Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Особенности размножения алтайских генотипов вишни и микровишни с использованием методов биотехнологии

ВАК РФ 06.01.07, Плодоводство, виноградарство

Автореферат диссертации по теме "Особенности размножения алтайских генотипов вишни и микровишни с использованием методов биотехнологии"

На правах рукописи (/^ ..--с ■&>—

ПЛАКСИНА Татьяна Викторовна

ОСОБЕННОСТИ РАЗМНОЖЕНИЯ АЛТАЙСКИХ ГЕНОТИПОВ ВИШНИ И МИКРОВИШНИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДОВ БИОТЕХНОЛОГИИ

Специальность 06 01 07 - плодоводство, виноградарство

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

□03 161160

Барнаул-2007

003161160

Работа выполнена в ГНУ Научно-исследовательский институт садоводства Сибири имени М А Лисавенко СО РАСХН

Научный руководитель - академик РАСХН

доктор сельскохозяйственных наук, профессор Калинина Ида Павловна

Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук, профессор

Северин Виталий Федорович,

кандидат сельскохозяйственных наук Полухин Николай Иванович

Ведущее учреждение: НИУ Центральный Сибирский

Ботанический сад СО РАН

Защита состоится « / » ноября 2007 г в « Л » часов на заседании диссертационного совета Д 220 002 03 при ФГОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет» по адресу 656049, г Барнаул, пр-т Красноармейский, 98 Факс (385-2)62-83-96

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет»

Автореферат разослан « / » г

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

С.В. Макарычев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы Производство высококачественного посадочного материала является одним из важнейших направлений развития современного садоводства Вишня одна из наиболее распространенных косточковых культур в садах юга Западной Сибири, в том числе на Алтае В последние десятилетия урожайность вишни и площади под этой культурой в промышленных садах Алтайского края значительно сократились Одна из основных причин этого - широкое распространение грибного заболевания - коккомикоза, к которому многие сорта оказались восприимчивыми

Привлечение методов биотехнологии является альтернативой традиционно используемым подходам решения вопросов размножения и сохранения ценных генотипов Методы биотехнологии позволяют осуществлять быстрое размножение ценных экземпляров растений, получать в больших количествах вегетативное потомство трудно размножаемых видов и форм, ускорять селекционный процесс (Высоцкий, 1986)

Морфогенетический потенциал и регенерационная способность культивируемых тканей плодовых культур во многом зависят от генотипа и условий культивирования

Алтайский генофонд вишни значительно отличается от европейского В создании сибирского сортимента вишни участвовали два вида вишня степная (Cerasus fruticosa Pall) и вишня обыкновенная (Cerasus vulgaris Mill), оба они не устойчивы к коккомикозу В НИИСС имени М А Лисавенко созданы перспективные сорта и отборные формы отдаленных гибридов с высокой устойчивостью к этому заболеванию Необходимо быстрое размножение их, сохранение ценных гибридных генотипов Поэтому совершенствование методов микроразмножения с использованием разных типов эксплантов для устойчивых к коккомикозу отборных гибридов и сортов вишни является актуальным

Цель исследований — усовершенствовать технологию ускоренного размножения устойчивых к коккомикозу алтайских генотипов вишни и микровишни m vitro

Задачи исследований заключались в изучении

- сроков изоляции и регуляторов роста на рост и развитие гибридных зародышей in vitro,

- влияния экзогенных регуляторов роста на процессы регенерации в культуре изолированных тканей семядолей,

- регуляторов роста на регенерационные процессы на стадиях собственно размножения и окоренения,

- влияния расположения почки на побеге при микроразмножении,

- влияния элементов минерального питания на коэффициент размножения и рост отборных форм церападусов в культуре m vitro,

- морфологических и цитологических признаков сортов, полученных путем микроразмножения,

- целесообразности использования растений сортов вишни, выращенных m vitro, при их зеленом черенковании,

- показателей эффективности использования методов биотехнологии для размножения сортов вишни

Научная новизна Впервые разработана технология размножения m vitro для устойчивых к коккомикозу алтайских генотипов вишни и микровишни

Впервые дана сравнительная оценка особенностей микроразмножения, окоренения и адаптации к нестерильным условиям различных алтайских генотипов вишни Подобраны оптимальные концентрации регуляторов роста на всех этапах их размножения в культуре m vitro

Выявлена стабильность морфологических, цитологических признаков сортов вишни степной после микроразмножения

Показана возможность повышения эффективности размножения зелеными черенками у трудно окореняемого сорта вишни Селиверстовская при использовании в качестве маточных растений, размноженных путем m vitro

Практическая значимость работы. Отработаны технологические приемы выращивания растений m vitro из зародышей, тканей семядолей и изолированных апексов, размножены m vitro ценные генотипы отдаленных гибридов 9 комбинаций скрещивания (133 генотипа), 5-ти отборных форм церападусов и 2-х сортов вишни. Показана целесообразность использования клонированных in vitro растений для последующего использования их при размножении зелеными черенками

Реализация результатов. Заложен коллекционный участок и маточник размноженных m vitro гибридов вишни, микровишни, сортов вишни

На четыре госсортоучастка переданы саженцы двух новых сортов селекции НИИСС (95 штук), размноженные методом in vitro

Основные положения, выносимые на защиту:

1 Увеличение коэффициента размножения генотипов вишни и микровишни достигается модификацией состава питательных сред (минеральные соли, регуляторы роста)

2 Для размножения вишни зелеными черенками целесообразно использовать маточные растения, размноженные m vitro

3 Эффективность применения методов биотехнологии для ускоренного размножения генотипов вишни и микровишни

Апробация работы. Основные результаты работы представлены на международных научных и научно-практических конференциях «Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда» (Москва, 1997), «Biotechnology approaches for exploitation and preservation of plant resources» (Yalta, Ukraine,

2002), «Биология клеток растений in vitro и биотехнология» (Саратов, 2003), «Генетические ресурсы растениеводства Дальнего Востока» (Владивосток, 2004), на региональных научно-практических конференциях «Адаптивный подход в земледелии, селекции и семеноводстве сельскохозяйственных культур в Сибири» (Новосибирск, 1996), «Научно-экономические проблемы регионального садоводства» (Барнаул, 2003), «Проблемы устойчивого развития садоводства Сибири» (Барнаул,

2003), на конференции научной молодежи «Молодые ученые в решении проблем аграрной науки» (Новосибирск, 1997), на IX и X генетико-селекционных школах РАСХН, Сибирское отделение (Новосибирск, 2004,2007)

Результаты исследований доложены на заседаниях ученых советов НИИСС им Лисавенко (1996, 1997, 2002-2006 гг)

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ общим объемом 1,32 печатных листа Доля автора 1,32 печатных листа

Объем и содержание работы Диссертация изложена на страницах машинописного текста, состоит из введения, 5 глав, выводов, рекомендаций производству, списка использованной литературы из 296 наименований, в том числе 106 на иностранных языках, содержит 26 таблиц, 39 рисунков и 6 приложений

Глава 2. Объекты, условия и методика проведения исследований

Исследования выполнены в лаборатории биотехнологии ГНУ НИИСС имени Лисавенко в 1996,1997, 2002-2007гг

Объекты исследований - сорта, отборные формы и гибриды родов вишня (Cerasus Mill), микровишня (Microcerasus Webb emend Spach), черемуха (Padus Mill) (табл 1)

Таблица 1

Объекты исследований и типы культивируемых эксплантов

Объект исследования Обозначение генотипа Тип экспланта

Гибриды вишни (Сегоят)-. 3-66-9(6х)* — свободное опыление зародыш, фрагменты семядолей, пазушные почки регенерантов

3-66-9(6х) х черемуха обыкновенная г2

3-66-9(6х) х черешня Дрогана желтая г4

3-66-9(6х) х в пенсильванская г5

^66-9(6х) х в Максимовича г6

ВЧ 8-83-46(6х) х черемуха обыкновенная г7

ВЧ 8-83-46(6х) х черешня Дрогана желтая г8

Гибриды микровишни (М1сгосега$и.ч): в песчаная х в войлочная Г3

Отборные формы церападусов (в. степнаях в. Маака), ВЧ 89-95-48 ВЧ 48 апикальные меристемы, пазушные почки регенерантов

ВЧ 89-95-49 ВЧ 49

ВЧ 89-95-50 ВЧ 50

ВЧ 89-95-51 ВЧ 51

ВЧ 89-95-53 ВЧ 53

Сорта вишни-. Кристина К

Селиверстовская С

*3-66-9(6х) — вишня степная х вишня обыкновенная

Гибридизацию, с целью получения устойчивых к коккомикозу гибридов, проводили в теплицах селекционного центра в соответствие с «Программой и методикой селекции плодовых, ягодных и орехоплодных культур» (1995)

В качестве основных питательных сред применены минеральные составы по прописям Мурасиге и Скуга (МС), Гамборга и Эвелега (В5). В работе использованы общепринятые приемы работы с культивируемыми изолированными тканями растений (Калинин и др, 1980)

Зародыши разных комбинаций скрещивания изолировали через 30, 45, 60 дней после опыления, использовали ткани семядолей 45-дневных зародышей.

На этапе микроразмножения испытывали различные концентрации бензила-минопурина (БАП) 1-10 мкМ

Для окоренения использовали питательные среды на основе половинного состава солей по МС и В5, дополненные -индолилмасляной кислотой (ИМК) или -индолилуксусной кислотой (ИУК) в концентрации 1-10 мкМ

При культивировании семядолей на 0-пассаже применяли чередование физических условий культивирования темнота (2 недели) и фотопериод (2 недели) Зародыши, меристемы и пазушные почки культивировали в условиях фотопериода 16 часов день / 8 часов ночь

Учет результатов экспериментов проводили через 20-30 суток, каждый эксперимент проводили в 10 повторностях и более

Регенерационную способность культивируемых тканей и органов изучаемых растений оценивали по количеству эксплантов, регенерировавших морфогенные структуры (почки, корни, листья или пролиферирующце только каллусную массу), по темпам роста и развития побегов-регенерантов Темпы роста и развития каллуса учитывали по 4-балльной системе (- рост отсутствует, + рост слабый, ++ рост средний, +++ рост сильный)

На этапе собственно размножения коэффициент размножения оценивали по количеству образовавшихся дополнительных почек или развившихся побегов

Зеленое черенкование проводили согласно технологии выращивания посадочного материала вишни, разработанной в НИИСС имени М А Лисавенко (1989)

Цитологические исследования проведены с помощью микроскопа «Jenaval» (Zeiss), подсчет хромосом по методике ЦГЛ им ИВ Мичурина (1976), фертиль-ность и жизнеспособность пыльцы исследована по общепринятым методикам (Паушева, 1988)

При обработке результатов исследований использованы методы статистического анализа В таблицах приведены средние арифметические величины и доверительный интервал (х ± tSx), или средние арифметические величины и ошибка сред-ней(х ± Sx), средние арифметические величины и наименьшая существенная разница (Рокицкий, 1973, Доспехов, 1985)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Влияние сроков изоляции и регуляторов роста на развитие зародышей вишни и микровишни in vitro

Успех эмбриокультуры in vitro зависит от срока изоляции зародыша и применяемой питательной среды В наших экспериментах использована питательная среда МС, дополненная БАП 1-2 мкМ, а также БАП 2 мкМ и ГК 5 мкМ.

На безгормонапьной питательной среде 30-дневные зародыши не прорастали и погибали Добавление в питательную среду регуляторов роста способствовало нормальному росту и развитию зародышей В зависимости от генотипа и концентрации регуляторов роста процент проросших зародышей составлял от 12,5 до 80 При БАП 1 мкМ процент прорастания варьировал от 12,5 до 40, при БАП 2 мкМ от 37,5 до 80 %, только для одного генотипа (Г 2) лучшие результаты получены на среде с совместным использованием БАП и ГК (табл 2)

Таблица 2

Влияние регуляторов роста на развитие изолированных 30-дневных зародышей отдаленных гибридов вишни и микровишни

Комбинация скрещивания БАП/ГК, мкМ Проросло зародышей, % Количество листьев, шт / зародыш, х ± tSx

3-66-9 (6х)св оп (п=10) 1/0 2/0 2/5 40,0 80,0 60.0 4,1±0,3 4,3±0,2 4,3±0,2

3-66-9 (6х) х черемуха обыкновенная (п=6) 1/0 2/0 2/5 т"> о JJP ^ -t о J 50,0 3,5±0,8 4,4±0,7 4,2±0,7

мв песчаная х мв. войлочная (п=5) 1/0 2/0 2/5 40,0 60,0 60,0 5,0±0,8 5,0±0,5 4,0±0,7

3-66-9 (6х) х черешня Дрогана желтая (п=5) 2/0 2/5 40,0 40,0 3,0±0,6 3,0±0,6

3-66-9 (6х) х в пенсильванская (п=7) 1/0 2/0 2/5 28,6 57,1 57,1 4,3±0,5 3,8±0,4 3,5±0,6

3-66-9 (6х) х в Максимовича (п=8) 1/0 2/0 2/5 12,5 37,5 37,5 3,3±0,4 5,8±0,8 5,4±0,8

Примечание св оп - свободное опыление, в — вишня, мв - микровишня

Прорастание 45-дневных зародышей всех комбинаций скрещивания на всех вариантах питательных сред составило от 33,3 до 100 % (табл 3)

Таблица 3

Влияние регуляторов роста на развитие изолированных 45-дневных зародышей

Комбинация скрещивания БАП/ ГК, мкМ Проросло зародышей, % Количество листьев, шт /зародыш Количество дополнительных побегов, шт./зародыш Длина первичного корня, мм

