Онтогенетическая реализация биохимических механизмов в иммунитете насекомых

Гайфуллина, Луиза Римовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Онтогенетическая реализация биохимических механизмов в иммунитете насекомых
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Онтогенетическая реализация биохимических механизмов в иммунитете насекомых"

На правах рукописи

Гайфуллина Луиза Римовна

ОНТОГЕНЕТИЧЕСКАЯ РЕАЛИЗАЦИЯ БИОХИМИЧЕСКИХ МЕХАНИЗМОВ В ИММУНИТЕТЕ НАСЕКОМЫХ

Специальность 03.00.04 - Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Уфа 2004

Работа выполнена в Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук

Научный руководитель

доктор биологических наук Николенко А. Г.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Мустафина О. Е. кандидат биологических наук Басченко И. А.

Ведущая организация:

Всероссийский институт защиты растений РАСХН

Защита диссертации состоится « /1 » 2004 г в

/оГ ч на заседании

Регионального диссертационного совета КМ 002.133.01. в Институте биохимии

и генетики Уфимского научного центра РАН по адресу: 450054, Уфа, Проспект

Октября, 69

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Уфимского

научного центра РАН

Автореферат разослан «

// » И-Ш^М 2004 г

Ученый секретарь

Регионального диссертационного совета

кандидат биологических наук

2 DOM illOQ '

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Изучение механизмов устойчивости живых организмов является важным звеном в решении целого ряда фундаментальных и практических проблем современной биологии. Знание механизмов защитных реакций насекомых позволит понять закономерности эволюции иммунитета, а также целенаправленно подойти к проблеме управления популяциями насекомых.

Биохимические защитные механизмы и тесно связанные с их функционированием клеточные компоненты гемолимфы активно участвуют в процессах линьки и метаморфоза (Ball et al., 1987; Nardi and Miklasz, 1989, Hon et al., 1997; Nardi et al., 2001). Детали участия биохимических механизмов и клеток гемолимфы в гистолитических и формообразующих процессах насекомых пока не ясны. Однако очевидно, что общий принцип функционирования данных систем в морфогенетических явлениях аналогичен определенным защитным реакциям насекомых (Kilincer and Giirkan, 1987, Ramalingam et al.,1993). Таким образом, общее физиологическое состояние, образ жизни, гормональный статус, характерные для каждой стадии развития насекомых, предполагают существование онтогенетических различий в биохимических механизмах иммунного ответа насекомых.

Экспериментальное подтверждение индуцирования достаточно специфических и долговременных защитных реакций насекомых возможно лишь при условии использования естественных способов заражения, а также патогенов в дозировках и степени вирулентности, не вызывающих глубоких патологических изменений в организме насекомого (De Gregorio et al., 2001; Ekengren, Hultmark, 2001; Tzou et al., 2001). Проведенные ранее многочисленные исследования защитных механизмов насекомых, как правило, методически не соответствовали этим условиям, в силу чего сформировали представление о неспособности насекомыми приобретать иммунитет (Флоренсов, Пестова, 1990) и об исключительной роли отбора особей с наиболее успешной реализацией защитных систем в возникновении

РОС Н . 'М!ЬНАЯ ЬУ< ■>■■ «• FKA ChcTepSypr

гообрк

устойчивых популяций насекомых. Вместе с тем, на сегодняшний день имеются единичные свидетельства развития долговременных биохимических и клеточных реакций иммунной запиты отдельных видов насекомых (Booman et al., 1978; Купер, 1980; Dunn, 1990; Karp, 1990), не носящие системного характера.

Изучение данных вопросов может изменить общее представление о способах формирования устойчивости насекомых к неблагоприятным факторам среды, обеспечивающих удивительную пластичность видов класса Insecta.

Цель работы заключалась в изучении онтогенетической реализации биохимических защитных реакций в иммунитете насекомых. Были поставлены следующие задачи:

1. Изучить онтогенетические особенности биохимических защитных реакций Leptinotarsa decemlineata Say. при развитии инфекционного процесса.

2. Изучить онтогенетические особенности гемоцитарных реакций Leptinotarsa decemlineata Say. при развитии инфекционного процесса.

3. Определить длительность биохимических защитных реакций Musca domestica L., вызванных действием экзогенных факторов.

Научная новизна. Впервые, на примере колорадского жука, показано, что онтогенетические особенности биохимических механизмов начального этапа иммунного ответа проявляются в преобладании на личиночной стадии неспецифических, а на имагинальной - специфических биохимических защитных реакций. Установлено, что онтогенетические особенности гемоцитарной реакции на начальном этапе развития инфекционного процесса заключаются в увеличении доли метаболических гемоцитов на стадии личинки и иммунокомпетентных клеток на стадии имаго. Впервые исследование иммунной реакции насекомых проводилось с использованием нелетальных доз патогена, что позволило явно показать эффект иммунизации у насекомых. Обнаруженный эффект иммунизации нелетальными дозами битоксибациллина (БТБ), выражающийся в повышении активности биохимических систем защиты и увеличении доли иммунокомпетентных и метаболических гемоцитов при

повторном заражении, сохраняется при смене возрастов личинок и онтогенетических стадий L.decemlineata Say. Показана возможность формирования долговременной, охватывающей весь онтогенез насекомого, реакции биохимических систем, участвующих в иммунном ответе M.domestica L., на примере действия Ы-ацетил-Б-глюкозамина (NAGA) и высокой температуры.

Практическая значимость. Полученные данные по онтогенетическим особенностям иммунного ответа и иммунизирующему действию нелетальных доз патогена рекомендованы для использования при установлении регламентов применения инсектицидов и других биологически активных для насекомых веществ. Данные об адаптивном действии NAGA будут использованы при разработке нового адаптогена для полезных насекомых.

Положения, выносимые на защиту

1. Реализация биохимических механизмов и гемоцитарных реакций в иммунном ответе насекомых онтогенетически обусловлена.

2. Иммунизация насекомых вносит вклад в формирование общей устойчивости их популяций наряду с действием отбора.

3. Тепловой стресс и действие NAGA вызывают долговременную реакцию биохимических систем, участвующих в иммунном ответе насекомых.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на конференциях «Молодые ученые Волго-Уральского региона на рубеже веков» (Уфа, 2001), «Биология - наука 21-го века» (Пущино, 2001), «Биоантиоксидант» (Москва, 2002), «Экологические аспекты интенсификации сельскохозяйственного производства» (Пенза, 2002), «Разнообразие беспозвоночных животных на севере» (Сыктывкар, 2003), на ХП съезде Русского энтомологического общества (Санкт-Петербург, 2002), на III съезде Всероссийского Общества Генетики и Селекции (Москва, 2004).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 работ.

Структура диссертации. Работа изложена на 174 страницах машинописного текста, содержит 24 таблицы и 35 рисунков, включает следующие разделы: введение, 5 глав, заключение, выводы и список литературы (266 источника, в том числе 193 иностранных).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследований

В качестве объектов исследований были использованы одновозрастные личинки, куколки и имаго колорадского жука Leptinotarsa decemlineata Say. и комнатной мухи Musca domestica L. линии Cooper. Условия содержания насекомых соответствовали специальным методикам ведения лабораторной культуры колорадского жука (Беньковская, 1990) и комнатной мухи (Салтыкова, 2000). В экспериментах использовали синхронизированных по возрасту личинок, куколок и имаго колорадского жука и комнатной мухи.

Модельное инфицирование насекомых битоксибациллином (БТБ), представляющим спорокристаллический препарат Bacillus thuringiensis var. thuringiensis, проводили по методике, представленной Е.С. Салтыковой (2000).

Приготовление клеточных препаратов гемолимфы производили фиксированием мазков 96%-ым этанолом и окрашиванием по методу Романовского-Гимзы (Кост, 1957). Типы форменных элементов гемолимфы определяли по классификации М.И. Сиротиной (1961).

Титр и углеводную специфичность гемагглютининов определяли по D. Stynen (1982).

Спектрофотометрическое измерение фенолоксидазной активности проводили по Е.Ю. Животенко и др. (1987), пероксидазной - по Бояркину (1951). Активность каталазы измеряли манганометрическим методом (Мерщиев, 1990). Активность тирозиназы, ДОФАоксидазы и пероксидазы выражали приростом оптической плотности в минуту, в перерасчете на концентрацию белка (ед. акт./мин/мг белка), удельную активность каталазы

выражали в нМ/мин/мг белка. Концентрацию белка определяли по О. Лоури (Lowry et al., 1951).

Электрофорез молекулярных форм фенолоксидазы проводили в 7,5% полиакриламидном геле по системе B.J. Davis (1962). Выявление ферментативной активности на электрофореграммах осуществляли по Г.Ю. Раушенбах (1997).

Статистический анализ полученных данных проводили с использованием среднеарифметического значения и ошибки среднего. Достоверность различий средних значений определяли по t-критерию Стюдента (Лакин, 1990).

Онтогенетические особенности биохимических защитных реакций Leptinotarsa decemlineata Say. при развитии инфекции Онтогенетические особенности агглютинирующей активности гемолимфы. Титр агглютининов в гемолимфе колорадского жука изменялся в онтогенезе, увеличиваясь к имагинальной стадии (Таб. 1). С развитием инфекции в организме насекомого наблюдался рост титра гемагглютининов. Причем с увеличением дозы патогена увеличивалась и скорость изменения агглютинирующей активности гемолимфы. Наиболее интенсивный рост титра гемагглютининов регистрировался при действии нелетальной и пятикратно увеличенной дозы патогена у личинки 4 возраста и перезимовавшего имаго. Иммунизация L.decemlineata нелетальной дозой БТБ вызывала у личинок и перезимовавших имаго увеличение титра гемагглютининов в первые часы после повторного заражения в сравнении с неиммунизированными особями.

Необходимо отметить, что гемагглютинины L.decemlineata на всех стадиях онтогенеза проявляли сходную углеводную специфичность, связываясь только со сложными олиго- и полимерными сахарами - сульфатированным полисахаридом гепарином, хитоолигосахаридами (ХОС) со степенью полимеризации 15 и гиалуроновой кислотой (ГУК) (Таб. 2). При всем том гемагглютинины L.decemlineata не обладали сродством к NAGA - структурной единице ХОС.

Таблица 1.

Титры агглютининов гемолимфы на начальном этапе развития инфекции в онтогенезе

L.decemlineata при однократном и двукратном действии БТБ

Возраст Контроль 0,1%БТБ 0,5% БТБ 0,1%+0,5% БТБ

2ч 4ч 24 ч 2ч 4ч 24 ч 0ч 2ч 4ч 24 ч

L III 64 64 64 64 64 64 128

LIV 512 512 512 1024 2048 4096 4096 1024 4096 4096 4096

Р 256 256 256 512 256 512 512 256 256 512 512

11G 1024 1024 1024 1024 1024 2048 256 1024 1024 2048 1024

IW 1024 2048 2048 2048 2048 4096 4096 2048 4096 4096 8192

L III личинки 3-го возраста, LIV - личинки 4-го возраста, Р - куколки, 11G - имаго 1-ой генерации, IW -перезимовавшие имаго

Таблица 2.

неингибиторы ингибиторы /минимальная концентрация, угнетающая агглютинацию,%

галактоза, й(-)фруктоза, й(+)рамноза, контроль БТБ

0(-)манноза, Ц+)арабиноза, N-ацетил-D- ХОС 0,125 0,250

глюкозамин, D(+)лактоза, 0(+)мальтоза гепарин 0,125 0,250

сахароза ГУК 0,250 0,250

ХОС - хитоолигосахариды, ГУК - гиалуроновая кислота

Очевидно, для связывания гемагглютининами L.decemlineata углевод должен обладать достаточной молекулярной массой или дополнительными связями. При развитии инфекции у личинок 4 возраста и перезимовавших имаго минимальная ингибирующая концентрация ГУК не изменялась, тогда как у ХОС и гепарина она увеличивалась вдвое. Данное наблюдение говорит не только об увеличении количества агглютининов в гемолимфе имаго колорадского жука, имеющих сродство к ХОС и гепарину, но и о включении специфических по отношению к БТБ механизмов защиты, поскольку токсины, нарабатываемые B.thuringiensis, имеют в своем составе сходные с ХОС гликозидные фрагменты (Dulmage, Rhodes, 1971).

Динамика активности ферментов фенолоксидазной и антиокислительной систем в гемолимфе. Начальный этап развития инфекции у L decemlineata сопровождался изменением уровня активности ферментов фенолоксидазной и антиокислительной систем в гемолимфе. При развитии инфекции у личинок 3 возраста наблюдались всплески ДОФАоксидазной и каталазной активности (рис.1. А). Начальный этап развития инфекции у 1-суточных личинок 4 возраста сопровождался повышением уровня активности тирозиназы и пероксидазы, а в середине 4-го личиночного возраста - увеличением активности всех рассматриваемых ферментов (рис.1. Б). Предварительная иммунизация личинок 4 возраста вызывала повышение реактивности ДОФАоксидазы в гемолимфе при повторном заражении (рис.1 В). Активность ферментов антиокислительной системы при этом обнаруживала тенденцию к стабилизации.

