Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Особенности алло- и гетероиммунного ответа трансгенных по рилизинг-фактору гормона роста (mMT1-hGRF) и интактных свиней

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гусев, Игорь Викторович

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Трансгенные животные и их значение в животноводстве

1.2. Связь генетического полиморфизма соматотропина с количественными признаками животных

1.3. Генетический контроль иммунного ответа

1.4. Гены иммунного ответа (Ir-genes)

1.5. Клетки иммунной системы

1.6. Механизм антителообразования ;

•Д' ■

1.7. Структура и функции антител! »

1.8. Функция ядрышковых организаторов и особенности их строения у свиней

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Динамика выработки агглютинирующих и гемолизи-рующих антител у свиней при аллоиммунизации эрит-роцитарными антигенами

3.2. Уровень естественных антител, выявленный у трансгенных и интактных свиней

3.3. Иммунный ответ у свиней при однократной гетероим-мунизации эритроцитами барана

3.4. Динамика выработки агглютининов у трансгенных и интактных свиней при гетероиммунизации

3.5. Динамика выработки гемолизинов у трансгенных и интактных свиней при гетероиммунизации

3.6. Корреляционный анализ уровня агглютининов и гемолизинов при гетероиммунизации свиней

3.7. Морфологическая характеристика ЯОР у свиней

3.8. Влияние иммунизации на активность ЯОР

3.9. Влияние иммунизации на пролиферативную активность лимфоцитов

Введение Диссертация по биологии, на тему "Особенности алло- и гетероиммунного ответа трансгенных по рилизинг-фактору гормона роста (mMT1-hGRF) и интактных свиней"

Актуальность темы. С начала 90-х годов XX столетия в лабораториях многих стран ведутся интенсивные работы по генетической трансформации, позволяющие получать животных с запрограммированными свойствами. Это дает возможность повысить продуктивность и генетическую устойчивость животных к заболеваниям, использовать их в качестве продуцентов биологически активных веществ, биомоделей, доноров органов и тканей при гете-ротрансплантации (Эрнст JI. К., 1993; Brem G., 1993).

Вместе с тем, уже на ранних этапах исследований стало ясно, что взаимодействие интродуцированной конструкции и генома-хозяина не может быть сведено к простому суммированию различных генетических задатков. Как оказалось, интеграция чужеродного гена часто влечет за собой целый спектр непредсказуемых явлений модификационной и мутационной природы. В связи с этим возникла задача разработки методов определения взаимодействия экзогена с геномом с целью повышения эффективности получения и размножения генетически трансформированных животных.

В связи с этим, представляет интерес оценка их биологических особенностей и в первую очередь особенностей функционирования иммунной системы.

Цель и задачи исследования. Цель работы состояла в оценке функциональных особенностей иммунной системы трансгенных по рилизинг-фактору гормона роста человека (mMTl-hGRF) свиней для разработки тест-системы, характеризующей иммунный статус свиней.

В задачи исследований входило определение реактивности иммунной системы свиней при однократной иммунизации эритроцитарными антигенами (ЕА), с учетом их иммуногенности и совместимости. При этом у свиней анализировали следующие показатели:

- наличие в сыворотке крови естественных антител-агглютининов и гемолизинов;

- динамику выработки антител-агглютининов и гемолизинов на введение алло-ЕА-иммуногенов;

- динамику выработки антител-агглютининов и гемолизинов на введение гетеро-ЕА-иммуногенов;

- характеристику ядрышкообразующих районов (ЯОР);

- динамику активности генов рибосомной РНК (рРНК) и пролиферативной активности лимфоцитов при гетероиммунизации.

Научная новизна и практическая значимость. Впервые определены особенности формирования иммунного ответа у трансгенных свиней при гетероиммунизации, динамика иммунного ответа и функционального состояния иммунокомпетентных клеток, показана целесообразность использования уровня гетероиммунного ответа в качестве теста, характеризующего иммунный статус организма.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на научных отчетах ВИЖа 1999-2000 гг.; на Международной научно-практической конференции «Повышение эффективности ведения свиноводства», Быково, июнь, 1999 г.; на научной конференции ВИЖа «Достижения молодых ученых в области животноводства», Дубровицы, июнь, 2000 г.; на III международной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве», Боровск, сентябрь, 2000 г.; на совместном заседании отделов сертификации, биотехнологии и эндокринологии ВИЖа, октябрь, 2000 г. 6

Основные положения, выносимые на защиту;

1. Трансгенные свиньи имеют более высокий уровень естественных гетероантител-гемолизинов в сыворотке крови по сравнению с интактными.

2. Метод гетероиммунизации эритроцитами барана с последующим контролем уровня иммунного ответа по нарастанию титров агглютининов и гемолизинов - информативная характеристика иммунной системы трансгенных свиней.

3. Трансгенные по гену соматолиберина свиньи характеризуются повышенным уровнем активности генов рРНК в лимфоцитах и более высокой пролиферативной активностью иммуннокомпетентных клеток.

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликованы 4 научные работы.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов и обсуждения собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы. Объем диссертации 114 страниц машинописного текста, включает 16 таблиц и 15 рисунков. Список литературы включает 172 источника, в том числе 92 на иностранных языках.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Гусев, Игорь Викторович

5. ВЫВОДЫ

1. Однократная аллоиммунизация свиней эритроцитными антигенами не позволяет дифференцировать их по уровню иммунореактивности. Титры антител у реагировавших животных не превышали 1:4 по агглютининам и гемолизинам, число слабо реагировавших животных на инъекцию аллоанти-гена составило 65%, а 35% свиней вовсе не реагировали.

2. Установлено, что трансгенные свиньи имели более высокий уровень спонтанных гетероантител - гемолизинов в сыворотке крови по сравнению с интактными (1о& 4,13±0,35; 1о& 2,67±0,60; р<0,05).

3. Однократная гетероиммунизация позволила получить у подопытных свиней ярко выраженный иммунный ответ у 100% животных, достигавший максимальной выраженности по гемолизинам на 7-ой день (титр 1о§2 7,69±0,45), а по агглютининам на 14-й день (титр \ctg2 4,89±0,36).

