Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Изучение механизма действия дельта-эндотоксина Bacillus Thuringiensis на насекомых

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Каменёк, Людмила Кирилловна

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Кристаллический дельта-эндотоксин и данные о механизме его действия на насекомых

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

4. ВЛИЯНИЕ ДЕЛЬТА-ЭНДОТОКСИНА НА Mg2+-3ABHCH

МУЮ АТФазу НАСЕКОМЫХ

4.1. Действие дельта-эндотоксина in vitro на препараты, содержащие АТФазную активность.

4.2. Изучение действия дельта-эндотоксина на устойчивые виды (на примере капустной совки)

4.3. Изменения АТФазной активности в процессе воздействия дельта-эндотоксина in vivo на насекомых

5. СВЯЗЬ МЕВДУ ИЗМЕНЕНИЕМ КОНЦЕНТРАЦИИ НЕКОТОРЫХ ИОНОВ И АКТИВНОСТИ Mg2+ -ЗАВИСИМОЙ АТФазы НАСЕКОМЫХ ПОД ДЕЙСТВИЕМ ДЕЛЬТА-ЭНДОТОКСИНА

6. ЦИТОТОКСИЧЕСКИЕ И БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

ДЕЛЬТА-ЭНДОТОКСИНА ВАС. а?ниЕ1Ш1ЕЯКГ

6.1. Цитотоксическое действие дельта-эндотоксина

6.2. Разобщающие свойства дельта-эндотоксина

6.3. Спектральное изучение свойств дельта-эндотоксина

7. ВОЗМОЖНОСТЬ ПРАКТИЧЕСКОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ . НО

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Изучение механизма действия дельта-эндотоксина Bacillus Thuringiensis на насекомых"

Актуальность темы. Защита растений от повреждений насекомыми - один из важных резервов повышения урожайности сельскохозяйственных культур и сохранения лесных насаждений.

Химический метод борьбы с вредителями, являющийся в настоящее время ведущим, наряду с общеизвестными преимуществами обла -дает и существенными недостатками, среди которых основным можно считать токсичность химических инсектицидов для полезной энтомо-фауны и теплокровных животных, загрязнение окружающей среды и все чаще встречающееся развитие резистентности у насекомых-вредителей,неизбежным последствием которой становится необходимость увеличения доз пестицидов и кратности обработок.Поэтому в настоящее время усилия специалистов в области защиты растений направлены на разработку таких систем защитных мероприятий,при которых применение химических средств было бы сведено до абсолютно необходимого минимума.

Биологический метод борьбы в рамках интегрированной системы служит перспективной альтернативой химической защите растений. Одним из наиболее обещающих направлений в биологическом методе борьбы с вредителями является использование патогенных микроорганизмов, и в первую очередь - энтомопатогенных бактерий. Чаще всего применяются препараты на основе спорообразующей бактерии Bacillus thuringiensis , поражающей многие виды чешуекрылых.

Эффективное использование этих препаратов требует знания многих особенностей как самого патогена и насекомого-объекта борьбы, так и механизмов их взаимодействия друг с другом и с окружающей средой.

Основным действующим началом Вас.№иг11^1епз1з является кристалический белок или (^-эндотоксин (дельта-эндотоксин). Это фактически протоксин, который становится токсином после разрушения его кишечным содержимым насекомого. Хорошо изучены гистопа -тологические изменения, вызываемые Вас.-Ышг±1^1епв1а в кишеч -нике насекомого.

Большинство исследователей приходят к заключению, что патологические изменения, происходящие при попадании энтомоцидных кристаллов в кишечник восприимчивых гусениц, являются лишь следствием более тонкого механизма биохимического воздействия токсина.

Однако имеющихся в доступной литературе данных недостаточно для получения однозначного ответа о биохимическом механизме действия дельта-эндотоксина на организм насекомых. В связи с этим вопрос до сих пор остается неясным и требует дальнейшего изуче -ния.

Цели и задачи исследования. Целью настоящего исследования являлось выяснение механизма действия дельта-эндотоксина на орга низм насекомых,^ использование полученных результатов для изыскания путей усиления вызванной дельта-эндотоксином патологии и улучшения существующих ныне форм препаратов на основе Вас.^игдл-giensis .

В связи с этим были поставлены следующие задачи: X)изучить

2+ действие дельта-эндотоксина Вас.^иг:Ь^1епз±з на -зависимую АТФазу (аденозинтрифосфатазу) насекомых - фермент,ответственный за активный транспорт ионов через клеточную мембрану и осуществляющий гидролиз и синтез АТФ; 2) исследовать связь между действием дельта-эндотоксина на этот фермент и на уровни кон -центрации некоторых ионов в гемолимфе; 3) изучить свойства дельа-эндотоксина как разобщителя окислительного фосфорилирования и .ыхания; 4) выяснить возможность усиления патологического процесса, вызванного дельта-эндотоксином, и повышения эффективности препаратов на основе Вас. Здиг1е1ех1818.