Первые часы развития инфекции у имаго L decemlineata сопровождались некоторым снижением уровня активности фенолоксидаз и повышением пероксидазной активности в гемолимфе (рис.2 А). У иммунизированных особей при повторном заражении регистрировалось многократное повышение тирозиназной активности при возвращении к контрольному уровню активности пероксидазы (рис. 2 Б).

ФОС

0,5 1 2 час

* 25

т J % 5

Ч---1 0

4 24 -5

—" ДОФАоксидаза катал аза

— — тирозиназа — — пероксидаза

Рисунок 1. Динамика активности ферментов фенолоксидазной (ФОС) и антиокислительной (АОС) систем в гемолимфе личинок L.decemlineata Say. на начальном этапе развития инфекции при однократном и двукратном действии БТБ. А - однократно обработанные БТБ личинки 3-го возраста, Б -однократно обработанные БТБ личинки 4-го возраста, В - личинки 4 возраста при повторном заражении. Данные нормированы по контролю * - достоверное отличие от контроля (Р>0,95).

ФОС А. АОС

ДОФАоксидаза тирозиназа

— каталаза — пероксидаза

Рисунок 2. Динамика активности ферментов фенолоксидазной (ФОС) и антиокислительной (АОС) систем имаго L.decemlineata при однократном (А) и двукратном (Б) действии БТБ. Данные нормированы по контролю. * - достоверное отличие опыта от контроля (Р>0,95).

В рассматриваемых нами системах гуморального иммунного ответа, согласно литературным данным, можно выделить два механизма защиты: неспецифический - ДОФАоксидазная, каталазная и пероксидазная активности гемолимфы, и специфический - агглютинирующая и тирозиназная активности гемолимфы (Marmaras et al., 1996; Nakamura et al., 2001; Сухорукова, 2002). С данной точки зрения можно заключить, что на начальном этапе развития инфекции у колорадского жука на стадии личинки 3 возраста преобладают неспецифические механизмы защиты, а у половозрелого имаго -специфические. В гуморальном иммунном ответе личинки 4 возраста представлены как неспецифические, так и специфические механизмы защиты. Вероятно, это связано с тем, что у колорадского жука личинка 4 возраста занимает относительно длительный период развития, с течением которого в

иммунном ответе личинки начинают работать элементы специфической защиты - тирозиназа и агглютинины.

Реализация биохимических защитных механизмов при повторном заражении L.decemîineata также характеризуется онтогенетическими особенностями. У личинок 4-го возраста она проявляется в стабилизации активности ферментов антиокислительного комплекса и в повышении реактивности ДОФА-оксидазы и титра агглютининов, а у имаго - в повышении активности тирозиназы и титра агглютининов. Таким образом, и при двукратном действии бактериального препарата иммунный ответ личинки 4-го возраста сочетает как неспецифическую реакцию, так и элементы специфических механизмов защиты, тогда как у перезимовавшего имаго агглютинирующая и тирозиназная активности гемолимфы обеспечивают эффективное распознавание. В целом, повышенная активность биохимических и клеточных реакций на повторное введение патогена и сохранение эффекта иммунизации при смене возрастов личинок и онтогенетических стадий L.decemîineata позволяют говорить о способности насекомых к развитию иммунной памяти.

Онтогенетические особенности гемопитарных реакций Leptinotarsa decemlineata Say. при развитии инфекционного процесса Гемоцшпарные реакции при однократном действии БТБ. Изменения активности биохимических защитных механизмов колорадского жука сопровождались изменением соотношения различных типов гемоцитов. С развитием инфекции в гемолимфе насекомого увеличивалась доля защитных клеток - метаболических (сферулоцитов и эноцитоидов), секретируюгцих ряд факторов гуморального иммунитета (Raina, 1976; Ochiai et al., 1992; Pesh et al., 1994; Glupov, 1996;), и иммунокомпетентных (активных фагоцитов) (Ribeiro et al., 1996; Tojo et al., 2000), осуществляющих фагоцитоз и инкапсуляцию. При этом фагоциты вытягивали на противоположных полюсах пару псевдоподий и

принимали веретеновидную форму, определяемую как активная форма фагоцитов (Сиротина, 1961; Андросов, Алиева, 1980; Рагялис, 1982).

У личинок в середине 3 и 4 возрастов с развитием инфекции доля активных фагоцитов достоверно увеличивалась лишь спустя 24 часа после обработки бактериальным препаратом. Характерным для данных этапов развития являлось увеличение доли эноцитоидов у личинок 3 возраста и эноцитоидов и сферулоцитов у 3-суточных личинок 4 возраста (рис. 3. А, Б). У куколок и 1 -суточных имаго на начальном этапе развития инфекции проявляется сходная гемоцитарная реакция - увеличение доли сферулоцитов (рис.3 В, Г)-

Гемоцитарный ответ половозрелых особей Ь.сЬсетИпесЛа - 10-суточных и перезимовавших имаго - отличался увеличением доли активных фагоцитов за счет активации амебоидных фагоцитов в первые 4 часа развития инфекции и образования веретеновидных фагоцитов более коротким путем непосредственно из прогемоцитов в последующие часы (рис.3. Д, Е). Аналогичная реакция гемоцитарной системы наблюдалась нами ранее на начальном этапе развития инфекции у представителей другого отряда класса [пвесШ - рабочих особей А.теШ/ега (Гайфуллина и др., 2002). Данное обстоятельство дает основание полагать об общности механизмов клеточной защиты на имагинальной стадии насекомых.

Гемоцитарные реакции при двукратном действии БТБ Предварительная обработка насекомых нелетальной дозой БТБ изменяла соотношение защитных клеток гемолимфы при повторном заражении в сравнении с неиммунизированными особями. Следствием иммунизации личинок в 3 возрасте являлось увеличение доли метаболических клеток -сферулоцитов и эноцитоидов - в первые часы после повторного заражения личинок 4 возраста (рис. 4 А). Иммунизация личинок в 1-е сутки 4 возраста проявлялась в увеличении доли активных фагоцитов на начальном этапе развития инфекции в сравнении с неиммунизированными особями.

0,5 1 2 4 24

час

^Н сферулоциты I I веретеновидные фагоциты при 0,1 %БТБ ВИИ эноцитоиды 1545 веретеновидные фагоциты при 0,5%БТБ

Рисунок 3. Увеличение доли защитных клеток гемолимфы при развитии инфекции на разных этапах онтогенеза L.decemlineata Say. А - личинки 3-го возраста, Б - личинки 4-го возраста, В - куколки, Г - 1-суточные имаго, Д - 10-суточные имаго 1-ой генерации, Е - перезимовавшие имаго.. Данные нормированы по контролю. * - достоверное отличие от контроля (Р>0,95).

Сферулоциты

Эноцитоиды

1сут0ч 1ч 4ч 24ч Зсут бсут время эксперимента

Веретеновидиые

Сферулоциты

Эноцитоиды

О 0,5 1

час

неиммунизированные

иммунизированные

Рисунок 4. Гемоцитарный ответ иммунизированных особей L.decemlineata Say. при повторном заражении на разных этапах онтогенеза. А - личинки 4-го возраста, иммунизированные в 3-м возрасте, Б - куколки, иммунизированные на стадии личинки 4-го возраста, В - имаго 1-ой генерации, иммунизированные на стадии личинки 4-го возраста, Г - перезимовавшие имаго. * - достоверное отличие иммунизированных от неиммунизированных (Р>0,95)

Обработка личинок 4 возраста нелетальной дозой БТБ оказала иммунизирующее действие при повторном заражении куколок, стимулируя у последних направление дифференциации гемоцитов в сторону веретеновидных фагоцитов, образующихся как при активации амебоидных фагоцитов, так и из прогемоцитов (рис. 4 Б). Действие нелетальных доз БТБ на имаго колорадского жука (1-ой генерации и перезимовавших) проявляло иммунизирующий эффект, увеличивая процент активных фагоцитов в первые часы после повторного заражения (рис. 4 В, Г). Кроме того, у перезимовавших имаго иммунизация вызывала увеличение доли метаболических клеток - сферулоцитов и эноцитоидов - после повторной обработки БТБ, свидетельствующее о включении механизмов гуморальной защиты. Примечательно, что следствием иммунизации рабочих особей медоносной пчелы также являлось более быстрое наращивание доли активных фагоцитов и увеличение доли сферулоцитов после повторного заражения в сравнении с неиммунизированными особями (Гайфуллина и др., 2002). Это дает основание полагать, что увеличение в гемолимфе доли активных фагоцитов и клеток, участвующих в процессах гуморальной защиты, может быть общей реакцией на развитие повторной инфекции для имагинальной стадии насекомых.

Длительность биохимических защитных реакций M.domestica L. на действие NAGA и высокой температуры

По результатам предварительного биотеста и проведенных ранее исследований (Салтыкова, 2000), NAGA был выбран нами в качестве фактора, условно модулирующего действие патогена, для проведения эксперимента, в котором определялась длительность биохимических защитных реакций на действие факторов разной природы (NAGA и высокая температура) в онтогенезе M.domestica. В данном эксперименте определялся уровень активности ДОФАоксидазы, каталазы и пероксидазы личинок, куколок и имаго М. domestica в 4-х вариантах: 1) контроль, 2) личинки перенесли тепловой

стресс, 3) личинки развивались в среде, содержащей NAGA, 4) личинки развивались в среде, содержащей NAGA, и перенесли тепловой стресс.

Действие NAGA и высокой температуры на личинок вызвало достоверное повышение (РХ),95) активности каталазы, пероксидазы и ДОФАоксидазы на куколочной и имагинальной стадиях (Таб.3).

Таблица 3.

Активность каталазы, пероксидазы и ДОФАоксидазы в онтогенезе

Активность каталазы, нМ/мин/мг белка Активность пероксидазы, ед.акт./мин/мг белка Активность ДОФАоксидазы, ед.акт./мин/мг белка

L Р ¡ L Р 1 L Р I

К 11,30 ±1,50 6,12 ±0,78 25,30 ±2,45 0,053 ±0,004 0,048 ±0,008 0,109 ±0,011 0,033 ±0,004 0,050 ±0,002 0,030 ±0,003

Т°С Я,50 '•дай- ж 0,058 ±0,003 Щрок 0,035 ±0,002 0,090 щт 0,080 ■ллШ

NAGA XI-W 10,51 f 20,25 ±1,40 0,057 ±0,003 TSMé щт 0,026 ±0,002 от ±¡¡>,«03 0,059 ±0,006

NAGA +'ГС 17,80 -12ДО: ±1,20 36,5:5 0,055 ±0,003 щооз тш 0,036 ±0,004 0,122 *0№ 0,085 ±0,008

В затемненных клетках различие опыта с контролем достоверно (Р>0,95). L - личинка, Р - куколка, I - имаго. К - контроль, Т°С - личинки перенесли тепловой стресс, NAGA - личинки перенесли действие NAGA, NAGA+ Т°С -личинки перенесли действие NAGA и тепловой стресс.

Повышение активности ферментов фенолоксидазной и антиокислительной систем при тепловом стрессе у насекомых рассматриваются как часть защитных реакций, направленных на снижение цитотоксического действия перекиси водорода и на регуляцию уровня биогенных аминов (Раушенбах и др., 1993; Беньковская и др., 2002; Сухорукова, 2002). Полученные нами данные, демонстрирующие повышенный уровень активности ферментов антиокислительной системы и ДОФАоксидазы на следующих после теплового стресса этапах онтогенеза свидетельствует о долговременности функционирования стимулированных тепловым стрессом систем антиоксидантной защиты и регуляции уровня биогенных аминов.

Воздействие NAGA на личинок М. domestica также стимулировало защитные системы организма насекомого, вызывая стойкое повышение уровня

активности ДОФАоксидазы на следующих стадиях онтогенеза. На фоне теплового стресса NAGA оказывало стабилизирующее действие на активность антиокислительных ферментов. Возможно, предварительное содержание насекомых на NAGA активизирует процесс ферментативной деградации перекиси водорода при тепловом стрессе и стабилизирует активность антиокислительных ферментов на уровне, приближающемся к соответствующим контролю значениям. Вместе с тем, NAGA повышал у насекомых уровень метаболизма в целом, физиологическими показателями чего являлись сокращение сроков развития личинок и куколок и увеличение веса куколок, а также оказывал компенсаторное действие при тепловом стрессе, значительно повышая жизнеспособность особей (рис. 5).