3-66-9 (6х) св оп (контроль)п=14 0/0 50,0 4,2±0,5 0 4,3±0,2

3-66-9 (6х) св оп, Гь п=10 1/0 2/0 2/5 70,0 90,0 100 5,9±0,6 5,8±0,6 4,3±0,5 0 1,3±0,3 1,7±0,3 6,0±0,1 4,9±0,6 5,5±0,3

3-66-9 (6х) х черемуха обыкновенная, Гь п=7 1/0 2/0 2/5 42,9 71,4 71,4 5,5±0,4 5,4±0,5 5,4±0,5 0 0 0 5,5±0,4 3,2±0,5 4,0±0,2

мв песчаная х мв войлочная, Г3, п=5 1/0 2/0 2/5 50,0 60,0 100 4,1 ±0,8 5,0±0,8 5,4±0,6 0 3,0±1 1,6±0,5 4,9±0,4 3,2±0,3 3,5±0,5

3-66-9 (6х) х черешня Дрогана желтая, Г4, п=б 1/0 2/0 2/5 33,3 66,7 66,7 5,0±0,6 5,5±0,5 5,0±0,6 0 0 0 5,5±0,3 3,9±0,1 5,0±0,2

3-66-9 (6х) х в пенсильванская, Г5, п=7 1/0 2/0 2/5 57,1 71,4 85,7 4,0±0,6 4,3±0,8 4,3±0,8 0 3,1±2,1 2,0 2,0±0,2 1,0±0,4 1,7±0,2

3-66-9 (6х) х в Максимовича, Г6, п=8 1/0 2/0 2/5 35,5 50,0 75,0 3,3±0,4 5,8±0,6 5,4±0,5 0 1,0 0 6,6±0,2 4,8±0,2 5,5±0,3

8-83-46 {6 х) черемуха обыкновенная, Г7, п=5 2/0 2/5 60,0 80,0 3,6±0,7 4,0±0,8 0 0 1,2±0,3 1,7±0,4

8-83-46 (6 х) х черешня Дрогана желтая, Г8, п=6 1/0 2/0 2/5 0 50,0 50,0 0 4,5±0,7 5,2±0,5 0 0 0 0 1,7±0,1 2,5±0,2

В отдельных комбинациях скрещивания число проросших 45-дневных зародышей увеличилось в 2 (Г5) и 2,8 раза (Г6), по сравнению с 30-дневными Зародыши были нормально развиты У зародышей отдельных комбинаций скрещивания (Гь Г3, Г5) на среде с БАП 2 мкМ наблюдалось образование дополнительных побегов за счет развития пазушных почек - от 1 до 5 побегов на один зародыш Совместное использование БАП с ГК не влияло на прорастание зародышей Г2, Г4, Г8, а в Гз, Г3, Г6, Г7 - стимулировало их развитие На этой среде наблюдалось образование дополнительных побегов у зародышей Гь Г3, Г5

Нормально развившихся 60-дневш>1х зародышей (75-100 %) получено на питательной среде с 2 мкМ ЬАП и 5 мкМ ГК.

Таким образом, целесообразно вводить в культуру in vitro зародыши через 45 дней после опыления, используя среду с БАП 2 мкМ. Этот срок изоляции является наиболее результативным и даст выход нормально развивающихся гибридных зародышей от 50 до 90 %. Кроме тор, зародыши этого срока изоляции чаще образуют дополнительные пазушные побеги, что является важным показателем при размножении ценных гибридных форм.

3.2, Культура изолированных тканей семядолей гибридов вишни

и ми крови щ ни

Нще одним типом экспланта при микроразмножении служили изолированные ткани семядолей. Ткани семядолей у многих видов растений обладают высоким морфогенетическим потенциалом.

15 качестве контроля использовали питательную среду без регуляторов роста. Па такой среде отмечалось незначительное увеличение размеров изолированных тканей семядолей, которые к концу пассажа темнели и погибали (100 % гибель экс-плантов). Интенсивность стеблевого органогенеза у тканей семядолей вишни и микровишни зависела от используемых в питательной среде регуляторов роста. Регенерация почек происходила при использовании более широкого диапазана концентраций и соотношения БАП и ПУК (БАП от 2 до 10 мкМ, ПУК от 0,5 до 2 мкМ (рис, 1).

Г"....... ~ ~ — "—----- ~ — !

3 4 5 6 Сортообразцы

■ 2 мкМ БАП

в 2 мкМ БАП + 0,5 мкМ НУК

□ 2 мкМ БАП + 5мкМ ГК

□ 10 мкМ БАП

□ 10 мкМ 6АП + 2 мкМ НУК

а 10 мкМ БАП + 2 мкМ НУК + 5 мкМ ГК

L

Примечание. 1 - Г:; 2 - Гг; 3 - Гэ; 4 - Г4; 5 - 6 -Г6; 7 - Г?; 8 - Г8 Рисунок 1. Влияние регуляторов роста па реге нерационную способность культивируем их in vitro тканей семядолей гибридных семян вишни и макровишни

Для большинства объектов исследования наиболее оптимальной явилась среда, дополненная БАП 10 мкМ и НУК 2 мкМ

3.3. Микроразмножение сортов, гибридов, отборных форм вишни и микровишни путем активации развития меристем

Коэффициент размножения на этапе собственно размножения оценивается по количеству образовавшихся почек или развившихся побегов Изучено влияние места расположения почки на побеге на развитие побегов и коэффициент размножения у разных генотипов вишни и микровишни (табл 4)

Таблица 4

Влияние концентрации БАП на регенерационную способность пазушных почек разных генотипов вишни и микровишни

Генотип Концентрация БАП, мкМ

1 2 5 10

3-66-9(6х) х черемуха обыкновенная 1,8 ±0,8* 2,0 ± 0,5** — 4,9 ±1,3 2,0 ± 0,7 1,5 ±0,7 1,1 ± 0,6

3-66-9(6х) х в Максимовича 10,4 ±0,8 14,1 ±0,9 11,4 ±0,7 14,1 ±0,4 18,7 ±0,5 21,2 ± 1,8 5,0 ±0,1 7,9 ±0,5

3-66-9(6х) х в пенсильванская 10,3 ± 0,7 14,1 т 0,9 12,3 ± 0,5 14,9 ± 0,5 16.6 ± 0,5 20.7 ± 2,9 5,5 ± 0,5 6,9 ± 0,7

в песчаная х в войлочная 4,0 ± 0,7 4,7 ± 0,7 — 3,0± 0,6 3,0 ± 0,4 1,6 ±0,8 2,0 ± 1,2

Сорт Кристина 11,1 ±0,8 13,5 ± 0,7 8,1 ±0,5 13,1 ±0,6 15.3 ± 1,2 30.4 ±2,7 6,7 ±0,3 13,7 ±0,6

Сорт Селиверстовская 10,2 ± 0,8 15,2 ±0,8 19.5 ± 5,5 17.6 ± 0,7 9,4 ± 0,1 15,5 ±3,3 11,1 ±0,1 16,7 ±0,7

* верхняя строка - почки, изолированные со средней части побега, **нижняя строка - почки, изолированные с нижней части побега, - эксперимент не проводился

Для гибридов Г5, Г6 и сорта Кристина наибольшее число пазушных почек развилось из почек, изолированных с нижней части побега на среде с БАП 5 мкМ. Для гибридов Г2 этот показатель был выше на этой же среде у почек, изолированных со средней части побега Для гибридов микровишни большее количество пазушных почек и побегов развилось на среде с 1 мкМ БАП, а у сорта Селиверстов-ская на среде с 2 мкМ БАП независимо от месторасположения почек на побеге

При собственно размножении церападусов для большинства изученных генотипов лучшие показатели получены при использовании питательной среды с БАП 4 - 6 мкМ (рис 2)

На среде с БАП 8-10 мкМ отмечена гипергидротация тканей Исключение составил церападус ВЧ 51, для культивирования которого требовалось повышенное содержание в среде БАП (10 мкМ)

1 2 3 4 5

вариант среды

Примечание: 1 -ЬАП 2 мкМ,2 - БАП 4 мкМ, 3 - БАП в мкМ,4-БАП 8 мкМ, 5 - БАП 10 мкМ

Рисунок 2. Влияние концентрации БАП на коэффициент размножений отборных форм церападусов в культуре пазушных почек

3.4. Влияние элементов минерального питания на развитие и коэффициент размножения эксплаитов

Повышение концентрации нитрата аммония в 1,5 - 2 pata в среде мс увеличивало число пазушных почек у всех изученных форм церападусов в 2 и более раза (рис. За), у трех форм церападусов достоверных различий от увеличения содержания NH.,NO:, в среде не выявлено. Исключение составил гибрид ВЧ 53, у которого лучшие результаты получены при двукратном увеличении NH4NO3. Неоднозначно сказалось увеличение концентрации NH4NO3 на длину побегов. Дпя форм ВЧ 48, 50 увеличение концентрации NH4NO3 в 1,5 раза выше контроля (контроль 1650 мг/л) привело к росту побегов, длина их возросла в 2 раза. У формы ВЧ 51 достоверных различий влияния разных концен траций NH4NO3 на длину побегов не выявлено, у ВЧ 53 увеличение концентрации в 2 раза привело к сокращению длимы побегов.

Повышение концентрации FeSOa 7HiO в среде (контроль 27,8 мг/л) увеличило коэффициент размножения, в среднем в два раза у изученных форм (рис. 36), Исключением явилась форма ВЧ 48. Для нее достоверных различий между вариантами не ш,¡явлено.

Для повышения коэффициента размножения следует использовать 2475 мг/л NH4NO;¡ или FeSQf Ж1О (в форме хелата) 41,7 мг/л в составе основной питательной среды, дополненной 2 мкМ БАП.

а) б)

Примечание: I - ВЧ 48, 2 - ВЧ 50, 3 - ВЧ 51.4-ВЧ53

Рисунок 3. Влияние концентрации а) NN //Оз; б) FeSOJ ■ 7И?0 на коэффициент размножения эксплантов отборных форм церападусов на среде с БАП 2 мкМ

3.5, Окоренение и адаптация

На стадии окоренения в качестве индукторов корнеобразован и я использовали ауксины. Число образующихся корней, их длина зависели от применяемого ауксина, его концентрации, минерального состава питательной среды и генотипа (табл. 5).

Таблица 5

Характеристики регенератов отборных форм церападусов (ВЧ), укорененных т \fitro на разных по составу средах с 1-ТМК, п=20

Варианты Количество корней, шт^экепдант Общая длина корней, мм I (обеги с каллусом. % Окоренение, %

1 2 5 4 5

Форма М 89-95- 48

й МС+ЗмкМ 4,7*1,1 129,1 ±20,4 0 100

Й В5+ЗмкМ 4,3 ¿1,9 20,0±8,6 20 100

й МС+5мкМ 2.8=0.6 71,7*22,8 20 100

й В5+§мкМ 1,6±0,3 80.0± 14 0 80

й МО 1 ОмкМ 1,9±0,7 73.0*22.8 60 80

й В;+10мкМ 1,5±0,5 22.0±4.6 60 70

Форма ВЧ89-95-50

Й МС+ЗмкМ 2.4±0,б 60,34 25,7 10 70

й В5+ЗмкМ 2.2^0,2 32,3±8,7 0 60

й М05мкМ 2.! ±0,5 К7_4±21,7 20 70

й В,±5мкМ 2.0±0,3 12,5+5,9 20 60

ЙМС+ЮмкМ 4.4±0,б 141,9+17,4 30 90

'А В5+10мкМ 2,0±0,5 (2,3^15,3 50 70

т I 2 | 3 1 4 I 5

Форма ВЧ89-95-51

V2 МС+ЗмкМ 3,0±0,9 97,9±6 0 90

•Л В5+ЗмкМ 2,3±0,3 28,0±4,8 40 30

'/з МС+5мкМ 6,6±1,7 66,3±16,2 10 80

/2 В5+5мкМ 2 26,0±4,3 40 60

/2 МС+10мкМ 1,7±0,3 68,8±16,6 100 40

'Л В5+10мкМ 1,2±0,6 1 12,0±6,5 90 40

Форма ВЧ 89-95-53

'А МС+ЗмкМ 2,4±1,3 90,0±29,1 20 50

Bs+ЗмкМ 2,2±0,4 29,6±0,6 20 50

'/г МС+5мкМ 6,4±1 125,5±20,1 30 100

Уз В5+5мкМ 3,6±0,6 101,7±28,5 60 70

'/2 МС+10мкМ 3,4±1,6 141,9±47,4 30 70

Уг В5+10мкМ 2,0±0,5 12,3±5,3 60 60

Для окоренения побегов церападусов использовали питательные среды МС и В5, дополненные ИМК от 3 до 10 мкМ Применение разных по минеральному составу питательных сред не влияло на количество образующихся корней, но общая длина корней увеличилась в 2-15 раз на среде Уг МС На среде с 5 мкМ ИМК окоренилось 80 — 100 % побегов Увеличение в питательной среде концентрации ИМК до 10 мкМ у большинства форм приводило к сильному разрастанию каллуса на ба-зальной части побега, кроме формы ВЧ 50

Побеги гибридов микровишни легко окоренялись на среде без регуляторов роста (87 %). Для окоренения других гибридов требовалось обязательное добавление в питательную среду стимуляторов ризогенеза Наиболее результативно использование ИМК 2 мкМ На этой среде окоренялось от 50 до 70% всех изученных гибридов вишни

Для окоренения побегов сорта Кристина следует использовать ИМК 4 мкМ, для сорта Селиверстовская ИМК 1 мкМ (табл 6)