Научная новизна работы. Впервые проведено изучение действия ,ельта-эндотоксина Вас. ^11г1пе1епз1Б на АТФазную систему насе-;омых. Показано, что данная ферментная система играет важную роль , возникновении синдрома патологии, вызванной дельта-эндотоксином, ри этом установлено, что увеличение активности фермента под влия-ием патогена коррелирует с восприимчивостью насекомых к Вас. 1иг1пе1епз1Б. Обнаружено, что изменение концентрации ионов К+ гемолимфе гусениц является следствием воздействия дельта-эндотокси-а на активность - зависимой АТФазы. Полученные данные подверждают высказанное в литературе предположение о способности ельта-эндотоксина разобщающе действовать на процессы окислитель-ого фосфорилирования и дыхания.

Практическая ценность. Результаты проведенной работы, вскры-ающие механизмы взаимодействия патогена с организмом насекомого-хозяина, могут быть использованы в сельском хозяйстве и микро-иологической промышленности для повышения активности препаратов а основе Вас. -ЬЬш^г^ег^Б.

Реализация результатов исследований. Результаты исследований вились теоретической основой для разработки усовершенствованных нсектицидных бактериальных составов, которые показали высокую ффективность в хозяйствах Новосибирской и Кемеровской областей. пробация работы. Материалы диссертации доложены на У совеании энтомологов Сибири (Новосибирск, 1979); на 1У региональной ;онференции молодых ученых и специалистов Сибири и Дальнего Вос-:ока (Новосибирск, 1980); на научно-практической конференции мо-[одых ученых (Новосибирск, 1981); на заседании Новосибирского )тделения Всесоюзного микробиологического общества (1982).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ, юлучено авторское свидетельство на изобретение.

Объем работы. Диссертация состоит из введения, шести глав и зыводов общим объемом 129 страниц машинописного текста. Работа иллюстрирована 13 таблицами и 2.8 рисунками. Список литературы зостоит из 166 наименований, в том числе 106 на иностранном языке.

Заключение Диссертация по теме "Защита растений", Каменёк, Людмила Кирилловна

выводы

1. Установлено, что Mg2+ -зависимая АТФаза насекомых ак -тивируется при действии растворенного дельта-эндотоксина in vitro . Высокий уровень активирования характерен для боярышницы, капустной белянки; средний - для непарного шелкопряда, обыкновенного соснового пилильщика; крайне низкий - для ка -пустной совки. Изучение действия дельта-эндотоксина на АТФаз -ную систему насекомых in vitro дает возможность определить восприимчивость вида К Bac.thuringiensis.

2. Выявлена связь между величиной и характером изменения активности 1^2+-зависимой АТФазы под влиянием дельта-эндотоксина и энтобактерина±п vivo и особенностями протекания патологического процесса в организме насекомых. График активирования имеет два максимума - через 5-60 минут и через 12-30 часов после введения патогена.

3. У изученных насекомых обнаружены два типа защитной реакции на действие дельта-эндотоксина Bac.thuringiensis : обусловленная неспособностью растворять кристаллы из-за низкого рН - у обыкновенного соснового пилильщика и связаная с наработкой инактивирующих дельта-эндотоксин веществ в процессе онтогенеза либо с перестройками в организме, проходящими на молекулярном уровне и делающими недоступной обычную мишень дельта-эндотоксина - у капустной совки.

Показано, что изменение концентрации ионов К+ в гемо -лимфе является следствием воздействия эндотоксина на актив -ность Mg2+ -зависимой АТФазы. Увеличение активности фермента коррелирует с вызванным им повышением концентрации ионов в гемолимфе .

- Ill

5. Изменений концентрации wa+ под действием эндотоксина не происходило. В то не время наблюдалась тенденция к увеличению концентраций ионовса2+ и Mg2+ в течение 1-3 часов после его введения.

6. Изучение влияния дельта-эндотоксина на искусственную фосфолипидную мембрану, его ИК- и ЯМР-спектров показало, что он является разобщителем процессов окислительного фосфорилирования и дыхания в организме насекомых, способным предоставлять протон.

7. С помощью методов световой, сканирующей и трансмиссионной электронной микроскопии установлено, что дельта-эндотоксин Вас.thuringiensis оказывает сильный цитотоксический эффект на клетки непарного шелкопряда in vitro . Они вакуолизируются, набухают и, наконец, разрушаются. При этом ядра становятся менее плотными для электронов, сильно вакуолизированными , в клетке очень мало рибосом, митохондрии переходят в "конденсированную" форму с очень сокращенным матриксом и вакуолизированными пристани, которая характерна для действия разобщителей окислительного фосфорилирования и дыхания.