Действие NAGA на M.domestica L. индуцировало дополнительные изоформы фенолоксидазы, отличные от тех, что инициировались при тепловом стрессе (рис. 6). Тепловой стресс индуцировал у личинок изоформу фенолоксидазы с Rf 0,5, специфичную для куколочной стадии. Данная молекулярная форма фермента сохранялась у имаго. Действие NAGA на личинок индуцировало ряд изоформ фенолоксидазы, также стабильно воспроизводившихся на последующих стадиях онтогенеза. Наибольшее внимание обращают на себя молекулярные формы с Rf 0,3 и >1. Данные изоформы фермента специфичны для строго определенных этапов развития комнатной мухи. Изоформа с Rf 0,3 характерна для куколочной стадии развития, а изоформы с Rft>l - для моментов перехода одной онтогенетической стадии в другую: при окукливании, у молодых куколок и фаратных имаго. И если исходить из положения, что в морфогенетических и иммунных процессах насекомых задействованы сходные механизмы (Natori et al., 1999), то молекулярные формы фенолоксидазы с Rf 0,3 и >1, инициируемые на строго определенных этапах онтогенеза M.domestica, могут индуцироваться и при развитии иммунной реакции в организме насекомого.

Сроки развития, сут

Вес куколок, мг

NAGA

контроль

контроль NAGA

Количество жизнеспособных имаго, нормировано по контролю

CZU т°с

■1 NAGA

0,9 "f Н--1 gü NAGA+ Т°С

0,7 0,5

Рисунок 5. Воздействие NAGA на жизненные показатели М. domestica. * - достоверное отличие от контроля (Р>0,95).

личинка

II III IV

куколка I П III

имаго

II III IV

Рисунок 6. Индукция дополнительных молекулярных форм фенолоксидазы в онтогенезе M.domestica L. при действии NAGA и (или) теплового стресса. I - контроль, II - личинки перенесли тепловой стресс, 1П - личинки перенесли действие NAGA, IV - личинки перенесли действие NAGA и тепловой стресс.

Ранее было показано, что NAGA инициирует у личинок М. domestica и L.decemlineata электрофоретический спектр фенолоксидазы, идентичный таковому при действии БТБ, и дает сходные пики общей фенолоксидазной активности (Салтыкова и др., 2003), что объясняется наличием в экзотоксине бактериального препарата гликозильных фрагментов, включающих олигомеры NAGA (Кандыбин, 1989). С этой точки зрения, NAGA инициирует защитные реакции фенолоксидазной системы, не вызывая совокупности патологических изменений, характерных для противоинфекционного ответа, благодаря чему NAGA оказывает компенсаторное действие, повышая выживаемость личинок L.decemlineata после обработки БТБ (Салтыкова и др., 2003). Предполагается, что механизм образования новых молекулярных форм фенолоксидаз при действии NAGA заключается в изменении степени гликозилирования фенолоксидаз, не оказывающем влияния на субстратную специфичность ферментных форм, но способствующем лучшему выполнению их функций при развитии защитной реакции насекомых на заражение (Салтыкова и др., 2003). К настоящему времени установлено, что молекулы фенолоксидазы насекомых ответственны за распознавание антигенов (Ratkliffe, 1985). Таким образом, на основе полученных нами данных можно предположить, что фенолоксидазная система участвует в формировании долговременной иммунной памяти, отбором необходимых гликозилированных молекулярных форм фермента при контакте с патогеном на предшествующих стадиях онтогенеза.

Выводы

1. Биохимические механизмы иммунного ответа на начальном этапе развития инфекционного процесса Leptinotarsa decemlineata Say. характеризуются значительными онтогенетическими различиями: у личинки TII возраста преобладают неспецифические механизмы защиты -повышение активности ДОФАоксидазы и каталазы; у имаго преобладают специфические механизмы защиты - повышение активности тирозиназы и титра агглютининов. Иммунный ответ личинки IV возраста

демонстрирует переходный вариант, обнаруживающий равно представленные неспецифические и специфические механизмы защиты.

2. Онтогенетические различия в клеточной защитной реакции на начальном этапе развития инфекционного процесса L.decemlineata Say. характеризуются увеличением доли метаболических гемоцитов (сферулоцитов и эноцитоидов) у личинок III-IV возрастов и увеличением доли иммунокомпетентных клеток (фагоцитов) у половозрелых особей L.decemlineata Say.

3. Нелетальные дозы битоксибациллина (БТБ) оказывают на L.decemlineata Say. иммунизирующее действие. Реализация биохимических защитных механизмов в ответ на повторное заражение проявляется в стабилизации активности ферментов антиокислительного комплекса на всех этапах онтогенеза, а также в повышении реактивности ДОФАоксидазы и титра агглютининов у личинки IV возраста и в повышении активности тирозиназы и титра агглютининов у имаго.

4. При повторном введении БТБ ранее иммунизированным личинкам и имаго L.decemlineata Say. в гемолимфе насекомых возрастает по сравнению с контролем доля иммунокомпетентных и метаболических клеток. Эффект иммунизации сохраняется при смене возрастов личинок и онтогенетических стадий L.decemlineata Say.

5. Показана возможность формирования долговременной реакции на действие внешних факторов биохимических систем, участвующих в иммунном ответе M.domestica L. Воздействие высокой температуры на личинок M.domestica L. повышает активность ферментов антиокислительной и фенолоксидазной систем и индуцирует дополнительную молекулярную форму фенолоксидазы с Rf 0,5. Обнаруженный эффект проявляется на последующих этапах онтогенеза.

6. Воздействие NAGA на личинок M.domestica L. повышает активность

ферментов антиокислительной и фенолоксидазной систем и индуцирует

молекулярные формы фенолоксвдазы с Rf 0,3 и >1. Обнаруженный эффект проявляется на последующих этапах онтогенеза. 7. Вызванное действием NAGA повышение уровня активности биохимических защитных систем в онтогенезе M.domestica L. коррелирует с повышением жизнеспособности особей после теплового стресса.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Гайфуллина JT.P. Влияние хитоолигосахаридов на антиокислительные ферменты медоносной пчелы // "Биология - наука 21-го века". Сборник тезисов 5-ой Пущинской конференции молодых ученых. - Пущино, 2001. -С.15.

2. Гайфуллина Л.Р. Изменение соотношения различных типов клеток гемолимфы медоносной пчелы при заражении БТБ // "Биология - наука 21-го века". Сборник тезисов 5-ой Пущинской конференции молодых ученых. - Пущино, 2001. - С.117-118.

3. Гайфуллина Л.Р. Гемоцитарная формула пчел разных рас при заражении БТБ // "Молодые ученые Волго-уральского региона на рубеже веков". Материалы юбилейной научной конференции молодых ученых. - Уфа, 2001. -С. 35-36.

4. Гайфуллина Л.Р., Салтыкова Е.С., Николенко А.Г. Расовые различия в клеточном иммунном ответе медоносной пчелы // XII Съезд Русского Энтомологического Общества. - С.-Петербург, 2002. - С. 308-309.

5. Салтыкова Е.С., Гайфуллина Л.Р., Беньковская Г.В., Николенко А.Г. Долговременный специфичный индуцируемый иммунитет у насекомых // XII Съезд Русского Энтомологического Общества. - С.-Петербург, 2002. - С. 308-309.

6. Гайфуллина Л.Р., Салтыкова Е.С., Беньковская Г.В., Николенко А.Г. Клеточные и биохимические защитные реакции колорадского жука при действии БТБ II Экологические аспекты интенсификации

сельскохозяйственного производства. Том II. Материалы международной научно-практической конференции. - Пенза, 2002. - С. 150-151.

7. Беньковская Г.В., Салтыкова Е.С., Сухорукова О.В., Гайфуллина JI.P. Аскорбиновая кислота - активный антиоксид ант, регулирующий жизненные процессы насекомых: влияние на чувствительные периоды онтогенеза и воздействие экстремальной температуры // "Биоантиоксидант". VI Международная конференция. Москва, 2002 г. - С. 665-666.

8. Беньковская Г.В., Поскряков A.B., Салтыкова B.C., Гайфуллина JI.P., Николенко А.Г. Адаптированность бурзянской пчелы к воздействию абиотических стрессоров // Тезисы докладов II Международной конференции "Разнообразие беспозвоночных животных на севере". Сыктывкар, 2003. - С. 9.

9. Гайфуллина JI.P., Салтыкова Е.С., Николенко А.Г. Клеточный иммунитет насекомых // Успехи современной биологии. - 2003. - Т. 123. - №2. — С. 195-206.

10. Гайфуллина JI.P., Салтыкова Е.С., Беньковская Г.В., Николенко А.Г. Иммунные реакции личинок и имаго колорадского жука (Leptinotarsa decemlineata Say.) при применении препарата биологической защиты картофеля // Агрохимия. - 2004. - №9. - С. 1-7.

11. Гайфуллина Л.Р., Салтыкова Е.С., Беньковская Г.В., Николенко А.Г. Возможность наследования индуцированных биохимических изменений у чистых линий Musca domestica // Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития. - T.I. - III Съезд Всероссийского Общества Генетики и Селекции. - Москва, 2004. - С. 45.

12. Гайфуллина JI.P. Онтогенетические особенности агглютинирующей активности гемолимфы колорадского жука (Leptinotarsa decemlineata Say.) // Материалы II конкурса научных работ молодых ученых и аспирантов УНЦ РАН и АН РБ. - Уфа, 2004. - С. 47-48.

Гайфуллина Луиза Римовна

ОНТОГЕНЕТИЧЕСКАЯ РЕАЛИЗАЦИЯ БИОХИМИЧЕСКИХ МЕХАНИЗМОВ В ИММУНИТЕТЕ НАСЕКОМЫХ

Специальность 03.00.04 - Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Лицензия № 0177 от 10.06.96 г. Подписано к печати 10.11.2004 Бумага офсетная. Отпечатано на ризографе. Формат 60x84 1/16. Усл.-печ. л. 1,5. Уч.-изд. 1,7. Тираж 100 экз. Заказ № 321.

Башкирский государственный медицинский униэС^С!

450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3.

:итет

?9 ноя 2004 ч-

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гайфуллина, Луиза Римовна

Введение

Глава 1. Биохимические защитные реакции в иммунитете насекомых. Обзор литературы

1.1. Гуморальный иммунитет насекомых

1.1.1. Гемолимфатические агглютинины насекомых и их участие в защитных реакциях

1.1.2. Фенолоксидазная система и ее место в иммунитете насекомых

1.1.3. Участие антиокислительных систем в защитных реакциях насекомых

1.2. Клеточные иммунные реакции: фагоцитоз, грануло- и капсулообразование

1.3. Онтогенетические особенности защитных систем насекомых

Глава 2. Объекты и методы исследований

2.1. Условия содержания объектов исследований

2.1.1. Колорадский жук (Coleoptera, Chrysomelidae: Leptinotarsa decemlineata Say)

2.1.2. Комнатная муха (Diptera, Muscidae: Musca domestica L.)

2.2. Постановка лабораторных экспериментов

2.2.1. Способы бактериального воздействия на L. decemlineata Say.

2.2.2. Условия температурного стрессового воздействия на M.domestica L.

2.2.3. Постановка лабораторных экспериментов для установления онтогенетических особенностей биохимических и клеточных защитных реакций L. decemlineata Say.

2.2.4. Постановка лабораторных экспериментов для определения длительности защитных реакций на действие экзогенных факторов в онтогенезе M.domestica L.

2.2.4.1. Определение наиболее эффективного углевода

2.2.4.2. Эксперимент по определению длительности защитных реакций на действие И-ацетил-О-глюкозамина и высокой температуры в онтогенезе М.domestica L.

2.3. Методика биохимических экспериментов

2.3.1. Методика измерения активности каталазы

2.3.2. Методика измерения активности пероксидазы

2.3.3. Методика измерения фенолоксидазной активности

2.3.4. Методика электрофоретического изучения активности фенолоксидазы

2.3.5. Методика определения агглютинирующей активности гемолимфы

2.3.6. Методика определения углеводной специфичности гемагглютиниов

2.4. Методика приготовления препаратов гемолимфы

2.5. Математическая обработка результатов

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Глава 3. Онтогенетические особенности защитных биохимических реакций Leptinotarsa decemlineata Say.

3.1. Онтогенетические особенности агглютинирующей активности гемолимфы Leptinotarsa decemlineata Say. на начальном этапе развития инфекции

3.2. Динамика ДОФАоксидазной и тирозиназной активности гемолимфы при воздействии БТБ на разных стадиях онтогенеза Leptinotarsa decemlineata Say.

3.3. Динамика каталазной и пероксидазной активности гемолимфы при воздействии БТБ на разных стадиях онтогенеза Leptinotarsa decemlineata Say.

