортикоидов до 'введения антигена уровень кортикостерона в плазме кроЕИ практически одинаков, то есть применяемые ниш воздействия но отразились на базальной функции надпочечников. Однако, ранние воздействия вызвали нарушения в гормональном звене иммунного ответа. Tai«,, введение антигена интактнкм 2-х месячным мышам приводит к заметному возрастанию кортикостерона в плазме крови через 96 ч после иммунизации, к моменту появления максимального числа АОК. У мышей, получавших физиологический. раствор, наблюдается такое же изменение уровня кортикостерона после иммунизации, как у интактных животных. Повы-

шение фона глюкокортикоидов в первые дни жизни привело к полному отсутствию реакции со стороны надпочечников на введение антигена. Снижение фона глюкокортикоидов в раннем онтогенезе, налртив, способствует чрезвычайно сильной активации этих желез в ответ на иммунизацию (рис.20).Реакция со стороны надпочечников мышей, которым вводили метирапон.на иммунизацию полностью совпадает с реакцией гипофиза (рис.21). Таким образом, изменение глюкокортикоидного фона в ареактивный период, в момент окончательного формирования структур и функций иммуннитета, приводит к нарушению реактивности гипофизарно-надпочечниковой системы в процессе иммунного ответа.

Возникает вопрос, не являются л? такие нарушения результатом недостаточности или изменения в регуляторных связях между ее центральным и периферическим звеньями? Для проверки этого предположения мыши с модифицированным в раннем возрасте уровнем глюкокортикоидов подвергались 30-ти минутному эмоциональному стрессу. Обнаружено, что все три группы экспериментальных животных активно реагировали на стрессорное воздействие. Повышение уровня кортикостерона в ответ на стресс как у животных, которым вводили в первые дни жизни кортикостерон, так и у животных, котороым вводили метирапон, было чрезвычайно высоким и не отличалось от такового у контрольной группы (рис.22).

В то же время, экспериментальные животные по-разному реагируют на введение интерлейкина 2. Интерлейкин 2 является одним из основных медиаторов иммунной системы, принимающих участие в реализации идмунного ответа. Показано, что ИЛ 2 активирует функции различных звеньев гипоталамо-пшофизарно-надпочечнико-вой системы (КагапШ, МсСапп, 1991, ОашЬгопего е% а1, 1992). В наших экспериментах мы также наблюдали достоверное повышение уровня кортикостерона в плазме крови у интактшх мышей и животных, получавших в раннем возрасте физ.растЕор через I час после введения ИЛ 2. Мыши, которым в первые дни жизни вводили кортикостерон, отвечали на ИЛ 2 значительно слабее, тогда как животные, получавшие метирапон, напротив, чрезвычайно сильно реагировали на введение лимфокина (рис.23). Характер реакции ГНС экспериментальных животных на ШГ 2 совпадает с реакцией

этой системы на иммунизацию.

Рис.23.

Рис.22.Реакция надпочечников 2-х месячных мышей Ва1Ь/с с модифицированным в раннем онтогенезе фоном глюкокортикоидов на 30-ти минутный эмоциональный стресс. За 100% принят базальный уровень гошона у интактных животных. По оси ординат-% прироста концентрации кортикостерона по отношению к оазальнсму уровню.

Рис.23. Реакция надпочечников 2-х месячных мышей Ва1Ъ/с с модифицированным в раннем онтогенезе фоном глюкокортикоидов на введение 200 ед/мышь человеческого рекомбинантного интерлзйки-на 2 ( через 1ч после инъекции). За 1002 принят уровень гормона у контрольных животных, котошм вводили растворитель. По оси ординат-Ж прироста концентрации кортикостерона по отношению к базальному уровню.

Результаты экспериментов свидетельствуют о том, что небольшие изменения глвкокортикоидного фона в раннем онтогенезе не меняют чувствительности ГНС к такому классическому ее активатору, как эмоциональный стресс,но меняют чувствительность этой системы к специфическим веществам, выделяемым в процессе иммунного ответа, например, к ИЛ 2. Разная реакция ГНС на ИЛ 2, а в результате этого-разный уровень кортикостерона у животных в ходе иммунной реакции , может влиять на число или функциональную активность клеток-супрессоров, известных своей чувст-

витальностью к глюкокортикоидам (Haynes, et al, 1979; Наупез, Fauci, 1979). Возможно, именно по этой причине мы наблюдаем низкий иммунный ответ у "кортикостероновых" и.высокий иммунный ответ у "метирапоновых" мышей. Вероятно, у "кортикостероновых" швотных образуется меньшее количество спещфгчэских супрес-соров, чем у мышей, обработанных мзтирапоном.

Наши данные хорошо согласуются с результатами единственной известной нам работы, сделанной в этом направлении, в которой продемонстрировано, что если новорожденных мышей подвергать хэндлингу с 2 по 21-й день жизни, то во взросло?.: состоянии ответ на иммунизацию у таких животных оказывается сниженным (Raymon et al, 1936). Автора связывают наблюдаемые нарушения с гормональными изменениями, вызываемы!® хэндлингом, и, прежде всего, с повышением уровня кортккостерона в плазме крови е период развития определенных звеньев иммунной системы.