4. Динамика гетероиммунного ответа трансгенных и интактных свиней имела идентичный характер по агглютининам, однако уровнь выработки антител у трансгенных животных во все периоды контроля был выше на 9-24%.

5. Независимо от уровня спонтанных антител-гемолизинов максимальное плато иммунного ответа у животных обеих групп было достигнуто на 7-й день. В дальнейшем у трансгенных животных уровень антител сохранялся до 21 дня, а у интактных свиней он снизился к 14 дню.

6. Установлено, что между числом ЯОР и интенсивностью иммунного ответа у свиней существует прямая связь. На 7 день после иммунизации корреляция между средним числом активных ЯОР и титрами агглютининов составила 0,72 ± 0,26 (р<0,05).

7. Свиньи, трансгенные по рилизинг-фактору гормона роста (тМТ1-ЬОКР), характеризуются повышением уровня активности генов рРНК в лим

95 фоцитах и повышенной пролиферативной активностью иммунокомпетент-ных клеток. Среднее значение ЯОР и митотического индекса у трансгенных животных были равны 2,77± 0,08 и 5,46 ± 0,47, при 2,54± 0,06 и 4,24 ± 0,43 в контроле (р<0,05).

8. Уровень активности ЯОР у свиней характеризуется высокой устойчивостью на протяжении длительного времени. Величина корреляции между числом активных ЯОР по периодам опыта составила от 0,5 до 0,93 (р<0,05),что позволяет использовать этот показатель в качестве теста для оценки состояния белкового синтеза.

96

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Научным учреждениям, при создании и разведении новых форм генетически трансформированных животных необходимо учитывать особенности состояния их иммунной системы. С целью оценки иммунного статуса трансгенных и интактных свиней рекомендуем использовать метод гетероиммуни-зации эритроцитами барана с последующим контролем уровня иммунного ответа по нарастанию титров агглютининов и гемолизинов в сыворотке крови.

Для оценки функциональных особенностей иммунокомпетентных клеток в качестве теста, отражающего состояние систем белкового синтеза в клетке, использовать метод окраски ЯОР азотнокислым серебром.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Материалы наших исследований свидетельствуют о том, что в результате гетероиммунизации ЭБ у свиней наблюдается четко выраженный иммунный ответ. Динамика иммунной реакции на гетероантиген у трансгенных и интактных свиней в значительной мере совпадает, но у первых она более выражена. Обнаружено сходство в динамике иммунного ответа, активности ЯОР и пролиферативных процессов у иммунокомпетентных клеток.

Между уровнем активности ЯОР и иммунным ответом существует прямая связь. Животные с повышенным уровнем активности кластеров генов рРНК характеризуются более высоким титром специфических белков.

Полученные нами данные указывают на то, что гетероиммунизация и последующий анализ иммунного ответа могут быть использованы в качестве теста при изучении особенностей функционирования иммунной системы у свиней, в том числе и трансгенных.

Установлено, что при однократной аллоиммунизации дифференцированный иммунный ответ у свиней слабо выражен. Аллоиммунизация не может быть использована в качестве теста, характеризующего иммунную реактивность животных.

Увеличение нагрузки на иммунную систему оказалось эффективным приемом, позволяющим не только оценить динамику функциональной активности иммунокомпетентных клеток. В сочетании с окраской ЯОР А§1чЮз этот прием позволил выяснить характер регуляции р-генов у свиней.

Результаты наших исследований свидетельствуют о том, что после иммунизации у свиней процессы активации биосинтеза и клеточной пролиферации происходят синхронно и наиболее интенсивно идут в первые дни.

Причем пролиферация клеток идет более интенсивно и заканчивается раньше, чем процессы биосинтеза.

Очевидно, что к 7 дню уже начинается затухание пролиферативных процессов. Но синтетические процессы идут еще достаточно интенсивно. Это полностью согласуется с данными, полученными при изучении динамики иммунного ответа у других видов животных (Гауровиц Ф., 1969). Продукты распада иммуноглобулинов и в первую очередь фрагменты Fab', F(ab')2 и Fc угнетают митогензависимую пролиферацию, но в то же время являются стимуляторами синтеза антител (Кульберг А. Я., 1985)

Анализ динамики числа ЯОР и клеточной пролиферации свидетельствует о том, что эти процессы продолжаются до 14 дня, но после 7 дня связь их с уровнем антител практически отсутствует. Это обусловлено тем, что в более поздние сроки после иммунизации концентрация антител в сыворотке зависит не столько от интенсивности их синтеза и числа продуцирующих клеток, сколько от количества молекул, синтезированных в предыдущий период и времени их полураспада, которое по литературным данным составляет от 20 до 40 суток. Известно, что этот показатель зависит от массы тела (Гауровиц Ф., 1969).

Механизм активации дополнительных кластеров рРНК генов в лимфоцитах у неиммунизированных, трансгенных по гену соматолиберина человека свиней, не совсем понятен. Не исключено, что он связан с повышенной секрецией соматотропина и воздействием этого гормона на регуляторные механизмы клеток.

Основным свойством гормона роста является его воздействие на белковый обмен (Kostyo J. L., Nutting D. К., 1979). Гормон роста активирует синтез нуклеиновых кислот, в том числе иРНК и тРНК (Kostyo J. L, 1980). Процесс сопровождается ростом числа рибосом и полисом, т.е. наблюдается увеличение активности всего белково-синтезирующего аппарата. Это приводит к усилению синтеза белков. Однако конкретизировать его механизм довольно сложно, поскольку гормон роста не имеет определенной периферической мишени (Полтавцева Р. А., 1997). Некоторые возможные пути активации ри-босомных генов под действием соматолиберина показаны на рисунке 15. г«потаяамУо

Псрскрссгная реакция с Т-хслпсРамы 4

Гипофиз 4 ПроЦЕООННГ

У4--4 антигена

СТГ;

Органы. | <&?

СИНТЕ-Ф* V,® — '

РУХХЦИЕ | ® ТЦ. ипррц».®

-— ИПФР12 © © I

О О О 4

О -О -От

-ХЕЛПЕРЫ

Я—клетки —^ анти—РФ1

В-КПЕТКИ аити—РФ1 I

В-КЛЕТКИ анти-РФП*^

В—КЛЕТКИ. НЕСУЩИЕ РЕЦЕПТОРЫ К инсулину ш

Усиление пролиферации В—КЛЕТОК 4

Активация пРоЦессоЬ £ыосинтЕаа

Йкти&аЦия гемоЬ рРНК

Рис. 15. Варианты активации генов рРНК у трансгенных свиней

Активирующее действие соматотропина возникает в результате его связывания со специфическими рецепторами клеток. Для ряда других гормонов, в том числе инсулина показано, что его функциональная активность зависит от способности "сшивать" на поверхности клетки специфические рецепторы (Кульберг А. Я., 1985). Известно, что соматотропин обладает инсу-линоподобным действием, ассоциированным с его фрагментом с 31 по 44 аминокислотный остаток (Панков Ю. А., Булатов А. А., 1988). Не исключено, что ЯОР-стимулирующее действие соматолиберина возникает в результате связывания соматотропина или инсулиноподобного фактора роста с рецепторами к инсулину. Но необходимо отметить, что стимулирующее действие инсулина на В-клетки проявляется в том случае, если они предварительно активированы, так как интактные клетки содержат незначительное количество рецепторов к этому гормону (Витета Э. С. с соавт.,1987). Скорее всего, на лимфоцитах существуют рецепторы к соматотропину или инсулиноподобно-му фактору роста.

Возможно и то, что в этом процессе принимают участие механизмы иммунного ответа, связанные взаимодействием В-клеток и Т-хелперов или супрессоров. Известно, что очень малые количества антител против многих аутоантигенов обнаруживаются в крови практически всех здоровых индивидуумов (Петров Р. В., 1982). Очевидно, клетки, способные вырабатывать ау-тоантитела в организме, существуют постоянно, но их или очень мало, или их активность супресирована. Вполне вероятно, что у определенной части трансгенных животных может развиваться своеобразный аутоиммунный ответ на наличие в крови полипептидов, синтез которых кодируется генами со-матотропного ряда. В основе его может лежать наличие среди компонентов соматотропной оси перекрестно реагирующих антигенов. Причиной возникновения перекрестной реакции может быть полиморфизм гормонов. Подтверждением чему может служить тот факт, что даже единичные аминокислотные замены приводят к изменению антигенных свойств белка (Витета Э. С. с соавт.,1987). В экспериментах, проведенных Рябых В. П. с соавт.(1995), показано наличие иммунного ответа у свиней на инъекцию чужеродного со-матотропина.

Не исключена и иммунная реакция на экзогенный соматолиберин. Это предположение не противоречит представлениям о механизмах формирования толерантности. Для ряда антигенов период становления толерантности заканчивается уже в эмбриогенезе. Время возникновения толерантности к продуктам соматотропного ряда, как и начало секреции экзогенного гормона не известно.

Такой вывод, казалось бы, логически вытекает из полученных нами данных об активности генов рРНК в ходе иммунного ответа. Подобный механизм активации их у трансгенов согласуется и с тем фактом, что у трансгенных животных часто отсутствует фенотипическое выражение действия экзогена. Это можно связать с тем, что продукт экзогена блокируется синтезируемыми в ответ на его выделение антителами. Однако иммунными механизмами трудно объяснить причины возникновения числовых вариаций активных ЯОР в лимфоцитах у нетрансгенных животных, отмеченных нами, а также описанных другими авторами у большинства обследованных пород свиней и других видов. Скорее всего, у животных действуют разные механизмы активации генов рРНК. При этом интеграция в геном экзогенной конструкции (ген соматолиберина человека) различными путями оказывает модифицирующее влияние на активность ЯОР. Анализ этого показателя представляет интерес при изучении физиологических особенностей животных, в том числе и генетически трансформированных.

Уровень активности ЯОР у свиней характеризуется высокой устойчивостью на протяжении длительного времени. Очевидно, в значительной мере этот признак генетически детерминирован. Что позволяет использовать его в качестве теста для оценки состояния клеточных систем белкового синтеза у животных.

Вместе с тем этот анализ довольно трудоемок, т.к. требует микрокопирования десятков клеток. Естественно возникает вопрос о возможности снижения трудоемкости этого процесса. На это косвенно указывает довольно высокий консерватизм числа ЯОР у животных. Мы определили оптимальное число клеток, необходимое для оценки средней активности ЯОР. В силу того,

93 что число ЯОР как и большинство цитологических показателей подчиняется биноминальному распределению, использование традиционных методов расчета объема выборки (Меркурьева Е. К., 1970) в данном случае малоэффективно. Кроме того, в эти формулы входит довольно субъективный критерий "допустимая погрешность". Поэтому, мы воспользовались разработанным А.Н. Завада (1987) подходом, основанным на корреляционном анализе.

Мы проанализировали связь между оценкой уровня ЯОР по стандартному и уменьшенному числу клеток. Оказалось, что даже при анализе 10 клеток среднее число ЯОР высоко коррелирует с полной оценкой, а при анализе 20 и 30 клеток корреляция с оценкой по 50 клеткам близка к единице. Следовательно, для анализа вполне достаточно 30 клеток. В результате уменьшения затрат времени на обследование одного животного представляется возможным без снижения точности значительно увеличить контингент обследованных животных. Это позволяет повысить эффективность использования данного метода.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гусев, Игорь Викторович, Дубровицы, Московской обл.

1. Балацкий В. Н. Генетический полиморфизм соматотропина и ассоциация его аллелей количественными признаками животных // Сельскохозяйственная биология. 1998. - № 4. - С. 43-54.

2. Баранов О. К. Молекулярно генетические системы иммунологического распознавания // Проблемы и перспективы современной иммунологии. -Новосибирск: Наука, - 1988. - С. 14-35.

3. Безенко С. П. Методические рекомендации по изготовлению реагентов для определения групп крови свиней. -Дубровицы. 1980.- 24 с.

4. Босток К., Самнер Э. Хромосома эукариотической клетки. М.: Мир.-1981. -598 с.

5. Букаров Н. Г. Антигены гистосовместимости сельскохозяйственных животных // IV съезд ВОГИС им. Н. И. Вавилова. М.:Наука. - 1982. - С. 202-203.

6. Вайсман Б., Капелинская Т., Городецкий С., Дыбан А. Возможность получения животных продуцентов биологически активных препаратов путем микроинъекции клонированных генов в яйцеклетки // Антибиотики и химиотерапия.- 1988.- T.XXXIIL- №.2.