Глава 4. Клеточные иммунные реакции в ответ на бактериальное заражение в онтогенезе Leptinotarsa decemlineata Say.

4.1. Изменение соотношения различных типов гемоцитов Leptinotarsa decemlineata Say. в онтогенезе

4.2. Гемоцитарные реакции в онтогенезе Leptinotarsa decemlineata

Say. при однократном действии БТБ

4.2.1. Гемограммы личинок Leptinotarsa decemlineata Say. при однократном действии БТБ

4.2.2. Гемограммы куколок Leptinotarsa decemlineata Say. при однократном действии БТБ

4.2.3. Гемограммы имаго Leptinotarsa decemlineata Say. при однократном действии БТБ

4.3. Гемоцитарные реакции в онтогенезе Leptinotarsa decemlineata Say. при двукратном действии БТБ

4.3.1. Гемограммы личинок Leptinotarsa decemlineata Say. при двукратном действии БТБ

4.3.2. Гемограммы куколок Leptinotarsa decemlineata Say. при двукратном действии БТБ

4.3.3. Гемограммы имаго Leptinotarsa decemlineata Say. при двукратном действии БТБ

Глава 5. Длительность защитных биохимических реакций Musca domestica L. при действии экзогенных факторов

5.1. Физиологические показатели в онтогенезе М. domestica L. при действии Сахаров

5.2. Влияние NAGA и высокой температуры на жизнеспособность и защитные ферментативные системы в онтогенезе Musca domestica L.

5.2.1. Показатели жизнеспособности Musca domestica L. при действии NAGA и высокой температуры

5.2.2. Активность каталазы, пероксидазы и ДОФАоксидазы в онтогенезе Musca domestica L. при действии NAGA и высокой температуры

5.2.3. Электрофоретические спектры фенол оксидазы Musca domestica L. при действии NAGA и высокой температуры

Введение Диссертация по биологии, на тему "Онтогенетическая реализация биохимических механизмов в иммунитете насекомых"

Изучение механизмов устойчивости живых организмов является важным звеном в решении целого ряда фундаментальных и практических проблем современной биологии. Знание механизмов защитных реакций насекомых позволит понять закономерности эволюции иммунитета, а также целенаправленно подойти к проблеме управления популяциями насекомых.

Биохимические защитные механизмы и тесно связанные с их функционированием клеточные компоненты гемолимфы активно участвуют в процессах линьки и метаморфоза (Ball et al., 1987; Nardi and Miklasz, 1989, Hori et al., 1997; Nardi et al., 2001). Детали участия биохимических механизмов и клеток гемолимфы в гистолитических и формообразующих процессах насекомых пока не ясны. Однако очевидно, что общий принцип функционирования данных систем в морфогенетических явлениях аналогичен определенным защитным реакциям насекомых (Kilincer and Giirkan, 1987, Ramalingam et al.,1993). Таким образом, общее физиологическое состояние, образ жизни, гормональный статус, характерные для каждой стадии развития насекомых, предполагают существование онтогенетических различий в биохимических механизмах иммунного ответа насекомых.

Научная новизна. Впервые, на примере колорадского жука, показано, что онтогенетические особенности биохимических механизмов начального этапа иммунного ответа проявляются в преобладании на личиночной стадии неспецифических, а на имагинальной - специфических биохимических защитных реакций. Установлено, что онтогенетические особенности гемоцитарной реакции на начальном этапе развития инфекционного процесса заключаются в увеличении доли метаболических гемоцитов на стадии личинки и иммунекомпетентных клеток на стадии имаго. Впервые исследование иммунной реакции насекомых проводилось с использованием нелетальных доз патогена, что позволило явно показать эффект иммунизации у насекомых. Обнаруженный эффект иммунизации нелетальными дозами битоксибациллина (БТБ), выражающийся в повышении активности биохимических систем защиты и увеличении доли иммунокомпетентных и метаболических гемоцитов при повторном заражении, сохраняется при смене возрастов личинок и онтогенетических стадий L.decemlineata Say. Показана возможность формирования долговременной, охватывающей весь онтогенез насекомого, реакции биохимических систем, участвующих в иммунном ответе M.domestica L., на примере действия N-ацетил-О-глюкозамина (NAGA) и высокой температуры.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на конференциях «Молодые ученые Волго-Уральского региона на рубеже веков» (Уфа, 2001), «Биология - наука 21-го века» (Пущино, 2001), «Биоантиоксидант» (Москва, 2002), «Экологические аспекты интенсификации сельскохозяйственного производства» (Пенза, 2002), «Разнообразие беспозвоночных животных на севере» (Сыктывкар, 2003), на XII съезде Русского энтомологического общества (Санкт-Петербург, 2002), на III съезде Всероссийского Общества Генетики и Селекции (Москва, 2004).

Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательской работы Института биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН, лаборатории биохимии адаптивности насекомых по теме «Генетико-биохимические механизмы адаптивности насекомых» (РАН, № гос. регистрации 01.200.2 05310).

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Гайфуллина, Луиза Римовна

149 Выводы

1. Биохимические механизмы иммунного ответа на начальном этапе развития инфекционного процесса Leptinotarsa decemlineata Say. характеризуются значительными онтогенетическими различиями: у личинки III возраста преобладают неспецифические механизмы защиты - повышение активности ДОФАоксидазы и каталазы; у имаго преобладают специфические механизмы защиты - повышение активности тирозиназы и титра агглютининов. Иммунный ответ личинки IV возраста демонстрирует переходный вариант, обнаруживающий равно представленные неспецифические и специфические механизмы защиты.

6. Воздействие NAGA на личинок M.domestica L. повышает активность ферментов антиокислительной и фенолоксидазной систем и индуцирует молекулярные формы фенолоксидазы с Rf 0,3 и >1. Обнаруженный эффект проявляется на последующих этапах онтогенеза.

7. Вызванное действием NAGA повышение уровня активности биохимических защитных систем в онтогенезе M.domestica L. коррелирует с повышением жизнеспособности особей после теплового стресса.

151

Заключение

Настоящая работа посвящена исследованию онтогенетических особенностей реализации биохимических защитных механизмов в иммунитете насекомых. В онтогенезе в норме и на начальном этапе развития инфекции нами были изучены изменения титра агглютининов, двух типов фенолоксидазной активности -ДОФАоксидазной и тирозиназной, активности ферментов антиокислительной системы - каталазы и пероксидазы, а также клеточной формулы гемолимфы. Рассматриваемые биохимические механизмы, составляющие гуморальный иммунный ответ насекомых, согласно литературным данным, обеспечивают два типа защитных реакций: неспецифический - ДОФАоксидазная, каталазная и пероксидазная активности гемолимфы, и специфический -агглютинирующая и тирозиназная активности гемолимфы (Глупов, 1993; Сухорукова, 2002; Marmaras et al., 1996; Nakamura et al., 2001). В клеточном составе гемолимфы насекомых с развитием инфекции нами отмечалось, прежде всего, изменение доли метаболических гемоцитов — эноцитоидов и сферулоцитов - секретирующих ряд факторов гуморального иммунитета (Ochiai et al., 1992; Pesh et al., 1994; Glupov, 1996), и иммунекомпетентных клеток — активных фагоцитов — осуществляющих фагоцитоз и инкапсуляцию (Ribeiro et al., 1996; Tojo et al., 2000).

Показано, что в норме личиночная стадия L.decemlineata характеризуется наиболее высоким уровнем активности фенолоксидаз и ферментов антиокислительной системы в гемолимфе. При этом этапы активного морфогенеза L.decemlineata - личинки 4-го возраста, куколки и 1-суточные имаго - отличаются . максимальной долей активных фагоцитов. Выявленные онтогенетические особенности активности факторов гуморальной системы защиты и клеточного состава гемолимфы L.decemlineata согласуются с полученными ранее данными на других видах Insecta (Запольских, 1976; Dvornik, 1992) и подтверждают предположения об участии защитных механизмов в процессах роста и развития насекомого. Полученные нами данные также позволили выявить определенную онтогенетическую закономерность в защитной реакции L.decemlineata. Во-первых, на начальной стадии развития инфекции у личинки L.decemlineata 3-го возраста преобладают неспецифические механизмы протнвоинфекционной защиты: повышается активность ДОФА-оксидазы и каталазы, а у имаго - механизмы специфической защиты: повышается титр агглютининов. В иммунном ответе личинки 4-го возраста, представляющем собой переходный вариант, неспецифические и специфические механизмы равно представлены. Во-вторых, начальный этап развития инфекции в период активного морфогенеза отличается увеличением доли метаболических гемоцитов, а у половозрелых особей -увеличением доли иммунокомпетентных клеток. Таким образом, можно заключить, что специфические механизмы защиты формируются у насекомого на достаточно продолжительных этапах онтогенеза. В данном случае у L.decemlineata элементы специфического ответа появляются в середине наиболее продолжительного 4-го личиночного возраста и максимально проявляются у перезимовавшего имаго.

При двукратном действии бактериального препарата на L.decemlineata показана возможность иммунизации насекомых нелетальными дозами патогена, не вызывающими глубоких патологических изменений в организме насекомого и смертности, отличной от контроля. Реализация биохимических механизмов защиты при повторном заражении L.decemlineata характеризуется онтогенетическими особенностями. У личинок 4-го возраста она проявляется в стабилизации активности ферментов антиокислительного комплекса и в повышении реактивности ДОФАоксидазы и титра агглютининов, а у имаго - в повышении активности тирозиназы и титра агглютининов. Таким образом, и при двукратном действии бактериального препарата иммунный ответ личинки 4-го возраста сочетает как неспецифическую реакцию, так и элементы специфических механизмов защиты, тогда как у перезимовавшего имаго агглютинирущая и тирозиназная активности гемолимфы обеспечивают эффективное распознавание. Кроме того, действие нелетальных доз патогена на личинок и имаго L.decemlineata проявляет иммунизирующий эффект при повторном заражении насекомых, увеличивая в сравнении с контролем долю иммунокомпетентных и метаболических клеток гемолимфы. В целом, повышенная активность биохимических защитных систем и гемоцитарной реакции на повторное введение патогена и сохранение эффекта иммунизации при смене возрастов личинок и онтогенетических стадий L.decemlineata позволяют говорить о способности насекомых к развитию иммунной памяти. Способность к иммунизации, продемонстрированная также на некоторых других представителях Insecta (Батурин, Батурина, 1984; Matz, 1987; Dunn, 1990), может являться одной из причин формирования общей устойчивости популяций насекомых, дополняющей действие отбора, что необходимо учитывать при производстве и использовании микробиологических препаратов.

Возможность формирования долговременной защитной реакции биохимических защитных систем насекомых показана при действии экзогенных факторов - NAGA и высокой температуры - на примере M.domestica. Воздействие высокой температуры рассматривалось нами в качестве фактора, вызывающего развитие стресс-реакции - повышение уровня активности ферментов фенолоксидазной и антиокислительной систем, направленного на снижение цитотоксического действия активных кислородных метаболитов и продуктов автоокисления биогенных аминов (Раушенбах и др., 1993; Higashi et al., 2000; Беньковская и др., 2002; Сухорукова, 2002). NAGA, оказывающий выраженное биологическое действие на M.domestica, а также, инициирующий у комнатной мухи и колорадского жука защитные гуморальные реакции, аналогичные для противоинфекционного ответа (Салтыкова и др., 2003), рассматривался нами в качестве фактора, частично моделирующего иммунный ответ. Результаты проведенных экспериментов показывают, что тепловой стресс и иммуностимулирующее действие NAGA на личинок M.domestica повышает активность ферментов антиокислительной системы и ДОФАоксидазы, а также изменяет изоферментный спектр фенолоксидазы не только на данном этапе развития, но и на последующих стадиях онтогенеза. Повышенный уровень активности ферментов антиокислительной системы и ДОФАоксидазы на следующих после теплового стресса этапах онтогенеза свидетельствует о долговременности функционирования стимулированных тепловым стрессом систем антиоксидантной защиты и регуляции уровня биогенных аминов. Вызванные же действием NAGA повышение активности данных ферментов и индукция дополнительных изоформ фенолоксидазы в онтогенезе M.domestica дает основание полагать возможность формирования в организме насекомого долговременных противоинфекционных защитных реакций. Механизм образования новых молекулярных форм фенолоксидаз при действии NAGA предположительно заключается в изменении степени гликозилирования фенолоксидаз, способствующем лучшему выполнению их функций (Салтыкова и др., 2003), задействованных в распознавании антигенов (Ratkliffe, 1985). Таким образом, на основе полученных нами данных можно предположить, что фенолоксидазная система участвует в формировании долговременной иммунной памяти, отбором необходимых гликозилированных молекулярных форм фермента при контакте с патогеном на предшествующих стадиях онтогенеза.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гайфуллина, Луиза Римовна, Уфа

1. Алексеева Т. А., Зотин А. И. Стандартный обмен насекомых: клопы, бабочки, перепончатокрылые // Известия РАН. Серия биологическая. 1996. -№ 2. -С. 193-205.