Известно, что неояатальные зкивотныо являются иммунологи-чески незрелыми. Наряда с особенностями состава лимфоадаых и нелимфоидных клеток 1эь:ункой системы (снижено число макрофагов и Т-хелперов, повышено количество супрессоров Т-клеточной ж макрофагальной природа, Landesberg, et al, 1988): в этот период отмечена недостаточность секротарной способности ихмуноком-петентных клеток. У животных наблюдается низкий уровень медиаторов иммунной системы: интерлейкинов, интерферона ( Argiris et al, 1985; Watson et al, 1991). Гликокортикоды e раняиэ сроки поотнатального пэреода могут оказывать воздействие как на онтогенэз лиыфоидных клеток, что вероятнее Есего происходит в наших экспериментах с индукцией неонатальной'толерантности, так и на способность лимфоцитов синтезировать медиаторы иммунной етстеми. Супресснруодее влияние глюкокортикоиднЕХ гормонов на экспрессию генов лзмфокинов показано Bleha et al, (1936) и Redondo et al,(1988). Известно, что формирование пула рецепторов в тканях-мишенях в онтогенезе происходит под влияние возраставшего количества активного лиганда (Csaba, 1986). Именно это явление лежит в основе гормонального импринтинга. В наших опытах кортикостерок, введенный неонатально, мог подавить синтез такого медиатора иммунной системы, как интерлейкип 2. В

результате, у животных сформировался меньший пул рецепторов для этого лимфокина в центральных эндокринных структурах. Вероятно, отсюда и обнаруженная наш пониженная чувствительность ГНС этих мышей к введению данного медиатора. Напротив, у жя-вотных, которые в первые дни постнатальной жизни были лишены глюкокортикоидов, подавление экспрессии гена ИЛ 2 не проксхо-дило, что когло способствовать более активному синтезу этого лимфокина, а,следовательно, и образованию большего количества рецепторов для него . ГНС таких животных отличается чрезвычайной чувствительностью как к ИЛ 2, так и к введению антигена .

Суммируя полученные результаты можно заключить, что глвко-кортикоиды в раннем онтогенезе могут оказывать влияние становление иммунных реакций, по крайней мере таких, как способность к кеонатальной иммунологической толерантности и формирование гуморального тпетунного ответа. Величина глюкокортикоид-ного 'фола в первые дни жизни в определенной степени детерминирует регуляторные взаимоотношения между гшюфизарно-надпочеч-нкковоЯ и иммунной системам во взрослом организме.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Рассмотрение иммунной и нейроэндокринной систем в виде единого комплекса адаптивных механизмов, поддергивающих гомеостаз организма, определило методологию экспериментальных подходов и интерпретацию полученных результатов настоящей работы.

Цри исследовании закономерностей взаимодействия иммунной и эждокринной систем становится очевидным, что особая роль в иммунонейроэндокринных взаимоотношениях принадлежит тимусу. С одной стороны известно, что это центральный орган клеточного Иммунитета, который посредством гуморальных факторов контролирует дафференцировку и созревание Т-лимфоцитов из костномозговых предшественников. Особенно важным периодом в функционировании этого органа является ранний онтогенез, поскольку именно в это время образуется основная масса зрелых иимунокомпе-тентных клеток. С другой стороны, установлено, что тимус является эндокринной железой, а его гуморальные факторы- гормонами, обеспечивающими тесную связь с другими железами внутренней секреции.

Как показали результаты проведенных нами экспериментов, оба исследованных нами гормональных фактора тимуса, тимозин (фракция 5) и тактивин оказывают существенное влияние на эндокринные функции гонад и надпочечников. По-видкмому, обнаруженное в наших опытах подавление тестостеронпродуцирующей функции семенников под влиянием гормонов тимуса целесообразно с биологической точки зрения. Как извастно, тестостерон оказывает ингибирувдее действие на иммунную систему (Козлов и др., 1982) и снижение его уровня факторами тимуса может создавать благоприятный фон для активации иммунных процессов. Установленный нами факт участия простагланданов в опосредовании эффекта тимозина на эндокринную функцию семенников представляется нам важным. Обнаруженная общность молекулярных механизмов, опосредующих действие гормонального продукта тимуса как на лимфоидные, так и на эндокринные органы еще раз свидетельствует об их структурно-функциональном единстве.

Провехэнныо эксперименты продемонстрировали такзе сущест-вонную зависимость функционирования надпочечников от тимуса. Получены убедительные доказательства того, что два гормональных препарата тимуса, тпкозин и тактивнн, сходным образом злиящие на созревание Т-лт»фоцитов (Аргон, 1989), разнонаправленно и различными путями действует на функционирование гштафизарно-надпочечниновоЭ системы. Если тимозан способствует активации функции надпочечников и его эффект опосредуется центральной структуре.™, то тактивин сникает функциональную активность надпочечнпков, препятствуя стимулирующему дейстЕЕю кортпкотропного гормона. Обнаруженная нами способность одного из гормональных фэктороз, тактивнна, оказывать антистрессорное действие является еще одним доказательством з пользу единства :г5лушой и эндокринной систем.

Таким образом ,тимус через свои гормоны способен модулировать глшокортикоздный фон организма. В настоящее время пшроко изучается роль глахокортпкоздов в регуляция иммунитета (сбзоры Blalock, 1589, Batesian et al, 1989). Понижение уровня глико-кортнкоидов под влиянием тактивина может быть благоприятно для пролиферации Т-лш.фэпитов на ранних стадиях дпффэренцяровки, когда они наиболее чувствительны к гормонам ( EesedovsKy, БогИп,1977). Повышение до определенных пределов уровня глкко-"орткгсоидов под действием ткмозина может способствовать рецир-куляцип лайоцитов и выходу зрелых Т-клеток на периферию (Ле-тягин, Шурлыгина 1987). Высокая концентрация этих гормонов в крови, по-видимому, притормаживает некоторые процессы, протекающие в лмфоидных структурах, предохраняя организм от ряда побочных продуктов иммунных реакций (Munck et al,1984). Нааи данные свидетельствуют о существовании еще одного, не рассматриваемого до сих пор, уровня регуляции функции гипофизарно-надпочечниковоЗ системы, включающего тимус и синтезируемые им пептиды. Необходимость и целесообразность существования такого уровня становится очевидной при рассмотрении иммунной и эндокринной систем как единого комплекса механизмов поддержания физиологического и генетического постоянства организма. Вероятно, тимусу принадлежит своего рода "координирующая" роль в

обеспечении их согласованного функционирования.