8. Изученные закономерности позволили предложить ряд прие -мов повышения эффективности бактериальных препаратов.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Каменёк, Людмила Кирилловна, Новосибирск

1. Африкян Э.К. Бактериальные инсектициды и их применение.- Изв. АН СССР Сер. биол., 1970, Ш I, с.14-29.

2. Африкян Э.К. Энтомопатогенные бактерии и их значение.- Ереван: изд-во АН Арм.ССР, 1973, 418 стр.

3. Бакеева Л.Е., Ясайтис A.A. Изменение структуры митохондрий в ответ на функциональные воздействия. -В сб.: Митохондрии. Молекулярные механизмы ферментативных реакций, М.: Наука, 1972, с. 56-64.

4. Батурин В.В., Батурина Л.И. Показатель водородных ионов (pH) пищеварительного канала насекомых при заражении кристалло-образующими бактериями. -В сб.: Микроорганизмы в защите растений от вредных насекомых. Иркутск, 1978, с.108-117.

5. Батурина Л.И. О резистентности насекомых. -В сб.: Использование микроорганизмов в борьбе с вредными насекомыми в сельском и лесном хозяйстве. Иркутск, 1978а, с.67-79.

6. Батурина Л.И., Кожева Т.А. Ферменты кишечного сока гусениц сибирского шелкопряда и изменение их активности при заражении Bacillus dendrolimus Talalaev . -Изв. Биол.-геогр. НИИ при Иркутском ун-те, 1970, т.25, с. 284-294.- из

7. Беллами Л. Инфракрасные спектры сложных молекул. -М.: Иностранная литература, 1963, 590 стр.

8. Гилмур Д. Метаболизм насекомых. -М.: Мир, 1968, 229стр.

9. Гулий В.В., Теплякова Т.В., Иванов Г.М. Микроорганизмы, полезные для биометода. -Новосибирск: Наука, 1981, 270 с.

10. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта. -М.: Колос, 1972, 333 с.

11. Журавская С.А., Юлдашов Т.М. Влияние инсектицидов на ак -тивность липазы пищеварительного тракта гусениц капустной сов-кн. В кн.: Физиология и токсикология насекомых-вредителей хлопчатника. Ташкент, 1970, с.155-160.

12. Ионин Б.И., Ершов Б.А. ЯМР-спектроскопия в органической химии. -Л.: Химия, 1967, 326 с.

13. Исакова Н.П., Разумова А.П. Значение лизоцима и гемоцитар-ной реакции в патогенезе бактериальных инфекций насекомых. -В сб.: Перспективы использования микроррганизмов в защите растений. Л., 1980, с.33-44.

14. Исакова Н.П., Разумова А.П. О факторах, влияющих на вое -приимчивость насекомых к бактериальным возбудителям на примере некоторых видов вредителей капусты. -В сб.: Биологическая защи-плодовых и овощных культур. Кишинев, 1971, с.180-182.

15. Каменёк Л.К. Выделение и очистка кристаллов эндотоксина Bacillus thuringiensis . -В сб.: Микробиологические методы борьбы с вредителями растений. Научно-технический бюллетень. Новоси- m бирск, 1980, в.2 (36), с.14-15.

16. Кандыбин Н.В., Гребельский С.Г., Череда М.Г., Стусь A.A. Овоцидное действие термостабильного экзотоксина Bacillus thuringiensis var.thuringiensis . -В сб.: Бактериальные средства и методы борьбы с насекомыми и грызунами. Л., 1972, с.50-54.

17. Катуха С.П., Честухина Г.Г., Степанов В.М. Химическая ха -рактеристика белков кристаллов Bacillus thuringiensis .-Химия природн. соедин., 1980, № 3, с.384-386.

18. Ким Нам Ук, Ли Хы Сон. Изучение кристаллических включений, содержащихся в Bacillus thuringiensis . -Сэнмульхак (КНДР), 1976, т.14, с.22-27. (Цит. по т Биология, 1976, 12Л570).

19. Комаров Ф.И., Коровкин Б.В., Меньшиков В.В. Биохимические исследования в клинике. -М.: Медицина, 1981, 407 с.

20. Коростель С.И., Лемеш Г.А. Изменение ДНК в тканях гусениц яблонной плодоножки под воздействием токсинов Bacillus thuringiensis . -В сб.: Тр.ВНИИ защиты растений.Л.,1974,в.42, с. 122-123.

21. Красилышков H.A., Гукасян А.Б. Bac.tuviensis nov. sp. -- новый возбудитель болезни сибирского шелкопряда. -Микробиология, 1964, т.33, с.664-671.

22. Кузманова И.Н. Взаимосвязь между экзопротеазной активностью, спорообразованием, образованием кристаллов и вирулентностью бактерий группы Вас.thuringiensis . -Прикл.биохимия и микробиология., 1976, т.12, с.495-500.