2. Андросов Г.К., Алиева М.И. Защитные реакции гемолимфы насекомых при микотоксикозе // Журнал общей биологии. 1980. - №5. - С.726-733.

3. Бартникайте И.С., Крищюнене Р.А. Цитопатологические и количественные изменения гемоцитов у личинок колорадского жука после обработки битоксибациллином // Труды АН ЛитССР. Сер.В. 1988. - Т.4(104). - С.54-59.

4. Батурин В.В. О классификации форменныъх элементов гемолимфы насекомых // Использование микроорганизмов для борьбы с вредными насекомыми в сельском и лесном хозяйстве. Иркутск. 1978. - С.89-94.

5. Батурина Л.И. Механизм действия кристаллофорных бактерий на личинок капустной совки (Barathra brassiana L.) // Микроорганизмы в защите растений от вредных насекомых. Иркутск. 1978. - С.86-93.

6. Батурин В.В., Ведерникова B.C. Сравнительное изучение морфологии гемоцитов представителей некоторых отрядов насекомых // Использование микроорганизмов для борьбы с вредными насекомыми в сельском и лесном хозяйстве. Иркутск. 1979. - С. 96-100.

7. Батурин В.В., Батурина Л.Н. Защитные реакции иммунизированных насекомых к кристаллообразующим бациллам // Энтомологические исследования в Киргизии. 1984. - №17. - С. 102-112.

8. Беньковская Г. В. Биологическое обоснование применения ингибиторов синтеза хитина для контроля численности колорадского жука в Предуралье Башкирии: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Ленинград-Пушкин, 1990. 22 с.

9. Болдырев А.А., Булыгина Е.Р., Волынская Е.А. Влияние пероксида водорода и гипохлорита на активность Na,K-ATPa3bi мозга // Биохимия. 1995. — Т.60. -Вып.10. -С.1688-1695.

10. Бояркин А.Н. Быстрый метод определения активности пероксидазы // Биохимия. 1951. - Т. 16. - Вып.4. - С.352-357.

11. Буров Методы испытаний гормональных препаратов (регуляторов роста, развития и размножения насекомых). JL: ВАСХНИЛ ВИЗР, 1983. - 34 с.

12. Владимиров Ю.А, Азизова О.А., Деев А.И. и др. Свободные радикалы в живых системах // Итоги науки и техники. Сер. Биофиз. М. ВИНИТИ. 1991. -Т.29. - 252с.

13. Гилмур Д. Метаболизм насекомых. М.: Мир, 1968. - 230 с.

14. Глупов В.В. Некоторые аспекты иммунитета насекомых // Успехи соврем, биологии. 1992. - Т. 112. - № 1. - С. 62-73.

15. Глупов В.В., Бахвалов С.А. Механизмы резистентности насекомых при патогенезе // Успехи современной биологии. 1998. - Т. 118. - Вып.4. - С.466-481.

16. Глупов В.В., Хвощевская М.Ф., Щепоткин И.А. и др. Морфофункциональная структура популяции гемоцитов Galleria mellonella L. (Lepidoptera: Pyralida) при инфекционном процессе // Известия РАН. Сер. биол. 1997. - №6. - С.645-653.

17. Дворник В.Я. Оксидазные системы насекомых // Автореферат дисс. .к.б.н. Донецк, ун-т. Донецк. 1990. - 20с.

18. Жеребкин М.В. Зимовка пчел / Россельхозиздат. 1979. - №14. - 149с.

19. Животенко Е. Ю., Кутузова Н. М., Филиппович Ю. Б. Изменение активности монофенол-монооксигеназы в онтогенезе комнатных мух и тутового шелкопряда // Онтогенез. 1987. - Т. 18. - № 2. - С. 208-211.

20. Заварзин А.А. Очерки эволюционной гистологии крови и соединительной ткани. М. Л.: Вып.2. 1947. - 274с.

21. Запольских О.В. Морфологический и цитохимический анализ клеток гемолимфы рабочей пчелы //Цитология. 1976. - Т. 18. - №8. - С.956-962.

22. Запольских О.В. Сравнительно-морфологическое и цитохимическое исследование клеток гемолимфы некоторых перепончатокрылых: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Л: Ин-т Цитол. АН СССР. 1978. - 19 с.

23. Запольских О.В. Клетки гемолимфы муравьев Formica //Зоологический журнал. 1981. - Вып.8. - С.1205-1210.

24. Запольских О.В. Сравнительная характеристика клеток гемолимфы минирующих пилильщиков из рода Heterarthrus (Hymenoptera, Tenthredinidae) //Зоологический журнал. 1987. - Вып.5. - С.717-723.

25. Запольских О.В. Морфологический и цитохимический анализ клеток гемолимфы минирующих пилильщиков рода Fenusa (Hymenoptera: Tenthredinidae) // Функциональная морфология клеток гемолимфы насекомых. Бирск: БГПИ, 1989. С.21-35.

26. Зюман Б.В. Почему болеют пчелы // Пчеловодство. 1993. - №4. - С.24-25.

27. Ивинскене В.Л., Заянчкаускас П.А. Изменение гемоцитов большой пчелиной огневки под воздействием фосфолипазы и термолабильного экзотоксина бактерий Bacillus thuringiensis //Труды АН ЛитССР 1986. - В. 1(93). - С. 59-65.

28. Каллис Х.А. Среда как генератор адаптивных изменений // Современные концепции эволюционной генетики. — Новосибирск: ИциГ СО РАН, 2000. — С. 168174.

29. Кандыбин Н.В. Бактериальные средства борьбы с грызунами и вредными наекомыми // М.: Агропромиздат. 1989. - 172 с.

30. Кубайчук В.П. Показатели каталазы как возможные тесты для оценки уровня физиологического состояния насекомых // IX съезд Всесоюз. энтомол. общества: Тез. докл. Киев. 1984. 4.1. С.260.

31. Кубайчук В.П. Установление температурного интервала для оценки энергии активации ферментов насекомых-вредителей на примере каталазы // С-х. биол. Сер. биол. раст. 1993. - №1. - С Л 08-112.

32. Кузнецов Н.Я. Основы физиологии насекомых// M.-JI., изд-во АН СССР. -1948. 380 с.

33. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1990. 352 с. Лахтин В.М. Лектины в исследовании белков и углеводов // Итоги науки и техники. Сер. Биотехнология. Т. 2. М.: ВИНИТИ, 1987. - 288 с.

34. Линевич Л.И. Лектины и углевод-белковое узнавание на разных уровнях организации животного // Успехи биол. химии. 1979. - Т. 20. -С. 71-94.

35. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека: в 2-х томах.- М.: Мир, 1993.-Т. 2.-415 с.

36. Меерсон Ф. 3. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца. М.: Медицина, 1984. - 272 с.

37. Мелехов Е.И. О возможном принципе регуляции повреждения и защитной реакции клетки // Журнал общей биологиию 1983. - Т.44. - №3. - С.386-397.

38. Мерщиев В.М. Манганометрический метод определения активности каталазы в организме пчел. Рыбное: Рацпредложение НИИП, 1990. - 23 с.

39. Миселюнене И. Морфология клеток гемолимфы гусениц капустной белянки //Цитология. 1975. - Т.17. - №6. - С.645-652.

40. Омельянчук Л. В., Дубовский И. М., Глупов В. В. Ген-регулятор фенолоксидазной активности у Drosophila melanogaster // Генетика. 2001. - Т. 37.- № 8. — С. 1063-1067.

41. Помонецкий В.Д., Эфендиев A.M., Кубатиев А.А. Ферменты клеточной защиты и методы их исследования. М.: Мир. - 1986. - 46с.

42. Рагялис А.К. Физиолого-биохимические изменения гемолимфы звездчатого пилильщика-ткача во время онтогенеза (1. Морфология клеток) // ТР. АН ЛитССР.- 1982. №4. С.69-78.

43. Рагялис А.К., Бартникайте И.С. Влияние метатиона на процентное соотношение гемоцитов в гемолимфе личинок звездчатого пилильщика-ткача //Труды АН ЛитССР. 1985. - В. - №3/91. - С.57-62.

44. Ратнер В.Л., Васильева JI.A. Мобильные генетические элементы (МГЭ): «эгоистическая ДНК» или функциональная часть генома? // Современные концепции эволюционной генетики. Новосибирск: ИциГ СО РАН, 2000. - С. 168174.

45. Раушенбах И. Ю., Серова JI. И., Тимохина И. С., Ченцова Н. А., Шумная JI.

46. B. Изменение содержания биогенных аминов у двух линий Drosophila virilis и их гибридов в онтогенезе и при тепловом стрессе // Генетика. 1991. - Т. 27. - № 4.1. C. 657-666.

47. Раушенбах И. Ю., Серова JI. И., Тимохина И. С., Шумная JL В., Ченцова Н. А., Бабенко В. Н. Генетический анализ различий в метаболизме дофамина у двух линий Drosophila virilis в норме и при тепловом стрессе // Генетика. 1993. - Т. 29. -№ 6. -С. 935-948.

48. Раушенбах И. Ю. Стресс-реакция насекомых: механизм, генетический контроль, роль в адаптации // Генетика. 1997. - Т. 33. - № 8. - С. 1110-1118.

49. Рыбина С.Ю., Гулий В.В. Элементы микроструктуры поверхности гемоцитов насекомых на примере яблонной плодожорки Carpocapsa pomonella L. 11 Микроорганизмы в защите растений. Кишинев. 1985. - С.9-16.

50. Сагды Ч.Т., Суханова К.М., Комаров С.А. Ультраструктура и функциональная активность клеток гемолимфы большого мучного хрущака (Coleoptera, Tenebrionidae) //Цитология. 1995. - Т.37. - №12. - С.1207-1215.

51. Салтыкова Е. С. Адаптивное действие хитоолигосахаридов на Apis mellifera L.: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Санкт-Петербург-Пушкин, 2000. 28 с.

52. С и кура A.I. Про мускардинну шфекцш у лялечок американьского бшого метелика // Доповш АН УРСР. №6. - К. - 1957.

53. Сиротина М.И. Анализ гемолимфы вредителей // Гематологический контроль при разработке микробиологической борьбы с колорадским жуком //Доклады АН СССР. 1961. - Т.140. - №3. - С.720-723.

54. Смирнова А.Н., Мыльников С.В., Опарина Т.И. Факторный анализ интенсивности перекисного окисления липидов у Drosophila melanogaster II Всесоюз. конф. по генет. насек. Тез. докл. М. 1991. С.97.

55. Справочник по клиническим лабораторным методам исследования / Под ред. Е.А. Кост. М.: Медицина, 1957. - 520 с.

56. Стил Э., Линдли Р., Бланден Р. Что, если Ламарк прав? Иммуногенетика и эволюция. М: Мир, 2002. - 237 с.

57. Сухорукова О.В. Участие ферментов фенолоксидазного комплекса в защитных реакциях насекомых: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Уфа, 2002. -24с.

58. Суханова М. Ж., Шумная Л. В., Гренбэк Л. Г., Грунтенко Н. Е., Хлебодарова Т. М., Раушенбах И. Ю. Генетический контроль активности тирозиндекарбоксилазы Drosophila virilis // Генетика. 1997. - Т. 33. - № 7. - С. 914-919.

59. Талиева М.Н., Мишина Г.Н. Окислительные ферменты во взаимоотношениях растения и патогена при мучнистой росе флокса // Физиология растений. 1996. - Т.43. - №5. - С.679-684.

60. Тюльпанова В.А., Тюльпанов В.Г. Гемолимфа лиственничной мухи (Chortophila laricicola) при микозе, вызываемом грибом Paecilomyces £аппо8ш//Зоологический журнал. 1971. - Т.51. - №6. - С.926-929.

61. Фархутдинов P.P., Лиховских В. А. Хемилюминисцентные методы исследования свободно-радикального окисления в биологии и медицине. Уфа. — 1995 - 90с.

62. Флоренсов В.А., Пестова И.М. Очерки эволюционной иммуноморфологии. -Иркутск. Издательство Иркутского Университета. - 1990. - 245с.

63. Харченко В.И. Форменные элементы гемолимфы и их использование для оценки физиологического состояния колорадского жука // Сб. науч. тр. Харьк. с.-х. ин-т. 1984. - Т. 304. - С. 80-83.

64. Цитлидзе Б.С. Активность каталазы и зимостойкость грузинских пчел // Пчеловодство. 1979. - №3. - С. 13.