Со своей стороны, для нормального протекания иммунных процессов в организме необходим определенный уровень функционирования гипофизарно-надпочечниковоЁ системы. Результаты экспериментов, проведенных на мышах HZB с генетически обусловленной аутоиммунной гемолитической анемией показали, что появление аутоантител совпадает со снижением "глвкокортикоидного тонуса" организма и нарушением нормального взаимодействия между иммунной и эндокринной системами. По всей видимости, чувствительность нзйроэндокринных структур к регуляторным влияниям икму-номедиаторов играет существенную роль в поддержании иммунного гомеостаза. При ее снижении в результате различных причин-генетических факторов, вирусных заболеваний, травм, экспериментальных вмешательств развиваются нарушения, проявляющиеся, в частности, в возникновении аутоиммунных реакций.

Исследования других аутоиммунных заболеваний, таких как системная красная волчанка у человека и аутоиммунный тиреоидит у цыплят, позволили обнаружить гиперпродукцию одного из медиаторов иммунной системы ИЛ 2 (Кготег, Wick, 1989). В настоящее время нет сведений о наличии такой гиперпродукции у мышей NZB. Однако, если у этих животных также имеет место высокий уровень данного медиатора, то, учитывая его активирующее влияние на функционирование ГНС, можно легко себе представить, что высокая концентрация кортикостерона у молодых мышей NZB является результатом не только гиперчувствительности их надпочечников к АКТГ, но ж повышенного содержания ИЛ 2. Высокий уровень глюко-кортикоидов защищает животных от гиперактивации иммунной системы. Так, Mason с соавторами показали, что у крыс Lewis с гипофункцией гипофизарно-надпочечниковой системы экспериментально можно вызвать аллергический энцефаломиелит. Это заболевание не индуцируется у крыс линии PVG с повышенным уровнем кортикостерона (Mason et al, 1990). Крысы Lewis выздоравливают без дополнительных вмешательств через несколько дней. Удаление эндогенных глюкококортикоидов при помощи адреналэктомии полностью блокирует выздоровление крыс Lewis и позволяет индуцировать заболевание у резистентных ранее крыс PVG. Результаты

нашей работы являются еще одним свидетельством в пользу представления о защитной роли высокого фона глюкокортикоидов при развитии аутоиммунных патологий. В наших экспериментах у молодых мышей NZB отмеченный нами высокий уровень функционирования надпочечников является, по-видимому, сложившимся в процессе селекции адаптивным механизмом, предохраняющим животных репродуктивного возраста от развития болезни. Гиперактивация ГНС в течение нескольких месяцев жизни приводит, вероятно, к быстрому истощению этой системы и уже к 6-7 мес. возрасту ее активность падает. Снижение "глюкокортикоидного тонуса" провоцирует появление аутоантител, а поддержание высокого глюкокортикоидного фона за счет введения небольших доз дексаметазона существенно замедляет аутоиммунный процесс. В этих экспериментах продемонстрирована важная роль гипофизарно-надпочечниковой системы в поддержании определенного уровня функционирования иммунитета.

Необходимо отметить, что мыши линии NZB достигают полного иммунологического созравания в очень раннем возрасте (Gazdar et al, 1971). Уже в течение первой недели жизни они отвечают выработкой антител на эритроциты барана как взрослые животные (Evans et al, 1968), тогда как другим линиям требуется несколько недель для достижения сравнимого уровня иммунологической зрелости. К сожалению, ни в наших экспериментах, ни в опытах других авторов не было исследовано состояние гипофизарно-надпо- чечниковой системы у таких животных в период раннего постнатального онтогенеза. Однако, учитывая литературные данные о синхронности развития иммунной и эндокринной систем (Pierpaoly et al, 1977), и'наши собственные результаты о взаимном влиянии этих систем на формирование друг друга в раннем периоде развития, можно высказать спекулятивное предположение о том, что раннее созревание иммунитета могло способствовать более быстрому становлению гипофизарно-надпочечникового . комплекса а, в связи с этим, и отмене ареактивного периода, в течение которого животные имеют низкий уровень кортикостерона и не способны отвечать его повышением на стрессорные воздействия.

Действительно, анализ функционирования ГНС показал, что у аутоиммунной линии наблюдается высокая активация в молодом возрасте и затем быстрое ее истощение, то есть онтогенетические темпы развития этой системы как бы сжаты. Как мы наблюдали в наших экспериментах, повышение уровня глюкокортикоидов в первые дни жизни способно повлиять на процесс формирования иммунологической толерантности. Возможно, более высокий глюко-кортикоидный фон по сравнению с нормой в неонатальный период мог способствовать ослаблению толерантности к собствеыым антигенам. Нам неизвестны данные о способности аутоиммунных животных формировать неонатальную толерантность,но показано, что взрослые мыши NZB демонстрируют резистентность к индукции и поддержанию иммунологической толерантности к чужеродным белкам и эритроцитам барана (Basten, 1989, Kronenberg,1991). Утрата толерантности к собственным антигенам является основополагающим фактором в развитии аутоиммунной болезни (Kronenberg, 1991).