23. Jlanna H.B. Гемолимфа златогузки и патологические измене -ния в ней под влиянием энтомопатогенных бактерий. -В сб.: Защита растений. Киев, 1967, в.4, с.60-76.

24. Левин A.C., Завезенова Т.В. Левина И.И. Фракционный состав белка эндотоксинов и биохимическая характеристика энтомопатогенных бацилл группы thuringiensis . -В сб.: Микроорганизмы в защите растений от вредных насекомых. Иркутск, ИГУ, 1978, с.37-44.

25. Ленинджер А. Биохимия. М.: Мир, 1974, 957 с.

26. Лескова А.Я. Патологические изменения гемолимфы у гусениц яблонной моли при|заражении их энтобактерином. -В кн.: Исследования по биологическому методу борьбы с вредителями сельского илесного хозяйства. Новосибирск, 1964, с.61-64.ей

27. Лескова А.Я., Охотников В.И. О последствии на насекомых препаратов, содержащих экзотоксин Bacillus thuringiensis .-В сб.: Патогенные микроорганизмы вредителей растений. Рига: Зи-натне, 1972, с.55-58.

28. Лескова А.Я., Рыбина Л.М., Чумакова А.Я. Действие ^-экзотоксина Bacillus thuringiensis на насекомых. -В сб.: Бактериальные средства и методы борьбы с насекомыми и грызунами. Л., 1972, с.55-65.

29. Либерман Е.А. Мембранный потенциал митохондрий. -В сб.: Митохондрии. Молекулярные механизмы ферментативных реакций. М.: Наука, 1972, с.99-107.

30. Либерман Е.А., Мохова E.H., Скулачев В.П., Топалы В.П. Действие разобщителей окислительного фосфорилирования на бимолекулярные фосфолипидные мембраны. -Биофизика, 1968, т.13, с. 188-193.

31. Лисовская Н.П. Аденозинтрифосфатаза клеточных мембран иперенос ионов. -Успехи биол.химии, 1967, т.8, с.93-116.

32. Македонский В.В., Шебеста К., Хаджилов A.A. Подавление синтеза рибонуклеиновых кислот в печени мыши под действием экзотоксина из Bacillus thuringiensis . -В кн.: Клеточное ядро: морфология, физиология, биохимия. М.: Наука, 1972, с.183-190.

33. Малян А.Н., Акулова Е.А. О механизме стимулирования растворимой АТФазы из хлоропластов. -Биохимия, 1978, т.43, с.1206 -- I2II.

34. Мейнел Д., Мейнел Э. Экспериментальная микробиология. -М.: Мир, 1967, 347 с.

35. Методические указания по разработке планирования потребностей сельского хозяйства в химических средствах защиты растений. Л., 1972, 70 с.

36. Миселюнене И.С. Патологические изменения гемолимфы у гусениц капустной белянки при заражении их энтобактерином-3. 13 с. Деп. ЛитНИИНТИ 25.02.1976, №104-76.

37. Норрис Д.Р. Белковый кристаллический токсин Bacillus thuringiensis : биосинтез и физическое строение. -В кн.: Микроорганизмы в борьбе с вредными насекомыми и клещами. М.: Колос, 1976, с.190-197.

38. Плохинский H.A. Математические методы в биологии. -М.: МГУ, 1978, 265 с.

39. Ролан Ж.-К., Селоши А., Селоши Д. Атлас по биологии клетки. -М.: Мир, 1978, 118 с.

40. Секун Н.П. Влияние инсектицидов на активность пищевари -тельных ферментов насекомых. -Химия в сельском хозяйстве, 1969, Ш 5, с.40-42.

41. Снедекор Д.У. Статистические методы в применении к исследованию в сельском хозяйстве и биологии. -М.: Сельхозиздат, 1961, 503 с.

42. Ткачев В.М. Влияние энтобактерина на энтомофагов листогры-зущих вредителей сада. -В сб.: Микробиологические методы защиты растений. Кишинев, 1976, с.23-24.

43. Трофименков В.Н., Тумаркин Р.И. Получение чистых кристаллов ИЗ Культур Вас.thuringiensis var galleriae, Bac.insectus Guk . -Тр. ВНИИ микробиол. средств защиты растений и бактериа -льных препаратов. Кишинев, 1973, в.1, с.73-77.

44. Тыщенко В.П. Основы физиологии насекомых. -Л.: ЛГУ, 1976, ч.1, 362 с.

45. Уотсон Д.Д. Молекулярная биология гена. М.: Мир, 1967, 462 с.

46. Фрезер Р. Инфракрасная спектроскопия. -В кн.: Аналитические методы белковой химии. М.: Иностранная литература, 1963, с.329-393.

47. Харсун А.И. Биохимия насекомых. -Кишинев: Картя молдове-няскэ, 1976, 336 с.

48. Харсун А.И., Спасский A.A. Некоторые вопросы биохимии паразитизма бактерий у насекомых. -Успехи соврем, биол., 1977, т. 83, с.432-441.

49. Хеймпел А., Ангус Т. Бактериальные инсектициды. -Сельское хозяйство за рубежом.-Растениеводство, 1961, №11, с.58-66.

50. Хенней К.Л. Включение у бактерий. -В кн.:Анатомия бактерий. М.: Медгиз, i960, с.348-371.

51. Чиргадзе Ю.Н. Инфракрасные спектры и структура полипептидов и белков. -М.: Наука, 1965, 135 с.

52. Швецова О.И. Биологическое обоснование эффективности бактериального препарата энтобактерин-3 для борьбы с вредными насекомыми. -К. общ. биол., 1962, т.23, с.381-390.

53. Штерншис М.В. Спектрофотометрический метод определения концентрации микроорганизмов в суспензии. -В сб.: Биологические методы борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур. Научно-технический бюллетень. Новосибирск, 1976, в.16, с.44-50.

54. Щепетильникова В.А., Федоринчик Н.С. Биологический метод борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур. -М.: Колос, 1968, 112 с.

55. Albers R.vY. Biochemical aspect of active transport. Ann. Rev. biochem.,V.36, pp.727-756.

56. Angus T.A. A bacterial toxin paralysing silkworm larvae. 1954, V.173, PP.545-546.

57. Angus T.A. Association of toxicity with protein-crystalline inclusions of Bacillus sotto Ishiwata. Can. J. Microbiol., 1956a, V.2, pp.122-131.

58. Angus T.A. Extraction, purification and properties of Bacillus sotto toxin. Can. J. Microbiol., 1956 , pp.416-426.

59. Angus T.A. Comparative toxicity of the parasporal inclusions of three entomogenous bacteria. J. Invert. Pathol., 1967, V.9,pp.256-260.

60. Angus T.A. Similarity of effect of valinomicin and Bacillus thuringiensis parasporal protein in larvae of' Bombyx mori. J. Invert. Pathol., 1968, V.11, pp.145-146.

61. Bateson J.B. Isolation of the cristalline parasporal bodies of Bacillus thuringiensis. Nature, 1965, V.205, pp.622.

62. Benz G. Physiopathology and histochemistry. In.: Insect pathology, an advanced treatise. New York: Acad. Press, 1963, V.1, pp.299-338.

63. Benz G. Die Pufferkapazität von Blut und Verdaungssaft von Pieris brassicae und der Einfluss von Anoxie und Bacillus thurin-giensis-Endotoxin auf die Permeabilität der Darmwand. J. Insect Physiol., 1966, V.12, pp.137-151.

64. Broersma D.B., Buxton J.A. A comparative study of the action of' six crystalliferous bacteria on the cabage looper, Tricho-plusia ni. J. Invert. Pathol., 1967, V.9, pp.58-69.

65. Bulla I.A., Kramer Ii.J., Bechtel D.B., Davidson L.I. Entomo-cidal proteinaceous crystal of Bacillus thuringiensis. In: Liicro-biology-1976. Washington: D.C., 1976, pp.534-539.

66. Bürgergon A., de Barjac H. Nouvelles donnes sur le role de la toxine soluble thermostable produite par Bacillus thuringiensis Berliner. C. R. Acad. Sci.,'V.251, pp.911-912.

67. Cheng E.Y., Cutcomp L.K. Ageing in the honeybee, Apis melli-fera, as related to brain ATPases and their DDT sensitivity. J. Insect Physiol., 1972, V.18, pp.2285-2291.

68. Cooksey K.E. Purification of a protein from Bacillus thuringiensis toxic to a larvae of Lepidoptera. Biochem. J., 1968, V.106. pp.445-454.

69. Cooksey K.E., Donninger C., Norris J.R., Shanlcland D. Nerve-blocking effect of Bacillus thuringiensis protein toxin. J. Invert, Pathol., 1969, V.13, pp.461-462.

70. Delafield P.P., Somerville II.J., Rittenberg S.C. Immunological homology between crystal and spore protein of Bacillus thuringiensis. J. Bacteriol., 1968, V.96, pp.713-720.

71. Evlakhova A.A., Schwetzova O.J. Llethodes de selection des for- 120 mes pathogene de microorganismes. Entomophaga, 1964» men. 2, pp.521-529.

72. Past P.G., Angus T.A. Effect of parasporal inclusions of Bacillus thuringiensis var. sotto Ishiv/ata on the permeability of gut wall of Bombyx inori (Linnaeus) larvae. J. Invert. Pathol.,1965, V.7, pp.29-32.

73. Past P.G., Donaghue T.P. The ¿"-endotoxin of Bacillus thuringiensis. 2. On the mode of action. J. Invert. Pathol., 1971, V.18,pp.135-138.

74. Past P.G., I.Iilne R. Bacillus thuringiensis parasporal toxin, dissolution of crystal with retention of toxicity. J. Invert. Pathol., 1979, V.34, pp.319.

75. Fast P.G., Korrison I.K. The ¿"-endotoxin of Bacillus thuringiensis. 4» The effect of ¿-endotoxin on ion regulation by midgut tissue of Bombyx mori larvae. J. Invert. Pathol., 1972, V.20, pp.208-211.

76. Past P.G., Videnova E. The ¿"-endotoxin of Bacillus thuringiensis. 5» On the occurence of endotoxin fragments in hemolymph. J. Invert. Pathol., 1974, V.23, pp.280-284.

77. Paust R.M. In vitro chemical reaction of the ¿"-endotoxin produced by Bacillus thuringiensis var. dendrolimus with other proteins.J. Invert. Pathol., 1968, V.11, pp.465-475«

78. Paust R.LI., Dougherty E.M. Effect of the B.t. ¿5"-endotoxin produced by Bacillus thuringiensis var. dendrolimus on the hemolymph of the silkworm, Bombyx mori. J. Invert. Pathol., 1969,V.13, pp.155-157.

79. Paust R.H., Estes L.E. Silicon content of the parasporal crystal of the several crystalliferous bacteria. J. Invert. Pathol.,1966, V.8, pp.141-144.- 121

80. Faust R.M., Hallam G.M., Travers R.S. Degradation of paras-poral crystal produced by Bacillus thuringiensis var. kurstalci. J. Invert. Pathol., 1974a, V.24, pp.365-373.

81. Faust R.ÎI., Travers R.S., Hallam G. M. Preliminary investi-" gation on the molecular mode of action of the -endotoxin produced by Bacillus thuringiensis var. alesti. J. Invert. Pathol., 1974 , V.23, pp.259-260.

82. Faust R.M., Travers R.S., Heimpel A.M. Correlation of the biochemical and histological temporal sequence in Bacillus thuringiensis (^-endotoxin intoxication. Proc. 11 Ann. meet. Soc.invert. pathol., Prague, 1978, p.36.

83. Fiske C.H., Subbarow J. The colorimetric determination of phosphorus. J. Biol. Chem., 1925, V.66, pp.988-994.

84. Gingrich R.E. A flotation procedure for producing sporefree crystals from commercial formulation of Bacillus thuringiensis. J. Invert. Pathol., 1968, V.10, pp.180-184.

85. Glatron M.-F., Lecadet M.-M., Dedonder R. Etude de la dissolution du cristal de Bacillus thuringiensis par ultracentrifu-gation et identification des extremites H et G terminales. G. R. Acad. Sci., 1969, V.269, Ser. D, pp.1338-1341,

86. Goodman N.S., Gottfried R.J., Rogoff î.ï.II. Biphasic system for separation of spores and crystals of Bacillus thuringiensis. J. Bacterid., 1967, V.94, p.485.

87. Hannay C.L. Crystalline inclusions in aerobic sporeforming bacteria. Nature, 1953, V.172, p.1004«

88. Hannay C.L., Fitz-James P.C. The protein crystals of Bacillus thuringiensis Berliner. Can. J. Microbiol., 1955, V. 1, pp.694 -710.

89. He impel A.LI. , Angus T.A. The site of action of crystallife-rous bacteria in Lepidoptera larvae. J. Insect Pathol., 1959,V.1, pp.152-170.

90. Heimpel A.M., Angus T.A. Bacterial insecticides. Bacteriol. Rev., 1960, V.24, pp.266-288.

91. Heimpel A.M., Angus T.A. Diseases caused by certain spore-forming bacteria. In: Insect Pathology. An advanced treatise. Hew York: Acad. Press, V.2, 1963» pp.21-73.

92. Herbert B.N. , Gould II.J., Chain E.B. Crystal protein of Bacillus thuringiensis var. tolworthi. Subunit structure and toxicity to Pieris brassicae. Eur. J. Biochen., 1971, V.24,pp«365-375.

93. Holmes K.C., Monro R.E. Studies on the structure of paraspo-ral inclusions from Bacillus thuringiensis. J. Mol. Biol., 1965, V.14» pp.572-581.

94. Hoopingarner R., Materu Iv'I.E.A. Toxicology and histopathology of Bacillus thuringiensis Berliner to Galleria mellonella L. J. Invert, pathol., 1964, V.6, pp.26-39.

95. Jaques R.P. Methods anf effectiveness of distribution of microbial insecticides. Ann. IT. Y. Acad. Sci., 1973, V.217, pp.109119.

96. Jaros L-J. Gut flora of Galleria mellonella supressing ingested bacteria. J. Invert. Pathol., 1979, V.34, pp.192-198.

97. Krieg A. Turicin, a bacterio.cin produced by Bacillus thurin123 giensis. J. Invert. Pathol., 1970, V.15, p.291. * Krishna S.S., Saxena K.N. Digestion and absorbtion of food in Tribolium castaneum Herbst. Physiol. Zool., 1962, V.35, pp.6678.

98. Martouret D., L'Hoste J., Roche A. Action sur le mesente-ron de Pieris brassicae L. de la toxine l'inclusion parasporale de Bacillus thuringiensis. Entornophaga, 1965, V.10, pp.443-452.

99. Meretoja T., Carlberg G., Gripenberg U., Linnainmaa K., So-rsa M. Mutagenicity of Bacillus thuringiensis exotoxin. 1. Mammalian tests. Hereditas, 1977, V.85, pp.105-112.

100. Milne R., Murphy D., Past P.G. Bacillus thuringiensis &-endotoxin: an improved technique for the separation of crystals from spores. J. Invert. Pathol., 1977, V.29, pp.230-231.

101. Mitchell P. Chemiosmotic coupling in oxidative and phos-phothetic phosphorylation. Biol. Rev., 1965, V.41, p.445.

102. Monro R.E. Protein turnover and the formation of protein inclusions during sporulation of Bacillus thuringiensis. Bio-chem. J., 1961a, V.81, pp.225-232.- 125

103. Monro R.E. Protein turnouver and the formation of proteinparasporal inclusions in Bacillus thuringiensis. J.Biophys. Bio-chem. Cytol., 1961 , V.11, pp.321-331.

104. Murphy D.W., Sohi S.S., Past P.G. Bacillus thuringiensis enzym-digested delta endotoxin: effect on cultured insect cells. Science,1976, V.194, pp.954-956.

105. Murray E.D., Spencer E.Y. A simplified purification technique for parasporal inclusions from certain varieties of Bacillus thuringiensis. J. Invert, Pathol., 1966, V.8, pp.418-420.

106. Nagamatsu Y.,Tsutsui R., Ichinari J. Subunit structure and toxic components of <?"-endo toxin Bacillus thuringiensis. J. Invert. Pathol., 1978, V.32, pp.103-109.

107. Narayanan K., Jayaraj S. The effect of Bacillus thuringiensis endotoxin on hernolymph cation levels in the citrus leaf caterpillars, Papilio demoleus. J.Invert. Pathol., 1974a, V.23, pp.125-126.

108. Narayanan K., Jayaraj S. Mode of action of Bacillus thuringiensis. Patterns of nucleic asid synthesis in insect cells infected (Papilionidae: Lepidoptera). Indian J. Exp. Biol., 1974 , V.12, pp.89-91.

109. Nishiitsutsuji-Uwo J., Endo Y. Mode of action of Bacillus thuringiensis ¿"-endotoxin: general characteristics of intoxica- 126 ted Bombyx mori. J. Invert. Pathol., 1980, V.35, pp.219-228.

110. TTishiitsutsuj i-Uwo J., Endo Y., liimeno LI. Mode of actionof Bacillus Thuringiensis <f-endotoxin. Effect on TH-368 cells.

111. J. Invert. Pathol., 1979, V.34, pp.267-275. '

112. Hishiitsutsuji-Uv/o J., Ohsawa A., Nishimura U.S. Factorsaffecting the insecticidal activity of (^-endotoxin of Bacillusthuringiensis. J. Invert. Pathol., 1977, V.29, рр.1б2-1б9.

113. Peacock A.J., Bowler K., Anstee J.H. Demostration of I\Ta+-+ 2+

114. K -Llg -dependent ATPase in a preparation of two species of insects. Experientia, 1972, V.28, pp.901-902.

115. Pendleton J.R. Some properties of antibiotics from cultures of a strain of Bacillus thuringiensis. J. Invert. Pathol., 1968, V.12, p.477.

116. Pendleton I.R. Sodium and potassium fluxes in Philosamia ricini during Bacillus thuringiensis protein crystal intoxication. J. Invert. Pathol., 1970a, V.16, pp. 313-315.

117. Pendleton I.R. Toxicity of Bacillus Thuringiensis crystals and crystal digests for a phasmid, Carausius morosus. J. Invert. Pathol., 1970 , V.15, p.287.

118. Pendleton I.R., Morrison R.B. Separation of the spores and crystals of Bacillus thuringiensis. Nature, 1966, V.212, pp.728729.

119. Pristavko V.P., Dovzhenok N.V. Ascorbic acid influence on larvae blood cell number and susceptibility to bacterial and fungal infection in the codling moth Laspeyresia pomonella. J. Invert. Pathol., 1974, V.24, pp.165-168.

120. Ramakrishnan li. Observations on the toxicity of Bacillus thuringiensis for the silkworm, Bombyx mori. J. Invert. Pathol., 1968, V.10, pp.449-450.- IZ7

121. Sayles V.B., Arcmson J.N., Rosenthal A. Small polypeptide components of the Bacillus thuringiensis. Parasporal crystalline inclusion. Biochem. Biophys. Res. Goiiimun., 1970, V.41 , pp.11261133.

122. Sharpe E.S., Baker P.L. Ultrastructure of the unusual crystal of the HD-1 isolate of Bacillus thuringiensis var. kurstaki. J. Invert. Pathol., 1979, V.34, pp.320-322.

123. Sharpe E.S.,Herman A.I., Toolan S.G. Separation of spores and parasporal crystals of Bacillus thuringiensis by flotation. J. Invert. Pathol., 1979, V.34, pp.315-316.

124. Siden I., Dalhammer G., Telander B., Boman E.G., Somerville H.J. Virulence factors in Bacillus thuringiensis: purification and properties of a protein . inhibitor of immunity in insect. J. Gen. Microbiol., 1979, V.114, pp.45-52.

125. Skou J.C. Enzymatic basis for active transport of lia+ and K+ across the cell membrane. Physiol. Rev.,1965, V.45, pp.596-617.

126. Smirnoff W.A. Biochemical exploration in insect pathology. Curr. Top. Compar. Pathobiol.,1973, V.2, pp.89-106.

127. Smirnoff W.A., Valero J.R. Perturbations metaboliques chez Choristoneura fumiferana Clemens au cours ae 1'infection par Bacillus thuringiensis seul ou en presence de chitinase. Rev. Ca-nad. Biol., 1972, V.31, pp.163-169.

128. Smirnoff W.A., Valero J.R. Metabolic exploration in insects: variations in potassium and calcium levels in insects during various infections. J. Invert. Pathol., 1980, V.35, pp.311-313.

129. Somerville II.J. Microbial Toxins. Ann. N. Y. Acad. Sci. , 1973, V.217, pp.93-108.

130. Somerville II.J. The insecticidal endotoxin of Bacillus thuringiensis. Pontif. acad. Sci. scr. varia, 1977, P41 , pp.253-274.

131. Soraerville H.J. Insect toxin in spores and protein crystals of Bacillus thuringiensis. Trends Biochem. Sei., 1978, V.3» pp. 108-110.

132. Soraerville K.J., Delafield P.P., Rittenberg S.C. Biochemical homology between crystal and spore protein of Bacillus thuringiensis. J. Bacteriol., 1968, V.96, pp.721-726.

133. Spencer E. Comparative amino acid composition of the para-sporal inclusions of five entomogenous bacteria. J. Invert. Pathol., 1968, V.10, pp.444-445.

134. Steinhaus E.A., Jerrel E.A. Puether observation on Bacillus thuringiensis Berliner and other sporeforming bacteria. Hilgar-dia, 1954, V.23, pp.1-23.

135. Sutter G.R., Raun E.S. Histopathology of european-corn-borer larvae treated with Bacillus thuringiensis. J. Invert. Pathol., 1967, V.9, pp.90-103.

136. Toumanoff C. L'action de Bacillus cereus var. alesti Toum. et Vago sur les chenilles de Galleria mellonella L. et Hypomome-uta cognatella Hb. Ann. inst. Pasteur, 1954, V.86, pp.570-578.

137. Travers R.S., Paust R.M., Reichelderfer O.P. Effect of Bacillus thuringiensis var. kurstaki S-endotoxin on isolated le-pidopteran mitochondria. J. Invert. Pathol., 1976, V.28, pp.351356.

138. Trümpi B. Analytische Untersuchungen am ^-Endotoxin von Ba' cillus thuringiensis. Zbl. Bacteriol., Parasitenk., Infections-krankh. Hyg., 1976, B.131, S.305-360.

139. Turbeck B.O., Nedergaard S., Kruse H. An anion-stimulated adenosine triphosphatase from the potassiumtransporting midgut of the larvae of Hyalophora cecropia. Biochim. Biophys. Acta, 1968, V.163, pp.354-361.

140. Vankova J., Horska K., Sebesta K. The fate of exotoxin of Bacillus thuringiensis in Galleria mellonella caterpillars. J. Invert. Pathol., 1974, V.23, pp.209-212.

141. Vankova J. The heat-stable exotoxin of Bacillus thuringiensis. Folia microbiol., 1978, V.23, pp.162-174.

142. V/ojtczak A.B., Chmurzynska W., Wojtczak L. Intracellular localization of enzymes in waxmoth, Galleria mellonella L. Acta Biol, expt., 1958, V.18, pp.249-264.

143. Young I.E., Fitz-James P.C. Chemical and morphological studies of bacterial spore formation. 2. Spore and parasporal protein formation in Bacillus cereus var. alesti. J. Biophys. Biochem. Cytol., 1959, V.6, pp.483-489.

144. Johnson D.E. Toxicity of Bacillus thuringiensis entomocidal protein toward cultured insect tissue. J. Invert. Pathol., 1981, V. 38, pp. 94-101.