65. Черныш С.И., Филатов Н.А., Черныш Н.С. Цитотоксическая активность гемоцитов насекомых //Тезисы докладов XII съезда Русского Энтомологического Общества. Санкт-Петербург, 19-24 августа 2002. Санкт-Петербург. - 2002. - С.372.

66. ЧураевР.Н. Об одной неканонической теории наследственности // Современные концепции эволюционной генетики. Новосибирск: ИциГ СО РАН, 2000. - С.22-32.

67. Шевкунова B.C. Влияние бактериальных инфекций но общее число гемоцитов у личинок некоторых насекомых // Вредители и болезни с.-х. культур. Новосибирск. 1972. - С.40-50.

68. Эволюция генома /под ред. Доувера Г., Флевелла Р. М.: Мир, 1986. 386 с.

69. Эммануэль Н.М., Акифьев А.П., Потапенко А.И. и др. Механизмы старения высших органов: роль ДНК и свободных радикалов // Всес. симп.: Молек. и клеточ. механизмы старения. Тез. докл. 1981. - С. 192-193.

70. Adelman R., Saul R.L., Ames B.N. Oxidative damage to DNA: Relation to species metabolic rate and life span // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1988. - V.85. - №8. - P.2706-2708.

71. Ahmad S.D., Weinhold L.C., Pardini R.S. Cabbage looper antioxidant enzymes: Tissue spezificity// Insect Biohem. 1991. - V.21. - №5. - P.563-572.

72. Akai H., Sato S. An ultrastructural study of the haemopoietic organs of the silkworm, Bombix mori HionmaX of Insect Physiology. 1971. - V.17. - P.1665-1676.

73. Allen R.G., Oberley L.W., Elwell J.H., Sohal R.S. Developmental patterns in the antioxidant defenses of the housefly, Musca domestica II J. Cell. Physiol. V. 146. -1991.-P. 270-276.

74. Amirante G.A. Production of heteroagglutinins in haemocytes of Leucophaea maderae L. II Experimentia. 1976. - V. 32. - №4. -P. 526-528.

75. Amzallag G.N., Selligmann H., Lemer H.R. A developmental window for salt-adaptation in Sorghum bicolor // J. Exptl. Bot. 1993. - V.44. - P.645-652.

76. Anderson К., Sun S.C., Boman H.G., Steiner H. Purification of the prophenoloxidase from Hyalophora cecropia and four proteins involved in its activation // J. Biochem. 1989. - V. 19. - P. 629-637.

77. Arakawa R.S. Superoxide generation in vitro in lepidopteran larval haemolymph // Journal of Insect Physiology. 1994. - V.40. - P. 165-171.

78. Ashida M., Dohke K. Activation of pro-phenoloxidase by the activating enzyme of the silkworm, Bombyx mori // Insect Biochem. 1980. - V. 10. - P. 37-47.

79. Ashida M.,Ochiai M., Niki T. Immunolocalization of prophenoloxidase among hemocytes of the silkworm, Bombyx mori // Tissue and Cell. 1988. - V.2. - №4. - P.599-610.

80. Ashida M. The prophenoloxidase cascade in insect immunity //Res. Immunol. -1990. V.141. - №9. - P.908-910.

81. Ashida M., Yamazaki H. I. Biochemistry of the phenoloxidase system in insects: with special reference to its activation // Molting and Metamorphosis / Ed. Ohnishi E., Ishizaki H. Tokyo: Japan Sci. Soc. Press- Berlin: Springer-Verlag, 1990. - P. 237-263.

82. Ashida M., Brey P. T. Role of the integument in insect defense: pro- phenol oxidase cascade in the cuticular matrix // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. - V. 92. -P. 10698-10702.

83. Baines D., Desantis Т., Downer R.G. Octopamin and 5-hydroxytryptamine enchance the phagocytic and nodule formation activities of cockroach {Periplaneta americana) haemocytes // J. Insect Physiol. V.38. - P.905-914.

84. Baines D., Downer R.G. Octopamin enchances phagocytosis in cockroach hemocytes: involvement of inositol trisphosphate // Arch. Insect Biochem. Physiol. -V.26. P.249-261.

85. Ball E.E., Gert de Couet H., Horn P.L., Quinn J.M.A. Haemocytes secrete basement membrane components in embryonic locusts // Development. 1987. - V.99. -P.255-259.

86. Barracco M.A., Menezes H. Mecanismos cellulares de defesa en insects //Cienc. e cult. 1985. - V.37. - №2. - P.237-250.

87. Batelle B.A., Kravitz E.A. Targets of octopamine actin in the lobster: cyclic nucleotide changes and physiological effects in hemolymph, heart and exoskeletal muscle // J. Pharmac. Exp. Ther. 1978. - V.205. - P.438-448.

88. Bayram S., Kilincer N. Some changes in blood cells of Agrotis segetum larvae infecting by Periscepsia carbonaria // Entomol. Dern. Yayinlari. 1987. - №3. - P.437-446.

89. Beaulaton J., Monpeyssin M. Ultrastructure et cytochimie des hemocytes Antheraea pernyi Guer (Lepidoptera, Attacidae) au cours du cinquieme age larvaire //Journal of Ultrastructure Research. 1976. - V.55. - P. 143-156.

90. Beck G., Cardinale S., Wang L., Reiner M., Sugumaran M. Characterization of a defense complex consisting of interleukin 1 and phenol oxidase from the hemolymph of the tobacco hornworm Manduca sexta II J. Biol. Chem. 1996. V.271. - P.l 1035-11038.

91. Beckage N.E. Modulation of immune responses to parasitoids by polydnaviruses // Parasitology. 1998. - V.l 16. - P.557-564.

92. Bermejo B.P., Rebuelta L.M., Villar del Frenso A.M. Effects of vitamins on antioxidant defenses in Drosophila melanogaster II Meth. and Find. Exp. and Clin. Pharmacol. 1994. - V.l6. - №1. - P. 139.

93. Brehelin M., Drif L., Baud L., Boemare N. Insect heamolymph: cooperation between humoral and cellular factors in Locusta migratoria II Insect Biochem. 1989. -V. 19.-P. 301-307.

94. Carter J.B., Green E.J. Hemocytes and granular cell fragments of Tipula paludosa larvae II Morphology. 1987. - V.l91. - №3. - P.289-294.

95. Charalambidis N.D., Foucas L.C., Zervas C.G., Marmaras V.J. Hemocyte surface phenoloxidase (PO) and immune response to lipopolysaccharide (LPS) in Ceratitis capitata II Journal of Insect Physiology. 1996. - V.26. - P.867-874.

96. Charlesworth В., Langley C.N. The population genetics of Drosophila transposable elements // Annu. Rev. Genet. 1989. - V.23. - P.251-287.

97. Chen C., Durrant H.J., Newton R.P., Ratcliffe N.A. A study of novel lectins and their involvement in the activation of the prophenoloxidase system in Blaberus discoidalis II Biochem. J. 1995. - V.310. -P.23.

98. Chen F., Torres M. Activation of mitogen activated protein kinase by heat shok treatment in Drosophila II Biochem. J. 1995. - 312. - №2. - P.341-349.

99. Chiang A.S., Gupta A.P., Han S.S. Arthropod immun system. 1. Comparative light and electron microscopic accounts of immunocytes and other hemocytes of Blatella germanica (Dictyoptera: Blatellidae) // J. Morphol. 1988. - V.198. - №3. - P.257-267.

100. Chosa N., Fukumitsu Т., Fujimoto K., Ohnishi E. Activation of prophenoloxidase Ai by an activating enzyme in Drosophila melanogaster // Insect Biochem. Mol. Biol. -1997.-V. 27.-P. 61-68.

101. Clark K., Pech L.L., Strand M.R. Isolation and identification of a plasmatocyte spreading peptide from hemolymph of the lepidopteran insect Pseudoplusia includens //Journal of Biological Chemistry. V.272. - 1997. - P.23440-23447.

102. Coodin S. and Coveney S. Lipophorin inhibits the adhesion of cockroach (Periplaneta americana) hemocytes in vitro //Journal of Insect Physiology. 1992. -V.38. - P.853-862.

103. Cui L., Luckhart S., Rosenberg R. Molecular characterization of a prophenoloxidase cDNA from the malaria mosquito Anopheles stephensi // Insect Molecular Biology. 2000. - V. 9. - P. 127-137.

104. Cullis C.A. Environmental induction of heritable changes in flax: Defined environments including changes in rDNA and peroxidase isozyme band pattern // Heredity. 1981. - V.47. - P.87-94.

105. Cullis C.A. DNA rearrangements in response to environmental stress // Adv. Genet. 1990. - V.28. - P.73-97.

106. Da Silva J.B., De Albuquerque C.M.R., De Araujo E.C., Peixoto C.A., Hurd H. Immune defense mechanisms of Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) against Candida albicans infection // J. Invert. Path. 2000. - V.76. - P.257-262.

107. Daquinag A. C., Nakamura S., Такао Т., Shimonishi Y., Tsukamoto T. Primary structure of a potent endogenous dopa-containing inhibitor of phenol oxidase from Musca domestica // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. - V. 92. - P. 2964-2968.

108. De Gregorio E., Spellman P.T., Rubin G.M., Lemaitre B. Genome-wide analysis of the Drosophila immune response using oligonucleotide microarrays // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2001. V.98. - P. 12590-12595.

109. De Verno P.J., Aston P.W., Chadwick J.S. Transfer of immunity against Pseudonomas aeruginosa P II-I in Galleria mellonella larvae // Dev. Сотр. Immunol. -1983. V. 7. - №3. - P. 423-434.

110. Davis В.J. Preprint «Disc Electrophoresis», Distillation Prod. Piv. Div. Eastman Kodak Co., Rochester N.Y. 1962.

111. Diehl-Jones W.L., Mandato C.A., Whent G., Downer R.G.H. Monoaminergic regulation of hemocyte activity // J. Insect Physiol. 1996. - V.42. - №1. - P. 13-19.

112. Doreen A. Histochemical properties of the spherulocytes of Galleria mellonella (Lepidoptera: Pyralidae) // Int. J. Insect Morphol. and Embriol. 1982. - V.l 1. - №5-6. -P.258-292.

113. Drif L., Brehelis M. Agglutinin mediated immune recognition in Locusta migratoria II Journal of Insect Physiology. 1989. - V.35. - P.729-736.

114. Dulmage H.T., Rhodes R.A. Production of pathogens in artificial media // Microbial control of insect and mites / Ed. Burges H.D., Hussey N.W. London New York: Akademic Press. - 1971. - P. 507-540.

115. Dunn P.E. Humoral immunity in insects immune strategy appeared to correspond to life-history characteristics // Bioscience. 1990.- V. 40. - №10. - C. 738-744.

116. Dunphy G.B., Webster J.M. Antihemocytic surface components of Xenorhabdus nematophylus var. dutki and their modification by serum of nonimmune larvae of Galleria mellonella//J. Invert. Pathol. 1991. - V.58. - P.40-51.

117. Dunphy G.B., Downer R.G. Octopamine a modulator of the haemocyte nodulation response of non-immune Galleria mellonella larvae // J. Insect Physiol. 1994. - V.40. -P.267-272.

118. Durrant A. The environmental induction of heritable changes in Linum II Heredity. — 1962. V.l7. - P.27-61.

119. Dvornik V.Y. Peroxidase and catalase in hemocytes of blackfly, Wilhelmia salopiensis edw., during preimaginal development // 9 Int. congr. Entomol. Beijing June28-July4. 1992. - P.41.

120. Ekengren S., Hutmark D. A family of Turandot-related genes in the humoral stress response in Drosophila II Biochem. Biophis. Res. Commun. -2001. -248. P.998-1003.

121. Essawy M., Maleville A., Brehelin M. The hemocytes of Heliothis armigera: ultrastructure, functions, and evolution in the course of larval development // Journal of Morphology. 1985. - V.186. - P.255-264.

122. Farkas R., Matha V. Rapid method for distinguishing plasmatocytes and granulocytes in Galleria mellonella by rhodaminel23 staining // Microbios. Lett. 1989.- V.41. №163-164. - P.133-135.

123. Farkas R., Zitnan D. Immunocytochemical demonstration of actin and tubulin in plasmatocytes and granulocytes of Galleria mellonella II Microbios. Lett. 1989. - V.40.- №158. P.63-66.

124. Fave I. Regulatory and functional aspects on hemolin, an insect immun protein of the immunoglobulin superfamily (IgSF) //20 Int. Congr. Entomol. Firenze. Aug. 25-31, 1996: Proc. Firenze, 1996. - P.215.

125. Felton G.W., Duffey S.S. Ascorbat oxidation redaction in Helicoverpa zea as a scaverging system against dietary oxidants // Arch. Insect Biochem. And Phisyol. 1992.- V.19.-№l.-P.27-37.