7. Вейсман И., Худ Л., Вуд В. Введение в иммунологию. М. 1983. - 356 с.

8. Верховский O.A., Федоров Ю.Н., Сологуб В.К. и др. Использование моно-клональных антител для оценки антигенных свойств иммуноглобулинов животных// Сельскохозяйственная биология.- 1995.- №.4.- С.94-100.

9. Витета Э. С., Брукс К., Айзексон П., Лейтон Д., Пюре Э., Дороти Ю. Рецепторы В-лимфоцитов. // В кн. Иммунология под ред. У. Пола. М.: Мир.-1987.-Т. 1.-С. 337-374.

10. Ю.Вишневская С. С., Всеволдов Э. Б. Индивидуальная изменчивость и наследование числа и размеров ядрышкообразующих районов хромосом у домашних свиней // Генетика. 1986. - Т. 22. - № 4. - С. 290 - 298.

11. П.Газарян К. Трансгенные животные: перспективы использования в животноводстве// Сельскохозяйственная биология.- 1988.- №.2.- С.31-39.

12. Гауровиц Ф. Иммунохимия и биосинтез антител. М.: Мир. 1969. -416 с.

13. Глазко В. И. ДНК-технологии животных. Киев. 1997.

14. Глазко В. И. Проблемы использования ДНК-технологий у животных // Сельскохозяйственная биология. 1998. - № 4. - С. 33-42.

15. Глазко В. И., Глазко Г. В. Русско-англо-украинский толковый словарь по прикладной генетике, ДНК-технологии и биоинформатике. Киев: Нора-принт. 2000. - 464 с.

16. Гольдман И.Л., Башкеев Е.Д., Гоголевский П. А. Прогрессивная технология получения трансгенных овец // Докл. РАСХН 1992.- № 9-10.-С. 25-30.

17. Гольдман И.Л., Разин C.B., Эрнст Л.К. и др. Молекулярно-биологические аспекты проблемы позиционно-независимой экспрессии чужеродных генов в клетках трансгенных животных// Биотехнология 1994.- № 2.- С.3-8.

18. Гольдман И.Л., Эрнст Л.К., Гоголевский П. и др. Теоретические вопросы получения трансгенных животных. Эксперименты на кроликах // Генно-инженерные сельскохозяйственные животные / Сб. науч. тр.- Вып.1.-1995.- С.93-102.

19. Городецкий С. И. Генетическая инженерия высших животных // Ж. Всесоюзного химического общества им. Д. И. Менделеева. 1984. - Т. 29. -№2.-С. 153-157.

20. Грабовская И. Л., Мамаева С. Е., Мамаев H. Н. Изучение характера серебрения и ассоциативной способности акроцентрических хромосом нормальных и лейкозных клеток человека // Цитология. 1986. - Т. 28. - № 3. С.-350-359.

21. Графодатский А. С. Ядрышкообразующие районы хромосом домашней свиньи // Цитология и генетика. 1981. - Т. 15. - № 5. - С. 29-31.

22. Графодатский А. С., Раджабли С. И. Хромосомы сельскохозяйственных и лабораторных млекопитающих. Атлас. Новосибирск.: Наука. — 1988127 с.

23. Дыбан А. П., Городецкий С. И. трансгенные млекопитающие: изучение фенотипических эффектов гормона роста человека, индуцированного животным // Биотехнология. 1989. - Т. 3. - № 3. - С. 352-357.

24. Захаров А. Ф., Бенюш В. А., Кулешов Н. П., Барановская Л. И. Хромосомы человека// Атлас.- М.:Медицина. 1982. - 263 с.

25. ЗО.Зенгбуш П. Молекулярная и клеточная биология. М.: Мир. 1982. - Т. 3. -С. 264-268.

26. Зиновьева Н. А., Попов А. Н., Эрнст Л. К. и др. Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве. Дубровицы. 1998. - 47 с.

27. Зиновьева Н. А., Эрнст Л. К., Брем Г. Трансгенные животные и возможности их использования. ВИЖ. 2001. - 128 с.

28. Калашникова Л. А. Получение и размножение трансгенных животных // Современные аспекты селекции, биотехнологии, информатизации в племенном животноводстве /Сб. ВНИИплем.- 1997.- С.257-264.

29. Киселева Т. Ю., Яковлев А. Ф., Смирнов А. Ф. О полиморфизме активности районов ядрышкого организатора хромосом у различных пород крупного рогатого скота // С.-х. биология. 1985. - № 4. - С. 100-103.

30. Кленовицкий П. М., Завада А. Н., Живалев И. К., Некрасов А. А. Ядрыш-кообразующие районы у трансгенных свиней // Генноинженерные сельскохозяйственные животные / Сб. науч. тр. 1995.- Вып. 1.- С. 64-67.

31. Кленовицкий П. М., Завада А. Н., Живалев И. К., Некрасов А. А. Полиморфизм ядрышкообразующих районов (ЯОР) у свиней // П-я международная конференция. Молекулярно-генетические маркеры животных. Тезисы докладов. Киев. - 1996. - С. 83-84.

32. Кленовицкий П. М., Некрасов А. А. Мутационные изменения у трансгенных животных // Актуальные проблемы развития животноводства. / Труды ВИЖа. 1998. - Вып. 57. - Ч. 4. - С.-184-191.

33. Кленовицкий П. М., Моисейкина Л. Т., Марзанов Н. С. Цитогенетика сельскохозяйственных животных. Элиста. 1999. - 141 с.

34. Кузнецов А. В. Трансгенные животные. Приемы конструирования. // Биотехнология. 1995. - Т. 3-4. - С. 3-6.

35. Кульберг А. Я. Молекулярная иммунология. М.: Высшая школа. 1985. -287 с.

36. Купер М. Д.Дерни Д., Шер И., Кантор X. Клетки иммунной системы // В кн. Иммунология под ред. У. Пола. М.: Мир. 1987. - Т. 1. - С. 74-204.

37. Лежава Т. А. Активность ядрышкообразующих районов хромосом человека в зависимости от возраста // Цитология и генетика. 1984. - Т. 18. -№1. - С. 40-46.

38. Ляпунова Н. А. Ядрышкообразующие хромосомы и регуляции числа копий рибосомных генов в геномах эукариот. // Тезисы докладов V съезда ВОГИС им. Н. И. Вавилова. -М.: 1987. - Т. VI. - С. 37-38.

39. Мамаев Н. Н., Мамаева С. Е. Структура и функция ядрышкообразующих районов хромосом: молекулярные, цитологические и клинические аспекты // Цитология 1992. - Т. 34. - № Ю. - С. 3-25.

40. Марзанов Н. С. Иммунология и иммуногенетика овец и коз. Кишинев: Штиинца.-1991.-240 с.

41. Медведев С. Ю., Козикова Л. В., Бавин В. Г., Яковлев А. Ф. Рост и развитие трансгенных кроликов и свиней с перенесенным геном рилизинг-фактора гормона роста человека // Сельскохозяйственная биология.-1995.- №.6.- С.43-48.

42. Меркурьева Е. К. Биометрия в селекции и генетики сельскохозяйственных животных. М.: Колос, 1970. - 423 с.

43. Методы исследований в иммунологии / под ред. Лефковитса И., Перниса Б. -М.:Мир.- 1981.-485 с.

44. Назаренко С. А., Карташева О. Г. Сравнительный анализ активности яд-рышкообразующих районов хромосом у спонтанных и медицинских абор-тусов // Генетика. 1991. - Т. 27. - № 6. - С. 1095-1103.

45. Панков Ю. А., Булатов А. А. Структурно-функциональное изучение гормонов роста. // В кн. "Гормон роста человека". Сб. научн. тр. 1988. - С. 7-14.

46. Панченко А. И. Влияние иммуногенетических показателей и условий содержания на воспроизводительные качества свиноматок // Дисс. . канд. с.-х. наук. Дубровицы, 1985. - 136 с.

47. Пендина А. А., Кузнецова Т. В., Баранов В. С. Полиморфизм ядрышкооб-разующих районов хромосом у эмбрионов человека // Цитология. 2000. -Т. 42. -№ 6. -С. 587-592.

48. Петров Р. В. Иммунология. М.: Медицина, 1982. - 368 с.

49. Пол У. Е. Иммунная система // В кн. Иммунология под ред. У. Пола. М.: Мир. - 1987.-Т. 1.-С. 14-45.

50. Пол У. Е. Гены иммунного ответа // В кн. Иммунология под ред. У. Пола. М.: Мир. 1988. - Т. 2. - С. 213-237.

51. Полтавцева Р. А. Физиолого биохимические процессы у свиней, трансгенных по конструкции ^^АР-ЬвН // Дисс. . канд. биол. наук. - Дубро-вицы, 1997. - 135 с.

52. Прокофьева-Бельговская А. А. Материальные основы наследственности // Гл.1. В кн. Основы цитогенетики человека / под ред. А. А. Прокофьевой-Бельговской. М.: Медицина 1969.— С. 9-63.

53. Росохатский С., Смирнов А. Ф., Ефимов А. Ф. и др. Повышение скорости роста кроликов, трансгенных по гену РФГР человека // Доклады РАСХН.1994.- №.2.- С.24-26.

54. Сакс Д. Г. Главный комплекс гистосовместимости // В кн. Иммунология под ред. У. Пола. М.: Мир. - 1988. - Т. 2. - С. 5-72.

55. Серов О. Л. Генетическая трансформация животных посредством введения чужеродных генов в зиготы // Онтогенез. 1985. - Т. 16. - № 6. -С.553-567.

56. Сидорова Е. В. Гены иммуноглобулинов // Успехи соврем, биологии. -1982.-Т. 94.-№ 1.-С. 38-55.

57. Созанский О. А. Межклеточная вариабельность состояния ядрышко-образующих районов хромосом человека // Автореф. канд. дис. М. — 1983.-26 с.

58. Созанский О. А., Коновалова Т. В., Яворовская О. М., Гулеюк Н. JL Структурная стабильность ядрышкообразующих районов хромосом человека // В кн. Хромосомы человека: в норме и патологии. М.: Наука. 1989. - 156 с.

59. Стент Г., Кэлидер Р. Молекулярная генетика. М.: Мир. 1986.

60. Стефанова В. Н. Изучение районов ядрышковых организаторов в лимфоцитах свиней // Бюлл. ВНИИГРЖ. Л. - 1981.- Вып. 51. - С. 3-7.

61. Стефанова В. Н. Количественная характеристика ядрышкообразующих районов хромосом свиней // Бюлл. ВНИИРГЖ. JL- 1983.- Вып. 67.- С. 610.

62. Тимофеева М. Я., Кост М. В., Тихомирова Т. П. и др. Организация кластера генов 5 S рибосомных РНК в геноме человека // Мол. биол. 1993. -Вып. 4.-С. 861-868.

63. Тихонов В. Н. Использование групп крови при селекции животных. М.: Колос.-1967.-391 с.

64. Тихонов В. Н. Иммуногенетика и биохимический полиморфизм домашних и диких свиней. Новосибирск.: Наука. 1991. - 301 с.

65. Фьюденберг X., Пинк Дж., Стайте Д., Ан-Чуан Ванг. Введение в иммуно-генетику. М.: Мир. 1975. - 224 с.

66. Хавкин Э. Е. Молекулярные маркеры в растениеводстве // Сельскохозяйственная биология. 1997. - № 5. - С. 3-19.

67. Чабан И. М., Шатайло В. В., Кленовицикий П. М. Изменение активности генов рРНК после иммунизации // Материалы конференции посвященной 80-летию МВА. "Совершенствование племенных и продуктивных качеств животных и птиц". М. 1999. - С. 95-96.

68. Штейн Г. И., Кудрявцева М. В., Кудрявцев Б. Н. Изменение морфологических параметров окрашенных серебром ядрышек гепатоцитов крыс при циррозе печени и в процессе ее реабилитации // Цитология. 1999. - Т. 41. - № 7. - С. 574-580.

69. Эрнст Л. К. Состояние и перспективы генной инженерии сельскохозяйственных животных // Аграрная наука. 1996. - № 1. - С. 8-9.

70. Эрнст Л. К., Гольдман И. Л., Кадулин С. Г. Генная инженерия в животноводстве: трансгенные сельскохозяйственные животные, кормовые растения, микроорганизмы рубца // Биотехнология. 1993. - Т. 5. - С. 2-14.

71. Яковлев А. Ф., Бавин В. Г., Стефанова В. Н. и др. Кариологический анализ свиней.// Методические рекомендации. Л. - 1984. - 43 с.

72. Anderson L., Archibald A. L., Gellin J. et al. 1-st Pig Gene Mapping Workshop (PGM1) 7 August 1992, Interlaken, Switzeraland // Anim. Genet. 1993. - V. 24.-№3.-P. 205-216.

73. Arbona J. R., Marple D. H., Russel R. W. Secretory patterns and metabolic clearence rate of porcine growth hormone in swine selected for growth // J. Anim. Sci. 1988. - V. 66. - P. 3068-3072.

74. Arruga M. V., Manteagido L. V. Evedence of Mendelian inheriance of the nucleolar region in the Spanishe common rabbit // J. Hered. V. 80. - P. 85-86.

75. Arruga M., Murcia C., Abaigar Т., Vericad J. Citogenetic analisis (GTG, CBG and NOR-bands) of a wild boor population (Sus scrofa scrofa) with chromosomal polymorphism in the south-east Spain // Genet. Select. Evol. 1990. - V. 22.-№ l.-P. 1-9.

76. Balicek P., Zizka I. Intercalar satelites of human acrocentric chromosomes as a cytological manifestation of polymorphism in GC-rich material // Hum Genet. -1980.-V. 54.-P. 343-347.

77. Baumann G. Growth hormone heterogeneity: genes, isohormones, variants, and binding proteins // Endocrine Reviews. 1991. - V. 12 - № 4. - P. 424-449.

78. Benacerraf B. The genetic mechanisms that control the immune response and antigen recognition // Ann. immunol. 1974. - V. 125. - P. 143-164.

79. Benacerrraf B., Green I., Paul W. E. The immune response of guinea pigs to hapten-polylysine conjugates as an example of the genetic control of the recognition of antigenicity // Quant. Biol. 1967. - V. 32. - P. 569-575.

80. Bernstein R., Dawson D., Griffiths J. Human inherited marker chromosome 22 short-arm enlargement: investigation of rDNA gene multiplicity. Ag-band size, and acrocentric assaciation II Hum Genet. 1981. - V. 58. -P. 135 - 139.

81. Bottomly K., Maurer P. H. Antigen-specific helper T-cells required for dominant production of an idiotype (Thld) are not under immune response (Ir) gene control//J. Exp. Med.- 1980.-V. 152.-P. 1571-1578.

82. Brem G. Interifance and tissue-specific expression of transgenes in rabbits and pigs // Mol. Deprod. and. Dev.- 1993.- V. 36.- № 2.- P.242-244.

83. Brem G. Production of transgenic mice, rabit and pigs by microinjection into pronuclei //Zuchtyniene.- 1995.- V.20.- № 5.- P. 134-139.93 .Brem G. Trangenic animals // Byotechnology. 1993. - V. 2. - P. 745-832.

84. Brem G., Muller M. Large transgenic mammals // Animals with novel genes / by Ed.N.Maclean.- Cambridge University Press.- 1994.- P.179-224.

85. Cadoret J. P. Mise au point de methodes de manipulation embryonnaire de mollusques bivalves. Aqpplication en genetique et pathologie infectiuse. Montpellier France: Ecole pratique des hautes etides. - 1992. - 113 p.

86. Capy. P., Renard C., Sellier P., Vaiman M. Etude prelimmaire des relations entre le comlexe majeur d'histocompatibilite (SLA) et des carac-teres de production chez le pore II Ann Genet. Sel Anim. 1981. - Y. 13 - P. 441.

87. Cerrottini J. C., Brunner K. T. Cell-mediated cytotoxicity, allograft rejection and tumor immunity // Adv. Immunol. 1974. - № 18. — P.67.

88. Chen E. Y., Liao Y. C., Smith D. H. et al. The growth hormone locus: nucleotide sequence, biology, and evolution. // Genomics. 1984. - V. 4. - P. 479-497.

89. Chen T. T., Powers D. A. Transgenic fish. // Tibtech. 1990. - V. 8. - P. 209215.

90. Cheung S. W., Sun L., Featherstone T. Visualization of NORs in relation to the precise chromosomal localization of ribosomal RNA genes // Cytogenet Cell Genet. 1989. - V. 50. - P. 93 - 97.

91. Constantiny F., Radice G, Lee G. Jnsertional mutations in trangenic mice // Progr. Nucl. Acid. Res. and Mol. Biol. San Diego. 1989. - V. 36. - P. 159169.

92. Dausset J. The major histocompatibility complex in man // Science. 1981. - V. 213. - № 4515. -P. 1469-1474.

93. Derenzini M., Ploton D. Interphase nucleolar organizer regions in cancer cells // Int. Rev. Exp. Pathol. 1991. - № 32. -P. 149-191.

94. Dorf M. E. et al. The Role of the major Complex in Immunobiology // Garland STPM Press, New York. 1981. - V. 35. - P. 378-381.

95. Ebert K. M. Gene transfer through embryo microingection // In Animal biotechnology. 1989. - P. 233-250.

96. Ellman L., Creen I., Martin W. J., Benacerrraf B. Linkage between the PLL gene and the locus controlling the major histocompatibility antigen in strain 2 quinea pigs // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1970. - V. 66. - P. 322-330.

97. Gannon F., Powell R., Barry T., McEvoy T. G., Sreenan J. M. Transgenic farm animals // J. of Biotechnology. 1990. - V. 16.-P. 155-170.

98. Gardner R. L. Contridutions of blastocyst micromanipulation to the study of mammalian development // Bioessays. 1998. -V. 20. - № 2. - P. 168-180.

99. Geldermann H., Muller E., Beeckmann P. et al. Mapping of quantitative-trait loci by means of marker genes in F2 generations of wild boar, pitrain and meishan pigs // J. Anim. Breed. Genet. 1996. V. 113. - P. 381-387.

100. Goodpasture C., Bloom S. Visualisation of nucleolar organizer regions in mammalian chromosomes using silver staining // Chromosoma. 1975. - V. 53.-P. 37-50.

101. Grosveld F., Kollias G. Eds. Transgenic animals. London: Academic Press.-1992.-288 p.

102. Hammer R. E., Palmiter R. D., Brinster R. L. Partial correction of murine hereditary growth disorder by germline incorporation of a new gene // Nature. -1984. -V. 311.-P.65-67.

103. Hammer R.E., Pursel V., Rexroad C. et.al. Production of transgenic rabbits sheep and pigs by microinjection // Nature. 1985. - V.315. - P. 680-683.

104. Heitz E. Die Urseaehe der gesetzmassignen zahl, lage, Form und Grosse pflanzlicher Nukleolen // Planta. - V. 12. - P. 775-844.

105. Henderson A. A., Warburton D. and Atwood K. C. Lacation of ribosomal DNA in the human chromosome complement // Proc. Natl. Acad. Sci. USA -1972. -V.69. P. 3394-3398.

106. Hens L., Kirsch-Volders M., Arrighi F. E., Susanne C. Relationship between measured chromosome distribution parameters and Ag-staining of the nucleolus in mammal cells // Hum. Genet. 1980. - № 53. - P. 363-370.

107. Howell W., Black D. Controlled silver staining of nucleolus organizer regions with a protective colloidal developer: in a one sptep method // Experien-tia.- 1980.-V. 36.-P. 1014-1015.

108. Howell W., Denston., Diamond J. Differential staining of the sotellite regions of human acrocentic chromosomes // Experientia. 1975. - V. 31. - P. 260-262.

109. Hsu T. C., Spirito S. E. and Pardue M. L. Distribution of 18 + 28S ribosomal genes in mammalian genomes // Chromosoma. 1975. - V. 53. - P. 25 - 36.

110. Isakova G. K. Interindividual and intercellular polymorphisms of Ag-NOR pattern in mink embryo sibling // Genet. Cell Evol. 1994. - Y. 82. -P. 87-95.

111. Jullian E., Hartung M., Vagner-Capodano A. M., Stahl A. Association of ribosomal genes in the human oocyte at meiotic prophase: cytogenetic consequences // Chrom. Today. 1987. -V. 9. - P. 301-309.

112. Knorr C., Moser G., Muller E. et al. Association of GH gene variants with performance traits in F2 generations of European wild boar, pietrain and me-ishanpigs//Anim. Genet. 1997.-V. 28.-P. 148-155.

113. Kostyo J. L. Rapid effect of growth hormone on amino acid transport and protein synthesis // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1980. - V. 148. - P. 284-312.

114. Kostyo J. L., Nutting D. K. Growth hormone and protein metabolism. In Handbook of physiology. 1979. - P. 187-210.

115. Lau Y. F., Pfeiffer R. A., Arrighi F. E. et al. Combination of silver and fluorescent staining for metaphases chromosomes // Amer. J. Hum. Genet. -1978. -V. 30. -№ l.-P. 76-79.

116. Lau Y. F., Wertelecki W., Pfeiffer R. A., Arrighi F. E. Cytologi-calanalyses of a 14p+ variant by means of N-banding and combinations of silver staining and chromosome banding // Hum Genet. 1979. - Y. 46. - P. 75-82.

117. Lefevre C., Imagava M., Dana S. et al. Tissue-specific expression of the human growth hormone gene is conferred in part by the binding of a specific transacting factor // EMBO. 1987. - V. 6. - № 4. - P. 971-981.

118. Lewis U. J., Singh R. N. P. et al. Human growth hormone: a complex of proteins // Recent Progr. In Hormone Res. 1980. - V. 36. - P. 477-504.

119. Liu W. S., Lu X. Z., Qiu H. Number and distribution of silverstained nucleolar organizer regions and evolutionary relation ships in domestic pig // Anim.Genet. - 1995. - V.26. - № 5. - P. 293-298.

120. Lonai P., Mc. Devitt H. O. I-region genes are expressed on T- and B-lymphocynes // G. Exp. Med. 1974. - V. 140. - P. 1317-1323.

121. Lunney, J., Pescovitz M. D., Sachs D. H. The swine major histocompatibility complex: Its structure and function // In Swine in Biomedical Research / Plenum Press, New York.- 1986. V. 3. - P. 1821-1836.

122. Mayr B., Schweizer D., Geber G. NOR activity, heterochromatin differentiation, and Robertsonian polymorphism in Sus scrofa L. // Journal of Heredity. -1984.-V. 75.-P. 79-80.

123. McClintock B. The relation of a particular chromosomal element to the development of the nucleoli in Zea mays // Z. Zell forsch. - 1934. - V. 21. - P. 294 - 328.

124. Mellink C. H. M., Bosma A. A., de Haan N. A. et al. Distribution of rRNA genes in breeds of domestic pig studied by non-radioactive in situ hybridization and selective silverstaining // Genet. Select. Evol. 1991. - V. 23.- № 1- Supp. 1. P. 168-172.

125. Mellink C. H. M., Bosma A. A., de Haan N. A. et al. Numerical variation of nucleolar organizer regions after silver staining in domestic and wild Suidae (Mammalia) //Anim. Genet. -1992. V. 23. - № 3. - P. 231-239.

126. Mellor A. L. The class I MHC gene family in mice // Immunol. Today. -1986.-V. 7.-P. 19-24.

127. Miller D. A., Breg W. R., Warburton D., Dev V. G., Miller O. J. Regulation of rRNA gene expression in a human familial 14p+ marker chromosome // Hum Genet. -1978. V. 43. - P. 289 - 297.

128. Mitchell G. E., Grumer F. C., McDevitt H. O. Genetic control of the immune response // J. Exp. Med. 1972. - V. 135.-P. 126-134.

129. Miyake Y., O'Brien S., Kaneda Y. Regional localization of rDNA Gene jn pig chromosome 10 by in situ hybsielization // Jpn. J. Vet. Sei. 1988. - V. 50. -№ 2. - P. 341-345

130. Moore D. D., Merks A. R. et all. The first intron of the human growth hormone gene contains a binding site for glucocorticoid receptor // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1985. - V. 82. - P. 699-702.

131. Morton C. C. Brown J. A., Holmes W. A., Nance W. E., Wolf B. Stain intensity of human nucleolus organizer region reflects incorporation of uridine in to mature ribosomal RNA. // Expl Cell Res. 1983. - V. 145. -P. 405-413.

132. Naito M. Genetic improvement of chickens by direct gene transfer // Proceedings of the 5 World Congress on Genetics Applied to Livestock Production. // 1996. -V. 21. - P. 341-353.

133. Nguyen T. C., The immune response in sheep: analysis of age, sex and genetic effects on the quantitative antibody response to chicken red blood cells // Vet. Immunology and Immunopatology. V. 5. - 1984. - P. 237-245.

134. Nielsen V. N., Larsen N. J., Agergaard N. Association of DNA-polymorphism in the growth-hormone gene with basal-plasma growth-hormoneconcentration and production traits in pigs // J. Anim. Breed. Genet. 1995. -V. 112.-P. 205-212.

135. Palmiter R.D., Brinster R.L., Hammer R.E. et.al. Dramatic growth of mice that develop from eggs microinjected with metallothionein-growth hormone fusion genes // Nature. 1982. - V.306. - P. 611-615.

136. Perry B. N., Savva D., Skidmore C. Are all growth hormone gene glucocorticoid responsive // Biochemical Society Transactions. 1988. - V. 16. - № 12. -P. 176-177.

137. Phllipsen M., Krisrensen B. Preliminary evidence of segregation distortion in the SLA system // Anim. Blood Groups Biochem. Genet. 1985. - Y. 16. -P. 125.

138. Pursel V. G., Pinkert C., Rexroad C., Mileer K. Animal growth regulation // Et by D. K.Campion, C. J.Hausman, K. J.Martin. New York.- London. 1989.

139. Pursel Y. G., Rexroad C., Pincert C. et.al. Progress on gene transfer in animals // Vet.Immunol. Immunopathol.- 1987.- V.17.- P.303-312.

140. Pursel V.G. et.al. II-th International Congress on Animal Reproduction and Artificial Insemination, Dublin, 1988.

141. Renard Ch., Chardon P., Vaiman M. The pig histocompatibility system SLA: Serological study on a group of antigenic specificities // Animal Blood Groups Biochemical Genetics. 1982. -V. 13. -P. 161-177.

142. Rexroad C. E. Transgenic technology in animal agriculture // Animal Biotechnology. 1992. - V.3. - № i. p. 1-13.

143. Rexroad C. E., Pursel V.G. Status of gene transfer in domestic animals // Proc. of 11th inter.congress on animal reproduction and artifical insemination. Dublin. 1988. - V.5. - P.28-35.

144. Robertson M. The evolutionary past of the maj or histocompatibility complex and the future of the cellular immunology // Nature. 1982. - V. 297. - № 5868.-P. 629-632.

145. Rothschild M. F., Renard Ch., Bolet G., Dando P., Vaiman M. Effect of SLA haplotypes on birth and weaning weights in pigs // Anim. Genet. 1986. -V. 17.-P. 267.

146. Rousseau G. G., Fliard P. H., Barlow J. W. et al. Approach to the molecular mechanisms the modulation of growth hormone gene expression by glucocorticoid and thyroid hormones // J. Steroid. Biochem. 1987. - V. 27. P. 149-158.

147. Schito M. L., Chopotar B., Barta I. R. Major histompatibility complex class I- and II-deficient Knock-out mice are resistant to primary but susceptible to secondary Eimeriapapillata II Parasitol. Res. 1998. - V. 84. - № 5. - P. 394398.

148. Schwartz R. H. Functional properties of I region gene products and theories of immune response (Ir) gene function // In: la Antigens. 1985. P. 203-221.

149. Smith C., Simpson S. P. The use of genetic polimorphism in Livestock improvement // J. Anim. Breed. Genet. 1986. - V. 103. - P. 205-217.

150. Steinmetz M., Hood L. Genes of major histocompatibility complex in mouse and man // Science. 1983. - V. 222. - № 4625. - P. 723-733.

151. Switonski M., Pietrzak A. Cytogenetic survey of AI boars: distribution of C-and Ag-NOR polymorphism // Anim. Sci. Rap. and Repts. 1992. - № 9. -P.91-96.

152. Vaiman M., Metzger J. J., Renard C., Vila J. P. Immune response gene(s) controlling the humoral anti-lysozyme response (IR Lys) linked to the major histocompatibility complex SLA in the pig // Immunogenetics. 1978. - V. 7. -P. 231-233.

153. Vaiman, ML, Renard C. Deficit of piglets homozygous for the SLA histocompatibility complex in families // XVII Conf Animal Blood Groups Biochemical Polymorphisms. Wageningen (Abstr.) 1980.

154. Vize P. D., Wells J. R. E. Isolation and characterization of the porcine growth hormone gene // Gene. 1987. - V. 55. - P. 339-344.

155. Wall R. J., Hawk H. W., Nel Neil. Varking transgenic livestok: genetic engineering on a large seale // J.Cell. Biochem. 1992. - V. 49. - № 2.- P. 113-120.

156. Wall R. J., Seidel G. E. Transgenic farm animals a critical analysis // Theriogenology. - 1992. -V. 38. - P. 337-357.

157. Warner C. M Genetic manipulation of the major histocompatibility complex (MHC) // J Anim. Sci. 1986.-V. 63.-P. 279-285.

158. Warner C. M., Meeker D. L., Rothschild M. F. Genetic control of immune responsiveness: a review of its use as a tool for selection for selection for disease resistance // J. Anim. Sci. 1987. - V. 64. - 2. - P. 394-406.

159. West B. L., Catanzaro D. F., Mellon S.H. et al. Interaction of a tissue-specific factor with an essential rat growth hormone gene promoter element // Mol. and Cell biol. 1987. -V. 7. - № 3. - P. 1193-1197.

160. Winkelman D. C., Hodgetts R. B. RELP for somatotropic genes identify quantitative trait loci for growth in mice // Genetics. 1992. - V. 131. - P. 929937.

161. Woychik R. P., Camper S. A. et al. Cloning and nucleotide sequencing of bovine growth hormone gene // Nucleic Acids Research. 1982. - V. 10. -№.22.-P. 7197-7210.