Таблица 6

Характеристики регенерантов сортов вишни, окорененных m vitro на среде 'Л МС с ИМК, (п=14)

ИМК, мкМ Окоренение, % Количество корней, шт /экспл HCPos Длина корней, см/экспл НСР05 Каллус

К С К С К С К С

1 64 50 2,1 1,4 0,51 5,3 2,4 2,24 - +

2 71 43 1,8 1,0 0,75 4,9 3,6 0,72 - +

4 86 57 2,4 2,3 - 6,7 5,6 0,52 + +++

10 64 43 2,0 1,8 - 7,9 3,0 1,32 + +++

HCPos 0,9 0,6 3,4 2,4

Примечание — отсутствие каллуса, + слабый рост каллуса, +++ сильный рост каллуса, К — сорт Кристина, С — сорт Селиверстовская

Более эффективно использование ИМК, результаты с ИУК были не стабильными

Этап адаптации растений-регенерантов к выращиванию ex vitro является завершающим и ключевым моментом микроразмножения Использовали три варианта условий адаптации два вида субстрата - речной песок и керамзит и без субстратный способ на гидропонной установке «Минивит» (табл 7)

Таблица 7

Характеристика растений — регенерантов вишни и микровишни на разных субстратах до и после адаптации

Субстрат Количество корней, шт. х ± IS* Средняя длина корня, мм, х ± tSj; Средняя высота побега, мм х ± tSx

до после до после ДО после

Песок, п=42 2,9±0,7 5,1±0,7 23,7±3,1 96,2±8,5 19,8±1,1 76,9±6,2

Керамзит, п=25 2,9±0,4 4,5±0,5 25,4±4,7 65,3±10,5 27,8±2,7 52,9±4,2

Без субстрата (гидропоника), п=65 2,9±0,3 4,6±0,5 24,6±4,3 94,2±10,6 25,8±1,7 130,4±10,1

Лучший результат адаптации (100 %) получен на гидропонной установке «Минивит» На ней отмечен быстрый рост растений в длину, через 4 недели побеги в среднем достигали 130 мм, в 5 раз больше чем до адаптации

Количество корней после адаптации во всех вариантах увеличилось в 1,4 - 1,6 раза, по сравнению с начальной величиной

3.6. Сравнительная характеристика сортов вишни, размноженных зелеными черенками ш vitro.

Растения сортов вишни, размноженных с помощью изолированных апикальных меристем, полностью сохранили форму плодов и листьев, окраску, число хромосом (4х=32) присущие материнскому растению Отмечено небольшое увеличение средней массы плодов Показатели качества пыльцы (фертильность и жизнеспособность) у сорта Селиверстовская не отличались от контроля, у сорта Кристина были выше в 2 раза

Сравнительная оценка способности к размножению зелеными черенками 2-х сортов вишни свидетельствуют о целесообразности использования в качестве маточных растений для зеленого черенкования экземпляры, размноженные m vitro (табл 8)

Процент окоренения зеленых черенков сорта Селиверстовская увеличился в 2-4 раза, количество корней в 1,6 - 3,2 раза при использовании черенков с клонированных in vitro растений, по сравнению с обычной технологией зеленого черенкования

Таблица 8

Характеристики окоренения зеленых черенков сортов вишни (2005-2006 гг )

Сорт Способ размножения маточных растений Год Окоренение, % Кол-во растений в опыте, шт Кол-во корней, шт Общая длина корней, см Критерий Стью-дента

Кристина традиционный 2005 54±9,1 30 7,0±1,6 33,8±8,5

m vitro 60±8,9 30 8,6±1,8 36,5±1,6

традиционный 2006 65±6,8 50 6,2±0,8 61,7±5,3

in vitro 75±7,9 30 10,3±0,9 84,2±9

Селивер-стовская традиционный 2005 10±2,5 150 2,8±0,3 18 5±1,7 t«j)>to 05

in vitro 41±9 30 5,3±0,9 44,6±5,4

традиционный 2006 14±3,9 80 1,7±0,2 9,4±2Д t$>to os

m vitro 31 ±5,2 80 7,8±0,7 36,8±3,2

Глава 4. Экономическая эффективность использования методов биотехнологии

Определение экономической эффективности производства саженцев вишни проводили путем сравнения двух способов выращивания традиционного ( in vivo -выращивание из зеленых черенков) и с помощью in vitro (табл 9)

Таблица 9

Экономическая эффективность способов вегетативного размножения вишни при выращивании 2-летних саженцев (2002 г)

Показатели Единица измерения Способ

in vitro in vivo

Площадь производства кв м 10,0 10,0

Получено продукции тыс шт 20,0 0,23

Затраты труда тыс чел -час 3,1 0,2

Затраты материально-денежных средств тыс. руб 217,5 2,8

Себестоимость 1 шт. РУб 9,2 12,6

Средняя цена реализации 1 шт руб 20,0 20,0

Прибыль с растения руб + 10,8 + 7,4

Чистый доход тыс руб 214 1,7

Рентабельность % 98 60

Использование способа размножения вишни in vitro повышает рентабельность производства 2-летних саженцев в 1,6 раза по сравнению с традиционным способом зелеными черенками

Методы биотехнологии могут быть успешно использованы в селекции По сравнению с традиционными способами селекции, по нашим усредненным данным, при использовании эмбриокультуры, размножения in vitro выход исходного гибридного материала увеличивается в 97 раз, происходит сокращение селекционного процесса минимум на один год

Глава 5 Технология микроразмножения алтайских генотипов вишни

и микровишни

В результате проведенных исследований и выявленных закономерностей, предлагается усовершенствованная технология микроразмножения алтайских генотипов вишни и микровишни с использованием разных типов эксплантов Она включает все этапы, от введения эксплантов в культуру in vitro до посадки растений-регенерантов в почву), оптимальные сроки, среды, способы адаптации регенерантов

Рисунок 4 Этапы технологии микроразмножения ценных генотипов вишни

и микровишни

выводы

1 Для сохранения и размножения наиболее ценных гибридов вишни и микровишни следует вводить 30-дневные зародыши в культуру m vitro, используя питательную среду MC с БАП 2 мкМ (достигается получение от 16,7 до 40 % нормально развивающихся зародышей) Лучшие результаты дает культивирование 45-дневных зародышей на среде с БАП 2 мкМ (50-90 %)

2 Регенерационная способность тканей семядолей зависит от генотипа и соотношения цитокинина и ауксина в составе питательной среды Для большинства объектов исследования наиболее оптимальной является среда с БАП 10 мкМ и НУК 2 мкМ

3 На этапе собственно размножения для сорта Кристина, гибридов с вишней пенсильванской, Максимовича целесообразно использовать почки с нижней части побега на питательной среде с БАП 5 мкМ, для сорта Селиверстовская — со средней или нижней части побега с БАП 2 мкМ, для гибридов 3-66-9 х черемуха обыкновенная - со средней части побега, БАП 5 мкМ, для гибридов микровишня песчаная х микровишня войлочная - почки, независимо от места их расположения на побеге на среде с БАП 1 мкМ, для церападусов, имеющих розеточный тип роста (ВЧ 48, 49, 50, 53) в составе питательной среды необходимо использовать БАП 4 мкМ и для ВЧ 51 - БАП 10 мкМ

4 Выявлено влияние генотипа и концентрации ауксина на этапе окоренения ю vitro Оптимальная концентрация ИМК для окоренения сорта Кристина - 4 мкМ, сорта Селиверстовская - 1 мкМ, гибридов вишни - 2 мкМ, церопадусов ВЧ 48, 51, 53-5 мкМ ИМК, ВЧ 50 - 10 мкМ ИМК

5 Для отборных форм церападусов увеличение в питательной среде MC NH4NO3 в 1,5 раза (2475 мг/л) или FeSÖ4 7Н20 в форме хелата в 1,5 раза (41,7 мг/л) повышает коэффициент размножения в 1,5-2 раза

6 Растения сортов вишни, размноженных с помощью изолированных апикальных меристем, полностью сохраняют форму плодов и листьев, окраску, число хромосом (4х) присущие материнскому растению Наблюдалось небольшое увеличение массы плодов Фертильность и жизнеспособность пыльцы сорта Селиверстовская были на уровне контроля, у сорта Кристина - выше в 2 раза

7 Процент окоренения трудно размножаемого сорта Селиверстовская, увеличивается в 2 - 4 раза, количество корней - в 1,6-3,2 раза при использовании зеленых черенков с клонированных m vitro растений, по сравнению с обычной технологией зеленого черенкования

8. Использование метода размножения m vitro повышает рентабельность производства саженцев сортов Кристина и Селиверстовская в 1,6 раза по сравнению с традиционным способом размножения зелеными черенками

9. Предложенная технология размножения in vitro алтайских сортов ускоряет внедрение их в производство

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 На стадии размножения вишни и микровишни in vitro использовать БАП в концентрации 1-5 мкМ

2. Применять в составе основной питательной среды МС 2475 мг/л NH4NO3 или FeS04 7Н20 (в форме хелата) 41,7 мг/л для повышения коэффициента размножения церападусов

3 Для окоренения побегов вишни необходимо добавлять в питательную среду 1 -5 мкМИМК

4 Целесообразно закладывать маточные насаждения вишни, растениями размноженными m vitro, трудно окореняемых сортов

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1 Плаксина Т В Культура изолированных зародышей как один из методов селекции вишни на Алтае // Адаптивный подход в земледелии Селекции и семеноводстве с/х культур в Сибири Материалы науч конф по растениеводству, селекции, земледелию и охране окружающей среды — Краснообск, 1996 —С 75-76

2. Плаксина Т В Культура зародышей in vitro при селекции сибирских сортов вишни на иммунитет к коккомикозу // Биология клеток растений m vitro, биотехнология и сохранение генофонда Тезисы докладов VII Между нар конф — M 1997 — С 51

3 Плаксина Т В Методы биотехнологии в селекции вишни на Алтае // Состояние и проблемы садоводства Сб науч трудов -Новосибирск, 1997 — часть I — С 170-173

4. Plaksma Т V. Application of biotechnological methods in cherry breeding // Inter Symposium "Biotechnology approachhes for exploitation and Preservation of plant resources Abstracts -Yalta, 2002 -P 82

5 Plaksma T V Propagation of new cultivars of cherry // VIII Inter Conf "The Biology of Plant Cells m vitro and Biotechnology Abstracts - Saratov, 2003 -P 252-253

6 Плаксина T В Ускоренное внедрение в производство новых сортов вишни с использованием биотехнологических методов // Научно-экономические проблемы регионального садоводства - Барнаул, 2003 -С 190-193

7 Плаксина Т В Использование биотехнологии в селекции вишни на Алтае // Проблемы устойчивого развития садоводства Сибири - Барнаул, 2003 -С 108-110.

8 Плаксина ТВ Перспективы использования методов биотехнологии в селекции вишни // Генетические ресурсы растениеводства Дальнего Востока Материалы Междунар науч. конф , посвященной 75-летию Дальневосточной опытной станции ВНИИР-Владивосток, 2004 -С 385-389

9 Плаксина Т В Роль биотехнологии в селекции вишни // Актуальные задачи селекции и семеноводства с/х растений на современном этапе докл и сообщения IX генетико-селекц шк - Новосибирск, 2005 - С 605-608

10 Плаксина Т В Микроразмножение новых сортов вишни алтайской селекции // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки 2007 - № 6 — С 40-44

ЛР № 020648 от 16 декабря 1997 г

Подписано в печать 27 09 2007 г Формат 60x84/1 б Бумага для множительных аппаратов Печагь ризо-графная Гарнитура «Times New Roman» Уел печ п 1,0 Тираж 100 экз 3aKaj№ 2/

Издательство АГАУ 656049, г Барнаул, пр Красноармейский, 98 62-84-26

Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Плаксина, Татьяна Викторовна

Список сокращений и обозначений

Введение

Глава 1. Состояние изученности проблемы (обзор литературы)

1.1. Использование методов биотехнологии в размножении плодовых и ягодных культур

1.2. Размножение in vitro косточковых культур

Глава 2. Объекты, условия и методики исследований

2.1. Объекты исследований

2.2. Методы культуры in vitro

Глава 3. Эмбриокультура и микроразмножение in vitro генотипов вишни и микровишни

3.1. Влияние сроков изоляции и регуляторов роста на рост и развитие зародышей in vitro

3.2. Культура изолированных тканей семядолей гибридов вишни и микровишни

3.3. Микроразмножение сортов, гибридов, отборных форм вишни и микровишни путем активации развития меристем

3.4. Влияние элементов минерального питания на развитие эксплантов вишни

3.5. Окоренение и адаптация пробирочных растений вишни и микровишни к нестерильным условиям

3.6. Сравнительная характеристика сортов вишни, размноженных зеленым черенкованием и in vitro

Глава 4. Экономическая эффективность использования методов биотехнологии

Глава 5. Технология микроразмножения алтайских сортов, гибридов вишни и микровишни

Выводы

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Особенности размножения алтайских генотипов вишни и микровишни с использованием методов биотехнологии"

Актуальность темы. Производство высококачественного посадочного материала является одним из важнейших направлений развития современного садоводства. Вишня одна из наиболее распространенных косточковых культур в садах юга Западной Сибири, в том числе на Алтае. Саженцы этой культуры очень востребованы в нашем регионе. Однако в последнее время урожайность вишни и площади, занимаемые под этой культурой в промышленном садоводстве Алтайского края, значительно сократились. В 1996 г. в Алтайском крае под вишней было занято более 1200 га (Субботин, 2002), а в 2006 г., по данным Главного управления сельского хозяйства Алтайского края, лишь 107 га. Одна из основных причин этого -широкое распространение грибного заболевания - коккомикоза, к которому многие ранее выращиваемые сорта оказались восприимчивыми.