126. Fenoglio C. et al. Cytochemical characterization of the hemocytes of Leucophaea maderae (Dictyoptera: Blaberoidae) //J. Morphol. 1993. - V.218. - №2. - P. 115-126.

127. Fields M.A., Tyson H. Activity and relative mobility of peroxidase and esterase isozymes of flax (Linum usitatissimum) genotrophs. I. Developing main stems // Can. J. Genet. Cytol. 1973. - V. 15. - P.731-744.

128. Franchini A., Miyan J.A., Ottaviani E. Induction of ACTH- and TNF-a-like molecules in the hemocytes of Calliphora vomitoria II Tissue and Cell. 1996. - V.28. -№5. - P.587-592.

129. Fridovich I. Superoxide dismutases // Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol. -1986. — V.58. — P.61-97.

130. Fujimoto K., Okino N., Kawabata S-i., Iwanaga S., Ohnishi E. Nucleotide sequence of the cDNA encoding the proenzyme of phenol oxidase A. of Drosophila melanogaster // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. - V. 92. - P. 7769-7773.

131. Fukuhara Т., Nishio S., Ono Y., Kawauchi M., Asari S., Ohmoto T. Induction of Cu,Zn-superoxide dismutase after cortical contusion injuri during hypothermia // Brain Res. 1994. - V.657. P.333-336.

132. Gillespie J.,Kanost M.R. Biological mediatirs of insect immunity // Annu. Rev. Entomol. 1997. - V.42. - P.611-643.

133. Gilliam M., Jeter W. Synthesis of agglutinating substances in adult honeybees against Bacillus larvae I I J. Invert. Patol. 1970. - V. 16. -P. 69-70.

134. Glaser R.W. On the existence of immunity principles in insects // Psyche. 1918. - V. 25. -P. 39-46.

135. Glupov V. Cell-mediated haemolytic activity of haemolymph from the Colorado potato beetle (Leptinotarsa decemlineata) // Cytobios. 1996. - V.86. - №344. - P.35-51.

136. Goldstein I.J., Hughes R.C., Monsigay M., Osawam Т., Sharon N. What should be called a lectin? // Nature. 1980. - V. 285. - №5760. -P. 66.

137. Gotz P., Boman A., Boman H.G. Interaction between insect immunity and an insect pathogenic nematode with symbiotic bacteria // Proceedings of the Royal Society. London. 1981. - V.212. - P.333-350.

138. Gupta A.P. Cellular elements // In Kerkut G.A. and gibert L.I. (eds.) Comprehensive Insect Physiology, Biochemistry and Pharmacology. V.3. Oxford. Pergamon press. 1985. P.401-451.

139. Hagen H.-E., Klager S. L., McKerrow J. H., Ham P. J. Simulium damnosum s. i. isolation and identification of prophenoloxidase following an infection with Onchocerca spp. Using targeted differential display // Exp. Parasitol. 1997. - V. 86. - P. 213-218.

140. Harm H., Renwrantz L. The inhibition of serum opsonins by a carbohydrate and the opsonizing effect of purified agglutinin on the clearance of non-self particles from the circulation of Helix pomatia //J. Invert. Path. 1980. - V. 36. - P. 64-70.

141. Hermes-Lima M., Storey J. M., Storey К. B. Antioxidant defenses and metabolic depression. The hypothesis of preparation for oxidative stress in land snails // Сотр. Biochem. Physiol. 1998. - V. 120. Part B. - P. 437-448.

142. Hollick J.B., Dorweiler J.E., Chandler V.L. Paramutation and related allelic interactions // Trends in Genet. 1997. - V.13. - P.302-307.

143. Hori S., Kobayashi A., Natori S. Monoclonal antibodies against pupa-specific surface antigens of Sarcophaga peregrina (Fresh fly) hemocytes //Biochemical and Biophysical Communications. 1997. - V.236. - P.497-501.

144. Horohov D.W., Dunn P.E. Changes in the circulating hemocyte population of Manduca Sexta larvae following injection of bacteria // J. Invert. Pathol. 1982. - V.40. -№3. - P.327-339.

145. Housseau F., Moorthy A., Langer D. A., Robbins P. F., Gonzales M. I., Topalian S. L. N-linked carbohydrates in tyrosinase are required for its recognition by human MHC class II-restricted CD4(+) T cells // Eur. J. Immunol. 2001. - V. 31. - P. 26902701.

146. Howard R.W., Stanley-Samuelson D.W. Eicosanoids as mediators of critical physiological functions in insects //20 Int. Congr. Entomol. Firenze. Aug. 25-31. 1996: Proc. Firenze. 1996. - P.567.

147. Jahagirdar A.P., Milton G., Wiswanata Т., Downer R.G.H. Calcium involvement in mediating the action of octopamine and hypertrehalosemic peptides on insect hemocytes IIFEBS. 1987. - V.219. - P.83-87.

148. Jiang H., Wang Y., Korochkina S. E., Benes H., Kanost M. R. Molecular cloning of cDNAs for two pro-phenol oxidase subunits from malaria vector, Anopheles gambiae // Insect Biochem. Mol. Biol. 1997. - V. 27. - P. 693-699.

149. Jomori Т., Natori S. Function of the lipopolysaccharide-binding protein of Periplaneta americana as an opsonin // FEBS Lett. 1992. - V. 296. - №3. -P. 283-286.

150. Jones J.C. Current concepts concerning insect hemocytes // J. Amer. Zoologist. -V.2. 1962. - P.209-246.

151. Jones J.C. The hemocytes of Sarcophaga bullata // J. Morphol. V.99. - 1956. -P. 233-257.

152. Jones O.T.G. Cross A.R., Hancock J.T. Inhibitors of NADPH oxidase as guides to its mehanism // Biochemical Sociaty Transactions. 1991. - V.19. - P.70-72.

153. Jwama R., Ashida M. Biosynthesis of prophenoloxidase in hemocytes of larval hemolymph of the silkworm, Bombyx mori //Insect Biochem. 1986. - V.16. - №3. -P.547-555.

154. Kanost M.P. Serine proteinase inhibitors in artropod immunity // Dev. and Сотр. Immunol. 1999. - V.23. - №4-5. - P.291-301.

155. Kilincer N., Giirkan M. Studies of changes in the morphological characteristics and number of hemocytes during Colorado beetle metamorphosis // Entomol. Dern. Yayinlari. 1987. - №3. - P.387-396.

156. Kobayashi A. Insect defence molecules and reactive oxygen // Developmental and Comparative Immunology. 1998. V.22. - P.129.

157. Komano H., Mizuno D., Natori S. A possible mechanism of induction of insect lectin // J. Biol. Chem. 1981. - V. 256. - P. 7087-7089.

158. Ma С. C., Kanost M. R. A beta 1,3-glucan recognition protein from an insect, Manduca sexta, agglutinates microorganisms and activates the phenoloxidase cascade // J. Biol. Chem. 2000. - V. 275. - P. 7505-7514.

159. Makdad R.-A. Rowley A.F. Studies on the cellular defence reactions of the madera cockroach, Leucophaea maderae // J. Invert. Pathol. 1990. - V. 55. - №3. -P. 350-356.

160. Mall S.B., Gupta G.S. Changes in the differential haemocyte counts of scullera nobilis related to metamorphosis and reproduction // J. Anim. Morphol. and Physiol. -1983.- V.30. №1-2. - P.93-100.

161. Mandato C.A., Dienl-Jones W.L., Downer G.H. Insect hemocyte adhesion in vitro: ingibition by apoliphorin I and an artificial substrate //Journal of Insect Physiology. 1996. - V.42. - №2. - P.143-148.

162. Marmaras V.J., Charalambidis N. Certain hemocyte proteins of the medfly, Ceratitis capitata, are responsible for nonself recognition and immobilization Eischerichia coli in vitro // Arch. Insect. Biochem. Physiol. 1992. - V. 21. - №4. -P. 281-288.

163. Marmaras V.J., Charalambidis N.D., Lambropoulou M. Cellular defense mechanisms in Ceratitis capitata: recognition and entrapment of Eisherihia coli by hemocytes // Arch. Insect. Biochem. and Physiol. 1994. - V.26. - №1. - P. 1-14.

164. Marmaras V.J., Charalambidis N.D., Zerva C.G. Immune response in insects: The role of phenoloxidase in defense reactions in relation to melanization and sclerotization //Arch. Insect. Biochem. and Physiol. 1996. - V.31. - №2. - P. 119-133.

165. Massie H.R., Williams T.R. Superoxide dismutase activity in two different wild-type stains Drosophila melanogaster II Gerontology (Schweiz). 1981. - У.21. - №4. -P.205-208.

166. Matz G. Acquisition d'une de l'encapsulement par les hemocytes de Locusta migratoria (L.) (Insecte Orthoptera) // C.R. Acad. Sci. 1987. - T. 305. - №1. - C. 1113.

167. Minnick M.F., Rupp R.A., Spence K.D. A bacterial-induced lectin which triggers hemocyte coagulation in Manduca sexta II Biochem. Biophys. Res. Commun. 1986. -V. 137. -№2.-P. 729-735.

168. Miranpuri G.S., Bidochka M.J., Kachatourians G.C. Morphology and cytochemistry of hemocytes ahd analisis of hemolymph from Melanoplus sanguinipes (Orthoptera: Acrididae) // J. Econ. Entomol. 1991. - V. 84. - P. 371-378.

169. Mobile DNA / Eds. Berg D.E., Howe M.M. Washington: Amer. Soc. Microbiol. - 1989.-972 p.

170. Mohrig W., Schittek D., Hanachke R. Immunologica: activation of phagocytic cells in Galleria mellonella I/ J. Inv. Pathol. 1979. - V.34. - P.84-87.

171. Muller H.-M., Dimopoulos G., Blass C., Kafatos F. C. A hemocyte-like cell line established from the malaria vector Anopheles gambiae expresses six prophenoloxidase genes // J. Biol. Chem. 1999. - V. 274. - P. 11727-11735.

172. Nappi A.J., Vass E. Hydrogen peroxide production in immune-reactive Drosophila melanogasterll J. Parasitol. 1998. - V.84. - P. 1150-1157.

173. Nappi A.J., Vass E., Frey F., Carton Y. Nitric oxide involvement in Drosophila immunity //Nitric Oxide: Biology and Chemistry. V.4. - №4. - 2000. - P.423-430.

174. Nappi A.J., Vass E., Frey F., Carton Y. Superoxide anion generation in Drosophila during melanotic encapsulatin of parasites //European Journal of Cell Biology. V.68. - 1995. - P.450-456.

175. Nardi J.B., Gao C., Kanost M.R. The extracellular matrix protein lacunin is expressed by a subset of hemocytes involved in basal lamina morphogenesis // J. Insect Physiol. 2001. - V.47. - P.997-1006.

176. Nardi J.B., Miklasz S.D. Hemocytes contribute to both the formation and breakdown of the basal lamina in developing wings of Manduca sexta //Tissue and Cell. -1989.-V.21.-P.559-567.

177. Natali L., Cavallini A., Cionini G. Nuclear DNA chenges within Helianthus annus L.: Changes within single progenies and their relationships with plant development // Theor. Appl. Genet. 1993.-V.85.-P.506-512.

178. Natori S., Shiraishi H., Hori S., Kobayashi A. The roles of Sarcophaga defense molecules in immunity and metamorphosis // Dev. and Сотр. Immunol. V. 23. - 1999. -P. 317-328.

179. Neuwirth M. The structure of the haemocytes of Galleria mellonella II Journal of Morphology. 1973. - V.139. - P. 105-123.

180. Ochiai M., Niki Т., Ashida M. Immunochemical localization of beta-1,3-glucan recognition protein in the silkworm, Bombyx mori II Celle and tissue researchl. 1992. -V.268.-P.431-437.

181. Olafsen J.A. Immunity in Invertebrate / Ed. Brehelin M. Berlin, Heidelberg: Springer-Verlag. 1986. - P. 111.

182. Orgel L.E., Crick F.H.C. Selfish DNA: the ultimate paraasite // Nature. 1980. -V.284. - №5757. - P.604-607.

183. Orr W.C., Frnold L.A., Sohal R.S. Relationship between catalase activity, life span and some parametres accociated with antioxidant defenses in Drosophila melanogaster И Mech. Ageing, and Dev. 1992. - V.63. -№3. - P.287-296.

184. Pathak J.P.N. Cell-mediated defence reactions in insects // In: Pathak J.P.N (Ed.). Insect Immunity. Oxford and IBH Publishing Co. New Delhi. 1993. - P.47-58.

185. Pech L.L., Strand M.R. Plasmatocytes from the moth Pseudoplusia includens induce apoptosis of granular cells //Journal of Insect Physiology. 2000. - V.46. -P.1565-1573.

186. Pendland J.C., Boucias D.G. Hemagglutinin activity in the hemolymph of Anticarsia gemmatalis larvae infected with the fungus Nomuraea rilevi II Dev. Сотр. Immunol. 1985. - V. 9. - №1. -P. 21-30.

187. Peng Z., Miles P.M. Oxidases in the gut of an aphid Macrosiphum rosae and their relation to dietary phenolics //1. Insect Physiol. 1991. - V.37. - №10. - P.779-787.

188. Raina A.K. Ultrastructure of the larval hemocytes of the pink bollworm Pectinophora gossypiella (Lepidoptera: Gelechniidae) // Int. J. Insect. Morphol. and Embryol. 1976. - V.5. - №3. - P.187-195.

189. Raina A.K., BellR.A. Haemocytes of the pink bollworm Pectinophora gossypiella during larval development and diapause // Journal of Insect Physiology. 1974. ~ V.20. -P.2171-2180.

190. Ramalingam N., Chandran P., Rajasekara P.M. Studies on haemocytes during metamorphosis in Odontopus varicornis (Hemiptera: Pyrrhocoridae) // Entomol. 1993. -V.18. - №1-2. - P.73-75.

191. Rattcliffe N.A., Rowley A.F. recognition factors in insect hemolymph // Dev. Сотр. Immunol. 1983. - V. 7. - №4. -P. 653-656.

192. Ratcliffe N.A., Gotz P. Functional studies on insects haemocytes, including nonself recognition// Res. Immunol. 1990. - V.141. - №9. - P.l 19-123.

193. Ratcliffe N. A., Brookman J. L., Rowley A. F. Activation of prophenoloxidase cascade and initiation of nodule formation in locusts by bacterial lipopolysaccharides // Developmental and Comparative Immunology. 1991. - V. 15. - P. 33-39.

194. Ribeiro C., Duvic В., Oliveira P., Givaudan A., Palha F., Simoes N., Brehelin M. Insect immunity effects of factors produced by a nematobacterial complex on immunocompetent cells // Journal of Insect Physiology. - 1999. - V.45. - P.677-685.

195. Ribeiro C., Simoes N., Brehelin M. Insect immunity: the haemocytes of the armyworm Mythimna unipuncta (Lepidoptera: Noctuidae) and their role in defense reactions. In vivo and in vitro studies //Journal of Insect Physiology. 1996. - V.42. -P.815-822.

196. Richards E.H., Ratcliffe N.A., Renwrantz L. Isolation and characterisation of a serum lectin from the giant stick insect // Insect Biochem. 1988. - Vol.18. - №7. -P.691-700.

197. Richards E.H., Edwards J.P. Parasitization of Lacanobia oleracea (Lepidoptera) by the ectoparasitic wasp, Eulophus pennicornis, supresses haemocyte-mediated recognition of non-self and phagocytosis // J. Insect Physiol. 2000. - V.46. - P. 1-11.

198. Rohloff L.H., Wiesner A., Gotz P. A fluorescence assay demonstrating stimulation of phagocytosis by haemolymph molecules of Galleria mellonella II . Insect Physiol. -1994. V.40. - P.1045-1049.

199. Rojas R.R., Leopold R.A. Chilling injury in the housefly: evidence for the role of oxidative stress between pupariation and emergence // Cryobiology. V. 33. - 1996. - P. 447-458.

200. Rothenfluh H. Hypothesis: A memory lymphocyte-specific soma-to-germline genetic feedback loop. // Immunology and Cell Biology. 1995. - V.73. - P.174-180.

201. Rowley A.F., Brookman J.L., Ratcliffe N.A.Possible involvement of the prophenoloxidase system, Locusta migratoria, in antimicrobial activity // J. Invertebr. Patol. 1990. -V. 56.-P. 31-38.

202. Rowley A.F., Ratcliffe N.A. Insects // In Rowley A.F., Ratcliffe N.A. (eds) Invertebrate blood cells. V.2. Academic Press. London. 1981. - P.421-488.

203. Sanger J., Sanger I., Southwick H. Host cell actin assembly is necessary and likely to propulsive force for intracellular movement // Insect Immun. 1992. - V.60. - P.3609-3619.

204. Saul S.J., Sugumaran M. Phenoloxidase activation in the hemolymph of Sarcophaga bullata larvae // Arch. Insect Biochem. Physiol. 1988. - V. 7. - P. 91-103.

205. Saxena S.C., Kumar D., Cytopathological and numerical changes in the haemocytes of Periplaneta americana after topical treatment with BHC (HCH) // Indian Biol. 1992. - V.24. - №1. -P.22-25.

206. Scapigliati G., Massini M. Caratterizzazione morfologica degli emocifi di Bacillus rassus II Redia. 1992. - V.75. - P. 233-240.

207. Schmit A. R., Rowley A. F., Ratcliffe N. A. The role of Galleria mellonella hemocytes in melanin formation // Journal of Invertebrate Pathology. 1977. - V. 29. -P.232-234.

208. Schmit A.R., Ratcliffe N.A. The encapsulation of Araldite implants and recognition of foreignness in Clitumnus extradentatus II J. Insect Physiol. 1978. - V.24. -P.511-521.

209. Selker E.U. Epigenetic phenomena in filamentous fungiA useful paradigms or repeat induced confusion? // Trends in Genet. 1997. - V.13. - P.296-301.

210. Semsei I., Verzar F. Possible mechanism of alteration in activities of three radical scavenging enzymes, superoxide dismutase and catalase // Age. 1989. - V.12. - №3. -P.111-112.

211. Sharma P.R., Dutta S.K. Studies on the haemocytes of Chrotogonus trachypterus and Acridae exaltata И Res. Bull. Panjab. Univ. 1976. - V.27. - №1-2. - P. 1-9.

212. Sharma P.R., Tikku K., Saxena B.P. An electron microscopy study of normal haemocytes of Poecilocerus pictus and their response to injected yeast cells // Insect Sci. and Appl. 1986. - V.7. - 31 - P. 85-91.

213. Soderhall K. Prophenoloxidase activating system and melanization a recognition mechanism of arthropods? A review // Developmental and Comparative Immunology. -1982.-V. 6.-P. 601-611.

214. Sorrentino R.P., Carton Y., Govind S. Cellular immune response to parasite infection in the Drosophila lymph gland is developmentally regulated // Developmental Biology. 2002. - V.243. - P.65-80.

215. Srdic Z, Gloor H. Spherule cells in Drosophila //Explerentia. 1979. - V.35. - №9.- P.1246-1249.

216. Stanley-Samuelson D.W. The biological significance of prostaglandins and related eicosanoids in invertebrates // Amer. Zool. 1994. - V.34. - №6. - P.589-598.

217. Stebbins M.R., Hapner K.D. Preparation and properties of haemagglutinin from haemolymph of Acrididae (Grasshoppers) // Insect Biochem. 1985. - V. 15. - №4. -P. 451-462.

218. Steel E.J., Gorczynski R.M., Pollard J.W. The somatic selection of acquired characters // Ed. Pollard J.W. Evol. utionary Theory: paths into the future. London, 1984. — P.217-237.

219. Steenkiste D. De hemocyten van de honigbij {Apis mellifera L.): typologie bloedbeeld en cellilaire verdegingsreacties // Rijksuniversitet Gent. Belgium. 1988. -285p.

220. Strand M.R. and Clark K.D. Plasmatocyte spreading peptide induces spreading of plasmatocytes but represses spreading of granulocytes //Archives of Insects Biochemistry and Physiology. V.42. - 1999. - P.213-223.

221. Strand M.R. and Pech L.L. Immunological basis for capability in parasitoid-host relationships //Annu. Rev. Entomol. 1995. - V.40. - P.31-56.

222. Strand M.R., Hayakawa Y., Clark K.D. Plasmatocyte spreading peptide (PSP1) and growth blocking peptide (GBR) are multifunctional homologs // Journal of Insect Physiology. 2000. - V.46. - P.817-824.

223. Stynen D., Peferoen M., De Loof A. Proteins with haemagglutinin activity in larvae of the Colorado beetle Leptinotarsa decemlineata II J. Insect Phisiol. 1982. - V.28. - №5. - P.465-470.

224. Sugumaran M. Phenoloxidase activation and insect immunity // In "Defense molecules". A.R. Liss. 1990. - P. 47-62.

225. Sugumaran M., Kanost M. R. Regulation of insect hemolymph phenoloxidases // Parasites and Pathogens of Insects / Ed. Beckage N. E., Thompson S. N., Federici B. A. -San Diego: Academic Press, 1993. P. 317-342.

226. Sun S.C., Faye I. Transcription of immune genes in the giant silkworm, Hyalophora cecropia, is augmented by H202 and diminished by thiol reagents // Europian Journal of Biochemistry. 1995. - V.231. - P.93-98.

227. Suzuki Т., Natori S. Identification of a protein having hemagglutinating activity in the hemolymph of the silkworm, Bombyx mori II J. Biochem. 1983. - V. 93. - P. 583590.

228. Taniani K., Wago H., Yamakawa M. In vitro phagocytosis of Escherichia coli and release of lipopolysaccharide by adhering hemocytes of the silkworm, Bombyx mori //Biochemical and Biophysical Research Communications. V.231. - 1997. - P.623-627.

229. Tojo S., Naganuma F., Arakawa K., Yokoo S. Involvement of both granular cells and plasmatocytes in phagocytic reactions in the greater wax moth, Galleria mellonella II Journal of Insect Physiology. 2000. - V.46. - P.l 129-1135.

230. Tzou P.T. De Gregorio E., Lemaitre B. How Drosophila combats microbial infectionA a model to study innate immunity and host-patogen interactions // Current Oppinion in Microbiology. 2002. - V.5. - P. 102-110.

231. Vilcinskas A., Matha V., Gotz P. Inhibition of phagocytic activity of plasmatocytes isolated from Galleria mellonella by entomogenous fungi and their secondary metabolites // Journal of Insect Physiology. 1997. - V.43. - P.475-483.

232. Wago H. Cellular recognition of foreign materials by the hemocytes of the silkworm Bombyx mori II Developmental and Comparative Immunology. 1982. - V.17. -P. 291-300.

233. Webb B.A., Luckhart S. Factors mediating short- and long-term immune suppression in a parasitoid insect // J. Insect Physiol. 1996. - V.42. - P.33-40.

234. Wiesner A., Wittwer D., Gotz P. A small phagocytosis stimulating factor is released by and on phagocytosing Galleria mellonella haemocytes in vitro // Journal of Insect Physiology. 1996. - V.42. - P.829-8351.

235. Wilson R., Chen C., Ratcliffe N.A. Innate immunity in insects: the role of multiple, endogenous serum lectins in the recognition of foreign invaders in the cockroach Blaberus discoidalis И J. Immunol. 1999. - V. 162. -P. 1590-1596.

236. Witten M.A., Ratcliffe N.A. In vitro superoxide activity in the haemolymph of the West Indian leaf cocroach, Blaberus< discoidalis II Journal of Insect Physiology. 1999. -V.45. - P.667-675.

237. Wittwer D., Franchini A., Ottavani E., Wiesner A. Presence of IL-1- and TNF-like molecules in Galleria me/lonella (Lepidoptera) haemocytes and in an insect cell line from Estigmene acraea (Lepidoptera) //Cytokine. V.l 1. - №9. - 1999. - P.637-642.

238. Wright T. R. F. Genetic of biogenic amines metabolism, sclerotisation and melanisation in Drosophila melanogaster // Adv. Genet. 1987. - V. 24. - P. 127-221.

239. Wood Jones F. Habit and heritage. London: Trubner & Co, 1943. - P.34-45.

240. Yamashita M., Twabuchi K. Bombix mori prohemocyte division and differentiation in individual mikrocultures //Journal of Insect Physiology. 2001. - V. 47. - P.325-331.

241. Yoshida H., Kinoshita K., Ashida M. Purification of a peptidoglycan recognition protein from hemolymph of the silkworm, Bombyx mori // J. Biol. Chem. 1996. -V. 271.-P. 13854-13860.

242. Yu X.-Q., Kanost M.R. Manduca sexta lipopolysaccharide-speecific immulectin-2 protects larvae from bacteria linfection I I Dev. Сотр. Immunol. 2003. - V. 27. - №3. -P. 189-196.

243. Yu-Bin L., Zong-Shun W., Ming-Hua Y. Studies on the ultrastructure of larvae Holotrichia оЫ\ta hemocytes // Acta Zool. Sin. 1992. - V.38. - №1. - P. 6-10.

Информация о работе

Гайфуллина, Луиза Римовна
кандидата биологических наук
Уфа, 2004
ВАК 03.00.04

Диссертация

Онтогенетическая реализация биохимических механизмов в иммунитете насекомых - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы