Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Оптимизация технологии клонального микроразмножения антуриума Андре (Anthurium andreanum Lind.) для промышленного цветоводства

ВАК РФ 06.01.01, Общее земледелие

Автореферат диссертации по теме "Оптимизация технологии клонального микроразмножения антуриума Андре (Anthurium andreanum Lind.) для промышленного цветоводства"

005000885

На правах рукописи

БОГДАНОВА Варвара Дмитриевна

ОПТИМИЗАЦИЯ ТЕХНОЛОГИИ КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ АНТУРИУМА АНДРЕ (Anthurium andreanum Lind.) ДЛЯ ПРОМЫШЛЕННОГО ЦВЕТОВОДСТВА

Специальность 06.01.01 - общее земледелие

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

1 7 НОЯ 2011

Москва 2011

005000885

Работа выполнена на кафедре декоративного растениеводства и газоноведения Российского государственного аграрного университета - МСХА имени К. А. Тимирязева.

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущее учреждение:

доктор сельскохозяйственных наук, профессор Исачкин Александр Викторович

доктор сельскохозяйственных наук, профессор Деменко Василий Иванович

кандидат биологических наук Лебедев Вадим Георгиевич

ГНУ Всероссийский селекционно-технологический институт садоводства и питомниководства

Защита диссертации состоится «6» декабря 2011 года в 14:00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.043.01 при Российском государственном аграрном университете - МСХА имени К.А.Тимирязева по адресу: 127550, Москва, ул. Тимирязевская, 49; тел./факс. 8 (499) 976-24-92

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке РГАУ-МСХА имени К.А.Тимирязева

Автореферат разослан « 3 » ноября 2011 г. и размещен на сайте университета www.timacad.ru и направлен на сайт Министерства образования и науки РФ по адресу référât vak@mon.gov.ru.

Ученый секретарь

диссертационного совета Г} - Е.Л.Маланкина

Общая характеристика работы Актуальность темы. Антуриум Андре (Anthurium andreanum Lind.) -одна из самых перспективных декоративных травянистых горшечных культур в РФ. В мировом промышленном цветоводстве занимает второе место по выращиванию в качестве горшечной культуры. На сегодняшний день в РФ существуют только зарубежные источники поставок антуриума Андре, как на срезку, так и для горшечной культуры. В мировой практике антуриум размножают исключительно в культуре in vitro. В России до 90-ых годов прошлого века антуриум размножали стандартными вегетативными способами (делением куста, черенкованием), но для данной культуры эти способы слишком трудоемки и длительны, имеют низкий коэффициент размножения. Следовательно, возникает необходимость активного внедрения в РФ современных методов клонального микроразмножения антуриума.

В связи с тем, что в промышленном цветоводстве РФ выращивание антуриума ведется с 2008 года исключительно по голландским технологиям, возникает необходимость оптимизации технологии клонального микроразмножения для производства горшечной культуры именно в условиях России.

С помощью технологии in vitro можно быстро получить необходимое количество растений нового сорта или сохранить коллекцию сортов. В настоящее время в технологии микроразмножения антуриума разработаны отдельные этапы. Однако они не всегда отвечают требованиям получения качественного посадочного материала. Основные трудности возникают, как правило, на начальных этапах размножения. Это связано с выбором экспланта, и способом его изоляции. Например, при использовании в качестве экспланта сегментов листовых пластинок наблюдается высокий уровень сомаклональной изменчивости. Кроме того, наличие постоянной эндогенной инфекции затрудняет размножение антуриума Андре в культуре ткани.

Цель и задачи работы. Цель работы - оптимизировать технологию клонального микроразмножения антуриума Андре (Anthurium andreanum Lind.) для промышленного цветоводства в РФ. Задачи исследований:

1. Изучить возможность использования в качестве эксплантов сегментов побегов с апикальной или боковыми почками для промышленного цветоводства.

2. Разработать оптимальный режим стерилизации для данных эксплантов.

3. Изучить влияние генотипических особенностей сортов антуриума Андре на побегообразовательную способность в условиях in vitro.

4. Изучить влияние минерального состава питательной среды и концентрации макроэлементов на развитие растений в условиях in vitro.

5. Изучить влияние 6-БАП в различных концентрациях и синергического взаимодействия 6-БАП с ИУК на побегообразовательную способность антуриума Андре в условиях in vitro.

6. Определить оптимальную методику адаптации растений антуриума Андре, полученных in vitro к нестерильным условиям.

Научная новизна работы. Доказана возможность использования в качестве эксплантов сегментов побега с апикальной или боковыми почками антуриума Андре в связи с отсутствием сомаклональной вариабельности.

Изучено влияние новых стерилизующих агентов на этапе введения эксплантов в культуру in vitro.

Подобран оптимальный состав питательных сред для культивирования антуриума Андре, позволяющий получить более высокий коэффициент размножения.

Доказана необходимость предварительного этапа ризогенеза для ускорения адаптации и получения более качественного посадочного материала.

Практическая значимость работы. Использование в качестве первичного экспланта сегментов побега с апикальной или боковыми почками исключает наличие сомаклональной вариации. Для данного типа экспланта полностью разработана технология клонального микроразмножения, включая этап адаптации. Определены оптимальные концентрации, экспозиция и состав стерилизующих агентов для обработки эксплантов антуриума Андре. Оптимизирован минеральный и гормональный состав питательных сред для этапов микроразмножения и ризогенеза. Определены оптимальные условия адаптации растений антуриума Андре к нестерильным условиям, полученных в культуре in vitro.

Апробация работы. Результаты работы обсуждены на заседании кафедры декортивного садоводства и газоноведения РГАУ-МСХА в 2011 году, на XI молодежной научной конференции ВНИИСХБ «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» (2011г.).

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 159 страницах машинописного текста, состоит из введения, 3 глав, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы и приложений. В тексте содержится 37 таблиц, 27 рисунка, 15 приложений. Список литературы включает 198 источников, в том числе 168 работ иностранных авторов.

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 5 работ, в том числе, 2 в изданиях рекомендованных ВАК РФ.

Материал и методика проведения исследлований.

Эксперименты выполнены в Биолаборатории ООО «Агроинвитро» агрокомбинат Московский (2006-2009 гг.), в лаборатории биотехнологии растений кафедры сельскохозяйственной биотехнологии РГАУ-МСХА им. К.А. Тимирязева (2009 г.) в лаборатории генетики, селекции и биотехнологии овощных культур РГАУ-МСХА им. К.А. Тимирязева (2009-2011 гг.)

Объектами исследований были выбраны различные по окраске покрывал сорта антуриума Андре: Orange love, Dakota, Sumi, Marasol. Маточные растения сортов находятся в ООО «Агроинвитро».

В качетсве экспланта использовали сегмент побега с апикальной или боковыми почками. Сегменты побегов с почками промывали в проточной водопроводной воде (20 мин.), затем помещали в раствор фундазол+ПАВ (20 мин.). Применяли ступенчатую стерилизацию с использованием различных стерилизующих агентов (NaOCl, цефазолин, клафоран, хлорамин-б, certisif сс 250) с последующей промывкой дистиллированной стерильной водой.

Экспланты высаживали на различные питательные среды с добавлением регуляторов роста, витаминов, сахарозы (20-30 г/л) и агар-агара (7-8 г/л); Культивировали в условиях световой комнаты при 16-и часовом фотопериоде и температуре 24°С. Питательные среды готовили по стандартной методике. В качестве регуляторов роста использовали БАП и ИУК.

Опыты проводили в трех- и пятикратной повторностях. В каждой повторности 10 сосудов. В сосуд высаживали 1 эксплант на этапе введения в культуру и по 6 микрочеренков на этапах размножения и ризогенеза.

Учитываемые показатели: на этапе введения эксплантов в культуру- доли приживаемости, контаминации и повреждения стерилизующим агентом (%); на этапе размножения - количество побегов с 100 мм2 базальной части микрочеренка (сегмент стебля с меристематической тканью), количество адвентивных побегов, длину побегов (мм), количество узлов и площадь листовой пластинки (мм2); на этапе ризогенеза - длину побегов (мм), количество и длину корней (мм), площадь листовой пластинки (мм2); на этапе адаптации к нестерильным условиям - приживаемость растений после пересадки (%), прирост надземной части (мм), развитие корневой системы (количество и длина корней) и площадь листовой пластинки (мм2).

Статистический анализ результатов наблюдений проводили с использованием однофакторного и двухфакторного дисперсионного анализа.

Признаки, измеренные в долях, предварительно переводили в величину (p=2arcsin\'p .

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 1. Введение эксплантов в культуру in vitro

На этапе введения эксплантов антуриума в культуру основное внимание было направлено на тип эксплантов, особенности действия стерилизующих веществ, влияние генотипических особенностей сортов антуриума Андре на побегообразовательную способность в условиях in vitro.

В целом по всем вариантам опытов по стерилизации была получена низкая приживаемость эксплантов, отмечен высокий уровень повреждения стерилизующим агентом и контаминация.

Лучшие результаты по приживаемости эксплантов были получены в двух вариантах опыта: при использовании двуступенчатой стерилизации с применением NaOCl 0,5 %, где первая ступень стерилизации 20 минут, вторая ступень- 30 мин и при использовании предварительной обработки certisif сс 250 0,5 мл/л в течении 2 часов с последующей двуступенчатой стерилизацией, где первая ступень стерилизации длится 15 минут, а вторая ступень - 20 минут (рис. 1.).

Воздействие антибиотиков в целом снижает приживаемость эксплантов и увеличивает общую экспозицию стерилизации. Использование хлорамина-б оправдано непосредственно при изолировании эксплантов (вторая ступень стерилизации). _

3£о

^Повреждение _ _ стерилизующим 3 агентом. °/о я Контаминация, %

Приживаемость. ° ь

Рис. 1. Влияние варианта стерилизации на приживаемость эксплантов антуриума Андре (2006-2008 г.г.)

Установлено, что генотип сорта антуриума Андре влияет на длину побегов и площадь листовой пластинки в условиях in vitro. Наибольшую длину побегов к площадь листовой пластинки наблюдали у сорта Sumi, при этом получено наименьшее количество побегов со 100 мм2 площади базальной части микрочеренка. Наибольшее количество побегов было получено у сорта Dakota. В целом, сорта со светлой окраской покрывала образуют более крупные побеги, но в меньшем количестве (табл. 1.).

Таблица 1. Показатели побегообразования сортов антуриума Андре со 100 ммг базальной части микрочеренка (2006-2008 г.г.)_

№ Признак Orange love Dakota Sumi Marasoi HCPos

J количество побегов, шт. 4,45 5,80 1,81 2,58 _

2 длина побега, мм 7,94 4,62 14,52 10,13 6,27

3 количество узлов, шт. 2,70 1,93 5,10 3,35 2,02

4 площадь листовой пластинки, мм2 4,25 14,25 70,13 20,62 18,82

Для первого этапа клонального микроразмножения оптимальной концентрацией цитокинина 6-БАП является 1,5 мг/л для сортов Orange love и Dakota. Важно отметить, что для обоих исследуемых сортов наиболее высокий коэффициент размножения и максимальное число адвентивных побегов отмечается при той же концентрации 1,5 мг/л (табл. 2.).

Таблица 2. Влияние концентрации 6-БАП на рост и развитие антуриума Андре in vitro (2006-2009 г.г.)_

Сорт Концентрация БАП, мг/л

0,5 1 1,0 1 1,5 1 2,0 ! 2,5 I 3,0

Колзчгетао адзеитнвньк побегов, шт.

Orange love 2.37 2,73 3,48 2,59 1,97 2,10

Dakota 1,65 1,97 2,27 2,10 1,61 1,71

НСРО5=0,67

Длина побега, мм.

Orange love 12,73 11,70 13,47 1 18,10 1 14,90 15,64

Dakota 9,98 9,10 9,03 10,50 9,30 9,69

НСРО5=1.83

Площадь ластовой пластаакн. ми2.

Orange love 10,73 20,67 22,32 14,27 8,73 8,47

Dakota 19,29 22.83 31,13 24,46 18,61 18,83

HCP¡)5= 11,29

Коэффициент размножения, шт.

Orange love 2,97 2,97 3,83 3,19 2,40 2,50

Dakota 2,17 2,63 3,27 3,00 2,31 2,69

HCP03=0,56

Установлено, что изменение концентрации 6-БАП оказывает влияние на следующие показатели побегообразования: количество адвентивных побегов, длину побега, площадь листовой пластинки и коэффициент размножения. Показано, что сорт Orange love более чувствителен к изменению концентрации 6-БАП в питательной среде, чем сорт Dakota.

2. Этап собственно клоналького микроразмножений антуриума Андре При микроразмножении антуриума Андре использовали индукцию образования новых адвентивных почек в тканях зкспланта. Данный способ выбран для получения высокого коэффициента размножения в короткие сроки. Кроме того, изучали влияние минерального состава питательной среды на побегообразовательную способность антуриума Андре.

Таблица 3. Влияние концентрации макросолей по MS на побегообразовательную способность антуриума Андре (2006-2008 г.г.)_

Сорт концентрация макросолей no MS

IMS 0.75MS 0,5MS 0,25MS

Количество адвентивных побегов, шт.

Orange love 0,90 1,04 0,58 2,22

Dakota 2,20 1,33 0,94 3,30

Sumí 2,45 0,98 1,22 L 1,58

Marasol 2,27 1,20 1,72 2,05

HCP0,=0,54

Длина побега, мм.

Orange love 14,50 12,42 10,72 13,94

Dakota 14,50 12,42 8,78 10,56

Sumi 8,64 9,64 10,39 11.92

Marasol 12,47 10,27 11,17 10,90

HCP05=1,63

Площадь листовой пластинки, мм2.

Orange love 24,46 12,51 11,14 9,28

Dakota 12,55 10,83 11,17 12,30

Sumi 64,61 51,07 30,67 38,80

Msraso! 12,80 53,47 29,28 44,93

HCPo5= 16,65

Коэффициент размножения, шт.

Orange love 2,11 1,58 1,51 I 2,56

Dakota 2,56 2,00 1,89 3,44

Sumi 2.86 2,02 2,33 2,38

Maraso! 1,80 1,93 2,28 2,43

HCPos=0,59

Было установлено, что сорта по-разному реагируют на изменение концентрации макроэлементов в питательной среде. Оптимальной концентрацией макроэлементов по MS, обеспечивающая наибольший коэффициент размножения является 0,25MS (табл.3)

Наибольшее количество адвентивных побегов и наибольшую длину побегов образует сорт Orange love. Отмечено, что сорта Sumi и Marasoi образут более Ефупные листовые пластинки, но изменение концентрации макросолей в среде не существенно влияет на размер листовых пластинок сортов.

Оптимальный минеральный состав питательной среды, обеспечивающий высокий коэффициент размножения и получение микрочеренков высокого качества имеет среда Фоесарда. Наибольший коэффициент размножения был отмечен у сортов с красной окраской покрывала: Orange love и Dakota. Более низкие показатели получены у сортов со светлой окраской покрывала - Sumi и Marasoi (табл. 4.).

Таблица 4. Влияние минерального состава питательной среды различных авторов на рост и развитие антуриума Андре in vitro (2007-2009 г.г.)

Сорт Минеральный состав питательных сред

Фоесарда BS Кнудсопа MS мод

Количества адвентивных побегоз( нгг.

Orange ïove 3,90 5,43 0,77 2,03

Marasoi 1,77 2,13 0,27 0,43

HCPos=l,09

Длина побгга, мм.

Orange lovs 16,17 15,70 6,90 14,97

Marasoi 11,93 11,87 6,10 12,30

НСР0з=2,б9

Площадь листовой пластинки, мм1.

Orange love 13,67 13,37 9,03 16,80

Marasoi 29,57 14,63 7,53 18,40

KCP0j=5,35

Коэффициент размножения, шт.

Orange love 5,10 5,73 1,67 3,10

Marasoi 2,83 3,17 1,27 1,90

НСРи-1,07

Установлен высокий уровень влияния синергического действия цитокинина (6-БАП) с ауксином (ИУК) в различных концентрациях. При совместном использовании цитокининов с ауксинами в зависимости от их концентрации можно добиться получения большего количества побегов или побегов большей длины. При добавлении в питательные среды наряду с

цитокининами ауксинов в некоторых случаях наблюдали развитие большего числа побегов, чем при использовании только цитокинов. Для всех сортов лучшие показатели были в варианте совместного применения 6-БАП (0,2 мг/л) с ИУК (0,1-0,15 мг/л)

Самые высокие показатели коэффициента размножения для сортов с красной окраской покрывала были получены при применении 6-БАП 0,2 мг/л в сочетании ИУК 0,15 мг/л, для сортов со светлой окраской покрывала- 6-БАП 0,2 мг/л в сочетании ИУК 0,10 мг. При таком соотношении регуляторов роста у сорта Sumí наблюдали ризогенез, что способствовало более быстрому переходу к адаптации in vivo, минуя дополнительный этап корнеобразования. Для сорта Sumi изменение концентрации ИУК при 6-БАП 0,2 мг/л не оказывает существенного влияния на побегообразовательную способность. Следует отметить, что по визуальной оценке некоторых признаков микрорастений (размер побегов, размер и цвет листьев, наличие корней) сорт Sumi за более короткий срок, чем сорт Orange love (45 и 60 дней соответственно) приобретает необходимые качества для последующей адаптации в условиях in vivo (табл.5).

Таблица 5. Влияние концентрации регуляторов роста ИУК и б-БАП на рост и развитие антуриума Андре in vitro (2008-2010 г.г.)_

Сорт Концентрация ИУК при БАП 0,2 мг/л

0,01 0,05 ОД 0,15

Количество адвентивных побегов, шт.

Orange love 1,70 1,73 2,87 3.23

Sumi 0,97 1,03 1,37 0,77

НСРО5=0,69

Длина побега, мм.

Orange love 12,37 13,70 10,83 8,03

Sumi 8,77 7,67 8,50 9,17

НСРО5=1,53

Площадь листовой пластинки, мм2.

Orange love 11,83 11,87 17,93 11,73

Sumi 35,37 30,03 30,27 44,30

различия недостоверны, F3Mn <Fo5

Коэффициент размножения, шт.

Orange love 2,47 2,57 4,03 4,17

Sumi 1,87 2,03 2,40 1,73

НСРО5=0,7

3. Рнзогенез и адаптация

Для индукции корнеобразования в питательную среду добавляли адсорбенты (активированный уголь, полифепан) в концентрациях 0,5 и 1 г/л. Установлено, что на этапе ризогенеза у сорта Orange love наибольшее число корней 3,3 шт. и наиболее длинные корни - 19,57 мм образуются на питательной среде Фоссарда без адсорбента.

В целом наилучшие результаты на этапе ризогенеза для сорта Orange love наблюдаются при использовании питательных сред Фоссарда и lA MS не содержащих адсорбентов (табл. 6).

Таблица 6. Влияние состава питательной среды на ризогенез антуриума Андрг сорт Orange love в условиях in vitro (2010-2011 г.г.)