Для вишни актуальным является получение устойчивых к коккомикозу форм от скрещивания вишни степной, являющейся основным культурным видом вишни в Сибири, с устойчивыми к коккомикозу дикорастущими дальневосточными и американскими видами. Доступным источником устойчивости к коккомикозу, кроме широко известной вишни Маака, являются вишни: Максимовича, курильская, сахалинская, пенсильванская, остропильчатая (Симагин, 2001). По мнению А.А. Юшева (1998), микровишни песчаная и войлочная в ближайшем будущем будут играть основную роль в создании сортов для регионов страны с суровыми климатическими условиями. Желательно получить гибриды при скрещивании вишни с черемухой обыкновенной - источником высокой зимостойкости и устойчивости к коккомикозу.

Алтайский генофонд вишни значительно отличается от европейского. В создании сибирского сортимента вишни участвовали два вида: вишня степная (Cerasus fruticosa Pall.) и вишня обыкновенная (Cerasus vulgaris Mill.). В результате получены сорта, отвечающие главным требованиям к выращиванию в сибирском климате: низкорослости, зимостойкости, урожайности, вкуса и величины плодов, но с низкой устойчивостью к коккомикозу (Субботин, 1991). На современном этапе задачей селекции является получить и размножить устойчивые к коккомикозу тетра- и гексаплоидную гибридную сибирскую вишню и гибриды церападусов (вишня степная х вишня Маака), гибриды микровишни для создания принципиально нового сортимента.

Привлечение методов биотехнологии является альтернативой традиционно используемым подходам в решении вопросов размножения и сохранения ценных форм. Методы биотехнологии позволяют осуществлять быстрое размножение ценного экземпляра растения; получать в больших количествах вегетативное потомство трудно размножаемых в обычных условиях видов и форм растений; работать в лабораторных условиях круглый год и планировать выпуск растений к определенному сроку; размножать растения без вывода их из ювенильной фазы, длительно сохранять растительный материал в условиях in vitro, ускорять селекционный процесс (Высоцкий, 1986; Подорожный, 1998). Метод эмбриокультуры позволяет сохранить и клонировать на ранних этапах развития уникальные генотипы отдаленных гибридов.

Известно, что широкому применению биотехнологий для разных видов и даже сортов растений препятствует то, что морфогенетический потенциал и регенерационная способность культивируемых тканей во многом зависит от генотипа и условий культивирования (Бутенко, 1964; Вечернина, 2004).

В НИИСС имени М.А. Лисавенко созданы перспективные сорта и отборные формы отдаленных гибридов с высокой устойчивостью к коккомикозу. Необходимо быстрое размножение их и сохранение ценных гибридных генотипов. Поэтому совершенствование методов микроразмножения с использованием разных типов эксплантов устойчивых к коккомикозу гибридов и сортов является актуальным.

Цель исследований. Усовершенствовать технологию ускоренного размножения устойчивых к коккомикозу алтайских генотипов вишни и микровишни in vitro.

Задачи исследований заключались в изучении:

- сроков изоляции и регуляторов роста на рост и развитие гибридных зародышей вишни и микровишни in vitro;

- влияния экзогенных регуляторов роста на процессы регенерации в культуре изолированных тканей семядолей;

- влияния регуляторов роста на регенерационные процессы на стадиях собственно размножения и окоренения;

- влияния расположения почки на побеге при микроразмножении;

- влияния элементов минерального питания на коэффициент размножения и рост отборных форм церападусов в культуре in vitro;

- морфологических и цитологических признаков сортов, полученных путем микроразмножения;

- целесообразности использования растений сортов вишни, выращенных in vitro, при их зеленом черенковании;

- показателей эффективности использования методов биотехнологии для размножения сортов вишни.

Научная новизна. Впервые разработана технология размножения in vitro устойчивых к коккомикозу алтайских генотипов вишни и микровишни.

Впервые дана сравнительная оценка особенностей микроразмножения, окоренения и адаптации к нестерильным условиям различных алтайских генотипов вишни. Подобраны оптимальные концентрации регуляторов роста на всех этапах размножения в культуре in vitro.

Выявлена стабильность морфологических и цитологических признаков сортов вишни степной после микроразмножения.

Показана возможность повышения эффективности размножения зелеными черенками трудно окореняемого сорта вишни Селиверстовская при использовании в качестве маточных растений, полученные при размножении in vitro.

Практическая значимость работы. Отработаны технологические приемы выращивания растений in vitro из зародышей, тканей семядолей и изолированных апексов; размножены in vitro ценные генотипы отдаленных гибридов 8 комбинаций скрещивания (133 генотипа), 5-ти отборных форм церападусов и 2-х сортов вишни.

Показана целесообразность использования клонированных in vitro растений для последующего использования их при размножении зелеными черенками.

Реализация результатов. Заложен коллекционный участок и маточник размноженных in vitro гибридов вишни, микровишни, сортов вишни.

Переданы саженцы двух новых сортов селекции НИИСС (95 штук), размноженные методом in vitro, на четыре госсортоучастка (прил. 1).

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Увеличение коэффициента размножения генотипов вишни и микровишни достигается модификацией состава питательных сред (минеральные соли, регуляторы роста).

2. Для размножения вишни зелеными черенками целесообразно использовать маточные растения, размноженные in vitro.

3. Эффективность применения методов биотехнологии для ускоренного размножения генотипов вишни и микровишни.

Апробация работы. Основные результаты работы представлены на международных научных и научно-практических конференциях: «Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда» (Москва, 1997), «Biotechnology approaches for exploitation and preservation of plant resources» (Yalta, Ukraine, 2002), «Биология клеток растений in vitro и биотехнология» (Саратов, 2003), «Генетические ресурсы растениеводства Дальнего Востока» (Владивосток, 2004); на региональных научно-практических конференциях: «Адаптивный подход в земледелии, селекции и семеноводстве сельскохозяйственных культур в Сибири» (Новосибирск, 1996), «Научно-экономические проблемы регионального садоводства» (Барнаул, 2003), «Проблемы устойчивого развития садоводства Сибири» (Барнаул, 2003), на конференции научной молодежи «Молодые ученые в решении проблем аграрной науки» (Новосибирск, 1997), на IX и X генетико-селекционных школах РАСХН Сибирское отделение (Новосибирск, 2004, 2007), на заседаниях ученого советов ГНУ НИИСС им. М.А. Лисавенко (1996-1997, 2002-2006 гг.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе в рецензируемом издании «Сибирский вестник сельскохозяйственной науки», общим объемом 2,1 п. л.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 163 страницах компьютерного текста и состоит из введения, 5 глав, выводов, рекомендаций производству, списка использованной литературы из 293 наименований, в том числе 100 на иностранных языках, содержит 26 таблиц, 39 рисунков и 6 приложений.

Заключение Диссертация по теме "Плодоводство, виноградарство", Плаксина, Татьяна Викторовна

ВЫВОДЫ

1. Для сохранения и размножения наиболее ценных экземпляров гибридов вишни и микровишни следует вводить 30-дневные зародыши в культуру in vitro, используя питательную среду МС с БАП 2 мкМ (достигается получение от 16,7 до 40 % нормально развивающихся зародышей). Лучшие результаты дает культивирование 45-дневных зародышей на среде с БАП 2 мкМ (50 - 90 %).

2. Регенерационная способность тканей семядолей зависит от генотипа и соотношения цитокинина и ауксина в составе питательной среды. Для большинства объектов исследования наиболее оптимальной является среда с БАП 10 мкМ и НУК 2 мкМ.

3. На этапе собственно размножении для сорта Кристина, гибридов с вишней пенсильванской, Максимовича целесообразно использовать почки с нижней части побега на питательной среде с БАП 5 мкМ; для сорта Селиверстовская - со средней или нижней части побега с БАП 2 мкМ; для гибридов 3-66-9 х черемуха обыкновенная - со средней части побега, БАП 5 мкМ; для гибридов микровишня песчаная х микровишня войлочная почки, независимо от места их расположения на побеге на среде с БАП 1 мкМ; для церападусов, имеющих розеточный тип роста (ВЧ48; 49; 50; 53), в составе питательной среды необходимо использовать БАП 4 мкМ и для ВЧ 51 - БАП 10 мкМ.

4. Выявлено влияние генотипа и концентрации ауксина на этапе окоренения in vitro. Оптимальная концентрация ИМК для окоренения сорта Кристина - 4 мкМ, сорта Селиверстовская - 1 мкМ, гибридов вишни - 2 мкМ, церопадусов ВЧ 48; 51; 53 - 5 мкМ ИМК, ВЧ 50 - 10 мкМ ИМК.

5. Для отборных форм церападусов увеличение в питательной среде МС NH4NO3 в 1,5 раза (2475 мг/л) или FeS04'7H20 в форме хелата в 1,5 раза (41,7 мг/л) повышает коэффициент размножения в 1,5-2 раза.

6. Растения сортов вишни, размноженных с помощью изолированных апикальных меристем, полностью сохраняют форму плодов и листьев, окраску, число хромосом (4х) присущие материнскому растению, наблюдалось небольшое увеличение массы плодов. Фертильность и жизнеспособность пыльцы сорта Селиверстовская были на уровне контроля, сорта Кристина - выше в 2 раза.

7. Процент окоренения трудно размножаемого сорта Селиверстовская, увеличивается в 2-4 раза, количество корней в 1,6-3,2 раза при использовании зеленых черенков с клонированных in vitro растений, по сравнению с обычной технологией зеленого черенкования.

8. Использование метода размножения in vitro повышает рентабельность производства саженцев сортов Кристина и Селиверстовская в 1,6 раза по сравнению с традиционным способом размножения зелеными черенками.

9. Предложенная технология размножения in vitro алтайских сортов ускоряет внедрение их в производство.

Практические рекомендации

1. Целесообразно закладывать маточные насаждения трудно окореняемых сортов вишни растениями, размноженными in vitro.

2. На стадии размножения вишни и микровишни in vitro использовать БАП в концентрации 1 -5 мкМ.

3. Применять в составе основной питательной среды МС 2475 мг/л NH4NO3 или FeS04*7H20 (в форме хелата) 41,7 мг/л для повышения коэффициента размножения церападусов.

4. Для окоренения побегов вишни необходимо добавлять в питательную среду 1 - 5 мкМ ИМК.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата сельскохозяйственных наук, Плаксина, Татьяна Викторовна, Барнаул

1. Аладдина О.Н. Эффективность размножения красной смородины и крыжовника in vitro при обработке маточных растений ретардантами Текст. / О.Н. Аладдина // Известия ТСХА. 2004. - Вып. 1. - С.62-70.

2. Алексеенко Л.В. Подбор питательных сред для клонального микроразмножения нейтральнодневных и ремонтантных сортов земляники Текст. / Л.В. Алексеенко, В.А. Высоцкий // Плодоводство и ягодоводство России. 1997. - T.IV. - С. 77-81.

3. А. с. 1341114 СССР. Контейнер для микроразмножения растений Текст. /

4. М.М. Танклевский, П.Я. Голодрига, В.А. Зленко, A.M. Танклевский. -заявл. 10.07.85; опубл. 15.09. 87,Б.И.№36.

5. А.с. 1591887 СССР, МКИ5 А 01 Н 3/00. Способ пересадки растенийрегенерантов в почвенный субстрат Текст. / В.А. Высоцкий, Л.В. Бартенева; НИИ садов, нечернозем, полосы. №444442378/30-13; заявл. 17.06.88; опубл. 15.09.90. Б. И. №34.

6. А.с. 1639534 СССР, МКИ 5 А. 01 Н 4/00 Способ размножения вишни invitro / Н. В. Агафонов, А.Т. Матушкин, И.В. Жаркова Текст. // Московская с/х академия-№4682076/13; заявл. 19.07.89; опубл. 07.04.91, Б. И. №13.

7. А.с. 1738169, SU А 01 Н 4/00 Способ размножения растений in vitro Текст.

8. В.А. Высоцкий, И.А. Шершень; заявл. 15. 07. 90; опубл. 07.06.92, Б.И. №21.

9. Атанасов А. Биотехнология в растениеводстве Текст. / А. Атанасов.

10. Новосибирск: Изд-во СО РАН, 1993. С.241.

11. Байбурина Р. К. Микроклональное размножение взрослых гибридных деревьев Betula pendula Roth. var. Carelica Merckl / P.K. Байбурина // Растительные ресурсы. 1998. - Вып. 34, №2. - С. 9-21.

12. Батыгина Т.Б. Морфогенетические потенции зародышей покрытосеменных растений Текст. / Т.Б. Батыгина, Р.Г. Бутенко // Ботанический журнал. -1981. №11. —С. 1531-1548.

13. Бойко Г.Н. Рост изолированных зародышей плодовых растений в стерильной культуре Текст. / Г.Н. Бойко // Бюллетень научной информации ЦГЛ им. И.В. Мичурина. Мичуринск, 1971. - Вып. 15. - С. 75-79.

14. Бойко Г.Н. Действие различных осмотически активных веществ на рост зародышей яблони в стерильной культуре Текст. / Г.Н. Бойко //

15. Физиология и биохимия культурных растений. 1977. - Т.9, №6. - С. 637-641.

16. Бургутин А.Б. Быстрое клональное размножение виноградного растения Текст. / А.Б. Бургутин, Р.Г. Бутенко, Н.В. Катаева // Биология культивируемых клеток и биотехнология: тез. докл. междунар. конф. -Новосибирск, 1988. Т. 2. - С. 312.

17. Бургутин А.Б. Микроклональное размножение винограда Текст. / А.Б. Бургутин // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. -М: Наука, 1991.-С. 216-221.

18. Бурдасов В.М. Клональное микроразмножение черной смородины Текст. / В.М. Бурдасов, Т.В. Тананыкина // Лекарственные растения Алтайского края: сб. науч. тр. Томск, 1986.- С. 119-121.

19. Бурдейная Т.В. Использование тидиазурона в культуре изолированных тканей и органов ягодных растений. Текст. / Т.В. Бурдейная, В.А. Высоцкий, JI.B. Алексеенко // Плодоводство и ягодоводство России. -1998.-T.V.-C. 55-58.

20. Буслова Е.Д. К методике выращивания зародышей высших растений, лишенных запасных веществ семени Текст. / Е.Д. Буслова // Доклады АН СССР.- 1967. №6. - С. 389-392.

21. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений Текст. / Р.Г. Бутенко. М.: Наука, 1964. - 270 с.

22. Вечернина Н.А. Адаптация растений-регенерантов к условиям выращивания in vivo как завершающий этап микроразмножения Текст. / Н.А. Вечернина, O.K. Таварткиладзе // Вестник алтайской науки. 2001 -Т.1, вып. 1.-С. 263-265.

23. Вечернина Н.А. Методы биотехнологии в селекции, размножении и сохранении генофонда растений Текст. / Н.А. Вечернина. Барнаул: Изд-во Алт. гос. ун-та, 2004- 205 с.

24. Высоцкий В.А. Совершенствование питательной среды для клонального микроразмножения вишни Текст. / В.А. Высоцкий, Е.В. Олешко //Агротехника и сортоизучение плодовых культур: сб. науч. тр. М., изд-во НИИЗИСНП, 1985. - 200 с.

25. Высоцкий В.А. Морфогенез и клональное микроразмножение растений Текст. / В.А. Высоцкий // Культура клеток растений растений и биотехнология. М., 1986. - С. 91-102.

26. Высоцкий В.А. Производство оздоровленного посадочного материала яблони Текст. / В.А. Высоцкий, И.С. Литвиненко // Достижения науки и техники АПК. 1987. - №2. - С. 25-27.

27. Высоцкий В.А. Использование методов культуры изолированных тканей и органов для оздоровления и ускоренного размножения плодовых и ягодных растений Текст. / В.А. Высоцкий // Селекция плодовых и ягодных культур. Новосибирск, 1989. - С. 132-138.

28. Высоцкий В.А. Особенности клонального микроразмножения актинидии Текст. / В.А. Высоцкий, Л.В. Бартенева // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. -М.: Наука, 1991. С. 213-216.

29. Высоцкий В.А. Регенерация вегетативных органов листовыми дисками и другими эксплантами рода Rubus in vitro Текст. / В.А. Высоцкий, М.Т. Упадышев // Физиология растений. 1992. - Т. 39, вып.З. - С. 584-591.

30. Высоцкий В.А. О генетической стабильности при клональном микроразмножении плодовых и ягодных культур Текст. /В.А. Высоцкий // Сельскохозяйстенная биология. 1995. -№5. - С. 57-63.

31. Высоцкий В.А. Использование биотехнологических приемов для создания новых форм косточковых растений Текст. / В.А. Высоцкий. // Совершенствование сортимента и технологии возделывания косточковых культур: сб. науч. тр. Орел, 1998. - С. 31-32.

32. Высоцкий В.А. Биотехнологические методы в системе производства оздоровленного посадочного материала и селекции плодовых и ягодныхрастений Текст.: автореф. дис. .д-ра с-х наук / Валерий Александрович Высоцкий. -М., 1998.-44 с.

33. Высоцкий В.А. Особенности регенерации растений изолированными пыльниками и листовыми дисками ягодных культур in vitro Текст. / В.А Высоцкий, М.Т. Упадышев, Ф.Н. Соломонова // Сельскохозяйственная биология. 1998. - № 3.- С. 44-50.

34. Высоцкий В.А. Возможности создания коллекций ценных форм плодовых и ягодных растений in vitro Текст. / В.А. Высоцкий // Плодоводство и ягодоводство России. 2000. - Т.7. - С. 56 - 61.

35. Высоцкий В.А. Биотехнологические приемы в современном садоводстве Текст. / В.А. Высоцкий // Садоводство и виноградарство. 2006. - №2. -С. 2-3.

36. Вовк В.В. Использование цитокининов ряда дифенилмочевины при микроклональном размножении межвидовых ремонтантных форм малины Текст. / В.В. Вовк, В.В. Заякин, И.Я. Нам // Сельскохозяйственная биология. 1999. - № 5. - С. 52-56.

37. Гамбург К.З. Регуляторы роста растений Текст. / К.З. Гамбург, О.Н. Кулаева, Г.С. Муромцев. М.: Колос, 1979. - 246 с.

38. Гамбург К.З. Ауксины в культурах тканей и клеток растений Текст. / К.З. Гамбург, Н.И. Рекославская, С.Г. Швецов. Новосибирск: Наука СО,1990.-243 с.

39. Геринг X. Преодоление витрификации и улучшение акклиматизации растений при клональном микроразмножении Текст. /X. Геринг // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука,1991.-С. 197-200.

40. Голяева О.Д. Использование отдаленной гибридизации в селекции вишни на устойчивость к коккомикозу Текст.: автореф. дис. .канд. с-х наук / Ольга Дмитриевна Голяева. Мичуринск, 1992. - 24 с.

41. Гудковский В.А. Итоги научной и производственной деятельности ВНИИС им. И.В. Мичурина за 2003г. Текст. / В.А. Гудковский // Доклады на сессии секции садоводства и виноградарства отделения растениеводства. М.: ВСТИСП, 2004. - С. 49.

42. Гусев А.А. Гистологическая и экологическая оценка всхожести семян вишни Текст.: автореф. дис. .канд. с-х наук. / Александр Андреевич Гусев. Мичуринск, 2006. - 23 с.

43. Гутиева Н.М. Микроклональное размножение персика Текст. //Достижения науки и техники АПК.- 2003. №10. - С. 45-46.

44. Дерфлинг К. Гормоны растений. Системный подход Текст.: пер. с англ. / К. Дерфлинг. М.: Мир, 1985. - 304 с.

45. Джигадло М.И. Размножение вишни методом верхушечных меристем Текст. / М.И. Джигадло, Е.Н. Джигадло // ОЗПЯОС. Тула, 1988. - С. 65-68.

46. Джигадло Е.Н. Использование биотехнологических методов в работе с косточковыми культурами Текст. / Е.Н. Джигадло, М.И. Джигадло, А.А. Гуляева // Сборник докл. сообщений XVIII Мичуринских чтений (27-29 октября 1997 г.)-Мичуринск, 1998. С. 59-63.

47. Джигадло М.И. Использование биотехнологических и биофизических методов в селекции и сорторазведении плодовых и ягодных культур

48. Текст.: автореф. дис.канд. с-х наук / Михаил Иосифович Джигадло.1. Мичуринск, 2003. 25 с.

49. Джори Б.М. Экспериментальная эмбриология Текст. / Б.М. Джори, П.С. Рао // Эмбриология растений: использование в генетике, селекции и биотехнологии: пер. с англ. М; Агропромиздат, 1990. - Т. 2. - С. 343 -427.

50. Дорошенко Н.П. Применение биотехнологии в селекции винограда Текст. / Н.П. Дорошенко // Вести семеноводства в СНГ. 1999. - № 1-2. -С. 57-58.

51. Доспехов Б.Н. Методика полевого опыта (с основами статистической обработки результатов исследований) Текст. / Б.Н. Доспехов. М.: Агропромиздат, 1985. - 351 с.

52. Дубовицкая Л.П. Преодоление несовместимости при получении аллоплоидов косточковых плодовых растений Текст. / Л.П. Дубовицкая // Докл. I Вавиловского общества генетиков и селекционеров (Саратов, 20-25 декабря 1994г.). Саратов, 1994. - С. 44.

53. Еникеев Х.К. Развитие зародышей вишни и черешни в культуре in vitro изолированных на ранних фазах эмбриогенеза Текст. / Х.К. Еникеев, В.А.Высоцкий, Г.А.Плотникова // Сельскохозяйственная биология. -1984,- № 11.-С. 46-47.

54. Евсеева Р.П. Эффекты неионизирующего излучения в культуре тканей плодовых растений Текст. / Р.П. Евсеева // 4 Съезд по радиационным исследованиям): тез. докл. (Москва, 20-24 нояб. 2001г.). М., 2001. - Т.З. -С. 832.

55. Жуков О.С. Методические рекомендации по получению растений-регенерантов плодовых пород в культуре пыльников гаплоидны Текст. /

56. О.С. Жуков, О.Я. Олейникова, Н.И. Савельев. Мичуринск, изд. ВНИИГ и СПР им. И.В. Мичурина, 1994. - 36с.

57. Жуков О.С., Олейникова О.Я., Савельев Н.И. Методические рекомендации по получению растений-регенерантов плодовых пород в культуре пыльников. Мичуринск, 1994. - 36 с.

58. Здруйковская-Рихтер А.И. Воспитание зародышей груши на питательной среде Текст. / А.И. Здруйковская-Рихтер // Труды Никитского ботанического сада. 1962. - Т. 36. - С. 233-242.

59. Здруйковская-Рихтер А.И. Воспитание раносозревающих сортов персика in vitro Текст. / А.И. Здруйковская-Рихтер // Труды Никитского ботанического сада. -1962. Т. 36. - С. 213-231.

60. Здруйковская-Рихтер А.И. Культура зародышей в искусственных условиях как метод селекции раносозревающих сортов черешни, персика и груши Текст. / А.И. Здруйковская-Рихтер // Труды Никитского ботанического сада. 1964. - Т. 37. - С. 256-270.

61. Здруйковская-Рихтер А.И. Культура изолированных зародышей и пути ее применения в биологических исследованиях Текст. / А.И. Здруйковская-Рихтер // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений: тр.1 Всесоюз. конф. М.: Колос, 1970. - С. 20-30.

62. Здруйковская-Рихтер А.И. Влияние семядолей на рост изолированных зародышей Текст. / А.И. Здруйковская-Рихтер //Физиология растений. -1973.-№ 6.-С. 1154-1157.

63. Здруйковская-Рихтер А.И. Культура изолированных зародышей и некоторые другие приемы выращивания растений in vitro Текст. / А.И. Здруйковская-Рихтер. М.: Колос, 1974-60 с.

64. Здруйковская-Рихтер А.И. Культура незрелых зародышей миндаля от межвидовой гибридизации и свободного опыления Текст. / А.И. Здруйковская-Рихтер // Бюллетень Никитского ботанического сада. -1980.-Вып. 115.-С. 85-90.

65. Здруйковская-Рихтер А.И. Получение сортов плодовых растений in vitro методом культуры изолированных зародышей Текст. / А.И. Здруйковская-Рихтер // Доклады АН СССР. 1985. - Т. 283, №1. - С. 246-249.

66. Здруйковская-Рихтер А.И. Культура изолированных зародышей, семяпочек и семян различных плодовых растений и аспекты ее применения в прикладных целях Текст. / А.И. Здруйковская-Рихтер // Сельскохозяйственная биология. 1985. -№ 3. - С. 57-61.

67. Здруйковская-Рихтер А.И. Морфогенетические процессы в тканях изолированных зародышей ранних стадий развития плодовых растений Текст. / А.И. Здруйковская-Рихтер // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. - С. 124-128.

68. Здруйковская-Рихтер А.И. Итоги селекции черешни с использованием эмбриокультуры in vitro Текст. / А.И. Здруйковская-Рихтер, В.П. Орехова, Т.М. Тарасюк // Бюл. ГБС РАН. 1997.-№ 175. - С. 137-141.

69. Зленко В.А. Размножение оздоровленного посадочного материала винограда в культуре in vitro Текст. / В.П. Зленко, И.В. Котиков, Л.П. Трошин // Садоводство и виноградарство. 2005. - № 1. - С. 21-23.

70. Иванова Н.Н. Микроразмножение Anthurium andreanum и Begonia riger elatior в условиях in vitro Текст. / Н.Н. Иванова // Бюллетень Государственного Никитского ботанического сада. 2002. - №86. - С. 40-42.

71. Калинин Ф.Л. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений Текст. / Ф.Л. Калинин, В.В. Сарнацкая, В.Е. Полищук. -Киев.: Наукова думка, 1980.-488 с.

72. Калинин Ф.Л. Технология микроклонального размножения растений Текст. / Ф.Л. Калинин, Г.П. Кушнир, В.В. Сарнацкая. Киев: Наукова думка, 1992.-232 с.

73. Катаева Н.В. Клональное размножение растений в культуре тканей Текст. / Н.В. Катаева, В.А. Аветисов //Культура клеток растений. М., 1981. - С. 137-149.

74. Катаева Н.В. Клональное микроразмножение растений Текст. / Н.В. Катаева, Р.Г. Бутенко. -М.: Наука, 1983. 96 с.

75. Катаева Н.В. Особенности микроразмножения трудноукореняемых сортов яблони Текст. / Н.В.Катаева //Сельскохозяйственная биотехнология. -1986.-№4.-С. 18-23.

76. Катаева Н.В. Клональное микроразмножение абрикоса Текст. / Н.В.Катаева, Л.А. Крамаренко // Бюллетень ГБС. 1989. - Вып. 153. - С. 69-74.

77. Катаева Н.В. Значение гормонов в формировании витрифицированных побегов яблони при микроразмножении Текст. / Н.В.Катаева, Н.Г. Александрова, Е.В. Драгавцев //Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. -М.: Наука, 1991. С. 189-192.

78. Кашин В.И. Итоги научной и производственной деятельности ВСТИСП за 2003г. Текст. / В.И. Кашин // Доклады на сессии секции садоводства и виноградарства отделения растениеводства. -М.: ВСТИСП, 2004. С. 69.

79. Климкина Н.П. Микроразмножение посадочного материала персика Текст. / Н.П. Климкина // Проблемы повышения эффективности НИР в сфере агропромышленного комплекса: мат. школы молодых ученых и спец., (Ташкент, 4-6 дек. 1989г.) Ташкент, 1991. - С. 97-99.

80. Ковалева И.С. Особенности микроклонального размножения сортов крыжовника Текст. / И.С. Ковалева, Т.В. Данилова //Агро. XXI 2001. -№5.-С. 21.

81. Ковальчук И.Ю. Культивирование зародышей косточковых культур в искусственных условиях Текст. / И.Ю. Ковальчук, Г.К. Успанова // Материалы Всесоюзной конф. по с/х биотехнологии (Целиноград, 25-28 июня, 1991г.)-Целиноград, 1991.-С. 34-35.

82. Колбанова Е.В. Методика размножения черной смородины in vitro Текст. / Е.В. Колбанова, Н.В. Кухарчик // Плодоводство: науч. тр. -Самохваловичи, 2006.- Т. 18, ч. 2: Методическое обеспечение устойчивого развития современного плодоводства. С. 163-169.

83. Колесникова А.Ф. Вишня. Черешня Текст. /А. Ф. Колесникова. -Харьков: Фолио; М.: Изд. ACT, 2003. 255с.

84. Кондратенко О.Н. Использование цитокининов для регенерации микропобегов Feijoa sellowiana Berg, в условиях in vitro Текст. / О.Н. Кондратенко, E.JI. Шишкина // Бюллетень Государственного Ботанического сада. Ялта, 2002. - Вып. 86. - С. 55-57.

85. Кравцов П.В. Опыт применения культуры изолированных зародышей в селекции плодовых растений Текст. / П.В. Кравцов // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М.: Наука, 1970. - С. 41-45.

86. Куликов И.М. Биотехнологические приемы в садоводстве: экономические аспекты Текст. / И.М. Куликов, В.А. Высоцкий, А.А. Шипунова // Садоводство и виноградарство. 2005. - №5. - 24-28.

87. Курсаков Г.А. Применение культуры изолированных зародышей при отдаленной гибридизации сливы Текст. / Г.А Курсаков // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М.: Наука, 1970. - С. 47-50.

88. Курсаков Г.А. Применение изолированной культуры зародышей и тканей при отдаленной гибридизации плодовых растений Текст. / Г.А Курсаков

89. Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. М.: Колос, 1979.-С. 25-34.

90. Курсаков Г.А. Опыт применения искусственной культуры зародышей при отдаленной гибридизации яблони с грушей Текст. / Г.А Курсаков, В.А. Иноземцев // Бюллетень ЦГЛ. Мичуринск, 1973. - Вып. 20. - С. 11-14.

91. Курсаков Г.А. Отдаленная гибридизация плодовых растений. Текст. / Г.А. Курсаков. М.: Агропромиздат, 1986. - 112 с.

92. Курсаков Г.А. Культура in vitro зародышей косточковых плодовых растений на ранних стадиях эмбриогенеза / Г.А. Курсаков, Л.П. Дубовицкая // Бюллетень ЦГЛ. Мичуринск, 1988. - Вып. 46. - С. 3-7.

93. Кухарчик Н.В. Биологические особенности опыления и оплодотворения сортов вишни разной степени само- и перекрестной совместимости в Белоруссии: автореф. дис. . канд. биолог, наук /Натальи Владимировны Кухарчик. Минск, 1990. - 24 с.

94. Лебедев В.А. Потенциальные возможности адвентивного органогенеза у различных сортов груши / В.А. Лебедев, В.Н. Деменко, С.В. Долгов // Известия ТСХА. 2004. - Вып. 4. - С. 81-87.

95. Лесникова Н.П. Культура зародышей и получение гибридных форм персика, абрикоса, алычи / Н.П. Лесникова, А.В. Смыкова, В.М. Горина // Сб. науч. тр. Государственного Никитского ботанического сада. 1997. -Т.119.-С. 46-63.

96. Лукичева Л. А. Особенности клонального микроразмножения безвирусных сортов вишни и сливы /Л.А. Лукичева // Сб. науч. тр. Государственного Никитского ботанического сада. 1997. - Т. 119. - С. 34-46.

97. Лукичева Л.А. Оздоровление вишни и сливы методом термотерапии in vitro / Л.А. Лукичева. В.И. Митрофанова // Бюл. Государственного Никитского ботанического сада. -2002. Вып. 86. - С. 59-61.

98. Матушкина О.В. Регенерация растений из изолированных соматических тканей у плодовых и ягодных культур в условиях in vitro / О.С. Матушкина // Сб. науч. тр. ВНИИС им. И.В. Мичурина. Мичуринск, 1998.-С. 84-86.

99. Матушкина О.В. Регенерация груши in vitro / О.В. Матушкина, И.Н. Пронина // The Biology of plant cells in vitro and biotechnology. VII International Conference. Saratov, 2003. - C. 197.

100. Матушкина О.В. Микроклональное размножение жимолости Текст. / О.В. Матушкина // Сб. науч. тр. ВНИИ садоводства. Мичуринск. - 2003. -№67. - С. 109-111.

101. Методические рекомендации: Цитологические исследования плодовых и ягодных культур Текст.: метод, рек. / под ред. ГЛ. Курсакова. -Мичуринск: ЦГЛ, 1976. 104 с.

102. Методические рекомендации по применению искусственной культуры тканей и органов в генетико-селекционных работах с плодовыми Текст. / под ред. Г.А. Курсакова, Т.В. Зоточкиной // ЦГЛ им. И.В. Мичурина -Мичуринск, 1987. С. 27-30.

103. Методические указания по выращиванию сеянцев вишни из зародышей изолированных на ранних стадиях развития / В.А. Высоцкий, Г.А. Плотникова. М., 1988. -14 с.

104. Методические указания. Технологический процесс получения безвирусного посадочного материала плодовых и ягодных культур Текст. / под ред. В.И.Кашина. -М: ВСТИСиП, 2001. 109 с.

105. Методические рекомендации по использованию биотехнологических методов в работе с плодовыми, ягодными и декоративными культурами / под ред. Е.Н. Джигадло. Орел: ГНУ ВНИИСПК, 2005. - 51 с.

106. Минаев В.А. Клональное микроразмножение слаборослых клоновых подвоев яблони селекции МГАУ Текст. / В.А. Минаев, А.В. Верзилин, В.А. Высоцкий //Садоводство и виноградарство. 2003. - №5. - С. 12 -14.

107. Минаев В.А. Эффективность клонального микроразмножения и качество оздоровленного подвойного материала Текст. / В.А. Минаев, А.В. Верзилин, В.А. Высоцкий //Садоводство и виноградарство. 2005. - №4. -С. 12-14.

108. Минаев В.А. Биологические особенности слаборослых клоновых подвоев яблони при клональном микроразмножении: автореф. дис. . канд. с-х. наук /Вадима Александровича Минаева. Мичуринск. - 2005. -23 с.

109. Митрофанова И.В. Микроклональное размножение субтропических и тропических плодовых культур Текст. / И.В. Митрофанова //Сб. науч. тр.

110. Государственного Никитского ботанического сада. Ялта, 1997. — Т. 119 — С. 63-95.

111. Морозова Т.Т. Оздоровление, размножение и хранение земляники и малины в культуре in vitro. Методические указания Текст. / Т.Т. Морозова, С.Е. Дунаева, JI.A. Лутова // ВНИИ растениеводства им. Н.И. Вавилова (ВИР). 1999. - 24 с.

112. Муратова С.А. Получение растений-регенерантов и генетическая трансформация сливы (Prunus domestica) Текст. / С.А. Муратова, С.В. Долгов, А.П. Фирсов // Современные проблемы садоводства: тез. докл. междунар. науч. конф. Самохваловичи, 1995. - С. 135.

113. Муратова С.А. Морфогенез в культуре листовых тканей сливы и вишни Текст. / С.А. Муратова // II съезд Вавиловского об-ва генетиков и селекционеров: тез. докл. СПб., 2000. -Т.1.-С. 158-159.

114. Муратова С.А. Регенерация адвентивных побегов из листовых эксплантов сливы (Prunus domestica) Текст. // VIII Internationalconference.-The Biology of Plant Cells in vitro and Biotechnology. -Saratov. -September 9-13, 2003.-C. 219.

115. Муромцев Г.С. Гиббереллины Текст. / Г.С. Муромцев, В.Н. Агностикова-М.: Наука, 1984.-208 с.

116. Нафталиев Н.П. Влияние фазы эмбрионального развития зародышей яблони и груши на рост в культуре in vitro Текст. / Н.П. Нафталиев, П.В. Кравцов // Бюллетень ЦГЛ им. И.В. Мичурина. Мичуринск, 1977. -Вып. 25.- С. 31-36.

117. Николаева М.Г. Действие гибберелловой кислоты и кинетина на произрастание семян некоторых плодовых Текст. / М.Г. Николаева, Л.М. Поздова, Г.И. Капранова // Роль температуры и фитогормонов в нарушении покоя семян. Л.: Наука, 1981. - С. 75-78.

118. Олешко Е.В. Особенности размножения вишни in vitro Текст. / Е.В. Олешко // Культура клеток растений и биотехнология. М., 1986. - С. 117-120.

119. Орлова С.Ю. Особенности биотехнологии сортов in vitro и криоконсервации пыльцы вишни Текст. / С.Ю. Орлова, А.А. Юшев // Плодоводство и ягодоводство России: сб. науч. работ / ВСТИСП. М., 2005.-Т. XII.- С. 318-329.

120. Осипова JT.В. Изучение особенностей роста изолированных апексов вишни в искусственной культуре и влияние физических факторов на этот процесс Текст. / Л.В. Осипова // Бюллетень науч. информации ЦГЛ им. И.В.Мичурина. -Мичуринск, 1986.-Вып. 44.-С. 15-20.

121. Осипова Л.В. Влияние магнитного поля на искусственную культуру каллусных тканей плодовых растений Текст. / Л.В. Осипова // Бюллетень науч. информации ЦГЛ им. И.В. Мичурина. Мичуринск, 1990. - Вып. 49.-С. 22-26.

122. Осипова Л.В. Разработка методики получения растений-регенерантов из каллусов вишни Текст. / Л.В. Осипова // Бюллетень науч. информации ЦГЛ им. И.В. Мичурина. Мичуринск, 1991. - Вып. 50. - С. 28-35.

123. Осипова Л.В. О применении ионизирующих излучений в искусственной культуре плодовых растений Текст. /Л.В. Осипова, Л.А. Дубовицкая // Бюллетень науч. информации ЦГЛ им. И.В. Мичурина. Мичуринск, 1995.-Вып. 52.-С. 38-43.

124. Осипова Л.В. Получение растений-регенерантов вишни в культуре тканей Текст. /Л.В. Осипова // Индукция морфогенеза и тканевая селекция плодовых и ягодных культур: метод, рекомендации / под ред. В.М. Тюленева. Мичуринск, 1996. - С. 24-39.

125. Петрова А.Д. Оздоровление и размножение садовых культур in vitro Текст. / А.Д. Петрова, М.Т. Упадышева // Садоводство и виноградарство. -2000,-№4.-С. 12-13.

126. Плаксина Т.В. Особенности клонального микроразмножения садовой земляники Текст. / Т.В. Плаксина // Садоводство и цветоводство на современном этапе: сб. науч. тр. /Новосибирский ЗПЯОС им. И.В. Мичурина. Новосибирск, 2005. - С. 129 -131.

127. Плотникова Г.А. Развитие зародышей вишни и черешни в культуре in vitro, изолированных на ранних фазах эмбриогенеза Текст. / Г.А Плотникова, В.А.Высоцкий // Сельскохозяйственная биология. 1984. -№11.-С. 46-47.

128. Плотникова Г.А. Культура зародышей in vitro и получение гибридных форм вишни и черешни Текст.: автореф. дисс. . канд. с.-х. наук. / Галина Александровна Плотникова. М., 1987. - 24 с.

129. Приходько Ю.Н. Культура изолированных зародышей сливы Текст. / Ю.Н. Приходько, А.И. Минин, С.Ю. Солдаткин // Плодоводство в Нечерноземье. -М., 1993. С. 76-87.

130. Пугачев P.M. Применение культуры зародышей in vitro в селекции рода Prunus L Текст. / P.M. Пугачев, В.В. Скорина, В.А. Матвеева // Биологическая продуктивность растений и пути ее повышения: сб. науч. тр.-Горки, 1999.-С. 91-97.

131. Пугачев P.M. Особенности размножения растений рода Prunus L. в культуре in vitro Текст.: автореф. дисс. канд. е.- х. наук / Роман Михайлович Пугачев. Горки, 2003. - 18 с.

132. Расторгуев С.Л. Метод эмбриокультуры в селекционной работе с аллополиплоидами Текст. // Садоводство и виноградарство. 2006. -№2. -С. 13-15.

133. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. Минск. -1973. - 319 с.

134. Савельев Н.И. Использование биотехнологических методов в генетико-селекционных исследованиях плодовых и ягодных культур Текст. / Н.И. Савельев, В.М. Тюленев, Н.В. Соловых // Сельскохозяйственная биотехнология. 2003. - № 3. - С. 51-63.

135. Савин Е.З. Микроклональное размножение яблони и груши in vitro Текст. /Е. 3. Савин // Садоводство и виноградарство. 1994. - №1. - С. 10-12.

136. Сассон А. Биотехнология: свершения и надежды Текст.: пер. с англ. / под ред., с предисл. и доп. В.Г. Дебабова. М.: Мир, 1987. - 411 с.

137. Свириденко Э.И. Особенности размножения облепихи in vitro Текст. / Э.И.Свириденко, В.М. Бурдасов, О.П. Дудченко // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. -С. 221-224.

138. Свитайло A.M. Размножение in vitro сортов вишни Метеор и Норд стар Текст. // Садоводство. 1986. - №3-4. - С. 57-58.

139. Симагин В. С. Направления и перспективы использования отдаленной гибридизации в селекции вишни в Сибири Текст. / B.C. Симагин // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. 2001. - № 1-2. - С. 71-76.

140. Смирнов Ю.Г. Отдаленная гибридизация сливы домашней на основе цитогенетики Текст. / Ю.Г. Смирнов, Г.С. Смирнова, С.В. Лучникова //

141. Проблемы и перспективы отдаленной гибридизации плодовых и ягодных культур: сб. докл. и сообщ. XX Мичуринских чтений (Мичуринск, 25-27 октября 2000 г.) Мичуринск: Изд-во ВНИИ генетики и селекции плодовых растений им. И.В. Мичурина, 2000. - С. 41-42.

142. Стрыгина О.В. Микроразмножение малины Текст. / Стрыгина О.В. // Микроразмножение и оздоровление растений в промышленном плодоводстве и цветоводстве: сб. науч. тр./ВНИИС им. И.В. Мичурина. -Мичуринск, 1989. С. 3-8.

143. Субботин Г.И. Новые сорта вишни для Сибири Текст. / Г.И. Субботин // Основные направления научного обеспечения отрасли садоводства Сибири: сб. науч. тр./РАСХН Сиб. отд-ние; НИИСС им. М.А. Лисавенко. -Новосибирск, 1991. -С.71-77.

144. Субботин Г.И. Вишня в южной Сибири Текст. / Г.И. Субботин -Барнаул: Изд-во Алт. ун-та, 2002. 145 с.

145. Суриков И.М. Несовместимость и эмбриональная стерильность растений Текст. -М.: Агропромиздат, 1991. -53с.

146. Технология выращивания посадочного материала вишни в Сибири Текст.: рекомендации / ВАСХНИЛ, Сиб. отд-ние; НИИСС им. М.А. Лисавенко. Новосибирск, 1989. - 72 с.

147. Туровская Н. И. Микроразмножение груши Текст. / Туровская Н. И // Садоводство. 1987. - № 6. - С. 22-24.

148. Туровская Н.И. Микроклональное размножение малины Текст. / Туровская Н.И., Стрыгина О.В. // Садоводство и виноградарство. 1990. - №8. - С. 26-29.

149. Тюленев В.М. Индукция морфогенеза из изолированных соматических тканей яблони и груши Текст. // Индукция морфогенеза и тканевая селекция плодовых и ягодных культур: метод, рекомендации / под ред.

150. B.М. Тюленева Мичуринск, 1996. - С. 4-22.

151. Тюленев В.М. Методы индукции морфогенеза in vitro и сомаклональная изменчивость плодовых и ягодных культур Текст. / В.М. Тюленев, Н.В. Соловых // Селекция и семеноводство полевых культур. Пенза, 2001.1. C. 103-105.

152. Тюленев В.М. Биотехнология в садоводстве Текст. / В.М.Тюленев, Н.В. Соловых, О.Я. Олейникова // Садоводство и виноградарство. 2005. -№3. -С. 2-4.

153. Упадышев М.И. Оптимизация состава питательной среды на основе листовой диагностики Текст. / М.И. Упадышев // Плодоводство и ягодоводство России: сб. науч. тр. М., 1994. - С. 63-69.

154. Упадышев М.Т. Модификационная изменчивость ягодных и плодовых культур в зависимости от способа размножения Текст. / М.Т. Упадышев И Сельскохозяйственная биология. 2003. -№3. - С. 64-71.

155. Упадышев М.И. Адаптация пробирочных растений: новые подходы к решению проблемы Текст. / М.И. Упадышев, В.А Медведев // Вестник РАСХН. 2003. - № 3. - С. 27-28.

156. Фролова JI.B. Оптимизация технологии микроклонального размножения вишни и оценка влияния ионов тяжелых металлов в культуре in vitro Текст.: автореф. дис. канд. с-х наук /Людмилы Владимировны Фроловой. Орел, 2003. - 20 с.

157. Хаак Э.Р. Клональное микроразмножение косточковых культур Текст. / Э.Р. Хаак, Ю.О. Нууст // Садоводство и виноградарство. 1989. - № 1. -С. 27-29.

158. Хвостова И.В. Способ культивирования изолированных зародышей яблони и груши Текст. / И.В. Хвостова, Т.Н. Курочка //Современные проблемы садоводства: тез. докл. междунар. науч. конф. (9-13 октября 1995 г.). Самохваловичи, 1995. - С.55.

159. Шипунова А.А. Клональное микроразмножение садовых растений Текст.: автореф. дис. канд. с-х наук / Анна Аркадьевна Шипунова. -М., 2003.-24 с.

160. Щеглов Н.И. Влияние физиологически активных веществ на культуру изолированных зародышей Текст. / Н.И. Щеглов // Труды Кубанского отделения Всесоюзн. Общества генетиков и селекционеров. 1975. -Вып. 1.-С. 262-265.

161. Щеглов Н.И. Гибберелловая кислота и ее влияние на культуру изолированных зародышей плодовых растений Текст. / Н.И. Щеглов, И.Е.Швыдко, JI.А. Ямпольская // Бюл. ЦГЛ им. И.В. Мичурина. 1977. -Вып. 25. - С. 39-42.

162. Щеглов Н.И. Метод культуры зародышей в генетико-селекционном изучении косточковых растений Текст. / Н.И. Щеглов // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. -М.: ВАСХНИЛ, 1979. С. 8593.

163. Эмбриология растений: использование в генетике, селекции, биотехнологии: в 2 т. М.: Агропромиздат, 1990. - 406 с.

164. Aier N.B. Micropropagation in some plum cultivars / N.B. Aier, S.D. Sharma // Fruit Sc. Rep. Skierniewice. 1990. - Vol. 17, N 2. - P. 57-63.

165. Anderson W.S. Mass propagation by tissue culture: principls and techniques / W. S. Anderson // Proceedings of confer. On nursery production of fruit plants through tissue culture-aplications and feasibility. Maryland, 1980. - P. 1-10.

166. Berthouly, M. Micropropagation in vitro dedifferentes ligness de Coffea arabica var. Camitor / M. Berthouly, N. Guzman, P. Chatelet//12 Colloq. Sci. int. cafe, Montreux, Paris, 1988. - P. 462-467.

167. Bhagwat B. The regeneration of shoots derived from Prunus avium leaves / B. Bhagwat, W. Lane // Plant Cell, Tissue, and Organ Cult. 2004. - 78, N 2. - P. 173-181.

168. Bhojwani S. In vitro propagation of Prynus purifolia / S. Bhojwani, K. Millina, D. Cohen // Sci. Hort. (Neth) 1984. - 23, N 3. - P. 247-254.

169. Borad, V.P. Regeneration of plantlets in Sapindus trifoliatus L. / V.P. Borad, D.M. Barvt, S.J. Macwan, A.R. Mehta // Indian J. Exp. Biol. 2001. -39, N 12.-P. 1288-1292.

170. Borkowska B. Development and biochemical charactoristies of sour cherry tissue cultures // Gartenbauurssenschaft. 1986. - Vol. 51, N 1. - P. 14-17.

171. Brown D.C. Plant regeneration by organogenesis / D.C. Brown, T.A. Thorpe // Cell culture and somatic cell genetics of plant. III. / Ed. I. K. Vasil. Acad. Press Inc., Orlando: Florida, 1987. -P.49-65.

172. Cronauer, S. Rapid multiplication of bananas and plantains by in vitro shoot tip culture / S. Cronauer, A.D. Krikorian // Hort. Sci. 1984. - 19, N 2. - P. 234-235.

173. Cruz G. S. Somatic embryogenesis and plant regeneration from zygotic embryos of Fijoa sellowiana Berg. / G.S. Cruz, J.M. Canhota, M.A. Abreu // Plant Sci. 1990. - 66, N 2. - P. 263-270.

174. Das D.K. An efficient regeneration system of black dram (Vigna mungo L.,) through organogenesis / D.K. Das, N.S. Prakash, N. Bahalla-Sarin // Plant Sci. 1998.- 134,N2.-P. 199-206.

175. Demerke T. Micropropagation of Phytolacca dodecandra through shoot-tip and nodal cultures / T. Demerke, H.G. Hughes // Plant Cell Repts.- 1990. 9, N7.-P. 390-392.

176. Durdina R. Utiaj pojedinin elemenata mineralne ishrane na fazu multiplikacije podloga za tresnju in vitro / R. Durdina, S. Miloje, C. Ljudinka // Jugosloven. Vocar. 1997.-31, N1 - 2. - P. 119-128.

177. Emershad R.L. Effect of media on embryo enlargement, germination and plant development in early-ripening genotypes of Prunus growth in vitro / R.L. Emershad, D.V. Ramming // Plant, Cell, Tissue and Organ Culture. 1994. -Vol. 37.-P. 55-59.

178. Flynn W.P. Theobroma cacao L. an axillary bud .in vitro propagation procedure Text. / W.P. Flyna, L.G. Glicenstein, P.J. Fritz // Plant Cell, Tissue, and Organ Cult. -1990. 20, N 2. - P.l 11-117.

179. Fourre J.L. Protein synthesis and modification by heat in rice cell culture / J.L., J. Lhoest // Plant Sci. 1989. - 61,N1.-P. 69-74.

180. Fukui H. Shoot tip culture of persimmon (Diospyros kaki Thunb.) / Fukui H., Sugiyama M., Nakamura M. // J. Jap. Soc. Hort. Sci. 1989. - 58, N 1. - P. 43-47.

181. Garland P. Micropropagation of pissrdi plum / P. Garland, 1. Stoltz // Ann. Bot. 1981. - 48, N 3. - P. 387-389.

182. Gautheret R. J. Introduction on problems des cultures in vitro de vegetaux ligneux / R. J. Gautheret // Bull. Soc. Bot. Fr. 1983. - N 2. - P. 5-10.

183. Goh H.K. In vitro plantlet formation in mangosteen (Garcinia mangostana L.) Text. / H.K. Goh, A.N. Rao, C.S. Loh // Ann Bot. 1988. - 62, N 1. - P. 8793.

184. Gonzalez M.V. Micopropagation of three berry fruit species using nodal segments form field- grown plants / Gozalez M.V., Lopez M.V., Valdes A.E. // Ann Appl. Biol. 2000. - 137, N 1. - C. 73-78.

185. Hammerschlag F.A. Regeneration of peach plants from callus derived from immature embryos / F.A. Hammerschlag, G. Bauchan, R. Scorza // Theor. And Appl. Genet. 1985. - 70, N3. - P. 225.

186. Hanke V. Untersuchungen zur regeneration an sornatischem Gewebe in vitro. Zur Adbentives prossbildung an Blattexplantaten bei Apfel (Malus domestica Borckh) / V. Hanke, A. Rohpe, C. Grafe // Gartenbauwissenschaft. 1991, 56, N 5.-S. 214-220.

187. Haoru Т. Somatic embryogenesis and organogenesis from immature embryo cotyledons of three sour cherry cultivars ( Prunus cerasus L.) / T. Haoru, R. Zhenglong, K. Gabi // Sci. Hort. (Neth). 2000. - 83, N 2. - P. 109-126.

188. Hesse C.O. Advances in fruit breeding. Peaches / C.O. Hesse //Purdue University Press West Lafayette, Indiana. -1975. P. 296-298.

189. Ishida M. In vitro propagation of Prunus japonica Thunb., a dwarfing rootstock for peach tree / M. Ishida, H. Matsuyama, A. Kitajima, Y. Sobajima // J. japan soc. Hortic. Sc. 1989. - Vol. 58, N 1. - P. 49-54.

190. James D.J. Factors affecting high frequency plant regeneration from apple leaf tissues cultured in vitro / D. J. James, A.J. Passey, E. Rugini //J. Plant Physiol. 1988.- 132. N2.-P. 148-154.

191. Jay-Allemand C. Culture in vitro d' embryons isoles de noyer commun (Juglans regia L.) / C. Jay-Allemand, D. Cornu // Ann. Sci. forest. 1989. -43, N2.-P. 189-197.

192. Jianzhong C. Embryo culture early-ripl hybrids of apple / C. Jianzhong Agr. Univ. Nanjing Agr. Univ - 1998. -21, N 2. - P. 30-33.

193. Klockonos N.P. Induction of morthogenesis in tissue culture of small-fruits /N.P. Klockonos // Biotechnology Approaches for Exploitation and Preservation of Plant Resources 26-31 May 2002 (Yalta, Ukraine). Abstracts. -Yalta, 2002. P. 30.

194. Кръстанова С. Приложение на някои биологични методи в селекция та на лозата // Лозарство Винарства. 1990. - 39, N 3. - С. 8-10.

195. Lane W. Formazione digermogli awentizi da embrioni di albicoceo in vitro / W. Lane, F. Cossio // Riv. Frutticolt. E. ortofloricolt. 1987. - 49, N11. - P. 89-92.

196. Ledbetter C.A. Germination and net in vitro growth of peach, almond and peach-almond hybrid embryos in response to mannitol unclusion in the nutrient medium / C.A. Ledbetter, D.E. Palmqust, S.J. Peterson // Euphytica. 1998. -103, N2.-P. 243-250.

197. Li G.R. Investigation of isolated grape embryos / G.R. Li, Y. Wang, D. Tang // Xibei zhiwu xuebao = Acta Bot. Boreali Occident. Sin. - 2001. - 21, №3. -P. 432-436.

198. Lloyd G. Commercially-feasible micopropagation of mountain laurel, Kalmia latifolia, by use of shoot tip culture / Lloyd G., Mecown B. // Comb. Proc. Intl. Plant Prop. Soc. 1981. - 30. -P. 421-427.

199. Maity S.K. In vitro propagation of Mussaenda erythrophylla Schum and Trom cv. Scarlet through multiple shoot regeneration / S.K. Maity, K.K. De, A. K. Kundu // Indian J.Exp. Biol. 2001.-39, N 11. - P. 1188-1190.

200. Manabu K. Propagation of Japanese cherry (Prunus jamasakura) by shoot-tip culture // "Кюсю Токай дайгаку Ногакубу оие,"Ргос. Fac.Agr. Kyuushu TokaiUniv., 1987, N6.-P. 1-4.

201. Mante S. Plant regeneration from cotyledons of Prunus persica, Prunus domestica and Prunus cerasus / S. Mante, R. Scorza, J. Cordts // //Plant Cell Tissue Organ Cult. 1989. - 19, N 1 - P. 1-11.

202. Mascarenhas A. F. Propagation of trees by tissue culture Text. / A.F. Mascarenhas , P.K. Gupta, V.M. Kulkarni, U. Mehta, R.S. Iyer // Tissue culture of Economically Important Plant / ed. A. N. Rao. ANBS: Singapore, 1982. -P. 175-179.

203. MatusutaN. Plantlet formation from leaf callus of Prunus lannesiana Uris // Japan. J. Breed. -1983. Vol.33, N 3. - P. 484-486.

204. Mehanna H.T. Effects of temperature, chemicals treatments and endogenous hormone content on peach seed germination and subsequent seedling growth / H.T. Mehanna, G.C. Martin, S. Nisijima // Scientia Hort. 1985. - 27. - P. 6373.

205. Mencuccini M. In vitro shoot regeneration from olive cultivar tissues /М. Mencuccini, E. Rugini // Plant Cell, Tissue and Organ Cult. 1993. - 32, N 3.-P. 283-288.

206. Mhatre M. Regeneration of plants from the culture of leaves and axillary buds of mulberry ( Morns indica L.) / Mhatre M., Bapart V., Rao P. // Plant Cell Repts. 1985.-4, N 1. - P. 78-80.

207. Miller G. A. In vitro propagation of 'Nemaguard' peach rootstock / G.A. Miller, D.C. Coston, E.D. Denny, M.E. Romeo // Hort. Science. 1982, 17, N 2.-P. 194.

208. Modgil, M. Micopropagation of apple cv. Tudeman's Early Worcester / M. Modgil., D. Sharma, S. Bhardway // Sci. hort. 1999. - Vol. 81. -P. 179-181.

209. MoreiraM.F. Anatomical aspects of ЮА-treated microcuttings of Gamphrena macrocephala St.-Hil. / M.F. Moreira, B. Appezzato-Gloria, L.B.P. Zaidan // Braz. Arch. Biol. And Technol. 2000. - 43, N2. - P.221-227.

210. Mosella C. L. Influences combines des substances de croissance et de divers composes phenoliques sur lemicrobouturage in vitro du Pecher (Prunus persica Batsch) / C.L. Mosella, J. Macheix // Bull. Soc. Bot. Fr. Actual. Bot. 1983. -130, N2.-P. 105-106.

211. Murashige, T. Plant propagation through tissue culture / T. Murashige //Ann. Rew. Plant Physiol. 1974. - 25, N 2. - P. 135-166.

212. Murashige, T. Clonal crops through tissue culture / T. Murashige // Plant tissue culture and its bio-technological application. 1976. -P.392-403.

213. Murayama H. In vitro shoot proliferation and rooting of several Japenese persimmon cultivars Text. / H. Murayama, R. Tao, T. Tanaka, A. Sugiura // J. of Jap. Soc. For Hortic. Sci. 1989. - 58, N 1. - P. 55-61.

214. Muriithi L.M. In vitro propagation of fig through shoot tip culture / Muriithi L.M, Rangan T.S., Waite В. H. //Hort Science. 1982. - 17, N 1. -P. 86-87.

215. Narayanaswamy S. Plant embryos and factors controlling their growth / S. Narayanaswamy, K. Norstog // Bot. Rev. 1964. -30, N 4. - P. 587-628.

216. Неделчева С. Размножение in vitro трех вегетативных подвоев рода Prunus / С. Неделчева, Д. Ганева, А. Атанасов // Растениевъд. Науки. -1985.-22.-№8.-С. 98-104.

217. Неделчева С. Калусогенезис и възможности за регенерация на цели растения прикасиата. Индуциран първичен и органогенен каллус от изолировании котиледони / С. Ниделчева, Е. Цонева // Растиниевьд. Науки. 1995. - 32, N 7-8. - С. 109-111.

218. Неделчева С. Поучване влиянието на минеральние съестав на хранительната среда вързу развитието на микроразмножении культури от Prunus armeniaca / Неделчева С. // Почвозн. Агрохимикол. 1999. - 34, N 2-3.-С. 78-82.

219. Perez-Molphe-Balch Е. In vitro propagation of Pelecyphora aselliformis Ehrenberg and P. strobiliformis Werdermann (Cactaceae) / E. Perez-Molphe-Balch, C.A. Silvia-Figueroa // In vitro Cell. And Dev. Biol-2000. 38, N l.~ P.73-78.

220. Perez-Tornero 0. Effect of basal media and growth regulators on the in vitro propagation of apricot (Prunus armeniaca L.) с v. Canino / Perez-Tornero 0., Lopez J.M., Egea, J., Burgos L. // J. Hortic. Sc. Biotechnol. 2000. - Vol. 75, N3.-P. 283-286.

221. Pevalek-Kozlina B. In vitro establishment of wild cherry (Prunus avium L.) initial culture //Acta biol. 1991. - 16, N 1. - P. 9-15.

222. Pinker I. Miklover mehrung von Bewurzelungstanigkeit /1. Pinker, I. Bethke //Dtsh. Baumsch. 1997.-49. № 8. -P.426-427.

223. Pliego Alfaro F. Somatic embryogenesis in avocado (Persea americana Mill.) in vitro / Alfaro F. Pliego T. Murashige // Plant Cell, Tissue and Organ Cuylt.- 1988-12, N1.-P. 61-66.

224. Poniedzialek W. Effect of growth regulators on rooting sour cherry in tissue culture / W. Poniedzialek, W. Lech, M. Malodobry // Acta hortic. Wageningln.- 1986. -N2.-P. 847-851.

225. Poniedzialek W. Rozmnazanie wisni odmiany Kelleris 16 / W. Poniedzialek, W. Lech, M. Malodobry // Zesz. Nauk AR Krakowie. Ogrodnictwo. - 1987. -N16.-P. 231-238.

226. Predieri S. High-frequncy shoot regeneration from leaves of the apple rootstock M-26 (Malus pumila Mill) /S. Predieri, F. Malavasi //Plant Cell Tissue Organ Cult. 1989. 17, N2-P. 133-142.

227. Qinglin L. Tissue culture of Prunus mume / L. Qinglin // J. Beijing Forest Univ. 1999.-21, N2. -P. 100-105.

228. Raghavan V. Embryo culture / V. Raghavan, S. Srivastava // Exp. Embryology of Vascular Plants. 1982. - P. 195-230.

229. Rama P. In vitro propagation of olive (Olea europaea sativa L.) / Rama P., Pontikis C. // Hort. Science -1990. 65, № 3. - P. 347-353.

230. Ramming D. V. In Ovulo Embryo Culture in Early maturing Prunus / D. V. Ramming // Hort. Science. 1985. - Vol. 20, N 3. - P. 419-420.

231. Ramming D. V. Embryo rescue techniques in nectarine and peach breeding / D. V. Ramming // N.Z. Agronomy Society Special Publication. 1986. - N 5. -P. 371-374.

232. Rao P. V. Tissue culture propagation of tree legume Albizia lebbek (L.) / P. V. Rao, D. Lakshmann, N. De Deepesh // Plant Sci. 1987. - 51, N 2-3. - P. 263267.

233. Rappoport J. In vitro culture of plant embryos and factors controlling their growth // Bot. Rev. 1964. - 30, N 4. - P. 587-628.

234. Res J. Embryo culture as an effective aid for rescuing hybrid seedlings of early ripening peacher (Prunus persica Batsch) // Punjab. Agr. Univ. 1994. -31, N2.-P. 127-130.

235. Rodriguez R. In vitro propagation of Prunus persica // Fyton. 1982. -Vol.42. -N1.-P.109-113.

236. Rubos A. C. Morphogenesis in embryonic tissue cultures of apple / A.C. Rubos, J.A. Pryke // Hort. Sci. 1984. - 59, N 4. - P. 469-475.

237. Rugirii E. In vitro propagation of some olive (Olea europaea L.) cultivars with different root ability, and medium development using analytical data from developing shoots and embryos // Sci. Hortic. 1984. - 24. - P. 123-134.

238. Rugini E. Somatic embryogenesis and plant regeneration in olive (Olea europaeaL.) //Plant Cell, Tissue Organ Cult. -1988. -14, N 3.-P. 207-214.

239. Ruzic D. Relationship between the concentration of macroelements their uptake and multiplication of cherry rootstock Gisela 5 in vitro / D. Ruzic, M. Saric, R. Cerovic, L. Culafic // Plant Cell Tissue Organ Cult. 2000. - Vol. 63, Nl.-P. 9-14.

240. Sechenbater M. L. Tissue culture and regeneration of plant Prunus mongolica / M. L. Sechenbater //Xibei zhiwu xuebao = Acta Bot. Boreali Occident. Sin. ~ 2002.-22. №6.-P. 1479-1481.

241. Sharon, M. Somatic embryogenesis and plant regeneration from leaf primordial of phoenix dactylifera cv yakubi / M. Sharon, P.C. Shankar // Indian J. Exp. Biol. 1998. - 36, N 5. - P. 526-529.

242. Shibli, R.A. In vitro multiplication of bitter almond (Prunus amygdalus) from North Jordan / R.A. Shibli, A.C. Jaradat, M.M. Ajloni, S.Aijanabi // In vitro Cell. And Dev. Biol. Anim. 1996. - 32, N 3. - P. 2.-74.

243. Skirvin R. Sources and frequency of somaclonal variation /R. Skirvin // Hort. Sci.-1994.-29.-P. 1232-1236.

244. Snir I. In vitro propagation of «Canino» apricot /1. Snir //Hort. Sci. 1984. -19, N2.-P. 229-230.

245. Schimmelpfeng H. Himbeerpflanzen aus Gewebekulturen ~ Erfahrung bei der Weiterkultur und im praktischen Anbau. Obstbau (Bonn), 1983, 8,7: 321-324.

246. Standard! A. Tissue culture propagation of kiwifruit / A. Standardi, F. Catalano // Com. Proc. Inter. Plant. Prop. Soc. 1985. - 34. - P. 236-243.

247. Stanys V. Morphogenesis of the components of apple seeds / V. Stanys, G. Staniele, B. Getvonauskis // Exp. boul. 1992. N 3-4. - P. 91-92.

248. Takahiro W. Plant regeneration from leaf Fragaria ananassa / W. Takahiro, J. Rakino// GakuenUniv. Natur. Sci. ~2002. ~27, N1. -P. 79-83.

249. Tang H. Somatic embryogenesis and organogenesis from immature embryo cotyledons of three sour cherry cultivar (Prunus cerasus) / H. Tang, Z. Ren // Sci. hort. (Nort),- 2000. 83, №2. -P. 109-126.

250. Tetsumura, T. Comparative rooting of shoot tips of four Japanese persimmon cultivars vs. shoots regenerated from roots cultured in vitro / T. Tetsumura, H. Yukinaga // Hort. Science 2000. - 35, N 5. - P. 940-944.

251. Tricoli D.V. Tissue culture of propagation of mature trees of Prunus serotina Ehrh. 1. Establishment, multiplication and rooting in vitro / D.V. Tricoli, C.A. Maynard, A.P. Drew//Forest Sci., 1985, 31,N l.-P. 201-208.

252. Wakasa M. Plant regeneration from in vitro cultures of peach /М. Wakasa, K. Yoshiaki, K. Massaki//Japan. J. Breed. -1978. -28, N2. -P. 113-121.

253. Welander M. Plant regeneration from leaf and stem segments of shoots raised in vitro mature apple trees / M. Welander // Plant Physiol. 1988. - 132, N 6. -P. 738-744.

254. White P.R. A handbook of plant tissue culture / P.R. White // The Jasques Cattel Press, Lancaster, Pensilvania, USA. -1943. 4. - P. 791-794

255. Yu T.A. Efficient rooting for establishment of papay plantlets by micropropagation / T.A. Yu, S.D. Yeh, Y.H. Cheng, J.S. Yang // Plant Cell, Tissue Organ Cult. 2000. - 61, N 1. - P. 29-35.