Особенности действия дельта - эндотоксинов Bacillus thuringiensis на микробиоценоз толстого кишечника животных

Купцова, Анна Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Особенности действия дельта - эндотоксинов Bacillus thuringiensis на микробиоценоз толстого кишечника животных
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Особенности действия дельта - эндотоксинов Bacillus thuringiensis на микробиоценоз толстого кишечника животных"

005002151

На правах рукописи

4У-

КУПЦОВА Анна Александровна

ОСОБЕННОСТИ ДЕЙСТВИЯ ДЕЛЬТА-ЭНДОТОКСИНОВ BACILLUS THURINGIENSIS НА МИКРОБИОЦЕНОЗ ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА ЖИВОТНЫХ

03.02.03 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 4 НОЯ 2011

Москва -

2011

005002151

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ульяновский государственный университет»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Каменек Людмила Кирилловна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Маннапова Рамзия Тимергалеевна

доктор биологических наук, доцент Юдина Татьяна Георгиевна

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная

сельскохозяйственная академия»

Защита диссертации состоится декабря 2011 г. в ^ час -^мин на заседании диссертационного совета Д 220.043.03 при Российском государственном аграрном университете - МСХА имени К.А. Тимирязева.

Адрес: 127550, Москва, ул. Тимирязевская, 49. Ученый совет РГАУ -МСХА имени К.А. Тимирязева.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Российского государственного аграрного университета - МСХА имени К.А. Тимирязева

Автореферат разослан « » ноября 2011 г.

и размещён на сайте университета vyww.timacad.ru

Отзывы на автореферат (в 2-х экземплярах заверенных печатью), просим направлять по адресу: 127550 г. Москва, ул. Тимирязевская, 49; тел. факс: 8(499) 976-24-92

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

О.В. Селицкая

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одними из наиболее эффективных и широко применяемых биопестицидов для борьбы с вредными насекомыми являются препараты на основе споро-кристаллического комплекса и отдельных параспоральных белков (Cry- и Cyt- белков, 5-эндотоксинов) грамположительной спорообразующей бактерии Bacillus thuringiensis. Преимуществами биопестицидов на основе В. thuringiensis по сравнению с химическими инсектицидами являются высокая специфичность действия, отсутствие загрязняющих остатков и сравнительно низкая стоимость процедур, требуемых для регистрации их в качестве средств защиты растений (Вершинина, Алимова, 2000). Кроме того, Cry-гены введены в целый ряд растений для их защиты от вредных насекомых (генно-модифицированные Bt-растения).

Сведения о действии Sí-растений и биоинсектицидов на основе различных компонентов В. thuringiensis на нецелевые объекты носят противоречивый характер. С одной стороны, литературные данные свидетельствуют об абсолютной экологической безопасности данных препаратов в рекомендуемых дозах, неактивности их компонентов в отношении теплокровных (Кандыбин, 1989; Головко и соавт., 1993; Киль, Надыкта, 2002). С другой стороны, определенные штаммы данного микроорганизма содержат гены, ответственные за образование энтеротоксинов, вызывающих отравление с диарейным синдромом, и гемолизина, гомологичного гемолизину II В. cereus и сходного с ним по свойствам (Hansen et al,. 1998; Perani et al, 1998; Gavina Rivera et al, 2000; Helgason et al., 2000; Imre et al., 2005).

Некоторые штаммы В. thuringiensis описаны как антибиотически активные против грибов и бактерий, способные проявлять бактериостатическое или бактерицидное действие. Это показано в работах ряда авторов (Юдина и соавт., 1988; Юдина и Егоров, 1996; Юдина и Бурцева, 1997; Кандыбин и Смирнов, 1999; Смирнов, 2000; Юдина, 2006; Го Даньян и соавт., 2011; Юдина и соавт., 20116; Marrone et al., 1999) и авторских свидетельствах Н.С. Егорова и соавторов (1987,1988 годы).

Известно, что белковые токсины способны оказывать влияние на микроорганизмы, входящие в состав нормального микробиоценоза кишечника: вызывать появление новых патогенных и условно-патогенных штаммов, изменять биологические свойства отдельных представителей микробиоты, селективно ингибировать или, напротив, усиливать их рост, обусловливать дисбиотические нарушения (Барановский и Кондрашин, 2000; Лобзин и соавт., 2003; Костюкевич, 2007).

При токсикологической оценке, гигиеническом нормировании и регламентации производства и применения биопрепаратов и трансгенных Bt растений изучение бактериоценоза желудочно-кишечного тракта животных представляется весьма важным и актуальным, так как в организм животных и человека Сгу-белки могут попадать перорально, вместе с пищей, прежде всего -с продуктами, содержащими генетически модифицированные Bt растения.

Цель исследования. Целью данного исследования явилась оценка влияния дельта-эндотоксинов В. thuringiensis subsp. kurstaki, являющихся основным действующим началом ряда биопестицидов, применяющихся в защите растений, на микроорганизмы биотопа прямого отдела толстого кишечника мышей при их пероральном введении in vivo.

Были поставлены следующие задачи:

1. Выявить изменение характера поведения и симптомов проявления дисбактериоза у белых мышей при пероральном введении дельта -эндотоксинов В. thuringiensis subsp. kurstaki Z-52.

2. Определить влияние дельта - эндотоксинов на изменение состава и численности микробиоты прямого отдела толстой кишки животных.

3. Изучить особенности микробного пейзажа толстого кишечника мышей при экспериментальном дисбактериозе, обусловленном действием высоких доз дельта-эндотоксинов.

4. Рассмотреть особенности межбактериальных взаимодействий в условиях формирующегося патобиоценоза толстого кишечника под влиянием бактериальных токсинов.

5. Выявить изменение персистирующих и патогенных свойств ряда бактерий, входящих в состав биотопа толстого кишечника мышей при экспериментальном дисбактериозе: антилизоцимную (АЛА), антиинтерфероновую (АИА) активности и адгезивные свойства.

Научная новизна работы. Впервые изучено действие дельта-эндотоксинов В. thuringiensis на кишечную микробиоту. Показано, что пероральное введение растворов дельта-эндотоксинов В. thuringiensis subsp. kurstaki Z-52 в дозе от 1 до 50 мг/кг веса животных в течение 28 суток не оказывает существенного влияния на изменение состава и численности микробиоценоза толстого кишечника белых мышей. Высокие дозы дельта-эндотоксинов (100 мг/кг веса животных) вызывают развитие дисбиотических изменений в толстом кишечнике белых мышей, изменение характера межмикробных взаимодействий и усиление факторов патогенности и персистирующих свойств условно-патогенных бактерий уже с первой недели применения.

Практическая значимость работы. Полученные результаты, демонстрирующие действие дельта - эндотоксинов В. thuringiensis subsp. kurstaki в отношении микробиоты желудочно-кишечного тракта теплокровных животных, могут быть использованы при контроле регламента производства и биологической активности промышленно выпускаемых биопестицидов, разработке норм и доз их безопасного применения и при оценке степени токсичности генетически модифицированных Si-растений в отношении теплокровных животных и человека.

Основные положения, выносимые на защиту:

Пероральное введение растворов дельта-эндотоксинов В. thuringiensis subsp. kurstaki Z-52 в дозе от 1 до 50 мг/кг веса белых мышей в течение 28 суток не оказывает значимого влияния на изменение состава и численности микробиоценоза толстого кишечника.

При применении дельта-эндотоксинов в дозе 100 мг/кг веса уже на первой неделе эксперимента происходит развитие дисбиотических изменений в толстом кишечнике белых мышей: происходит структурная перестройка микробиоценоза, чаще выявляются гемолитические штаммы бактерий Escherichia coli и Staphylococcus aureus, проявляющие антагонистическое действие в отношении ряда микроорганизмов, наблюдается увеличение степени патогенности и персистирующих свойств штаммов некоторых видов условно-патогенных микроорганизмов.

Работа выполнена на экологическом факультете ФГБОУ ВПО УлГУ при частичной поддержке гранта МО РФ аналитической ведомственной целевой программы «Развитие научного потенциала высшей школы (2009-2010 годы)» по проекту № 2.1.1/2275 «Разработка теоретических основ экологически безопасного регулирования численности вредных организмов дельта -эндотоксинами Bacillus thuringiensis» и гранта ФЦП, гос. контракт № 02.740.11.5230.

Личный вклад автора - участие в практическом решении всех поставленных задач, анализе и обобщении полученных результатов.

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены на всероссийских и международных научных конференциях и симпозиумах разных уровней: «Проблемы защиты растений в условиях современного сельскохозяйственного производства» (ВИЗР, Санкт-Петербург, 2009); «Становление и достижения биохимической школы Казанского университета» (Казань, КГУ), «Современные проблемы физиологии, экологии и биотехнологии микроорганизмов» (МГУ, Москва, 2009); «Ломоносов -2010» (МГУ, Москва, 2010), «Биологически активные вещества микроорганизмов: прошлое, настоящее, будущее» (МГУ, Москва, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 15 работ, из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения и трех глав: обзор литературы, объекты и методы исследования, результаты исследования и их обсуждение, а также выводов, списка используемых литературных источников и приложений. Работа изложена на 164 страницах, содержит 11 таблиц, 11 рисунков и 9 приложений. Список использованных литературных источников включает 308 наименований, в том числе 209 зарубежных.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В данной главе дан обзор отечественной и зарубежной литературы об основных проблемах безопасности применения биопрепаратов на основе различных подвидов В. thuringiensis и генно-модифицированных ¿/-растений, об основных факторах, влияющих на развитие дисбиотических изменений в кишечнике животных и человека. Также даны характеристика и механизм действия белковых дельта - эндотоксинов как основных факторов токсичности В. thuringiensis, освещены вопросы биологической активности токсинов, в том числе по отношению к прокариотическим организмам.

ГЛАВА II. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Получение растворов кристаллов. В работе был использован штамм Z-52 В. thuringiensis subsp. kurstaki, продуцирующий кристаллы дельта -эндотоксинов классов CrylA и Сгу2, полученный из ФГУП ГосНИИ Генетики и селекции промышленных микроорганизмов. Выделяли параспоральные кристаллы дельта-эндотоксинов по известной методике с помощью и-ксилола (Chestukhina et al., 1980), активировали их до активных токсинов и перерастворяли в 0,02М фосфатном буфере (Юдина, 2006); полученные растворы белков нужной концентрации использовали для перорального (per о$) введения подопытным животным. Фракционирование белков кристаллов проводили на электрофоретической системе Paragon фирмы «Весктап» на ацетоцеллюлозных пластинах в гиппуратном буфере (рН 8,6).

Работа с экспериментальными животными. В работе использовали белых беспородных мышей - самок возраста 180 дней со средним весом 26,0 ± 3,0г. В соответствии с требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР от 12.08.1977 № 755), все животные содержались в виварии в клетках по 10 особей при сходных условиях в отношении температуры, влажности и освещения, а также рациона питания. Все мыши были разделены на 9 групп. 1-я группа - контрольная, животным которой вводили per os буферный раствор;

2-я группа - доза получаемых дельта-эндотоксинов 1мг/кг веса; 3-я группа -Змг/кг веса; 4-я 1руппа - 5мг/кг веса; 5-я группа -10мг/кг веса; 6-я группа -15мг/кг веса. 7-я группа (группа А) - доза дельта-эндотоксинов 25мг/кг веса; 8-я группа (группа В) - 50 мг/кг веса; 9-я группа (группа С) — 100 мг/кг веса. В группах с 1 по 6-ю было по 40 мышей, с 7 по 9-ю - по 120.

Каждое животное ежедневно в первой половине дня получало раствор дельта - эндотоксинов внутрижелудочно с помощью зонда в течение 28 суток. Ежедневно контролировали состояние животных, поедаемость корма, поведение, состояние шерстного покрова, наличие/отсутствие диареи, прирост/снижение массы тела. На определенных сроках проведения эксперимента животных подвергали усыплению эфиром, вскрывали и проводили отбор фекальных масс из содержимого толстого кишечника (прямой отдел) в стерильную одноразовую посуду для исследования микробиоты.

Выделение и идентификация микроорганизмов. Микроорганизмы выделяли и идентифицировали с использованием классических бактериологических методик, используя широкий набор коммерческих селективных и диагностических питательных сред и с помощью коммерческих тест-систем фирмы ЬАСНЕМА (Чехия): БЫТЕШ^ (1 и 2), ЗТИЕРТСКез^ №П7Е1Ш1ез1, 8ГАРУ1е51, а также по морфологическим, биохимическим и культуральным признакам, согласно определителю Берджи (1997). Количественное содержание бактерий и грибов на 1 г исследуемого материала выражали в десятичных логарифмах КОЕ/г).

Определение индекса встречаемости проводили по числу проб, в которых обнаружены микроорганизмы исследуемого вида, выраженных в процентах к общему числу проанализированных проб. При встречаемости в 50% проб и выше виды считались постоянными (доминирующими), добавочные виды соответствовали значениям от 25 до 50%, случайные - ниже 25%.

Определение индекса доминирования (С) - доли в %, которую составляет обилие исследуемого вида по отношению к суммарному обилию всех сравниваемых между собой видов в изучаемом материале.

Антагонистическую активность гемолитических штаммов эшерихий (Е.соИ Н1у+) определяли методом штрихов с отсроченным антагонизмом при совместном культивировании микроорганизма-продуцента факторов ингибирования роста и индикаторных штаммов (Блинкова, 2003; Постникова и соавт., 2004).

Изучение антилизоцимной активности (АЛА) проводили по методу О.В. Бухарина и Б.Я. Усвяцова (1982). При этом штаммы считались высокоактивными при нейтрализации лизоцима в концентрации более 5 мкг/мл, среднеакгивными - от 3 до 4 мкг/мл, низкоактивными - от 0 до 2 мкг/мл.

Антиинтерфероновую активность (АИА) штаммов культур E.coli и St. aureus исследовали по методу О.В. Бухарина и В.Ю. Соколова (1989) с учетом антибактериального действия препарата человеческого лейкоцитарного интерферона. АИА исследуемого штамма считали высокой при инактивации человеческого лейкоцитарного интерферона в концентрации более 2 ед., средней - от 1,1 - 2ед, низкой - от 0 до 1 ед.

Адгезивные свойства культур E.coli, Enterococcus spp. и St. aureus, выделенных в контроле, на 14 и на 28 сутки после начала введения растворов дельта-эндотоксинов и гемолитических штаммов Е. coli (по 10 произвольно выбранных штаммов) оценивали по методике В.И. Бриллис и соавт. (1986) с определением среднего показателя адгезии (СПА), коэффициента участия эритроцитов в адгезивном процессе (К,%) и индекса адгезивности микроорганизма (ИАМ).

Статистическая обработка результатов исследований выполнена на персональном ЭВМ типа IBM «Pentium IV», графическая обработка материалов выполнена с помощью пакета прикладных программ Microsoft Excel 2003, использовались методы статистической обработки данных и результатов исследований «Биометрия» (Лакин, 1990). Вычислялся также коэффициент ранговой корреляции Спирмена с целью определения фактической степени параллелизма между двумя количественными рядами изучаемых признаков и оценки тесноты установленной связи с помощью количественно выраженного коэффициента.

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Электрофоретическое разделение белковых компонентов параспоральных кристаллов B.thuringiensis subsp. kurstaki Z-52.

После электрофоретического разделения белков было выявлено, что преобладающими являются фракции с Mr 120-140 кДа (49,0-52,0%) и 65-80 кДа около (45%). В незначительных количествах в пробах обнаруживали компонент с Mr около 5-10 кДа. Следовательно, растворы кристаллов представляют собой многокомпонентные системы, включающие 3-4 белковые фракции с различными электрофоретическими характеристиками, что подтверждает результаты, полученные ранее для разных подвидов В. thuringiensis (Chestukhina et al., 1994).

3.2 Изменение характера поведения и симптомов проявления дисбактериоза у мышей после перорального введения дельта-эндотоксинов В. thuringiensis.

У мышей, получавших дозы дельта-эндотоксина от 1 до 50 мг/кг веса, как и в контроле, в течение всего периода эксперимента явно выраженных признаков дисбактериоза не наблюдалось, кроме некоторого снижения

активности в поведении у незначительного числа особей в опыте. Вздутие живота и наличие диареи у ряда животных в группе С появились уже к концу первой недели после начала эксперимента и сохранялись, постепенно усиливаясь, в течение всего периода наблюдений. На 28-е сутки число мышей с признаками заболевания составило 14 из 30 особей, или 46,7%.

В экспериментальных группах 2, 3, 4, 5, 6, 7 и 8 вес каждой мыши составил в среднем от 26,0 до 26,5 г, а среднее количество корма, поедаемого в сутки одним животными, было сравнимо с таковьм в контрольной группе и составило 10,4 - 11,0 г в сутки. В 9-й группе (группа С) среднее количество поедаемого корма одним животным сократилось к 28 - м суткам с 11,0 до 8,1 грамма, а вес одной мыши составил, в среднем, 23,1 г.

3.3 Определение влияния пероралыюго введения дельта-эндотоксинов В. (Ниг^1еп51э на изменение состава и численности кишечной микробиоты белых мышей.

В результате проведенных бактериологических исследований содержимого прямого отдела толстого кишечника животных было установлено, что пероральное введение дельта - эндотоксинов в дозах от 1,0 до 50,0 мг/ кг веса практически не оказывало влияния на изменение состава и численности кишечной микрофлоры.

Таблица 1. Состав микробиоты кишечника мышей при введении дельта-эндотоксинов ВасШих Ишпп&етк (100 мг/кг веса)_

Микроорганизмы Количественное содержание микробиоты lg КОЕ/г

Контроль 7-е сутки 14-е сутки 21-е сутки 28-е сутки

Bifidobacterium spp. 6,4±0,13 6,0±0,20 5,7±0,30* 5,5±0,20* 5,2±0,30*

Lactobacillus spp. 13,9±0,96 12,5±0,30 11,0±0,60* 10,8±0,04* 9,6±0,70*

Bacteroides 4,5±0,11 4,3±0,20 3,9±0,30* 3,9±0,10* 3,б±0,50*

E. coli (тип.) 7,4±0,16 7,3±0,10 7,0±0,10* 6,9 ±0,10* 6,7±0,20*

E. coli(rm.) ед** ед** 1,1 ±0,10* 1,3±0,20* 1,7 ±0,10*

Klebsiella spp 1,03±0.01 1,2±0,10 1,4±0,10* 1,б±0,20* 1,9±0,20*

Proteus spp. 2,7±0,04 2,8±0,20 3,0±0,60 3,0±0,20 3,3±0,10*

Enterococcus spp. 2,3±0,20 2,5±0,10 2,5±0,20 2,7±0,30* 2,9±0,20*

Enterococcus fee. 1,1±0,10 1,2±0,10 1,3±0,20 1,3±0,10 1,4±0,10*

Staphylococcus spp. 3,1±0,30 3,4±0,40 3,2±0,20 3,5±0,30 3,6±0,10*

St. aureus ед** ед** 1,2 ±0,10* 1,3±0,20* 1,5 ±0,20

Грибы p. Candida 1,0±0,03 1,1±0,10 1,3±0,10* 1,4±0,10* 1,б±0,20*

Citrobacter spp. - 1,5 ±0,20* 2,1±0,20* 2,3±0,20* 2,3±0,10*

Morganella morganii - 1,4 ±0,10* 1,8±0,10* 1,9±0,20* 2,0±0,10*

Yersinia enterocolitica - 1,3±0,10* 1,5±0,10* 1,б±0,10* 1,8±0,20*

Примечания: *Статистически значимые различия с контрольным вариантом; ** микроорганизмы обнаруживаются в единичных количествах; - микроорганизмы в посевах не обнаруживаются Количество повторностей п=10, результаты достоверны при р<0,005.

Наблюдалось лишь незначительное, статистически не достоверное уменьшение количества бифидобактерий, лактобацилл, бактероидов и эшерихий с нормальной ферментативной активностью на 28-е сутки. Гемолитические штаммы St. aureus и Е. coli высевались в единичных количествах.

При введении высоких доз препарата (100 мг/кг, табл.1) было отмечено подавление роста нормальной микрофлоры в толстом кишечнике, количество доминирующих видов - бифидобактерий и лактобактерий на 28-е сутки уменьшилось по сравнению с контролем, соответственно, с 6,4±0,13 до 5,2±0,8 lg КОЕ/г и с 13,9±0,9б до 9,6±0,70 lg КОЕ/г, количество бактероидов уменьшилось с 4,5±0,11 до 3,6±0,50 lg КОЕ/г, а число жизнеспособных клеток кишечной палочки сократилось с 7,4±0,16 до 6,7±0,20 lg КОЕ/г.

Штаммы золотистого стафилококка и эшерихий, обладающие гемолитической активностью, в контрольной группе и на 7-е сутки обнаруживались в единичных количествах, а на 28-е сутки их количество составило в среднем 1,5 - 1,7 lg КОЕ/г. Количество клебсиэлл, протей и дрожжеподобных грибов рода Candida также значимо увеличилось на 28-е сутки по сравнению с контролем. Кроме того, в микробном пейзаже толстого кишечника на 7 сутки эксперимента проявились условно-патогенные бактерии Citrobacter spp., Morganella morganii и Y. Enterocolitica в количестве 1,3-1,5 lg КОЕ/г, и на 28 сутки их число составило 1,8-2,3 lg КОЕ/г.

Индекс встречаемости микроорганизмов в микробиоте толстого кишечника при введении высоких доз дельта-эндотоксинов (100 мг/кг веса) на 28-е сутки для бифидобактерий и лактобактерий составил 100%, т.е. во всех пробах были обнаружены микроорганизмы данного вида. Тот же показатель для бактероидной микрофлоры уменьшился с 58,4±4,6 % в контроле до 52,0±7,0 % на 28-е сутки, а для клеток кишечной палочки соответственно, с 84,2 ±11,2 % в контроле, до 73,5±10,8 % на момент окончания эксперимента. Частота встречаемости условно-патогенных микроорганизмов в экспериментальных группах, напротив, увеличилась, и составила для протеи 39,8±7,7% и клебсиэлл 42,5±6,3%. Частота встречаемости бактерий Enterococcus и Staphylococcus увеличилась соответственно до 39,8±5,4% и 38,2±4,4%. Enterococcus fecalis высевались в 42,1±5,0% проб, а грибы р. Candida высевались в 18,2 ±4,1% проб. Установлено, что доминантными видами, формирующими микробиоту в контрольной группе животных, являются лактобактерии, бифидобактерии, бактероиды и кишечные палочки с нормальной ферментативной активностью, в совокупности их доля составила около 75% (рис.1). Доля условно-патогенных микроорганизмов — клебсиэлл, протей и грибов рода Candida составила чуть более 25%. Было установлено, что на 7-е, 14-е, 21-е и особенно на 28-е сутки эксперимента выявляется

структурная перестройка биоценоза, которая проявляется в уменьшении индекса доминирования микроорганизмов, составляющих нормальную микробиоту кишечника (до 52% на 28 сутки) и увеличении значимости условно-патогенных видов (до 48%).

D3 Versinia enterocolitica CJ Л{organella morganii SS <._'if г< j h tjf 1 & sp>p.

/>. Candida ШИК St. aureus

LL Staphylococcus vy/'

SS Enterococcus fecalis

CO Enterococcus spp

S3 Proteus spp.

CD Klebsiella spp

HU E. colifeejvt.J

SS /'.' coli Cmurt.J

C3 Bacreroides

SS Lactobacillus spp.

CD Bifidobacterium spp.

Рис. 1. Индексы доминирования микроорганизмов биоценоза толстого кишечника мышей при введении дельта-эндотоксинов В. thuringiensis (100мг/кг веса).

На 14-е и 28-е сутки эксперимента от 24-х животных с признаками дисбактериоза (в группе С) был высеян 251 штамм, а от мышей контрольной группы - 192 штамма грамположительных и грамотрицательных условно-патогенных бактерий, а также фибов. В микробном пейзаже условно-патогенных грамотрицательных бактерий превалировали штаммы Е. coli: 49 в контрольной группе и 80 в группе С с признаками дисбактериоза, что составило соответственно 48,5 и 54,8%. Также наблюдалось большое количество штаммов Proteus spp., Klebsiella spp., Citrobacter spp. В группе условно-патогенных грамположительных бактерий, выделенных из фекалий мышей с признаками дисбактериоза, большую долю составляли бактерии родов Staphylococcus (69 штаммов, или 65,7%) и Enterococcus (15 штаммов, или 14,3%). В контрольной группе в основном высевались Staphylococcus epidermidis (37 штаммов, или 40,6%) и Enterococcus spp. (31 штамм, или 34,1%). Таким образом, сопряженными таксонами микроорганизмов, чаще встречающимися совместно в группах биоценозов животных с выраженными признаками дисбактериоза, оказались бактерии родов Escherichia-Staphylococcus.

Важной особенностью микробиоценоза, формирующегося под влиянием высоких доз эндотоксинов В. thuringiensis (100мг/кг веса), является появление на 14-е сутки большого количества гемолитических (Н1у+) штаммов St. aureus и Е. coli, которые в контроле выделялись в единичных количествах (табл. 2).

На 28 сутки после начала введения дельта - эндотоксинов число штаммов Е. coli Н1у+ обнаруживались в 22,5±5,3% проб. Всего было выделено 23 штамма, или 28,5 % от общего числа, из них лактозонегативными (lac') оказалось 5 штаммов, или 6,3%. Штаммы St. aureus Н1у+ высевались в 5,1% исследуемых анализов, общее их количество составило 11 из 50 выделенных, или 42,0%.

Таблица 2. Частота обнаружения и количество штаммов Е. coli Н1у+ и St. aureus Н1у+ в 1 г кишечного содержимого у мышей группы С_

Количество штаммов Всего было выделено штаммов

Е. coli В том числе Е coli Н1у+ Из них Е. coli lac " St. aureus В том числе St. aureus Н1у+

Контроль

Вед. 59 2 0 0 0

В% 0 3,4±0,40 0 0 0

ИВ микроорганизмов, % 2, 0±0,5 0 0 0

14 сутки

Вед. 63 16 2 И 3

В% 100,0 25,4 3,2 100,0 27,3

ИВ микроорганизмов, % 15,0±2,4 3,3±0,5 10,5±1,6 2, 5±0,3

28 сутки

Вед. 80 23 5 50 И

В% 100,0 28,5 6,3 100,0 22,0

ИВ микроорганизмов, % 20,7±5,3 12,2±4,2 17,8±4,2 5,1±1,2

Примечание: ИВ — индекс встречаемости.

Появление в микробном пейзаже эшерихий гемолитических и лактозонегативных штаммов с высоким патогенным потенциалом свидетельствует о формировании патологического биоценоза в толстом кишечнике животных, основной причиной которого, видимо, является введение животным в течение достаточно длительного времени высоких доз дельта-эндотоксинов В.

3.4 Особенности межбактериальных взаимодействий в условиях формирующегося патобиоценоза толстого кишечника.

Показано, что при развитии дисбактериоза наблюдается увеличение антигенной нагрузки условно-патогенных микроорганизмов и, как правило, усиление их антагонизма в отношении других симбионтов кишечника (Барановский и Кондрашин, 2000). Н основе изучения чувствительности различных видов микроорганизмов к антагонистическому действию гемолитических эшерихий, выделенных при экспериментальном дисбактериозе,

было выяснено, что все они оказались в той или иной степени чувствительны к подобному действию, проявляющемуся в формировании зон подавления роста при совместном культивировании (табл. 3).

Высокую чувствительность к антагонистическому действию гемолитических эшерихий проявили типичные Е. coli и Lactobacillus spp. Среднюю чувствительность - штаммы St. epidermidis, Proteus spp., Citrobacter spp. и Klebsiella spp. Наименее чувствительными к ингибирующему действию Е. coli Н1у+ оказались штаммы золотистого стафилококка.

Таблица 3. Чувствительность индикаторных штаммов бактерий к антагонистическому действию Е. coli Н1у+ _

№ п/п Индикаторные виды Число штаммов, ед Чувствительных штаммов Чувствительность в мм подавления роста

Ед. %

1 St. epidermidis 19 12,0±1,4 67,2±5,2 7,9±1,1 +++

2 St. aureus 46 28,0±4,3 61,2±3,4 4,8±1,2++

3 Proteus spp. 21 11,0±0,9 52,3±4,5 6,2±1,9 +++

4 Citrobacter spp. 19 11,1±0,5 58,8±2,7 5,3±1,5 +++

5 Klebsiella spp. 17 9,3±0,9 54,7±5,1 7,1±0,8 +-Н-

6 E. coli тип. 57 23,2±1,3 40,7±2,2 10,2±0,9 ++++

7 Lactobacillus spp. 84 53,3±4,1 63,5±4,9 19,1±1,8 ++++

Примечание: ++ слабая степень чувствительности (размер зоны подавления роста индикаторных штаммов до 5,0 мм); +++ средняя степень чувствительности (размер зоны подавления роста индикаторных штаммов от 5,0 до 10 мм); ++++ высокая степень чувствительности (размер зоны подавления роста индикаторных штаммов более 10 мм).

Таким образом, гемолитические штаммы Е. coli, выделенные из патобиоценоза толстого кишечника былых мышей, сформированного под влиянием дельта-эндотоксинов, обладали антагонистическим действием по отношению к некоторым видам микроорганизмов, входящим в состав симбионтной микробиоты, со способностью в разной степени ингибировать рост как близкородственных энтеробактерий (Е. coli тип.), так и неродственных микроорганизмов — лактобактерий, нитробактерий, стафилококков, протей и клебсиэлл. Проведенные исследования позволили оценить характер ассоциативных взаимодействий Е. coli Н1у+ с симбионтными микроорганизмами в условиях дисбактериоза как антагонистический тип межмикробных взаимоотношений, при котором может изменяться лерсистентный потенциал бактерий и их биологические свойства.

3.5 Изменение персистирующих свойств штаммов бактерий Е. coli и St. aureus, выделенных от мышей с экспериментальным дисбактериозом, обусловленном действием дельта-эндотоксинов Bacillus thuringiensis

3.5.1 Антилизоцимная активность (АЛА). Были изучены показатели персистенции 49 штаммов Е. coli, выделенных от животных контрольной группы, и 80 штаммов - от животных группы С на 28 сутки (эксперимент), а

также 50 штаммов St. aureus, высеянные от животных экспериментальной группы и 26 штаммов, высеянных от животных группы С на 14 сутки (контроль).