Состав питательней среды для ризогенеза Длина побега,мм. Количество корней,шт. Длина корней, мм Площадь листовой пласткнки, мм2

полифепан 1 г/л 17,00 2,23 12,70 46,73

полифепан 0,5 г/л+акт. уголь 0,5 г/л 22,87 2,50 14,47 29,73

акт. уголь 1 г/л 18,17 2,67 10,23 67,87

0,5 Ма без адсорбента 19,1 2,93 9,20 32,53

Фоссард-без адсорбента 16,47 3,30 19,57 27,63

НСРо5=1,57 НСРо5=0,6р НСРО5=1,47 НСРО5=15,72

На этапе адаптации к нестерильным условиям у растений, прошедших этап ризогенеза на данных средах наблюдался наименьший прирост и худшие показатели качества развития растений.

На этапе адаптации михрорастений антуриума сорта Orange love к нестерильным условиям наибольшее количество корней 4,7 шт. образуется при использовании на этапе ризогенеза питательной среды, содержащей 1 г/л полифепака. Питательная среда, содержащая 1г/л полифепана, по длине корней достоверно не отличается от питательных сред без адсорбентов. Наиболее длинные корни 23,8 мм и 19,1мм образуются при использовании сред в состав, которых входит полифепан в концентрации 1 г/л и 0,5 г/л в сочетании с 0,5 г/л активированного угля. Следует отметить, что, применяя эти питательные среды на этапе ризогенеза в условиях in vivo, наблюдался наибольший прирост 7мм и 8мм соответственно.

В целом, адаптация растений антуриума лучше проходила при использовании полифепана в концентрациях 1 г/л и 0,5 г/л в сочетании с активированным углем 0,5 г/л (табл. 7).

Таблица 7. Влияние адсорбента на ризоггнез, приживаемость (%) и прирост (мм) антуриума Андре сорта Orange love в нестерильных условиях в зависимости от использования адсорбентов (2010-2011 г.г.)

Состав питательной среды Количество корней, шт Длина корней, ми Приживаемость, % Прирост, мм

полифепан 1 г/л 4,7 19,1 95 7

полифепан 0,5 г/л+акт. уголь 0,5 г/л 2,3 23,8 77 8

акт. уголь 1 г/л 3,2 14,4 86 5

0,5 М8 без адсорбента 3,6 15,5 92 4

Фоссард-без адсорбента 3,6 17,3 75 1

НСР05=1,2 НСРо5=7,6 1 -

По сравнению с сортами Dakota и Marasol, сорт Orange iove на питательной среде Фоссарда без адсорбентов образует более длинные побеги 16,5 мм и большее количество корней 3,3шт., более длинные корни 27,3 мм и более крупные листовые пластинки 78,9 мм2 образуются у сорта Dakota. Для сортов Dakota и Marasol адаптация к нестерильным условиям проходит лучше, чем у сорта Orange love (табл. 8).

Таблица 8. Влияние генотипа сорта на ризогенез антуриума Андре, среда Фоссарда без адсорбента (2010-2011 г.г.)

Сорт Длина побега,мм. Количество корней,шт. Длине корней, мм Площадь листовом пластинки, мм2

Orange love 16,47 3,30 19,57 27,63

Dakota 9,86 1,60 27,31 78,93

Marasol 9,01 2,43 19,55 58,61

HCP0v=i,19 НСР05-0,30 НСРс5=0,69 НСРО5=3,44

При использовании адсорбентов на этапе ризогенеза сорт Orange love образует более длинные побеги, чем сорт Sumi. Наиболее длинные побеги 18,17 мм образуются у сорта Orange love на питательной среде, содержащей 1 г/л активированного угля. Существенных различий в количестве образованных корней у сортов обнаружено не было. Наибольшее количество корней 3,14 шт. образуется у сорта Sumi на питательной среде, содержащей 1 г/л полифепана. Наиболее длинные корни 18,13 мм у сорта Sumi образуются при использовании питательной среды с содержанием 1 г/л полифепана. Установлено, что более

длинные корни у обоих исследуемых сортов образуются при использовании питательной среды, содержащей i г/л полифепана. Следует отметить, что такой показатель как площадь листовой пластинки, имеет большое значение при адаптации in vitro растений к нестерильным условиям. Микрорастения с более крупными листовыми пластинками лучше адаптируются к нестерильным условиям. На этапе ризогенеза площадь листовой пластинки зависит только от генотипа сорта. Наиболее крупные листовые пластинки 97,06 мм2 отмечены у сорта Sumi на питательной среде, содержащей 1 г/л полифепана (табл. 9).

Таблица 9. Влияние генотипа сорта на ризогенез антуриума Андре, среда 'Л. MS (2010-2011 г.г.)

Сорт Концентрация адсорбента г/л

1 активированный уголь 1полкфгпан

Длина побега, мм

Orange love 18,17 17.00

Sumi 10,25 13,13

HCPC5=0,6S

Количество корней, шт.

Orange love 2,67 2,23

Sumi 2,40 3,14

HCP05=0,33

Длина корней, мм.

Orange love 10,23 12,70

Sumi 7,66 18,13

Repass

Площадь ластовой пластинка, км2.

Orange ¡ove 67,87 46,73

Sumi 91,23 97,06

НСРм=9,Зб

В целом на этапе ризогенеза лучшие показатели развития растений для сорта Orange love отмечены при использовании питательной среды Мурасиге и Скуга, модифицированной по макроэлементам, содержащей 1 г/л активированного угля. Для сорта Sumi лучшие показатели отмечены при использовании питательной среды Мурасиге и Скуга, модифицированной по макроэлементам, содержащей 1 г/л полифепана.

Отмечено, что при адаптации микрсрастений антуриума Андре сортов Orange love и Sumi количество и длину корней влияют только генетические особенности сортов, а не вид используемого адсорбента на этапе ризогенеза. Сорт Sumi по сравнению с сортом Orange love образует большее количество корней и более длинные корни (табл. 10).

Таблица 10. Влияние адсорбента на ризогенез, приживаемость (%) и прирост (мм) антуриума Андре в нестерильных условиях в зависимости от сорта и использования адсорбентов (2010-2011 г.г.)

Сорт Концентраций адсорбента г/л

1 акт.уголь 1 полкфепак

Количество корней шт.

Orange love 3,20 4,00

Sumi 5,80 4,20

HCP0j=1.58

Длква корней, мм.

Orange love 14,62 20,41

Sumi 36,20 34,00

HCPo,=6,05

Приживаемость, % ср.

Orange love 86 95

Sumi 83 71

различия недостоверны, F3Mn<Fo5

Прирост, мм. ср.

Orange love 5 7

Sumi 6 6

различия недостоверны, F3Mn<F05

Сорт Orange love лучше приживается при пересадке в нестерильные условия, чем сорт Sumi. В целом при адаптации к нестерильным условиям, лучшие биометрические показатели отмечены у сортов Dakota и Sumi.

Выводы

1. При использовании в качестве эксплантов сегментов побегов с почкой необходима двухступенчатая стерилизация с применением серебросодержапщх препаратов. Наибольшая приживаемость эксплантов (30%) отмечена при использовании certiaif сс 250 в концентрации 1,5 мл/л с последующей основной стерилизации в 0,5% гипохлорите натрия в экспозиции 15 мин до изолирования эксплантов и 25 мин после изолирования эксплантов.

2. Установлено достоверное влияние генотипа сорта на длину побегов и площадь листовой пластинки, максимальные показатели обнаружены у сортов со светлой окраской покрывала. Достоверных различий между сортами по количеству адвентиЕных побегов обнаружено не было.

3. Установлено влияние минерального состава питательной среды на побегообразовательную способность антуриума Андре в условиях in vitro. На этапе введения в культуру оптимально использовать У* MS по макроэлементам и на этапе микроразмножения - питательную среду Фоссарда.

4. Установлено влияние гормонального состава питательной среды на побегообразовательную способность антуриума Андре. На этапе введения в культуру оптимально использовать 6-БАП в концентрации 1,5 мг/л, на этапе микроразмножения использовать сочетание ИУК-6-БАП в концентрации 0,1-0,2

мг/л

5. Для сортов со светлой окраской покрывала возможно исключение этапа ризогенеза, вследствие образования корней на этапе микроразмножения. Для сортов с красной окраской покрывала оптимально применение адсорбентов на этапе ризогенеза.

6. Использование на этапе укоренения адсорбентов положительно влияет на последующую адаптацию растений к нестерильным условиям, оптимальным является применение пояифепана 1г/л.

Рекомендации производству

1. На этапе введения в культуру антуриума Андре рекомендуется з качестве эксплантов использовать апикальные и боковые почки.

2. Необходимо использовать модифицированную среду Мурасиге и Скуга, содержащей четвертную концентрацию макросолей с добавлением 1,5 мг/л 6-БАП

3. При изолировании эксплантов рекомендуется проводить замачивание в растворе certisif сс 250 0,5 мл/л в течении 2 часов, затем дзуетупенчатую стерилизацию гипохлоритом натрия.

4. На этапе микрорезмксжения антуриума необходимо использовать питательную среду Фоссарда с добавлением 0,2 мг/л 6-БАП и среду Мурасиге и Скуга, модифицированную по макроэлементам, с добавлением 0,2 мг/л 6-БАП и 0,1 мг/л ИУК.

5. Укоренение микрочеренхоз следует производить на питательной среде с добавлением адсорбентов:! г/л полифепана или 1 г/л активированного угля.

6. Пересадку укорененных растений в нестерильные условия необходимо проводить через 4 недели.

Список работ, опубликованных, по теме диссертации

1. йсачкин A.B., Богданова В.Д. Перспективы микроразмножения антуриума Андре (Anthurium andreamim). // Доклады ТСХА, вып. 281, ч. 1. М., Изд-во РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева, 2009, с. 205-207.

2. Богданова В.Д., Исачкин A.B. Изучение экспозиции стерилизации для клояального микроразмкожгния антуриума Андре сорта (Anthurium

cmdrecm-am)lDakota'. И Доклады ТСХА, вып. 282, ч. 1. М., Изд-во РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева, 2010, с. 562-564.

3. Богданова В.Д., Исачкин A.B. Изучение влияния генотипа антуриума Андре (Anthurium andreanu.m) на побегообразование в условиях in vitro. // В сборнике «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии». Тез. докл. XI молодежной научной конференции. М., Изд-во «Сервис Принт», 2011, с. 15-17.

4. Богданова В.Д., Исачкин A.B. Влияние концентрации регуляторов роста на побегообразовательную способность антуриума Андре в условиях in vitro. // ArpoXXI, № 7-9, М., ООО «Издательство Агрорус», 2011, с. 41-43.

5. Богданова В.Д., Исачкин A.B. Антуриум Андре:размножение in vitro. // Цветоводство, № 6, М., ООО 'Редакция журнала'Цветоводство", 2011, с. 1819.

Отпечатано с готового оригинал-макета

Формат 60х841Лб. Усл. печ. л. 0,93. Тираж 100 экз. Заказ 509.

Издательство РГАУ - МСХА имени К.А. Тимирязева 127550, Москва, ул. Тимирязевская, 44

Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Богданова, Варвара Дмитриевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Биологические особенности антуриума Андре.

1.2. Болезни антуриума Андре.

1.3. Способы размножения антуриума Андре.

1.4. Антуриум Андре как горшечная культура в промышленном цветоводстве.

1.5. Клональное микроразмножение, как способ ускоренного размножения и оздоровления декоративных культур.

1.6. Технология микроразмножения антуриума Андре.

1.6.1. Выбор экспланта и подготовка маточного растения.

1.6.2. Приготовление и стерилизация эксплантов антуриума Андре.

1.6.3. Введение в культуру семян антуриума Андре.

1.6.4. Введение в культуру эксплантов листа, черешка, покрывала антуриума Андре.

1.6.5. Введение в культуру апикальных и боковых почек антуриума Андре

1.6.6. Соматический эмбриогенез антуриума Андре.

1.6.7. Ризогенез.

1.6.8. Физиологические и экологические основы адаптации регенерантов к нестерильным условиям.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА II. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Место проведения и объекты исследований.

2.2. Методы исследований.

2.2.1. Стерилизация эксплантов.

2.2.2. Введение эксплантов в культуру in vitro.

2.2.3. Состав питательных сред на этапе размножения.

2.2.4. Влияние минерального состава питательных сред разных авторов на побегообразование антуриума в условиях in vitro.

2.2.5. Влияние гормонального состава среды на этапе размножения антуриума.

2.2.6. Ризогенез и адаптация к нестерильным условиям.

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Влияние способов стерилизации на приживаемость эксплантов.

3.1.1. Влияние экспозиции стерилизации на приживаемость эксплантов

3.1.2. Влияние способов стерилизации с участием антибиотиков на приживаемость эксплантов.

3.1.3. Влияние концентрации стерилизующего агента на приживаемость эксплантов.

3.1.4. Влияние концентрации стерилизующего агента с участием хлорамина-б на приживаемость эксплантов.

3.1.5. Влияние солей серебра certisif сс 250 на приживаемость эксплантов

3.2. Введение эксплантов в культуру in vitro.

3.3. Состав питательных сред на этапе размножения.

3.3.1. Влияние минерального состава среды на побегообразование антуриума в условиях in vitro.

3.3.2. Влияние концентрации нитрата аммония на побегообразование антуриума в условиях in vitro.

3.3.3. Влияние минерального состава питательных сред разных авторов на побегообразование антуриума в условиях in vitro.

3.4. Влияние гормонального состава среды на этапе размножения антуриума.

3.4.1. Влияние концентрации 6-БАП на побегообразование антуриума в условиях in vitro.

3.4.2. Изучение синергического действия 6-БАП и ИУК на побегообразование антуриума в условиях in vitro.

3.5. Ризогенез и адаптация к нестерильным условиям.

3.5.1. Влияние состава питательной среды на ризогенез сорта Orange love в условиях in vitro и последующую адаптацию к нестерильным условиям.

3.5.2. Влияние генотипа сорта антуриума на ризогенез в условиях in vitro и последующую адаптацию к нестерильным условиям.

ВЫВОДЫ.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Оптимизация технологии клонального микроразмножения антуриума Андре (Anthurium andreanum Lind.) для промышленного цветоводства"

Цветоводство является в настоящее время одной из самых доходных отраслей сельского хозяйства во всем мире. Цветоводство в нашей стране имеет такое же большое значение, как и развитие других отраслей народного хозяйства. И главной задачей, цветоводства сегодня является — бесперебойное обеспечение населения цветочной продукцией широкого ассортимента, высокого качества, с учетом покупательского спроса. Одной из самых перспективной культурой в мире и у нас в стране является антуриум Андре, который в будущем, вероятно, займет одну из лидирующих позиции по объему производства.

Основными способами размножения антуриума Андре в мире является микроклональное размножение. До настоящего времени в РФ не проводили размножение антуриума in vitro в промышленных масштабах.

В настоящий момент в промышленном цветоводстве существуют только импортные источники поставок антуриума, как на срезку, так и в качестве горшечной культуры. Такое положение дел имеет ряд существенных недостатков, среди которых особенно следует выделить следующие:

• транспортировка и хранение (необходимость транспортировки не только требует значительных денежных затрат, но и существенно снижает качество поставляемой продукции);

• карантинный аспект;

• экономический аспект;

При покупке за рубежом стоимость черенков складывается из:

• достаточно высокой стоимости самого посадочного материала;

• длительной процедуры таможенной очистки;

• стоимости включения сорта в Госреестр;

• оплаты услуг брокера;

• оплаты складов временного хранения.

Все эти расходы составляют до 40% стоимости посадочного материала. Можно существенно уменьшить затраты при производстве антуриума, если выращивать высококачественный посадочный материал у нас в стране.

Себестоимость промышленного производства черенков антуриума in vitro в Нидерландах составляет: 1 черенок — 20-50 евроцентов, а цена продажи 80 евроцентов — 1 евро, а после адаптации стоимость возрастает до 1,5 евро и к этому еще необходимо прибавить затраты на доставку и цена адаптированного черенка в России будет составлять 2,1 евро. А цена адаптированного материала выращенного в России будет составлять 25-30 руб. за черенок.

Существует несколько методов размножения антуриума: стеблевыми черенками, семенами, in vitro.

Однако только размножение in vitro совмещает высокий коэффициент размножения, хорошее качество и выравненность посадочного материала. Для сравнения при размножении отрезками побегов одно растение дает за год до 5 растений, а методом in vitro за год получают до 5000 клонов с одного растения. Кроме того, при размножении стеблевыми черенками от маточных растений передается вирусная, грибная и бактериальная инфекции и такой метод требует наличия больших площадей для размножения.

Следовательно, метод микроклонального размножения антуриума экономически более эффективен по сравнению с другими способами размножения на сегодняшний день. Поэтому существует необходимость более глубокого изучения стерильной культуры антуриума Андре и близких к нему видов.

Кроме всех перечисленных аспектов, метод культуры тканей позволяет решить ряд следующих трудностей при микроклональном размножении антуриума, наиболее значимыми из которых являются:

1. Наличие постоянной эндогенной инфекции. При наличии активного роста и регенерации культура должна проходить индексацию на наличие бактериальных инфекций. Следует уточнить, что в промышленном цветоводстве в качестве экспланта при микроразмножении антуриума используют части листовых пластинок, сегменты базальной части черешков, сегменты редуцированных листьев, сегменты покрывала с последующим ростом недифференцированной ткани на экспланте. И далее индуцируют регенерацию почек, побегов, эмбриоидов. Что приводит к возникновению следующей трудности. 2. При регенерации из каллусной ткани существует серьезная проблема, связанная с сомаклональной вариабельностью, которая на некоторых сортах может достигать 40 %. Следует напомнить, что сомаклональная вариабельность — это размах колебаний в различии признаков у растений, регенерируемых из культивируемых соматических клеток. Следовательно, возникает необходимость разработки экономически -эффективного метода размножения in vitro антуриума Андре, позволяющего минимизировать сомаклональную вариабельность и обеспечить высокое качество посадочного материла.

Научная новизна работы. Доказана возможность использования в качестве эксплантов сегментов побега с апикальной или боковыми почками антуриума Андре в связи с отсутствием сомаклональной вариабельности. Изучено влияние новых стерилизующих агентов на этапе введения эксплантов в культуру in vitro. Подобран оптимальный состав питательных сред для культивирования антуриума Андре, позволяющий получить более высокий коэффициент размножения. Доказана необходимость предварительного этапа ризогенеза для ускорения адаптации и получения более качественного посадочного материала.

Практическая значимость работы. Использование в качестве первичного экспланта сегментов побега с апикальной или боковыми почками исключает наличие сомаклональной вариации. Для данного типа экспланта полностью разработана технология клонального микроразмножения, включая этап адаптации. Определены оптимальные концентрации, экспозиция и состав стерилизующих агентов для обработки эксплантов антуриума Андре. Оптимизирован минеральный и гормональный состав питательных сред для этапов микроразмножения и ризогенеза. Определены оптимальные условия адаптации растений антуриума Андре к нестерильным условиям, полученных в культуре in vitro.

Цель и задачи работы. Цель работы - оптимизировать технологию клонального микроразмножения антуриума Андре (Anthurium andreanum Lind.) для промышленного цветоводства в РФ.

Задачи исследований:

1. Изучить возможность использования в качестве эксплантов сегментов побегов с апикальной или боковыми почками для промышленного цветоводства.

2. Разработать оптимальный режим стерилизации для данных эксплантов.

3. Изучить влияние генотипических особенностей сортов антуриума Андре на побегообразовательную способность в условиях in vitro.

4. Изучить влияние минерального состава питательной среды и концентрации макроэлементов на развитие растений в условиях in vitro.

5. Изучить влияние 6-БАП в различных концентрациях и синергического взаимодействия 6-БАП с ИУК на побегообразовательную способность антуриума Андре в условиях in vitro.

6. Определить оптимальную методику адаптации растений антуриума Андре, полученных in vitro к нестерильным условиям.

Заключение Диссертация по теме "Общее земледелие", Богданова, Варвара Дмитриевна

ВЫВОДЫ

1. При использовании в качестве эксплантов сегментов побегов с почкой необходима двухступенчатая стерилизация с применением серебросодержащих препаратов. Наибольшая приживаемость эксплантов (30%) отмечена при использовании certiaif сс 250 в концентрации 1,5 мл/л с последующей основной стерилизации в 0,5% гипохл орите натрия в экспозиции 15 мин до изолирования эксплантов и 25 мин после изолирования эксплантов.

2. Установлено достоверное влияние генотипа сорта на длину побегов и площадь листовой пластинки, максимальные показатели обнаружены у сортов со светлой окраской покрывала. Достоверных различий между сортами по количеству адвентивных побегов обнаружено не было.

3. Установлено влияние минерального состава питательной среды на побегообразовательную способность антуриума Андре в условиях in vitro. На этапе введения в культуру оптимально использовать ХЛ MS по макроэлементам и на этапе микроразмножения - питательную среду Фоссарда.

4. Установлено влияние гормонального состава питательной среды на побегообразовательную способность антуриума Андре. На этапе введения в культуру оптимально использовать 6-БАП в концентрации 1,5 мг/л, на этапе микроразмножения использовать сочетание ИУК-6-БАП в концентрации 0,10,2 мг/л

5. Для сортов со светлой окраской покрывала, возможно исключение этапа ризогенеза, вследствие образования корней на этапе микроразмножения. Для сортов с красной окраской покрывала оптимально применение адсорбентов на этапе ризогенеза.

6. Использование на этапе укоренения адсорбентов положительно влияет на последующую адаптацию растений к нестерильным условиям, оптимальным является применение полифепана 1г/л.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ

1. На этапе введения в культуру антуриума Андре рекомендуется в качестве эксплантов использовать апикальные и боковые почки.

2. Необходимо использовать модифицированную среду Мурасиге и Скуга, содержащую четвертную концентрацию макросолей с добавлением 1,5 мг/л 6-БАП.

3. При изолировании эксплантов рекомендуется проводить замачивание в растворе certisif сс 250 0,5 мл/л в течении 2 часов, затем двухступенчатую стерилизацию гипохлоритом натрия.

4. На этапе микроразмножения антуриума необходимо использовать питательную среду Фоссарда с добавлением 0,2 мг/л 6-БАП и среду Мурасиге и Скуга, модифицированную по макроэлементам, с добавлением 0,2 мг/л 6-БАП и 0,1 мг/л ИУК.

5. Укоренение микрочеренков следует производить на питательной среде с добавлением адсорбентов: 1 г/л полифепана или 1 г/л активированного угля.

6. Пересадку укорененных растений в нестерильные условия необходимо проводить через 4 недели.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата сельскохозяйственных наук, Богданова, Варвара Дмитриевна, Москва

1. Бутенко Р.Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе: уч. пособие. М.: ФБК-ПРЕСС, 1999. - 160 е.: ил.

2. Высоцкий В.А. Клональное микроразмножение растений // Культура клеток растений и биотехнология. М.: Наука, 1986. - С. 91-102.

3. Гасымов Ш.Н. Оптимальный режим клонального микроразмножения антуриума Андре // 22 секция совета ботанических садов Закавказья по вопросам интродукции растений. 1987. С. 55-56.

4. Деменко В.И. Микроклональное размножение садовых растений: уч. издание. -М.: изд. МСХА, 2007. 53 с.

5. Деменко В.И. Основные проблемы микроклонального размножения садовых растений на современном этапе. // Доклады ТСХА: Сборник статей, Вып. 282, Часть 1. М.: Изд-во РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева, 2010, с. 565-568.

6. Деменко В.И., Михальчик Л.Е. Размножение яблони и вишни методом in vitro. // Доклады ТСХА: Сборник статей, Вып. 277, М.: Изд-во РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева, 2005, с. 528-533.

7. Денисьевская H.A. Биологические особенности плодоношения антуриумов в защищенном грунте // Интродукция и акклиматизация растений. Киев: Наук. Думка. 1989. - С. 57-60.

8. Денисьевская H.A., Майко Т.К., Кушнир Г.П. Значение эндогенных факторов при микроразмножении антуриума Андре // Интродукция и акклиматизация растений. Киев: Наук. Думка. - 1988. - Вып. 9. - С. 6669.

9. Калинин Ф.Л., Сарнацкая В.В., Полищук В.Е. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений. Киев: Наукова думка, 1980. - 488 с.

10. Калинин Ф.Л., Сарнацкая В.В., Полищук В.Е., Желтоножская JI.B. Исследование процесса опухолевой трансформации у растений с использованием метода культуры ткани. В кн.: Проблемы онкологии и тератологии растений. JL: Наука, 1975, с. 343-347

11. Капранова H.H. Комнатные растения в интерьере. М.: изд. МГУ. -1989.- 190 с.

12. Кефели В.И. Природные ингибиторы роста и фитогормоны. М.: Наука, 1974.-252 с.

13. Кефели В.И., Комизерко Е.И., Жлоба Н.М., Мазин В.В., Шашкова JI.C., Филонова В.П., Яковлева JI.B. Образование фенольных соединений в некоторых растительных объектах, чувстваительных к цитокининам. -Докл. АН СССР, 1976, 229, № 4, с. 1018-1021

14. Крючкова В. А. Биотехнологические приемы оптимизации микроклонального размножания и адаптации генотипов сирени / автореферат. М.: изд. МСХА, 2005. - 20 с.

15. Лаврентьева А.Н. Особенности микроразмножения интродуцируемых растений закрытого грунта // Тезисы докладов. Кишинев: 1989. - С. 99-101.

16. Лаврентьева А.Н. Особенности микроразмножения интродуцируемых растений закрытого грунта. // Тезисы докладов. Кишинев, 1989, с. 99100.

17. Митрофанова О.В., Мустафин А.М. Технология выращивания безвирусного антуриума Андре // Интродукционное изучение цветочных растений. Сборник научных трудов. Ялта. - 1985. Т. 97, - С. 1-11.

18. Негрук В.И. Пер. с англ; С предисл. Бутенко Р.Г. Биотехнология растений: культура клеток. М.: Агропромиздат, 1989. - 280 е.: ил.

19. Негрук В.И. Пер. с англ; С предисл. Бутенко Р.Г. Биотехнология сельскохозяйственных растений. М.: Агропромиздат, 1987. - 304 с.

20. Новак Ф.И., Непустил Й. Клоновое размножение Anthurium andreanum посредством каллусной культуры in vitro // Третья конференция по культуре клеток: Тез. докл. Абовян: Изд-во АН СССР, 1979. - С. 140.

21. Ругите Я. Ароидные: Великолепен в срезке // Цветоводство №1. М.: Агропромиздат. - 1990. - С. 20.

22. Скрипчинский В.А. Естественное изменение длины дня в тропиках как фактор, регулирующий ритмы роста и развития местных растений // Ботан. журн. 1958. - 43. - С. 490-503.

23. Слепушенко Е.П. Антуриумы для массового выращивания // Цветоводство №6. М.: изд. Колос. 1979. - С. 12.

24. Тахтаджан A.JI. Жизнь растений. Цветковые растения. М.: Прсвещение, 1982, Т.6. - 543 с.

25. Турецкая Р.Х., Леонова Н.Т., Коф . Э.М. Содержание фенольных ингибиторов и ауксинов в этиолированных и зеленых растениях и их рост // Фенольные соединения и их биологические функции. — М.: Наука, 1968.-С. 261-268.

26. Уоллес А.Р. Тропическая природа. М.: Мысль, 1975. - 222 с.

27. Уоринг Ф., Филипс И. Рост растений и дифференцировка. М.: Мир, 1984.-512 с.

28. Цоглин Л., Гавель H., 1994. Автоселекционные процессы при микроклональном размножении растений. Фототрофное размножение картофеля in vitro. Физиол. Раст., т. 41, вып. 3. С. 436-439

29. Червеченко Т.М., Кушнир Г.П. Биология и размножение антуриума Андре в закрытом грунте. Докл. АН УССР, 1981, серия «Б», с. 83-86.

30. Шевелуха B.C., Калашникова Е.А., Воронин Е.С. и др. Сельскохозяйственная биотехнология: Учеб; Под ред. Шевелухи B.C. -2-е изд., перераб. и доп. М.: Высш. шк., 2003. - 469 е.: ил.

31. Atak С. and Celik О. Micropropagation of anthurium andreanum from leaf expiants. Pak. J. Bot., 41(3): 1155-1161, 2009.

32. Atta-Alla H., Mcalister B., Van Staden J. (1998). In vitro culture and establishment of Anthurium parvispathum. South African Journal of Botany, 64: 296-298

33. Bejoy, M., V.R. Sumitha and N.P. Anish. 2008. Foliar regeneration in Anthurium andreanum Hort. cv. Agnihotthri. Biotechnology, 7(1): 134-138

34. Borchsenius, F. (1997). Patterns of plant species endemism in Ecuador. Biodiversity and Conservation, 6, 379-399.

35. Bown, D. 2000. Aroids: plants of the arum family, second edition. Timber, Portland, Oregon, USA. 468 p.

36. Boxus P and Terzi J-M (1987). Big losses due to bacterial contaminations can be avoided in mass propagation scheme. Acta Hort. 212: 91-93.

37. Bradbury, F.G., 1988. Identification of cultivable bacteria from plants and plant tissue cultures by use of simple classical methods. Acta Hortic., 225: 27-37

38. Brown, D.C.W., Leung, D.W.M., Thorpe, T.A.: Osmotic requirement for shoot formation in tobacco callus. Physiol. Plantar. 46 (1979), 36-41.

39. Brown, D.C.W., Thorpe, T.A. : Changes in water potential and its components during shoot formation in tobacco callus. Physiol, plantar. 49 (1980), 83-87.

40. Brown, W.D. And Thorpe, D.A., 1984. Organization of plant tissue culture laboratory. In: K.I. Vasil (Editor), Cell Culture and Somatic Genetics of Plants. Vol. 1. Academic Press, London, pp. 1-12.

41. Capellades, Q.M., Beruto, M., Vandershaeghe, A. and Debergh, P.C., 1991. Ornamentals. In: P.C. Debergh and R.H. Zimmerman (Editors), Micropropagation. Kluwer Academic, Dordrecht, pp. 215-229

42. Carpenter, G., Gillison, A.N. and Winter, J. (1993) DOMAIN: a flexible . modeling procedure for mapping potential distributions of plants andanimals. Biodiversity and Conservation, 2, 667-680.

43. Castillo B., Smith M.A.L. Direct somatic embryogenesis from Begonia gracilis explants. Plant Cell Rep 1997; 16(6): 385-8

44. Chen, J., D.B. McConnell, R.J. Henny and K.C. Everitt. 2003. Cultural guidelines for commercial propagation of interiorspace anthurium. University of Florida, IFAS extension, EHN956

45. Cheng, T.-Y., H. Saka und T.H. Voqui-dinh 1980: Plant regeneration from soybean cotyledonary node segments in culture. PL Sci. Lett. 19, 91-99.

46. Cooksey, D.A. 1985. Xanthmonas blight of Anthurium andreanum in California. Plant Dis. 69: 727

47. Croat T (1986) The distribution of Anthurium (Araceae) in Mexico, Middle America and Panama. Selbyana 9: 94-99

48. Croat, T.B. (1995). Floristic comparisons of Araceae in six Ecuadorian florulas. Biodiversity and conservation of Neotropical Montane Forests (eds S.P. Churchill, H. Balslev, E. Forero and J.L. Luteyn), pp. 489-499. The New

49. York Botanical Garden, New York.

50. Croat, T.B. 1979. The distribution of the Araceae. Tropical botany (eds. K. Larsen and L.B. Holm-Nielsen), pp. 291-308. Academic Press, London.

51. Croat, T.B. 1980. Flowering behavior of the Neotropical genus Anthurium (Araceae). Amer. J. Bot. 67: 888-904

52. Croat, T.B. 1983. A revision of the genus Anthurium (Araceae) of Mexico and Central America. Part I: Mexico and Middle America. Annals of the Missouri Botanical Garden, 79: 17-28

53. Croat, T.B. 1988. Ecology and life forms of Araceae. Aroideana, 11. p. 4.

54. Croat, T.B. 1992. Species diversity of Araceae in Colombia: a preliminary survey. Annals of the Missouri Botanical, 79: 17-28.

55. Croat, T.B. 1999. Araceae. Catalogue of the vasvular plants of Ecuador. Monograph systematic botany from Missouri Botanical Garden (eds. P.M. Jorgensen and S. Leon-Yanez), pp. 227-246

56. De Wald S.G., Litz R.E. and Moore G.A. (1989). Optimizing somatic embryo production in Mango. J. Amer. Soc. Hort. Sci. 114: 712-716.

57. Debergh, C.P. And Maene, L.J., 1981. A Scheme for commercial propagation of ornamental plants by tissue culture. Scientia Hortic., 14: 335-345

58. Dressier, R.L. 1968. Observations on orchids and euglossine bees in Panama and Costa Rica. Rev. Biol. Trop. 15: 143-183

59. Dufour, L. and V. Guerin. 2003. Growth, developmental features and flower production of Anthurium andreanum Lind. In tropical condition. Scientia Horticulture, 98: 25-35

60. Dufour, L. and V. Guerin. 2005. Nutrient solution effects of the development and yield of Anthurium andreanum Lind., in tropical soilless conditions.

61. Scientia Horticulture 105: 269-282.

62. Duncan, D.B. 1955. Multiple range and multiple F tests. Biometrics, 11:142.

63. Dye D.W. (1962). The inadequacy of the usual determinative tests for identification ofXanthomonas ssp. N.Z.J. Sci. 4: 393-416.

64. Dye D.W. (1964). The taxonomic position of Xanthomonas trifolii. (Huss 1907) James 1955. N.Z.L. Sci. 7: 261-269.

65. Eapen S., Rao P.S. (1985). Regeneration of plant from Anthurium patulum. Current Science, 54: 284-286

66. Esau, K. 1977: Anatomy of seed plants. John Wiley und Song Verlag, New York, Santa Barbara, London, Sydney, Toronto, 550 S.

67. Feng, Y.L.D., Z. Sun and C. Niu. 2006. Micropropagation of Parthenocissus quinquefolia L., from seedling explants. Journal of Applied Horticulture, 8(2): 151-154

68. Finnie JF, van Staden J (1986) In vitro culture of Anthurium andreanum. S Afr J Bot 52: 343-346

69. Franz, Nico M. 2007. Pollination of Anthurium (Araceae) by derelomine flower weevils (Coleoptera: Curculionidae). Rev. Biol. Trop. Vol. 55(1): 269-277.

70. Gamborg O.L., Eveleigh D.E. Culture methods and detection of glucanases in cultures of wheat and barley. Can. J. Biochem., 1968, 46, № 5, p. 417421

71. Geier T. (1988). Ploidy variation in callus and regenerated plants of Anthurium scherzerianum Schoot. Acta Hort. 226: 293-298.

72. Geier T. Morphogenesis and plant regeneration from spadix fragments ofthanthurium scherzerianum cultivated in vitro. Proc. 5 Intl. Cong. Plant Tissue and Cell Culture. Plant Tissue Culture, 1982. 137-138.

73. Geier, T., 1990. In: P.V. Ammirato, N.R. Sharp, D.A. Evans and B.J. Bajaj (Editors), Anthurium. Handbook of Plant Cell Culture. Vol. 5. McGraw-Hill,1. New York, pp. 228-252

74. Gentry, A.H. (1986). Endemism in tropical versus temperate communities. Conservation biology: the science of scarcity and diversity (ed. M.E. Soule), pp. 153-181. Sinauer Assoc., Sunderland, MA.

75. Gentry, A.H. (1995). Patterns of diversity and floristic composition in Neotropical. Montane Forests (eds S.P. Churchill, H. Balslev, E. Forero and J.L. Luteyn), pp. 103-126. The New York Botanical Garden, New York.

76. George, E.F., M.A. Hall and J.D. Klerk. 2008. Plant propagation by tissue culture, Volume 1. The Background, Springer, pp. 65-75

77. George, J., et al.: The use of a novel stabilizing substrate for the in vitro cultivation of cauliflower (Brassica oleacea L. var botrytis). Plant cell rep. 2 (1983), 189-191.

78. Gerlach, D. 1977: Botanische Microtechnik. Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 311 S.

79. Grayum, M.H. 1990. Evolution and phylogeny of the Araceae. Ann. Missouri Bot. Gard. 77: 628-697

80. Guevara, Y.M. and Debrot. 1987. Bacterial blight of anthurium in Venezuela, p. 764. In: E.L. Civerolo, A. Collmer, R.E. Davis, and A.G. Gillespie (eds.). Plant pathogenic bacteria. Martinus Nijhoff, Dordrecht, The Netherlands.

81. Guilan W., Chao C., Wei L., Yanmei L. Cytological study on callus of leaf and reprodaction block mass of aerial root in anthurium andreanum. Acta hortic. Sinica. 2006, 33(3): 587-591.

82. Guisan, A. and Zimmermann, N.E. (2000). Predictive habitat distribution models in ecology. Ecological Modelling, 135,147-186.

83. Hamidah, M., A.G.A. Karim and P. Debergh. 1997. Somatic embryogenesis and plant regeneration in Anthurium scherzerianum. Plant Cell, Tissue, Organ Culture, 48: 189-193

84. Hawaii Agricultural Statistics Service (1994) Hawaii flowers and nursery products, annual summary. Hawaii Dep Agric, US Dep Agric, Honolulu,1. Hawaii

85. Hayward, A.C. 1972. A bacterial disease of Anthurium in Hawaii. Plant Dis. Rptr. 56: 904-908

86. Herman, B.E., 1987. Special tissue. Contamination of plant tissue cultures: Toward control of micropropagation contamination. Agricell Rep., 9(5): 3334

87. Higaki T., Lichty J.S., Moniz D. (1994). Anthurium culture in Hawaii. HITAHR Research Extension Series 152, University of Hawaii, Honolulu

88. Higaki T., Rasmussen H.P. (1979). Chemical induction of adventitious shoots in anthurium. HortScience 14: 64-65

89. Hohe A., Winkelmann T., Schwenkel H.G. Development of somatic eembryos of Cyclamen persicum Mill. in liquid culture. Gartenbauwissenschaft 2001; 66: 219-2492. http://www.anthura.nl.

90. Hutchinson J.F., Kaul V., Maheswaran G., Moran J.R., Graham M.W., Richards D.(1992). Genetic improvement of floricultural crops using biotechnology. Australian Journal of Botany, 40: 765-787

91. Hvoslef-Eide A.K., Preil W. (2005). Liquid culture systems for in vitro plant production. Springer, Dordrecht, The Netherlands.

92. Imamura J., Higaki T. (1988). Effect of GA3 and BA on lateral shoot prodaction on Anthurium. HortScience 23: 353-354

93. International Floriculture Quarterly Report (1992). Cut flower 1991 rankings, vol 3. Pathfast Publishing, Essex, pp 56-62

94. Izsak, E. und S. Izhar 1983: Rapid micropropagation of strawberry plantletsfrom seeds for breeding purposes. Acta Hort. 131, 101-103.

95. Jaime A. Teixeira da Silva, S. Nagae and Michio Tanaka. Effect of physical on micropropagation of anthurium andreanum. Plant Tissue Cult. 15(1): 1-6, 2005 (June).

96. Jain S.M. Feeding the world with induced mutations and biotechnology.

97. Proc. Int. Nuclear Conference 2002 Global trends and Perspectives. Seminar 1: agriculture and bioscience. Bangi, Malaysia: MINT; 2002. p. 114

98. Jain S.M., Jenks M.A., Rout G.R., Radojevic L. Micropropagation of ornamental potted plants. Propagation of Ornamental Plants Vol. 6, № 2, 2006: 67-82.

99. Jingming W., Yonghua L., Shengqin H., Lina L., Qingsheng Y. Effect of elevanted C02 concentration on Photosynthetic rate, growth and development in anthurium andreanum Lind. Leaves. Acta hortic. sinica. 2005, 32 (2): 335-338.

100. Jiu C.M., Xu Z.H. (1992). An efficient procedure for micropropagation of Anthurium scherzerianum schott (flamingo flower). Chinese Journal of Botany, 4: 49-55

101. Jones, D. and Sacking, M.S.J., 1980. Numerical methods in the classification and identification of bacteria with special reference to the Enterobacteriaceae. Soc. Appl. Bacteriol. Symp. Ser., 8: 73-106

102. Joseph D., Martin K.P., Madassery J., Philip V.J. (2003). In vitro propagation of three commercial cut flower cultivars of Anthurium andreanum Hort. Indian Journal of Experimental Biology, 41: 154-159

103. Keller E.R.J., Brehmer M., Hofer E. Micropropagation of anthurium andreanum Lind. And the use of a Novel Stabilizing Substrate. Arch. Gartenbau, Berlin 34 (1986) 3, 149-156.

104. Kessler, M. (2002). The elevational gradient of Andean plant endemism: varying influences of taxon-specific traits and topography at different taxonomic levels. Journal of Biogeography, 29, 1159-1165.

105. Kim S.W., Oh S.C., In D.S., Liu J.R. Plant regeneration of rose (Rosa hybrida) from embryogenic cell derived protoplasts. Plant Cell Tissue Organ Cult 2003a; 73(1): 15-9

106. Knapp, S. (2002). Assessing patterns of plant endemism in Neotropical

107. Uplands. Botanical Review, 68, 22-37.

108. Knauss J.F. and Miller J.W. (1978).

109. Kraft. U., Gräser, H. Gajek, W.: Erfolgreiche Zusammenarbeit von Wissenschaft und Praxis bei der Gewebevermehrung von Anthurium-Andreanum-Hybriden, Gartenbau 30 (1983), 281-283.

110. Krieg, R.N. and Holt, J.G. (Editors), 1984. Bergey's Manual of Sistematic Bacteriology. Vol. 1. Williams and Wilkins, Baltimore, London, pp. 140-598

111. Kuehnle A.R., Nan G.L. (1991). Isolation and culture of protoplasts from two tropical monocots, Anthurium and Dendrobium orchid. Physiol Plant 82: A7

112. Kuehnle A.R., Sugii N. (1991). Callus induction and plantlet regeneration of , ► Hawaii anthurium. HortScience 26: 919-921

113. Kunisaki J.T.(1980) In vitro propagation of Anthurium andreanum. Lind. Hort. Science 15: 508-509.

114. Leffring, L., Hoogstrate, J., Braster, M.: Weefselkweek Anthurium resultaten nog lang geen 100%. Vakblad v. d. bloemisterij 31 (1976), 14-15.

115. Leggatt, V.l., Waites, W.M., Leifert, C. and Nicholas, J., 1988. Characterisation of micro-organisms isolated from plants during micropropagation. Acta Hortic., 225: 93-102

116. Leifert C. and Waites W.M. (1992). Bacterial growth in plant tissue culture media. J. Applied. Bacterial. 72: 460-466.

117. Leifert C., Waites W.M and Nicholas J.R. (1989). Bacterial contamination of micropropagated plant cultures. J. Applied. Bacterial. 67: 353-361.

118. Leifert, C. and Waites, W.M., 1990. Contaminants of plant tissue cultures.

119. Newsletter (IAPTC), 60: 2-13

120. Leike, H. u.a.: "Stabilisator fur ein Nahrmedium" DDR -WPC 12 N 5/00 1595 07.

121. Leshem, B.: Growth of carnation meristems in vitro. Anatomical structure of abnormal plantlets and the effect of agar concentration in the medium on their formation. Ann. Bot. 52 (1983), 413-417.

122. Levi A. and Sink K.C. (1990). Differential effects of sucrose, glucose and fructose during somatic embryogenesis in asparagus. J. Plant Physiol. 137: 184-189. '

123. Lightbourn G.J., Devi Prasad P.V. (1990). In vitro techniques for rapid multiplication of four varieties of Anthurium andreanum in Jamaica. Proc Interam Soc Trop Hort 34: 3-5

124. Lipp, R.L., A.M. Alvarez, A.A. Benedict, and J. Berestecky. 1992. Use of monoclonal antibodies and pathogenicity tests to characterize strains of Xanthomonas campestris pv. dieffenbachiae from aroids. Phytopathology 82: 677-682

125. Loiselle, B.A., Howell, C.A., Graham, C.H., Goerck, J.M., Brooks, T., Smith, K.G. and Williams, P.H. (2003). Avoiding pitfalls of using species distribution models in conservation planning. Conservation Biology, 17, 1591-1600.

126. Lorz, H. 1984: Variability in tissue culture derived plantlets. In: Peacock, W.J. und P. Starlinger (eds.), Genetic manipulation: impact on man and society, ICSU Press, Cambridge, 103-114.

127. Mac Faddin, F.J., 1980. Biochemical Tests for Identification of Medical Bacteria. Williams and Wilkins, Baltimore, London, pp. 1-13

128. Madison M. (1980). Aroid profile no. 6: Anthurium andreanum. Aroideana 3: 58-60

129. Madison, M. 1979. Protection of developing seeds in Neotropical Araceae. Aroideana 2: 52-61

130. Martin, K.P., D. Joseph, J. Madassery and V.J. Philip. 2003. Direct shoot regeneration from lamina explants of two commercial cut flower cultivars of Anthurium andreanum Hort. In Vitro Cell. Dev. Biol-Plant, 39:500-504.

131. Matsumoto T.K. and Kuehnle A.R (1997) Micropropagation of Anthurium. Biotechnology in Agriculture and Forestry, Vol. 40, pp 14-29.

132. May R.A., Trigiano R.N. Somatic embryogenesis and plant regeneration from leaves of Dendrathema grandiflora. J. Am Soc Hortic Sci 1991; 116: 366-371

133. Mayo, S.J., J. Bogner and P.C. Boyce. 1997. The genera of Araceae, with contribution from J.C. French and R. Hegnauer, illustrations by E. Catherine. Royal Botanical Gardens, Kew. 370 p.

134. Miller T.E. and Schroth M.N. (1972). Monitoring the epiphytic populations of Erwinia amylovora on pear with a selective medium. Phytopathology 62: 1175-1182.

135. Mize, C.W. And Y.W. Chun. 1988. Analysing treatment means in plant tissue culture research. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 13: 201-217.

136. Mu, L. 1990. Anthurium culture and bligth in Tahiti, p. 37-38. In: A.M. Alvarez (ed.). Proc. Third Anthurium Blight Conf. HITAHRJ. Ser. 05.07.90.

137. Murashige T., Skoog F. (1962). A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture. Physiol Plant 15: 473-497

138. Murch S.J., Victor J.M.R., Saxena RK. Auxin, calcium and sodium in somatic embryogenesis of African violet (Saintpaulia ionantha Wendl.) cv. Benjamin. Acta Hortic 2003; 625: 201-9

139. Natural, M.P. 1990. Anthurium blight in the Philippines, p. 38. In: A.M. Alvarez (ed.). Proc. Third Anthurium Blight Conf. HITAHRJ. Ser. 05.07.90.

140. Neill, D. (1999). Catalogue of the vascular plants of Ecuador. Monograph systematic botany from Missouri Botanical Garden (eds. P.M. , J0rgensen and S. Leon-Yanez), pp. 385-386. Missouri Botanical Garden, St. Louis, MO.

141. Nhut, D.T., N. Duy, N.N.H. Vy, C.D. Khue, D.V. Khiem and D.N. Vinh. 2006. Impact of Anthurium spp. Genotype on callus iduction derived from leaf explants, shoot and root regeneration capacity from callus. Journal of Applied Horticulture, 8(2): 135-137

142. Nitsch J.P. (1969). Experimental androgenesis in Nicotinia. Phytomorphology 19: 389-404

143. Norman D, Alvarez A (1994) Latent infections of in vitro anthurium caused by Xanthomonas campestris pv. dieffenbachiae. Plant Cell Tissue Organ Cult 39: 55-61

144. Norman, D.J. 1997. Minimizing losses to anthurium blight. Florida Grower's Ornamental Outlook 6(1): 22-23

145. Orlikowska T., Sabala I., Nowak E. (1995). Adventitious shoot regeneration on explants of Anthurium, Codiaeum, Diffenbachia, Gerbera, Rosa and Spathiphyllum for breeding purposes. Acta Horticulture, 420: 115-117

146. Osternack N., Saare-Surminski K., Preil W., Lieberei R. Induction of somatic embryos, adventitious shoots and roots in hypocotyls tissue of

147. Euphorbia pulcherrima Willd. Ex Klotzsch: comparative studies on embryogenic and organogenic competence. J. Appl Bot 1999; 73: 197-201

148. Peterson, A.T. (2001). Predicting species geographic distributions based on ecological niche modeling. Condor, 103, 559-605.

149. Pierik R.L., Van Leenwen A., Rigter G. Regeneration of leaf expiants of a anthurium andreanum Lindl, in vitro // Netherl. J. Agricult. Sei. 1979. - 7, №3.- P. 221-226.

150. Pierik R.L.M. (1991). Commercial micropropagation in Western Europe and Israel. In: Debergh P.C.,Zimmerman R.H. (eds) Micropropagation. Kluwer, Dordrecht, pp 155-165

151. Pierik R.L.M., (1976). Anthurium andreanum plantlets produced from callus tissues cultivated in vitro. Physiologia Plantarum, 37: 80-82

152. Pierik, R.L.M., H.H.M. Steegmans and J.A.J. Van der Meys. 1974. Plantlet formation in callus tissue of Anthurium andreanum Lind. Scientia Horticulture, 2:193-198

153. Poddar, K., R.K. Vishnoi and S.L. Kothari. 1997. Plant regeneration from embriyogenic callus of finger millet Eleusine coracana (L.) Gaerth., on higher concentrations of NH4N03 as a replacement of NAA in the medium. Plant Science, 129: 101-106

154. Poupet A., Beck D., Bettachini B., Onesto J.-P. et Rolande Poupet. Multiplication in vitro de deux especes d'anthurium: a. andreanum et a. scherzerianum. C.R. Acad. Agri. De France, 1985, 71, № 2, pp. 151-156.

155. Preil W. (2003). Micropropagation of ornamental plants. In: Laimer M., Rucker W. (Eds.). Plant tissue culture 100 years since Gottlied Haberlandt. Springer-Verlag, New York: 115-133.

156. Prior, P., B. Hostachy, P. Sunder, and P. Rott. 1986. Bacterial blight (Xanthomonas campestris pv. dieffenbachiae) and bacterial leaf spot (Pseudomonas sp.) of Anthurium in the French West Indies. Inst. Natl. Rech. Agron., Sta. Pathologie Veg., Paris.

157. Puchooa, D. and D. Sookun. 2003. Induced mutation and In vitro cultured of Anthurium andreanum AMAS, Food and Agricultural Research Council, Reduit, Mauritius, 17-27

158. Pueschel A.K., Schwenkel H.G., Winkelmann. Inheritance of the ability for regeneration via somatic embryogenesis in Cyclamen persicum. Plant Cell Tissue Organ Cult 2003; 72: 43-51

159. Qinying L., Qiren L., Huiying H., Yanjun Z., Xingyun X. The callus induction of anthurium andreanum Linden and bud differentiation. Acta hortic. Sinica. 2003, 30(1): 107-110.

160. Reuther, G. 1977: Embryoide Differenzierungsmuster im Kallus der Gattungen Iris und Asparagus. Ber. Deutsch. Bot. Ges. 90, 417-437.

161. Rodriguez, R. 1982: Multiple shoot but formation and plantlet regeneration on Castanea sativa Mill. Seeds in culture. Plant Cell Rep. 1, 161-164.

162. Romeis, B. 1968: Mikroskopische Technik. R. Oldenburg Verlag, München und Wien, 552 S.

163. Rosario T.L., Lapitan L.A. (1981). Callus and plantlet formation in Anthurium andreanum Lind. Phillipp Agric 64: 197-202

164. Rout G. R., Jain S.M. (2004). Micropropagation of ornamental plants-cut flowers. Propagation of Ornamental Plants, 4: 3-28.

165. Rout G. R., Jain S.M. (2005). Micropropagation of floricultural crops. In: Murch S.J., Saxena P.K. (Eds.). Journey of a single cell to plant. Oxford & IBH Publishing Company, New Delhi, India: 309-365.

166. Rout G.R., Debata B.K., Das P. Somatic embryogenesis in callus cultures of Rosa hybrida L. cv. Landora. Plant Cell Tissue Organ Cult 1991; 27: 65-9

167. Rout G.R., Mohapatra A., Jain S.M. Tissue culture of ornamental pot plant: A critical review on present scenario and future prospects. Biotechnology Advances 24 (2006) 531-560.

168. Sanchez R.T., Gradaille M.D., Borrero L.N., Laffitte O.C., Avila M.B. Micropropagacion de variedades de anthurium andreanum de Ínteres comercial. Agrícola vergel/ diciembre 1999. 793-797.

169. Schuld B.A., Crane J. and Harrison M.D. (1992). Symptomless infection with Clavibacter michiganensis subspecies sepedonicius during tissue culture propagationof potato. Can. J. Plant Sci. 72: 943-953.

170. Silva, J.A.T., S. Nagae and M. Tanaka. 2005. Effect of Physical Factors on Micropropagation of Anthurium andreanum. Plant Tissue Culture, 15(1): 1-6

171. Singh F., Sangama (1991). Micropropagation and plant conformity in Anthurium andreanum. In: Prakash J., Pierik R.L.M. (eds) Horticulture -new technologies and applications. Kluwer, Dordrecht, pp 201-204

172. Skov, F. (2000). Potential plant distribution mapping based on climatic similarity. Taxon, 49, 503-515.

173. Skov, F. and Borchsenius, F. (1997). Predicting plant species distribution patterns using simple climatic parameters: a case study of Ecuadorian palms. Ecography, 20, 347-355.

174. Sneath, P.H.A., 1986. Some thoughts on bacterial classification. J. Gen. Microbiol., 17: 185-200

175. Starr M.P. (1946). The nutrition of phytopathogenic bacteria I. Minimal nutritive requirements of genus Xanthomonas. J. Bacterial. 51: 131-143.

176. Tanaka K., Kanno Y., Kudo S., Suzuki M. Somatic embryogenesis and plant regeneration in Chrysanthemum (Dendrathema grandiflorum Ramat.) Kitamura. Plant Cell Rep 2000; 19: 946-53

177. Te-chato, S., T. Susanon and Y. Sontikun. 20 medium influencing embryogenesis and organogenesis in Anthurium spp. 06. Cultivar, explant type and culture. Songklanakarin J. Sci. Technol., 28(4): 717-722

178. Teng, W.L. 1997. Regeneration of Anthurium adventitious shoots using liquid or raft culture. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 49: 153-156

179. Trolinder N.L. and Goodin J.R. (1988). Somatic embryogenesis in cotton (Gossypium) I. Effects of source of explants and hormone regime. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 12: 31-42.

180. Vallencia, R, Pitman, N., Leon-Yanez, S. and J0rgensen, P.M. (2000). Libro rojo de las plantas endemicas del Ecuador. Herbario QCA, Pontificia Universidad Catolica del Ecuador, Quito.

181. Vargas, J.H., T. Consiglio, P.M. Jordensen and T.B. Croat. 2004. Modelling distribution patterns in a species-rich plant genus, Anthurium (Araceae), in Ecuador. Diversity Distrib., 10, 211-216.

182. Vargas, T.E., A. Mejias, M. Oropeza and E. Garcia. 2004. Plant regeneration of Anthurium andreanum cv. Rubrun. Electronic Journal of Biotechnology, 7(3): 282-286

183. Weijie X., Bin X., Guangdong W., Weiming G., Fangde W., Jianping J. Somatic embryogenesis and plant regeneration of anthurium andreanum. Actahortic. Sinica. 2006, 33(6): 1281-1286.

184. White Ph. R. Handbook of plant tissue culture. Jaques Cattell press, 1943a, 4, p. 791-794

185. Wicart G., Mouras A., Lutz A. Histological study of organogenesis andembryogenesis in Cyclamen persicum Mill. Tissue culture: evidence for a single organogenetic pattern. Protoplasma 1984; 119: 159-67

186. Winkelmann T., Hohe A., Schwenkel H.G. Establishing embryogenic suspension cultures in Cyclamen persicum 'Purple Flamed'. Adv Hortic Sei 1998; 12: 25-30

187. Young, F. 1990. Anthurium blight in Jamaica, p. 37. In: A.M. Alvarez (ed.). Proc. Third Anthurium Blight Conf. HITAHRJ. Ser. 05.07.90.

188. Young, K.R., Ulloa Ulloa, C., Luteyn, J.L. and Knapp, S. (2002). Plant evolution and endemism. Andean South America: an introduction. Botanical Review, 68, 4-27.

189. Yunpeng Z., Weiming G., Guangdong W. Observation on anatomic structure of eight kinds of calli in anthurium andreanum. Acta hortic. Sinica. 2005, 32(1): 60-64.

190. Zens A. und Zimmer K. Entwicklung von Klonsorten bei Anthurium scherzerianum Scott mit Hilfe von in-vitro-Kulturtechniken II. Histologische Analyse der Sprobproliferation in vitro gekeimter Samen. Gartenbauwissenschaft, 53 (3). S. 110-113, 1988.

191. Магаво! селикционер АпШига; присвоено название - АпШезёи; покрывало крупное, цвет - желтый ; окраска незрелого початка - оранжевая; окраска зрелого початка -кремовая.