Таким образом, в первых двух разделах настоящей работы представлены результаты исследования закономерностей взаимодействия иммунной и эндокринной систем во взрослом организме. Они свидетельствуют о том, что иммунная система с помощью ти-мических гормонов в определенной степени контролирует функционирование эндокринных желез. Гуморальные продукты тимуса участвуют в регуляции таких важнейших для организма гормональных функций, как репродуктивная функция и функция адаптации к изменяющимся условиям окружающей среды. Наши результаты и данные литературы позволяют считать, что тимус является, вероятно, полноправной составляющей частью нейроэндокринной системы, связанной прямыми и обратными связями с железами внутренней секреции. И если влияние гормонов на вилочковую железу изучалось достаточно подробно (обзор Чесноковой и др.,1984), то результаты наших экспериментов частично восполняют недостаток информации об обратном, афферентном звене взаимодействия тимуса с эндокринными структурами. Анализируя данные, полученные на аутоиммунных животных, становится понятным, что , со своей стороны, эндокринная система посредством гипофизарно-надпо-

чечникового комплекса во многом определяет протекание иммунных реакций. Все эти факты могут служить подтверждением гипотезы о существовании на уровне целостного организма единого регуля-торного нейроиммуноэндокринкого контура, обеспечивающего его гомеостаз. Нарушение нормальных физиологических отношений между отдельными звеньями этого контура может способствовать возникновению патологических процессов.

Важнейшим этапом формирования взаимосвязи между иммунной и нейроэндокринной системами является период раннего постнаталь-ного онтогенеза, момент их окончательного созревания. В процессе эволюции происходит усложнение регуляторных механизмов индивидуального развития. С повышением организации и совершенствованием онтогенетической приспособляемости все более возрастает роль нейрогормональных систем, выступающих в качестве универсальных регуляторов физиологических процессов. Особенно велик интерес к роли этих систем в раннем онтогенезе млекопитающих. К настоящему времени накоплено большое количество данных, свидетельствующих о том, что ход индивидуального развития с самых начальных и до конечных этапов совершается под контролем нейромедиаторов и гормонов (Мицкевич, 1978, Бузников, 1987). Для осуществления гормонального регуляторного эффекта особое значение имеет синхронность воздействия гормонов как морфогенетических индукторов и появление компетенции в тканях мишенях, которая, по-видимому, определяется наличием или отсутствием гормональных рецепторов (Номиссаренко и др., 1986, СзаЬа, 1986). Незначительные сдвиги в созревании взаимодействующих тканей могут привести к утрате морфогенетического эффекта, а .следовательно, к существенным и необратимым изменениям в развитии организма. Осознавая важность данного этапа для развития иммунной и эндокринной систем, можно было предполагать, что обе они, каждая посредством своих регуляторных гормонов,участвуют в формировании иммунных и эндокринных функций в период раннего постнатального онтогенеза и именно в это время складывается паттерн их совместного функционирования во взрослом организме.

Результаты наших экспериментов подтвердили это предположе-

ше. Так, было показано, что становление гормональной активности семенников и надпочечников в первые дни жизни происходит под контролем тимуса. Тимус, согласно нашим данным, обладая гормональным влиянием на семенники, способствует формированию более высокого уровня функционирования этих желез, внося свой вклад в обеспечение репродуктивной функции животных. Именно в этот период происходит дифференцировка мозга, организация ги-поталамических центров по циклическому (женскому) или тоническому (мужскому) типу, определяется структура гипофиза, периферических желез и связи между ними. Видимо, присутствие вилоч-ковой железы в этот "критический" момент обеспечивает нормальное созревание гипоталамо-гипофизарно-гонадной оси. Данные Rebar и соавторов, свидетельствующие о том, что у генетически бестимусных мышей, самцов и самок, снижено содержание гипофи-зарных гонадотропинов (1982) и гонадотропинрилизинг гормонов (1983), подтверждают это предположение. Кроме того, уже довольно давно известно, что неонатальное удаление тимуса приводит к дегрануляции клеток гипофиза, продуцирующих соматотроп-ный горюн и пролактин (Morel et al, 1978). Показательны также результаты работ японских исследователей Nlshlzuka.Sakalcura (1971,1972), свидетельствующие о том, что ранние стадии развития фолликулов в яичниках самок в эмбриональный период находятся под влиянием тимуса.

Гормон тимуса тимозин, участвует и в становлении функциональной активности надпочечников в первые дни жизни. Практически нет литературных данных о взаимосвязи тимуса и гипофи-зарно-надпочечниковой системы в этот пэриод. Известно только, что у генетически бестимусных мышей не наступает дегенерация Х-зона надпочечника, которая является фетальной и в норме ис-• чезает еще до полового созревания (Shire, Pantelouris, 1974). Наши результаты свидетельствуют о том, что гормональное влияние тимуса в неонатальный период необходимо для нормального формирования функции надпочечников, а его отсутствие в это время приводит к необратимым ее нарушениям.

Таким образом, иммунной системе, центральным органом которой является тимус, отведена своя, определенная роль в сцена-

рии развития эндокринных функций надпочечников и гонад.

Следует отметить, что действие тимуса и его гормона тимози-на на созревание эндокринных функций семенников у молодых мышей оказалось противоположным его влиянию на железы у взрослых животных со сформированным эндокринным статусом. При исследовании действия тимозина на функционирование надпочечников наблюдается та же картина. Если в более поздние сроки и по нашим данным, и по данным других исследователей, тимус находится в реципрокных отношениях с гонадами ( Fltzpatrlch.Greenstein, 198Т) и надпочечниками (Корнева,Шишек,1988), то в раннем периоде он, по-видимому, обладает формообразовательным, морфоге-нетнческим влиянием в отношении эндокринной системы.

Известно, что в состав 5-й фракции тимозина, которая была использована в наших опытах, входит около 40 пептидов (Goldstein et al,1981). Имеются данные о том, что индивидуальные пептиды обладают различной биологической активностью как по отношению к лимфоидным клеткам, так и к эндокринным структурам (Goldstein et al, 1981, Rebar et al, 1981, Healy et al, 1983). Вполне возможно, что действие тимозина на гонады и надпочечники в ранние сроки постнатального онтогенеза и у взрослых животных осуществляется посредством различных белковых молекул. Наши данные о разнонаправленном эффекте двух гормональных факторов тимуса тимозина и тактивина на функцию надпочечников также свидетельствуют о вероятности такого предположения.

Смена функций в онтогенезе известна и для других гормонов. Так, установлено, что меланоцитостимулирушций гормон в период эмбрионального развития и в первые дни жизни у крыс обладает мощным соматотропным влиянием, сравнимым с действием гормона роста (Swaab, 1980). К тому же, до 14 дня жизни этот гормон значительно более эффективно стимулирует стероидогенез в надпочечниках, чем классический АКТГ (Vazquez, №11,1992).К 3-ей неделе постнатальной жизни оба эти свойства мвланоцито-стимулирующего гормона полностью исчезают.

В этой связи уместно упомянуть имеющиеся данные о разнонаправленном влиянии гормонов на иммунные процессы. Так, Бе Gulbert с соавт.(1985) ежедневно вводили компенсаторные дозы

эстрогенов неонатально овариэктомированным крысам. Было обнаружено, что у крыс, забитых на 30-й день жизни, до полового созревания, эстрогены способствуют усилению ответа Т-хелперов на антиген. Если животных забивали на 45-й день жизни, после полового созревания, то ответ Т-хелперов на антиген оказывался достоверно сниженным. Следовательно, влияние эстрогенов в онтогенезе меняется на противоположное..

И в наших экспериментах, и в опытах других авторов разно-нацравленное или просто разное влияние горюнов в раннем периоде развития по сравнению с более поздним онтогенезом связано, вероятно, с отсутствием компетентности тканей-мишеней, незрелостью рецепторных систем , которые и определяют , в конечном итоге, эффект гормонального воздействия (Шаляпина, 1986). Так, показано, что глюкокортикоидные горюны в ранней дастнатальной жизни связываются, в основном, с минералокорти-кодными рецепторами, поскольку собственная рецепторная система в этот период оказывается недостаточно зрелой ( Новеп1е1<1, е1; а1, 1990).

Нельзя забывать, что окончательное созревание иммунной и эндокринной систем в первые дни постнатальной жизни происходит в особый перид развития, который был назван ареактивным. Способность отвечать на стресс есть одно из основополагающих свойств млекопитающих и секреция глюкокортикоидных гормонов ' корой надпочечника является центральным звеном этого ответа. Начиная с последних дней эмбрионального развития, такие виды млекопитающих как крыса и мышь секретируют кортикостерон в ответ на множество стрессорных раздражителей. Базальный уровень горюна у них высок. После рождения , начиная со 2 и по ' 14 день жизни, эти животные перестают отвечать или отвечают слабо на многие виды стресса. Данный период характеризуется низким.уровнем кортикотропина и кортикостерона в плазме крови (Заро1зку, Меапеу,198б). Предполагают, что таким способом организм избегает повышения уровня стрессорных горюнов, обладающих катаболическими эффектами, в период развития и формирования центральной нервной системы. Однако, механизмы "организации" такого периода до сих пор практически неизвестны.

Таким образом, окончательное созревание иммунной системы в нормальном организме происходит на фойе низкого и стабильного уровня глюкокортикоидов. Наши данные свидетельствуют о том, что глюкокортикоидные гормоны могут существенно влиять на становление иммунной системы в раннем постнатальноы онтогенезе. Изменение глюхокортикоидного фона в это время вызывает значительные нарушения формирующихся иммунных функций. Необходимо подчеркнуть, что даже такое небольшое повышение уровня глюко-кортикоидных гормонов, какое ш получали при введение низких, близких к физиологическим, доз кортикостерона, а также снижение этого уровня после введения метирапона в наших экспериментах оказывают длительные эффекты на иммунную систему.

Полученные нами результаты проливают свет на механизмы этого процесса. Установлено, что повышение уровня кортикостерона у новорожденных мышей изменяет нормальный теш развития иммунной системы, отменяя способность к формированию неона-тальной иммунологический толерантности. Вероятно, глюкокорти-коиды способны влиять на субпопуляцию лимфоцитов, ответственных за этот иммунологический процесс. У мышей с повышенным в раннем возрасте глшокортикоидным фоном устанавливается более низкий уровень гуморального иммунного ответа, тогда как у животных со сниженным фоном , напротив, формируется значительно более рысокий иммунный ответ по сравнению с контролем. Модификация глюкокортикоидного фона в первые 5 дней жизни привела к изменению чувствительности центральных регуляторных звеньев ГНС к медиатору иммунной системы интерлейкину 2,что, вероятно, и обусловило ту или иную величину иммунных реакций. Таким образом, была выявлена детерминирующая роль глвкокортикоидных гормонов в раннем периоде развития в установлении регуляторных взаимоотношений медду иммунной н гипофизарно-надпочечниковой системами в дальнейшем. Эти данные являются яркой иллюстрацией выдвинутого в настоящей работе положения о том, что взаимное влияние иммунной и эндокринной систем в процессе их созревания определяят закономерности их взаимодействия во взрослом организме.

Суммируя литературные и собственные данные можно предпо-

латать, что одной из причин биологической целесообразности существования ареактивного периода (периода неотвечаемости на стресс) является наглядно продемонстрированная в наших опытах опасность повышения глшокортикоидного фона по отношению к формирующейся в раннем онтогенезе иммунной системе. Тимус, согласно нашим данным, обладая гормональным влиянием на функцию коры надпочечников, может способствовать снижению уровня глюкокортикоадов в раннем онтогенезе, внося свой вклад в обеспечение низкого глюкокортикоидаого фона в этот момент.

В целом, проведенное нами исследование свидетельствует , что тимус, посредством вырабатываемых им гормонов, воздействует на железы внутренней секреции на всех этапах онтогенеза. У молодых животных его действие выражается в регуляции формирования эндокринных функций гонад и надпочечников. У взрослых животных влияние тимуса на железы носит модулирующий характер. Следовательно, на протяжение всего периода индивидусльного развития центральный орган иммунитета контролирует не только состояние иммунного статуса, но и функционирование эндокринной сферы. В то же время .нами продемонстрирована роль глюкокорти-коидных гормонов в созревании иммунологических функций в нео-натальный период и участие этих горлонов в физиологической регуляции иммунной системы в дальнейшем.

Очевидно, что как тимус участвует в онтогенетической программе развития эндокринной системы, определяя тем самым уровень ее функционирования во взрослом организме, так и глюко-кортикодные гормоны играют роль в процессе созревания иммунной системы, формируя до определенной степени иммунологический статус в зрелости. Можно полагать, что взаимное влиянии обеих исследованных систем в процессе их становления во многом и определяет закономерности их взаимодействия на протяжение всего периода индивидуального развития .

выводу

1. Тимус, как эндокринная железа, принимает участие в регуляции гормональной активности половой и гшюфязарно-надпочеч- , нкковой систем. Вырабатываемые им пептидные гормоны оказывают существенное воздействие на функцию данных £9лез внутренней секреции ео взрослом организме.

2. Гормональные факторы тимуса тимознн и тактивин способствуют подавлению эндокринной функции гонад и оказывают разнонаправленное , реализующееся различными путями, влияние на функцию надпочечников у ззрослых мылэй. Тжозян, действуя через центральные регуляторные структуры, усиливает функциональную активность иадпочечшжов.ТактпЕин, препятствуя стаг/лгрунцо?.у действию АКТГ, обладает тормозящим эффектом и способен предотвращать активацию талэз.

3. Нормальное функционирование пшофнзарно-надпочочпиковой систеш является зазным условием стабильности э^лункых Функций У мышей с наследственно обусловленной патологией иммунитета (линия нгВ) теряется чувствительность этой системы к рэгуля-торным сигналам со стороны зомунокомпетенткх плеток, что совпадает с развитием аутоиммунной агрессии.

4. Глякокортшсоидные гормоны обладают протективным действием, зспцщая организм от проявления генетически обусловленной ауто-гмиунной болезни. Появление аутоантител у мышей ИВ коррелирует с резким снижением у них пула свободные глюкохортиковдов. Искусственное повышение концентрации свободных гормонов до величин, близких к физиологическим , замедляет .аутоиммунный процесс. Снижение функциональной активности гипофязарно-надпочечниковой оси в процессе онтогенеза является, вероятно, одной из причин нарушения взаимодействия иммунной и эндокринной систем у мышей линии ИВ и может служить серьезным патогенетическим фактором в проявлении аутоиммунной болезни.

5. Тимус принимает участие в формировании эндокринных функций семенников и надпочечников в первые дни постнатального разви-

тия. Нарушение функционирования надпочечников и семенников у неонатально тимэктомированных и генетически бестимусных мышей связано с отсутствием гормонального влияния'тимуса в раннем онтогенезе.

6. Гормональный продукт тимуса тимозин в раннем постнатальном онтогенезе способствует активации эндокринной функции семенников и снижении» функции надпочечеников у взрослых животных.

7. Глюкокортикоидные гормоны участвуют в формировании иммунологических функций в первые дни постнатальнс-й жизни у мышей. Незначительная модификация глюкокортикоидного фона в раннем онтогенезе приводит к нарушениям иммуннных процессов в зрелом возрасте. Увеличение уровня глюкокортикоидных гормонов в первые дни жизни ослабляет способность экспериментальных мышей к формированию неонатальной толорантности. У животных, которым повышали уровень глюкокортикоидов сразу после рождения, наблюдается значительное снижение величины гуморального иммунного ответа, тогда как у мышей, которым вводили метира-пон, ингибитор биосинтеза кортикостерона, напротив, гуморальный иммунный ответ оказывается резко повышенным.

8. Глюкокортикоиды в период раннего постнатального онтогенеза могут не только влиять на формирование иммунных реакций, но и детерминируют развитие регуляторых связей между иммунной и эндокринной системами.

9. Вся совокупность данных, полученных в настоящей работе свидетельствует о взаимозависимости функционирования иммунной и эндокринной систем как в период их формирования в раннем постнатальном онтогенезе, так и во взрослом организме.Можно полагать, что взаимное влияние этих двух систем в момент их окончательного созревания во многом определяет закономерности их взаимодействия во взрослом организме.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТИЛЕ ДИССЕРТАЦИИ

I. Чеснокова В.М.,Юнкер В.М..Синицина О.В. Особенности эндокринной системы у бестимусных мышей nude . Известия СО АН СССР, сер. биол.,1980, вып.З, N 15, с.106-110.

2. Чеснокова В.М.,Иванова Л.Н., Юнкер В.М. Особенности функционирования эндокринной системы у мышей с врожденным отсутствием тимуса . Тезисы докладов II Всесоюзного съезда эндокринологов, Ленинград, 1980, с.391-392.

3. Чеснокова В.М. Влияние мутации nude на эндокринную функцию гонад и надпочечников у мышей. Тезисы докладов IV Съезда ВОГиС, Кишинев, 1982, ч.1, с.262-263.

4. Чеснокова В.М.,Юнкер В.М., Синицина О.В. Эндокринная система у генетически бестимусных мышей nude. Успехи теоретической и прикладной генетики. Новосибирск, 1982, с.209-207.

5. Чеснокова В.М.,Юнкер В.М., Иванова Л.Н. .Грунтенко Е.В. Зн-докринная функция гонад и надпочечников у бестимусных и тпмэк-?с?,гарэванных мышей. Бюллетень эксп. биол. и мед.,1982, N 3,

с. 102-104.

6. Чеснокова В.М..Иванова Л.Н. Роль тимуса в формировании зн-докринной функции семонншсов. Проблемы эндо:сринологии,1983, Т.29, II 6, с.61-64.

7. Чеснокова В.И., Иванова Л.Н., Грунтенко З.В. Влияние тимуса на эндокринные функции гонад и надпочечников у мышей. Бюллетень эксп.биол. и мед.,1983, N 8, с.89-91.

8. Чеснокова В.М. Роль тимуса в формирование эндокринной функции гонад и надпочечников у мышей . Тезисы докладов Х1У Съезда Всесоюзного физиологического общества гол.И.П.Павлова, Баку, 1983,т.2, С.255.

9. Чеснскова В.М., Иванова Л.Н., Грунтенко Е.В. Эндокринная функция тимуса и его связь с другими железами внутренней секреции. Успехи современной биологии, 1984, т.93, .вып.З, с.435-446.

10. Чеснокова В.М..Игнатьева Е.В., Иванова Л.Н. Иммунно-эндокринные взаимодействия в онтогенезе мышей. Нейро-эндокринная регуляция иммунного гомеостаза. Тез.докладов IV Всесоюзного симпозиума, Ленинград, 1986, с.80.

11. Чеснокова В.М..Игнатьева Е.В. Участие тимозина в формировании и функционировании эндокринной системы мышей в онтогенезе. Вопросы эволюционной физиологии. Девятое совещание, Ленинград, 1986,с.3II-3I2.

12. Chesnokova V.M., Ignatleva E.V.,Ivanova L.N. Imnnme-endocrlne lnteractlons }n the ontogénesis of mlce. Abstr.XXIII sympoBlua on Blologlcal Modela, CSSR, 1986, p.34.

13. Чеснокова B.M., Игнатьева E.B.,Иванова Л.Н. и др. Влияние тимозина на формирование функциональной активности надпочечников у мышей. Проблемы эндокринологии, 1937, N 1, с.56-60.

14. Chesnokona V.M.,Grunteritoo E.V., Ivanova L.N., Ignatleva E.V. Evldence íor thymus lnvolvement ln development oí adrenals and gonadal endocrina íunctlon ln mlce. Endocrinología experlmentalls, 1987, v.21, p.133-142.

15. Чеснокова B.M. Феногенетический анализ влияния гена nu на эндокринные функции гонад и надпочечников у мышей. Тезисы докладов 5 съезда ВОГИС,Москва, IS37, т.1, с.237-298.

16. Чеснокова В.Ы., Игнатьева Е.В., Грошхина Н.Ю.,Гонтова

И.А. Взаимное модифицирующее влияние гормонов тимуса и надпочечников на формирование иммунных и эндокринных функций у ш-шей. Онтогенетические и генетико-эволюционные аспекты нейроэн-докринпой регуляции стресса. Международное совещание, Новосибирск, 1986, С.193-194.

17. Чеснокова В.Ы..Игнатьева Е.В.,Иванова Л.Н. Влияние тимозина Еа эндокринную функцию семенников у мышей. Бюллзтань эксп. биол.и мед.,1988, Ы 10, с.493-495.

18. Игнатьева Е.В.,Чеснокова В.М.,КЕкер В.М., и др. Влияние тимозина на формирование функциональной активности надпочечников и гонад у генетически бестимусных ыыыей. Проблемы зндо-криногологии, 1983, N 6, с.83-86.

19. Чеснокова В.М., Игнатьева Е.В. Модифицирукщаф роль глюко-кортикоидов в формировании иммунологических функций организма. Тез. докладов III Всесоюзного съезда эндокринологов, Ташкент, 1989, с.127-128.

20. Игнатьева Е.В..ЧеснокоЕа В.М. Влияние гормонов тимуса на формирование и дальнейшее функционирование гонад и надпочечников у мышей. Тез. докладов III Всесоюзного Съезда эндокринологов, Ташкент, 1989, с.44-45.

21. Chesnokova V.M.,Ignatleva E.V. Effect oí thymic hormones upon the pltultary-adrenal axis ln mlce. Clrculating regula-

tory factors and neuroendocrine function. Cellular and Molecular Neurobiology,1989, v.9, N 4, c.419.

22. Чеснокова B.M., Иванова JI.H..Козлов В.А. Участие глюкокор-тиковдов в формировании некоторых иммунологических функций организма. Тез.докладов Всесоюзной конференции "Стресс и иммунитет", Ростов на Дону, 1989, с.97-98.

23. Игнатьева Е.В..Чеснокова В.М. Влияние тактивина на функциональную активность надпочечников у мышей. Тезисы докладов Всесоюзной конференции "Стресс и иммунитет", Ростов на Дону, 1989, с.70.

24. Чеснокова В.М.,Чухлиб В.Л.,Игнатьева Е.В. Глюкокортикоид-ный тонус у мышей с генетически детерминированной аутоиммунной патологией (линия NZB). Известия СО АН СССР, сер. биол. 1989, вып.2, с.26.

25. Игнатьева Е.В., Чеснокова В.М., Иванова Л.Н. Влияние тактивина на продукцию кортикостерона суспензией клеток надпочечников мышей. Бюллетень эксп. биол. и мед.,1990, N 1, с.53-55.

26. Игнатьева Е.В..Чеснокова В.М., Иванова Л.Н. Влияние тимо-зина (фракция 5) и тактиЕина на функцию коры надпочечников у мышей . Проблемы эндокринологии, 1990, N 6. с. 76-78.

27. Чеснокова В.М., Чухлиб В.Л., Игнатьева Е.В. Особенности функционирования гипофизарно-адренокортикальной системы у мышей с генетически детерминированной аутоиммунной патологией (линия NZB).Материалы международного симпозиума "Физиология адренокортикальной систмеы" .Ленинград, 1990, с.154-155.

28. Ignatieva E.V., Chesnokova V.M. The effect of thymic factor tactlvln on the glucocorticoid function of the adrenals. The first European young scientist conference on Immunology, Bratislava, 1990, p.36.

29. Chuhllb V.L., Chesnokova V.M. The possible role of glucocorticoids In the manifestation of autoimmune desease In NZB •mice. The first European young scientist conference on lrnuno-logy, Bratislava, 1990, p. 419.

30. Chesnokova V.M.,Ignatieva E.V. Involvement of Thymic Hormones in Regulation of the Pituitary-Adrenal Axis. Endocrinología Experlmentalls, 1990, v.84, p.133-141.

31. Chesnokova V.a.,Chuhlib V.L., Karlaglna A.J. The role of neuroendocrine system In determining genetic susceptibility to autolnmune disease in NZB mice. Clrcumventrlcular Organs and Brain Fluid Environment, Molecular and Functional Aspects, IV Relnbardabrunn Symposium CVO, Germany, 1991, p.14.

32. Chesnokova V.M., Busick J.V., Gontova I.A., Gromlkchlna N.J. Neuroendocrine system in the immune response oi adult mice with modified glucocorticoid level in early ontogenesis. Fifth Symposlua on Catecholamine and Other Neurotransmitters in Stress, Czecho-Slovakla, 1991, p.12.

33. Чеснокова В.Ы. Механизмы взавимодействия эндокринной и иммунной систем в период раннего постнатального онтогенеза. II Всероссийский съезд эндокринологов, Челябинск, 1991, с.42.

34. Chesnokova V.H., Chukhlib V.L.,Ignatieva E.V., Ivanova L.N. The possible involvement of glucocortlcosteroid3 in the development of genetically determined autoimmune pathology in NZB mice. Biomedical Science, 1991, v.2, p.55T-561.

35. Чеснокова B.M., Карягина А.Ю. .Чухлиб В.Л. Особенности функционирования гипсфнзарно-надпочечниковой системы у самок с наследственной аутоиммунной патологией (линия NZB). Физиологический журнал СССР, 1992, Т.78, N 1, C.I09-II5.

36. Chesnokova V.M., Busick J.V. Involvement of the neuroendocrine system in the linnune response of adult mice with alterations in glucocorticoid levels during early ontogenesis. (R.Kvetnansky, R.licCarty, J.Axelrod Eds. )Stress: Neuroendocrine and Molecular Approaches , New York, Gordon and Breach, 1992, pp. 641-647.

37. J.Madar, V.Chesnokova Cortlcosterone treatment affects neonatal induction of immunological tolerance to hen egg lyso-ayme In mice. Folia Biologica, 1992, v.38, p.103-112.

38. J.Madar, V.Chesnokova Cortlcosterone level Influences the Induclbllity of immunological tolerance In neonatal mice. Abstr. VIII International Congress of Immunology, Hungary, 1992,

39. Chesnokova V.M., Ignatieva E.V., Ivanova L.N. The thymic factor tactivin prevents ACTH from stimulating steroidogenesis

by mouse adrenal cells. Thymus, 1992, v.19, p.65-75.

40. V.Chesnokova, V.Chukhllb., A.Kariagina, L.Ivanova The possible involvement oi glucocortlcosteroids in the development of autoimmune pathology in NZB mice. Abstrakts Herbsttagung der Osterreichischen Gesellschalt fur Allergologie und Immunologie, Innsbruck, 1992, p.16.

41. V.Chesnokova, J.Busick, J.Madar. Alteration oi basal glucocorticoid levels early in ontogeny induce permanent modification of immune functions in the mouse. Abstrakts Herbsttagung der Osterreichischen Gesellschaft fur Allergologie und Immunologie, Innsbruck, 1992, p.18..

42. V.Chesnokova, J.Busick, V.Chesnokov, G.Jakobson, L.Ivanova Different effects of IL 2 in vivo treatment and emotional stress on POMC gene expression in the pituitary of mice. Endocrinol.Scand. (In press).

Подписано к печати 12.07.1993

Формат бумаги 60x90 1/16. Печ. л. 4,3. Уч.-изд. л. 3.1

Тираж 120 экз. Заказ 97

Ротапринт Института цитологии и генетики СО РАН 630090, Новосибирск, проспект академика М. А. Лаврентьева, 10

Информация о работе

Чеснокова, Вера Михайловна
доктора биологических наук
Новосибирск, 1993
ВАК 03.00.13

Автореферат

Похожие работы