Результаты исследования показали, что штаммы Е. coli, выделенные от мышей с экспериментальным дисбактериозом, достоверно чаще (р<0,05) проявляли антшшзоцимную активность, чем штаммы, выделенные от контрольных животных. Штаммов, обладающих высокой способностью инактивировать лизоцим, наблюдалось в 2,3 раза больше, чем в контроле, и в 1,3 раза больше штаммов, имеющих среднюю АЛА. Число неактивных штаммов уменьшилось в 1,4 раза (рис. 2).

Эксперимент

Контроль

* \ 44,йиз,£

13,5:®§28,7

30% 40% 50% 60% 70% 10% »0% 1С-/..

□ Неактивные Ш Средняя AHA

В Низкая АИА Я Высокая АИА

Рис. 2. Количество (%) штаммов Е. coll с различной АЛА._

Эксперимент 2,5 44,5

Контроль

SSti

>70,5:

0% 10% 20%

□ Неактивные Ш Средняя АИА

S0% «0% 70* »04 50% 100%

Е Низкая АИА ■ Высокая АИА

Рис. 3. Количество (%) штаммов St. aureus с различной AJIA._

Штаммы St. aureus, выделенные от мышей с проявлениями дисбактериоза на 28 сутки (50 штаммов), также достоверно чаще (р<0,05) проявляли более высокую антшшзоцимную активность, чем штаммы, выделенные от животных с проявлениями дисбактериоза на 14 сутки (контроль). В частности, штаммов, обладающих высокой способностью инактивировать лизоцим, наблюдалось в 1,9 раза больше, и в 2,3 раза больше штаммов, имеющих среднюю АЛА. Таким образом, возрастание антилизоцимной активности зависело от времени воздействия токсина на микробиоту кишечника (рис. 3).

Повышение в микробном пуле числа штаммов St. aureus и Е. coli со средней и высокой антилизоцимной активностью способствует защите бактериальных клеток от бактерицидных факторов макроорганизма, бактерии приобретают дополнительные средства дистанционного действия, направленного на инактивацию механизмов иммунитета организма и, как следствие, происходит увеличение общего числа штаммов St. aureus и Е. coli, высеваемых из микробиоценоза толстого кишечника животных, сформированного под влиянием высоких доз эндотоксинов. Такое явление

наблюдается при дисбактериозе, обусловленном, в частности, применением антибиотиков (Барановский и Кондрашин, 2000).

3.5.2 Антиинтерфероновая активность (АИА). Из 49 штаммов Е. coli, выделенных из контрольной группы животных, 32 штамма (65,2%) оказались неактивны, 4 штамма (8,1%) проявили низкую АИА, 8 (15,2%) - среднюю степень АИА и 5 (11,5%) - высокую степень АИА.

Из 80 штаммов Е. coli, выделенных от животных экспериментальной группы, неактивными оказалось уже меньше половины - 39 штаммов (49,8%), что в 1,3 раза меньше, чем в контроле. Количество штаммов с низкой АИА также уменьшилось, но незначительно - до 6 (7,2%), а вот количество штаммов со средней степенью АИА увеличилось до 17 (20,5%) или в 1,3 раза, а штаммов с высокой АИА выросло до 21 (22,5%), или почти в 2 раза (рис.4).

Эксперимент

Контроль

:49,8

7,2!

235: Ш

Эксперимент

Контроль

10 : :: 37,2 ~S 34.5Е jjlHfouBB

! i 1 L,

15.2 :i;48

0% 10% 10% 30% 40% 10% MS 70% 80% 90% 100%

0% 104 10% 30% 40% 50% 60% 10% 80% $0% 100%

□ Неактивные Я Средняя АИА.

В Низкая АИА ■ Высокая АИА

Q Неактивные В Средняя АИА

0 Низкая АИА Я Высокая АИА

Рис. 4. Количество (%) штаммов E.coli с различной АИА.

Рис. 5. Количество (%) штаммов St. aureus с различной АИА.

Изучение показателей АИА штаммов St. aureus показало, что из 50 штаммов, выделенных от животных экспериментальной группы, неактивным оказался каждый десятый штамм, что в 1,5 раза меньше, чем в контроле. Количество штаммов с низкой АИА уменьшилось до 19 (37,2%), число штаммов со средней степенью инактивировать интерферон практически не изменилось - 12 (24,5%), а штаммов с высокой АИА возросло до 14 (28,3%), или почти в 2,5 раза (рис. 5).

Известно, что при дисбактериозе персистентные характеристики ассоциантов в микробиоценозе не остаются инертными (Бухарин, 2009), и повышение персистентного потенциала условно-патогенной микрофлоры происходит как под действием ассоциантов - симбионтов, при формировании патобиоценозов, так и под воздействием лекарственных средств или других биологических препаратов, например, токсинов бактерий, что было показано в нашем случае.

3.6 Изменение фактора патогенности (адгезивных свойств) штаммов бактерий, выделенных от мышей с экспериментальным дисбактериозом

Исследование адгезивных свойств микроорганизмов (табл. 4) показало, что штаммы St. aureus, Enterococcus spp. и E. coli, выделенные от животных экспериментальных групп А и Б на 14 на 28 сутки, не отличались по показателям адгезии от штаммов, выделенных от животных контрольных групп.

Штаммы St. aureus и Enterococcus spp., выделенные от животных, получавших растворы токсина в дозе 100 мг/кг веса, имели более высокие показатели адгезивной активности (СПА и К%; Р<0,05) как на 14, так и на 28 сутки эксперимента по сравнению с микроорганизмами контрольных групп, и это четко коррелировало с увеличением их общего содержания в кишечном содержимом животных.

Таблица 4. Адгезивные свойства бактерий, выделенных из биотопа

толстого кишечника мышей

Микроорганизмы Сроки введения токсинов Дозы введения мг/кг веса СПА К(%) ИАМ

St. aureus Контроль 2,56±0,30 70,40±4, 55 3,60±0,12

14 сутки 25,0 2,48±0,53 69,85±5,10 3,51±0,21

50,0 2,7б±0,40 71,20±4,42 3,78±0,16

100,0 3,12*±0,20 78,10*±2,34 4,00±0,10

28 сутки 25,0 2,32±0,21 72,40±5,85 3,24±0,13

50,0 2,46±0,12 71,51±5,67 3,40±0,25

100,0 3,33*±0,24 81,32*±4,56 4,09±0,27

Enterococcus spp. Контроль 2,30±0,40 62,96±5,13 3,65±0,19

14 сутки 25,0 2,42±0,54 64,26±6,09 3,67±0,15

50,0 2,48±0,62 65,54±7,18 3,87±0,20

100,0 3,28*±0,22 72,5*±3,42 4,51±0,23

28 сутки 25,0 2,28±0,56 63,00±4,83 3,59±0,18

50,0 2,44±0,45 62,88±6,65 3,80±0,15

100,0 3,56*±0,52 74,24*±5,05 4,77±0,22

E.coli типичные Контроль 2,1б±0,18 65,34±5,27 3,31±0,16

14 сутки 25,0 2,24±0,33 63,54±9,16 3,52±0,19

50,0 2,09±0,35 66,43±7,74 3,15±0,11

100,0 1,80*±0,12 55,12*±4,02 3,25±0,14

28 сутки 25,0 2,20±0,25 64,35±8,12 3,40±0,10

50,0 2,10±0,24 63,43±б,64 3,30±0,21

100,0 1,72»±0,10 52,32*±3,08 3,27±0,28

* Статистически значимые различия с контрольным вариантом (Р<0,05, при п = 10)

Микроорганизм считался неадгезивным при ИАМ <1,75; низкоадгезивным — от 1,76 до 2,5; среднеадгезивным — от 2,51 до 4,0; высокоадгезивным при ИАМ выше 4,0.

Типичные эшерихии отличались сниженными по сравнению с контрольной группой показателями адгезии по сравнению с контрольной группой (СПА и К%; Р<0,05) на всех сроках проведения эксперимента при применении дозы токсина в 100 мг/кг, что коррелировало со снижением их содержания в кишечнике.

Отсутствие достоверных различий в численности представителей всех рассматриваемых видов бактерий при воздействии дельта-эндотоксинов в дозах от 25 до 50 мг/кг веса животных в течение всего срока исследования оказалось сопоставимо с отсутствием различий в показателях их адгезии.

Установлена статистически значимая взаимосвязь между адгезивными свойствами бактерий и их количественным содержанием в кишечном содержимом мышей (СПА и КОЕ/г на 14 и 28 сутки исследования; коэффициент ранговой корреляции Спирмена г=0,54, что указывает на умеренную тесноту связи между этими двумя признаками, при Р<0,05).

Таким образом, изменение показателей адгезии микроорганизмов зависело от вида микроорганизма, а также от доз и продолжительности применения растворов дельта-эндотоксинов и могло быть одной из причин количественных изменений в микробиоценозе толстого кишечника животных.

Анализ проведенных исследований по изучению адгезивных способностей гемолитических Е.соН, выделенных из толстого кишечника мышей, показал, что большинство штаммов, высеянных из биотипа на 14 сутки эксперимента, обладали среднеадгезивными свойствами, а высеянных на 28 сутки эксперимента - высокоадгезивными. Среднее значение СПА составило 6,04±0,60, что более чем в 2 раза больше, чем в контрольной группе, среднее значение ИАМ составило 7,62±0,53, это в 1,8 раз больше, чем в контроле. При этом среднее количество участвующих в адгезивном процессе эритроцитов было примерно на том же уровне - 79,24±4,30%.

Выявленная в ходе исследований способность гемолитических Е.соН активно прикрепляться к поверхности эукариотических клеток доказывает то, что данные микроорганизмы обладают способностью к усилению адгезии в условиях развивающегося под действием дельта-эндотоксинов дисбактериоза, что создает условия для последующей их инвазии в ткани хозяина, что обычно приводит к развитию инфекций.

Таким образом, пероральное введение невысоких доз дельта-эндотоксинов В. йта^'ешй от 1 до 50 мг/кг веса мышей в течение достаточно длительного времени не оказало существенного влияния на микроорганизмы, входящие в состав микробиоценоза толстого кишечника животных. Негативные изменения наблюдались лишь при применении дозы 100 мг/кг веса.

Следует отметить, что внедрение интенсивных технологий возделывания сельскохозяйственных культур неизбежно повлечет расширение применения микробиологических средств защиты растений, что приводит обычно к широкомасштабному загрязнению окружающей среды спорами, клетками и метаболитами микроорганизмов. Основными бактериальными загрязнителями при этом являются бактерии рода Bacillus - В. cereus и В. thuringiensis. Кроме того, существуют риски возможного негативного влияв гя токсичных трансгенных белков Bt растений, объемы выращивания которых во всем мире постоянно увеличиваются.

Быстрое изменение биологических свойств микроорганизмов, являющихся компонентами различных биотопов, появление резистентности условно-патогенных микроорганизмов к применяемым антибиотикам - вот неполный список возможных отдаленных неблагоприятных эффектов, связанных с нарушение регламентов использования биопестицидов и Bt трансгенных растений, содержащих белки, обладающие бактерицидной, фунгицидной и инсектицидной активностью (Герунова и соавт., 2009).

При оценке возможных экологических и пищевых рисков дальнейшее изучение действия дельта-эндотоксинов В. thuringiensis на микробиоту различных биотопов теплокровных животных и человека представляется весьма важным.

ВЫВОДЫ

1. Длительное пероральное введение высоких доз дельта-эндотоксинов В. thuringiensis (100 мг/кг веса) вызвало дисбиотические изменения в микробиоценозе толстого кишечника у 46,7% лабораторных мышей, что проявилось в появление диареи и изменении характера поведения животных. В контроле и в группах животных, получающих дозы токсина от 1 до 50 мг/кг веса, подобных изменений отмечено не было.

2. При пероральном введении животным токсина от 1 до 50 мг/кг веса в течение 28 суток в биотопе толстого кишечника наблюдалось небольшое, статистически недостоверное уменьшение количества доминирующих видов микроорганизмов и увеличение содержания добавочных и транзиторных условно-патогенных видов.

Использование per os дельта-эндотоксинов в дозе 100 мг/кг уже на 7-е -14-е сутки привело к статистически значимому уменьшению по сравнению с контролем количества доминирующих видов и появлению значительного числа штаммов клебсиэлл, протей, дрожжеподобных грибов рода Candida, Citrobacter spp., Morganella morganii, Y. Enterocolitica, гемолитических эшерихий и золотистого стафилококка. Выявлено уменьшение доли и индекса

встречаемости доминирующих микроорганизмов и увеличение тех же показателей у добавочных и транзиторных видов бактерий.

3. У животных с признаками дисбактериоза чаще высевались штаммы условно-патогенных грамотрицательных энтеробактерий родов Escherichia, Proteus, Klebsiellae, Citrobacter, а в группе условно-патогенных грамположительных бактерий - штаммы Staphylococcus spp. и Enterococcus spp. Обнаружилось большее количество гемолитических штаммов бактерий Е. coli и St. aureus. В микробиоценозе толстого кишечника животных с дисбактериозом выявлены сопряженные таксоны условно-патогенных микроорганизмов -бактерий родов Escherichia- Staphylococcus.

4. Выделенные из кишечника мышей с экспериментальным дисбактериозом гемолитические штаммы Е. coli обладали антагонистическим действием по отношению к микроорганизмам, входящим в состав микробиоты толстого кишечника, со способностью ингибировать рост как близкородственных энтеробактерий, в том числе типичную кишечную палочку, так и неродственных - стафилококков, лактобактерий, протей и клебсиэлл.

5. Установлено увеличение числа штаммов бактерий Е. coli и St. aureus с высокой и средней антилизоцимной и антиинтерфероновой активностью, выделенных от мышей с экспериментальным дисбактериозом, вызванным применением дельта-эндотоксинов В. thuringiensis. Выявлено, что усиление адгезивности St. aureus и Enterococcus spp. и увеличение их общего содержания в кишечном содержимом животных с выраженным дисбактериозом на 14 и 28 сутки исследования имеют четкую корреляцию. Те же дозы токсина приводили к некоторому снижению адгезивности типичных Е. coli по сравнению с контрольной группой, что коррелировало со снижением их содержания в кишечнике.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Публикации в журналах, рекомендованных ВАК РФ

1. Климентова, Е.Г. Особенности микробиоты толстого кишечника теплокровных животных при дисбактериозе, обусловленном действием дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis/ Е.Г. Климентова, JI.K. Каменек, А.А. Купцова // Научные ведомости Белгородского государственного университета. — 2011. — №3 (98)— Выпуск 14. — С.76-84.

2. Климентова, Е.Г. Изменение микрофлоры толстого кишечника у мышей при длительном пероральном введении 5-эндотоксина Bacillus thuringiensis /Е.Г. Климентова, А.А. Купцова, Л.К. Каменек, В.В. Гулий //Сельскохозяйственная биология. —2011. — №4. - С. 115-120.

3. Климентова, Е.Г. Действие дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis на теплокровных животных/ Е.Г. Климентова, JI.K. Каменек, А.А. Купцова // Научные ведомости Белгородского государственного университета. — 2011. — №3 (98)—Выпуск 14/1 — С.334-339.

Публикации в сборниках и материалах конференций

4. Каменек, JT.K. Перспективы использования дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis как агента защиты растений от вредителей и болезней и получения экологически чистой продукции /JI.K. Каменек, Е.Г. Климентова, Д.В. Каменек, А.А. Купцова, Л.Д. Терехина // Материалы научной конференции «Проблемы защиты растений в условиях современного сельскохозяйственного производства». - 2009. - ВИЗР, СПб. -С. 71-73.

