Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Опыт применения живой и инактивированной вакцин для защиты от гриппа детей дошкольного возраста

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Опыт применения живой и инактивированной вакцин для защиты от гриппа детей дошкольного возраста"

На правах рукописи

ГРИГОРЬЕВА Елена Петровна

ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ ЖИВОЙ И ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИН ДЛЯ ЗАЩИТЫ ОТ ГРИППА ДЕТЕЙ ^ШКОЛЬНОГО ВОЗРАСТА

Специальность: 03.00.06 - вирусология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 1995

Со

О

¿О

3=

Гч.

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте экспериментальной медицины РАМН.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Л.Г.Руденко

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор А.А.Смородкнцев

доктор медицинских наук А.Л.Соминнна

Ведущая организация - Государственный институт стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им.Л.А.Тарасевича Госкомсанэпиднадэора Российской <1едерации.

Защита диссертации состоится 1995 года

в ¿3^ часов на заседании специализированного совета Д 001.23.02 при Научно-исследовательском институте экспериментальной медицины РАМН (197376, Санкт-Петербург, ул. акад. И.П.Павлова, 12).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НШ1Ш РАМН.

Автореферат разослан »/Г- 1995 года.

Учений секретарь специализированного совета доктор медицинских наук

Л.А.Бурова

Актуальность проблемы.

В течение очень долгого времени грипп остается серьезной проблемой для большинства стран мира. Во время эпидемического сезона гриппом болеют около 10Z населения земного шара, т.е. около 500 млн. человек.Во время пандемии это число может возрастать в 4-5 раз. Если нормализовать вс-э инфекционные болезни по отношению к гриппу, приняв ущерб, причиняемый гриппозной инфекцией за 100Z, то из данных анализа, . проведенного в США (N'ltl. Acad. Press W., 1985) видно, что ущерб, причиняемый этой инфекцией выше, в сравнении с любой другой. Учитывая, что наиболее часто гриппом болеют дети, что'именно дети играют наиболее важную роль в распространении гриппа среди населения и", наконец, что потеря рабочих дней родителями больных детей приносит серьезный экономический ущерб для общества, особое внимание при стратегии борьбы с гриппом следует уделить вакцинации детей всех возрастов. Тем не менее, в нашей стране, к началу настоящих исследований, не существовало препаратов, которые могли бы быть использованы для профилактики гриппа среди детей дошкодь-. ного возраста, у которых не только велик показатель заболеваемости (37 Ki 100), но й частота госпитализации при гриппе в результате тяжести инфекции является наивысшей (Natl. Acad. Press' W.; 1285). ^

He были известны действительные пределы безвредности разрабатываемых и выпускаемых в нашей стране инактивированных вакцин (адсорбированная гриппозная химическая вакцина, гриппозные инактйвированные хроматографическая и центрифужная вакцины, субъединичная вакцина Трштповак СЕ-АХ"), что позволило бы достаточно обоснованно расширить за счет детей контингента их при-* ыенения. Живая гриппозная вакцина, приготовленная методом генетической рекомбинации коллективом сотрудников под руководством профессора Г.И.Александровой, была испытана только в авторских наблюдениях.

Основным нерешенным вопросом оставался вопрос тактики иммунизации детей, включавший з себя Tim препарата, безвредность и целесообразность его ежегодного применения в рамках индивидуальных или массовых прививок против гриппа.

Естественно, было бы нереально предполагать, что грипп ио-

жет Сыть ликвидирован с помощью вакцин, однако при правильной стратегии борьбы с гриппом ущерб, -причиняемый этой инфекцией для здоровых людей и экономики общества в целом, может быть существенно снижен.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящего исследования являлось обоснование оптимальных средств профилактики гриппа, а также схем их применения для детей З-б лет.

Для достижения этой цели было необходимо реыение следующих задач:

1. Оценить в строго контролируемых клинико-иммунологических наблюдениях разрабатываемые в стране инактивированные вакцины для детей дошкольного возраста.по показателям безвредности, иммуногенности и реактогенным свойствам.

2. Изучение безвредности, реактогенности и прививочной ак- ' тивности живой гриппозной вакцины для детей, а именно:

1). Проведение, клинико-иммунологических наблюдений за детьми 3-6 лет, иммунизированными моно- и дивакциной:

а) изучение безвредности препарата с помощью клинико-лабораторных и иммунологических критериев;

б) анализ прививочной активности вакцины, включающий показатели приживаемости вакцинного вируса, формирование гуморальных и секреторных антител;

в) изучение взаимосвязи между прививочной активностью и новизной. входившего в нее штамма; •

2). Изучение профилактической эффективности живой гриппозной вакцины, в том числе эффективности ежегодных прививок живой гриппозной вакциной. -

3).. Формулирование рекомендаций для практики здравоохранения по специфической профилактике гриппа среди детей дошкольного возраста.

Положения, выносимые на защиту.

1. Разработанные отечественные инактивированные вакцины:' расщепленная адсорбированная химическая вакцина (АГХ-вакцина), вирионная инактивированная хроыатографическая дополнительно очищенная вакцина, детский вариант (ГИХВ-Д) и субъединичная висцина "Грипповак СЕ-АЖ", - не могут Сыть рекомендованы для

профилактики гриппа у детей 3-6 лет. так как не удовлетворяют современным медико-биологическим требованиям к такого рода препаратам.

2. Живая гриппозная рекомбинантная вакцина, использованная как в виде монопрепарата, так и в виде дивакцины из эпидемически актуальных штаммов является безвредной и обладает выраженной иммунологической и профилактической эффективностью.

3. При применении гриппозной живой вакцины целесообразно проводить иммунизацию одних и тех же детей в течение 3 лет подряд для обеспечения иммунитета и формирования иммунологической памяти. Вакцинация против гриппа может быть проведена в рамках прививочного календаря в период, свободный от вакцинации против других детских инфекций.'

Научная новизна работы. • ,

1. Впервые проведены комплексные вирусологич&ские, иммунологические и эпидемиологические исследования при апробации новых разрабатываемых противогриппозных вакцин среди детей дошкольно--го возраста с целью обоснования оптимальных средств профилактики гриппа и схем их применения.

2. При изучении в ограниченных клинико-иммунологических испытаниях на детях 3-6 лет инактивированкйх гриппозных вакцин впервые показано, что ни одна'из апробированнйх отечественных вакцин не может быть рекомендована для применения среди детей З-б лет. Расщепленная АГХ-вакцина и дополнительно очищенная хроматографическая вакцина не соответствовали по своим параметрам иымуногенности технической документации на эти препараты, а субъединичная вакцина "Грилповак" характеризовалась нестабильными показателями безвредности.

3. Впервые в налей стране и за рубежоы проведены ыноголет-ние поэтапные исследования живой гриппозной вакцины на детях З-б лет, обосновавшие внедрение этого препарат? в практику здравоохранения.

4. Раскрыты дополнительные резервы повшения эффективности и безвредности живой гриппозной вакцины за счет двукратного введения, применения дивакцины, антигенной новизны атяшов и оптимизации прививочного календаря.

5. Научные разработки по теме диссертация, касашеся новых вакцинных втаымов вируса гриппа запшеяи 3 авторскими свв-

— 5 -

детельствами (штамм 47/Т(H1N1), авторское свидетельство N 1632040, штамм 47/S(H3N2), авторское свидетельство N 1655985, штамм В/60/32.Р,-авторское свидетельство N 1731811).

Практическая значимость работы.

1. Изучена возможность защиты от гриппа детей 3-6 лет с помощью живых и инактивированных вакцин.

2. На основании результатбв исследований живая гриппозная рекомбинантная* вакцина для детей приказом Министерства здравоохранения СССР N 1062 от 22.09.87 г. разрешена для широкого применения.

3. Для производства Одесским предприятием вирусных и бак' терийных препаратов живых гриппозных вакцин использованы вакцинные штаммы вируса гриппа, подготовленные с нашим участием.

4. С учетом полученных нами данных разработаны методичес- ' • кие рекомендации до защите от гриппа детей 3-15 лет живой грип-

поаной вакциной, которые утверждены Министерством здравоохранения Казахской CCFJ 09.09.1986г.

5. Применение живой гриппозной вакцины нашло отражение в приказе Министерства здравоохранения СССР N 327 от 07.08.1990г.

" "О защите населения от гриппа и других острых респираторных заболеваний".

Материалы диссертации получили свое дальнейшее развитие в научных исследованиях, проводимых в г.Новгороде в течение , 1989-1992гг. по программе ВОЗ "Влияние массовой вакцинации детей на эпидемический процесс гриппа в масштабах города". На основе рекомендаций по внедрению вакцины в практику здравоохранения по Постановлению Совмина РФ N 610 от 21.09.1992 г. в г.Иркутске открыто производство ЖГВ для детей. За пбриод 1993-94гг.

По государственному заказу выпущено 7,6 млн. доз ЖГВ для детей.

» . >

I ■ ;

■ Апробация работы._1 • ' ' __г j:

Материалы диссертации доложены на Всероссийской конферея-; щга "Завита детей от гриппа" (Ростов-наклону, 1985), VIM Меч-; „ досовской межобластной конференции молодь« ученых "Современные вопросы вирусология, микробиологии в иммунологии" (Одесса, | 1085), На _ Всесоюзной научно-практической конференции "Иоствак-. пянгаьвыр осложнения: патогенез, профилактика, лечение" С.-Пе- |

- 6 - . ' тербург, 19-21 ноября 1991 г.), на заседаниях Ленинградского общества микробиологов, эпидемиологов и вирусологов (1936, 1987, 1991).

Публикации.

Результаты исследования опубликованы в 13 работах, в той числе получено три авторских свидетельства на изобретения. .

Объем и структура диссертации.

Работа изложена 472 на страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, глав собственных исследований, обсуждения, заключения и выводов. Библиографический список включаетнаименования, в т.ч. 2^2. отечественных и зарубежных источников. Материалы диссертации иллюстрированы /Г/ таблицами.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ' .

Основу работы по возможности вакцинопрофилактики гриппа у. детей 3-6 лет составило изучение прививочной активности различных противогриппозных вакцин, которое проводили в 3 этапа:

- изучение безвредности, реактогенности и антигенной активности препаратов в открытых коллективах на ограниченных по численности группах детей; • •• ^

- контролируемые эпидемиологические наблюдения для оценки профилактической эффективности и безвредности на больших' по численности контингентах населения (организованные дети, посе-пяяяие детские дошкольные учреждения - ДПУ);. .

- определение профилактической эффективности препарата в условиях массовой Вакцинации детей З-'б лет, поседаших ЯДУ. Сбгеы провелеМ а '^следований представлен в таблице 1.

Для ишуниёацим детей были использованы следующие препарат ты: .

1. Инактивированные вакцины: . 1.1. Адсерб!гров<Ёяная гриппозная химическая (АГХ) вакцина, расщоплепнзя, типа А(Н?.М2) с содержанием гемаггяотинина (ГА) в прививочной дозе 1,6-3,0 ют, вводила» вприцеы подгедао э козэ

О,1-0,2 МЯ.

1.2. Субы&тг-тая вакцина "Грипяогак СЕ-АЗ", зксп9{Ш«я-т.гсерзд! 16 я 16, состоят»? из вташов вируса грягаа

Таблица l.

ОБЪЕМ Й СТРУКТУРА ПРОВЕДЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

1 ............— | Препарат I (год наблюдений) Число обследованных детей 1 Вид наблюдения |

1 I АГХ-вакцина 1 175 чел. клинико-иммунологическое|

1 I "Грипповак СЕ-АЖ" 213 чел. клинико-иммунологическое|

1 гихв-'д 683 чел. клинико-иммунологическое|

I ЖГВ (1984) 262 чел. клинико-иммунологическое|

• I ЯГВ (1985) 260 чел. клинико-иммунологическое|

I ЖГВ (1986) 177 чел. клинико-иммунологическое|

I ЖГВ " I (1984, Калининград) | 3445 чел. контролируемое эпид- | наблюдение |

I ЖГВ | (1985, Калининград) 524 чел. контролируемое эпид- | наблюдение |

. . 1 «ТВ Г(1986, Калининград) 3730 чел. контролируемое эпид- | наблюдение |

I ЖГВ I (1986, Алма-Ата) I ЖГВ I (1987,' Алма-Ата) '1 2154 чел. 11549 чел. 3610 чел. 12709 чел. контролируемое эпид- | наблюдение | массовая вакцинация | контролируемое эпид- I наблюдение | массовая вакцинация |

I ЖГВ (1988, Алма-Ата) ■ —- 15641 чел. массовая вакцинация | ....... 1

. - 8 -

A(HINI), A(H3N2) и B'c содержанием гемагглютинина 12-15 MKT каждого штамма. Вводили двукратно, подкожно, шприцем, в дозе 0,5 мл с интервалом 28-30 дней,

1.3. Гриппозная инактивированная хроматографическая дополнительно очищенная вакцина, детский вариант (ГИХВ-Д) дивакцина типа A(H1N1)+A(H3N2). Серии препарата 41 и 5 содержали 5 «кг гемагглютинина в прививочной дозе, серии 42 и 46 - по 2,5 мкг гемагглютинина. Вводили с помощью безигольного инъектора ЕИ-2 внутрикожно.

2. Производственные серии живой гриппозной рекомбинантной вакцины (ЖГВ) из штаммов А/47/25/1 (H1N1), А/47/Ф (H3N2). A/47/Чд (H1N1) и А/47/Т (H1N1). Вакцину вводили интраназадьно, двукратно в разведении 1:2, с помощью распылителя-дозатора типа РДЯ-М4. Интервал между вакцинацией и ревакцинацией составил 28-30 дней. ,

В качестве плацебо использовали апирогенный стерильный физиологический раствор.

Изучение безвредности препаратов включало в себя клини-. ко-зпидемиологическую характеристику (показатели общей и местной реактогенности, уровень соматической и.инфекционной заболеваемости в поствакцинальный период), a Tatgie углубленную клини-ко-иммунологическую оценку возможного побочного действия препарата.

С этой целью был проведен ряд гематологических (клинический анализ крови с подсчетом числа тромбоцитов, лимфоцитограмма по О.П.Григоровой, определение лимфоцитарного и полиморфноядер-ного индекса лимфоцитов) и биохимических исследований (определение С-реактквного белка, белковых фракций крови, нейраынновой кислоты и трансаминазы), а также для SFB изучение воздействия иммунизации на функциональную активность B-системы иммунитета (динамика титров антител к вирусам, не входящим в состав вакцйт ны: вирусы гриппа В it парагриппа), изучение аадергизируидаго влияния иммунизации (динамика титров антител к белку куриного эмбриона, определение концентрации IgE), неспецифическое воздействие иммунизации определяли с помощью реакции власттраяс-Фсрмаций с фитогематютинином (STA) и влияния на полиморфной-дерные лейкоциты (определение спонтанной подвижности лейиошт» в капиллярах, способность поглосать и восстанавливать чясттшы нитрясинего тетрагочия, HCT, состояние ферментной якттавости

- g -

лиаосомально-катионных белков), д Определение специфической активности препаратов проводили • в реакции торможения гемаггдютинации (РТГА) по общепринятой методике ; изучение динамики титров антител в сыворотке крови и смывах верхних дыхательных путей проводили в реакции непряыой гемаггдютинации (РИГА).

Эпидемиологическую эффективность препарата определяли на основании сравнения данных о заболеваемости гриппом и 0R3 в опытной и контрольной группах детей (по данным клинического диагноза) .

ч При проведении статистического анализа достоверность раз-

личия средних величин определяли по критерию'Стыодента, критерию Фишера, критерию X2. Расчеты проведены на ЗВМ в лаборатории общей эпидемиологии и кибернетики ВНИИ гриппа Минздрава СССР.

МАТЕРИАЛЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Гриппозные инактивированные вакцины.

В отечественной практике в настоящее время разработано четыре гриппозные инактивированные вакцины: две вирионные (хрома" тографическая и центрифужная), расщепленная АГХ-вакцина (адсорбированная гриппозная'химическая вакцина) и субъединичная вак--цина "Грипповак CE-AS". До начала настоящих исследований эти препараты были разрешены только для взрослых и прошли апробацию . лргь на детях школьного возраста. Поскольку в сравнительном плане на детях дошкольного возраста эти вакцины изучены не были, мы провели комплексную оценку каждого препарата (за исключением цедьновирионной центрифужной вакцины, которая, по данным зарубежного опыта,, никогда не использовалась для профилактики Гриппа у детей) ■с обоснованием рекомендаций по возможности 'дальнейшего расширения контингентов их применения.

. На первом этапе была организована углубленная кдинико-ла-

_бораторная апробация этих_ препаратов—на -ограниченных -группах—

. детей. 3-6 лет. Тщательные клинико-инструментальные и лабораторные исследования привитых показали, что все инактивированные , вакцины обладали низким уровнем реактогенности для детей 3-6 ; лет. Показатель реактогенности всех инактивированных вакцин не превышал уровень,' допустимый по техническим условиям (3.0Z) и i . соответствовал для АГХ-вакцины 1,03 (для детей 5-6 дет) и 0,8

..." 10 -

(для детей 3-4 лет), хроматографической вакцины - О, для вакцины "Грипповак" - 0,9. Местные реакции у привитых инактивирован-ными вакцинами развивались, как правило, на второй день после прививки и сохранялись преимущественно 2-3 дня, выражаясь, в основном, в виде неярких гиперемий средней и слабой степени выраженности. Однако, у детей, привитых ГИХВ-Д. встречались и инфильтраты слабой степени выраженности, что, вероятно, связано с методом введения препарата (с помощью инъектора БИ-2). Необходимо также отметить, что при повторном введении вакцины "Грипповак" гиперемия средней силы развивалась достоверно чаще, чем после первичной иммунизации (16,62 против 5,62), .по-видимому, это обусловлено развитием сенсибилизации после первичного " введения вакцины.

В ходе определения безвредности, проведенного нами с Использованием комплекса гематологических и биохимических показателей, у подавляющего большинства детей вакцинальные реакции не были выявлены. Вместе с тем следует отметить, что у части детей на любой препарат отмечалось увеличение числа эозинофилов, лиы-. фоцитов, повышение СОЭ. а в отдельных случаях появление С-реак-тивного Сетча и умеренная диспротеинемия (повышение^- иглобулинов и снижение )<-глобулина). Следует отметить, что эти отклонения были нестойкими и при повторном обследовании нормализовались. Подобные отклонения имеЛи место и среди'детей контрольной группы, но менее часто, чем в группе привитых. АГХ-вакцива характеризовалась низким уровнем антигенной активности: 38,6-43,1Z сероконверсий, средняя кратность прироста антител составила 2,4-3,0, количество лиц с титром антител 1:40 и выше - 40,3-52,3Z для привитых дозами 1,6:3,0. ыкг гемагглвтинина соответственно. Более иммуногенной была вакцина 'Тргатовак": к вирусу гриппа типа ACH3N2) уровень сероконверсий составил 93,IX, а средняя-кратность прироста антител - 24,6. Покаэатели для вируса гриппа В были более низкими: 64,ОХ сероконверсий, средний геометрический титр возрос до 20,6, а средняя кратность прироста антител составила 3,6. Уровень сероконверсий к вирусу гриппа типа А(Н1Н1) также оказался невысоким (42,42), средняя геометрическая титров после ревакцинации составил 23,6, а средняя кратность прироста антител - 3,6. Количество детей с аотит-ньи титром антител 1:40 я вдае после регашивадаи к вирусам грилпа типа А(Н1М1). А(Ю?12) а В составили соопмпствегео 30,0,

-1186,2-и 44.4Z. Иммунологические показатели вакцины ГИХВ-Д были несколько выше к вирусу гриппа Á(H3N2), чем к вирусу гриппа A(H1N1). Показатель сероконверсий составил 65,2-54,22, средние геометрические титров антител возросли в обеих группах до 50,9-50,2, а средняя кратность прироста антител составила 3,8-4,1, независимо от вводимой дозы препарата (2,5-5,0 мкг ге-магглютиюша). Процент сероконверсий к вирусу гриппа типа , A(H1N1) составил у привитых дозой 2,5 мкг ГА 37,52, дозой 5,0 UKT ГА - 52.V2, средние геометрические титров антител возросли соответственно до 19,2 и 33,1, а средняя кратность прироста составила 2,4-3,2. Количество лиц с защитным титром антител 1:40 и выше для привитых вакциной,в дозе 2,5 мкг ГА составило к вирусу гриппа A(H1N1) 40,32, к вирусу гриппа A(H3N2) - 56,52, для привитых дозой 5,0 мкг ГА - 58,82 и 58,32 соответственно.

Таким образом, по сумме исследований, выполненных нами с различными препаратами отечественных инактивированных вакцин на • детях 3-6 лет, мы пришли к заключению о невозможности их дальнейших испытаний в эпидемиологических наблюдениях, так как использованные препараты не вполне соответствовали требованиям, предъявляемым к такого рода вакцинам (показатель* сероконверсий должен составлять не менее 702, кроме того, у привитых вакциной "Грипповак СЕ-АЖ" настораживает увеличение частоты местных реакций после повторного введения препарата), и должны быть доведены до международных стандартов, обеспечивающих гарантирован-• » дую безопасность и протективную активность.

Живая гриппозная рекомбинантная вакцина. : '

К началу наших исследований в России была разработана жи-. вая гриппозная рекомбинантная вакцина для профилактики гриппа у детей, -начиная о трех лет (Г.И.Александрова и соавт., 1984).; j ' Вакцина была испытана в авторских наблюдениях, и главной нашей] : .аадачей явилось проведение контролируемых клинико-эпидемиологи-' j веских и эпидемиологических наблюдений по оценке безвредности,!: . прививочной активности и профилактической эффективности 2ГВ для ; / детей 3-6 лет. Эту работу проводили совместно с работниками практическогоздравоохранения Ленинградской области, г. Кали-: - доиграла и г.Алма-Ата. j

Проведенный анализ реактогенных свойств препарата показал ;

его низкую реактогенность. У большинства детей лихорадочные реакции и другие клинические симптомы после вакцинации, на протя- ' жении 5 дней наблюдения, отсутствовали. Самочувствие не нарушалось.' Вакцинация не отразилась на посещаемости детских дошкольных учреждений (ДДУ). Сильные температурные реакции отсутствовали как среди привитых, так и среди получивших плацебо. Средние температурные реакции отмечены в единичных случаях, как в группе привитых, так и в группе получивших плацебо. Индекс ре-актогенности соответствовал 0,782, что значительно ниже допустимого (22). Не было выявлено и достоверных различий при сопоставлении частоты развития реакций со стороны носоглотки и явлений интоксикации у привитых и получивших плацебо (3,082- 1,522 и 1,542- 0,762 соответственно). Оценка реактогенности была проведена также на основании данных официальной регистрации заболеваемости гриппом и ОРЗ у детей в течение 14 дней от начала вакцинальной кампании, продолжавшейся в течение 2 недель. Показатель заболеваемости в группе вакцинированных составил 2,42, в контрольной группе - 1,72 (Р>0,05), что также свидетельствует о низкой реактогенности вакцины.

У детей не были зарегистрированы патологические сдвиги в гематологических и биохимических показателях как на ранних, так ' и на поздних сроках поствакцинального периода. ' .

При изучении воздействия иммунизации на функциональную активность клеточного иммунитета отмечено достоверное повышение интенсивности бласттрансформацаи на 7 и 21. день после первого :введения препарата, а к 28 дню интенсивность бласттрансформацнн снизилась до исходного уровня.

! Для суждения о воздействии иммунизации ХГВ на функционал-', ную активность полкморфноядерных лейкоцитов использовали 3 «а- ' тода: 1) определение спонтанной подвижности лейкоцитов-в капил-|лярах, 2) способность поглощать и восстанавливать частицы нюк ¡расинего тетразолия (НСТ-тест), 3) состояние фериениой акта»-' |ности лизосоиально-катионных белков. * ... •

I Торможение спонтанной подвижности лейкоцитов с одинаковой !частотой отмечали как у привитых детей, так и у детей, получив-, .ших плацебо. На ранних сроках введения нитрасинего тетразолия -[увеличивалось число клеток, содержащих диформазан до 20,5+3,61, однако через 28 дней после окончания ишушгаации этот показа-. ;тель не отличался от исходного, следовательно, активация кисло-

*

родозависимого метаболизма была обратимой и непродолжительной. В отличие от этого достоверных различий в показателях лизосо-ыааьно-катионных белков ни на одном сроке не отмечали.

Проведены наблюдения по изучению уровйя антител к белкам куриного эмбриона в ответ на иммунизацию. Достоверных отличий с группой плацебо не выявлено (средние геометрические титров ач-' тител до прививки. в группе привитых и плацебо . составили ' 2,1-2,5, на 28-й день после завершения ревакцинации - 2,6-3,5 соответственно). Отсутствие аллергизирующего воздействия иммунизации подтвердилось при изучении уровня содержания иммуноглобулина Е в сыворотках крови дошкольников, которым вводили вакцину или плацебо. Среднее содержание 1вЕ в обследованных сыворотках не изменялось после вакцинации (содержание 1рЕ в группе привитых моновакциной - 52,07+21,ЗЗки/1, у привитых дивакциной - 30,75+5,84ки/1, в группе плацебо - 65.52.+15,28к1!/1, после вакцинации - 43,56+27,96 и 38,59+13,17 соответственно, в группе плацебо - б4,72+и7б7}.

Для изучения воздействия иммунизации на функциональную активность В-системы иммунитета была изучена динамика- нарастания титров антител в сыворотке крови и секретах верхних Дыхательных . путей к вирусам,не входящим в состав вакцины (вирусу гриппа В и парагриппа),. Ни у кЬго из наблюдаемых детей, входивших в группу привитых,.яе было отаечено достоверного снижения титров антител к указанным вирусам. Полученные данные указывают на отсутствие • угнетающего действия вакцины на систему .общего и местного иммунитета.

Для оценки безвредности живой гриппозной вакцины детей 3-6 лет проведен анализ соматической и инфекционной заболеваемости, йсюшчап грипп и ОРВй, зарегистрированной в течение 6 месяцев после первой вакцинация. Всего в группе двукратно привитых детей заболело 7,71, в контрольной группе - 9,21. Показатели частоты.' больиинства анализируемых заболеваний у привитых и полу-чявних плацебо детейстатистическидостоверно не различались.

Таким образом, результаты оценки безвредности живой гриппозной рекомСивантной вакцины не выявили побочного действия препарата ва организм ребенка как в период вакцинации, так и на отлаженных сроках после ее проведения.

ймуувогекнссть.

Оценивая перспективу вакшшсяфсфилактикя гриппа с помощью

-14- л

живой гриппозной вакцины, нухшо прежде всего подчеркнуть важность своевременного обновления антигенного состава вакцины в период появления новых вариантов возбудителя гриппа. За период с 1 алреля 1987г. по 31 декабря 1989г. нами совместно с сотрудниками Ленинградской Областной СЗС и Ленинградского Облздравот-дела были испытаны 10 рекомбинантов, кандидатов з вакцинные итаыш, в тоы числе 5 штаммов-для рекомбинаятной вакцины -типа В. Получено 3 авторских свидетельства на шгашы А/47/1ЧНШ), A/47/S(H3N2) и В/60/32,Р. Биологическая активность штаммов составила А/47/Т - 7.01£ЭИД5о/0.2 ш, A/47/S - V,51g3H25o/0.2 УЛ. В/60/32,Р - 6,51дЗИД50/0,2ыл. Оценка иммунного отьета показала, что все подготовленные штампы по показателям сероконверсий соответствовали фармакопейной статье (80,52, 70,52, 61,92 соответственно) .

В 1884 г. в г.Калининграде при проведении заключительных испытаний ЖГВ была использована вачцина из штакма A/47/25/i(H1N1), показатель сероконверсий у первично привитых серонегативных детей 3-6 лет составил 59,42. В 1985г. была проведена иммунизация детей моновакцинами из штаммов ■ А/47/25/1 (H1N1) и А/47/Ф(НЗ№), а также дивакциной типа A(H1N1)+A(H3N2) из соответствующих штаммов. Высокие показатели -иымуногенной активности били, зарегистрированы 'при применении всех трех препаратов. Достоверные сероконверсии к вирусу гриппа A(H1N1) были зарегистрированы у 57,42 ! детей З-б лег, привитых моновакциной A(H1N1) и у 59,02. детей, привитых дивакциной. К вирусу гриппа A(H3N2) сероконверсии были зарегистрированы у 48,52-40,02 детей, привитых моно- и дивакциной соответственно.

При углубленном изучении иммунного ртвета установлено, что иммунизация живой моно- и дивакциной сопровождалась накоплением сывороточных и секреторных антител к обоим поверхностным антигенам. По данным РИГА в сыворотках крови двукратно привитых детей количество сероконверсий к гемагглютинину HI составило 50-62,52, гемагглютинину-НЗ - 50,0-50,02 у прйвнтых моно- и дивакциной соответственно, количество сероконверсий к нейрамиюда-зе N1 - 66,7-37,52, нейраминидазе N2 - 58,3-50,02 у привитых моно- и дивакциной соответственно. Средняя кратность прироста секреторных антител к гемагглютинину HI составила 2,8-10,0, у привитых моно- и дивакциной соответственной к гемагглютинину НЗ - 4,4-3,6 соответственно, к нейраминидазе HI - 3,8-2,9 соот-

t

ветственно, к N2 - 2.9- 4,9.

Таким образом, иммунизация детей ЖГВ стимулировала активную выработку антител, уровень которых соответствовал требованиям на препарат, предусматривающим не менее 502 сероконверсий в группе детей с исходным титром антител 1:16 и ниже. Показана возможность совмещения вирусов гриппа типа A(H1N1) и A(H3N2) в ед;.ноы препарате. .

Профилактическая эффективность ЖГВ для детей.

Профилактическая эффективность ЖГВ была изучена в условиях контролируемого эпидемиологического наблюдения в ходе массовой вакцинации детей.

Первые исследования профилактической эффективности вакцины были проведени и рамках приемочных испытаний препарата в г.Калининграде. Всего под наблюдением находилось 3445 детей 3-6 лет, из них 1723 вакцинированных, 1722 - контрольная группа. Профилактическую эффективность в данном наблюдении определить не удалось из-за несоответствия вакцинного и эпидемического штаммов. Изучение заболеваемости в контролируемых наблюдениях и в условиях массовой вакцинации в г.Алма-Ата в 1986-87 гг. при применении, живой гриппозной дивакцины типа A(H1N1)+A(H3N2) в группе двукратно привитых детей (1 г.од наблюдения) показало снижение . заболеваемости в 1,4 раза'(коэффициент .эффективности 291).

Эффективность живых гриппозных вакцин зависит не только от формирования индивидуальной защиты у каждого ребенка, но и от коллективного иммунитета, который формируется при охвате прививками. 70-80Z численности коллектива. При организации контролируемого наблюдения охват детей прививками не превышал 252. поскольку'было соблюдено требование о формировании контрольных групп, равноценных привитым, что несколько снизило показатели эффективности,т.к. они были обусловлены, в основном, формированием инливидуальной аашгиты.и ниже потенциально ожидаемых.-

Разработка тактики вакцинации против гриппа детей 3-6 лет.

_Традиционно сложившаяся тактика ежегодных прививочных кампаний не Сша изучена в достаточной степени в отновении безводности я возможных изменений реактивности организма, а также эпидемиологической целесообразности повторных прививок одних' и

- 16 - а

тех же лиц. Мы проводили изучение безвредности, прививочной активности и профилактической эффективности ЖГВ для одних и тех же детей, привитых в течение 2-3 лет подряд, особое внимание было уделено изучению реактогенности вакцины при применении ее в течение 3 лет. Оказалось, что при вакцинации в течение 2-3 лет подряд реактогенность ЖГВ не повышалась. Сильных температурных реакций не отмечали, а частота катаральных явлений в группе привитых была равна О (второй год наблюдения) или ниже, чем в контроле (5,952 и 11,52 соответственно в третий год наблюдения).

При изучении клинико-иммунологических и эпидемиологических показателей безвредности препарата не выявлено отрицательного влияния вакцинации на организм детей, привитых 2 и 3 года подряд. Не выявлено аллергизирующёго влияния вакцинации по показателю нарастания антител к белку куриного эмбриона, как у детей привитых 2, так и 3 года подряд (количество сероконверсии в группе привитых и в контроле' составило соответственно 33,3-36,72 и 0-5,32).

При изучении влияния вакцинации на уровень антител к вирусу парагриппа, не входившего в состав вакцины, у детей, привитых 2 года подряд, достоверных отличий с группой плацебо не выявлено (четырехкратное снижение титра антител отмечено в группе привитых только у одного ребенка,. у 58,42 детей титры антител остались без изменений, в группе плацебо - у 83,32), что говорит об отсутствии угнетающего влияния вакцинации на В-систему иммунитета. • . • '

Уровень заболеваемости различными нозологическими формами в течение 6 месяцев после прививки у детей, привитых 2 года подряд, составил 13,62 (в контроле - 11,42), 3 года»- 4,52 (в контроле - 7,62), при анализе заболеваемости отдельными нозологическими формами достоверных отличий с плацебо не выявлено.

Были выявлены преимущества многократного применения ЖГВ в следующих показателях:

1. Отмечено дополнительное нарастание уровня антигемагглю-тинируюших антител и увеличение кратности их прироста после введения вакцины в течение 2 лет. ЖГВ4 стимулировала сероконвер-сии у 59,4Х детей, привитых 1 год, и у 702 детей, привитых в течение 2 лет. Дополнительные сероконверсии зарегистрированы при вакцинации в течение. 3 лет у 32,72 детей, не ответивши па

í

прививку в первый год.

2. При изучении профилактической эффективности препарата в течение 3 лет его применения в условиях контролируемого наблюдения и при массовой вакцинации выявлено снижение заболеваемости детей, иммунизированных 3 года подряд, в 1,6 раза по сравнению с группой плацебо. Полученный индекс эффективности превышал показатели, полученные у детей, привитых в течение 1. года (1,6 по. сравнению с 1,4-1,2).

Полученные нами данные позволили сформулировать рекомендации по целесообразности введения в прививочный календарь прививок против гриппа. В соответствии.с нашими исследованиями первый курс иммунизации против гриппа может быть проведен у детей в возрасте 3, 4 и 5 лет. За этот период у детей формируется иммунитет к применявшимся вакцинным штаммам и иммунологическая память к гриппу, ватем, по мере появления новых антигенных разновидностей вируса гриппа и введения их в состав вакцины, проводятся курсы ревакцинации в 8, 10, И и 12-13 лет. в-периоды, свободные от плановых профилактических прививок против других детских инфекций. Представленные рекомендации позволяют рационально спланировать профилактическую работу в практическом здравоохранении.

'выводы

1*. • Впервые проведенная на детях .3-6 лет сравнительная оценка отечественных инактгаированных гриппозных вакцин (АГХ-вакцины, ШВ-Д, 'Трипповак CE-AS") показала, что изученное вакцины в применяемых догах ве соответствуют требованиям технических условий, предъявляемым к подобного рода препаратам. АГХ-вашша и ГИХВ-Д характеризовались низкой антигенной активностью. вакцина 'Трипповак CE-AS" при достаточно высоких показателях антигенной активности; оказывает побочное действие на организм привитых. _' __

2. В клннихо-зпидемиологических и контролируемых эпидемиологических каЗдшаешш установлена ареактогенность и безвредность для детей З-б.лет »ивой гриппозной рексмбинантной вакцины, гркменашайся как в виде моаопреперата, так н виде дивакцины rana А.

3. Показана ¡амуногеняаз активность живой гриппозной в&к-

I 1

цины, проявляющаяся в формировании сывороточных и секреторных антител у привитых детей.

4. Отмечено, что во время эпидемий, вызванных вирусами гриппа А/Тайванъ/1/86(НШ) и А/Сычуань/2/87 (НЗИ2) при неполном соответствии вакцинного и эпидемического штаммов и развитии эпидемии в период незавершенного формирования поствакцинального иммунитета, индекс профилактической эффективности вакцины в условиях массовой вакцинации составил для детей 3-6 лет 1,4-1,2 соответственно.

5. Выдвинуто положение о целесообразности ежегодных прививок детей живой гриппозной вакциной. Основанием послужили данные об отсутствии нарастания показателей реактогенности и безвредности вакцины, а также повышение показателей стимуляции им-муногенности и профилактической эффективности вакцины у детей, привитых в течение 2-3 лег подряд.

6. Определены пути оптимизации практического применения ЖГВ, предусматривающие проведение массовых прививочных кампаний против гриппа в свободные от других прививок сроки в рамках прививочного календаря.

СПИСОК РАБОТ, ' опубликованных по материализм диссертации

1. Е.П. Григорьева, Л.Г.Руденко, А.Б.Лобанова. Изучение безвредности и прививочной активности субгединичной вакцины "Грипповак" в наблюдениях на детях 3-6' Лет// Осложнения гриппа и других ОГО. - Л., 1985. - С.126-133.

2. Р.И.Васильева, Л.А.Смирнова, Е.П.Григорьева и др. Разработка, апробация и перспективы .применения-новых препаратов для профилактики гриппа и 0Р9 у детей// Тезисы докладов XI Украинского республиканского съезда микробиологов, зпидеииологст и паразитологов, Одесса 9-11 октября 1985 г. - Киев., 1685. 4.1. - С.80-81. ' . •

I 3. И.И.Масленникова, И.О.Павлова, Е.П.Григорьева я др. Формирование специфических сывороточных я секреторных антител У детей, иммунизированных живой гриппозной вакцзвой// Ослсашепия гриппа и других ОРЗ. - Л., 1985. - С. 152-157.

4. Л.Г.Руденко, Р.И.Васильева,-Е.П.Григорьева в др. Завита, от гриппа детей с помодью жявой гриппозной изтрэааза^ной вак-

цины// Методические рекомендации: Утверждено Министерством здравоохранения Казахской ССР 09.09.1986г. - 17с.

5. Н.А.Маркевич, И.И.Масленникова, А.В.Исполатова, С.К.Григорьева, Л.Г.Руденко, Е.П.Григорьева'и др. Формирование специфических антител у дошкольников, иммунизированных живой гриппозной вакциной, воздействие вакцинации на В-систему иммунитета и развитие аллергии// Профилактика гриппа и других ОРЗ у взрослых и детей. - Л., 1987. - С.58-62.

6. Е.П.Григорьева, Е.М.Дорошенко, И.И.Масленникова. Безвредность и прививочная активность живой гриппозной рекомбинант-ной вакцины для детей в условиях многократной иммунизации// Проблемы конструирования гриппозных вакцин. - Л., 1988, -С.138-143.

7. Л.Г.Руденко, Е.П.Григорьева, В.П.Дриневский и др. Итоги изучения живой гриппозной интраназальной вакцины при иммунизации детей 3-15 лет// Журнал микробиол., зпидемиол., и иммуноби-ол.- 1988. - N 5. - С.41-46.

8. Л.Г.Руденко, Я.С.Шварцман, А.В.Исполатова, Е.П.Григорьева и др. Основные характеристики живой гриппозной вакцины для детей из штаммов вируса гриппа А(НШ) и МУ2П2) при раздельном и совместном их применении// Вопр. вирусол. - 1Р89. - N 1.

- С.29-34. _

9. М.И.Гущина, Г.И.Александрова, Т.Е.Медведева, А.И.Климов, К. Я.Лисовская, Л.Г.Руденко, Е.П.Григорьева и др. Штамм 47/Т вируса гриппа А(НШ), используемый для живой интраназальной вакцины для детей// Авторское свидетельство N 1632040 от 01.11.90 г.

10/ и.Й.Гущина, ..Г.И.Александрова, Т.Е.Медведева, А.И.Климов, К.В.Лисовская, А.М.Груннс, Л.Г.Руденко, Е.П.Григорьева.и др. Штамм 47/3 вируса гриппа А(НЗИ2), используемый для живой интраназальной вакцины для детей// Авторское свидетельство N 1655985 ОТ 19.02.91 Г.

-И. Т.А.Ермаченко, К.В.Лисовская, Е.П.Григорьева и др.

©т®ш В/60/32,Р вируса гриппа В. используемый для получения живей мнтранаваяьной вакцины для взрослых » детей// Авторское свидетельство N 1731811 от 08.01.92 г.

32. Л.Г.Р/деюсо, Антоиио Рамирес, Морелия Варро, М.И.Гуйи-ва. Роза Эяева Армапда, Т.А.Ерыаченко, Ю.Р.Романова, Е.П.Григорьева и др. Прививочные свойства живей гриппозной, рекойи-

нантной вакцины типов А и В при раздельном и совмёЬтвом применении детям 3-14 лет// Вопр. вирусол. - 1991. - N 6. -0.472-475.

13. Е.П.Григорьева, А.Р.Рекстин, Л.Г.Руденко и др. Изучение прививочных свойств и профилактической "эффективности живой гриппозной поливалентной вакцины у детей 5-14 лет// Вопр. вирусол. - 1994. - N 1. - С. 26-29.