5. Купцова, А.А. Антибиотическое действие дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis в отношении некоторых бактерий, входящих в состав микрофлоры кишечника теплокровных животных/ А.А. Купцова, Л.К. Каменек, Е.Г. Климентова, Д.В. Каменек, Н.А. Феоктистова // Материалы Всероссийского симпозиума с международным участием «Современные проблемы физиологии, экологии и биотехнологии микроорганизмов». -2009. - М.: МАКС Пресс. - С.101.

6. Купцова, А.А. Изменение состава микрофлоры кишечника и биохимических свойств некоторых бактерий рода Escherichia под действием дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis/ А.А. Купцова //Материалы научно-практической конференции «Становление и достижения биохимической школы Казанского университета». - 12 ноября 2009. - Казань-.КГУ. - С.71-73.

7. Климентова, Е.Г. Антимикробная активность параспоральных кристаллов Bacillus thuringiensis в отношении бактерий-симбионтов кишечника животных /Е.Г.Климентова, Л.К. Каменек, А.А. Купцова // Любищевские чтения-2010.- Современные проблемы экологии и эволюции. Сборник материалов конференции. -2010. - Ульяновск: УлГПУ. - С. 349-352.

8. Купцова, А.А. Дисбиотические изменения в микрофлоре кишечника теплокровных животных под действием дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis /А.А.Купцова //Материалы международного молодежного научного форума Ломоносов - 2010. - Москва, МГУ им. М.В. Ломоносова, -М.: МАКС Пресс.-С. 170-171.

9. Климентова, Е.Г. Влияние применения биопестицидов на основе дельта-эндотоксина почвенной бактерии Bacillus thuringiensis на теплокровных животных / Е.Г. Климентова, Л.К. Каменек, А.А. Купцова // Сборник

материалов IV Всероссийской научной конференции с международным участием. -2010. - Томск: TMJI-Пресс. -Т.З. -С. 109-112.

Ю.Каменек, Л.К. Дельта-эндотоксин Bacillus thuringiensis как перспективный агент защиты растений от вредителей и болезней /Л.К. Каменек, Е.Г. Климентова, Д.В. Каменек, A.A. Купцова //Сборник материалов 6 Международной научно-практической конференции «Биологическая защита растений как основа экологического земледелия и фитосанитарной стабилизации агроэкосистем», Всероссийский НИИ биологической защиты растений. — 21-24 сентября 2010 г. —Краснодар. — С.405-407.

11.Климентова, Е.Г. Экологические аспекты применения препаратов на основе Bacillus thuringiensis в сельском хозяйстве / Е.Г. Климентова, A.A. Купцов« // Материалы VII международной конференции «Современное состояние и перспективы развития микробиологии и биотехнологии» — 2010. — Минск: «Беларуская навука». — С. 448-450.

12.Климентова, Е.Г. Действие Сгу-белков параспоральных кристаллов Bacillus thuringiensis на микробиоценозы кишечника животных / Е.Г. Климентова,

A.A. Купцова, Л.К. Каменек, H.A. Феоктистова // Сборник материалов всероссийского симпозиума с международным участием «Биологически активные вещества мшфоорганизмов: прошлое, настоящее, будущее. — 2011. — М.:МАКС Пресс. — С.60.

13. Купцова, A.A. Влияние длительного перорального введения дельта-эндотоксинов Bacillus thuringiensis на теплокровных животных /A.A. Купцова, Е.Г. Климентова, Л.К. Каменек //Настоящее и будущее биотехнологии в решении проблем экологии, медицины, сельского, лесного хозяйства и промышленности: Сборник научных трудов научно-практического семинара с международным участием. — 2011. — Ульяновск: УлГУ. — С.116-120.

14. Климентова, Е.Г. Действие дельта- эндотоксинов Bacillus thuringiensis на развитие дисбиотических изменений в биотопе толстого кишечника теплокровных животных / Е.Г.Климентова, Л.К. Каменек, A.A. Купцова,

B.В. Гулий // Материалы международной научно-практической конференции. Минск, 5-8июля 2011. —2011. — Минск: «Несвиж». — С. 256-261.

15. Климентова, Е.Г. Влияние белков параспоральных кристаллов энтомопатогенной бактерии Bacillus thuringiensis на видовой состав микрофлоры толстого кишечника белых мышей /Е.Г. Климентова, A.A. Купцова, Л.К. Каменек // Информационный бюллетень ВПРС МОББ. — 2011.—С. 100-104.

Отпечатано с готового оригинал-макета

Формат 60х84'/1б. Усл.печ.л. 1,16 Тираж 100 экз. Заказ 540

Издательство РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева 127550, Москва, ул. Тимирязевская, 44

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Купцова, Анна Александровна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Биопестициды на основе метаболитов Bacillus thuringiensis и проблемы безопасности их применения для различных компонентов ^ ^ биоценоза

1.2. Генетически модифицированные организмы и проблемы безопасности их применения

1.3. Токсическое действие Bacillus thuringiensis и ее компонентов в отношении животных и человека

1.4. Устойчивость компонентов В. thuringiensis в окружающей среде

1.5. Кишечная микробиота теплокровных животных и человека, ее основные функции и значение

1.6. Bacillus thuringiensis как агент микробиологической защиты растений

1.7.Кристаллические дельта-эндотоксины как основные факторы токсичности В.thuringiensis 35 1.8 Биологическая активность дельта-эндотоксинов

2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Электрофоретическое разделение белковых компонентов параспоральных кристаллов В. thuringiensis subsp. kurstaki Z

3.2. Изменение характера поведения и симптомов проявления дисбактериоза у мышей при введении дельта - эндотоксинов В. thuringiensis

3.3. Определение влияния перорального введения дельта - эндотоксинов

В. thuringiensis на изменение состава и численности кишечной микробиоты белых мышей.

3.4. Особенности микробного пейзажа толстого кишечника мышей при экспериментальном дисбактериозе, обусловленном действием высоких доз растворов дельта-эндотоксинов В. thuringiensis

3.5. Чувствительность различных видов микроорганизмов ЖКТ к антагонистическому действию гемолитических эшерихий, выделенных при экспериментальном дисбактериозе

3.6. Изменение персистирующих свойств штаммов бактерий Е. coli и St. aureus, выделенных от мышей с экспериментальным дисбактериозом

3.6.1. Антилизоцимная активность

3.6.2. «Антиинтерфероновая» активность

3.7. Изменение факторов патогенности штаммов бактерий, выделенных от мышей с экспериментальным дисбактериозом

3.7.1. Изменение адгезивных свойств условно-патогенных бактерий

Введение Диссертация по биологии, на тему "Особенности действия дельта - эндотоксинов Bacillus thuringiensis на микробиоценоз толстого кишечника животных"

Актуальность темы. Стратегией развития биотехнологической отрасли Российской Федерации до 2020 гг. предусмотрено снижение зависимости от импорта основных видов биопрепаратов, сокращение использования химических средств защиты растений, массовое создание сельскохозяйственных предприятий, занимающихся органическим земледелием. Ожидается снижение пестицидной нагрузки на агроценозы и прилегающие территории, что должно положительно отразиться на улучшении общей экологической обстановки. В настоящее время в России выпускается около 30 наименований микробиологических препаратов для сельского хозяйства, в том числе 11 фунгицидов, 17 инсектицидов. Ими обрабатываются поля на площади около 8 млн. га (9% всех пахотных земель) (www. agroxxi.ru).

Основой значительного количества биоинсектицидов является споро-кристаллический комплекс и отдельные параспоральные белки (Cry- и Cyt-белки, дельта-эндотоксины) широко распространенной в природе энтомопатогенной бактерии В. thuringiensis (Вершинина, Алимова, 2000; Кандыбин и соавт., 2009).

Дельта-эндотоксины представляют собой семейство гомологичных белков, оказывающих избирательное действие на насекомых (Bravo, 1997). Некоторые штаммы В. thuringiensis описаны как активные против грибов (Кандыбин, Смирнов, 1999; Смирнов, 2000; Тюльпинева, 2003; Marrone et al., 1999), архей, аэробных и анаэробных бактерий, в том числе термофильных (Юдина, Егоров, 1996; Юдина, Бурцева, 1997; Егоров и соавт., 1990; Юдина, 2006; Го Даньян и соавт., 2009; Юдина и соавт., 2011а, 20116; Yudina et al., 2003).

В России запатентован ряд биоинсектицидов на основе очищенного и активированного дельта-эндотоксина В. thuringiensis (например, препараты серии «Дельта»), имеющие высокий биологический эффект в отношении большого числа вредителей (Каменек, 1995). Кроме того, cry-гены введены в целый ряд растений для их защиты от вредных насекомых (генно-модифицированные ^/-растения). В России на октябрь 2008 г. зарегистрировано 15 ГМ культур, в том числе 2 устойчивых к колорадскому жуку сорта картофеля: Bt картофель «Елизавета 2904/1 kgs» и «Луговской 1210 ашк» с генами СгуЗА (российской селекции, Центр «Биоинженерия» РАН).

Сведения об экологических последствиях применения ^/-растений и биоинсектицидов на основе различных компонентов В. thuringiensis, их действие в отношении нецелевых объектов носят весьма противоречивый характер. Известно, что определенные штаммы данного микроорганизма содержат гены, ответственные за образование энтеротоксинов, вызывающих отравление с диарейным синдромом (Imre et al., 2005; Damgaard et al., 2008). В опытах на лабораторных животных по оценке острой токсичности компонентов различных штаммов В. thuringiensis доказан либо большой процент летальности, либо серьезные патологические изменения в их тканях и органах (Oshodi and Macnaughtan, 1990).

Показано, что большинство подвидов В. thuringiensis обладают энтеротоксинами, гемолизинами и другими факторами вирулентности, многие из которых описаны на генетическом уровне (Damgaard, 1995, 1996; Perani et all, 1998).

Известно, что белковые токсины бактерий способны оказывать влияние на микроорганизмы, входящие в состав нормального микробоценоза кишечника: вызывать появление новых патогенных и условно-патогенных штаммов, потенциально обладающих непредсказуемыми свойствами, изменять биологические свойства отдельных представителей микробиоты, селективно ингибировать или, напротив, усиливать их рост, обусловливать дисбиотические нарушения (Барановский и Кондрашин, 2000).

При токсикологической оценке, гигиеническому нормированию и регламентации производства и применения биопрепаратов оценка действия их компонентов на микробиоту желудочно-кишечного тракта представляется весьма важной, так как в организм животных и человека Сгу-белки могут попадать перорально, вместе с пищей.

1. Выявить изменение симптомов проявления дисбактериоза '--у белых мышей при пероральном введении дельта - эндотоксинов В. thuringiensis.

2. Определить влияние дельта - эндотоксинов В. thuringiensis на изменение состава и численности микрофлоры прямого отдела толстой кишки животных.

3. Изучить особенность микробного пейзажа толстого кишечника при экспериментальном дисбактериозе, обусловленном действием высоких доз дельта-эндотоксинов В. thuringiensis.

4. Рассмотреть особенности межбактериальных взаимодействий в условиях формирующегося патобиоценоза толстого кишечника теплокровных животных.

5. Выявить изменение персистирующих и патогенных свойств ряда бактерий, входящих в состав биотопа толстого кишечника мышей при экспериментальном дисбактериозе: антилизоцимную (АЛА), «антиинтерфероновую» (АИА) активности и адгезивные свойства.

Научная новизна работы.

Впервые в условиях эксперимента изучено действие дельта-эндотоксинов В. thuringiensis на кишечную микробиоту. Показано, что пероральное введение растворов дельта-эндотоксинов В. БиЬяр. ки^аЫ Ъ-52 в дозе от 1 до 50 мг/кг веса животных в течение 28 суток не оказывает существенного влияния на изменение состава и численности микробиоценоза толстого кишечника белых мышей.

Высокие дозы дельта-эндотоксинов (100 мг/кг веса животных) вызывают развитие дисбиотических изменений в толстом кишечнике белых мышей, изменение характера межмикробных взаимодействий и усиление факторов патогенности и персистирующих свойств условно-патогенных бактерий уже с первой недели применения.

Практическая значимость работы. Полученные результаты, демонстрирующие действие дельта - эндотоксинов В. 1кигт£1ет15 в отношении микробиоты желудочно-кишечного тракта теплокровных животных, могут быть использованы при токсикологической оценке, гигиеническому нормированию и регламентации производства и применения биопрепаратов, используемых в защите растений и генетически модифицированных ^-растений, разработке и контролю норм и доз их безопасного применения.

Результаты диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций по биотехнологии, микробиологии и экологии микроорганизмов, проведении лабораторно-практических занятий в ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет».

Положения, выносимые на защиту. пероральное введенение растворов дельта-эндотоксинов В. 1кигт£1ет1$ в дозе от 1 до 50 мг/кг веса животных не вызывает дисбиотические расстойства у животных и не оказывает существенного влияния на изменение состава и численности микробиоты толстого кишечника животных и изменения их персистирующих и патогенных свойств.

- действие длительного перорального введения высоких доз дельта-эндотоксинов В. thuringiensis (100 мг/кг веса) вызывает снижение физической активности животных, количества поедаемого корма, уменьшение веса, появление диареи и вздутие живота у почти половины мышей экспериментальной группы. Происходит развитие дисбиотических изменений в микробиоценозе толстого кишечника.

- при введении высоких доз дельта-эндотоксинов происходит структурная перестройка микробиоценоза: уменьшается доля и количество доминирующих микроорганизмов и увеличивается число условно-патогенных видов, чаще высеваются гемолитические штаммы Е. coli и St. aureus, появляются сопряженные таксоны условно-патогенных микроорганизмов - бактерии родов Escherichia- Staphylococcus.

- штаммы Е. coli Н1у+, выделенные из биоценоза толстого кишечника мышей при экспериментальном дисбактериозе, проявляют антагонистическое действие в отношении ряда микроорганизмов со способностью в различной степени подавлять рост патогенных и условно -патогенных бактерий.

- происходит изменение факторов патогенности и персистирующих свойств штаммов условно-патогенных бактерий, выделенных от мышей с экспериментальным дисбактериозом.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на научных конференциях и симпозиумах всероссийского и международного уровня: «Проблемы защиты растений в условиях современного сельскохозяйственного производства» (ВИЗР, Санкт-Петербург, 2009); «Становление и достижения биохимической школы Казанского университета» (КГУ, Казань, 2009); «Современные проблемы физиологии, экологии и биотехнологии микроорганизмов» (МГУ, Москва, 2009); «Ломоносов - 2010» (МГУ, Москва, 2010); «Биологически активные вещества микроорганизмов: прошлое, настоящее, будущее» (МГУ, Москва, 2011);

Публикации. По материалам конференций опубликовано 15 работ, в том числе 3 работы в журналах из списка ВАК РФ. \

Структура и объём диссертационной работы. Диссертация состоит из введения и трех глав: обзор литературы, объекты и методы исследования, результаты исследования и их обсуждение, а также выводов, списка используемых литературных источников и приложений. Работа изложена на 164 страницах, содержит 11 таблиц, 11 рисунков, 9 приложений. Список использованных литературных источников включает 308 наименования, в том числе 214 зарубежных.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Купцова, Анна Александровна

выводы

1. Длительное пероральное введение высоких доз дельта-эндотоксинов В. thuringiensis (100 мг/кг веса) вызвало проявление дисбиотических изменений в микробиоценозе толстого кишечника у 46,7% тестируемых мышей, что проявилось в появление диареи и изменении характера поведения животных. В контроле и в группах животных, получающих дозы токсина от 1 до 50 мг/кг веса, подобных изменений отмечено не было.

3. У животных с признаками дисбактериоза чаще высевались штаммы условно-патогенных грамотрицательных энтеробактерий родов Е. coli, Proteus spp., Klebsiellae spp., Citrobacter spp., а в группе условно-патогенных грамположительных бактерий - штаммы Staphylococcus spp. и Enterococcus spp. Обнаружилось большее количество гемолитических штаммов бактерий родов Е. coli и St. aureus. В микробиоценозе толстого кишечника животных с дисбактериозом выявлены сопряженные таксоны условно-патогенных микроорганизмов - бактерий родов Escherichia- Staphylococcus.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Купцова, Анна Александровна, Москва

1. Азизбекян, P.P. Споро- и кристаллообразование у B.thuringiensis /Р.Р.Азизбекян, Т.А.Смирнова //Успехи микробиологии. - 1988. - Вып.22. -С.83-107.

2. Андреева, И.В. Потенциальные возможности применения пробиотиков в клинической практике / И.В. Андреева // Клиническая микробиология, антимикробная химиотерапия. 2006. - Т. 8, № 2. - С. 151-172.

3. Ардатская, М.Д. Дисбактериоз кишечника: понятие, диагностические подходы и пути коррекции. Возможности и преимущества биохимического исследования кала: пособие для врачей / М.Д. Ардатская, О.Н. Минушкин, Н.С. Иконников. М., 2004. - 88 с.

4. Артющенко, И.И. Кишечные инфекции / И.И. Артющенко, B.C. Коновалов. -М., 1987,-с. 70-73.

5. Бакеева, Л.Е. Изменение структуры митохондрий в ответ на функциональные воздействия /Л.Е. Бакеева, A.A. Ясайтис //Митохондрии. Молекулярные механизмы ферментативных реакций. М.: Наука. - 1972. - С.56-64.

6. Барановский, А.Ю. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника/А.Ю. Барановский, Э.А. Кондрашин. Санкт-Петербург: Питер, 2000. - 209 с.

7. Баранов, A.C. О бедной картошке замолвите слово//СО-диск«За биобезопасность». М.: ЭК «Эремурус». 2004.

8. Бизюкова, О.В. Рынок биопестицидов Северной Америки и Западной Европы/О.В. Бизюкова //Биологическая защита растений основа стабилизацииагроэкосистем. Материалы Международной научно-практической конференции. Краснодар. 2010. - С. 62-65.

9. Бондаренко, В. М. Дисбиозы и препараты с пробиотической функцией / В. М. Бондаренко, А. А. Воробьев // Журн. микробиол. 2004. - № 1. - С. 84-92.

10. Блинкова, Л.П. Бактериоцины: критерии, классификация, свойства, методы выявления / Л.П Блинкова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2003. - № 3. - С. 109-113.

11. Блохина, Т.П. Изменчивость B.thuringiensis при разных условиях выращивания /Т.П.Блохина, З.В.Сахарова, Ю.Н.Игнатенко и др.. //Микробиология. 1984. - Т.53. - Вып.З. - С.427-431.

12. Брилис, В.И. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов. /В.И. Брилис, Т.А. Брилене, Х.П. Ленцнер // Лабораторное дело. 1986. - № 4. - С. 210-212.

13. Брилис, В. И. Некоторые аспекты влияния антибиотиков на адгезивные свойства микроорганизмов и доступная модель его изучения / В. И. Брилис, Т.А. Брилене, Л.А. Левков и др.. //Лаб. Дело. 1986. - №5. - С. 353-357.

14. Бурцева, Л.И. Бактериальные болезни насекомых /Л.И.Бурцева, М.В.Штерншис, Г.В.Калмыкова //Патогены насекомых: структурные и функциональные аспекты. М.: Круглый год, 2001. - С. 167-245.

15. Бухарин, O.B. Антилизоцимный тест как маркер персистенции микроорганизмов /О.В.Бухарин, Б.Я. Усвяцов // Теоретическая и прикладная иммунология: Тез. докл.1 всес.конф. -М., 1982. С.58-64.

16. Бухарин, О.В. A.c. № 1564191.СССР. Способ определения антиинтерфероновой активности микроорганизмов/О.В. Бухарин, В.Ю. Соколов. 1989.

17. Бухарин, О.В. Персистенция патогенных бактерий / О.В. Бухарин. М.: Медицина; Екатеринбург: УрО РАН. - 1999. - 366с.

18. Бухарин, О.В. Персистентный потенциал условно-патогенных микроорганизмов/Бухарин, О.В., Валышев A.B., Черкасов С.В.//Эпидем. Вакцинопроф. 2005. - № 4 (23). - С. 43 - 48.

19. Бухарин, О.В. Инфекция модельная система ассоциатиного симбиоза/ О.В. Бухарин // Журн. Микробиол. - 2009. - №1. - С. 83-86.

20. Вершинина, В.И. Продукты на основе микробной биомассы /В.И.Вершинина, Ф.К.Алимова //Микробная биотехнология. Казань: Унипресс: ДАС, 2000 - С. 125-200.

21. Гейл, Э. Молекулярные основы действия антибиотиков /Э.Гейл, Э.Кандлифф, П.Рейнолдс, М.Ричмонд и др.. М.: Мир, 1975. - 500с.

22. Головина, И.Г. Литические ферменты микроорганизмов/ И.Г. Головина //Успехи микробиологии. 1972.- №8.- С. 108-134.

23. Головко, А.Э. Роль В.thuringiensis в природных биоценозах /А.Э. Головко, П.Н.Голышин, Н.Ф.Рябченко //Микробиологический журнал. 1993. -Т.55. -№3. -С.104-109.

24. Добжанская, Е.О. Характеристика нового штамма Bacillus thuringiensis, продуцента эндотоксина против жесткокрылых/ Е.О.Добжанская, С.Н.Чирков, Т.П. Блохина // Микробиология. 2002. - Т. 69. - №6. - С. 796-800.

25. Доувер, Г. Эволюция генома. / Г.Доувер, Р.Флейвелл. М.: Мир, 1986.-С. 40.

26. Дронина М.А. Токсинсвязывающие белки из мембран кишечного эпителия личинок Anopheles stephens /М.А.Дронина, Л.П.Ревина, Л.И.Костина, Л.А.Ганнушкина, И.А.Залунин, Г.Г.Честухина // Биохимия, 2006. - Т.71(2). -С.173-181.

27. Егоров, Н.С. Руководство к практическим занятиям по микробиологии / Н.С. Егоров. М.: Изд-во МГУ. - 1983. - С. 106-148.

28. Егоров, Н. С. Изучение свойств параспоральных кристаллов Вас. thuringiensis/ Н. С. Егоров, Ж. К. Лория, Т. Г. Юдина //Тр. IV Всесоюз. конф. по биологии клетки. Тбилиси, 1985. ЧI. - С. 259.

29. Егоров, Н.С. Способ выделения антибиотиков из параспоральных кристаллов Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki/ Н.С. Егоров, Т.Г. Юдина, Ж.К. Лория /А.с. №1367491, 15.09.1987. Приоритет от 02.10.1985.

30. Егоров, Н.С. Способ определения антибиотического действия параспоральных кристаллов Bacillus thuringiensis / Н.С. Егоров, Т.Г. Юдина, Ж.К. Лория /А.С. №1420947. 01. 05. 1988. Приоритет от 29.10.1985.

31. Егоров, Н.С. Биологически активные соединения, определяющие токсичность микробных инсектицидов на основе Bacillus thuringiensis / Н.С.

32. Егоров, Юдина Т.Г.// М.: ВНИИСЭНТИ Минмедбиопрома, 1989. Вып. 6. - 50 с.

33. Егоров, Н.С. О корреляции между инсектицидной и антибиотической активностями параспоральных кристаллов B.thuringiensis /Н.С.Егоров, Т.Г.Юдина, А.Ю.Баранов //Микробиология. 1990. - Т.59. - №3. - С.448-452.

34. Залунин, И.А. Белковый состав кристаллов дельта-эндотоксина различных серотипов Bacillus thuringiensis /И.А.Залунин, Г.Г.Честухина, В.М.Степанов //Биохимия. 1979. - Т. 44. - С.693-698.

35. Залунин, И.А. О различии первичных структур дельта-эндотоксинов, образуемых разными серотипами B.thuringiensis /И.А.Залунин, Е.Д.Левин, Е.А.Тимохина, Г.Г.Честухина, В.М.Степанов //Биохимия. 1982. - Т.47. -Вып.9. - С. 1570-1576.

36. Захарова, И .Я. Литические ферменты микроорганизмов/ И .Я. Захарова, И.Н. Павлова. Киев: Наук. Думка, 1985. - 215с.

37. Зурабова, Э.Р. Новые штаммы Bacillus thuringiensis subsp.kurstaki, выделенные из мельничной огнёвки /Э.Р.Зурабова, Т.П.Круглякова, М.К.Дергалюк //Сельскохозяйственная биология. 1988. -№5. - С.60-64.

38. Ивинскене, В.Л. Фосфолипаза и термолабильный экзотоксин Bacillus thuringiensis / В.Л. Ивинскене //Энтомопатогенные бактерии и их роль в защите растений. 1987. - С.57-75.

39. Кагава, Я. Биомембраны./ Я. Кагава М.: Высшая школа, 1985. - 303с.

40. Каменек, JI.К. Влияние дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis на активный транспорт ионов у насекомых /Л.К.Каменек, М.В.Штерншис //Изв. СО АН СССР, Сер. биология. 1984. - Вып.З. - С. 113-117.

41. Каменек, Л.К. Действие эндотоксина Bacills thuringiensis на культуру клеток непарного шелкопряда /Л.К.Каменек, Н.И.Харина //Актуальные проблемы земледелия химизации и защиты растений в Сибири. Новосибирск, 1981.-С.40.

42. Каменек, Л.К. Дельта-эндотоксин Bacillus thuringiensis: строение, свойства и использование для защиты растений. Дисс. докт. биол. наук. М., 1998.-345с.

43. Каменек, Л.К. Разобщающее действие дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis /Л.К.Каменек, М.В.Штерншис //Интегрированная защита растений от болезней и вредителей в Сибири. Новосибирск, 1986. - С.80-85.

44. Каменек, Л.К. Способ получения эндотоксинсодержащих энтомопатогенных препаратов. Патент РФ № 2027369. 1995.

45. Каменек, Л.К. Антибактериальное действие дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis как потенциального агента защиты растений / Л.К. Каменек, Т.А. Левина, Д.А.Терехин, Л.Д. Миначева // Биотехнология. 2005. - N1. - С. 59 -67.

46. Каменек, Л.К. Роль сукцинатдегидрогеназы в резистентности бактерий к дельта-эндотоксину Bacillus thuringiensis! Л.К. Каменек, Т.А. Левина. //Микробиология. 2005. - том 74. - №5. - с. 711-713.

47. Каменек, Д.В. Действие дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis на перевиваемые культуры клеток /Д. В. Каменек. Автореф. диссерт. канд.биол. наук. Казань. 2008. - 21с.

48. Кандыбин, Н.В. Бактериальные средства борьбы с грызунами и вредными насекомыми / Н.В. Кандыбин М.: Агропромиздат, 1989. - 172с.

49. Кандыбин, Н.В. Микробиоконтроль численности насекомых и его доминанта Bacillus thuringiensis/H.B. Кандыбин, Т.И. Патыка, В.П. Ермолова, В.Ф. Патыка // С-П.б., Пушкин: ООО Инновационный центр защиты растений. 2009. - 244 С.

50. Киль, В.И. Генетически модифицированный картофель, устойчивый к колорадскому жуку /В.И.Киль, В.Д.Надыкта //Arpo XXI. 2002. - №1. - С. 1215.

51. Климентова, Е.Г. Антимикробное действие дельта-эндотоксина

52. B.thuringiensis в отношении ряда фитопатогенных бактерий. Автореф. дисс. к.б.н.-М., 2001.-21с.

53. Кольчевский, А.Г. Изменчивость физиолого-биохимических свойств B.thuringiensis subsp.thuringiensis после пребывания в почве /А.Г.Кольчевский, А.Я.Лескова //Микробиология. Т.54. - 1985. - Вып.6. - С.1019-1020.

54. Кузнецов, JI.E. Оптимизация синтетической питательной среды для культивирования B.thuringiensis /Л.Е.Кузнецов, М.П.Ховрычев //Микробиология. 1984. - Т.53. - Вып.1. - С.54-57.

55. Кузнецов, В.В. Возможные биологически риски при использовании генетически модифицированных сельскохозяйственных культур/ В.В. Кузнецов//Вестник ДВО РАН. 2005 - №3.- С.40-54.

56. Лакин, Г. Ф. Биометрия / Г. Ф. Лакин / М. Высшая школа. - 1990. - 352 с.

57. Ленгелер, Й. Современная микробиология: прокариоты: в 2 т.; пер. с англ. / Й. Ленгелер, Г. Древе, Г. Шлегель. М.: Мир, 2005. - 695с.

58. Левина, Т.А. Особенности антибактериального действия дельта-эндотоксинов Bacilllus thuringiensis как перспективного агента защиты растений. Автор. Дисс. К.б.н., Казань. 2005. - 23 с.

59. Лукин, А. А. Роль пептидных антибиотиков в регуляции клеточной дифференциации у бактерий/ А. А. Лукин, В. И. Пермогоров // Антибиотики. -1983.- №6.-С. 28.

60. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. Пер. с англ./Под ред. Хоулта Дж., Крига Н., Снита П., Стейли Дж., Уилльямса С. М.: Мир. - 1999. - 800 с.

61. Постникова, Е. А. Поиск перспективных штаммов бифидобактерий и лактобациллдля разработки новых биопрепаратов/Е. А. Постникова, Б.А. Ефимов, H.H. Володин, Л.И. Кафарская, //Журн. микробиол. 2004. -№2 - С. 64-69.

62. Пуштаи, А. Генетически модифицированные продукты питания: потенциальное воздействие на здоровье человека / А. Пуштаи, С. Бардоч, С.У. Ивен / CAB International. Пер. с англ. М.: МСоЭС. 2004. -с. 45.

63. Сазыкин, Ю. О. Антибиотики как биохимические реагенты / Ю. О. Сазыкин //ВИНИТИ. 1984. - С. 3.

64. Сахарова, З.В. Споруляция и кристаллообразование у B.thuringiensis при лимитации роста источниками питания /З.В.Сахарова, Ю.Н.Игнатенко, М.П.Ховрычев, В.П.Лыков, И.Л.Работнова, В.В.Шевцов //Микробиология. -1984. Т.53. - Вып.2. - С.279-284.

65. Сахарова, З.В. Кинетика роста и развития B.thuringiensis при периодическом культивировании /З.В.Сахарова, Ю.Н.Игнатенко, Ф.Шульц, М.П.Ховрычев, И.Л.Работнова //Микробиология. 1985. - Т.54. - Вып.4. -С.604-608.

66. Сахарова, З.В. Рост и спорообразование B.thuringiensis при высоких концентрациях субстратов /З.В. Сахарова, И.Л. Работнова, М.П. Ховрычев //Микробиология. 1988. - Т.57. - Вып.6. - С.992-995.

67. Семенов, A.B. Характеристика антагонистической активности бактерий при межмикробных взаимодействиях, дисс. к.б.н., Оренбург. 2009. - 132 с.

68. Скулачёв, В.П. Трансформация энергии в биомембранах/В.П. Скулачёв.-М.: Наука, 1972.-203 с.

69. Смирнов О.В. Патотипы B.thuringiensis и экологические основы их использования в защите растений Автореф.дисс.д.б.н. Санкт-Петербург -Пушкин, 2000. - 42с.

70. Смирнов, O.B. Полифункциональная активность Bacillus thuringiensis Berliner/ O.B. Смирнов, С.Д. Гришечкина //Сельскохозяйственная биология. 2011. -№3. -С. 123-126.

71. Смирнова, Т.А. Ультраструктура спор и кристаллов бактерий различных серотипов В.thuringiensis /Т.А.Смирнова, А.М.Михайлова, В.С.Тюрин, Р.Р.Азизбекян //Микробиология. 1984. - Т.53. - Вып.З. - С.455-462.

72. Степанов, В. М. Структурные основы биологической специфичности эндотоксинов/ В. М. Степанов, Г. Г. Честухина //Матер. Всесоюз. конф. «Пути совершенствования микробиологической борьбы с вредными насекомыми и болезнями растений». 1986. - С. 207.

73. Тюльпинева, A.A. Антифунгальное действие дельта-эндотоксина Bacillus Thuringliensis как экологически безопасного агента защиты растений / Авт. диссерт. канд.биол. наук. -2003. -Ульяновск. 21 с.

74. Хеймпел, A.M. Безопасность энтомопатогенных микроорганизмов для человека и позвоночных животных / A.M. Хеймпел /Микроорганизмы в борьбе с вредными насекомыми и клещами. М.: Колос. - 1976. - С.373-390.

75. Хужамшукуров, H.A. Энтомоцидная активность бактериальных клеток В. thuringiensis /Н.А.Хужамшукуров, Т.Ю.Юсупов, И.М.Халалов, А.Г.Гузалова, М.М.Мурадов, К.Д.Давранов //Прикладная биохимия и микробиология. 2001. -Т.37. -№6. -С.698-701.

76. Честухина, Г.Г. Сравнительная биохимия 8-эндотоксинов и ферментов Bacillus thuringiensis /Г.Г.Честухина, В.М.Степанов //Тезисы V Всесою-зного биохимического съезда. М., 1985. - Т.1. - С.236-237.

77. Честухина, Г.Г. Аминокислотные последовательности пептидов N-концевого домена дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis подвида alesti.

78. Гипервариабельные участки эндотоксинов В. thuringiensis /Г.Г.Честухина, С.А.Тюрин, А.Л.Остерман, О.П.Ходова, В.М.Степанов //Биохимия. 1986. -Т.51.-С. 1048-1050.

79. Честухина, Г.Г. Структурное многообразие дельта-эндотоксинов Bacillus thuringiensis /Г.Г.Честухина, Л.И.Костина, И.А.Залунин, О.М.Ходова, В.М.Степанов //Тезисы VII Всесоюзн. симпозиума по химии белков и пептидов. -Таллин, 1987. С.132-133.

80. Честухина, Г.Г. Изучение структуры и функции дельта-эндотоксинов и протеиназ Bacillus thuringiensis. Автореф. дисс. д.б.н. М., 1990. - 53с.

81. Юдина, Т.Г. Биологическая активность параспоральных кристаллов В.thuringiensis /Т.Г.Юдина, Н.С.Егоров, Ж.К.Лория, С.Н.Выборных //Изв. АНСССР. 1988. - Сер.биологическая. - №3. - С.427-436.

82. Юдина, Т.Г. Влияние источников углерода на биологическую активность и морфологию параспоральных кристаллов В. thuringiensis /Т.Г.Юдина, О.В.Саламаха, Е.В.Олехнович, Н.П.Рогатых, Н.С.Егоров //Микробиология. -1992. Т.61. -Вып.4. - С.577-584.

83. Юдина, Т.Г. Чувствительность диссоциантов Micrococcus luteus к действию дельта-эндотоксинов В.thuringiensis /Т.Г.Юдина, Е.С.Милько, Н.С.Егоров //Микробиология. 1996. - Т.65. - №3. - С. 365-369.

84. Юдина, Т.Г. Антимикробная активность белковых включений различных бактерий /Т.Г.Юдина, Н.С.Егоров //Доклады Академии Наук. 1996. - Т.349. -№2. - С.283-286.

85. Юдина, Т.Г. Действие дельта-эндотоксинов четырёх подвидов В.thuringiensis на различных прокариот /Т.Г.Юдина, Л.И.Бурцева //Микробиология. 1997. -Т.66. -№1. - С.25-31.

86. Юдина, Т.Г. Антимикробная активность и экологическая роль белковых включений бактерий представителей родов Bacillus, Xenorhabdus, Photorhabdus. Дисс. д.б.н. в форме науч. доклада. - М. - 2006. - 81 с.

87. АН, A. Bacillus thuringiensis serovar. israelensis (ABG-6108) against chironomids and some nontarget aquatic invertebrates /А. Ali //J. Invert. Pathol. -1981.-38:264.-p.272.

88. Andrews, R. E. Protease activation of the entomocidal protoxin of Bacillus thuringiensis subsp. Kurstakil R. E. Andrews, M. M. Bibilos, L. A. Bulla //Appl. and Environ. Microbiol. 1985. - V.50. - № 4. - P. 737.

89. Agrawal, N. Interation of gene-cloned and insect cell-expressed aminopeptidase N of Spodoptera litura with insecticidal crystal protein CrylC/ N. Agrawal, P. Malhotra, R.K. Bhatnagar //Appl Environ Microbiol. 2002. - V.68(9). - P. 45834592.

90. Armstrong, J.L. Delta endotoxin of Bacillus thuringiensis subsp. israelensis! J.L. Armstrong, G.F. Rohrmann, G.S. Beaudreau // J Bacterid. 1985. - V. 161:39-P.46.

91. Aronson, A. Structure and morphogenesis of the bacterial spore coat /A.Aronson, P.C.Fitz-James //Bacteriol.Revs. 1976. - V.40. - P.360-402.

92. Aronson, A.I. Mutagenesis of specificity and toxicity regions of a Bacillus thuringiensis protoxin gene /A.I.Aronson, D.Wu, C.Zhang //J. Bacterid. 1995. -V.177 - P.4059-4065.

93. Aronson, A.I. Why Bacillus thuringiensis insecticidal toxins are so effective: unique features of their mode of action. / A.I. Aronson, Y. Shai /FEMS Microbiol Lett.-2001.- 195:1.-P.8.

94. Barry, J. W. Predicting and measuring drift of Bacillus thuringiensis sprays. / J.W. Barry// Environ. Toxicol. Chem. 1993. -V.12. - P.1977-1989.

95. Bai, Y.Y. Effects of transgenic rice expressing Bacillus thuringiensis CrylAb protein on ground-dwelling collembolan community in postharvest seasons/ Y.Y. Bai, R.H. Yan, G.Y. Ye, F.N. Huang, J.A. Cheng // Environ Entomol. 2010. -V.39(l). - P.243-251.

96. Barefoot, S.F. Identification and purification of a protein that induces production of the Lactobacillus acidophilus bacteriocin lactacin B/ S.F. Barefoot // Appl. Environ. Microbiol. 1994. -V. 60. №10. - P.3522-3528.

97. Barry, J.W. Predicting and measuring drift of Bacillus thuringiensis sprays / J.W.Barry, et al. //Environ. Toxicol. Chem. 1993. V. 12. - P. 1977-1989.

98. Berliner, E. Uber die Schlaffsucht der Mehlmottenraupe (Ephestia Kuhniella Zell.) und ihren Erreger Bacillus thuringiensis n.sp./E. Berliner //Zeitschr. angew. Ent. 1915. - B.2. - S.29-56.

99. Becker, N. Bacterial control of vector-mosquitoes and black flies. In: Charles JF, Delecluse A, Nielsen-LeRoux C, editors. Entomopathogenic bacteria: from laboratory to field application / N. Becker /Kluwer Academic Publishers. 2000. -P. 383.

100. Beckie, H.J. Impact of herbicide-resistant crops as weeds in Canada / H.J. Beckie, L.M. Hall, S.I. Warwick //Proceedings Brighton Crop Protection Council. Weeds.-2001.- P. 135-142.

101. Bellocq, MI. Effects of the insecticide Bacillus thuringiensis on Sorex cinerus (masked shrew) populations, diet, and prey se-lection in a jack pine plantation in northern Ontario /Bellocq, MI.// Can. J. Zool. 1992. - V.70. - P. 505-510.

102. Bennett, R.W. Bacillus cereus Food Poisoning. / R.W. Bennett, S.M. Harmon //Laboratory diagnosis of infectious diseases: Principles and practice. Volume 1: Bacterial, mycotic, and parasitic diseasesNew York: Springer-Verlag. 1990. -V.70.-P. 505-510.

103. Berg, N. Summary of acute toxicology in support of formula amendment of Foray 48B. / N. Berg, E.W. Sorensen, J.M. Overholt //Danbury, CT: Novo Nordisk.1991. (May 21.)

104. Bosch, D. Recombinant Bacillus thuringiensis crystal proteins with new properties: possibilities for resistance management /D.Bosch, B.Schipper, H.van der Kleij, RA.de Maagd, J.Stiekema //Bio/Technology. 1994. - №12. - P.915-918.

105. Bravo, A. Phylogenetic relationships of Bacillus thuringiensis d-endotoxin family proteins and their functional domains //Jour. of. Bacterid. 1997. - V.179. -№9. - P.2793-2801.

106. Bravo, A. N-terminal Activation Is an Essential Early Step in the Mechanism of Action of the Bacillus thuringiensis Cry 1 Ac Insecticidal Toxin /A.Bravo, J.Sanchez, T.Kouskoura, N.Crickmore //J. Biol. Chem. 2002. - V.277. - P.23985-23987.

107. Bravo, A. How to cope with insect resistance to Bt toxins? /Bravo A., Soberon M. //Trends Biotechnology. 2008. - V.26(10). - P.573-579.

108. Bulla, L.A. Entomocidal proteinaceous crystal of Bacillus thuringiensis /L.A.Bulla, K.J.Kramer, D.B.Bechtel, L.I.Davidson //In: Microbiology. -Washington: D.C. 1976. - P.534-539.

109. Burtseva, L.I. Bacillus thuringiensis novosibirsk (serotypeH24a24c), a new subspecies from the west Siberian plain/L.I. Burtseva, V.A. Burlak, G.V. Kalmikova, H.de Baijac, and M.M. Lecadet //Journal of Invertebrate Pathology. -1995.-V. 66.-P. 92-93.

110. Butko, P. Cytolytic Toxin CytlA and Its Mechanism of Membrane Damage: Data and Hypotheses/ P. Butko //Appl. and Env. Microbiology. 2003. - V.69. -№5.-P.2415-2422.

111. Butko, P. Membrane permeabilization induced by cytolytic delta-endotoxin CytA from Bacillus thuringiensis var.israelensis /P.Butko, F.Huang, M.Pusztai-Carey, W.K.Surewicz //Biochemistry. 1996. - V.35. - P.l 1355-11360.

112. Bosch, D. Recombinant Bacillus thuringiensis insecticidal proteins with new properties for resistance management/ D. Bosch, B. Schipper, H. van der Kleij, R.A. de Maagd, J. Stiekema //Biotechnology. 1994. - V.12. - P.915-918.

113. Boonserm, P. Crystal Structure of the Mosquito-larvicidal Toxin Cry4Ba and Its Biological Implications /P. Boonserm, P. Davis, D.J. Ellar, J. Li // J Mol Biol. -2005. V. 348. - V. 363-382.

114. Bravo, A. Mode of action of Bacillus thuringiensis Cry and Cyt toxins and their potential for insect control / A. Bravo, S. Gill Saijeet, and M. Soberon //Toxicon. -2007. March 15. - V. 49 (4). - V.423-435.

115. Cahan, R. Antibacterial activity of CytlAa from Bacillus thuringiensis subsp. Israelensis / R. Cahan, H. Friman, Y. Nitzan //Microbiology. 2008. - V. 154. - P. 3529-3536.

116. Carrol, J. Analysis of Bacillus thuringiensis d-endotoxin action on insect-membrane permeability using a light-scattering assay /J.Carrol, D.J.Ellar //Eur. J. Biochem. 1993. - V.214. - P.771-778.

117. Charles, J.F. Action de la S-endotoxine de Bacillus thuringiensis var. israelensis sur cultures de cellules de Aedes aegypti L.I J.F. Charles //Ann. Microbiol.- 1983.-V.134.-P. 365-381.

118. Chestukhina, G. G. The main features of Bacillus thuringiensis 8-endotoxin molecular structure/ G. G.Chestukhina, L. I.Kostina, A. L.Mikhailova, S. A.Yurin, F.S.Klepikova, V. M.Stepanov //Arch, Microbiol. 1982. - V.132. - P. 159-162.

119. Cooksey, K.E. Purification of a protein from Bacillus thuringiensis toxic to a larvae of Lepidoptera/ K.E. Cooksey //Biochem.J. 1968. - V.106. - P.445-454.

120. Coghlan, A. GM crop DNA found in human gut bugs / A. Coghlan -NewScientist. 2002.

121. Coux, F. Role of interdomain salt bridges in the pore-forming ability of the Bacillus thuringiensis toxins CrylAa and CrylAc /F.Coux, V.Vachon, C.Rang,

122. K.Moozar, L.Masson, M.Royer, M. Bes, S.Rivest, R.Brousseau, J.-L.Schwartz, R.Laprade, R.Frutos //Jour, of Biolog. Chem. 2001. - V.276. - N.38. - P.35546-35551.

123. Crickmore N., 2005. Full list of delta-endotoxins. http://www.biols.susx.uk/Home/Neil Crickmore/Bt/.

124. Damgaard, P. H. Diarrhoeal enterotoxin production by strains of Bacillus thuringiensis isolated from commercial Bacillus thuringiensis-based insecticides. / P. H. Damgaard // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1995. - V. 12. - P.245-250.

125. Damgaard, P. H. Enterotoxin-producing strains of Bacillus thuringiensis isolated from food / P. H. Damgaard, H. D. Larsen, B. M. Hansen, J. Bresciani, and K. Jorgensen // Lett. Appl. Microbiol. 1996. - V.23. - P. 146-150.

126. Damgaard, P.H. Enterotoxin-producing strains of Bacillus thuringiensis isolated from food / P.H. Damgaard, H.D. Larsen, B.M. Hansen, J. Bresciani, K. Jorgensen // Letters in Applied Microbiology. 2008. - V.23. -P. 133-145.

127. David, B. Monitoring Human Exposures to Bacillus thuringiensis after Aerial Applications de Amorim / B. Levin David and V.Giovana // Department of Biology, University of Victoria, Victoria, B.C., Canada Bio-Weapons, Insects, and Humans, 2002.

128. De Baijac, H. Classification of Bacillus thuringiensis strains/ H. De Baijac, E. Frachon // Entomophaga. 1990. - V. 35. - P. 233-240.

129. Debro, L. Two different parasporal inclusions are produced by Bacillus thuringiensis subsp.finitimus /L.Debro, P.C. Fitz-James, A.Aronson //J. Bacterid. -1986. V.165. - P.258-268.

130. De Maagd, R.A. Structure, diversity and evolution of protein toxins from spore-forming entomopathogenic bacteria / R.A. De Maagd, A. Bravo, C. Berry, N. Crickmore, H,E. Schnepf//Ann Rev Genet. 2003. - V.37. - P.409-433.

131. Devillers, J. The usefulness of the agar-well diffusion method for assessing chemical toxicity to bacteria and fungi / J. Devillers, R. Steiman, F. Seigle-Murandi // Chemosphere. 1989.-V. 19.-№ 10-11.- P. 1693-1700.

132. Drobniewski, F.A. The safety of Bacillus species as insect vector control agents/ F.A. Drobniewski, A. Review// J. Appl. Bacteriol. 1994. - V.76. - P. 101109.

133. Eidt, D.C. Toxicity of Bacillus thuringiensis var. kurstaki to aquatic insects. / D.C. Eidt //Can. Ent. 1985. - V.l 17. - P. 829- 837.

134. Ellis, R. BTK. Unpublished report. /R. Ellis //Winnipeg, MB, Canada: Prairie Pest Management. 1991.

135. Ewen, S.M. Effects of diets containing geletically modified potatoes efpressing lectin on rat small intestine / S.M. Ewen, A. Pusztai // The LANCET. -1999. V.51. - P.23302-23350.

136. Fast, P.G. The effect of 8 -endotoxin on ion regulation by midgut tissue of Bombyx mori larvae /P.G.Fast, R.Milne //J.Invert. Pathol. 1979. - V.34. - P.319.

137. Faust, R. Degradation of the parasporal crystal produced by Bacillus thuringiensis var.kurstaki /R.Faust, G.Hallam, R.Travers //J. Invertebr. Pathol. -1974 a. V.24. - P.365-373.

138. Faust, R. Preliminary investigations on the molecular mode of action of the 8 -endotoxin produced by Bacillus thuringiensis var.alesti /R.Faust, R.Travers, G.Hallam //J. Invertebr. Pathol. 1974 b. - V.23. - P.259-261.

139. Faust, R.M. Comparative morphology and size distribution of the parasporal crystals from various strains of Bacillus thuringiensis /R.M.Faust, J.R.Adams, K.Abe, T.Iizzuka, L.A.Bulla //J. Sericult. Sci. Jap. 1982. - V.51. - P.316-324.

140. Faust, R.M. Nature of pathogenig process of Bacillus thuringiensis/ R.M. Faust //Compar. Pathol. 1984. - V.7. - P.91-141.

141. Fedhila S. The InhA2 Metalloprotease of Bacillus thuringiensis Strain 407 Is Required for Pathogenicity in Insects Infected via the Oral Route /S.Fedhila, P.Nel, D.Lereclus //J. Bacteriol. 2002. - V.184. - P.3296-3304.

142. Feitelson, J. S. Bacillus thuringiensis: Insects and Beyond / J.S. Feitelson, J. Payle, Kim Leo. // Biotechnology. —1992. —V.10. —N 3. — P. 271-274.

143. Fruton, I. S. Proteinase-catalysed svnthesis of peptide bonds/1. S. Fruton //Adv. enzymol. and Relat. areas Mol. Biol. N. Y. —1982. —V. 53. —p. 239.

144. Gaddis, P.K. Secondary effects of BT spray on avian predators: The reproductive success of chestnut-backed chicka-dees/ P.K.Gaddis, C.C. Corkran //Portland, OR. —1986. —p.52.

145. Gill, S.S. Identification, isolation and cloning of a Bacillus thuringiensis CrylAc toxin-binding protein from midgut of the lepidopteran insect Heliothis virescens /S.S.Gill, E.A.Cowlest, V.Francis //J. Biol. Chem. 1995. - V.270. -P.27277-27282.

146. Grochulski, P. Bacillus thuringiensis CrylA(a) insecticidal toxin: crystal structure and channel formation /P.Grochulski, L.Masson, S.Borisova, M.Pusztai-Carey, J.L.Schwartz, R.Brousseau, M.Cygler //J. Mol. Biol. 1995. - V.254. -P.447-464.

147. Haag, K.H. Effects of herbicides and microbial insecticides on the insects of aquatic plants / K.H. Haag, G.R. Buckingham //Aquatic PI. Manage . — 1991. — V.29. —P.5-57.

148. Hansen, B.M. Molecular and phenotypic characterization of Bacillus thuringiensis isolated from leaves and insects / B.M. Hansen, P.H. Damgaard, J. Eilenberg, J.C.Pedersen // J Invertebr Pathol. —1998. —V. 71—№ 2. —P. 106-114.

149. Hauge, H.H. Plantaricin A is an amphiphilic alpha-helical bacteriocin-like pheromone which exerts antimicrobial and pheromone activities through different mechanisms / H. H. Hauge, D. Mantzilas, G. Moll // Biochemistry. —1998. —№ 37. — P. 563-569.

150. Hauge, H.H. Membrane-mimicking entities induce structuring of the two-peptide bacteriocins plantaricin E/F and plantaricin J/K / H.H. Hauge, D. Mantzilas, V.G.H. Eijsink, J. Nissen-Meyer // J. Bacterid. —1999. —V. 1. —P. 740-747.

151. Heimpel, A.M. Bacterial insecticides /A.M.Heimpel, T.A.Angus //Bacterid. Rev. 1960. - V.24. - P. 266-288.

152. Henning, S.Bacterial insecticides / S. Henning, R. Metz, W.P. Hammens //Ant.J.Food Microbiol. —1986. —V. 3 (3). — P.121-134.

153. Herbert, B.N. Biosynthesis of the crystal protein of B.thuringiensis var.tolworthi: kinetics of formation of the polypeptide components of the crystal protein in vivo /B.N.Herbert, H.J.Gould //Eur. Biochem. 1973. - V.37. - P.441-448.

154. Hodgman, T.C. Models for the structure and function of the Bacillus thuringiensis 8-endotoxins determined by compilational analysis /T.C.Hodgman, D.J.Ellar //DNA Seq. 1990. - V. 1. - P.97-106.

155. Hofte, H. Insecticidal crystal protein of Bacillus thuringiensis /77 H. Hofte, H.R. Whiteley //Microbiol. Revs. —1989. —V. 53. —№2. — P. 242-255.

156. Horn, D.J. Selective mortality of parasitoids and predators of Myzus persicae on collards treated with malathion, carbaryl or Bacillus thuringiensis / D.J. Horn, //Ent. exp. appl. — 1983. —V.34. —P. 208-211.

157. Hoti, S.L. Changes in the populations of Bacillus thuringiensis H-14 and Bacillus sphaericus applied to vector breeding sites. / S.L. Hoti, K. Balaraman. //The Environmentalist. —1991. —V.l 1(1) —P. 39-44.

158. H^ Y. Bacillus thuringiensis Cry5B protein is highly efficacious as a singledose therapy against an intestinal roundworm infection in mice/Y. Hu , S.B. Georghiou, A.J. Kelleher, Aroian R.V.// PLoS Negl Trop Dis. 2010. -p.614.

159. Huang, Y. A field study of the persisting effect of Bacillus thuringiensis in citrus groves / Y. Huang, R. Huang, K. Li. // Biological Control. —1990. —V.6(3). —P.131-133.

160. Ikezava, H. Phosphatidylinositolspecific phospholipase C from Bacillus cereus and Bacillus thuringiensis /H.Ikezava, R.Taguchi //Methods in Enzymology. -N.-Y.: Acad. Press. — 1981. V.71. - P. 731 -741.

161. Iriarte, J. Biología y ecología de Bacillus thuringiensis. Bioinsecticidas: Fundamentos y Aplicaciones de Bacillus thuringiensis en el Control Integrado de Plagas. / Iriarte J, Caballero P. Ferre / Eds. Phytoma-Espana. 2001. - P. 15-44.

162. Ito, A. A Bacillus thuringiensis Crystal Protein with Selective Cytocidal Action to Human Cell /A.Ito, Y.Sasaguri, S.Kitada, Y.Kusaka, K.Kuwano, K.Masutomi, E.Mizuki, T.Akao, M.Ohba //J. Biol. Chem. 2004. - V.279. - №20. - P.21282-21286.

163. James, R.R. Bacillus thuringiensis var. kurstaki affects a beneficial insect, the cinnabar moth (Lepidoptera: Arctiidae). / R.R. James, J.C. Miller, B. Lighthart. //J. Econ. Entomol. — 1993. — V. 86(2). — P. 334-339.

164. Jenkins, J.L. Exploring the mechanism of action of insecticidal proteins by genetic engineering methods. In: Setlow JK, editor / J.L. Jenkins, D.H.Dean //Genetic Engineering: Principles and Methods. New York: Plenum Press. — 2000. — p. 33.

165. Jones, I.W. Summary report: Effect of Dipel (r) and Plyac (r) on hatchability of ringneck pheasant eggs /I.W. Jones //Oregon Dept. of Fish and Wildlife. — 1986. — p. 120.

166. Jurat-Fuentes, J.L. Characterization of a Cryl Acreceptor alkaline phosphatase in susceptible and resistant Heliothis virescens larvae/ J.L. Jurat-Fuentes, M.J.Adang // Eur J Biochem. 2004.- V.271.-P.3127-3135.

167. Khodyrev,V.P. Characterization of crystal-forming bacteria Bacillus thuringiensis subsp. tohokuensis toxic to mosquito larvae/V. P. Khodyrev, G.V. Kalmykova, L. I. Burtseva and V. V. Glupov// Biology Bulletin. — 2005. — V.33. — N5.5 —P.13-51.

168. Knowles, B.H. Mechanism of action of Bacillus thuringiensis insecticidal delta-endotoxins / B.H. Knowles, //Adv. Insect. Phys. 1994. - V.24. - P.275-303.

169. Koni, P.A. Cloning and characterization of a novel Bacillus thuringiensis cytolytic delta-endotoxin /P.A. Koni, D.J. Ellar //J. Mol. Biol. 1993. - V.229. -P.319-327.

170. Kreutzweiser, D.P. Lethal and sub-lethal effects of Bacillus thuringiensis var. kurstaki on aquatic insects in laboratory bioas-says and outdoor stream channels / D.P. Kreutzweiser // Bull. Environ. Contam. Toxicol. —1992. —V. 49. — P.252-258.

171. Krieg, A.A. New serotype of Bacillus thuringiensis isolated in Germany: Bacillus thuringiensis var.darmstadiensis /A.Krieg, H.de Baijac, A.Bonnefoi //J. Invert. Pathol. 1968. - V.10. - P.428-430.

172. Krieg, A. Bacillus thuringiensis var.tenebrionis: a new pathotype effective against larvae of Coleoptera /A.Krieg, A.M.Huger, G.A.Langenbruch, W.Shnetter //Z. Angew. Entomol. 1983. - V.96. -№.5. - P.500-508.

173. Krieg, A. Mitteilungen aus der Biologischen Bundesanstalt fur Land- und Forstwirtschaft /A.Krieg, A.M.Huger //Symposium in memoriam Dr. Ernst Berliner, Darmstadt 25.8.1986., Berlin-Dahlem, Heft 233.

174. Kronstad, I. W. Inverted repeat Sequences flank Bacillus thuringiensis crystal Protein Gene /1. W. Kronstad, H. R. Whiteley //J. Bacterid. — 1984. —V. 160. —№ 1.—P. 95.

175. Kurahashi, K. Two meahanisms of the biosynthesis of antibiotic peptides / K.Kurahashi, C. Nishio //Mechanisms of biosynthesis of antibiotic peptides. — 1985.- P. 55.

176. Kumar, S. Bacillus thuringiensis (Bt) transgenic crop: an environment friendly insect-pest management strategy /Kumar S, Chandra A, Pandey KC //J Environ Biol.- 2008. V.29(5). - P.641-653.

177. Le Binh, T. Differential Effects of pH on the Pore-Forming Properties of Bacillus thuringiensis Insecticidal Crystal Toxins /T.Le Binh, V.Vachon, J.L.Schwartz, R.Laprade //Appl.and Environment. Microb. 2001. - V.67. - №10. -P.4488-4494.

178. Lecadet, M.M. La toxine figuree de Bacillus thuringiensis. Fechnique de separation et composition en acides amines/ M.M.Lecadet //Compt. Rend. Acad. Sci.- 1965. V.261. - P.5693-5696.

179. Lee, M.K. Domain III exchanges of Bacillus thuringiensis CrylA toxins affect binding to different gypsy moth midgut receptors /M.K.Lee, B.A.Young, D.H.Dean //Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. - V.216. - P.306-312.

180. Lereclus, D. Recent aspects of genetic manipulation in Bacillus thuringiensis / D. Lereclus, M.M. Lecadet, A. Klier, G. Rapoport, R. Dedonder //Biochimie. — 1985.—V. 67. —№ 1. —P. 91.

181. Li, J. Crystal structure of insecticidal d-endotoxin from Bacillus thuringiensis at 2.5 A resolution /J.Li, J.Carroll, D.J.Ellar //Nature. 1991. - V.353. - P.815-821.

182. Li, J. Structure of the mosquitocidal delta-endotoxin CytB from Bacillus thuringiensis ssp.kyushuensis and implications for membrane pore formation /J.Li, P.A.Koni, D.J.Ellar//J. Mol. Biol. 1996. - V.257. -№1. - P. 129-152.

183. Lorence, A. 8-Endotoxins induce cation channels in Spodoptera frugiperda brush border membranes in suspension and in planar lipid bilayers /A.Lorence,

184. A.Darszon, C.Diaz, A.Lievano, R.Quintero, A.Bravo //FEBS Lett. 1995. - V.360. -P.217-222.

185. Luthy, P. Insecticidal toxins of Bacillus thuringiensis/ P. Luthy //FEMS Microbiology Letters. 1980. - V.8. - P. 1-7.

186. Marrone, P.G. Strain of Bacillus for controlling plant disease /P.G.Marrone, S.D.Heins, D.C.Manker, D.R.Jimenez, C.N.Chilcott, P.Wigley, A.Broadwell /Пат.5919447. США, МПК6 A01N 63/00, C12N 1/20. —1999.

187. Maldonado, A. Production of plantaricin NC8 by Lactobacillus plantarum NC8 is induced in the presence of different types of gram-positive bacteria /А. Maldonado, J. L. Ruiz-Barba, R. Jimenez-Diaz// Arch. Microbiol. —2004. — V. 181. — P. 8-16.

188. Manceva, S. D. Effect of pH and ionic strength on the cytolytic toxin CytlA: a fluorescence spectroscopy study / S. D. Manceva, M. Pusztai-Carey, P. Butko// Biochim Biophys Acta. — 2004. —P. 123—130.

189. Manceva, S. D. A detergent-like mechanism of action of the cytolytic toxin CytlA from Bacillus thuringiensis var. israelensis / S. D. Manceva, M. Pusztai-Carey, P. S. Russo, P. Butko, // Biochemistry. — 2005. —V. 44. —P.589-597.

190. Mandi, I. Effect of linear gramicidin on sporulation and intra cellular ATP pools of Bacillus brevis /I.Mandi, H. Paulus //Arch. Microbiol. —1985. —V. 143. — № 3. —P. 248.

191. Masson, L. Polydispersity of Bacillus thuringiensis Cryl toxins in Solution and its effect on receptor binding kinetics / L. Masson, A.Mazza, S.Sreedhara, M.J.Adang, R.Broisseau //Biochem. Biophys. Acta. —2001. —V.1594. —P.266-275.

192. McFarland, L. Epidemiology, risk factors and treatments for antibiotic associated diarrhea /L. McFarland // Diagn. Dis. —1998. — V.16. —P.292-307.

193. McGaughey, W.M. Man-aging insect resistance to Bacillus thuringiensis toxins / W.M. McGaughey, M.E. Whalon //Science. —1992. —V. 258. —P. 14511455.

194. Mercer, D.K. Fate of free DNA and transformation of oral bacterium Streptococcus gordonii DL1 plasmid DNA in human saliva / D.K. Mercer, K.P.

195. Scott, W.A. Bruce-Johnson, L.A.Glover, H.J. Flint //Aplied and Environmental Microbiology. —1999. —V. 65. —P.6-10.

196. Miller, J.C. Field assessment of the effects of a microbial pest control agent on non-target Lepidoptera / J.C. Miller //Amer. Entomol. —1990-a. —P.135-139.

197. Miller, J.C. Effects of a microbial insecticide, Bacillus thuringiensis kurstaki, on nontarget Lepidoptera in a spruce budworm-infested forest /J.C. Miller// J. P. Lepid . -1990-6. —V. 29(4). —P. 267-276.

198. Nishio, C. Peptide antibiotic subtilin is synthesized via precursor proteins /C. Nishio, S. Komura, K. Kurahcshi //Biochem. Biophys. Res. Communs. —1983. — V. 116.—№2. —P. 751.

199. Novo Nordisk. Enzyme Toxicology Lab. Bacillus thuringiensis var. kurstaki: Acute oral toxicity/pathogenicity study in rats given Btk /N. Nordisk, tox batch PPQ 2843 (NB 75). Danbury, CT: (July 20.). —1990a.

200. Novo Nordisk. Enzyme Toxicology Lab. Acute dermal toxicity study in rabbits with the end product Foray 48B / Nordisk, N. //Batch BBN 6057. Danbury, CT. (December 12.). —1990b.

201. Ohana, B. Fate of Bacillus thuringiensis subsp. israelensis under simulated field conditions / B.Ohana, J. Margalit, Z. Barak. //Appl. Environ. Microbiol. — 1987. —V.57(4). —P.828-831.

202. Ohba, M. Crystals of Bacillus thuringiensis subsp.yunnanensis are produced only in asporogenous cells /M.Ohba, K.Aizawa //J. Invert. Pathol. 1986. - V.48. -P.254-256.

203. Oshodi, R.O. YK. preparation: Acute inhalation toxicity study in rats. /R.O. Oshodi, P. Macnaughtan // Danbury, CT: Novo Nordisk. — 1990. —V. 6.

204. Padua, L.E. Isolation of a Bacillus thuringiensis strain (serotype 8a:8b) highly and selectively toxic against mosquito larvae / L.E. Padua, M. Ohba, K. Aizawa // J. Invertebr. Pathol. —1984. — V. 44. — P. 12-17.

205. Paulov, S. Effects of Bacillus thuringiensis (H-14) endotoxins on the development of the frog Rana temporaria L. Acta /S. Paulov// FRN Univ. Comen. Zoologia — 1987. —V.30. — P. 21-26.

206. Pigott, C.R. Role of receptors in Bacillus thuringiensis crystal toxin ctivity/C.R. Pigott, D.J. Ellar, //Microbiol Mol Biol Rev. 2007. - V.71(2). - P.255-81.

207. Peker, E. Periorbital cellulitis caused by Bacillus thuringiensis /E. Peke^ E. Cagan, M. Dogan, A. Kilic, H. Caksen, O. Yesilmen//Eur J Ophthalmol.-2010. -V. 20(1).-243-245.

208. Petras, S.F. Survival of Bacillus thuringiensis spores in soil /S.F. Petras, L.E. Casida, // Appl. Environ. Microbiol. —1985. —V.50. —P. 1496-1501.

209. Petropoulos, A.D. Polyamines affect diversely the antibiotic potency / A.D. Petropoulos, D.N. Wilson, D.L. Kalpaxis //J Biol.Chem. —2004.—V.279. — P.26518-26525.

210. Pendleton, I.R. Characterization of crystal protoxin and an activated toxin from Bacillus thuringiensis var.entomocidus/ I.R. Pendleton //I. Invertebr. Pathol. -1973. V.21. -P.46-49.

211. Perani, M. Prevalence of b-exotoxin, diarrhoeal toxin and specific d-endotoxin in natural isolates of Bacillus thuringiensis / M. Perani, A. Bishop, A.Vaid //FEMS Microbiology Letters. —1998. —V.160. — P.55-60.

212. Peyronnet, O. Ion channel activity from the midgut brush-border membrane of Gypsy moth (Lymantria dispar) larvae /O.Peyronnet, V.Vachon, J.-L.Schwarz, R.Laprade // Jour, of Exp. Biol. 2000. - V.203. - P. 1835-1844.

213. Poncet, S. Evaluation of synergistic interactions between the CrylVA, CrylVB and CrylVD toxic components of B.thuringiensis subsp.israelensis crystals /S.Poncet, A.Delecluse, A.Klier, G.Rapoport //J. Invert. Pathol. 1995. - V.66. -P.131-135.

214. Prasad, S.S. Biochemistry and biological activities of the proteinaceous crystal of Bacillus thuringiensis /S.S.Prasad, Y.I.Shethna //J. Sci. Ind. Res. 1976. -V.35. -P.626-632.

215. Rasmussen, T. Quorum sensing inhibitors: a bargain of effects/T. Rasmussen, M. Givskov // Microbiology.— 2006, —№152. — P. 895-904.

216. Rivera, G. Common occurrence of enterotoxin genes and enterotoxicity in Bacillus thuringiensis /G. Rivera, A. M. Granum, P. E. Priest//F. G. FEMS Microbiology Letters, — 2000. —V. 190. —P. 151-155.

217. Reardon, R.C. Efficacy and field persistence of Bacillus thuringiensis after ground application to Balsam fir and white spruce in Wisconsin / R.C. Reardon, K. Haissig //Can. Ent. —1984. —V.116. —P. 153-158.

218. Reed, J.P. Establishment of Cry9C susceptibility baselines for European corn borer and southwestern corn borer (.Lepidoptera: Crambidae)/ J.P.Reed, W.R.Halliday// J. Econ. Entomol. 2001. - V. 94. - P.397-402.

219. Restrepo, N. Cloning, expression and toxicity of a mosquitocidal toxin gene of Bacillus thuringiensis subsp. medellin! N. Restrepo, D. Gutierres, M.M. Patino// Men Inst Oswaldo Cruz. 1997. - V. - P. 257-262.

220. Roche, D. Communications blackout Do N-acylhomoserinelactone-degrading enzymes have any role in quorum sensing / D. Roche//Microbiology. —2004. — №150. — P. 2023-2028.

221. Rosas-Garcia, N.M. Biochemical and molecular characterization of delta-endotoxins in Bacillus thuringiensis/N.M. Rosas-Garcia, A. Sanchez-Varela , J.M. //Folia Microbiol (Praha). 2009. - № 54(6). - 487-492.

222. Rosenquist, H. Occurrence and significance of Bacillus cereus and Bacillus thuringiensis in ready-to-eat food/ H. Rosenquist, S.Lasse, R.A. Sigrid, B. J. Gert, A. Wilcks// FEMS Microbiology Letters. — 2005. —V.250. —P.129-136

223. Rodenhouse, N.L. Results of experimental and natural food reductions for breeding black-throated blue warblers /N.L. Rodenhouse, R.T. Holmes //Ecology. — 1992. —V.73(l). —P.357-372.

224. Sadoff, Ph.D. The antibiotics of Bacillus species: their possible roles in sporulafion /Ph.D. Sadoff //Progress in industrial microbiol. —1972. — V. II. — P. 1.

225. Salama, H.S. Parasites and predators of the meal moth Plodia interpunctella Hbn as affected by Bacillus thuringiensis Berl. /Salama, H.S.//J. Appl. Ent. — 1991. —V.112.—P.244-253.

226. Sayles, V.B. Small polypeptide components of the Bacillus thuringiensis. Parasporal crystalline inclusion /V.B.Sayles, J.N.Aronson, A.Rosenthal //Biochem. Biophys. Res. Commun. 1970. - V.41. - P.l 126-1133.

227. Schneph, E. Bacillus thuringiensis and its pesticidal crystal proteins/ E. Schneph, N.Crickmore, J.Van Rie, D.Lereclus, J. Baum, J.Feitelson, D.R. Zeigler, D.H. Dean // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998. - V. 62(3). - P.775-806.

228. Schnepf, E. Bacillus thuringiensis and Its Pesticidal Crystal Proteins /E.Schnepf, N.Crickmore, J.Van Rie, D.Lereclus, J.Baum, J.Feitelson, D.R.Zeigler, D.H.Dean //Microbiology and Molecular Biology Reviews. 1998. - V.62. - №3. - P.775-806.

229. Schubbert, R. Ingested foreign (phage M13) DNA survives transiently in the gastrointestinal tract and enters the blood stream of mice / R. Schubbert, C. Lettmann, W. Doerfler // Molecules, Genes and Genetics. —1994. —V. 242—P.495-504.

230. Schubbert, R. On the fate of orally ingested foreign DNA in mice: chromosomal association and placental transmission in the fetus /R. Schubbert, U. Hohlweg, D. Renz , W. Doerfler //Molecules, Genes and Genetics.—1998.—V. 259. —P.569-576.

231. Shively, J.M. The carboxysome, a prokaryotic organelle: a mini review / J.M.Shively, R.S. English //Can. J. Bot. — 1991. — V. 69. —P.957-962.

232. Siegel, J.P. Mammalian safety of Bacillus thuringiensis israelensis /J.P. Siegel, J.A. Shadduck IINew Brunswick, NJ: 1988. Rutgers University Press.

233. Siegel, J.P. Clearance of Bacillus sphaericus and Bacillus thuringiensis ssp. israelensis from mammals. /J.P. Siegel, J.A. Shadduck //J. Econ. Ent. — 1990. —V. 83(2).—P. 347-355.

234. Sinegre, G. Sécurité d'emploi du serotype H-14 de Bacillus thuringiensis pour la faune non-cible des gites a moustiques du littoral mediterraneen Francais/G., B. Gaven, and JL Jullien // Parassitologia Sinegre. —1980. —V. 22(1, 2) —P.205-211.

235. Slatin, S.L. Delta-endotoxins form cation-selective channels in planar lipid bilayers /S.L.Slatin, C.K.Abrams, L.English //Biochem. Biophys. Res. Commun. -1990. V.169. -P.765-772.

236. Somerville, H.J. Association of the crystalline inclusion of Bacillus thuringiensis with the exosporium /H.J.Somerville, C.R.James //J.Bacteriol. 1970. -V.102. - P.580-583.

237. Steinhaus, E. A. Possible use of Bacillus thuringiensis Berliner as an aid in the biological control of the alfalfa caterpillar /E.A. Steinhaus//Hilgardia. 1951. - V.20. -P. 359-381.

238. Sturme, M. Making sense of quorum sensing in lactobacilli:- a special focus on Lactobacillus plantarum WCFS1 / M. Sturme, C. Francke, R. Siezen, W. de Vos, M. Kleerebezem // Microbiology. —2007. —№153. — P. 3939-3947.

239. Travers, R. Effects of Bacillus thuringiensis var.kurstaki 8-endotoxin on isolated lepidopteran mitochondria /R.Travers, R.Faust, C.F.Reichelderfer //J. Invertebr. Pathol. 1976 b. - V.28. - P. 351-356.

240. Travers, R.S. Selective process for efficient isolation of soil Bacillus spp./R.S. Travers, P.A.W. Martin, C.F. Reichelderfer //Appl. Environ. Microbial. 1987. -V.53. - P.1263-1266.

241. Vachon, V. Influence of the biophysical and biochemical environment on the kinetics of pore formation by Cry toxins. / V.Vachon, J.L.Schwartz, R.Laprade // J Invertebr Pathol. 2006. - V.92(3). - 160-165.

242. Vandenbergh, P.A. Lactic acid bacteria, their metabolic products and interference with microbial growth /P.A.Vandenbergh //FEMS Microbiol. Rev. -1993.-№ 12. P.224-238.

243. Van Frankenhuyzen, K. Application of Bacillus thuringiensis in forestry /K. Van Frankenhuyzen // Kluwer Academic Publishers. -2000. -p. 371.

244. Vidaver, A.K. Bacteriocins: the future and reality/A.K.Vidaver//Plant Disease. 1983. - V.67. - №5. - P.471.

245. Ware, G.W. Pesticides: Theory and application /Ware, G.W. // New York: WH Freeman and Co. -1983.- P. 147- 149.

246. West, A.W.Persistence of Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus in soil supplemented with grass or manure /A.W.West, H.D. Burges //Plant and Soil. 1985. -V.83. -P.389-398.

247. Whalon, M.E. Bt: mode of action and use /M.E. Whalon, B.A. Wingerd// Arch. Insect Biochem. Physiol. —2003. —V.54. —P.200-211.

248. Wu, D. Localized mutagenesis defines regions of the Bacillus thuringiensis d-endotoxin involved in toxicity and specificity /D.Wu, A.I. Aronson /J. Biol. Chem. -1992.-V.267.-P.2311-2317.

249. Wu, D. Synergism in mosquitocidal activity of 26 and 65 kDa proteins from Bacillus thuringiensis subsp.israelensis crystal /D.Wu, F.N.Chang //FEBS Lett. -1985. V.190. -P.232-236.

250. Wu, D. Synergism of mosquitocidal toxicity between CytA and CrylVD proteins using inclusions produced from cloned genes of Bacillus thuringiensis /D.Wu, J.J.Johnson, B.A.Federici //Mol. Microbiol. 1994. - V.13. - P.965-972.

251. Yan, L. Biofilm-Specific Cross-Species Induction of Antimicrobial Compounds in Bacilli /L.Yan, K. Boyd, D. Adams, J. Burgess// Appl. Environ. Microbiol. -2003. -V. 69. -№. 7. P. 3719-3727.

252. Youngman, P.New ways to study developmental genes in spore-forming bacteria / P. Youngman, P. Zuber, J.B. Percins, K. Sandman, M. Igo, R.Losick //Science. -1985. -№ 4697. -P. 281.

253. Yudina, T.G. Antibacterial activity of Cry- and Cyt-proteins from Bacillus thuringiensis subsp. israelensis / T.G.Yudina, A.V.Konukhova, L.P.Revina, L.I. Kostina, I.A. Zalunin, G.G. Chestukhina//Can. J. Microbiol. -2003. -V.49. -№1. -P. 37 44.

254. Zalunin, I.A. Cytopathological effect of Bacillus thuringiensis israelensis endotoxins on the intestines of Aedes aegypti mosquito larvae/ I.A. Zalunin, S.Yu.Chaika, M.A.Dronina, L.P. Revina // Паразитология. 2002. - Т. 36. - № 5. - С. 343-344.

Информация о работе

Купцова, Анна Александровна
кандидата биологических наук
Москва, 2011
ВАК 03.02.03

Диссертация

Особенности действия дельта - эндотоксинов Bacillus thuringiensis на микробиоценоз толстого кишечника животных - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы